HK1252848A1

HK1252848A1 - 制备取代的3-(2-苯胺基-1-环己基-1h-苯并咪唑-5-基)丙酸衍生物的方法

Info

Publication number: HK1252848A1
Application number: HK18112179.8A
Authority: HK
Inventors: Heiko Schirmer
Original assignee: Bayer Pharma Aktiengesellschaft
Priority date: 2015-07-27
Filing date: 2016-07-25
Publication date: 2019-06-06
Also published as: CN107848985A; AU2016299329A1; MX2018001204A; PE20181039A1; JP2018527328A; BR112018001535A2; US10703727B2; AR105494A1; CL2018000241A1; IL256926A; EP3328838A1; CN107848985B; RU2018106948A; WO2017017046A1; CO2018000795A2; JP6787998B2; AU2016299329B2; TW201718513A; CA2993480A1; KR20180030906A

Description

制备取代的3-(2-苯胺基-1-环己基-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸衍生物的方法

本发明涉及制备取代的3-(2-苯胺基-1-环己基-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸衍生物的方法以及可用于制备取代的3-(2-苯胺基-1-环己基-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸衍生物的中间体。本发明还涉及3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸的结晶形式，包含该结晶形式的药物组合物，以及该结晶形式用于制备用于治疗疾病的药物的用途。

引言

公开说明书WO2015/121210(A1)中公开了作为突变异柠檬酸脱氢酶IDH1 R132H的抑制剂的3-(2-苯胺基-1-环己基-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸。

IDH1 R132H参与多种细胞过程诸如柠檬酸循环，脂质代谢，修复过程诸如组蛋白甲基化和DNA甲基化(Prensner，J.R.和Chinnaiyan，A.M.：Metabolism unhinged: IDHmutations in cancer，Nature Medicine 2011，17，291-293)。IDH1突变的抑制代表了治疗肿瘤的有希望的疗法。

WO2010/151441(A1)公开了4-(1-环戊基-1H-苯并[d]咪唑-2-基氨基)-N-羟基苯甲酰胺和制备该化合物的方法。

从该现有技术出发，目的包括提供制备3-(2-苯胺基-1-环己基-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸的方法，通过该方法可以以高收率和高纯度获得3-(2-苯胺基-1-环己基-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸，并且该方法可以用作工业生产方法。

发明描述

本发明涉及制备通式(I)的化合物的方法：

其中

R¹ 代表氢原子或R¹代表选自C₁-C₃-烷基-、C₁-C₃-烷氧基-、C₁-C₃-卤代烷基-和C₁-C₃-卤代烷氧基-的系列的基团，

R² 代表氢原子或C₁-C₃-烷基，

R³ 代表氢原子或C₁-C₃-烷基，

R⁴ 代表环己基，其任选被C₁-C₃-烷基单或多取代，和

R⁵ 代表氢原子或C₁-C₆-烷基；

其中所述方法包括以下步骤，其中使通式(II)的化合物：

其中R⁴具有与式(I)的化合物相同的定义，并且R⁶代表C₁-C₆-烷基，

或通式(II)的化合物的盐或溶剂化物或盐的溶剂化物；

与通式(III)的化合物反应：

其中R¹、R²和R³具有与式(I)的化合物相同的定义；

并且在该反应中形成通式(IV)的化合物：

其中R¹、R²、R³和R⁴具有与式(I)的化合物相同的定义，并且R⁶具有与式(II)的化合物相同的定义。

术语“取代的”表示指出的原子或指出的基团上的一个或多个氢已被来自指定组的选择所替代，条件是在有关情况下不超过指出的原子的正常化合价。取代基和/或变体的组合是允许的。

术语“卤素原子”是指氟、氯、溴或碘原子，优选氟、氯或溴原子。

术语“C₁-C₆-烷基”是指具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链饱和一价烃基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、1-乙基丁基、2-乙基丁基、1,1-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基或1,3-二甲基丁基或其异构体。所述基团优选具有1、2、3或4个碳原子(“C₁-C₄-烷基”)，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基，特别优选具有1、2或3个碳原子(“C₁-C₃-烷基”)，例如甲基、乙基、正丙基或异丙基。

术语“C₁-C₃-卤代烷基”是指直链或支链饱和一价烃基，其中术语“C₁-C₃-烷基”如上所定义，并且其中一个或多个氢原子已被相同或不同的卤素原子替代。卤素原子优选为氟。C₁-C₃-卤代烷基例如为氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、五氟乙基、3,3,3-三氟丙基或1,3-二氟丙-2-基。

术语“C₁-C₃-烷氧基”是指式(C₁-C₃-烷基)-O-的直链或支链饱和一价基团，其中术语“C₁-C₃-烷基”如上所定义，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基或异丙氧基。

