FR3095339A1 - Bactérie de la famille des Christensenellacées dans la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie - Google Patents
Bactérie de la famille des Christensenellacées dans la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie Download PDFInfo
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Abstract
L’invention concerne une bactérie de la famille des Christensenellacées ou d’une composition en contenant pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie chez l’être humain ou l’animal.
Description
L’invention concerne le traitement de l’hypertriglycéridémie avec des bactéries spécifiques du microbiote intestinal.
Les triglycérides sont des lipides qui permettent le stockage des acides gras au niveau des tissus adipeux. Ils peuvent être hydrolysés en fonction des besoins pour permettre la libération d’acides gras utilisés ensuite comme source d’énergie.
L’hypertriglycéridémie correspond à un excès de triglycérides circulants, c’est-à-dire contenus dans le sang. En particulier l’hypertriglycéridémie correspond à une élévation des taux de triglycérides circulants au-delà de 150 mg/dL soit 1,7 mmol/L selon les directives de la NCEP ATP III, « American Heart Association », « National Lipid Association », « the Endocrine Society », « the European Society of Cardiology » et « the European Atherosclerosis Society ».
La maladie peut être classée en 2 catégories:
- l’hypertriglycéridémie primaire : d’origine génétique
- l’hypertriglycéridémie secondaire : induite par des traitements médicamenteux, la prise excessive d’alcool, de mauvaises habitudes alimentaires, le diabète, les maladies endocriniennes, les maladies rénales, les maladies hépatiques, la grossesse ou les désordres auto-immunitaires.
- l’hypertriglycéridémie primaire : d’origine génétique
- l’hypertriglycéridémie secondaire : induite par des traitements médicamenteux, la prise excessive d’alcool, de mauvaises habitudes alimentaires, le diabète, les maladies endocriniennes, les maladies rénales, les maladies hépatiques, la grossesse ou les désordres auto-immunitaires.
La prévalence de l’hypertriglycéridémie est évaluée à environ 32% de la population américaine, dont 18% au-delà de la limite des 200 mg/dL (hypertriglycéridémie modérée à sévère).
L’hypertriglycéridémie peut-être à l’origine de complications et engendrer l’apparition d’autres pathologies. En effet, l’hypertriglycéridémie modérée est un facteur de risque important de développement de maladies cardiovasculaires, telle que l’athérosclérose. On sait également que l’une des principales pathologies associée à l’hypertriglycéridémie sévère est la pancréatite aigüe.
Actuellement, il existe plusieurs types de traitements :
Modification de l’hygiène de vie et adoption d’un régime alimentaire riche ou supplémenté en oméga 3 : ce type de traitement est conseillé pour les hypertriglycéridémies mineures et modérées sans risque associé. Toutefois, la gestion uniquement par une modification de l’hygiène de vie n’a qu’un impact limité et conduit généralement à une évolution de la maladie vers une hyperlipidémie sévère.
- des statines (hypolipémiants) : ils agissent principalement sur l’élévation de LDL-cholesterol mais pas sur l’élévation de triglycérides qui a pourtant été attribuée à un risque accru d’accidents vasculaires. De plus, les statines présentent des effets secondaires importants, principalement des douleurs musculaires. Dans certains cas il a été démontré qu’elles peuvent causer une élévation de la glycémie et précipiter un diabète de type 2.
- des fibrates : ils sont recommandés dans le traitement de l’hypertriglycéridémie modérée à sévère avec risque élevé d’évènement cardiovasculaire. Toutefois, ils sont souvent associés à de la toxicité hépatique et sont contre-indiqués avec de nombreux médicaments, en particulier des antibiotiques.
- la niacine : elle a une efficacité limitée et des effets nocifs importants. Elle est limitée à une utilisation restreinte et déconseillée par les autorités sanitaires américaines en combinaison avec les statines.
Modification de l’hygiène de vie et adoption d’un régime alimentaire riche ou supplémenté en oméga 3 : ce type de traitement est conseillé pour les hypertriglycéridémies mineures et modérées sans risque associé. Toutefois, la gestion uniquement par une modification de l’hygiène de vie n’a qu’un impact limité et conduit généralement à une évolution de la maladie vers une hyperlipidémie sévère.
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- la niacine : elle a une efficacité limitée et des effets nocifs importants. Elle est limitée à une utilisation restreinte et déconseillée par les autorités sanitaires américaines en combinaison avec les statines.
