JP2001511347A - 哺乳動物サイトカイン：インターロイキン−ｂ３０および関連する試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 哺乳動物由来のサイトカインをコードする精製された遺伝子、それに関連する試薬（精製されたタンパク質、特異的抗体、およびこの分子をコードする核酸を含む）が提供される。これらの試薬を使用する方法および診断キットもまた提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、哺乳動物の免疫系細胞のような哺乳動物細胞の生物学的および生理
学的制御に機能するタンパク質に関連する組成物に関する。特に、精製された遺
伝子、タンパク質、抗体および関連する（例えば、活性、発達、分化および多様
な細胞型（造血細胞を含む）の機能を調節するための）有用な試薬を提供する。

【０００２】 （発明の背景） 組換えＤＮＡ技術は、一般に、宿主への導入を経るような、ドナー供給源から
引き続くプロセシングのためのベクターへ遺伝情報を組み込む技術を言い、それ
によって転移した遺伝情報はコピーされ、そして/または新しい環境下で発現さ れる。通常は、遺伝情報は、所望されるタンパク質産物をコードするメッセンジ
ャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に由来する相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の形態で存在する
。キャリアは、頻繁には宿主中で後の複製のためにｃＤＮＡを組み込む能力を有
し、そして幾つかの場合では、実際にはｃＤＮＡの発現を制御し、そしてその結
果宿主中でコードされた生成物の合成を指向するプラスミドである。

【０００３】 しばらくの間は、哺乳動物の免疫応答は、「免疫ネットワーク」と呼ばれる一
連の複雑な細胞間相互作用に基づくものであることが知られている。最近の研究
は、このネットワークの内部作用への新しい見識を提供してきた。多くの応答が
存在することが明らかなってきた一方で、実際には、リンパ球、マクロファージ
、顆粒球および他の細胞がネットワーク様相互作用の周辺を循環し、免疫学者た
ちは今日、リンホカイン、サイトカインまたはモノカインとして知られる可溶性
タンパク質がこれらの細胞間相互作用の制御において重大な役割を果たすという
見解を一般には保持している。従って、細胞修飾因子の単離、特徴付け、および
作用機構には特筆すべき関心があり、それらを理解することは免疫系障害のよう
な多くの医学的異常の診断および治療における有意な進歩を導く。これらの因子
の幾つかは、例えば、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）のような造血増殖
因子である。例えば、Ｔｈｏｍｓｏｎ（１９９４；編）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎ
ｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第２版）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉ
ｅｇｏ；ＭｅｔｃａｌｆおよびＮｉｃｏｌａ（１９９５）Ｔｈｅ Ｈｅｍａｔｏ
ｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｃ
ａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；ならびにＡｇｇａｒｗ
ａｌおよびＧｕｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ
Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂを参照のこと。

【０００４】 リンホカインは、様々な方法で細胞活性を明らかに媒介する。これらは多機能
性造血幹細胞の、複雑な免疫系を構成する多様な細胞系列を含む莫大な数の前駆
体への増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、発達（ｇｒｏｗｔｈ）、および分
化を支持することが示されている。細胞性成分間の固有かつ均衡のとれた相互作
用は、健常な免疫応答のために必要とされる。異なる細胞系列は、リンホカイン
が他の薬剤と組み合わされて投与された場合では、しばしば異なる様式で応答す
る。

【０００５】 免疫応答にとりわけ重要な細胞系列は、リンパ球の以下の２つのクラスを含む
：Ｂ−細胞（これは、免疫グロブリン（外来の物質を認識および結合してそれの
除去をもたらす能力を有するタンパク質）を産生および分泌し得る）、ならびに
リンホカインを分泌し、そしてＢ−細胞および様々な他の細胞（他のＴ−細胞を
含む）を誘発または抑圧し、免疫ネットワークを構成する様々なサブセットのＴ
−細胞。これらのリンパ球は、多くの他の細胞型と相互作用する。

【０００６】 別の重要な細胞系列は、マスト細胞（これは全ての哺乳動物種において確実に
は同定されていない）であり、これは体内にはりめぐらされた毛細血管の近傍に
位置する顆粒含有結合組織細胞である。これらの細胞は、肺、皮膚ならびに胃腸
管および尿生殖器管でとりわけ高濃度で見られる。マスト細胞は、アレルギー関
連障害、特に以下のようなアナフィラキシーにおいて中心的役割を果たす：選択
された抗原が、マスト細胞表面上でレセプターに結合した１つのクラスの免疫グ
ロブリンと架橋したときに、マスト細胞は、メディエーター（例えば、ヒスタミ
ン、セロトニン、へパリンおよびプロスタグランジン（これらは、例えばアナフ
ィラキシーのようなアレルギー性反応を生じる））を脱顆粒し、そして放出する
。

【０００７】 様々な免疫障害のより良い理解および処置の研究は、インビトロでの免疫系の
細胞を維持するための一般的な無力により妨げられてきた。免疫学者たちは、こ
れらの細胞の培養が、Ｔ−細胞および他の細胞上清物（これは様々な増殖因子（
多くのリンホカインを含む）を含む）の使用によって実現されることを発見した
。

【０００８】 前述から、新規のリンホカイン（例えば、Ｇ−ＣＳＦおよび/またはＩＬ−６ に関連するリンホカイン）の発見および開発は、免疫系および/または造血細胞 に直接的にまたは間接的に関連する広範な範囲の変性な状態、または異常な状態
のための新規の治療に貢献し得た。特に、公知のリンホカインの有意な活性を強
化または増強するリンホカインの発見および開発は非常に都合が良い。本発明は
、新規のインターロイキン組成物および関連する化合物、ならびにそれらの使用
のための方法を提供する。

【０００９】 （発明の要旨） 本発明は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、イヌ類、ネコ類、霊長類）、インタ
ーロイキン−Ｂ３０（ＩＬ−Ｂ３０）およびその生物学的活性に関する。本発明
は、それら自身のポリペプチドをコードする核酸およびそれらの産生および使用
のための方法を含む。本発明の核酸は、ある程度は、本明細書中に含まれるクロ
ーニングされた相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）配列に対するそれらの相同性により、
そして／またはＧ−ＣＳＦのような増殖因子様の活性またはサイトカイン様の活
性（ＤｉｅｇｏＮａｇａｔａ（１９９４）Ｔｈｏｍｓｏｎ Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋ
ｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ 第２版．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、 Ｓａ
ｎ を参照のこと）および/またはＩＬ−６（Ｈｉｒａｎｏ（１９９４） Ｔｈ ｏｍｓｏｎ Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ 第２版．，Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、 Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ を参照のこと）についての機
能的アッセイにより特徴付けられ、これらのポリペプチド（これらは代表的には
これらの核酸によりコードされる）に対して適用される。増殖因子依存性の生理
学、つまり免疫応答の制御における調節または介入のための方法が提供される。

【００１０】 本発明は、一部において、Ｇ−ＣＳＦおよびＩＬ−６に対し有意な配列および
構造的類似性を示す新規のサイトカイン配列の発見に基づく。特に、本発明は、
例えばヒトのような霊長類の成熟したサイズが約１６８アミノ酸であるタンパク
質をコードする遺伝子ならびにブタおよびネズミ（例えばマウス）配列をコード
する遺伝子を提供する。有意な配列相同性を示す機能的等価物は、他の哺乳動物
（例えば、ウシ、ウマおよびラット）および非哺乳動物種から入手可能である。

【００１１】 様々なタンパク質の実施態様において、本発明は以下の物を提供する：配列番
号２に対して少なくとも約１２アミノ酸の長さに渡って少なくとも約８５％の配
列同一性を示す実質的に純粋かまたは組換えのＩＬ−Ｂ３０タンパク質またはペ
プチド；配列番号２のＩＬ−Ｂ３０天然配列；およびＩＬ−Ｂ３０配列を含む融
合タンパク質。特定の実施態様において、相同性は、少なくとも約９０％の同一
性であり、かつこの部分は少なくとも約９アミノ酸であり；この相同性が、少な
くとも約８０％同一性であり、かつこの部分は少なくとも約１７アミノ酸であり
；または相同性が少なくとも約７０％であり、かつこの部分は少なくとも２５ア
ミノ酸である。他の実施態様において、ＩＬ−Ｂ３０は：表１の成熟配列を含み
；または天然のＩＬ−Ｂ３０と異なる翻訳後修飾パターンを示し：またはタンパ
ク質もしくはペプチドであり；これは霊長類を含む哺乳動物から選択される温血
動物由来であり；配列番号２の少なくとも１つのポリペプチドセグメントを含み
；同一性を示す複数の部分を示し；ＩＬ−Ｂ３０の天然の対立遺伝子改変体であ
り；少なくとも約３０アミノ酸長を有し；哺乳動物のＩＬ−Ｂ３０に特異的であ
る少なくとも２つの非重複エピトープを示し；哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０に対して少
なくとも２０アミノ酸長に渡って少なくとも約９０％の配列同一性を示し；グリ
コシル化され；天然のグリコシル化で少なくとも１０ｋＤの分子量を有し；合成
ポリペプチドであり；固体基板に付着され；別の化学成分と結合体化し；天然配
列由来の置換が５倍以下であり；または天然配列由来の欠失もしくは挿入改変体
である。好ましい実施態様は、以下のものを含む組成物を含む：滅菌したＩＬ−
Ｂ３０タンパク質またはペプチド；またはＩＬ−Ｂ３０タンパク質もしくはペプ
チドおよびキャリア（ここで、キャリアは以下のものである：水性化合物（水、
生理食塩水および/もしくは緩衝液を含む）；ならびに／または経口、直腸、経 鼻、局所的または非経口投与のために処方された水性化合物）。融合タンパク質
の実施態様において、このタンパク質は以下のものを有し得る：表１の成熟タン
パク質配列；検出用または精製用タグ（ＦＬＡＧ、Ｈｉｓ６またはＩｇ配列を含
む）；および／または別のサイトカインまたはケモカインの配列。

【００１２】 キットの実施態様は、ＩＬ−Ｂ３０タンパク質またはポリペプチド、および：
タンパク質またはポリペプチドを包含する区画；ならびに／あるいはキット中の
試薬の使用または処分のための取り扱い説明書を有するキットを含む。

【００１３】 結合化合物の実施態様において、この化合物は、抗体由来の抗原結合部位を有
し得、これは天然のＩＬ−Ｂ３０タンパク質に特異的に結合し、ここで：ＩＬ−
Ｂ３０は哺乳動物のタンパク質であり；結合化合物はＦｖ、Ｆａｂ、またはＦａ
ｂ２フラグメントであり；結合化合物は別の化学成分と結合体化し；または抗体
は：表１の成熟ポリペプチドのペプチド配列に対して惹起され；成熟ＩＬ−Ｂ３
０に対して惹起され；精製されたげっ歯類のＩＬ−Ｂ３０に対して惹起され；免
疫選択され；ポリクローナル抗体であり；変性したＩＬ−Ｂ３０と結合し；少な
くとも３０μＭのＫｄを示し；固体基板（ビーズまたはプラスチック膜を含む）
に付着され；滅菌組成物中にあり；または検出可能に標識される（放射活性標識
または蛍光標識を含む）。結合化合物を含むキットは：結合化合物を包含する区
画；および／またはキット内の試薬の使用または処分のための取り扱い説明書を
有するキットを含む。このキットはしばしば定性分析または定量分析をなし得る
。好ましい組成物は以下のものを含む：滅菌結合化合物；または結合化合物およ
びキャリア（ここで、キャリアは以下のものである：水性化合物（水、生理食塩
水および/もしくはは緩衝液を含む）；ならびに／または経口、直腸、経鼻、局 所的または非経口投与のために処方された水性化合物）。

【００１４】 核酸の実施態様は、ＩＬ−Ｂ３０タンパク質またはペプチドまたは融合タンパ
ク質をコードする単離されたかもしくは組換えの核酸を含み、ここで：ＩＬ−Ｂ
３０は哺乳動物由来であり；そして／または核酸は：表１の１つの抗原性ペプチ
ド配列をコードし；表１の複数の抗原性ペプチド配列をコードし；このセグメン
トをコードする天然のｃＤＮＡに対して少なくとも約８０％の同一性を示し；発
現ベクターであり；複製開始点をさらに含み；天然の供給源由来であり；検出可
能な標識を含み；合成ヌクレオチド配列を含み；６ｋｂよりも小さく、好ましく
は３ｋｂよりも小さく；霊長類を含む哺乳動物由来であり；天然の完全長コード
配列を含み；ＩＬ−Ｂ３０をコードする遺伝子についてのハイブリダイゼーショ
ンプローブであり；またはＰＣＲプライマー、ＰＣＲ産物または変異誘発プライ
マーである。本発明はまた、このような組換え核酸を含む細胞、組織または器官
を提供し、そして好ましくは、この細胞は：原核細胞；真核細胞；細菌細胞；酵
母細胞；昆虫細胞；哺乳動物細胞；マウス細胞；霊長類細胞；またはヒト細胞で
ある。

【００１５】 キットの実施態様は、このような核酸、および：これらの核酸を包含する区画
；ＩＬ−Ｂ３０タンパク質またはポリペプチドをさらに含む区画；および／また
はこのキット中の試薬の使用または処分についての取り扱い説明書を有するキッ
トを含む。代表的には、このキットは、定性的分析または定量的分析をなし得る
。

【００１６】 特定の実施態様において、この核酸は：３０℃かつ２Ｍより低い塩の洗浄条件
下で、または４５℃および／もしくは５００ｍＭ塩の洗浄条件で、または５５℃
および／もしくは１５０ｍＭ塩の洗浄条件で配列番号１に対しハイブリダイズし
；または霊長類のＩＬ−Ｂ３０に対し、少なくとも約８５％の同一性を示し、お
よび／もしくはこの伸長が少なくとも約３０ヌクレオチドであり、または少なく
とも９０％の同一性を示し、および／もしくは伸長が少なくとも５５ヌクレオチ
ドであり、または少なくとも９５％の同一性を示し、および／もしくは伸長が少
なくとも７５ヌクレオチドである。

【００１７】 本発明は、細胞と哺乳動物のＩＬ−Ｂ３０のアゴニストまたはアンタゴニスト
との接触する工程を含む細胞または組織培養細胞の生理学または発達を調節する
方法を包含する。この方法は：この接触させる工程が、Ｇ−ＣＳＦおよび／また
はＩＬ−６のアゴニストまたはアンタゴニストと組み合わせる工程であるか；ま
たはこの接触させる工程が、ＩＬ−Ｂ３０を特異的に結合する抗体の結合部位を
含む結合組成物を含む、アンタゴニストと組み合わせる工程であり得る。

【００１８】 （好ましい実施態様の詳細な説明） 本明細書中に引用される全ての参考文献は、個々の刊行物または特許出願のそ
れぞれが、参考として援用されることが具体的かつ個々に示されるように、同程
度に本明細書中に参考として援用される。

【００１９】 （Ｉ．一般） 本発明は、サイトカイン（これは、例えば、免疫細胞または他の細胞の間でシ
グナルを媒介し得る、分泌される分子である）である種々の哺乳動物タンパク質
をコードするアミノ酸配列およびＤＮＡ配列を提供する。例えば、Ｐａｕｌ（１
９９４）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第３版）Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ． 「Ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ｃｙｔｏｋｉｎ
ｅｓ，ａｎｄ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ，ｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ｗｉｌｌ ｂｅ ｕｓｅｆｕｌ ｉｎ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｏｄｕｌａｔｉ
ｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ」を参
照のこと。ＩＬ−Ｂ３０は、（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（Ｎ
Ｋ）細胞、マクロファージ、樹状細胞、造血前駆体細胞などのようなリンパ球細
胞を含む）造血細胞に対して刺激効果または阻害効果のいずれかを有するようで
ある。タンパク質はまた、タンパク質上の種々のエピトープ（直鎖状エピトープ
または立体的エピトープの両方）に対する抗体を惹起させるための抗原（例えば
、免疫原）として有用である。

【００２０】 ＩＬ−Ｂ３０をコードするｃＤＮＡは、ヒト細胞株から同定された。この分子
は、ｈｕＩＬ−Ｂ３０と称された。ブタの配列に対応する関連遺伝子もまた、同
定された。げっ歯類の遺伝子（例えば、マウス由来）もまた、記載される。

【００２１】 ヒト遺伝子は、約１６８アミノ酸の可溶性低分子サイトカイン様タンパク質を
コードする。シグナル配列は、おそらく、約２１残基であり、そしてＭｅｔから
ほぼＡｌａにわたっている。表１ならびに配列番号１および２を参照のこと。Ｉ
Ｌ−Ｂ３０は、長鎖サイトカインのメンバーの構造的モチーフ特性を示す。例え
ば、ＩＬ−Ｂ３０、Ｇ−ＣＳＦ、およびＩＬ−６（ＧｅｎＢａｎｋから入手可能
な配列）を比較のこと。表２もまた参照のこと。

【００２２】

【表１】

【００２３】

【表２】

【００２４】 関連したサイトカインタンパク質に対するＩＬ−Ｂ３０の構造的ホモロジーは
、この分子の関連した機能を示唆する。ＩＬ−Ｂ３０は、ＩＬ−６およびＧ−Ｃ
ＳＦに配列類似性を示す長鎖サイトカインである。

【００２５】 ＩＬ−Ｂ３０のアゴニストまたはアンタゴニストはまた、機能的アンタゴニス
トまたはレセプターアンタゴニスト（例えば、これらは、それら各々のレセプタ
ーに結合するＩＬ−６またはＧ−ＣＳＦをブロックするか、または反対の作用を
媒介する）として作用し得る。従って、ＩＬ−Ｂ３０またはそのアンタゴニスト
は、免疫傷害（例えば、Ｔ細胞免疫不全、慢性炎症もしくは組織拒絶）を含む異
常な医学的状態、または心臓血管もしくは神経生理学的な状態における処置にお
いて有用であり得る。

【００２６】 天然の抗原は、標的細胞における生物学的または生理学的応答を導く種々の生
化学的応答を媒介し得る。本明細書中で特徴付けられる好ましい実施態様は、ヒ
トに由来するが、他の霊長類、または他の種の対応物実施態様も事実上存在する
。他の哺乳動物種（例えば、霊長類、イヌ、ネコ、およびげっ歯類）におけるタ
ンパク質のさらなる配列もまた、利用可能である。以下を参照のこと。以下の記
載は、例示の目的でヒトＩＬ−Ｂ３０に関するが、同様に、他の種からの関連し
た実施態様に適用可能である。

