FR2843883A1 - Extraits de sangsues pour psoriasis - Google Patents
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Abstract
Procédé d'obtention d'un extrait actif de sangsues comprenant :- l'obtention d'un extrait brut de sangsues laissées pendant trois à sept mois sans nourriture, ledit extrait comprenant les substances actives- l'homogénéisation de l'extrait brut- la resuspension et l'incubation de l'extrait brut dans une solution saline à pH 6,8-7,1, à température ambiante, pendant moins de 20 heures- la collecte du surnageant comprenant les substances actives, ledit surnageant formant l'extrait actif.
Description
i L'invention concerne un procédé d'obtention d'extraits de sangsues ayant
des
propriétés cosmétiques et/ou pharmaceutiques. Les produits selon l'invention ont notamment pour propriété de stimuler les échanges de protéines et de lipides dans la peau, leur conférant une action antiinflammatoire en général, et contre certaines 5 maladies dermatologiques notamment le psoriasis, l'herpès, l'eczéma, l'acné en particulier.
On connaît déjà l'utilisation de sangsues pour préparer des extraits
biologiquement actifs ayant des propriétés médicales notamment sur le système nerveux, cardio-vasculaire, immunitaire. Le document RU 2,129,428 décrit 10 l'utilisation de sangsues pour obtenir une action positive sur l'état psychosomatique.
Le document RU 1,552,420 décrit la préparation d'extraits ayant une action
antithrombotique, thrombolytique, antiathérosclérotique.
Le document brevet FR 2,603,188 décrit l'utilisation d'extraits de poudres de
sangsues lyophilisés possédant une activité enzymatique à effet cosmétique 15 (stimulation des échanges de protéines et de lipides).
Le document RU 2,153,325 décrit la préparation d'un extrait d'un homogénat de sangsues médicinales, notamment à partir des sécrétions de glandes salivaires, du sang
ou du tube digestif possédant une activité anti-stress et antioxydante.
Le document US 5,977,056 décrit une méthode de traitement de la thrombose 20 utilisant un extrait de glandes salivaires de sangsues comprenant un polypeptide (hémentine), éventuellement en combinaison avec des anticoagulants tels que l'hirudine. Toutefois les méthodes connues de l'art antérieur présentent notamment pour inconvénient que dans certaines conditions l'administration des extraits de sangsues est 25 à l'origine d'irritations et de réactions allergiques, ou bien encore de perte d'activité
dans le produit final.
L'invention vise à pallier les inconvénients de l'art antérieur.
Les inventeurs ont démontré de manière surprenante que la méthode d'extraction, ainsi que le stade de développement des sangsues à partir desquelles les 30 extraits sont préparés, ont un impact déterminant sur l'efficacité thérapeutique et/ou
cosmétique de ces extraits et leur absence d'effets secondaires.
A cet effet l'invention a pour objet de définir dans un premier temps un procédé d'obtention d'un extrait de sangsues comprenant: - l'obtention d'un extrait brut de sangsues laissées pendant trois à sept mois sans 35 nourriture, ledit extrait comprenant les substances actives l'homogénéisation de l'extrait brut - la resuspension et l'incubation de l'extrait brut dans une solution saline à pH 6,8-7,1,
à température ambiante.
- la collecte du surnageant comprenant les substances actives, ledit surnageant formant l'extrait actif. L'incubation se fait par mélange à vitesse constante pendant 5 à 20 heures; au
delà de 20 heures l'activité de l'extrait final sera nettement moins élevée.
La resuspension se fait de préférence dans une solution double volume à pH 6,87,1.
Le procédé comprend de manière préférée après l'étape de collecte du surnageant, une étape de correction de pH, jusqu'à un pH de 7,4 à 7,8, puis une étape
de séchage.
L'étape de collecte se fait de préférence sans rinçage à l'eau distillée ou en
solution physiologique, et sans séchage.
Selon une réalisation, le procédé comprend une étape de conservation, par
lyophilisation ou analogue, de l'extrait actif.
Les sangsues utilisées sont typiquement des sangsues Hirudo medicinalis.
Selon un autre aspect l'invention concerne un extrait de sangsue non irritant,
comprenant au moins une substance active contre le psoriasis et/ou antiinflammatoire, 20 susceptible d'être obtenu par le procédé décrit cidessus.
