FR2999085A1 - Utilisation d'un extrait de levure pour augmenter la synthese de peptides antimicrobiens - Google Patents

Abstract

La présente invention se situe dans le domaine cosmétique et pharmaceutique. La présente invention concerne l'utilisation d'un extrait de levure, provenant de l'hydrolyse des protéines de levures, pour protéger la muqueuse et la cavité buccale des agressions microbiennes, pour renforcer la fonction barrière chimique et pour maintenir l'équilibre de la microflore normale de la cavité buccale. L'invention concerne encore l'utilisation dans une composition, d'un extrait de levure provenant de l'hydrolyse des protéines de levures, pour augmenter le taux d'expression de peptides antimicrobiens.

Description

UTILISATION D'UN EXTRAIT DE LEVURE POUR AUGMENTER LE TAUX D'EXPRESSION DE PEPTIDES ANTIMICROBIENS La présente invention se situe dans le domaine cosmétique et pharmaceutique. La présente invention concerne l'utilisation d'un extrait de levure provenant de l'hydrolyse des protéines de levures pour protéger la muqueuse et la cavité buccale des agressions microbiennes, pour renforcer la fonction barrière chimique et pour maintenir l'équilibre de la microflore normale de la cavité buccale. L'invention concerne encore l'utilisation dans une composition, d'un extrait de levure provenant de l'hydrolyse des protéines de levures, pour augmenter le taux d'expression de peptides antimicrobiens.

Par la suite de la description on utilise indifféremment les termes « muqueuse buccale » et « muqueuse orale » pour se référer à l'épithélium de recouvrement de la cavité buccale. Les termes « cavité buccale » ou « cavité orale » selon l'invention englobent l'ensemble des surfaces de la muqueuse orale, les glandes salivaires associées et les annexes kératiniques présentes dans la cavité buccale, en particulier les dents, les gencives, la langue, et le palais.

Toute la cavité buccale est revêtue d'une membrane muqueuse protectrice, la muqueuse buccale, qui contient de nombreux récepteurs sensoriels. L'épithélium de la muqueuse buccale est de type pavimenteux stratifié (muqueuse buccale et de l'oesophage) et tend à se kératiniser au niveau des points de friction importante (tissu gingival et palatin). Cet épithélium repose sur un tissu collagène dense appelé chorion, relié aux muscles sous jacents par un tissu de soutien sous muqueux, dans lequel se trouvent de nombreuses glandes salivaires accessoires, séreuses et muqueuses. La fonction première de la muqueuse buccale est de constituer une barrière entre l'environnement extérieur et le milieu intérieur pour protéger les tissus des dommages mécaniques, de la pénétration des microorganismes et des matériaux toxiques. C'est la couche la plus externe de l'épithélium de la muqueuse orale qui assure cette fonction grâce à deux types de barrières: une barrière physique constituée par la muqueuse buccale, elle-même assurée grâce à la forte cohésion intercellulaire (desmosomes, jonctions adhérentes), et une barrière chimique formée par les sécrétions de la muqueuse buccale (salive) qui permet de lutter contre les allergènes et les irritants et possèdent un rôle antimicrobien, grâce à la présence d'enzymes hydrolytiques et de peptides antimicrobiens. Les cellules du système immunitaire forment une troisième barrière défensive capable d'éliminer les microorganismes qui seraient parvenus à passer à travers l'épithélium buccal. La cavité buccale est un environnement exposé à de nombreux microorganismes, ainsi une flore microbienne importante est présente sur les surfaces de la cavité buccale, par exemple sous la forme de biofilm (ou « plaque bactérienne »), sur la surface des gencives et des dents. On distingue communément la microflore compatible avec la santé de la cavité buccale de la microflore dite pathogène. La microflore buccale du sujet sain, ou « microflore buccale normale », comprend des microorganismes commensaux et transitoires cohabitant 10 harmonieusement et constituant un écosystème stable, le plus souvent des bactéries Gram+. Il s'agit d'Actinomyces, de certains Streptocoques, comme S. Gordonii, etc. D'autres microorganismes comme les levures du genre Candida, Candida albicans par exemple, font également partie de la microflore normale de la bouche. Pour la flore pathogène, les bactéries sont regroupées en complexes, selon leur degré de pathogénicité et leur 15 localisation. Les bactéries les plus souvent associées à la destruction parodontale, comme P. gingivalis, T. forsythia ou A. actinomycetemcomitans, ont été réunies sous la bannière du « complexe rouge ». Les bactéries associées à une destruction moins importante ont été incluses dans le « complexe orange ». Les infections bactériennes sont relativement rares et opportunistes. La plupart du 20 temps, l'épithélium de la muqueuse buccale est confronté à des microorganismes bénins ou commensaux. Par exemple, Streptoccocus Gordonii est un commensal colonisateur primaire de la surface des dents, des gencives et de la langue, qui initialise la formation de biofilms dans la bouche, en créant des surfaces auxquelles les autres colonisateurs peuvent adhérer. L'accumulation de biofilm formant la plaque dentaire peut entraîner la formation de caries 25 et de parodontites. Cependant, des altérations quantitatives et qualitatives de la microflore normale sont susceptibles d'induire des irritations et/ou des inflammations locales plus ou moins importantes, par exemple des candidoses, des gingivites et des parodontites. Une accumulation de bactéries au contact du tissu gingival, en particulier dans le sillon gingivodentaire, va conduire à l'apparition d'une inflammation gingivale. La gingivite peut 30 donner lieu à la parodontite, lorsque des changements de l'écologie bactérienne du sillon gingivodentaire se produit, notamment lorsqu'un nombre croissant de certains germes pathogènes, comme Porphyromonas gingivalis par exemple, provoquent la destruction des tissus parodontaux caractérisant la parodontite.

