BE1028339B1 - Composition comprenant de l'Akkermansia muciniphila et de l'extrait de thé vert - Google Patents

Abstract

Sont divulguées des compositions comprenant de l'Akkermansia muciniphila et de l'extrait de thé vert. L'utilisation de la composition pour favoriser la perte de poids et réduire la graisse viscérale et améliorer la fonction de barrière intestinale chez un sujet qui en a besoin est également divulguée.

Description

Composition comprenant de l'Akkermansia muciniphila et de l'extrait de thé vert DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention porte sur une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de thé vert. En particulier, la présente invention concerne une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de thé vert, dans laquelle Akkermansia muciniphila est pasteurisé. Les compositions de la présente invention sont utiles dans la prévention ou le traitement d'un trouble métabolique choisi dans le groupe comprenant l'obésité, le syndrome métabolique, les troubles liés à un déficit en insuline ou à une résistance à l'insuline, le diabète sucré, l'intolérance au glucose, le métabolisme anormal des lipides, l'hyperglycémie, la dyslipidémie, les maladies de la fonction barrière, y compris les maladies inflammatoires de l'intestin, la maladie de Crohn et la colite ulcéreuse, le syndrome du côlon irritable, le trouble de la contractilité intestinale, l'hypercholestérolémie et la dyslipidémie athérogène, et en particulier l'obésité. En outre, les compositions de l'invention sont utiles pour favoriser la perte de poids, réduire la graisse viscérale ou améliorer la fonction de barrière intestinale.

BACKGROUND L'obésité et le surpoids sont une tendance mondiale, le nombre d'adultes obèses étant estimé à environ 600 millions. La prévalence des troubles liés à l'obésité, tels que, par exemple, le diabète, l'hypertension, les pathologies cardiaques et les maladies du foie. En raison de ces pathologies hautement invalidantes, l'obésité est actuellement considérée dans les pays occidentaux comme l'un des problèmes de santé publique les plus importants. L'obésité est associée à des dysfonctionnements métaboliques ayant un impact sur l'homéostasie du glucose et le métabolisme des lipides par exemple. Une autre — comorbidité est un état inflammatoire de bas grade associé à des niveaux plus élevés de lipopolysaccharides sanguins (LPS), également appelé endotoxémie métabolique. Une autre comorbidité de l'obésité est l'altération ou la réduction de la fonction de barrière intestinale. Une perméabilité intestinale accrue entraîne la translocation de bactéries et/ou de composants de micro-organismes dans le sang et dans des organes tels que le foie ou le tissu adipeux. L'inflammation intestinale, le LPS et la translocation bactérienne sont également observés lors de maladies inflammatoires de l'intestin.

Parmi les exemples, on peut citer la maladie de Crohn, la colite, la colite ulcéreuse, les douleurs intestinales ou coliques et d'autres maladies inflammatoires intestinales.

Il est intéressant de noter que tant les maladies inflammatoires de l'intestin que les maladies liées à l'obésité sont associées à des modifications de la composition du microbiote intestinal.

L'intestin humain est colonisé par une communauté diverse, complexe et dynamique de microbes représentant plus de 1000 espèces différentes, qui interagissent en permanence avec l'hôte.

Le microbiote intestinal dépend des caractéristiques de l'hôte telles que l'âge, le sexe, le bagage génétique.

Les autres facteurs comprennent les conditions environnementales telles que le stress, les médicaments, la chirurgie gastro- intestinale, les agents infectieux et toxiques et les changements alimentaires quotidiens.

Le microbiote intestinal a un impact sur le développement de l'obésité et des troubles connexes, sur le surpoids et l'inflammation intestinale, ou sur la douleur intestinale.

La dysbiose du microbiote peut perturber davantage la diaphonie entre les organes et l'intégrité de la barrière intestinale, ce qui entraîne des symptômes.

Le thé vert a été décrit pour le traitement de l'obésité ou de la glycémie.

Par exemple, Kobayashi et al (2000) (https: / /pubs.acs.org/doi/pdf/10.1021/jf0006832) révèle que les polyphénols du thé vert inhibent l'absorption du glucose.

Cependant, ce document ne révèle pas une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de thé vert.

WO2013130773A2 à Kaplan révèle une méthode pour modifier l'abondance relative de microbiote chez un sujet comprenant l'administration au sujet d'une dose efficace d'une composition consistant essentiellement en Verrucomicrobia substantiellement purifiée pour le traitement de l'obésité et du syndrome métabolique.

WO2014076246 à l'Université catholique de Louvain et à la Wageningen Universiteit décrit l'utilisation d'Akkermansia muciniphila pour le traitement de l'obésité et des troubles connexes.

Toutefois, ce document ne révèle pas une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de thé vert. — EP3347030 à l'Université catholique de Louvain et à la Wageningen Universiteit décrit Akkermansia muciniphila pour une utilisation dans le traitement dun trouble

* BE2020/5802 métabolique chez un sujet qui en a besoin, dans lequel Akkermansia muciniphila est pasteurisé. Ce document ne décrit pas la combinaison d'Akkermansia muciniphila avec un extrait de plante.

