FI71156B - Foerfarande foer framstaellning av nya 6beta-hydroxialkylpenicillansyraderivat med beta-laktamasinhibitoraktivitet - Google Patents

Description

1 71156

Menetelmä uusien ft -laktamaasi-inhibiittoriaktiivisuuden omaavien 6 (>-hydroksialkyylipenisillaanihappo johdannaisten valmistamiseksi 5 Eräs kaikkien tunnetuin ja laajalti käytetty luokka bakteerienvastalsia aineita ovat niin kutsutut ft -laktaami-antibiootit. Näille yhdisteille on ominaista se, että niissä on runko, joka käsittää 2-atsetidinoni (ft -laktaami)-renkaan yhdistyneenä joko tiatsolidiini- tai dihydro-1,3-tiatsiini-10 renkaaseen. Kun runko sisältää tiatsolidiini-renkaan nimitetään yhdisteitä tavallisesti yleisesti penisilliineiksi, kun taas silloin kun runko sisältää dihydrotiatsiini-ren-kaan nimitetään yhdisteitä kefalosporiineiksi. Tyypillisiä esimerkkejä penisilliineistä, joita tavallisesti käytetään 15 kliinisesti, ovat bentsyylipenisilliini (penisilliini G), fenoksimetyylipenisilliini (penisilliini V), ampisilliini ja karbenisilliini; tyypillisiä esimerkkejä tavanomaisista kefalosporiineista ovat kefalotiini, kefaleksiini ja kefat-soliini.

20 Kuitenkin huolimatta ft -laktaami-antibioottien laajas ta käytöstä ja laajasta hyväksymisestä arvokkaina kemotera-peuttisina aineina niillä on se huomattava haitta, että tietyt jäsenet eivät ole aktiivia ia tiettyjä mikro-organismeja vastaan. Otaksutaan, että useissa tapauksissa tietyn 25 mikro-organismin tämä vastustuskyky tiettyyn ft -laktaami-antibioottiin nähden johtuu siitä, että mikro-organismi tuottaa ft -laktamaasia. Viimeksimainitut aineet ovat entsyymejä, jotka lohkaisevat penisilliinien ja kefalosporii-nien ft -laktaami-renkaan, jolloin muodostuu tuotteita, 30 joilla ei ole bakteerinvastaista aktiviteettiä. Kuitenkin tietyillä aineilla on kyky estää β -laktamaaseja ja käytettäessä Λ -laktainaasi-inhibiittoria yhdistelmänä penisilliinin tai kefalosporiinin kanssa voidaan lisätä tai tehostaa penisilliinin tai kefalosporiinin bakteerinvastais-35 ta tehokkuutta tiettyjä Λ-laktamaasia tuottavia mikro-organismeja vastaan. Katsotaan, että esiintyy bakteerin- 71156 vastaisen tehokkuuden voimimistumista silloin kun /^-lak-tamaasia estävän aineen ja /3-laktaamiantibiootin yhdistelmän bakteerinvastainen aktiviteetti on huomattavasti suurempi kuin yksittäisten komponenttien bakteerinvastaisten 5 aktiviteettien summa β -laktamaasia tuottavia mikro-organismeja vastaan.

Di Ninno, et ai., £J. Org. Chem.,42, 2960 (1977)" ovat kuvanneet 6ö-hydroksialkyylipenisillaanihappojen ja vastaavien bentsyyliesterien synteesiä voimakkaina baktee-10 rinvastaisina aineina ja käytettäviksi välituotteina.

6-etyylipenisillaanihappo ja sen sulfoksidi-johdan-nainen on kuvattu antibiootteina US-patenttijulkaisussa 4 123 539.

6(S-hydroksipenisillaanihappo ja sen esterit on val-15 mistettu 6-diatsopenisillaanihaposta ja vastaavista estereistä U. Org. Chem. , 39, 1444 ( 1974.),/.

US-patenttijulkaisu 4 143 046 kuvaa 6 Λ -substituoi-tuja sulfonyylioksipenisillaanihappoja bakteerinvastaisina aineina.

20 Keksinnön kohteena on täten menetelmä uusien kaavan (II) mukaisten 6 (3 -hydroksialkyylipenisillaanihappojohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien emässuo-lojen valmistamiseksi, jotka ovat fi -laktaami-inhibiitto-reita, 25 H h (0)2 .CH3

30 Q' W C02H

jossa kaavassa Y merkitsee ryhmää 0-R- , R,-CH-3 33 jossa R3 on sulfo, vety, 2-18 hiiliatomia sisältävä alkano-yyli, bentsoyyli, fenyylisulfonyyli tai metyylillä substi- 3 71156 tuoitu fenyylisulfonyyli, on vety, 1,4-hiiliatomia sisäl tävä alkyyli, fenyyli, bentsyyli, fenetyyli tai pyridyyli.

Edullinen ryhmä /3 -laktamaasi-inhibiittoreita ovat sellaiset yhdisteet, joilla kaavassa (II) R^ on vety. Eri-5 koisen edullisia tässä ryhmässä ovat sellaiset yhdisteet, joissa R3 on vety, asetyyli, stearoyyli tai bentsoyyli.

Toinen edullinen ryhmä kaavan (II) mukaisia yhdisteitä ovat sellaiset, joissa Rg on vety ja R^ on 1-4 hiili-atomia sisältävä alkyyli. Erikoisen edullisia tässä ryhmäs-10 sä ovat yhdisteet, joissa on metyyli.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että poistetaan bentsyyliryhmä palladiumkatalysaattorin läsnäollessa yhdisteestä, jolla on kaava 15 (OK CH~ g I ^ / y -ί;/6 CH^ )-N-\ 20 ° C02CH2C6H5 jossa Y merkitsee samaa kuin edellä, ja haluttaessa (a) muodostetaan kaavan (II) mukaisen yhdisteen farmaseuttisesti hyväksyttävä emässuola tavanomaisilla menetelmillä, tai 25 (b) muodostetaan helposti hydrolysoituva esteri alkyloimal- la kaavan (II) mukaisen yhdisteen emässuola 3-6 hiiliatomia sisältävällä alkanoyylioksimetyylihalogenidilla.

