HRP20040051A2 - Metabolic controlled fermentation process for pseudomonic acid production - Google Patents
Metabolic controlled fermentation process for pseudomonic acid production Download PDFInfo
- Publication number
- HRP20040051A2 HRP20040051A2 HR20040051A HRP20040051A HRP20040051A2 HR P20040051 A2 HRP20040051 A2 HR P20040051A2 HR 20040051 A HR20040051 A HR 20040051A HR P20040051 A HRP20040051 A HR P20040051A HR P20040051 A2 HRP20040051 A2 HR P20040051A2
- Authority
- HR
- Croatia
- Prior art keywords
- fermentation
- process according
- fermentation process
- acid
- mixture
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
- C12P17/162—Heterorings having oxygen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. Lasalocid
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Reference srodne prijave
Ova prijava poziva se na privremenu prijavu 35 U.S.C. 119 (e) U.S. Provisional Patent Application Serial No. 60/299,927, predanu 21. 6. 2001., čiji je sadržaj ovdje uključen u svojoj potpunosti.
Područje izuma
Predmetni izum odnosi se na fermentacijski proces kontroliran metabolizmom za preparaciju pseudomonične kiseline. Određenije, predmetni izum je usmjeren na fermentacijski proces za preparaciju pseudomonične kiseline A regulacijom pH razine smjese za fermentacijsku kulturu putem unošenja dekstroze, mineralne soli kao što je kalcij klorid, kisele otopine ili alkalne otopine.
Pozadina izuma
Pseudomonična kiselina A, također poznata kao mupirocin, predstavlja glavnu komponentu pseudomonične kiseline. Pseudomoničnu kiselinu A otkrili su A. T. Fuller et al. 1971 godine [Nature 234, 416 (1971)]. Pseudomonična kiselina A ima sljedeći kemijski naziv i trgovačko ime: [2S-[2α(E),3β,4β,5α[2R*,3R*(1R*,2R*)]]]-9-[[3-metil-1-okso-4-[tetrahidro-3,4-dihidroksi-5-[[3*-(2-hidroksi-1-metilpropil)oksiranil]metil]-2H-piran-2-il]-2-butenil]oksi]nonanska kiselina, pseudomonična kiselina A, trans-pseudomonična kiselina, BRL-4910A, Bactoderm, Bactroban i Turixin.
Pseudomonična kiselina ima topičku antibakterijsku terapeutsku aktivnost.
[image]
Pseudomonična kiselina A (Mupirocin)
Pseudomonična kiselina A je moćan antibiotik protiv gram (+) bakterija (Staphilococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae) i nekih gram (-) bakterija (Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae) [A. Ward, D. M. Campoli-Richards: Drugs 32, 425-444 (1986)]. Način djelovanja vjeruje se da uključuje inhibiranje izoleucin-tRNA sintetaza enzima koji djeluje na sintezu peptida kod bakterija [J. Hughes and G. Mellows: Biochem. Journal 191, 209-219 (1980)]. Izlaganje ovih referenci je uključeno putem reference u svojoj potpunosti.
Sada se pseudomonična kiselina proizvodi uzgajanjem Pseudomonas sp. Uobičajeni postupak "Fed Batch Technology" uključuje unošenje hranjivih tvari na početku fermentacijskog procesa bez reguliranja pH i koncentracije hranjivih tvari. Uslijed fluktuacije razine pH i nedostatka hranjivih tvari za vrijeme "Fed Batch" fermentacijskog procesa, iskorištenje pseudomonične kiseline je često smanjeno. Istovremeno povećanje nečistoća često predstavlja glavni nedostatak "Fed Batch" tehnologije.
Postoj i neprekidna potreba za poboljšanjem fermentacijskih procesa za preparaciju pseudomonične kiseline, naročito za povećanjem stupnja čistoće produkta pseudomonične kiseline A (npr., značajno smanjujući količinu nečistoća pseudomonične kiseline B).
Sažetak izuma
Prema jednom aspektu, predmetni izum pruža poboljšani postupak za proizvodnju pseudomonične kiseline koji obuhvaća korake:
a) pripremanje fermentacijske smjese koja sadrži mikroorganizam koji proizvodi pseudomoničnu kiselinu;
b) reguliranje pH fermentacijske smjese, i
c) izoliranje pseudomonične kiseline iz fermentacijske smjese.
Prema drugom aspektu, predmetni izum pruža efikasni postupak za proizvodnju pseudomonične kiseline koji postiže visoku razinu čistoće (tj., omjer pseudomonične B nečistoće prema pseudomoničnoj kiselini A je manje od 3%). Stoga, predmetni izum pruža poboljšani i ekonomični fermentacijski postupak za preparaciju visoko pročišćene pseudomonične kiseline A uz povećano iskorištenje.
Prema drugom aspektu, predmetni izum pruža fermentacijski postupak za proizvodnju pseudomonične kiseline pomoću soja Pseudonomas sp. uloženog pod šifrom No. NCAIM (P) B 001235 u Nacionalnoj zbirci poljoprivrednih i industrijskih mikroorganizama ("National Collection of the Agricultural and Industrial Microorganisms").
Prema drugom aspektu, predmetni izum pruža fermentacijski proces pri kojem se pH fermentacijske kulture regulira da bude oko 5.5-6.0 za vrijeme fermentacije. Najviše preferirano, pH fermentacijske smjese se održava na oko 5.7.