Ushiroade 2019 révèle une augmentation du genre Akkermansia dans la Verrucomicrobia chez des souris à régime riche en graisses suite à l'administration du composé du thé vert Epigallocatechin-3-gallate. Le document est disponible sur Ushiroda et al, Green tea polyphenol (epigallocatechin-3-gallate) improves gut dysbiosis and serum bile acids dysregulation in highfat diet fed mice ; J. Clin. Biochem. Nutr. | Juillet 2019 | vol. 65 | no. 1 | 34-46, doi : 10.3164/jcbn.18116. Cependant, ce document ne révèle pas une composition comprenant de l'Akkermansia muciniphila et de l'extrait de thé vert. Sheng 2018 décrit une augmentation de l'épigallocatéchine-3-gallate (EGCG) promue par Akkermansia muciniphila qui réduit efficacement l'obésité due à l'alimentation, la graisse viscérale et l'insulinorésistance. Ce document ne décrit pas une composition comprenant de l'Akkermansia muciniphila pasteurisé et un extrait de thé vert. Le document est disponible à l'adresse suivante : Sheng et al, Obesity treatment by epigallocatechin-3-gallate-regulated bile acid signaling and its enriched Akkermansia muciniphila, FASEB J. 2018 Dec ; 32(12) : 6371-6384, doi : 10.1096/fj.201800370R. US2018318323A1 à Plexus Worldwide divulgue une composition modulante des microbiomes intestinaux comprenant du thé vert pour stimuler la croissance de l'Akkermansia. Cependant, ce document ne divulgue pas une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de thé vert. CN108541953 à Zhang Quingyu révèle que les polyphénols du thé sont un prébiotique qui favorise la prolifération d'Akkermansia muciniphila dans le caecum et [liléon. Ce document ne divulgue pas une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de thé vert. Toutefois, il est toujours urgent de fournir des compositions améliorées pour traiter les troubles métaboliques, en particulier l'obésité et favoriser la perte de poids. BRÈVE DESCRIPTION DE L'INVENTION Les inventeurs actuels ont découvert de manière surprenante que l'association d'Akkermansia muciniphila et d'un extrait de thé vert donne des résultats supérieurs en matière de perte de poids par rapport à d'autres extraits de plantes et est donc synergique.

C'est notamment le cas lorsque Akkermansia muciniphila est pasteurisé.

En conséquence, un premier aspect de l'invention est une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de thé vert.

Dans un autre aspect de l'invention, Akkermansia muciniphila est pasteurisée.

Un autre aspect de l'invention est une composition destinée à être utilisée dans la prévention ou le traitement d'un trouble métabolique choisi dans le groupe comprenant l'obésité, le syndrome métabolique, les troubles liés à un déficit en insuline ou à une résistance à l'insuline, le diabète sucré, l'intolérance au glucose, métabolisme anormal des lipides, hyperglycémie, dyslipidémie, maladies de la fonction barrière, y compris les maladies inflammatoires de l'intestin, la maladie de Crohn et la colite ulcéreuse, le syndrome du côlon irritable, le trouble de la contractilité intestinale, l'hypercholestérolémie, le trouble de la fonction barrière intestinale et la dyslipidémie athérogène.

Dans un autre aspect de l'invention, le trouble métabolique est l'obésité ou le trouble de la fonction de barrière intestinale.

Dans un autre aspect de l'invention, la composition réduit le développement de la masse graisseuse, en particulier du tissu adipeux viscéral, par rapport à un sujet non traité.

Dans un autre aspect de l'invention, la composition comprend en outre un ou plusieurs ingrédients choisis dans le groupe constitué par les probiotiques, les bactéries, les levures, les microorganismes, les prébiotiques ou une combinaison de ceux-ci.

Dans un autre aspect de l'invention, la composition comprend en outre un minéral ou une vitamine ou une combinaison de ceux-ci.

Dans un autre aspect de l'invention, la composition comprend en outre un support — pharmaceutiquement acceptable ou un support de qualité alimentaire.

Dans un autre aspect de l'invention, la composition est administrée oralement.

Dans un autre aspect de l'invention, l'Akkermansia muciniphila pasteurisée est administrée en une quantité de 1.10* to 1.10" cellules par jour, de préférence de 1.10° cellules à to 1.10! cellules par jour, et encore plus préférablement de 1.106 à 1.10 cellules par jour, de préférence telle qu'exprimée en TFU par cytométrie de flux.

Autre aspect de l'invention, l'extrait de thé vert est administré en quantité de 30 à 600 mg par jour.

Dans une autre variante, l'extrait de thé vert est administré en quantité 5 allant jusqu'à 1000 mg, voire 2000 mg par jour.

Dans un autre aspect de l'invention, le thé vert contient 10 ou même moins de 5 % en poids ou plus, de préférence 50 % en poids ou plus de gallate d'épigallocatéchine (EGCG). Autre aspect de l'invention, l'extrait de thé vert est administré en une quantité qui fournit 100 mg à 600 mg d'EGCG par jour.

Dans un autre aspect de l'invention, l'extrait de thé vert est administré en une quantité qui fournit 200 mg à 300 mg d'EGCG par jour.

Dans un autre aspect de l'invention, la composition est une composition cosmétique, une composition nutritionnelle, un produit alimentaire, un complément alimentaire, un aliment médical ou un médicament.

Dans un autre aspect de l'invention, la composition comprend en outre un second extrait de plante.

Dans un autre aspect de l'invention, le second extrait de plante est choisi dans le groupe constitué par Aronia melanocarpa, Emblica officinalis, Olea Europa, Citrus bergamia, Vaccinium macrocarpon, Myrciaria dubia, Panax ginseng rouge, Vaccinium oxycoccos, Vaccinium macrocarpon.

Un autre aspect de l'invention est une méthode de production de la composition de l'invention comprenant les étapes suivantes a.

Cultures de cellules du genre Akkermansia ; b.

Pasteurisation des cellules cultivées obtenues à l'étape a) ; c.

