FR2867072A1 - Utilisation d'un extrait d'algue rouge du genre rissoella dans des compositions cosmetiques et dermopharmaceutiques pour proteger les cellules - Google Patents
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Abstract
La présente invention se rapporte à des compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles contiennent un extrait d'algue rouge du genre Rissoella, notamment Rissoella verruculosa, capable de lutter contre le stress cellulaire, de renforcer l'homéostasie des cellules, de limiter les processus inflammatoires en régulant par la répression, via les processus transcriptionnels des gènes, l'induction de plusieurs classes de protéines de stress, notamment protéines de choc thermique HSP, métallothionéines, thiorédoxines , glutarédoxines et de divers médiateurs de l'inflammation.
Description
- 1-
UTILISATION D'UN EXTRAIT D'ALGUE ROUGE DU GENRE RISSOELLA
DANS DES COMPOSITIONS COSMETIQUES ET
DERMOPH[ARMACEUTIQUES POUR PRO'l'EGERLES CELLULES La présente invention concerne l'utilisation d'un extrait d'une algue marine du genre Rissoella, notamment Rissoella verruculosa, en quantité efficace et dans un milieu physiologiquement acceptable pour un usage topique dans des compositions cosmétiques et/ou dermopharmaceutiques, plus particulièrement dans les applications où l'on cherche une protection efficace des cellules.
Tout milieu naturel est le siège de variations limitées, annuelles, saisonnières et quotidiennes d'un certain nombre de ses facteurs. Tout organisme qui y vit doit donc pouvoir supporter des modifications de ces conditions d'existence en maintenant des conditions constantes de son milieu intérieur. Cet ensemble de corrélations homéostatiques est qualifié d'adaptation régulatrice. Il fait appel à différents processus physiologiques de régulations internes.
Cette adaptation se manifeste aussi au niveau cellulaire.
En effet, chaque cellule soumise à un stress subit des changements importants s'accompagnant éventuellement de l'apparition ou de la disparition de structures complexes. Mais il lui faut conserver ses potentialités, rétablir son homéostasie et maintenir un état redox optimal.
Pour cela, elle possède un système complexe de contrôle qui lui permet de régler et de coordonner les activités de ses différents métabolismes en les adaptant à ses besoins en fonction des conditions de l'environnement.
Ainsi en réponse aux différents facteurs de stress chimique ou physique, la cellule active un certain nombre de gènes spécialisés encodant pour des protéines appelées protéines de stress . Il va y avoir soit expression ou non-expression des gènes, soit modulation de cette expression par la répression. En fait il s'agit d'un problème de régulation de l'expression des gènes.
Les protéines de stress s'associent à d'autres protéines n'ayant pas encore acquis (biosynthèse) ou ayant perdu (dénaturation) leur conformation tridimensionnelle. Ces interactions sont destinées à prévenir l'agrégation des protéines altérées, à éliminer les protéines anormales, à assurer le transfert des protéines du cytoplasme vers la membrane plasmique ou vers divers organites tels les mitochondries, les lysosomes, le noyau ou le réticulum endoplasmique.
La plupart des ces protéines de stress sont exprimées de façon constitutives, d'autres sont induites par le stress. Certaines jouent le rôle de chaperonnes, d'autres interviennent comme antioxidants.
Si l'on expose une cellule a un stress, la cellule répond en augmentant sa production de protéines de stress ce qui permet de maintenir ses fonctions cellulaires et de ramener les fonctions métaboliques à des valeurs basales.
Toutefois, cette production de protéines de stress doit être limitée car un 20 excès engendre la mort cellulaire.
Les protéines de stress sont souvent assimilées à des protéines de choc thermique HSP Heat Shock Proteins . Au cours des trente dernières années, on en a découvert près de trente. On les groupe selon leur poids moléculaire e.g HSP 27 (27 kDa), HSP 60 (60kDa), HSP 70 (70 kDa), HSP 90 (90 kDa) et HSP 110 (110 kDa) (Ciocca et al., 1993 J. Nat. Cancer Institute, 85: 1558-1570; Arrigo & Landry, 1994 Cold Spring Harbor Laboratory Press: 335-373; Kiang & Tsokos, 1998 Pharmacol.Ther.80:183-201; Feder & Hofinann, 1999 Ann.Rev.Physiol., 61: 243- 282).
Outre le choc thermique, de nombreux facteurs déclenchent la production de HSP e.g. les oxydants et radicaux libres, certains métaux lourds, l'éthanol, une carence en glucose ou en ATP, la fièvre, l'ischémie, certaines infections....
Dans les domaines cosmétiques et dermatologiques, l'utilisation d'extraits induisant la synthèse des protéines de choc thermique a été plusieurs fois mentionnée.