L'invention concerne également toute composition pharmaceutique comprenant
un extrait selon le procédé précité et un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
D'autres avantages et objets de l'invention apparaîtront à la lecture de la
description détaillée illustrée par les exemples suivants. 25
Exemple 1.
Le protocole d'obtention de l'extrait actif final par exemple compris les étapes suivantes: prendre 500 sangsues médicinales (poids total 550g), les laisser jener quatre mois, après plusieurs repas avec des produits sanguins agréés, homogénéiser, 30 centrifuger et collecter le surnageant, amener le pH à 7,4-7,8, lyophiliser pour obtenir
une poudre d'environ 65g.
Exemple 2.
Etude des actions éventuellement irritantes et allergéniques des préparations, de la 35 toxicité, de l'influence à long terme sur l'application sur la peau, sur les structures morphologiques de la peau et du foie d'animaux expérimentaux selon la méthode de
l'exemple 1.
Les études ont été réalisées sur 75 cobayes. Les préparations ont été appliquées quotidiennement pendant 30 jours à des concentrations de 5% (n=l), de 1% (n=20) et 5 0,1% (n=20). Comme contrôle on a utilisé une solution physiologique de NaCl à 0,85% (n=15). Il a été démontré que le surnageant ne possède pas d'action irritante et allergique sur la peau, qu'il n'y a pas de conséquences négatives sur la structure morphologique de la peau et du foie et qu'il n'y a pas d'action toxique générale sur l'organisme. Il n'y a pas d'incidence sur le poids, les animaux sont actifs, mobiles, ont 10 le poil brillant et un bon appétit. Le pouvoir allergisant a été déterminé en mesurant les troubles de pigmentation en des endroits séparés de la peau. Tous les résultats ont
démontré l'absence d'effets allergisants.
Exemple 3.
On a étudié le contenu total en protéines solubles de la peau sur des animaux expérimentaux par des méthodes standards appropriées (2). Les études ont été faites sur 60 cobayes. Le surnageant a été appliqué quotidiennement pendant 30 jours à une concentration de 2% (n=20), 0,5% (n=20). On a utilisé comme contrôle une solution physiologique NaCl 0,85% (n=20). Les résultats sont les suivants: une solution à 2% 20 de surnageant augmente le contenu en protéines solubles total de 73,6%, une solution à 0,5% entraîne une augmentation de 35,4%. La solution physiologique ne provoque pas de changement sur ce facteur. Les résultats semblent indiquer une stimulation des
échanges protéiques au niveau de la peau.
Exemple 4.
La préparation obtenue de sangsues médicinales de l'exemple 1 a été utilisée pour préparer des gels à 3% et 0,5% (5% propylèneglycol, 0,5% Ultrez-10, 0,4% germaben
II, 0,2% de triéthanolamine, 0,2% de fragance, 0,1% EDTA et eau distillée) .
L'action anti-inflammatoire des gels a été étudiée. Le gel à 0,5% a été testé comme 30 médicament selon un protocole d'analyse de médicaments. Les tests ont été conduits sur 40 rats blancs de la lignée Wistar (poids corporel 200+15g). Les animaux ont reçu une injection intradermique de 0, 5 ml d'une solution de formol à 10%. Après trois
heures d'application, la taille des papules a été étudiée dans la zone d'injection.
Les résultats ont été les suivants: 100% chez les animaux témoins (placebo - gel 35 n = 10), 92,4% avec un extrait désigné prototype de l'art antérieur non obtenu par le procédé selon l'invention, 58,5% pour un gel à 0,5% selon l'invention, 14,6% pour un
gel à 3%.
Ces résultats démontrent l'action anti-inflammatoire des gels comprenant des extraits actifs obtenus par la demanderesse, ces gels permettant une réduction de l'inflammation dans la zone d'injection intradermique de formol.
Exemple 5.
Des tests cliniques à l'aide de gels 0,5% (préparation de l'exemple 4), ont été conduits sur des patients ayant une peau sèche, sensible, fragile, au niveau du visage chez des 10 individus de 30 à 50 ans (20 personnes).