Ajout d'un cryoprotecteur et d'un tampon de pH ; d. lyophilisation des cellules pasteurisées de l'étape c) ; e. en mélangeant la poudre lyophilisée avec un extrait de thé vert f.

Au choix, produire des capsules, des gélules ou des capsules de gel mou à partir du mélange de l'étape e).

Un autre aspect de l'invention est une composition selon l'une des revendications précédentes pour promouvoir la perte de poids ou la fonction de barrière intestinale chez un sujet qui en a besoin. Un autre aspect de l'invention est une méthode de traitement ou de prévention d'un trouble métabolique chez un sujet qui en a besoin, dans laquelle la méthode comprend l'administration au sujet d'une quantité efficace, en particulier sans effets secondaires limitant le traitement, d'une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de thé vert. Dans une forme de présentation préférée, Akkermansia muciniphila est pasteurisé.

DEFINITIONS On entend par “traitement” la réduction ou l'atténuation d'au moins un effet indésirable ou symptôme d'une maladie, d'un trouble ou d'un état. Ce terme désigne donc à la fois le traitement thérapeutique et les mesures prophylactiques ou préventives. Par "prévention”, on entend le fait d'empêcher qu'une maladie ou une affection ne survienne ou de réduire le risque qu'elle ne survienne. Par "quantité efficace” ou "quantité thérapeutiquement efficace”, on entend le niveau ou la quantité d'agent qui est visé, sans causer d'effets secondaires négatifs ou néfastes importants à la cible, retarder ou prévenir l'apparition d'un trouble métabolique, ralentir ou arrêter la progression, l'aggravation ou la détérioration d'un ou plusieurs symptômes du trouble métabolique ; provoquer une amélioration des symptômes du trouble métabolique ; réduire la gravité ou l'incidence du trouble métabolique ; guérir le trouble métabolique ; ou rétablir la quantité et/ou la proportion normale d'Akkermansia muciniphila dans l'intestin du sujet à traiter. "Akkermansia muciniphila' désigne la bactérie dégradant la mucine identifiée par Derrien (Derrien et al., 2004. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 54:1469-1476). Les cellules sont de forme ovale, non mobiles et à Gram négatif. Akkermansia muciniphila peut également être appelée Akkermansia spp. ou Akkermansia-like bacteria. Elle appartient au phylum Verrucomicrobia. Il est généralement admis que les souches présentant une similarité nucléotidique déterminée expérimentalement par hybridation ADN-ADN — d'environ 70 % peuvent être considérées comme la même espèce - ce qui correspond à une identité nucléotidique moyenne (ANI) d'environ 95 %.

Dans un mode de réalisation, Akkermansia muciniphila comprend également des fragments d'Akkermansia muciniphila. "Akkermansia muciniphila pasteurisé" désigne l'Akkermansia muciniphila soumis à un traitement thermique.

Dans l'une de ses versions, Akkermansia muciniphila pasteurisé désigne Akkermansia muciniphila qui a été chauffé à une température comprise entre 50°C et 100°C pendant au moins 10 minutes. "TFU" ou "Total Fluorescent Units" signifie le nombre de cellules tel que déterminé par leur luminosité de fluorescence après coloration.

Dans un mode de réalisation privilégié, le TFU est mesuré par cytométrie de flux.

Par exemple, dans une première étape, des aliquotes de lots de biomasse sont réhydratées dans du PBS et colorées avec Syto 9 et de liodure de propidium selon le protocole du fabricant (LIVE/DEAD® BacLight TM Bacterial Viability Kit, Thermofisher). Le TFU peut ensuite être obtenu en analysant les échantillons colorés sur le cytomètre de flux Attune NxT.

En général, les TFU sont exprimés en unités fluorescentes totales par gramme ou par ml, de préférence par gramme. "Extrait de thé vert" désigne tout extrait de feuilles ou de bourgeons de Camellia sinensis.

Lextrait de thé vert est en général riche en polyphénols, en particulier en gallate d'épigallocatéchine (EGCG), en gallate d'épicatéchine, en épicatéchines et en flavanols.

L'extrait de thé vert peut être obtenu par extraction alcoolique ou par extraction à l'eau, concentré ou non et transformé en liquide ou en poudre.

Les "probiotiques” sont des micro-organismes vivants qui, lorsqu'ils sont administrés en quantité efficace, ont un effet bénéfique sur la santé ou le bien-être d'un sujet.

Dans un cas, ces bienfaits pour la santé sont associés à l'amélioration de l'équilibre du microbiote humain ou animal dans le tractus gastro-intestinal, ou au rétablissement d'un microbiote normal.

Le terme "prébiotique” désigne une substance, comme par exemple une substance qui ne peut être digérée par l'homme, mais qui module la composition et/ou l'activité du microbiote intestinal par sa métabolisation par des micro-organismes dans l'intestin, conférant ainsi un effet physiologique bénéfique à l'hôte.

Le "sujet" désigne un animal, de préférence un mammifère, plus préférablement un humain ou un animal.

Le terme "surpoids" désigne une situation dans laquelle le sujet a un indice de masse corporelle (IMC) de 25 ou plus. Dans ce contexte, l'IMC est défini comme la masse corporelle de l'individu (en kg) divisée par le carré de sa taille (en mètre).

