FR2967580A1 - Materiau comprenant un polysaccharide acide et un biopolymere cationique - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne un matériau comprenant, voire consistant en au moins un polysaccharide acide choisi parmi les poly(galacturonate)s, l'héparine et ses dérivés, l'acide hyaluronique et ses dérivés, les chondroïtine sulfates, la pectine et ses dérivés, les polysaccharides neutres, tels que la cellulose ou le dextrane et leurs dérivés, modifiés par des groupements carboxylates et/ou sulfates, comprenant un motif hydrophobe à une teneur molaire d'au moins 2 % par rapport à l'unité de répétition, au moins un biopolymère cationique choisi parmi les polyaminoacides et les polysaccharides porteurs de groupements cationiques, choisi parmi les groupements mono-, di-, tri-alkylamino ou tétraalkylammonium, ce biopolymère cationique comprenant une teneur molaire en groupement cationique d'au moins 25 % par rapport à l'unité de répétition, et éventuellement au moins une substance active, notamment hydrophobe, un procédé permettant l'obtention d'un tel matériau, une compositioj comprenant un tel matériau, un dispositif comprenant un tel matériau et une surface revêtue par un tel matériau.

Description

MATERIAU COMPRENANT UN POLYSACCHARIDE ACIDE ET UN BIOPOLYMERE CATIONIQUE

La présente invention concerne un matériau formé de bio-polyélectrolytes, 5 notamment polysaccharide acide et biopolymére cationique, en particulier utilisé pour la solubilisation et le transport de substances actives peu solubles dans l'eau.

La délivrance de principes actifs vers un organe, un tissu ou des cellules est une préoccupation majeure aujourd'hui. Parmi les problèmes rencontrés pour une délivrance 10 efficace figurent la solubilité, la stabilité, la pharmacocinétique, la bio-distribution desdits principes actifs, ainsi qu'un ciblage insatisfaisant. L'efficacité de traitements de maladies, par exemple de maladies infectieuses ou cancéreuses, peut être améliorée par une délivrance spécifique. Dans le cas particulier des principes actifs (PA) hydrophobes, un des problèmes est 15 leur faible solubilité dans l'eau qui rend difficile, voire impossible, une délivrance satisfaisante. Une des solutions pour pallier en tout ou partie à ce problème de délivrance est la vectorisation de ces principes actifs. Cette vectorisation a donc pour objectif d'améliorer la solubilité, la stabilité, la 20 pharmacocinétique et/ou la bio-distribution desdits principes actifs, et/ou leur ciblage spécifique. Des systèmes de vectorisation ont déjà été décrits dans la littérature. Ils peuvent notamment se présenter sous forme de micelles, micro/nanosphéres, micro/nanocapsules, vésicules lipidique ou polymérique. 25 Les micelles de polymères peuvent être caractérisées par leur structure coeur-coquille en équilibre avec les molécules amphiphiles en solution. Des micelles ont été décrites dans la littérature, notamment par Jones et al., (Eur. J. Biopharm, 1999, 48, 101), par Torchilin (Pharm. Res., 2007, 24, 1), ou dans la demande WO 99/61512. Ces micelles peuvent présenter une stabilité au stockage et/ou après injection qui limite leur utilisation comme 30 vecteurs de PA. Les micro/nanosphéres peuvent être formées par une matrice de polymère biodégradable comme les poly(lactide)/poly(lactide-co-glycolide) de la famille des polyesters. Ces systèmes peuvent être synthétisés par de nombreuses méthodes dont les plus courantes sont l'émulsion-évaporation de solvant, le « salting-out », la nanoprécipitation et l'émulsion-diffusion, par exemple décrit par Soppimath et al. (J. Control Release, 2010, 70, 1). Ces méthodes sont en général efficaces pour encapsuler des principes actifs hydrophobes avec des rendements élevés. Cependant, elles requièrent l'utilisation de solvants organiques. D'autre part, la libération étant contrôlée par des phénomènes de diffusion/érosion, cela peut conduire à des pics de libération (« effet burst ») observé notamment avec les particules de poly(lactide)/poly(lactide-co-glycolide) et dont le contrôle est aléatoire (Huynh et al., Int. J. Pharm., 2009, 379, 2010 ; Shah et al., Pharm. Res., 2006, 23, 2638).

Il a également été décrit des biopolyméres rendus hydrophobes par greffage de groupement lipophiles issus de précurseurs alcool ou cholestérol (Akiyoshi et al., J. Control Release, 1998, 54, 313 ; Park et al., J. Control Release, 2009, 135, 259 ; Hwang et al., J. Control Release, 2008, 128, 23 ;Nam etv al., J. Control Release, 2009, 135, 259 ; FR 2 855 521). Ceux-ci peuvent conduire à la formation de nanoparticules matricielles.

Cependant elles peuvent présenter une stabilité variable après incorporation du principe actif hydrophobe (Saravanakumar et al., J. Control Release, 2009, 140, 210). Des systèmes de vectorisation par les liposomes (vésicules lipidiques) et les vésicules de polymères sont étudiés de manière intensive. Plusieurs formulation d'agents anti-cancéreux sont actuellement en phase clinique dont certaines ont été approuvées pour une utilisation clinique (Haley et al ., Urol. Oncol., 2008, 26, 57). Ces assemblages sont en général non toxiques et biocompatibles. Cependant, ils présentent fréquemment des limitations en termes de capacité d'encapsulation, de stabilité et de production, ainsi que de relargage précoce des actifs hydrophiles dans le sang (Alphandary et al., Int. J. Antimicrob. Agents, 2000, 13, 155).

Un système de vectorisation formé de nanocapsules lipidiques capable d'incorporer des principes actifs hydrophobes a été proposé dans la demande WO 2001/064328. Ces nanocapsules présentent l'avantage d'être formulés en l'absence de solvants organiques, contrairement aux systèmes décrits ci-dessus, cependant elles renferment des tensioactifs constituant la paroi hydrophile et enrobant le coeur huileux de triglycérides.

Par ailleurs, une solution permettant d'éviter l'emploi de tensioactifs a été développée dans la demande WO 1998/014180 et consiste à utiliser des polyélectrolytes comme agent de solubilisation de principes actifs hydrophobes. Ce procédé permet de préparer des dispersions colloïdales aqueuses de molécules actives hydrophobes. Cette approche a ensuite été étendue à la synthèse de nanoparticules de PA hydrophobes en utilisant la technique de dépôt couche-par-couche pour enrober des agrégats (appelés cristaux) de principes actifs hydrophobes (Agarwal et al., J. Control. Release, 2008, 128, 255 ; Chen et al., Nanomedicine, 2009, 5, 316). Cependant, ce procédé peut présenter une maîtrise insuffisante de la taille des particules, celles-ci dépendant de la taille des cristaux de principe actif. Ainsi, les systèmes de vectorisation décrits dans l'art antérieur peuvent présenter des inconvénients en terme de facilité et/ou de coût de préparation, de quantité de principes actifs vectorisée, de biocompatibilité, en particulier de métabolisation du vecteur, de stabilité, en particulier en milieu physiologique, de délivrance de la substance incorporée, de maîtrise du taux d'encapsulation et/ou du relargage (notamment afin d'éviter en tout ou partie un effet « burst »), de pharmacocinétique, de bio-distribution desdits principes actifs A, de ciblage, de versatilité d'utilisation et/ou d'adaptabilité vis-à-vis de principes actifs différents, de biocompatibilité avec l'organisme et/ou avec le principe actif, de taille et/ou de forme du vecteur, notamment film ou capsule.

