[go: up one dir, main page]

FR3136650A3 - Mélange de HMO fucosylés - Google Patents

Mélange de HMO fucosylés Download PDF

Info

Publication number
FR3136650A3
FR3136650A3 FR2306375A FR2306375A FR3136650A3 FR 3136650 A3 FR3136650 A3 FR 3136650A3 FR 2306375 A FR2306375 A FR 2306375A FR 2306375 A FR2306375 A FR 2306375A FR 3136650 A3 FR3136650 A3 FR 3136650A3
Authority
FR
France
Prior art keywords
component
mass
mol
mixture
components
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
FR2306375A
Other languages
English (en)
Other versions
FR3136650B3 (fr
Inventor
Martin Matwiejuk
Nicole Seifert
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DSM IP Assets BV
Original Assignee
DSM IP Assets BV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by DSM IP Assets BV filed Critical DSM IP Assets BV
Publication of FR3136650A3 publication Critical patent/FR3136650A3/fr
Application granted granted Critical
Publication of FR3136650B3 publication Critical patent/FR3136650B3/fr
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/065—Microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/30—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols, e.g. xylitol; containing starch hydrolysates, e.g. dextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/18—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a glycosyl transferase, e.g. alpha-, beta- or gamma-cyclodextrins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/28—Oligosaccharides
    • A23V2250/284—Oligosaccharides, non digestible
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/113—Acidophilus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/125—Casei
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/145—Gasseri
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/149—Jensenii
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/165—Paracasei
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/169—Plantarum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/173—Reuteri
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/175—Rhamnosus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/513—Adolescentes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/515—Animalis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/517—Bifidum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/519—Breve
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/529—Infantis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/531—Lactis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/533—Longum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

La présente invention concerne un mélange d'oligosaccharides de lait humain ("HMO") comprenant cinq HMO fucosylés, ainsi qu'un procédé enzymatique pour préparer ledit mélange, dans lesquel ladite synthèse comprend une réaction enzymatique d'α1-3/4-transfucosidase entre des donneurs et des accepteurs de HMO.

