FR3138029A1

FR3138029A1 - Extrait anhydre de feuilles sans tige d’hippophae rhamnoides ou composition comprenant ledit extrait pour utilisation pour maintenir et/ou ameliorer la microcirculation cutanee et composition comprenant ledit extrait

Info

Publication number: FR3138029A1
Application number: FR2207445A
Authority: FR
Inventors: Thomas RINALDI; Chloé LORION; Nicolas Bechetoille; Sandrine Lopis-Presle; Virginie Charton
Original assignee: Gattefosse SA
Current assignee: Gattefosse SA
Priority date: 2022-07-20
Filing date: 2022-07-20
Publication date: 2024-01-26
Also published as: CN119744174A; EP4558157A1; WO2024018160A1; KR20250041135A; JP2025525577A

Abstract

Extrait anhydre de feuilles sans tige d’Hippophae rhamnoides ou composition comprenant ledit extrait pour utilisation pour maintenir et/ou améliorer la microcirculation cutanée.

Description

EXTRAIT ANHYDRE DE FEUILLES SANS TIGED’HIPPOPHAE RHAMNOIDESOU COMPOSITION COMPRENANT LEDIT EXTRAIT POUR UTILISATION POUR MAINTENIR ET/OU AMELIORER LA MICROCIRCULATION CUTANEE ET COMPOSITION COMPRENANT LEDIT EXTRAIT

La présente invention se rapporte à l’utilisation cosmétique et/ou dermatologique d’un extrait liquide anhydre de feuillesd’H i ppophae rhamnoidesou d’une composition cosmétique et/ou dermatologique comprenant ledit extrait pour maintenir et/ou améliorer la microcirculation cutanée.

Art antérieur

Le cerne, zone bordée en haut par la paupière inférieure et en bas par la pommette, est une préoccupation cosmétique dans le monde entier car c’est la première zone du visage à accuser les signes de la fatigue et du stress.

Anatomiquement, la peau sous les yeux est très fine, environ 0,5mm d’épaisseur (3 fois plus fine que le reste du visage), et donc extrêmement sensible aux stress environnementaux (UV, pollution, alcool, stress, manque de sommeil). De ce fait, la peau infra-orbitaire est très sensible à l’attaque des radicaux libres et peut facilement présenter une inflammation.

Ainsi, les cernes et les poches correspondent à une inflammation locale de la zone infra-orbitaire saine, en réponse à un stress (UV, pollution, fatigue…).

La microcirculation cutanée, en particulier dans la zone infra-orbitaire est organisée en deux plexus parallèles, situés à moins de 1 mm de la surface de la peau. Le plexus supérieur, situé dans le derme papillaire se compose de petites artérioles et veinules, avec des boucles capillaires qui s’étendent perpendiculairement à la surface de la peau. Les capillaires sont le siège de l’oxygène et des échanges nutritionnels au sein du tissu cutané tandis que les petites veinules jouent un rôle dans l’extravasation des leucocytes. Le plexus inférieur est localisé au niveau de l’interface dermo-hypodermique. Il se compose d’artères et de veines provenant du tissu adipeux et du muscle sous-jacent, et perforent le fascia pour former des artérioles ascendantes et des veinules descendantes, reliés au plexus superficiel.

Les cellules endothéliales microvasculaires sont les composants majeurs des vaisseaux sanguins du derme. Les cellules endothéliales sont interconnectées par des jonctions cellule-cellule et forment une barrière entre le sang et le tissu dermique environnant. La barrière endothéliale est une structure dynamique qui contrôle les échanges de fluides et de solutés, dont les protéines plasmatiques, ainsi que des cellules, en particulier les leucocytes. Dans des conditions homéostatiques basales, les jonctions cellule-cellule ont une faible perméabilité aux fluides et aux solutés. De plus, de multiples processus de régulation opèrent dans les cellules endothéliales pour maintenir la fonction barrière endothéliale.

Dans des conditions inflammatoires dues à différents facteurs (UV, pollution, fatigue, stress), divers médiateurs pro-inflammatoires dont le TNF-α agissent sur les cellules endothéliales pour augmenter la perméabilité vasculaire, entrainant l’ouverture des jonctions intercellulaires, ce qui conduit in fine à l’extravasation des leucocytes entrainant avec eux la fuite des globules rouges et autres nutriments qui composent le plasma. La microcirculation cutanée est ainsi détériorée et l'accumulation des leucocytes dans le tissu cutané est responsable des poches sous les yeux tandis que l’accumulation des globules rouges dans l’espace extracellulaire conduit à la pigmentation pourpre de la peau du contour de l’œil, caractéristique des cernes.

L’hémoglobine, composant principal des globules rouges, se dégrade et libère des produits de dégradation pigmentés tels que l’hème (pigment rouge) qui s’accumule dans le derme et l’épiderme. Néanmoins, la dégradation de l’hème libre entraine également la libération et l’accumulation de molécules de fer dans le tissu cutané. Les ions ferreux libres s’oxydent et produisent des ROS (Reactive Oxygen Species), qui conduisent à une augmentation de l’oxydation et de l’inflammation de la peau. C’est pourquoi, la chélation des ions ferreux constitue une stratégie complémentaire à la dégradation de l’hème pour lutter contre la formation des cernes mais également améliorer l’éclat du teint.

Le Demandeur s’est intéressé à l’argousier dans le cadre de sa recherche sur la microcirculation cutanée.

Décrit par Linné en 1753,Hippophae rhamnoides L. (selon la classification botanique APG IV 2016) est un arbrisseau dioïque épineux originaire des zones tempérées d’Europe et d’Asie. Ce n’est qu’au début du XXe siècle que l’espèce a été introduite au Canada par les immigrants russes. Préconisée pour lutter contre l’érosion des sols, l’espèce est maintenant répartie sur tout le territoire, et cultivée pour ses fruits en Saskatchewan, Colombie-Britannique et au Québec.

Arbuste qui se limite aux bordures de rivière ou de massifs dunaires, voire en lisière de forêts sablonneuses,Hippophae rhamnoidespeut atteindre 1 à 5m de haut avec des feuilles caduques lancéolées, de couleur argentée sur la surface inférieure. Les fleurs, apétales, très petites sont verdâtres et écloses, avant les feuilles. Les pieds femelles produisent les fruits sous forme de baies charnues de 6 à 8 mm de diamètres engainant en masse compacte les rameaux. Les baies arrivent à maturité en début d’automne, montrant alors une belle couleur orange et un gout acidulé. Les fruits matures restent en place tout l’hiver sur les rameaux.

Les caractères morphologiques de l’argousier varient considérablement en fonction du large éventail de conditions climatiques qui couvre l'aire de distribution du taxon. La sélection variétale (facilité de récolte, haute teneur en huile, résistance aux maladies, etc.), les nombreux croisements entre sous-espèces et les programmes d’amélioration génétique font qu'il n'est plus possible de les distinguer en tant que sous espèces. Seuls les cultivars horticoles font l’objet d’une appellation définie comme par exemple Leïkora ou Orange Energy.

Très largement répandue sur les continents de l’hémisphère Nord,Hippophae rhamnoïdespossède plusieurs noms vernaculaires faisant référence à sa morphologie ou à son milieu d’accueil : argasse, grisset, épines luisante, épine marante, saule épineux, faux nerprun, bourdaine marine, olivier ou ananas de Sibérie. Dans d’autres langues ce sontsea-buckthorn(en anglais),sanddorn(en allemand) ou encoreespino amarillo(en espagnol).

