FR2836474A1

FR2836474A1 - Composes, compositions et methode pour le transport des molecules de cyclosporine a travers la barriere hemato-encephalique

Info

Publication number: FR2836474A1
Application number: FR0202299A
Authority: FR
Inventors: Patrick Mouchet; Anthony R Rees; Eskil Elmer; Marcus F Keep
Original assignee: Synt EM SA; Maas Biolab LLC
Current assignee: Synt EM SA; Maas Biolab LLC
Priority date: 2002-02-22
Filing date: 2002-02-22
Publication date: 2003-08-29
Anticipated expiration: 2022-02-22
Also published as: WO2003070755A2; FR2836474B1; AU2003229835A1; WO2003070755A3; AU2003229835A8

Abstract

La présente invention concerne un composé qui comprend au moins une molécule de cyclosporine et au moins un vecteur peptidique capable de transporter ladite molécule à travers la barrière hémato-encéphalique. L'invention concerne aussi l'utilisation dudit composé pour la préparation de compositions pharmaceutiques destinées notamment au traitement ou à la prévention de maladie du système nerveux central.

Description

COMPOSES, COMPOSITIONS ET METHODE POUR LE TRANSPORT DES MOLECULES DE CYCLOSPORINE A TRAVERS LA BARRIERE HEMATO-ENCEPHALIQUE
DOMAINE DE L'INVENTION
La présente invention se rapporte à l'utilisation de peptides vecteurs pour le transport des molécules de Cyclosporine à travers la barrière hématoencéphalique (BHE) ainsi qu'à l'utilisation desdits composés pour la préparation de médicaments utiles pour les maladies cérébrales comprenant les traumatismes cérébraux, les dommages de la moelle épinière, l'accident vasculaire cérébral, et les maladies neurodégénératives incluant la maladie d'Alzheimer, de Parkinson, de Huntington et de Charcot (sclérose amyotrophique latérale) aussi bien que les scléroses multiples.

LA CYCLOSPORINE.

La cyclosporine A est un médicament immunosuppresseur. Le traitement médical décrit ci-dessous a déjà été décrit, dans le Brevet Américain No. 4,117, 118 et de nombreux autres, qui relatent sa production, sa formulation et ses propriétés immunosuppressives.

La cyclosporine A est produite par le champignon Tolypocladium Inflatum Gams. C'est un polyaminoacide cyclique, constitué de 11 acides aminés. L'un de ces acides aminés, un ss-hydroxyaminoacide appelé buténylméthyl-thréonine (MeBmt), existe uniquement dans la cyclosporine A, . Le poids moléculaire est de 1202.6 et la composition chimique est C62HlllNllOl2.

La molécule est hautement lipophile, et donc peu soluble dans l'eau. Le médicament est transporté dans le sang pour 58% à l'intérieur des hématies, pour approximativement 10-20% dans les leucocytes, et 33% se lie aux protéines plasmatiques. Dans le plasma la cyclosporine A est liée aux lipoprotéines de haut poids moléculaire (HDL), de faible poids moléculaire (LDL), très faible poids moléculaire (VHDL) et une petite fraction à l'albumine. Une très petite fraction est libre dans le plasma.

La molécule est métabolisée, principalement dans le foie par le cytochrome P450. Il existe au moins 40 métabolites connus de la cyclosporine A, avec diverses modifications chimiques, comme des hydroxylations, des déméthylations des oxydations et des formations d'époxide.

Il existe de nombreux variants de la cyclosporine A, différant par exemple par un acide aminé, qui ont des propriétés pharmacologiques similaires. Normalement, la cyclosporine A ainsi que la plupart de ses métabolites ne passent pas la barrière hémato-encéphalique (Begley et al., 1990 ; Lensmeyer et al., 1991). Quand le transporteur glycoprotéine-P est inactif ou que la barrière hématoencéphalique est rompue, la cyclosporine peut passer à travers et entrer en contact avec les neurones. Plusieurs analogues de la cyclosporine peuvent facilement traverser la barrière hémato-encéphalique. Plusieurs analogues de la cyclosporine ne sont pas immunosuppresseurs. Il y a un sous-ensemble d'analogues de la cyclosporine qui peuvent à la fois passer facilement la barrière hémato-encéphalique et qui ne sont pas immunosuppresseurs.

Le transporteur glycoprotéine-P est apparenté au MDR ou résistance multi-drogues . On trouve la protéine MDR dans diverses cellules tumorales et elle est responsable du transport actif vers l'extérieur d'autres médicaments chimiothérapeutiques efficaces. La présence du MDR confère aux cellules tumorales la résistance à ces médicaments chimiothérapeutiques et empêche l'effet antitumoral recherché. La cyclosporine est un inhibiteur du MDR, et permet aux molécules thérapeutiques de pénétrer dans les cellules tumorales, provoquant un meilleur effet anti-tumoral.

La famille des cyclosporines comprend les cyclosporines A à Z, incluant la cyclosporine C, la cyclosporine D, la cyclosporine G et la cyclosporine 0. Certains des métabolites connus de la cyclosporine A comprennent : (selon la nomenclature Hawk's Cay ) AMI, AM9, AMlc, AM4N, AM19, AMlc9, AMlc4N9, AM1A, AM1A4N, AMlAc, AM1AL, AMlld, AM69, AM4N9, AM14N, AM14N9, AM4N69, AM99N, Dihydro-CsA, Dihydro-CsC, Dihydro-CsD, Dihydro-CsG, M17, AMlc-GLC, conjugué sulphate de cyclosporine, BHlla, BH15a, B, G, E, 0 (et venant se chevaucher avec la nomenclature de Hawk's ci-dessus, selon la nomenclature de Maurer) Ml, M2, M3, M4, M5, M6, M7, M8, M9, M10, Mil, M12, M13, M14, M15, M16, M17, M18, M19, M20, M21, M22, M23, M24, M25, M26, MUNDFl and MeBMT. Certains métabolites de la cyclosporine G comprennent GMl, GM9, GM4N, GMlc, GMlc9, et GM19. Les cyclosporines modifiées incluent les analogues d'acides aminés modifiés en C-9, les analogues d'acides aminés modifiés en position 8, les analogues modifiés en position 6 contenant des résidus MeAla ou MeAbu, et SDZ-209-313,

SDZ-205-549, SDZ-033-243, et SDZ-PCS-833. D'autres cyclosporines modifiées comprennent des variants partiellement et complètement deutérés ou tritiés, de même que d'autres isotopes substitués comprennant le carbone, l'azote et l'oxygène. On inclut des cyclosporines rendues solubles par l'addition de phosphate ou d'autres groupes hydrophiles.