Lorsque les barrières physique et chimique ont été altérées, dans les cas d'inflammation et d'infections des tissus par des microorganismes pathogènes, les systèmes immunitaires innés et acquis sont mobilisés et permettent des réponses appropriées. Chez le sujet sain, la fonction barrière chimique est assurée par la microflore buccale normale, la salive, le fluide gingival et l'épithélium de la muqueuse buccale. Cette barrière chimique permet le maintien de l'écosystème et de la santé de la bouche. Les microorganismes commensaux de la microflore buccale normale ont un rôle dans le développement, la fonction physiologique et la santé de l'épithélium gingival. Ils jouent un rôle important dans la résistance à la colonisation de la muqueuse et de la cavité orale par 10 des microorganismes pathogènes car : - ils sont en compétition pour l'espace et la nourriture avec les bactéries pathogènes, ils libèrent des substances antibactériennes (inhibiteurs, création de conditions de pH défavorables ou modification de récepteurs) qui ralentissent la croissance des bactéries pathogènes, et 15 - ils stimulent de manière continue le système immunitaire ce qui permet la régulation de la microflore buccale. La salive, secrétée en continu et baignant la surface de la muqueuse buccale, maintient des conditions d'humidité et de pH optimales pour la fonction barrière de la muqueuse buccale. De plus la salive concentre des molécules protectrices telles les immunoglobulines, 20 les peptides antimicrobiens (AMPs) et limite l'adhésion des microorganismes. Les kératinocytes gingivaux synthétisent également des peptides antimicrobiens comme l'adrénomédulline, la calprotectine, la cathélicidine LL-37, les B-défensines. Les AMPs sont une famille de polypeptides de moins de 100 acides aminés qui ont une activité antimicrobienne directe et permettent l'initiation d'une réponse hôte qui entraîne la 25 libération de cytokines, l'inflammation, l'angiogenèse et la re-épithélialisation. Le mécanisme d'action est encore mal connu mais il est actuellement admis que les AMPs se fixent sur la membrane des microorganismes cibles sous forme de pores multimériques ce qui conduit à la lyse de la cellule cible. Les Defensines (DEFBs) et la Cathélicidine (LL-37) sont des AMPs de type cationiques 30 à spectre large. A ce jour, une seule Cathélicidine humaine hCAP18(human Cationic Peptide 18) est connue, qui est un propeptide inactif Son fragment C-terminal LL37, d'environ 4,5 kDa, a une activité antimicrobienne à large spectre d'action et module la réponse immunitaire. La Cathélicidine est maturée post-transcriptionnellement par des protéases spécifiques, durant ou après sa sécrétion, le segment C-terminal LL-37 étant clivé et libéré. Au niveau de la cavité buccale, LL-37 est retrouvée dans les kératinocytes, le fluide gingival et la salive. Les défensines sont des petits peptides cationiques et de moins de 50 acides aminés exprimés sous forme de prépropeptides précurseurs. La famille des défensines peut être divisée en deux groupes : les a-defensines (qui se trouvent dans les neutrophiles et les cellules de Paneth du petit intestin) et les f3-defensines exprimées à la surface des cellules épithéliales. Six I3-defensines nommées DEFB1 à 6 ont été identifies dans les tissus humains, notamment DEFB 1 à 3 sont retrouvées dans les épithéliums gingivaux, la salive et le fluide gingivo-dentaire. Elles sont transcrites et traduites en une préprodéfensine qui subira une maturation et donnera le peptide fonctionnel d'environ 4 à 5 kDa. Dans ce contexte, les propriétés antimicrobiennes des AMPs apparaissent comme particulièrement intéressantes pour renforcer la protection de la muqueuse buccale contre les agressions microbiennes.

Un certain nombre de substances introduites dans des produits cosmétiques ou pharmaceutiques destinés à la muqueuse orale ont vu le jour, par exemple des agents antibactériens chimiques tels que la chlorhexidine ou le triclosan ont été utilisés dans les produits destiné aux soins de la cavité orale. Toutefois, il est bien connu de l'homme du métier que les agents antibactériens couramment utilisés sont irritants pour la muqueuse orale, et ont un goût désagréable. De plus, les produits disponibles ont une efficacité relative et circonscrite à la durée du traitement. Aussi, il subsiste le besoin d'un nouvel agent physiologiquement acceptable pour protéger la santé et l'intégrité des fonctions de la muqueuse buccale mais également pour éviter l'altération de l'aspect esthétique de la muqueuse buccale suite à de réactions inflammatoires locales répétées, présentant une action rapide et durable dans le temps. Des extraits peptidiques de levure ont précédemment été décrits pour leurs effets sur la peau (FR 2904 552, FR 2887 772). Les inventeurs ont maintenant mis en évidence que de tels hydrolysats peptidiques de levure avaient une activité antimicrobienne.

La présente invention a pour objectif de proposer un agent actif présentant l'avantage d'être d'origine naturelle et permettant de protéger la flore microbienne commensale de la muqueuse buccale. Les inventeurs ont mis en évidence une activité antimicrobienne, d'un extrait de levure, décrit dans la présente invention. Il a notamment été mis en évidence que cet extrait de levure, lorsqu'il est appliqué sur la muqueuse buccale, a une forte activité protectrice vis-à-vis de la microflore de la muqueuse buccale et des agressions par les agents infectieux qui provoquent des réactions d'irritation de la muqueuse buccale. Les inventeurs ont également mis en évidence l'utilisation cosmétique de cet extrait de levure qui permet de renforcer la barrière chimique de la cavité buccale et de protéger l'équilibre de la microflore buccale normale. Ce nouveau principe actif, capable d'augmenter le taux d'expression d'AMPs de la muqueuse buccale permet ainsi d'ouvrir de nouvelles perspectives cosmétiques et thérapeutiques.

Selon un premier aspect, la présente invention concerne un extrait de levure provenant de l'hydrolyse des protéines de levures pour son utilisation en tant qu'agent actif antimicrobien. L'invention et les avantages qui en découlent seront mieux compris à la lecture de la description.

L'invention s'adresse aux mammifères en général, et plus particulièrement, aux êtres humains. Dans la suite de la description on se réfère indifféremment par « agent actif» ou « extrait de levure » à l'extrait de levure provenant de l'hydrolyse des protéines de levure selon l'invention.

Le terme « antimicrobien » ou « protection des agressions microbiennes » est relatif à la mort des microorganismes, à l'inhibition de leur croissance ou à la prévention de leur croissance. « L'inhibition de la croissance des microorganismes pathogènes » signifie la réduction de la croissance des microorganismes pathogènes, par exemple en termes de réduction du nombre de colonies et/ou de la taille des colonies de microorganismes pathogènes, tandis que le terme « prévention de la croissance des microorganismes » désigne l'arrêt de la croissance des microorganismes. Par « microorganismes » ou « microbes » on entend tout organisme compris dans les domaines phylogénétiques des archées ou des bactéries, ainsi que les champignons unicellulaires et filamenteux (par exemple les levures), les algues unicellulaires ou filamenteuses, les parasites uni et pluri cellulaires et les virus. Le terme "extrait" désigne toute substance ou mélange de substances, ou préparation isolée, obtenue à partir de l'hydrolyse de la matière première que constituent les levures. On entend par « composés peptidiques », les fragments de protéines, les peptides et les acides aminés libres présents dans le mélange. Les peptides, acides aminés et fragments de protéines sont dosés selon les techniques classiques, bien connues de l'homme du métier. L' « agent actif» peut se définir comme étant une molécule ou un ensemble de molécules susceptibles d'apporter des modifications ou des modulations au fonctionnement d'un système biologique. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait de levures est un extrait de levures du genre Kluyveromyces et/ou du genre Saccharomyces. Bien entendu l'hydrolysat peut être préparé à partir de levures d'au moins l'une quelconque des nombreuses variétés et espèces appartenant au genre Saccharomyces et/ou d'au moins l'une quelconque des nombreuses variétés et espèces appartenant au genre Kluyveromyces. Selon un mode de réalisation préférée, ledit agent actif provient de l'hydrolyse de protéines de levure choisies parmi l'espèce Saccharomyces cerevisiae, l'espèce Kluyveromyces lactis et/ou l'espèce Kluyveromyces marxianus. Toute méthode d'extraction ou de purification connue de l'homme du métier peut être utilisée afin de préparer l'extrait de levure selon l'invention. Préférentiellement, l'extrait de levure est obtenu par un procédé qui comprend : - une étape d'extraction des protéines d'origine végétale, - une étape d'hydrolyse contrôlée qui libère des composés peptidiques biologiquement actifs.