Contraint par l’abondance de neige en hiver, la récolte des fruits sur le continent Nord-Américain se pratique à l’automne avant la chute des feuilles. Les branches à fruits sont coupées et congelées, puis une opération de séparation du fruit de la branche et des feuilles est réalisée par un tri mécanique. Le co-produit de feuilles obtenues est séché et utilisé comme succédané de thé.

Les usages alimentaires, médicinaux, horticoles et écologiques del’Hippophae rhamnoidesremontent à l'Antiquité. Les Grecs utilisaient les feuilles et les jeunes rameaux en complément de fourrages pour accélérer la prise de poids des chevaux et lustrer leur pelage, d'où son nom latin hippophae, qui signifie « Hippos » = chevaux et « phaos » = reluire.

En Médecine traditionnelle chinoise, japonaise ou tibétaine, de même qu’en médecine ayurvédique (Inde), on emploie encore beaucoup l’argousier, notamment comme tonique, et pour soigner toutes sortes d'affections de la peau et des muqueuses. Il est aussi utilisé pour les troubles digestifs, l’inflammation des poumons et les règles douloureuses ou irrégulières. Plus particulièrement au Tibet, la graine, le fruit ou la feuille peuvent être utilisés pour traiter les œdèmes, la régénération des tissus, l’inflammation et les infections bactériennes ; en Turquie, le fruit et la feuille sont employés en tant qu’antiseptique, cicatrisant et pour le traitement des ulcères.

En association avec d’autres plantes, il est également utilisé pour traiter certains troubles cardiovasculaires (notamment les troubles de l’agrégation plaquettaire), les troubles digestifs, l’indigestion, les inflammations des poumons et les menstruations irrégulières ou douloureuses. Pratiquement toutes les parties de l’argousier sont employées en médecine traditionnelle : outre les baies et les graines, on prépare également des extraits de feuilles et d’écorce.

: Les extraits de feuilles d’argousier sont utilisés pour la préparation de thé, teintures et autres décoctions dans le cadre :
- de la prévention et du traitement du rhume, de l'amygdalite, de la bronchite et des ARVI (renforce l'immunité et lutte contre les maladies saisonnières) ;
- de la prévention et du traitement de l'hypertension artérielle, effet calmant et hypotenseur, stabilisateur de pression artérielle ;
- du traitement des maladies du système cardiovasculaire ;
- du traitement du diabète (effet hypoglycémique),;
- du traitement des maladies inflammatoires des articulations,
- du traitement des maladies du foie (effet hépatoprotecteur, restauration des cellules hépatiques normales dans les maladies inflammatoires).
- du traitement de colite, ulcère gastrique et ulcère duodénal par utilisation de l’infusion ou de la poudre de feuilles sèches.

Le document FR2943255 décrit un extrait de graine d’argousier( H i ppophae rhamnoides )riche en acides gras et stérols obtenu par extraction CO₂supercritique pour stimuler l'activité de la 5-alpha-réductase et la production de sébum pour traiter les déséquilibres hormonaux cutanés liés à la ménopause, par exemple la perte d’éclat de la peau. L’activité biologique est démontrée vis-à-vis de la stimulation de l’activité de la 5-alpha réductase par des fibroblastes humains normaux (FHN), de la synthèse de collagène I / FHN, de la synthèse de glycosaminoglycanes et acide hyaluronique / FHN, de la synthèse d’intégrines par des kératinocytes humains normaux.

Le document FR2971940 décrit l’obtention d’un extrait aqueux, alcoolique ou glycolique de rameaux d’hiver d’H i ppophae rhamnoidespour son effet dépigmentant de la peau, des poils et de cheveux. Les rameaux d’hiver concernent uniquement la partie tige sans feuille de l’argousier et contiennent des composés de type indole. Les mécanismes biologiques responsables de l’effet dépigmentant s’appuient sur la stimulation de la biosynthèse de la mélanine produite par les mélanocytes.

Le Demandeur a démontré que de manière tout à fait surprenante, un extrait de feuilles sans tiges d’H i ppophae rhamnoidesa un effet sur la microcirculation cutanée le rendant utilisable pour réduire les cernes et/ou les poches au niveau du contour de l’œil et/ou pour améliorer l'éclat du teint.

Plus précisément, l’invention a pour objet l’utilisation cosmétique et/ou dermatologique destinée à une peau saine d’un extrait anhydre de feuilles d’H i ppophae rhamnoidesou d’une composition cosmétique comprenant ledit extrait pour maintenir et/ou améliorer la microcirculation cutanée.

Le maintien et/ou l’amélioration de la microcirculation cutanée permet d’envisager l’utilisation de l’extrait pour réduire les cernes et/ou les poches au niveau du contour de l’œil et/ou pour maintenir et/ou augmenter l’éclat du teint de la peau.

Comme il sera vu par la suite, le Demandeur a démontré que l’extrait selon l’invention permettait :
- de diminuer l’expression de la protéine d’adhésion VCAM-1 et/ou
- de diminuer l’adhésion des cellules mononucléées aux membranes des cellules endothéliales et,
- d’augmenter la résistance électrique trans-endothéliale et/ou,
- d’augmenter l’expression de l’enzyme HMOX-1 et/ou,
- d’augmenter la chélation des ions ferreux et/ou,
- d’augmenter l’expression des enzymes anti-oxydantes GPX2 et/ou, GPX3 et/ou TXN et/ou,
d’augmenter l’activité anti-radicalaire.

En ce qui concerne la protéine d’adhésion VCAM-1, elle est à l’origine de l’extravasation des globules blancs et des globules rouges dans l’espace extracellulaire par migration entre deux cellules endothéliales. Ceci est facilité par la rupture des contacts endothéliaux qui forment un espace paracellulaire à travers lequel les cellules passent.

Plus précisément, les leucocytes circulent dans la circulation sanguine mais doivent traverser la barrière endothéliale pour atteindre les tissus enflammés. Cette migration rapide du sang vers le site des infections est essentielle à la réparation des tissus en réponse à une inflammation aiguë. L'extravasation des leucocytes est un processus hautement régulé qui implique l'engagement d'interactions complexes entre les leucocytes et l'endothélium, notamment via les sélectines, les intégrines, la molécule d'adhésion intercellulaire (ICAM1), la molécule d’adhésion vasculaire (VCAM1), la molécule d'adhésion jonctionnelle (JAM-1/A/C) et la molécule d'adhésion des cellules endothéliales plaquettaires (PECAM1).

L’étape initiale de la réponse inflammatoire est une réorganisation de la surface des cellules endothéliales pour capturer les leucocytes circulants. La libération de cytokines inflammatoires stimule la synthèse de molécules d’adhésion (P-selectine, E-selectine) sur la surface des cellules endothéliales, ce qui favorise localement des interactions adhésives faibles et transitoires entre les leucocytes et l’endothélium. Le dépôt de chimiokines sur la surface endothéliale déclenche alors l’activation d’intégrines leucocytaires (ICAM-β2) qui entrainent l’adhésion ferme des leucocytes et leur arrêt via des interactions avec les récepteurs de surface (ICAM1, VCAM1).

En d’autres termes, diminuer l’expression de la protéine d’adhésion VCAM-1 permet de diminuer la réponse inflammatoire.