Ainsi, aucun des traitements actuels n’est satisfaisant, et il existe un besoin important pour un traitement efficace de l’hypertriglycéridémie, qui soit bien toléré et par conséquent qui puisse être administré sur le long terme sans présenter d’effets secondaires, seul ou co-administré avec un autre médicament hypolipémiant existant pour en potentialiser les effets et ainsi réduire la dose nécessaire et donc les effets secondaires.
C’est l’objectif de la présente invention, qui, pour y répondre, vise l’utilisation de bactéries particulières du microbiote intestinal humain, à savoir des bactéries de la famille desChristensenellacées.
Des bactéries de la famille desChristensenellacées, notamment du genreChristensenella, ont déjà été étudiées et décrites. C’est le cas en particulier deChristensenella minuta,Christensenella massiliensisetChristensenella timonensis.Christensenella minutaen particulier a été décrite pour la première fois en 2012. En 2014, une étude a montré qu’il s’agissait du taxon le plus héritable dans une cohorte de jumeaux britanniques et que leur présence est associée à un indice de masse corporelle faible. Cette corrélation entreChristensenella minutaet l’indice de masse corporelle faible a ensuite été observée dans une dizaine d’études parues depuis 2014 dans des populations géographiquement diverses.
De façon surprenante, et selon l’invention, les bactéries de la famille desChristensenellacées, notamment du genreChristensenella, et notammentChristensenella minuta, lorsqu’elles sont administrées à l’homme ou à l’animal, sont capables d’agir sur la diminution des triglycérides circulants et des lipoprotéines (LDL, VLDL).
C’est pourquoi, l’invention a pour objet une bactérie de la famille desChristensenellacées,pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie chez l’être humain ou l’animal.
Avantageusement, une telle bactérie, lorsqu’elle est administrée à un être humain ou un animal présentant une hypertriglycéridémie, est capable d’agir sur les triglycérides en excès dans l’organisme et sur les lipoprotéines qui permettent leur transport.
L’invention a également pour objet les compositions comprenant au moins une bactérie de la famille desChristensenellacées,pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie chez l’être humain ou l’animal.
D’autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description en détails de l’invention qui va suivre.
L’invention a donc pour objet l’utilisation dans la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie chez l’être humain ou l’animal, d’au moins une bactérie de la famille desChristensenellacées.
L’invention vise donc une bactérie de la famille desChristensenellacéespour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie, en particulier chez des personnes ou des animaux présentant une hypertriglycéridémie secondaire.
Selon l’invention, les bactéries de la famille desChristensenellacées, lorsqu’elles sont administrées à un être humain ou un animal présentant une hypertriglycérdémie, sont capables d’agir sur les triglycérides circulants en excès lors d’une hypertriglycéridémie, et sur les lipoprotéines LDL (« low density lipoproteins » lipoprotéines de faible densité et VLDL (« very low density lipoproteins » lipoprotéines de très faible densité). Ces molécules sont directement à l’origine de la maladie et leur diminution permet de prévenir et/ou lutter contre la pathologie. En particulier l’invention permet de diminuer le taux de triglycérides circulants sous le seuil des 150 mg/dL et celui des lipoprotéines LDL sous le seuil des 1,6 g/L.
La ou les bactéries utiles selon l’invention, sont administrées à des êtres humains ou des animaux dans une quantité efficace pour une action sur au moins une de ces molécules, c’est-à-dire pour diminuer la production d’au moins une de ces molécules dans l’organisme. Selon un mode de réalisation adapté, la ou les bactéries peuvent être administrées à raison d’une dose de 106à 1012unités formant des colonies (CFU) par jour, quel que soit le poids de la personne ou de l’animal. Préférentiellement il s’agit d’une dose unique, c’est-à-dire administrée en une seule fois ou une dose avant chaque repas soit trois fois par jour.
Préférentiellement, la bactérie de la famille desChristensenellacéesest utile également dans le traitement d’au moins une maladie provoquée par une hypertriglycéridémie telle que de l’athérosclérose ou la pancréatite aigüe.
La ou les bactéries utiles selon l’invention sont des bactéries de la famille desChristensenellacées, préférentiellement du genreChristensenella. Il peut s’agir en particulier deChristensenella massiliensis, Christensenella timonensiset/ouChristensenella minuta.Selon une variante particulièrement adaptée, il s’agit deChristensenella minuta.