On désignera ci-après par les termes cyclosporine ou cyclosporines cette famille entière de cyclosporines comme décrite ci-dessus, incluant la cyclosporine A, tous les dérivés de cyclosporine, variants, variants en acides aminés, isotopes, métabolites, comprennant des dérivés mono-, di-et trihydroxylés, Ndéméthylés, aldéhydes, carboxyles, conjugués, sulphates, glucuronides, phosphates, cyclisations intramoléculaire et les variants ne comportant pas de structure cyclique tout comme les peptides plus courts et les acides aminés et leurs dérivés et sels avec ou sans propriétés immunosuppressives capables ou non de traverser la barrière hémato-encéphalique.

Les cyclosporines sont hautement lipophiles et généralement peu solubles dans l'eau. Elles nécessitent en général un émulsifiant, comme le cremophore ou le Labrafil pour rester en phase aqueuse. Des réactions anaphylactiques et neurotoxiques ont été décrites après l'emploi de ces émulsifiants (notamment le cremophore, une huile de ricin éthylée). Le besoin d'une formulation améliorée qui aurait une meilleure solubilité dans l'eau, traverserait mieux la barrière hémato-encéphalique et ne serait ni anaphylactique ni neurotoxique est important.

LES MECANISMES D'ACTION DE LA CYCLOSPORINE EN TANT QUE NEUROPROTECTEUR.

La cyclosporine s'est avérée être la molécule neuroprotectrice la plus efficace jamais trouvée pour un grand nombre de maladies neurologiques, comme l'indique le brevet américain 5,972. 924 et de nombreux articles scientifiques (Borlongan et al., 2000 ; Friberg et al., 1998 ; Keep et al., 2001 ; Leventhal et al., 2000 ; Li et al., 1997 ; Okonkwo et al., 1999 ; Okonkwo and Povlishock, 1999 ; Petersen et al., 2000 ; Scheff and Sullivan, 1999 ; Sullivan et al., 2000a ; Sullivan et al., 2000b ; Sullivan et al., 1999 ; Uchino et al., 1998 ; Uchino et al., 1995 ; Yoshimoto and Siesjö, 1999). La cyclosporine est aussi utile dans le traitement de tumeurs cérébrales en tant que raidioprotecteur neuronal sélectif autorisant des taux croissants de traitement et amenuisant les troubles psychologiques induits par les radiations, comme indiqué dans la demande de brevet PCT/US98/20040. On a suggéré que la cyclosporine limitait les dégâts cérébraux par de multiples mécanismes importants. La cyclosporine se lie et inhibe la cyclophiline, une peptidyl-prolyl isomérase qui est impliquée dans le repliement normal et anormal des protéines, et qui apparaît être impliquée dans la neuroprotection et la neurodégénération. Le complexe cyclosporine-cyclophiline inhibe à la fois l'activité phosphatase (Liu et al., 1991) de la calcineurine (une phosphatase calcium-dépendante des radicaux sérine/thréonine des protéines bien connue), et prévient l'activation de cascades enzymatiques calcium-dépendantes potentiellement neurotoxiques. L'inhibition de la

calcineurine bloque aussi l'oxyde nitrique synthase et la production d'oxyde nitrique, réduisant les radicaux libres intracellulaires destructeurs. La cyclosporine a aussi pour effet de stabiliser les mitochondries. En outre, la cyclosporine empêche la perte du gradient de protons mitochondrial, préservant ainsi la production d'énergie vitale (ATP). De plus, la cyclosporine empêche l'apparition du phénomène de transition de perméabilité mitochondriale prévenant le relargage de protéines telles que l'Apoptosis Inducing Factor (AIF), le cytochrome c et la procaspase 9 qui, lorsqu'elle est présente dans le cytosol, induit la cascade des caspases et des autres voies léthales menant à la mort cellulaire neuronale (Bernardi, 1996 ; Bernard et al., 1998). Enfin, la cyclosporine est neuroprotectrice grâce à une influence sur la transcription des gènes des cellules nerveuses, par exemple en affectant la transcription du gène brain-derived neurotrophic factor (BDNF) (Miyata et al., 2001). Cette combinaison d'effets neuronaux confère à la cyclosporine sa puissante action neuroprotectrice dans un grand nombre de maladies neurologiques pouvant inclure de manière non exhaustive les dégâts cérébraux issus d'un traumatisme, d'une commotion, d'une infection, de radiations et de maladies neurodégénératives, comme décrit ci-dessous.

CYCLOSPORINE ET MALADIES NEURODEGENERATIVES.

La cyclosporine est la molécule neuroprotectrice la plus efficace connue, même si elle est administrée à posteriori du traumatisme cérébral. La cyclosporine, via les voies décrites ci-dessus, prévient la

mort neuronale induite par les dommages issus d'un traumatisme, d'une ischémie ou d'un déséquilibre métabolique, des toxines ou une neurodégénérescence. Les conditions dans lesquelles la cyclosporine est efficace sont inventoriées ci-dessous.

- Les traumatismes cérébraux et médulaires, comprenant les interventions neurochirurgicales.

Les traumatismes cérébraux comprennent les dommages causés par des phénomènes d'accélération ou de décélération, de section d'un axone, et les dommages à la fois visibles ou non visibles causés au parenchyme cérébral et aux vaisseaux. Le dégât initial est suivi par une cascade d'événements qui étendent les dommages cérébraux jours après jours. Les traumatismes cérébraux peuvent avoir pour conséquence une commotion, une amnésie, une léthargie, des changements de la personnalité, une perte des fonctions sensorimotrice, cognitive, mnésique et des déficits de concentration, le coma ou la mort.

Un traumatisme cérébral ou médulaire peut résulter d'un traumatisme par contusion ou par perforation comprennant les accidents de la route, la pratique de sports, les chutes, un coup, un projectile ou une balle, et de différentes sources d'énergie incluant l'électricité, la chaleur et l'onde de choc. Le traumatisme dû à la naissance par forceps peut causer des contusions cérébrales et l'élongation du plexus brachial.

Les procédés neurochirurgicaux ou la chirurgie cérébrale endommagent le cerveau sain par la pression, la section, le traumatisme direct, l'axotomie et l'ischémie. Certains procédés neurochirurgicaux incluent une

craniotomie et tréphine, ainsi que les cavités percées à travers le crâne dans le but d'effectuer une lobectomie, une résection du tissus cérébral, une biopsie, une résection tumorale, le clippage d'un anévrisme, le retrait d'une malformation vasculaire, des reconstructions et des traumatismes. Les implants neurochirurgicaux cérébraux incluent des shunts ventriculaires ou cérébrospinaux et des appareils d'accès à des pompes ou des réservoirs, des dispositifs de pression subarachnoïde ou intraparenchymateuse intracérébrale, des dispositifs de dialyse cérébrale de température ou d'oxygène, des électrodes profondes, des grilles corticales, des électrodes cyberneurales, des puces électroniques ou des interfaces ou des implants d'ordinateur, des moniteurs de scalp foetal, des stimulateurs profonds du cerveau et des transplantations intracérébrales de neurones et de neurones artificiels ou de facteurs de production cellulaire ou encore de vecteurs viraux. Les implants et les prothèses comprennent la rétine, le nerf optique, le tronc cérébral, le cortex thalamique ou occipital, des implants cochléaire, vestibulaires, du nerf auditif, du tronc cérébral, et des implants du lobe thalamique ou temporal, et des implants ou des grilles corticales et des appareils prosthétiques, des systèmes spinaux et autres systèmes sensorimoteurs.

