FR3155714A1 - Association d’extraits de rose et peptide pour la nutrition de la peau - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne l’utilisation cosmétique non thérapeutique d’une association d’actifs cosmétiques pour favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et/ou des lèvres, favoriser et/ou améliorer l’hydratation de la peau, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité du teint et/ou de la peau, caractérisée en ce que l’association d’actifs comprend : (i) un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable ; (ii) un extrait de roses sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée, obtenu à partir de roses fraiches de la variété Evanrat, et (iii) un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8.

Description

Association d’extraits de rose et peptide pour la nutrition de la peau DOMAINE DE L'INVENTION

La présente invention concerne une utilisation cosmétique d’une association d’actifs cosmétiques pour favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et/ou des lèvres, favoriser et/ou améliorer l’hydratation de la peau, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité du teint et/ou de la peau. L’invention porte aussi sur un procédé cosmétique non thérapeutique de soin et/ou de maquillage de la peau et/ou des lèvres pour favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et/ou des lèvres comprenant l’application sur ladite peau et/ou lesdites lèvres, en particulier la peau, d’une composition cosmétique selon l’invention.

ETAT DE LA TECHNIQUE

La peau est la première barrière de protection de l'organisme vis-à-vis de l'environnement. Le maintien de son intégrité est donc essentiel. On sait que la nutrition joue un rôle essentiel sur la qualité de la peau, notamment grâce aux conséquences cutanées observées lors de carences nutritionnelles. Par exemple, une carence de vitamine C entraine une décoloration cutanée et une mauvaise réparation de la peau.

Les composants structurels de la peau proviennent de nutriments comme les petits peptides, les minéraux, les vitamines, qui peuvent servir de cofacteurs, d’activateurs ou d’inhibiteurs d’enzymes. De plus, la peau est constamment exposée aux UV, et de facteurs pro-oxydants, ce qui justifie l’intérêt de vitamines antioxydantes pour une bonne fonction cutanée.

Les nutriments proviennent de la vascularisation sanguine présente dans le derme, mais dont l’épiderme est dépourvu. Ainsi, les couches supérieures de la peau dépendent de l’apport nutritionnel des couches inférieures. Les nutriments doivent donc voyager dans les différentes couches de l’épiderme, mais également au cœur des cellules et dans leurs organelles. Les cellules humaines sont enveloppées par une membrane, une bicouche phospholipidique qui sépare deux compartiments aqueux : l’espace extracellulaire et l’espace intracellulaire. Des protéines spécialisées qu’on appelle transporteurs sont dédiées aux échanges de nutriments à travers cette membrane, et/ou pour atteindre les organelles intra cellulaires. Différentes classes de transporteurs existent, pour distribuer différentes classes de nutriments : les acides aminés, les lipides, les vitamines, les minéraux, mais également l’eau. Il existe également les récepteurs de nutriments, qui une fois lié à leur ligand permettent de déclencher une réponse intracellulaire essentielle. Or, l’expression de ces transporteurs peut être impactée par divers stress qui perturbent l’homéostasie cutanée : par exemple le stress oxydant. Une diminution de ces transporteurs va impacter les échanges de nutriments et donc la nutrition de la peau.

Il existe donc un besoin d’actifs stimulant l’expression des différentes classes de transporteurs pour favoriser et/ou améliorer la distribution des nutriments dans les couches supérieures de la peau.

De manière inattendue, la Demanderesse a mis en évidence un effetin vitrosur l’expression de ces transporteurs par un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat. Elle a également démontré un effet synergique sur l’expression de ces transporteurs entre le peptide Acetyl Hexapeptide-8, un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat et un extrait de roses sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée obtenue à partir de roses fraiches de la variété Evanrat.

La présente invention porte donc sur l’utilisation cosmétique non thérapeutique d’une association d’actifs cosmétiques pour favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et/ou des lèvres, favoriser et/ou améliorer l’hydratation de la peau, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité du teint et/ou de la peau, caractérisée en ce que l’association d’actifs comprend :

(i) un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable ;

(ii) un extrait de roses sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée, obtenu à partir de roses fraiches de la variété Evanrat, et

(iii) un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8.

L’invention porte également sur un procédé cosmétique non thérapeutique de soin et/ou de maquillage de la peau et/ou des lèvres pour favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et/ou des lèvres comprenant l’application sur ladite peau et/ou lesdites lèvres, en particulier la peau, d’une composition cosmétique comprenant :

1. un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable ;
2. un extrait de roses sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée, obtenu à partir de roses fraiches de la variété Evanrat, et
3. un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8.

L’invention porte en outre sur l’utilisation cosmétique non thérapeutique d’un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat (i), obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable, pour favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et/ou des lèvres.

DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Utilisation de l’association selon l’invention

Ainsi, la présente invention porte donc notamment sur l’utilisation cosmétique non thérapeutique d’une association d’actifs cosmétiques pour favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et/ou des lèvres, favoriser et/ou améliorer l’hydratation de la peau, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité du teint et/ou de la peau, caractérisée en ce que l’association d’actifs comprend :

(i) un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable ;

(ii) un extrait de roses sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée, obtenu à partir de roses fraiches de la variété Evanrat, et

(iii) un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8.

Les roses ou rosiers utilisés comme matériel végétal pour la préparation des extraits utilisés selon l’invention correspondent au rosier ou rose ‘Jardin de Granville®’, une variété hybride proposée exclusivement par « Roses anciennes André Eve S.A.S » et protégée par Certificat d’Obtention Végétale sous le N°20110345 avec pour espèce la dénomination Rosa L. et pour la variété la dénomination EVANRAT. Ce rosier buisson appartient au groupe des hybrides modernes, qui, de mai à octobre, se couvre de roses en permanence, montrant ainsi un excellent caractère remontant.

Extrait de bois de rose et procédé de préparation

L’extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat ou rose ‘Jardin de Granville®’, de préférence de bois de rose d’été, utilisé selon l’invention est obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable, selon les techniques décrites dans la demande FR3090380.

On parlera indifféremment d’extrait aqueux de bois de rose ou de bois de rosier ou d’extrait polaire de bois de rose ou de bois de rosier ou d’extrait hydrophile de bois de rose ou de bois de rosier ou d’éco-extrait obtenu par un procédé d’éco-extraction de bois de rose ou de bois de rosier dans la description.

L’expression « solvant polaire » signifie que le solvant a une valeur d’indice de Polarité qui est égale ou supérieure à une valeur de 4. L’indice de polarité est une grandeur calculée sur la base de grandeurs thermodynamiques (de solubilité et de changement d’état) qui met en évidence le caractère plus ou moins polaire d’une molécule. On se reportera, pour les indices de polarité des solvants, à l'article de L.R. SNYDER : Classification of the solvent properties of common liquids ; Journal of Chromatography, 92 (1974), 223-230.

Les solvants polaires préférés sont ceux constitués d’un composé comprenant au moins une liaison covalente polaire de type O-H.

A titre de solvant polaire cosmétiquement acceptable, on choisit un solvant ou un mélange de solvants choisi(s) parmi l’eau, les alcools en C₁-C₄, tel que l’éthanol, les glycols, tels que l’éthylène glycol, le glycérol, le butylèneglycol et le propylèneglycol, et leurs mélanges. De préférence, on utilise l’eau.

Selon un mode particulier, ledit extrait aqueux de bois de rose est caractérisé en ce qu’il comprend de l’eau en une teneur allant de 94 à 96%, une teneur en extrait sec allant de 3 à 5% et des conservateurs en une teneur allant de 0,5 à 1% en poids par rapport au poids total de l’extrait.

Matériel végétal

On distingue deux types de bois de rose selon le moment de l’année où ils sont récoltés :

• Les bois d’hiver, généralement récoltés entre les mois de novembre et d’avril, et
• Les bois d’été, généralement récoltés entre les mois de mai et d’octobre.

Selon un mode particulier et préféré, on utilisera des bois d’été. On parlera indifféremment dans la description de bois de rose ou bois de rose d’été.

Les bois de rose selon l’invention sont obtenus à partir de roses entières fraichement coupées et sont isolés du reste de la plante par séparation manuelle ou mécanique.

Dans un mode de réalisation particulier, les bois de rose sont directement utilisés en vue de l’extraction.

Dans un autre mode de réalisation, les bois de rose sont préalablement séchés avant extraction.

Selon un mode particulier et préféré, le bois de rose est broyé préalablement à l’étape d’extraction.

Les bois de rose comprennent des sucres monosaccharides (fructose, glucose), et polysaccharides en particulier disaccharides, des polyphénols (catéchine), des acides aminés (majoritairement acide aspartique tyrosine et arginine), des minéraux (cendres, sodium, potassium, calcium), des flavonoïdes (pour la plupart glycosylés) et des tanins.