La résistance électrique trans-endothéliale permet quant à elle de mesurer la perméabilité membranaire des cellules endothéliales et donc la fonction barrière de celles-ci. Plus la résistance est élevée et plus la fonction barrière est efficace.

En d'autres termes, augmenter la résistance électrique trans-endothéliale est synonyme de renforcement de la fonction barrière endothéliale.

En ce qui concerne gène HMOX-1, celui-ci code une enzyme de dégradation de l’hémoglobine, constituant principal des globules rouges, à l’origine de la pigmentation des cernes.

Comme déjà dit, l’accumulation des globules rouges dans l’espace extracellulaire conduit à la pigmentation pourpre de la peau du contour de l’œil, caractéristique des cernes.

L’hémoglobine, composant principal des globules rouges, se dégrade et libère des produits de dégradation pigmentés tels que l’hème qui s’accumule dans le derme et l’épiderme. L’hème libre est toxique quand il n’est pas complexé. Par conséquent, l'élimination de l'hème libre est essentielle. L’enzyme Hème Oxygénase de type 1 (HMOX-1) catabolise la dégradation de l’hème en biliverdine. La biliverdine est ensuite transformée en bilirubine par l’action de la Biliverdine réductase A. Ces catabolites, connus pour leurs rôles antioxydants, aident à réduire l'apparence des cernes.

En d’autres termes, augmenter l’expression du gène HMOX-1 permet d’augmenter la dégradation de l’hème.

Enfin, augmenter l’expression transcriptomique de gènes de défense de l’oxydation GPX2 et/ou, GPX3 et/ou TXN permet de diminuer l’oxydation, en particulier l’oxydation des ions ferreux en ROS (Reactive Oxygen Species) qui s’accumulent dans l’espace extracellulaire en raison de la dégradation de l’hémoglobine.

Selon l’invention, l’extrait contient des flavonoïdes, des dérivés galliques et des triterpènes.

En pratique, l’extrait est obtenu par une première étape d’extraction solide/fluide, suivie d’une seconde étape de séparation solide/fluide, puis d’une troisième étape de récupération de l’extrait sous forme liquide ou pâteuse.

L’invention concerne également l’extrait susceptible d’être obtenu par le procédé ci-dessus et dont les caractéristiques phytochimiques sont à l’origine des effets décrits par la suite.

L’invention concerne également une composition cosmétique et/ou dermatologique contenant ledit extrait.

L’extraction solide/fluide peut être effectuée par différentes techniques bien connues de l’homme du métier, telles que macération, re-macération, digestion, macération dynamique, décoction, extraction en lit fluidisé, extraction assistée par micro-ondes, extraction assistée par ultra-sons, extraction à contre-courant, percolation, re-percolation, lixiviation, extraction sous pression réduite, diacolation, extraction par fluide supercritique, extraction par eau subcritique, extraction à reflux.

Dans la suite de la description et dans les revendications, le terme « fluide » dans l’expression « solide/fluide » désigne un solvant d’extraction quel que soit son état physique. Il peut par exemple s’agir d’un solvant fluide, tel que par exemple du CO₂à l’état supercritique ou liquide, par exemple de l’éthanol.

Selon une autre caractéristique, l’extraction solide/fluide est effectuée à partir de feuilles dépourvues de tiges sous forme fraîches ou sèches, les feuilles pouvant se présenter en outre sous forme entières, concassées, broyées, ou cryobroyées.

Avantageusement, les feuilles sont collectées pendant la période de récolte des fruits en été/automne.

Selon l’invention, le solvant d’extraction est un solvant anhydre (c’est-à-dire qui contient moins de 5% d’eau) apolaire ou de polarité intermédiaire. Le solvant d’extraction peut donc être choisi selon l’invention dans le groupe de polarité intermédiaire comprenant les alcools tels que l’éthanol, les glycols tels que le propylène glycol, le 1.3-propanediol et le butylène glycol, la glycérine, les Low Transition Temperature Mixtures (LTTM) ou les Natural Deep Eutectic Solvents (NaDES) anhydres. Il peut être également choisi dans la gamme des solvants apolaires comme le CO₂supercritique, les huiles végétales, les triglycérides à chaînes moyennes C₈-C₁₀, les esters d’acide gras tels que le myristate d’octyldodecyl, etc... Ces solvants peuvent être utilisés seuls ou en mélanges.

Dans un mode de réalisation avantageux, on utilise en tant que solvant d’extraction de l’éthanol ou du CO₂supercritique ou un mélange des deux.

Lorsque le solvant d’extraction est un mélange d’éthanol et de CO₂supercritique, le ratio massique éthanol/ CO₂supercritique est avantageusement compris entre 1:5 et 1:50, avantageusement entre 1/10 et 1/20.

En pratique le ratio plante/solvant appliqué pour l’étape d’extraction est compris entre 1/99 et 80/20, avantageusement entre 2/98 et 20/80. L’extraction s’opère à une température comprise entre 2 et 100°C, préférentiellement entre 20 et 80°C, à une pression absolue comprise entre 1 et 500 bars, préférentiellement entre 1 et 300 bars, pendant quelques minutes à plusieurs jours en fonction de la méthode d’extraction utilisée.

Selon l’invention, l’extraction solide/fluide est suivie d’une étape de séparation solide/fluide, l’objectif étant de récupérer la phase liquide ou pâteuse contenant la matière active. Cette séparation peut être effectuée par toute technique connue de l’homme du métier, en particulier l’égouttage, le pressage, l’essorage, la décantation (gravitaire ou centrifuge) ou la filtration.

Selon un autre mode de réalisation, l’étape de récupération de la phase liquide ou pâteuse est suivie d’une étape de concentration, laquelle permet d’obtenir une forme concentrée liquide à pâteuse selon le facteur de concentration. En pratique, l’étape de concentration est effectuée par évaporation sous pression atmosphérique ou pression réduite ou séparation membranaire.

Postérieurement ou simultanément à l’étape de concentration, l’extrait peut être solubilisé dans un solvant de reprise choisi dans le groupe comprenant les glycols, la glycérine, l’éthanol, les triglycérides à chaînes moyennes, les esters d’acides gras et les huiles végétales.

Dans le mode de réalisation dans lequel le solvant d'extraction est un mélange de CO₂supercritique et d’éthanol, on évapore l’éthanol et on solubilise l’extrait végétal concentré dans un solvant de reprise qui est le myristate d’octyldodecyl à raison avantageusement de 0.1 à 5% en masse, de préférence de l’ordre de 0.5% d’extrait sec végétal.

Dans le mode de réalisation dans lequel le solvant d'extraction est l’éthanol, on évapore l’éthanol et on solubilise l’extrait végétal dans un solvant de reprise qui est avantageusement un glycol, de préférence le 1,3-propanediol, à raison avantageusement de 0.5 à 5% en masse, de préférence de l’ordre de 1.5% en d’extrait sec végétal.

Enfin, en vue d’un conditionnement stérile ou non stérile, l’étape de solubilisation de l’extrait peut être suivie d’une ou plusieurs étapes de filtration. Préalablement à l’étape de filtration finale, des additifs tels que conservateurs et anti-oxydants connus de l’homme du métier peuvent être incorporés dans l’extrait liquide pour garantir sa stabilité.

En fonction de la nature du solvant mis en œuvre, il peut s’avérer que l’extrait obtenu présente une couleur trop marquée. Dans cette hypothèse, le procédé d’obtention de l’extrait comprend une étape supplémentaire de décoloration de l’extrait, de préférence par adsorption, avantageusement sur charbon actif ou terre décolorante.