Ces bactéries peuvent être isolées à partir de selles humaines par exemple selon les protocoles publiés par Morotomi et al. 2012 (Morotomi, M., Nagai, F. & Watanabe, Y. Description of Christensenella minuta gen. nov., sp. nov., isolated from human faeces, which forms a distinct branch in the order Clostridiales, and proposal of Christensenellaceae fam. nov. INTERNATIONAL JOURNAL OF SYSTEMATIC AND EVOLUTIONARY MICROBIOLOGY 62, 144–149 (2012)) et NDongo et al. 2016 (Ndongo, S., Dubourg, G., Khelaifia, S., Fournier, P. E. & Raoult, D. Christensenella timonensis, a new bacterial species isolated from the human gut. New Microbes and New Infections 13, 32–33 (2016)). Ces documents décrivent également les méthodes de culture des bactéries utiles selon l’invention.
La ou les bactéries utiles selon l’invention, pour leur utilisation précédemment décrite, sont préférentiellement administrées dans une composition.
Ainsi, l’invention a également pour objet une composition comprenant au moins une bactérie de la famille desChristensenellacéesdans la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie chez l’être humain ou l’animal. La ou les bactéries sont présentes en une quantité efficace dans la composition permettant un effet sur l’hypertriglycéridémie dont sont atteints les personnes ou les animaux traités.
Préférentiellement, la composition utile selon l’invention comprend 106à 1012unités formant des colonies (CFU) de bactéries de la famille desChristensenellacéespar dose quotidienne de composition à administrer. Préférentiellement cela correspond à une dose quotidienne de bactéries à administrer, quel que soit le poids de la personne ou de l’animal. De façon préférée, cette dose est administrée en une seule fois.
La composition utile selon l’invention peut être sous forme liquide. Elle peut notamment comprendre des bactéries de la famille desChristensenellacéeset un milieu de culture desdites bactéries qui permet de les conserver, comme par exemple préférentiellement le milieu Columbia agar anaérobique enrichi en sang de mouton, ou un milieu équivalent ne contenant pas de produit dérivé d’origine animale.
Selon une variante, la composition utile selon l’invention peut se présenter sous forme solide. Dans ce cas les bactéries peuvent être présentes sous forme lyophilisée, et peuvent comprendre également des excipients tels que par exemple la cellulose microcrystalline, le lactose, le saccharose, le fructose, le lévulose, les amidons, le stachyose, le raffinose, l’amylum, le lactate de calcium, le sulfate de magnésium, le citrate de sodium, le calcium stearate, la polyvinylpyrrolidone, la maltodextrine, les galactooligosaccharides, les fructooligosaccharides, les pectines, les béta-glucans, les lactoglobulines, les isomaltooligosaccharides, les polydextroses, le sorbitol et/ou le glycérol.
Les compositions utiles selon l’invention peuvent se présenter sous forme de poudre, de poudre microencapsulée, de gélule, de capsule, de comprimé, de pastille, de granulés, d’émulsion, de suspension ou de suppositoire. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, elles peuvent se présenter sous une forme gastro-résistante, telles qu’un comprimé enrobé contenant des bactéries microencapsulées.
Les bactéries peuvent être utilisées vivantes ou inactivées par exemple par la chaleur, l’exposition à un pH approprié, aux rayons gamma ou à la mise sous haute pression.
Elles peuvent être toutes vivantes ou toutes inactivées.
Préférentiellement, au moins une partie des bactéries est constituée par des bactéries vivantes, en particulier au moins 50% (en nombre), encore plus préférentiellement au moins 90% (en nombre).
Ainsi, selon un mode de réalisation adapté, les bactéries présentes dans la composition utile selon l’invention sont pour au moins 50% des bactéries vivantes (en nombre), préférentiellement pour au moins 90% des bactéries vivantes (en nombre), encore plus préférentiellement toutes vivantes.
Les conditions de conservation selon l’invention se présentent pour des formulations liquides sous la forme d’un produit congelé maintenu à -20°C dans un sachet hermétique. Pour les formulations solides, les conditions de conservation selon l’invention comprennent une capsule ou un enrobage hermétique à la lumière et à l’oxygène maintenu à une température ambiante comprise entre 15°C et 40°C et un taux d’humidité compris entre 3% et 70%.
Les bactéries utiles selon l’invention, et en particulier les compositions l’incluant, peuvent être administrées par voie orale, topique, inhalée ou rectale.