Le gel a été placé sur le visage quotidiennement pendant trente jours. La crème n'a pas d'action irritante ni allergénique et réduit la sécheresse de la peau chez les individus ayant la peau sèche. Les mesures d'échange d'humidité avant et après l'application du gel montrent que les propriétés d'hydratation de la peau sont améliorées de 42,5% 15 (p<0,01). Les tests d'élastométrie montrent une augmentation de 6% de l'élasticité de
la peau.
Exemple 6.
Pour ces essais on a utilisé une préparation de type onguent à concentration de 3% et 20 0,5%; les préparations ont été intégrées dans une composition comprenant 50% de lanoline et respectivement 47 ou 49,5% de vaseline. Comme contrôle on a utilisé un onguent avec une solution 0, 85% de NaCl. L'action thrombolytique des onguents a été analysée en utilisant le modèle de stase veineuse de Wessler (3). Une action antiinflammatoire a également été étudiée dans des conditions non stériles: 12 heures 25 après l'application sur les articulations, on a observé un pyresis dans la zone d'articulation. Après 24 heures de formation d'un thrombus dans des veines bulbaires de rats, on a testé des onguents pour une application quotidienne pendant six jours. Le septième jour l'analyse du degré de canalisation des vaisseaux a été effectuée. Les
résultats sont les suivants.
Onguent Part finale de thrombine Action (%) antiinflammatoire 3% onguent (n=10) 15 10 ++++
0,5% onguent (n=10) 45 10 ++±
0,5% onguent - prototype 75 10 ++ (n=10) Onguent- contrôle (n=10) 85 5 +
Ainsi l'onguent obtenu présente une activité thrombolytique et antiinflammatoire.
Exemple 7.
On a utilisé l'action hypotensive de l'onguent (exemple 6) par rapport au contrôle (onguent avec une solution volume égal 0,85% NaCl). On a utilisé des rats de la lignée SHR (rats spontanément hypertensifs). La pression a été enregistrée dans une veine de la queue deux heures après l'application de l'onguent sur la peau de la queue. Pour un onguent utilisé à 3% la pression (p<0,01) a été réduite de 160+5 jusqu'à 110 10 mm 10 Hg (n=14), pour un onguent à 0,5%, elle a réduite de 155 5 jusqu'à 130 10 mm Hg.
On n'observe pas de modifications chez le contrôle pour ce paramètre.
Les tests ont été conduits chez des patients volontaires ayant souffert d'une hypertension idiopathique de degré 2. Après application de l'onguent la pression sanguine a été mesurée après deux heures. Pour un onguent à 3% la pression est 15 statiquement (p<0,01) réduite de 165/100 à 125/87 mm Hg (n=14), pour un onguent à
0,5% elle est réduite de 170/115 à 138/95 mm Hg.
Ainsi l'onguent possède des propriétés hypotensives.
Exemple 8.
Des tests cliniques ont été réalisés avec des onguents 0,5% (exemple 6) sur des patients souffrants de thrombophlébite avec un trouble de trophicité. Le groupe a été constitué de 30 hommes et 20 femmes âgés de 32 à 65 ans. Le groupe testé comprenait 20 malades (10 hommes et 10 femmes). Avant l'application de l'onguent, on a appliqué un agent antiseptique sur les surfaces érosives et ulcératives, à l'aide d'une solution 25 inodore antiseptique. La surface a ensuite été séchée à l'aide d'une gaze. L'onguent en quantité de 2 à 5g a été appliqué. Pour optimiser le traitement dans la zone épicutanée on a appliqué des ultrasons en mode pulsé (4 secondes) avec une intensité 0,4-0,6 W/cm2. La durée d'application de l'impulsion a été de 8 à 10 secondes. Le traitement a
été traité en dix fois.
Cette méthode de traitement n'a pas engendré de sensations de douleur. Dès 3 à 4 applications on observe une réduction de l'oedème, de la sensation d'inconfort, de
peine et de fatigue dans la zone de thrombose des vaisseaux.
On a également effectué une palpation dans la zone de la veine testée. On observe 5 manifestement une réduction de toutes les inflammations. L'état général des patients est également nettement amélioré, notamment le sommeil et l'appétit sont restaurés. La différence entre la température centrale et périphérique est restaurée ce qui traduit un
retour à la normale de la micro-circulation et de la circulation périphérique.