En particulier, le calcium améliore la différenciation épidermique et renforce la structure de la peau, tandis que le potassium amplifie l’hydratation cutanée et booste l’assimilation de l’énergie. Les phytosucres (fructose, glucose) sont destinés à gorger les cellules cutanées d’énergie.

L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention est un extrait concentré en composés naturels polaires. L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention est distinct d’une eau de rose. Il s’agit ici d’un extrait de bois de rose mettant en œuvre l’extraction de composés naturels de bois de rose en présence de solvants aqueux (polaire) avec ou sans ajout de modificateur de pH, et une mise en œuvre, dans la formulation, sous la forme d’une solution ou concentré aqueux, le solvant du concentré pouvant être le solvant d’extraction et/ou un solvant additionnel.

Selon un mode particulier, l’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention comprend en outre en faible proportion un extrait de fleurs de rose représentant de 0,01 à 1%, de préférence de 0,05 à 0,5%, de préférence 0,1 à 0,2% de l’extrait aqueux total de rose selon l’invention. Dans ce mode de réalisation, le matériel végétal d’origine comprend des bois de rose et des fleurs de rose dans une proportion 0,01% fleurs pour 99,99% de bois à 1% fleurs pour 99% de bois.

Procédé d’extraction

L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention peut être obtenu selon différents procédés d’éco-extraction connus de l’homme du métier et notamment celui décrit ci-après.

Selon un mode particulier et préféré, on utilisera comme matériel végétal dans les procédés d’extraction adaptés à l’invention décrits ci-après, des bois de rose de la variété Evanrat, de préférence la rose Jardin de Granville®, de préférence des bois de rose préalablement séchés.

Les bois peuvent être utilisés frais, congelés ou préalablement séchés à l’aide d’outils de séchage conventionnels et connus de l’homme du métier, comme par exemple le séchage à l’air libre, en étuves, par lyophilisation ou zéodratation. Ainsi, selon un mode de réalisation, et préalablement à l’étape d’extraction elle-même, les bois peuvent avoir été séchés et/ou broyés. Selon un autre mode de réalisation, les bois sont utilisés humides puis broyés.

Selon un mode particulier, les bois sont broyés avant extraction, par exemple au moyen d’un mortier, d’un cryobroyage, d’un mixeur, d’un broyeur traditionnel ou d’un centrifugeur selon les méthodes connues de l’homme du métier.

L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention peut être obtenu en particulier selon des procédés d’extraction enzymatique.

Selon les molécules que l’on cherche à extraire, les enzymes seront adaptées aux parois à hydrolyser pour accéder à ces dites molécules. Avantageusement, on pourra notamment utiliser des enzymes de type cellulase, hémicellulase, pectinase ou protéase, seules ou en combinaison.

On pourra ainsi utiliser une cellulase pour libérer le glucose et la cellulose ; une hemicellulase pour libérer les mono et oligomères de sucres réduits ; une pectinase pour libérer les acides uroniques ; et avantageusement une protéase pour hydrolyser les protéines de structure et améliorer la lyse de la matière première.

Dans un mode de réalisation préféré, l’éco-extraction est réalisée au moyen du protocole décrit dans la demande de brevet WO2011045387 (correspondant à la demande de brevet FR2351461) au nom de l’Institut National Polytechnique de Lorraine INPL. Il s’agit d’une technologie alternative répondant aux contraintes réglementaires et environnementales tout en restant compétitif économiquement. Ce procédé innovant, permet d’extraire de la matière végétale, en une seule étape, trois types de produits à savoir une huile (riche en nutriments polyphénols, stérols, vitamine E…), un extrait aqueux ainsi qu’un tourteau (phase solide).

Ainsi, dans un mode de réalisation de l’invention, l’extrait aqueux de bois de rose de l’utilisation selon l’invention est obtenu par un procédé d’extraction enzymatique comprenant les étapes :

a) addition d'eau au bois de rose préalablement broyé,

b) addition d'un mélange enzymatique contenant au moins une cellulase, au moins une hémicellulase et au moins une pectinase, et avantageusement en outre au moins une protéase,

c) incubation sous agitation du bois de rose préalablement broyé et du mélange enzymatique pour libérer dans le milieu réactionnel des huiles, des protéines et des sucres fermentescibles,

d) séparation du milieu réactionnel pour obtenir de l'huile libre, une phase aqueuse contenant des protéines et des sucres fermentescibles, et une phase solide, et

e) séparation de la phase aqueuse et ajout éventuel de conservateurs.

Ledit extrait de bois de rose utilisé selon l’invention étant obtenu après l’étape de séparation (e).

Selon un mode particulier, à l’étape a), la taille de particule appropriée de la matière végétale est avantageusement obtenue par broyage de ladite matière végétale. Le broyage doit être le plus fin possible pour favoriser l'action des enzymes. Idéalement, toutes les particules doivent avoir une taille proche de 50 µm, de préférence proche de 10 µm.

De préférence, la masse d'eau ajoutée à la matière végétale est égale à 1 à 2 fois la masse de ladite matière végétale et ne dépasse pas cette quantité.

En particulier à l’étape b), le rapport entre l'activité de la pectinase et l'activité de la cellulase étant d'au moins 0,14, de préférence compris entre 0,3 et 2,5, et plus préférentiellement entre 0,35 et 0,45, et le rapport entre l'activité de la pectinase et l'activité de l'hémicellulase étant d'au moins 7.10^-3; de préférence compris entre 1.10^-2et 0,5, et plus préférentiellement entre 1.10^-2et 2.10^-2.

Plus particulièrement, le mélange enzymatique utilisé contient au moins une cellulase, au moins une hemicellulase, au moins une pectinase, et avantageusement en outre au moins une protéase. Selon un mode particulier, la ou les cellulase(s), hemicellulase(s) et pectinase(s) représentent 75% du mélange enzymatique et la ou les protéase(s) représentent 25% dudit mélange enzymatique. Selon un mode particulier, les cellulases sont présentes en une teneur allant de 1 à 50%, de préférence de 20 à 30% en poids du mélange enzymatique, les hémicellulases sont présentes en une teneur allant de 1 à 50%, de préférence de 20 à 30% en poids du mélange enzymatique et les pectinases sont présentes en une teneur allant de 1 à 50%, de préférence de 20 à 30% en poids du mélange enzymatique. Et avantageusement les protéases sont présentes en une teneur allant de 1 à 50%, de préférence de 20 à 30% en poids du mélange enzymatique.

Dans un mode de réalisation préféré le mélange enzymatique utilisé contient 25% de cellulases, 25% d’hémicellulases, 25% de pectinases et 25% de protéases.

De préférence, la quantité utilisée du mélange enzymatique tel que défini ci-dessus est comprise entre 0,25% et 10%, de préférence entre 1 % et 6%, en volume du mélange eau/matière végétale.

Avantageusement, l'incubation selon l'étape c) est réalisée pendant 2 à 20 heures, de préférence entre 4 et 12 heures, à une température comprise entre 25°C et 75°C, de préférence entre 40°C et 60°C, et de préférence autour de 50°C.

La réaction d'hydrolyse est ensuite stoppée par désactivation des enzymes par chauffage de préférence entre 80°C et 105°C pendant par exemple 5 à 20 minutes

Puis le milieu réactionnel est séparé, selon l'étape d), en utilisant toutes les techniques de séparation connues adaptées, telle que la centrifugation ou la décantation.

Selon un mode particulier, le mélange est préfiltré sur tamis de 0.8mm puis 0.5mm afin de retirer la partie le plus importante de la phase solide, puis une filtration stérilisante est avantageusement réalisée sur plaques clarifiantes d’une taille de pores de 0.2µm, à une pression de 2 Bars.

La phase aqueuse obtenue après filtration stérilisante est stabilisée avec les conservateurs (acide citrique, sorbate de potassium, benzoate de sodium).

Selon un mode de réalisation particulier, l’extrait aqueux de bois de rose utilisé dans l’association de l’invention ou dans la composition de l’invention est obtenu par un procédé d’extraction enzymatique comprenant les étapes :

a) addition d'eau au bois de rose préalablement broyé présentant une taille de particule appropriée,

b) addition d'un mélange enzymatique contenant au moins une cellulase, au moins une hémicellulase et au moins une pectinase, et avantageusement en outre au moins une protéase,

c) incubation sous agitation du bois de rose préalablement broyé et du mélange enzymatique pour libérer dans le milieu réactionnel des huiles, des protéines et des sucres fermentescibles, pendant une durée dépendant des rendements recherchés,

d) séparation du milieu réactionnel pour obtenir de l'huile libre, une phase aqueuse contenant des protéines et des sucres fermentescibles, et une phase solide,

e) séparation de la phase aqueuse et ajout éventuel de conservateurs.

