FR3005421A1

FR3005421A1 - AEDES AEGYPTI PROTEIN AS A TARGET FOR PREVENTING OR TREATING DENGUE INFECTION

Info

Publication number: FR3005421A1
Application number: FR1354263A
Authority: FR
Inventors: Brumas Marthe Dorothee Misse; Pornapat Surasombatpattana; Rodolphe Hamel
Original assignee: Institut de Recherche pour le Developpement IRD
Current assignee: Institut de Recherche pour le Developpement IRD
Priority date: 2013-05-13
Filing date: 2013-05-13
Publication date: 2014-11-14
Also published as: WO2014184735A1

Abstract

La présente invention a trait à une protéine de salive d'Aèdes Agypti utile en tant que cible pour lutter contre la réplication du virus de la dengue chez des hôtes mammifères et à des compositions pharmaceutiques comprenant cette protéine.The present invention relates to an Aedes Agypti saliva protein useful as a target for combating dengue virus replication in mammalian hosts and pharmaceutical compositions comprising this protein.

Description

Protéine d'Aedes aegypti utile en tant que cible pour prévenir ou traiter une infection par la dengue La présente invention a trait à une protéine de salive d"Aedes aegypti utile en tant que cible pour lutter contre la réplication du virus de la dengue (désigné par l'abréviation « DENV ») chez des hôtes mammifères. La dengue est la maladie virale transmise par les moustiques la plus répandue et elle est provoquée par le virus de la dengue (DENV), virus enveloppé à ARN simple brin de polarité positive de la famille des flaviviridés. Aedes (Ae.) aegypti et Ae. albopictus sont devenus des vecteurs de cette maladie et ces espèces de moustiques sont devenues très répandues sous les latitudes tropicales et subtropicales. Ces deux vecteurs transmettent la maladie en injectant le DENV dans la peau des vertébrés, avec leur salive, lorsqu'ils se nourrissent. Différentes protéines présentes dans la salive (Pile. aegypti aident le moustique à prendre son repas sanguin en neutralisant les réponses physiologiques élaborées par l'hôte vertébré pour prévenir la perte de sang et combattre l'infection. Cependant, la salive contient également de nombreuses protéines, connues ou encore à déterminer, essentielles pour une transmission optimale du DENV et d'autres arbovirus, grâce à leur capacité à moduler la réponse immunitaire de l'hôte.The present invention relates to an Aedes aegypti saliva protein useful as a target for combating dengue virus replication (referred to herein as a target for preventing or treating dengue infection). by the abbreviation "DENV") in mammalian hosts Dengue is the most widespread mosquito-borne viral disease and is caused by Dengue virus (DENV), a single-stranded RNA enveloped virus of positive polarity. the family of flaviviridae Aedes (Ae.) aegypti and A. albopictus have become vectors of this disease and these mosquito species have become widespread in tropical and subtropical latitudes, both of which transmit the disease by injecting DENV into the Vertebrate skin, with their saliva, when they are feeding Different proteins in saliva (Pile aegypti help the mosquito take its blood meal n neutralizing the physiological responses developed by the vertebrate host to prevent blood loss and fight infection. However, saliva also contains many proteins, known or still to be determined, essential for optimal transmission of DENV and other arboviruses, thanks to their ability to modulate the immune response of the host.