L'extrait est donc destiné à être utilisé dans le domaine cosmétique et/ou dermatologique par voie topique.

L'extrait ou la composition cosmétique et/ou dermatologique qui l’incorpore est donc destiné à être utilisé dans le domaine cosmétique et/ou dermatologique par voie topique, pour maintenir et/ou améliorer la microcirculation cutanée de peaux saines.

En pratique, l’extrait représente entre 0.1 % et 10 % en poids de la composition cosmétique et/ou dermatologique, préférentiellement entre 0.5 % et 5 %.

La composition cosmétique et/ou dermatologique selon l’invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour une application topique sur la peau par exemple sous forme anhydre, sous forme d’une émulsion huile-dans-eau, d’une émulsion eau-dans-huile, d’une émulsion multiple, d’une émulsion siliconée, d’une microémulsion, d’une nanoémulsion, d’un gel, d’une solution aqueuse ou d’une solution hydro-alcoolique.

Cette composition peut être plus ou moins fluide et se présenter sous forme d’une crème blanche ou colorée, d’une pommade, d’un lait, d’une lotion, d’un sérum, ou d’un gel.

La composition cosmétique et/ou dermatologique peut contenir les excipients habituellement utilisés dans les domaines cosmétique et dermatologique, tels que les matières grasses, les tensioactifs détergents et/ou conditionnants, les émulsionnants et co-émulsionnants, les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les agents exfoliants, les parfums, les charges, les filtres hydrophiles et lipophiles, les matières colorantes, les neutralisants, les agents pro-pénétrants, et les polymères. Ces types d’excipients sont tous bien connus de l’homme du métier.

En pratique, les quantités de ces différents excipients sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés, et la somme des excipients représente de préférence 0,01% à 30% du poids total de la composition.

Comme matières grasses appropriées, on peut citer les huiles minérales, les huiles d’origine animale (telle la lanoline), les huiles végétales, les huiles de synthèse (comme par exemple l’isopropyl le myristate, l’octyldodecyl, l’isostearyl isostearate, le decyl oleate, l’isopropyl le palmitate) et les huiles siliconées (la cyclomethicone, la dimethicone). On peut utiliser comme matières grasses des alcools gras, des acides gras, des cires et des gommes, et en particulier des élastomères de silicone.

Comme tensioactifs détergents et/ou conditionnants appropriés, on peut citer les tensioactifs non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères, et leurs mélanges, tels que par exemple les alkylsulfates, les alkyléthersulfates tels que le lauryl éther sulfate de sodium, les alkyl bétaïnes telles que la cocamidopropylbetaïne, ou les sels d’ammonium quaternaires.

Comme émulsionnants et co-émulsionnants appropriés, on peut citer par exemple les esters de polyglycérols et d’acide gras, les esters de sucrose et d’acide gras, les esters de sorbitane et d’acide gras, les esters d’acide gras et de sorbitane oxyéthylénés, les ethers d’alcool gras et de PEG, les esters de glycérol et d’acide gras, les alkyl sulfates, les alkyl ether sulfates, les alkyl phosphates, les alkyl polyglucosides, les alkyl polypentosides, les dimethicone copolyols.

Comme gélifiants hydrophiles appropriés, on peut citer par exemple les polymères carboxyvinyliques, les copolymères acryliques (carbomers) tels que les copolymères d’acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les polysaccharides tels que la gomme xanthane, la gomme guar, les gommes naturelles telles que la gomme de cellulose et dérivés, les amidons et leurs dérivés, les argiles et les copolymères d’acide 2-acrylamido-2-méthylpropane.

Comme gélifiants lipophiles appropriés, on peut citer par exemple les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d’acides gras, la silice hydrophobe et l’éthylcellulose.

Comme conservateurs appropriés, on peut citer par exemple les acides benzoïque, sorbique, propionique, salicylique, dehydroacétique et leurs sels, l’alcool benzylique, l’éthylhexylglycérine, les parabens, leurs sels et esters, le triclosan, l’imidazolidinyl urée, le 5 phenoxyethanol, la DMDM hydantoïne, le diazolidinyl urée, la chlorphenesine.

Comme antioxydants appropriés, on peut citer par exemple les agents chelatants tels que l’EDTA et ses sels, le metabisulfite de sodium, les acides salicylique, ascorbique et citrique et leurs sels, le tartrate de sodium, le gluconate de sodium, les caroténoïdes et les tocophérols.

Comme solvants utilisables dans la composition cosmétique (distinct du solvant d’extraction), on peut citer l’eau, l’éthanol, la glycérine, le propylène glycol, le propanediol, le butylène glycol, le sorbitol.

Comme agents exfoliants appropriés, on peut citer par exemple les exfoliants chimiques tels que les AHA, et les exfoliants physiques tels que les poudres naturelles ou synthétiques.

Comme charges appropriées, on peut citer par exemple le talc, le kaolin, le mica, la serecite, le magnesium carbonate, l’aluminium silicate, le magnesium silicate, les poudres organiques telles que le nylon.

Comme colorants appropriés, on peut citer par exemple les colorants lipophiles, les colorants hydrophiles, les pigments et les nacres habituellement utilisés dans les compositions cosmétiques ou dermatologiques, et leurs mélanges.

Comme neutralisants appropriés, on peut citer par exemple la soude, la triethanolamine, l’aminomethyl propanol, l’hydroxyde de potassium.

Comme agents pro-pénétrants appropriés, on peut citer par exemple les alcools et glycols (éthanol, propylène glycol), l’éthoxydiglycol, les alcools et acides gras (acide oléique), les esters d’acides gras, le dimethyl isosorbide.

La composition de l’invention peut également contenir en outre d’autres actifs que l’extrait selon l’invention. Comme actifs appropriés, on peut citer par exemple les anti-radicalaires ou plus généralement les antioxydants, les blanchissants, les pigmentants, les émollients, les hydratants, les anti-séborrhéiques, les anti-inflammatoires, les antiacnéiques, les agents kératolytiques et/ou desquamants, les agents anti-rides et tenseurs, les agents drainants, les agents anti-irritants, les agents apaisants, les vitamines et leurs mélanges, les agents matifiants, les actifs anti-âge tel que le rétinol, les cicatrisants, les antiseptiques et les huiles essentielles.

L’invention et les avantages qui en découlent ressortiront bien des exemples de réalisation suivants à l’appui des figures annexées.

La est une photo de l’évaluation par colorimétrie de la chélation des ions ferreux (Fe²⁺) dans une solution contenant l’extrait 1C à une concentration de 0,1% à 2% par rapport à la solution NT.

Description détaillée de l’invention

Exemple 1 : : Préparation et analyse phytochimique de l’extrait CO2 supercritique et co-solvant éthanol (Extrait 1, 1A, 1B, 1C)°

Les feuilles sèches d’Hippophae rhamnoidessont broyées. On introduit dans l’extracteur CO₂supercritique les feuilles sèches broyéesd’Hippophae rhamonoideset l’éthanol 96° selon un ratio massique de 1:2. L’extraction Solide/Fluide est conduite par diffusion en continu de CO₂supercritique dans l’extracteur selon une charge totale de CO₂supercritique de 30Kg de CO₂/Kg de plante, soit un ratio éthanol/CO2 supercritique de 1:15, soit un ratio plante/solvants (CO₂supercritique et éthanol) de 3:97, à une température de 50°C et une pression de 285bars. En sortie d’extracteur, le fluide est détendu, libérant le CO₂sous forme gazeuse et on collecte sous forme liquide l’extrait concentré éthanolique. L’éthanol est ensuite évaporé sous pression réduite de 50 mbars à 70°C pour obtenir l’extrait végétal pur concentré (noté Extrait 1). L’extrait 1 ainsi obtenu se présente sous forme d’une pâte brun verdâtre.