Les compositions utiles selon l’invention, en plus des bactéries utiles selon l’invention peuvent comprendre d’autres composés, tels que :
- au moins un probiotique, et/ou
- au moins une bactérie produisant de l’acide lactique qui permet de créer un environnement anaérobique favorable auxChristensenellacéestelle qu’au moins une bactérie choisie parmi les bactéries du genreLactobacillus spp.,Bifidobacteriumspp.,Streptococcusspp. et/ou au moins un autre organisme favorisant les conditions anaérobiques nécessaires à la survie desChristensenellacéestelle qu’au moins une levure choisie parmi desSaccharomycesspp. ou des micro-organismes de la famille desMethanobacteriaceaeet/ou
- au moins une bactérie associée à l’écosystème desChristensenellacéescar elles facilitent leur survie dans l’intestin telle qu’au moins une bactérie choisie parmi les bactéries du phylum Firmicutes, Bacteroidetes, Actinobacteria, Tenericutes, et Verrucomicrobia, et/ou
-au moins une bactérie choisie parmi les bactéries de l’ordre desClostridales, desVerrucomicrobiales, des Aeromonadales, desAlteromonadales, ML615J-28, RF32, YS2,de la famille desClostridiacées, desLachnospiracées, desRuminococcacées, desBacteroidac é e s, desEnterococcac é e s, desRikenéllacées, desDehalobactériacées,des Veillonellacéeset/ou
- au moins une bactérie choisie parmi les bactéries du genreFaecalibacterium,Akkermansia,Eubacterium , TuricibacteretOscillospiratelle que par exempleFaecalibacterium praus n itzii,Akkermansia muciniphila,Eubacterium halii,Turicibacter sanguinis,Oscillospira guilliermondii., et/ou
- au moins un prébiotique tel que par exemple au moins un prébiotique choisi parmi les galactooligosaccharides, les fructooligosaccharides, les inulines, les arabinoxylans, les béta-glucanes, les lactoglobulines et/ou les béta-caséines, et/ou
- au moins un polyphénol tel que par exemple au moins un polyphénol choisi parmi la quercetin, le kaempferol, le resvératrol, les flavones (comme la lutéoline), les flavan-3-ols (comme les catéchines), les flavanones (comme la narinénine), les isoflavones, les anthocyanidines, les proanthocyanidines, et/ou
- au moins un minéral et/ou au moins une vitamine et/ou au moins un agent nutritionnel, et/ou
- au moins un principe actif pharmaceutique préférentiellement choisi parmi les oméga 3, les statines, les fibrates, la niacine.
- au moins un probiotique, et/ou
- au moins une bactérie produisant de l’acide lactique qui permet de créer un environnement anaérobique favorable auxChristensenellacéestelle qu’au moins une bactérie choisie parmi les bactéries du genreLactobacillus spp.,Bifidobacteriumspp.,Streptococcusspp. et/ou au moins un autre organisme favorisant les conditions anaérobiques nécessaires à la survie desChristensenellacéestelle qu’au moins une levure choisie parmi desSaccharomycesspp. ou des micro-organismes de la famille desMethanobacteriaceaeet/ou
- au moins une bactérie associée à l’écosystème desChristensenellacéescar elles facilitent leur survie dans l’intestin telle qu’au moins une bactérie choisie parmi les bactéries du phylum Firmicutes, Bacteroidetes, Actinobacteria, Tenericutes, et Verrucomicrobia, et/ou
-au moins une bactérie choisie parmi les bactéries de l’ordre desClostridales, desVerrucomicrobiales, des Aeromonadales, desAlteromonadales, ML615J-28, RF32, YS2,de la famille desClostridiacées, desLachnospiracées, desRuminococcacées, desBacteroidac é e s, desEnterococcac é e s, desRikenéllacées, desDehalobactériacées,des Veillonellacéeset/ou
- au moins une bactérie choisie parmi les bactéries du genreFaecalibacterium,Akkermansia,Eubacterium , TuricibacteretOscillospiratelle que par exempleFaecalibacterium praus n itzii,Akkermansia muciniphila,Eubacterium halii,Turicibacter sanguinis,Oscillospira guilliermondii., et/ou
- au moins un prébiotique tel que par exemple au moins un prébiotique choisi parmi les galactooligosaccharides, les fructooligosaccharides, les inulines, les arabinoxylans, les béta-glucanes, les lactoglobulines et/ou les béta-caséines, et/ou
- au moins un polyphénol tel que par exemple au moins un polyphénol choisi parmi la quercetin, le kaempferol, le resvératrol, les flavones (comme la lutéoline), les flavan-3-ols (comme les catéchines), les flavanones (comme la narinénine), les isoflavones, les anthocyanidines, les proanthocyanidines, et/ou
- au moins un minéral et/ou au moins une vitamine et/ou au moins un agent nutritionnel, et/ou
- au moins un principe actif pharmaceutique préférentiellement choisi parmi les oméga 3, les statines, les fibrates, la niacine.