Certains des co-inventeurs ont récemment démontré que la salive d'Ac. aegypti active la réplication du DENV dans les kératinocytes humains (1: Surasombatpattana et al., 2011) en 'inhibant la sécrétion de peptides antimicrobiens (AMP), S100A7, Elafin, ainsi que d'interférons (IFN) aux tout premiers stades de l'infection (2 : Surasombatpattana et al., 2012). 25 Après une analyse génomique et protéomique fonctionnelle de glandes salivaires de moustiques Ae. aegypti femelles, quatre protéines supplémentaires qui sont abondamment présentes dans la salive de moustique (3 Wasinpiyamongkol et al., 2010; 4: Luplertlop et al., 2011) ont été identifiées et ont ensuite été caractérisées selon la présente invention, 30 pour leur capacité à moduler l'infection par le DENV des kératinocytes humains. Chacune de ces molécules, la protéine analogue à la serpine anticoagulante dirigée contre le .Fxa (AT : numéro d'enregistrement Genbank Q1HRTV7_AEDAE), l'adénosine-désaminase (AD: Q179D4 AEDAE), une protéine salivaire putative sécrétée de la famille des protéines de 34 kDa (34 kDa : Q1HRWO_AEDAE) et une protéine putative sécrétée (VA: Q8T9U5 AEDAE), a été produite sous forme de protéine recombinante dans un système d'expression baculovirus et purifiée sur une résine Ni-SepharoseTM 6 Fast Flow (figure 1-a).Some of the co-inventors have recently demonstrated that Ac saliva. aegypti activates the replication of DENV in human keratinocytes (1: Surasombatpattana et al., 2011) by inhibiting the secretion of antimicrobial peptides (AMPs), S100A7, Elafin, as well as interferons (IFN) at the earliest stages of life. infection (2: Surasombatpattana et al., 2012). After functional genomic and proteomic analysis of salivary glands of Ae mosquitoes. aegypti females, four additional proteins that are abundantly present in mosquito saliva (3 Wasinpiyamongkol et al., 2010; 4: Luplertlop et al., 2011) were identified and were further characterized according to the present invention, for their ability to modulate DENV infection of human keratinocytes. Each of these molecules, the anticoagulant serpin protein directed against .Fxa (AT: Genbank registration number Q1HRTV7_AEDAE), adenosine deaminase (AD: Q179D4 AEDAE), a putative salivary protein secreted from the protein family 34 kDa (34 kDa: Q1HRWO_AEDAE) and a secreted putative protein (VA: Q8T9U5 AEDAE), was produced as a recombinant protein in a baculovirus expression system and purified on a Ni-SepharoseTM 6 Fast Flow resin (FIG. -at).

Le DENV a été inoculé dans des kératinocytes épidermiques humains primaires en présence ou en l'absence de chacune des quatre protéines et les taux intracellulaires d'ARNin viral ont été quantifiés par PCR en temps réel 24 heures après l'infection. En inoculant le DENV dans des kératinocytes épidermiques humains primaires en présence ou en l'absence de chacune des quatre protéines, les inventeurs ont observé une augmentation significative de l'expression de transcrits du DENV dans les kératinocytes infectés par le DENV en présence des protéines, par rapport aux cellules infectées avec le DENV seul. De manière inattendue, l'une des protéines a induit la plus forte augmentation de la réplication virale à seulement 1 lag,/mL.DENV was inoculated into primary human epidermal keratinocytes in the presence or absence of each of the four proteins, and intracellular levels of viral RNAin were quantified by real-time PCR 24 hours after infection. By inoculating DENV into primary human epidermal keratinocytes in the presence or absence of each of the four proteins, the inventors observed a significant increase in the expression of DENV transcripts in DENV-infected keratinocytes in the presence of proteins. compared to cells infected with DENV alone. Unexpectedly, one of the proteins induced the greatest increase in viral replication at only 1 lag / ml.

Ainsi, un but de la présente invention est de fournir une nouvelle cible permettant de prévenir ou de traiter la dengue. Selon un autre bu,t, la présente invention a également trait à des compositions 20 pharmaceutiques comprenant la protéine utilisée en tant que cible. Elle a également trait à un procédé de prévention ou de traitement de la dengue consistant à utiliser ladite protéine. 25 La présente invention a donc trait à une nouvelle cible permettant de prévenir ou de traiter la dengue, constituée d'une protéine salivaire putative sécrétée de la famille des protéines de 34 kDa (Q1HRWO_AEDAE) d'Aedes aegypti. Le terme « protéine de 34 kDa » tel qu'utilisé ci-après désigne la forme native ou une protéine 30 recombinante. Ladite protéine inhibe fortement l'expression de transcrits des facteurs IRF3 et IRF7 dans les kératinocytes infectés par le DENV, comme le montrent les résultats expérimentaux divulgués ci-après.Thus, an object of the present invention is to provide a new target for preventing or treating dengue fever. According to another embodiment, the present invention also relates to pharmaceutical compositions comprising the protein used as a target. It also relates to a method of preventing or treating dengue by using said protein. The present invention thus relates to a novel target for preventing or treating dengue, consisting of a putative salivary protein secreted from the Aedes aegypti family of 34 kDa proteins (Q1HRWO_AEDAE). The term "34 kDa protein" as used hereinafter refers to the native form or a recombinant protein. Said protein strongly inhibits the expression of transcripts of IRF3 and IRF7 factors in DENV-infected keratinocytes, as shown by the experimental results disclosed hereinafter.