L'origine naturelle de ces extraits est diverse. Il s'agit de: - plantes à métabolisme CAM de la famille des Cactacées, Crassulacées et Saxifragacées dont les extraits accélèrent et amplifient la synthèse des protéines de choc thermique HSP, notamment HSP 27 et 90 (brevet INOVAT FR 2 757 863), feuilles d' Olea europea dont l'extrait augmente la production de protéines de stress, notamment HSP70 (brevet SILAB FR 2 813 525), zooplancton, notamment un extrait d'Artemia qui contient et induit des HSP de 15 type 10-30, 40, 60, 70, 90 et 100-110 kDa (brevet Laboratoire SEPORGA FR 2 810 241), - champignons et de levures stressés d'espèces diverses dont les extraits induisent des HSP et/ou des HSF, les HSP appartenant à une ou à plusieurs familles de HSP notamment petites HSP (10-30), HSP40, HSP 60, HSP 70, HSP 90 et HSP 100-110 (brevet Laboratoire SEPORGA FR 2 809 308), - microalgues (e.g. du genre Chlorella) contenant des substances inductrices de protéines de choc thermique constitutives et/ou inductives, notamment HSP 43, 60, 25 73,et 95 kDa (brevet CODIF International FR 2 792 832), - macroalgues du genre Porphyra dont les extraits hydroalcooliques modulent l'induction des protéines de stress notamment des HSP 27, 60, 70 kDa (brevets LARENA FR 2 832 628 et 2 832 629).
Des composés issus de plusieurs plantes supérieures ont été aussi incorporés dans des formulations cosmétiques ou dermatologiques pour favoriser la production endogène d'HSP 32 (brevet PARFUMS CHRISTIAN DIOR FR 2 787 996) ou d'HSP 72 (brevet SILAB FR 2 825 632). - 4-
Tous ces brevets ne concernent en fait qu'une seule classe de protéines de stress: les protéines de choc thermique HSP.
Mais bien d'autres protéines sont synthétisées en situation de stress (Jacquier-Sarlin & Polla, 1994 Méd/Sci., 10:31-34).
Ainsi l'ubiquitine est aussi induite à la suite d'un choc thermique, de même des antioxidants enzymatiques tels la superoxide dismutase et l'hème oxygénase.
Les métallothionéines sont aussi synthétisées. Ce sont des protéines de faible poids moléculaire caractérisées par leur richesse en cystéine qui peuvent se complexer avec des métaux e.g. cadmium, argent, mercure et cuivre. Elles jouent un rôle essentiel dans les mécanismes de régulation des métaux essentiels (e.g. zinc et cuivre) en participant à des réaction d'oxydo-réduction. Elles constituent aussi un moyen de protection contre les effets toxiques des métaux non essentiels (e.g. cadmium et mercure).
La régulation redox est une clé essentielle dans les processus de protection cellulaire. Plusieurs molécules exercent des rôles déterminants dans le maintien des formes réduites et oxydées des fonctions thiols et participent à la régulation de l'expression génique via des facteurs de transcription, notamment les métallothionéines mais aussi les thiorédoxines et les glutarédoxines.
On comprend donc l'importance qui existe à disposer de produits qui aident à contrôler les réactions homéostatiques, à maintenir un état redox optimal et à lutter contre les effets néfastes du stress cellulaire.
Dans le domaine de la Cosmétique et de la Dermopharmacie, on s'intéresse de plus en plus au stress cellulaire et à ses conséquences sur l'état de la peau. En effet, la peau est exposée à de multiples agressions, notamment à des variations climatiques brutales de température et d'humidité. Le stress cellulaire peut aussi être induit par bien d'autres facteurs, notamment des facteurs psychologiques. Les conséquences d'un stress physique, chimique et physiologique sur les cellules cutanées sont bien connues e.g. vieillissement, sécheresse, inconfort, allergies, eczémas, pellicules Dans le cadre de la présente invention, il a été découvert, de manière tout à fait surprenante, que l'utilisation d'un extrait de ladite espèce algale Rissoella verruculosa: - permet une protection de la viabilité cellulaire et renforce la résistance des cellules contre les agressions de l'environnement: chaud, froid et humidité, - permet de protéger les constituants cellulaires (protéines et matériel génétique) et le potentiel antioxydant endogène des effets du stress, - facilite l'adaptation des cellules aux agressions en régulant, via des processus transcriptionnels, l'expression de certains gènes impliqués dans les réactions de stress, notamment des HSP mais aussi des métallothionéines et des protéines directement impliquées dans le maintien du potentiel redox intracellulaire: les thiorédoxines et les glutarédoxines, - présente aussi une activité anti-inflammatoire en réponse au stress, - permet de rompre les cascades d'activation des protéines conduisant à la mort cellulaire.
Du fait de ses activités multiples, ledit extrait trouve avantageusement son utilisation seul ou en association avec au moins un autre principe actif, dans un milieu physiologiquement acceptable, dans les produits destinés en particulier à lutter contre le stress cellulaire, à renforcer la résistance cellulaire vis-à-vis des agressions externes, à diminuer ou inhiber les inflammations induites par les effets néfastes du stress, voire à prévenir la mort cellulaire programmée ou non suite à un excès de stress.
Par milieu physiologiquement acceptable, on entend un milieu compatible avec la peau, les muqueuses et les phanères.
Préférentiellement selon l'invention, l'extrait ou les applications le 5 comprenant sont employés de manière topique.
Selon l'invention, les produits comprenant l'extrait peuvent être des compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques. Plus particulièrement selon l'invention, il s'agit de compositions cosmétiques.
L'algue Rissoella verruculosa (Bertoloni) J. Agardh est une macroalgue rouge (Rhodophycée) appartenant au groupe des Floridées et à la famille monotype des Rissoellacées. Son thalle est fixé aux rochers par une croûte basale très mince, généralement peu visible et pérenne. Il possède une fronde dressée parfois ramifiée pouvant atteindre 2 cm de large et 15 cm de haut. Cette fronde est aplatie en ruban ou en lame avec des marges denticulées ou incisées.