L’extrait aqueux de bois de rose utilisé dans l’association de l’invention ou dans la composition de l’invention est caractérisé notamment par la présence d’acides aminés (acide aspartique, tyrosine, arginine) et de sucres totaux (glucose, fructose).

En particulier, selon un mode de réalisation, l’extrait aqueux de bois de rose utilisé dans l’association de l’invention ou dans la composition de l’invention est caractérisé en ce qu’il comprend des acides aminés parmi l’acide aspartique, la tyrosine et/ou l’arginine, et des sucres parmi le glucose et/ou le fructose.

L’extrait aqueux de bois de rose utilisé selon l’invention se caractérise également par le fait qu’il ne s’agit pas d’un extrait fermenté.

Selon un mode particulier, l’extrait aqueux de bois de rose utilisé selon l’invention comprend de l’eau en une teneur allant de 94 à 96%, une teneur en extrait sec allant de 1 à 6% et préférentiellement de 3 à 5% et des conservateurs en une teneur allant de 0,5 à 1% en poids par rapport au poids total de l’extrait. Cet extrait de bois de rose selon l’invention est dénommé en nom INCI water (and) rose extract (and) citric acid (and) potassium sorbate (and) sodium benzoate.

L’extrait aqueux de bois de rose de la composition selon l’invention sera généralement présent en une teneur allant de 0,01 à 10%, en particulier de 0,05 à 5% en poids par rapport au poids total de la composition.

Hexapeptide

L’association de l’invention et les compositions de l’invention comprennent également un hexapeptide, en particulier un hexapeptide de nom INCI : Acetyl hexapeptide 8.

De préférence, l’acetyl hexapeptide 8 est celui commercialisé par la société LIPOTEC sous la dénomination ARGIRELINE® Amplified peptide de nom INCI : WATER and ACETYL HEXAPEPTIDE-8 and SODIUM BENZOATE. Le produit commercial ARGIRELINE® Amplified peptide comprend 0,05% de peptide.

Selon un mode particulier, le produit commercial ARGIRELINE® Amplified peptide contenant l’acetyl hexapeptide-8 est présent dans la composition de l’invention en une teneur allant de 0,1% à 10% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 0,5% à 5% et de préférence encore de 1% à 3% en poids par rapport au poids total de la composition.

En particulier l’acetyl hexapeptide-8 est présent dans la composition de l’invention en une teneur en peptide allant de 0,00005% à 0,005% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 0,00025% à 0,0025%, et de préférence encore de 0,0005% à 0,0015% en poids par rapport au poids total de la composition.

Extrait de roses sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée et procédé de préparation

Par « extrait de roses sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée », « fraction sérique bioactive » ou « fraction bioactive isolée de roses », « sérum de rose », « Sérum Rose De Granville® », « Zeta » ou « Zeta fraction », on entend un extrait de roses de la variété Evanrat, ou rose ‘Jardin de Granville®’, comprenant les enzymes, protéines, sucres, ions et autres molécules actives présentes dans le cytosol des cellules composant les différents tissus végétaux des roses. L’extrait selon l’invention est distinct d’un cryoextrait de pétales roses tel que décrit dans la demande FR3066388.

Matériel végétal

L’extrait de roses sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée utilisé selon l’invention peut être préparée à partir de roses fraiches de la variété Evanrat, ou roses ‘Jardin de Granville®’, congelées, lyophilisées, ou d’un mélange quelconque de celles-ci. Dans le contexte de l’invention, on utilise de préférence des roses fraiches.

Selon un mode particulier, on utilisera des roses d’été pour préparer la fraction sérique bioactive isolée de roses, en particulier des pétales de roses d’été. Selon un autre mode, on utilisera de préférence, des roses d’hiver, en particulier des pétales de roses d’hiver.

Il est particulièrement avantageux d’utiliser les pétales des roses de la variété Evanrat car ils sont riches en sucres monosaccharides (fructose, glucose, saccharose), des acides organiques (acide citrique, acide malique), des polyphénols (catéchine), de la vitamine C, des acides aminés (majoritairement acide aspartique, acide glutamique, asparagine et glutamine), des minéraux (cendres, potassium, calcium), et des caroténoïdes.

Par riche en sucres monosaccharides, on entend un extrait de roses sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée, dans lequel ledit extrait comprend au moins 500 µg/µL d’au moins un sucre monosaccharide choisi parmi le fructose, glucose et le saccharose.

Par riche en minéraux, on entend un extrait de roses sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée, dans lequel ledit extrait comprend au moins 500 mg/Kg d’au moins un minéral choisi parmi le potassium, le calcium et le sodium.

Ainsi, selon un mode de réalisation, l’extrait de roses de la variété Evanrat sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée, utilisée dans l’association de l’invention ou la composition de l’invention comprend au moins 500 µg/µL d’au moins un sucre monosaccharide choisi parmi le fructose, glucose et le saccharose, et/ou au moins 500 mg/Kg d’au moins un minéral choisi parmi le potassium, le calcium et le sodium.

Avantageusement, le calcium améliore la différenciation épidermique et renforce la structure de la peau, tandis que le potassium amplifie l’hydratation cutanée et booste l’assimilation de l’énergie. Les phyto-sucres (fructose, glucose, saccharose) permettent de gorger les cellules cutanées d’énergie.

Procédé d’extraction

On utilise comme matériel végétal des roses fraiches de la variété Evanrat ou roses ‘Jardin de Granville®’. Selon un mode préféré, il s’agit des pétales frais de roses de la variété Evanrat ou roses ‘Jardin de Granville®’.

Avantageusement, ledit procédé ne requiert l’ajout d’aucun solvant ou liquide exogène.

Le procédé mis en œuvre pour obtenir la fraction sérique bioactive isolée utilisée selon l’invention comprend les étapes principales de :

a) Nettoyage du matériel végétal, macération, pressage puis séparation mécanique du matériel végétal pour obtenir une dispersion colloïdale intracellulaire (DCI) et un matériau enrichi en fibres (fraction A) ;

b) « Traitement A » puis séparation mécanique de la Dispersion Colloïdale Intracellulaire (DCI) pour obtenir le Surnageant A et une Fraction Membranaire (Fraction B) ;

c) « Traitement B » puis séparation mécanique du Surnageant A pour obtenir le Surnageant B et la Fraction C (Fraction Cytoplasmique) ;

d) « Traitement C » puis séparation mécanique du Surnageant B pour donner une « Fraction sérique bioactive » et une Fraction D (Précipité) ; et

e) Optionnellement, mélange de la « fraction sérique bioactive » avec au moins un conservateur et/ou stabilisant.

L’extrait de roses fraiches, de préférence de pétales de roses frais, de la variété Evanrat ou rose ‘Jardin de Granville®’ obtenu à l’issue de ce procédé, est une « fraction sérique bioactive » ou « fraction bioactive » au sens de l’invention.

Par « nettoyage » on entend l'élimination des débris des roses de Granville® fraîches, et de préférence des pétales frais, avant un traitement ultérieur, d'une manière qui évite de blesser la plante, ou l'élimination de composants précieux. Par exemple, il peut être effectué par rinçage à basse pression avec de l'eau potable dans des conditions où le lavage à l'eau de ruissellement ne contiendrait pas sensiblement de pigments végétaux. L'excès d'eau de lavage est ensuite éliminé des plantes lavées.

Par « macération » on entend le fait de transformer les roses de Granville® fraîches, et de préférence les pétales frais, en particules plus petites pour rompre leur intégrité et faciliter par la suite l'expulsion de la dispersion colloïdale intracellulaire (DCI) liquide. Des exemples d'instruments de macération appropriés comprennent, sans s'y limiter, des dispositifs tels qu'un concasseur, une meule ou un broyeur (par exemple, un broyeur à couteaux, un broyeur à marteaux, etc.). Pour éviter une dégradation du matériel végétal induite par la température, l'étape de macération peut inclure une surveillance de la température et la sélection des paramètres de macération garantissant qu'il n'y a pas d'augmentation significative de la température du matériel végétal au cours de cette étape.

Par « pressage » on entend la séparation de la matière liquide des roses de Granville® fraîches, et de préférence des pétales frais, par application d'une force mécanique. Cela inclut, mais sans s'y limiter, des techniques telles que le drainage par gravité ambiante, le pressage par un objet lourd, la force centrifuge d'un expulseur rotatif, la pression du piston d'une presse hydraulique, ou des rouleaux ou une vis de type approprié pour une presse.