Description

Mélange de HMO fucosylés Domaine de l'invention
La présente invention concerne un mélange d'oligosaccharides de lait humain ("HMO") comprenant cinq HMO fucosylés, ainsi qu'un procédé enzymatique pour produire ledit mélange, dans lequel ladite synthèse comprend une réaction enzymatique par une α1-3/4-transfucosidase entre des donneurs et accepteurs de HMO.
Arrière-plan
Les HMO ont fait l’objet d’un intérêt marqué ces dernières années en raison de leurs rôles dans de nombreux procédés biologiques se produisant dans l'organisme humain. Le lait de mammifère contient au moins 130 de ces oligosaccharides complexes (voirUrashima et al:Milk Oligosaccharides. Nova
Science Publisher (2011) ; ou Chen,Adv. Carbohydr . Chem. Biochem .72, 113 (2015)).
Des preuves s'accumulent sur le fait que la communauté résidente de microbes, appelée microbiome, dans les voies digestives humaines, joue un rôle majeur dans la santé et la maladie. Quand la composition normale du microbiome est déséquilibrée, l'hôte humain peut en subir des conséquences. La recherche récente a impliqué des déséquilibres du microbiome dans des troubles aussi divers que le cancer, l'obésité, les maladies intestinales inflammatoires, le psoriasis, l'asthme, et éventuellement même l'autisme. On pense que les HMO modulent positivement le microbiome, et présentent un intérêt croissant à cette fin. Toutefois, la diversité remarquable des HMO, couplée à leur manque de disponibilité, en particulier pour les HMO plus complexes, a freiné les recherches des fonctions spécifiques de HMO individuels et donc limité l'exploration de leur plein potentiel pour une utilisation afin de promouvoir la bonne santé humaine.
La source naturelle des HMO est le lait de mammifère, qui contient principalement de l'eau, conjointement avec 55 à 70 g/l de lactose, 24 à 49 g/l de lipides, environ 13 g/l de protéines, 5 à 15 g/l de HMO et environ 1,5 g/l de minéraux.
Les efforts pour développer des procédés destinés à la production de HMO à l'échelle industrielle ont significativement augmenté ces dernières années. Des procédés ont été conçus pour produire des HMO par fermentation microbienne, par des procédés enzymatiques, par synthèse chimique, ou par des combinaisons de ces technologies.
En particulier, la fermentation dansE. colia été employée avec succès pour la production industrielle à grande échelle de HMO. Le document WO 01/04341 décrit comment produire des oligosaccharides fondamentaux de lait humain éventuellement substitués par du fucose, par utilisation d'E. coligénétiquement modifiée.
Les documents WO 2012/158517 et WO 2013/154725 décrivent des compositions prébiotiques contenant 3-FL, 2'-FL et DFL, et le document WO 2012/112777 décrit un mélange de 3-FL, 2'-FL, DFL et lactose, produit dans uneE. coligénétiquement modifiée.
Dans un effort pour pouvoir produire par voie de synthèse des mélanges de HMO sans qu'il soit nécessaire de synthétiser tous les oligosaccharides constitutifs du mélange, des procédés enzymatiques pour la synthèse enzymatique de mélanges oligosaccharidiques de HMO ont été développés, et sont décrits dans les documents WO 2012/156897 et WO 2012/156898. A titre de développement supplémentaire, les documents WO 2016/063261 et WO 2016/063262 décrivent des enzymes et procédés enzymatiques optimisés pour la génération de HMO fucosylés. Ces procédés ont donné des mélanges réactionnels contenant une pluralité d'oligosaccharides HMO différents.
Néanmoins, ces procédés comprennent l'utilisation d'enzymes hautement spécialisées qui, à leur tour, conduisent à la nécessité de conditions sensibles de stœchiométrie et de réaction, ainsi qu'à la nécessité de terminer les réactions au point d'équilibre souhaité dans les réactions et à l'élimination des métabolites secondaires non souhaités.
Il existe donc toujours un besoin clair pour d'autres HMO spécifiques ou combinaisons de HMO pour moduler un microbiome d'une manière souhaitée, de façon à traiter des problèmes spécifiques de santé humaine, ainsi que des procédés simplifiés et plus précis pour les produire.
Le premier objet de l'invention concerne un mélange constitué ou essentiellement constitué d’un composant A qui est le 3-FL, un composant B qui est le LNFP-I, un composant C qui est le 2'-FL, un composant D qui est le LNDFH-I, un composant E qui est le DFL, et éventuellement un composant F qui est le lactose.
Le deuxième objet de l'invention concerne une composition comprenant le mélange constitué ou essentiellement constitué de 2'-FL, 3-FL, LNFP-I, DFL, LNDFH-I et éventuellement de lactose. La composition peut être une composition nutritionnelle, pharmaceutique ou cosmétique.
Le troisième objet de l'invention concerne un procédé pour la synthèse enzymatique du mélange ci-dessus de HMO, de préférence dans des conditions essentiellement dépourvues de tampon. Ladite synthèse enzymatique comprend une réaction enzymatique par une α1-3/4-transfucosidase entre un donneur de HMO fucosylé et deux accepteurs de HMO fucosylés. La synthèse enzymatique pour préparer un mélange de HMO selon la présente invention comprend les étapes de réaction d'un composant A, d'un composant B et d'un composant C en présence d'une α1-3/4-transfucosidase pour produire un mélange réactionnel et d'élimination de l'α1-3/4-transfucosidase et éventuellement du lactose du mélange réactionnel. En conséquence, la présente invention concerne aussi un mélange constitué ou essentiellement constitué de 2'-FL, 3-FL, LNFP-I, DFL, LNDFH-I et éventuellement de lactose, obtenu ou susceptible d'être obtenu par la synthèse enzymatique divulguée ici.
Une caractéristique spéciale de ladite synthèse enzymatique selon la présente invention est qu'elle peut être effectuée dans des conditions essentiellement dépourvues de tampon. Typiquement, la synthèse enzymatique selon la présente invention est effectuée à un pH situé dans la plage allant de 4,5 à 7, tel que de préférence un pH situé dans la plage allant de 5,0 à 6,0.
L'α1-3/4-transfucosidase utilisée dans la synthèse enzymatique selon la présente invention est de préférence dépourvue d'activité hydrolytique, ou au moins a une activité hydrolytique significativement réduite.
Selon un aspect de la présente invention, la synthèse enzymatique selon la présente invention comprend en outre une étape d'élimination qui contient une étape pour désactiver l'α1-3/4-transfucosidase. Ladite étape d'inactivation peut comprendre un chauffage de la solution réactionnelle à des températures situées dans la plage allant de 60°C à 100°C, pendant une période de temps située dans la plage allant de 5 minutes à 180 minutes.
Dans la synthèse enzymatique selon la présente invention, l'α1-3/4-transfucosidase est éliminée par exemple par microfiltration, nanofiltration, centrifugation ou ultracentrifugation. Ladite synthèse enzymatique peut comprendre plus d'une étape pour l'élimination de l'α1-3/4-transfucosidase. Une étape peut consister à éliminer l'α1-3/4-transfucosidase au moyen de charbon activé en poudre en mode discontinu. En variante, l'étape peut consister à éliminer l'α1-3/4-transfucosidase au moyen de charbon activé en poudre en mode colonne.
Un autre objet de l'invention concerne un mélange constitué ou essentiellement constitué de 2'-FL, 3-FL, LNFP-I, DFL, LNDFH-I et éventuellement de lactose, pour une utilisation dans, ou une composition comprenant le mélange constitué ou essentiellement constitué de 2'-FL, 3-FL, LNFP-I, DFL, LNDFH-I et éventuellement de lactose, pour une utilisation dans le traitement, la prévention et/ou l'amélioration d'une maladie et/ou d'un état associé à un déséquilibre du microbiome.
Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'un mélange constitué ou essentiellement constitué de 2'-FL, 3-FL, LNFP-I, DFL, LNDFH-I et éventuellement de lactose, pour amplifier la viabilité de probiotiques en solution aqueuse.
Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'un mélange constitué ou essentiellement constitué de 2'-FL, 3-FL, LNFP-I, DFL, LNDFH-I et éventuellement de lactose, ou d'une composition comprenant le mélange constitué ou essentiellement constitué de 2'-FL, 3-FL, LNFP-I, DFL, LNDFH-I et éventuellement de lactose, dans la gestion diététique d'un humain ou dans une application cosmétique.
Brève description de la figure
L'invention sera décrite ci-après plus en détail en référence à la jointe qui montre le compte de colonies deL. rhamnosusaprès 3 heures d'incubation avec ou sans HMO à 37°C et à pH 3,0.
Description détaillée
En général, tous les termes utilisés ici doivent être interprétés selon leur signification habituelle dans le domaine technique, et ceci est applicable à tous les objets de modes de réalisation de l'invention, sauf définition ou mention contraire explicite.
Toutes les références à "un/une/le/la [séquence, enzyme, étape, etc.]" doivent être interprétées de manière ouverte comme se référant à au moins une instance de ladite séquence, enzyme, étape, etc., sauf mention contraire explicite.
Les étapes de n'importe quel procédé divulgué dans la présence n'ont pas besoin d'être effectuées dans l'ordre exact divulgué, sauf mention explicite.
Le mot "comprenant" est utilisé au sens de "incluant", plutôt qu'au sens de "constitué de".
Dans le contexte de l'invention, le terme "oligosaccharide" signifie un polymère saccharidique contenant un certain nombre de motifs monosaccharidiques attachés ensemble via des liaisons interglycosidiques. Des oligosaccharides préférables dans l'invention sont les oligosaccharides de lait humain (HMO).
Le terme "oligosaccharide de lait humain" ou "HMO", dans le présent contexte, signifie un glucide complexe que l'on trouve dans le lait maternel humain (à des fins de référence, voir Urashima et al. :Milk Oligosaccharides. Nova Science Publisher (2011) ; ou Chen,Adv. Carbohydr . Chem . Biochem .72, 113 (2015)).
De façon spécifique, 2'-FL est le 2'-fucosyl-lactose ((Fucα1-2Galβ1-4Glc), 3-FL est le 3-fucosyl-lactose (Galβ1-4[Fucα1-3]Glc), DFL est le difucosyl-
lactose (Fucα1-2Galβ1-4[Fucα1-3]Glc), LNFP-I est le lacto-N-fucopentaose I (Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc) et LNDFH-I est le lacto-N-difucohexaose (Fucα1-2Galβ1-3[Fucα1-4]GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc). Dans les structures ci-dessus, Fuc signifie le motif L-fucopyranosyle, Gal signifie le motif D-galactopyranosyle, Glc signifie le motif D-glucopyranose et GlcNAc signifie le motif D-(2-acétylamino)-2-désoxy-glucopyranosyle. Dans le contexte de la présente invention, le lactose n'est pas considéré comme une espèce de HMO.
Dans le contexte de l'invention, le terme "donneur" concerne un saccharide fucosylé, dans lequel un α1-3-fucosyle est transféré, par l'intermédiaire d'une réaction catalysée par une enzyme, sur un autre saccharide, après quoi le produit ainsi produit est un saccharide contenant un α1-3-fucosyle ou α1-4-fucosyle. Le terme "accepteur" concerne le saccharide sur lequel le groupe fucosyle provenant du donneur est transféré.
La "gestion diététique" signifie l'alimentation exclusive ou partielle de patients qui, à cause d'une maladie, d'un trouble ou d'un état médical, souffrent de :
- soit avoir une capacité limitée, amoindrie ou altérée à prendre, digérer, absorber, métaboliser ou excréter des aliments ordinaires ou certains nutriments qu'ils contiennent, ou des métabolites,
- soit avoir d'autres exigences nutritives déterminées médicalement.
(voir : Commission Notice on the classification of Food for Special Medical Purposes of the European Commission,Official Journal of the European Union C401, 25.11.2017, p. 10-11).
Les termes "microbiote", "microflore" et "microbiome" signifient une communité de microorganismes vivants qui peuplent typiquement un organe ou une partie du corps, en particulier les organes gastrointestinaux des humains. Les membres les plus dominants du microbiote gastrointestinal comprennent les microorganismes des embranchementsFirmicutes, Bacteroidetes , Actinobacteria , Proteobacteria , Synergistetes , Verrucomicrobia , Fusobacteria ,etEuryarchaeota, au niveau du genreBacteroides , Faecalibacterium , Bifidobacterium , Roseburia , Alistipes , Collinsella , Blautia , Coprococcus , Ruminococcus , EubacteriumetDorea, au niveau de l'espèceBacteroides uniformis , Alistipes putredinis , Parabacteroides merdae , Ruminococcus bromii , Dorea longicatena , Bacteroides caccae , Bacteroides thetaiotaomicron , Eubacterium hallii , Ruminococcus torques, Faecalibacterium prausnitzii , Ruminococcus lactaris , Collinsella aerofaciens , Dorea formicigenerans , Bacteroides vulgatusetRoseburia intestinalis. Le microbiote gastrointestinal comprend le microbiote associé à la muqueuse, qui est situé dans ou attaché à la couche muqueuse couvrant l'épithélium des voies gastrointestinales, et le microbiote associé au lumen, que l'on trouve dans le lumen des voies gastrointestinales.
Par "modulation du microbiome", on entend le fait d'exercer une influence modificatrice ou régulatrice sur le microbiote, par exemple une influence conduisant à une augmentation de l'abondance intestinale indigène deBifidobacterium,Barnesiella,Faecalibacteriumet/ou de bactéries produisant du butyrate. Dans un autre exemple, l'influence peut conduire à une réduction de l'abondance intestinale deRuminococcus gnavuset/ou de protéobactéries. Les "protéobactérie" constituent un embranchement de bactéries Gram négatives et comprennent une large diversité de bactéries pathogènes, telles qu'Escherichia,Salmonella,Vibrio,Helicobacter,Yersiniaet de nombreux autres genres notables.
Une "administration par voie orale" signifie n'importe quelle forme conventionnelle de délivrance d'une composition à un humain par la bouche.
Un "traitement préventif" ou une "prévention" signifie un traitement donné ou une action entreprise pour diminuer le risque d'apparition ou de rechute d'une maladie.
Par "traiter", on entend remédier à une maladie ou un état médical avec comme objectif d'améliorer ou de stabiliser le résultat chez la personne traitée ou remédier à un besoin nutritionnel sous-jacent. Par conséquent, le terme "traiter" inlcut la gestion diététique ou nutritionnelle de la maladie ou de l'état médical en remédiant aux besoins nutritionnels de la personne traitée. Les termes "traiter" et "traitement" ont des significations grammaticalement correspondantes
Tous les enseignements antérieurs reconnus ci-dessus sont incorporés ici à titre de référence. Aucune reconnaissance d'un quelconque document publié antérieur dans la présente ne devrait être considérée comme une admission ou représentation que son enseignement relevait de la connaissance générale commune à la date de celui-ci.
Le nouveau mélange de HMO
Conformément à la présente invention, on a découvert de façon surprenante qu'un nouveau mélange de 5 HMO fucosylés peut être préparé par synthèse enzymatique utilisant un seul donneur de HMO de départ et deux accepteurs de HMO de départ. La réaction peut de préférence être effectuée dans des conditions essentiellement dépourvues de tampon. De préférence également, l'enzyme a une activité hydrolytique limitée ou absente.
Le nouveau mélange, constitué ou essentiellement constitué de 5 HMO fucosylés, a une nouvelle combinaison unique de propriétés et d'activités biologiques. Plus précisément, le mélange peut être utilisé pour la modulation du microbiome d'un humain, notamment l'augmentation de l'abondance deBifidobacteriumet deBarnesielladans le microbiome d'un humain. En outre, le mélange peut réduire l'abondance deFirmicutesdans le microbiome humain, en particulier deClostridia. Le mélange peut aussi être utilisé pour traiter et/ou réduire le risque d'une large gamme d'infections bactériennes et virales humaines, ainsi que pour. Le nouveau mélange de HMO décrit ici est anti-infectieux. En outre, le mélange, lorsqu'il est combiné à un probiotique, amplifie sensiblement la viabilité de ce probiotique en solution aqueuse.
Un aspect de la présente invention concerne un mélange constitué ou essentiellement constitué de :
  1. un composant A qui est le 3-FL,
  2. un composant B qui est le LNFP-I,
  3. un composant C qui est le 2'-FL,
  4. un composant D qui est le LNDFH-I,
  5. un composant E qui est le DFL, et éventuellement
  6. un composant F qui est le lactose.
Par conséquent, un mode de réalisation de l'invention est un mélange constitué ou essentiellement constitué de :
  1. un composant A qui est le 3-FL,
  2. un composant B qui est le LNFP-I,
  3. un composant C qui est le 2'-FL,
  4. un composant D qui est le LNDFH-I, et
  5. un composant E qui est le DFL.
Un autre mode de réalisation de l'invention est un mélange constitué ou essentiellement constitué de :
  1. un composant A qui est le 3-FL,
  2. un composant B qui est le LNFP-I,
  3. un composant C qui est le 2'-FL,
  4. un composant D qui est le LNDFH-I,
  5. un composant E qui est le DFL, et
  6. un composant F qui est le lactose.
Synthèse enzymatique pour produire le mélange de HMO selon l'invention
Dans les paragraphes qui suivent, l'expression "peut porter" est équivalente à l'expression "porte éventuellement", et l'expression "peut être substitué" est équivalente à l'expression "est éventuellement substitué".
Le nouveau mélange décrit ci-dessus de HMO fucosylés est préparé par une synthèse enzymatique comprenant un donneur HMO de fucosyle qui est le composant A (3-FL), deux accepteurs HMO de fucosyle qui sont le composant B (LNFP-I) et le composant C (2'-FL), et une transfucosidase, de préférence dans des conditions essentiellement dépourvues de tampon. De préférence également, dans ladite réaction, l'enzyme a une activité hydrolytique (c'est-à-dire fucosidase) limitée ou absente.
Par conséquent, cette invention concerne aussi un procédé pour préparer un mélange de HMO constitué ou essentiellement constitué d’un composant A qui est le 3-FL, un composant B qui est le LNFP-I, un composant C qui est le 2'-FL, un composant D qui est le LNDFH-I, un composant E qui est le DFL, et un composant F qui est le lactose, par réaction des composants A, B et C en présence d'une α1-3/4-transfucosidase pour produire un mélange réactionnel contenant les composants A, B, C, D, E et le lactose, et ensuite élimination de la α1-3/4-transfucosidase du mélange réactionnel. L'α1-3/4-transfucosidase peut être éliminée d'une manière conventionnelle, par exemple par dénaturation du mélange réactionnel suivie de sa centrifugation ou de son ultrafiltration.