Le cycle de développement est trigénétique avec un gamétophyte et un sporophyte isomorphes.
Les frondes commencent leur développement en hiver à partir du disque basal pérenne. Elles apparaissent alors de couleur brune pourpre pour s'éclaircir au printemps et devenir franchement jaune-orangé en été. Elles disparaissent progressivement du mois d'août au mois de septembre. Les tétrasporanges et les cystocarpes sont nettement apparents en été, donnant un aspect verruqueux aux frondes.
L'espèce Rissoella verruculosa est endémique de la Méditerranée occidentale (côtes d'Espagne, Baléares, France, Corse, Italie et Algérie). Elle est absente sur les côtes de Méditerranée orientale.
Rissoella verruculosa présente un mode de vie très particulier car cette algue rouge est: - 7- - thermophile: elle croît dans des eaux chaudes, silicicole: elle ne se développe que sur des substrats de nature siliceuse ou dolomitique, - photophile: elle vit dans l'étage supérieur de l'étage médiolittoral, sur des rochers soumis à un ensoleillement intense et à une forte action des vagues, en constituant des ceintures très caractéristiques, - reviviscente: elle supporte une dessication poussée due à une émersion de longue durée en été et se développe ensuite après imbibition, - eurytherme: elle résiste à de grands écarts de température, - euryhaline: elle s'adapte à de grandes variations de salinité.
Les cellules de cette algue ont donc une capacité remarquable à réagir aux stress et à développer un état de résistance extrême.
Dans un mode de réalisation avantageux, l'extrait de l'algue Rissoella verruculosa selon la présente invention est un extrait qui peut être obtenu à partir de thalles ou de quelque partie isolée de thalles sous forme fraîche, congelée, sèche, entière, fragmentée ou broyée.
Dans un mode de réalisation avantageux, 1' extrait de ladite algue selon la présente invention est un extrait aqueux caractérisé en ce que l'on réalise l'extraction à partir de thalles ou de quelque partie isolée de thalles sous forme fraîche, congelée, sèche, entière, fragmentée ou broyée.
Plus particulièrement, l'extrait est avantageusement obtenu par macération des thalles dans un solvant ou un mélange de solvants suivie d'une filtration et d'une centrifugation pour éliminer les particules.
Dans un mode préféré de réalisation de la présente invention, l'extrait ainsi obtenu est calibré par des ultrafiltrations et concentrations successives.
A titre de solvants avantageusement employés, on citera l'eau, les solvants chlorés tel que le chloroforme, les éthers tels que l'éther éthylique, l'acétone, les esters en C2 à C8 tels que l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle, des alcools en Cl à C6 tels que le méthanol, l'éthanol, l'isopropanol et le butanol, des polyols en C2 à C6 tels que le propylène glycol et le butylène glycol, sans que cette liste soit limitative. Ces solvants peuvent être utilisés seuls ou en mélange.
L'extraction peut être renouvelée plusieurs fois jusqu'à épuisement des thalles conformément aux procédés bien connus de l'homme de l'art.
La proportion en masse entre le solvant et le matériau frais à extraire peut 10 varier dans de larges limites. Plus précisément elle peut être comprise entre 10: 1 et 1: 5 et de préférence 1: 2.
Des améliorations, optimisations et modifications du procédé de préparation des extraits sont envisageables. A la place de la macération simple, on peut employer les techniques à contre courant, la décoction, la lixiviation, l'extraction sous reflux, l'extraction à l'aide d'ultrasons ou de micro-ondes associée ou non aux solvants, l'extraction au moyen de fluides supercritiques, notamment de CO2 supercritique avec ou sans co-solvant.
Pour certaines applications cosmétiques, il peut s'avérer judicieux de concentrer et de purifier l'extrait liquide ou encore de préparer un extrait sec à partir d'extrait liquide par exemple par des techniques classiques de séchage, précipitation, évaporation, atomisation ou lyophilisation.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la 25 lecture des exemples qui suivent, qui sont donnés à titre purement illustratifs et ne sont pas limitatifs de l'invention.
Exemple n 1: Préparation d'un extrait selon l'invention La préparation de l'extrait de Rissoella verruculosa selon l'invention comprend la succession des étapes suivantes: - 10 à 300g de thalles préalablement séchés et réduits en poudre calibrée de 500 à 5 m sont dispersés dans 100 à 2000m1 d'eau sous agitation modérée et à la température de 1 C à 40 C, la suspension est filtrée et centrifugée pour éliminer les particules, le surnageant est ensuite soumis à des ultrafiltrations successives de 300kDa à 5kDa et enfin concentré jusqu'à la calibration de ses activités.
L'extrait obtenu est limpide et de couleur ambrée. La valeur du pH est comprise entre (4.0 et 10.0) plus particulièrement entre 4.0 et 7.0, notamment entre 4.5 et 5.5.
Exemple n 2: Mise en évidence de la cytocompatibilité de l'extrait de Rissoella L'extrait doit être non-cytotoxique pour ne pas induire la synthèse de protéines de stress à cause de sa toxicité.
Une étude de cytocompatibilité a été conduite sur des kératinocytes normaux humains (NHEK).