Par « matériau enrichi en fibres » ou « MEF » ou « FEM » (Fibre Enriched Material), on entend une fraction solide et/ou semi-solide enrichie en fibres de roses de Granville® fraîches, de préférence de pétales frais, dont la dispersion colloïdale intracellulaire (DCI) liquide a été éliminée par pressage.

Par « dispersion colloïdale intracellulaire » ou « DCI » ou « ICD » (Intracellular Colloidal Dispersion) on entend la matière liquide expulsée par pressage de roses de Granville® fraîches, de préférence des pétales frais. Le liquide résultant contient des particules solides et/ou semi-solides dispersées et, potentiellement, des gouttelettes de liquides non miscibles à l'eau de diverses tailles (collectivement appelées particules), dans un milieu aqueux contigu. Les particules sont principalement constituées d'organites de cellules végétales, de fragments d'organites et de matières résiduelles enrichies en fibres. Le milieu aqueux est principalement constitué de cytosols et de vacuoles.

Par « séparation » on entend la séparation de particules solides et/ou semi-solides, et de gouttelettes de liquide non aqueux à partir d'un liquide aqueux en exploitant la densité et/ou la taille des particules. Cela inclut, mais sans s'y limiter, des techniques telles que l’égouttage, la filtration (y compris la filtration utilisant un gradient de pression), l'écumage, la sédimentation par gravité ambiante, la décantation, la centrifugation ou une combinaison de ce qui précède. De préférence, on utilisera la séparation mécanique en flux continu, mais cela n'exclut pas le traitement par lots. « Séparation 1 » et « Séparation 2 » se réfèrent aux étapes respectives du procédé, effectuées avec des paramètres respectifs.

Par « surnageant », il est fait référence à un matériau aqueux à partir duquel des particules ont été séparées. « Surnageant A » et « Surnageant B » désignent les surnageants résultant des étapes de séparation respectives du procédé.

Par « précipité », il est fait référence aux particules à partir desquelles un matériau aqueux a été séparé. « Fraction B » et « Fraction C » désignent les précipités résultant des étapes de séparation respectives du procédé.

Les termes « fraction de sérum de roses de Granville® fraîches » et « fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® » désignent des compositions produites par le procédé tel que représenté ci-dessus sans conservateurs et/ou stabilisants ajoutés pour protéger la composition de l'ingrédient contre les facteurs environnementaux tels que la température, l'atmosphère (par exemple, l'oxygène), la lumière et les micro-organismes.

Par « conservateurs et/ou stabilisants » on entend des substances qui, lorsqu'elles sont ajoutées à une « fraction de sérum de roses de Granville® fraîches », de préférence une « fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® », la protègent contre les facteurs environnementaux tels que la température, l'atmosphère (par exemple l'oxygène), la lumière et les micro-organismes. Des substances appropriées particulières peuvent comprendre, sans limitation, un conservateur, un stabilisant et/ou un mélange de ceux-ci.

Le terme « sérum de roses de Granville® » ou « extrait de roses de Granville® fraîches » tel qu'utilisé ici signifie une combinaison d'une fraction de sérum de roses de Granville® fraîches et de conservateurs et/ou de stabilisants.

Le terme « sérum de pétales de roses de Granville® » ou « extrait de pétales frais de roses de Granville® » tel qu'utilisé ici signifie une combinaison d'une fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® et de conservateurs et/ou de stabilisants. Dans un mode de réalisation préféré, l’extrait utilisé selon l’invention est obtenu par la mise en œuvre du procédé d’extraction divulgué dans les brevets EP2919757, JP 6130924, CN ZL201380057567.6, EP2491939B1, CN1929851B, les brevets américains n° 8 734 861 et n° 7 473 435 ; la demande de brevet US n° 16/078925.

De préférence, les fleurs de roses (Roses de Granville®) et 4 à 5 cm de tige sont récoltés de manière à éviter le hachage ou l’écrasement de la biomasse collectée pour éviter la perturbation de la structure cellulaire des fleurs. La viabilité des plantes collectées peut être testée à l’aide d’un fluoromètre à chlorophylle multimode OS5p (Opti-Sciences Inc, Hudson, NH, États-Unis).

Selon un mode de réalisation particulier les fleurs fraîches vivantes, y compris les pétales, le pistil et l’étamine, ont été retirées de la tige, y compris le sépale et le réceptacle, et emballées dans des sacs de stockage et sont placé(e)s immédiatement à des températures négatives comprises entre -20°C et -80°C, comme par exemple -20°C, -40°C ou -60°C. Les fleurs peuvent ainsi être stockées sur de longues périodes, comme par exemple plusieurs mois, ou plusieurs années, avant d’être utilisées aux fins du procédé d’extraction.

Selon un mode de réalisation préféré, les fleurs fraîches vivantes, y compris les pétales, le pistil et l’étamine, sont retirées de la tige, y compris le sépale et le réceptacle, et emballées dans des sacs de stockage et placées dans un stockage à une température comprise entre 0 et 20°C et de préférence à une température comprise entre 2 et 6°C jusqu’à ce que la récolte soit terminée.

Etape a

Une fois la récolte terminée, les roses, de préférence les pétales de roses, sont immédiatement rincés par pulvérisation avec de l'eau de 10°C à 15°C pendant 0,1 à 0,3 minutes avec un débit de 5 à 6 litres par minute. L'excès d'eau est de préférence éliminé des fleurs rincées en les laissant égoutter pendant au moins 1 minute. Les fleurs rincées peuvent alors subir une macération, un pressage et une séparation par pressage mécanique, à rouleaux, hydrauliques, ou extracteur à jus pour extraire le contenu de la dispersion colloïdale intercellulaire liquide (DCI) du matériau enrichi en fibres (« Fraction A »).

A l’issue de ces étapes, le rendement de la fraction A est compris entre 30% et 65%, de préférence entre 35% et 60% et de manière encore préférée entre 40 % et 55 % (poids/poids).

Le DCI comprend typiquement de 2% à 20% de matière sèche, de préférence de 4% à 16% de matière sèche, et de manière encore préférée de 6 % à 12 % de matière sèche.

A cette étape, le DCI peut être congelé pour stockage. Typiquement, il est congelé à -20°C.

Etape b

Lorsque le DCI a été congelé pour stockage, il doit préalablement être décongelé doucement. Typiquement, il est placé à décongeler à 4°C ou dans de la glace.

Le « traitement A » est réalisé par un traitement de déstabilisation du DCI avec des ondes électromagnétiques produites à partir de magnétrons fonctionnant à une fréquence comprise entre 2,45 et 5,8 GHz. Les paramètres du traitement de déstabilisation sont fixés pour obtenir la diminution de la valeur de la composante réelle de la constante diélectrique basse fréquence (ε'o) d'environ 20 Farads par mètre (F/m) par rapport à sa valeur avant le traitement. Ce traitement dégrade la stabilité du DCI en provoquant l'agglomération et/ou l'agrégation de particules (c'est-à-dire des organites, fragments d'organites, matière fibreuse résiduelle) en assemblages suffisamment grands et stables pour permettre et/ou améliorer la séparation mécanique.

En effet, on considère la suspension colloïdale intracellulaire obtenue comme une dispersion colloïdale relativement stable composée d'une phase continue (cytoplasme et contenu de vacuoles) et d'une phase dispersée (organites suspendus et leurs fragments). Selon la théorie de Derjaguin-Laundau-Verwey-Overbeek (DLVO), cette stabilité est maintenue par la somme des forces attractives de van der Waals et des forces répulsives des doubles couches électriques. La barrière énergétique résultant de la force répulsive empêche les particules de la phase dispersée de s'approcher à moins qu'elles n'aient suffisamment d'énergie pour surmonter cette barrière, auquel cas la force d'attraction les mettra en contact (elles adhéreront alors de manière irréversible). La théorie DLVO décrit l'interaction et l'énergie potentielle des particules en fonction de leurs paramètres, de leur distance les unes des autres et des caractéristiques de la phase continue. La modification des valeurs des variables affectant la force répulsive affecte la stabilité de la dispersion. Dans des conditions normales de stabilité colloïdale, une augmentation de l'énergie potentielle à mesure que les particules s'approchent les unes des autres constitue une barrière énergétique potentielle qu'il est impossible de surmonter sans apport énergétique externe. Cette barrière énergétique maintient les particules séparées et la dispersion stable. Les conditions modifiées lors du traitement A, permettent à la force de répulsion de la double couche de diminuer au point qu’il il n'existe plus de barrière énergétique potentielle et que les particules peuvent s'approcher et s'agglomérer librement.

Le rétablissement des conditions initiales ne rend pas la stabilité, car les particules se sont irréversiblement agglomérées. Elles sont ainsi facilement éliminables par des moyens mécaniques (Koganov et coll., sofw journal 2017).