Également, un objet de cette invention concerne un procédé pour obtenir un mélange de HMO constitué ou essentiellement constitué d’un composant A qui est le 3-FL, un composant B qui est le LNFP-I, un composant C qui est le 2'-FL, un composant D qui est le LNDFH-I, et un composant E qui est le DFL, comprenant les étapes de réaction des composants A, B et C en présence d'une α1-3/4-transfucosidase pour produire un mélange réactionnel contenant les composants A, B, C, D, E et du lactose, et ensuite d'élimination du lactose et de la α1-3/4-transfucosidase du mélange réactionnel. L'α1-3/4-transfucosidase peut être éliminée par exemple par dénaturation de celle-ci suivie d'une centrifugation ou d'une ultrafiltration. Le lactose peut être séparé des composants A, B, C, D et E par exemple par ultra- et/ou nano-filtration en cascade, ou bien le lactose peut être d'abord traité avec une lactase pour qu'il soit dégradé en glucose et galactose qui peuvent ensuite être séparés des composants A, B, C, D et E par ultra- et/ou nano-filtration.
L'enzyme (protéine) appropriée pour mettre en œuvre la réaction enzymatique ci-dessus est une α1-3/4-fucosidase ou une α1-3/4-transfucosidase. Ces enzymes sont capables de transférer un résidu fucosyle d'un donneur de fucosyle, dans lequel le résidu fucosyle est attaché par une liaison α1-3, à un accepteur. Plus précisément, si l'accepteur est un HMO, le résidu fucosyle est transféré à la position 4 d'un GlcNAc dans le HMO accepteur, ou bien si soit cette position n'est pas libre soit il n'y a pas de GlcNAc dans la structure du HMO accepteur, à la position 3 de Glc.
L'α1-3/4-(trans)fucosidase est une α1-3/4-L-fucosidase naturelle telle que classifiée conformément à EC 3.2.1.111 ou son mutant génétiquement modifié. Toutes les α1-3/4-L-fucosidases peuvent agir comme une transfucosidase dans une certaine mesure.
Une α1-3/4-(trans)fucosidase préférée convenant pour la mise en œuvre de la réaction enzymatique selon l'invention est une α1-3/4-(trans)fucosidase qui a une identité d'au moins 60 %, de préférence d'au moins 70 %, de manière encore préférée d'au moins 80 %, en particulier d'au moins 90 %, avec les positions d'acides aminés 56 à 345 de l'α1-3/4-fucosidase deBifidobacterium longum subsp . infantisATCC 15697 telle que présentée dans le brevet US 8361756 en tant que protéine ayant la SEQ ID NO : 18 (appelée SEQ ID NO : 1 dans la présente demande).
Dans la synthèse enzymatique de l'invention, l'hydrolyse des composants peut devenir significative en raison d'une augmentation des concentrations des composants produits de la réaction, dans laquelle les composants α3/4-fucosylés sont ensuite hydrolysés en les composants non α3/4-fucosylés, lactose, 2'-FL et LNFP-I et fucose libre. Ainsi, l'α1-3/4-transfucosidase de la présente invention a de préférence une activité hydrolytique limitée ou absente. L'activité hydrolytique limitée ou absente de l'α1-3/4-transfucosidase permet des durées de réaction plus longues que ce qui serait sinon possible.
Ainsi, une α1-3/4-transfucosidase encore préférée pour produire les mélanges de HMO de cette invention est une α1-3/4-transfucosidase dépourvue d'activité hydrolytique, ou au moins ayant une activité hydrolytique significativement réduite.
Une telle α1-3/4-transfucosidase peut être produite par altération de la séquence d'acides aminés au niveau d'une ou plusieurs positions d'acides aminés, de façon que la séquence d'acides aminés mutée ait pour résultat une activité de transfucosidase améliorée et/ou une activité hydrolytique réduite. Conformément à cette invention, l'α1-3/4-tranfucosidase
a. a été mutée au moins au niveau d'une ou plusieurs des positions d'acides aminés suivantes de la SEQ ID NO : 1 ; 134, 135, 168, 170, 174, 216, 221, 236, 237, 244, 245, 282 et 413, de préférence au niveau d'une ou plusieurs des positions d'acides aminés suivantes : 134, 135, 174, 216, 221, 282 et 413 ; et de ce fait
b. fournit un taux de conversion d'au moins 20 % et jusqu’à 70 %, tel qu'au moins 35 %, ou tel qu'au moins 40 %, ou tel qu'au moins 50 %, pour la réaction enzymatique de la présente invention.
De façon adéquate, les fucosidases mutantes utilisées dans l'invention sont des fucosidases non naturelles, c'est-à-dire qu'elles ne sont pas produites dans la nature ou ne sont pas présentes naturellement, mais sont produites en résultat d'une synthèse chimique, d'une manipulation génétique ou de procédés similaires en laboratoire, ayant pour résultat des fucosidases mutantes synthétiques.
De préférence, l'α1-3/4-transfucosidase mutée comprend ou est constitué du polypeptide de la SEQ ID NO : 1, et une mutation d'acide aminé au moins au niveau d'une ou plusieurs des positions d'acides aminés suivantes : 134, 135, 174, 216, 221 et 282.
De préférence, l'α1-3/4-transfucosidase de ce premier aspect comprend ou est constitué du polypeptide de la SEQ ID NO : 1, et une mutation d'acide aminé au moins au niveau de la position d'acide aminé 174, et au niveau d'une ou plusieurs des positions d'acides aminés suivantes : 134, 135, 170, 216, 221, 236, 237, 241, 244, 245 et 282, de préférence au niveau d'une ou plusieurs des positions d'acides aminés suivantes : 134, 135, 216, 221 et 282.
Egalement de préférence, l'α1-3/4-transfucosidase comprend ou est constitué du polypeptide de la SEQ ID NO : 1, et une mutation d'acide aminé au moins au niveau de la position d'acide aminé 135, et au niveau d'une ou plusieurs des positions d'acides aminés suivantes : 134, 170, 174, 216, 221, 236, 237, 241, 244, 245 et 282, de préférence au niveau d'une ou plusieurs des positions d'acides aminés suivantes : 134, 135, 216, 221 et 282.
Encore plus préférablement, l'α1-3/4-transfucosidase comprend ou est constitué du polypeptide de la SEQ ID NO : 1, et une mutation d'acide aminé au moins au niveau des positions d'acides aminés 135 et 174, et au niveau d'une ou plusieurs des positions d'acides aminés suivantes : 134, 170, 216, 221, 236, 237, 241 et 282, de préférence au niveau d'une ou plusieurs des positions d'acides aminés suivantes : 134, 216, 221 et 282.
Eventuellement, l'α1-3/4-transfucosidase comprend ou est constitué du polypeptide de la SEQ ID NO : 1, et une mutation d'acide aminé au moins au niveau des positions d'acides aminés 135 et/ou 174, et au niveau d'une ou plusieurs des positions d'acides aminés suivantes : 134, 170, 216, 221, 236, 237, 241 et 282, de préférence au niveau d'une ou plusieurs des positions d'acides aminés suivantes : 134, 216, 221 et 282, et il y a une autre mutation au niveau d'une ou plusieurs des positions d'acides aminés suivantes : 165, 168, 232, 237, 258, 260 et 274.
De préférence, l'α1-3/4-transfucosidase comprend, de manière encore préférée est constitué de, la séquence de la SEQ ID NO : 1 ayant des mutations :
- aux positions d'acides aminés 135 et/ou 174, et
- au moins à une position d'acide aminé choisie parmi 168, 237 et 413.
Dans cet aspect Trp (W) à la position 135 est de préférence remplacé par Ala, Asp, Asn, Glu, Gln, His, Phe, Leu, Lys, Val ou Tyr, de manière encore préférée Phe ou Tyr ; Ser (S) à la position 168 est de préférence remplacée par Glu (E) ; Ala (A) à la position 174 est de préférence remplacée par Arg, Asn, Cys, Glu, Ile, His, Leu, Lys, Met, Phe, Trp, Tyr ou Val, de manière encore préférée Asn, His ou Phe ; Glu (E) à la position 237 est de préférence remplacée par His (H) ; et Glu (E) à la position 413 est de préférence remplacée par Arg (R).
De manière encore préférée, l'α1-3/4-transfucosidase comprend, de manière encore plus préférée est constitué de, la séquence de la SEQ ID NO : 1, comme décrit ci-dessus, ayant des mutations :
- à la position d'acide aminé 174,
- à la position d'acide aminé 135 ou 168, et
- à la position d'acide aminé 413
- et éventuellement à la position d'acide aminé 165, 232, 258, 260 ou 274.
La combinaison ci-dessus de mutations confère à l'enzyme mutée non seulement une performance de synthèse de transfucosidase davantage améliorée, mais aussi une stabilité davantage amplifiée, en particulier une stabilité à la température, tout en maintenant une performance de synthèse de transfucosidase davantage améliorée. Les mutations en 135, 165, 174, 232, 258, 260 et 274 sont de préférence les suivantes :
- à la position 135, sous la forme W135F ou W135Y,
- à la position 165, sous la forme P165E,
- à la position 174, sous la forme A174F, A174H ou A174N,
- à la position 232, sous la forme R232A,
- à la position 258, sous la forme Q258R,
- à la position 260, sous la forme D260P,
- à la position 274, sous la forme N274A.
De préférence également, l'α1-3/4-transfucosidase mutée qui comprend ou est constitué du polypeptide de la SEQ ID NO : 1, et une mutation au niveau d'au moins la position d'acide aminé 174 ou 282, de préférence des deux positions d'acides aminés, offre une activité hydrolytique significativement ou complètement supprimée. De ce point de vue, Ala (A) à la position 174 est de préférence remplacée par Phe (F), Asn (N) ou His (H), et/ou Val (V) à la position 282 est de préférence remplacée par Arg (R), Glu (E), His (H) ou Lys (K). L'activité hydrolytique supprimée est avantageuse parce que l'enzyme mutée ne dégrade alors pas significativement le donneur et/ou le produit par hydrolyse. En résultat, la réaction de transfucosidase n'est plus contrôlée cinétiquement, et un rapport synthèse/hydrolyse bien meilleur (signifiant une meilleure performance de synthèse) peut être obtenu. Une mutation au niveau de l'une ou des deux, de préférence des deux, des positions d'acides aminés ci-dessus peut fournir une activité hydrolytique vis-à-vis des produits fucosylés réduite d'au moins 100 fois, de préférence d'au moins 1 000 fois, de manière encore préférée d'au moins 10 000 fois.
Par conséquent, l'α1-3/4-transfucosidase mutée a
  1. le polypeptide de la SEQ ID NO : 1 et une mutation au moins au niveau de la position d'acide aminé 174 ou 282, et
  2. une activité hydrolytique significativement ou complètement supprimée, en comparaison avec la protéine selon la SEQ ID NO : 1.
De plus, conformément à un certain mode de réalisation, l'α1-3/4-transfucosidase mutée comprend ou de préférence est constitué du polypeptide de la SEQ ID NO : 1 et une mutation au niveau de
- au moins la position d'acide aminé 174 ou 282, et
- au moins la position d'acide aminé 165, 168, 232, 237, 258, 260 ou 274.
La combinaison de mutations, telle que divulguée ci-dessus, confère non seulement une hydrolyse du produit fucosylé significativement réduite, de préférence pratiquement indétectable, mais aussi une stabilité, en particulier une stabilité à la température, améliorée.
Par conséquent, l'α1-3/4-transfucosidase mutée a
  1. le polypeptide de la SEQ ID NO : 1 avec une mutation au moins de l'acide aminé à la position 174 ou 282, et au moins au niveau de la position d'acide aminé 165, 168, 232, 237, 258, 260 ou 274, et
  2. une activité hydrolytique significativement ou complètement supprimée, et/ou
  3. une stabilité, en particulier une stabilité à la température, amplifiée,
en comparaison avec la protéine selon la SEQ ID NO : 1.
De préférence, l'α1-3/4-transfucosidase mutée comprend ou de préférence consiste en la séquence d'acides aminés de la SEQ ID NO : 1, une mutation d'au moins l'acide aminé à la position 174 ou 282, de manière encore préférée Ala (A) à la position 174 est de préférence remplacé par Phe (F), Asn (N) ou His (H) et/ou Val (V) à la position 282 est de préférence remplacé par Arg (R), Glu (E), His (H) ou Lys (K).
Une α1-3/4-transfucosidase modifiée particulièrement préférée comprend ou consiste en la séquence d'acides aminés de la SEQ ID NO : 1 avec les mutations suivantes : W135F-A174N-N274A-E413R, ladite numérotation des acides aminés étant conforme à la SEQ ID NO : 1.
Dans la mise en œuvre du procédé de cette invention, les concentrations relatives particulières du composant A donneur, des composants B et C accepteurs, de l'α1-3/4-transfucosidase, du solvant aqueux et du tampon d'incubation ne sont pas critiques. De ce point de vue, le procédé peut être adéquatement mis en œuvre à la température ambiante (par exemple à 15-50, de préférence 20-37°C) à un pH de 4 à 7, de préférence 5 à 6, pendant 15 minutes à 24 heures. La réaction est typiquement effectuée de façon qu'un équilibre soit atteint.
Dans la réaction enzymatique, le composant A est fourni en tant que donneur de fucosyle et les composants B et C sont fournis en tant qu'accepteurs de fucosyle. Au cours de la réaction de l'α1-3/4-transfucosidase, un résidu fucosyle est transféré du donneur aux deux accepteurs, avec par conséquent comme résultat la génération d'un composant D, d'un composant E, et de lactose. Toutefois, le composant E nouvellement généré peut aussi servir de donneur de fucosyle, ce qui a pour résultat une réaction enzymatique d'α1-3/4-transfucosidase entre le composant E et le composant B pour générer le composant D et le composant C, ou entre le composant E et le lactose pour générer le composant A et le composant C, dans des réactions de sous-équilibre ultérieures.
De manière encore préférée, l'α1-3/4-transfucosidase, avantageusement le mutant W135F-A174N-N274A-E413R (la numérotation des acides aminés étant conforme à la SEQ ID NO : 1) est utilisée à raison d'environ 0,09 à 0,11 % massique par rapport au poids global initial des composants A, B et C. La quantité d'enzyme n'affecte pas la proportion finale des HMO dans la composition obtenue, et n'a un effet que lorsque l'équilibre est atteint (une plus forte concentration d'enzyme conduit à un temps plus court pour atteindre l'équilibre).
En ce qui concerne la préparation du mélange constitué ou essentiellement constitué des composants A, B, C, D, E, et éventuellement du lactose, de préférence des mélanges selon l'un quelconque des modes de réalisation i) à iv) exposés ci-dessous, la synthèse enzymatique selon l'invention est effectuée en présence d'un tampon approprié, mais de préférence dans des conditions essentiellement dépourvues de tampon.
A la lumière de l'invention, une solution tamponnée est une solution contenant un agent tampon, caractérisée en ce que le pH de la solution résiste aux changements de la concentration d'ions hydrogène libres en résultat de facteurs internes et/ou environnementaux. En outre, une solution tamponnée maintient essentiellement le pH pour un système réactionnel à l'intérieur d'une plage de pH spécifique, en fonction de l'agent tampon utilisé. De plus, il est bien connu que les solutions tamponnées pour réactions enzymatiques apportent des cofacteurs essentiels aux réactions enzymatiques, par exemple des sels critiques, et également résistants aux changements de la concentration d'ions hydrogène, et des conditions qui stabilisent les protéines en général. En conséquence, lors de la mise en œuvre d'une réaction enzymatique, l'homme du métier s'attend à ce qu'il soit nécessaire d'introduire dans le milieu réactionnel des composants et/ou agents tampons qui sont normalement considérés comme essentiels pour que l'enzyme fonctionne convenablement.
Cependant, avant un traitement ultérieur des produits réactionnels, ces composants et/ou agents additionnels, et/ou leurs produits résiduels, doivent être éliminés de la réaction, ce qui peut être à la fois long et fastidieux, en ajoutant des coûts non souhaités au procédé de production.
On a trouvé de façon surprenante que la synthèse enzymatique selon la présente invention peut être réalisée dans des conditions essentiellement dépourvues de tampon, ce qui élimine ainsi la nécessité de fournir et d'éliminer les composants et/ou agents tampons.
Selon un aspect de la présente invention, la synthèse enzymatique décrite ici est effectuée dans de l'eau purifiée, dans laquelle l'étape de purification peut comprendre un ou plusieurs traitements de purification choisis dans le groupe constitué par : une osmose inverse, une filtration, une ultrafiltration, une sédimentation, une chloration, une addition d'iode, une électrodialyse, une ébullition, un dessalement, et une floculation.
Selon un aspect actuellement préféré de l'invention, la synthèse enzymatique est effectuée dans de l'eau ayant une conductivité, avant utilisation dans la synthèse enzymatique, inférieure à 10 µS/cm, telle qu'inférieure à 5 µS/cm, telle qu'inférieure à 1 µS/cm, telle qu'inférieure à 0,1 µS/cm, et/ou une teneur en silice inférieure à 0,05 mg/l, telle qu'inférieure à 0,04 mg/l, telle qu'inférieure à 0,02 mg/l ou telle qu'inférieure à 0,01 mg/l.
Dans une synthèse enzymatique selon la présente invention, les conditions essentiellement dépourvues de tampon sont des conditions dans lesquelles aucun agent tampon additionnel n'est ajouté à l'eau purifiée.
Dans le présent contexte, l'expression "essentiellement dépourvue de tampon" inclut aussi une solution dans laquelle des sels inorganiques sont ajoutés pour purifier l'eau ayant des plages de pureté et de conductivité spécifiées antérieurement, pour agir comme des agents stabilisants pour l'enzyme, dans laquelle les sels ne contiennent pas de capacité de tamponnage. Des exemples de sels comprennent les sels courants tels que, mais sans s'y limiter, le chlorure de sodium (NaCl), le chlorure de calcium (CaCl2), le chlorure de magnésium (MgCl2), le chlorure de potassium (KCl), et le sulfate de sodium (Na2SO4).
Selon un aspect d'une synthèse enzymatique, conformément à la présente invention, les conditions essentiellement dépourvues de tampon peuvent comprendre une quantité de sel située dans la plage allant de 1 micromolaire à 1 molaire, dans une plage préférée telle que 100 micromolaires à 500 micromolaires, ou dans une plage davantage préférée de 1 millimolaire à 300 millimolaire. Selon un autre aspect, la condition essentiellement dépourvue de tampon se réfère à la présence de traces d'ions dans l'eau, à une concentration ayant pour résultat une conductivité inférieure à 5 µS/cm.
Selon un autre aspect de l'invention, l'expression "essentiellement dépourvu de tampon" inclut aussi l'utilisation de l'eau du robinet.
La présence d'ions dans une solution, avec ou sans addition de sels à la solution, peut affecter le pH de la solution, même à des concentrations en traces, ayant pour résultat une conductivité supérieure à 5 µS/cm, toujours sans addition de capacités de tamponnage aux conditions essentiellement dépourvues de tampon. En outre, l'addition de réactifs à une solution dans une condition essentiellement dépourvue de tampon peut aussi changer le pH de la solution ainsi que la conductivité. Par conséquent, dans le présent contexte, les conditions après l'addition d'ions et/ou de réactifs à la solution réactionnelle sont toujours considérées comme étant essentiellement dépourvues de tampon.
Selon un aspect préféré d'une synthèse enzymatique, conformément à la présente invention, la synthèse est effectuée dans une solution pratiquement sans tampon dans laquelle le pH est situé dans la plage allant de 4 à 7, de préférence à un pH de 5 à 6.
Avant d'utiliser un mélange de HMO selon l'invention en tant que traitement ou autre, il est nécessaire d'éliminer les composants réactionnels non souhaités. Les produits non souhaités du produit final sont par exemple les enzymes, telles que l'α1-3/4-transfucosidase, le lactose, des produits en traces additionnels et/ou des produits non souhaités similaires.
En outre, une synthèse enzymatique selon la présente invention peut comprendre une ou plusieurs étapes pour désactiver et séparer l'α1-3/4-transfucosidase du reste du mélange réactionnel.