术语“C₁-C₃-卤代烷氧基”是指如上所定义的直链或支链饱和一价C₁-C₃-烷氧基，其中一个或多个氢原子已被相同或不同的卤素原子替代。卤素原子特别是氟。C₁-C₃-卤代烷氧基是例如氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基或五氟乙氧基。

在本文中例如在“C₁-C₃-烷基”、“C₁-C₃-卤代烷基”、“C₁-C₃-烷氧基”或“C₁-C₃-卤代烷氧基”的定义的上下文中使用的术语“C₁-C₃”，是指具有限于1至3个的碳原子数，即1、2或3个碳原子的烷基。

如果列出了值的范围，则包括该范围内的每个单独的值和子范围。例如，“C₁-C₆”涵盖C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₁-C₆、C₁-C₅、C₁-C₄、C₁-C₃、C₁-C₂、C₂-C₆、C₂-C₅、C₂-C₄、C₂-C₃、C₃-C₆、C₃-C₅、C₃-C₄、C₄-C₆、C₄-C₅和C₅-C₆。

例如，此处使用的术语“离去基团”是指与结合电子一起作为化学反应中的稳定物质被置换的原子或原子组。离去基团优选选自：卤素(特别是氟、氯、溴或碘)、(甲基磺酰基)氧基、[(三氟甲基)磺酰基]氧基、[(九氟丁基)磺酰基]氧基、(苯基磺酰基)氧基、[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基、[(4-溴苯基)磺酰基]氧基、[(4-硝基苯基)磺酰基]氧基、[(2-硝基苯基)磺酰基]氧基、[(4-异丙基苯基)磺酰基]氧基、[(2,4,6-三异丙基苯基)磺酰基]氧基、[(2,4,6-三甲基苯基)磺酰基]氧基、[(4-叔丁基苯基)磺酰基]氧基和[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氧基。

为得到式(IV)的化合物的式(II)的化合物与式(III)的化合物的反应优选在溶剂诸如四氢呋喃(THF)中在40℃至60℃的温度下使用偶联剂诸如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCl)实施。

式(II)的化合物还可以通过还原式(V)的硝基化合物来获得：

。

还原可以例如通过气态氢使用催化剂诸如炭载体上的钯(Pd/C)在合适的溶剂诸如四氢呋喃(THF)中在10℃至60℃范围的温度下实施。

式(V)的硝基化合物可以例如根据下面的反应方案在亲核芳族取代反应中获得：

此处，X是合适的离去基团，优选氟原子。

亲核芳族取代可以在回流条件(约80℃)下使用合适的碱诸如碳酸钾(K₂CO₃)在合适的溶剂诸如乙腈中实施。

式(III)、(VI)和(VII)的化合物大部分可商购获得或者可以通过已知方法由已知化合物产生。

式(I)的酸化合物可以由式(IV)的化合物根据以下方案通过羧酸酯的皂化制备：

其中R⁵代表氢原子。

皂化可以例如通过碱诸如氢氧化钠(NaOH)在合适的溶剂诸如四氢呋喃(THF)中在20℃至60℃的温度下实施。

在优选的实施方案中，R²是氢原子，R³是氢原子，而R¹代表选自C₁-C₃-烷基-、C₁-C₃-烷氧基-、C₁-C₃-卤代烷基-和C₁-C₃-卤代烷氧基-的系列的基团。

在特别优选的实施方案中，R²是氢原子，R³是氢原子，而R¹代表选自甲基、甲氧基、三氟甲基和三氟甲氧基的系列的基团。

在特别优选的实施方案中，R²是氢原子，R³是氢原子，并且R¹是三氟甲氧基。

在进一步优选的实施方案中，R⁴代表任选地被甲基单-、二-、三-或四-取代的环己基。

在特别优选的实施方案中，R⁴选自以下的系列：

其中*表示其中基团R⁴与分子其余部分连接的位置。

在进一步优选的实施方案中，R⁵代表氢原子或甲基。

在特别优选的实施方案中，R⁵代表氢原子。

在进一步优选的实施方案中，R⁶代表甲基、乙基、异丙基或叔丁基。

在特别优选的实施方案中，R⁶代表甲基或乙基。

在特别优选的实施方案中，R⁶代表甲基。

在进一步特别优选的实施方案中，根据本发明的方法用于制备式(Ia)的化合物：

其中

R² 代表氢原子或C₁-C₃-烷基，

R³ 代表氢原子或C₁-C₃-烷基，

R⁴ 代表环己基，其任选被C₁-C₃-烷基单或多取代，和

R⁵ 代表C₁-C₃-烷基，

其中所述方法包括以下步骤，其中使通式(IIa)的化合物：

其中R⁶代表C₁-C₆-烷基；

或通式(IIa)的化合物的盐或溶剂化物或盐的溶剂化物，

与通式(III)的化合物反应：

其中R¹、R²和R³具有与式(Ia)的化合物相同的定义；

并且在该反应中形成通式(IVa)的化合物：

其中R¹、R²和R³具有与式(Ia)的化合物相同的定义，并且R⁶具有与式(IIa)的化合物相同的定义。

在特别优选的实施方案中，根据本发明的方法用于制备3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸，其中所述方法包括以下步骤，其中使式(IIa)的3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸的烷基酯

