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FR2668775A1 - Procede continu permettant la preparation et la separation de glucose et de fructose a partir de saccharose. - Google Patents

Procede continu permettant la preparation et la separation de glucose et de fructose a partir de saccharose. Download PDF

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FR2668775A1
FR2668775A1 FR9112670A FR9112670A FR2668775A1 FR 2668775 A1 FR2668775 A1 FR 2668775A1 FR 9112670 A FR9112670 A FR 9112670A FR 9112670 A FR9112670 A FR 9112670A FR 2668775 A1 FR2668775 A1 FR 2668775A1
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Abstract

L'invention concerne un procédé de préparation de glucose et de fructose à partir de saccharose, au moyen d'une hydrolyse enzymatique, dans laquelle une solution de saccharose est hydrolysée, sous forme de procédé continu, par une enzyme invertase immobilisée sur un substrat solide, et une fraction glucose et une fraction fructose sont séparées de la solution obtenue par l'hydrolyse, sous forme de procédé continu, au moyen d'un procédé chromatographique à lit fluide simulé.

Description

Procédé continu permettant la préparation et la séparation de glucose et de fructose à partir de saccharose.
L'invention concerne un procédé amélioré pour la préparation de glucose et de fructose à partir de saccharose. Le procédé comprend l'hydrolyse du saccharose par une enzyme immobilisée et la séparation chromatographique du glucose et du fructose du produit d'hydrolyse, au moyen d'un lit fluide simulé.
Habituellement, on prépare le glucose et le fructose à partir de solutions ou de sirops de saccharose, en hydrolysant le saccharose par une catalyse acide (par exemple en utilisant un échangeur de cations sous forme acide) ou d'une manière enzymatique, par l'enzyme invertase. La séparation du glucose et du fructose de la solution hydrolysée s'effectue au moyen de procédés chromatographiques qui sont problématiques du fait que la séparation est réalisée sous la forme d'un procédé discontinu qu'on peut difficilement appliquer à l'échelle industrielle, et les quantités d'extrait sec des solutions de glucose et de fructose obtenues sont faibles.
Par exemple, le brevet américain n0 3 692 582 décrit un procédé dans lequel on prépare le glucose et le fructose à partir du saccharose dans un procédé discontinu.
Dans cette demande de brevet, on hydrolyse le saccharose en utilisant une catalyse acide ou un échangeur de cations sous forme acide. On traite le produit d'hydrolyse obtenu par un procédé chromatographique discontinu, en utilisant un échangeur de cations sous la forme calcium, de préférence un échangeur de cations à base de polystyrène-sulfonate, réticulé au moyen de divinylbenzène, comme garnissage de colonne. Dans ce brevet, les plus grandes quantités d'extrait sec de la fraction glucose obtenue sont de 12 g / 100 ml.
La demande de brevet britannique n0 1 085 696 décrit un procédé discontinu comprenant l'hydrolyse du sac charose et la séparation des fractions glucose et fructose dans une seule et même colonne garnie d'un échangeur de cations partiellement sous forme acide et partiellement sous forme calcium (résine à base de polystyrène sulfoné, réticulée au moyen de divinylbenzène). Le procédé de cette demande de brevet permet d'obtenir une séparation efficace du glucose et du fructose, et il est indiqué que les plus grandes quantités d'extrait sec des fractions glucose et fructose obtenues sont de 141 g/l et 132 g/l.
Barker, P.E. et Chuach, C.H. ('The Chemical Engineer", août/septembre 1981, pages 389-393) décrivent un procédé chromatographique semi-continu pour la séparation du glucose et du fructose dans une solution contenant 50 * en poids de solides (50/50 % de fructose et de glucose), les quantités d'extrait sec des solutions obtenues étant supérieures à 10 % en poids pour la fraction glucose et supérieures à 4,1 % en poids pour la fraction fructose.
Une récente mise au point de la technologie de séparation est la chromatographie en lit fluide simulé, dont le but est de fournir un procédé en continu avec un degré de séparation élevé et, en même temps, des plus grandes quantités d'extrait sec des solutions, de façon à réduire les phases de concentration.