Lähtöaine valmistetaan lähtemällä bentsyyli-6,6-di-bromipenisillanaatista. Tarkoituksenmukaisen aldehydin kon-30 densaatio enolaatin kanssa, joka on muodostettu bentsyyli- 6,6-dibromipenisillanaatin ja organometallisen reagenssin reaktion avulla prosessin mukaan, jonka on kuvannut Di Ninno, et ai., J. Org. Chem., 42, 2960 (1977), antaa tulokseksi bentsyyli-6-bromi-6-hydroksialkyylipenisillanaatin, josta 35 välituotteista saadaan keksinnön mukaisia tuotteita.

Tästä kondensaatiosta saatu tuote käsittää diastereo- 71156 meerisiä seoksia johtuen kahdesta asymmetrisestä keskuksesta, joista toinen on penaami-rungon 6-asemassa ja toinen on hiiliatomissa ketjussa 6-asemassa seuraavasti: 5 Br . H CH3 V (f ^C02CH2C6H5 10

Kuten tämän alan asiantuntija voi helposti todeta, näistä ainoastaan toinen on asymmetrinen keskus tässä välituotteessa silloin kun on vety.

Substituentit 6-asemassa merkitään ot- tai & - ja on 15 osoitettu rakennekaavassa katkoviivalla tai kiinteällä sidoksella. Sivuketjussa olevan substituentin stereokemiallista konfiguraatiota merkitään (R) tai (S) (Cahn, et ai., Experien-tia, 12, 81 (1956)). Konfiguraation määräys suoritetaan ydin-magneettisella resonanssispektroskopialla.

20 Bentsyyli-6,6-dibromipenisillanaattia käsitellään inertissä liuottimessa -20 - -78°C:ssa noin 1 ekvivalentilla t-butyylilitiumia tai t-butyylimagnesiumkloridia. Saatua eno-laattia käsitellään sitten sopivalla aldehydillä ja lyhyen reaktioajan jälkeen reaktioseos jäähdytettiin ja tuote eris-25 tään tavallisella tavalla.

Sinkkikloridin lisäys enolaatin liuokseen ennen aldehy-din lisäystä näyttää kontrolloivan kondensaatiotuotteen ste-reokemiaa. Näissä olosuhteissa saadaan pääasiassa (S)-konfiguraatiota sivuketjussa.

30 Kun dietyyli-sinkkiä käytetään organometallisena rea- genssina saadaan pääasiassa (R)-konfiguraatiota tuotteen sivu-ketjussa .

Alkureaktio suoritetaan vedettömässä inertissä liuottimessa, joka huomattavassa määrin liuottaa reaktiokomponen-35 tit reagoimatta missään suuremmassa määrässä reaktiokompo-nenttien tai tuotteiden kanssa reaktio-olosuhteissa.

r 71156 5

On edullista että mainituilla liuottimilla on kiehumispisteet ja jäätymispisteet, jotka sopivat yhteen reaktiolämpötilojen kanssa. Sellaiset liuottimet tai seokset käsittävät aromaattisia liuottimia kuten tolueenin ja eetteri-liuottimia kuten 5 tetrahydrofuraanin ja dietyylieetterin.

Lähtöaineena käytettävän penisillanaatti-johdannaisen ja organometallisen reagenssin moolisuhde ei ole tärkeä menetelmässä. Käyttämällä pieni ylimäärä organometallista reagenssia aina 10 %:iin saakka yli ekvimolaarisen määrän 10 auttaa reaktion saamiseksi täydelliseksi ja ei aiheuta mitään suurempaa probleemaa halutun tuotteen eristämiseksi puhtaana.

Kosteus voidaan tehokkaasti poistaa reaktioseoksesta käyttämällä typpi- tai argon-atmosfääriä.

15 Reaktioaika riippuu väkevyydestä, reaktiolämpötilas ta ja lähtöaineiden reaktiokyvystä. Kun reaktio suoritetaan edullisessa reaktiolämpötilassa -60 - -78°C on enolaatin muodostumisaika noin 30-45 minuuttia. Reaktioaika välituotteen muodostamiseksi mainitusta enolaatista ja aldehydistä 20 on noin 30-60 minuuttia.

Reaktion päätyttyä tuote eristetään tavanomaisella tavalla ja diastereomeerinen seos voidaan erottaa kolonni-kromatografian avulla. Kuitenkin seuraavan reaktion, joka käsittää 6-bromi-substituentin poistamisen, luonne edellyt-25 tää oC- ja /0-epimeerien asemassa C-6 erottamisen tarpeellisuuden.

Käsiteltäessä bentsyyli-6-bromi-6-hydroksialkyyli-penisillanaattia, joka saadaan ensimmäisestä reaktiosta, tri-n-butyylitina-hydridillä saadaan muodostetuksi bentsyy-30 li-6-hydroksialkyylipenisillanaatti, jossa 6-hydroksialkyyli-ryhmä on A konfiguraatiossa. Tämä tulos on riippumaton subs-tituenttien muodostamisesta lähtöaineiden 6-asemassa. Siten &dr bromi-6/3 -hydroksialkyyliesterit ja 6/3 - bromi - 6 »6- hy d ro ks i -alkyyliesterit antavat molemmat käsittelyssä tri-n-butyyli-35 tina-hydridin kanssa saman 6^-hydroksialkyyliesterin päätuotteena edellytettynä että kaikki muut rakenneparamentit yhdisteissä ovat samoja.

6 71156

Reaktio suoritetaan inertissä liuottimessa, joka huomattavassa määrässä liuottaa reaktiokomponent.it reagoimatta missään suuremmassa määrässä reaktiokomponenttien tai tuotteen kanssa reaktio-olosuhteissa. Edelleen on edul-5 lista, että mainittu liuotin on aproottinen liuotin, joka ei sekoitu veden kanssa ja jonka kiehumis- ja jäätymispiste sopii reaktiolämpötiloihin. Sellaiset liuottimet tai niiden seokset käsittävät edullisina liuottimina bentseeniin ja tolueeniin.