De très nombreuses protéines de levure sont susceptibles de contenir des peptides bioactifs au sein de leur structure. L'hydrolyse ménagée permet de dégager ces composés de nature peptidique. Il est possible, mais non nécessaire pour réaliser l'invention, d'extraire soit les protéines concernées d'abord et de les hydrolyser ensuite, soit d'effectuer l'hydrolyse d'abord sur un extrait brut et de purifier les composés de nature peptidique ensuite.

Selon une méthode de réalisation de l'invention actuellement préférée, l'hydrolysat de levure est un extrait aqueux. Par extrait aqueux, on entend tout ensemble de composés solubles dans l'eau ou dans tout solvant constitué totalement ou partiellement d'eau. Les extraits selon l'invention sont notamment des extraits aqueux purifiés. On peut en particulier citer des solvants aqueux. Par solvant aqueux, on entend tout solvant constitué totalement ou partiellement d'eau. On peut citer l'eau elle-même, le glycérol, les solvants hydro- alcooliques en toutes proportions ou encore les solvants constitués d'eau et d'un composé comme le propylène glycol ou le butylène glycol en toutes proportions. Cet hydrolysat peut être obtenu par dissolution dans l'eau, l'alcool ou l'éther, puis par concentration de cette solution en faisant intervenir l'évaporation ou la distillation. Toute méthode d'extraction ou de purification connue de l'homme du métier peut être utilisée pour préparer l'hydrolysat selon l'invention. L'extraction des protéines des levures peut être réalisée suivant le procédé classique (Osborne, T. B., The Vegetable Proteins, 2nd Edition. Longmans, Green and Co., London, 1924) modifié. Un mode particulier de mise en oeuvre du procédé d'obtention de l'extrait de levure selon l'invention est décrit ci-dessous. Dans une première étape, les levures sont mises en culture de manière classique dans un milieu adapté à leur développement, de préférence en présence de lactose. Elles sont récoltées par centrifugation puis mises en suspension dans une solution tampon, préférentiellement un tampon phosphate. Dans une seconde étape, ces cellules sont éclatées à l'aide d'une presse de french ou à l'aide d'un broyeur à bille, la majorité des composants membranaires insolubles étant écartés par centrifugation ou par filtration.

Le lysat de levures est mis en suspension dans une solution alcaline contenant un produit adsorbant de type polyvinylpolypyrrolidone (PVPP) insoluble (0,01 -20 %) ; en effet il a été observé que les opérations d'hydrolyses et de purifications ultérieures étaient facilitées par ce moyen. La fraction soluble, contenant les protéines, les glucides et éventuellement des lipides, est recueillie après des étapes de centrifugation et de filtration. Cette solution brute constituant alors une première forme de l'extrait. Ce filtrat peut être alors recueilli et remis en solution. Une fraction, riche en composés de nature peptidique, peut alors être isolée par précipitation en milieu alcoolique ou par une solution saline. Le précipité est ensuite lavé à l'aide d'un solvant organique tel que, par exemple, l'éthanol ou le butanol puis le solvant est évaporé par séchage sous vide. Les composants solubles et les acides nucléiques sont ainsi écartés. Le précipité riche en protéines est remis en solution dans l'eau ou un autre solvant et constitue alors une forme plus purifiée de l'hydrolysat. La fraction soluble, comprenant les protéines, des glucides et éventuellement des lipides, est recueillie après des étapes de centrifugation et de filtration. Cette solution brute est ensuite hydrolysée dans des conditions ménagées pour générer des composés peptidiques, des polypeptides et des peptides solubles. L'hydrolyse se définit comme étant une réaction chimique impliquant le clivage d'une molécule par de l'eau, cette réaction pouvant se faire en milieu neutre, acide ou basique. Selon l'invention, l'hydrolyse est réalisée par voie chimique et/ou de façon avantageuse par des enzymes protéolytiques. Selon des caractéristiques particulières, l'hydrolyse est réalisée par des protéases végétales ou issues de biotechnologie en particulier la bromélaine, l'alcalase, la flavourzym.

Avantageusement les enzymes protéolytiques permettent une meilleure hydrolyse et facilite la filtration des protéines. L'hydrolyse conduit alors à l'obtention de polypeptides de faibles poids moléculaires inférieurs à 5 kDa et plus particulièrement une fraction importante inférieure à 2,5 kDa. Une fois ces différentes hydrolyses effectuées, une étape de désactivation thermique est nécessaire pour inactiver ces enzymes.

Après filtration, la solution obtenue constitue une première forme avantageuse d'extrait peptidique de levure selon l'invention. L'extrait peptidique de levure peut être encore purifié afin de sélectionner les poids moléculaires et la nature des peptides générés. La purification s'effectue avantageusement par des étapes d'ultrafiltrations successives à travers des filtres de porosité décroissante, en conservant les filtrats à chaque étape et/ ou par une méthode de type chromatographique, afin d'enrichir spécifiquement l'hydrolysat en peptides bioactifs. Selon un autre mode de réalisation de l'hydrolysat de levure selon l'invention, l'étape d'hydrolyse peut être réalisée directement sur les levures récoltées après centrifugation ou sur les fractions obtenues après éclatement cellulaire. Des étapes de filtrations et de stérilisation sont par la suite réalisées. L'utilisation d'extraits peptidiques, et en particulier d'extraits peptidiques de bas poids moléculaires, présente de nombreux avantages en cosmétique. Outre le fait de générer des composés peptidiques qui ne préexistaient pas dans le mélange protéique de départ, l'hydrolyse et la purification permettent d'obtenir un mélange de composés peptidiques plus stables, de composition plus facilement reproductible et ne provoquant pas de réactions allergiques en cosmétique. Selon des caractéristiques particulières, l'extrait de levure selon l'invention comprend essentiellement des composés peptidiques de bas poids moléculaires. De préférence, l'extrait peptidique de levure selon l'invention comprend essentiellement des composés peptidiques de poids moléculaire inférieur à 5 kDa, plus préférentiellement encore de poids moléculaire inférieur à 2,5 kDa.