Cet Extrait 1 concentré peut ensuite être solubilisé dans différents solvants selon le besoin.

Extrait 1A : afin de permettre la biodisponibilité de cet extrait concentré lipophile dans les milieux aqueux des tests d’efficacité biologique, l’Extrait 1 est totalement solubilisé à 5g/100mL de DMSO sous agitation pendant 15 minutes à 60°C (Extrait 1A). L’extrait 1A ainsi obtenu se présente sous la forme d’un liquide brun verdâtre.

Extrait 1B : afin de disposer d’une forme liquide huileuse facilement formulable en cosmétique, l’Extrait 1 est solubilisé entièrement dans du myristate d’octyldodécyl (MOD) à une concentration de 0.5g/100g sous agitation mécanique, à 60°C pendant 1h, puis filtré sur plaques de cellulose présentant un seuil de coupure compris entre 1.5 et 3µm (Extrait 1B). L’extrait 1B ainsi obtenu se présente sous la forme d’un liquide limpide vert.

Extrait 1C : afin de disposer d’un extrait huileux liquide de couleur dépourvu ou quasiment dépourvu de pigments chlorophylliens de couleur verte, une étape de décoloration de l’Extrait 1B au moyen d’un charbon actif peut être additionnellement réalisée. 0.8% de charbon actif poudre sont ajoutés à l’Extrait 1B sous agitation mécanique, à 50°C pendant 1h. Le mélange est ensuite filtré sur plaques en cellulose présentant un seuil de coupure compris entre 2.5 et 4.2µm (Extrait 1C). L’extrait 1C ainsi obtenu se présente sous la forme d’un liquide limpide jaune.

La recherche et la quantification des triterpénoïdes est réalisée par HPLC-CAD (CAD : détecteur d’aérosols chargés) pour tous les extraits. La présence de 3 acides triterpéniques majoritaires est détectée : acide ursolique, acide oléanolique et acide maslinique. Ces 3 acides triterpéniques sont quantifiés par rapport à une droite d’étalonnage obtenue avec la molécule étalon acide ursolique. La concentration de ces 3 acides triterpénique dans l’extrait 1 est de 5%.

L’ensemble des résultats figure dans le Tableau 1.

Tableau 1 : Composition en acides triterpéniques de l’extrait 1, 1A, 1B, 1C.

La recherche et la quantification des composés phénoliques est réalisée par UHPLC-UV uniquement dans les Extraits 1 et 1A. La présence de MOD empêche l’analyse dans les extraits 1B et 1C. La présence de flavonoïdes de type flavonols glycosylés (7 molécules) ainsi que de dérivés galliques (3 molécules) a été détectée dans les extraits. Leurs concentrations sont déterminées par rapport à des droites d’étalonnage établies avec la molécule étalon narcissine pour les flavonols glycosylés et avec l’acide ellagique pour les dérivés galliques. Les concentrations dans les extraits 1B et 1C sont déterminées par calcul en fonction du coefficient de dilution. Elle est de l’ordre de 1% dans l’Extrait 1.

L’ensemble des résultats figure dans le Tableau 2.

Tableau 2 : Composition en composés phénoliques de l’extrait 1, 1A, 1B, 1C

Exemple 2 : Préparation et analyse phytochimique de l’extrait éthanolique (Extrait 2, 2A, 2B, 2C)
Les feuilles sèches d’Hippophae rhamnoidessont broyées. On introduit dans l’extracteur les feuilles sèches broyées d’Hippophae rham n oideset l’éthanol 96° selon un ratio massique de 1:9. L’extraction Solide/Liquide est réalisée sous agitation mécanique continue, à pression atmosphérique, à la température de reflux du mélange pendant 3h. En fin d’extraction, la séparation Solide/Liquide est réalisée par filtration sur une toile. L’extrait liquide brut est ensuite filtré sur plaque en cellulose jusqu’au grade de 0.8-0.5 µm, puis déchlorophyllé par ajout de 0.2% de charbon actif pendant 1h à température ambiante sous agitation mécanique. L’éthanol est ensuite évaporé sous pression réduite jusqu’à 50 mbars à 80°C pour obtenir l’extrait végétal pur concentré (noté Extrait 2). L’extrait 2 ainsi obtenu se présente sous forme d’une pâte brune.

Cet Extrait 2 concentré peut ensuite être solubilisé dans différents solvants selon le besoin.

Extraits 2A et 2B : afin de permettre la biodisponibilité de cet extrait concentré de polarité intermédiaire dans les milieux aqueux des tests d’efficacité biologique, l’Extrait 2 est solubilisé totalement dans du DMSO sous agitation 15 minutes à 60°C à 2 concentrations : 10g/100mL (Extrait 2A) et 1.4 g/100mL (Extrait 2B). Les extraits ainsi obtenus se présentent sous la forme d’un liquide brun (Extrait 2A) et d’un liquide limpide jaune ambré (Extrait 2B).

Extrait 2C : afin de disposer d’une forme liquide anhydre facilement utilisable par le formulateur cosmétique, l’Extrait 2 est solubilisé entièrement dans du 1,3-propanediol (PDO) à une concentration de 1.4g/100g sous agitation mécanique, à 60°C pendant 1h, puis filtré sur plaques de cellulose jusqu’au seuil de coupure final compris entre 0.3 et 0.1µm (Extrait 2C). L’extrait 2C ainsi obtenu se présente sous la forme d’un liquide limpide jaune ambré.

La caractérisation phytochimique des extraits figure dans les tableaux 3 et 4.

La recherche et la quantification des composés phénoliques est réalisée par UHPLC-UV dans les extraits. A l’instar de l’Extrait 1, la présence de flavonoïdes de type flavonols glycosylés (7 molécules) ainsi que de dérivés galliques (3 molécules) a été détectée dans l’Extrait 2. Leurs concentrations sont déterminées par rapport à des droites d’étalonnage établies avec la molécule étalon narcissine pour les flavonols glycosylés et avec l’acide ellagique pour les dérivés galliques. La concentration en composés phénoliques totaux identifiés est de l’ordre de 4% dans l’Extrait 2.

L’ensemble des résultats figure dans le Tableau 3.

Tableau 3 : Composition en composés phénoliques de l’extrait 2, 2A, 2B, 2C

La recherche et la quantification des triterpénoïdes est réalisée par HPLC-CAD (CAD : détecteur d’aérosols chargés) pour l’Extrait 2. A l’instar de l’Extrait 1 la présence de 3 acides triterpéniques majoritaires est également détectée : acide ursolique, acide oléanolique et acide maslinique. Ces 3 acides triterpéniques sont quantifiés par rapport à une droite d’étalonnage obtenue avec la molécule étalon acide ursolique. Les concentrations dans les extraits 2A, 2B et 2C sont déterminées par calcul en fonction du coefficient de dilution. La concentration de ces 3 acides triterpénique dans l’extrait 2 est de 1%.