10 Reaktioaika riippuu väkevyydestä, reaktiolämpötilas ta ja reaktiokomponenttien reaktiokyvystä. Kun reaktio suoritetaan edullisessa lämpötilassa liuottimen paluujäähdy-tyslämpötilassa päättyy reaktio tavallisesti noin 4-5 tunnissa.

15 Reagenssien moolisuhde ei ole tärkeä menetelmässä.

Tavallisesti käytetään ylimäärää tina-hydridiä ja voidaan käyttää niinkin paljon kuin 100 %:n ylimäärä yli ekvimolaa-risen määrän.

Kun reaktio on päättynyt liuotin poistetaan ja 20 jäännöstä sekoitetaan heksaanin kanssa organotina-sivutuot-teen poistamiseksi. Välituote voidaan puhdistaa ja isomeerit erottaa kolonni-kromatografian avulla.

Saadun bentsvvli-6/>-(S)- ja -(R)-hydroksialkyyli-penisillanaatin hapettaminen vastaaviksi keksinnön mu-25 kaisen menetelmän lähtöaineiksi suoritetaan sopivasti käyttämällä orgaanista peroksihappoa, esim. peroksikarboksyy-lihappoa kuten m-klooriperbentsoehappoa. Reaktio suoritetaan käsittelemällä bentsyyli-6^3 -(R) tai -(S)hydroksialkyyli-penisillanaattia noin 2-4 ekvivalentilla ja edullisesti 30 noin 2,2 ekvivalentilla hapettavaa ainetta inertissä liuottimessa. Tyypillisiä liuottimia ovat klooratut hiilivedyt kuten metyleenikloridi, kloroformi ja 1,2-dikloorietaani.

Hapetusaine ja substraatti yhdistetään liuottimessa 0-5°C:ssa. Lämpötilan annetaan nousta huoneen lämpöti-35 laan. Reaktioaika on noin 3-6 tuntia.

Sulfonien, jotka ovat käyttökelpoisia välituotteita, 7 71156 eristämisen aikana liuotin poistetaan ja jäännös jaetaan veden ja veteen sekoittumattoman liuottimen kuten etyyliasetaatin kesken. Vesi- orgaanisen liuotinseoksen pH säädetään arvoon 7,0 ja jäljellä oleva ylimäärä peroksidia hajotetaan natrium-5 bisulfiitilla. Välituote, joka sisältyy orgaaniseen faasiin, eristetään ja puhdistetaan tavanomaisella tavalla.

Keksinnön mukaiset biologisesti aktiiviset tuotteet valmistetaan debentsyloimalla vastaavat bentsyyliesterit.

Siten sopivaa bentsyyliesteriä lisätään esihydratun 5% palla-10 diumia sisältävän kalsiumkarbonaattikatalyytin suspensioon 50%:issa metanoli-vesi-liuoksessa. Hydrolyysi. suoritetaan huoneen lämpötilassa ja tavallisesti suoritetaan paineessa 2,8- 3,5 kg/cm . Näissä olosuhteissa reaktio päättyy tavallisesti 30-60 minuutissa. Suodattamalla käytetty katalyytti ja sen 15 jälkeen poistamalla liuotin jäähdytysku.ivauksella saadaan kalsiumsuola eristetyksi. Tehtäessä suodos happameksi katalyytin poistamisen jälkeen ja sen jälkeen uutettaessa veteen sekoittumattomalla liuottimena kuten etyyliasetaat.illa saadaan vapaa happo eristetyksi.

20 Vaihtoehtoisesti kaavan (II) mukaisia yhdisteitä voidaan myös valmistaä samoilla reaktiosarjoil!a kuin mitä edellä on kuvattu, mutta erilaisessa perättäisessä järjestyksessä. Esim. alussa muodostettu bentsyyli-6-bromi-6-hydroksialkyylipenisil-lanaatti voidaan hapettaa edellä kuvatulla tavalla ja sen jäl-25 keen poistaa 6-bromi-substituentti tri-n-butyylitina-hydridiiiä ja debentsyloida.

Kaavan (II) mukaiset yhdisteet, jossa on alkanoyyli, valmistetaan asyloimalla tarvittava bentsyyli-6/S-hydroksi-alkyy-lipenisillanaattisulfoni ja sen jälkeen hydraamalla bent syy p-j__ 30 esteri.

Asyloiminen suoritetaan saattamalla penisillanaattisulfoni kosketukseen ekvimolaarisen määrän kanssa happohalogenidia ja käyttämällä niin paljon kuin 10-20%:n ylimäärää, inertissä liuottimessa kuten etyleenikloridissa. Tertiäärinen amiini 35 lisättynä molaarisessa määrässä vastaten happohalogenidia 8 71156 toimii muodostuneen vetyhalogenidin sitojana.

Asyloiminen suoritetaan reaktiolämpötilassa noin 0-5°C ja reaktioajassa noin 20-30 minuuttia. Välituote saadaan poistamalla liuotin ja käsittelemällä saatua jäännöstä vesi-5 etyyliasetaatilla ja orgaaninen faasi haihdutetaan haluttujen aineiden saamiseksi.

Lopputuotteiden, s.o. kaavan (II) mukaisten yhdisteiden, joissa Rg on alkanoyyli, muodostaminen suoritetaan debentsy-loimalla edellä esitetyissä olosuhteissa.

10 Keksinnön mukaiset yhdisteet, joilla on kaava (II), jossa R^ on bentsoyyli, valmistetaan samankaltaisella tavalla kuin on kuvattu sellaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa Rg on alkanoyyli, ja se käsittää ensiksi, bentsyyli-6 /,j-hyd-roksialkyylipenisillanaattisulfonin asyloinnin ja sen jälkeen 15 bentsyyliryhmän poistamisen esteristä.