Prema drugom aspektu, predmetni izum pruža fermentacijski proces za preparaciju pseudomonične kiseline gdje se pH regulira unošenjem izvora ugljika koji se može asimilirati u podlogu fermentacijske kulture. Preferirano, izvor ugljika koji se može asimilirati je dekstroza.
Prema drugom aspektu, predmetni izum pruža fermentacijski proces za preparaciju pseudomonične kiseline gdje se dekstroza održava na razini manjoj od oko 0.5% u fermentacijskoj smjesi za vrijeme proizvodne faze.
Prema drugom aspektu, predmetni izum pruža fermentacijski proces za preparaciju pseudomonične kiseline gdje se fermentacijska kultura hrani otopinom koja sadrži najmanje 0.1 % kalcijevog klorida (CaCl2) za vrijeme proizvodne faze fermentacije.
Prema jednom drugom aspektu, predmetni izum pruža fermentacijski proces za preparaciju pseudomonične kiseline gdje se pH medij a fermentacijske kulture regulira unošenjem alkalne otopine i/ili kisele otopine u fermentacijsku smjesu.
Prema drugom aspektu, predmetni izum pruža fermentacijski proces za optimalnu kombinaciju unošenja dekstroze i kisele otopine. Predmetni izum pruža optimalnu kombinaciju unošenja dekstroze i kiseline koja može stimulirati biosintezu pseudomonične kiseline za vrijeme fermentacije i izbjeći efekt represije uslijed suviška izvora ugljika u smjesi.
Detaljan opis izuma
Ako nije drugačije navedeno, izraz "%" odnosi se na % težine u odnosu na težinu, "vvm" odnosi se na volumen zraka / volumen fermentacijske smjese / minute, "HPLC" odnosi se na visokotlačnu tekućinsku kromatografiju. Izraz "dekstroza" odnosi se također na glukozu.
Kako se ovdje koristi, izraz "uronjena kultura" odnosi se na fermentacijsku kulturu koja je tekuća kultura uz miješanje i propuhivanje zraka; "Fed Batch Technology" odnosi se na fermentacijski proces gdje se jedna ili više hranjiva komponenta (npr., izvor ugljika ili sol) unose samo na početku fermentacijskog procesa, "metabolička kontrola" fermentacije odnosi se na fermentacijski proces za vrijeme kojeg se podešava potrošnja izvora ugljika ili dušika; "proizvodna faza" odnosi se na period fermentacije za vrijeme kojeg se potrebne molekule biosintet i žiraju; i "logaritamska faza" odnosi se na period fermentacije za vrijeme kojeg se mikroorganizam umnožava logaritamskom progresijom.
Kako se ovdje koristi, izraz "mineralna sol" odnosi se na sol biološki važnog elementa i elementa u tragovima. Preferirano, koristi se magnezijev sulfat kao mineralna sol koja djeluje tako da regulira pH i neke druge dodatne efekte. Najviše preferirano, kalcijev klorid se koristi kao mineralna sol.
Kako se ovdje koristi, izraz "koji se može asimilirati" odnosi se na dani mikroorganizam koji ima enzimski sistem za apsorpciju hranjivih tvari i potrošnju ili primjenu ili razgradnju takvih hranjivih tvari za primjenu u biosintezi složenih sastojaka mikroorganizma.
Preferirani mikroorganizam za proizvodnju pseudomonične kiseline za provođenje fermentacijskog procesa izuma je soj Pseudonomas sp.. Alternativni mikroorganizmi za proizvodnju pseudomonične kiseline uključuj u potomstvo Pseudonomas sp., njegove prirodne varijante i mutante. Najviše preferirano, koristi se soj Pseudonomas sp. koji ima šifru No. NCAIM (P) B 001235 uloženu u Nacionalnoj zbirci poljoprivrednih i industrijskih mikroorganizama ("National Collection of the Agricultural and Industrial Microorganisms").
Preferirano, pH fermentacijske smjese se regulira tako da se povisi pseudomonična kiselina A a smanji pseudomonična kiselina B (tj., omjer nečistoće pseudomonifine B prema pseudomoničnoj A je manji od 3%). Više preferirano, pH fermentacijske smjese se održava na pH razini između oko 5.2 - 6.2. Najviše preferirano, pH fermentacijske smjese je pH 5.7.
Preferirano, soj Pseudomonas sp., se uzgaja u uronjenom medij u za kulturu. Preferirano, fermentacijska kultura se provodi pri temperaturi unutar 20 - 30°C.
Za reguliranje pH fermentacijske kulture, jedna preferirana izvedba uključuje unošenje izvora ugljika koji se može asimilirati u medij fermentacijske kulture. Preferirana izvedba izvora ugljika koji se može asimilirati je dekstroza. U skladu s tim, unošenje dekstroze služi kao izvor ugljika koji se može asimilirati i njegovi intermedijeri i konačni produkti često snižavaju pH fermentacijske smjese. Najviše preferirano, unošenje dekstroze se održava na razini ispod od oko 0.5% dekstroze u fermentacijskoj smjesi za vrijeme proizvodne faze.
Druge preferirane izvedbe izvora ugljika koji se može asimilirati uključuju glicerol, biljna i životinjska ulja i masnoće.