"L'obésité” désigne une situation dans laquelle le sujet a un IMC supérieur ou égal à 30. "Fragment" peut désigner les composants cellulaires, les métabolites, les molécules sécrétées, les vésicules et les composés résultant du métabolisme d'Akkermansia muciniphila et autres. Les fragments peuvent être obtenus, par exemple, en récupérant le sumageant d'une culture d'Akkermansia muciniphila ou en extrayant des composants cellulaires ou des fractions cellulaires, des métabolites ou des composés sécrétés d'une culture d'Akkermansia muciniphila.

DESCRIPTION DÉTAILLÉE DE L'INVENTION La requérante démontre ici que les effets bénéfiques sur le métabolisme observés après l'administration d'une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de thé vert, comme le montrent les exemples pour Akkermansia muciniphila.

Par conséquent, cette invention conceme une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de thé vert pour traiter, ou pour être utilisé dans le traitement de troubles métaboliques chez un sujet qui en a besoin.

Dans le présent document, un trouble métabolique est un trouble lié à une altération de l'homéostasie métabolique, comme par exemple une altération de l'homéostasie du glucose ou des lipides.

Dans un mode de réalisation, on dit que le trouble métabolique est l'obésité.

Parmi les autres troubles métaboliques, on peut citer, entre autres, le syndrome métabolique, les troubles liés à une carence ou à une résistance à l'insuline, le diabète sucré, y compris le diabète de type 1 ou le diabète de type 2, l'intolérance au glucose, le métabolisme anormal des lipides, athérosclérose, hypertension, prééclampsie, pathologie cardiaque, accident vasculaire cérébral, maladie hépatique grasse non alcoolique, hyperglycémie, stéatose hépatique, dyslipidémie, dysfonctionnement du système immunitaire associé au surpoids et à l'obésité, maladies du foie telles que par exemple, la fibrose associée à l'obésité, ou les anomalies des fonctions hépatiques, y compris les modifications de la production de bile, les maladies inflammatoires,

immunitaires et des fonctions de barrière comme, par exemple, les maladies inflammatoires de l'intestin, y compris la maladie de Crohn et la colite ulcéreuse, et le syndrome du côlon irritable, les maladies cardiovasculaires, l'hypercholestérolémie, l'élévation des triglycérides, l'asthme, lapnée du sommeil, l'arthrose, la neurodégénérescence, les maladies de la vésicule biliaire, le syndrome X, les troubles inflammatoires et immunitaires, la dyslipidémie athérogène et le cancer.

Dans un cas, l'hypercholestérolémie correspond à une concentration de cholestérol plasmatique supérieure ou égale à 2 g/L ou 5 mmol/L.

Dans une autre variante, l'hypercholestérolémie correspond à un rapport entre la concentration plasmatique de cholestérol total et la concentration plasmatique de HDL (cholestérol à lipoprotéines de haute densité) supérieur ou égal à 4,5:1, de préférence 5:1. Dans un mode de réalisation, les Akkermansia muciniphila pasteurisées de l'invention sont des cellules non viables.

Dans le présent document, les "cellules non viables" désignent les cellules qui ne sont pas capables de proliférer.

Des exemples pour visualiser ou compter les cellules d'Akkermansia muciniphila ont été fournis par Derrien et al. (2008. Appl.

Environ.

Microbiol. 74:1646-8), Derrien et al. (2011. Frontiers Microbiol. 2:166-175) ou Reunanen et al. (2015. Appl.

Environ.

Microbiol. 81(11):3655-62). La composition de l'invention peut également comprendre un excipient pharmaceutiquement acceptable ou un support de qualité alimentaire, par exemple des solvants, des milieux de dispersion, des revêtements, des agents isotoniques et des agents retardant l'absorption, etc.

Pour l'administration humaine, les préparations doivent répondre à des normes générales de sécurité et de pureté, comme l'exigent les normes de l'Office of Biologics de la FDA.

La présente invention concerne également un médicament, un aliment médical, un aliment ou un complément alimentaire comprenant une quantité efficace d'Akkermansia muciniphila ou d'un fragment de celle-ci et un extrait de thé vert.

La présente invention conceme également une méthode pour traiter ou prévenir un trouble métabolique chez un sujet qui en a besoin, dans laquelle ladite méthode comprend l'administration d'une quantité efficace d'Akkermansia muciniphila ou d'un fragment de celle-ci et d'un extrait de thé vert au sujet qui en a besoin.

Un autre objet de l'invention est un procédé pour rétablir une proportion normale d'Akkermansia muciniphila, de fragments ou d'autres composés actifs d'Akkermansia muciniphila dans l'intestin d'un sujet qui en a besoin, dans lequel ledit procédé comprend l'administration d'une quantité efficace d'Akkermansia muciniphila ou d'un fragment de celle-ci et d'un extrait de thé vert au sujet.

La composition de l'invention est administrée au moins une fois par semaine, de préférence au moins deux fois par semaine, plus préférablement au moins trois fois par semaine, et encore plus préférablement au moins quatre fois par semaine. Dans une autre forme, la composition de l'invention est administrée au moins une fois par jour, et de préférence au moins deux fois par jour.

Dans un mode de réalisation, la composition de l'invention est administrée pendant 1 semaine, de préférence pendant 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 semaines ou plus, voire de manière permanente.

Dans un mode de réalisation, la composition de l'invention est administrée pendant une période qui dure jusqu'à ce que le résultat souhaité soit atteint, par exemple la perte de poids, le traitement des troubles métaboliques ou la diminution du niveau de cholestérol dans le plasma.