【００２７】 （ＩＩ．精製ＩＬ−Ｂ３０） ヒトＩＬ−Ｂ３０のアミノ酸配列は、配列番号２内に１つの実施態様として示
される。このタンパク質をコードする他の天然に存在する核酸は、提供された配
列を用いる標準的手順（例えば、ＰＣＲ技術）またはハイブリダイゼーションに
よって単離され得る。これらのアミノ酸配列（アミノからカルボキシまで提供さ
れる）は、他のタンパク質および例示する多くの改変体からタンパク質抗原を区
別することを可能にする、サイトカインの配列情報を提供することにおいて重要
である。さらに、このペプチド配列は、このようなセグメントを認識する抗体を
産生するためのペプチドの調製を可能にし、そしてヌクレオチド配列は、オリゴ
ヌクレオチドプローブの調製を可能にする。そしてこれらの両方が、このような
配列をコードする遺伝子の検出または単離（例えば、クローニング）のためのス
トラテジーである。

【００２８】 本明細書中に使用される用語「ヒト可溶性ＩＬ−Ｂ３０」とは、タンパク質の
文脈において使用される場合、配列番号２に示される可溶性ポリペプチドまたは
その有意なフラグメントに対応するアミノ酸配列を有するタンパク質を含む。好
ましい実施態様としては、特定された長さの複数の異なる（例えば、重複しない
）セグメントが挙げられる。代表的には、複数は、少なくとも２、より通常には
少なくとも３、そして好ましくは、５、７、またはそれ以上である。長さの複数
の最小値が提供され、種々のサイズのより長い長さ（例えば、１つの長さは、７
および２つの長さは、１２）が適切であり得る。

【００２９】 結合成分（例えば、抗体）は、代表的には、例えば、少なくとも約１００ｎＭ
、通常は約３０ｎＭより良好、好ましくは約１０ｎＭより良好、そしてより好ま
しくは約３ｎＭより良好な高い親和性でＩＬ−Ｂ３０と結合する。対応物のタン
パク質は、ヒト以外の哺乳動物種（例えば、他の霊長類、有蹄類、またはげっ歯
類）において見出される。非哺乳動物種（例えば、トリまたは両生類）もまた、
構造的または機能的に関連した遺伝子およびタンパク質を有する。

【００３０】 本明細書中で使用される用語「ポリペプチド」とは、意味のあるフラグメント
またはセグメントを含み、そして少なくとも約８アミノ酸、一般的には、少なく
とも約１２アミノ酸、代表的には、少なくとも約１６アミノ酸、好ましくは、少
なくとも約２０アミノ酸、そして特に好ましい実施態様においては、少なくとも
約３０以上のアミノ酸（例えば、３５、４０、４５、５０など）のアミノ酸残基
のストレッチを含む。このようなフラグメントは、全ての実際の組み合わせにお
いて、実質的に全ての位置で始まり、および／または終わる（例えば、残基１、
２、３などで始まり、そして例えば、１５０、１４９、１４８などで終わる）末
端を有し得る。特に、目的のペプチドは、構造ドメイン境界（例えば、ヘリック
スＡ、Ｂ、Ｃ、および／またはＤ）に対応する末端を有する。表１を参照のこと
。

【００３１】 用語「結合組成物」とは、（例えば、抗体−抗原相互作用において）ＩＬ−Ｂ
３０と特異的に結合する分子をいう。特異性は、多少包括的（例えば、特定の実
施態様、または例えば、霊長類、げっ歯類などの関連した実施態様の群に特異的
）であり得る。これは、天然の生理学的に相当するタンパク質−タンパク質相互
作用（共有結合または非共有結合のいずれか）においてを含む、ＩＬ−Ｂ３０と
特異的に会合する化合物（例えば、タンパク質）もまた含む。この分子は、ポリ
マーまたは化学試薬であり得る。機能的アナログは、構造的改変を有するタンパ
ク質であり得るか、または適切な結合決定基と相互作用する分子形状を有する分
子であり得る。これらの化合物は、レセプター結合相互作用のアゴニストまたは
アンタゴニストとして作用し得る（例えば、Ｇｏｏｄｍａｎら（編）Ｇｏｏｄｍ
ａｎおよびＧｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａ
ｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（最新版）Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅ
ｓｓを参照のこと）。

【００３２】 例えば、タンパク質の文脈において、実質的に純粋とは、代表的には、タンパ
ク質が、他の夾雑タンパク質、核酸、または元の供給源生物に由来する他の生物
学的物質を含まないことを意味する。純度は、標準的な方法（代表的には重量）
によってアッセイされ得、そして通常は、少なくとも約４０％純粋、一般的には
、少なくとも約５０％純粋、しばしば少なくとも約６０％純粋、代表的には、少
なくとも約８０％純粋、好ましくは、少なくとも約９０％純粋、そして最も好ま
しい実施態様においては、少なくとも約９５％純粋である。キャリアまたは賦形
剤が、しばしば添加される。

【００３３】 ポリペプチドまたはフラグメントの可溶性は、環境およびポリペプチドに依存
する。多くのパラメーター（温度、電解質環境、ポリペプチドのサイズおよび分
子特性、ならびに溶媒の性質を含む）が、ポリペプチドの可溶性に影響を及ぼす
。代表的には、ペプチドが使用される温度は、約４℃〜約６５℃の範囲である。
通常は、使用時の温度は、約１８℃を超える。診断目的には、温度は、通常は、
ほぼ室温または室温より暖いが、アッセイにおいて成分が変性する温度より低い
。治療目的には、温度は、通常は体温であり、代表的にはヒトおよびマウスにつ
いては約３７℃であるが、一定の状況下で、インサイチュまたはインビトロで温
度は、上昇され得るか、または低下され得る。

【００３４】 ポリペプチドのサイズおよび構造は、一般的には、実質的に安定な状態にあり
、そして通常は、変性された状態にない。ポリペプチドは、例えば、可溶性を付
与するために、４次元構造で他のポリペプチドと会合し得るか、または脂質また
は界面活性剤と会合し得る。

【００３５】 溶媒および電解質は、通常、生物学的活性を保存するために使用される型の生
物学的に適合性の緩衝液であり、そして通常、生理学的水溶性溶媒に近い。通常
、溶媒は、中性ｐＨ、代表的には、約５〜１０の間、そして好ましくは、約７．
５を有する。いくつかの場合において、１つ以上の界面活性剤が添加され、代表
的には、穏やかな非変性界面活性剤（例えば、ＣＨＳ（コレステリルヘミスクシ
ネート）もしくはＣＨＡＰＳ（３−［３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニ
オ］−１−プロパンスルホネート））またはタンパク質の構造特性もしくは生理
学的特性の有意な破壊を回避するように十分低濃度で添加される。他の場合にお
いて、強い界面活性剤が有意な変性をもたらすために使用され得る。

【００３６】 （ＩＩＩ．物理的改変体） 本発明はまた、ＩＬ−Ｂ３０抗原のアミノ酸配列と実質的なアミノ酸配列同一
性を有するタンパク質またはペプチドを含む。改変体としては、種改変体、多型
性改変体、または対立遺伝子改変体が挙げられる。

【００３７】 アミノ酸配列ホモロジー、または配列同一性は、必要ならば、残基マッチを最
適化することによって、必要に応じてギャップを導入することによって決定され
る。Ｎｅｅｄｌｅｈａｍら（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−
４５３；Ｓａｎｋｏｆｆら（１９８３）Ｔｉｍｅ Ｗａｒｐｓ，Ｓｔｒｉｎｇ
Ｅｄｉｔｓ，ａｎｄ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｔｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ
ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ、
Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｅｙ，Ｒｅａｄｉｎｇ，ＭＡの第１章；ならびにＩｎ
ｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；およびＵｎ
ｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕ
ｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩからのソフトウェアパッケージもま
た参照のこと。配列同一性は、保存的置換を考慮する場合、マッチするにつれて
変化する。保存的置換としては、代表的には、以下の群における置換が挙げられ
る：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、
グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リジン、アル
ギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。この保存は、生物学的特徴、機能
的特徴、または構造的特徴に対して適用され得る。相同的なアミノ酸配列は、代
表的には、タンパク質配列の天然の多型性または対立遺伝子、および種間のバリ
エーションを含むことが意図される。代表的な相同的タンパク質またはペプチド
は、ＩＬ−Ｂ３０のアミノ酸配列と２５〜１００％の同一性（ギャップが導入さ
れ得る場合）から、５０〜１００％の同一性（保存的置換が含まれる場合）を有
する。同一性の尺度は、少なくとも約３５％、一般的には、少なくとも約４０％
、しばしば、少なくとも約５０％、代表的には、少なくとも約６０％、通常は、
少なくとも約７０％、好ましくは、少なくとも約８０％、そしてより好ましくは
、少なくとも約９０％である。

【００３８】 単離されたＩＬ−Ｂ３０のＤＮＡは、ヌクレオチド置換、ヌクレオチド欠失、
ヌクレオチド挿入、および短いヌクレオチドストレッチの反転によって、容易に
改変され得る。これらの改変は、これらの抗原、それらの誘導体、または類似の
生理学的、免疫原性、抗原性、または他の機能的活性を有するタンパク質をコー
ドする新規のＤＮＡ配列を生じる。これらの改変された配列は、変異体抗原を産
生するため、または発現を増強させるために使用され得る。増強された発現は、
遺伝子増幅、増加された転写、増加された翻訳、および他の機構が関与し得る。
「変異型ＩＬ−Ｂ３０」は、上に提示されたＩＬ−Ｂ３０の配列同一性の定義内
に入るが、欠失、置換、または挿入のいずれであろうと、天然に普通に見出され
るＩＬ−Ｂ３０のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有する別のポリペプチ
ドを含む。これは、一般的には、配列番号２の配列を有するタンパク質と顕著な
同一性を有し、およびそれらの配列と種々の生物学的活性（例えば、抗原性また
は免疫原性）を共有するタンパク質を含み、そして好ましい実施態様において、
天然の完全長の開示された配列の大部分を含む。完全長の配列が代表的には好ま
しいが、短縮型バージョンもまた有用である。同様に、天然の供給源から見出さ
れる遺伝子またはタンパク質が、代表的には最も望ましい。類似の概念は、異な
るＩＬ−Ｂ３０タンパク質、特に、種々の温血動物（例えば、哺乳動物および鳥
類）において見出されるＩＬ−Ｂ３０タンパク質に適用される。これらの記載は
、一般的に、全てのＩＬ−Ｂ３０タンパク質を含み、具体的に考察された特定の
霊長類の実施態様に限定されないことを意図する。

【００３９】 ＩＬ−Ｂ３０の変異誘発はまた、アミノ酸挿入または欠失を作製することによ
って行われ得る。置換、欠失、挿入、または任意の組み合わせが、最終構築物に
達するように生成され得る。挿入は、アミノ末端融合またはカルボキシ末端融合
を含む。ランダムな変異誘発を、標的コドンにおいて実施し得、次いで、発現さ
れた変異体は、所望の活性についてスクリーニングされ得る。公知の配列を有す
るＤＮＡ中の所定の部位で置換変異体を作製する方法は、（例えば、Ｍ１３プラ
イマー変異誘発またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術によって）当該分野
で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）；Ａｕｓｕｂｅｌら（
１９８７および増補）；ならびにＫｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２を参照のこと。好ましい実施態
様としては、例えば、ヌクレオチドレベルまたはアミノ酸レベルにて１つのひだ
（ｆｏｌｄ）、２つのひだ、３つのひだ、５つのひだ、７つのひだなどの好まし
い保存的置換が挙げられる。好ましくは、これらの置換は、保存されたシステイ
ンから離れており、そしてそばしば、らせん構造ドメインから離れた領域に存在
する。このような改変体は、特異的な抗体を産生するために有用であり得、そし
てしばしば多くのまたは全ての生物学的特性を共有する。

【００４０】 本発明はまた、組換えタンパク質（例えば、これらのタンパク質に由来するセ
グメントを使用した異種融合タンパク質）を提供する。異種融合タンパク質は、
天然には、同じ様式で通常は融合されないタンパク質またはセグメントの融合物
である。同様の概念は、異種核酸配列に適用される。

【００４１】 さらに、新たな構築物は、他のタンパク質に由来する同様の機能的ドメインの
組み合わせから作製され得る。例えば、標的結合セグメントまたは他のセグメン
トは、異なる新たな融合ポリペプチド間またはフラグメント間で「交換（ｓｗａ
ｐ）」され得る。例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：１３３０−１３３６；およびＯ’Ｄｏｗｄら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５９８５−１５９９２を参照のこと。

【００４２】 ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅ
ｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２によって記載されるホスホルアミダイト方法
は、適切な合成ＤＮＡフラグメントを産生する。二重鎖フラグメントは、しばし
ば、相補鎖を合成しそして適切な条件下でこの鎖とアニーリングさせるか、また
は適切なプライマー配列を用いたＤＮＡポリメラーゼを使用して相補鎖を付加す
るか（例えば、ＰＣＲ技術）のいずれかによって得られる。

【００４３】 構造分析は、サイトカインのＩＬ−６ファミリーと比較して、この遺伝子に適
用され得る。このファミリーとしては、例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ−
１２、Ｇ−ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、およびＯｂが挙げられる。ＩＬ
−６ファミリーの他のメンバーとのヒト、ブタ、およびマウスのＩＬ−Ｂ３０配
列のアラインメントは、構造特徴の規定を可能にする。特に、βシートおよびα
ヘリックス残基は、例えば、ＲＡＳＭＯＬプログラム（Ｂａｚａｎら（１９９６
）Ｎａｔｕｒｅ ３７９：５９１；Ｌｏｄｉら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
６３：１７６２−１７６６；ＳａｙｌｅおよびＭｉｌｎｅｒ−Ｗｈｉｔｅ（１９
９５）ＴＩＢＳ ２０：３７４−３７６；ならびにＧｒｏｎｅｎｂｅｒｇら（１
９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４：２６３−２６９を参照
のこと）を使用して決定され得る。置換についての好ましい残基としては、レセ
プターと相互作用することが推測される、表面にむき出した残基が挙げられる。
機能を保存する他の残基は、特に表面が露出された残基から離れた位置における
、保存的置換基である。

【００４４】 （ＩＶ．機能的改変体） ＩＬ−Ｂ３０に対する生理学的応答のブロッキングは、そのレセプターに対す
るリガンドの結合の競合的阻害をもたらし得る。

【００４５】 本発明のインビトロアッセイは、しばしば、単離されたタンパク質、これらの
タンパク質のレセプター結合セグメントを含む可溶性フラグメント、または固相
基質に付着したフラグメントを使用する。これらのアッセイはまた、結合セグメ
ントの変異および改変、またはサイトカインの変異および改変（例えば、ＩＬ−
Ｂ３０アナログ）のいずれかの効果の診断的決定を可能にする。

【００４６】 本発明はまた、例えば、サイトカインに対する中和抗体、またはレセプター結
合フラグメントが試験化合物と競合する競合薬物スクリーニングアッセイの使用
を意図する。

【００４７】 ＩＬ−Ｂ３０抗原の「誘導体」とは、天然に生じる形態からのアミノ酸配列変
異体、グリコシル化改変体、および他の化学的部分を有する共有結合体または凝
集結合体を含む。共有結合誘導体は、例えば、標準的方法によって、ＩＬ−Ｂ３
０のアミノ酸側鎖またはＮ末端またはＣ末端において見出される基に機能性を連
結することによって調製され得る。例えば、ＬｕｎｄｂｌａｄおよびＮｏｙｅｓ
（１９８８）Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ，第１巻〜第２巻，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，
Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、ＦＬ；Ｈｕｇｌｉ（１９８９編）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ
，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；およびＷｏｎｇ（１９９１）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ Ｌｉ
ｎｋｉｎｇ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬを参照のこと。

【００４８】 特に、グリコシル化改変が挙げられ、例えば、ポリペプチドの合成およびプロ
セシングの間か、またはさらなるプロセシング工程においてポリペプチドのグリ
コシル化パターンを改変することによって作製される。例えば、Ｅｌｂｅｉｎ（
１９８７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５６：４９７−５３４を参照のこ
と。リン酸化アミノ酸残基（例えば、ホスホチロシン、ホスホセリン、またはホ
スホスレオニン）を含む他の小さな改変を有する同じ１次アミノ酸配列を有する
ペプチドのバージョンもまた含まれる。

【００４９】 ＩＬ−Ｂ３０と他の相同的または非相同的タンパク質との間の融合ポリペプチ
ドもまた提供される。多くのサイトカインレセプターまたは他の表面タンパク質
は、多量体（例えば、ホモダイマー実体）であり、そして反復構築物は、タンパ
ク質切断に対する感受性の減少を含む種々の利点を有し得る。代表的な例は、融
合されたリガンドの存在または位置を容易に決定し得るように、レポーターポリ
ペプチド（例えば、ルシフェラーゼ）のタンパク質のセグメントまたはドメイン
（例えば、レセプター結合セグメント）との融合物である。例えば、Ｄｕｌｌら
、米国特許第４，８５９，６０９号を参照のこと。他の遺伝子融合パターンとし
ては、細菌βガラクトシダーゼ、ｔｒｐＥ、プロテインＡ、βラクタマーゼ、α
アミラーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、酵母α接合因子、およびＨｉｓ６配
列のＦＬＡＧ配列のような検出または精製タグが挙げられる。例えば、Ｇｏｄｏ
ｗｓｋｉら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：８１２−８１６を参照のこと
。

【００５０】 融合ペプチドは、代表的には、組換え核酸方法または合成ポリペプチド方法の
いずれかによって作製される。核酸の操作および発現のための技術は、一般的に
、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎ
ｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版），第１巻〜第３巻，Ｃ
ｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；およびＡｕｓｕ
ｂｅｌら（１９９３編）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ，ＮＹ．に記
載される。ポリペプチドの合成のための技術は、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ
（１９６３）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５６；Ｍ
ｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：３４１−３４７；Ａ
ｔｈｅｒｔｏｎら（１９８９）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅ
ｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ；およびＧｒａｎｔ（１９９２）Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅ
ｐｙｉｄｅｓ：Ａ Ｕｓｅｒ’ｓ Ｇｕｉｄｅ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ，ＮＹ
．に記載される。再折り畳み方法は、合成タンパク質に適用可能であり得る。