Kada se koristi glicerol za hranjenje medija fermentacijske kulture kao izvor ugljika koji se može asimilirati, on nema dovoljan efekt da snizi pH fermentacijske smjese. U skladu s tim, cesto se koristi kisela otopina da se istovremeno hrani fermentacijska smjesa kako bi se postigao optimalni efekt. Preferirano, kisele otopine uključuju HCl, HNO3 i H2SO4. Najviše preferirano, kisela otopina je HCl.
Kada je pH medij a fermentacijske kulture nizak, često se koristi alkalna otopina za ishranu fermentacijske smjese da se postigne optimalna pH razina. Preferirano, alkalna otopina koja se koristi za ishranu fermentacijske smjese uključuje NaOH i KOH. Najviše preferirano, alkalna otopina je NaOH.
Druga preferirana izvedba za reguliranje pH medija fermentacijske kulture uključuje unošenje mineralne soli. Preferirano, otopina kalcijevog klorida se koristi za ishranu medij a fermentacijske kulture. Više preferirano, koristi se 0.1 - 0,8% (wt/wt) otopina kalcijevog klorida. Najviše preferirano, koristi se 0.1% (wt/wt) otopina kalcijevog klorida.
Postupak prema izumu je detalj no ilustriran sljedećim primjerima koji nisu ograničavajući.
Primjer 1
[image]
Kultura Pseudomonas sp. u nasadnom mediju
Nasadni medij (bez dekstroze) priređen je u posudi od 60 litara. Priređeni nasadni medij (oko 40 - 60 litara) je steriliziran oko 45 min pri temperature oko 120°C.
Otopina dekstroze priređena je odvojeno. pH otopine dekstroze podešen je pomoću kloridne kiseline do oko 4.0 - 5.0. Otopina dekstroze je sterilizirana oko 25 min. pri temperaturi oko 120°C. Sterilizirana otopina dekstroze dodana je u nasadni medij da se postigne koncentracija dekstroze 20 g/L.
Soj Pseudomonas sp. (tj., NCAIM(P) B 001235) je nanesen na sterilizirani nasadni medij (oko 500 ml). Soj Pseudomonas sp. pušten je da raste u nasadnom mediju dok nije dostigao logaritamsku fazu rasta. Uzgoj Pseudomonasa proveden je uz sljedeće parametre:
Temperatura: oko 25 ± 1°C;
Tlak: oko 0.4 ± 0.1 bar;
Brzina miješanja: oko 400 okretaja u minuti (rpm);
Omjer prozračavanja: oko 0.5 vvm.
Ukupno vrijeme faze nasađivanja bilo je 24 sata.
Kultura Pseudomonas sp. u fermentacijskom mediju
Glavni fermentacijski medij je priređen u posudi od 300 litara. Priređeni glavni fermentacijski medij (oko 200 litara) steriliziran je oko 45 min pri temperaturi oko 120°C.
Otopina dekstroze priređena je odvojeno. pH otopine dekstroze podešen je pomoću kloridne kiseline do oko 4.0 - 5.0. Otopina dekstroze je sterilizirana oko 25 min pri temperaturi oko 120°C. Sterilizirana otopina dekstroze dodana je u glavni fermentacijski medij.
Nakon što je priređen glavni fermentacijski medij, dodan je nasadni medij koji sadrži soj Pseudomonas sp. nakon nasadnog stupnja. Omjer nasadnog stupnja prema glavnom fermentacijskom mediju bio je oko 10% (wt/wt).
Uzgoj fermentacijske smjese proveden je uz sljedeće parametre:
Temperatura: oko 25 ± 1°C;
Omjer provjetravanja: oko 0,5 - 1.0 vvm;
Brzina miješanja: oko 300 - 600 okretaja u min (rpm); i
Tlak: oko 0.5 bar.
Brzina miješanja i brzina provjetravanja podešene su unutar gore spomenutog raspona kako bi se održavao otopljeni kisik na konstantnoj razini od 30% za vrijeme cijelog fermentacijskog procesa.
Trajanje uzgoja fermentacijske smjese bilo je oko 64 sata. Za vrijeme fermentacijskog procesa, dodatno ulje je dodavano u fermentacijsku smjesu ako je došlo do pjenjenja smjese.
ISKORIŠTENJE: Postignuto iskorištenje pseudomonične kiseline A bilo je oko 2056 μg /gram fermentacijske smjese kako je mjereno pomoću HPLC. Nečistoća pseudomonična kiselina B procijenjena je na oko 18 % (wt/wt) pseudomonične kiseline A.
Određivanje sadržaja i čistoće pseudomonične A i pseudomonične B:
Određivanje sadržaja i čistoće za pseudomoničnu A i pseudomoničnu B temeljeno je na metodi probe u USP 24. Određivanje probe provedeno je pomoću HPLC u kojoj su određivane koncentracije pseudomonične A i pseudomonične B kao i omjer wt/wt pseudomonične A i pseudomonične B.
Kromatografski sistem je uključivao:
Kolona : LiChrosper 100 RP-18,5m, 250-4;
Detektor: UV 229 nm;
Brzina protoka: 0.7 ml/min;
Naneseni volumen: 20 μl; i
Mobilna faza: Prirediti prikladnu smjesu pH 6.3 fosfatnog pufera (0.05 M monobazični natrijev fosfat) i acetonitril (75:25).