La présente invention vise donc à résoudre les problèmes évoqués ci-dessus en tout ou partie. Selon un premier aspect, l'invention a pour objet un matériau comprenant, voire consistant en : - au moins un polysaccharide acide choisi parmi les poly(galacturonate)s, l'héparine et ses dérivés, l'acide hyaluronique et ses dérivés, les chondroïtine sulfates, la pectine et ses dérivés, les polysaccharides neutres, tels que la cellulose ou le dextrane et leurs dérivés, modifiés par des groupements carboxylates et/ou sulfates, dont certaines des unités de répétition portent un motif hydrophobe à une teneur molaire d'au moins 2 % par rapport à l'unité de répétition, - au moins un biopolymére cationique choisi parmi les polyaminoacides et les polysaccharides porteurs de groupements cationiques, choisi parmi les groupements mono-, di-, tri-alkylamino ou tétraalkylammonium, ce biopolymére cationique comprenant une teneur molaire en groupement cationique d'au moins 25 % par rapport à l'unité de répétition, - et éventuellement au moins une substance active, notamment hydrophobe.

Tout particulièrement, ledit matériau est formé, au moins en partie, grâce à l'appariement de biopolymères de charges opposées, par exemple polysaccharide acide et biopolymère cationique. Par exemple le polysaccharide acide comprend des charges négatives et le biopolymère cationique comprend des charges positives qui développent des interactions de charges. Ces biopolyméres de charges opposées peuvent être obtenus par la technique de dépôt couche-par-couche, notamment telle que décrite par O. Decher et al., Thin Sa/id Films 1992, 0 831, ou par Y. Lvov, et al., Physica B 1994, 198, 89. Par « biopolymère », on entend au sens de la présente invention un polymère biocompatible susceptible d'être métabolisé par l'organisme en métabolites biocompatibles, en particulier le biopolymère est choisi parmi les polysaccharides et les polyaminoacides. Par « dérivé », on entend au sens de la présente invention un composé qui se déduit d'un autre par une simple addition ou une substitution. Dans le cas présent un polysaccharide dérivé d'un polysaccharide peut présenter des fonctions hydroxyles substituées ou modifiées en autres fonctions. Par exemple des fonctions hydroxyles peuvent être transformées en fonctions esters ou amides, ou encore des fonctions hydroxyles peuvent être protégées, notamment par des groupements protecteurs, en particulier tels que défini dans Green's Protective Groups in Organic Synthesis 4th ed.

Tout particulièrement un dérivé comprend moins de 20 % en nombre de fonctions modifiées. Par « substance active », on entend au sens de la présente invention un composé ou une association de composés, éventuellement sous forme de sel(s), assurant l'activité ou une partie de l'activité de la composition les comprenant.

Une telle substance active peut être : - une substance active pharmacologique ou phytosanitaire, - une substance active cosmétique, en particulier dermatologique, et - une substance active alicament. Une substance active pharmacologique, peut être une molécule faisant ou ayant fait l'objet d'une autorisation de mise sur le marché dans un pays, en particulier un pays choisi parmi les pays constituant l'Union Européenne, la Suisse, les Etats-Unis, le Japon, la Chine, l'Inde et le Brésil.

Une substance active cosmétique peut être un composé présentant l'activité cosmétique dans la composition cosmétique. Une substance active de type alicament peut être un composé présentant l'activité alicament dans l' alicament.

Par « substance active hydrophobe », on entend au sens de la présente invention une substance active, éventuellement sous forme de sel, présentant une solubilité dans l'eau à 25°C inférieure ou égale à 200 µg/1, en particulier inférieure ou égale à 150 µg/1, voire inférieure ou égale à 100 µg/1, et tout particulièrement inférieure ou égale à 50 µg/1. Les matériaux obtenus, en particulier films et capsules, peuvent résulter de la complexation de polyanion(s), comme le polysaccharide acide, avec au moins un polycation, comme le biopolymére cationique. Cette complexation peut être le principe même de la formation de ces matériaux. Le polysaccharide acide peut comprendre un ou plusieurs, notamment deux ou trois, types de motifs osidiques par unité de répétition. Tout particulièrement, l'unité de répétition comprend deux types de motifs osidiques, notamment l'acide D-glucuronique et la N-acétyl-D-glucosamine. Le polysaccharide acide est choisi parmi les poly(galacturonate)s, l'héparine et ses dérivés, l'acide hyaluronique et ses dérivés, les chondroïtine sulfates, la pectine et ses dérivés, les polysaccharides neutres tels que la cellulose, le dextrane et leurs dérivés, modifiés par des groupes carboxylates et/ou sulfates. Les groupes carboxylates ou sulfates des polysaccharides neutres peuvent être insérés via le greffage d'un groupement carboxyméthyl, ou par sulfonation à l'aide d'un complexe de type SO3-amine, comme le SO3-ME3N (triméthylamine), le SO3-Et3N (triéthylamine), le SO3-Pyridine, et le SO3-Piperidine ou de type complexe non-aminé comme le SO3-DMF. Ainsi, parmi les dérivés de la cellulose ou de dextrane, on peut citer la carboxyméthylcellulose, le dextrane sulfate, ou le carboxyméthyldextrane-sulfate. Tout particulièrement, le polysaccharide acide comprend au moins 100, en particulier au moins 200, notamment au moins 300, voire au moins 400 unités de répétition. Le motif hydrophobe peut être greffé sur une fonction acide carboxylique, une fonction alcool du polysaccharide acide.

Selon un mode de réalisation particulier, le motif hydrophobe est greffé sur une fonction acide carboxylique du polysaccharide acide. Lorsque le motif hydrophobe est greffé sur une fonction alcool du polysaccharide acide, il peut être greffé via une fonction ester ou éther.

Lorsque le motif hydrophobe est greffé sur une fonction acide carboxylique, il peut être greffé via une fonction amide, ester ou -CONHNHCO-, dite « carbonylhydrazide ». Tout particulièrement, le motif hydrophobe est greffé sur une fonction acide carboxylique via un carbonylhydrazide. Le motif hydrophobe peut être un motif hydrocarboné comprenant au moins six atomes de carbone. Il peut éventuellement comprendre, outre la liaison avec le polysaccharide acide, au moins une fonction choisie parmi les alcools, les thiols, les éthers, les thioéthers, les esters, les thioesters, les amides, les carbamates, les aldéhydes, les cétones, les cétals, les acétals, les nitro, les nitriles, les imines, les oximes, les hydrazides et les carbonylhydrazides. Tout particulièrement il comprend au maximum trois, notamment deux fonctions telles que définies ci-dessus, voire une fonction telle que définie ci-dessus. Le motif hydrophobe peut tout particulièrement comprendre au moins une fonction choisie parmi les thioéthers, les esters, les thioesters, les amides, les carbamates, les aldéhydes, les cétones, les cétals, les acétals, les nitro, les nitriles, les imines, les oximes, les hydrazides et les carbonylhydrazides. Selon une variante il comprend une, deux, ou trois fonctions telles que définies ci-dessus, tout particulièrement il en comprend une ou deux, voire il en comprend une. Selon un mode de réalisation particulier le motif hydrophobe est lié au polysaccharide acide via une liaison carbonylhydrazide et comprend 0 ou 1 fonction carbonylhydazyde, notamment à l'exclusion de toute autre fonction.