Kaavan (II) mukaiset yhdisteet, joissa R^ on fenyylisul-fonyyli tai substituoitu fenyylisulfonyyli, valmistetaan parhaiten ensiksi asyloimalla bentsyyli-6 /3 -hydroksialkyylipeni-sillanaatti ekvimolaarisella määrällä sulfonyylikloridia 20 käyttäen pyridiiniä liuottimena ja reaktiolämpötilassa 0°C reaktioaikana noin 2-3 tuntia. Tuote eristetään jäähdyttämällä reaktioseos vedellä ja sen jälkeen uuttamalla ja puhdistamalla .

Toinen reaktiovaihe käsittää välituote-esterin debentsy-25 loimisen käyttäen vetyä ja 5%:ista palladiumia kalsiumkarbo-naatilla edellä kuvatun menetelmän mukaisesti.

Viimeinen vaihe kaavan (II) mukaisten yhdisteiden saamiseksi käsittää 6 /3-sulfonyylioksialkyylipenisillaanihappo-jen hapettamisen kaliumpermanganaatilla veden ja metyleeni-30 kloridin seoksessa ympäristön lämpötiloissa pH-arvossa 6-6,4.

Reaktion jälkeen, mikä vaatii noin 45 - 60 minuuttia, pH säädetään arvoon 1,5 ja tuote eristetään orgaanisesta faasista.

Sellaisten kaavojen (II) mukaisten yhdisteiden synteesi, joissa R^ on sulfo, suoritetaan antamalla bentsyyli-6 /3-35 hydroksialkyylipenisillanaattisulfonin reagoida rikkitriok- sidi-pyridiini-kompleksin kanssa dimetyyliformamidissa huoneen lämpötilassa 45-60 minuutin ajan.

9 71156

Tuote, joka eristetään pyridiniumsuolana, debentsyloi-daan vedyllä ja 5%:lla palladiumilla kalsiumkarbonaatissa edellä kuvatulla tavalla.

Kun kaavan (II) mukainen yhdiste helposti hydrolysoi-5 tuvan esterin muodossa joutuu nisäkkään vereen tai kudokseen, muodostuu helposti kaavan (II) mukainen vastaava happo. Nämä helposti hydrolysoituvat esteriryhmät ovat tunnettuja peni-silliinialalla. Useimmissa tapauksissa ne parantavat peni-silliiniyhdisteen absorptio-ominaisuuksia. Lisäksi esteri-10 ryhmän on oltava luonteeltaan sellainen että se antaa farmaseuttisesti hyväksyttäviä ominaisuuksia kaavan (II) mukaiselle yhdisteelle ja vapauttaa farmaseuttisesti hyväksyttäviä tähteitä silloin kun se lohkeaa in vivo.

Edellä mainitut helposti, hydrolysoituvat esteriryhmät 15 ovat helposti identifioitavissa penisilliinialalla siten kun on kuvattu saksalaisessa patenttihakemuksessa 2 517 316. Tyypillisiä tällaisia esteriryhmiä ovat 3-ftalidyyli , 4-kro-tonolaktonyyli , V*" -butyrolakton-M-yyli, alkanoyy 1 ioksi-al-kyyli ja alkoksikarbonyylioksialkyyli. Kuitenkin edullinen 20 esteriryhmä on alkanoyylioksimetyyli , jossa on 3-6 hiiliatomia.

Kaavan (II) mukaisten yhdi steiden helposti hydrolysoituvat esterit valmistetaan suoraan kaavan (II) mukaisesta yhdisteestä esteröimällä. Käytetty spesifinen menetelmä 25 riippuu luonnollisesti esterin muodostavan tähteen rakenteesta, mutta sopiva menetelmä on helposti alan asiantuntijan valittavissa. Silloin kun on alkanoyylioksialkyyIi, yhdisteet voidaan valmistaa alkyloimalla kaavan (II) mukainen yhdiste alkanoyylioksialkyylihalogenidilla. Termi "halogenidi" tar-30 koittaa kloorin, bromin tai jodin johdannaista. Reaktio suoritetaan liuottamalla kaavan (II) mukaisen yhdisteen suola sopivaan polaariseen orgaaniseen liuottimeen, kuten N,N-dime-tyyliformamidiin ja sen jälkeen lisäämällä noin 1 mooliekvi-valentti halogenidia. Kun reaktio on olennaisesti päättynyt, 35 tuote erotetaan tunnetulla tavalla. Usein on ri iitävää lal- 10 71156 mentaa reaktioväliaine ylimäärällä vettä ja sen jälkeen uuttaa veteen sekoittumattomaan orgaaniseen liuottimeen ja sitten talteenottaa se haihduttamalla liuotin. Lähtöaineen suolat, joita tavallisesti käytetään, ovat alkalimetallisuo-5 loja, kuten natrium- ja kaliumsuola ja tertiäärisiä amiini-suoloja, kuten trietyyliamiini-, N-etyylipiperidiini-, N,N-dimetyylianiliini- ja N-metyylimorfol.iini-suoloja. Reaktio suoritetaan lämpötilassa alueella noin 0-50°C ja tavallisesti noin 0-25°C:ssa. Reaktion päätymiseen tarvittava aika vaih-10 telee riippuen eri tekijöistä, kuten reaktiokomponenttien väkevyydestä ja reaktiokyvystä. Niinpä käytettäessä halo-geeniyhdistettä jodidi reagoi nopeammin kuin bromidi, joka vuorostaan reagoi nopeammin kuin kloridi.