Dans une des versions de l'invention, la dose quotidienne d'Akkermansia muciniphila administrée est de 1.10? à environs 1.105 TFU par jour, de préférence de 1.10% to 1.10"? cellules par jour, encore de préférence de 1.105 cellules à to 1.10"! cellules par jour, et encore plus préféré de 1.106 à 1.107 cellules par jour Dans une autre version de l'invention, la dose quotidienne d'Akkermansia muciniphila pasteurisée est de 1.106 à environ 1.10"? cellules/jour, de préférence d'environ 1.108 à environ 1.10'° cellules/jour, plus préférablement d'environ 1.10° à environ 1.10" — cellules/jour.

La présente invention conceme également l'utilisation cosmétique d'Akkermansia muciniphila pasteurisée ou d'un fragment de celle-ci pour favoriser la perte de poids chez un sujet.

Un autre objet de l'invention est donc une composition cosmétique comprenant une quantité cosmétiquement efficace d'Akkermansia muciniphila pasteurisée ou d'un fragment de celle-ci et un extrait de thé vert, et son utilisation pour favoriser la perte de poids chez un sujet. Par "quantité cosmétiquement efficace”, on entend ici la quantité de composition cosmétique nécessaire et suffisante pour favoriser un effet cosmétique, comme par exemple pour induire une perte de poids chez un sujet.

Dans lune des concrétisations de l'invention, la composition, la composition pharmaceutique, la composition cosmétique ou le médicament comprend en outre des souches ou espèces probiotiques supplémentaires, comme par exemple des souches ou espèces probiotiques bactériennes. Dans une autre forme, les autres souches sont pasteurisées. Ces probiotiques comprennent des souches ou des espèces de bactéries ou de champignons, de préférence des souches ou des espèces de levures. Dans une première variante, ces souches ou espèces probiotiques supplémentaires sont sélectionnées parmi celles qui sont naturellement présentes dans l'intestin du sujet, de préférence dans l'intestin humain, et plus préférentiellement dans l'intestin de sujets humains sains.

Les exemples de souches ou d'espèces probiotiques bactériennes qui peuvent être utilisées dans la présente invention comprennent, sans s'y limiter, Lactobacillus, Lactococcus, Bifidobacterium, Veillonella, Desemzia, Christensenella, Allobaculum, Coprococcus, Collinsella, Citrobacter, Turicibacter, Sutterella, Subdoligranulum, Streptococcus, Sporobacter, Sporacetigenium, Ruminococcus, Roseburia, Proteus, Propionobacterium, Leuconostoc, Weissella, Pediococcus, Streptococcus, Prevotella, Parabacteroides, Papillibacter, Oscillospira, Melissococcus, Dorea, Dialister, Clostridium, Cedecea, Catenibacterium, Butyrivibrio, Buttiauxella, Bulleidia, Bilophila, Bacteroides, Anaerovorax, Anaerostipes, Anaerofilum, _Enterobacteriaceae, Fermicutes, Atopobium, Alistipes, Acinetobacter, Slackie, Shigella, Shewanella, Serratia, Mahella, Lachnospira, Klebsiella, ldiomarina, Fusobacterium, Faecalibacterium, Eubacterium, Enterococcus, Enterobacter, Eggerthella, Dysosmobacterium ou Anaerobacterium.

Les souches probiotiques préférées sont Lactobacillus, Lactococcus, Bifidobacterium, Christensenella, Clostridium, Anaerostipes, Faecalibacterium, Eubacterium, Enterococcus, Enterobacter, Eggerthella, Dysosmobacter ou Anaerobacterium .

Les souches ou espèces de procaryotes qui peuvent être utilisées dans la présente invention comprennent, entre autres, Archaea, Fimicutes, Verrucomicrobia,

Christensenella, Bacteroidetes (comme, par exemple, Allistipes, Bacteroides ovatus, Bacteroides splachnicus, Bacteroides stercoris, Parabacteroides, Prevotella ruminicola, Porphyromondaceae, et genre apparenté), Protéobactéries, Bêta-protéobactéries (comme, par exemple, Aquabacterium et Burkholderia), Gamma-protéobactéries (comme, par exemple, Xanthomonadaceae), Actinobactéries (comme, par exemple, Actinomycetaceae et Atopobium), Fusobactéries, Méthanobactéries, Spirochètes, Fibrobactéries, Deferribactéries, Deinococcus, Thermus, = Cyanobactéries, Méthanobrevibactéries, Peptostreptococcus, Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionobactéries, Enterobacteriaceae, Faecalibacterium, Bacteroides, Parabacteroides, Prevotella, Eubacterium, Bacilles (tels que, par exemple, Lactobacillus salivarius et espèces apparentées, Aerococcus, Granulicatella, Streptococcus bovis et genre apparenté et Streptococcus intermedius et genre apparenté), Clostridium (tel que, par exemple, Anaerobutyricum halli, Eubacterium limosum, Anaerobutyricum soehngenii et genre apparenté) et Butyrivibrio.

Les exemples de souches ou d'espèces probiotiques fongiques, de préférence des souches ou espèces probiotiques de levure, qui peuvent être utilisées dans la présente invention comprennent, sans sy limiter, les Ascomycetes, les Zygomycètes et les Deutériomycètes, de préférence des groupes Aspergillus, Torulopsis, Zygosaccharomyces, Hansenula, Candida, Saccharomyces, Clavispora, Bretanomyces, Pichia, Amylomyces, Zygosaccharomyces, Endomycess, Hyphopichia, Zygosaccharomyces, Kluyveromyces, Mucor, Rhizopus, Yarrowia, Endomyces, Debaryomyces, et/ou Penicillium.

Dans un mode de réalisation, la seule souche ou espèce microbienne, de préférence bactérienne, comprise dans la composition, la composition pharmaceutique, la composition cosmétique ou le médicament est Akkermansia muciniphila.