La neurochirurgie et les chirurgies orthopédique spinale peuvent endommager la moelle épinière par compression, pression, élongation, lacération, contusion, section, axotomie, hémorragie, et ischémie. Les procédés incluent la discectomie, la fusion, la laminectomie, l'instrumentation et la reconstruction

cervicale, thoracique ou lombaire, pour les hernies discales, les sténoses, les tumeurs, les infections, les malformations vasculaires, les fractures et les dislocations osseuses, ainsi que les malformations, la croissance et la scoliose des os et des tissus mous. Les implants spinaux incluent les cathéters, les pompes, les stimulateurs de la moelle épinière et les appareils cyberneuraux, tout comme les greffes biologiques incluant les cellules foetales, les cellules souches et les cellules manipulées ou les vecteurs viraux.

- Accident vasculaire cérébral.

L'accident vasculaire cérébral inclut l'accident vasculaire cérébral ischémique focal, l'accident vasculaire cérébral ischémique global et l'accident vasculaire cérébral hémorragique. L'embolie cérébrale bloque la totalité ou la quasi-totalité du flux sanguin d'une région spécifique du cerveau. La perte d'oxygène et de nutriments cause rapidement aux neurones la perte de leur hémostase, et ces derniers meurent. Les cellules se trouvant dans la zone de pénombre autour des de la zone d'embolie, et les cellules re-perfusées dans la pénombre ischémique et le noyau, peuvent être sauvées par une molécule neuroprotectrice.

L'accident vasculaire cérébral ischémique global advient durant une période de réduction de l'apport de sang ou d'oxygène à la totalité du cerveau. Certaines cellules sont plus propices à l'ischémie globale, plus particulièrement les neurones de l'hippocampe associés à la mémoire et certains neurones corticaux.

L'accident vasculaire cérébral hémorragique est une infiltration de sang dans le cerveau, ou des espaces de fluide cérébro-spinal provenant des artères, des veines, des malformations de type anévrisme ou vasculaire. Le dommage est causé par une pression directe sur le cerveau, causant une lésion cérébrale locale et un traumatisme, une ischémie, le spasme d'un vaisseau et la fabrication de produits toxiques de décomposition de sang.

L'accident vasculaire cérébral embolique peut être spontané, peut être d'origine cardiaque, septique, athéromateux, tumoral, avoir comme source les lipides, la moelle et l'air. On sait que l'embolie provient de procédés variables incluant la déviation d'artère coronaire, l'endarterectomie carotidienne, l'angiographie, l'angioplastie coronarienne, les procédés coronariens, carotidiens et vertébraux incluant le stenting.

L'accident vasculaire cérébral global est une ischémie de la totalité du cerveau et peut être issue d'un arrêt cardiaque, d'une noyade, d'une asphyxie, d'un choc, d'une hypotension, du spasme d'un vaisseau, d'une arythmie, d'une dissociation électromécanique cardiaque, d'une crise d'asthme, d'une hypotension causée par un acte de chirurgie, d'une perte de sang, d'une anaphylaxie et d'une asphyxie néonatale.

Les accidents vasculaires cérébraux hémorragiques incluent une hémorragie hypertensive, une angiopathie congophile, une hémorragie intracérébroventriculaire de prématurité, une rupture d'anévrisme et le spasme de vaisseau et les malformations artérioveineuses et autres malformations vasculaires. Ceci

inclut aussi la thrombose du sinus veineux ou une thrombose de la veine de drainage cortical causant un infarctus veineux, un choc thermique et un traumatisme dû à la pression ou une maladie due à la décompression et à l'augmentation de la pression intracrânienne.

- Les désordres métaboliques incluant les encéphalopathies hépatique et urémique.

Les désordres métaboliques peuvent troubler la fonction et la structure cérébrales de manière temporaire ou permanente. Ceux-ci incluent les états épileptiques, le coma diabétique (hypoglycémique ou hyperosmolaire), l'éclampsie, la pré-éclampsie, l'encéphalopathie hépatique, l'encéphalopathie urémique et le kernicerus ou l'ictère du nouveau-né.

- Toxines.

Les neurotoxines et les toxines endommagent ou désorganisent soit des populations de neurones spécifiques, ou le cerveau entier. Celles-ci comprennent les aminoglycosides, les hydrocarbures chlorés, les organophosphates, les insecticides, les herbicides, le paraquat, l'Agent Orange, les gaz innervant, le MPTP, la roténone, le cyanide, le monoxyde de carbone, le méthanol, l'éthanol, le mercure, l'arsenic et les agents chimiothérapeutiques incluant le méthotréxate, la mercaptopurine, le fluoroacil, les nitrosurées, l'hydroxyurée, le cisplatinum, le carboplatinum, la daunorubicine, la doxorubicine, l'ectoposide, la vincristine, la vinblastine, le taxol et ses dérivés, le cyclophosphamide, et les corticostéroïdes.

- Virus, bactéries, prions et agents infectieux.

Les virus, les bactéries, les prions et les agents infectieux peuvent causer des dommages légers ou sévères au cerveau entier, ou à des parties spécifiques de ce dernier. Les exemples en sont herpes encephalitis qui affecte surtout les lobes temporaux et le virus de la poliomyélite qui affecte seulement les neurones moteurs spinaux. D'autres agents infectieux qui endommagent ou détruisent le cerveau sont herpes zoster, le virus rabbique, le VIH (causant la démence du SIDA, la myélopathie du SIDA, la neuropathie du SIDA, la paraparésie tropicale), les maladies à prion comme la maladie de Creutzfelt-Jacob typique et atypique, le Kuru, la scrapie et l'encéphalopathie bovine spongiforme. Pour exemples supplémentaires nous avons les encéphalies virales et les méningites telles les méningites Equine, Japonaise, Dengue, Nile, la rougeole et la leukoencéphalopathie postvaccinatoire progressive multifocale (virus JC) et la panencéphalite subaiguë sclérosante (virus de réactivation de la rougeole). D'autres agents infectieux affectant le cerveau incluent la malaria, la maladie de Lyme et la neurosyphilis.

- Irradiation du cerveau.

Les radiations ionisantes produisent des radicaux libres et endommagent l'ADN de manière directe.

Celles-ci tuent aussi les cellules, dont les neurones. Les cellules à division rapide, telles que les cellules tumorales, sont plus vulnérables, mais le taux de radiation

qui peut être toléré par le cerveau ou la colonne vertébrale est limité par l'effet létal sur les neurones.