L’invention est à présent illustrée par des exemples de bactéries utiles selon l’invention, des procédés de cultures de ces bactéries, des exemples de compositions les contenant et des résultats d’essais démontrant l’efficacité de l’invention.
Exemple 1 : Christensenella minuta.
Christensenella minutapeut-être cultivée selon le protocole opératoire décrit en suivant.
1/ Dissoudre un milieu RCM (“Reinforced Clostridial Medium” milieu clostridiale renforcé) déshydraté dans de l’eau distillée
2/Ajouter 0,5 mL/L de solution de résazurine-Na (0,1% p/v)
3/Porter à ébullition et refroidir à température ambiante tout en injectant un mélange gazeux à 80% de N2et à 20% de CO2
4/Etaler le milieu sous la même atmosphère gazeuse dans des tubes de type Hungate anoxiques ou dans des flacons de sérum puis autoclaver
5/Avant utilisation, ajoutez 1,0 g de carbonate de sodium par litre à partir d'une solution mère anoxique stérile préparée avec un mélange gazeux à 80% de N2et à 20% de CO2
6/ Vérifier le pH du milieu après autoclavage et ajuster le pH entre 7,3 et 7,5, en utilisant une solution mère anoxique stérile de bicarbonate de sodium (5% p / v) préparée dans une atmosphère gazeuse à 80% de N2et à 20% de CO2.
Christensenella minutapeut-être cultivée selon le protocole opératoire décrit en suivant.
1/ Dissoudre un milieu RCM (“Reinforced Clostridial Medium” milieu clostridiale renforcé) déshydraté dans de l’eau distillée
2/Ajouter 0,5 mL/L de solution de résazurine-Na (0,1% p/v)
3/Porter à ébullition et refroidir à température ambiante tout en injectant un mélange gazeux à 80% de N2et à 20% de CO2
4/Etaler le milieu sous la même atmosphère gazeuse dans des tubes de type Hungate anoxiques ou dans des flacons de sérum puis autoclaver
5/Avant utilisation, ajoutez 1,0 g de carbonate de sodium par litre à partir d'une solution mère anoxique stérile préparée avec un mélange gazeux à 80% de N2et à 20% de CO2
6/ Vérifier le pH du milieu après autoclavage et ajuster le pH entre 7,3 et 7,5, en utilisant une solution mère anoxique stérile de bicarbonate de sodium (5% p / v) préparée dans une atmosphère gazeuse à 80% de N2et à 20% de CO2.
Exemple 2 : Christensenella massiliensis
Christensenella massiliensispeut-être cultivée selon le protocole opératoire décrit en suivant.
Christensenella massiliensispeut-être cultivée selon le protocole opératoire décrit en suivant.
1/Préparer un milieu carboxyméthylcellulose (N2/ CO2) en suivant les instructions suivantes fournies par DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen).
| Casitone | 30.0 g |
| Extrait de levure | 5.0 g |
| K2HPO4 | 5.0 g |
| Na-resazurin solution (0.1% w/v) | 0.5 ml |
| L-Cysteine-HCl x H2O | 0.5 g |
| D-Glucose | 4.0 g |
| Cellobiose | 1.0 g |
| Maltose | 1.0 g |
| Amidon (soluble) | 1.0 g |
| Na2CO3 | 1.5 g |
| Filtrat de viande (voir Tableau 2) | 1000ml |
2/Dissoudre les différents constituants listés dans le tableau ci-dessus, sauf la cystéine, les carbohydrates et le carbonate.
3/Faire bouillir le milieu pendant 1 min, puis le laisser refroidir à la température ambiante sous une atmosphère gazeuse à 80% de N2et à 20% de CO2 .
4/Ajouter 0,5 g/L de L-cystéine-HCl x H2O et le verser sous la même atmosphère gazeuse dans des tubes de type Hungate (pour les souches exigeant des particules de viande, introduire celles-ci en premier dans le tube, utiliser 1 partie de particules de viande pour 4 ou 5 parties de liquide).
5/ Autoclavage à 121°C pendant 20 min.