Dans un mode de réalisation, la composition, la composition pharmaceutique, la composition cosmétique ou le médicament consiste en Akkermansia muciniphila pasteurisée.

Dans l'une des concrétisations de l'invention, la composition, la composition pharmaceutique, la composition cosmétique ou le médicament comprend en outre un prébiotique.

Les exemples de prébiotiques pouvant être utilisés dans la présente invention _ comprennent, entre autres, l'inuline et les fructanes de type inuline, l'oligofructose, les bêta-glucanes, le xylose, l'arabinose, l'arabinoxylane, le ribose, le galactose, le rhamnose, la cellobiose, le fructose, le lactose, salicine, saccharose, glucose, esculine, tween 80, tréhalose, maltose, mannose, mellibiose, mucus ou mucines, raffinose, fructooligosaccharides, galacto-oligosaccharides, acides aminés, alcools, glucides _ fermentables et toute combinaison de ceux-ci.

Parmi les autres exemples non limitatifs de prébiotiques, citons les dérivés de cellulose solubles dans l'eau, les dérivés de cellulose insolubles dans l'eau, les flocons d'avoine non transformés, le métamucil, le son et toute combinaison de ces produits.

Les exemples de dérivés de cellulose hydrosolubles comprennent, sans s'y limiter, la méthylcellulose, la méthyléthylcellulose, l'hydroxyéthylcellulose, l'éthylhydroxyéthylcellulose, l'hydroxyéthylcellulose cationique, l'hydroxypropylcellulose, l'hydroxyéthylméthylcellulose, l'hydroxypropylméthylcellulose et la carboxyméthylcellulose.

La composition de l'invention peut être administrée par voie orale, rectale, oesophagogastroduodénoscopie, coloscopie, sonde naso-gastrique ou orogastrique.

La composition peut être administrée par voie orale sous forme de comprimés, de pilules, de capsules, de gélules de gélatine molle, de pilules enrobées de sucre, ou de comprimés de dispersion, de comprimés effervescents ou d'autres solides.

La composition peut être administrée par voie orale sous forme de liquide, de solution — buvable ou de liposome.

Dans un mode de réalisation, la composition de l'invention comprend en outre des excipients, des diluants et/ou des supports choisis en fonction de la voie d'administration prévue. Les exemples d'excipients, de diluants et/ou de supports comprennent, sans s'y limiter, l'eau, une solution saline tampon au phosphate, une solution saline tampon anaérobie au phosphate, le bicarbonate de sodium, le jus, le lait, le yaourt, les préparations pour nourrissons, les produits laitiers, les colorants, comme, par exemple, le dioxyde de titane (E171), le dioxyde de fer (E172) et le noir brillant BN (E151) ; les agents aromatisants ; les épaississants, comme, par exemple, le monostéarate de glycérol ; les édulcorants ; les agents d'enrobage, comme, par exemple, l'huile de colza raffinée, l'huile de soja, l'huile d'arachide, la lécithine de soja ou la gélatine de poisson ; les diluants, comme par exemple le lactose, le lactose monohydraté ou l'amidon ; les liants, comme par exemple la povidone, l'amidon prégélatinisé, les gommes, le saccharose, le polyéthylène glycol (PEG) 4000 ou PEG 6000 ; agents de désintégration, comme par exemple la cellulose microcristalline ou le carboxyméthyl amidon sodique, comme par exemple le carboxyméthyl amidon sodique de type A ; agents lubrifiants, comme par exemple le stéarate de magnésium ; agent d'écoulement, comme par exemple la silice colloïdale anhydre, etc.

La composition de l'invention est une composition pharmaceutique. Dans un autre cas, la composition de l'invention est un additif alimentaire, un additif pour boisson, un complément alimentaire, un produit nutritionnel, un aliment médical ou une composition nutraceutique.

L'obésité et les troubles connexes sont associés à une perméabilité intestinale accrue et à une production de mucus, une barrière épithéliale, un système immunitaire et/ou une production de composés antibactériens altérés par le sujet.

En conséquence, la composition de la présente invention peut être utilisée pour diminuer la perméabilité intestinale, pour restaurer la production de mucus altérée, pour restaurer la barrière épithéliale, pour restaurer le système immunitaire ou pour restaurer la production de composés antibactériens ou une combinaison de ceux-ci.

De plus, la composition de l'invention peut être utile pour contrôler la fonction de barrière intestinale. En conséquence, un autre aspect est une méthode de contrôle de la fonction de barrière intestinale comprenant l'administration d'une quantité efficace ou cosmétiquement efficace de la composition de l'invention à un sujet qui en a besoin. Dans l'une de ces versions, la composition de l'invention régule l'épaisseur de la couche de mucus qui peut être réduite en cas d'obésité ou d'autres troubles métaboliques. Dans une autre, l'administration de la composition de l'invention induit la production de peptides antimicrobiens du côlon, comme par exemple le Reglllgamma. Dans un autre cas, l'administration de la composition de l'invention induit la production de composés de la famille des endocannabinoïdes, comme par exemple les acylglycérols choisis dans le groupe comprenant le 2-oleoylglycérol, le 2-palmitoylglycérol et le 2- arachidonoylglycérol. Dans une autre variante, l'administration de la composition de l'invention régule le renouvellement du mucus.