其中R⁶代表C₁-C₆-烷基；

或式(IIa)的化合物的盐或溶剂化物或盐的溶剂化物，

与4-异硫氰酸根合苯基三氟甲基醚反应，

并且在该反应中形成式(IVa)的3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸的烷基酯：

其中R⁶具有与式(IIa)的化合物相同的定义。

在进一步优选的实施方案中，使用的式(IIa)的化合物为 3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸甲酯盐酸盐的二氧杂环己烷溶剂化物：

该加合物在每种情况下由1分子的3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸甲酯、1分子的二氧杂环己烷和2分子的盐酸组成，其例如由用二氧杂环己烷和盐酸处理溶于THF中的3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸甲酯产生。

它可以容易地从副产物和起始化合物中纯化和分离，所述起始化合物产生于3-(3-硝基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸甲酯向3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸甲酯的还原。

因此，本发明进一步涉及3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸甲酯-1,4-二氧杂环己烷盐酸盐(1:1:2)。

因此，本发明进一步提供从起始材料

3-(4-氟-3-硝基苯基)丙酸的烷基酯：

(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己胺：

和

4-异硫氰酸根合苯基三氟甲基醚：

其中R⁶代表C₁-C₆-烷基，

制备3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸的方法。

根据本发明的用于制备3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸的方法优选包括以下步骤：

(a) 使3-(4-氟-3-硝基苯基)丙酸的烷基酯与(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己胺反应，以得到3-(3-硝基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸的烷基酯

(b) 将来自步骤(a)的3-(3-硝基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸的烷基酯还原，以得到3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸的烷基酯

(c) 使来自步骤(b)的3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸的烷基酯与4-异硫氰酸根合苯基三氟甲基醚反应，以得到3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸的烷基酯

(d) 将来自步骤(c)的3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸的烷基酯皂化，以得到3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸。

在优选的实施方案中，将来自步骤(a)的产物不经纯化地供入步骤(b)。

在进一步优选的实施方案中，用盐酸/二氧杂环己烷混合物处理来自步骤(a)的3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸的烷基酯，以便得到3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸的烷基酯-1,4-二氧杂环己烷盐酸盐(1:1:2)，然后将其供入步骤(c)。

在进一步优选的实施方案中，将来自步骤(c)的产物不经纯化地供入步骤(d)。

在进一步优选的实施方案中，步骤(d)中的皂化通过THF中的氢氧化钠水溶液实现；然后用盐酸中和，并通过加入异丙醇将3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸结晶出来。

本发明进一步提供结晶形式的3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸(以下也简称为“所述结晶形式”)，其通过用异丙醇处理溶于THF中的3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸来获得。

通过用异丙醇处理溶于THF中的3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸形成的结晶形式与WO2015/121210(A1)中描述的方法产生的无定形形式相比可以被更简单和有效地纯化。与无定形形式相比，其具有改善的药理学和/或药代动力学特征。

图1显示所述结晶形式的X射线衍射图。

本发明进一步涉及3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸的结晶形式，其特征在于在X-射线衍射图中在以下2θ角处的最大值：6.5、8.5、11.2、11.3、11.9、12.1、13.4、14.3、14.8、15.0、15.1、15.2、15.3、15.9、16.4、17.1、17.4、17.6、18.0、18.2、19.1、19.1、19.6、19.9、20.1、20.2、20.8、21.1、21.6、21.8、22.4、22.6、22.9、23.2、23.4、24.0、24.3、24.3、24.7、24.9。

本发明进一步提供一种药物，其包含指定结晶形式的3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸。

该结晶形式适合用作治疗和/或预防人类和动物疾病的药物。

可以通过存在的3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸的作用解释作为IDH1 R132H抑制剂的结晶形式的药效。

本发明进一步涉及所述结晶形式用于治疗和/或预防病症，特别是用于治疗肿瘤的用途。

本发明进一步提供用于治疗和/或预防肿瘤的方法的所述结晶形式。

本发明进一步涉及所述结晶形式用于制备用于治疗和/或预防病症，特别是用于治疗肿瘤的药物的用途。

本发明进一步提供使用药学有效量的所述结晶形式治疗和/或预防病症，特别是治疗肿瘤的方法。

根据本发明可被治疗的实体肿瘤是例如乳腺、呼吸道、脑、生殖器官、胃肠道、泌尿生殖道、眼、肝脏、皮肤、头和颈、甲状腺、甲状旁腺、骨和结缔组织的肿瘤，以及这些肿瘤的转移。