La demande de brevet finlandaise n0 882740 décrit un procédé à lit fluide simulé pour fractionner la mélasse en fractions bétaine, saccharose et mélasse résiduaire.
Des procédés chromatographiques en continu pour la séparation du glucose et du fructose dans des solutions contenant du sucre sont décrits, par exemple, dans les brevets américains n0 4 157 267 (zéolithe comme phase fixe), n0 4 267 054 (une résine échangeuse d'ions, telle que l'échangeur de cations Duolite C-20X4 sous la forme calcium, comme phase fixe), n0 4 332 623 (par exemple un échangeur de cations fortement acide Diaion FRK-01 sous la forme calcium, comme phase fixe), n0 4 379 751 (un échan geur de cations sous la forme calcium, comme le Duolite C20X4, comme phase fixe).Les procédés qui sont décrits dans ces brevets sont censés donner des solutions de glucose et de fructose contenant des quantités d'extrait sec aussi élevées que 20 % et plus, jusqu a presque 30 %.
Quand on effectue la séparation en continu en utilisant un lit fluide simulé, les impuretés contenues dans la solution d'hydrolyse ont tendance à affecter le résultat de la séparation. On sait qu'une hydrolyse acide du saccharose aboutit toujours à une solution impure contenant des disaccharides de différents types, en plus du glucose et du fructose. Une hydrolyse enzymatique est plus spécifique qu'une hydrolyse acide et, dans ce cas, il se forme seulement des petites quantités d'impuretés indésirables. Pour que l'hydrolyse puisse être réalisée sous forme de procédé continu, il est nécessaire d'immobiliser l'enzyme sur un substrat approprié. On a obtenu des résultats prometteurs en utilisant de la DEAHP-cellulose comme substrat [ Hradil,
J. et Svek F., "Enzyme Microb. Technol.", 3, (1981) 331335].Cependant, le substrat utilisé est relativement souple, et c'est pourquoi il n'est pas particulièrement approprié pour un procédé industriel à grande échelle.
Les brevets américains n0 4 110 164 et 4 168 250 décrivent des résines échangeuses d'ions qui conviennent pour être utilisées comme substrats dans l'immobilisation de macromolécules, comme la glucose-isomérase (une enzyme isomérisant le glucose en fructose). On prépare de telles résines échangeuses d'ions à partir d'un dérivé de cellulose aggloméré, renforcé par du polystyrène et dérivé par exemple au moyen de groupes carboxyméthyle ou diéthylaminoéthyle.
Le but de la présente invention est de réaliser un procédé de préparation de glucose et de fructose à partir de solutions contenant du saccharose, avec des rendements élevés et un degré de pureté suffisamment élevé, d'une ma nière telle que l'hydrolyse et la séparation des fractions puissent être réalisées, séparément l'une de l'autre, sous forme de procédé continu, et que les concentrations des produits des solutions obtenues par le procédé de séparation soient suffisamment élevées du point de vue économique.
Ce problème est résolu selon l'invention, en ce qu'on combine une hydrolyse enzymatique et une chromatographie en lit simulé, l'opération d'hydrolyse étant réalisée au moyen de l'enzyme invertase immobilisée sur un substrat à base de cellulose.
La combinaison d'une hydrolyse enzymatique en continu à une chromatographie en continu en lit fluide simulé selon l'invention représente un perfectionnement considérable par rapport au procédé discontinu de production de glucose et de fructose à partir du saccharose, et elle permet d'obtenir du glucose et du fructose ayant un degré de pureté très élevé, à des rendements élevés.
Le procédé selon l'invention comprend une opération d'hydrolyse dans laquelle le saccharose en solution aqueuse est hydrolysé par l'enzyme invertase immobilisée sur un dérivé cellulosique aggloméré, de façon à obtenir une solution d'hydrolyse contenant du fructose et du glucose substantiellement purs, et une opération de séparation dans laquelle une fraction glucose et une fraction fructose sont séparées de la solution d'hydrolyse au moyen d'une chromatographie en lit fluide simulé.