Les radiations médicales sont administrées via un accélérateur linéaire, des résidus de cobalt ou un implant d'isotopes radioactifs. Les radiations ou les faisceaux orientés de radiations agissant sur la totalité ou partie du cerveau détruisent les neurones causant la démence, et induisent la nécrose du cerveau sain. La protection des neurones sains permet d'infliger de plus fortes radiations aux tumeurs ou aux malformations vasculaires, ce qui a pour résultat un meilleur pourcentage de guérison, et réduit les complications dans le cerveau sain.

Des radiations d'origines variées, incluant les réacteurs nucléaires, le désassemblage d'appareils nucléaire, provenant de l'exposition directe à un rayonnement nucléaire, ou de résidus contaminés peuvent tuer les neurones et endommager le cerveau.

- Indications chroniques : les maladies neurodégénératives.

On pense que dans beaucoup de maladies neurodégénératives, la mort cellulaire neuronale est induite par des protéines toxiques anormales telles que l'amyloïde, ou tau, la preseniline, l'alpha-synucleine, le huntingtine ou le SOD anormal.

Ces protéines anormales détruisent des populations de neurones sélectionnées en induisant un stress métabolique et la production de radicaux libres. La mort cellulaire par neurodégénérescence advient via la voie mitochondriale finale commune. La cyclosporine empêche

cette voie de mort mitochondriale finale commune et prévient la mort neuronale.

Les maladies neurodégénératives incluent la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la maladie de Huntington, le syndrome de Down, la maladie de Charcot, l'atrophie spinale musculaire, la paralysie bulbaire, la schizophrénie, le syndrome de Tourette, l'atrophie cérébrale corticale diffuse, la démence à corps de Lewy, la démence mésolimbocorticale, la dégénérescence thalamique, la maladie de Pick, l'atrophie multisystème, la dégénérescence cortico-striato-spinale, le syndrome de ShyDrager, le syndrome de Richardson-Steele-Olzewski, le complexe Prakinson-SLA-Démence de Guam, le syndrome postpolio, l'atrophie olivocérébelleuse, l'ataxie de Friedreich, le syndrome paranéoplastique, l'encéphalopathie traumatique chronique (Démence pugilistique), la maladie de Wilson, la maladie de Menke, la gangliosidose Tay-Sachs et la maladie de Krabbe, la neuropathie périphérique, la neuropathie diabétique et le vieillissement. Les maladies neurologiques chroniques suspectées être de nature immune comprennent les scléroses multiples, le syndrome de Guillain-Barré, et le lupus érythémateux.

- Vision.

Les structures visuelles font parties du cerveau. Celles-ci comprennent la rétine, le nerf optique, le chiasma et le tractus, mais aussi les projections au tronc cérébral, le thalamus et le cortex occipital. La rétine et les neurones du nerf optique sont vulnérables aux traumatismes, à l'ischémie, à la pression, aux radiations,

aux photons, aux troubles métaboliques et à la neurodégénérescence. Sous certaines conditions incluant le glaucome, l'ischémie du nerf optique, la dégénérescence maculaire, les rétinites, les neurites optiques, le détachement rétinien, l'hémorragie rétinienne, la cécité provoquée par le rayonnement, la cécité due au méthanol, les traumatismes traumatiques et l'augmentation de pression intracrâniale.

LA BARRIERE HEMATO-ENCEPHALIQUE.

La barrière hémato-encéphalique est formée de cellules endothéliales qui, de différentes manières, forment un obstacle aux molécules qui tentent de les traverser ; tout d'abord, elles forment une barrière physique consistant en des jonctions serrées connectées les unes aux autres et prévenant tout passage via la voie paracellulaire, tout du moins pendant que l'activité d'endocytose sur place est faible. Tout cela contribue à limiter fortement le passage de molécules plasmatiques vers l'espace cérébral extracellulaire.

De plus, il existe des systèmes de transport ATP-dépendant à l'intérieur de l'endothélium capillaire cérébral qui exclut activement du cerveau les médicaments lipophiles telle que la cyclosporine. En particulier, la glycoprotéine-P, un système de transport, a été identifié comme étant un exportateur actif de la cyclosporine hors de l'endothélium capillaire cérébral, et représente un composé important de blocage de la barrière hémato-encéphalique en ce qui concerne l'entrée de la cyclosporine dans le cerveau (Sakata et al., 1994 ; Tsuji et al. ; 1993).

Ainsi, dans le cadre de ses travaux de recherche, la Demanderesse a démontré que des vecteurs peptidiques, par exemple des peptides linéaires dérivés de peptides naturels tels que la Portégrine et la Tachyplésine (Kokryakov et al., 1993 ; Tamura et al., 1993) transportent des molécules actives à travers la barrière hématoencéphalique. La Protégrine et la Tachyplésine sont des peptides naturels avec une structure de type épingle à cheveux formée par des ponts disulfure. Ces ponts jouent un rôle important dans l'activité cytolytique observée dans les cellules humaines. La réduction irréversible de ces ponts rend possible le fait d'obtenir des peptides linéaires, non cytotoxiques, capables de traverser rapidement les membranes des cellules de mammifères par des moyens qui ne nécessitent pas d'utiliser un récepteur membranaire (Temsamani et al., 2000 ; 2001 ; Rousselle et al., 2000 ; 2001 a & b ; Mazel et al., 2001).

Le travail et ses résultats concernant ces peptides linéaires et leur utilisation en tant que peptide vecteur pour la passage de molécules actives à travers la barrière hémato-encéphalique ont été décrits dans la demande de brevet français No 98/15074 déposée le 30 Novembre 1998 et la demande de brevet français No 99/02938 déposée le 26 Novembre 1999.

DESCRIPTION DE L'INVENTION
La présente invention fournit des méthodes pour le transport de la cyclosporine à travers la barrière hémato-encéphalique (BHE) utilisant pour ce faire des vecteurs peptidiques. Ainsi, l'invention se rapporte tout

d'abord à des composés qui comprennent au moins une molécule de cyclosporine et au moins un vecteur peptidique capable de transporter lesdites molécules à travers la barrière hémato-encéphalique.

Les molécules de cyclosporine, et plus particulièrement de cyclosporine A, sont décrites cidessus. Par l'intermédiaire d'un exemple non restrictif concernant le médicament, l'invention considère la cyclosporine et ses dérivés comme ayant un effet biologique similaire mais qui, tels quels, ne permettent pas de traverser la barrière hémato-encéphalique.

Suivant un mode de réalisation préféré, le vecteur peptidique capable de transporter la molécule de cyclosporine à travers la barrière hémato-encéphalique est un peptide linéaire dérivé des familles Protégrine et Tachyplésine.