可以治疗的血液肿瘤是，例如，

- 多发性骨髓瘤，

- 淋巴瘤或

- 白血病。

可以治疗的乳腺肿瘤是，例如：

- 具有阳性激素受体状态的乳腺癌

- 具有阴性激素受体状态的乳腺癌

- Her-2阳性乳腺癌

- 激素受体和Her-2阴性乳腺癌

- BRCA相关乳腺癌

- 炎性乳腺癌。

可以治疗的呼吸道肿瘤是，例如，

- 非小细胞支气管癌，例如鳞状细胞癌、腺癌、大细胞癌，和

- 小细胞支气管癌。

可以治疗的脑肿瘤是，例如，

- 神经胶质瘤，

- 胶质母细胞瘤，

- 星形细胞瘤，

- 脑膜瘤，和

- 髓母细胞瘤。

可以治疗的男性生殖器官的肿瘤是，例如:

- 前列腺癌，

- 恶性附睾肿瘤

- 恶性睾丸肿瘤和

- 阴茎癌。

可以治疗的女性生殖器官的肿瘤是，例如:

- 子宫内膜癌

- 子宫颈癌

- 卵巢癌

- 阴道癌

- 外阴癌。

可以治疗的胃肠道肿瘤是，例如:

- 结直肠癌

- 肛门癌

- 胃癌

- 胰腺癌

- 食道癌

- 胆囊癌

- 小肠癌

- 唾液腺癌

- 神经内分泌肿瘤

- 胃肠道间质瘤。

可以治疗的泌尿生殖道肿瘤是，例如:

- 膀胱癌

- 肾细胞癌

- 肾盂和下尿道癌。

可以治疗的眼肿瘤是，例如:

- 视网膜母细胞瘤

- 眼内黑素瘤。

可以治疗的肝脏肿瘤是，例如:

- 肝细胞癌

- 胆管细胞癌。

可以治疗的皮肤肿瘤是，例如:

- 恶性黑素瘤

- 基底细胞癌

- spinaliomas

- 卡波西肉瘤

- Merkel细胞癌。

可以治疗的头和颈的肿瘤是，例如:

- 喉癌

- 咽和口腔癌

- 中线结构的癌症(例如NMC, C.A. French, Annu. Rev. Pathol. 2012, 7:247-265)。

可以治疗的肉瘤是，例如:

- 软组织肉瘤

- 骨肉瘤。

可以治疗的淋巴瘤是，例如:

- 非霍奇金淋巴瘤

- 霍奇金淋巴瘤

- 皮肤淋巴瘤

- 中枢神经系统淋巴瘤

- AIDS相关的淋巴瘤。

可以治疗的白血病是，例如:

- 急性髓性白血病

- 慢性髓性白血病

- 急性淋巴性白血病

- 慢性淋巴性白血病

- 毛细胞白血病。

所述结晶形式可以全身地和局部地起作用。为此目的，它们可以以合适的方式，例如通过口服、肠胃外、肺部、鼻部、舌下、舌、含服、直肠、皮肤、透皮、结膜或耳道途径或作为植入物或支架施用。

所述结晶形式可以以适合于这些施用途径的施用形式施用。

用于口服施用的合适的施用形式是根据现有技术起作用的那些，其可以快速且以改良的方式释放所述结晶形式，例如片剂(未包衣或包衣片剂，例如具有耐胃液或延迟溶出或不溶性包衣，其控制所述结晶形式的释放)、在口腔中快速崩解的片剂或膜剂/薄片(wafers)、膜剂/冻干产物、胶囊剂(例如硬或软明胶胶囊剂)、糖衣片剂、颗粒剂、小丸剂、粉剂、乳剂、混悬剂或气雾剂。

可以在避免再吸收步骤(例如通过静脉内、动脉内、心内、脊柱内或腰髓内途径)或包括再吸收(例如通过肌内、皮下、皮内、经皮或腹膜内途径)的情况下完成肠胃外施用。适于肠胃外施用的施用形式包括混悬剂、乳剂、冻干产物或无菌粉末形式的注射和输注制剂。

用于其它施用途径的合适的施用形式是例如用于吸入的药物形式(包括粉末吸入器、喷雾器)、滴鼻剂或喷雾剂；用于舌、舌下或含服施用的片剂、膜剂/薄片或胶囊剂、栓剂、耳或眼制剂、阴道胶囊剂、水性混悬剂(洗剂、振摇混合物)、亲脂性混悬剂、软膏剂、乳膏剂、透皮治疗系统(例如贴剂)、乳、糊剂、泡沫剂、撒粉剂、植入物或支架。