Le test classique du MTT a permis d'étudier la viabilité cellulaire.
DO 1 DO 2 DO 3 DO 4 DO 5 DO 6 moyenne Témoin 0.298 0.339 0.293 0.334 0. 313 0.332 0.318 extrait 0,3% 0.283 0.357 0.335 0.318 0.321 0.321 0.323 extrait 1% 0.278 0.381 0.341 0.32 0.282 0.281 0.314 extrait 3% 0.246 0. 341 0.329 0.306 0.28 0.322 0.304 extrait 9% 0.336 0.368 0.336 0.333 0. 355 0.344 0.345 DO: densité optique La comparaison statistique des 5 moyennes est abordée par une analyse de variance à 1 facteur, modèle fixe à partir de 6 mesures par lot.
Les résultats Fc = 1,721 et 4-25 Fa 0,05 = 2,7587 ne faisant pas apparaître 25 de différences significatives entre les moyennes traduisent l'absence de cytotoxicité.
De fait, l'extrait de Rissoella, préparé selon l'invention, et testé jusqu'à 9%, est compatible avec les kératinocytes. - 10-
Exemple n 3: Etude de l'influence de différentes doses d'extrait de Rissoella sur la viabilité des kératinocytes humains soumis à des chocs thermiques L'influence de plusieurs doses d'extrait de Rissoella est observée sur la 5 viabilité de kératinocytes humains en culture soumis à des stress thermiques.
Après 24h de culture en présence de l'extrait algal, les kératinocytes sont soumis à divers chocs thermiques: +48 C pendant 1heure, +4 C pendant 2 heures et -18 C pendant 30 minutes. Leur viabilité est évaluée 6h après la fin des traitements, sans changement du milieu de culture par le test classique au MTT.
Les résultats obtenus sont illustrés sur les graphiques insérés en annexe: Fig. 1 stress à +48 C pendant 1 heure, Fig.2: stress à +4 C pendant 2 heures et Fig.3: stress à -18 C pendant 30 minutes. Ils sont exprimés en % d'absorbance par rapport aux cellules témoins non stressées.
L'analyse statistique des résultats exprimés en D.O. pour chacun des 3 chocs thermiques a été réalisée en employant: - une analyse de variance (ANOVA) à 1 facteur, modèle fixe, à partir de 8 20 mesures par lot et l'analyse de la plus petite différence significative afin de pouvoir hiérarchiser les moyennes.
La significativité des résultats: Fc pour l'ANOVA et Ac pour le 2ème test est 25 codée de la façon suivante: Non significatif a < 0,05 NS ou = Significatif a = 0,05 * ou < hautement significatif a = 0,01 ** ou très hautement significatif a = 0,001 *** ou <
-
Les paramètres calculés Fc et de sont comparés aux paramètres théoriques suivants: 4-35 Fa 0,05 = 2,6415 4-35 Fa 0,01 = 3,9082 4-35 Fa 0,001 = 5, 8764 test +48 C +4 C -18 C Act 0,05 0,0399 0,0618 0,0279 da 0,01 0,059 0, 0915 0,0412 da 0,001 0,0912 0,1414 0,0637 10 Pour le choc thermique de + 48 C pendant 1 heure: - l'ANOVA révèle l'action très hautement significative du facteur (Fc = 29,9437 ***) - la hiérarchisation des moyennes révèle une action significative de l'extrait au- dessus de 0,5% (E: extrait, Ts: témoin stressé) E 0,5% - Ts de = 0,029 NS E 1,5% - E 0,5% de = 0,058 * E 4 % - E 1,5% de=0,051 * E3%-E4% Ac = 0,010 NS d'où la hiérarchisation: Ts = E 0,5% < E 1,5% < E 4% = E 3%.
Pour le choc thermique de +4 C pendant 2 heures: - l'ANOVA révèle l'action très hautement significative du facteur (Fc = 148 * * *) - la hiérarchisation des moyennes révèle une action très hautement significative de l'extrait dès 0,5% (E: extrait, Ts: témoin stressé) E0, 5%-Ts de=0,211 *** E 1,5%-E 0,5% de=0,182 *** E 4 % - E 1,5% de = 0,086 * E3%-E4% dc=0,082* d'où la hiérarchisation: Ts < E 0,5% <E 1,5% < E 4% < E 3%. - 12-
Pour le choc thermique de - 18 C pendant 30 minutes: - l'ANOVA révèle l'action très hautement significative du facteur (Fc = 697 ***) - la hiérarchisation des moyennes révèle une action très hautement significative de 5 l'extrait dès 0,5% (E: extrait, Ts: témoin stressé) E 0,5% - Ts Ac = 0,249 *** E 1,5% - E 0,5% Ac = 0,143 *** E 4 % - E 1,5% Ac 0,113 *** E3%-E4% Ac=0,034* d'où la hiérarchisation: Ts < E 0,5% <E 1, 5% < E 4% < E 3%.
Ainsi, les kératinocytes traités avec l'extrait de Rissoella présentent des taux de viabilité, significativement à très hautement significativement supérieurs à ceux des cellules témoins soumises aux mêmes conditions de stress.
Exemple n 4: Etude de l'influence de différentes doses d'extrait de Rissoella sur la viabilité des kératinocytes humains soumis à des chocs osmotiques L'influence de plusieurs doses d'extrait de Rissoella est observée sur la viabilité de kératinocytes humains en culture soumis à des stress osmotiques.