De préférence, à l’issue du « traitement A », on réalise l’étape de séparation mécanique du DCI par centrifugation afin de produire le « Surnageant A » et la « Fraction B ».

Typiquement, le "surnageant A" a une turbidité inférieure à environ 100 NTU.

La « fraction B » comprend typiquement de 10% à 30% de matière sèche, de préférence de 13% à 27% de matière sèche, et de manière encore préférée environ 15,0 % à 25,0 % de matière sèche.

Etape c

Le « traitement B » est réalisé par ajustement du niveau de pH dans le « surnageant A » par titrage avec, par exemple, un alcali jusqu'à obtenir un pH supérieur à 6, de préférence un pH allant de 6,5 à 7,5. Typiquement, on utilisera comme alkali préféré le carbonate de potassium.

A l’issue du « traitement B », on réalise de préférence l’étape de séparation mécanique du « Surnageant A » par centrifugation afin de produire le « Surnageant B » et la « Fraction C ».

La « fraction C » comprend typiquement de 5% à 25% de matière sèche, de préférence de 8% à 22% de matière sèche, et de manière encore préférée environ 10,0% à 20,0% de matière sèche.

Etape d

Le « traitement C » est réalisé par ajustement du niveau de pH dans le « surnageant B », notamment par titrage avec, par exemple, de l'acide jusqu’à obtenir un pH inférieur à 4,5. Typiquement, on utilisera comme acide préféré une solution d’acide citrique.

A l’issue du « traitement C », on réalise de préférence l’étape de séparation mécanique du « Surnageant B » par centrifugation afin de produire la « Fraction sérique bioactive » ou « fraction de sérum de roses de Granville® fraîches », de préférence la « fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® » et la « Fraction D » (Extrait Non Conservé).

La « fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® » comprend typiquement de 2% à 20% de matière sèche, de préférence de 4% à 16% de matière sèche, et de manière encore préférée de de 6,0% à 10,0% de matière sèche.

Etape e

Selon certains modes de réalisation, la fraction de sérum obtenue à l’issue de l’étape d) est mélangée avec au moins un conservateur ou au moins un stabilisant pour donner un ingrédient fini, ou avec une combinaison de ceux-ci pour donner l'extrait de roses de Granville® fraîche ou « Sérum Rose De Granville® », de préférence l'extrait de pétales frais de roses de Granville® ou « Sérum de pétales de Roses De Granville® ».

Des agents stabilisants particulièrement appropriés peuvent comprendre, sans limitation, un conservateur, un stabilisant et/ou des mélanges de ceux-ci. Les conservateurs et stabilisants appropriés à utiliser dans la présente invention comprennent, sans s'y limiter, le sorbate de potassium, le benzoate de sodium, le métabisulfite de sodium, la glycérine, le propylène glycol, le dipropylène glycol, le butylène glycol, le pentylène glycol, l'hexylène glycol et le caprylyl glycol. Dans un mode de réalisation particulier, les agents stabilisants peuvent comprendre au moins un conservateur, au moins un stabilisant, au moins un antioxydant ou leurs mélanges.

Ainsi, selon un mode de réalisation, la fraction sérique bioactive isolée de roses, obtenue à partir de roses fraiches de la variété Evanrat, utilisée dans l’association de l’invention ou la composition de l’invention est obtenue par le procédé comprenant les étapes de :

a) nettoyage du matériel végétal, macération, pressage puis séparation mécanique du matériel végétal pour obtenir une dispersion colloïdale intracellulaire (DCI) et un matériau enrichi en fibres (fraction A) ;

b) déstabilisation du DCI avec des ondes électromagnétiques puis séparation mécanique de la dispersion colloïdale intracellulaire (DCI) pour obtenir le surnageant A et une Fraction Membranaire (fraction B) ;

c) ajustement du niveau de pH dans le surnageant A jusqu'à obtenir un pH supérieur à 6, de préférence un pH allant de 6 à 7, puis séparation mécanique du surnageant A pour obtenir le surnageant B et la fraction C (fraction cytoplasmique) ;

d) ajustement du niveau de pH dans le surnageant B jusqu’à obtenir un pH inférieur à 4,5 puis séparation mécanique du surnageant B pour donner une « Fraction sérique bioactive » et une fraction D (précipité) ; et

e) Optionnellement, mélange de la « fraction sérique bioactive » avec au moins un conservateur et/ou stabilisant.

Selon un mode particulier, la fraction sérique bioactive isolée de roses, de préférence de pétales de roses, utilisée selon l’invention comprend de l’eau en une teneur allant de 90 à 94%, une teneur en extrait sec allant de 6 à 10%. Cette fraction sérique bioactive isolée de roses utilisée selon l’invention est dénommée en nom INCI Rosa Hybrid Flower Extract.

Selon un autre mode particulier, la fraction sérique bioactive isolée de roses, de préférence de pétales de roses, obtenue selon l’invention comprend de l’eau en une teneur allant de 89 à 93%, une teneur en extrait sec allant de 6 à 10% et des conservateurs et/ou stabilisants en une teneur allant de 0,3 à 1% en poids par rapport au poids total de l’extrait.

La fraction sérique bioactive isolée de roses pourra être présente dans l’association de l’invention ou la composition de l’invention en une teneur allant de 0,01 à 10% en poids, en particulier de 0,02 à 5% en poids par rapport au poids total de la composition.

Procédé cosmétique

L’invention porte aussi sur un procédé cosmétique non thérapeutique de soin et/ou de maquillage de la peau et/ou des lèvres comprenant l’application sur la peau et/ou les lèvres, en particulier la peau, d’une composition telle que définie selon l’invention.

Par « composition cosmétique » utilisée dans le procédé de l’invention, on entend toute composition à visée cosmétique, c’est à dire esthétique, pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain et plus particulièrement avec les matières kératiniques, en particulier la peau et/ou les lèvres, en particulier la peau du visage et/ou du cou.

Par « milieu physiologiquement acceptable » on entend tout excipient convenant à une utilisation topique, en contact avec les matières kératiniques, sans risque de toxicité, d'incompatibilité, d'instabilité et/ou de réponse allergique.

Le milieu physiologiquement acceptable représente généralement de 1 à 99% en poids, par rapport au poids total de ladite composition.

Par « utilisation topique » ou « application topique », on entend une composition destinée à une application sur les matières kératiniques. De fait, une composition orale n’est pas destinée à une application topique sur la peau.

Une composition pour l’application topique selon le procédé de l’invention pourra être par exemple sous forme d’une crème, émulsion huile-dans-eau, ou eau-dans-huile ou émulsion multiple, lotion, ou d’un sérum.

Dans un mode de réalisation préféré, ladite composition utilisée dans le procédé selon l’invention est sous la forme d’une crème ou d’un sérum.

La phase aqueuse de la composition selon l'invention comprend de l'eau et éventuellement un solvant hydrosoluble.

On entend par ‘solvant hydrosoluble’ selon l’invention, un composé liquide à température ambiante et miscible à l'eau (miscibilité dans l'eau supérieure à 50 % en poids à 25 °C et pression atmosphérique). On peut citer notamment :

• les mono-alcools inférieurs en C1-C5 tels que l'éthanol, l'isopropanol et leurs mélanges;
• les glycols en C2-C8 tels que l'éthylène glycol, le propylène glycol, le 1,3-butylène glycol, le dipropylène glycol, et leurs mélanges ;
• les polyols en C2-C32 tels que les polyglycérols, les polyéthylènes glycols, et leurs mélanges,

et leurs mélanges.

Elle peut comprendre également des gélifiants hydrophiles, des antioxydants, des conservateurs et leurs mélanges.

La composition cosmétique utilisée dans le procédé selon l’invention peut comprendre en outre une phase grasse (corps gras solides) ou huileuse.

On entend par « phase huileuse » une huile ou un mélange d'huiles miscibles entre elles, ou non. Par « huile », on entend, au sens de l'invention, un corps gras, non soluble dans l'eau, liquide à 25°C et pression atmosphérique. Ces huiles peuvent être volatiles ou non volatiles, végétale, minérale ou synthétique.

Une phase huileuse selon l’invention peut comprendre des huiles naturelles, hydrocarbonées, siliconées, et leurs mélanges.

La teneur en phase grasse ou huileuse dans la composition cosmétique de l’invention ira généralement de 0,2 % à 45 %, de préférence de 0,5 % à 30 %, et de préférence encore de 2 % à 25 % en poids par rapport au poids total de ladite composition.

La composition utilisée dans le procédé de l'invention peut également comprendre tout additif usuellement utilisé en cosmétique tels que des antioxydants, des parfums, des agents actifs cosmétiques, comme par exemple des agents émollients, des agents hydratants, des vitamines, des agents anti-âge, des agents liftants, des agents tenseurs, des agents repulpants, des agents éclaircissants, des charges, des nacres et leurs mélanges.