6/ Après autoclavage, ajouter le glucose, le cellobiose, le maltose et l'amidon provenant de solutions mères anoxiques stériles préparées à 100% de gaz N2et de carbonate à partir d'une solution mère anoxique stérile préparée sous des mélanges gazeux à 80% de N2et 20% de CO2 .
7/ Ajuster le pH du milieu à 7, si nécessaire.
Préparation du Filtrat de viande :
3/Faire bouillir le milieu pendant 1 min, puis le laisser refroidir à la température ambiante sous une atmosphère gazeuse à 80% de N2et à 20% de CO2 .
4/Ajouter 0,5 g/L de L-cystéine-HCl x H2O et le verser sous la même atmosphère gazeuse dans des tubes de type Hungate (pour les souches exigeant des particules de viande, introduire celles-ci en premier dans le tube, utiliser 1 partie de particules de viande pour 4 ou 5 parties de liquide).
5/ Autoclavage à 121°C pendant 20 min.
6/ Après autoclavage, ajouter le glucose, le cellobiose, le maltose et l'amidon provenant de solutions mères anoxiques stériles préparées à 100% de gaz N2et de carbonate à partir d'une solution mère anoxique stérile préparée sous des mélanges gazeux à 80% de N2et 20% de CO2 .
7/ Ajuster le pH du milieu à 7, si nécessaire.
Préparation du Filtrat de viande :
| Viande hachée (sans gras) | 500.0 g |
| NaOH 1 N | 25.0 ml |
| Eau distillée | 1000ml |
- Utiliser du bœuf maigre ou de la viande de cheval.
- Enlever la graisse et le tissu conjonctif avant de hacher.
- Mélanger la viande, l'eau et NaOH, puis faire bouillir pendant 15 min sous agitation.
- Laisser refroidir à la température ambiante, retirer la graisse de la surface et filtrer, en retenant les particules de viande et le filtrat.
- Ajouter au filtrat de l'eau jusqu'à un volume final de 1000,0 ml.
- Enlever la graisse et le tissu conjonctif avant de hacher.
- Mélanger la viande, l'eau et NaOH, puis faire bouillir pendant 15 min sous agitation.
- Laisser refroidir à la température ambiante, retirer la graisse de la surface et filtrer, en retenant les particules de viande et le filtrat.
- Ajouter au filtrat de l'eau jusqu'à un volume final de 1000,0 ml.
Les bactéries doivent être cultivées en condition anaérobie à 37°C.
Exemple 3 : Christensenella timonensis
Christensenella timonensispeut-être cultivée selon le même protocole opératoire que celui décrit à l’exemple 2 pourChristensenella massiliensis.
Christensenella timonensispeut-être cultivée selon le même protocole opératoire que celui décrit à l’exemple 2 pourChristensenella massiliensis.
Exemple 4 : Composition utile selon l’invention sous forme liquide
Un exemple de composition utile selon l’invention sous forme liquide est une composition comprenantChristensenella minuta109CFU/mL dans le milieu de culture RCM anaérobie décrit ci-dessus modifié pour ne contenir aucun produit d’origine animale et enrichi en glycérol 5%.
La composition de l’exemple 4 est obtenue à partir d’une RCB («research cell bank » banque de cellules de recherche) préparée à base deChristensenella minuta1010CFU/mL puis conservée congelée à -20°C dans un sachet hermétique à l’oxygène.
La composition congelée doit être réchauffée à température ambiante jusqu’à retrouver une forme liquide avant utilisation.
Un exemple de composition utile selon l’invention sous forme liquide est une composition comprenantChristensenella minuta109CFU/mL dans le milieu de culture RCM anaérobie décrit ci-dessus modifié pour ne contenir aucun produit d’origine animale et enrichi en glycérol 5%.
La composition de l’exemple 4 est obtenue à partir d’une RCB («research cell bank » banque de cellules de recherche) préparée à base deChristensenella minuta1010CFU/mL puis conservée congelée à -20°C dans un sachet hermétique à l’oxygène.
La composition congelée doit être réchauffée à température ambiante jusqu’à retrouver une forme liquide avant utilisation.
Exemple 5 : Composition utile selon l’invention sous forme solide
Un exemple de composition utile selon l’invention sous forme lyophilisée peut être obtenu par lyophilisation de la composition de l’exemple 4 à l’état congelé.
Un exemple de composition utile selon l’invention sous forme lyophilisée peut être obtenu par lyophilisation de la composition de l’exemple 4 à l’état congelé.