Standardna otopina:
Odvagane pseudomonična A i pseudomonična B dodane su u volumetrijsku tikvicu volumena 100 ml nakon čega slijedi 25 ml acetonitrila da nastane smjesa, smjesa je razrijeđena fosfatnim puferom (pH 6.3) i onda promiješana. Konačna koncentracija standarda bila je oko 100 μg/ml.
Trajanje: oko 15 minuta.
Priređivanje uzorka iz fermentacijske smjese:
Mupirocin fermentacijska smjesa (5 ml) prenesena u 10.0 ml volumetrijsku tikvicu i razrijeđena etil alkoholom (96%);
Obrađivano ultrazvukom 20 minuta;
Centrifugirano 15 minuta na 5000 rpm;
Razrijeđen supernatant (1.0 ml) do 10.0 ml mobilnom fazom;
Filtrirano kroz Millipore filtar (0.45 mikrona).
Primjer 2
[image]
Kultura Pseudomonas sp. u nasadnom mediju
Nasadni medij (bez dekstroze) priređen je u posudi od 60 litara. Priređeni nasadni medij (oko 40 - 60 litara) je steriliziran oko 45 min pri temperature oko 120°C.
Otopina dekstroze priređena je odvojeno. pH otopine dekstroze podešen je pomoću kloridne kiseline do oko 4.0 - 5.0. Otopina dekstroze je sterilizirana oko 25 min pri temperaturi oko 120°C. Sterilizirana otopina dekstroze dodana je u glavni fermentacijski medij pri koncentraciji dekstroze 20 g/L.
Soj pseudomonas sp. (tj., NCAIM (P) B 001235) inokuliran u steriliziran nasadili medij (500 ml). Soj Pseudomonas sp, pušten je da raste u nasadnom mediju dok nije došao do faze logaritamskog rasta. Uzgoj Pseudomonasa provođen je uz sljedeće parametre:
Temperatura: oko 25 ± 1°C;
Tlak: oko 0.4 ± 0,1 bar;
Brzina miješanja: oko 400 rpm; i
Omjer provjetravanja: oko 0.5 vvm.
Ukupno vrijeme faze nasađivanja bilo je 24 sata.
Kultura Pseudomonas sp. u fermentacijskom mediju
Glavni fermentacijski medij je priređen u posudi od 300 litara. Priređeni glavni fermentacijski medij (oko 200 litara) steriliziran je oko 45 min pri temperaturi oko 120°C.
Otopina dekstroze priređena je odvojeno. pH otopine dekstroze podešen je pomoću kloridne kiseline do oko 4,0 - 5.0. Otopina dekstroze je sterilizirana oko 25 min. pri temperaturi oko 120°C. Sterilizirana otopina dekstroze dodana je u glavni fermentacijski medij da se postigne koncentracija 20 g/L.
Nakon što je priređen glavni fermentacijski medij, dodan je nasadni medij koji sadrži soj Pseudomonas sp. nakon nasadnog stupnja. Omjer nasadnog stupnja prema glavnom fermentacijskom mediju bio je oko 10% (wt/wt).
Uzgoj fermentacijske smjese proveden ja uz sljedeće parametre:
Temperatura: oko 25 ± 1°C;
Brzina provjetravanja: oko 0.5 - 1.0 vvm;
Brzina miješanja: oko 300 - 600 okretaja u min (rpm), - i
Tlak: oko 0.5 bar.
Brzina miješanja i brzina provjetravanja podešene su unutar gore spomenutog raspona kako bi se održavao otopljeni kisik na konstantnoj razini od 30% za vrijeme cijelog fermentacijskog procesa.
Kada je fermentacijska smjesa postigla pH oko 5.5 - 5.8, pH je počeo rasti. Kroz fermentacijsku smjesu pH je reguliran pri konstantnoj razini oko 5.5 - 6.0. Ovo je postignuto dodavanjem otopine kloridne kiseline u fermentacijsku smjesu. Brzina nanošenja kloridne kiseline varirala je ovisno o trenutačnom pH smjese.
Trajanje uzgoja fermentacijske smjese bilo je oko 66 sati. Za vrijeme fermentacijskog procesa, dodatno ulje je dodavano u fermentacijsku smjesu ako je došlo do pjenjenja smjese.
ISKORIŠTENJE: Postignuto iskorištenje pseudomonične kiseline A bilo je oko 2251 μg/gram fermentacijske smjese kako je mjereno pomoću HPLC. Nečistoća pseudomonična kiselina B procijenjena je na oko 1.6 % (wt/wt) pseudomonične kiseline A.
Primjer 3
U ovom primjeru preparacija nasadnog medija, glavnog fermentacijskog medija i uzgoj soja Pseudomonas sp. u nasadnom mediju i glavnom fermentacijskom mediju provedeni su u skladu s primjerom 2.
Uzgoj fermentacijske smjese također je proveden s istim parametrima kulture kako je definirano u primjeru 2.
Međutim, pH fermentacijske smjese u ovom primjeru bio je podešavan primjenom različitog postupka. Umjesto unošenja kloridne kiseline u fermentacijsku smjesu, pH je reguliran unošenjem otopine dekstroze.