L'utilisation d'une large gamme de concentrations a permis de découvrir que la protéine de 34 kDa exerce une activation, dépendante de la relation dose/effet, de la réplication du DENV, avec un effet maximal aux plus faibles doses utilisées. Comme expliqué dans les exemples, les données obtenues révèlent une corrélation inverse entre l'augmentation de la réplication virale et la diminution de l'expression de chacun des gènes de la réponse immunitaire innée testés. Une protéine non liée à la salive n'a pas influencé la réplication du DENV, confirmant ainsi la spécificité de la protéine de 34 kDa.Using a wide range of concentrations, it has been found that the 34 kDa protein exerts a dose-response dependent activation of DENV replication, with maximum effect at the lowest doses used. As explained in the examples, the data obtained reveal an inverse correlation between the increase in viral replication and the decrease in the expression of each of the innate immune response genes tested. Non-saliva-related protein did not influence the replication of DENV, thus confirming the specificity of the 34 kDa protein.

La forte activation de.la réplication du DENV par la protéine de 34 kDa dans les kératinocytes humains est liée à son fort effet inhibiteur sur la voie de signalisation des IRF, entraînant l'abrogation de la production d'IFN de type I. La présente invention tire également parti du rôle prépondérant que joue la protéine de 34 kDa 15 dans l'infection par le DENV des kératinocytes humains, pour fournir des compositions pharmaceutiques comprenant une quantité efficace de protéine de 34 kDa en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. , Ainsi, lesdites compositions pharmaceutiques sont particulièrement utiles pour prévenir ou 20 traiter l'infection par le DENV des kératinocytes humains, en inhibant la réponse immunitaire antivirale aux tout premiers stades de l'infection. Lesdites compositions peuvent être utilisées sous des formes appropriées pour une administration par voie orale, par voie topique ou par injection. 25 La présente invention a également trait à un procédé de prévention ou de traitement d'une infection par le DENV chez un patient, ledit procédé consistant à administrer la protéine de 34 kDa au patient pour induire une réponse immunogène ou un composé capable d'inhiber l'effet de la protéine de 34 kDa pour au moins réduire la charge virale. 30 Elle a également trait à une composition vaccinale permettant de prévenir ou de traiter la dengue, comprenant une quantité efficace de la protéine de 34 kDa susmentionnée, éventuellement sous une forme recombinante, en association avec au moins un adjuvant.The strong activation of the replication of DENV by the 34 kDa protein in human keratinocytes is related to its strong inhibitory effect on the RFID signaling pathway, resulting in the abrogation of type I IFN production. The invention also takes advantage of the prominent role played by the 34 kDa protein in human keratinocyte DENV infection to provide pharmaceutical compositions comprising an effective amount of 34 kDa protein in association with a pharmaceutically acceptable carrier. Thus, said pharmaceutical compositions are particularly useful for preventing or treating human keratinocyte DENV infection by inhibiting the antiviral immune response at the earliest stages of infection. The compositions may be used in forms suitable for oral, topical or injection administration. The present invention also relates to a method of preventing or treating a DENV infection in a patient, said method comprising administering the 34 kDa protein to the patient to induce an immunogenic response or a compound capable of inhibiting the effect of the 34 kDa protein to at least reduce the viral load. It also relates to a vaccine composition for preventing or treating dengue, comprising an effective amount of the aforementioned 34 kDa protein, optionally in a recombinant form, in combination with at least one adjuvant.