Par ailleurs, le motif hydrophobe peut comprendre des chaînes aliphatiques saturées ou insaturées, linéaires, ramifiées et/ou cycliques, et des groupements aryle, comme les benzyles, les tolyles, les phényles ou les naphtyles, voire hétéroaryles comme les pyridynyles. En particulier le motif hydrophobe peut être greffé sur une fonction acide 30 carboxylique en formant une liaison du type carbonylhydrazide (-CONHNHCO-). Dans ce cas, le motif peut être du type -CONHNHCORI(CONHNH)mR2 où o RI représente un alkyléne ou un polyéther, comme du poly(éthyléne glycol), comprenant de 1 à 17 atomes de carbones, un alcényle ou un alcynyle comprenant de 2 à 17 atomes de carbones, un aryle comprenant de 6 à 17 atomes de carbone, ces groupements pouvant comprendre ou non au moins une fonction choisie parmi les alcools, les thiols, les éthers, les thioéthers, les esters, les thioesters, les amides, les carbamates, les aldéhydes, les cétones, les cétals, les acétals, les nitro, les nitriles, les imines, les oximes, les hydrazides et les carbonylhydrazides, o m représentant 0 ou 1, o Rz représentant H, un alkyle ou un polyéther comprenant de 6 à 17 atomes de carbones, un alcényle ou un alcynyle comprenant de 6 à 17 atomes de carbones, un aryle ou un arylalkyle comprenant de 6 à 17 atomes de carbone, ces groupements pouvant comprendre ou non au moins une fonction choisie parmi les alcools, les thiols, les éthers, les thioéthers, les esters, les thioesters, les amides, les carbamates, les aldéhydes, les cétones, les cétals, les acétals, les nitro, les nitriles, les imines, les oximes, les hydrazides et les carbonylhydrazides. Les alkyles, alkylénes, polyéthers, alcényles et alcynyles peuvent être linéaires, 15 ramifiés ou cycliques. Ils peuvent également être substitués par exemple par des atomes d'halogènes, comme du chlore ou du fluor, ou encore par des aryles. Les aryles peuvent être substitués, par exemple par des atomes d'halogènes, comme du chlore ou du fluor, ou encore par des alkyles. Tout particulièrement, le motif hydrophobe est du type 20 CONHNHCORI(CONHNH)mR2 avec o RI représente un alkyléne ou un polyéther comprenant de 1 à 17 atomes de carbone, dépourvu d'autres fonctions chimiques ou avec au moins une fonction choisie parmi les éthers, les thioéthers, les esters, les thioesters, les amides, les carbamates, les aldéhydes, les cétones, les cétals, les acétals, les nitriles, les imines, les oximes et les hydrazides, en 25 particulier le groupement alkyléne est du type -(CH2)X avec x représentant un nombre entier allant de 1 à 17, en particulier de 2 à 10, voire de 3 à 8, et en particulier de 4, et le polyéther est un polyéthylène glycol ou un polypropyléneglycol, o m représentant 0 ou 1, en particulier m représente 1, o Rz représentant H, un alkyle ou un polyéther comprenant de 6 à 17 atomes de carbones, 30 dépourvu d'autres fonctions chimiques ou avec au moins une fonction choisie parmi les éthers, les thioéthers, les esters, les thioesters, les amides, les carbamates, les aldéhydes, les cétones, les cétals, les acétals, les nitriles, les imines, les oximes et les hydrazides, en particulier le groupement alkyléne est du type -(CH2)y-CH3 avec y représentant un nombre entier allant de 6 à 16, en particulier de 7 à 14, voire de 8 à 11, et en particulier de 9. Selon un mode de réalisation particulier, le motif hydrophobe est du type - CONHNHCORI(CONHNH)mR2 où o RI représente -(CH2)X avec x représentant un nombre entier allant de 1 à 17, en particulier de 2 à 10, voire de 3 à 8, et en particulier de 4, o m représente 1, o Rz représentant H ou un groupement alkyléne du type -(CH2)y-CH3 avec y représentant un nombre entier allant de 6 à 16, en particulier de 7 à 14, voire de 8 à 14, et en particulier de 9. Le taux de greffage molaire du motif hydrophobe peut aller de 5 à 40 %, notamment de 10 à 30 %, voire d'environ 20 % par rapport à l'unité de répétition. Le polysaccharide substitué peut représenter de 10 % à 90 % en poids par rapport au poids total du matériau.

Selon un mode de réalisation particulier, le polysaccharide comprend, voire consiste en, l'acide hyaluronique, en particulier de formule (I) suivante : OH Formule (I) dans laquelle - n est un nombre entier allant de 250 à 2 500, notamment de 450 à 1 500, et - R représente - OH, - OZ, avec Z étant un contre ion monovalent comme Na+ ou K+ ou un contre ion divalent, comme Cal+ ou Mg2+, en particulier Z est un ion monovalent, 25 - NHNHCORI(CONHNH)mR2 où o RI représente un alkyléne ou un polyéther comprenant de 1 à 17 atomes de carbone, un alcényl ou un alcynyl comprenant de 2 à 17 atomes de carbone, un aryle comprenant de 6 à 17 atomes de carbone, ces groupements pouvant comprendre ou non au moins une fonction choisie parmi les alcools, les thiols, les éthers, les thioéthers, les esters, les thioesters, les amides, les carbamates, les aldéhydes, les cétones, les cétals, les acétals, les nitro, les nitriles, les imines, les oximes, les hydrazides et les carbonylhydrazides, o m représente 0 ou 1, o Rz représente H, un alkyle ou un polyéther comprenant de 6 à 17 atomes de carbone, un alcényle ou un alcynyle comprenant de 6 à 17 atomes de carbones, un aryle ou un arylalkyle comprenant de 6 à 17 atomes de carbone, ces groupements pouvant comprendre ou non au moins une fonction choisie parmi les alcools, les thiols, les éthers, les thioéthers, les esters, les thioesters, les amides, les carbamates, les aldéhydes, les cétones, les cétals, les acétals, les nitro, les nitriles, les imines, les oximes, les hydrazides et les carbonylhydrazides, avec un taux de greffage molaire du motif hydrophobe supérieur ou égal à 2 %, notamment le taux de greffage peut aller de 5 à 40 %, notamment de 10 à 30 %, voire d'environ 20 % par rapport à l'unité de répétition. Tout particulièrement, le motif hydrophobe est du type - CONHNHCORI(CONHNH)mRz avec RI représente un alkyléne ou un polyéther comprenant de 1 à 17 atomes de carbones, dépourvu d'autres fonctions chimiques ou avec au moins une fonction choisie parmi les éthers, les thioéthers, les esters, les thioesters, les amides, les carbamates, les aldéhydes, les cétones, les cétals, les acétals, les nitriles, les imines, les oximes et les hydrazides, en particulier le groupement alkyléne est du type -(CH2)X , et le groupement polyéther est du type -(CH2CHCH3O)r ou -(CH2CH20)s , o avec x, représentant un nombre entier allant de 1 à 17, en particulier de 2 à 10, voire de 3 à 8, et en particulier de 4, r représentant un nombre entier allant de 1 à 5, en particulier de 1 à 4, voire de 1 à 3, et s représentant un nombre entier allant de 1 à 8, en particulier de 2 à 5, voire de 3 à 6, o m représentant 0 ou 1, en particulier m représentant 1, o Rz représentant H ou un alkyle comprenant de 6 à 17 atomes de carbones, dépourvu d'autres fonctions chimiques ou avec au moins une fonction choisie parmi les éthers, les thioéthers, les esters, les thioesters, les amides, les carbamates, les aldéhydes, les cétones, les cétals, les acétals, les nitriles, les imines, les oximes et les hydrazides, en particulier le groupement alkyléne est du type -(CH2)y-CH3 avec y représentant un nombre entier allant de 6 à 16, en particulier de 7 à 14, voire de 8 à 11, et en particulier de 9. Selon un mode de réalisation particulier, le motif hydrophobe est du type - CONHNHCORI(CONHNH)mR2 où o RI représente -(CH2)X avec x représentant un nombre entier allant de 1 à 17, en particulier de 2 à 10, voire de 3 à 8, et en particulier de 4, o m représente 1, o Rz représentant H ou un groupement alkyléne du type -(CH2)y-CH3 avec y représentant un nombre entier allant de 6 à 16, en particulier de 7 à 14, voire de 8 à 11, et en particulier de 9. L'acide hyaluronique greffé peut représenter de 10 % à 90 % en poids par rapport au poids total du matériau. Les polysaccharides acides greffés par des motifs hydrophobes, et plus particulièrement les acides hyaluroniques de Formule (I) peuvent être obtenus grâce aux protocoles décrits dans WO 2007/059890 ou dans Biomacromolecules, 2009, 10, 2875-2884. Le biopolymére cationique est choisi parmi les polyaminoacides et les polysaccharides porteurs de groupements cationiques, mono-, di-, tri-alkylamino ou tétraalkylammonium, comprenant une teneur molaire en groupement amino ou tétraalkylammonium d'au moins 25 %. Par « biopolymére cationique », on entend par exemple un biopolymére présentant une teneur molaire en charges positives d'au moins 25 % par unité de répétition. Ce biopolymére cationique peut comprendre un ou plusieurs, notamment deux ou trois, motifs de type résidu aminoacide ou osidique, par unité de répétition.