La synthèse enzymatique est effectuée dans un récipient réactionnel et, dans certains cas, il peut être avantageux de transférer la solution depuis le récipient réactionnel, qui peut être une cuve de traitement ou un récipient plastique ou n'importe quel autre récipient approprié pour effectuer la synthèse, dans un deuxième récipient, avec par exemple une régulation de la pression, une régulation de la température et/ou une régulation de l'environnement liquide et/ou gazeux. Ainsi, une synthèse enzymatique peut être effectuée d'une manière dans laquelle le récipient réactionnel et le récipient d'inactivation/désactivation sont les mêmes, ou peut être effectuée d'une manière dans laquelle le récipient réactionnel et le récipient d'inactivation/désactivation ne sont pas les mêmes.
L'étape de désactivation peut impliquer un chauffage à une température située dans la plage allant de 60°C à 100°C pendant un intervalle de temps de 1 minute à 180 minutes, tel que 5 minutes à 150 minutes, 10 minutes à 120 minutes, 15 minutes à 90 minutes, et 30 minutes à 60 minutes. Selon un aspect préféré, l'étape de désactivation implique un chauffage du mélange réactionnel à une température située dans la plage allant de 60°C à 100°C pendant un temps d'au moins 1, 5, 10, 30 ou 60 minutes.
Après la ou les étapes pour désactiver l'α1-3/4-transfucosidase dans le mélange réactionnel restant, une synthèse enzymatique de la présente invention comprend en outre une ou plusieurs étapes pour éliminer l'α1-3/4-transfucosidase désactivée du mélange de HMO synthétisé, ce qui donne ainsi un mélange qui constitué ou essentiellement constitué des composants A, B, C, D, E et du lactose, de préférence les mélanges selon l'un quelconque des modes de réalisation i) et ii) exposés ci-dessous, y compris leurs modes de réalisation préférés et davantage préférés.
En général, l'α1-3/4-transfucosidase peut être éliminée du mélange de HMO synthétisé par des procédés de séparation conventionnels, tels qu'une filtration (nano-, ultra- ou micro-filtration), une élimination par centrifugation ou ultracentrifugation, un traitement du mélange réactionnel avec du charbon activé en poudre selon un mode discontinu et/ou un mode sur colonne et/ou des procédés chromatographiques, tels qu'un échange d'ions, une chromatographie d'affinité, une chromatographie d'exclusion diffusion, une chromatographie à polarité de phases directe ou inversée, de préférence après que l'enzyme utilisée pour la synthèse a été dénaturée ou désactivée. Des procédés de séparation peuvent être combinés dans une séparation à étapes multiples.
Selon un aspect de l'invention, le mélange réactionnel, contenant une α1-3/4-transfucosidase, est traité avec du charbon activé, par exemple le mélange réactionnel passe dans une colonne garnie de charbon activé au moyen d'un écoulement péristaltique, d'un écoulement sous haute pression ou d'un écoulement par gravité.
Selon un autre aspect de l'invention, lors de l'utilisation d'une ultrafiltration ou d'une microfiltration pour la séparation d'une α1-3/4-transfucosidase d'avec le mélange réactionnel, la séparation peut impliquer une étape antérieure dans laquelle l'α1-3/4-transfucosidase (inactivée) a formé des particules, telles que des agrégats, des cristaux et/ou des précipités, ce qui permet une séparation par filtration plus commode. La taille des pores de la membrane d'ultra- ou de micro-filtration est choisie de façon que les composants glucides puissent traverser la membrane tout en assurant la rétention de l'α1-3/4-transfucosidase (inactivée).
Selon un autre aspect de l'invention, lors de l'utilisation d'une ultracentrifugation ou d'une centrifugation pour la séparation de l'α1-3/4-transfucosidase, la séparation peut impliquer une étape antérieure dans laquelle l'α1-3/4-transfucosidase (inactivée) a formé des particules, telles que des agrégats, des cristaux et/ou des précipités, ce qui permet une séparation par (ultra)centrifugation plus commode.
Les étapes de purification exposées ci-dessus ont pour résultat une solution aqueuse purifiée à partir de laquelle un mélange solide qui consiste ou consiste essentiellement en les composants A, B, C, D, E et du lactose, de préférence les mélanges selon l'un quelconque des modes de réalisation i) et ii) exposés ci-dessous, y compris leurs modes de réalisation préférés et davantage préférés, peuvent être obtenus après l'élimination de l'eau, par exemple par évaporation, séchage par pulvérisation, ou lyophilisation.
Pour l'obtention du mélange qui consiste ou consiste essentiellement en les composants A, B, C, D et E, de préférence les mélanges selon l'un quelconque des modes de réalisation iii) et iv) exposés ci-dessous, y compris leurs modes de réalisation préférés et davantage préférés, le lactose devrait être séparé des composants A, B, C, D et E. Un procédé approprié pour cela est par exemple une filtration sur gel, ou une filtration sur membrane utilisant une membrane qui assure la rétention des composants A, B, C, D et E et permet au lactose de passer. Un autre procédé est qu'avant ou après l'élimination de l'α1-3/4-transfucosidase du milieu réactionnel comme exposé ci-dessus, mais avant l'élimination de l'eau, une β-galactosidase est ajoutée pour dégrader le lactose en glucose et galactose, puis ces monosaccharides sont séparés au moyen d'une membrane qui assure la rétention des composants A, B, C, D et E er permet au glucose et au galactose de passer. L'élimination de la β-galactosidase peut être effectuée avant ou après cette filtration sur membrane, par utilisation de l'une des étapes exposées pour l'élimination de l'α1-3/4-transfucosidase.
Modes de réalisation du premier aspect de l'invention
Concernant le mélange qui consiste ou consiste essentiellement en les composants A, B, C, D, E et F, il est préférable que, par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble,
i) - le composant D représente 8 à 13 % molaire ou 14 à 22 % massique, et/ou
- le composant E représente 9,5 à 17,5 % molaire ou 11,5 à 19 % massique, et/ou
- les composants D+E représentent 17,5 à 30,5 % molaire ou 25,5 à 41 % massique,
ou
ii) - le composant D représente 2 à 22 % molaire ou 5 à 34 % massique, ou
- le composant E représente 7 à 24 % molaire ou 6 à 29 % massique,
à condition que les composants D+E représentent 23,5 à 33 % molaire ou 30,5 à 43 % massique.
Le mélange selon le mode de réalisation i) est typiquement susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est situé dans la plage allant d'environ 3/1 à 1/3, et les composants accepteurs sont à peu près équimolaires. Le mélange selon le mode de réalisation ii) est typiquement susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est à peu près équimolaire, et, dans l'accepteur, le rapport molaire du composant B au composant C est situé dans la plage allant d'environ 3,5/1 à 1/3,9.
Concernant le mode de réalisation i) exposé ci-dessus, il est préférable que les composants A+B+C représentent 41,5 à 67 % molaire ou 41 à 66 % massique par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble, en particulier quand il y a davantage de composant B présent que de composant C.
Dans un mode de réalisation i) davantage préféré,
- le composant A représente 52 à 58 % molaire ou 47 à 52 % massique,
- le composant B représente 4 à 6 % molaire ou 6,5 à 8,5 % massique,
- le composant C représente 1 à 2 % molaire ou 1 à 2 % massique,
- le composant D représente 8,5 à 10 % molaire ou 15,5 à 17,5 % massique,
- le composant E représente 10 à 11,5 % molaire ou 11,5 à 13 % massique, et
- le composant F représente 17,5 à 20,5 % molaire ou 12 à 13,5 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est d'environ 3/1, et les composants accepteurs sont à peu près équimolaires.
Également, dans un mode de réalisation i) davantage préféré,
- le composant A représente 42 à 46 % molaire ou 36 à 40 % massique,
- le composant B représente 7 à 9 % molaire ou 11,5 à 13,5 % massique,
- le composant C représente 3 à 4 % molaire ou 2,5 à 3,5 % massique,
- le composant D représente 9 à 11 % molaire ou 16,5 à 19 % massique,
- le composant E représente 11 à 13,5 % molaire ou 13 à 16 % massique, et
- le composant F représente 20,5 à 23,5 % molaire ou 13 à 16 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est d'environ 2/1, et les composants accepteurs sont à peu près équimolaires.
Également, dans un mode de réalisation i) davantage préféré,
- le composant A représente 7,5 à 9,5 % molaire ou 5 à 7,5 % massique,
- le composant B représente 21 à 24 % molaire ou 30 à 33 % massique,
- le composant C représente 16 à 19 % molaire ou 12,5 à 15,5 % massique,
- le composant D représente 10 à 12 % molaire ou 16,5 à 19,5 % massique,
- le composant E représente 14 à 16,5 % molaire ou 14,5 à 17 % massique, et
- le composant F représente 23 à 27 % molaire ou 13 à 16 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est d'environ 1/2, et les composants accepteurs sont à peu près équimolaires.
Également, dans un mode de réalisation i) davantage préféré,
- le composant A représente 3 à 5,5 % molaire ou 2,5 à 4 % massique,
- le composant B représente 26 à 30 % molaire ou 36 à 40 % massique,
- le composant C représente 22,5 à 25,5 % molaire ou 17 à 20 % massique,
- le composant D représente 8,5 à 11 % molaire ou 14 à 16,5 % massique,
- le composant E représente 11 à 14 % molaire ou 11 à 14 % massique, et
- le composant F représente 20 à 23 % molaire ou 11 à 13,5 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est d'environ 1/3, et les composants accepteurs sont à peu près équimolaires.
Dans un mode de réalisation i) particulièrement davantage préféré,
- le composant A représente 19 à 24,5 % molaire ou 15 à 20 % massique,
- le composant B représente 12,5 à 15,5 % molaire ou 19 à 22 % massique,
- le composant C représente 7 à 10 % molaire ou 6 à 8 % massique,
- le composant D représente 11 à 14 % molaire ou 18 à 22 % massique,
- le composant E représente 14,5 à 17,5 % molaire ou 16 à 19 % massique, et
- le composant F représente 25 à 30 % molaire ou 15 à 19 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est d'environ 1/1, et les composants accepteurs sont à peu près équimolaires.
Concernant le mode de réalisation ii) exposé ci-dessus, il est préférable que les composants A+B+C représentent 40,5 à 54,5 % molaire ou 41 à 54 % massique par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble, en particulier quand le composant A représente 21 à 27 % molaire .
Dans un mode de réalisation ii) davantage préféré,
- le composant A représente 21,5 à 25,5 %en moles ou 16 à 19,5 % massique,
- le composant B représente 18 à 22 % molaire ou 24,5 à 28,5 % massique,
- le composant C représente 2 à 4 % molaire ou 1,5 à 3,5 % massique,
- le composant D représente 18 à 22 % molaire ou 30 à 34 % massique,
- le composant E représente 6,5 à 9,5 % molaire ou 6 à 9 % massique, et
- le composant F représente 23 à 27 % molaire ou 13 à 15,5 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est à peu près équimolaire et, dans l'accepteur, le rapport molaire du composant B au composant C est d'environ 3,5/1.
Également, dans un mode de réalisation ii) davantage préféré,
- le composant A représente 21 à 24,5 % molaire ou 16,5 à 20 % massique,
- le composant B représente 15 à 18 % molaire ou 21 à 25 % massique,
- le composant C représente 5,5 à 7,5 % molaire ou 4 à 6 % massique,
- le composant D représente 13 à 16,5 % molaire ou 22 à 26 % massique,
- le composant E représente 12 à 15 % molaire ou 12,5 à 15,5 % massique, et
- le composant F représente 24 à 28 % molaire ou 14 à 17 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est à peu près équimolaire et, dans l'accepteur, le rapport molaire du composant B au composant C est d'environ 1,4/1.
Également, dans un mode de réalisation ii) davantage préféré,
- le composant A représente 21 à 24,5 % molaire ou 17 à 20,5 % massique,
- le composant B représente 10,5 à 13,5 % molaire ou 16,5 à 20 % massique,
- le composant C représente 9 à 12 % molaire ou 8 à 10 % massique,
- le composant D représente 8 à 10 % molaire ou 14 à 17 % massique,
- le composant E représente 17,5 à 20,5 % molaire ou 19,5 à 23 % massique, et
- le composant F représente 24,5 à 28,5 % molaire ou 14,5 à 17,5 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est à peu près équimolaire et, dans l'accepteur, le rapport molaire du composant B au composant C est d'environ 1/1,5.
Également, dans un mode de réalisation ii) davantage préféré,
- le composant A représente 23 à 27 % molaire ou 21 à 25 % massique,
- le composant B représente 6 à 8 % molaire ou 10 à 12,5 % massique,
- le composant C représente 15 à 19,5 % molaire ou 14 à 16,5 % massique,
- le composant D représente 2,5 à 4,5 % molaire ou 5,5 à 7,5 % massique,
- le composant E représente 21 à 24,5 % molaire ou 25 à 28,5 % massique, et
- le composant F représente 23,5 à 27,5 % molaire ou 16 à 19 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est à peu près équimolaire et, dans l'accepteur, le rapport molaire du composant B au composant C est d'environ 1/3,9.
Dans un mode de réalisation ii) particulièrement davantage préféré,
- le composant A représente 19 à 24,5 % molaire ou 15 à 20 % massique,
- le composant B représente 12,5 à 15,5 % molaire ou 19 à 22 % massique,
- le composant C représente 7 à 10 % molaire ou 6 à 8 % massique,
- le composant D représente 11 à 14 % molaire ou 18 à 22 % massique,
- le composant E représente 14,5 à 17,5 % molaire ou 16 à 19 % massique, et
- le composant F représente 25 à 30 % molaire ou 15 à 19 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand tant le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) que le rapport molaire du composant B au composant C sont à peu près équimolaires.
Concernant le mélange qui consiste ou consiste essentiellement en les composants A, B, C, D et E, il est préférable que, par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble,
iii) - le composant D représente 10 à 17,5 % molaire ou 16 à 25,5 % massique, et/ou
- le composant E représente 12 à 23,5 % molaire ou 13 à 22 % massique, et/ou
- les composants D+E représentent 22 à 41 % molaire ou 29 à 47,5 % massique,
ou
iv) - le composant D représente 3,5 à 29,5 % molaire ou 6 à 39 % massique, ou
- le composant E représente 9 à 32 % molaire ou 7,5 à 34,5 % massique,
à condition que les composants D+E représentent 31,5 à 41 % molaire ou 36,5 à 49 % massique.
Le mélange selon le mode de réalisation iii) est typiquement susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est situé dans la plage allant d'environ 3/1 à 1/3, les composants accepteurs sont à peu près équimolaires, et le lactose est pratiquement éliminé de la composition ainsi obtenue. Le mélange selon le mode de réalisation iv) est typiquement susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est à peu près équimolaire, dans l'accepteur, le rapport molaire du composant B au composant C est situé dans la plage allant d'environ 3,5/1 à 1/3,9, et le lactose est pratiquement éliminé de la composition ainsi obtenue.
Concernant le mode de réalisation iii) exposé ci-dessus, il est préférable qu'il y ait davantage de composant B présent dans le mélange que de composant C.
Dans un mode de réalisation iii) davantage préféré,
- le composant A représente 65 à 71 % molaire ou 53,5 à 59,5 % massique,
- le composant B représente 5 à 7 % molaire ou 7,5 à 9,5 % massique,
- le composant C représente 1,5 à 2,5 % molaire ou 1 à 2 % massique,
- le composant D représente 10 à 12,5 % molaire ou 18 à 20,5 % massique, et
- le composant E représente 12 à 14,5 % molaire ou 13 à 15,5 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est d'environ 3/1, les composants accepteurs sont à peu près équimolaires, et le lactose est pratiquement éliminé de la composition ainsi obtenue.
Également, dans un mode de réalisation iii) davantage préféré,
- le composant A représente 54 à 58,5 % molaire ou 42 à 46,5 % massique,
- le composant B représente 9 à 11,5 % molaire ou 13 à 15,5 % massique,
- le composant C représente 4 à 5 % molaire ou 3 à 4 % massique,
- le composant D représente 11,5 à 14 % molaire ou 19 à 23 % massique,
- le composant E représente 15 à 18 % molaire ou 15 à 18,5 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est d'environ 2/1, les composants accepteurs sont à peu près équimolaires, et le lactose est pratiquement éliminé de la composition ainsi obtenue.
Également, dans un mode de réalisation iii) davantage préféré,
- le composant A représente 10 à 12,5 % molaire ou 6,5 à 9 % massique,
- le composant B représente 28,5 à 32 % molaire ou 34,5 à 38,5 % massique,
- le composant C représente 22 à 25 % molaire ou 15 à 17,5 % massique,
- le composant D représente 13,5 à 16 % molaire ou 19,5 à 22,5 % massique,
- le composant E représente 19 à 21,5 % molaire ou 17 à 19,5 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est d'environ 1/2, les composants accepteurs sont à peu près équimolaires, et le lactose est pratiquement éliminé de la composition ainsi obtenue.
Également, dans un mode de réalisation iii) davantage préféré,
- le composant A représente 4,5 à 6,5 % molaire ou 2,5 à 4,5 % massique,
- le composant B représente 34 à 38 % molaire ou 41,5 à 45,5 % massique,
- le composant C représente 29 à 32,5 % molaire ou 19 à 22,5 % massique,
- le composant D représente 11 à 13,5 % molaire ou 16 à 19 % massique,
- le composant E représente 14,5 à 17,5 % molaire ou 13 à 16 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est d'environ 1/3, les composants accepteurs sont à peu près équimolaires, et le lactose est pratiquement éliminé de la composition ainsi obtenue.
Dans un mode de réalisation iii) particulièrement davantage préféré,
- le composant A représente 29 à 33 % molaire ou 20 à 24,5 % massique,
- le composant B représente 18 à 21,5 % molaire ou 23 à 25,5 % massique,
- le composant C représente 10 à 12,5 % molaire ou 7,5 à 9,5 % massique,
- le composant D représente 15 à 17,5 % molaire ou 22 à 22,5 % massique,
- le composant E représente 20,5 à 23,5 % molaire ou 19,5 à 22 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est d'environ 1/1, les composants accepteurs sont à peu près équimolaires, et le lactose est pratiquement éliminé de la composition ainsi obtenue.
Concernant le mode de réalisation iv) exposé ci-dessus, il est préférable que les composants A+B+C représentent 57 à 70 % molaire ou 51 à 64,5 % massique par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble, en particulier que le composant A représente 29 à 35,5 % molaire .
Dans un mode de réalisation iv) davantage préféré,
- le composant A représente 29,5 à 33,5 % molaire ou 19 à 22,5 % massique,
- le composant B représente 25 à 28,5 % molaire ou 29 à 33 % massique,
- le composant C représente 3 à 5 % molaire ou 2 à 3,5 % massique,
- le composant D représente 26 à 29,5 % molaire ou 35 à 39 % massique,