Ainsi selon un mode de réalisation particulier, la composition cosmétique utilisée dans le procédé cosmétique non thérapeutique selon l’invention est destinée à une application topique sur la peau et/ou les lèvres et en particulier sur la peau du visage et/ou du cou.

En particulier, selon un mode de réalisation, ladite composition cosmétique pour application topique sur la peau et/ou les lèvres, en particulier la peau du visage et/ou du corps, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait aqueux de bois de rose, une fraction sérique bioactive isolée obtenue à partir de rose fraiche, de l’Acetyl Hexapeptide-8, et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les antioxydants, les parfums, les agents émollients, les agents hydratants, les vitamines, les agents anti-âge, les agents liftants, les agents tenseurs, les agents repulpants, les agents éclaircissants, les charges, les nacres et leurs mélanges.

Selon un mode de réalisation particulier, le procédé cosmétique non thérapeutique de soin et/ou de maquillage de la peau et/ou des lèvres selon l’invention, pour favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et/ou des lèvres comprend l’application sur ladite peau et/ou lesdites lèvres, en particulier la peau, d’une composition cosmétique comprenant :

(i) un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable ;

(ii) un extrait de roses sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée, obtenu à partir de roses fraiches de la variété Evanrat, et

(iii) un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8.

Par « peau et/ou lèvres » selon l’invention, on entend notamment une peau et/ou des lèvres saines, c’est-à-dire ne présentant pas de troubles ou de désordres qui relèveraient d’un état pathologique (sujets ‘non sains’, atteints d’une pathologie).

Selon un mode particulier, l’application de la composition telle que définie selon l’invention sur la peau et/ou les lèvres permet de favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et/ou des lèvres.

Selon un autre mode de réalisation, le procédé cosmétique non thérapeutique selon l’invention est caractérisée en ce que la composition cosmétique comprend :

- de 0,01% à 10% en poids, en particulier de 0,05% à 5% en poids par rapport au poids total de ladite composition, de l’extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat (i) ;

- de 0,01% à 10% en poids, en particulier de 0,02% à 5% en poids par rapport au poids total de ladite composition, de l’extrait de roses de la variété Evanrat sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée (ii) ; et

- de 0,00005% à 0,005% en poids, en particulier de 0,00025% à 0,0025%, et plus particulièrement encore de 0,0005% à 0,0015% en poids par rapport au poids total de ladite composition, de l’hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8 (iii).

Selon un mode de réalisation préféré, ladite composition cosmétique utilisée dans le procédé cosmétique non thérapeutique selon l’invention est caractérisée en ce qu’elle est appliquée sur une peau impactée par un contexte nutritionnel défavorable ou déséquilibré.

Utilisation de l’extrait de bois de rose en nutrition de la peau

L’invention porte également sur l’utilisation cosmétique non thérapeutique d’un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat (i), obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable, pour favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et/ou des lèvres.

L’invention va désormais être illustrée dans les exemples non limitatifs suivants. Sauf indication contraire, les pourcentages (%) sont exprimés en pourcentages (%) en poids par rapport au poids total de la composition.

EXEMPLES

EXEMPLE 1 : Préparation des actifs cosmétiques et associations d’actifs cosmétiques

Préparation de l’extrait de bois de rose :

Les bois de rose de la variété Evanrat, en particulier de la variété rose Jardin de Granville®, éventuellement additionnés de fleurs de rose, ont été réduites en poudre en trois étapes.

Etape 1 : passage dans un broyeur de jardin afin d’obtenir des tronçons de deux centimètres

Etape 2 : passage dans un broyeur industriel

Mise en solution

L’extraction enzymatique a été réalisée dans un réacteur d'une contenance maximale de 70l. Le réacteur est agité par hélice et est thermostaté par double enveloppe.

16Kg de poudre de bois de rose à 0.1% de fleurs de rose sont dispersés et mis en suspension dans 47,5Kg d'eau.

Afin de désactiver les enzymes endogènes, le mélange a été élevé à une température de 85°C pendant 1 min puis stabilisé à 50°C.

Lyse des parois végétales

0.8 Kg d’un cocktail Enzymatique HEL1PR1 comprenant un mélange de cellulases, d’hémicellulases et de pectinases à 75% et des protéases à 25%, ont été ajoutés au mélange réactionnel correspondant (5% w/w). La réaction est poursuivie pendant 4 heures, la température est maintenue à 50°C.

Inactivation des enzymes

Le mélange a été porté à 85°C pendant 1 min afin d'inactiver les enzymes, puis ramené à 35°C.

Pré filtration

Le mélange est préfiltré sur tamis de 0.8mm puis 0.5mm afin de retirer la partie le plus importante de la phase solide, puis sur un drap.

Filtration stérilisante

Une filtration a été réalisée sur plaques clarifiantes (PALL corporation) d’une taille de pores de 0.2µm, à une pression de 2 Bars.

Formulation

La phase aqueuse obtenue après filtration stérilisante est stabilisée avec les conservateurs suivants :

- Acide citrique,

- Sorbate de potassium et

- Benzoate de sodium.

On obtient, après filtration, un extrait aqueux de bois de rose à 3.7% en poids de matière sèche par rapport au poids total de l’extrait.

Des dosages réalisés sur cet extrait aqueux non stabilisé par des conservateurs donnent les résultats suivants :

Polyphénols totaux (g/L) : 2.5

Sucres réducteurs (g/L) : 16.2

Azote protéique (g/L) : 0.64

Protéines totales (g/L) : < 6

Glucose (g/100g) : 1.4 (±0.8)

Fructose (g/100g) : 0.3 (±0.3)

Préparation de la fraction active de roses fraîches (ZETA fraction):

On utilise comme matériel végétal des pétales frais de roses de la variété Evanrat ou rose « Jardin de Granville® ».

La fraction sérique bioactive de pétales de rose utilisée selon l’invention est obtenue selon le protocole suivant :

a1) nettoyage des pétales frais de roses par pulvérisation avec de l'eau d’une température d’environ 12°C, pendant 0,1 à 0,3 minutes à un débit de 5 à 6 litres par minute,

a2) macération, pressage puis séparation mécanique des roses à l'aide d'une presse à vis mécanique (modèle CP-6 Vincent Corporation, FL) pour extraire le contenu de la dispersion colloïdale intercellulaire liquide (DCI) du matériau enrichi en fibres (« Fraction A ») ;

b1) déstabilisation du DCI avec des ondes électromagnétiques produites à partir de magnétrons fonctionnant à une fréquence comprise entre 2,45 et 5,8 GHz,

b2) centrifugation de la dispersion colloïdale intracellulaire (DCI) pour obtenir le surnageant A et une Fraction Membranaire (fraction B) ;

c1) ajustement du niveau de pH dans le surnageant A par un alkali (i.e., le carbonate de potassium), afin d’obtenir un pH allant de 6 à 7,

c2) séparation mécanique du surnageant A pour obtenir le surnageant B et la fraction C (fraction cytoplasmique) ;

d1) ajustement du niveau de pH dans le surnageant B par de l’acide citrique afin d’obtenir un pH inférieur à 4,5,

d2) séparation mécanique du surnageant B pour donner une « fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® » et une fraction D (précipité) ; et

e) mélange de la « fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® » avec du sorbate de potassium et du benzoate de sodium.

L’extrait de roses de la variété Evanrat sous la forme d’un fraction sérique bioactive isolée, aussi appelé « sérum de pétales de roses de Granville® », « Zeta sérum », « Zf sérum », « ZETA FRACTION » ou « ZETA fraction » dans les exemples suivants, contient 8% matière sèche (matière active), 91,5% en poids d’eau, 0,15% en poids de sorbate de potassium et 0,3% en poids de benzoate de sodium. Ces teneurs s’entendent en en poids par rapport au poids total de l’extrait. Le nom INCI de cet extrait est Rosa Hybrid Flower Extract, Potassium Sorbate, and Sodium Benzoate.

Des dosages réalisés sur cet extrait de roses de la variété Evanrat donnent les résultats suivants :

Glucose (µg/µL) : 15300 (±300)

Fructose (µg/µL) : 31200 (±150)

Saccharose (µg/µL) : 1500 (±50)

Potassium (µg/µL) : 2200 (±80)

Calcium (µg/µL) : 2000 (±100)

Sodium (µg/µL) : 500 (±10)

Hexapeptide

Acetyl-hexapeptide 8de la société LIPOTEC est commercialisé sous la dénomination ARGIRELINE® Amplified peptide de nom INCI : WATER and ACETYL HEXAPEPTIDE-8 and SODIUM BENZOATE. Dans les exemples, on entend par « Acetyl hexapeptide 8 » le produit commercial ARGIRELINE® Amplified peptide comprenant 0,05% de peptide.