Opaženo je da je pH počeo rasti kada je fermentacijska smjesa postigla pH oko 5.5 - 5.8. U ovom primjeru, pH je reguliran pri konstantnoj razini oko 5.5 - 6.0. Ovo je postignuto dodavanjem otopine dekstroze. Brzina unošenja otopine dekstroze u fermentacijsku smjesu ovisila jeo trenutačnom pH i trenutačnom sadržaj u dekstroze u smjesi. Za vrijeme unošenja dekstroze, razina glukoze nije puštena da bude iznad oko 0.5% (wt/wt). Kada se pH povisio iznad 5.8 - 6.0 i razina dekstroze je bila iznad 0.45% (wt/wt), pH je podešen unošenjem kloridne kiseline umjesto dekstroze u fermentacijsku smjesu.
Trajanje uzgoja fermentacijske smjese bilo je oko 66 sati. Za vrijeme fermentacijskog procesa, dodatno ulje je dodavano u fermentacijsku smjesu ako je došlo do pjenjenja smjese.
ISKORIŠTENJE: Postignuto iskorištenje pseudomonične kiseline A bilo je oko 3021 μg/gram fermentacijske smjese kako je mjereno pomoću HPLC. Nečistoća pseudomonična kiselina B procijenjena je na oko 2.9 % (wt/wt) pseudomonične kiseline A.
Predmetni izum ne treba se ograničiti u dometu ovdje opisanim specifičnim izvedbama. Zaista, različite modifikacije izuma dodatno uz one opisane ovdje, postat će očite stručnjacima u području, iz prethodnog opisa i pratećih brojki. Takve modifikacije su namijenjene da budu unutar dometa patentnih zahtjeva. Ovdje su citirane različite publikacije čije iznošenje je uključeno putem reference u svojoj potpunosti.
Claims (34)
1. Fermentacijski proces za proizvodnju pseudomonične kiseline naznačen time da obuhvaća korake:
a) pripremanje fermentacijske smjese koja sadrži mikroorganizam koji proizvodi pseudomoničnu kiselinu;
b) reguliranje pH fermentacijske smjese,- i
c) izoliranje pseudomonične kiseline iz fermentacijske smjese.
2. Fermentacijski proces prema zahtjevu 1 naznačen time da pseudomonična kiselina je pseudomonična kiselina A.
3. Fermentacijski proces prema zahtjevima 1 ili 2 naznačen time da se mikroorganizam koji proizvodi pseudomoničnu kiselinu izabere iz skupine koja se sastoji od soja Pseudomonas sp., njegovog potomstva, prirodne varijante i mutantne varijante Pseudomonasa sp..
4. Fermentacijski proces prema zahtjevu 3 naznačen time da soj Pseudomonas sp. je NCAIM (P) B 001235 uložen u Nacionalnoj zbirci poljoprivrednih i industrijskih mikroorganizama ("National Collection of the Agricultural and Industrial Microorganisms").
5. Fermentacijski proces prema patentnim zahtjevima 1, 2, 3 ili 4 naznačen time da je fermentacija u uronjenoj kulturi.
6. Fermentacijski proces prema patentnim zahtjevima 1, 2, 3, 4 ili 5 naznačen time da se fermentacija održava pri temperaturi oko 20°C - 30°C.
7. Fermentacijski proces prema patentnim zahtjevima 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 naznačen time da se pH fermentacijske smjese regulira za vrijeme proizvodne faze fermentacije.
8. Fermentacijski proces prema patentnim zahtjevima 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7 naznačen time da se pH fermentacijske smjese održava na oko 5.7.
9. Fermentacijski proces prema patentnim zahtjevima 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 naznačen time da se pH fermentacijske smjese regulira unošenjem izvora ugljika koji se može asimilirati u fermentacijsku smjesu.
10. Fermentacijski proces prema patentnom zahtjevu 9 naznačen time da se unošenje izvora ugljika koji se može asimilirati kontrolira metabolički.
11. Fermentacijski proces prema patentnom zahtjevu 9 ili 10 naznačen time da je izvor ugljika koji se može asimilirati dekstroza.
12. Fermentacijski proces prema patentnim zahtjevima 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ili 11 naznačen time da se pH fermentacijske smjese regulira istovremenim dodavanjem izvora ugljika koji se može asimilirati i kisele otopine u fermentacijsku smjesu.
13. Fermentacijski proces prema patentnom zahtjevu 12 naznačen time da je izvor ugljika koji se može asimilirati glicerol i kisela otopina je kloridna kiselina.
14. Fermentacijski proces prema patentnim zahtjevima 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ili 13 naznačen time da se pH fermentacijske smjese regulira dodavanjem mineralne soli u fermentacijsku smjesu.
15. Fermentacijski proces prema patentnom zahtjevu 14 naznačen time da je mineralna sol otopina kalcijevog klorida.
16. Fermentacijski proces prema patentnom zahtjevu 15 naznačen time da je otopina kalcijevog klorida oko 0.1% - 0.8% (wt/wt).
17. Fermentacijski proces prema patentnom zahtjevu 15 naznačen time da je otopina kalcijevog klorida oko 0.3% (wt/wt).
18. Fermentacijski proces prema patentnim zahtjevima 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 ili 17 naznačen time da se pH fermentacijske smjese regulira dodavanjem alkalne otopine u fermentacijsku smjesu.