Le groupement cationique, mono-, di-, tri-alkylamino ou tétraalkylammonium, peut être présent directement sur le biopolymére, c'est par exemple le cas de la poly(L-lysine), et/ou être greffé sur le biopolymére. Lorsque le groupement cationique, en particulier lorsqu'il s'agit de tétraalkylammonium, greffé, il peut l'être via une fonction éther ou amine, en particulier secondaire. Tout particulièrement le greffage peut être effectué via ouverture d'un cycle de type époxyde par une fonction alcool ou amine, en particulier primaire, du biopolymére.

Ainsi, le groupement cationique peut être greffé via l'ouverture d'un époxyde de Formule A suivante Formule A dans laquelle - Ra, Rb, Rc, identiques ou différents, représentent H ou un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, et en particulier Ra, Rb, Rc, identiques ou différents, représentent un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, - m' est un entier allant de 1 à 6, en particulier de 1 à 4, voire est 1 ou 2. - Tout particulièrement, Ra, Rb et Rc, sont identiques et représentent un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, notamment méthyle, éthyle, propyle ou butyle. En particulier, le greffage peut être effectué via un glycidyl tétraalkylammonium, notamment tétraméthylammonium, en milieu acide ou neutre tel que décrit par Cho et al., Biomacromolecules, 2006, 7, 2845, par Seong et al., J. Appl. Polym. Sci., 2000, 76, 2009 ou Lim et al., Carbohydr. Res., 2004, 339, 313. Le biopolymére peut présenter un taux de greffage molaire d'au moins 35 %, notamment d'au moins 50 % par rapport au nombre d'unités de répétition. Plus particulièrement, le taux de greffage molaire peut aller de 25 à 300 %, notamment de 35 à 200 %, voire de 50 à 150 % par rapport à l'unité de répétition. Le biopolymére cationique peut représenter de 10 à 90 % en poids par rapport au poids total du matériau. Tout particulièrement, le rapport pondéral polysaccharide acide / biopolymére cationique va de 10/1 à 1/10.

Selon une première variante, le biopolymére cationique est un polysaccharide cationique, en particulier le biopolymére cationique comprend, voire consiste en, du chitosane porteur de groupement cationique. Tout particulièrement, le biopolymére cationique peut correspondre au chitosane de Formule (II) suivante : Formule (II) dans laquelle - n' est un nombre entier allant de 150 à 3 000, notamment de 200 à 2 5550, et en particulier de 200 à 2 000, - R'1 et R'z représentent, indépendamment l'un de l'autre, H, ou -R'4NR'aR'bR'c, avec - R'4 représentant un espaceur du type -(CH2)x,- ou -CHOH(CH2)X,- et x' représentant un nombre entier allant de 1 à 6, en particulier représentant 1 ou 2, - R'a, R'b, R'c, identiques ou différents, représentant H ou un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, et en particulier R'a, R'b, R'c, identiques ou différents, représentent un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, voire R'a, R'b, R'c, identiques ou différents, représentent un alkyl comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, et en particulier le méthyle, l'éthyle, le propyle ou le butyle, - R'3 représente H, un groupement acétyle ou -R"SNR"aR"bR"c, avec - R"5 représentant un espaceur du type -(CH2)X>>- ou -CHOH(CH2)X>>- et x" représentant un nombre entier allant de 1 à 6, en particulier représentant 1 ou 2, - R"a, R"b, R"c, identiques ou différents, représentant H ou un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, et en particulier R"a, R"b, R"c, identiques ou différents, représentent un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, voire R"a, R"b, R"c, identiques ou différents, représentent un alkyl comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, et en particulier le méthyle, l'éthyle, le propyle ou le butyle, en particulier avec une teneur molaire de greffage d'au moins 25 % par rapport à l'unité de répétition. Tout particulièrement le taux de greffage molaire peut aller de 25 à 250 %, voire de 30 à 150 % par rapport à l'unité de répétition. Selon un mode de réalisation particulier, le chitosane est greffé, notamment de manière telle que définie ci-dessus. Il peut tout particulièrement être greffé par réaction d'un alcool ou d'une amine avec un groupe réactif comme un groupe époxyde, ou avec un groupe partant comme un halogénure ou un tosylate, d'un composé portant une fonction cationique, comme un ammonium quaternaire. Par exemple du chlorure de glycidyl triméthylammonium en milieu aqueux, à pH acide ou neutre tel que décrit par Cho et al., Biomacromolecules, 2006, 7, 2845, par Seong et al., J. Appl. Polym. Sci., 2000, 76, 2009 et Lim et al., Carbohydr. Res., 2004, 339, 313. Selon une variante, le chitosane peut répondre à la Formule (II) dans laquelle R' l et R'z représentent H et R'3 représente H, un groupement acétyle ou -R"SNR"aR"bR"c, avec - R"5 représentant un espaceur du type (CH2)x,, ou CHOH(CH2)X>> et x" représentant un nombre entier allant de 1 à 6, en particulier représentant 1 ou 2, - R"a, R"b, R"c, identiques ou différents, représentant H ou un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, et en particulier R"a, R"b, R"c, identiques ou différents, représentent un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, voire R"a, R"b, R"c, identiques ou différents, représentent un alkyl comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, et en particulier le méthyle, l'éthyle, le propyle ou le butyle, et le taux de greffage molaire peut aller de 25 à 250 %, voire de 30 à 150 % par rapport au nombre d'unités de répétition. Selon une autre variante, le chitosane peut répondre à la Formule (II) avec un greffage du groupement cationique sur les hydroxyles et/ou les amines, en particulier avec un taux de greffage molaire qui va de 25 à 250 %, voire de 30 à 150 % par rapport à l'unité 20 de répétition. Lorsque le matériau comprend en tant que biopolymére cationique du polysaccharide cationique, comme du chitosane porteur d'un ou plusieurs types de groupement(s) cationique(s), ledit matériau peut être dépourvu de réticulation entre le polysaccharide acide et le polysaccharide cationique. 25 Selon une deuxième variante, le biopolymére cationique est un polyaminoacide, en particulier le biopolymére comprend, voire consiste en, de la poly(L-lysine). Lorsque le matériau comprend en tant que biopolymére cationique du polyaminoacide, ledit matériau peut présenter une réticulation entre le polysaccharide acide et le polyaminoacide cationique, la réticulation peut notamment être effectuée via 30 une liaison de type peptidique. Ceci peut tout particulièrement être réalisé dans le cas où le matériau est sous forme de film ou de capsules, notamment de capsule. Selon un mode de réalisation encore plus particulier, le matériau comprend, voire consiste en : - de l'acide hyaluronique de Formule (I) tel que défini ci-dessus, - du chitosane de Formule (II) tel que défini ci-dessus, - et éventuellement une substance active. Selon un mode de réalisation encore plus particulier, le matériau comprend, voire consiste en : - de l'acide hyaluronique de Formule (I) tel que défini ci-dessus, - de la poly(L-Lysine) ou PLL, - et éventuellement une substance active. En particulier ce matériau présente une réticulation entre la poly-(L-lysine), et le polysaccharide, notamment de type liaison peptidique entre des fonctions amines de la PLL et des fonctions acides du polysaccharide. Une telle réticulation peut être effectuée comme décrit dans l'article de Szarpak et al., Biomacromolecules, 2010, 1l, 713. Les substances actives pharmaceutiques utilisables peuvent être choisies parmi les anti-viraux, les agents anti-cancéreux, les antibiotiques, les anti-mycosiques, les adjuvants pour vaccins. Tout particulièrement les substances actives utilisées sont hydrophobes. Parmi les substances actives on peut tout particulièrement citer le paclitaxel et le saquinavir. Le matériau comprenant un polysaccharide acide et un biopolymére cationique peut être obtenu par un dépôt couche-par-couche, et en particulier par alternance de couches de polysaccharide acide et de biopolymére cationique. La formation de ce matériau résulte de la formation de complexes polyanion/polycation. Il peut en particulier être obtenu par les protocoles décrit par G. Decher et al., Thin Sol/d Mlms 1992, 210, 831, ou par Y, Lvov, et aL, Phys ça B 1994, 198, 89.