L’ensemble des résultats figure dans le Tableau 4.

Tableau 4 : Composition en acides triterpéniques de l’extrait 2, 2A, 2B, 2C

Exemple 3 : Effet des extraits 1 A et 2 A selon l’invention sur la synthèse de la protéine d’adhésion ferme VCAM-1 en condition inflammatoire dans des cultures 2D de cellules endothéliales microvasculaires dermiques humaines.

Principe de la méthode:
On utilise l’immunomarquagein situcouplée à une analyse d’image pour mesurer la synthèse de la protéine d’adhésion ferme VCAM-1 dans des cultures en monocouche de cellules endothéliales microvasculaires dermiques en condition inflammatoire traitées ou non avec l’extrait 1A ou l’extrait 2A.

Protocole :
Des cellules endothéliales microvasculaires dermiques humaines sont prétraitées pendant 18h avec l’extrait 1A ou l’extrait 2A à la concentration finale respective de 0,025% et 0,07%. Les cellules endothéliales sont ensuite stimulées avec du TNF-α à 0,2 ng/ml et traitées en concomitance pendant 6h avec l’extrait 1A ou l’extrait 2A à la concentration finale respective de 0,025% et 0,07%. Les cellules non traitées (NT) sont utilisées comme contrôle. Les cellules sont lavées avec un tampon phosphate salin avant d’être fixées, perméabilisées au Triton à 0,1% pendant 5 minutes et saturées à la BSA (albumine sérique bovine) à 1% pendant 1 heure. Les cellules sont incubées avec l’anticorps primaire (anti-VCAM-1) pendant 1 nuit, lavées en tampon PBS, incubées avec l’anticorps secondaire lié au fluorochrome Alexa 594 pendant 1 heure. La fluorescence est lue sur un spectrophotomètre-imageur Cytation 5 (Biotek) avec les filtres adéquates. Les mesures de fluorescence par analyse d’image sont effectuées sur des paramètres communs d’acquisition.

L’étude est basée sur 3 expériences indépendantes (n=3). Le test statistique est le t-test non paramétrique Mann-Whitney pour comparer la synthèse de VCAM-1 dans les cultures de cellules endothéliales microvasculaires dermiques NT par rapport aux cellules endothéliales traitées avec l’extrait 1A ou l’extrait 2A.

Résultats:

Les résultats sont exprimés en % par rapport aux cellules NT et sont représentés dans les tableaux 5 et 6. Les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart type sur les 3 expériences (n=3).

Tableau 5 : Synthèse de VCAM-1 (en % par rapport aux cellules non traitées) dans des cellules endothéliales microvasculaires dermiques humaines, en condition inflammatoire, traitées avec l’extrait 1A à 0,025%.

Tableau 6 : Synthèse de VCAM-1 (en % par rapport aux cellules non traitées) dans des cellules endothéliales microvasculaires dermiques humaines, en condition inflammatoire, traitées avec l’extrait 2A à 0,07%

Les extraits selon l’invention induisent une diminution significative de la synthèse protéique de VCAM-1 (-82% vs NT, pour l’extrait 1A, -55% vs NT, pour l’extrait 2A) dans les cellules endothéliales microvasculaires dermiques en condition inflammatoire par rapport au non traité. Le solvant d’extraction seul n’induit pas de diminution de la synthèse de VCAM-1 (données non présentées). Les extraits 1A et 2A diminuent la perméabilité vasculaire en condition inflammatoire, c’est-à-dire la fuite des globules blancs et rouges dans l’espace extracellulaire et par conséquent les extraits 1A et 2A induisent une amélioration de la fonction barrière endothéliale.

Exemple 4 : Effet de l’extrait 1 A et de l’extrait 2 A selon l’invention sur la diminution de l’adhésion des cellules mononuclées de sang adulte (CMN) aux membranes des cellules endothéliales microvasculaires dermiques humaines en condition inflammatoire , dans des cultures 2D en monocouche.

Principe de méthode:
On utilise un marquage fluorescent in situ couplé à une analyse d’image pour mesurer l’adhésion des CMN aux membranes des cellules endothéliales microvasculaires dermiques dans des cultures en monocouche en condition inflammatoire traitées ou non avec l’extrait 1A ou l’extrait 2A.

Protocole:
Des cellules endothéliales microvasculaires dermiques humaines sont prétraitées pendant 18h avec l’extrait 1A ou l’extrait 2A à la concentration finale respective de 0,025% et 0,05%. Les cellules endothéliales sont ensuite stimulées avec du TNF-α à 0,2 ng/ml et traitées en concomitance pendant 4h avec l’extrait 1A ou l’extrait 2A à la concentration finale respective de 0,025% et 0,05%. Les cellules non traitées (NT) sont utilisées comme contrôle. En parallèle des traitements, les CMN sont marquées à la calcéine pendant 1h avant d’être mises en contact avec les cellules endothéliales préalablement stimulées et traitées. Après 1h d’adhésion des CMN, les monocouches de cellules endothéliales sont lavées avec un tampon phosphate salin et le nombre de CMN adhérées est mesuré par lecture de la fluorescence sur un spectrophotomètre-imageur Cytation 5 (Biotek) avec les filtres adéquates. Les mesures de fluorescence par analyse d’image sont effectuées sur des paramètres communs d’acquisition.

L’étude est basée sur 3 expériences indépendantes (n=3). Le test statistique est le t-test non paramétrique Mann-Whitney pour comparer l’adhésion des CMN aux membranes des cellules endothéliales microvasculaires dermiques NT par rapport aux cellules endothéliales traitées avec l’extrait 1A ou l’extrait 2A.

R é sultats:

Les résultats sont exprimés en % par rapport aux cellules NT et sont représentés dans les tableaux 7 et 8. Les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart type sur les 3 expériences (n=3).

Tableau 7 : Adhésion des CMN (en % par rapport aux cellules non traitées) dans des cellules endothéliales microvasculaires dermiques humaines traitées avec l’extrait 1A à 0,025%

Tableau 8 : Adhésion des CMN (en % par rapport aux cellules non traitées) dans des cellules endothéliales microvasculaires dermiques humaines traitées avec l’extrait 2A à 0,05%

Les extraits selon l’invention induisent une diminution significative de l’adhésion des CMN (-35% vs NT, pour l’extrait 1A, -43% vs NT, pour l’extrait 2A) aux membranes des cellules endothéliales microvasculaires dermiques dans des cultures en monocouche en condition inflammatoire par rapport au non traité. Le solvant d’extraction seul n’induit pas de diminution du nombre de CMN adhérées (données non présentées). Les extraits 1A et 2A diminuent la perméabilité vasculaire en condition inflammatoire, c’est-à-dire la fuite des globules blancs et rouges dans l’espace extracellulaire et par conséquent ils induisent une amélioration de la fonction barrière endothéliale.

Exemple 5 : Effet de l’extrait 1 A et de l’extrait 2 A selon l’invention sur l’augmentation de la résistance électrique trans-endothéliale (TEER) en condition inflammatoire dans des cultures 2D de cellules endothéliales microvasculaires dermiques humaines.