Selon un autre but, la cible permettant de prévenir ou de traiter la dengue est la séquence de nucléotides codant la protéine de 34 kDa susmentionnée, Selon encore un autre but, la présente invention a trait à des constructions nucléotidiques 5 comprenant une séquence de nucléotides codant la protéine de 34 kDa susmentionnée. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention sont présentés ci-après en référence aux figures 1 et 2 et à la figure complémentaire 1, qui illustrent respectivement : 10 Figure 1: Activation de la réplication du DENV par les protéines de salive d'Ae, aegypti dans 'les kératinocytes infectés. (a) On a fait passer des protéines salivaires recombinantes purifiées sur un gel d'acrylamide à 10 % et on les a révélées par coloration au nitrate d'argent. Bande MM : marqueurs de masse moléculaire ; bande 1 : AT ; bande 2: AD; bande 3: 34 kDa ; bande 4: VA et bande 5: 15 gp120 du VIH-1. (b) On a infecté des kératinocytes avec le DENV à une multiplicité d'infection de 1, en présence ou en l'absence de protéines salivaires. 24 h après l'infection, on a quantifié l'ARN viral intracellulaire par RT-PCR en temps réel. Les résultats sont exprimés en copies d'ARN viral par microlitre dans les kératinocytes infectés par le DENV. 20 On a utilisé le test de Wilcoxon-Mann-Whitney pour déterminer la différence statistique entre .les ensembles de données. On a considéré qu'une valeur P <0,05 était significative. *Valeurs P < 0,05. Figure 2: Expression de l'ARNm des IFN de type I, des IRF et des AMP dans les 25 kératinocytes infectés par le DENV, On a exposé les cellules au DENV à une multiplicité d'infection de 1, en présence ou en l'absence de protéines saliva.ires à 1 et 5 p.g/mL. On a analysé l'expression de l'ARNm des peptides (a) IFN-a, (b) IFN-13, (c) IRF3, (d) IRF7, (e) LL-37, (f) S100A7 et (g) RNase7, par RT-PCR quantitative en temps réel aux instants indiqués. 30 Les résultats sont exprimés en facteur de multiplication de l'induction de transcrits dans les ,kératinocytes infectés par le DENV, en présence ou en l'absence de protéines salivaires, par rapport à des cellules infectées par un leurre. On a utilisé le test de Wilcoxon-Mann-Whitney pour déterminer la différence statistique entre les ensembles de données. On a considéré qu'une valeur P <0,05 était significative. *Valeurs P <0,05, 'Figure complémentaire 1: La diminution, induite par la protéine de 34 kDa d'Ae. aegypti, de l'expression génique de la réponse immunitaire innée est inversement corrélée avec son effet d'activation de la réplication du DENV. On a infecté des kératinocytes avec le DENV à une multiplicité d'infection de I, en présence ou en l'absence de la protéine de 34 I(Da ou de la protéine gp120 du VIH en tant que protéine témoin. (a) 24 h après l'infection, on a quantifié l'ARN viral intracellulaire par RT-PCR quantitative en temps réel. Les résultats sont exprimés en copies d'ARN viral par microlitre dans les kératinocytes infectés par le DENV. On a analysé l'expression de l'ARNm des peptides (b) IFN-a, (c) IFN-13, ,(d) IRF3, (e) IRF7, LL-37, (g) S100A7 et (h) RNase7, par RT-PCR quantitative en temps réel aux temps indiqués. Les résultats sont exprimés en facteur de multiplication de l'induction de transcrits dans les kératinocytes infectés par le DENV, en présence ou en l'absence de protéines salivaires, par rapport à des cellules infectées par un leurre. On a utilisé le test de Wilcoxon-Mann-Whitney pour déterminer la différence statistique entre les ensembles de données. On a considéré qu'une valeur P <0,05 était significative. *Valeurs P <0,05. 