【００５１】 本発明はまた、アミノ酸配列の改変またはグリコシル化における変化以外のＩ
Ｌ−Ｂ３０タンパク質の誘導体の使用を意図している。そのような誘導体は、化
学的部分またはタンパク質キャリアーとの共有結合または凝集結合を含み得る。
共有結合または凝集誘導体は、免疫原として、イムノアッセイの試薬として、ま
たは結合パートナー（例えば、他の抗原）のアフィニティー精製のような精製法
において有用である。抗ＩＬ−Ｂ３０抗体または別の結合組成物のアッセイ、ま
たは精製における使用のため、ＩＬ−Ｂ３０は、当該分野において周知の方法に
より、固体支持体（例えば、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ）に共有結合
によって固定され得るかまたはグルタルアルデヒド架橋を用いるかもしくは用い
ずにポリオレフィン表面に吸着させ得る。また、ＩＬ−Ｂ３０タンパク質は、例
えば、診断アッセイでの使用のために検出可能な基で標識され得る。ＩＬ−Ｂ３
０の精製は、固定化された抗体または相補的な結合パートナー（例えば、レセプ
ターの結合部分）によって達成され得る。

【００５２】 可溶化されたＩＬ−Ｂ３０または本発明のフラグメントは、結合特異的抗血清
または抗体の生成のための免疫原として使用され得る。精製した抗原は、モノク
ローナル抗体または抗原結合フラグメントをスクリーニングために使用され得、
これらは、天然の抗体の抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ，Ｆａｂ’、Ｆ
（ａｂ）₂など）を包含する。精製されたＩＬ−Ｂ３０抗原はまた、上昇したサ イトカインレベルの存在に応答して生成した抗体を検出する試薬として使用され
得、この存在は、異常または特定の生理学的状態または疾病状態の診断となり得
る。この発明は、配列番号１で示されたヌクレオチド配列でコードされたアミノ
酸配列、またはそれを含むたんぱく質のフラグメントに対して惹起した抗体を意
図している。特に、この発明は、特定のドメイン（例えば、へリックスＡ、Ｂ、
ＣまたはＤ）に対して結合親和力を有するかまたはこれに対して惹起された抗体
を意図している。

【００５３】 本発明は、更なる密接に関連した種改変体の単離を意図している。サザンおよ
びノーザンブロット分析によって、同様の遺伝実体が他の哺乳動物に存在するこ
とが確かめられる。ＩＬ−Ｂ３０は、種改変体（例えば、げっ歯動物、ウサギ目
の動物、肉食動物、偶蹄類、奇蹄類および霊長類）において広範であるようであ
る。

【００５４】 本発明はまた、構造、発現、そして機能の特有性および類似性双方を示す一群
の関連抗体を単離する手段を提供する。分子の多くの生理学的影響の解明は、分
子の更なる別種または多型変異体の単離および特徴づけによって大いに加速する
。詳細には、本発明は、異なる種においてさらなる相同な遺伝実体を同定するに
有用なプローブを提供する。

【００５５】 この単離された遺伝子は、ＩＬ−Ｂ３０の発現が欠如した細胞（例えば、対応
するタンパク質を欠き、そしてネガティブバックグラウンド活性を示す種タイプ
または細胞のいずれか）の形質転換を可能にする。このことによって、非形質転
換コントロール細胞と比較して、ＩＬ−Ｂ３０の機能の分析が可能になるはずで
ある。

【００５６】 これらの抗原によって媒介される様々な生理学的機能を達成する重要な構造エ
レメントの解明は、現代の分子生物学の標準技術を使用して行い得る（特に、関
連したクラス数の比較において）。例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９
）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：１３３９−１３３６に記載されたホモローグスキャ
ンニング変異誘発技術、Ｏ’Ｄｏｗｄら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２６３：１５９８５−１５９９２で使用されたアプローチ、およびＬｅｃｈｌｅ
ｉｔｅｒら（１９９０）ＥＭＢＯ Ｊ．９：４３８１−４３９０を参照のこと。

【００５７】 細胞内機能はおそらく、レセプターシグナル伝達を含む。しかし、タンパク質
内在化は、ある環境下で起り得る。そして、細胞内成分とサイトカインとの間の
相互作用も起り得る。相互作用成分とのＩＬ−Ｂ３０の相互作用の特定セグメン
トは、変異誘発または直接的な生化学的手段（例えば、架橋またはアフィニティ
法）によって同定され得る。結晶学的または他の物理的方法による構造分析もま
た適用される。シグナル変換のメカニズムの更なる研究は、アフィニティー法ま
たは遺伝的手段（例えば、変異体の相補分析）によって単離可能であり得る関連
成分の研究を含む。

【００５８】 ＩＬ−Ｂ３０の発現および制御の更なる研究が追求される。この抗原に関連し
た制御エレメントは、異なる、生理学的、発生的、組織特異的または他の発現パ
ターンを示すはずである。上流または下流の遺伝子領域（例えば、制御エレメン
ト）は興味が持たれる。

【００５９】 ＩＬ−Ｂ３０抗原の構造研究は、新しい抗原の設計、特に、分子上にアゴニス
トあるいはアンタゴニスト特性を示すアナログの設計を導く。これは、所望のス
ペクトルの活性を示す抗原を単離するための以前、記載されたスクリーニング法
と併用され得る。

【００６０】 （Ｖ．抗体） 抗体は、このＩＬ−Ｂ３０タンパク質の様々なエピトープ（種、多型あるいは
対立遺伝子改変体、およびフラグメント（天然に存在する形態およびそれらの組
換え形態の両方）を含む）に対して惹起され得る。加えて、抗体は、それらの活
性形態または不活性形態（ネイティブ型または変性型を含む）のいずれかのＩＬ
−Ｂ３０に対して惹起され得る。抗イデオタイプ抗体もまた意図される。

【００６１】 抗原の予め決定されたフラグメントに対する抗体（結合フラグメントおよび単
鎖型を含む）は、免疫原性タンパク質とこのフラグメントとの結合体による動物
の免疫によって惹起され得る。モノクローナル抗体は、所望の抗体を分泌してい
る細胞から調製する。これらの抗体は、正常または欠損ＩＬ−Ｂ３０に対する結
合についてスクリーニングされ得、またはアゴニストまたはアンタゴニスト活性
（例えば、レセプターで媒介された）についてスクリーニングされ得る。抗体は
、アゴニストまたはアンタゴニスト（例えば、レセプターに対する結合を立体的
にブロックすることによって）であり得る。これらのモノクローナル抗体は、通
常、少なくともＫ_D約１ｍＭで、より通常は少なくとも約３００μＭで、代表的 には少なくとも約１００μＭで、より代表的には少なくとも約３０μＭで、好ま
しくは、少なくとも約１０μＭで、より好ましくは少なくとも約３μＭで、また
はより強力に結合する。

【００６２】 この発明の抗体はまた、診断的適用においても有用であり得る。捕捉または非
中和抗体として、それらは、レセプターとの結合を阻害することなく、抗原と結
合する能力についてスクリーニングされ得る。中和抗体として、それらは、競合
的結合アッセイに有用であり得る。それらはまた、ＩＬ−Ｂ３０タンパク質また
はそのレセプターの検出または定量において有用である。例えば、Ｃｈａｎ （
１９８７年編）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ、
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｒｌａｎｄｏ、ＦＬ； Ｐｒｉｃｅ ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ（１９９１年編）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉ
ｃｅ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ
；およびＮｇｏ（１９８８年編）Ｎｏｎｉｓｏｔｏｐｉｃ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓ
ａｙ、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ、Ｙを参照のこと。交差吸収または他の試
験は、様々なスペクトルの特異性（例えば、独特または共有の種特異性）を示す
抗体を同定する。

【００６３】 さらに、この発明の抗体（抗原を結合するフラグメントを含む）は、抗原に対
して結合し、そして機能的結合を阻害する（例えば、生物学的応答を誘発し得る
レセプターに対して）強力なアンタゴニストであり得る。それらはまた、非中和
抗体として有用であり得、そして毒素または放射性核種と結合され得、その結果
、この抗体が抗原と結合したとき、それを発現している（例えば、表面で）細胞
は、死滅する。さらに、これらの抗体は、薬剤または他の治療剤と直接またはリ
ンカーの手法によって間接にのいずれかで結合され得、そして薬剤標的化を達成
し得る。

【００６４】 抗原フラグメントは、免疫原として使用されるべき融合または共有結合したポ
リペプチドとして他の物質、特にポリペプチドと結合し得る。抗原とそのフラグ
メントは、様々な免疫原（キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブ
ミン、破傷風毒素など）と融合または共有結合し得る。ポリクローナル抗血清調
製法の説明については、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｏｅｂｅｒ Ｍｅｄｉｃ
ａｌ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、Ｈａｒｐｅｒ ａｎｄ Ｒｏｗ １９６９； Ｌａｎ
ｄｓｔｅｉｎｅｒ （１９６２）Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｓｅｒｏｌｏ
ｇｉｃａｌ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、Ｄｏｖｅｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ； Ｗｉｌｌｉａｍｓら（１９６７）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ｖｏｌ．１、
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＨａｒｌｏｗ およ
び Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ を参照のこと。

【００６５】 いくつかの例で、様々な哺乳動物宿主（例えば、ネズミ、げっ歯動物、霊長類
、ヒトなど）からモノクローナル抗体を調製することが望ましい。そのようなモ
ノクローナル抗体を調製するための技術の記載は、例えば、Ｓｔｉｔｅｓら編、
Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （第４版）、
Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ
、ＣＡ、ならびにそこに記載された参考文献；Ｈａｒｌｏｗ および Ｌａｎｅ
（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ； Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ （第
２版）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；および特に、Ｋｏ
ｈｌｅｒ および Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９
５−４９７（これは、モノクローナル抗体生成の１方法を議論する）に認められ
得る。

【００６６】 他の適切な技術は、インビトロで抗原ポリペプチドに対するリンパ球の暴露、
あるいはファージまたは同様のベクターにおける抗体ライブラリーの選抜に対す
るリンパ球の暴露を含む。Ｈｕｓｅら（１９８９）「λファージのイムノグロブ リンレパートリーの大きなコンビナトリアルライブラリーの生成」、Ｓｃｉｅｎ ｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；およびＷａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕ
ｒｅ ３４１：５４４−５４６を参照のこと。本発明のポリペプチドおよび抗体
は、修飾してまたはしないで使用され得、これらはキメラまたはヒト化した抗体
を含む。度々、このポリペプチドと抗体は、共有結合または非共有結合のいずれ
かで検出可能なシグナルを提供する物質との結合によってラベルされる。広範囲
の様々なラベルおよび結合技術は、公知でありそして広く科学および特許文献双
方に報告されている。適切なラベルは、放射性核種、酵素、基質、コファクター
、インヒビター、蛍光部分、化学発光部分、磁気粒子などを含む。そのようなラ
ベルの使用を教示する特許は米国特許第３,８１７,８３７、３,８５０,７５２、
３,９３９,３５０、３,９９６,３４５、４,２７７,４３７、４,２７５,１４９お
よび４,３６６,２４１号を含む。組換えイムノグロブリンもまた作製され得る。
Ｃａｂｉｌｌｙ、 米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｏｒｅら、米国特許
第４，６４２，３３４号；およびＱｕｅｅｎら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’
ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３を参照のこと。

【００６７】 この発明の抗体は、タンパク質単離においてアフィニティークロマトグラフィ
ーにもまた使用し得る。この抗体が個体支持物と結合されたカラムは、調製され
得る。例えば、Ｗｉｌｃｈｅｋら（１９８４）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１０
４：３−５５を参照のこと。

【００６８】 各々のＩＬ−Ｂ３０に対して惹起された抗体はまた、抗イデオタイプ抗体を惹
起するために有用である。これらは、それぞれの抗原の発現に関する様々な免疫
学的状態の検出または診断において有用である。

【００６９】 （ＶＩ．核酸） 記載されたペプチド配列および関連試薬は、（例えば、天然源から）ＩＬ−Ｂ
３０をコードしているＤＮＡクローンの検出、単離または同定に有用である。代
表的には、それは、哺乳動物から遺伝子を単離するのに有用であり、そして、同
様の手法が他種（例えば、トリおよび哺乳動物のような温血動物）から遺伝子を
単離するのに適用される。交差ハイブリダイゼーションによって、同じものから
ＩＬ−Ｂ３０（例えば、多型改変体または他種）の単離がなされ得る。多くの異
なったアプローチが首尾よく適切な核酸クローンを単離するため使用できる。

【００７０】 この精製されたタンパク質または現定されたペプチドは、上に記載したように
標準方法による抗体生成に有用である。合成ペプチドまたは精製タンパク質は、
免疫系に対して呈示されて、モノクローナルまたはポリクローナル抗体を生成を
し得る。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ/Ｇｒｅｅｎｅ；およびＨａｒ ｌｏｗ および Ｌａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓ
ｓを参照のこと。

【００７１】 例えば、この特定の結合組成物は、ＩＬ−Ｂ３０を発現する細胞株から作製さ
れた発現ライブラリーのスクリーニングに使用され得る。細胞内発現のスクリー
ニングは、様々な染色または免疫蛍光法によって成し遂げ得る。結合組成物は、
表面融合タンパク質を発現している細胞をアフィニティ精製、または選択するた
めに使用され得る。

【００７２】 このペプチドセグメントはまた、ライブラリーをスクリーニングするために適
当なオリゴヌクレオチドを予想するために使用し得る。この遺伝コードは、スク
リーニングのプローブとして有用な適当なオリゴヌクレオチドを選択するのに使
用し得る。例えば、配列番号１を参照のこと。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）
技術を組み合わせて、合成オリゴヌクレオチドは、ライブラリーから正しいクロ
ーンを選択するのに有用である。相補的配列もまた、プローブ、プライマーまた
はアンチセンス鎖として使用され得る。例えば、アンカー化されたベクターまた
はポリ−Ａ相補的ＰＣＲ技術、または他のペプチドの相補的ＤＮＡと結合した様
々なフラグメントが、特に有用であるはずである。

【００７３】 この発明は、生物学的に活性を有する対応したＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド（特
に、記載された配列の非翻訳５’部分をコードする部分が欠如しているポリペプ
チド）をコードする単離ＤＮＡまたはフラグメントの使用を意図する。加えて、
この発明は、生物学的活性を有するタンパク質またはポリペプチドをコードし、
そして本明細書に記載されたＤＮＡ配列と適当な条件下でハイブリダイズし得る
単離された、または組換えのＤＮＡを包含する。該生物学的活性タンパク質また
はポリペプチドは、インタクトな抗原またはフラグメントであり得、そして、例
えば、配列番号２で開示されたアミノ酸配列（特に、成熟、分泌ポリペプチド）
を有する。さらに、この発明は、単離されたまたは組換えＤＮＡ、またはそのフ
ラグメントの使用を包含し、これらは分泌されたＩＬ−Ｂ３０と高いアイデンテ
ィティーを示すタンパク質をコードする。この単離されたＤＮＡは、５’および
３’側面にそれぞれの調節配列を有し得る（例えば、プロモーター、エンハンサ
ー、ポリ−Ａ付加シグナルなど）。あるいは、発現は、コードセグメントの異種
プロモーターへの作動可能な結合によって（例えば、内因性遺伝子の上流へのプ
ロモーターの挿入によって）達成され得る。

【００７４】 「単離された」核酸は、例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、または混合したポリマーのよ
うな核酸である（これは、ネイティブな配列を天然に伴うほかの成分、（例えば
、元の種由来のリボゾーム、ポリメラーゼ、および/または隣接ゲノム配列）か ら実質的に分離される）。この用語は、その自然に存在する環境から取り出され
た核酸配列を包含し、そして組換えまたはクローン化されたＤＮＡ単離物および
化学的に合成されたアナログまたは異種系によって生物学的に合成されたアナロ
グを含む。実質的に、純粋な分子は、その分子の単離された形態を含む。一般に
、この核酸は、約５０Ｋｂ未満、普通は約３０ｋｂ未満、代表的には、約１０ｋ
ｂ未満、そして好ましくは約６ｋｂ未満のベクターまたはフラグメントである。

【００７５】 単離された核酸は、一般的に、分子の均質な組成物であるが、いくつかの実施
態様において、わずかな異種性を含む。この異種性は、代表的に、所望の生物学
的機能または活性に重要でないこのポリマーの末端、または部分に認められる。

【００７６】 「組換え」核酸は、その産生の方法または構造のどちらかによって規定される。
その産生法（例えば、ある方法により作製される産物）に対する文献で、この方
法は、例えば、ヌクレオチド配列におけるヒト介入を含む組換え核酸技術（代表
的には、選抜または生成を含む）の利用である。あるいは、この方法は、お互い
天然には連続しないが、天然の産物、例えば、天然に存在する変異体を除外する
２つのフラグメントの融合を含む配列の生成により作られる核酸であり得る。こ
のように、例えば、任意の天然に存在しないベクター（合成オリゴヌクレオチド
法を使用して得られる配列を含む核酸のような）で細胞を形質転換することによ
って作られる産物が含まれる。そのような方法は、あるコドンを同じかまたは保
存的アミノ酸をコードしている重複なコドンに置き換えるためにしばしばなされ
る。一方、代表的に配列認識部位の導入または除去をすることについてもなされ
ている。

【００７７】 あるいは、単一の遺伝実体を生成するための所望機能の核酸セグメントをとも
に結合することもなされている。この遺伝的実体は、通常利用できる天然形態で
は見出されない機能の所望の組み合わせを含む。制限酵素認識部位は、しばしば
、そのような人工操作の標的である。しかし、他の部位特定標的（例えば、プロ
モーター、ＤＮＡ複製部位、調節配列、制御配列または他の有用な機能）が、設
計によって組み込まれ得る。同様の概念が組換え体（例えば、融合物、ポリペプ
チド）のため意図される。具体的に含まれるのは、遺伝コードの重複性によりこ
れらの抗原のフラグメントと類似したポリペプチドをコードする合成核酸、およ
び様々な異なる種または多型改変体由来の配列融合物である。

【００７８】 核酸の文脈で、重要な「フラグメント」とは、少なくとも約１７ヌクレオチドの
連続したセグメントであり、一般に、少なくとも約２２ヌクレオチド、通常、少
なくとも約２９ヌクレオチド、よりしばしば、少なくとも３５ヌクレオチド、代
表的に、少なくとも約４１ヌクレオチド、通常、少なくとも約４７ヌクレオチド
、好ましくは、少なくとも約５５ヌクレオチド、そして特に好ましい実施態様で
は少なくとも約６０またはそれ以上のヌクレオチド（例えば、６７、７３、８１
、８９、９５など）である。