Ainsi, la présente invention concerne égalernenL un procédé de préparation d'un matériau selon l'invention comprenant des étapes de dépôt couche-par-couche, et en particulier par alternance de couches, de polysaccharide acide et de biopolymére cationique. Bien entendu, le matériau peut comprendre des polysaccharides et/ou des biopolyméres cationiques de différents tpyes, soit au sein d'une même couche, soit dans des couches différentes, soit les deux. Tout particulièrement, notamment préalablement à la fabrication du matériau, et en particulier au dépôt couche-par-couche, la substance active est complexée avec le polysaccharide acide greffé tel que défini ci-dessus et/ou avec le biopolymére cationique.

En particulier un principe actif hydrophobe, peut être complexé avec un polysaccharide acide greffé tel que défini ci-dessus. Dans le cas d'un principe actif non-hydrophobe, ce dernier peut être complexé avec un biopolymére cationique tel que défini ci-dessus ou avec un polysaccharide acide.

Par ailleurs, le matériau peut être obtenu sous forme de capsule, par exemple en revêtant une particule colloïdale biodégradable, comme du CaCO3, par le film multicouche décrit ci-dessus puis en dissolvant la particule, par exemple par un chélatant, comme de l'EDTA, acide éthylène diamine tétra acétique. Le matériau peut se présenter sous forme de film déposé sur un support solide ou de 10 capsules, en particulier de microcapsules. Ces capsules ou microcapsules peuvent être creuses. Dans le cas des capsules, le matériau peut comprendre un nombre de paires de couches allant de 3 à 30, en particulier de 3,5 à 20, notamment de 4 à 15, voire de 4,5 à 12. Dans le cas des films, le matériau peut comprendre un nombre de paires de couches 15 allant de 3 à 100, en particulier de 4 à 50, notamment de 5 à 25, voire de 5 à 15, et tout particulièrement de 5 à 10. La présente invention concerne encore une composition, notamment cosmétique, pharmaceutique, alimentaire, par exemple de type alicament, comprenant un matériau tel que défini ci-dessus. 20 En particulier, la composition est formulée de manière à permettre une administration orale, nasale, parentérale. La présente invention selon un autre de ses aspects porte également sur un dispositif, notamment de type biomatériau implantable ou implant médical, comme un stent, comprenant un matériau tel que défini ci-dessus. 25 Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne une surface revêtue en tout ou partie, notamment via des liaisons covalentes, par un matériau tel que défini ci-dessus.

Exemples 30 Dans les présents exemples les abréviations suivantes sont utilisées : - HA correspond à de l'acide hyaluronique et plus particulièrement, - HA1 OC10 correspond à un acide hyaluronique (HA) dont la fonction acide carboxylique est greffée par NHNHCO(CH2)4CONHNH(CH2)9CH3 avec un taux de greffage molaire de 10% ; il est préparé à partir d'un lot d'acide hyaluronique initial obtenu par fermentation bactérienne et ayant masse molaire moyenne MW = 200 000 g/mol, - HA20C10 correspond à un acide hyaluronique dont la fonction acide carboxylique est greffé par NHNHCO(CH2)4CONHNH(CH2)9CH3 avec un taux de greffage molaire de 20%, - QCHI correspond à du chitosane greffé par -CH2CHOHCHN+(CH3) 3.C1- et obtenu à partir d'un lot de chitosane initial (provenant de FMC BioPolymer AS, Novamatrix, Norvège), ayant un degré de N-acétylation de 9 % et une masse molaire moyenne MW de 372000 g/mol. Plus précisément, QCHI correspond à : - QCHI-1 ayant un greffage uniquement sur la fonction amine du chitosane et un taux de greffage molaire de 31 %, - QCHI-2 ayant un greffage uniquement sur la fonction amine du chitosane et un taux de greffage molaire de 66 %, - QCHI-3 ayant un greffage sur les fonctions amines et alcools du chitosane et un taux de greffage molaire de 93 %, - QCHI-4 ayant un greffage sur les fonctions amines et alcools du chitosane et un taux de greffage molaire de 111 % et - QCHI-5 ayant un greffage sur les fonctions amines et alcools du chitosane et un taux de greffage molaire de 133 %, - PLL correspond au poly(hydrobromure de L-lysine) provenant de SIGMA de masse Mw (15000-30000) g/mol dans le cas des capsules et de masse Mw - 70000 g/mol dans le cas des films plans. Par ailleurs, HAlOC10 et HA20C10 peuvent être obtenus en utilisant le protocole décrit dans WO 2007/059890 ou dans Biomacromolecules, 2009, 10, 2875-2884 et QCHI-1, QCHI-2, QCHI-3 et QCHI-4 peuvent être obtenus en utilisant le protocole décrit par Seong et al., J. Appl. Polym. Sci., 2000, 76, 2009, Cho et al., Biomacromolecules, 2006, 7, 2845, ou Lim et al., Carbohydr. Res., 2004, 339, 313.