Itse asiassa on usein edullista käytettäessä klooriyhdistettä 15 lisätä alkalimetallijodidia aina yhteen mooliekvivalenttiin saakka. Tämä vaikuttaa reaktion nopeuttamiseen. Huomioonottamalla kaikki edellä mainitut tekijät on reaktioaika tavallisesti noin 1-24 tuntia.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet ovat happamia ja 20 muodostavat suoloja emäksisten aineiden kanssa. Sellaiset suolat kuuluvat tämän keksinnön piiriin. Näitä suoloja voidaan valmistaa tavanomaisella tavalla, kuten saattamalla happamet ja emäksiset komponentit, tavallisesti moolisuhteessa 1:1 vesipitoiseen, ei-vesipitoiseen 2 5 tai osittain vesipitoiseen väliaineeseen. Sen jälkeen suola otetaan talteen suodattamalla, saostamalla ei-liuottimellä ja sen jälkeen suodattamalla, haihduttamalla liuotin pois tai vesipitoisten liuosten yhteydessä lyofilisoimalla. Emäksiset aineet, joita sopivasti käytetään suolan muodos-30 tamiseksi, ovat sekä orgaanisia että epäorgaanisia aineita ja niihin kuuluvat ammoniakki, orgaaniset amiinit, alkali-metallihydroksidit, -karbonaatit, -bikarbonaatit, -hydri-dit ja -alkoksidit samoin kuin maa-alkalimetallihydroksidit, -karbonaatit, -hydridit ja -alkoksidit. Edustavia esimerkke-35 jä sellaisista emäksistä ovat primääriset amiinit, kuten 11 7115 6 n-propyyliamiini, n-butyyliamiini, aniliini, sykloheksyyli-amiini, bentsyyliamiini ja oktyyliamiini; sekundääriset amiinit kuten dietyyliamiini, morfoliini, pyrrolidiini ja piperidiini; tertiääriset amiinit kuten dietyyliamiini, 5 N-etyylipiperidiini, N-metyylimorfoliini ja 1,5-diatsabisyk-lo/4,3,0/non-5-eeni; hydroksidit kuten natriumhydroksidi, kaliumhydroksidi, ammoniumhydroksidi ja bariumhydroksidi; alkoksidit kuten natriumetoksidi ja kaliumetoksidi; hydridit kuten kaisiumhydridi ja natriumhydridi; karbonaatit kuten 10 kaliumkarbonaatti ja natriumkarbonaatti; bikarbonaatit kuten natriumbikarbonaatti ja kaliumbikarbonaatti; ja pitkäketjuis-ten rasvahappojen alkalimetallisuolat, kuten natrium-2-etyy-liheksanoaatti.

Edullisia kaavan (II) mukaisten yhdisteiden suoloja 15 ovat natrium-, kalium- ja trietyyliamiinxsuolat.

Kuten edellä on esitetty, kaavan (II) mukaiset yhdisteet sellaisenaan tai helposti in vivo hydrolysoituvan esterin muodossa ovat mikrobiaalisten /5 -laktamaasien voimakkaita inhibiittoreita ja ne lisäävät /'3-laktaami-antiboottien 20 (penisilliinien ja kefalosporiinien) bakteerinvastaista tehokkuutta useita mikro-organismeja vastaan, erikoisesti niitä vastaan, jotka tuottavat ^3-laktamaasia. Kaavan (II) mukaisten yhdisteiden kyky lisätä /3-laktaami-antibiootin tehokkuutta voidaan osoittaa kokeilla, joissa tietyn anti-25 biootin MIC-arvo yksinään ja kaavan (II) mukaisen yhdisteen vastaava arvo yksinään mitataan. Senjälkeen näitä MIC-arvo-ja vertaillaan MIC-arvoihin, jotka saadaan tietyn antibiootin ja kaavan (II) mukaisen yhdisteen yhdistelmällä. Jos yhdistelmän bakteerinvastainen voimakkuus on huomattavasti suu-30 rempi kuin mitä voitiin odottaa yksityisten yhdisteiden voimakkuuksista, niin kysymyksessä on silloin aktiviteetin voimistuminen. Yhdistelmien MIC-arvot mitataan käyttämällä menetelmää, jonka on kuvannut Barry ja Sabath julkaisussa "Manual of Clinical Microbiology", julkaisija Lenette, 35 Spaulding ja Truant, 2. painos, 1974, American Society for Microbiology.

i2 71156

Kaavan (II) mukaiset yhdisteet ja niiden helposti hydrolysoivat esterit voimistavat fr -laktaami-antibioottien bakteerinvastaista tehokkuutta in vivo. Toisin sanoen ne alentavat antibiootin sitä määrää, joka tarvitaan suojaa-5 maan hiiriä tiettyjen fr-laktamaasia tuottavien bakteerien muutoin kuolettavaa ymppää vastaan.

Kaavan (II) mukaisten yhdisteiden ja niiden helposti hydrolysoituvien estereiden kyky voimistaa /3-laktaami-anti-biootin tehokkuutta fr-laktamaasia tuottavia bakteereja 10 vastaan tekee ne arvokkaiksi annosteltavaksi yhdessä /3-lak-taamiantibioottien kanssa hoidettaessa bakteeri-infektioita nisäkkäissä, erikoisesti ihmisessä. Hoidettaessa bakteeri-infektiota kaavan (II) mukaista yhdistettä voidaan antaa laktaami-antibiootin kanssa erikseen tai molemmat aineet 15 voidaan annostella samanaikaisesti. Vaihtoehtoisesti kaavan (II) mukaista yhdistettä voidaan annostella erillisenä aineena hoidon aikana /$ -laktaami-antibiootilla. Eräissä tapauksissa on edullista esiannostella kaavan (II) mukaista yhdistettä ennen hoidon alkamista fr -laktaami-antibiootilla. 20 Käytettäessä kaavan (II) mukaista yhdistettä tai sen helposti hydrolysoituvaa esteriä voimistamaan /^-laktaami-antibiootin tehokkuutta, annostellaan yhdisteen (II) seosta fr-laktaami-antibiootin kanssa edullisesti valmisteena farmaseuttisen kantoaineen tai laimennusaineen kanssa. Far-25 maseuttinen koostumus käsittää farmaseuttisesti hyväksyttävän kantoaineen, A -laktaami-antibiootin ja kaavan (II) mukaisen yhdisteen, tai sen helposti hydrolysoitavan esterin, sisältää tavallisesti noin 5-80 paino-% farmaseuttisesti hyväksyttävää kantoainetta.