RESULTATS D’ESSAIS DEMONTRANT L’EFFET DE L’INVENTION
Démonstration
in vivo
de l’eff
et
sur la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie
L’objectif de cette étude est d'évaluer les effets de bactéries de la famille desChristensenella céessur l'hypertriglycéridémie. L’étude a été réalisée en aveugle : les expérimentateurs ne connaissaient pas les traitements afin que leurs connaissances antérieures n'influencent en aucun cas le résultat de l'étude.
Le protocole opératoire est décrit en suivant.
-Des souris mâles et femelles C57Bl/6 âgées de quatre semaines ont été achetées à Charles River (St Germain sur l’Arbresle, France) et reçues dans l’élevage afin de commencer une période d’acclimatation d’une semaine au régime de maintenance standard (Safe A04). Le premier jour de l'expérience (J0), les animaux ont été mis sous un régime riche en graisses (« Research Diet D12451 » 45% kcal noté HFDF45% dans le Tableau 1 pour « half fat diet 45% ») et répartis aléatoirement en 2 groupes (n = 5 par groupe / par sexe), chacun recevant une solution à 150 µL deC hristensenella minuta(109UFC/ mL) ou une solution témoin constituée par le milieu de culture utilisé pour la croissance des bactéries pendant 12 semaines.
Les animaux ont reçu de la nourriture et de l’eau à volonté pendant toute la durée de l’étude et ont été maintenus dans une pièce à température (22,0 ± 2,0 ° C) et humidité (40-50%) constante et éclairée sur un cycle 12h (8h - 20h) / 12h d'obscurité.
À la fin de l'essai (J85), un prélèvement sanguin final a été effectué sur les animaux anesthésiés (avec un mélange de kétamine / xylazine 80/10 mg / kg). Les échantillons de sang ont été recueillis dans des tubes à centrifuger pré-remplis de sulfate d'héparine (200 UI/mL de sang). Le plasma a été séparé par centrifugation (3 500 tr / min, 15 min à 4 ° C) et les triglycérides ont été mesurés.
-Des souris mâles et femelles C57Bl/6 âgées de quatre semaines ont été achetées à Charles River (St Germain sur l’Arbresle, France) et reçues dans l’élevage afin de commencer une période d’acclimatation d’une semaine au régime de maintenance standard (Safe A04). Le premier jour de l'expérience (J0), les animaux ont été mis sous un régime riche en graisses (« Research Diet D12451 » 45% kcal noté HFDF45% dans le Tableau 1 pour « half fat diet 45% ») et répartis aléatoirement en 2 groupes (n = 5 par groupe / par sexe), chacun recevant une solution à 150 µL deC hristensenella minuta(109UFC/ mL) ou une solution témoin constituée par le milieu de culture utilisé pour la croissance des bactéries pendant 12 semaines.
Les animaux ont reçu de la nourriture et de l’eau à volonté pendant toute la durée de l’étude et ont été maintenus dans une pièce à température (22,0 ± 2,0 ° C) et humidité (40-50%) constante et éclairée sur un cycle 12h (8h - 20h) / 12h d'obscurité.
À la fin de l'essai (J85), un prélèvement sanguin final a été effectué sur les animaux anesthésiés (avec un mélange de kétamine / xylazine 80/10 mg / kg). Les échantillons de sang ont été recueillis dans des tubes à centrifuger pré-remplis de sulfate d'héparine (200 UI/mL de sang). Le plasma a été séparé par centrifugation (3 500 tr / min, 15 min à 4 ° C) et les triglycérides ont été mesurés.
Les résultats sont présentés dans le Tableau 3.
| Cage – code souris | Triglycérides mM | ||
| HFD45% + C minuta | ♀ | C3- SM | 0,42 |
| C3- OG | 0,80 | ||
| C3- OD | 0,65 | ||
| C6- SM | 0,43 | ||
| C6- OG | 0,35 | ||
| HFD45% + témoin |
C2- SM | 1,20 | |
| C2- OG | 0,52 | ||
| C7- SM | 0,73 | ||
| C7- OG | 0,63 | ||
| C7- OD | 0,54 | ||
| HFD45% + C minuta | ♂ | C9- SM | 0,41 |
| C9- OG | 0,56 | ||
| C15- SM | 0,31 | ||
| C15- OG | 0,42 | ||
| C15- OD | 1,23 | ||
| HFD45% + témoin | C12- SM | 0,34 | |
| C12- OG | 1,94 | ||
| C12- OD | 1,12 | ||
| C14- SM | 0,84 | ||
| C14- OG | 1,24 |
Ces résultats montrent que l’administration d’une bactérie de la famille desChristensenellacéesempêche l’augmentation des triglycérides plasmatiques et peut être utilisée en prévention ou en traitement de l’hypertriglycéridémie .