19. Fermentacijski proces prema patentnom zahtjevu 18 naznačen time da se alkalna otopina izabere iz skupine koja se sastoji od natrijevog hidroksida i kalijevog hidroksida.
20. Fermentacijski proces prema patentnom zahtjevu 18 naznačen time da je alkalna otopina kalijev hidroksid.
21. Fermentacijski proces prema zahtjevima 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ili 20 naznačen time da se pH fermentacijske smjese regulira dodavanjem kisele otopine u fermentacijsku smjesu.
22. Fermentacijski proces prema patentnom zahtjevu 21 naznačen time da se kisela otopina izabere iz skupine koja se sastoji od nitratne kiseline (HNO3), sulfatne kiseline (H2SO4) i kloridne kiseline (HCl).
23. Fermentacijski proces prema patentnim zahtjevima 21 ili 22 naznačen time da je kisela otopina kloridna kiselina.
24. Postupak prema patentnim zahtjevima 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 ili 23 naznačen time da se pH fermentacijske smjese održava između oko 5.2 - 6.2.
25. Fermentacijski proces za proizvodnju pseudomonične kiseline naznačen time da obuhvaća korake:
a) pripremanje fermentacijske smjese koja sadrži mikroorganizam koji proizvodi pseudomoničnu kiselinu i kalcijev klorid;
b) reguliranje pH fermentacijske smjese unošenjem dekstroze nakon čega slijedi kiselina, ako je potrebno; i
c) izoliranje pseudomonične kiseline iz fermentacijske smjese.
26. Fermentacijski proces prema patentnom zahtjevu 24 ili 25 naznačen time da reguliranje pH uključuje održavanje pH na oko 5.7 - 6.
27. Fermentacijski proces prema patentnim zahtjevima 11, 25 ili 26 naznačen time da reguliranje pH uključuje maksimalnu razinu dekstroze oko 0.5% (wt/wt).
28. Fermentacijski proces prema patentnim zahtjevima 25, 26 ili 2 7 naznačen time da se kiselina dodaje kada je pH najmanje oko 5.8 i razina dekstroze je najmanje oko 0.45% (wt/wt).
29. Fermentacijski proces prema patentnim zahtjevima 1, 25, 26, 26, 27 ili 28 naznačen time da proces dovodi do nastajanja pseudomonične kiseline čistoće najmanje oko 82% (wt/wt) pseudomonične kiseline A u odnosu na pseudomoničnu kiselinu B.
30. Fermentacijski proces prema patentnom zahtjevu 29 naznačen time da je čistoća najmanje oko 97%.
31. Pseudomonična kiselina naznačena time da je priređena postupkom prema patentnom zahtjevu 30.
32. Fermentacijska smjesa mikroorganizma koji proizvodi pseudomoničnu kiselinu naznačena time da obuhvaća razinu pseudomonične kiseline A u odnosu na pseudomoničnu kiselinu B (wt/wt) najmanje 97%, gdje su pseudomonična kiselina A i B nastale fermentacijom mikroorganizma.
33. Farmaceutska kompozicija naznačena time da obuhvaća pseudomoničnu kiselinu A i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent, gdje je razina pseudomonične kiseline A najmanje oko 97% u usporedbi s razinom pseudomonične kiseline E (wt/wt).
34. Postupak za liječenje infekcije koja podliježe pseudomoničnoj kiselini u životinji naznačen time da obuhvaća davanje farmaceutske kompozicije prema patentnom zahtjevu 33.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US29992701P | 2001-06-21 | 2001-06-21 | |
| PCT/US2002/020044 WO2003000910A2 (en) | 2001-06-21 | 2002-06-21 | Metabolic controlled fermentation process for pseudomonic acid production |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HRP20040051A2 true HRP20040051A2 (en) | 2004-10-31 |
Family
ID=23156895
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HR20040051A HRP20040051A2 (en) | 2001-06-21 | 2002-06-21 | Metabolic controlled fermentation process for pseudomonic acid production |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7439045B2 (hr) |
| EP (1) | EP1409703A4 (hr) |
| JP (1) | JP2005518780A (hr) |
| KR (1) | KR20040026669A (hr) |
| AU (1) | AU2002345856A1 (hr) |
| CA (1) | CA2448547A1 (hr) |
| CZ (1) | CZ200467A3 (hr) |
| DE (1) | DE02744598T1 (hr) |
| ES (1) | ES2228294T1 (hr) |
| HR (1) | HRP20040051A2 (hr) |
| HU (1) | HUP0500797A2 (hr) |
| MX (1) | MXPA03012044A (hr) |
| PL (1) | PL374255A1 (hr) |
| SK (1) | SK412004A3 (hr) |
| TR (1) | TR200403211T3 (hr) |