【００７９】 ＩＬ−Ｂ３０タンパク質をコードするＤＮＡは、特に、遺伝子、関連したまた
は類似のタンパク質ｍＲＮＡおよびｃＤＮＡ種、ならびに異種からの相同性タン
パク質をコードするＤＮＡを同定するのに有用である。霊長類、げっ歯動物、イ
ヌ、ネコおよびトリを含む他種で相同体が存在する。様々なＩＬ−Ｂ３０タンパ
ク質は相同体であるべきであり、本明細書に含まれる。しかし、この抗原とより
遠い進化関係にあるタンパク質でさえ、それらが十分な相同性を持つならばこれ
らの配列を使用して適切な条件で容易に単離され得る。霊長類ＩＬ−Ｂ３０タン
パク質が特に目的のタンパク質である。

【００８０】 ゲノム配列（例えば、イントロンを含んだもの）由来の組換えクローンは、ト
ランスジェニック研究（例えば、トランスジェニック細胞およびトランスジェニ
ック生物体を含む）および遺伝子治療に有用である。例えば、Ｇｏｏｄｎｏｗ（
１９９２）「Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ａｎｉｍａｌｓ」 Ｒｏｉｔｔ編、Ｅｎｃｙ
ｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、１５０２−１５０４頁、 Ｔｒａｖｉｓ（１９９２）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１３９２−１３９４、Ｋｕｈｎら（１９９１）Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２５４：７０７−７１０、Ｃａｐｅｃｃｉ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２４４：１２８８、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ（１９８７年編）Ｔｅｒａｔｏｃａ
ｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ａ
Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、
およびＲｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９９２）Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ．Ｏｎｃｏｌｏｇ
ｙ １０：１８０−１９９を参照のこと。

【００８１】 実質的な相同性（例えば、同一性）とは、核酸配列の比較文脈において、セグ
メントまたはこれらの相補鎖が、比較した場合、適当なヌクレオチド挿入または
欠失で最適に整列化されると、少なくとも約５０％のヌクレオチドで同一であり
、一般に、少なくとも約５８％、通常、少なくとも約６５％、たびたび、少なく
とも約７１％、代表的に、少なくとも約７７％、通常、少なくとも約８５％、好
ましくは、少なくとも約９５〜９８％またはそれ以上、そして特定の実施態様で
は約９９％と同等またはそれ以上のヌクレオチドで同一であることが意味される
。あるいは、実質的な相同性は、代表的には、ＩＬ−Ｂ３０の配列（例えば、配
列番号１）を使用して、このセグメントが選ばれたハイブリダイゼーション条件
下で、ある鎖、またはその補体に対してハイブリダイズしたときに存在する。代
表的に、選抜ハイブリダイゼーションは、少なくとも約３０ヌクレオチドの範囲
にわたって少なくとも約５５％、好ましくは、約２５ヌクレオチドの範囲にわた
って少なくとも約７５％、そして、最も好ましくは、約２０ヌクレオチドにわた
って少なくとも約９０％で存在する場合に生じる。Ｋａｎｅｈｉｓａ（１９８４
）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２：２０３−２１３を参照のこと。同一性比
較の長さは、記載されているように、より長い範囲にわたり得る。そして、特定
の実施態様では、少なくとも約１７ヌクレオチド、通常は、少なくとも約２８ヌ
クレオチド、代表的に、少なくとも約４０ヌクレオチド、そして好ましくは、少
なくとも約７５〜１００またはそれ以上のヌクレオチドの範囲にわたり得る。

【００８２】 このハイブリダイゼーションの文脈での相同性に関して、ストリンジェントな
条件は、塩、温度、有機溶媒および他のパラメーターのストリンジェントに組み
合わされた条件であり、代表的には、それらはハイブリダイゼーション反応を制
御する。ストリンジェントな温度条件は普通、約３０℃以上の温度を含み、通常
、約３７℃以上、代表的に、約５５℃以上、好ましくは、約７０℃以上の温度を
含む。厳密な塩条件は、通常、約１０００ｍＭより低く、普通、約４００ｍＭよ
り低く、代表的に、約２５０ｍＭより低く、好ましくは約１５０ｍＭより低い（
約１００、５０、または２０ｍＭでさえも含む）。しかし、このパラメーターの
組み合わせは、任意の単一パラメーターの測定よりはるかに重要である。例えば
、Ｗｅｔｍｕｒ ａｎｄ Ｄａｖｉｄｓｏｎ（１９６８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．３１：３４９−３７０を参照のこと。ストリンジェントな条件下のハイブリダ
イゼーションは、少なくともバックグラウンドの２倍を超えるようなバックグラ
ウンドを与え、好ましくは少なくとも３〜５倍またはそれ以上であるバックグラ
ウンドを与える。

【００８３】 配列比較のために、代表的には、１つの配列が参照配列として作用し、それに
対して試験配列が比較される。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列
および参照配列がコンピューターに入力され、必要な場合には、サブ配列座標が
指定され、そして、配列アルゴリズムプログラムパラメーターが指定される。次
いで、配列比較アルゴリズムは、その指定されたプログラムパラメーターに基づ
いて、試験配列について、参照配列に対する配列同一性パーセントを計算する。

【００８４】 比較のための配列の視覚的なアライメントは、例えば、ＳｍｉｔｈおよびＷａ
ｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２の局所相同
性アルゴリズムによってか、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（１９７０
）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズムに
よって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似性検索法によってか、これ
らのアルゴリズムのコンピューター化された実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎ
ｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐ
ｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗ
ＩのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によってか、
または、視覚的検査（一般的には、Ａｕｓｕｂｅｌら、前出を参照のこと）によ
って、行われ得る。

【００８５】 有用なアルゴリズムの１つの例は、ＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、漸
進的な、ペアをつくるアラインメントを用いて、関連する配列の群から複数の配
列アラインメントを作成し、関連性および配列同一性パーセントを示す。それは
また、アラインメントを作成するために使用されるクラスター化の関連性を示す
系図または系統図をプロットする。ＰＩＬＥＵＰは、ＦｅｎｇおよびＤｏｏｌｉ
ｔｔｌｅ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１−３６０の漸進的ア
ラインメント法の単純化したものを使用する。使用される方法は、Ｈｉｇｇｉｎ
ｓおよびＳｈａｒｐ（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１−１５３によって記
載される方法に類似する。そのプログラムは、３００までの配列をアラインし得
、それぞれの最大長は５０００ヌクレオチドまたは５０００アミノ酸である。複
数のアラインメント手順は、２つの最も類似の配列のペアをつくるアラインメン
トで開始し、２つのアラインされた配列のクラスターを生成する。次いで、この
クラスターは、次に最も関連する配列またはアラインされた配列のクラスターに
アラインされる。配列の２つのクラスターは、２つの個々の配列のペアをつくる
アラインメントの単純な拡張によってアラインされる。最終的なアラインメント
は、一連の漸進的な、ペアをつくるアラインメントによって達成される。プログ
ラムは、配列比較の領域に、特定の配列、およびそれらのアミノ酸またはヌクレ
オチド座標を指定すること、ならびにプログラムパラメーターを指定することに
よって実行される。例えば、参照配列は、他の試験配列と比較され得、以下のパ
ラメーター：デフォルトギャップ重み（３．００）、デフォルトギャップ長重み
（０．１０）、および重みを付けた末端ギャップを用いて配列同一性関係のパー
セントを決定する。

【００８６】 配列同一性パーセントおよび配列類似性パーセントを決定するのに適切な別の
アルゴリズムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．２１５：４０３−４１０に記載されるＢＬＡＳＴアルゴリズムである。ＢＬＡ
ＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、国立バイオテクノロジー情報センタ
ー（ｈｔｔｐ：ＷＷＷ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．／）を通して公的
に利用可能である。このアルゴリズムは、問合せ配列中の長さＷの短いワード（
ｗｏｒｄ）を同定することによって、最初にハイスコア配列ペア（ＨＳＰｓ）を
同定することを含み、その短いワードはデータベース配列中の同じ長さのワード
とアラインされた場合に、ある正の値の閾値スコアＴに一致するか、または満足
するかのいずれかである。Ｔとは、隣接するワードスコア閾値という（Ａｌｔｓ
ｃｈｕｌら、前出）。これらの最初の隣接するワードの一致は、それらを含むよ
り長いＨＳＰを見出すための検索の開始のための種（ｓｅｅｄｓ）として作用す
る。次いで、そのワードの一致は、累積のアラインメントスコアが増加され得る
限りは、各々の配列に沿って、両方の方向に伸長される。各々の方向におけるワ
ードの一致の伸長は、以下の場合に停止する：累積のアラインメントスコアがそ
の達成された最大値から量Ｘだけ低下した場合；１つ以上のネガティブスコアの
残基アラインメントの蓄積によって、その累積スコアがゼロ以下になった場合；
または、いずれかの配列の末端に到達した場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメ
ーターＷ、Ｔ、およびＸは、アラインメントの感度および速度を決定する。ＢＬ
ＡＳＴプログラムは、ワード長（Ｗ）１１、ＢＬＯＳＵＭ６２スコア付けマトリ
ックス（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５を参照のこと）、アライ
ンメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝４、および両方の鎖の比
較を、デフォルトとして使用する。

【００８７】 配列同一性パーセントを計算するのに加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた
、２つの配列の間の類似性の統計学的な分析を行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎおよ
びＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ９０：５８７３−５７８７を参照のこと）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによ
って提供される類似性の１つの測定は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これ
は、２つのヌクレオチド間またはアミノ酸配列の間の偶然に生ずる一致の確率の
表示を提供する。例えば、核酸は、試験核酸の、参照核酸との比較における最小
合計確率が、約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、そして最も好まし
くは約０．００１未満である場合に、参照配列に類似であるとみなされる。

【００８８】 ポリペプチドの２つの核酸配列が実質的に同一であるということのさらなる指
標は、第１の核酸によってコードされるポリペプチドが、以下に示すように、第
２の核酸によってコードされるポリペプチドと免疫学的に交差反応性であること
である。従って、ポリペプチドは、代表的には、例えば、２つのポリペプチドが
保存的置換によってのみ異なる場合に、第２のポリペプチドに実質的に同一であ
る。２つの核酸配列が実質的に同一であることの別の指標は、その２つの分子が
、以下に記載するように、ストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズす
ることである。

【００８９】 他の哺乳動物種由来のＩＬ−Ｂ３０は、密接に関連する種の種間（ｃｒｏｓｓ
−ｓｐｅｃｉｅｓ）ハイブリダイゼーションによってクローニングされ、そして
単離され得る。相同性は、関連性が遠い種間では相対的に低くなり得、従って、
相対的に密接に関連する種のハイブリダイゼーションが、望ましい。あるいは、
種特異性がより低い抗体調製物の調製は、発現クローニングアプローチにおいて
有用であり得る。

【００９０】 （ＶＩＩ．ＩＬ−Ｂ３０；模倣物の作製） ＩＬ−Ｂ３０またはそのフラグメントをコードするＤＮＡは、化学合成、ｃＤ
ＮＡライブラリーのスクリーニング、または広範な種々の細胞株または組織サン
プルから調製されたゲノムライブラリーのスクリーニングによって得られ得る。
例えば、ＯｋａｙａｍａおよびＢｅｒｇ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ
ｌ．２：１６１−１７０；ＧｕｂｌｅｒおよびＨｏｆｆｍａｎ（１９８３）Ｇｅ
ｎｅ ２５：２６３−２６９；およびＧｌｏｖｅｒ（編 １９８４）ＤＮＡ Ｃ
ｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓ
ｓ，Ｏｘｆｏｒｄを参照のこと。あるいは、本明細書中で提供される配列は、有
用なＰＣＲプライマーを提供するか、またはＩＬ−Ｂ３０をコードする適切な遺
伝子の合成的調製もしくは他の調製を可能にする（天然に生ずる実施態様を含む
）。

【００９１】 このＤＮＡは、全長ＩＬ−Ｂ３０またはフラグメント（これは次には、例えば
、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を生成するために使用され得る）の
合成のために；結合研究のために；改変分子の構築および発現のために；および
、構造機能研究のために、広範な種々の宿主細胞中で発現され得る。

【００９２】 本明細書で使用されるベクターは、プラスミド、ウイルス、バクテリオファー
ジ、組込み可能ＤＮＡフラグメント、および宿主のゲノムへのＤＮＡフラグメン
トの組込みを可能にする他のビヒクルを含む。例えば、Ｐｏｕｗｅｌｓら、（１
９８５および補遺）Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．；およびＲｏｄｒｉｇｕｅｚら
、（１９８８）（編）Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ，Ｂ
ｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡを参照のこと。

【００９３】 本発明の目的のために、ＤＮＡ配列は、それらが互いに機能的に関連する場合
に、作動可能に連結される。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、
プレタンパク質として発現される場合、またはポリペプチドを細胞膜へ方向付け
ることもしくはポリペプチドの分泌に関与する場合に、ポリペプチドに作動可能
に連結される。プロモーターは、ポリペプチドの転写を制御する場合に、コード
配列に作動可能に連結される；リボソーム結合部位は、翻訳を可能にするように
配置される場合に、コード配列に作動可能に連結される。通常は、作動可能な連
結は、連続的で、そしてリーディングフレームにあることを意味するが、リプレ
ッサー遺伝子のような特定の遺伝子エレメントは、連続して連結されていないが
、なおオペレーター配列に結合して、これは次には発現を制御する。例えば、Ｒ
ｏｄｒｉｇｕｅｚら、第１０章、２０５−２３６頁；ＢａｌｂａｓおよびＢｏｌ
ｉｖａｒ（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５：
１４−３７；およびＡｕｓｕｂｅｌら、（１９９３）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔ
ｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ ａｎ
ｄ Ｗｉｌｅｙ，ＮＹを参照のこと。

【００９４】 適切な発現ベクターの代表的な例は、ｐＣＤＮＡ１；ｐＣＤ（Ｏｋａｙａｍａ
ら、（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１１３６−１１４２を参照
のこと）；ｐＭＣ１ｎｅｏ Ｐｏｌｙ−Ａ（Ｔｈｏｍａｓら、（１９８７）Ｃｅ
ｌｌ ５１：５０３−５１２を参照のこと）；およびｐＡＣ３７３またはｐＡＣ
６１０のようなバキュロウイルスベクター（例えば、Ｍｉｌｌｅｒ（１９８８）
Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４２：１７７−１９９を参照のこと）を
含む。

【００９５】 特定のまたは規定されたグリコシル化パターンを提供する系で、ＩＬ−Ｂ３０
ポリペプチドを発現させることがしばしば所望される。例えば、Ｌｕｃｋｏｗお
よびＳｕｍｍｅｒｓ（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：４７−５
５；ならびにＫａｕｆｍａｎ（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８５：
４８７−５１１を参照のこと。

【００９６】 ＩＬ−Ｂ３０またはそのフラグメントは、細胞膜に、ホスファチジルイノシト
ール（ＰＩ）結合されるように操作され得るが、ホスファチジルイノシトール切
断酵素（例えば、ホスファチジルイノシトールホスホリパーゼＣ）を用いる処理
によって膜から除去され得る。これにより抗原が生物学的に活性な形態で放出さ
れ、そしてタンパク質化学の標準的な手順による精製が可能になる。例えば、Ｌ
ｏｗら、（１９８９）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ９８８：４
２７−４５４；Ｔｓｅら、（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１００３−１
００８；およびＢｒｕｎｎｅｒら、（１９９１）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１
４：１２７５−１２８３を参照のこと。

【００９７】 ＩＬ−Ｂ３０が特徴付けされたので、そのフラグメントまたは誘導体が、ペプ
チドを合成するための従来のプロセスによって調製され得る。これらには、Ｓｔ
ｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ（１９８４）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉ
ｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｒｏｃ
ｋｆｏｒｄ，ＩＬ；ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＢｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）
Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒ
ｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４
）Ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＶｉｌｌａｆｒ
ａｎｃａ（編 １９９１）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ ＩＩ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，
Ｃａにおいて記載されるようなプロセスが含まれる。

【００９８】 （ＶＩＩＩ．使用） 本発明は、本明細書中の別の箇所で記載される診断的適用において（例えば、
ＩＬ−Ｂ３０媒介状態において）、または以下の診断のためのキットの記載にお
いて、使用を見出す試薬を提供する。その遺伝子は、法医科学において、例えば
、げっ歯類をヒトから区別するために、または、ディファレンシャルな発現もし
くは修飾パターンを示す異なる細胞間を区別するためのマーカーとして、有用で
ある。

【００９９】 本発明はまた、顕著な商業的および／または治療的可能性を有する試薬を提供
する。ＩＬ−Ｂ３０（天然に生じたものまたは組換え体）、そのフラグメント、
およびそれに対する抗体ならびにＩＬ−Ｂ３０に対する結合アフィニティーを有
するとして同定された化合物は、分子生物学、免疫学、または生理学の教育技術
のための試薬として有用であるはずである。適切なキットは、例えば、タンパク
質、抗体、クローニング方法、組織学などの産生または使用における実践的な実
験室での演習において、その試薬を用いて調製され得る。

【０１００】 その試薬はまた、異常な生理または発生に関連する状態（炎症状態を含む）の
処置において有用である。それらは、相互作用する成分の存在または非存在につ
いてのインビトロ試験において有用であり得、これは、特定の処置ストラテジー
の成功と相関し得る。特に、種々の細胞（例えば、造血細胞またはリンパ球）の
生理の調整は、本明細書中で提供される組成物を用いる処置のための適切な方法
によって達成される。例えば、Ｔｈｏｍｓｏｎ（１９９４；編）Ｔｈｅ Ｃｙｔ
ｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第２版）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａ
ｎ Ｄｉｅｇｏ；ＭｅｔｃａｌｆおよびＮｉｃｏｌａ（１９９５）Ｔｈｅ Ｈｅ
ｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏ
ｒｓ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；ならびに、Ａ
ｇｇａｒｗａｌおよびＧｕｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋ
ｉｎｅｓ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂ．を参照のこと。

【０１０１】 例えば、ＩＬ−Ｂ３０による異常な発現または異常なシグナリングに関連する
疾患または障害は、アゴニストまたはアンタゴニストの適当な標的であるようで
ある。新規なサイトカインは、造血細胞、例えば、リンパ球（例えば、炎症およ
び／または自己免疫障害のような、免疫学的応答に影響を与える）の調節または
発生において役割を演じるはずである。あるいは、それは血管の生理または発生
、あるいは神経細胞の効果に影響を与え得る。

【０１０２】 特に、サイトカインは、種々の状況において、細胞によるサイトカイン合成、
増殖などを媒介するはずである。ＩＬ−Ｂ３０のアンタゴニスト（例えば、ＩＬ
−Ｂ３０の天然に生ずる形態のムテイン変異体、またはブロッキング抗体）は、
例えば、炎症または自己免疫応答のような状況において、免疫応答をブロックす
るための選択的かつ強力な方法を提供し得る。Ｓａｍｔｅｒら、（編）Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ 第１巻および第２巻、Ｌｉｔｔｌｅ，
Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏ．もまた参照のこと。