L'opération d'hydrolyse est réalisée en continu en amenant une solution de saccharose dans une colonne pourvue de l'enzyme immobilisée. L'écoulement peut s'effectuer par gravité ou au moyen d'une pompe. La teneur en saccharose de la solution à amener dans la colonne est généralement comprise entre 30 et 60 % en poids.
Le substrat de l'enzyme invertase est une résine à base de cellulose agglomérée, renforcée avec du polystyrè ne. Il est solide du point de vue mécanique et résistant du point de vue chimique, et la dimension de ses particules est aussi appropriée à une utilisation à l'échelle industrielle. Un substrat approprié est la diéthylaminoéthyl (DEAE)-cellulose, qu'on prépare de la manière décrite dans les brevets américains n0 3 823 133, 4 110 164 et 4 168 250.
La température est, de préférence, d'environ 500C pendant l'opération d'hydrolyse.
Le saccharose est hydrolysé, pendant 1' opération d'hydrolyse, presque complètement en glucose et en fructose. Les fractions glucose et fructose sont séparées de la solution d'hydrolyse obtenue, au moyen d'un système chromatographique à lit fluide simulé ; un tel procédé est décrit, par exemple, dans la demande de brevet finlandaise 882740.
Ce procédé de séparation fait appel à plusieurs colonnes chromatographiques montées en série. La série peut comporter 2 à 14 colonnes. Les colonnes sont reliées entre elles au moyen de conduites de façon à ce que le recyclage à travers toutes les colonnes puisse s'effectuer avec une pompe unique. A la place d'une pompe unique, on peut utiliser plusieurs pompes ; par exemple, on peut prévoir des pompes entre certaines colonnes ou entre chaque colonne. La vitesse d'écoulement est de 2 à 5 m3/heure/m2 de section transversale de la colonne.
Les colonnes sont pourvues de conduites d'amenée et de conduites de produit, respectivement pour amener l'eau d'élution et la solution d'alimentation dans la colonne, et pour recueillir une fraction de la colonne. Les conduites d'amenée et de produit sont pourvues de vannes et, ainsi, on peut arrêter l'amenée ou le soutirage quand une quantité de solution prédéfinie a été amenée ou soutirée. Les conduites reliant les colonnes sont aussi pourvues de vannes. Les conduites d'amenée sont pourvues, en outre, de pompes pour pomper l'eau d'élution et amener la solution dans les colonnes présélectionnées ; les conduites comportent aussi des échangeurs de chaleur. Les conduites de produit sont pourvues d'appareils montés en série pour contrôler la qualité du produit pendant l'opération.De tels appareils montés en série comprennent un débitmètre, un den sitomètre, un détecteur d'indice de réfraction, un conduc tivimètre, un appareil de mesure de l'activité optique, un thermomètre, etc... Pour contrôler le procédé, on utilise un microprocesseur ou un ordinateur.
La figure 1 est une vue schématique d'un appareil spécifique, qui convient pour être utilisé dans l'opération de séparation. L'appareil comprend des colonnes 1 à 4 qui sont reliées en série ; des conduites 9 à 16 reliant les colonnes entre elles ; un réservoir 17 pour la solution d'hydrolyse ; un réservoir d'eau 18 ; une conduite d'entrée 19 pour la solution d'hydrolyse ; une conduite d'entrée d'eau 20 ; une pompe de circulation 21 ; une pompe d'entrée 22 pour la solution d'hydrolyse ; une pompe d'entrée d'eau 23 ; des échangeurs de chaleur 24 à 26 ; des conduites de sortie 27 à 29 pour les fractions de produits ; et des vannes 30 à 62.
La figure 2 est une vue schématique d'un appareil comportant huit colonnes 1 à 8.
Les colonnes sont garnies d'un échangeur de cations du type gel fortement acide (comme du Finex VO9 C ; fabriqué par Cultor Ltd.), de préférence sous la forme calcium.