所述结晶形式可以转化为所提及的施用形式。这可以通过与惰性的、无毒的药学上合适的助剂混合以本身已知的方式来完成。这些助剂包括载体(例如微晶纤维素、乳糖、甘露醇)、乳化剂和分散剂或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠、聚氧脱水山梨糖醇油酸酯)、粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮)、合成和天然聚合物(例如白蛋白)、稳定剂(例如抗氧化剂，如抗坏血酸)、着色剂(例如无机颜料，如氧化铁)和香料和/或气味矫正剂。

本发明还提供了药物，其包含所述结晶形式，典型地以及一种或多种惰性的、无毒的药学上合适的助剂，和其用于上述目的的用途。

通过用药物制剂中常用的赋形剂将一种或多种活性化合物转化成期望的施用形式以本身已知的方式配制药物制剂。

所使用的赋形剂例如可以是载体物质、填充剂、崩解剂、粘合剂、湿润剂、助流剂、吸收剂和吸附剂、稀释剂、共溶剂、乳化剂、矫味剂、着色剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、用于改变渗透压的盐或缓冲剂。应当参考Remington´s Pharmaceutical Science, 第15版. MackPublishing Company, East Pennsylvania (1980)。

药物制剂可以以如下形式存在

固体形式，例如作为片剂、糖衣片剂、丸剂、栓剂、胶囊剂、透皮系统或

半固体形式，例如作为软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、栓剂、乳剂或

液体形式，例如作为酊剂、混悬剂或乳剂。

在本发明上下文中，助剂可以是例如盐、糖(单糖、二糖、三糖、寡糖和/或多糖)、蛋白质、氨基酸、肽、脂肪、蜡、油、烃及其衍生物，并且助剂可以是天然来源的或者可以通过合成或部分合成的手段获得。

用于口服或经口施用的有用形式尤其是片剂、糖衣片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、混悬剂或乳剂。

用于肠胃外施用的有用形式尤其是混悬剂和乳剂。

所述结晶形式可以单独使用或者如果需要，与一种或多种其它药理活性物质组合使用，条件是该组合不会导致不希望的和不可接受的副作用。因此，本发明进一步提供了特别是用于预防和/或治疗上述病症的包含所述结晶形式和一种或多种其它活性化合物的药物。

例如，所述结晶形式可以与用于治疗肿瘤病症的已知的抗过度增殖、细胞生长抑制或细胞毒性物质组合，但是与此同时其也可以与具有支持或组分性质的那些物质组合，或者其也可以与在血管发生中显示出阳性作用的那些化合物组合。