【０１０３】 さらに、特定の（例えば、炎症の他の修飾因子との）組合せ組成物が有用であ
る。このような他の分子は、ステロイド、ＩＬ−６および／またはＧ−ＣＳＦの
他のバージョン（種変異体またはウイルスホモログを含む）、ならびにそれらの
それぞれのアンタゴニストを含み得る。

【０１０４】 ノーザンブロット分析によってＩＬ−Ｂ３０ ｍＲＮＡを産生することが示さ
れている細胞型のそれぞれにおいて、種々の異常な状態が知られている。Ｂｅｒ
ｋｏｗ（編）Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ
ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．；
Ｔｈｏｒｎら、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅ
ｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎ．Ｙ．；およびＷｅ
ａｔｈｅｒａｌｌら、（編）Ｏｘｆｏｒｄ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｅｄｉ
ｃｉｎｅ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄを
参照のこと。多くの他の医学的状態および疾患は、マクロファージまたは単球に
よる活性化を含み、そしてこれらの多くは、本明細書中に提供されるアゴニスト
またはアンタゴニストによる処置に対して応答性である。例えば、Ｓｔｉｔｅｓ
およびＴｅｒｒ（編；１９９１）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ Ａｐｐｅｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ
，Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ；およびＳａｍｔｅｒら、（編）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏ．を参
照のこと。これらの問題は、本明細書中に提供される組成物を使用する予防また
は処置に感受性であるはずである。膵島局在化は、糖尿病に対する関連性の可能
性を示唆する。

【０１０５】 ＩＬ−Ｂ３０、アンタゴニスト、抗体などは、精製され得、次いで患者（獣医
学的な、またはヒトの患者）に投与され得る。これらの試薬は、治療的使用のた
めに、従来の薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤（例えば、免疫原性アジ
ュバント）中で、さらなる活性または不活性成分、ならびに例えば、生理学的に
無害な安定化剤、賦形剤、または保存剤と組合せられ得る。これらの組合せは、
滅菌ろ過され得、そして用量バイアル中での凍結乾燥により用量形態にされるか
、または安定化された水性調製物中で保存され得る。本発明はまた、補体結合で
ない形態を含む、抗体またはその結合フラグメントの使用を意図する。

【０１０６】 ＩＬ−Ｂ３０またはそのフラグメントを用いる薬物スクリーニングは、ＩＬ−
Ｂ３０に対する結合アフィニティーを有するか、またはＩＬ−Ｂ３０機能に対す
る他の関連する生物学的効果（関連する成分の単離を含む）を有する化合物の同
定のために行われ得る。次いで、引き続く生物学的アッセイは、その化合物が内
因性の刺激活性を有し、そして、それゆえに、サイトカインの活性をブロックす
るという意味において、それがブロッカーまたはアンタゴニストであるかを決定
するために使用され得る。同様に、内因性刺激活性を有する化合物は、シグナル
経路を活性化し得、従ってそれがＩＬ−Ｂ３０の活性を刺激するという意味にお
いて、アゴニストである。本発明はさらに、アンタゴニストとしてＩＬ−Ｂ３０
に対するブロッキング抗体の治療的使用、およびアゴニストとしての刺激抗体の
治療的使用を意図する。このアプローチは、他のＩＬ−Ｂ３０種変異体を用いて
、特に有用であるはずである。

【０１０７】 効果的な治療に必要な試薬の量は、投与の手段、標的部位、患者の生理学的状
態、および投与される他の医薬を含む、多くの異なる因子に依存する。従って、
処置用量は、安全性および有効性を最適化するように滴定すべきである。代表的
には、インビトロで使用される用量は、これらの試薬のインサイチュ投与のため
の有効量に関する有用な手引き（ｇｕｉｄａｎｃｅ）を提供し得る。特定の障害
の処置のための有効用量の動物試験は、ヒト用量のさらなる予測的指標を提供す
る。種々の考慮が、例えば、Ｇｉｌｍａｎら（編 １９９０）Ｇｏｏｄｍａｎお
よびＧｉｌｍａｎ’ｓ： Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅ
ｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第８版，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ
； およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ， 第１７版（１９９０），Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，
Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎに記載される。投与のための方法は、その中で議論され
、および以下の、例えば経口投与、静脈内投与、腹腔内投与、または筋内投与、
経皮拡散、およびその他について議論される。薬学的に受容可能なキャリアには
、例えば、Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ， Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ
， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙに記載されるような、水、生理食塩水、緩衝液および
他の化合物が含まれる。用量範囲は、適切なキャリアと共に、通常、１ｍＭの濃
度より低い量、代表的には約１０μＭ濃度未満、通常約１００ｎＭ未満、好まし
くは約１０ｐＭ（ピコモル）未満、そして最も好ましくは約１ｆＭ（フェムトモ
ル）未満になることが期待される。徐放処方物、または徐放装置が、連続投与ま
たは長期投与のためにしばしば利用される。例えば、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３を参照のこと。

【０１０８】 ＩＬ−Ｂ３０、そのフラグメント、およびそれに対する抗体またはそのフラグ
メント、アンタゴニストおよびアゴニストは、処置されるべき宿主に直接投与さ
れ得るか、または化合物の大きさに依存して、投与前に、卵白アルブミンまたは
血清アルブミンのようなキャリアタンパク質へ、これらを結合させることが所望
され得る。治療処方物は、多くの従来の用量処方物として投与され得る。活性成
分が単独で投与されることが可能である場合、これを薬学的処方物として提示す
ることが好ましい。代表的には、処方物は、上記で定義されるような、それらの
１つ以上の受容可能なキャリアと共に、少なくとも１つの活性成分を含む。各キ
ャリアは、他の成分と適合性であり、患者に対して無害であるという意味で、薬
学的および生理学的の両方で受容可能であるべきである。処方物には、経口投与
、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与（皮下、筋内、静脈内、皮
内を含む）に適切なものが含まれる。この処方物は、単位用量形態で都合よく提
供され得、そして薬学の分野で周知の任意の方法によって調製され得る。例えば
、Ｇｉｌｍａｎら（編 １９９０）ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔ
ｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕ
ｔｉｃｓ， 第８版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ； およびＲｅｍｉｎｇｔ
ｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版（１９
９０）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐｅｎ
ｎ．； Ａｖｉｓら（編 １９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａ
ｇｅ Ｆｏｒｍ： Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｄｅｋｋ
ｅｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ； Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、（編 １９９０）Ｐｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ， Ｄｅ
ｋｋｅｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＬｉｅｂｅｒｍａｎら（編 １９９０）
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｄｅｋｋｅｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。本発明の
治療は、他の薬剤（例えば、ＩＬ−６もしくはＧ−ＣＳＦ，またはこれらの対応
するアンタゴニストを含む、他のサイトカイン）と組み合わせて、または関連し
て使用され得る。

【０１０９】 天然に生じる形態および組換え形態の、本発明のＩＬ−Ｂ３０は、そのタンパ
ク質に対する結合活性について化合物をスクリーニングし得るキットおよびアッ
セイ方法において、特に有用である。自動化アッセイのいくつかの方法が、近年
において開発され、短時間での何万もの化合物のスクリーニングを可能にした。
例えば、Ｆｏｄｏｒら、（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７−７７３
（これは、固体基板上で合成される複数の規定されたポリマーによって結合アフ
ィニティーを試験するための手段を記載する）を参照のこと。適切なアッセイの
開発は、本発明によって提供されるような、大量の精製された可溶性ＩＬ−Ｂ３
０の利用可能性によって非常に促進され得る。

【０１１０】 他の方法は、ＩＬ−Ｂ３０−ＩＬ−Ｂ３０レセプター相互作用において重要な
残基を決定するために使用され得る。相互作用および／またはシグナリングにお
いて重要な特定の残基を決定するために、変異分析が行われ得る（例えば、Ｓｏ
ｍｏｚａら、（１９９３）Ｊ．Ｅｘｐｔｌ．Ｍｅｄ． １７８：５４９−５５８
）。ＰＨＤ（ＲｏｓｔおよびＳａｎｄｅｒ（１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １９
：５５−７２）およびＤＳＣ（ＫｉｎｇおよびＳｔｅｒｎｂｅｒｇ（１９９６）
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．５：２２９８−２３１０）は、α−へリックス（Ｈ）
、β−鎖（Ｅ）またはコイル（Ｌ）の二次構造予測を提供し得る。ヘリックスＡ
およびＤは、レセプター相互作用において最も重要であり、Ｄヘリックスは、よ
り重要な領域である。ヘリックスＡは、ヒトにおいておよそｐｒｏ（７）からｈ
ｉｓ（２７）までにわたり、一方へリックスＤは、およそｔｒｐ（１３５）から
ｇｌｙ（１６２）までにわたる。表面に露出した残基は、レセプター結合に影響
するが、一方埋め込まれた残基は一般的な構造に影響する。特定の重要性がある
予測残基は、ａｒｇ（１４６）、ｓｅｒ（１４７）、ｇｌｎ（１４９）、ａｌａ
（１５０）、ａｌａ（１５３）、ｖａｌ（１５４）、ａｌａ（１５６）、ａｒｇ
（１５７）、ａｌａ（１６０）、およびｈｉｓ（１６１）に対応するようである
。

【０１１１】 例えば、アンタゴニストは、一旦抗原が、例えば三次元構造データによって構
造的に定義されると、通常見出され得る。潜在的な相互作用アナログの試験は、
精製されたＩＬ−Ｂ３０を使用する高度に自動化されたアッセイ方法の開発によ
り、現在可能である。特に、新規なアゴニストおよびアンタゴニストは、本発明
中に記載されるスクリーニング技術を使用することによって発見される。特に重
要性のあるものは、ＩＬ−Ｂ３０分子のスペクトルについて、組合せた結合アフ
ィニティーを有することが見出された化合物、例えば、ＩＬ−Ｂ３０の種改変体
についてのアンタゴニストとして働き得る化合物である。

【０１１２】 薬物スクリーニングの１つの方法は、ＩＬ−Ｂ３０を発現する組換えＤＮＡ分
子を用いて安定に形質転換した、真核生物または原核生物宿主細胞を利用する。
ＩＬ−Ｂ３０を発現する細胞は、他の分子からの単離において、単離され得る。
このような細胞は、生存可能な形態または固定された形態のいずれかで、標準結
合パートナー結合アッセイのために使用され得る。Ｐａｒｃｅら、（１９８９）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：２４３−２４７；およびＯｗｉｃｋｉら、（１９９０
）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：４００７−４０
１１（これらは、細胞応答を検出するための感度のよい方法を記載する）もまた
参照のこと。

【０１１３】 薬物スクリーニングのための別の方法は、ＩＬ−Ｂ３０に対する適切な結合親
和性を有する化合物のためのハイスループットスクリーニングを提供するアプロ
ーチを含み、そしてＧｅｙｓｅｎ（１９８４年９月１３日に公開された、欧州特
許出願第８４／０３５６４号）において詳細に記載される。最初に、多数の異な
る小さなペプチド試験化合物は、固体基板（例えば、プラスチックピンまたはい
くつかの他の適切な表面）上で合成される（Ｆｏｄｏｒら、（１９９１）を参照
のこと）。次いで全てのピンは、可溶化された未精製のＩＬ−Ｂ３０または可溶
化された精製されたＩＬ−Ｂ３０と反応して、そして洗浄される。次の工程は、
結合したＩＬ−Ｂ３０の検出を含む。

【０１１４】 合理的な薬物設計はまた、ＩＬ−Ｂ３０および他のエフェクターまたはアナロ
グの分子形状の構造的研究に基づき得る。エフェクターは、結合に応答して他の
機能を媒介する他のタンパク質であり得るか、あるいはＩＬ−Ｂ３０と通常は反
応する他のタンパク質（例えば、レセプター）であり得る。特異的な他のタンパ
ク質と相互作用する部位を決定するための１つの手段は、物理的構造決定（例え
ば、Ｘ線結晶学または２次元ＮＭＲ技術）である。これらは、例えば、他のサイ
トカイン−レセプターモデルに対してモデル化される場合、どのアミノ酸残基が
分子接触領域を形成するかに関して、ガイダンスを提供する。タンパク質の構造
決定の詳細な説明については、例えば、ＢｌｕｎｄｅｌｌおよびＪｏｈｎｓｏｎ
（１９７６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ， Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。

【０１１５】 （ＩＸ．キット） 本発明はまた、別のＩＬ−Ｂ３０または結合パートナーの存在を検出するため
の種々の診断キットおよび方法における、ＩＬ−Ｂ３０タンパク質、それらのフ
ラグメント、ペプチド、およびそれらの融合産物の使用を意図する。代表的には
、このキットは、規定されたＩＬ−Ｂ３０ペプチドまたは遺伝子セグメント、あ
るいは、一方または他方（例えば、ＩＬ−Ｂ３０フラグメントまたは抗体）を認
識する試薬のいずれかを含む区画を有する。

【０１１６】 ＩＬ−Ｂ３０に対する試験化合物の結合能力を決定するためのキットは、代表
的には、試験化合物；標識化化合物（例えば、ＩＬ−Ｂ３０について既知の結合
親和性を有する結合パートナーまたは抗体）；ＩＬ−Ｂ３０の供給源（天然に存
在するかあるいは組換えの）；および遊離した標識化化合物から結合した標識化
化合物を分離するための手段（例えば、分子を固定するための固相）、を含む。
一旦化合物がスクリーニングされると、これらが、ＩＬ−Ｂ３０シグナル伝達経
路に対するアゴニストまたはアンタゴニストとして作用するかを決定するために
、抗原に対して適切な結合親和性を有する化合物を、当該分野で周知であるよう
な適切な生物学的アッセイにおいて評価し得る。組換えＩＬ−Ｂ３０ポリペプチ
ドの利用可能性はまた、このようなアッセイを較正するために十分に規定された
標準を提供する。

【０１１７】 例えば、サンプル中のＩＬ−Ｂ３０の濃度を決定するための好ましいキットは
、代表的には、標識化化合物（例えば、抗原について既知の結合親和性を有する
結合パートナーまたは抗体）、サイトカインの供給源（天然に存在するかまたは
組換えの）および遊離した標識化化合物から結合した標識化化合物を分離するた
めの手段（例えば、ＩＬ−Ｂ３０を固定化するための固相）を含む。試薬および
取扱い説明書を含む区画は、通常は提供される。

【０１１８】 ＩＬ−Ｂ３０またはフラグメントに特異的な抗原結合フラグメントを含む抗体
は、上昇したレベルのＩＬ−Ｂ３０および／またはそのフラグメントの存在を検
出するための診断適用に有用である。このような診断アッセイは、溶解物、生存
細胞、固定化細胞、免疫蛍光法、細胞培養、体液を使用し得、そして血清などに
おける抗原に関連する抗原の検出を含み得る。診断アッセイは、均質（遊離した
試薬と抗原結合パートナー複合体との間の分離工程なしで）であるか、または不
均一（分離工程を用いる）であり得る。種々の市販のアッセイキットには、例え
ば、放射免疫測定（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、酵素免
疫法（ＥＩＡ）、酵素増幅免疫アッセイ技術（ＥＭＩＴ）、基質標識蛍光免疫ア
ッセイ（ＳＬＦＩＡ）などがある。例えば、Ｖａｎ Ｖｕｎａｋｉｓら（１９８
０）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ．７０：１−５２５；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎ
ｅ（１９８０）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ， ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ； およびＣｏｌｉｇａｎら（編 １９９
３）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、 Ｇ
ｒｅｅｎｅおよびＷｉｌｅｙ，ＮＹを参照のこと。

【０１１９】 抗イデオタイプ抗体は、ＩＬ−Ｂ３０に対する抗体の存在を診断するための類
似の使用を有し得、それ自体、種々の異常状態を診断し得る。例えば、ＩＬ−Ｂ
３０の過剰産生は、種々の免疫学的反応を生じ得る。この過剰産生は、特に、ガ
ンまたは異常な活性化または分化のような増殖性細胞の状態において、異常な生
理学的状態を診断し得る。さらに、利用可能な分布パターンは、サイトカインが
膵臓のランゲルハンス島において発現するという情報を提供し、このことは、 サイトカインが、器官の機能（例えば、糖尿病に関する医学的状態において）に
関与し得るということを示唆する。

【０１２０】 診断アッセイのための試薬は、アッセイの感度の最適化に関して、キットにお
いて頻繁に、供給される。本発明のために、アッセイ、プロトコルおよび標識 の性質に依存して、標識されたかまたは標識されていない、抗体または結合パー
トナー、あるいは標識されたＩＬ−Ｂ３０のいずれかが提供される。これは通常
、緩衝液、安定化剤、シグナル産生に必要な材料（例えば、酵素にとっての基質
）などのような他の付加物との組合わせにおいて存在する。好ましくは、キット
はまた、適切な使用および使用後の内容物の処分のための取扱い説明書を含む。
代表的には、このキットには、各々の有用な試薬のための区画が含まれる。望ま
しくは、この試薬は、凍結乾燥した乾燥粉末として提供され、そしてこの試薬は
、アッセイを実施するために適切な濃度の試薬を提供する水性培地において再構
築され得る。

【０１２１】 薬物スクリーニングおよび診断アッセイの、前述した多くの成分は、修飾なく
使用され得るか、または種々の方法で修飾され得る。例えば、標識は、検出可能
なシグナルを直接的または間接的に提供する、共有結合または非共有結合部分に
よって達成され得る。これらのアッセイのいずれにおいても、結合パートナー、
試験化合物、ＩＬ−Ｂ３０またはそれらに対する抗体は、直接的または間接的の
いずれかで標識され得る。直接的な標識についての可能性としては、標識群：^{12 5} Ｉのような放射標識、ペルオキシダーゼおよびアルカリホスファターゼのよう な酵素（米国特許第３，６４５，０９０号）、および蛍光強度の変化をモニター
し得る蛍光標識（米国特許第３，９４０，４７５号）、波長変化、または蛍光偏
向が挙げられる。間接的な標識についての可能性としては、１つの成分のビオチ
ン化に続いて上記の標識群の１つへ結合させたアビジンとの結合が挙げられる。