Par peptide dérivé de la famille Protégrine on entend tout peptide correspondant à la formule I suivante :
BX (X or B) BXXXXBBBXXXXXXB (I) et par peptide dérivé de la famille Tachyplésine on entend tout peptide correspondant à la formule II suivante :
BXXXBXXXBXXXXBBXB (II), dans lesquelles : - les groupes B, identiques ou différents, représentent un résidu d'un acide aminé dont la chaîne latérale porte un groupement basique, et - les groupes X, identiques ou différents, représentent un résidu d'un acide aminé aliphatique ou aromatique,

ou lesdits peptides de formule (I) ou (II), dans leur forme retro, formés des acides aminés ayant une configuration D et/ou L, ou un fragment formé d'une séquence d'au moins 5 et préférentiellement 7 acides aminés successifs des peptides ayant la formule (I) ou (II).

Des exemples de B et X sont proposés cidessous :
B est choisi parmi l'arginine, la lysine, l'acide diaminoacétique, l'acide diaminobutirique, l'acide diaminopropionique, l'ornithine.

X est choisi parmi la glycine, l'alanine, la valine, la norleucine, l'isoleucine, la leucine, la cystéine, la**cystéine, la pénicillamine, la méthionine, la sérine, la thréonine, l'asparagine, la glutamine, la phénylalanine, l'histidine, le tryptophane, la tyrosine, la proline, l'Abu, l'acide amino-1-cyclohexane carboxylique, l'Aib, le carboxylic 2-aminotétraline, le 4bromophénylalanine, la tert-Leucine, la 4chlorophénylalanine, la beta-cyclohexylalanine, la 3,4dichlorophénylalanine, la 4-fluorophénylalanine, l'homoleucine, la beta-homoleucine, l'homophényalanine, la 4-methylphénylalanine, la 1-naphtyl-alanine, la 2naphtylalanine, la 4-nitrophenylalanine, la 3nitrotyrosine, la norvaline, la phenylglycin, la 3pyridylalanine, la [2-thienyl]alanine.

La molécule de cyclosporine peut être liée directement ou indirectement au vecteur peptidique en son extrémité N-terminale ou C-terminale ou par l'une de ses chaînes latérales. La molécule de cyclosporine peut être

liée directement ou indirectement au vecteur peptidique par l'intermédiaire d'un groupe fonctionnel qui est présent naturellement ou inséré soit dans le vecteur soit dans la molécule, ou dans les deux.

Les groupes fonctionnels tels que-OH,-SH,- COOH, -C (O) H, -C (O) -, -NH2 peuvent être présents naturellement ou peuvent être insérés dans le vecteur ou dans la molécule de cyclosporine ou dans les deux.

Le couplage entre le vecteur peptidique et la molécule de cyclosporine peut être effectué en utilisant toute méthode de couplage acceptable en tenant compte de la nature chimique à la fois du vecteur et de la cyclosporine.

Ainsi la liaison entre la molécule de cyclosporine et le vecteur peptidique peut être choisie parmi les groupes comprenant une liaison covalente, une liaison hydrophobe, une liaison ionique, un linker qui est clivable ou non clivable en milieu physiologique ou à l'intérieur des cellules.

Si le couplage est conduit de manière indirecte, un linker (agent de liaison) est utilisé avantageusement. Comme exemples non exhaustifs d'agent de liaison pouvant être utilisés entrant dans la portée de notre invention, nous pouvons mentionner les agents bi-ou multifonctionnels contenant un alkyl, aryl, alkylaryl ou des groupes peptidiques, esters, amides, amines, alkyl ou aryl ou alkylaryl aldéhydes ou acides, anhydrides, sulfhydriles ou des groupes carboxyles tels que les dérivés d'acide maleymil benzoique, d'acide maleymil propionique et les dérivés succinimidyles, groupes dérivés de bromure ou chlorure de cyanogène, carbonyldiimidazole, esters,

phosgène, esters de succinimide ou halogénures d'acides sulfoniques.

Un groupe spécifique de linkers comprend la structure ayant les formules suivantes :

- C (0)-CH2-NRi-C (0)-R2-NH-R3-C (0)- (III) - C (0)-CH2-NR1-C (0)-R2-NH-O-R3-C (0)- (IV) - C (0) -CHz-NRI-C (0) -Rz-0-NH-R3-C (0) - (V) - C (0)-CH2-NR-C (0)-R2-NH-NR.-R3-C (0)- (VI) -C (0)-CH2-NR,-C (0)-R2-NR,-NH-R3-C (0)- (Vii - C (O) - Rz-NH-R3-C (0) - (VIII) dans lesquelles :
Ri est H, OH, un alkyl, un aryl, un alkylaryl, un acyl ou un allyl.

R2 et R3 sont des alkyls linéaires (CH2) n ou des alkyls ramifiés (par an alkyl, aryl, alkylaryl, acyl, allyl ou tout autre alkyl ramifié).

R4 est H, un alkyl, un aryl, un alkylaryl, un acyl ou un allyl.

On préfère les linkers impliquant au moins un pont disulfure en raison de leur stabilité dans le plasma après injection du composé. Une fois les composés objet de l'invention passés à travers la barrière hématoencéphalique, ledit pont disulfure est réduit, libérant la molécule de cyclosporine active. Le couplage peut être effectué à n'importe quel site du vecteur peptidique ou de la molécule de cyclosporine.

Ainsi, un mode de réalisation préféré de l'invention concerne un composé consistant en un conjugué comprenant une molécule de cyclosporine, un vecteur peptidique et un linker tel que défini ci-dessus.

Des modes de réalisation additionnels de l'invention fournissent des composés comprenant une molécule de cyclosporine liée à plusieurs vecteurs peptidiques ou à plusieurs molécules de cyclosporine liées à un vecteur peptidique. L'invention mentionne des polymères de tels composés.

L'invention fournit aussi une composition pharmaceutique comprenant au moins un des composés cités ci-dessus.

Un autre sujet de la présente invention est l'utilisation dudit composé pour la création d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prévention d'une maladie choisie dans le groupe comprenant le traumatisme cérébral, le traumatisme médulaire, l'accident vasculaire cérébral, les maladies d'Alzheimer, de Parkinson, de Huntington, de Charcot de même que les maladies ayant pour cause des désordres neurologiques incluant de manière non exhaustive la démence VIH, la sclérose en plaque, les maladies à prion et les encéphalopathies d'origine infectieuse, toxique et métabolique.