Après 24h de culture dans un milieu pauvre en nutriments et en présence de l'extrait algal, les kératinocytes sont cultivés dans le même milieu rendu hypertonique par l'ajout de diverses concentrations de sorbitol: 100, 200 et 300 mM.
Leur viabilité est évaluée, sans changement de milieu, 6h après la fin des traitements par le test classique au MTT.
Les résultats obtenus sont exprimés en % d'absorbance par rapport aux 30 cellules non stressées et illustrés sur le graphique inséré en annexe Fig. 4.
L'analyse statistique des résultats a été réalisée en employant: - 13- une analyse de variance (ANOVA) à 1 facteur, modèle fixe, à partir de 8 mesures par lot pour laquelle: 3-28 Fa 0,05 = 2,9467 3-28 Fa 0,01 = 4,5681 3-28 Fa 0,001 = 7,1931 - l'analyse de la plus petite différence significative pour laquelle: Aa 0,05 = 0,0463 Aa 0,01 = 0 0685 Aa 0,001 = 0 1058.
L'ANOVA révèle l'action très hautement significative du facteur (Fc = 172 ***).
La hiérarchisation des moyennes révèle une action très hautement significative dès 0,5% (E: extrait, Ts: témoin stressé) E 0,5% - Ts Ac = 0,143 *** E 1,5 % - E 0,5% Ac = 0,159 *** E 3% - E 1,5% Ac = 0,113 *** d'où la hiérarchisation: Ts < E 0,5% <E 1,5% < E 3% Les résultats montrent une amélioration très hautement significative de la viabilité avec l'extrait de Rissoella pour toutes les conditions expérimentales.
Exemple n 5: Effet répresseur de l'expression de certains gènes impliqués dans le stress par l'extrait de Rissoella Les effets de l'extrait de Rissoella ont été analysés sur l'expression des gènes en relation avec le stress dans des conditions ou non d'induction de stress (choc thermique) à l'aide de minichips dédiées (membrane de cDNA arrays contenant plusieurs dizaines de gènes en relation avec le stress cellulaire). Cette technique de mini puces à ADN a permis de visualiser et quantifier simultanément l'expression de 101 gènes d'une cellule soumise à un choc - 14- thermique. Elle a aussi permis de visualiser les changements d'activités au sein de cette cellule en réponse au stress.
Le modèle cellulaire utilisé est le kératinocyte humain normal (NHEK) 5 cultivé dans le milieu SFM (Invitrogen 17005034) sans ajout de facteur de croissance ni d'extrait pituitaire.
Les kératinocytes sont cultivés à confluence en plaque 12 puits dans deux séries identiques: une série A réalisée dans des conditions normales (37 C) (deux plaques: témoin et essai produit), une série B destinée aux études pour le choc thermique (deux plaques: témoin et essai produit). L'extrait algal est ajouté aux cultures à raison de 3%. Les cellules sont cultivées à 37 C pendant 1 heure. La série B est ensuite placée 30 min au bain marie à 45 C et la série A est laissée à 37 C. Les cellules sont à nouveau cultivées pendant 4h30. A la fin de l'incubation, elles sont rincées au PBS puis lysées.
L'ARN est extrait pour l'analyse génomique. Il est purifié à l'aide du kit Chemagie mRNA Direct Kit (AbCys, Chemagen) puis l'ARN de chaque cellule est réverse-transcrit en utilisant un pool d'amorces correspondant aux cDNAs immobilisés sur les membranes et un déoxynucléotide triphosphate marqué au 33P Une sonde cDNA multiple marquée est réalisée pour chaque condition de culture. Ces sondes purifiées sont ensuite hybridées dans des conditions optimisées aux cDNAs en excès fixés sur les membranes. Après lavage, la quantité relative de sonde marquée est révélée par autoradiographie et par comptage direct sur un Phosphorlmager.
L'analyse des deux membranes est réalisée à l'aide du logiciel Optiquant.
Les résultats sont exprimés en unités relatives d'expression (RE) et % par 30 rapport aux témoins (Tl: témoin à 37 C, T2: témoin à 45 C). - 15-
Le stress thermique a considérablement perturbé l'homéostasie et le métabolisme des kératinocytes.
Les cellules cultivées en présence de l'extrait de Rissoella et soumises aux 5 mêmes conditions de stress ont pallié ces phénomènes en modifiant la régulation de leur expression génétique par répression ou induction.
L'extrait de Rissoella est capable de provoquer la répression de l'expression de la plupart des gènes induits par le stress thermique et de ramener le métabolisme 10 à des fonctions basales.
Cette modulation intéresse tout particulièrement les gènes codant pour des protéines impliquées dans: - la réponse de choc thermique (différentes familles de HSP, ubiquitine), - la régulation redox de l'homéostasie (thiorédoxines et glutarédoxines), - la défense antioxidante (antioxidants enzymatiques et métallothionéines) , 20 - la réponse inflammation (interleukines, lipoxygénases et prostaglandines), - la mort cellulaire (facteur tumoral de nécrose lié à l'apoptose et divers régulateurs de l'apoptose).