Principe de méthode:
On utilise la technique de la TEER (Trans-Endothelial Electrical Resistance) pour mesurer la perméabilité membranairein vitrod’une monocouche de cellules endothéliales microvasculaires dermiques en condition inflammatoire traitées ou non avec l’extrait 1A ou l’extrait 2A. La TEER est une technique quantitative qui mesure l’intégrité de la barrière de cellules endothéliales grâce à 2 électrodes placées dans chacun des deux compartiments : 1 courant passe à travers la monocouche et mesure la résistance électrique de la barrière cellulaire en Ohms. Ainsi, en condition non inflammatoire où les cellules sont cohésives, la résistance électrique des cellules est forte (fonction barrière endothéliale renforcée) alors qu’en condition inflammatoire où les cellules sont dissociées, la résistance électrique des cellules est faible (fonction barrière endothéliale altérée).

Protocole:
Des cellules endothéliales microvasculaires dermiques humaines sont prétraitées pendant 24h avec l’extrait 1A ou l’extrait 2A à la concentration finale respective de 0,01% et 0,07%. Les cellules endothéliales sont ensuite stimulées avec du TNF-α à 0,2 ng/ml et traitées en concomitance pendant 24h avec l’extrait 1A ou l’extrait 2A à la concentration finale respective de 0,01% et 0,07%. Les cellules non traitées (NT) sont utilisées comme contrôle. L’intégrité de la barrière endothéliale a été évaluée en mesurant en temps réel la résistance électrique trans-endothéliale des cellules (en Ohms) grâce à un système calibré composé de deux électrodes.

L’étude est basée sur 3 expériences indépendantes (n=3). Le test statistique est le t-test non paramétrique Mann-Whitney pour la résistance électrique trans-endothéliale des cellules endothéliales microvasculaires dermiques NT par rapport aux cellules endothéliales traitées avec l’extrait 1A ou l’extrait 2A.

Résultats:
Les résultats sont exprimés en % par rapport aux cellules NT et sont représentés dans les tableaux 9 et 10. Les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart type sur les 3 expériences (n=3).

Tableau 9 : Mesure de la résistance électrique trans-endothéliale (en % par rapport aux cellules non traitées) dans des cellules endothéliales microvasculaires dermiques humaines traitées avec l’extrait 1A à 0,01%

Tableau 10 : Mesure de la résistance électrique trans-endothéliale (en % par rapport aux cellules non traitées) dans des cellules endothéliales microvasculaires dermiques humaines traitées avec l’extrait 2A à 0,07%

Les extraits selon l’invention induisent une augmentation significative (+111% vs NT, pour l’extrait 1A, +160% vs NT pour l’extrait 2A) de la résistance électrique trans-endothéliale dans des cultures en monocouche en condition inflammatoire par rapport au non traité. Le solvant d’extraction seul n’induit pas d’augmentation de la résistance électrique trans-endothéliale (données non présentées). Les extraits 1A et 2A augmentent la fonction barrière endothéliale en condition inflammatoire, et par conséquent ils induisent une diminution de la perméabilité vasculaire.

Exemple 6 : Effet de l’extrait 1 A sur l ’ augmentation de l ’ expression transcriptomique du g è ne HMOX-1, qui code une enzyme de d é gradation de l ’ h é moglobine, dans des cultures 2D de fibroblastes dermiques humains.

Principe de méthode:
On utilise la technique de PCR (Polymerase Chain Reaction) en temps réel pour mesurer l’expression du gène HMOX-1 (Heme oxygenase 1) dans des cultures en monocouche de fibroblastes dermiques humains traités ou non avec l’extrait 1A.

. Protocole :
Des fibroblastes dermiques humains, issus de paupières et de poches, sont traités pendant 6h avec l’extrait 1A à la concentration finale de 0,025%. Les cellules non traitées (NT) sont utilisées comme contrôle. Les cellules sont lavées avec un tampon phosphate salin puis lysées pour l’extraction des ARN. Après dosage et validation de la qualité des ARN, l’expression relative du gène HMOX-1 est évaluée par PCR en temps réel.

: L’étude est basée sur 3 expériences indépendantes (n=3). Le test statistique est le t-test non paramétrique Mann-Whitney pour comparer l’expression du gène HMOX-1 dans des cultures de fibroblastes dermiques humains NT par rapport aux fibroblastes dermiques traités avec l’extrait 1A.

Résultats:
L’expression du gène HMOX-1 dans des fibroblastes dermiques humains traités ou non avec l’extrait 1A a été quantifiée. Les résultats sont exprimés en % par rapport aux cellules NT et représenté dans le tableau 11. Les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart type sur les 3 expériences (n=3).

Tableau 11 : Expression du gène HMOX-1 (en % par rapport aux cellules non traitées) dans des fibroblastes dermiques humains traités avec l’extrait 1A à 0,025%

L’extrait 1A induit une augmentation significative de l’expression du gène HMOX-1 (+119% vs NT) dans des fibroblastes dermiques humains par rapport au non traité. Le solvant d’extraction seul n’induit pas d’augmentation de l’expression d’HMOX-1 (données non présentées). L’extrait 1A induit donc la dégradation de l’hémoglobine, présente dans les globules rouges, à l’origine de la pigmentation caractéristique des cernes.

Exemple 7 : Effet de l’extrait 1 C sur la ch é lation des ions ferreux (Fe ²⁺ ) dans un test in tubo .

Principe de méthode:
On utilise la ferrozine pour évaluer le pouvoir chélateur de l’extrait 1C dans un testin tubo. La ferrozine forme avec les ions ferreux, présents dans le milieu réactionnel, un complexe ferrozine-Fe²⁺de couleur violette intense. La quantification de ce complexe par spectrophotométrie à 562 nm dans un milieu de concentration connue en fer, renseigne sur la quantité de fer non chélaté et donc sur la capacité de l’extrait 1C à le chélater. Ainsi, plus la coloration de la solution contenant l’extrait 1C est claire, plus le pouvoir chélateur de l’extrait testé est important.

Protocole:
L’extrait 1C est mis en contact, suivant une gamme de concentration de 0,1% à 2%, avec une solution de chlorure de fer (FeCl₂) pendant 10 minutes. Afin d’évaluer le pouvoir chélateur de l’extrait, la ferrozine est ensuite ajoutée au mélange pendant 10 minutes. L’absorbance de la solution est lue par un spectrophotomètre à 562 nm. Plus l’absorbance de la solution est faible, plus le pouvoir chélateur de l’extrait 1C, vis-à-vis des ions Fe²⁺est important.

Résultats:
Les résultats de chacune des solutions contenant l’extrait 1C de 0,1% à 2% en comparaison avec la solution NT sont représentés sur la .

L’extrait 1C obtenu selon l’invention induit la chélation des ions ferreux en effet-dose. Le solvant d’extraction seul n’induit pas de chélation des ions ferreux (données non présentées). L’extrait 1C diminue donc la pigmentation caractéristique des cernes et de l’éclat du teint en chélatant les ions ferreux qui s’accumulent dans l’espace extracellulaire en raison de la dégradation de l’hémoglobine, constituant principal des globules rouges.

Exemple 8 : Effet de l’extrait 2 B sur l’activité anti - radicalaire par la mesure du DPPH in tubo .

Principe de méthode :
On utilise le testin tubocolorimétrique du DPPH (en référence au nom du réactif 1,1- diphényl-2-picrylhydrazyl) pour évaluer la capacité antioxydante de l’extrait 2B. Le DPPH est un radical azote très stable, caractérisé par une couleur violette intense, qui se décolore lorsqu’il est réduit en présence d’une molécule antioxydante. Par mesure spectrophotométrique de la variation d’absorbance de la solution de DPPH après réaction avec l’extrait 2B, on quantifie le pouvoir réducteur de l’extrait.