De manière préférentielle, la composition pharmaceutique est de forme appropriée pour l'administration via toute voie convenable incluant la voie orale, sublinguale, buccale, nasale, inhalation, parentérale (incluant la voie intrapéritonéale, intratissulaire, subcutanée, intradermale, intramusculaire, intra-articulaire, veineuse (centrale, hépatique et périphérique), lymphatique, cardiaque, artérielle, incluant une voie cérébrale artérielle sélective ou suprasélective,

la perfusion rétrograde à travers le système veineux cérébral, via un cathéter dans le parenchyme cérébral ou les ventricules), l'exposition directe ou sous pression sur ou à travers le cerveau ou le tissu spinal, ou l'un quelconque du fluide cérébrospinal, des ventricules, des injections dans le subarachnoide, les espaces cérébraux cisternaux, subduraux ou épiduraux, via les ventricules cérébraux ou une ponction lombaire, une instillation intra et péri-oculaire incluant l'application par injection autour de l'oeil, à l'intérieur du globe oculaire, dans ses structures et ses couches, de même que par voie entérale, intestinale, rectale, vaginale, uréthrale, ou la vessie vésicale. Pour les indications in utero et périnatale, les injections dans la vascularisation maternelle, ou à travers ou dans les organes maternels, et dans l'embryon, le foetus, les tissus néonataux et les annexes associées telles que le sac amniotique, le cordon ombilical, l'artère ou les ombilicales et le placenta, la voie parentérale étant la voie préférée. La voie préférée peut varier selon l'état du patient.

Cette invention inclut la possibilité de gérer la durée et la séquence de délivrance des traitements médicamenteux pour y inclure un pré-traitement et un posttraitement, de manière simultanée avec le traitement.

Les cyclosporines vectorisées selon la présente invention sont utilisées chez des patients qui nécessitent une neuroprotection contre des maladies neurologiques de nature aiguë à chronique incluant l'accident vasculaire cérébral, l'hémorragie cérébrale, les traumatismes cérébraux et spinaux, les radiations ionisantes, la

chimiothérapie, la neurotoxicité aux structures vestibulocochléaires, le décollage rétinien et la neurodégénérescence comprennant la sclérose latérale amyotrophique, les maladies de Parkinson et d'Alzheimer.

Les cyclosporines vectorisées sont utilisées chez des patients qui nécessitent à la fois une neuroprotection contre une maladie neurologique et un état d'immuno-dépression centrale, tel que dans le cas de transplantation neurale, xénotransplantation neurale, sclérose en plaque, neuropathie VIH, lupus érythémateux et du syndrome de Guillain-Barré.

Les cyclosporines vectorisées sont utilisées chez les patients nécessitant qu'ils soient en état de nonimmunité, comme dans le cas de transplantation d'organes et de tissus et de maladies autoimmunes telles que l'arthrite rhumatoïde.

Les cyclosporines vectorisées sont utilisées chez les patients nécessitant un état de non-immunité de la peau dans le cas de maladies telles que le psoriasis, l'eczéma et l'alopécie.

De plus, un autre objet de l'invention est une méthode pour traiter les lésions cérébrales traumatiques, les lésions de la moelle épinière, les accidents vasculaires cérébraux, les maladies d'Alzheimer, de Parkinson, de Huntington, de Charcot de même que les maladies opportunes dues à des maladies neurologiques incluant de façon non exhaustive la démence VIH, les scléroses multiples, les maladies à prion et les encéphalopathies d'origine infectieuse, toxique et métabolique consistant à administrer à un patient une

composition pharmaceutique contenant au moins un composé vectorisé formé d'une molécule de cyclosporine (le terme cyclosporines tel que défini ci-dessus) couplé à un vecteur peptidique, ledit vecteur peptidique étant un dérivé de la famille de la Protégrine ou de la famille de la Tachyplésine.

DESCRIPTION DES FIGURES ET EXEMPLES
La présente invention sera mieux comprise en lisant la description du travail expérimental accompli dans le cadre de ses travaux de recherche par la Demanderesse, qui ne doit pas être interprétée comme étant de nature restrictive.

La figure 1 représente un schéma réactionnel pour la préparation d'un composé selon l'invention comprenant la cyclosporine et un vecteur peptidique. l - Synthèse Chimique de la Cyclosporine vectorisée.

Il sera fait référence à la figure 1 en annexe qui représente schématiquement la synthèse chimique d'un composé vectorisé de la cyclosporine.

1) Synthèse du peptide vecteur.

Le peptide SynB3 de séquence RRLSYSRRRF (SEQ ID NO : 1) est assemblé sur phase solide selon une stratégie Fmoc/tBu, clivé et déprotégé par l'acide trifluoroacétique, puis purifié par chromatographie liquide haute pression préparative en phase inverse et lyophilisé. Sa pureté

( > 95%) et son identité sont confirmées par HPLC analytique et par spectrométrie de masse.

2) Synthèse du conjugué de Cyclosporine A.

De la Cyclosporine A (414 mg ; n = 344 pmol) et de l'anhydride d'acide chloroacétique (m = 500 mg) sont mélangés dans 1 ml de pyridine. Chauffé 3h à 50 C le mélange obtenu est étendu par 6 ml d'eau. Après extraction à Et2O, la phase organique est lavée par une solution de NaHC03 saturée puis à l'eau. La phase éthérée séchée sur

NaSO, est concentrée sur évaporateur rotatif donnant 441 mg de cristaux jaunes de chloroacétyl-cyclosporine (M+H = 1279-Rdt brut = 100%) qui sont solubilisés dans 1 ml d'acétonitrile.

Après agitation pendant 14h à 40 C, en présence de chlorhydrate de benzylamine (2 éq.-m = 98 mg-679 mol), de diisopropyléthylamine (3 éq. - 177 pl - 1, 02 mmol) et de NaI (0,5 éq.-m = 25 mg-170 pmol), le mélange réactionnel est ensuite concentré sur évaporateur rotatif puis étendu par 7 ml de DMSO et purifié par HPLC

préparative pour donner 416 mg de poudre jaune de (2benzylamino-acétyl)-cyclosporine (M+H = 1351-Msl TFA = 1464-Rdt = 82%).

Un mélange d'acide N-Boc-iminodiacétique (m = 11, 9 mg-51, 1 pmol), de diisopropycarbodiimide (1 éq.- 7,9 pl-51, 1 pmol) dans 400pl de dichlorométhane et 100pl de DMF est agité à température ambiante pendant 30 minutes.

Transfèré sur une solution de (2-benzylamino-acétyl)- cyclosporine (68 mg-46, 4 pmol), de DIEA (3 éq. - 23pl - 139 pmol) dans 300pl de DMF le produit est agité à température ambiante pendant 3h.

3) Couplage de la Cyclosporine A sur SynB3
Le peptide synB3 (1,1 éq.-106 mg-50, 9 mol) mélangé à du PyBOP (1,1 éq.-26. 5 mg-50, 9 pmol), de la DIEA (4 éq.- 29 l - 204 mol et 2,5 ml de DMF est ajouté au mélange précédent puis agité à température ambiante pendant 14h. Le conjugué est purifié par HPLC préparative.