Dans un mode de réalisation, l'administration de la composition de l'invention à un sujet augmente la satiété dudit sujet. Par conséquent, selon ce mode de réalisation, la méthode de l'invention augmente la satiété ou diminue l'apport alimentaire chez un sujet, induisant ainsi une perte de poids durable chez le sujet, et traitant ainsi les troubles métaboliques chez ledit sujet, tels que, par exemple, les troubles métaboliques liés à l'obésité.

BRÈVE DESCRIPTION DES DESSINS La figure 1 montre le poids corporel à la semaine 12 de l'administration orale de véhicule ou d'A. muciniphila pasteurisé complétée ou non par des extraits de plantes (figure 1A et 1B) sur la prise de poids corporel à la semaine 12 dans un modèle DIO (45 kcal% de lipides, 12 semaines). ***p < 0,001, ****p < 0,0001 vs HFD Véhicule ; ###p < 001, ###p < 0,9" vs HFD pAkk (valeurs p obtenues en utilisant une ANOVA à sens unique suivie du test post-hoc de Bonferroni).

Les figures 2A, 2B, 3A et 3B montrent l'effet d'Akkermansia muciniphila pasteurisé seul ou en combinaison avec des extraits de plantes sur le poids corporel et la prise de poids dans un modèle DIO (45 kcal% de lipides, 12 semaines).

La figure 2 montre le poids corporel au fil du temps lors de l'administration orale du véhicule (cercles) ou d'A. muciniphila pasteurisé seul (carrés) ou d'A. muciniphila pasteurisé avec du thé vert (triangles) sur la prise de poids corporel au fil du temps dans un modèle DIO (45 kcal% de lipides, 12 semaines). *p < 0,05, **p < 0,01, **p < 0,001, **p < 0,0001 vs véhicule HFD ; #p < 0,05, ##p < 0,01, ## <0.0001vs HD PAK, (valeurs p obtenues à l'aide d'une ANOVA à 1 voie suivie du test post-hoc de Bonferroni).

La figure 3 montre la prise de poids au fil du temps lors de l'administration orale du véhicule (cercles) ou de A. muciniphila pasteurisé seul (carrés) ou de A. muciniphila pasteurisé avec du thé vert (triangles) sur la prise de poids au fil du temps dans un modèle DIO (45 kcal% de lipides, 12 semaines). *p < 0,05, “p < 0,01, ***p < 0,001, ***p <

0,0001 vs véhicule HFD ; #p < 0,05, ##p < 0,01, ##<0.0001 vs HP PAK, (valeurs p obtenues à l'aide d'une ANOVA à 1 voie suivie du test post-hoc de Bonferroni).

La figure 4 montre l'apport alimentaire lors de l'administration orale de véhicule ou d'A. muciniphila pasteurisé complétée ou non par du thé vert sur l'apport alimentaire. ***p < 0,001, ***p < 0,0001 vs véhicule HFD ; ####p < 0:0001vs HFD pAkk (valeurs p obtenues à l'aide d'une ANOVA unidirectionnelle suivie du test post-hoc de Bonferroni).

Les figures 4A, 4B, 4C, 4D et 4E montrent l'effet d'une composition comprenant de l'Akkermansia muciniphila pasteurisée et de l'extrait de thé vert sur la fonction de barrière intestinale dans un modèle DIO (45 kcal% de lipides, 12 semaines). La figure 5 montre l'expression génique des biomarqueurs de l'intégrité de la barrière intestinale dans le côlon lors de l'administration orale de véhicule ou de A. muciniphila pasteurisée complétée ou non par du thé vert à la semaine 12 sur différents marqueurs de l'intégrité de la barrière intestinale dans le côlon (analyse PCR du changement de pli par rapport au groupe de véhicule HFD) (A) expression de ZO-1, (B) expression d'Intectine, (C) expression d'Occludine, (D) expression de Claudine3. *p < 0,05 par rapport au véhicule HFD ; p < 0,05 par rapport au pAkk HFD. (valeurs p obtenues à l'aide d'une ANOVA à 1 voie suivie du test post-hoc de Bonferroni).

DESCRIPTION DÉTAILLÉE DU DESSIN Les figures 1, 2, 3, 4 et 5 montrent l'effet in vivo de la pasteurisation d'Akkermansia muciniphila (appelée "pAkk" dans les figures) seule ou en combinaison avec des extraits végétaux sur le poids corporel, la prise de poids, l'apport alimentaire chez les souris et la fonction de barrière intestinale chez les souris nourries avec un régime riche en graisses, ci-après dénommé "HFD". Les souris C57BL/6J mâles âgées de neuf semaines (Charles River Laboratory, l'Arbresle, France) ont bénéficié d'une période d'acclimatation d'au moins cinq jours après leur arrivée. Les animaux ont été hébergés dans des cages ventilées et enrichies (48 x 37,5 x 21 cm 3) pendant toute la phase expérimentale. Les litières des cages des animaux étaient changées une fois par semaine. Les souris ont été logées en groupes de 5 animaux selon un cycle lumineux normal (à 19 heures, lumières éteintes), 22 + 2 °C et 50 + 10 % d'humidité relative.

Les paramètres d'hébergement ont été enregistrés quotidiennement.

Pendant la phase d'acclimatation, le régime alimentaire standard (RM1 (E) 801492, SDS) et l'eau du robinet ont été fournis ad libitum.

Pendant la phase expérimentale (12 semaines), un régime alimentaire riche en graisses (45 kcal%) (Research Diet #12451) (groupe HFD) et de l'eau du robinet ont été fournis ad libitum.