尽管不是详尽的清单，但是可用于组合的适合的药理活性物质例如包括：

131I-chTNT、阿巴瑞克、阿比特龙、阿柔比星、阿柏西普、阿地白介素、阿仑珠单抗、阿利维A酸、六甲蜜胺、氨鲁米特、氨柔比星、安吖啶、阿那曲唑、arglabin、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿昔替尼、阿扎胞苷、巴利昔单抗、贝洛替康、苯达莫司汀、贝伐单抗、贝沙罗汀、比卡鲁胺、比生群、博来霉素、硼替佐米、波舒替尼、brentuximab、布舍瑞林、白消安、卡巴他赛、苹果酸卡博替尼(cabozantinib-s-malate)、亚叶酸钙、左亚叶酸钙、卡培他滨、卡铂、卡非佐米、卡莫氟、卡莫司汀、卡妥索单抗、塞来考昔、西莫白介素、西地尼布、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、氯地孕酮、氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸、氯法拉滨、copanlisib、克立他酶、克唑替尼、环磷酰胺、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪、更生霉素、阿法达贝泊汀、达沙替尼、柔红霉素、达帕菲尼、地西他滨、地加瑞克、地尼白介素-毒素连接物(denileukin diftitox)、地舒单抗、地洛瑞林、盐酸右雷佐生、二溴螺氯铵、多西紫杉醇、去氧氟尿苷、多柔比星、多柔比星+雌酮、依库珠单抗、依决洛单抗、乙酸甲基羟基玫瑰树碱、艾曲波帕、内皮他丁、依诺他滨、恩杂鲁胺、表柔比星、环硫雄醇、红细胞生成素α、红细胞生成素β、依他铂、艾立布林、埃罗替尼、雌二醇、雌氮芥、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、法倔唑、非格司亭、氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟他胺、福美坦、福莫司汀、氟维司群、硝酸镓、加尼瑞克、吉非替尼、吉西他滨、吉姆单抗、谷卡匹酶、glutoxim、戈舍瑞林、二盐酸组胺、组氨瑞林、羟基脲、碘-125粒子、伊班膦酸、替伊莫单抗、依鲁替尼、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、咪喹莫特、英丙舒凡、干扰素α、干扰素β、干扰素γ、伊匹木单抗、伊立替康、伊沙匹隆、兰瑞肽、拉帕替尼、来那度胺、来格司亭、香菇多糖、来曲唑、亮丙瑞林、甲酰四氢叶酸、左旋咪唑、利舒脲、洛铂、洛莫司汀、氯尼达明、马索罗酚、二氯甲基二乙胺、甲羟孕酮、甲地孕酮、美法仑、美雄烷、巯嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、甲氧沙林、氨基乙酰丙酸甲酯、甲睾酮、米法莫肽、米替福新、米铂、二溴甘露醇、米托胍腙、二溴卫矛醇、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、奈达铂、奈拉滨、尼洛替尼、尼鲁米特、尼妥珠单抗、尼莫司汀、二胺硝吖啶、阿托珠单抗、奥法木单抗、高三尖杉酯碱、奥美拉唑、奥普瑞白介素、奥沙利铂、奥佐米星、p53基因疗法、紫杉醇、帕利夫明、钯-103粒子、盐酸帕洛诺司琼、帕米膦酸、帕米膦酸二钠、帕木单抗、帕唑帕尼、培门冬酶、PEG-红细胞生成素β(甲氧基PEG-红细胞生成素β)、聚乙二醇化非格司亭、聚乙二醇干扰素α-2b、培美曲塞、喷他佐辛、喷司他丁、培洛霉素、培磷酰胺、培妥珠单抗、溶链菌、吡柔比星、普乐沙福、普利霉素、聚氨葡糖、聚磷酸雌二醇、多糖-K、泊马度胺、pomatinib、卟吩姆钠、普拉曲沙、泼尼氮芥、泼尼松、丙卡巴肼、喹高利特、氯化镭-223、雷洛昔芬、雷替曲塞、雷莫芦单抗、拉布立酶、雷莫司汀、雷佐生、refametinib、瑞戈非尼、利塞膦酸、利妥昔单抗、罗米地新、甲砜霉素、roniciclib、ruxolitinib、沙格司亭、sipuleucel-T、西佐喃、索布佐生、甘氨双唑钠、索拉非尼、链脲菌素、舒尼替尼、他拉泊芬、滑石、他米巴罗汀、他莫昔芬、他索那敏、替西白介素、替加氟、替加氟+吉美嘧啶+奥替拉西、替莫泊芬、替莫唑胺、坦西莫司、替尼泊苷、睾酮、替曲膦、沙利度胺、噻替派、胸腺法新、硫鸟嘌呤、托珠单抗、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、碘131托西莫单抗、曲美替尼、曲贝替定、曲妥珠单抗、曲奥舒凡、维甲酸、曲洛司坦、曲普瑞林、曲磷胺、色氨酸、乌苯美司、戊柔比星、凡德他尼、伐普肽、威罗菲尼、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春氟宁、长春瑞滨、维莫德吉、伏力诺他、伏氯唑、钇-90玻璃微球、净司他丁、净司他丁斯酯、唑来膦酸、佐柔比星。

通常，可以用所述结晶形式与其它细胞生长抑制或细胞毒性活性剂的组合来实现以下目的：

• 与用单独的活性成分的治疗相比，在减缓肿瘤生长、减小其尺寸或甚至完全消除它的方面的改善的效力；

• 与单一疗法的情况相比，使用以更低剂量使用的化疗药物的可能性；

• 与各自施用相比，具有更少副作用的更可耐受的疗法的可能性；

• 治疗更广泛的肿瘤病症的可能性；

• 实现对疗法的更高的响应速度；

• 与当今的标准疗法相比，更长的患者的存活时间。

另外，所述结晶形式也可以与放射疗法和/或外科手术干预联合使用。

实验部分

实施例。

实施例1

3-(3-硝基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸甲酯(V)的制备

首先向402g(1.77mol)的3-(4-氟-3-硝基苯基)丙酸甲酯(VI)在3.0L乙腈中的溶液中装入367g(2.66mol)的碳酸钾，并加入300g(2.12mol)的(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己胺。将混合物在100℃的夹套温度下在回流下搅拌12小时。冷却至20℃后，将3.6L水加入到混合物中。为了改善相分离，加入1.0L饱和氯化钠溶液。除去下部水相。将有机相在50℃的夹套温度下减压(约50mbar)浓缩，得到油状残余物。产量：640.5g(理论的104%)高度粘稠的橙色油状物。

实施例2

3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸甲酯二盐酸盐二氧杂环己烷溶剂化物(IIa)的制备

首先向氢化反应器中的640.5g(1.77mol)的3-(3-硝基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸甲酯(来自实施例1的粗产物)在3.2L四氢呋喃中的溶液中装入32g钯催化剂(5重量%；0.05eq.，32g，88.5mmol)，并将混合物在氢气氛(1.5bar正压)下在25℃的温度下搅拌10h。通过压力过滤器(Seitz K300滤板)滤出反应混合物，并将滤液在50℃的夹套温度下减压(约50mbar)浓缩，得到油状残余物。将残余物溶于1.3L二氧杂环己烷中，并在20℃的内部温度下经20min的时段向其中加入560mL 4N HCl/二氧杂环己烷(4.4mol HCl)。在此过程中，产品结晶出来。将其搅拌2h，滤出并每次用500mL MTBE洗涤两次。将湿产物在40℃的温度下在干燥箱中真空干燥4h。