Exemple 1 : Préparation de films HA greffé hydrophobe/PLL ou QCHI Les solutions de polyélectrolytes ont été préparées dans un tampon PBS (phosphate buffered saline à pH 7,4) à la concentration de : - 2 g/L pour le HA greffé hydrophobe (HA20C10 ou HAlOC10), - 0,5 g/L pour la PLL et - 2 g/L pour le QCHI (QCHI-1, QCHI-2, QCHI-3, QCHI-4 ou QCHI-5) Une couche précurseur de poly(éthyléneimine) (à 5 mg/mL) est déposée afin d'augmenter l'adhésion du film au fond du puits, puis les solutions de polyélectrolytes (50µL) sont déposées successivement dans chaque puits. Après 8 minutes d'adsorption, les puits sont rincés deux fois durant 1 min à l'aide du tampon PBS. La séquence est répétée jusqu'à l'obtention d'un film comprenant 8 paires de couches, noté (Polysaccharide acide/Biopolymére cationique)g. Pour les expériences impliquant une réticulation des films, carbodiimide hydrosoluble, le 1-éthyl-3-(3-dimethylamino-propyl)carbodiimide (EDC, 200 mM) a été introduit au contact des films en présence de N-hydrosulfosuccinimide (50 mM). Cette réaction, qui est réalisée dans un milieu contenant 0,15 M NaCl ajusté à pH 5,5, consiste à faire réagir les groupements ammonium de la PLL avec les groupements carboxyliques du HA greffé hydrophobe pour former des liaisons covalentes de type amide (Richert, Biomacromolecules 5, 284-294, 2004). La solution d'agent réticulant est mise au contact du film durant toute la nuit à 4°C. Puis les films sont rincés pendant 1 heure avec du tampon PBS afin de stopper la réticulation et éliminer les produits solubles de la réaction. Les films suivants comprenant 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 paires de couches ont été synthétisés selon le protocole décrit ci-dessus : HAlOC10/QCHI-2 ; HAlOC10/QCHI-3 ; HAlOC10/QCHI-4 ; HAlOC10/QCHI-5 ; HA20C10/QCHI-2 ; HA20C10/QCHI-3 ; HA20C10/QCHI-4 ; HA20C10/QCHI-5 ; HAlOC10/PLL et HA20C10/PLL. La croissance des films (PLL/HA greffé hydrophobe) et (QCHI/HA greffé hydrophobe) a été suivie par spectroscopie infrarouge et par spectroscopie UV.

En particulier, la Figure 1 représente la croissance des films (PLL/HA20C10) et (QCHI-4/HA20C10) suivie : (A) par spectroscopie d'absorbance à 230 nm, et (B) par spectroscopie infrarouge en mode réflexion totale interne, qui permet d'obtenir la masse adsorbée.

La figure lA représente l'absorbance à 230 nm (unité arbitraire) en fonction du nombre de paires de couches déposées. La figure 1B représente la masse totale déposée (en ng/cm2), mesurée par spectroscopie infrarouge, en fonction du nombre de paire de couches.

Exem le 2 : Pré aration de microca suies HA20C 10/ CHI-4 et HA20C 10/PLL Des microcapsules ont été préparées en utilisant du carbonate de calcium comme particule colloïdales biodégradables. Ces microparticules ont été synthétisées à partir de solutions de CaClz et de Na2CO3 (comme décrit par A.A. Antipov, D. Shchukin, Y. Fedutik, A.I. Petrov, G.B. Sukhorukov, H. Mohwald, Carbonate microparticles for hollow polyelectrolyte capsules fabrication, Colloids and Surfaces, A: Physicochemical and Engineering Aspects, 224 (2003) 175-183, et par D.V. Volodkin, A.I. Petrov, M. Prevot, G.B. Sukhorukov, Matrix Polyelectrolyte Microcapsules: New System for Macromolecule Encapsulation, Langmuir, 20 (2004) 3398-3406). Les microparticules de CaCO3 ont été revêtues par le technique de dépôt couche-par- couche en les incubant à une concentration de 2 % (m/v) (comme décrit par A.I. Petrov, D.V. Volodkin, G.B. Sukhorukov, Protein-Calcium Carbonate Coprecipitation: A Tool for Protein Encapsulation, Biotechnology Progress, 21 (2005) 918-925) dans une solution aqueuse (0,15 M de NaCl, pH 6,5) de HA20C10 (CI, = 1 g/1), et de QCHI-4 (CI, = 2 g/1) ou de PLL (CI, = 2 g/L). Après agitation pendant 10 min, les microparticules ont été collectées par centrifugation et les polyélectrolytes résiduels non adsorbés ont été enlevés par deux lavages avec une solution aqueuse de NaCl à 0,01 M (pH 6,5). Après dépôt de 4,5 ou 5 bicouches, le coeur de CaCO3 a été enlevé par traitement avec une solution d'EDTA à 0,1 M (pH 7,2). Pour éviter des dommages mécaniques de la coque de polyélectrolyte « molle », les ions dissous résultant de la décomposition CaCO3 ont été enlevés par dialyse contre de l'eau pure, en utilisant des membranes à dialyse Spectra/Por® avec un seuil de coupure de 6-8 kDa. Lorsque la poly(L-lysine) est utilisée dans les multicouches avec du HA greffé hydrophobe, comme le HA20C10/PLL, sur les particules de CaCO3, les particules revêtues du film sont été incubées avec la solution EDC (400mM) /sulfo-NHS (100 mM) à pH 6,5 pendant 12h, afin de procéder à une réticulation des couches. Les particules sont ensuite dissoutes par agitation de la dispersion de particules dans une solution aqueuse d'EDTA 0,1 M (pH=7,2). Les microcapsules suivantes ont été synthétisées selon le protocole ci-dessus : - (HA20C10/QCHI-4)5 ; (HA20C10/QCHI-4)4 (5 et 4 indiquant respectivement le nombre de bicouches déposées) ; et - (HA20C10/PLL)4,5.

Exemple 3 : Inclusion d'une sonde fluorescente dans un film Cet exemple porte sur l'inclusion dans des films multicouches d'une sonde fluorescence hydrophobe, le Nile Red, abrégé NR, communément utilisé comme modèle de drogue hydrophobe. Il est connu que la fluorescence du Nile Red dépend de l'environnement dans lequel il se trouve (Gautier et al., J. Controlled Release 1999, 60, 235) et qu'elle est nulle en milieu non-polaire. La capacité de films plans obtenus par dépôt alterné de d'acide hyaluronique greffé hydrophobe HAlOC10 ou HA20C10 et biopolymére de type chitosane greffé QCHI à piéger le Nile Red a été analysée. Dans le présent exemple, la sonde a été pré-complexée aux dérivés hydrophobes du HA. En figure 2 sont présentées les mesures de l'intensité de fluorescence (unité arbitraire) obtenues pour différents types de films en fonction du nombre de couches d'acide hyaluronique hydrophobe (8 indiquant 8 paires de couches QCHI/HA greffé hydrophobe au total). Les longueurs d'onde excitation et d'émission pour le NR sont respectivement : 590 + 5 nm et 650 + 5 nm. Plus précisément, la figure 2 présente l'incorporation du Nile Red dans différents types de HA greffé hydrophobe/QCHI suivi par spectrofluorimétrie en faisant varier le nombre de couches de HA greffé hydrophobe avec un concentration de Nile Red fixée à 10 µM . Il apparaît que les films à base de HA20C10 présentent une intensité de fluorescence beaucoup plus élevée que ceux contenant le HAlOC10. Ceci indique que l'incorporation de Nile Red est supérieure avec HA20C10 qu'avec HAlOC10. La fluorescence des films augmente également avec le taux de greffage du chitosane quaternarisé, montrant un effet synergique des deux polysaccharides modifiés vis-à-vis de l'incorporation de molécules hydrophobes.

L'incorporation de molécules hydrophobes dans les films peut donc être aisément modulée en fonction du taux de greffage des polysaccharides modifiés

Exemple 4 : Inclusion du Nile Red (sonde fluorescente) dans des capsules La capacité de ces mêmes films déposés sur un support biodégradable, en l'occurrence des 30 microparticules de carbonate de calcium à pH 6,5, à former des microcapsules a été évaluée. Les dérivés testés sont les capsules obtenues dans l'exemple 2 (HA20C10/QCHI-4)5 ont conduits de manière remarquable à la formation de capsules après dissolution du coeur de CaCO3. Ce procédé, utilisant des particules biocompatibles et faciles à dissoudre par traitement avec un agent chélatant (acide éthylénediaminetétraacétique, EDTA), permet ainsi d'obtenir des vecteurs à base de biopolyméres originaux dans des conditions douces et non toxiques.