Pour les patients du groupe témoin (sans onguent) après 10 procédures on n'observe 10 pas d'amélioration notable. Un autre groupe de 25 patients souffrants d'ulcères trophiques a été testé, ulcères ds à des troubles de la circulation sanguine veineuse et artérielle. L'application des onguents a été effectuée après l'application d'antiseptiques sur la surface. On remarque qu'après environ cinq jours le processus d'épithélisation a débuté pour à peu près tous les patients. L'épithélisation s'est effectuée en 17 à 35 15 jours pour tous les patients. Pour 80% des malades, les ulcères trophiques ont été complètement guéris. Il faut également remarquer une baisse de la douleur et des oedèmes. Des applications locales épicutanées ont été très bien tolérées, sans réaction
non souhaitée. On n'observe pas non plus d'intoxication.
Exemple 9.
Des tests cliniques ont été réalisés avec des onguents 0,5% sur des patients souffran de psoriasis (à différents stades), âgés de 30 à 75 ans (20 personnes). L'apparition des plaques de psoriasis chez les patients était de nature saisonnière. L'onguent a été appliqué dans la zone malade quotidiennement pendant 4 à 8 jours. Les patients du 25 groupe contrôle (n=25) recevaient un traitement conventionnel. L'onguent n'a pas
d'effet irritant ni allergique.
Une seule application d'onguent a suffi pour entraîner une réduction notable des symptômes de psoriasis (de 10 à 15%). Le recouvrement total de la surface de la peau sans altération de la pigmentation a été obtenu dans 50% des cas après 4 ou 5 séances 30 d'application de l'onguent. La durée de traitement est réduite de 50 à 60% par rapport au contrôle. L'application préventive de l'onguent chez des patients sensibles au psoriasis réduit la fréquence d'apparition des plaques de 50%. Ainsi la préparation
obtenue permet une action préventive et curative pour le traitement du psoriasis.
Ces exemples ne sont pas limitatifs, des premiers essais sont effectivement
également favorables pour le traitement de l'acné, de l'herpès et de l'eczéma.
En complément des expériences présentées, la demanderesse fait les observations suivantes. Les résultats obtenus par les inventeurs indiquent que avec l'utilisation de sangsues avant trois mois de jene, les substances actives n'ont pas encore une activité suffisante ou sont produites en quantité insuffisante pour obtenir l'effet souhaité; après sept mois de jene, ces substances semblent perdre leur activité. Par 3 mois, on entend environ 3 mois et par 7 mois, environ 7 mois, le niveau d'activité n'étant pas 10 nécessairement brusquement modifié à une date précise. Les analyses effectuées sur les extraits actifs de sangsues obtenus montrent que ceux-ci comprennent les composants suivants: destabilase, inhibiteur de kallikréine,
hyaluronidase, kininogénase, kininase, cholestérinestérase, bdelline, egline.
Comme indiqués précédemment, le procédé selon l'invention ne comprend de 15 préférence pas de lavage préliminaire à l'eau distillée par une solution physiologique, ni de séchage: ces opérations entraînent une perte partielle de la sécrétion des glandes
salivaires de la sangsue.
L'étape distinctive essentielle de resuspension-incubation semble conduire à la
dégradation de complexes de substances, ces substances alors sous forme libre 20 individualisée se retrouvant en solution sous une forme beaucoup plus active.
L'activité du produit final est accrue d'un facteur de l'ordre de 7 à 10 par rapport au produit obtenu sans cette étape de resuspension-incubation. De plus, par des mécanismes pour l'instant non totalement élucidés mais de manière surprenante, cette
étape permet l'apparition d'une activité anti-psoriasis.
Au vu des résultats très positifs obtenus, l'invention propose également une méthode de traitement comportant l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace à un patient, de l'extrait actif. Divers moyens d'administration sur la peau (bain, crèmes, solutions...) peuvent être utilisés. L'extrait actif peut être incorporé avantageusement dans une composition pharmaceutique qui peut être administrée à un patient de 30 manière orale ou parentérale. Par parentérale on entend notamment une administration sous cutanée, intraveineuse, intra-articulaire, une injection intra-trachéique, des
techniques d'infusion.