On obtient 126 mg du conjugué Boc de cyclosporine A (M+H = 2941 - Msel TFA = 3510-Rdt = 77%). Le conjugué Boc (103 mg - 35 mol) est solubilisé dans 900p1 de HCl 4N dans du dioxane et 90p1 de DMF. Le produit est purifié par HPLC préparative. On obtient 99 mg de conjugué (M+H 1+ = 2841 - Msel TFA = 3524 - Rdt = 80%).

II-Composées testés
Les composés testés sont donnés dans le tableau 1 ci-dessous.

Tableau 1

<tb>
<tb> Composé
<tb> Composé <SEP> 1 <SEP> Cyclosporine <SEP> A
<tb> Composé <SEP> 2 <SEP> Cyclosporine <SEP> A-linker-RRLSYSRRRF
<tb> Composé <SEP> 3 <SEP> Cyclosporine <SEP> A-linker-RRLSYSrrrf
<tb>
III-Essai utilisé.

1) Perfusion cérébrale in situ.

Des souris (20-25 g, Iffa-Credo ; l'Arbresle, France) sont anesthésiées. Après exposition de la carotide commune, l'artère carotide externe droite est liée au niveau de la bifurcation avec la carotide interne et la carotide commune est liée entre le coeur et le site d'implantation du cathéter (cathéter polyéthylène,

ID : 0.76). Celui-ci, préalablement rempli par une solution d'héparine (100 unités/ml) est inséré dans la carotide commune. Les souris sont perfusées avec le tampon de perfusion (128 mM NaCl, 24 mM NaHC03, 4.2 mM
KC1, 2.4 mM NaH2P04, 1.5 mM Cal2, 0.9 mM MgS04, et 9 mM D- glucose). Ce tampon est filtré puis bullé par un mélange contenant 95% O2/5% CO2 afin de maintenir le pH proche de
7.4 et d'alimenter le cerveau en oxygène au cours de la perfusion.

Les souris sont perfusées avec le tampon contenant la cyclosporine A libre ou la cyclosporine A vectorisée. La cyclosporine A est marquée au tritium 3H (activité spécifique 20 Ci/mol). Juste avant le début de la perfusion, le coeur est arrêté par section des ventricules, ceci afin d'éviter au cours de la perfusion un reflux du perfusat. L'hémisphère droit est alors perfusé à une vitesse de 10 ml/min pendant 60 secondes après quoi la souris est décapitée. La quantité de radioactivité dans l'hémisphère droit est alors mesurée et la pénétration cérébrale (Kin) est calculée.

2) Résultats.

Dans cette étude, nous avons comparé la pénétration dans la BHE de la cyclosporine A libre avec la cyclosporine A vectorisée. Pour suivre le passage des produits à travers la barrière hémato-encéphalique, nous avons utilisé de la cyclosporine A préalablement marquée au tritium 3H.

La cyclosporine A libre et la cyclosporine A vectorisée sont ensuite perfusées dans le cerveau de la

souris. Après 60 secondes de perfusion dans le tampon, la pénétration des produits est estimée par la constante d'influx ou Kin en ul/sec/g. Le tableau 2 ci-dessous montre que la vectorisation de la cyclosporine A (CsA) par le vecteur SynB3 augmente son passage dans le cerveau d'environ 4 fois après une perfusion de 60 secondes dans du tampon.

CsA <SEP> libre <SEP> CsA-synB3 <SEP> CsA-synB3
<tb> mixte <SEP> L/D
<tb> Kin <SEP> (ul/s/g) <SEP> 2,5 <SEP> 10,5 <SEP> 6,1
<tb> SEM <SEP> 0,79 <SEP> 3,9 <SEP> 1,32
<tb> n <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 5
<tb>

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Claims

REVENDICATIONS

1) Un composé qui comprend au moins une molécule de cyclosporine et au moins un vecteur peptidique capable de transporter ladite molécule à travers la barrière hémato-encéphalique.

2) Le composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la molécule de cyclosporine est la Cyclosporine A.

3) Le composé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le vecteur peptidique est un peptide linéaire ayant pour formule l'une des formules suivantes (I) ou (II) :

BX (X ou B) BXXXXBBBXXXXXXB (I)

BXXXBXXXBXXXXBBXB (II) dans lesquelles : - les groupes B, identiques ou différents, représentent un résidu d'un acide aminé dont la chaîne latérale porte un groupement basique, et - les groupes X, identiques ou différents, représentent un résidu d'un acide aminé aliphatique ou aromatique, ou lesdits peptides de formule (I) ou (II), dans leur forme retro ou formés des acides aminés ayant une configuration D et/ou L, ou un fragment formé d'une séquence d'au moins 5, et préférentiellement 7 acides aminés successifs des peptides de la formule (I) ou (II).

4) Le composé de la revendication 3, caractérisé en ce que B est choisi parmi le groupe comprenant l'arginine, la lysine, l'acide diaminoacétique, l'acide diaminobutyrique, l'acide diaminopropionique, l' ornithine.

5) Un composé selon les revendications 3 ou 4, caractérisé en ce que X est choisi parmi la glycine, l'alanine, la valine, la norleucine, l'isoleucine, la leucine, la cystéine, la cystéine, la pénicillamine, la méthionine, la sérine, la thréonine, l'asparagine, la glutamine, la phénylalanine, l'histidine, le tryptophane, la tyrosine, la proline, l'Abu, l'acide amino-1cyclohexane carboxylique, l'Aib, le carboxylic 2aminotétraline, la 4-bromophénylalanine, la tert-Leucine, la 4-chlorophénylalanine, la beta-cyclohexylalanine, la 3,4-dichlorophénylalanine, la 4-fluorophénylalanine, l'homoleucine, la beta-homoleucine, l'homophényalanine, la 4-methylphénylalanine, la 1-naphtyl-alanine, la 2naphtylalanine, la 4-nitrophenylalanine, la 3nitrotyrosine, la norvaline, la phenylglycin, la 3pyridylalanine, la [2-thienyl] alanine.

6) Un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que la molécule de cyclosporine est liée directement ou indirectement au vecteur peptidique en son extrémité N-terminale ou Cterminale ou par l'une de ses chaînes latérales.

7) Un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la molécule de cyclosporine peut être liée directement ou indirectement au vecteur peptidique par l'intermédiaire d'un groupe fonctionnel qui est présent naturellement ou inséré soit dans le vecteur soit dans la molécule, ou dans les deux.

8) Le composé de la revendication 7, caractérisé en ce que le groupe fonctionnel est choisi parmi des groupes comprenant-OH,-SH,-COOH,-C (O) H,-C (O)- ,-NH2.

9) Un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que la liaison entre la molécule de cyclosporine et le vecteur peptidique peut être choisie parmi les groupes comprenant une liaison covalente, une liaison hydrophobe, une liaison ionique, un linker qui est clivable ou non clivable en milieu physiologique ou à l'intérieur des cellules.