| WO (1) | WO2003000910A2 (hr) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1625394A (zh) * | 2001-12-28 | 2005-06-08 | 拜奥盖尔药厂有限公司 | 结晶和无定形莫匹罗星钙的制备方法 |
| IL150907A (en) * | 2002-07-25 | 2007-07-04 | Stephan Cherkez | Process for the preparation of stable amorphous calcium pseudomonate |
| DK1641438T3 (da) * | 2004-06-01 | 2010-06-07 | Teva Gyogyszergyar Zartkoeruen | Fremgangsmåde til fremstilling af den amorfe form af et lægemiddel |
| US7619102B2 (en) | 2005-02-21 | 2009-11-17 | Axellia Pharmaceuticals Aps | Purification of mupirocin |
| CN108277243B (zh) * | 2018-01-19 | 2021-03-12 | 浙江瑞邦药业股份有限公司 | 一种假单胞菌酸a的制备方法 |
| CN108949845B (zh) * | 2018-08-08 | 2021-08-10 | 福建康鸿生物科技有限公司 | 一种发酵培养基及由发酵培养基制备莫匹罗星的方法 |
| EP4273256A4 (en) * | 2021-02-07 | 2025-07-16 | Hangzhou Zhongmeihuadong Pharmaceutical Co Ltd | FERMENTATION PROCESS FOR MUPIROCIN |
Family Cites Families (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1643240A1 (de) | 1966-09-16 | 1971-06-24 | Boehringer Sohn Ingelheim | Verfahren zur Herstellung neuer racemischer oder optisch aktiver 1-Phenoxy-2-aminoalkane |
| US3977943A (en) | 1971-06-12 | 1976-08-31 | Beecham Group Limited | Antibiotics |
| US4071536A (en) | 1971-06-12 | 1978-01-31 | Beecham Group Limited | Antibiotics |
| GB1395907A (en) | 1971-06-12 | 1975-05-29 | Beecham Group Ltd | Antibiotics |
| JPS5270083A (en) | 1975-12-04 | 1977-06-10 | Yoshitomi Pharmaceut Ind Ltd | Manufacture of an antibiotics, trans-pseudomonic acid |
| GB1577730A (en) | 1976-10-23 | 1980-10-29 | Beecham Group Ltd | Treatment of infections with pseudomonicacid salts or esters thereof |
| GB1577545A (en) | 1977-07-27 | 1980-10-22 | Beecham Group Ltd | Treatment of swine dysenter |
| CA1103264A (en) | 1977-09-30 | 1981-06-16 | Norman H. Rogers | Purification of pseudomonic acid |
| CA1115699A (en) | 1978-05-20 | 1982-01-05 | Alan D. Curzons | Lithium pseudomonate and its preparation |
| CA1196284A (en) | 1982-05-28 | 1985-11-05 | Joshua Oduro-Yeboah | Pharmaceutical formulations |
| GB8415579D0 (en) | 1984-06-19 | 1984-07-25 | Beecham Group Plc | Compounds |
| GB8428952D0 (en) | 1984-11-16 | 1984-12-27 | Beecham Group Plc | Formulations |
| GB8530796D0 (en) | 1985-12-13 | 1986-01-22 | Beecham Group Plc | Pharmaceutical composition |
| IE59628B1 (en) * | 1986-06-26 | 1994-03-09 | Beecham Group Plc | Treatment of fungal infections |
| US5594026A (en) | 1990-12-11 | 1997-01-14 | Smithkline Beecham Group P.L.C. | Polymorphs of crystalline mupirocin |
| US5292892A (en) * | 1991-05-07 | 1994-03-08 | Sankyo Company, Limited | Anti-bacterial compound and pharmaceutical compositions thereof |
| US6503881B2 (en) | 1996-08-21 | 2003-01-07 | Micrologix Biotech Inc. | Compositions and methods for treating infections using cationic peptides alone or in combination with antibiotics |
| AU724070B2 (en) | 1996-10-01 | 2000-09-14 | Smithkline Beecham Corporation | Use of mupirocin for the manufacture of a medicament for the treatment of bacterial infections associated with colonisation of the nasopharynx by pathogenic organisms |
| US6231875B1 (en) | 1998-03-31 | 2001-05-15 | Johnson & Johnson Consumer Companies, Inc. | Acidified composition for topical treatment of nail and skin conditions |
| EP1151131A4 (en) | 1999-02-03 | 2004-05-12 | Biogal Gyogyszergyar | PROCESS FOR THE PREPARATION OF A PSEUDOMONIC ACID ANTIBIOTIC USING A MICROBIOLOGICAL METHOD |
| JP2002535996A (ja) | 1999-02-03 | 2002-10-29 | ビオガル ジョジセルジャール アール テー． | シュードモナス酸群を含む培養液からのシュードモナス酸ａの単離方法 |
| US6335023B1 (en) | 1999-06-30 | 2002-01-01 | Ruey J. Yu | Oligosaccharide aldonic acids and their topical use |
| US6528086B2 (en) | 1999-09-28 | 2003-03-04 | Zars, Inc. | Methods and apparatus for drug delivery involving phase changing formulations |
| IL137363A (en) | 2000-07-18 | 2005-12-18 | Agis Ind 1983 Ltd | Pharmaceutical compositions containing mupirocin |
| IL150907A (en) | 2002-07-25 | 2007-07-04 | Stephan Cherkez | Process for the preparation of stable amorphous calcium pseudomonate |
-
2002
- 2002-06-21 AU AU2002345856A patent/AU2002345856A1/en not_active Abandoned