L'une quelconque des formes plus ou moins purifiées de l'hydrolysat est alors solubilisée dans de l'eau ou dans tout mélange contenant de l'eau, puis stérilisée par ultrafiltration. L'extrait de levure, obtenu selon l'invention, est analysé qualitativement et quantitativement pour ses caractéristiques physico-chimiques et sa teneur en composés peptidiques. On entend par composés peptidiques, les fragments de protéines, les peptides et les acides aminés libres présents dans le mélange. Les peptides, acides aminés et fragments de protéines sont dosés selon les techniques classiques, bien connues de l'homme du métier. Ainsi, selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait de levure a un 10 pH compris entre 4 et 5, et préférentiellement, entre 4 et 4,5. Avantageusement ce pH acide favorise la dissolution des protéines dans l'eau et stabilise les protéines. L'extrait de levure selon l'invention a un poids sec titrant entre 0,1 et 8 g/1, et de manière préférée entre 0,1 et 5 g/1, et comprend : entre 0,1 et 5 g/1 de composés peptidiques en poids d'extrait sec, 15 et entre 0,1 et 2 g/1 de sucres en poids d'extrait sec. L'extrait est alors dilué dans de l'eau ou dans tout mélange de solvant contenant de l'eau, puis stérilisée par filtration stérilisante (0,2 um). On procède à une phase de dilution dans de l'eau ou dans tout mélange contenant de l'eau, puis cette dilution est stérilisée par ultrafiltration afin d'obtenir un hydrolysat 20 peptidique caractérisé par une concentration en protéines de 30 et 70 % du poids total de l'extrait sec, plus particulièrement cette concentration est de 40 et 50 % du poids total de l'extrait sec. Les solvants utilisés sont physiologiquement acceptables et classiquement utilisés par l'homme du métier, choisis parmi le glycérol, l'éthanol, le propanediol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols 25 cycliques, ou tout mélange de ces solvants. Selon des caractéristiques particulières, on utilise de 30 à 80% de solvant. De préférence on solubilise dans 70% de glycérol. L'avantage d'utiliser un pourcentage de solvant est que cela permet d'avoir une activité résiduelle de l'eau inférieure à 0,7 ce qui limite les contaminations de l'extrait 30 Préférentiellement, après dilution l'extrait de levure selon comprend : - entre 1,5 et 3,5 g/1 de composés peptidiques en poids d'extrait sec, - et environ 0,3 g/1 de sucres en poids d'extrait sec.

Ainsi, l'agent actif selon l'invention est avantageusement solubilisé dans un ou plusieurs solvants physiologiquement acceptables, tels que l'eau, le glycérol, l'éthanol ou tout mélange de ces solvants. L'agent actif dilué est ensuite stérilisé par ultrafiltration. Après cette étape de dilution, l'agent actif peut être encapsulé ou inclus dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique tels que les liposomes ou toute autre microcapsule utilisée dans le domaine de la cosmétique ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites et plus généralement solubilisé dans, ou fixé sur, tout vecteur physiologiquement adapté. L'extrait de levure selon l'invention peut être utilisé dans une composition 10 pharmaceutique ou de soin de la cavité buccale. La composition peut comprendre une quantité d'extrait de levure nécessaire afin d'obtenir le résultat recherché, à savoir, protéger la muqueuse buccale des dommages causés par des agressions microbiennes. Selon un mode de réalisation avantageux, l'extrait de levure selon l'invention est utilisé pour la préparation d'une composition pharmaceutique à une concentration comprise entre 15 0,0001 % et 20 % environ, de préférence entre 0,01 % et 5 % environ, et plus préférentiellement à une concentration comprise entre 0,01 % et 1 % environ par rapport au poids total de la composition finale. Selon des caractéristiques particulières, l'invention concerne un extrait de levures, 20 provenant de l'hydrolyse des protéines de levures, pour son utilisation pour la protection de la muqueuse et de la cavité buccale des agressions microbiennes L'utilisation de l'extrait de levure, ou d'une composition le comprenant, sur des muqueuses buccales ayant la fonction barrière chimique altérée ou un affaiblissement du système immunitaire local, va permettre à la muqueuse et à la cavité buccale d'être 25 protégées et de mieux résister aux agressions par des microorganismes pathogènes ou opportunistes. Selon des caractéristiques particulières, l'invention concerne un extrait de levure, provenant de l'hydrolyse des protéines de levures, pour son utilisation pour augmenter le taux d'expression de peptides antimicrobiens. 30 De manière préférée, l'invention concerne un extrait de levure, provenant de l'hydrolyse des protéines de levures, pour augmenter le taux d'expression cellulaire de défensines et/ou de cathélicidine.

Avantageusement l'extrait de levure selon l'invention permet de stimuler la production d'AMPs de type cathélicidine et défensines par les cellules de la muqueuse buccale, sans provoquer de réaction toxique ou allergique. Selon des caractéristiques particulières, l'invention concerne un extrait de levure, provenant de l'hydrolyse des protéines de levures, pour son utilisation pour stimuler les défenses immunitaires de la muqueuse buccale. Selon des caractéristiques particulières, l'invention concerne un extrait de levure, provenant de l'hydrolyse des protéines de levures, pour son utilisation pour le traitement des infections par des bactéries du complexe rouge. Selon des caractéristiques particulières, l'invention concerne un extrait de levure, provenant de l'hydrolyse des protéines de levures, pour son utilisation pour le traitement des infections par Porphyromonas Gingivalis. L'invention se rapporte encore à un extrait de levure pour son utilisation pour le traitement des gingivites et des parodontites. L'invention se rapporte encore à un extrait de levure pour son utilisation comme médicament pour le traitement des candidoses. Selon des caractéristiques particulières, l'invention concerne un extrait de levure, provenant de l'hydrolyse des protéines de levures, pour son utilisation pour limiter l'accumulation de plaque bactérienne dentaire et sous gingivale.

Selon un deuxième aspect, l'invention concerne l'utilisation cosmétique d'un extrait de levure, provenant de l'hydrolyse des protéines de levures, pour renforcer la fonction barrière chimique de la muqueuse buccale. On entend par « renforcer la fonction barrière chimique », que l'application sur la muqueuse buccale saine d'un extrait de levure selon l'invention ou d'une composition cosmétique le comprenant permet d'augmenter le taux d'expression cellulaire des AMPs. L'extrait de levure a une action localisée au niveau de l'épithélium de la muqueuse buccale et il permet de calmer les irritations de la muqueuse buccale, par exemple de type hypersensibilité, douleurs, rougeurs ou inconforts. Selon des caractéristiques particulières, l'invention concerne l'utilisation d'un extrait de levure, provenant de l'hydrolyse des protéines de levures, pour protéger la flore microbienne normale et/ou limiter le déséquilibre de la flore microbienne normale de la cavité buccale.