Protocole :
L’extrait 2B est mis en contact, suivant une gamme de concentration de 0,1% à 2%, avec une solution contenant du DPPH pendant 30 minutes. L’absorbance de la solution est lue par un spectrophotomètre à 518 nm. Plus l’absorbance de la solution est faible, plus l’activité anti-radicalaire de l’extrait 2B, est importante.
L’étude est basée sur 3 expériences indépendantes (n=3). Le test statistique est le t-test non paramétrique Mann-Whitney pour comparer l’activité anti-radicalaire de la condition NT avec l’extrait 2B.

Résultats :
Les résultats sont exprimés en % par rapport à la condition NT et sont représentés dans le tableau 12. Les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart type sur les 3 expériences (n=3).

Tableau 12 : Activité anti-radicalaire (en % par rapport à la condition non traitée) de l’extrait 2B testé de 0,1 à 2 %

L’extrait 2B obtenu selon l’invention induit une augmentation de l’activité anti-radicalaire en effet-dose. Le solvant d’extraction seul n’induit pas d’augmentation de l’activité anti-radicalaire (données non présentées). L’extrait 2B présente une capacité antioxydante en diminuant l’oxydation du fer qui s’accumule dans l’espace extracellulaire, à l’origine de la pigmentation caractéristique des cernes et de l’éclat du teint, en raison de la dégradation de l’hémoglobine, constituant principal des globules rouges.

Exemple 9 : Effets de l’extrait 2 C sur l’expression transcriptomique des gènes de défense de l’oxydation dans des cultures 2D de kératinocytes primaires humains normaux.

Principe de méthode:
Il est le même que celui de l’exemple 5 à l’exception des gènes d’intérêt GPX2, GPX3 et TXN qui codent respectivement le Glutathion Peroxidase 2, le Glutathion Peroxidase 3 et la Thioredoxine.

Protocole:

Des kératinocytes primaires humains normaux sont traités pendant 24h avec l’extrait 2C suivant une gamme de concentration de 0,1% à 0,5%. Les cellules non traitées (NT) sont utilisées comme contrôle. Les cellules sont lavées avec un tampon phosphate salin puis lysées pour l’extraction des ARN. Après dosage et validation de la qualité des ARN, l’expression relative des gènes GPX2, GPX3 et TXN est évaluée par PCR en temps réel.
L’étude est basée sur 3 expériences indépendantes (n=3). Le test statistique est le t-test non paramétrique Mann-Whitney pour comparer l’activité anti-radicalaire de la condition NT avec l’extrait 2C.

Résultats:
Les résultats sont exprimés en % par rapport aux cellules NT et représentés dans le tableau 13 (GPX2), tableau 14 (GPX3) et tableau 15 (TXN). Les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart type sur les 3 expériences (n=3).

Tableau 13 : Expression du gène GPX2 (en % par rapport à la condition non traitée) dans des cultures 2D de kératinocytes primaires humains normaux traités avec l’extrait 2C de 0,1 à 0,5%

Tableau 14 : Expression du gène GPX3 (en % par rapport à la condition non traitée) dans des cultures 2D de kératinocytes primaires humains normaux traités avec l’extrait 2C de 0,1 à 0,5 %

Tableau 15 : Expression du gène TXN (en % par rapport à la condition non traitée) dans des cultures 2D de kératinocytes primaires humains normaux traités avec l’extrait 2C de 0,1 à 0,5 %

L’extrait 2C obtenu selon l’invention induit une augmentation significative de l’expression transcriptomique des gènes GPX2, GPX3 et TXN en effet-dose dans les cultures 2D de kératinocytes primaires humains normaux. Le solvant d’extraction seul n’induit pas d’augmentation de l’expression des gènes GPX2, GPX3 et TXN (données non présentées). L’extrait 2C présente une capacité antioxydante en diminuant l’oxydation du fer qui s’accumule dans l’espace extracellulaire, à l’origine de la pigmentation caractéristique des cernes et de l’éclat du teint, en raison de la dégradation de l’hémoglobine, constituant principal des globules rouges.

Claims

Extrait anhydre de feuilles sans tiged’H i ppophae rhamnoidesou composition comprenant ledit extrait pour utilisation pour maintenir et/ou améliorer la microcirculation cutanée.
Extrait selon la revendication 1 pour réduire les cernes et/ou les poches au niveau du contour de l’oeil.
Extrait selon la revendication 1 pour maintenir et/ou augmenter l’éclat du teint de la peau.
Extrait selon l’une des revendications précédentes pour diminuer l’expression de la protéine d’adhésion VCAM-1 et/ou diminuer l’adhésion des cellules mononucléées aux membranes des cellules endothéliales microvasculaires dermiques et/ou augmenter la résistance électrique trans-endothéliale.
Extrait selon l’une des revendications précédentes pour augmenter l’expression de l’enzyme HMOX-1 et/ou la chélation des ions ferreux.
Extrait selon l’une des revendications précédentes pour augmenter l’expression des enzymes anti-oxydantes GPX2 et/ou GPX3 et/ou TXN et/ou augmenter l’activité anti-radicalaire.
Extrait selon l’une des revendications précédentes pour réduire l’inflammation.
Extrait selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l’extrait contient des flavonoïdes, des dérivés galliques et des triterpènes.
Extrait anhydre de feuilles sans tiged’Hippophae rhamnoidesou composition cosmétique et/ou dermatologique comprenant ledit extrait caractérisée en ce que ledit extrait est susceptible d’être obtenu par une première étape d’extraction solide/fluide, suivie d’une seconde étape de séparation solide/fluide, puis d’une troisième étape de récupération de la phase liquide ou pâteuse.
Extrait ou composition selon la revendication 9, caractérisée en ce que le fluide est un solvant d’extraction anhydre.
Extrait ou composition selon la revendication 10, caractérisé en ce que le solvant d’extraction anhydre est l’éthanol ou le dioxyde de carbone (CO₂) supercritique ou un mélange des deux.
Extrait ou composition selon la revendication 11, caractérisé en ce que lorsque le solvant d’extraction anhydre est un mélange d’éthanol et de CO₂supercritique, le ratio massique éthanol/ CO₂supercritique est avantageusement compris entre 1:5 et 1:50, préférentiellement compris entre 1:10 et 1:20.
Extrait ou composition selon l’une des revendications 11 à 12, caractérisé en ce que lorsque le solvant d'extraction anhydre est un mélange de CO₂supercritique et d’éthanol, on évapore l’éthanol et on solubilise l’extrait dans un solvant de reprise qui est l’octyldodecyl myristate.
Extrait ou composition selon la revendication 11, caractérisé en ce que lorsque le solvant d'extraction anhydre est l’éthanol, on évapore l’éthanol et on solubilise l’extrait dans un solvant de reprise qui est le propanediol.
Extrait ou composition selon l’une des revendications 9 à 14, caractérisé en ce que le ratio plante/fluide est compris avantageusement entre 1/99 et 80/20, préférentiellement entre 2/98 et 20/80.
Composition cosmétique et/ou dermatologique selon l’une des revendications 9 à 15, caractérisée en ce que l’extrait représente entre 0.1 % et 10 % en poids de la composition, préférentiellement entre 0.5 % et 5 %.