30 Käytettäessä kaavan (II) mukaisia yhdisteitä tai niiden helposti in vivo hydrolysoituvia estereitä, yhdistelmänä fr -laktaami-antibiootin kanssa mainittuja yhdisteitä voidaan annostella suun kautta tai parenteraalisesti, so. lihaksensisäisesti, ihonalaisesti tai intraperitoneaalisesti.

35 Vaikkakin lääkäri määrää lopullisen annostuspitoisuuden ihmiselle, niin kaavan (II) mukaisten yhdisteiden ja fr- 13 71156 laktaami-antibiootin päivittäiset annokset ovat tavallisesti alueella noin 1:3-3:1. Lisäksi käytettäessä kaavan (II) mukaisia yhdisteitä yhdistelmänä /^-laktaami-antibiootin kanssa kunkin komponentin päivittäinen suun kautta annetta-5 va annos on tavallisesti alueella noin 10-200 mg 1 kg kohti ruumiin painoa ja kunkin komponentin päivittäinen parenteraa-linen annos on normaalisti noin 10 - 400 mg 1 kg kohti ruumiin-Painoa. Nämä luvut ovat ainoastaan kuvaavia ja useissa tapauksissa voi olla tarpeellista käyttää annoksia, jotka 10 ovat mainittujen rajojen ulkopuolella.

Tyypillisiä ^-laktaami-antibiootteja, joiden kanssa kaavan I tai II mukaisia yhdisteitä ja niiden estereitä, jotka ovat helposti hydrolysoituvissa in vivo, voidaan annostella yhdessä ovat: 15 5-(2-fenyyli asetamido)penisiliaanihappo, 6-(2-fenoksiasetamido)penisillaanihappo, 5- (2-fenyylipropionamido)penisilläänihappo, 6- (D-2-amino-2-fenyyliasetamido)penis lilaanihappo, 6- (D—2 -amino-2 -Λ-hydroksi f enyyli/ as et amido) peni s lilaani happo, 2 0 6-(D-2-amino-2-/l,4-sykloheksadienyyli7-as etamido)penisil- laanihappo, 5- (1-aminosykloheksaanikarboksiamido)penisiliaanihappo, 6- (2-karboksi-2-fenyylias etamido)penis illaanihappo, 6- (2-karboksi-2-Z.3-tie.nyyliJr as et amido) peni si liaani happo, 2 5 6- (D-2 -/^4-etyylipiperatsiini-2 , 3-dioni -l-karboks iamidoj ~ 2-fenyyliasetamido)penislilaanihappo, 6-(D-2-£4-hydroksi-l,5-naftyridiini-3-karboksiamidQ7- 2-fenyylias etamido)-penisiliaanihappo, 6-(D-2-s ulfo-2-fenyyliasetamido)penisiliaanihappo, 3 0 6-(D-2-sulfoamino-2-fenyyliasetamido)penis lilaanihappo, 6 - (D-2 - /.imidatsolidin-2 -oni-karboks iamid<i? - 2 -f enyyliaset-amido)peni sillaanihappo, 6-(D-2-ZT3-metyylisulfonyyli-imidatsolidin-2-oni-l-karboksi- amidcjj-2-fenyyliasetamido)penisillaanihappo, 3 5 6-(ZTieksahydro-lH-atsepiini-l-yyli7metyleeniamino )penisil-laanihappo, “ 71156 asetoksimetyyli-6-( 2-fenyyliasetamido)periisillanaatti , asetoksimetyyli-6-(D-2-amino-2-fenyyliasetamido)penisi11a-naatti, asetoksimetyyli-6-(D-2-amino-2-A-hydroks if enyyli7 -asetamido) -5 penisillanaatti, pivaloyylioksimetyyli-6-(2-fenyyliasetamido)penisillanaatti, pivaloyylioksimetyyli-6-(D-2-amino-2-fenyyliasetamido)-penisillanaatti, pivaloyylioksimetyyli-6-(D-2-amino-2-A"hydroksifenyyli7 -10 asetamido)penisillanaatti, 1-(etoksikarbonyylioksi)etyyli-6-(2-fenyyliasetamido)penisillanaatti , 1-(etoksikarbonyylioksi)etyyli-6-(D-2-amino-2-fenyyliasetamido) penisillanaatti, 15 l-(etoksikarbonyylioksi)etyyli-6-(D-2-amino-2-A-hydroksi-fenyylij asetamido)penisillanaatti, 3-ftalidyyli-6-(2-fenyyliasetamido)penisillanaatti, 3-ftalidyyli-6-(D-2-amino-2-fenyyliasetamido)penisillanaatti , 2 0 3-ftalidyyli-6 - (D-2-amino-2 -A”hydroksifenyyli7 asetamido)-penisillanaatti, 6-(2-fenoksikarbonyyli-2-fenyyliasetamido)penisillaanihappo, 6-(2-tolyylioksikarbonyyli-2-fenyyliasetamido)penisillaa-nihappo, 2 5 6-(2 -β> -indanyylioks ikarbonyyli.7 -2 -f enyyli asetamido) penisi1- laanihappo, 6-(2-fenoksikarbonyyli-2-£5-tienyyli_7asetamido)penisiliaani-happo, 6-(2-tolyylioksikarbonyyli-2-£3-tienyyli7asetamido)-3° penisillaanihappo, 6 - (2-/B “indanyylioks ikarbonyyli7 “2-Z”3-tienyyli7 asetamido) -penisillaanihappo, 6-(2,2-dimetyyli-5-okso-4-fenyyli-l-imidatsolidinyyli)-penisillaanihappo, 3 5 7-(2-£’2“tienyyli7asetamido)kefalosporaanihappo, 15 71156 7-C 2-£l-tetratsolyyl£7asetamido-3-(2-/3-metyyli-1,3,4-t i adi at so lyyljjt iometyyli)-3-desasetoksimetyylikefalospo-raanihappo, 7- (D-2-formyylioksi-2-fenyyliasetamido) -3 - ( 5-Ζ.Ί-metyyli-5 tetratsolyyli/tiometyyli)-3-desasetoksimetyylikefalosporaa-nihappo, 7-(D-2-amino-2-fenyyliasetamido)desasetoksikefalosporaani -happo, 7-alfa-metoksi-7-(2-f2-tienyyli/asetamido)-3-karbamoyyli-10 oksimetyyli- 3-desasetoksimetyylikefalosporaanihappo, 7 -(2-syanoas etamido)kefalosporaanihappo, 7-(D-2-hydroksi-2-fenyyliasetamido)-3-(5-/l-metyyli~ t et rat so lyyli./t iometyyli )-3-desasetoksimetyylikefalosporaa-nihappo, 15 7-(D-2-amino-2-p-hydroksifenyyliasetamido)desasetoksi- kefalosporaanihappo, 7-(2-Z4-pyridyylitiq7asetamido)kefalosporaanihappo , 7-(D-2-amino-2£l,4-sykloheksadienyyli7 asetamido)kefalospo-riinihappo, 20 7-(D-2-amino-2-fenyyliasetamido)kefalosporaanihappo, 7-/D-(-)-alfa-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksi-amido) -alf a- ( 4-hydroksi fenyy li) asetamidö7 - 3-Ζ”( 1-metyy li- 1,2,3,4-tetratsol-5-yyli)tiometyyli7-3-kefemi-4-karboksyy-lihappo, 25 7-(D-2-amino-2-fenyyliasetamido)-3-kloori-3-kefem-4-karboksyylihappo, Ί-£2-(. 2-amino-4-t iat so ly yli )-2-(metoksi-imino)as etamido? -kefalosporaanihappo, /£R,7R-3-karbamoyylioksimetyyli-7(2Z)-2-metoksi-imino-30 (fur-2-yyli)asetamido-kef-3-emi-4-karboksylaatti7 5 7-ZT2-(2-aminotiatsol-4-yyli)asetamido7 3-Z~(£l-2dimetyyli- aminoetyyli)-lH-tetratsol-5-yyli7tio)metyyli7kef-3-emi-4-karboksyylihappo, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