【０１２２】 遊離したＩＬ−Ｂ３０から結合したＩＬ−Ｂ３０を分離するか、あるいは遊離
した試験化合物から結合した試験化合物を分離するための種々の方法がまた存在
する。ＩＬ−Ｂ３０は、種々のマトリクス上に固定され、続いて洗浄され得る。
適切なマトリクスには、ＥＬＩＳＡプレート、フィルター、およびビーズのよう
なプラスチックが含まれる。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（編１９９３）Ｃｕｒｒ
ｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， 第１巻、第２章
、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｉｌｅｙ，ＮＹを参照のこと。他の適切な分離技術には
、Ｒａｔｔｌｅら（１９８４）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３０：１４５７−１４６１
に記載されるフルオレセイン抗体磁化粒子方法、および米国特許第４，６５９，
６７８号に記載されるような二重抗体磁化粒子分離が、限定されることなく含ま
れる。

【０１２３】 種々の標識物に対するタンパク質またはそれらのフラグメントを連結するため
の方法は、文献において広範に報告されているので、本明細書中では詳細な議論
を必要としない。多くの技術は、ペプチド結合を形成させるためのカルボジイミ
ドまたは活性化エステルの使用、あるいは連結のための、クロロアセチルのよう
な活性化ハロゲンまたはマレイミドのような活性化オレフィンと、メルカプト基
の反応によるチオエーテルの形成などのいずれかによる、活性化されたカルボキ
シル基の使用を含む。融合タンパク質はまた、これらの適用における使用を見出
す。

【０１２４】 本発明の別の診断上の局面は、ＩＬ−Ｂ３０の配列から得られたオリゴヌクレ
オチドまたはポリヌクレオチド配列の使用を含む。これらの配列は、異常な状態
（例えば、炎症性または自己免疫性）を有することが疑われる患者からのサンプ
ルにおけるＩＬ−Ｂ３０メッセージのレベルを検出するためのプローブとして使
用され得る。サイトカインは、活性化のためのマーカーまたはメディエーターで
あり得るので、サイトカインは、例えば、効果が進行して顕著になる前に予防的
様式において、例えば、さらなる治療が要求される時点を決定するために、活性
化細胞の数を決定するために有用であり得る。ＲＮＡおよびＤＮＡヌクレオチド
配列の両方の調製、配列の標識、および配列の好ましい大きさの調製は、文献に
おいて十分に説明および議論されている。例えば、Ｌａｎｇｅｒ−Ｓａｆｅｒら
（１９８２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７９：４３８１−４３
８５；Ｃａｓｋｅｙ（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３６：９６２−９６７；お
よびＷｉｌｃｈｅｋら（１９８８）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７１：１−３
２を参照のこと。

【０１２５】 他の分子の定性的発現または定量的発現について試験する診断キットがまた、
意図される。診断または予後は、マーカーとして使用される複数の徴候の組合わ
せに依存し得る。従って、キットはマーカーの組合わせについて試験し得る。例
えば、Ｖｉａｌｌｅｔら（１９８９）Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｇｒｏｗｔｈ
Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｓ．１：８９−９７を参照のこと。他のキットが他の細胞部
分集団を評価するために使用され得る。

【０１２６】 （Ｘ．ＩＬ−Ｂ３０レセプターの単離） 特異的リガンド−レセプター相互作用のリガンドを単離することによって、レ
セプターを単離するための方法がある。Ｇｅａｒｉｎｇら（１９８９）ＥＭＢＯ Ｊ． ８：３６６７−３６７６を参照のこと。例えば、ＩＬ−Ｂ３０サイトカ
インのレセプターへの結合を妨げることなく、ＩＬ−Ｂ３０サイトカインを標識
するための手段は、決定され得る。例えば、親和性標識は、リガンドのアミノ末
端またはカルボキシル末端のいずれかと融合され得る。このような標識は、ＦＬ
ＡＧエピトープタグまたは、例えばＩｇドメインまたはＦｃドメインであり得る
。発現ライブラリーは、サイトカインの特異的結合について、例えば、細胞選別
、または亜集団（このような結合成分を発現する）を検出するための他のスクリ
ーニングによって、スクリーニングされ得る。例えば、Ｈｏら（１９９３）Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：１１２６７−１１２７１
；およびＬｉｕら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１８２１−２９を
参照のこと。あるいは、パンニング方法が使用され得る。例えば、Ｓｅｅｄおよ
びＡｒｕｆｆｏ（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８４：３３６５−３３６９を参照のこと。

【０１２７】 標識とのタンパク質架橋技術は、ＩＬ−Ｂ３０サイトカインの結合パートナー
を単離するために適用され得る。これは、例えば、リガンド−レセプター様様式
で、サイトカインと特異的に相互作用するタンパク質の同定を可能にする。

【０１２８】 初期の実験は、既知のＩＬ−６またはＧ−ＣＳＦレセプター成分がＩＬ−Ｂ３
０に対する応答に関与するかどうかを決定するために実施される。これらの機能
性レセプター複合体が、ＩＬ−Ｂ３０レセプター複合体（特異的レセプターサブ
ユニットまたはアクセサリーレセプターサブユニットのいずれか）と、多くのま
たは全ての成分を共有し得ることもまた、十分可能である。

【０１２９】 本発明の多くの改変および変更は、当業者に明らかであるように、その精神お
よび範囲から逸脱することなくなされ得る。本明細書中に記載される特定の実施
態様は、例示の目的のためにのみ提供されるが、本発明は、これらの請求項が与
えられる等価物の権利の全範囲とともに、添付の請求項の文言によってのみ限定
される。

【０１３０】 （実施例） （Ｉ．一般的な方法） 以下の多くの標準的方法が、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９
）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ（第２版）第１巻〜第３巻，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ． ＮＹ； Ａｕｓｕｂ
ｅｌら，Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉ
ａｔｅｓ， Ｂｒｏｏｋｌｙｎ， ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７お
よび補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ，ＮＹ；Ｉｎｎｉｓら（編 ｌ９９
０）ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａ
ｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹにお
いて記載されるか、または参照される。タンパク質精製のための方法には、硫酸
アンモニウム沈澱、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化お
よび他の方法が含まれる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８７および定期的な
補遺）；Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ（１９９０）「Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ 第１８２巻およびこのシリーズの他の巻；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９５および
補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ Ｊｏｈｎ ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ；
Ｐ．Ｍａｔｓｕｄａｉｒａ（編 １９９３） Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉ
ｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉ
ｏｎ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ；およびタンパク質精製産物の使用についての
製造者の文献、例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ， Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ， ＮＪ
，またはＢｉｏ−Ｒａｄ， Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡを参照のこと。組換え技術
との組合わせは、適切なセグメント（エピトープタグ）への融合（例えば、（例
えば、プロテアーゼで除去可能である配列を介して）融合され得るＦＬＡＧ配列
または等価物）を可能にする。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９８９）Ｃｈｅｍｉ
ｓｃｈｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ １２：６９−７０；Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９９０
）「Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉ
ｎｓ ｗｉｔｈ Ｍｅｔａｌ Ｃｈｅｌａｔｅ Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ」Ｓｅｔｌ
ｏｗ（編）Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ａ
ｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２：８７−９８，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ．
およびＣｒｏｗｅら（１９９２）ＯＩＡｅｘｐｒｅｓｓ：Ｔｈｅ Ｈｉｇｈ Ｌ
ｅｖｅｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉ
ｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ＱＵＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡを
参照のこと。

【０１３１】 標準の免疫学的技術は、例えば、Ｈｅｒｔｚｅｎｂｅｒｇら（編 １９９６）
Ｗｅｉｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ 第１巻〜第４巻， Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ； Ｃ
ｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ， ＮＹ；およびＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ 第７０巻、第７３巻、第７４巻、第８４巻、第
９２巻、第９３巻、第１０８巻、第１１６巻、第１２１巻、第１３２巻、第１５
０巻、第１６２巻および第１６３巻に記載される。サイトカインアッセイは、例
えば、Ｔｈｏｍｓｏｎ（編 １９９４）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂ
ｏｏｋ（第２版）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ； Ｍｅ
ｔｃａｌｆおよびＮｉｃｏｌａ（１９９５）Ｔｈｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉ
ｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｃａｍｂｒｉｄ
ｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；ならびにＡｇｇａｒｗａｌおよびＧ
ｕｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ Ｂｌａｃｋｗ
ｅｌｌ Ｐｕｂに記載される。

【０１３２】 血管性生物学的活性のためのアッセイは、当該分野で周知である。これらは、
腫瘍または他の組織（例えば、動脈平滑筋増殖）（例えば、Ｋｏｙａｍａら（１
９９６）Ｃｅｌｌ ８７：１０６９−１０７８）を参照のこと）、血管上皮への
単球の接着（ＭｃＥｖｏｙら（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：２０６
９−２０７７を参照のこと）などにおける血管形成および血管拡張（ａｎｇｉｏ
ｓｔａｔｉｃ）活性を含む。Ｒｏｓｓ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６２：８０
１−８０９； ＲｅｋｈｔｅｒおよびＧｏｒｄｏｎ（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐａ
ｔｈｏｌ．１４７：６６８−６７７；Ｔｈｙｂｅｒｇら（１９９０）Ａｔｈｅｒ
ｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １０：９６６−９９０；およびＧｕｍｂｉｎｅｒ（１９
９６） Ｃｅｌｌ ８４：３４５−３５７もまた参照のこと。

【０１３３】 神経細胞の生物学的活性のためのアッセイは、例えば、Ｗｏｕｔｅｒｌｏｏｄ
（編 １９９５）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｍｏｄｕｌ
ｅｓ １０， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ； Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；およびＮｅｕｒｏｍｅｔｈｏｄｓ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪに記載される。発生システ
ムの方法論は、例えば、Ｍｅｉｓａｍｉ（編）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｈｕｍ
ａｎ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ
ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；およびＣｈｒｉｓｐｅｅｌｓ（編）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐ
ｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅに記載される。

【０１３４】 ＦＡＣＳ分析は、Ｍｅｌａｍｅｄら（１９９０）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒ
ｙ ａｎｄ Ｓｏｒｔｉｎｇ Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ，ＮＹ；Ｓｈａｐｉｒｏ（１９８８）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔ
ｏｍｅｔｒｙ Ｌｉｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；およびＲｏｂｉｎｓｏｎ
ら（１９９３）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ Ｗｉｌｅｙ-Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹに記載される。

【０１３５】 （ＩＩ．ヒトＩＬ−Ｂ３０のクローニング） 遺伝子配列を、表１に提供する。この配列は、メラノサイト、仔ウシ心臓、お
よび妊娠中の子宮から作製された、ｃＤＮＡライブラリーに由来する。また、膵
臓のランゲルハンス島由来のｃＤＮＡライブラリー配列から見出される。これら
の配列は、ＰＣＲプライマーまたはプローブの調製して、遺伝子の細胞分布を決
定を可能にする。この配列はメッセージをコードするゲノムＤＮＡの単離を可能
にする。

【０１３６】 プローブまたはＰＣＲプライマーを使用して、種々の組織または細胞型がプロ
ーブされ、細胞分布を決定する。ＰＣＲ産物は、例えばＴＡクローニングキット
（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してクローニングされる。生じるｃＤＮＡプラ
スミドは、自動化シークエンサー（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で
、両末端から配列決定される。

【０１３７】 （ＩＩＩ．ＩＬ−Ｂ３０の細胞発現） 霊長類ＩＬ−Ｂ３０をコードするｃＤＮＡについて特異的な、適切なプローブ
またはプライマーが調製される。代表的には、このプローブは、例えば、ランダ
ムプライミングによって標識される。この発現は、多分、記載される細胞型にお
いて存在し、そして多分、膵臓のランゲルハンス島において存在する。サザン分
析：一次増幅されたｃＤＮＡライブラリーからのＤＮＡ（５μｇ）が、適切な制
限酵素で消化され、インサートを放出し、１％アガロースゲルで泳動され、そし
てナイロン膜（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌ、Ｋｅｅｎｅ、
ＮＨ）へトランスファーされる。

【０１３８】 ヒトｍＲＮＡ単離のためのサンプルには、以下が含まれる：末梢血単核細胞（
単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、顆粒球細胞、Ｂ細胞）、休止状態（Ｔ１００）；末梢
血単核細胞、抗ＣＤ３と共に、２時間、６時間、１２時間プールして活性化（Ｔ
１０１）；Ｔ細胞、ＴＨ０クローンＭｏｔ７２、休止状態（Ｔ１０２）；Ｔ細胞
、ＴＨ０クローンＭｏｔ７２、抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３と共に、３時間、６時
間、１２時間プールして活性化させた、（Ｔ１０３）；Ｔ細胞、ＴＨ０クローン
Ｍｏｔ７２、特異的ペプチドと共に、２時間、７時間、１２時間プールしてアネ
ルギー処理（Ｔ１０４）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６、休止状態（Ｔ１０
７）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６、抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３と共に、３
時間、６時間、１２時間プールして活性化（Ｔ１０８）；Ｔ細胞、ＴＨ１クロー
ンＨＹ０６、特異的ペプチドと共に、２時間、６時間、１２時間プールしてアネ
ルギー処理（Ｔ１０９）；Ｔ細胞、ＴＨ２クローンＨＹ９３５、休止状態（Ｔ１
１０）；Ｔ細胞、ＴＨ２クローンＨＹ９３５、抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３と共に
、２時間、７時間、１２時間プールして活性化（Ｔ１１１）；Ｔ細胞腫瘍株ジャ
ーカットおよびＨｕｔ７８、休止状態（Ｔ１１７）；Ｔ細胞クローン、プールし
たＡＤ１３０．２、Ｔｃ７８３．１２、Ｔｃ７８３．１３、Ｔｃ７８３．５８、
Ｔｃ７８２．６９、休止状態（Ｔ１１８）；Ｔ細胞無作為γδＴ細胞クローン、
休止状態（Ｔ１１９）；ＣＤ２８−Ｔ細胞クローン；脾細胞、休止状態（Ｂ１０
０）；脾細胞、抗ＣＤ４０およびＩＬ−４で活性化（Ｂ１０１）；Ｂ細胞ＥＢＶ
株、プールしたＷＴ４９、ＲＳＢ、ＪＹ、ＣＶＩＲ、７２１．２２１，ＲＭ３、
ＨＳＹ、休止状態（Ｂ１０２）；Ｂ細胞株ＪＹ、ＰＭＡおよびイノマイシンと共
に、１時間、６時間プールして活性化（Ｂ１０３）；プールしたＮＫ２０クロー
ン、休止状態（Ｋ１００）；プールしたＮＫ２０クローン、ＰＭＡおよびイノマ
イシンと共に６時間活性化させた、プールしたＮＫ２０クローン（Ｋ１０１）；
ＮＫＬクローン、ＬＧＬ白血病患者の末梢血由来、ＩＬ−２処理（Ｋ１０６）；
造血性前駆体株ＴＦ１、ＰＭＡおよびイノマイシンと共に１時間、６時間プール
して活性化させた（Ｃ１００）；Ｕ９３７前駆単球株、休止状態（Ｍ１００）；
Ｕ９３７前駆単球株、ＰＭＡおよびイノマイシンと共に１時間、６時間プールし
て活性化（Ｍ１０１）；洗浄された単球、ＬＰＳ、ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０と共
に１時間、２時間、６時間、１２時間、２４時間プールして活性化（Ｍ１０２）
；洗浄された単球、ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０と共に、１時間、２時間、６
時間、１２時間、２４時間プールして活性化（Ｍ１０３）；洗浄された単球、Ｌ
ＰＳ、ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０と共に４時間、１６時間プールして活性化（Ｍ１
０６）；洗浄された単球、ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０と共に、４時間、１６
時間プールして活性化（Ｍ１０７）；洗浄された単球、ＬＰＳで１時間活性化（
Ｍ１０８）；洗浄された単球、ＬＰＳで６時間活性化（Ｍ１０９）；ＤＣ ７０
％ＣＤ１ａ＋、これはＣＤ３４+ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαで１２日目由来、休 止状態（Ｄ１０１）；ＤＣ ７０％ ＣＤ１ａ＋、これはＣＤ３４+ ＧＭ−Ｃ ＳＦ、ＴＮＦαで１２日目由来、ＰＭＡおよびイオノマイシンで１時間活性化（
Ｄ１０２）；ＤＣ ７０％ ＣＤ１ａ＋、これはＣＤ３４+ ＧＭ−ＣＳＦ、Ｔ ＮＦαで１２日目由来、ＰＭＡおよびイオノマイシンで６時間活性化（Ｄ１０３
）；ＤＣ ９５％ ＣＤ１ａ＋、これはＣＤ３４+ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαで １２日目にＦＡＣＳで分離、ＰＭＡおよびイオノマイシンと共に１時間、６時間
プールして活性化（Ｄ１０４）；ＤＣ ９５％ ＣＤ１４＋、前ＣＤ３４+ Ｇ Ｍ−ＣＳＦ、ＴＮＦαで１２日目にＦＡＣＳで分離、ＰＭＡおよびイオノマイシ
ンと共に１時間、６時間プールして活性化（Ｄ１０５）；ＤＣ ＣＤ１ａ＋ Ｃ
Ｄ８６+、これはＣＤ３４+ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαで１２日目にＦＡＣＳで分
離、ＰＭＡおよびイオノマイシンと共に１時間、６時間プールして活性化（Ｄ１
０６）；単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日目由来のＤＣ、休止状態（Ｄ１０７
）；単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日目由来のＤＣ、休止状態（Ｄ１０８）；
単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日目由来のＤＣ、ＬＰＳで４時間、１６時間プ
ールして活性化（Ｄ１０９）；単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日目由来のＤＣ
、ＴＮＦα、単球スープで４時間、１６時間プールして活性化（Ｄ１１０）；上
皮細胞、未刺激；上皮細胞、ＩＬ−１βで活性化；肺線維芽肉腫株ＭＲＣ５、Ｐ
ＭＡおよびイノマイシンと共に１時間、６時間プールして活性化（Ｃ１０１）；
腎臓上皮ガン細胞株ＣＨＡ、ＰＭＡおよびイノマイシンと共に１時間、６時間プ
ールして、活性化（Ｃ１０２）。ＩＬ−Ｂ３０の転写物の発現は、洗浄された単
球、ＬＰＳ、ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０と共に４時間、１６時間プールして活性化
（Ｍ１０６）；洗浄された単球、ＬＰＳ、ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０と共に１時間
、２時間、６時間、１２時間、２４時間プールして活性化（Ｍ１０２）；洗浄さ
れた単球、ＬＰＳで６時間活性化（Ｍ１０９）；および洗浄された単球、ＬＰＳ
で１時間活性化（Ｍ１０８）において非常に高かった。発現は、ＤＣ ９５％
ＣＤ１ａ＋、これはＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα １２日目ＦＡＣＳ分
離由来、ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６時間プールして活性化（Ｄ１０４
）；およびＮＫ２０クローン、ＰＭＡおよびイオノマイシンで６時間プールして
活性化（Ｋ１０１）において高かった。より少ない発現は、ＤＣ７０％ ＣＤ１
ａ＋、これはＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα １２日目由来、ＰＭＡおよ
びイオノマイシンで６時間活性化（Ｄ１０３）；ＤＣ７０％ ＣＤ１ａ＋、これ
はＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα １２日目由来、ＰＭＡおよびイオノマ
イシンで１時間活性化（Ｄ１０２）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６、特異的
ペプチドを用いて２、６、１２時間プールしてアネルギー処理（Ｔ１０９）；末
梢血単核細胞、抗ＣＤ３を用いて２、６、１２時間プールして活性化（Ｔ１０１
）；Ｔ細胞、ＴＨ０クローンＭｏｔ７２、抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３を用いて３
、６、１２時間プールして活性化（Ｔ１０３）；脾臓細胞、抗ＣＤ４０およびＩ
Ｌ−４を用いて活性化（Ｂ１０１）；Ｔ細胞、ＴＨ０クローンＭｏｔ７２、特異
的ペプチドを用いて２、７、１２時間プールしてアネルギー処理（Ｔ１０４）；
脾臓細胞、休止状態（Ｂ１００）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６、抗ＣＤ２
８および抗ＣＤ３を用いて３、６、１２時間プールして活性化（Ｔ１０８）；上
皮細胞、ＩＬ−β活性化；洗浄した単球、ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０を用い
て４、１６時間プールして活性化（Ｍ１０７）；およびＢ細胞株ＪＹ、ＰＭＡお
よびイオノマイシンで１、６時間プールして活性化（Ｂ１０３）において検出さ
れた。検出可能な発現は、単球、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日目由来のＤＣ、
ＬＰＳで４、１６時間プールして活性化（Ｄ１０９）；Ｔ細胞、ＴＨ０クローン
Ｍｏｔ７２、休止状態（Ｔ１０２）；末梢血単核細胞（単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞
、顆粒球、Ｂ細胞）、休止状態（Ｔ１００）；Ｔ細胞 ＣＤ４＋ ＣＤ４５ＲＯ
−、抗ＣＤ２８、ＩＬ−４、および抗ＩＮＦγ中２７日目に極性化されている、
Ｔ細胞のＴＨ２極性化、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８を用いて４時間活性化（Ｔ１
１６）；Ｔ細胞クローン、プールしたＡＤ１３０．２、Ｔｃ７８３．１２、Ｔｃ
７８３．１３、Ｔｃ７８３．５８、Ｔｃ７８２．６９、休止状態（Ｔ１１８）；
Ｕ９３７前単核細胞株、休止状態（Ｍ１００）；造血性前駆体株ＴＦ１、ＰＭＡ
およびイオノマイシンで１、６時間プールして活性化（Ｃ１００）；Ｔ細胞、Ｔ
Ｈ２クローンＨＹ９３５、抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３を用いて２、７、１２時間
プールして活性化（Ｔ１１１）；ＤＣ ＣＤ１ａ＋ ＣＤ８６＋、ＣＤ３４＋
ＧＭ−ＣＳＦ、 ＴＮＦα １２日目ＦＡＣＳ分離由来、ＰＭＡおよびイオノマ
イシンで１、６時間プールして活性化（Ｄ１０６）；洗浄した単球、ＬＰＳ、Ｉ
ＦＮγ、ＩＬ−１０で１、２、６、１２、２４時間プールして活性化（Ｍ１０３
）；ＤＣ、これは単球 ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日目由来、ＴＮＦα、単球
スープで４、１６時間プールして活性化（Ｄ１１０）；ＤＣ、これは単球由来
ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日目、休止状態（Ｄ１０８）；Ｕ９３７前単球株、
ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６時間プールして活性化（Ｍ１０１）；Ｔ細
胞ランダムγδＴ細胞クローン、休止状態（Ｔ１１９）；およびＴ細胞、ＴＨ１
クローンＨＹ０６、抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３を用いて、３、６、１２時間プー
ルして活性化（Ｔ１０８）において観察された。他のサンプルにおいては、シグ
ナルは検出されなかった。