La solution d'alimentation est une solution d'hydrolyse obtenue dans l'opération d'hydrolyse et généralement diluée, jusqu'à l'obtention d'une quantité d'extrait sec de 50 à 60 % en poids, avec de l'eau ou avec une solution recyclée de l'opération de séparation, et elle contient du glucose et du fructose et de très petites quantités d'oligosaccharides sous forme de solutés. On ajuste la température de la solution d'alimentation à 40 à 850C avant de l'introduire dans le système de séparation.
La température de l'eau utilisée pour l'élution est comprise, de préférence, entre 60 et 700C.
Pendant la séparation, une portion de solution d'alimentation est recyclée à travers la série de colonnes au moyen des pompes. On ajoute une nouvelle portion de so- lution dans la série de colonnes, entre la fraction oligosaccharides et la fraction fructose, au sommet d'une colonne préselectionnée. Tandis qu'on introduit la solution d'alimentation dans une colonne, on recueille simultanément une fraction glucose par le bas d'une autre colonne. Dans le même temps, le fructose est élué dans une autre colonne encore, tandis qu'on ajoute de l'eau d'élution d'une manière telle que la quantité de solution reste constante dans le système.
Les quantités d'extrait sec des fractions glucose et fructose obtenues grâce au procédé selon l'invention sont comprises entre 25 et 33 % en poids, et le glucose et le fructose des fractions obtenues sont sous une forme substantiellement pure ( > 95 %). D'une manière avantageuse, le glucose et le fructose peuvent être cristallisés à un grand rendement dans les fractions.
On explique le procédé selon l'invention au moyen des exemples suivants, qui ne sont pas restrictifs du champ d'application de l'invention.
Dans les exemples, l'activité enzymatique est indiquée en unités Sumner (SU). Une unité Sumner correspond à la quantité d'enzyme qui forme 1 mg de sucre inverti, en 5 minutes, à pH 4,5 et à 200C, dans des conditions normales (5 ml d'une solution de saccharose à 6,5 % + 1 ml de solution d'enzyme).
EXEMPLE 1
Immobilisation de l'invertase
Comme substrat pour l'invertase, on utilise de la diéthylaminoéthylcellulose agglomérée, renforcée avec du polystyrène, qui a été préparée, par exemple, de la manière décrite dans les brevets américains n0 3 823 133, 4 110 164 et 4 168 250. On immerge 200 mg de ce substrat de DEAE-cellulose dans de 1 eau, on chauffe à 800C, et on l'abandonne pendant une nuit, à la température ambiante. On sépare le substrat de l'eau par aspiration, au moyen d'un entonnoir en verre fritté.
L'enzyme utilisée est un produit commercial de la firme Honeywill and Stein Ltd., dont l'activité enzymatique indiquée est de 6.260 unités Sumner/ml. On dilue 250 ml de concentré d'invertase (activité enzymatique de 1.565.000
SU) avec de l'eau, selon un rapport de 1:1, on mélange avec les 200 g de substrat susmentionnés, et on abandonne le mé- lange à 450C pendant 4 heures, tout en mélangeant.
Le pH de la solution résultante est de 7,0, la conductivité est de 1.000 pS/cm.
L'activité enzymatique liée au substrat est de 1.354.000 SU. Ainsi, l'activité de l'enzyme immobilisée dans le système est de 6.770 SU par gramme de substrat.
L'enzyme immobilisée est stockée dans du glycérol à 55 %, pH 5,8.
Hydrolyse (inversion)
On place 20 ml de l'enzyme immobilisée, préparée de la manière décrite ci-dessus, dans une colonne (1,6x10 cm), et une solution de saccharose, contenant 620 g de saccharose/l, est pompée à travers la colonne, pH 5,0, à 500C. La vitesse d'écoulement est de 40 ml par heure.