- le composant E représente 9 à 11,5 % molaire ou 7,5 à 10 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est à peu près équimolaire, dans l'accepteur le rapport molaire du composant B au composant C est d'environ 3,5/1, et le lactose est pratiquement éliminé de la composition ainsi obtenue.
Également, dans un mode de réalisation iv) davantage préféré,
- le composant A représente 29 à 32,5 % molaire ou 20,5 à 23 % massique,
- le composant B représente 21 à 24,5 % molaire ou 26 à 29,5 % massique,
- le composant C représente 7,5 à 10 % molaire ou 5 à 7 % massique,
- le composant D représente 18 à 21,5 % molaire ou 27 à 29,5 % massique,
- le composant E représente 17 à 19,5 % molaire ou 15,5 à 18 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est à peu près équimolaire, dans l'accepteur le rapport molaire du composant B au composant C est d'environ 1,4/1, et le lactose est pratiquement éliminé de la composition ainsi obtenue.
Également, dans un mode de réalisation iv) davantage préféré,
- le composant A représente 29 à 33 % molaire ou 22 à 24,5 % massique,
- le composant B représente 15 à 18 % molaire ou 20,5 à 23 % massique,
- le composant C représente 13 à 15,5 % molaire ou 9,5 à 12 % massique,
- le composant D représente 11 à 13,5 % molaire ou 17 à 20 % massique,
- le composant E représente 24,5 à 27,5 % molaire ou 24 à 27 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est à peu près équimolaire, dans l'accepteur le rapport molaire du composant B au composant C est d'environ 1/1,5, et le lactose est pratiquement éliminé de la composition ainsi obtenue.
Également, dans un mode de réalisation iv) davantage préféré,
- le composant A représente 31,5 à 35,5 % molaire ou 26 à 29,5 % massique,
- le composant B représente 8,5 à 10,5 % molaire ou 12,5 à 15 % massique,
- le composant C représente 21 à 24 % molaire ou 17 à 20 % massique,
- le composant D représente 3,5 à 5,5 % molaire ou 6 à 9,5 % massique,
- le composant E représente 28 à 32 % molaire ou 30,5 à 34,5 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) est à peu près équimolaire, dans l'accepteur le rapport molaire du composant B au composant C est d'environ 1/3,9, et le lactose est pratiquement éliminé de la composition ainsi obtenue.
Dans un mode de réalisation iv) particulièrement davantage préféré,
- le composant A représente 29 à 33 % molaire ou 21 à 24,5 % massique,
- le composant B représente 18 à 21,5 % molaire ou 23 à 25,5 % massique,
- le composant C représente 10 à 12,5 % molaire ou 7,5 à 9,5 % massique,
- le composant D représente 15 à 17,5 % molaire ou 23 à 25,5 % massique,
- le composant E représente 20,5 à 23,5 % molaire ou 19,5 à 22 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble.
Ce mélange est susceptible d’être obtenu quand tant le rapport molaire du donneur (composant A) à l'accepteur (composants B et C) que le rapport molaire du composant B au composant C sont à peu près équimolaires, et le lactose est pratiquement éliminé de la composition ainsi obtenue.
Composition pharmaceutique, cosmétique et/ou nutritionnelle
Un mélange selon la présente invention constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2'-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose peut être formulé comme une composition pharmaceutique, cosmétique et/ou nutritionnelle qui peut contenir un véhicule acceptable des points de vue pharmaceutique, cosmétique et/ou nutritionnel tel qu’une solution saline tamponnée au phosphate, une solution saline non tamponnée, des mélanges d’éthanol dans l’eau, de l’eau, et des émulsions telles qu’une émulsion huile/eau ou eau/huile, ainsi que divers agents mouillants et/ou excipients. La composition pharmaceutique, cosmétique et/ou nutritionnelle peut aussi contenir d’autres matériaux ne produisant pas de réaction adverse, allergique ou autrement indésirable lors de l’administration à un patient.
Les véhicules et autres matériaux compris dans la composition pharmaceutique, cosmétique et/ou nutritionnelle peuvent inclure un ou plusieurs des suivants : des solvants, des dispersants, des enrobages, des agents favorisant l’absorption, des agents de libération contrôlée, et un ou plusieurs excipients inertes, tels que des amidons, des polyols, des agents de granulation, des celluloses microcristallines, des diluants, des lubrifiants, des liants, et des agents délitants. Si on le souhaite, les formes posologiques en comprimés des mélanges anti-infectieux peuvent être enrobées par des techniques aqueuses ou non aqueuses connues de l’homme du métier.
Une composition pharmaceutique, cosmétique et/ou nutritionnelle selon la présente invention peut être administrée par voie orale, buccale, sublinguale, topique et/ou rectale. Elle peut être formulée comme un comprimé, une capsule, un suppositoire, un comprimé effervescent, une boulette, une tablette, une pastille, un gel, une pâte, une solution, une suspension, une émulsion, un sirop, un bolus, un électuaire, une bouillie, dans un liquide aqueux ou non aqueux, une poudre, ou des granules contenant une concentration prédéterminée du mélange de HMO.
Également, une composition pharmaceutique, cosmétique et/ou nutritionnelle selon la présente invention peut contenir des liants, des lubrifiants, des diluants inertes, des agents aromatisants, et des humectants. Un comprimé, une capsule, un suppositoire ou une boulette contenant la composition pharmaceutique, cosmétique et/ou nutritionnelle de la présente invention peut éventuellement être enrobé ou formulé de façon à permettre une libération prolongée, retardée ou contrôlée du mélange anti-infectieux de HMO.
Le mélange de HMO selon l’invention peut être complémenté d’agents pharmaceutiques additionnels, de principes pharmaceutiques actifs ou d’agents ayant un effet sur les conditions indésirables pour la santé du patient auquel la composition est administrée.
Dans un mode de réalisation, la composition peut être sous la forme d’une composition nutritionnelle. Par exemple, la composition nutritionnelle peut être une composition alimentaire, une solution de réhydratation, un aliment médical ou un aliment à but médical particulier, un complément nutritionnel, et analogue. La composition nutritionnelle peut contenir des sources de protéines, lipides et/ou glucides digestibles, et peut être sous forme pulvérulente ou liquide. La composition peut être conçue pour être la seule source de nutrition, ou en tant que complément nutritionnel.
Des sources de protéines appropriées comprennent les protéines de lait, les protéines de soja, les protéines de riz, les protéines de pois et les protéines d’avoine, ou leurs mélanges. Les protéines de lait peuvent être sous la forme de concentrés de protéines de lait, d’isolats de protéines de lait, de protéines de lactosérum ou de caséine, ou de mélanges des deux. Les protéines peuvent être des protéines entières ou des protéines hydrolysées, soit partiellement hydrolysées soit largement hydrolysées. Les protéines hydrolysées offrent l’avantage d’une digestion plus facile, ce qui peut être important pour les humains dont les voies gastro-intestinales sont enflammées ou compromises. Les protéines peuvent aussi être apportées sous la forme d’acides aminés libres. Les protéines peuvent représenter d’environ 5 % à environ 30% de l’énergie de la composition nutritionnelle, normalement de 10 % à 20 %. Dans l’idéal, la source de protéines ne contient pas de quantités excessives de lactose.
La source de protéines peut être une source de glutamine, de thréonine, de cystéine, de sérine, de proline, ou d’une combinaison de ces acides aminés. La source de glutamine peut être une glutamine dipeptidique et/ou une protéine enrichie en glutamine. La glutamine peut être incorporée en raison de l’utilisation de la glutamine par les entérocytes en tant que source d’énergie. La thréonine, la sérine et la proline sont des acides aminés importants pour la production de mucine. La mucine gaine les voies gastro-intestinales et peut améliorer la fonction de barrière intestinale et la cicatrisation de la muqueuse. La cystéine est un précurseur majeur de glutathion, qui est la clé des défenses antioxydantes du corps.
Des glucides digestibles appropriés comprennent la maltodextrine, l’amidon hydrolysé ou modifié ou l’amidon de maïs, les polymères de glucose, le sirop de maïs, l’extrait sec de sirop de maïs, le sirop de maïs à forte teneur en fructose, les glucides dérivés du riz, les glucides dérivés du pois, les glucides dérivés de la pomme de terre, le tapioca, le saccharose, le glucose, le fructose, le saccharose, le miel, les alcools de sucre (par exemple maltitol, érythritol, sorbitol), ou leurs mélanges. De préférence, la composition a une teneur réduite en ou est exempte de lactose ou d’autres glucides FODMAP. En général, les glucides digestibles apportent d’environ 35 % à environ 55 % de l’énergie de la composition nutritionnelle. Un glucide digestible approprié est une maltodextrine à faible équivalent de dextrose (DE).
Les lipides appropriés comprennent les triglycérides à chaîne moyenne (MCT) et les triglycérides à longue chaîne (LCT). De préférence, le lipide est un mélange de MCT et LCT. Par exemple, les MCT peuvent représenter d’environ 30 % à environ 70 % en poids des lipides, plus spécifiquement d’environ 50 % à environ 60 % en poids. Les MCT offrent l’avantage d’une digestion plus facile, ce qui peut être important pour les humains dont les voies gastro-intestinales sont enflammées ou compromises. En général, les lipides apportent d’environ 35 % à environ 50 % de l’énergie de la composition nutritionnelle. Les lipides peuvent contenir des acides gras essentiels (acides gras oméga-3 et oméga-6). De préférence, ces acides gras polyinsaturés apportent moins d’environ 30 % de l’énergie totale de la source de lipides.
Les sources appropriées de triglycérides à longue chaîne sont l’huile de colza, l’huile de tournesol, l’huile de palme, l’huile de soja, les matières grasses du lait, l’huile de maïs, les huiles oléfiniques supérieures, et la lécithine de soja. Les huiles de coco fractionnées constituent une source appropriée de triglycérides à chaîne moyenne. Le profil lipidique de la composition nutritionnelle est de préférence conçu pour avoir un rapport des acides gras polyinsaturés oméga-6 (n-6) à oméga-3 (n-3) d’environ 4/1 à environ 10/1. Par exemple, le rapport des acides gras n-6 à n-3 peut être d’environ 6/1 à environ 9/1.
La composition nutritionnelle peut aussi contenir des vitamines et des minéraux. Si la composition nutritionnelle est destinée à être la seule source de nutrition, elle contient de préférence un profil vitaminique et minéral complet. Des exemples de vitamines comprennent les vitamines A, B complexes (telles que B1, B2, B6 et B12), C, D, E et K, la niacine, et les vitamines acides telles que l’acide pantothénique, l’acide folique et la biotine. Des exemples de minéraux comprennent le calcium, le fer, le zinc, le magnésium, l’iode, le cuivre, le phosphore, le manganèse, le potassium, le chrome, le molybdène, le sélénium, le nickel, l’étain, le silicium, le vanadium et le bore.
La composition nutritionnelle peut aussi contenir un caroténoïde tel que la lutéine, le lycopène, la zéaxanthine, et le bêta-carotène. La quantité totale de caroténoïde incorporé peut varier d’environ 0,001 µg/ml à environ 10 µg/ml. La lutéine peut être présente en une quantité d’environ 0,001 µg/ml à environ 10 µg/ml, de préférence d’environ 0,044 µg/ml à environ 5 µg/ml de lutéine. Le lycopène peut être présent en une quantité de 0,001 µg/ml à environ 10 µg/ml, de préférence d’environ 0,0185 µg/ml à environ 5 µg/ml de lycopène. Le bêta-carotène peut être présent à raison d’environ 0,001 µg/ml à environ 10 mg/ml, par exemple d’environ 0,034 µg/ml à environ 5 µg/ml de bêta-carotène.
La composition nutritionnelle contient aussi de préférence des concentrations réduites de sodium ; par exemple, d’environ 300 mg/l à environ 400 mg/l. Les électrolytes restants peuvent être présents à des concentrations établies de façon à répondre aux besoins sans apporter de charge rénale en solutés indue à la fonction rénale. Par exemple, le potassium est de préférence présent à raison d’environ 1180 à environ 1300 mg/l ; et le chlorure est de préférence présent à raison d’environ 680 à environ 800 mg/l.
La composition nutritionnelle peut aussi contenir divers autres ingrédients conventionnels tels que des conservateurs, des agents émulsionnants, des agents épaississants, des tampons, des fibres et des prébiotiques (par exemple fructooligosaccharides, galactooligosaccharides), des probiotiques (par exemple B. animalis subsp. Lactis BB-12, B. lactis HN019, B. lactis Bi07, B. infantis ATCC 15697, .L. rhamnosus GG, L. rhamnosus LGG DSM 33156, L. rhamnosus HNOO1, L. acidophilus LA-5, L. acidophilus NCFM, L. fermentum CECT5716, B. longum BB536, B. longum AH1205, B. longum AH1206, B. breve M-16V, L. Reuteri ATCC 55730, L. reuteri ATCC PTA-6485, L. reuteri DSM 17938), des composés antioxydants/anti-inflammatoires, y compris les tocophérols, les caroténoïdes, un ascorbate/la vitamine C, le palmitate d’ascorbyle, les polyphénols, le glutathion, et la superoxyde dismutase (melon), d’autres facteurs bioactifs (par exemple hormones de croissance, cytokines, TGF-β), des colorants, des arômes, et des stabilisants, des lubrifiants, et ainsi de suite.
La composition nutritionnelle peut être formulée comme une poudre soluble, un concentré liquide, ou une formulation prête à l’emploi. La composition peut être administrée à un humain en ayant besoin via un tube nasogastrique ou par voie orale. Divers arômes et d’autres additifs peuvent aussi être présents.
Les compositions nutritionnelles peuvent être préparées par n’importe quelles techniques de fabrication couramment utilisées pour préparer des compositions nutritionnelles sous forme solide ou liquide. Par exemple, la composition peut être préparée par combinaison de diverses solutions d’alimentation. Une solution d’alimentation en protéines-dans-graisse peut être préparée par chauffage et mélange de la source de lipides et ensuite addition d’un émulsifiant (par exemple la lécithine), de vitamines liposolubles, et d’au moins une portion de la source de protéines, avec chauffage et agitation. Une solution d’alimentation en glucides est ensuite préparée par addition de minéraux, d’oligoéléments et d’ultra-oligoéléments, d’agents épaississants ou de mise en suspension, à de l’eau, avec chauffage et agitation. La solution résultante est maintenue pendant 10 minutes avec poursuite du chauffage et de l’agitation avant l’addition de glucides (par exemple les HMO et des sources de glucides digestibles). Les solutions d’alimentation résultantes sont ensuite combinées ensemble, avec chauffage et agitation, et le pH est ajusté à 6,6-7,0, après quoi la composition est soumise à un traitement à température élevée de courte durée, pendant lequel la composition est traitée à la chaleur, émulsionnée et homogénéisée, puis laissée à refroidir. Des vitamines hydrosolubles et de l’acide ascorbique sont ajoutés, le pH est ajusté dans la plage souhaitée, si nécessaire, des arômes sont ajoutés, et de l’eau est ajoutée pour atteindre la teneur en extrait sec totale souhaitée.
Pour un produit liquide, la solution résultante peut ensuite être conditionnée dans des conditions aseptiques pour former une composition nutritionnelle conditionnée dans des conditions aseptiques. Sous cette forme, la composition nutritionnelle peut être sous une forme liquide concentrée ou prête à l’emploi. En variante, la composition peut être séchée par pulvérisation et traitée et conditionnée sous la forme d’une poudre pour reconstitution.
Quand le produit nutritionnel est un liquide nutritionnel prêt à l’emploi, il peut être préférable que la concentration totale de HMO dans le liquide, en poids du liquide, soit d’environ 0,1 % à environ 1,5 %, y compris d’environ 0,2 % à environ 1,0 %, par exemple d’environ 0,3 % à environ 0,7 %. Quand le produit nutritionnel est un liquide nutritionnel concentré, il peut être préférable que la concentration totale de HMO dans le liquide, en poids du liquide, soit d’environ 0,2 % à environ 3,0 %, y compris d’environ 0,4 % à environ 2,0 %, par exemple d’environ 0,6 % à environ 1,5 %.
Dans un autre mode de réalisation, la composition nutritionnelle est sous une forme posologique unitaire. La forme posologique unitaire peut contenir un véhicule de qualité alimentaire acceptable, par exemple une solution saline tamponnée au phosphate, des mélanges d’éthanol dans l’eau, de l’eau, et des émulsions telles qu’une émulsion huile/eau ou eau/huile, ainsi que divers agents mouillants ou excipients. La forme posologique unitaire peut aussi contenir d’autres matériaux qui ne produisent pas de réaction adverse, allergique ou autrement indésirable lors d’une administration à un humain. Les véhicules et autres matériaux peuvent comprendre des solvants, des dispersants, des enrobages, des agents favorisant l’absorption, des agents de libération contrôlée, et un ou plusieurs excipients inertes, tels que des amidons, des polyols, des agents de granulation, la cellulose microcristalline, des diluants, des lubrifiants, des liants, et des agents délitants. De préférence, la forme posologique unitaire comprend principalement des HMO avec une quantité minimale de liants et/ou excipients. Les formes posologiques unitaires sont particulièrement adaptées quand elles sont incomplètes du point de vue nutritionnel ou ne sont pas destinées à servir de seule source de nutrition.
Une forme posologique unitaire peut être administrée par voie orale, par exemple en tant que comprimé, capsule, ou pellet contenant une quantité prédéterminée du mélange, ou comme une poudre ou des granules concernant une concentration prédéterminée du mélange, ou un gel, une pâte, une solution, une suspension, une émulsion, un sirop, un bolus, un électuaire, une bouillie, dans un liquide aqueux ou non aqueux, contenant une concentration prédéterminée du mélange. Une composition administrée par voie orale peut contenir un ou plusieurs liants, lubrifiants, diluants inertes, agents aromatisants, et humectants. Une composition administrée par voie orale telle qu’un comprimé peut éventuellement être enrobée et peut être formulée de façon à permettre une libération prolongée, retardée ou contrôlée des HMO.
Une forme posologique unitaire peut aussi être administrée par tube nasogastrique ou perfusion directe dans les voies gastro-intestinales ou l’estomac.
Une forme posologique unitaire peut aussi contenir des agents thérapeutiques tels que des antibiotiques, des probiotiques, des analgésiques, et des agents anti-inflammatoires.