EXEMPLE 2 : Effet des actifs cosmétiques et associations d’actifs cosmétiques sur l’hydratation et la nutrition de la peau

2.1 - Objectifs de cette étude

Le présent exemple étudie les propriétés des différents actifs cosmétiques selon l’invention, seuls et en combinaison, sur l’hydratation de la peau et sa nutrition. L’impact de ces actifs a été évalué sur l’expression des marqueurs spécifiques de la peau suivants :

• Aquaporine 9 (AQP9) : les aquaporines sont des canaux transportant l’eau dans les tissus. Ils sont essentiels à la bonne hydratation de l’épiderme depuis les couches basales jusqu’aux couches supérieures. AQP9 est une aquaporine exprimée dans l’épiderme ;
• Famille de transporteur de soluté 15 membre 1 (SLC15A1) : cette protéine, exprimée dans les cellules de l’épiderme, est spécialisée dans le transport de di- ou tri-peptides notamment pour la nutrition de la peau ;
• Les récepteurs 2 et 3 de l’acide Hydroxycarboxylique (HCAR2 – HCAR3) : localisés à la surface de la membrane cellulaire, ils se lient à la niacine, une des molécules composant la vitamine B3. La vitamine B3 est précurseur du NAD+ et du NADP+, nécessaire comme cofacteur d’oxydoréduction au métabolisme des glucides, des lipides, et des protéines (Benavente et al., NAD in skin: therapeutic approaches for niacin. Curr Pharm Des. 2009;15(1):29-38) favorisant ainsi la nutrition de la peau.

2.2. Matériels et méthodes 2.2.1. Culture cellulaire

Des kératinocytes humains normaux issus d’un prélèvement cutané de chirurgie plastique sont mis en culture dans un milieu EpiLife^TMcomplet avec une densité d’ensemencement de 50.000 cellules par puits, dans des plaques 12 puits. A sub-confluence, les cellules sont traitées 24 heures avec les actifs, selon quatre conditions différentes :

• Condition 1 - Serum de rose :extrait de roses de la variété Evanrat sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée tel que décrit à l’exemple 1, utilisé à une concentration finale de 0.05% dans le milieu de culture des cellules ;
• Condition 2 - Bois de rose :extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat tel que décrit à l’exemple 1, utilisé à une concentration finale de 0.125% dans le milieu de culture des cellules ;
• Condition 3 - Hexapeptide-8 :Acetyl Hexapeptide-8 sous la forme du produit commercial Argireline®, utilisé à une concentration finale de 2% dans le milieu de culture des cellules ;
• Condition 4 – association des trois actifs :extrait de roses de la variété Evanrat sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée tel que décrit à l’exemple 1, utilisé à une concentration finale de 0.05% dans le milieu de culture des cellules + extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat tel que décrit à l’exemple 1, utilisé à une concentration finale de 0.125% dans le milieu de culture des cellules + Acetyl Hexapeptide-8, utilisé à une concentration finale de 2% dans le milieu de culture des cellules.

Une cinquième condition contrôle avec des cellules non traitées est aussi effectuée.

2.2.2. Extraction des ARNs totaux

Le milieu de culture des cellules est éliminé, et 250 µL de tampon de lyse RLT (fourni dans le kit Nucleospin RNA trace, Macherey-Nagel) sont ajoutés. Les cellules sont raclées à l’aide d’un Cell Scraper puis le lysat cellulaire est récupéré dans une deepwell 1,2 mL (fourni dans le kit Nucleospin RNA). Les ARN totaux sont extraits selon les protocoles définis.

Les solutions d’ARN totaux obtenues sont dosées, et leur qualité vérifiée, à l'aide d'un lecteur de microplaques, le spectrostarNANO (BMG Labtech) couplé au MicrolabSTAR. Cet appareil est relié à l'ordinateur pilotant la plateforme Robotique et possède le logiciel spécifique d'analyse des résultats (logiciel MARS). La technique nécessite une micro-plaque de 384 puits (LoBase), un contrôle positif (RNA 250, AM7155, Thermofisher) permettant de valider les pipetages réalisés par le robot ainsi que les valeurs générées par le lecteur spectrostarNANO.

2.2.3 Synthèse des ADN complémentaires

Le kit de reverse transcription (RT) utilisé est le High Capacity Reverse Transcription Kit (Thermo Fisher), selon le protocole fourni. 500 ng d’ARN totaux sont dilués dans de l’eau pour obtenir un volume final de 25 µL. Ce mélange est ensuite incubé pendant 10 minutes à 25°C puis 2 heures à 37°C en présence de 25 µL de mélange réactionnel de High Capacity Reverse Transcription Kit 2X. Ce mélange réactionnel comprend 5 µL de tampon RT, 2 µL de dNTP, 5 µL de primer, 0,5 µL de RNase OUT, 2,5 µL de mélange RT et 10 µL d’eau. Tous les composants de ce mélange réactionnel proviennent du kit de reverse transcription High Capacity Reverse Transcription Kit (Thermo Fisher). Les différentes incubations sont faites au sein du TRobot (Biométra).

2.2.4 PCR-TaqMan Low Density Array

Pour mettre en place la phase de PCR réaction de polymérisation en chaîne),), 15 µL de chaque mélange ARN totaux + mélange réactionnel (comme préparé ci-dessus) sont mélangés à 60 µl d’eau. Sont ensuite ajoutés 75 µL de TaqMan Gene Expression master mix (ThermoFisher), contenant l’ADN polymerase. Après homogénéisation, 100 µL du mélange final sont déposés sur les cartes microfluidiques contenant les sondes correspondant aux gènes testés (tableau 1 ci-dessous). Ces dernières sont centrifugées puis scellées. Le CD Rom correspondant au profil des gènes déposés sur les plaques est chargé dans le logiciel SDS 2.3, précisant l’emplacement de chaque gène sur la carte. Le gène contrôle (ou « endogeneous » gene) à utiliser pour la normalisation des résultats est à indiquer avant le lancement de la PCR. Cette dernière est réalisée selon le protocole fourni par Applied Biosystems dans l’appareil ABI Prism 7900HT Sequence detection system. Les étapes de la qPCR sont 2 min à 50°C, 10 min à 94,5°C puis 30s à 97°C et 1 min à 59,7°C pour 40 cycles.5

Gène	Symbole	Référence Taq Man	Ref seq N° d’accession GeneBank
Aquaporin 9	AQP9	Hs01033361_m1	NM_001320635.1
solute carrier family 15 member 1	SLC15A1	Hs00192639_m1	NM_005073.3
hydroxycarboxylic acid receptor 2	HCAR2	Hs02597779_s1	NM_032554.3
hydroxycarboxylic acid receptor 3	HCAR3	Hs02341102_s1	NM_006018.2

2.2.5 Analyses statistiques

La PCR quantitative en temps réel peut être exploitée si son efficacité est comprise entre 90% et 110%. Pour chaque échantillon, le nombre de cycles auquel apparaît le signal est déterminé par le logiciel SDS 2.3. Pour un même essai, les niveaux d’expression des transcrits d’intérêt obtenus sont normalisés par rapport à la valeur obtenue pour le gène de ménage Beta-2-microglobuline (gène contrôle). Ce gène dont l’expression est constitutive et invariante permet de s’affranchir toutes variations induites au cours de l’expérience (dosage des ARNs totaux, pipetages, étape de réverse transcription, PCR dans l’appareillage).

Dans la méthode de RT-PCR TLDA, la quantification est effectuée en utilisant la méthode comparative de ΔΔCt. Les valeurs de quantification relative (RQ) obtenues correspondent au niveau d’amplitude (x fois plus ou moins que le contrôle) de l’expression par rapport à notre contrôle ici le non traité. Le RQ est obtenu par le calcul suivant où le contrôle est égal à 1 :

RQ = 2-ΔΔCt = 2-(ΔCt traité - ΔCt non traité)

ΔCt traité = Ct gène cible traité – Ct gène de ménage traité

ΔCt non traité Ct gène cible non traité – Ct gène de ménage non traité

Afin d’évaluer des variations d’activité transcriptionnelle statistiquement significative, le test t de Student est utilisé. Chaque condition est réalisée en triplicate (3 non traités et 3 traités dans les mêmes conditions). Le test-F de Fischer est tout d’abord appliqué en comparant les deux matrices de données. Lorsque la valeur est supérieure à α = 0,05 alors la variance pour le test t de Student est de 2, lorsque le test-F de Fischer est inférieur à α = 0,05 alors la variance sera égale à 3. Les variations transcriptionnelles retenues seront celles qui ont un test t de Student inférieur à α = 0,05.