On observe que le degré d'inversion est supérieur à 99 %. La composition de la solution sortant de la colonne est la suivante
Concentration, % d'extrait sec
Glucose Fructose Saccharose Autres disaccharides
50,0 49,3 0,7
EXEMPLE 2
On utilise le même substrat que dans l'exemple 1 pour l'immobilisation de l'enzyme. On met 400 kg (1.000 1) du substrat en suspension dans de l'eau, dans un réservoir de 2.000 litres, dans lequel on le laisse absorber de l'eau pendant une nuit. On décante le substrat cinq fois, pour éliminer les solides fins, en utilisant un volume d'eau du substrat à chaque fois.
On verse dans le réservoir, qui contient le substrat, 500 kg d'une enzyme invertase du même type que dans l'exemple 1 et ayant une activité de 5.498 SU/ml, un poids spécifique de 1,14 kg/l, pH 4,8, et une conductivité de 1.050 pS/cm. On malaxe le mélange pendant une heure. Le pH de la solution résultante est de 7,2 et sa conductivité est de 800 ps/cm. On remplit le réservoir d'eau chaude, d'une manière telle que la température du réservoir est de 450C (en tout environ 1.000 1) et on continue de mélanger pendant 4 heures.
L'activité du substrat chargé de l'enzyme est de 6.030 SU/g de substrat.
On soutire de l'eau du réservoir en pompant une so- lution de saccharose contenant 620 g d saccharose/l dans le réservoir, par une vanne de fond. On pompe la suspension substrat/saccharose dans une colonne d'un volume de 2 m3 et d'un diamètre de 1 m.
On effectue l'inversion en pompant une solution de saccharose à travers la colonne, à 500C et à pH 5,0. La so- lution sortant de la colonne contient 49,2 % de fructose, 50,5 % de glucose et 0,3 % de saccharose, sur la base de l'extrait sec.
Chromatographie
La solution de fructose-glucose obtenue ci-dessus est séparée en fractions fructose et glucose par un procédé en continu faisant appel à un système de lit fluide simulé.
On utilise un appareil d'essai à l'échelle d'une installation pilote. Il comporte 8 colonnes, une pompe d'entrée, une pompe de circulation, une pompe pour l'eau d'élution, des régulateurs de flux et de pression, et des vannes d'entrée et de sortie pour les différents flux produits. Le diagramme de l'écoulement est représenté sur la figure 2.
Le diamètre de chaque colonne est de 0,2 m et la hauteur du produit de garnissage de chaque colonne est de 1,25 m. Le produit de garnissage est un échangeur de cations Finex V09 C fortement acide (fabriqué par Cultor
Ltd.), du polystyrène sulfoné, réticulé au moyen de divinylbenzène, 5,5 %, la dimension moyenne des particules est de 0,36 mm. Le produit de garnissage a été régénéré en une forme calcium.
La vitesse d'écoulement est de 120 l/h, et la température est de 650C.
La séparation du fructose et du glucose est réalisée en une séquence à 5 phases. Les colonnes sont reliées entre elles en série, et la direction de l'écoulement est toujours de la colonne 1 vers la colonne 2, etc.., et de la colonne 8 de nouveau vers la colonne 1, de la manière suivante
Phase 1 : La solution d'hydrolyse est amenée dans la colon
ne 1, et la fraction glucose est soutirée de la
colonne 2. Dans le même temps, de l'eau est ame
née dans la colonne 5, et la fraction fructose
est soutirée de la colonne 6.
Phase 2 : La fraction glucose est encore soutirée de la co
lonne 2, et dans le même temps, de l'eau est ame
née dans la colonne 5.
Phase 3 : Recyclage des solutions dans toutes les colonnes,
au moyen de la pompe de circulation.
Phase 4 : De l'eau est amenée dans la colonne 3, et la
fraction oligosaccharides est soutirée de la co
lonne 2.
Phase 5 : Recyclage des solutions dans toutes les colonnes,
au moyen de la pompe de circulation.
Après que la séquence a été complètement réalisée, on continue le programme de contrôle du procédé en revenant à la phase 1. En répétant cette séquence 7 ou 8 fois, le système est équilibré, de sorte que les compositions des fractions produits élués sont constantes.