Ces capsules, de façon similaire aux films plans, présentent en outre l'avantage de pouvoir contenir des molécules hydrophobes insolubles dans l'eau. Ceci est confirmé par observation en microscopie confocale de microcapsules contenant du Nile Red dans leur paroi. En effet, la fluorescence observée dans les parois des capsules est une preuve de leur incorporation et de leur localisation dans un environnement hydrophobe.

La figure 3 est une image de microscopie confocale à balayage laser de capsules de HA20C10/QCHI (taux = 110 %) contenant du Nile Red dans la paroi. La paroi claire des capsules est due à la fluorescence du Nile Red piégé dans les nanodomaines hydrophobes. La forme de ces capsules est sphérique, et leur diamètre est d'environ 5 µm, correspondant à celle des particules de CaCO3. Par ailleurs, ces capsules sont homogènes en taille. Les images obtenues par microscopie électronique à balayage après séchage des capsules montrent la présence d'un grand nombre de capsules à base de HA20C10. La Figure 4, image de microscopie électronique à balayage de capsules de (HA20C10/QCHI-4)5 après séchage, montre bien cette homogénéité. La quantité de Nile Red incorporée dans les capsules (HA20C10/QCHI-4)5 a été estimée 20 en réalisant des mesures de fluorescence après extraction du Nile Red des capsules avec de l'éthanol par le protocole suivant. On prélève 200 µL de suspension de capsules dans le PBS. Après les avoir centrifugées (4000 rpm, 4 min, 20 °C), on élimine la phase aqueuse et on ajoute 0.5 mL d'EtOH . Après centrifugation (4000 rpm, 4 min, 20 °C), le surnageant contenant la drogue est récupérée. 25 Cette opération est répétée 2 fois. Les solutions alcooliques sont rassemblées et analysées à l'aide d'un lecteur de fluorescence microplaques (Infinite 1000, Tecan, Autriche). La concentration en NR est déterminée en utilisant une courbe étalon préalablement établie à partir de solutions de NR dans EtOH de concentrations connues. La concentration par capsules est déduite du nombre de capsules par mL de suspension. 30 Celui-ci est déterminé à l'aide d'une chambre de comptage Petroff-Hausser. La quantité dans chaque capsule déduite de la courbe de calibration du Nile Red dans l'éthanol est de l'ordre de 0,17 pg. Ceci correspond à une concentration par capsule d'environ 64 mM, c'est-à-dire environ 6400 fois la concentration du Nile Red dans la solution aqueuse initiale de HA20C 10 (CNile Red = 10 µM). Dans le cas des capsules (HA20C10/PLL)4.5 réticulées chimiquement (telles que décrites en exemple 2), la concentration par capsule est d'environ 3,4 mM, indiquant une capacité 5 d'incorporation légèrement inférieure pour ces capsules. La libération de drogue et en l'occurrence de Nile Red en fonction du temps est déterminée de la manière suivante : On répartit 5 mL d'une suspension de capsules dans le PBS en 5 échantillons de 1 mL (J0, J2, J4, J6 et J8). Dans l'échantillon J0, on prélève 2 x 200 µL de suspension de capsules. 10 Les 2 prélèvements subissent un traitement similaire à celui décrit ci-dessus pour doser la molécule incorporée dans les capsules. Deux prélèvements sont effectués afin de confirmer les valeurs. Les échantillons J2, J4, J6 et J8 sont introduits dans des membranes à dialyse (membranes Spectra/Por® avec un seuil de coupure de 6-8 kDa), puis ces derniers sont immergés dans 200 mL de PBS. Chaque solution (J2, J4, J6 et J8) subit 4 lavages avec 15 200 mL de PBS pendant 2 jours. Pour chaque échantillon J2, J4, J6 et J8, on prélève respectivement au bout de 2, 4, 6 et 8 jours, 2 x 200 µL de suspension de capsules. Les 2 prélèvements subissent un traitement similaire à celui décrit ci-dessus pour doser la molécule incorporée dans les capsules. L'analyse de la quantité de Nile Red libérée par les capsules (HA20C10/QCHI-4)5 en 20 fonction du temps met en évidence une libération lente sur plusieurs jours et ce, bien que le milieu aqueux environnant soit changé deux fois par jour. La figure 5 représente la diminution de l'intensité de fluorescence (en %) en fonction du temps (jours) des capsules (HA20C10/QCHI-4)5 traduisant la libération du Nile Red. Ceci montre une affinité élevée de la molécule hydrophobe vis-à-vis de la paroi 25 multicouche. Cela démontre le potentiel de ces systèmes multicouches comme vecteur de PA actifs hydrophobes.

Exemple 5 : Inclusion de principes actifs Paclitaxel et Saquinavir Des principes actifs hydrophobes ont été incorporés dans des capsules et/ou des films à 30 base de HA greffé hydrophobe et de QCHI tels que décrit en exemple 3 : - un agent anti-cancéreux puissant: le paclitaxel (nom commercial pour le Taxol) qui présente une activité prouvée contre de nombreuses tumeurs solides humaines et qui est utilisé pour le traitement de cancers du sein, de l'ovaire et du poumon, et 22 - un puissant agent anti-VIH : le Saquinavir, inhibiteur de protéase VIH.

Exemple 5a : Paclitaxel dans des films plans Pour étudier l'incorporation dans les films du taxol et son relargage, un mélange de 5 paclitaxel et de paclitaxel marqués par un fluorophore (Oregon Green) a été utilisé. La concentration en paclitaxel Oregon Green a été fixée à 1 µM. Les films ont été fabriqués directement au sein de micropuits (Plaque 96 puits Nunc) afin de lire leur absorbance à 230 nm et leur fluorescence au lecteur microplaque (TECAN Infinite 1000, TECAN, Austria) (longueur d'onde d'excitation 496 + 10 et d'émission 524 10 + 10 nm). Ce mélange (Taxol et Taxol-Oregon Green), pré-compléxé aux HA greffé hydrophobe, a été inséré dans des films multicouches selon l'invention, à base de QCHI et de HA greffé hydrophobe, tels que présenté en Figure 6. Cette Figure 6 représente la variation de la fluorescence (unité arbitraire) du Taxol-Oregon 15 Green (A) en fonction du nombre de paires de couches déposées et (B) de la concentration initiale en Taxol (LM) pour différents couples HA greffé hydrophobe /QCHI Ainsi, pour une concentration initiale fixée en Taxol (allant de 1 à 10 µM), la variation de la quantité de Taxol insérée dépend en partie du nombre de paires de couches déposées (Figure 6A). 20 De plus, pour un nombre de couches données, la quantité de Taxol insérée dépend à la fois de la concentration initiale en Taxol lors de la pré-complexation et des taux de greffage des couples des polysaccharides (Figure 6B). L'efficacité maximale est obtenue pour le HA greffé hydrophobe le plus substitué (HA20C10) en combinaison avec le QCHI-5 le plus substitué. Il est à noter que le dérivé 25 QCHI-4 possède des propriétés très proches, alors que le HAlOC10 possède une capacité d'encapsulation inférieure à celle du HA20C10.

Exemple 5b : Saquinavir dans des films plans Le Saquinavir, pré-compléxé aux HA greffé hydrophobe, a été inséré dans des films 30 multicouches selon l'invention, à base de QCHI-5/HA greffé hydrophobe et PLL/HA greffé hydrophobe, tels que présentés en Figure 7. La concentration initiale fixée en saquinavir est de 10, 50 ou 100 µM.

L'insertion du Saquinavir dans les films plans, construits dans des plaques 96 puits, a été quantifiée en mesurant la fluorescence des films, due à l'incorporation du Saquinavir. En effet, celui-ci possède des propriétés de fluorescence intrinsèque. La fluorescence des films a été donc été mesurée en fonction du nombre de couches déposées, pour les films formés à partir de PLL ou de QCHI-5 (Figure 7). Les longueurs d'onde excitation et d'émission pour le Saquinavir sont respectivement : 239 ± 10 nm et 362 ± 10 nm. La Figure 7 représente la variation de la fluorescence (unité arbitraire) du Saquinavir en fonction du nombre de paires de couches déposées pour des films à base de QCHI-5/HA greffé hydrophobe et PLL/HA greffé hydrophobe.