- 2002-06-21 TR TR2004/03211T patent/TR200403211T3/xx unknown
- 2002-06-21 EP EP02744598A patent/EP1409703A4/en not_active Withdrawn
- 2002-06-21 JP JP2003507293A patent/JP2005518780A/ja active Pending
- 2002-06-21 PL PL02374255A patent/PL374255A1/xx unknown
- 2002-06-21 SK SK41-2004A patent/SK412004A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2002-06-21 WO PCT/US2002/020044 patent/WO2003000910A2/en not_active Ceased
- 2002-06-21 KR KR10-2003-7016709A patent/KR20040026669A/ko not_active Ceased
- 2002-06-21 CZ CZ200467A patent/CZ200467A3/cs unknown
- 2002-06-21 HU HU0500797A patent/HUP0500797A2/hu unknown
- 2002-06-21 DE DE02744598T patent/DE02744598T1/de active Pending
- 2002-06-21 MX MXPA03012044A patent/MXPA03012044A/es unknown
- 2002-06-21 US US10/177,026 patent/US7439045B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-06-21 CA CA002448547A patent/CA2448547A1/en not_active Abandoned
- 2002-06-21 ES ES02744598T patent/ES2228294T1/es active Pending
- 2002-06-21 HR HR20040051A patent/HRP20040051A2/hr not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20030027292A1 (en) | 2003-02-06 |
| DE02744598T1 (de) | 2005-03-31 |
| TR200403211T3 (tr) | 2005-02-21 |
| PL374255A1 (en) | 2005-10-03 |
| WO2003000910A2 (en) | 2003-01-03 |
| EP1409703A4 (en) | 2004-08-18 |
| CZ200467A3 (cs) | 2004-10-13 |
| WO2003000910A3 (en) | 2003-04-24 |
| CA2448547A1 (en) | 2003-01-03 |
| AU2002345856A1 (en) | 2003-01-08 |
| KR20040026669A (ko) | 2004-03-31 |
| JP2005518780A (ja) | 2005-06-30 |
| ES2228294T1 (es) | 2005-04-16 |
| EP1409703A2 (en) | 2004-04-21 |
| HUP0500797A2 (en) | 2007-06-28 |
| MXPA03012044A (es) | 2004-06-17 |
| SK412004A3 (en) | 2004-12-01 |
| US7439045B2 (en) | 2008-10-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE68927103T2 (de) | Verfahren zur herstellung von gamma- und delta-lactonen | |
| CN101225411A (zh) | 生物合成生产混合长链二元酸的新方法 | |
| HRP20040051A2 (en) | Metabolic controlled fermentation process for pseudomonic acid production | |
| CN117126904B (zh) | 一种循环持续发酵鼠李糖脂的方法 | |
| CN101538599B (zh) | 提高脱氮假单胞杆菌维生素b12产量的方法 | |
| CN110392737A (zh) | 用产阿洛酮糖差向异构酶微生物生产阿洛酮糖的方法 | |
| CA2719581A1 (en) | Improved fermentation process for higher yield coefficient of lipase-inhibitor with respect to consumed fatty acid | |
| CN104388501B (zh) | 一种应用生物酶的红霉素制备方法 | |
| DE112018006584T5 (de) | Verfahren zur fermentativen Herstellung von oxidiertem Coenzym Q10 sowie daraus hergestelltes hochgehaltiges oxidiertes Coenzym Q10 | |
| KR101579766B1 (ko) | 일종의 사이클릭 리포펩티드 화합물의 제조방법 | |
| CN117327747B (zh) | 采用微生物发酵生产d-泛酸的方法 | |
| TWI627278B (zh) | 生產l-組胺酸之麩胺酸棒狀桿菌變異株與使用其生產l-組胺酸之方法 | |
| CN118109527A (zh) | 一种采用构巢曲霉发酵产5-氨基乙酰丙酸的工艺 | |
| CN109576196A (zh) | 一种生产多拉菌素的发酵培养基及多拉菌素的生产方法 | |
| EP1613759B1 (en) | Fermentation processes with low concentrations of carbon- and nitrogen-containing nutrients | |
| CN105671110B (zh) | 一种生产达巴万星前体a40926的方法 | |
| Adamczak et al. | Properties and yield of synthesis of mannosylerythritol lipids by Candida antarctica | |
| CN110468051A (zh) | 一种k252a发酵培养基及其制备方法 | |
| NO326120B1 (no) | Mikroorganisme som produserer 5-aminolevulinsyre og fremgangsmåte for fremstilling av 5-aminolevulinsyre ved anvendelse derav | |
| JP2002281993A (ja) | シキミ酸の製造方法 | |
| WO1998023766A1 (fr) | Procede de preparation de ribitol | |
| Pospíšil et al. | Changes in fatty acid branching and unsaturation of Streptomyces cinnamonensis as a response to NaCl concentration | |
| KR0175497B1 (ko) | 산화환원 전위조절에 의한 자일리톨의 제조방법 | |
| KR920005976B1 (ko) | 미생물에 의한 l-글루타민의 제조방법 | |
| CN116814714A (zh) | 一种提高海南霉素发酵水平的补料方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1OB | Publication of a patent application | ||
| AIPI | Request for the grant of a patent on the basis of a substantive examination of a patent application | ||
| PNAN | Change of the applicant name, address/residence |
Owner name: TEVA GYOGYSZERGYAR RESZVENYTARSASAG, HU |
|
| ODRP | Renewal fee for the maintenance of a patent |
Payment date: 20050606 Year of fee payment: 4 |
|
| OBST | Application withdrawn |