On contrôle la séparation au moyen d'un microprocesseur, qui définit les volumes de fractions d'alimentation, de recyclage et de produit, qui ont été prédéfinis d'une manière précise. Ces volumes sont indiqués dans le tableau 1 suivant
Tableau 1
(Volume en litre)
Phase n0 1 2 3 4 5
Charge d'alimentation 30 - - -
Fraction fructose 30 - - -
Fraction glucose 30 3 - -
Fraction oligosaccharides - - - 15
Produit de recyclage - - 147 - 15
La pureté de la fraction fructose obtenue est de 96,9 % et sa concentration est de 30,0 % en poids. Le rendement est de 95 % par rapport à la charge d'alimentation.
Les résidus de saccharose sont complètement séparés du fructose. La fraction fructose contient 2,6 % de glucose et 0,7 % d'oligosaccharides.
EXEMPLE 3
On hydrolyse une solution de saccharides au moyen d'une enzyme immobilisée, substantiellement de la manière décrite dans les exemples 1 et 2. De cette manière, on pré- pare 2,6 m3 de solution d'hydrolyse, dont la quantité d'extrait sec est de 650 g/l, dont 47 % de fructose, 52 % de glucose et 1 % d'oligosaccharides.
On effectue la séparation par chromatographie en lit fluide simulé, d'une manière substantiellement analo que à celle de l'exemple 2, en utilisant quatre colonnes reliées entre elles, ayant chacune une contenance de 22 m3.
La fraction fructose obtenue contient 96 % de fructose et 4 % de glucose, exprimés en extrait sec, et pas de saccharose. L'élution du glucose et du fructose est représentée sur la figure 3, dans laquelle les points entre lesquels la fraction fructose a été récupérée sont représentés par des lignes de division.
EXEMPLE 4
A partir des fractions glucose et fructose obtenues dans l'exemple 2, le fructose peut être cristallisé, par exemple de la manière décrite dans le brevet américain n0 3 883 365, et le glucose peut être cristallisé de la manière décrite par Dean, G.R. et Gottfried, J.B., "Adv. Carboh.
Res." 5 (1950), pages 127-142 ; et Kirk-Othmer, "Encyclopedia of Chem. Tech.", tome 6, page 924.
A) Fructose
Le fructose est cristallisé par une opération de cristallisation par refroidissement à deux phases, d'une manière analogue à celle qui est décrite dans l'exemple IV du brevet américain n0 3 883 365. On ajuste la solution à pH 5,5, et on l'évapore jusqu a ce qu'on obtienne une teneur en extrait sec de 92,4 % en poids. Le temps de cristallisation est de 60 heures + 70 heures, et le rendement en fructose cristallin est de 43 % à partir de l'extrait sec.
B) Glucose
On évapore la solution de glucose jusqu a ce qu'on obtienne une teneur en extrait sec de 70 à 80 % en poids, on la refroidit et on l'introduit dans des cristallisoirs.
Le cristallisoir est généralement un réservoir cylindrique à l'horizontale, pourvu d'un malaxeur lent, d'une chemise à eau de refroidissement et de serpentins. On introduit des germes cristallins dans le cristallisoir (20 à 25 % de la cristallisation précédente est laissée dans le cristalli soir), et la solution de glucose, à environ 460C, est mé- langée aux germes, de sorte que la température initiale est d'environ 430C. On refroidit la masse lentement jusqu a 20 à 300C, pendant 3 à 5 jours ; environ 60 % du glucose sont ainsi cristallisés en cristaux de monohydrates qu'on sépare. Après cela, on sèche le glucose humide.

Claims (9)

REVENDICATIONS
1. Procédé de préparation de glucose et de fructose à partir de saccharose au moyen d'une hydrolyse enzymatique, caractérisé en ce que la solution de saccharose est hydrolysée sous forme de procédé continu au moyen d'une enzyme invertase immobilisée sur un substrat solide, et une fraction glucose et une fraction fructose sont séparées de la solution résultant de l'hydrolyse, sous forme de procédé continu, au moyen d'un procédé chromatographique en lit fluide simulé.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le substrat de l'enzyme invertase est une résine de cellulose agglomérée, renforcée par du polystyrène et dérivatisée au moyen de groupes éthylaminoéthyle.