产量：785g(理论的91%，基于使用的3-(4-氟-3-硝基苯基)丙酸甲酯)浅黄色固体。

实施例3

3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸(I)的制备

在20℃的温度下向500g(1.043mol)的3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸甲酯二盐酸盐二氧杂环己烷溶剂化物(IIa)在3.0L THF中的悬浮液中加入296.5g(2.29mol)的N,N-二异丙基乙胺，并将混合物搅拌30min。加入252g(1.15mol)的异硫氰酸4-(三氟甲氧基)苯酯，并将温度保持在50℃达1h。随后，加入300g(1.56mol)的EDCI，并将混合物在80℃的夹套温度下在回流下搅拌4h。将混合物冷却至20℃，加入1.5L的20%柠檬酸水溶液，将混合物搅拌30min，加入1.5L MTBE，并将混合物再搅拌15min。除去下部水相。将有机相每次用1.5L 4.8%碳酸氢钠水溶液萃取两次。将有机相在50℃的夹套温度下减压(约50mbar)浓缩，得到油状残余物，随后向其中加入3L THF和2L 3.7%氢氧化钠溶液(1.56mol)，并将混合物在50℃的温度下搅拌3h。冷却至20℃后，用10%盐酸水溶液将混合物调节至pH 4，加入500mL饱和氯化钠溶液，并除去水相。将有机相在80℃的夹套温度下浓缩，得到油状残余物，然后向其中加入4L异丙醇，并在100℃的夹套温度下蒸馏出约2.5L。同时在80℃的内部温度下经20min的时段加入900mL水。在此过程中，产品从热混合物中结晶出来。冷却至20℃后，将产物滤出，并依次用500mL异丙醇和500mL水洗涤。将湿产物在60℃的温度下在干燥箱中真空干燥16h。

产量：398g(理论的77%)的白色结晶固体(m.p.：248℃)。

X射线粉末衍射图

图1显示了根据本发明的结晶形式的X射线衍射图。

为了记录X射线衍射图，使用锗单色化CuKα₁辐射以透射模式来使用自动STOE粉末衍射仪。带有铜阳极的X射线管在40kV和40mA下运行。在2°≤2θ≤40°(步长0.5°)之间记录2θ扫描。使用软件STOE WinX^pow来评估数据。

2θ值的最大值列于表1中。

生物化学测定中IDH1 R132H的抑制

IDH1 R132H催化α-酮戊二酸(α-KG)向(2R)-2-羟基戊二酸(2-HG)的NADPH依赖性还原。NADPH消耗量由发光确定。

在每种情况下在32℃下在384孔滴定板中以41μL的反应体积和在以下缓冲条件下进行生物化学反应：50mM Tris pH 7.5，100mM NaCl，20mM MgCl₂，0.05% BSA，0.01% Brij，1µM NADPH和250µM α-KG。使用终浓度为1.5nM 的IDH1 R132H酶。测试化合物在0.002至10μM的浓度范围进行测定。最终的DMSO浓度为2.4%。

将反应混合物温育30分钟，然后加入40µL检测混合物(0.75µg/ml荧光素酶，0.02U/ml氧化还原酶，4µg/mL FMN，2µL/ml癸醛/乙醇，50mM Tris pH 7.5，0.5%甘油，0.01%Tween 20，0.05% BSA)。使用发光读数器(10秒测量时间，1秒积分周期，30%灵敏度)测定发光。发光下降与mIDH1的活性成正比。通过从相对发光对抑制剂浓度的图进行插值来确定IC₅₀值。结果汇编在表2中。

细胞测定

在具有突变异柠檬酸脱氢酶蛋白的过度表达的细胞系的培养基中测定(2R)-2-羟基戊二酸(2HG)的浓度。mIDH催化α-酮戊二酸向2-HG的NADPH依赖性还原。在含有10% FCS的DMEM中培养细胞(LN229 R132H，Mohrenz等，Apoptosis (2013) 18：1416-1425)。使用胰蛋白酶获得细胞并置于96孔滴定板中。将细胞在37℃，5% CO₂中温育过夜。第二天，将测试化合物加入到细胞中。DMSO的终浓度为0.1%，并使用DMSO对照。然后将滴定板置于培养箱中24小时。