1R 71156

Seuraavista taulukoista ilmenee keksinnön mukaisten yhdisteiden aktiivisuus soluvapaiden beta-laktamaasien inhibiittoreina (taulukko I) sekä yhden keksinnön mukaisen yhdisteen (6-beta-hydroksimetyylipenisillaanihapposulfonin) in 5 vitro aktiivisuus vastaavat farmakologiset ominaisuuset omaavaan tunnettuun yhdisteeseen, sulbaktaamiin verrattuna.

i7 71156

TAULUKKO I

Keksinnön mukaisten yhdisteiden aktiivisuus solu-vapaiden beta-laktamaasien inhibiittoreina.

H <0’2 CH3 YH— 0^ "'*C0 2I!

Beta-lak- Antibiootti Beta-lak- tamaasin (pitoisuus) Inhibiittori tamaasin alkuperä —- hydrolyy- Y (pitoisuus) s in inhi bit io (%) E. cloacae Penisilliini G HOCH^- l,0^uM 11, 4 67B009 (33/UM) 16.i 57,0 66 77,0

Ampisilliini CH.(Gi ) cC0„CH- 66 ,uM 51,3 (33/UM) 3 2 Ib 2 2 /

Ampisilliini (Γ J) (S) 6 6/uM 100 (33/UM) '''CH- H^

Ampisilliini CcH'/,,(S) 6 6,uM 9 9,4 (33/UM) 6 5 >CH" ‘

7 HO

Ampislliini 00 6 6,uM 3 4,0 (33/UM) m

Ampisillini y , p, 5 6,uM 100 (33/Um) CgH^^H- '

HO

Ampisilliini C.Hjh'^^CH-^ ° ^ 66 ,uM 100

(33 uM) 6 5 c- I

^d/un; HQ

71156 18 TAULUKKO I (jatkuu)

Beta-lak- Antibiootti Beta-lak- tamaasin (pitoisuus) Inhibiittori tamaasin alkuperä -- hydrclyy- Y (pitoisuus) sin inhi bit io (%) E. cloacae Amoisilliini (R) 66,uK 97,8 67BOC9 (33/UM) b ° H0^

Ampisilliini (S) 6 6^uM 100 H0‘"'

Pen G CH''/,, (R) 66 ,uM 97 ,6 (33/UM) ° CH- ' HO^

Amis Uliini (S) 6 6,uK 100 (33/UM) b 7:h- ' H0V°'

Pen G H 1,0 0 (33/uM) 16,6 0 66,0 26 E. coli Ampisillini HOCH - 0,67,uM 92,1 51A129 (33,uM) 1,0 7 95,7 16,5 100 66,0 100

Ampisilliini H 1,0,uM 97,0 (66 ,uM) 16,57 100 7 66,0 100

Pseud.aer. Pen G HOCH - 1,0,uM 21,7 52A104 (3 3 , uM) 1 16,57 93,4 7 66,0 98,8

Pen G

(66/UM) H 66/UM 0 19 , 71156 TAULUKKO I (jatkuu)

Beta-lak- Antibiootti Beta-lak- tamaasin (pitoisuus) Inhibiittori tamaasin alkuperä -- hydrolyy- Y (pitoisuus) sin inhi- bitio (%)

Kleb.pn. Ampisilliini H0CH9- 1,0,uM 8 2,2 53A079 (3 3 ,uM) 16,5 100 ' 66,0 100

Ampisilliini (66 ,uM) H 16,5 ,uM 100 1 66,07 100

Staph. Ampisilliini HOCH»- 1,0, uM 3 9,3 aureus (33,uM) 1 16,5/ 78,8 01AU00 ' 66,0 98,3

Ampisilliini H 1,0,uM 0 (66 ,uM) 16,57 95,8 1 66,0 100,0 20 ^ 7115 6

•H

C rt •H 4-> •H 44

«H rt CN

<-1 41 M LO

•HM * «>

C co 3 co cm LO

0) -H CO Ή CNJ

XI o- 44 ε + :rt < c •—.