Les tableaux insérés ci-après montrent l'expression différentielle des différents gènes suite au traitement thermique. Par commodité, ces gènes ont été regroupés selon leur fonction sans tenir compte des interactions possibles entre les fonctions cellulaires. - 16-
La réponse de choc thermique Températures 37 C 45 C Gènes Témoin (T1) Extrait de Rissoella (E) Témoin (T2) Extrait de Rissoella(E) moyenne moyenne % E/T1 moyenne % T2/T1 moyenne % E/T2 HSP27 71.3 139. 3 195 190.8 268 115.5 61 DNAJB1 99.0 45.1 46 211.9 214 72.6 34 HSPAIA 1. 5 1.9 126 89.6 5973 78.1 87 HSPCA 1.6 1.8 116 45.4 2858 19.5 43 HSPCB 15. 4 14.7 95 66.0 428 33.8 51 HSPA2 30.2 16.6 55 45.9 152 41.3 90 HSPA9B 11. 1 10.1 90 16.5 148 8.6 52 UBC 26.6 42.6 160 91.1 330 37.4 41 HSP27: 27- kDa heat shock protein 1 - DNAJB1: HSP 40 - HSPAIA: HSP70.1, 70-kDa heat shock protein 1 - HSPCA: HSP90A, heat shock 90kDa protein 1 alpha - HSPCB: HSP90B, heatshock 90-kDa heat-shock protein beta - HSPA2: heat shock 70kDa protein2 - HSP9B: mitochondrial stress -70 protein - UBC: ubiquitin C. La régulation redox de l'homéostasie Températures 37 C 45 C Gènes Témoin (T 1) Extrait de Rissoella (E) Témoin (T2) Extrait de Rissoella(E) moyenne moyenne % E/TI moyenne % T2/Tl moyenne % E/T2 TXN 19. 3 25.0 129 58.3 301 33.1 57 TXNRDI 159.8 255.5 160 332.9 208 225.6 68 TXNRD2 30.7 23.0 75 34.5 112 16.2 47 PRDX4 1.8 1.5 86 5.0 288 1.5 30 GLRX 8.9 5.3 59 7.6 85 4.8 64 GLRX2 5.4 7.3 137 9.2 171 4.4 48 TXN: thioredoxin - TXNRD1:thioredoxin reductase 1 - TXNRD2: thioredoxin reductase 2 - PRDX4: peroxiredoxin 4, thioredoxin peroxidase A0372 - GLRX: glutaredoxin, thioltransferase-15 GLRX2: glutaredoxin 2.
La défense antioxidante Températures 37 C 45 C Gènes Témoin (TI) Extrait de Rissoella (E) Témoin (T2) Extrait de Rissoella(E) moyenne moyenne % E/T1 moyenne % T2/Tl moyenne % E/T2 CAT 18.7 7.5 40 13.7 73 5.1 37 SOD1 2. 4 1.6 67 5.4 228 4.3 78 SOD2 1.5 1.5 100 2.4 157 1.5 64 HMOX2 756.9 341. 3 45 641.4 85 254.7 40 MT1G 43.3 36.6 85 113.6 262 54.1 48 MT1X 67.6 48. 6 72 145.3 215 53.6 37 MT2A 1009.0 500.6 50 1061.9 105 446.5 42 MT3 556. 1 275.8 50 553.4 100 236.1 43 MTIH 42.5 25.7 60 95.2 224 36.7 39 CAT: catalase - SOD1: Superoxide dismutase 1, cytosolic, Cu-Zn - SOD2: superoxide dismutase 2, mitochondrial SOD, Mn2+ dependent - IIMOX2: heme oxygenase 2 (decycling), constitutive - MT1G: metallothionein 1G - MT1X: metallothionein 1X - MT2A: metallothionein 2A - MT3: metallothionein 3 MT1H: metallothionein lH, metallothionein 0 (MTO) + MT1I, MT2 + MTIL + MT1R. - 17-
La réponse inflammatoire Températures 37 C 45 C Gènes Témoin (Tl) Extrait de Rissoella (E) Témoin (T2) Extrait de Rissoella(E) moyenne moyenne % E/T1 moyenne % T2/T1 moyenne % E/T2 IL1A 53.5 26.7 50 53.3 100 17.9 34 IL 1B 1.5 1.5 100 2.8 184 1.5 54 ILIR1 11.9 17.3 146 32.6 274 9.4 29 IL11 8. 9 4.9 54 11.6 129 2.9 25 IL12A 10.4 2.8 27 7.2 70 2.5 34 IL6 18.9 8. 1 43 13.8 73 4.9 36 ALOX12 1.6 4.4 280 5.0 322 1.8 36 ALOX12B 3.4 3. 0 87 6.1 178 2.6 43 ALOX15 28.7 20.8 72 37.6 131 12.3 33 ALOX15B 375. 3 180.3 48325.3 87 139.3 43 ALOX E3 46.3 24.8 54 50.2 108 15.0 30 ALOX5 580.4 264.0 45 564.5 97 207.7 37 ALOX 5AP 3.2 3.9 125 8.1 256 5. 1 63 PTGDS 138.0 136.4 99 206.3 150 96.3 47 COX1 10.9 6.0 55 12.4 115 5. 3 43 IL1A: interleukin-1 alpha - IL1B: interleukin -lbeta - IL1R1: interleukin- 1 receptor typel - IL11: interleukin 11- IL12A: interleukin-12 alpha subunit IL-12A - 1L6: interleukin-6 - ALOX12: lipoxygenase 12 - ALOX12B: lipoxygenase 12,12R type - ALOX15: lipoxygenase 15-ALOX15B: lipoxygenase -15B- ALOXE3: lipoxygenase -3 - ALOX5: lipoxygenase-5, ALOX5AP: lipoxygenase -5- activating protein - PTGDS: prostaglandin D2 synthase 21kDa-COX1: prostaglandin G/H synthase 1.