Selon une réalisation une composition pharmaceutique incorporant l'extrait comprend typiquement un excipient ou un transporteur qui est préférablement choisi de manière que la formulation puisse être administrée par voie parentérale, telle qu'une
solution saline stérile.
On utilise par exemple des transporteurs liquides appropriés tels qu'une solution aqueuse stérile, une solution saline, une solution aqueuse de dextrose, une solution de sucre, de l'éthanol, du glycol et des huiles. Des comprimés et capsules destinés à une administration orale peuvent contenir des excipients habituels tels que des agents liants, des agents lubrifiants, etc. Des préparations liquides orales peuvent être sous forme de suspension aqueuse ou huileuse, de solution, d'émulsion, de sirop, d'élixir ou analogue, ou peuvent être 10 présentées sous forme d'un produit en poudre reconstituable en présence d'eau ou d'un autre transporteur approprié. De telles préparations liquides peuvent contenir des additifs habituels tels que des agents de suspension, des agents émulsifiants, des
transporteurs non aqueux.
Par ailleurs, l'extrait brut obtenu selon la présente invention peut être obtenu non 15 seulement par une technique de type broyage des sangsues (exemple 1), mais également par prélèvement au même stade (après jene pendant 3 à 7 mois) de bactéries Aeromonas présentes dans l'intestin des sangsues; la demanderesse a démontré en effet que ces extraits contenant les Aeromonas ont une activité au moins
aussi bonne que celle d'extraits préparés par broyat.
Compte tenu de l'absence d'effets secondaires et des propriétés biologiques spécifiques et avantageuses de l'extrait à l'aide du procédé décrit, par rapport aux extraits obtenus jusqu'à présent, les inventeurs en déduisent que les extraits actifs n'ont pas exactement la même composition que les extraits de l'art antérieur. Les inventeurs émettent l'hypothèse que certains composés à l'origine d'effets secondaires sont 25 absents, et/ou que certains composés spécifiques inhibant ces effets sont récupérés lors
de l'extraction.
Les substances actives de l'extrait de sangsues peuvent être utilisées dans un but thérapeutique ou cosmétique, en particulier selon la concentration de l'extrait actif en substances actives, et l'importance du trouble de l'individu. 30
Claims (14)
1. Procédé d'obtention d'un extrait actif de sangsues comprenant: l'obtention d'un extrait brut de sangsues laissées pendant trois à sept mois sans nourriture, ledit extrait comprenant les substances actives l'homogénéisation de l'extrait brut - la resuspension et l'incubation de l'extrait brut dans une solution saline à pH 6,8-7,1, à température ambiante, pendant moins de 20 heures
- la collecte du surnageant comprenant les substances actives, ledit surnageant formant 10 l'extrait actif.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'incubation se fait avec
mélange à vitesse constante pendant 5 à 20 heures.
3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la resuspension se fait
dans une solution double volume à pH 6,8-7,1.
4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend après l'étape de collecte du surnageant, une étape de correction du pH, 20 jusqu'à un pH de 7,4 à 7,8, puis une étape de séchage.
5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'étape de collecte se fait sans rinçage à l'eau distillée ou en solution physiologique, et
sans séchage.
6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il
comprend une étape de conservation, par lyophilisation ou analogue, de l'extrait actif.
7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les 30 sangsues sont des sangsues Hirudo medicinalis.
8. Extrait de sangsue non irritant, comprenant au moins une substance active contre le psoriasis et/ou anti-inflammatoire, susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'une
quelconque des revendications 1 à 7. 35
9. Composition pharmaceutique comprenant un extrait selon la revendication 8 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
10. Composition cosmétique comprenant un extrait selon la revendication 8.
11. Composition pharmaceutique selon la revendication 9 pour une administration en combinaison avec un anti-inflammatoire.
12. Extrait selon la revendication 8, en tant que médicament.
13. Utilisation d'un extrait selon la revendication 8, pour la préparation d'un médicament anti-psoriasis et/ou anti-inflammatoire.
14. Utilisation d'un extrait susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'une 15 quelconque des revendications 1 à 7, pour la préparation d'un médicament contre
l'herpès, l'eczéma, l'acné.
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