La posologie appropriée d’une composition nutritionnelle pour un humain peut être déterminée d’une manière conventionnelle, sur la base de facteurs tels que la concentration de HMO, et l’état général, le statut immunitaire, le poids corporel et l’âge de l’humain. La quantité requise de HMO devrait généralement être située dans la plage allant d’environ 1 g à environ 15 g par jour, dans certains modes de réalisation d’environ 2 g à environ 10 g par jour, par exemple d’environ 3 g à environ 7 g par jour. Des régimes posologiques appropriés peuvent être déterminés par des procédés connus de l’homme du métier.
Dans un autre mode de réalisation, le mélange de HMO peut être formulé comme une composition pharmaceutique. La composition pharmaceutique peut contenir un véhicule pharmaceutiquement acceptable, par exemple une solution saline tamponnée au phosphate, des mélanges d’éthanol dans l’eau, de l’eau, et des émulsions telles qu’une émulsion huile/eau ou eau/huile, ainsi que divers agents mouillants et/ou excipients. La composition pharmaceutique peut aussi contenir d’autres matériaux qui ne produisent pas de réaction adverse, allergique ou autrement indésirable lors d’une administration à un humain. Les véhicules et autres matériaux peuvent comprendre des solvants, des dispersants, des enrobages, des agents favorisant l’absorption, des agents de libération contrôlée, et un ou plusieurs excipients inertes, tels que des amidons, des polyols, des agents de granulation, la cellulose microcristalline, des diluants, des lubrifiants, des liants, et des agents désintégrants.
Les compositions pharmaceutiques peuvent être administrées par voie orale, par exemple comme un comprimé, une capsule, ou un pellet contenant une quantité prédéterminée, ou comme une poudre ou des granules concernant une concentration prédéterminée, ou un gel, une pâte, une solution, une suspension, une émulsion, un sirop, un bolus, un électuaire, ou une bouillie, dans un liquide aqueux ou non aqueux, contenant une concentration prédéterminée. Les compositions administrées par voie orale peuvent contenir des liants, des lubrifiants, des diluants inertes, des agents aromatisants, et des humectants. Les compositions administrées par voie orale telles que les comprimés peuvent éventuellement être enrobées et peuvent être formulées de façon à permettre une libération prolongée, retardée ou contrôlée du mélange qu’elles contiennent.
Les compositions pharmaceutiques peuvent aussi être administrées au moyen d’un suppositoire à usage rectal, d’un tube aérosol, d’une sonde nasogastrique ou par perfusion directe dans les voies gastro-intestinales ou l’estomac.
Les compositions pharmaceutiques peuvent aussi comprendre des agents thérapeutiques tels que des antibiotiques, des probiotiques, des analgésiques, et des agents anti-inflammatoires. La dose appropriée d’une composition pharmaceutique peut être déterminée d’une manière conventionnelle, sur la base de facteurs tels que la concentration des HMO, et l’état général, le statut immunitaire, le poids corporel et l’âge du patient. La quantité requise de HMO devrait généralement être située dans la plage allant d’environ 1 g à environ 15 g par jour, dans certains modes de réalisation d’environ 2 g à environ 10 g par jour, par exemple d’environ 3 g à environ 7 g par jour. Des régimes posologiques appropriés peuvent être déterminés par des procédés connus de l’homme du métier.
Utilisation d ’ un mélange de HMO selon la présente invention
La présente invention concerne aussi l’utilisation d’un mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2’-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose, à des fins médicales.
Les HMO individuels sont connus pour avoir des effets bénéfiques sur la santé et sont connus pour avoir un effet sur les infections bactériennes et virales. Alors que les HMO individuels isolés sont bénéfiques par eux-mêmes, des mélanges combinés de HMO, tels que décrits ici, ont un effet synergique dans le traitement d’infections, en comparaison avec les composants individuels isolés.
Un objet de l’invention concerne un mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2’-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose, y compris les modes de réalisation préférés et davantage préférés décrits plus haut, ou une composition comprenant le mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2’-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose, y compris les modes de réalisation préférés et davantage préférés décrits plus haut, pour une utilisation dans le traitement, la prévention et/ou l’amélioration d’une maladie et/ou d’un état lié à un déséquilibre du microbiome. En variante, un objet de l’invention concerne une méthode de traitement, prévention et/ou amélioration d’une maladie et/ou d’un état lié à un déséquilibre du microbiome chez un humain, comprenant l’administration à l’humain d’un mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2’-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose, ou d’une composition comprenant le mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2’-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose. Typiquement, un mélange de 3-FL, LNFP-I, 2’-FL, LNDFH-I et DFL selon la présente invention peut être utilisé pour la modulation du microbiome d’un humain, par exemple pour augmenter l’abondance de Bifidobacterium et l’abondance de Barnesiella, ladite modulation réduisant l’abondance de Firmicutes, en particulier de Clostridia.
En outre, un autre objet de l’invention concerne un mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2’-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose, y compris les modes de réalisation préférés et davantage préférés décrits plus haut, ou une composition comprenant le mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2'-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose, y compris les modes de réalisation préférés et davantage préférés décrits plus haut, pour une utilisation dans le traitement et/ou la réduction du risque d'une large gamme d'infections bactériennes ou virales chez un humain. En variante, un objet de l'invention concerne une méthode de traitement et/ou de réduction du risque d'une large gamme d'infections bactériennes ou virales chez un humain, comprenant l'administration à l'humain d'un mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2'-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose, ou d'une composition comprenant le mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2'-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose. Les infections peuvent survenir dans plusieurs parties du corps, sans se limiter au microbiome intestinal, mais aussi dans d'autres parties du corps exposées à l'environnement externe, telles que la peau, les cheveux, les oreilles, les yeux, le nez et le système respiratoire. Un ou plusieurs HMO du mélange selon la présente invention peuvent inhiber l'adhérence de bactéries pathogènes, telles quePseudomonas aeruginosaouCampylobacter jejuni,Escherichia coliuropathogènes et entéropathogènes, certaines espèces deSalmonellaet/ou le pathogène responsable des pneumoniesPseudomonas aeruginosa, ainsi que des virus tels que les norovirus. Un ou plusieurs HMO du mélange selon la présente invention peuvent aussi se lier directement à des toxines pathogènes, telles que des toxines deClostridium difficile. Un ou plusieurs HMO du mélange selon la présente invention peuvent servir de modulateur du système immunitaire et affecter la santé intestinale par stimulation des bifidobactéries. Un ou plusieurs HMO du mélange selon la présente invention peuvent inhiber la croissance deStreptococcusdu Groupe B tant chez les nourrissons que dans le lait maternel. LesStreptococcusdu Groupe B sont une cause majeure de septicémies, pneumonies et méningites néonatales. Un ou plusieurs HMO du mélange selon la présente invention peuvent se lier directement aux toxines Shiga Stx2 et Stx1B5 deShigella dysenteriae. Un ou plusieurs HMO du mélange selon la présente invention ont le potentiel de réduire le risque de maladies infectieuses dues à des pathogènes soit bactériens soit viraux, le plus vraisemblablement dues à la liaison d'exotoxines bactériennes.
En outre, un autre objet de l'invention concerne une utilisation non médicale d'un mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2'-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose, y compris les modes de réalisation préférés et davantage préférés décrits plus haut, ou d'une composition comprenant le mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2'-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose, y compris les modes de réalisation préférés et davantage préférés décrits plus haut, pour maintenir l'homéostasie commensale du microbiote intestinal chez un humain.
En outre, un autre objet de l'invention concerne une utilisation non médicale d'un mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2'-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose, y compris les modes de réalisation préférés et davantage préférés décrits plus haut, ou d'une composition comprenant le mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2'-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose, y compris les modes de réalisation préférés et davantage préférés décrits plus haut, dans la gestion alimentaire d'un humain.
De plus, un mélange constitué ou essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2'-FL, LNDFH-I, DFL et éventuellement de lactose, y compris les modes de réalisation préférés et davantage préférés décrits plus haut, amplifie la viabilité de probiotiques utiles dans des compositions aqueuses. On a trouvé que des souches probiotiques, par exemple des souches deLactobacillus rhamnosus, lorsqu'elles sont mélangées à des HMO, ont une régénération et une viabilité significativement augmentées lorsqu'elles viennent en contact avec un environnement liquide à faible pH, tel que l'acide de l'estomac ou des boissons acides. Ainsi, la combinaison du mélange de HMO selon la présente invention ensemble avec des souches probiotiques, de préférence des probiotiques lyophilisés, peut offrir un moyen fiable de délivrer une quantité quantifiable de probiotiques à un hôte (humain ou animal), soit sous forme de type pharmaceutique, dans des compositions nutritionnelles, soit sous une forme à base d’aliment.
Bien que l'invention ait été décrite en référence à des modes de réalisation, on appréciera le fait que diverses modifications sont possibles dans le cadre de l'invention.
Il est mis à disposition les objets numérotés suivants de l'invention :
1. Un mélange constitué ou essentiellement constitué d’un composant A qui est le 3-FL, un composant B qui est le LNFP-I, un composant C qui est le 2'-FL, un composant D qui est le LNDFH-I, un composant E qui est le DFL, et éventuellement un composant F qui est le lactose.
2. Le mélange selon l'objet 1, essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2'-FL, LNDFH-I, DFL et lactose, de préférence dans lequel
- le composant D représente 8 à 13 % molaire ou 14 à 22 % massique, et/ou
- le composant E représente 9,5 à 17,5 % molaire ou 11,5 à 19 % massique, et/ou
- les composants D+E représentent 17,5 à 30,5 % molaire ou 25,5 à 41 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble,
ou
- le composant D représente 2 à 22 % molaire ou 5 à 34 % massique, ou
- le composant E représente 7 à 24 % molaire ou 6 à 29 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble, à condition que les composants D+E représentent 23,5 à 33 % molaire ou 30,5 à 43 % massique.
3. Le mélange selon l’objet 1 ou 2, dans lequel
- les composants A+B+C représentent 41,5 à 67 % molaire ou 41 à 66 % massique, de préférence dans lequel il y a davantage de composant B que de composant C présent, ou
- les composants A+B+C représentent 40,5 à 54,5 % molaire ou 41 à 54 % massique, de préférence dans lequel le composant A représente 21 à 27 % molaire .
4. Le mélange selon l'un quelconque des objets précédents, dans lequel
- le composant A représente 19 à 24,5 % molaire ou 15 à 20 % massique,
- le composant B représente 12,5 à 15,5 % molaire ou 19 à 22 % massique,
- le composant C représente 7 à 10 % molaire ou 6 à 8 % massique,
- le composant D représente 11 à 14 % molaire ou 18 à 22 % massique,
- le composant E représente 14,5 à 17,5 % molaire ou 16 à 19 % massique, et
- le composant F représente 25 à 30 % molaire ou 15 à 19 % massique.
5. Le mélange selon l'objet 1, essentiellement constitué de 3-FL, LNFP-I, 2'-FL, LNDFH-I et DFL, de préférence dans lequel
- le composant D représente 10 à 17,5 % molaire ou 16 à 25,5 % massique, et/ou
- le composant E représente 12 à 23,5 % molaire ou 13 à 22 % massique, et/ou
- les composants D+E représentent 22 à 41 % molaire ou 29 à 47,5 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble,
ou
- le composant D représente 3,5 à 29,5 % molaire ou 6 à 39 % massique, et/ou
- le composant E représente 9 à 32 % molaire ou 7,5 à 34,5 % massique,
par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble,
à condition que les composants D+E représentent 31,5 à 41 % molaire ou 36,5 à 49 % massique.
6. Le mélange selon l'objet 5, dans lequel
- il y a davantage de composant B que de composant C dans le mélange, ou
- les composants A+B+C représentent 57 à 70 % molaire ou 51 à 64,5 % massique, de préférence dans lequel le composant A représente 29 à 35,5 % molaire .
7. Le mélange selon l'objet 1, 5 ou 6, dans lequel
- le composant A représente 29 à 33 % molaire ou 20 à 24,5 % massique,
- le composant B représente 18 à 21,5 % molaire ou 23 à 25,5 % massique,
- le composant C représente 10 à 12,5 % molaire ou 7,5 à 9,5 % massique,
- le composant D représente 15 à 17,5 % molaire ou 22 à 25,5 % massique,
- le composant E représente 20,5 à 23,5 % molaire ou 19,5 à 22 % massique.
8. Une composition comprenant le mélange selon l'un quelconque des objets précédents, de préférence ladite composition comprenant en outre un probiotique, de manière encore préféréeL. rhamnosus, en particulierL. rhamnosusLGG DSM 33156.
9. Un procédé pour obtenir le mélange selon l'un quelconque des objets 1 à 7, ledit procédé comprenant la réaction de 3-FL, LNFP-I et 2'-FL en présence d'une α1-3/4-transfucosidase pour produire un mélange réactionnel, et ensuite l'élimination de l'α1-3/4-transfucosidase et éventuellement du lactose du mélange réactionnel, de préférence dans lequel l'α1-3/4-transfucosidase comprend ou consiste en la séquence d'acides aminés de la SEQ ID NO : 1 avec les mutations suivantes : W135F-A174N-N274A-E413R.
10. Un mélange ou une composition selon l'un quelconque des objets 1 à 8, pour une utilisation en tant que médicament, de préférence
- dans lequel le microbiome d'un humain est modulé, ou
- dans lequel l'utilisation est le traitement et/ou la réduction du risque d'une large gamme d'infections bactériennes ou virales chez un humain.
11. Une utilisation du mélange selon l'un quelconque des objets 1 à 8 pour amplifier la viabilité de probiotiques, de préférenceL. rhamnosus, de manière encore préféréeL.rhamnosus LGG DSM 33156, dans une composition aqueuse.
Exemples
Exemple 1
Dans un fermenteur de 20 litres, on transfère une solution de 3-FL (4,278 kg, corrigés pour le dosage, 8,76 moles), de LNFP-I (3,807 kg, corrigés pour le dosage, 4,46 moles) et de 2'-FL (2,072 kg, corrigés pour le dosage, 4,24 moles) dans de l'eau (17,5 kg). On ajuste le pH de la solution à 6,0 avec une solution à 7 % de HCl. On dissout dans de l'eau (100 g) une poudre lyophilisée (11,6 g) du mutant W135F-A174N-N274A-E413R deBifidobacterium longumsubsp.infantisATCC 15697 (la numérotation des acides aminés étant conforme à la SEQ ID NO : 1, voir le document WO 2016/063261) et on ajoute le tout à la solution ci-dessus, puis on agite le mélange réactionnel à 25°C pendant 18 heures, après quoi on le chauffe à 55°C sur 4 heures et on poursuit l'agitation à cette température pendant 2 heures. Ensuite, on établit le pH du mélange à 5,0 avec une solution à 7 % de HCl et on chauffe le mélange à 70°C sur 1 heure et on le maintient à cette température pendant 2 heures. Puis on laisse le mélange refroidit à 15°C pendant que l'enzyme précipite. On soumet ensuite la suspension obtenue à une ultrafiltration (membrane de céramique 15 kDa, 0,5 m2, pression transmembranaire 5,8 à 5,9 bars, température 19 à 24°C) et on collecte 28,05 kg de perméat. On soumet le perméat à une microfiltration (membrane en PES de 0,2 µm) et on le lyophilise, ce qui donne 10,57 g de poudre (saccharides par CLHP : 95 % massique parmi lesquels le 3-FL représente 16 % massique, le LNFP-I représente 19 % massique, le 2'-FL représente 7 % massique, le LNDFH-I représente 18 % massique, le DFL représente 17 % massique et le lactose représente 18 % massique ; teneur en protéines par le test de Bradford : < 6 ppm).
Exemple 2
Conformément au protocole exposé dans l'Exemple 1, on obtient les compositions suivantes avec différents rapports donneur/accepteur :
Rapport molaire relatif
Produit de Départ Produit
Donneur Accepteur
3-FL LNFP-I 2’-FL 3-FL LNFP-I 2’-FL LNDFH-I DFL lactose
0,51 0,49 0,23 0,14 0,08 0,12 0,16 0,27
0,24 0,25
0,52 0,48 0,23 0,16 0,06 0,15 0,14 0,26
0,28 0,2
0,51 0,49 0,23 0,20 0,03 0,20 0,08 0,26
0,38 0,21
0,52 0,48 0,23 0,12 0,1 0,09 0,19 0,27
0,19 0,29
0,51 0,49 0,23 0,07 0,17 0,03 0,23 0,25
0,1 0,39
0,50 0,5 0,21 0,13 0,09 0,11 0,16 0,3
0,25 0,25
0,76 0,24 0,55 0,05 0,02 0,09 0,10 0,19
0,12 0,12
0,68 0,32 0,44 0,08 0,03 0,10 0,13 0,22
0,16 0,16
0,35 0,65 0,08 0,23 0,18 0,11 0,15 0,25
0,32 0,33
0,26 0,74 0,04 0,28 0,24 0,10 0,13 0,21
0,36 0,38
Exemple 3
On réchauffe à 37°C des solutions deLactobacillus rhamnosuslyophilisé (Probio-Tec® LGG®, Chr. Hansen, déposé à la collection de cultures DSMZ avec le numéro d'accès DSM 33156, 0,4 mg/ml) et des HMO (2'-FL, 2'-FL/DFL en un rapport en poids de 6,1/1 et le mélange de HMO de l'Exemple 1, respectivement, 5 % en poids/volume) dans de la solution stérile saline tamponnée au phosphate (PBS, pH = 3), et on mélange vigoureusement pendant environ 30 secondes jusqu'à ce qu'il ne reste aucune motte visible. Le témoin contient uniquement le probiotique. On incube les tubes à 37°C pendant 3 heures. On dilue encore les échantillons et on étale 100 µl en double sur des plaques de gélose MRS incubées pendant 48 heures à 37°C dans des chambres anaérobies. Les résultats sont exprimés par les valeurs moyennes avec écart type d'unités formant des colonies (CFU) par millilitre, et calculés à partir de colonies de LGG sur des plaques de gélose ( ).
Le LGG lyophilisé dissous avec un mélange de HMO selon l'invention présente une régénération et une capacité de survie fortement et significativement amplifiées en comparaison avec le témoin ou certains des ingrédients du mélange de HMO après 3 heures d'incubation à 37°C dans des conditions acides à pH 3,0, comme déterminé par le décompte des colonies. Les données suggèrent que la réduction de la régénération et de la viabilité deL. rhamnosusaprès exposition à des conditions de pH faible, par exemple dans l'estomac ou dans une boisson acide, peut être empêchée en présence de HMO.