La mort cellulaire apoptotique et nécrotique Températures 37 C 45 C Gènes Témoin (Tl) Extrait de Rissoella (E) Témoin (T2) Extrait de Rissoella(E) moyenne moyenne %E/T1 moyenne %T2/T1 moyenne %E/T2 TNFSFIO 20.4 33.4 164 55.3 272 19.6 35 BAX 806.6 362.6 45 682.4 85 278. 4 41 BCL2 202.2 94.7 47 164.9 82 71.3 43 BCL2L1 57.9 55.0 95 60.2 104 43. 8 73 TNFSF10: TNF-related apoptosis inducing ligand TRAM., - BAX: apoptosis regulator BAX - BCL2: apoptosis regulator Bel-2 - BCL2L1: apoptosis regulator Bcl-X, BCL2-like 1.
Conclusion Les exemples ci-dessus démontrent que l'extrait préparé à partir de la macroalgue Rissoella verruculosa selon l'invention possède de puissants effets protecteurs vis-à-vis du stress cellulaire, notamment des stress environnementaux dus à la chaleur, au froid ou à l'humidité.
En réponse au stress thermique, l'extrait a permis d'améliorer la résistance des cellules, de réguler l'homéostasie cellulaire, de réparer les déséquilibres métaboliques en modulant la synthèse de nombreuses protéines de stress, - 18- notamment plusieurs familles de HSP mais aussi des métallothionéines et des thiorédoxines.
En réponse au stress thermique, l'extrait a permis de réguler les processus inflammatoires en modulant la synthèse de plusieurs interleukines et médiateurs de l'inflammation (e.g. lipoxygénases et prostaglandines) et de rompre les cascades d'activation des protéines conduisant à la mort cellulaire en modulant la synthèse de plusieurs régulateurs de l'apoptose.
Ledit extrait peut être avantageusement incorporé dans les compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques, lesdites compositions en contenant, seul ou en association avec au moins un autre principe actif mais en quantité efficace pour une application topique et dans un milieu compatible avec la peau, les muqueuses et les phanères.
Il peut y être employé pour l'exploitation soit d'une des activités protectrices démontrées prise isolément, soit d'au moins deux de ces activités soit encore de toutes ces activités considérées ensemble.
La composition finale de l'extrait destiné à être utilisé dans lesdites 20 compositions consiste dans une proportion pouvant varier entre 0,1 % et 40 % (p/p), préférentiellement entre 0,5 % et 4 %.
On peut formuler l'invention sous diverses formes de compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques. Ces formulations incluent toute forme galénique normalement employée en cosmétique et dermopharmacie pour une application topique: solutions aqueuses, hydroalcooliques ou huileuses, émulsions huile dans eau ou eau dans huile ou multiples, gels aqueux ou huileux, produits anhydres, liquides, pâteux ou solides sans que cette liste soit exhaustive.
Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides. Elles peuvent prendre l'aspect d'une crème, d'un lait, d'une lotion, d'un gel, d'une pommade, d'un - 19- sérum, d'une pâte, d'une mousse, d'un solide. Elles peuvent éventuellement être appliquées sous forme d'aérosol et même de patch.
L' extrait de Rissoella verrucolosa selon l'invention peut être combiné dans lesdites compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques avec tout autre ingrédient habituellement utilisé dans les formulations: les lipides d'extraction et/ ou de synthèse, les polymères gélifiants et viscosants, les tensioactifs, les émulsionnants, les conservateurs, les antioxydants, les parfums, les vitamines, les émollients, les séquestrants, les dépigmentants, les filtres solaires, les agents amincissants, les céramides, les matières colorantes, les bactéricides, les antipelliculaires, les principes actifs hydro- ou liposolubles, les extraits de plantes, les extraits marins, les extraits tissulaires sans que cette liste soit limitative.
Bien entendu, on veillera à sélectionner le ou les éventuels ingrédients à ajouter aux compositions selon l'invention de manière à ne pas altérer ou substantiellement altérer les propriétés avantageusement attachées à ces compositions.
Il est possible d'incorporer cet extrait algal selon l'invention dans tout vecteur cosmétique adéquat comme par exemple des agents filmogènes, des liposomes, des chylomicrons, des cyclodextrines, des micelles, des macro-, micro-et nanoparticules des macro-, micro- et nanocapsules, ou encore de les absorber sur des polymères organiques, des supports textiles et minéraux.
L'extrait de Rissoella verruculosa selon l'invention est utilisé dans des applications cosmétiques ou dermopharmaceutiques destinées aux soins des peaux réactives et des peaux sensibles pour les aider à mieux supporter les stress, notamment ceux induits par les sévères conditions de l'environnement. En outre les effets dudit extrait permettent de prolonger la fonction protectrice de la peau.