10) Un composé selon la revendication 9, caractérisé en ce que le linker est choisi dans le groupe comprenant les agents bi-ou multifonctionnels contenant un alkyl, aryl, alkylaryl ou des groupes peptidiques, esters, amides, amines, alkyl, aryl ou alkylaryl aldéhydes ou acides, anhydrides, sulfhydriles ou des groupes carboxyles tels que les dérivés d'acide maleymil benzoique, acide maleymil propionique et les dérivés succinimidyles, groupes dérivés de bromure ou chlorure de cyanogène,

carbonyldiimidazole, esters, phosgène, esters de succinimide ou halogénures sulfoniques.

11) Un composé selon l'une quelconque des revendications 9 ou 10, caractérisé en ce que le linker est choisi dans les groupes comprenant les formules suivantes :

- C (0)-CH2-NRi-C (0)-R2-NH-R3-C (0)- (III) - C (0)-CH2-NRi-C (0)-R2-NH-0-R3-C (0)- (IV) - C (0)-CH2-NRi-C (0)-R2-O-NH-R3-C (0)- (V) - C (0)-CH2-NRi-C (0)-R2-NH-NR4-R3-C (0)- (VI) - C (0)-CH2-NR-C (0)-R2-NR.-NH-R3-C (0)- (VII) - C (O) - R2-NH-R3-C (O) - (VIII) dans lesquelles :

Ri est H, OH, un alkyl, un aryl, un alkylaryl, un acyl ou un allyl.

R4 est H, un alkyl, un aryl, un alkylaryl, un acyl ou un allyl.

12) Un composé selon l'une quelconque des revendications 9 à 11, caractérisé en ce que la liaison entre le linker et la molécule de cyclosporine et/ou le vecteur peptidique comprend au moins un pont disulfure.

13) Une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé selon les revendications 1 à 12.

14) Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 pour la préparation

d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prévention des états neurologiques aigus incluant les lésions cérébrales traumatiques, les lésions de la moelle épinière, l'exposition aux radiations, la chimiothérapie, les états épileptiques, la schizophrénie et la chirurgie cérébrale ou spinale.

15) Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prévention des états neurologiques aigus incluant l'accident vasculaire cérébral, l'accident vasculaire cérébral embolique, l'ischémie globale cérébrale, la rupture d'anévrisme, l'hémorragie subarachnoide, les spasmes des vaisseaux et l'accident vasculaire cérébral hémorragique.

16) Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prévention des maladies neurodégénératives comprennant la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la maladie de Huntington, le syndrome de Down, la maladie de Charcot, l'atrophie spino-musculaire, la paralysie bulbaire, la schizophrénie, le syndrome de Tourette, l'atrophie cérébrale corticale diffuse, la démence à corps de Lewy, la démence mésolimbocorticale, la dégénérescence thalamique, la maladie de Pick, l'atrophie multisystème, la dégénérescence cortico-striato-spinale, le syndrome de ShyDrager, le syndrome de Richardson-Steele-Olzewski, le

complexe Prakinson-SLA-Démence de Guam, le syndrome postpolio, l'atrophie olivocérébelleuse, l'ataxie de Friedreich, le syndrome paranéoplastique, l'encéphalopathie traumatique chronique (Démence pugilistique), la maladie de Wilson, la maladie de Menke, la gangliosidose Tay-Sachs et la maladie de Krabbe, la neuropathie périphérique, la neuropathie diabétique et le vieillissement.

17) Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prévention des maladies à prions incluant la maladie de Creutzfeldt-Jacob, la maladie atypique de CreutzfeldtJacob, le Kuru, la scrapie, et l'encéphalopathie bovine spongiforme.

18) Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prévention des maladies rétrovirales incluant la démence du SIDA, la myélopathie du SIDA, la neuropathie périphérique du SIDA, et la paraparésie tropicale.

19) Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prévention des maladies visuelles et rétiniennes incluant la dégénérescence relative au glaucome, la dégénérescence maculaire, la dégénérescence diabétique, la rétinopathie

diabétique, l'inflammation relative à la dégénérescence, le détachement rétinien, les neurites optiques, les lésions du nerf optique, du chiasma optique, du tractus optique et les lésions rétiniennes causées par les photons, les traumatismes, l'ischémie, et l'augmentation de la pression intracrânienne.

20) Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prévention d'infections virales et bactériennes et d'encéphalopathies incluant les encéphalites herpétiques, l'encéphalite équine, l'encéphalite post-vaccinatoire, l'encéphalite Japonaise, l'encéphalite Nile, la méningite, la rage, la poliomyélite, la leukoencéphalopathie progressive multifocale, la panencéphalite subaigüe sclérosante, la malaria cérébrale, la maladie de Lyme et la neurosyphilis.

21) Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prévention des maladies immunes incluant les sclérosesen plaque, le syndrome de Guillain-Barré, le lupus érythémateux et la maladie de Grave.

22) Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prévention des effets des neurotoxines incluant les

aminoglycosides, les hydrocarbures chlorés, les organophosphates, les insecticides, les herbicides, le paraquat, l'Agent Orange, les gaz innervant, le MPTP, la roténone, le cyanide, le monoxyde de carbone, le méthanol, l'éthanol, le mercure, l'arsenic et les agents de chimiothérapie incluant le méthotrexate, la mercaptopurine, le fluorouracile, les nitrosourées, l'hydroxyurée, le cisplatinum, le carboplatinum, la daunorubicine, la doxorubicine, l'époside, la vincristine, la vinblastine, le taxol et ses dérivés, le cyclophosphamide, et les corticostéroides.

23) Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prévention des encéphalopathies métaboliques incluant l'encéphalopathie hépatique et l'encéphalopathie urémique.

24) Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prévention de l'être humain nécessitant un état de nonimmunité en vue de la transplantation d'un organe, tissu ou cellulaire, ou pour les maladies autoimmunes et immunes telles que l'arthrite rhumatoide, l'eczéma, le psoriasis et l'alopécie.

25) Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 pour la préparation

d'une composition pharmaceutique pour le traitement chez l'être humain d'une tumeur résistante à la chimiothérapie.

26) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 25, caractérisée en ce que la composition pharmaceutique est une forme appropriée pour l'administration par la voie parentérale, la voie intravasculaire, la voie orale, la voie rectale, la voie vaginale, la voie nasale, la voie transdermique, la voie pulmonaire, la voie cérébrospinale, la voie intracisternale, la voie subarachnoide, la voie intratéchale, ou directement dans ou sur le parenchyme cérébral.

27) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 25, caractérisée en ce que la composition pharmaceutique est une forme appropriée pour l'administration par la voie intravasculaire, la voie cérébrospinale, la voie intraventriculaire, la voie intracisternale, la voie subarachnoide, la voie intratéchale, ou directement dans ou sur le parenchyme cérébral, utilisant partiellement ou complètement des appareils tels que ceux à relargage prolongé par injection dépot, des pompes, des réservoirs ou des catheters.