Les résultats sont présentés en moyenne sur n=3. Le test t de Student a été utilisé pour comparer l’effet entre les cellules traitées et non traitées. Un effet significatif par rapport au contrôle (valeur de 1,0) est un résultat > 1,5 (correspondant à une augmentation de l’activité transcriptionnelle d’au moins 50%).

Les résultats sont considérés comme très significatifs pour p<0,01(**).

2.3 Résultats

Les résultats obtenus pour chacune de conditions testées sont représentés au tableau 2.

Gènes	Sérum de rose (0,05%)	Bois de rose (0,125%)	Hexapeptide-8 (2%)	Association 3 actifs : Serum de rose (0,05%) + Bois de rose (0,125%) + Hexapeptide-8 (2%)
AQP9	1.364 p<0.05	1.853 (+85%) p<0.01	1.241 p<0.05	2.656 (+165%) p<0.01
SLC15A1	1.458 p=0.261	2.190 (+119%) p<0.01	1.524 p=0.340	3.534 (+253%) p<0.01
HCAR2	1.095 p=0.287	1.471 p<0.05	0.896 p=0.383	1.678 (+67%) p<0.01
HCAR3	1.168 p=0.347	1.199 p=0.184	1.010 p=0.944	1.502 (+50%) p<0.01

Selon les résultats observés au tableau 2, les kératinocytes humains normaux traités avec le peptide seul ou le sérum de rose seul ne montrent pas de différence d’expression significative sur l’expression des 4 gènes cibles par rapport aux cellules non traitées : soit la variation est égale ou inférieure à 1.5 (moins de 50% d’augmentation de l’activité transcriptionnelle), soit p>0.01. Un traitement avec l’extrait de bois de rose induit l’expression de deux transporteurs : AQP9 et SLC15A1. Cependant, le complexe des trois actifs stimule l’expression des 4 gènes cibles, et AQP9 et SLC15A1 sont stimulés de façon supérieure au traitement avec le bois seul.

L’extrait de bois de rose permet donc d’améliorer significativement l’hydratation et la nutrition des cellules de la peau. De plus, l’association de ces trois actifs (bois de rose, sérum de rose et acetyl hexapeptide-8) permet d’améliorer encore plus l’hydratation de la peau, la nutrition de la peau, de maintenir l’homéostasie cellulaire et d’améliorer l’éclat et l’homogénéité du teint.

EXEMPLE 3 : Formulations 3.1 Composition sous la forme d’une émulsion

Eau déminéralisée qsp 100,0%

Glycols 20,0%

Conservateurs 0,6%

Chélatant 0,04%

Carbomer (Carbopol® 981) 0,3%

Sodium polyacrylate (Covacryl® MV60) 0,2%

Sodium Hydroxide 0,15%

Extrait aqueux de bois de rose * 1%

Sérum de rose * 1%

Acetyl hexapeptide-8(ARGIRELINE® Amplified peptide

comprenant 0.05% de peptide)2% (soit 0.001% peptide)

Huile végétale, esters 16%

Anti-oxydant 0,2%

Steareth-2 0,8%

* tels que décrits dans l’exemple 1

3.2 : Composition sous la forme d’une crème riche pour le visage

Eau déminéralisée qsp 100,0%

Glycols 13,0%

Carbomer (Carbopol® 981) 0,3%

Sodium polyacrylate (Covacryl® MV60) 0,2%

Sodium Hydroxide 0,15%

Extrait aqueux de bois de rose * 1,5%

Sérum de rose * 1,5%

Acetyl hexapeptide-8(ARGIRELINE® Amplified peptide

comprenant 0.05% de peptide)2% (soit 0.001% peptide)

Huile végétale, esters 16%

Triglycérides d’acides gras 4%

Beurre de karité 1%

Antioxydant 0,2%

Concentré de parfum 0,4%

Steareth-2 0,8%

Conservateurs qs

* tels que décrits dans l’exemple 1

3.3 : Composition sous la forme d’un gel-sérum pour le contour des yeux

Eau purifiée Qsp 100.00%

Glycols 13,0%

Conservateurs 0,60%

Carbomer 0,80%

Glyceryl stearate citrate 0,70%

Lécithine et sodium acrylates copolymer (Lecigel PCR négatif) 1,20%

Isostearate isostearyle 9,0%

Bis-diglyceryl polyacyladipate-2 (Softisan 649 MB) 1,0%

Silice 2,0%

Extrait aqueux de bois de rose * 0,5%

Acetyl hexapeptide-8(ARGIRELINE® Amplified peptide

comprenant 0.05% de peptide)2% (soit 0.001% peptide)

Extrait de bois de rose * 1%

Sérum de rose * 1,5%

Tocopheryl acetate 0,10%

Parfum de rose 0,20%

* tels que décrits dans l’exemple 1

Claims (11)

1. Utilisation cosmétique non thérapeutique d’une association d’actifs cosmétiques pour favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et/ou des lèvres, favoriser et/ou améliorer l’hydratation de la peau, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité du teint et/ou de la peau, caractérisée en ce que l’association d’actifs comprend :

   1. un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable ;
   2. un extrait de roses sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée, obtenu à partir de roses fraiches de la variété Evanrat, et
   3. un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8.
2. Utilisation cosmétique non thérapeutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que l’extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat (i) comprend des acides aminés parmi l’acide aspartique, la tyrosine et/ou l’arginine, et des sucres parmi le glucose et/ou le fructose.
3. Utilisation cosmétique non thérapeutique selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que l’extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat (i) est obtenu par un procédé d’extraction enzymatique comprenant les étapes :
   a) addition d'eau au bois de rose préalablement broyé,
   b) addition d'un mélange enzymatique contenant au moins une cellulase, au moins une hémicellulase et au moins une pectinase, et avantageusement en outre au moins une protéase,
   c) incubation sous agitation du bois de rose préalablement broyé et du mélange enzymatique pour libérer dans le milieu réactionnel des huiles, des protéines et des sucres fermentescibles,
   d) séparation du milieu réactionnel pour obtenir de l'huile libre, une phase aqueuse contenant des protéines et des sucres fermentescibles, et une phase solide,
   e) séparation de la phase aqueuse et ajout éventuel de conservateurs.
4. Utilisation cosmétique non thérapeutique selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l’extrait de roses de la variété Evanrat sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée (ii) comprend au moins 500 µg/µL d’au moins un sucre monosaccharide choisi parmi le fructose, glucose et le saccharose, et/ou au moins 500 mg/Kg d’au moins un minéral choisi parmi le potassium, le calcium et le sodium.
5. Utilisation cosmétique non thérapeutique selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l’extrait de roses de la variété Evanrat sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée (ii) est obtenu à partir de pétales frais de roses de la variété Evanrat.
6. Procédé cosmétique non thérapeutique de soin et/ou de maquillage de la peau et/ou des lèvres pour favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et/ou des lèvres comprenant l’application sur ladite peau et/ou lesdites lèvres, en particulier la peau, d’une composition cosmétique comprenant :

   1. un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable ;
   2. un extrait de roses sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée, obtenu à partir de roses fraiches de la variété Evanrat, et
   3. un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8.
7. Procédé cosmétique non thérapeutique selon la revendication 6, caractérisé en ce que la composition cosmétique comprend :

   • de 0,01% à 10% en poids, en particulier de 0,05% à 5% en poids par rapport au poids total de ladite composition, de l’extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat (i) ;
   • de 0,01% à 10% en poids, en particulier de 0,02% à 5% en poids par rapport au poids total de ladite composition, de l’extrait de roses de la variété Evanrat sous la forme d’une fraction sérique bioactive isolée (ii) ; et
   • de 0,00005% à 0,005% en poids, en particulier de 0,00025% à 0,0025%, et plus particulièrement encore de 0,0005% à 0,0015% en poids par rapport au poids total de ladite composition, de l’hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8 (iii).
8. Procédé cosmétique non thérapeutique selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce que ladite composition cosmétique est sous la forme d’une crème, d’une émulsion huile-dans-eau, ou eau-dans-huile ou d’une émulsion multiple, d’une lotion, ou d’un sérum.
9. Procédé cosmétique non thérapeutique selon l’une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisé en ce que la composition cosmétique est destinée à une application topique sur la peau et/ou les lèvres et en particulier sur la peau du visage et/ou du cou.
10. Procédé cosmétique non thérapeutique selon l’une quelconque des revendications 6 à 9, caractérisé en ce que la composition cosmétique est appliquée sur une peau impactée par un contexte nutritionnel défavorable ou déséquilibré.
11. Utilisation cosmétique non thérapeutique d’un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat (i), obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable, pour favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et/ou des lèvres.