3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le système chromatographique à lit fluide simulé comporte au moins 2 colonnes chromatographiques montées en série, et l'écoulement du liquide dans les colonnes s'effectue dans une seule direction, et que le glucose et le fructose sont séparés pendant la même séquence, ladite séquence comprenant les phases consistant à
a) amener une solution d'hydrolyse, phase au cours de laquelle une solution contenant du glucose et du fructose, obtenue par l'hydrolyse de la solution de saccharose, est amenée dans une desdites colonnes, tout en éluant pratiquement simultanément une fraction glucose par un fond d'une colonne, ledit fond étant placé dans le système de colonnes en aval du sommet de la colonne dans laquelle ladite solution d'alimentation est amenée, et tout en amenant simultanément de l'eau dans une colonne placée dans le système de colonnes en aval de la colonne dans laquelle le glucose est élué, et le fructose est élué par un fond d'une colonne, ledit fond étant situé en aval du sommet de la colonne dans laquelle l'eau est introduite,
b) éluer la fraction glucose de façon complémentai re, tout en continuant l'élution de la fraction glucose par le bas de la même colonne que ci-dessus et d'introduire de l'eau d'élution dans la même colonne que ci-dessus,
c) recycler à travers toutes lesdites colonnes les solutions contenues dans le système,
d) éluer une fraction oligosaccharides dans une colonne, tout en introduisant de l'eau d'élution dans une colonne située en aval de ladite colonne, et
e) continuer de recycler à travers lesdites colonnes les solutions contenues dans le système, et qu'on répète la séquence comportant les phases a) à e) jusqu'à l'obtention de l'équilibre.
4. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le système chromatographique à lit fluide simulé comporte au moins 2 colonnes chromatographiques montées en série, et l'écoulement du liquide dans les colonnes s'effectue dans une seule direction, et que le glucose et le fructose sont séparés pendant la même séquence, ladite séquence comprenant les phases consistant à
a) amener une solution d'hydrolyse, phase au cours de laquelle une solution contenant du glucose et du fructose, obtenue par l'hydrolyse de la solution de saccharose, est amenée dans une desdites colonnes, tout en éluant pratiquement simultanément une fraction glucose par un fond d'une colonne, ledit fond étant placé dans le système de colonnes en aval du sommet de la colonne dans laquelle ladite solution d'alimentation est amenée, et tout en amenant simultanément de l'eau dans une colonne placée dans le système de colonnes en aval de la colonne dans laquelle le glucose est élué, et le fructose est élué par un fond d'une colonne, ledit fond étant situé en aval du sommet de la colonne dans laquelle l'eau est introduite,
b) éluer la fraction glucose de façon complémentaire, tout en continuant l'élution de la fraction glucose par le bas de la même colonne que ci-dessus et d'introduire de l'eau d'élution dans la même colonne que ci-dessus,
c) recycler à travers toutes lesdites colonnes les solutions contenues dans le système, et qu'on répète la séquence comportant les phases a) à c) jusqu'à l'obtention de l'équilibre.
5. Procédé selon la revendication 3 ou 4, caractérisé en ce que le nombre de colonnes chromatographiques de la série est de 2 à environ 14, de préférence de 4 à 8.
6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisé en ce que la phase fixe des colonnes chromatographiques est une résine échangeuse de cations fortement acide.
7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que la résine échangeuse de cations fortement acide se présente sous la forme calcium.
8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 7, caractérisé en ce que la vitesse d'écoulement linéaire du liquide dans les colonnes est comprise entre 2 et 5 m/h.
9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 8, caractérisé en ce que la température de la so- lution d'alimentation et de l'eau d'élution à recycler est comprise entre environ 400C et environ 850C.
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