【０１３９】 要約すれば、その分布が、活性化マクロファージにおいて増加したＩＬ−Ｂ３
０（炎症における役割を示唆する）；活性化したＴｈ１細胞（Ｔヘルパーサブセ
ット（特に、Ｔｈ１免疫応答）における調節またはエフェクターの役割を示唆す
る）；そして、活性化樹状細胞（抗原提示における役割、または胚中心のＴまた
はＢ細胞のＤＣとの相互作用を、示唆する）を示す。

【０１４０】 マウスｍＲＮＡ単離のためのサンプルとしては、以下：休止状態マウス線維芽
細胞Ｌ細胞株（Ｃ２００）；Ｂｒａｆ：ＥＲ（Ｂｒａｆのエストロゲンレセプタ
ーとの融合）でトランスフェクトされた細胞、コントロール（Ｃ２０１）；脾臓
由来のＭｅ１１４＋ネイティブＴ細胞、休止状態（Ｔ２０９）；脾臓由来のＭｅ
１１４＋ネイティブＴ細胞、ＩＦＮγ、ＩＬ−１２を用いて刺激、そして抗ＩＬ
−４でＴＨ１細胞に極性化、ＩＦＮγおよびＩＬ−４に、６、１２、２４時間プ
ールして曝露（Ｔ２１０）；脾臓由来のＭｅ１１４＋ネイティブＴ細胞、ＩＬ−
４および抗ＩＦＮγを用いて刺激してＴｈ２細胞に極性化、ＩＬ−４および抗Ｉ
ＦＮγに、６、１３、２４時間プールして曝露（Ｔ２１１）；Ｔ細胞、ＴＨ１極
性化（Ｍｅｌｌ４ 明るい、脾臓由来のＣＤ４＋細胞、ＩＦＮγおよび抗ＩＬ−
４を用いて７日間極性化；Ｔ２００）；Ｔ細胞、ＴＨ２極性化（Ｍｅｌｌ４ 明
るい、脾臓由来のＣＤ４＋細胞、ＩＬ−４および抗ＩＦＮγを用いて７日間極性
化；Ｔ２０１）；Ｔ細胞、トランスジェニックＢａｌｂ／Ｃ由来で高度に３×に
ＴＨ１極性化（Ｏｐｅｎｓｈａｗら、（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２
：１３５７−１３６７を参照のこと；抗ＣＤ３を用いて２、６、２４時間プール
して活性化；Ｔ２０２）；Ｔ細胞、トランスジェニックＢａｌｂ／Ｃ由来で高度
に３×にＴＨ２極性化（抗ＣＤ３を用いて２、６、２４時間プールして活性化；
Ｔ２０３）；Ｔ細胞、トランスジェニックＣ５７ ｂｌ／６由来で高度に３×に
ＴＨ１極性化（抗ＣＤ３を用いて２、６、２４時間プールして活性化；Ｔ２１２
）；Ｔ細胞、トランスジェニックＣ５７ ｂｌ／６由来で高度に３×にＴＨ２極
性化（抗ＣＤ３を用いて２、６、２４時間プールして活性化；Ｔ２１３）；Ｔ細
胞、高度にＴＨ１極性化（トランスジェニックＢａｌｂ／Ｃ由来の未処置ＣＤ４
＋Ｔ細胞、ＩＦＮγ、ＩＬ−１２、および抗ＩＬ−４を用いて３×に極性化；Ｉ
ＧＩＦ、ＩＬ−１２、および抗ＩＬ−４を用いて、６、１２、２４時間刺激、プ
ールした）；ＣＤ４４− ＣＤ２５＋ 前Ｔ細胞、胸腺より分離（Ｔ２０４）；
ＴＨ１ Ｔ細胞クローンＤ１．１、抗原による最後の刺激後、３週間休止状態（
Ｔ２０５）；ＴＨ１ Ｔ細胞クローンＤ１．１、１０μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡ刺激
１５時間（Ｔ２０６）；ＴＨ２ Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５、抗原を用いる最後
の刺激後３週間休止状態（Ｔ２０７）；ＴＨ２ Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５、１
０μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡ刺激１５時間（Ｔ２０８）；未刺激Ｂ細胞株ＣＨ１２（
Ｂ２０１）；未刺激成熟Ｂ細胞白血病細胞株Ａ２０（Ｂ２００）；脾臓由来の未
刺激大Ｂ細胞（Ｂ２０２）；全脾臓由来のＢ細胞、ＬＰＳ活性化（Ｂ２０３）；
脾臓由来のメトリザマイド富化樹状細胞、休止状態（Ｄ２００）；骨髄由来の樹
状細胞、休止状態（Ｄ２０１）；未刺激の骨髄由来の樹状細胞、抗Ｂ２２０、抗
ＣＤ３，および抗クラスＩＩを用いて枯渇、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４中で培
養（Ｄ２０２）；骨髄由来の樹状細胞、抗Ｂ２２０、抗ＣＤ３，および抗クラス
ＩＩを用いて枯渇させ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４中で培養、抗ＣＤ４０を用
いて１日間、５日間プールして刺激（Ｄ２０３）；単球細胞株ＲＡＷ２６４．７
、ＬＰＳで４時間活性化（Ｍ２００）；ＧＭおよびＭ−ＣＳＦを用いて誘導され
た骨髄マクロファージ（Ｍ２０１）；ＧＭ−ＣＳＦを用いて誘導された骨髄マク
ロファージ、ＬＰＳ、ＩＦＮγ、およびＩＬ−１０を用いて２４時間刺激（Ｍ２
０５）；骨髄マクロファージ由来、ＧＭ−ＣＳＦを用いる、ＬＰＳ、ＩＦＮγ、
および抗ＩＬ−１０を用いて２４時間刺激（Ｍ２０６）；腹膜のマクロファージ
（Ｍ２０７）；マクロファージ細胞株Ｊ７７４、休止状態（Ｍ２０２）；０．５
、１、３、６、１２時間でのプールしたマクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ
＋抗ＩＬ−１０（Ｍ２０３）；０．５、１、３、５、１２時間でのプールしたマ
クロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋ＩＬ−１０（Ｍ２０４）；未刺激マスト
細胞株ＭＣ−９およびＭＣＰ−１２（Ｍ２０８）；脳微小血管内皮細胞由来の不
死化内皮細胞株、未刺激（Ｅ２００）；脳微小血管内皮細胞由来の不死化内皮細
胞株、ＴＮＦαを用いてオーバーナイトで刺激（Ｅ２０１）；脳微小血管内皮細
胞由来の不死化内皮細胞株、ＴＮＦαを用いてオーバーナイトで刺激（Ｅ２０２
）；脳微小血管内皮細胞由来の不死化内皮細胞株、ＴＮＦαおよびＩＬ−１０を
用いてオーバーナイトで刺激（Ｅ２０３）；ｗｔ Ｃ５７ ｂｌ／６マウスから
の全大動脈、５ヶ月齢のＡｐｏＥ ＫＯマウス由来の全大動脈（Ｘ２０７）；１
２ヶ月齢のＡｐｏＥ ＫＯマウス由来の全大動脈（Ｘ２０７）；ｗｔ 胸腺（Ｏ
２１４）；全胸腺、ｒａｇ−１（Ｏ２０８）；全腎臓、ｒａｇ−１（Ｏ２０９）
；全腎臓、ＮＺ Ｂ／Ｗマウス；および全心臓、ｒａｇ−１（Ｏ２０２）、が挙
げられる。高いシグナルが、ＬＰＳで４時間活性化された単球細胞株ＲＡＷ２６
４．７（Ｍ２００）；Ｔ細胞、トランスジェニックＣ５７ ｂｌ／６から高度に
３×ＴＨ１極性化する（抗ＣＤ３を用いて、２、６、２４時間プールして活性化
；Ｔ２１２）；および高度にＴＨ１極性化しているＴ細胞（トランスジェニック
Ｂａｌｂ／Ｃ由来の未処置のＣＤ４＋ Ｔ細胞、ＩＦＮγ、ＩＬ−１２、および
抗ＩＬ−４を用いて３×に極性化；ＩＧＩＦ、ＩＬ−１２、および抗ＩＬ−４を
用いて、６、１２、２４時間刺激（プールした）、において検出された。検出可
能なシグナルが、Ｔ細胞において検出され、トランスジェニックＢａｌｂ／Ｃか
ら高度に３×ＴＨ１極性化した（Ｏｐｅｎｓｈａｗら、（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ
．Ｍｅｄ．１８２：１３５７−１３６７；抗ＣＤ３を用いて２、６、２４時間活
性化（プールした）；Ｔ２０２）；Ｔ細胞、ＴＨ２極性化（Ｍｅｌｌ４ 明るい
、脾臓由来のＣＤ４＋細胞、ＩＬ−４および抗ＩＦＮγを用いて７日間極性化；
Ｔ２０１）；Ｔ細胞、ＴＨ１極性化（Ｍｅｌｌ４ 明るい、脾臓由来のＣＤ４＋
細胞、ＩＦＮγおよび抗ＩＬ−４を用いて７日間極性化；Ｔ２００）；０．５、
１、３、６、１２時間でのプールしたマクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋
抗ＩＬ−１０（Ｍ２０３）；マクロファージ細胞株Ｊ７７４、休止状態（Ｍ２０
２）；０．５、１、３、５、１２時間でのプールしたマクロファージ細胞株Ｊ７
７４＋ＬＰＳ＋ＩＬ−１０（Ｍ２０４）；脳微小血管内皮細胞由来の不死化内皮
細胞株、ＴＮＦαを用いてオーバーナイトで刺激（Ｅ２０１）；ＧＭ−ＣＳＦを
用いて誘導された骨髄マクロファージ、ＬＰＳ、ＩＦＮγ、および抗ＩＬ−１０
を用いて２４時間刺激（Ｍ２０６）、において検出された。他のサンプルは、シ
グナルを示さない。ＲＡＷ２６４．７マウス単球細胞株における発現は、タンパ
ク質の天然の供給源を示唆する。

【０１４１】 （ＩＶ．ＩＬ−Ｂ３０の染色体マッピング） ＩＬ−Ｂ３０をコードする単離されたｃＤＮＡを使用する。染色体マッピング
は、標準的な技術である。例えば、ＢＩＯＳ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｎｅ
ｗ Ｈａｖｅｎ、ＣＴ）およびＰＣＲを用いたマウス体細胞ハイブリッドパネル
の使用法を参照のこと。付随的な証拠は、マウスＩＬ−Ｂ３０遺伝子が第１０番
染色体に位置することを示唆する。

【０１４２】 （Ｖ．ＩＬ−Ｂ３０タンパク質の精製） 複数のトランスフェクト細胞株を、他の細胞と比較して高いレベルでサイトカ
インを発現する細胞株についてスクリーニングする。種々の細胞株をスクリーニ
ングし、そして取り扱いにおけるそれらの有利な特性について選択する。天然の
ＩＬ−Ｂ３０は、天然の供給源から単離され得るか、または形質転換した細胞か
ら適切な発現ベクターを使用して発現することによって単離され得る。発現した
タンパク質の精製は、細胞溶解物もしくは上清から、標準的な手順によって達成
されるか、または高効率で有効な精製をするための操作手段と組み合わせられ得
る。ＦＬＡＧまたはＨｉｓ６セグメントは、このような精製の特色のために使用
され得る。あるいは、アフィニティークロマトグラフィーが特異的抗体とともに
使用され得る（以下を参照のこと）。

【０１４３】 タンパク質は、所望によりｃｏｌｉ発現系、昆虫細胞発現系、または哺乳動物
発現系において産生される。

【０１４４】 （ＶＩ．相同なＩＬ−Ｂ３０遺伝子の単離） ＩＬ−Ｂ３０ ｃＤＮＡまたは他の種の対応する配列は、所望の供給源（例え
ば、霊長類細胞ｃＤＮＡライブラリー）からライブラリーをスクリーニングする
ためのハイブリダイゼーションプローブとして使用され得る。多くの異なる種が
、プローブを使用して、簡易なハイブリダイゼーションに必要なストリンジェン
シーについて、およびその存在についての両方についてスクリーニングされ得る
。適切なハイブリダイゼーション条件を使用して、交差ハイブリダイゼーション
の特異性を示すクローンについて選択する。

【０１４５】 ペプチド配列に基づく縮重プローブを使用するハイブリダイゼーションによる
スクリーニングはまた、適切なクローンの単離を可能にする。あるいは、ＰＣＲ
スクリーニングのための適切なプライマーの使用は、適切な核酸クローンの富化
を生じる。

【０１４６】 類似の方法は、種改変体、多型改変体、または対立遺伝子改変体のいずれかを
単離するために適用可能である。種改変体は、プローブとしての１つの種からの
全長単離体またはフラグメントの単離に基づく種間ハイブリダイゼーション技術
を使用して単離される。

【０１４７】 あるいは、ヒトＩＬ−Ｂ３０に対して惹起された抗体は、適切な（例えば、ｃ
ＤＮＡ）ライブラリー由来の交差反応性タンパク質を発現する細胞についてスク
リーニングするために使用される。精製されたタンパク質または規定されたペプ
チドは、上記のように、標準的な方法によって抗体を産生するために有用である
。合成ペプチドまたは精製されたタンパク質は、モノクローナル抗体もしくはポ
リクローナル抗体を生成するために免疫系に対して提示される。例えば、Ｃｏｌ
ｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ
（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。得られる
抗体は、記載されるように、スクリーニング、精製、または診断のために使用さ
れる。

【０１４８】 （ＶＩＩ．ＩＬ−Ｂ３０に特異的な抗体の調製） 合成ペプチドまたは精製されたタンパク質は、モノクローナル抗体またはポリ
クローナル抗体を生成するために免疫系に対して提示される。例えば、Ｃｏｌｉ
ｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（
１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。ポリクロー
ナル血清またはハイブリドーマが調製され得る。適切な状況において、結合試薬
は、上記のように（例えば、蛍光もしくはその他）標識されるか、またはパニン
グ法のために基板に固定化されるかのいずれかである。免疫選択および関連する
技術は、所望により、選択的試薬を調整するために利用可能である。

【０１４９】 （ＶＩＩＩ．生物学的機能の幅の評価） ＩＬ−Ｂ３０の生物学的活性を、ＩＬ−Ｂ３０とＩＬ−６とＧ−ＣＳＦとの間
の配列相同性および構造相同性に基づいて試験した。最初に、ＩＬ−６またはＧ
−ＣＳＦの生物学的活性を示したアッセイを試験した。