Avantageusement, l'utilisation cosmétique de l'extrait de levure selon l'invention permet de maintenir une bonne fonction barrière chimique de la muqueuse buccale en stimulant localement, au niveau de l'épithélium de la muqueuse buccale, l'expression d'AMPs, ce qui contribue au maintien de l'équilibre et des conditions favorables de l'écosystème de la microflore normale de la muqueuse buccale. Selon un mode de réalisation préférée, ledit extrait de levures provient de l'hydrolyse de protéines de levure choisies parmi l'espèce Saccharomyces cerevisiae, l'espèce Kluyveromyces lactis et/ou l'espèce Kluyveromyces marxianus. L'extrait de levure utilisé est obtenu par des procédés tels que décrits précédemment et les caractéristiques et la composition de l'extrait obtenu sont les mêmes que décrites plus haut. L'extrait de levure selon l'invention peut être utilisé dans une composition cosmétique destinée à la cavité buccale. La composition peut comprendre une quantité d'extrait de levure nécessaire afin d'obtenir le résultat recherché, à savoir, pour renforcer la fonction barrière chimique de la muqueuse buccale et protéger la flore microbienne normale de la cavité buccale. Selon un mode de réalisation avantageux, l'extrait de levure selon l'invention est utilisé dans une composition cosmétique à une concentration comprise entre 0,0001 % et 20 % environ, de préférence entre 0,01 % et 5 % environ, et plus préférentiellement à une concentration comprise entre 0,01 % et 1 % environ par rapport au poids total de la composition finale. Les compositions selon l'invention peuvent être appliquées par toute voie appropriée, notamment orale ou topique sur la muqueuse buccale, et leurs formulations sont adaptées par l'homme du métier à leur application sur une surface de la cavité buccale, en particulier pour des compositions cosmétiques, pharmaceutiques ou d'hygiène de la bouche. Dans des modes de réalisation particuliers, la composition selon l'invention peut être une solution liquide adaptée pour irriguer, rincer ou vaporiser ; un dentifrice tel qu'une poudre, une pâte ou un gel pour les dents, un gel parodontal ; un liquide adapté à recouvrir la surface des dents (par exemple un liquide blanchissant) ; un chewing-gum ; un film ou une bande non soluble, soluble ou partiellement soluble (par exemple une bande blanchissante pour les dents) ; une composition encapsulable (par exemple une gélule) ; une lingette ; un implant, une solution de rinçage de la bouche ; une mousse : un fil dentaire ; etc. . Ces compositions comprennent un milieu physiologiquement adapté selon l'invention, c'est-à-dire un milieu qui convient à une utilisation en contact avec la surface de la cavité buccale, sans risque par exemple de toxicité, d'incompatibilité, d'instabilité, ou encore de réponse allergique.

Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention comprend au moins un ingrédient humectant, un matériel abrasif, une base, et une quantité efficace d'un extrait de levure selon l'invention. Pour certaines formes souhaitables conformes à l'invention, la composition orale peut être de nature solide ou se présenter sous forme de pate, comme c'est le cas pour les poudres dentifrices, les comprimés dentifrices, les pâtes dentifrices ou les crèmes dentifrices. La base de telles préparations orales solides ou pâteuses contient une matière de polissage ou abrasif dentaire qui est compatible avec la composition. Des agents de polissage appropriés comprennent l'alumine hydratée, l'alumine calcinée, la silice, y compris la silice acide, neutre ou alcaline, un gel de silice hydratée, le phosphate dicalcique dihydrate, le metaphosphate de sodium ou de potassium, le phosphate tricalcique et autres phosphates, le carbonate de calcium, le silicate d'aluminium, les silicates de zirconium, le phosphate dicalcique anhydre, le pyrophosphate de calcium, l'orthophosphate de magnésium, le phosphate trimagnésique, le carbonate de calcium, l'alumine, l'alumine hydratée, le silicate d'aluminium, le silicate de zirconium, la silice, la bentonite et leurs mélanges, des matières plastiques telles qu'un polymethacrylate, la bentonite, et leurs mélanges. Des matières de polissage préférées comprennent l'alumine calcinée, l'alumine hydratée et un gel de silice hydratée. On utilise des ingrédients humectants, dans les compositions de la présente invention, pour prévenir le durcissement de la composition et son dessèchement lors de son exposition à l'air. Des exemples d'humectants sont les alcools polyhydriques tels que la glycérine, le sorbitol, le xylitol, ou les polyethyleneglycol de bas poids moléculaire. Les polyethyleneglycols utilisés comme humectants dans la présente invention ont un poids moléculaire moyen limite à 1000 kDa, par exemple d'environ 200-1000, de préférence environ 400-800, et mieux encore environ 550-650 kDa.

Dans certains modes de réalisation de l'invention, un composé fournissant du fluor est présent dans la préparation orale. Ces composés peuvent être légèrement solubles dans l'eau ou complètement solubles dans l'eau. Ils sont caractérisés par leur aptitude à libérer des ions fluorure dans l'eau et par une absence pratique de réactivité avec les autres composes de la préparation orale. Parmi ces substances, on peut citer les fluorures minéraux, comme les sels solubles de métaux alcalins, de métaux alcalino-terreux et de métaux lourds, par exemple le fluorure de sodium, le fluorure de potassium, le fluorure d'ammonium, un fluorure de cuivre comme le fluorure cuivreux, le fluorure de zinc, un fluorure d'étain comme le fluorure stannique ou le chlorofluorure stanneux, le fluorure de baryum, le fluosilicate de sodium, le fluosilicate d'ammonium, le fluozirconate de sodium, le monofluophosphate de sodium, les mono- et di-fluophosphates d'aluminium et le pyrophosphate de sodium-calcium fluoré. On préfère utiliser les fluorures des métaux alcalins et de l'étain, comme le fluorure de sodium et le fluorure stanneux, le monofluophosphate de sodium et leurs mélanges.

Optionnellement, les compositions décrites ici peuvent comprendre d'autres ingrédients facultatifs tels que des agents antitartres, des agents antiplaques, anti-bacteriens, anti-inflammatoires, des polymères carboxylates anioniques, des ingrédients pour modifier la viscosité, des surfactants, des arômes, des pigments, des agents pour le traitement de la sécheresse buccale.