Claims (25)

  1. Mélange constitué ou essentiellement constitué d’un composant A qui est le 3-FL, un composant B qui est le LNFP-I, un composant C qui est le 2'-FL, un composant D qui est le LNDFH-I, un composant E qui est le DFL, et éventuellement un composant F qui est le lactose.
  2. Mélange selon la revendication 1, comprenant, essentiellement constitué, ou constitué de 3-FL, LNFP-I, 2'-FL, LNDFH-I, DFL et de lactose.
  3. Mélange selon la revendication 1 ou 2, dans lequel
    - le composant D représente 8 à 13 % molaire ou 14 à 22 % massique, et/ou
    le composant E représente 9,5 à 17,5 % molaire ou 11,5 à 19 % massique, et/ou
    - les composants D+E représentent 17,5 à 30,5 % molaire ou 25,5 à 41 % massique,
    par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble
  4. Mélange selon la revendication 1 ou 2, dans lequel
    - le composant D représente 2 à 22 % molaire ou 5 à 34 % massique, ou
    - le composant E représente 7 à 24 % molaire ou 6 à 29 % massique,
    par rapport aux composants A, B, C, D, E et F pris ensemble, à condition que les composants D+E représentent 23,5 à 33 % molaire ou 30,5 à 43 % massique.
  5. Mélange selon la revendication 3, dans lequel les composants A+B+C représentent 41,5 à 67 % molaire ou 41 à 66 % massique, de préférence dans lequel il y a davantage de composant B que de composant C présent.
  6. Mélange selon la revendication 4, dans lequel les composants A+B+C représentent 40,5 à 54,5 % molaire ou 41 à 54 % massique, de préférence dans lequel le composant A représente 21 à 27 % molaire .
  7. Mélange selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel
    - le composant A représente 19 à 24,5 % molaire ou 15 à 20 % massique,
    - le composant B représente 12,5 à 15,5 % molaire ou 19 à 22 % massique,
    - le composant C représente 7 à 10 % molaire ou 6 à 8 % massique,
    - le composant D représente 11 à 14 % molaire ou 18 à 22 % massique,
    - le composant E représente 14,5 à 17,5 % molaire ou 16 à 19 % massique, et
    - le composant F représente 25 à 30 % molaire ou 15 à 19 % massique.
  8. Mélange selon la revendication 1, comprenant, essentiellement constitué ou constitué de 3-FL, LNFP-I, 2'-FL, LNDFH-I et DFL.
  9. Mélange selon la revendication 1 ou 8, dans lequel
    - le composant D représente 10 à 17,5 % molaire ou 16 à 25,5 % massique, et/ou
    - le composant E représente 12 à 23,5 % molaire ou 13 à 22 % massique, et/ou
    - les composants D+E représentent 22 à 41 % molaire ou 29 à 47,5 % massique,
    par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble.
  10. Mélange selon la revendication 1 ou 8, dans lequel
    - le composant D représente 3,5 à 29,5 % molaire ou 6 à 39 % massique, ou
    - le composant E représente 9 à 32 % molaire ou 7,5 à 34,5 % massique,
    par rapport aux composants A, B, C, D et E pris ensemble, à condition que les composants D+E représentent 31,5 à 41 % molaire ou 36,5 à 49 % massique.
  11. Mélange selon la revendication 9, dans lequel il y a davantage de composant B que de composant C présent dans le mélange.
  12. Mélange selon la revendication 10, dans lequel les composants A+B+C représentent 57 à 70 % molaire ou 51 à 64,5 % massique, de préférence dans lequel le composant A représente 29 à 35,5 % molaire.
  13. Mélange selon l'une quelconque des revendications 1 et 8 à 12, dans lequel
    - le composant A représente 29 à 33 % molaire ou 20 à 24,5 % massique,
    - le composant B représente 18 à 21,5 % molaire ou 23 à 25,5 % massique,
    - le composant C représente 10 à 12,5 % molaire ou 7,5 à 9,5 % massique,
    - le composant D représente 15 à 17,5 % molaire ou 22 à 25,5 % massique,
    - le composant E représente 20,5 à 23,5 % molaire ou 19,5 à 22 % massique.
  14. Composition comprenant le mélange selon l'une quelconque des revendications précédentes.
  15. Composition selon la revendication 14, comprenant en outre un probiotique, de préférenceL. rhamnosus, de manière encore préféréeL. rhamnosusLGG DSM 33156.
  16. Composition selon la revendication 14 ou 15, qui est une composition nutritionnelle, pharmaceutique ou cosmétique.
  17. Procédé pour obtenir le mélange de l'une quelconque des revendications 1 à 13, ledit procédé comprenant la réaction de 3-FL, LNFP-I et 2'-FL en présence d'une α1-3/4-transfucosidase pour produire un mélange réactionnel, et ensuite l'élimination de l'α1-3/4-transfucosidase et éventuellement du lactose du mélange réactionnel
  18. Procédé selon la revendication 17, dans lequel l'α1-3/4-transfucosidase comprend ou est constitué de la séquence d'acides aminés de la SEQ ID NO : 1 avec les mutations suivantes : W135F-A174N-N274A-E413R.
  19. Procédé selon la revendication 17 ou 18, qui est effectué dans des conditions essentiellement dépourvues de tampon.
  20. Mélange ou composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, pour une utilisation en tant que médicament.
  21. Mélange pour une utilisation ou composition pour une utilisation selon la revendication 20, dans lequel le microbiome d'un humain est modulé.
  22. Mélange pour une utilisation ou composition pour une utilisation selon la revendication 20, dans lequel l'utilisation est le traitement et/ou la réduction du risque d'une large gamme d'infections bactériennes ou virales chez un humain.
  23. Utilisation non médicale du mélange selon l'une quelconque des revendications 1 à 13 ou de la composition nutritionnelle ou cosmétique selon l'une quelconque des revendications 14 à 16 pour moduler le microbiome d'un humain.
  24. Utilisation du mélange selon l'une quelconque des revendications 1 à 13 pour amplifier la viabilité de probiotiques, de préférenceL. rhamnosus, de manière encore préféréeL. rhamnosusLGG DSM 33156, dans une composition aqueuse.
  25. Utilisation du mélange selon l'une quelconque des revendications 1 à 13 pour une application cosmétique.
FR2306375A 2022-06-20 2023-06-20 Mélange de HMO fucosylés Active FR3136650B3 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA202200588 2022-06-20
DKPA202200588A DK202200588A1 (en) 2022-06-20 2022-06-20 Mixture of fucosylated HMOs