Les souris ont été traitées quotidiennement avec un gavage oral de 180 ul de véhicule, ou 180 pl de solution d'A. muciniphila seule ou 180 ul de solution d'A. muciniphila + chaque extrait de plante (bergamote : 125 mg/kg ; ginseng : 50 mg/kg ou thé vert : 300 mg/kg) pendant les 12 semaines de traitement HFD.

Le poids corporel, l'alimentation et la consommation d'eau ont été évalués chaque semaine.

Le côlon proximal a été homogénéisé individuellement et l'ARN total des tissus a été préparé à l'aide de TRIReagent (Sigma Aldrich) et du kit HT QlAcube RNeasy 96 (Qiagen). L'analyse de quantification de l'ARN total a été effectuée en analysant 1 ul de chaque échantillon dans Nanodrop (Ozyme). L'ADNc a été préparé par transcription inverse de 1 ug d'ARN total en utilisant un kit RT iScript (Biorad). La PCR en temps réel a été réalisée avec le système et le logiciel de PCR en temps réel Via7 (biotechnologie appliquée) en utilisant les mélanges maîtres de PCR en temps réel SYBR Green (Biorad) pour la détection.

Le gène RPL19 a été choisi comme gène d'entretien.

Tous les échantillons ont été effectués en double, et les données ont été analysées selon la méthode 2AACT.

L'identité et la pureté du produit amplifié ont été évaluées par l'analyse de la courbe de fusion à la fin de l'amplification.

IL est surprenant de constater que parmi les extraits de plantes, le thé vert est celui qui, — combiné à l'Akkermansia muciniphila pasteurisé, a donné des résultats supérieurs sur le poids, la prise de poids (figure 1, 2 et 3) et la fonction de barrière intestinale (figure 5). En effet, la prise de poids était significativement plus faible pour la combinaison d'Akkermansia muciniphila pasteurisé et d'extrait de thé vert que pour l'Akkermansia muciniphila pasteurisé seul.

Ces résultats indiquent un effet potentialisateur ou synergique de l'extrait de thé vert lorsqu'il est combiné avec de l'Akkermansia muciniphila pasteurisée.

L'association d'Akkermansia muciniphila pasteurisé et d'un extrait de thé vert a également amélioré la fonction barrière avec un effet plus prononcé sur la ZO-1, l'intectine, l'occlusion et la Claudine 3 (voir figure 5).

Claims (15)

REVENDICATIONS

1. Composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de thé vert.

2. Composition selon la revendication 1, dans laquelle Akkermansia muciniphila est pasteurisée.

3. Composition conforme à l'une des revendications précédentes, destinée à être utilisée dans la prévention ou le traitement d'un trouble métabolique choisi dans le groupe comprenant l'obésité, le syndrome métabolique, les troubles liés à un déficit en insuline ou à une résistance à l'insuline, le diabète sucré, l'intolérance au glucose, métabolisme anormal des lipides, hyperglycémie, dyslipidémie, maladies de la fonction barrière, y compris les maladies inflammatoires de l'intestin, la maladie de Crohn et la colite ulcéreuse, le syndrome du côlon irritable, le trouble de la contractilité intestinale, l'hypercholestérolémie et la dyslipidémie athérogène.

4. Composition selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle le trouble métabolique est l'obésité ou le trouble de la fonction de barrière intestinale.

5. Composition selon l'une des revendications précédentes, comprenant en outre un ou plusieurs ingrédients choisis dans le groupe constitué par les probiotiques, les bactéries, les levures, les microorganismes, les prébiotiques ou une combinaison de ceux-ci.

6. Composition selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle la composition comprend en outre un minéral ou une vitamine ou une combinaison de ceux-ci.

7. Composition selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle la composition comprend en outre un support pharmaceutiquement acceptable ou un support de qualité alimentaire.

8. Composition selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle la composition est administrée oralement.

9. Composition selon lune des revendications précédentes, dans laquelle l'Akkermansia muciniphila pasteurisé est administré en une quantité de 1.10* to

1.10"? cellules par jour, de préférence de 1.10° cellules à to 1.10! cellules par jour, et encore plus préférablement de 1.106 à 1. 10% cellules par jour.

10. Composition selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle l'extrait de thé vert est administré en une quantité de 30 mg à 300 mg par jour, de préférence de 100 mg à 200 mg par jour de gallate d'épigallocatéchine (EGCG).

11.Composition selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle la composition est une composition cosmétique, une composition nutritionnelle, un produit alimentaire, un complément alimentaire, un aliment médical ou un médicament.

12. Composition selon la revendication 1, dans laquelle la composition comprend en outre un second extrait de plante.

13. Composition selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle le second extrait de plante est choisi dans le groupe constitué par Aronia melanocarpa, Emblica officinalis, Olea Europa, Citrus bergamia, Vaccinium macrocarpon, Myrciaria dubia, Panax ginseng rouge, Vaccinium oxycoccos, Vaccinium macrocarpon.

14.Méthode de production d'une composition selon lune des revendications précédentes comprenant les étapes suivantes a. Cultures de cellules du genre Akkermansia ; b. Pasteurisation des cellules cultivées obtenues à l'étape a) ; c. Ajout d'un cryoprotecteur et d'un tampon de pH ; d. lyophilisation des cellules pasteurisées de l'étape c) ; e. en mélangeant la poudre lyophilisée avec un extrait de thé vert f. Au choix, produire des capsules ou des gélules à partir du mélange de l'étape e).

15.Utilisation de la composition selon l'une des revendications précédentes pour favoriser la perte de poids ou réduire la graisse viscérale ou améliorer la fonction de barrière intestinale chez un sujet qui en a besoin.