使用Balss等(Acta Neuropathol (2012) 124：883-891)发表的方法测量2-HG。将HClO₄加入到每个孔中，并将滴定板离心。将等分试样移出并与羟基戊二酸脱氢酶(HGDH)、心肌黄酶、NAD+和刃天青一起温育。通过荧光光谱以Ex 540nm Em 600nm测定刃天青向试卤灵的转化。荧光信号的增加与2-HG的形成成正比。通过从相对荧光对抑制剂浓度的图进行插值来确定IC₅₀值。结果汇编在表3中。

。

Claims

1.制备通式(I)的化合物的方法：

其中

R² 代表氢原子或C₁-C₃-烷基，

R³ 代表氢原子或C₁-C₃-烷基，

R⁴ 代表环己基，其任选被C₁-C₃-烷基单或多取代，和

R⁵ 代表氢原子或C₁-C₆-烷基；

其中所述方法包括以下步骤，其中使通式(II)的化合物：

或通式(II)的化合物的盐或溶剂化物或盐的溶剂化物；

与通式(III)的化合物反应：

其中R¹、R²和R³具有与式(I)的化合物相同的定义；

并且在该反应中形成通式(IV)的化合物：

2.根据权利要求1的方法，其中R²是氢原子，R³是氢原子，并且R¹代表选自C₁-C₃-烷基-、C₁-C₃-烷氧基-、C₁-C₃-卤代烷基-和C₁-C₃-卤代烷氧基-的系列的基团。

3.根据权利要求1的方法，其中R²是氢原子，R³是氢原子，并且R¹代表选自甲基-、甲氧基-、三氟甲基-和三氟甲氧基-的系列的基团。

4.根据权利要求1至3中任一项的方法，其中R⁴选自以下的系列：

其中*表示其中基团R⁴与分子其余部分连接的位置。

5.根据权利要求1至4中任一项的方法，其中R⁵代表氢原子或甲基。

6.根据权利要求1的方法，其用于制备式(Ia)的化合物：

其中

R² 代表氢原子或C₁-C₃-烷基，

R³ 代表氢原子或C₁-C₃-烷基，

R⁴ 代表环己基，其任选被C₁-C₃-烷基单或多取代，和

R⁵ 代表C₁-C₃-烷基，

其中所述方法包括以下步骤，其中使通式(IIa)的化合物：

其中R⁶代表C₁-C₆-烷基；

或通式(IIa)的化合物的盐或溶剂化物或盐的溶剂化物，

与通式(III)的化合物反应：

其中R¹、R²和R³具有与式(Ia)的化合物相同的定义；

并且在该反应中形成通式(IVa)的化合物：

7.根据权利要求1的方法，其用于制备3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸，其中所述方法包括以下步骤，其中使式(IIa)的3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸的烷基酯：

其中R⁶代表C₁-C₆-烷基；

或式(IIa)的化合物的盐或溶剂化物或盐的溶剂化物，

与4-异硫氰酸根合苯基三氟甲基醚反应，

其中R⁶具有与式(IIa)的化合物相同的定义。

8.根据权利要求7的方法，其用于制备3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸，其中所述方法包括以下步骤，其中使3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸甲酯-1,4-二氧杂环己烷盐酸盐(1:1:2)

与4-异硫氰酸根合苯基三氟甲基醚反应，

并且在该反应中形成3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸甲酯：

。

9.根据权利要求1的方法，其用于制备3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸，所述方法包括以下步骤：

10.根据权利要求9的方法，其中用盐酸/二氧杂环己烷混合物处理来自步骤(a)的3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸的烷基酯，以便得到3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸的烷基酯-1,4-二氧杂环己烷盐酸盐(1:1:2)，然后将其供入步骤(c)。

11.根据权利要求9的方法，其中步骤(d)中的皂化通过THF中的氢氧化钠水溶液实现；然后用盐酸中和，并通过加入异丙醇将3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸结晶出来。

12.结晶形式的3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸，其通过用异丙醇处理溶于THF中的3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸来获得。

13.结晶形式的3-(2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基}-1-[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]-1H-苯并咪唑-5-基)丙酸，其特征在于在X-射线衍射图中在以下2θ角处的最大值：6.5、8.5、11.2、11.3、11.9、12.1、13.4、14.3、14.8、15.0、15.1、15.2、15.3、15.9、16.4、17.1、17.4、17.6、18.0、18.2、19.1、19.1、19.6、19.9、20.1、20.2、20.8、21.1、21.6、21.8、22.4、22.6、22.9、23.2、23.4、24.0、24.3、24.3、24.7、24.9。

14.3-(3-氨基-4-{[(1R,5R)-3,3,5-三甲基环己基]氨基}苯基)丙酸烷基酯-1,4-二氧杂环己烷盐酸盐(1:1:2)。

15.药物，其包含根据权利要求12或13中任一项的化合物与惰性的、无毒的、药学上合适的赋形剂以及任选的一种或多种其他活性成分的组合。

16.根据权利要求15的药物，其用于治疗和/或预防肿瘤。