Dans des modes de réalisations particuliers, la composition orale selon l'invention comprend un ou plusieurs agents antitartre pour prévenir et/ou réduire la formation de calculs. Par exemple, le système antitartre peut inclure du tetrasodium pyrophosphate (TSPP) ou du sodium tripolyphosphate (STPP). Le phosphate et les sels de phosphate sont généralement utilisés sous la forme d'espèces cationiques solubles totalement ou partiellement neutralisée (par exemple potassium, sodium ou sels d'ammonium, ou une combinaison de ceux-ci). Dans un autre mode de réalisations, la composition orale selon l'invention comprend une ou plusieurs sources d'ions stanneux acceptables oralement, utilisée pour, par exemple pour réduire la gingivite, la plaque dentaire, la formation de calculs ou la sensibilité des dents. Par exemple, le fluorure stanneux, et d'autres halides stanneux tels que le dihydrate de Chlorure stanneux, le pyrophosphate stanneux, des sels de carboxylate stanneux organiques tels que le formate, l'acétate, le gluconate, lactate, tartrate, oxalate, malonate et citrate, le glyoxide éthylène stanneux. Dans un autre mode de réalisations, la composition orale selon l'invention comprend 30 une source d'ions Zinc acceptable oralement pour son utilisation comme antimicrobien, anticalculs et rafraichisseur d'haleine. La source d'ions Zinc comprend par exemple l'acétate, le gluconate, le citrate le glycinate, le sulfate, l'oxyde de Zinc.

Dans un autre mode de réalisations, la composition orale selon l'invention comprend un sialagogue acceptable oralement. Par sialagogue on entend un agent stimulant la production de salive, utilisé pour réduire la sécheresse buccale. Les sialagogues adaptés comprennent les acides alimentaires tels que les acides citrique, malique, lactique, succinique, ascorbique, fumarique et tartrique. Dans un autre mode de réalisations, la composition orale selon l'invention comprend un agent anti-plaque, par exemple, le cuivre, le magnésium ou le strontium stanneux ; les copolyols de dimethicone tels que le cétyl dimethicone copolyol; des enzymes telles que la papaïne, la glucoamylase et la glucose oxydase ; l'urée ; le lactate de calcium, les polyacrylates de strontium ; les agents chélateurs tels que les acides citriques ou tartriques et les sels de métaux alcalins. Dans un autre mode de réalisations, la composition orale selon l'invention comprend un agent anti-inflammatoire acceptable oralement, par exemple, un anti-inflammatoire stéroïdien tels que le flucinolone ou l'hydrocortisone ; un anti-inflammatoire non stéroïdien tel que le ketorolac, le flurbiprofen, l'ibuprofène, le naproxene, l'indomethicin, le dialofenac, l'aspirine, le tolmetin, le ketoprofen, le piroxicam, l'aspirine, le diflunisal. Ces compositions comprennent, en outre, tout additif communément utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des co-solvants acceptable oralement (éthanol, glycérol, alcool benzylique, humectant...), des épaississants, des diluants, des émulsionnants, des antioxydants, des colorants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des huiles essentielles, des oligo-éléments, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, des filtres chimiques ou minéraux, des agents hydratants ou des eaux thermales etc. Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. On utilise des agents tensioactifs organiques acceptable oralement, dans les compositions de la présente invention, pour obtenir une action prophylactique accrue, faciliter l'obtention d'une dispersion complète de l'extrait de levures dans toute la cavité buccale et rendre les présentes compositions davantage acceptables du point de vue cosmétique. La substance tensioactive organique est de préférence de nature anionique, non ionique ou ampholytique et elle est de préférence utilisée comme substance détergente conférant des propriétés détersives et moussantes à la composition. Comme exemples convenables de substances tensioactives anioniques, on peut citer les monosulfates solubles dans l'eau des monoglycerides des acides gras supérieurs, comme le sel de sodium du monoglyceride monosulfate des acides gras hydrogènes de 1 'huile de noix de coco, les (alkyl supérieur)sulfates. comme le laurylsulfate de sodium, les alkylarylsufonates comme le dodecylbenzenesulfonate de sodium, les alkyls supérieurs sulfoacetates, les esters d'acides gras supérieurs du 1,2-dihydroxypropanesulfonate et les acyl amides aliphatiques supérieurs satures des composes aminoacides carboxyliques a chaine aliphatique courte comme ceux comportant 12 a 16 atomes de carbone dans les radicaux acide gras, alkyle ou acyle, et les substances analogues. Les amides dernièrement mentionnes sont par exemple la N-lauroylsarcosine et les sels de sodium, de potassium et d'ethano lamine de la Nlauroyl, N-myristoyl- ou N-palmitoylsarcosine qui doivent être essentiellement exempts de savon ou d'acide gras supérieur similaire. Des exemples de tensioactifs non ioniques solubles dans l'eau sont les produits de condensation de l'oxyde d'éthylène avec divers composes réactifs contenant de l'hydrogène, régissant avec l'oxyde d'éthylène et présentant de longues chaines hydrophobes (par exemple des chaines aliphatiques d lenviron 12 a 20 atomes de carbone), ces produits de condensation ("ethoxameres") contenant des fractions polyoxyethylene hydrophiles et étant notamment des produits de condensation du poly(oxyde d'éthylène) avec les acides gras, les alcools gras, les amides gras, les polyalcools (par exemple le monostéarate de sorbitol) et le poly(oxyde de propylène). II est possible d'utiliser, un agent gélifiant non ionique (agent épaississant), y compris des gommes naturelles et synthétiques telles que l'hydroxyethylcellulose, l'hydroxymethylcellulose, la methylcellulose, etc. L'agent gélifiant préféré est l'hydroxyethyl-cellulose. On peut aussi utiliser des sels de bicarbonates adaptés à leur utilisation sur la surface de la cavité buccale. Des sels de bicarbonate convenables sont par exemple le bicarbonate de sodium, de potassium ou d'ammonium. On peut aussi utiliser tout agent de sapidité convenable ou tout agent édulcorant approprie. Des agents de sapidité convenables sont par exemple les essences ou huiles essentielles, comme lessence de menthe verte, l'essence de menthe poivrée, l'essence de Wintergreen, l'essence de sassafras, l'essence de girofle, l'essence de sauge, l'essence d'eucalyptus, l'essence de marjolaine, l'essence de cannelle, l'essence de citron et l'essence d'orange, et le salicylate de méthyle. Des agents édulcorants convenables comprennent le saccharose, le lactose, le maltose, le sorbitol, le xylitol, le cyclamate de sodium, la perillartine, 1 'APM (ester méthylique de l'aspartylphenylalanine), la saccharine et analogues. Diverses autres substances peuvent être incorporées dans les préparations orales selon l'invention, par exemple des agents de blanchiment, des agents conservateurs, des silicones, 5 des composes de la famille de la chlorophylle, et/ou des substances a base d'ammonium comme l'urée, le phosphate diammonique et leurs mélanges. Ces adjuvants, lorsqu'ils sont présents, sont incorporés dans les préparations en des quantités qui ne perturbent pratiquement pas les propriétés et les caractéristiques désirées. Il est bien entendu que l'extrait de levure selon l'invention peut être utilisé seul ou bien 10 en association avec au moins un autre principe actif, dans une composition cosmétique, destinés à favoriser l'action de l'extrait de levure selon l'invention, notamment, la prévention et/ou le traitement des désordres liés à la fonction barrière de la muqueuse buccale ou l'apaisement de la muqueuse buccale. On peut citer, de manière non limitative, des principes actifs peptidiques, par exemple le 15 GP4GTM (FR 2 817 748, Ashland), le peptide CollaxylTM (FR 2 827 170, Ashland), le Peptide Vinci 0 1Tm (FR 2 837 098, Ashland), le Peptide VinciO2TM (FR 2 841 781, Ashland), l'ATPeptideTm (FR 2 846 883, Ashland) On peut citer également, des extraits de végétaux, tels que l'extrait de lin (Lipigénine TM, FR2956818, Ashland), l'extrait d'Artémia salina (FR 2 817 748, Ashland) ou encore l'extrait de levure (DynagenTM, FR 2951946, 20 Ashland; Actopontine TM, FR 2944526, Ashland). D'autres principes actifs adaptés comprennent des agents blanchissants, tels que le bioxyde de titane, des agents actifs parodontaux, des rafraîchisseurs de l'haleine, des agents de contrôle des odeurs. Il est possible d'utiliser également des ingrédients actifs sur la sensibilité des dents, par exemple la capsaïcine, l'eugénol, les sels de potassium ou de strontium. D'autres agents actifs utilisés 25 sont, par exemple, des agents cicatrisants, apaisants, des agents anti-radicalaires, tels que le coenzyme Q10, les rétinoïdes, la vitamine D, la vitamine C, la vitamine B5, l'acide folique, la nicotinamide, la thiamine, la riboflavine, les bioflavonoïdes ou encore la pyridoxine. On peut citer en outre, des agents stimulant la synthèse de macromolécules dermiques, des agents hydratants, antibactériens, antifongiques, anti-inflammatoires, anesthésiques, des 30 agents modulants la différenciation, la pigmentation ou la dépigmentation dentaire ou de la muqueuse buccale, etc.