'Les interférons de type I sont connus pour combattre les virus pendant les infections virales, non seulement directement en inhibant la réplication virale dans les cellules, mais aussi indirectement en stimulant les réponses immunitaires innée et adaptative. Dans la présente étude, on a découvert que les protéines AD et VA inhibent fortement l'expression de transcrits de l'IFN-a et de l'IFN-13 dès 1 gg/mL, tandis que leur effet à 5 i.tg/mL, notamment sur l'expression de PARNm de l'IPN-f3, est moins prononcé (figure 2-a et b). Parmi les quatre protéines, c'est la protéine AT qui présente l'effet le plus faible.According to another object, the target for preventing or treating dengue is the nucleotide sequence encoding the above-mentioned 34 kDa protein. According to yet another object, the present invention relates to nucleotide constructs comprising a coding nucleotide sequence. the aforementioned 34 kDa protein. Other characteristics and advantages of the invention are presented hereinafter with reference to FIGS. 1 and 2 and to complementary FIG. 1, which respectively illustrate: FIG. 1: Activation of DENV replication by saliva proteins Ae, aegypti in infected keratinocytes. (a) Purified recombinant salivary proteins were run on a 10% acrylamide gel and revealed by silver nitrate staining. MM band: molecular weight markers; band 1: AT; band 2: AD; band 3: 34 kDa; band 4: VA and band 5: 15 gp120 of HIV-1. (b) Keratinocytes were infected with DENV at a multiplicity of infection of 1, in the presence or absence of salivary proteins. 24 h after infection, intracellular viral RNA was quantified by RT-PCR in real time. The results are expressed in copies of viral RNA per microliter in the keratinocytes infected with DENV. The Wilcoxon-Mann-Whitney test was used to determine the statistical difference between the data sets. A value P <0.05 was considered significant. * Values P <0.05. Figure 2: Expression of mRNA of type I IFNs, IRFs and AMPs in DENV-infected keratinocytes. The cells were exposed to DENV at a multiplicity of infection of 1, in the presence or at the same time. absence of saliva.ires at 1 and 5 μg / mL. The expression of the mRNA of the (a) IFN-α, (b) IFN-13, (c) IRF3, (d) IRF7, (e) LL-37, (f) S100A7 and (g) peptides was analyzed. RNase7, by quantitative RT-PCR in real time at the indicated times. The results are expressed as a multiplication factor for the induction of transcripts in DENV-infected keratinocytes in the presence or absence of salivary proteins, as compared to decoy-infected cells. The Wilcoxon-Mann-Whitney test was used to determine the statistical difference between the data sets. A value P <0.05 was considered significant. * Values P <0.05, Complementary Figure 1: The decrease, induced by the 34 kDa protein of Ae. aegypti, the gene expression of the innate immune response is inversely correlated with its activation effect of replication of DENV. Keratinocytes with DENV were infected at a multiplicity of infection of I, in the presence or absence of the 34 I protein (Da or HIV gp120 protein as a control protein.) (A) 24 h after infection, intracellular viral RNA was quantified by quantitative RT-PCR in real time, and the results were expressed as viral RNA copies per microliter in DENV-infected keratinocytes. MRNA of (b) IFN-α, (c) IFN-13, (d) IRF3, (e) IRF7, LL-37, (g) S100A7 and (h) RNase7, by quantitative RT-PCR The results are expressed as a multiplication factor for the induction of transcripts in DENV-infected keratinocytes, in the presence or absence of salivary proteins, with respect to cells infected with a decoy. used the Wilcoxon-Mann-Whitney test to determine the statistical difference between the data sets. that a P value <0.05 was significant. * Values P <0.05. Type I interferons are known to combat viruses during viral infections, not only directly by inhibiting viral replication in cells, but also indirectly by stimulating innate and adaptive immune responses. In the present study, it was found that AD and VA proteins strongly inhibit the expression of IFN-α and IFN-13 transcripts from 1 gg / mL, while their effect at 5 μg / mL. mL, especially on the expression of PNN-m of IPN-f3, is less pronounced (Figure 2-a and b). Among the four proteins, the AT protein has the weakest effect.