Exemple 5c : Saquinavir dans des microcapsules Du Saquinavir a été également incorporé dans des microcapsules et la quantité de drogue hydrophobe a été estimée en réalisant des mesures d'absorbance à l'aide d'un lecteur microplaque (TECAN) (longueur d'onde : 239 nm) après extraction du Saquinavir des capsules avec du méthanol. On procède selon le protocole décrit dans l'exemple 4. La concentration en Saquinavir est déterminée en utilisant une courbe étalon préalablement établie à partir de solutions de concentrations connues en Saquinavir dans le méthanol. Les quantités de Saquinavir, exprimées par capsule, sont présentées dans le tableau 1. Ce tableau 1 présente les quantités moyennes de Saquinavir incorporés par capsule de (HA20C10/QCHI-4)5 et (HA20C10/PLL)4, telles que décrites en exemple 2.

Tableau 1 0,085 0,064 uantité insérée par capsules (pg/capsule) Quantité insérée par 0,127 10-3 0,095 x 10-3 capsules (pmoFcapsule) Concentration dans une 15,38 12 capsule (mM) Ces données permettent de démontrer l'excellente capacité d'incorporation des capsules en 25 Saquinavir.

Claims (16)

1. REVENDICATIONS1. Matériau comprenant, voire consistant en : - au moins un polysaccharide acide choisi parmi les poly(galacturonate)s, l'héparine et ses dérivés, l'acide hyaluronique et ses dérivés, les chondroïtine sulfates, la pectine et ses dérivés, les polysaccharides neutres, tels que la cellulose ou le dextrane et leurs dérivés, modifiés par des groupements carboxylates et/ou sulfates, comprenant un motif hydrophobe à une teneur molaire d'au moins 2 % par rapport à l'unité de répétition, - au moins un biopolymére cationique choisi parmi les polyaminoacides et les polysaccharides porteurs de groupements cationiques, choisi parmi les groupements mono-, di-, tri-alkylamino ou tétraalkylammonium, ce biopolymére cationique comprenant une teneur molaire en groupement cationique d'au moins 25 % par rapport à l'unité de répétition, - et éventuellement au moins une substance active, notamment hydrophobe.
2. 2. Matériau selon la revendication 1, caractérisé en ce que le polysaccharide acide comprend, voire consiste en acide hyaluronique et ses dérivés.
3. 3. Matériau selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le motif hydrophobe est greffé sur une fonction acide carboxylique via une fonction amide, ester ou - CONHNHCO-, dite « carbonylhydrazide ».
4. 4. Matériau selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le motif hydrophobe greffé sur une fonction acide carboxylique est du type - CONHNHCORI(CONHNH)mR2 où o RI représente un alkyléne ou un polyéther, comme du poly(éthyléne glycol), comprenant de 1 à 17 atomes de carbones, un alcényle ou un alcynyle comprenant de 2 à 17 atomes de carbones, un aryle comprenant de 6 à 17 atomes de carbone, o m représentant 0 ou 1, o Rz représentant H, un alkyle ou un polyéther comprenant de 6 à 17 atomes de carbones, un alcényle ou un alcynyle comprenant de 6 à 17 atomes de carbones, un aryle ou un arylalkyle comprenant de 6 à 17 atomes de carbone.
5. 5. Matériau selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le motif hydrophobe est du type -CONHNHCORI(CONHNH)mR2 où o RI représente -(CH2)X avec x représentant un nombre entier allant de 1 à 17, en particulier de 2 à 10, voire de 3 à 8, et en particulier de 4, o m représente 1, o Rz représentant H ou un groupement alkyléne du type -(CH2)y-CH3 avec y représentant un nombre entier allant de 6 à 16, en particulier de 7 à 14, voire de 8 à 14, et en particulier de 9.
6. 6. Matériau selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que le taux de greffage molaire du motif hydrophobe va de 5 à 40 %, notamment de 10 à 30 %, voire d'environ 20 % par rapport à l'unité de répétition.
7. 7. Matériau selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que le groupement cationique est greffé via l'ouverture d'un époxyde de Formule A suivante Formule A dans laquelle - Ra, Rb, Rc, identiques ou différents, représentent H ou un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, et en particulier Ra, Rb, R,, identiques ou différents, 20 représentent un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, - m' est un entier allant de 1 à 6, en particulier de 1 à 4, voire est 1 ou 2.
8. 8. Matériau selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que le biopolymére présente un taux de greffage molaire d'au moins 35 %, notamment d'au moins 50 % par rapport au nombre d'unités de répétition. 25
9. 9. Matériau selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que le biopolymére cationique comprend, voire consiste en, du chitosane porteur de groupement cationique.
10. 10. Matériau selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que le biopolymére cationique comprend, voire consiste en, du chitosane de Formule (II) 30 suivante :15Formule (II) dans laquelle - n' est un nombre entier allant de 150 à 3 000, notamment de 200 à 2 5550, et en particulier de 200 à 2 000, - R'1 et R'z représentent, indépendamment l'un de l'autre, H, ou -R'4NR'aR'bR'c, avec - R'4 représentant un espaceur du type (CH2)x, ou CHOH(CH2)X, et x' représentant un nombre entier allant de 1 à 6, en particulier représentant 1 ou 2, - R'a, R'b, R'c, identiques ou différents, représentant H ou un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, et en particulier R'a, R'b, R'c, identiques ou différents, représentent un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, voire R'a, R'b, R'c, identiques ou différents, représentent un alkyl comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, et en particulier le méthyle, l'éthyle, le propyle ou le butyle, - R'3 représente H, un groupement acétyle ou -R"SNR"aR"bR"c, avec - R"5 représentant un espaceur du type (CH2)x,, ou CHOH(CH2)X>> et x" représentant un nombre entier allant de 1 à 6, en particulier représentant 1 ou 2, - R"a, R"b, R"c, identiques ou différents, représentant H ou un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, et en particulier R"a, R"b, R"c, identiques ou différents, représentent un alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, voire R"a, R"b, R"c, identiques ou différents, représentent un alkyl comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, et en particulier le méthyle, l'éthyle, le propyle ou le butyle, en particulier avec une teneur molaire de greffage d'au moins 25 % par rapport à l'unité de répétition.
11. 11. Matériau selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que le biopolymére cationique comprend, voire consiste en, de la poly(L-lysine), en particulier ledit matériau présente une réticulation entre le polysaccharide acide et le polyaminoacide cationique, la réticulation peut notamment être effectuée via une liaison de type peptidique.
12. 12. Matériau selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que la substance active est choisie parmi les anti-viraux, les agents anti-cancéreux, les antibiotiques, les anti-mycosiques, les adjuvants pour vaccins.
13. 13. Matériau selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé en ce qu'il se 5 présente sous forme de capsule ou de film.
14. 14. Procédé de préparation d'un matériau tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 13 comprenant des étapes de dépôt couche-par-couche, et en particulier par alternance de couches, de polysaccharide acide et de biopolymére cationique. 10
15. 15. Composition, notamment cosmétique, pharmaceutique, alimentaire, par exemple de type alicament, comprenant un matériau tel que selon l'une quelconque des revendications 1 à 13.
16. 16. Dispositif, notamment de type implant médical ou biomatériau implantable, comprenant un matériau tel que selon l'une quelconque des revendications 1 à 13.