L'extrait de Rissoella verruculosa selon l'invention peut être aussi utilisé pour d'autres applications de soins et d'hygiène de la peau (produits pour le visage - 20- et le corps, produits de jour et de nuit, produits solaires, produits anti-rides) mais également dans le domaine des soins et d'hygiène capillaires (lotions, shampooings, crèmes, mousses, produits protecteurs, réparateurs, photoprotecteurs) et des produits pour les ongles (crèmes, lotions, filmogènes, protecteurs, réparateurs, vernis) et enfin des produits pour les lèvres (rouge à lèvres, baumes, bâtons applicateurs) sans que ces listes soient exhaustives.
Claims (5)
1 Compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles contiennent un extrait de l'algue rouge du genre Rissoella, notamment 5 l'espèce Rissoella verruculosa.
2 Compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques selon la revendication 1 caractérisées en ce que l'on réalise l'extraction à partir de thalles ou toute partie de thalles de ladite algue sous forme fraîche, congelée, sèche, entière, fragmentée ou broyée.
3 Compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 1 et 2 caractérisées en ce que ledit extrait est obtenu par macération des thalles de ladite algue, suivie de filtration, centrifugation, ultrafiltration et concentration.
4 Compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 2 et 3 caractérisées en ce que la macération peut être remplacée par des techniques à contre courant, la décoction, l'extraction sous reflux, l'extraction à l'aide d'ultrasons, de micro-ondes associée ou non aux solvants, l'extraction par des fluides supercritiques, notamment le CO2 supercritique avec ou sans co-solvant.
- Compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 2 à 4 caractérisées en ce que le solvant d'extraction est choisi parmi le groupe constitué par l'eau, les solvants chlorés tel que le chloroforme, les éthers tels que l'éther éthylique, l'acétone, les esters en C2 à C8 tels que l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle, des alcools en Cl à C6 tels que le méthanol, l'éthanol, l'isopropanol et le butanol, des polyols en C2 à C6 tels que le propylène glycol et le butylène glycol et leurs mélanges. - 22-
6 - Compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 caractérisées en ce que ledit extrait est utilisé soit sous forme liquide soit sous forme sèche obtenue par séchage, précipitation, atomisation, évaporation ou lyophilisation.
7 Compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisées en ce que ledit extrait est incorporé ou associé à un vecteur cosmétique adéquat tel que par exemple des agents filmogènes, des liposomes, des chylomicrons, des micelles, des cyclodextrines, des macro-, micro- et nanoparticules, des macro-, micro- et nanocapsules ou absorbé sur des polymères organiques, des supports textiles et minéraux.
8 - Compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 caractérisées en ce que qu'elles comprennent de 0,1% à 40% en masse, en particulier de 0,5% à 4% en masse d'extrait de ladite algue.
9 - Compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 caractérisées en ce que lesdites compositions se présentent sous toute forme galénique appropriée pour des soins d'hygiène ou des soins de la peau et des cheveux dans un milieu physiologiquement acceptable.
- Utilisation d'un extrait de Rissoella verruculosa en tant que principe actif, ledit principe actif étant incorporé seul ou en association avec au moins un autre principe actif, pour des compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques en application topique telles que définies dans l'une des revendications 1 à 9.
11 - Utilisation d'un extrait de ladite algue selon la revendication 10 caractérisée en ce que lesdites compositions sont destinées à lutter contre le stress cellulaire, en régulant l'induction de diverses protéines, notamment des protéines de choc thermique HSP mais aussi des métallothionéines et des antioxidants. - 23-
12 - Utilisation d'un extrait de ladite algue selon la revendication 10 caractérisée en ce que lesdites compositions sont destinées à renforcer l'homéostasie cellulaire et maintenir le potentiel redox intracellulaire en réponse au stress, en régulant l'induction des thiorédoxines et des glutarédoxines.
13 - Utilisation d'un extrait de ladite algue selon la revendication 10 caractérisée en ce que lesdites compositions sont destinées à lutter contre les processus inflammatoires en réponse au stress, en régulant l'induction des protéines impliquées dans ces processus, notamment des interleukines, des lipoxygénases et des prostaglandines.
14 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 10 à 13 caractérisée en ce que lesdites compositions sont destinées à protéger les composants cellulaires notamment les protéines et le matériel génétique ainsi que le potentiel antioxydant endogène.
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| MA58206B1 (fr) * | 2022-10-07 | 2024-08-30 | Universite Chouaïb Doukkali | Formulation et procédé de fabrication d'une pommade cicatrisante à base de l'extrait méthanolique de l'algue rouge Halopitys incurvus. |
Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
| IT1248347B (it) * | 1991-06-21 | 1995-01-05 | Ruggero Bandelloni | Estratti di origine algale con attivita' antivirale, in particolare nei confronti di retrovirus, e farmaci che li contengono |
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Patent Citations (1)
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| IT1248347B (it) * | 1991-06-21 | 1995-01-05 | Ruggero Bandelloni | Estratti di origine algale con attivita' antivirale, in particolare nei confronti di retrovirus, e farmaci che li contengono |
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| MA58206B1 (fr) * | 2022-10-07 | 2024-08-30 | Universite Chouaïb Doukkali | Formulation et procédé de fabrication d'une pommade cicatrisante à base de l'extrait méthanolique de l'algue rouge Halopitys incurvus. |
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