Toutefois, aux deux concentrations, la protéine de 34 kDa inhibe complètement l'expression des IFN de type I. L'induction de la réponse des IFN de type I est activée par deux facteurs de transcription appartenant à la famille des facteurs de régulation des IFN (IRF), l'IRF-3 et l'IRF-7, par translocation d'IRF3 et d'IRF7 dimérisés dans le noyau, où ils amorcent la transcription des gèneus des IFN. Il a été rapporté que le complexe DENV/protéase inhibe la phosphorylation de l'IRF3, entraînant l'absence de production d'IFN de type I dans les cellules dendritiques humaines.However, at both concentrations, the 34 kDa protein completely inhibits the expression of type I IFNs. The induction of the type I IFN response is activated by two transcription factors belonging to the family of IFN regulatory factors. (IRF), IRF-3 and IRF-7, by translocation of IRF3 and dimerized IRF7 into the nucleus, where they initiate the transcription of IFN genes. The DENV / protease complex has been reported to inhibit phosphorylation of IRF3, resulting in the absence of type I IFN production in human dendritic cells.

Pour mieux comprendre le mécanisme moléculaire qui sous-tend l'inhibition des IFN de type I par les protéines salivaires, on a analysé leur effet sur l'expression de l'ARNm de l'IRF3 et de l'IRF7. À l'instar de son effet sur l'expression génique des IFN de type I, la protéine de 34 kDa inhibe aussi fortement l'expression de transcrits de l'IRF3 et de l'IRF7 à chacune des 'concentrations utilisées (figure 2-c et d). Bien que les trois autres protéines n'aient aucun effet significatif sur la transcription de l'IRF3, elles inhibent l'expression de PARNm de l'IRF7 dans les kératinocytes infectés par le DENV. On a ensuite étudié le niveau d'expression des AMP. Comme le montre la figure complémentaire 1, l'utilisation d'une large gamme de concentrations a permis de découvrir que la protéine de 34 kDa exerce une activation, dépendante de la relation dose/effet, de la 20 réplication du DENV, avec un effet maximal aux plus faibles doses utilisées. Comme expliqué plus haut, on a observé une corrélation inverse entre l'augmentation de la réplication virale et la diminution de l'expression de chacun des gènes de la réponse immunitaire innée testés. Une protéine non liée à la salive n'a pas influencé la réplication du iDENV, confirmant ainsi la spécificité de la protéine de 34 kDa. 25 Les données indiquées ci-dessus permettent l'identification d'une protéine exprimée de façon proéminente dans la salive d'Ae. aegypti, à savoir la protéine de 34 kDa qui constitue donc une cible d'intérêt pour lutter contre la réplication du DENV chez des hôtes mammifères.To better understand the molecular mechanism underlying the inhibition of type I IFN by salivary proteins, their effect on the expression of IRF3 and IRF7 mRNA was analyzed. Like its effect on the gene expression of type I IFNs, the 34 kDa protein also strongly inhibited the expression of IRF3 and IRF7 transcripts at each of the concentrations used (FIG. c and d). Although the other three proteins have no significant effect on the transcription of IRF3, they inhibit the expression of IRF7 mRNA in DENV-infected keratinocytes. The level of expression of the MPAs was then studied. As shown in Supplementary Figure 1, the use of a wide range of concentrations has found that the 34 kDa protein exerts a dose-response dependent activation of DENV replication with maximum at the lowest doses used. As explained above, there was an inverse correlation between the increase in viral replication and the decrease in expression of each of the innate immune response genes tested. Non-saliva-related protein did not influence the replication of iDENV, thus confirming the specificity of the 34 kDa protein. The data indicated above allow the identification of a protein expressed prominently in Ae saliva. aegypti, namely the 34 kDa protein which is therefore a target of interest to fight against the replication of DENV in mammalian hosts.

Références bibliographiques 1 - Surasombatpattana P, Hamel R, Patramool S et al. (2011) Dengue virus replication in infected human keratinocytes leads to activation of antiviral innate immune responses. Infect 5 'Genet Evol 11:1664-73. 2 - Surasombatpattana P, Patramool S, Luplertlop N et al. (2012) Aedes aegypti saliva enhances dengue virus infection of human keratinocytes by suppressing innate immune responses. J Invest Dennatol 132:2103-5. 10 3 - Wasinpiyarnongkol L, Patramool S, Luplertlop N et al. (2010) Blood-feeding and immunogenic Aedes aegypti saliva proteins. Proteomics 10:1906-16. 4- Luplertlop N, Surasombatpattana P, Patramool S et al. (2011) Induction of a peptide with 15 .activity against a broad spectrum of pathogens in the Aedes aegypti salivary gland, following Infection with Dengue Virus. PLoS Pathog e1001252.References 1 - Surasombatpattana P, Hamel R, Patramool S et al. (2011) Dengue virus replication in infected human keratinocytes leads to the activation of antiviral innate immune responses. Infect 5 Genet Evol 11: 1664-73. 2 - Surasombatpattana P, Patramool S, Luplertlop N et al. (2012) Aedes aegypti saliva enhances dengue virus infection of human keratinocytes by suppressing innate immune responses. J Invest Dennatol 132: 2103-5. 3 - Wasinpiyarnongkol L, Patramool S, Luplertlop N et al. (2010) Blood-feeding and immunogenic Aedes aegypti saliva proteins. Proteomics 10: 1906-16. 4- Luplertlop N, Surasombatpattana P, Patramool S et al. (2011) Induction of a peptide with a broad spectrum of pathogens in the Aedes aegypti salivary gland, following Infection with Dengue Virus. PLoS Pathog e1001252.

Claims

REVENDICATIONS1. Use to prevent or treat dengue infection consisting of a putative salivary protein secreted from the family of Iffla proteins (Genbank accession number Q1HRWO_AEDAE) from Aecles aegypti.

2. Pharmaceutical compositions comprising an effective amount of 34 kDa protein in association with a pharmaceutically acceptable carrier. 10

3. Pharmaceutical compositions according to claim 2, for preventing or treating DENV infection of human keratinocytes by inhibiting the antiviral immune response in the very early stages of infection.

4. Pharmaceutical compositions according to claim 3, in suitable forms for oral, topical or injection administration.