Claims (14)
- Bactérie de la famille desChristensenellacéespour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie chez l’être humain ou l’animal.
- Bactérie de la famille desChristensenellacéespour son utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite bactérie est une bactérie du genreChristensenella.
- Bactérie de la famille desChristensenellacéespour son utilisation selon l’une des précédentes revendications, caractérisée en ce que ladite bactérie est choisie parmiChristensenella massiliensis, Christensenella timonensisetChristensenella minuta.
- Bactérie de la famille desChristensenellacéespour son utilisation selon l’une des précédentes revendications, dans la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie secondaire chez l’être humain ou l’animal.
- Composition comprenant au moins une bactérie de la famille desChristensenellacéespour une utilisation selon l’une des précédentes revendications, dans la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie chez l’être humain ou l’animal.
- Composition pour son utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce qu’elle se présente sous forme liquide.
- Composition pour son utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce qu’elle se présente sous forme solide.
- Composition pour son utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que les bactéries sont présentes sous forme lyophilisée.
- Composition pour son utilisation selon l’une des revendications 5 à 8, caractérisée en ce que les bactéries présentes sont pour au moins 50% des bactéries vivantes (en nombre).
- Composition pour son utilisation selon l’une des revendications 5 à 9, caractérisée en ce que les bactéries présentes sont pour au moins 90% des bactéries vivantes (en nombre).
- Composition pour son utilisation selon l’une des revendications 5 à 10, par voie orale, rectale, inhalée ou topique.
- Composition pour son utilisation selon l’une des revendications 5 à 11, caractérisée en ce qu’elle se présente sous forme de poudre, de poudre microencapsulée, de gélule, de capsule, de comprimé, de pastille, de granulés, d’émulsion, de suspension ou de suppositoire.
- Composition pour son utilisation selon l’une des revendications 5 à 12, caractérisée en ce qu’elle se présente sous une forme gastro-résistante.
- Composition pour son utilisation selon l’une des revendications 5 à 13, caractérisée en ce qu’elle comprend également :
- au moins un probiotique, et/ou
- au moins une bactérie produisant de l’acide lactique et/ou au moins un autre organisme favorisant les conditions anaérobiques nécessaires à la survie desChristensenellacées, et/ou
- au moins une bactérie associée à l’écosystème desChristensenellacées, et/ou
- au moins une bactérie choisie parmi les bactéries du genreFaecalibacterium,Akkermansia,Eubacterium , TuricibacteretOscillospira, et/ou
- au moins un prébiotique, et/ou
- au moins un polyphénol, et/ou
- au moins un minéral et/ou au moins une vitamine et/ou au moins un agent nutritionnel, et/ou
- au moins un principe actif pharmaceutique choisi parmi les statines, les fibrates, la niacine, les oméga 3.
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1904346A FR3095339B1 (fr) | 2019-04-25 | 2019-04-25 | Bactérie de la famille des Christensenellacées dans la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie |
| EP20725761.9A EP3958882A1 (fr) | 2019-04-25 | 2020-04-24 | Bactérie de la famille des christensenellacées dans la prévention et/ou le traitement de l'hypertriglycéridémie |
| US17/912,190 US20230190824A1 (en) | 2019-04-25 | 2020-04-24 | Bacterium of the christensenellaceae family in the prevention and/or treatment of hypertriglyceridemia |
| PCT/EP2020/061510 WO2020216929A1 (fr) | 2019-04-25 | 2020-04-24 | Bactérie de la famille des christensenellacées dans la prévention et/ou le traitement de l'hypertriglycéridémie |
Applications Claiming Priority (2)
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| FR1904346A FR3095339B1 (fr) | 2019-04-25 | 2019-04-25 | Bactérie de la famille des Christensenellacées dans la prévention et/ou le traitement de l’hypertriglycéridémie |
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| Publication Number | Publication Date |
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ID=68210892
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| FR (1) | FR3095339B1 (fr) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115369050A (zh) * | 2021-05-17 | 2022-11-22 | 中国科学院微生物研究所 | 一株小克里斯滕森氏菌sj-2及其应用 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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2019
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