Selon un troisième aspect, l'invention consiste encore en un procédé de traitement cosmétique destiné à protéger la flore microbienne normale et/ou à limiter le déséquilibre de la flore microbienne normale de la cavité buccale, caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la surface de la muqueuse et/ou de la cavité buccale à traiter une composition comprenant un extrait de levure provenant de l'hydrolyse des protéines de levures. Des modes de réalisation particuliers de ce procédé de traitement cosmétique résultent également de la description précédente. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif. La Figure 1 montre sous la forme d'un histogramme la détection immunohistochimique du taux d'expression de la cathélicidine LL-37 dans les cellules HOK traitées ou non avec l'extrait de levure obtenu selon l'exemple 1 à 0,25% ou 0,5% pendant 7 h. La Figure 2 montre sous la forme d'un histogramme la détection immunohistochimique du taux d'expression des ARNm du TNF-alpha, sur les kératinocytes humains de la muqueuse orale, soumis à un stress de type bactérien, traitées avec l'extrait de levure selon l'exemple 1 à 0,25%, ou 0,5% pendant 24h, en comparaison avec les cellules contrôle non traitées soumises au même stress bactérien.

Exemple 1 : Préparation d'un hydrolysat peptidique de levure (Saccharomyces cerevisiae L'agent actif est obtenu à partir d'un extrait de levure de l'espèce Saccharomyces cerevisiae. Les levures sont cultivées dans un milieu adapté à leur développement puis centrifugées pour récupérer une biomasse. La biomasse est ensuite broyée dans un broyeur à billes. Ensuite, le broyat est remis en suspension dans de l'eau à une concentration de 100 grammes par litre avant une hydrolyse enzymatique entre 40 et 60°C pendant 2 heures. Après hydrolyse, l'extrait est centrifugé puis soumis à une dilution dans un mélange eau-glycérol. L'extrait est ensuite filtré avant stérilisation.

On obtient alors un hydrolysat contenant une quantité de composés de nature protéique et peptidique représentant environ entre 30 et 70 % du poids total de l'extrait sec, plus particulièrement cette quantité est comprise entre 40 et 50 % du poids total de l'extrait sec.

En fin de purification, on obtient un extrait végétal de saccharomyces beige et limpide. Il est caractérisé par un sec de 0,1 à 8 g/kg, une teneur en protéines de 0,1 à 5 g/1 et un taux de sucres entre 0,05 et 0,25 g/L. Exemple 2 Mise en évidence de l'effet de l'extrait de levure selon l'exemple 1 sur les 5 niveaux d'expression d'ARNm de la Cathelicidine LL-37 dans des kératinocytes humains oraux Le but de cette étude est de démontrer l'effet de l'extrait de levure obtenu selon l'exemple 1, sur le taux d'expression des ARNm de la Cathélicidine LL-37, péptide antimicrobien de la famille des cathélicidines, dans des kératinocytes humains oraux. 10 Protocole : Les kératinocytes humains oraux sont cultivés dans un milieu adéquat et traités avec l'extrait de levure obtenu selon l'exemple 1, dilué à 0,25% et 0,5% à partir d'une solution mère à 2,5W1, pendant différents temps. Une condition non traitée est effectuée en parallèle. 15 Les ARN totaux sont extraits avec le RNeasy mini kit (QIAGEN, 74104) et reverse transcrits avec le High Capacity cDNA reverse-transcription kit contenant des inhibiteurs de RNAses (Applied Biosystems, 4368814). La PCR quantitative est réalisée à l'aide du thermocycler Step One Plus (Applied Biosystems). Les primers et sondes de la cible Cathelicidine et du contrôle endogène 18S sont issus des Taqman Expression Assays 20 (Applied Biosystems, Hs99999901s1 pour 18S et Hs00189038 ml pour la Cathelicidine), dilués dans de l'eau stérile et du Master Mix (Applied Biosystems). Résultats : Les résultats ont montré une augmentation significative de l'expression des ARNm de la 25 cathélicidine (LL-37) par les kératinocytes humains oraux traités par l'extrait de levure. Au temps d'incubation de 6 heures, cette augmentation est de +30% et + 63% pour des concentrations en actif de 0,25% et 0,5%, respectivement. Conclusion : 30 Le traitement par l'extrait de levure obtenu selon l'exemple 1, a permis d'induire une augmentation de l'expression de la cathélicidine par les kératinocytes humains de la muqueuse orale.