Publications (2)

Publication Number Publication Date
FR3136650A3 true FR3136650A3 (fr) 2023-12-22
FR3136650B3 FR3136650B3 (fr) 2024-06-28

Family

ID=87059739

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FR2306375A Active FR3136650B3 (fr) 2022-06-20 2023-06-20 Mélange de HMO fucosylés

Country Status (9)

Country Link
EP (4) EP4539680A1 (fr)
KR (1) KR20250024846A (fr)
CN (1) CN119403457A (fr)
AU (1) AU2023286780A1 (fr)
DE (1) DE202023103382U1 (fr)
DK (2) DK202200588A1 (fr)
ES (1) ES1317021Y (fr)
FR (1) FR3136650B3 (fr)
WO (4) WO2023247577A1 (fr)

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2796082B1 (fr) 1999-07-07 2003-06-27 Centre Nat Rech Scient Procede de production d'oligosaccharides
ES2456292T3 (es) 2006-03-09 2014-04-21 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Procedimiento de producción de oligosacáridos sialilados
WO2008033520A2 (fr) 2006-09-15 2008-03-20 The Regents Of The University Of California Séquences géniques de bifidobactéries et leur utilisation
CA2805501A1 (fr) 2010-07-16 2012-01-19 Glycom A/S Synthese de nouveaux derives sialo-oligosaccharide
DE12746649T1 (de) 2011-02-16 2016-09-29 Glycosyn LLC Biosynthese menschlicher milcholigosaccaride in manipulierten Bakterien
WO2012113405A1 (fr) 2011-02-21 2012-08-30 Glycom A/S Hydrogénolyse catalytique d'une composition d'un mélange de précurseurs d'oligosaccharides et ses utilisations
RU2013146524A (ru) 2011-03-18 2015-04-27 Глюком А/С Синтез новых фукозо-содержащих производных углеводородов
AU2012257395A1 (en) * 2011-05-13 2013-12-12 Glycom A/S Method for generating human milk oligosaccharides (HMOs) or precursors thereof
US9382564B2 (en) 2011-05-13 2016-07-05 Glycom A/S Diversification of human milk oligosaccharides (HMOs) or precursors thereof
JP6129821B2 (ja) * 2011-05-13 2017-05-17 グリコシン リミテッド ライアビリティー カンパニー プレバイオティクスとしての、精製された２’−フコシルラクトース、３−フコシルラクトース、およびラクトジフコテトラオースの使用
US20150265661A1 (en) 2012-04-13 2015-09-24 Trustees Of Boston College Prebiotic effect of sialyllactose
EP3191499A4 (fr) 2014-09-09 2018-06-06 Glycosyn LLC Alpha (1,3) fucosyltransférases destinées à être utilisées dans la production d'oligosaccharides fucosylés
US10415021B2 (en) * 2014-10-24 2019-09-17 Glycom A/S Mutated fucosidase
US10314852B2 (en) * 2014-10-24 2019-06-11 Glycom A/S Mixtures of HMOs
EP3425052A1 (fr) 2017-07-07 2019-01-09 Jennewein Biotechnologie GmbH Fucosyltransférases et leur utilisation dans la production d'oligosaccharides fucosylés
WO2019020707A1 (fr) 2017-07-26 2019-01-31 Jennewein Biotechnologie Gmbh Sialyl-transférases et leur utilisation dans la production d'oligosaccharides sialylés
US20220282262A1 (en) 2018-12-04 2022-09-08 Glycom A/S Synthesis of the fucosylated oligosaccharide lnfp-v
EP3848471A1 (fr) 2020-01-10 2021-07-14 Chr. Hansen HMO GmbH Production fermentative séquentielle d'oligosaccharides
EP4192944A1 (fr) 2020-08-10 2023-06-14 Inbiose N.V. Production de mélanges d'oligosaccharides par une cellule
US20240035055A1 (en) * 2020-08-10 2024-02-01 Inbiose N.V. Process for purification of an oligosaccharide solution produced by cell cultivation or microbial fermentation
CN112189850A (zh) * 2020-09-17 2021-01-08 合生元（广州）健康产品有限公司 益生元在促进胃肠道中益生菌存活的应用
DK181242B1 (en) 2021-05-17 2023-05-30 Dsm Ip Assets Bv GENETICALLY ENGINEERED CELLS COMPRISING A RECOMBINANT NUCLEIC ACID SEQUNCE ENCODING AN α-1,2-FUCOSYLTRANSFERASE CAPABLE OF PRODUCING LNFP-I, NUCLEIC ACID SEQUENCES ENCODING SAME AND METHODS FOR USE OF SAME

Also Published As

Publication number Publication date
EP4539678A1 (fr) 2025-04-23
DE202023103382U1 (de) 2023-11-29
WO2023247578A1 (fr) 2023-12-28
CN119403457A (zh) 2025-02-07
WO2023247577A1 (fr) 2023-12-28
KR20250024846A (ko) 2025-02-19
AU2023286780A1 (en) 2025-01-02
EP4539681A1 (fr) 2025-04-23
ES1317021U (es) 2025-04-10
DK202300035U3 (da) 2023-09-22
DK202300035U9 (da) 2024-07-05
DK202200588A1 (en) 2024-02-23
EP4539679A1 (fr) 2025-04-23
FR3136650B3 (fr) 2024-06-28
EP4539680A1 (fr) 2025-04-23
WO2023247483A1 (fr) 2023-12-28
WO2023247579A1 (fr) 2023-12-28
ES1317021Y (es) 2025-07-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12063949B2 (en) Mixture of HMOs
RU2769462C2 (ru) Синергетическая выработка бутирата, связанная со сложностью смеси огм для применения у младенцев или детей младшего возраста в медицинских целях
AU2018272764B2 (en) HMOs blends for use in infants or young children for health purposes
WO2015071402A1 (fr) Compositions pour utilisation dans la prévention ou le traitement de l&#39;entérocolite nécrosante chez les nouveau-nés et les jeunes enfants
JP2011504365A (ja) 乳児のための年齢に合わせた栄養システム
CN114468302A (zh) 用于预防或治疗有风险婴儿或幼儿的urt感染的组合物
FR2853908A1 (fr) Produit immunomodulateur obtenu a partir d&#39;une culture de bifidobacterium et compositions le contenant
US20200069709A1 (en) Synthetic composition for microbiota modulation
TW201625144A (zh) 用於胃腸環境以提供改善之微生物群和代謝輪廓之營養組成物
CN114761024A (zh) 用于改善孕妇微生物群的hmo混合物
US20200155580A1 (en) Synthetic composition comprising one or more human milk oligosaccharides (hmos)
EP2919592B1 (fr) Utilisation de maltodextrines branchees dans le bien-etre intestinal du nourrisson
FR3136650A3 (fr) Mélange de HMO fucosylés
CN112806577B (zh) 产丁酸的益生元益生菌增效组合
WO2022118270A1 (fr) Oligosaccharides de lait humain destinés à être utilisés pour favoriser la durée du sommeil nocturne
FR2877844A1 (fr) Composition contenant un probiotique destinee a l&#39;alimentation infantile chez des sujets souffrant de diarrhees
RU2773404C2 (ru) Смеси олигосахаридов грудного молока (огм) для применения у младенцев или детей младшего возраста в медицинских целях
WO2025099321A1 (fr) Compositions comprenant des oligosaccharides de lait humain et des cellules inactivées d&#39;un micro-organisme
FR3078610A1 (fr) Composition de probiotiques particuliers et utilisation pour diminuer les symptomes inflammatoires digestifs
HK1256277A1 (en) Nutritional compositions comprising lactobacillus rhamnosus gg, as well as dietary butyrate and/or a compound for stimulating formation of endogenous butyrate

Legal Events

Date Code Title Description
PLFP Fee payment

Year of fee payment: 2

PLFP Fee payment

Year of fee payment: 3