【０１５０】 （Ａ．細胞の増殖に関する効果） 種々の細胞型の増殖に関する効果を、種々の濃度のサイトカインを使用して評
価する。用量応答分析を、関連するサイトカインＩＬ−６、Ｇ−ＣＳＦなどと組
み合わせて行う。

【０１５１】 （Ｂ．ヒト単球上の細胞表面分子の発現に対する効果） 単球を、正常な健常ドナーの末梢血単核細胞からのネガティブ選択によって精
製する。簡単には、３×１０⁸個のフィコールバンド化単核細胞を、例えば、２ ００μｌのαＣＤ２（Ｌｅｕ−５Ａ）、２００μｌのαＣＤ３（Ｌｅｕ−４）、
１００μｌのαＣＤ８（Ｌｅｕ ２ａ）、１００μｌのαＣＤ１９（Ｌｅｕ−１
２）、１００μｌのαＣＤ２０（Ｌｅｕ−１６）、１００μｌのαＣＤ５６（Ｌ
ｅｕ−１９）、１００μｌのαＣＤ６７（ＩＯＭ ６７；Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ
， Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ，ＭＥ）、および抗グリコホリン抗体（１０Ｆ７ＭＮ，
ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）からなるモノクローナル抗体のカクテル
（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ， ＣＡ）
とともに氷上でインキュベートする。抗体結合細胞を洗浄し、次いでヒツジ抗マ
ウスＩｇＧ結合磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）とともにビ
ーズ対細胞比２０：１でインキュベートする。抗体結合細胞を、磁場をかけるこ
とによって単球から分離する。引き続いて、ヒト単球を、ＩＬ−Ｂ３０、ＩＬ−
６、Ｇ−ＣＳＦ、もしくはこれらの組み合わせの非存在下または存在下で１％ヒ
トＡＢ血清を含有するＹｓｓｅｌの培地（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔ
ｓ，Ｃａｌａｂａｓａｓ，ＣＡ）にて培養する。

【０１５２】 細胞表面分子の発現の分析は、直接免疫蛍光によって行い得る。例えば、２×
１０⁵個の精製ヒト単球を、１％ヒト血清を含有するリン酸緩衝化生理食塩水（ ＰＢＳ）において氷上で２０分間インキュベートする。細胞を２００×ｇでペレ
ット化する。細胞を２０ｍｌのＰＥまたはＦＩＴＣ標識したｍＡｂ中で再懸濁す
る。氷上でのさらなる２０分間のインキュベーションの後、細胞を１％ヒト血清
を含有するＰＢＳ中で洗浄し、続いてＰＢＳ単独で２回洗浄する。細胞を、１％
パラホルムアルデヒドを含有するＰＢＳにおいて固定し、そしてＦＡＣＳｃａｎ
フローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）上で分析する。例示的なｍＡｂを使用する（例えば、Ｂｅｃ
ｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎからの、ＣＤ１１ｂ（抗ｍａｃｌ）、ＣＤ１１ｃ（
ｇｐ１５０／９５）、ＣＤ１４（Ｌｅｕ−Ｍ３）、ＣＤ５４（Ｌｅｕ５４）、Ｃ
Ｄ８０（抗ＢＢ１／Ｂ７）、ＨＬＡ−ＤＲ（Ｌ２４３）、およびＣＤ８６（ＦＵ
Ｎ １；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ＣＤ６４（３２．２；Ｍｅｄａｒｅｘ）、Ｃ
Ｄ４０（ｍＡｂ８９；Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ Ｆｒａｎｃｅ）。

【０１５３】 （Ｃ．ヒト単球によるサイトカイン産生に対するＩＬ−Ｂ３０の効果） ヒト単球を、記載するように単離し、そして１％ヒトＡＢ血清をＩＬ−Ｂ３０
（１／１００希釈のバキュロウイルス発現材料）の非存在下または存在下で含有
するＹｓｓｅｌの培地（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｃａｌａｂａ
ｓａｓ，ＣＡ）において培養する。さらに、単球を、ＩＬ−Ｂ３０の非存在下ま
たは存在下でＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ ０１２７：Ｂ８ Ｄｉｆｃｏ）で刺激し、
細胞培養上清におけるサイトカイン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＧＭ−
ＣＳＦ、およびＩＬ−１０）の濃度をＥＬＩＳＡによって決定する。

【０１５４】 サイトカインの細胞質内染色のために、単球を、ＩＬ−Ｂ３０およびＬＰＳ（
Ｅ．ｃｏｌｉ ０１２７：Ｂ８ Ｄｉｆｃｏ）および１０ｍｇ／ｍｌのＢｒｅｆ
ｅｌｄｉｎ Ａ（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｍａｄｉｓ
ｏｎ ＷＩ）の存在下または非存在下で、Ｙｓｓｅｌの培地において１２時間培
養する（１００万／ｍｌ）。細胞をＰＢＳで洗浄し、そして室温で２０分間、２
％ホルムアルデヒド／ＰＢＳ溶液中でインキュベートする。引き続き、細胞を洗
浄し、透過化緩衝液（ＰＢＳ／ＢＳＡ（０．５％）／アジド（１ｍＭ）中の０．
５％サポニン（Ｓｉｇｍａ））において再懸濁し、そして２０分間室温でインキ
ュベートする。細胞（２×１０⁵）を遠心分離し、そして透過化緩衝液で１：１ ０に希釈した直接結合体化した抗サイトカインｍＡｂの２０ｍｌ中で室温で２０
分間再懸濁する。以下の抗体を使用し得る：ＩＬ−１α−ＰＥ（３６４−３Ｂ３
−１４）；ＩＬ−６−ＰＥ（ＭＱ２−１３Ａ５）；ＴＮＦα−ＰＥ（ＭＡｂ１１
）；ＧＭ−ＣＳＦ−ＰＥ（ＢＶＤ２−２１Ｃ１１）；およびＩＬ−１２−ＰＥ（
Ｃ１１．５．１４；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ）。引
き続いて、細胞を透過化緩衝液中で２回、そしてＰＢＳ／ＢＳＡ／アジド中で１
回洗浄し、そしてＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃ
ｋｉｎｓｏｎ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ， ＣＡ）上で分析する。

【０１５５】 （Ｄ．ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の増殖に対するＩＬ−Ｂ３０の効果
） 全ＰＢＭＣを、正常な健常ドナーのバフィーコートから、記載される（Ｂｏｙ
ｕｍら）ようにフィコールハイパークによる遠心分離によって単離する。ＰＢＭ
Ｃを、９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ， Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏ
ｎ，ＮＪ）中で、ＩＬ−Ｂ３０の非存在下または存在下で１％ヒトＡＢ血清を含
有する２００μｌのＹｓｓｅｌの培地（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ
， Ｃａｌａｂａｓｅｓ， ＣＡ）において培養する。細胞を、培地単独か、ま
たは１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と組み合わせて、１
２０時間培養する。３Ｈ−チミジン（０．１ ｍＣｉ）を、培養の最後の６時間
の間に添加し、そして３Ｈ−チミジンの取りこみを、液体シンチレーションカウ
ンティングによって決定する。

【０１５６】 天然のタンパク質、組換えタンパク質、および融合タンパク質を、多くの他の
生物学的アッセイ系において、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ、マクロファージ
、樹状細胞、造血前駆体など上で、アゴニストおよびアンタゴニストの活性につ
いて試験する。ＩＬ−６およびＧ−ＣＳＦの構造的関連のため、これらの活性に
関連するアッセイが分析されるべきである。

【０１５７】 ＩＬ−Ｂ３０を、ＩＬ−６またはＧ−ＣＳＦレセプターを発現するトランスフ
ェクト細胞およびコントロール上でアゴニストまたはアンタゴニストについて評
価する。例えば、Ｈｏら（１９９３）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓ
ｃｉ． ＵＳＡ ９０，１１２６７−１１２７１；Ｈｏら（１９９５）Ｍｏｌ．
Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１５：５０４３−５０５３；およびＬｉｕら（１９９４）
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１８２１−１８２９を参照のこと。

【０１５８】 ＩＬ−Ｂ３０を、マクロファージ／樹状細胞活性化および抗原提示アッセイ、
抗原または同種異系刺激に応答したＴ細胞サイトカイン産生および増殖における
効果について評価する。例えば、ｄｅ Ｗａａｌ Ｍａｌｅｆｙｔら（１９９１
）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１２０９−１２２０；ｄｅ Ｗａａｌ Ｍａｌ
ｅｆｙｔら（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：９１５−９２４；Ｆｉｏ
ｒｅｎｔｉｎｏら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７，３８１５−３８２
２；Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：３４４
４−３４５１；およびＧｒｏｕｘら（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：
１９−２９を参照のこと。

【０１５９】 ＩＬ−Ｂ３０をまた、ＮＫ細胞刺激に対する効果について評価する。アッセイ
は、例えば、Ｈｓｕら（１９９２）Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：５
６３−５６９；およびＳｃｈｗａｒｚら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ
．１６：９５−１０４に基づき得る。

【０１６０】 Ｂ細胞増殖および分化の効果を、例えば、Ｄｅｆｒａｎｃｅら（１９９２）Ｊ
．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：６７１−６８２；Ｒｏｕｓｓｅｔら（１９９２）Ｐ
ｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８９：１８９０−１８
９３において記載される方法論（ＩｇＧ２およびＩｇＡ２スイッチ因子アッセイ
（ｓｗｉｔｃｈ ｆａｃｔｏｒ ａｓｓａｙｓ）を含む）によって分析する。Ｃ
ＯＳ７上清とは異なり、ＮＩＨ３Ｔ３およびＣＯＰ上清は、見かけ上、ヒトＢ細
胞アッセイには干渉しないことに、注目すべきである。

【０１６１】 （ＩＸ．遺伝的に改変された動物の作製および分析） トランスジェニックマウスは、標準的な方法によって作製され得る。このよう
な動物は、特定の組織、または生物の全体に渡って、遺伝子の欠失の効果を決定
するために有用である。このようなものは、種々の段階の動物または特定の組織
の発達に対して、興味深い洞察を提供し得る。さらに、生物学的ストレスに対す
る種々の応答に対する効果を評価し得る。例えば、Ｈｏｇａｎら（１９９５）Ｍ
ａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ：Ａ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （第２版）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。

【０１６２】 トランスジェニックマウスは作製されており、そしてその動物は誕生時に生き
ているようであるが、成長することができず、そして代表的には数週間以内に死
亡する。その構築物は、広範でかつ高度な発現を導くはずのＣＭＶエンハンサー
を伴うアクチンプロモーターに基づいている。それらのマウスは、ＩＬ−６トラ
ンスジェニックマウスと同様に、成長阻害動物（ｒｕｎｔｅｄ）である。さらに
、それらは、腹部の膨張、胃および腸の炎症、細胞の肝臓への浸潤を示し、そし
て代表的には５０日目をむかえる前に死亡する。これらのマウスは繁殖しない。
トランスジェニックマウスの第２のサブセットは、表現型の重篤度がより少なく
、そしてそれらを繁殖させる試みが行われている。

【０１６３】 マウスＩＬ−Ｂ３０のゲノム構造は決定されている。ＩＬ−Ｂ３０ノックアウ
トマウスの産生のためのストラテジーが開発されており、そして構築が開始され
ている。

【０１６４】 本明細書中で引用される全ての参考文献は、あたかも各個々の刊行物または特
許出願が、具体的にそして個々に全ての目的のためにその全体が参考として援用
されることが示されてるかと同様な程度まで、本明細書中で参考として援用され
る。

【０１６５】 当業者に明らかなように、本発明の多くの修飾および改変が、その精神および
範囲から逸脱することなく成され得る。本明細書中に記載される特定の実施態様
は、例示の目的のためのみで提供され、そして本発明は、添付の請求の範囲の文
言、ならびにこのような請求項に与えられる等価物の権利の全範囲によってのみ
限定される。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｋ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ｃ１２Ｑ 1/68 33/68 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｐ 21/08 33/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ // Ｃ１２Ｐ 21/08 5/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＲ，ＨＵ，Ｉ Ｄ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ， ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (71)出願人 2000 Ｇａｌｌｏｐｉｎｇ Ｈｉｌｌ Ｒ ｏａｄ， Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ， Ｎｅ ｗ Ｊｅｒｓｅｙ 07033−0530， Ｕ. Ｓ．Ａ

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ａ）配列番号２の成熟コード部分由来の少なくとも１７個の
   連続するアミノ酸； ｂ）配列番号４の成熟コード部分由来の少なくとも１７個の連続するアミノ酸；
   または ｃ）配列番号５の成熟コード部分由来の少なくとも１７個の連続するアミノ酸；
   を含む抗原性ポリぺプチドをコードする、単離されたポリヌクレオチド、または
   組換えポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 ａ）配列番号２；またはｂ）配列番号４； の成熟ポリぺプチドをコードする、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 ａ）配列番号１のコード部分、またはｂ）配列番号３のコー
   ド部分に対して； ５５℃、５００ｍＭ未満の塩、および５０％ホルムアミドでハイブリダイズする
   、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 ａ）配列番号１のコード部分の少なくとも３５個の連続する
   ヌクレオチド；または ｂ）配列番号３のコード部分の少なくとも３５個の連続するヌクレオチド； を含む、請求項３に記載のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 請求項１に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
6. 【請求項６】 請求項５に記載の発現ベクターを含有する宿主細胞であって
   、真核生物細胞を含む、宿主細胞。
7. 【請求項７】 請求項１に記載の組換えポリヌクレオチドを発現する工程を
   包含する、抗原性ポリぺプチドを作製する方法。
8. 【請求項８】 請求項１に記載のポリヌクレオチドの検出のための方法であ
   って、該ポリヌクレオチドを、 ａ）配列番号１のコード部分；または ｂ）配列番号３のコード部分； の少なくとも２５個の連続するヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイ
   ブリダイズするプローブと接触させて、２本鎖を形成する工程であって、ここで
   、該２本鎖の検出が、該ポリヌクレオチドの存在を示す、工程を包含する、方法
   。
9. 【請求項９】 請求項１に記載のポリヌクレオチドの検出のためのキットで
   あって、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で請求項１に記載の
   ポリヌクレオチドの少なくとも１７個の連続するヌクレオチドにハイブリダイズ
   して２本鎖を形成するプローブ、を含む区画を含む、キット。
10. 【請求項１０】 前記プローブが検出可能に標識されている、請求項９に記
    載のキット。
11. 【請求項１１】 ａ）配列番号２由来の少なくとも１７個の連続するアミノ
    酸； ｂ）配列番号４由来の少なくとも１７個の連続するアミノ酸；または ｃ）配列番号５由来の少なくとも１７個の連続するアミノ酸； に特異的に結合する抗体の結合部位を含む、結合化合物。
12. 【請求項１２】 請求項１１に記載の結合化合物であって、 ａ）前記抗体の結合部位が、 １）配列番号２のポリぺプチドと特異的に免疫反応性であるか； ２）配列番号４のポリぺプチドと特異的に免疫反応性であるか； ３）配列番号５のポリぺプチドと特異的に免疫反応性であるか； ４）精製されたヒトＩＬ−Ｂ３０タンパク質または組換え的に産生されたヒト
    ＩＬ−Ｂ３０タンパク質に対して惹起されているか； ５）精製されたマウスＩＬ−Ｂ３０または組換え的に産生されたマウスＩＬ−
    Ｂ３０に対して惹起されているか； ６）モノクローナル抗体、ＦａｂまたはＦ（ａｂ）２中にあるか；あるいは、
    ｂ）該結合化合物が、 １）抗体分子であるか； ２）ポリクローナル抗血清であるか； ３）検出可能に標識されているか； ４）滅菌してあるか；または ５）緩衝化組成物中にある、 結合化合物。
13. 【請求項１３】 請求項１１に記載の結合化合物を使用する方法であって、
    該結合化合物を、抗原を含む生物学的試料と接触させる工程であって、ここで、
    該接触により、結合化合物：抗原複合体が形成される、工程を包含する、方法。
14. 【請求項１４】 前記生物学的試料がヒト由来であり、そして前記結合化合
    物が抗体である、請求項１３に記載の方法。
15. 【請求項１５】 請求項１２に記載の結合化合物、および： ａ）該検出のための該結合化合物の使用についての説明資料；または ｂ）該結合化合物を分離するための区画、 を含む、検出キット。
16. 【請求項１６】 実質的に純粋な、または単離された抗原性ポリぺプチドで
    あって、請求項１１に記載の結合組成物に結合し、そしてさらに ａ）配列番号２由来の少なくとも１７個の連続するアミノ酸； ｂ）配列番号４由来の少なくとも１７個の連続するアミノ酸；または ｃ）配列番号５由来の少なくとも１７個の連続するアミノ酸、 を含む、ポリぺプチド。
17. 【請求項１７】 請求項１６に記載のポリぺプチドであって、 ａ）霊長類ＩＬ−Ｂ３０タンパク質由来の少なくとも２５個の連続するアミノ
    酸残基の少なくとも１つのフラグメントを含むか； ｂ）げっ歯類ＩＬ−Ｂ３０タンパク質由来の少なくとも２５個の連続するアミ
    ノ酸残基の少なくとも１つのフラグメントを含むか； ｃ）可溶性ポリぺプチドであるか； ｄ）検出可能に標識されているか； ｅ）滅菌組成物中にあるか； ｆ）緩衝化組成物中にあるか； ｇ）細胞表面レセプターに結合しているか； ｈ）組換え産生されたか、または ｉ）天然に存在するポリぺプチド配列を有する、 ポリぺプチド。
18. 【請求項１８】 請求項１７に記載のポリぺプチドであって、 ａ）配列番号２の少なくとも１７個の連続するアミノ酸を含むか； ｂ）配列番号４の少なくとも１７個の連続するアミノ酸を含むか；または ｃ）配列番号５の少なくとも１７個の連続するアミノ酸を含む、 ポリぺプチド。
19. 【請求項１９】 細胞または組織培養細胞の生理または発生を調節する方法
    であって、該細胞を、哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０のアゴニストまたはアンタゴニスト
    と接触させる工程を包含する、方法。
20. 【請求項２０】 請求項１９に記載の方法であって、 ａ）前記接触させる工程が、Ｇ−ＣＳＦおよび／もしくはＩＬ−６のアゴニス
    トもしくはアンタゴニストと組み合わせられるか；または ｂ）前記接触させる工程が、ＩＬ−Ｂ３０に特異的に結合する抗体の結合部位
    を含む結合組成物を含むアンタゴニストとの接触である、 方法。