Exemple 3 Mise en évidence de l'effet de l'extrait de levure sur les niveaux d'expression d'ARNm de la béta-défensine 2 dans des kératinocytes humains oraux Le but de cette étude est de démontrer l'effet de l'extrait de levure obtenu selon l'exemple 1, sur le taux d'expression des ARNm de la béta-défensine 2, peptide antimicrobien de la famille des défensines, dans des kératinocytes humains oraux. Protocole : Les kératinocytes humains oraux sont cultivés dans un milieu adéquat et traités avec l'extrait de levure obtenu selon l'exemple 1, dilué à 0,25% et 0,5% à partir d'une solution mère à 2,5g/1, pendant différents temps. Une condition non traitée est effectuée en parallèle.

Les ARN totaux sont extraits avec le RNeasy mini kit (QIAGEN, 74104) et reverse transcrits avec le High Capacity cDNA reverse-transcription kit contenant des inhibiteurs de RNAses (Applied Biosystems, 4368814). La PCR quantitative est réalisée à l'aide du thermocycler Step One Plus (Applied Biosystems). Les primers et sondes de la cible bétadéfensine 2 et du contrôle endogène 18S sont issus des Taqman Expression Assays (Applied Biosystems, Hs99999901s1 pour 18S et Hs00175474_ml pour la béta-défensine 2), dilués dans de l'eau stérile et du Master Mix (Applied Biosystems). Résultats : Les résultats ont montré une augmentation significative de l'expression des ARNm de la 20 béta-défensine 2 par les kératinocytes humains oraux traités par l'extrait de levure. A une heure de traitement, cette augmentation est de +6% et +19% pour des concentrations en actif de 0,25% et 0,5%, respectivement. Conclusion : 25 Le traitement par l'extrait de levure obtenu selon l'exemple 1, a permis d'induire une augmentation de l'expression de la béta-défensine 2 par les kératinocytes humains de la muqueuse orale.

Exemple 4 - Mise en évidence de l'effet de l'extrait de levure obtenu selon l'exemple 1, sur le taux d'expression des ARNm du TNF-alpha, sur les kératinocytes humains de la muqueuse orale, soumis à un stress de type bactérien : Le but de cette étude est de démontrer l'effet de l'extrait de levure obtenu selon l'exemple 1, sur le taux d'expression des ARNm du TNF-alpha, cytokine pro-inflammatoire, induite par une suspension bactérienne de Porphyromonas gingivalis, inactivée par la chaleur, sur des kératinocytes issus de la muqueuse orale.

Protocole : Des cellules HOK (Human Oral Keratinocytes) sont traitées par une suspension bactérienne de P. gingivalis, inactivée par la chaleur, en présence de l'extrait de levure dilué à 0,25% et 0,5% à partir d'une solution mère à 2,5g/1, pendant 24 heures. En parallèle, des cellules contrôle sont cultivées en absence d'actif et de stress bactérien. A l'issue de cette incubation, les ARN totaux sont extraits avec le RNeasy mini kit (QIAGEN, 74104) et reverse transcrits avec le High Capacity cDNA reverse-transcription kit contenant des inhibiteurs de RNAses (Applied Biosystems, 4368814). La PCR quantitative est réalisée à l'aide du thermocycler Step One Plus (Applied Biosystems). Les primers et sondes de la cible TNF-alpha et du contrôle endogène 18S sont issus des Taqman Expression Assays (Applied Biosystems, Hs99999901 si pour 18S et Hs01113624 gl pour le TNF-alpha), dilués dans de l'eau stérile et du Master Mix (Applied Biosystems). Résultats : La figure 2 montre les résultats sous la forme d'un histogramme. Les résultats ont montré une augmentation significative de l'expression des ARNm du TNF-alpha par les kératinocytes humains oraux en présence de la suspension inactivée de P. gingivalis. Lorsque les cellules sont traitées par l'extrait de levure, une diminution significative du taux d'ARNm du TNF-alpha a été mesurée sur les cellules orales soumises au stress bactérien.

Conclusion : Le traitement par l'extrait de levure obtenu selon l'exemple 1, a permis de réduire le taux d'expression de la cytokine pro-inflammatoire, TNF-alpha, induite par une suspension inactivée de P. gingivalis, sur des kératinocytes humains normaux.

Claims (10)

1. REVENDICATIONS1. Extrait de levure provenant de l'hydrolyse des protéines de levures pour son utilisation en tant qu'agent actif antimicrobien.
2. 2. Extrait de levure selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'extrait de levure contient au moins 0,1 à 5 g/1 de composés peptidiques en poids d'extrait sec, 0,1 à 2 g/1 de sucres en poids d'extrait sec et comprend essentiellement des composés peptidiques de poids moléculaire inférieur à 5 kDa.
3. 3. Extrait de levure selon l'une des revendications 1 à 2 pour son utilisation pour la protection de la muqueuse et de la cavité buccale des agressions microbiennes.
4. 4. Extrait de levure selon l'une des revendications 1 à 3 pour son utilisation pour 15 augmenter le taux d'expression de peptides antimicrobiens.
5. 5. Extrait de levure selon l'une des revendications 1 à 4 pour son utilisation pour stimuler les défenses immunitaires de la muqueuse buccale. 20
6. 6. Extrait de levure selon l'une des revendications 1 à 5 pour son utilisation pour le traitement des infections par Porphyromonas Gingivalis.
7. 7. Utilisation cosmétique d'un extrait de levure provenant de l'hydrolyse des protéines de levures pour renforcer la fonction barrière chimique de la muqueuse buccale.
8. 8. Utilisation cosmétique d'un extrait de levure selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'extrait de levure contient au moins 0,1 à 5 g/1 de composés peptidiques en poids d'extrait sec, 0,1 à 2 g/1 de sucres en poids d'extrait sec et comprend essentiellement des composés peptidiques de poids moléculaire inférieur à 5 kDa.
9. 9. Utilisation cosmétique d'un extrait de levure selon l'une des revendications 7 à 8, pour protéger la flore microbienne normale et/ou à limiter le déséquilibre de la flore microbienne normale de la cavité buccale. 10 25 30 35
10. 10. Procédé de traitement cosmétique destiné à protéger la flore microbienne normale et/ou à limiter le déséquilibre de la flore microbienne normale de la muqueuse et de la cavité buccale, caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la surface de la muqueuse et/ou de la cavité buccale à traiter une composition comprenant un extrait de levure selon l'une quelconque des revendications 7 à 9.