Π ·Η •H XJ ή

C -H

O (0 rH

Uh 44 r I O ·Η 00 ;i -H C 00 co xv ·η cn 0 ) ·Η **

C4 H* rH 00 LO LO

Γ4 " rH LO CM LO

rt J- ·Η I r. r, r.

44 I CO C, H LO CSI

•rl O *H O rH · C O. Cl, rt

rt a ε + -H

rt rt < co H 44 ·Η

r H *H O

•H e e CO Pj e •h rt ·η rt C M C 44

QJ rl -H

Ο· Ή · H o\°

•H CO ,—I O

rH *H ,—I LO

>, CO -H O CD O

>> C CO LO O O C

VH -M O) -H 00 JX CO

VH 0) CL CU /\ rt ε — ε ε •H ·Η

C H CO rt O

* -H X!

Ni O -Hr- -H

!J fi E o 44 i-i xv rt —' ·η e

Co rt o E · h < rC M LO CÖ |h i -4 o rt e: ;rt rt^rtM+H o o o rtco 41 44 o LO lo rt co N r -I rt M HO)

1 rt 441 -HE

CO CO rH Ό 01 ^ rt rt -h

CO CO rt rt rH

co rt > co o co rt co -μ

Csi CO rt -H e

" -rt 44 E -H

oo > Qo O rt > -1" ·Η oo · γη M rt l *H esi rt C, fL, 4-1 »» r

O ,4 co ooo ^sOO

rt Lj- O LO O · -H ·Η

(4 I rH rH iH CO CO

Φ O 0-1 E 45 3 a; e υ ^ rt rt •H +-1 54 Uh Uh CV -h rt e e '•‘l Ξ> \ ·Η ·Η

XV W I I

44 C -H CC

5-1 ·' H E /—i r-s co :rt crt co m oo r~> rt X) Ό

•H s-r Ήβ rt >1 >S

C CO CU -H s-n-5 (O CO CO

rt rt rt 44 m -h i i

bo i—IN ϋ U OOO

Jh ·Η C ·Η »H +-> > > O 44 (U C C ·Η ·Η ·Η 0 OrrtCUCU D-,<<

e O M 44 44 -H

44 ε Uh U O rH •—sr-·,-', •H (UCCOCOO rHCOJ-

SitE'rlW W U v_/v_/L_^ 71156 21 ·· ·Η ε •Η (Π 2 3 •H v

•H

d td O CM CM

•H fjQ * ** * £ WrH uOLO O lO CO CD <X> (D O £ csj esi o esi Ό d CO ^

pC

=3 g + c ^

•H *H

co 7; 0 -h ” M-ι tn rH ,Χ ·Η 00 3 O G co tn ·Η H CM Λ CM CSl

Q "H λ CM CM rH vt CM

(^| 00 ** " " " r

(¾^ Ιη·=*· O CD LO CD oo no CC

3 *· CO | 1/5 OM

Λ Qc •Hl du CO +i 3 e m + 3 0- 2 rH 3 *

H rC C

•H ·Η -H

vs en C w

C ·Η Id Ή *H

3 C 3 G o

rX t) I f *H C

4-1 CL ,—I *H G

Id -H -H H 0O CO

•m H Cfl rH OM -M

s-' >, ·Η >H

en oo o o cd o to qsp

μ φ o OO OO OCMO

M0)Cl rH OM CM CM CSl VH LO

m g s^ tn s\ /\

•H -H C

o en e ^ 0) id y ,Χ ·η ή s e

y o ·η ^ . E

o Ci ε ° *h 3 Ό S r y> o 3> >> id ^ -o < ,c -μ M ·η -h

H i rX H -C

Λ A ίο oo οοοοο·Η M. .μ Olo OloOOlo

13 y OM rl rH rH C

ld tn id ^ id s^ a fd

tn rH +J

co 3 3 Ή co 3 oo Ό cm en π3 r *H 3 ·

00 > > *H

3- ·η ε

1 ·Η OO 3 CU

CU +-> CO rX *h

O M CM O rH

fO r OLO O LO O O O ·|—| 0 £ (X) O CM LO CM O O LO -μ

3 0 J-OM rH rH "G

3 C I Λ es .,Η +J -H CU · > en -H o rH 3

•H > EC

Ό "s I

A C M C

>H -H rs 3 0 co μ. .μ V_e r*

•H 2 -H

E 3 ω X

en U 3 i

• h 0 3 rs id 0 3 C

C O ·Η 3 3 -μ 3 ·Η 3 cu ui jj

3 U -td H 3 C H O rH +j -H rH

M o O rH ·, I 3 rH e rH -rl O 0 rH

C ^ Ή 3 G I 1 3 3 3 (U ·. I 3 -P 3 o >’ w C *H O m ·Η 3 V e G Xl ·Η 3 o h; 3 3 en E ·π tn o ·η 3 3 0 X χ

Cl p, 3 X -H A 3 en X H-> > bO bo G

x 3 C CH rH 333 3 >-, O· (H u -μ· rs rs • H -μ3 eno i—( G C H X CP OO -HP vh co S co 3 M O X yo Pen SE CJ en - w 22 71156

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä. Ydinmagneet-tiset resonanssispektrit (NMR) mitattiin arvossa 60 MHz liuokselle deuterokloroformissa (CDClg), perdeuterodimetyyli-sulfoksidissa (DMSO-dg) tai deutero-oksidissa (D^O) mikäli 5 muuta ei ole ilmoitettu, ja piikki-asemat on ilmoitettu miljoonasosina (ppm) myötäkenttään tetrametyylisilaanista tai natrium-2,2-dimetyyli-2-silapentaani-5-sulfonaatista. Seuraavia lyhennyksiä on käytetty piikki-muodolle: s = singletti; d = dubletti; t = tripletti; q = kvartetti; 10 m = multipletti.

Esimerkki 1 15 6 /l· -hydroksimetyylipenisillaanihappo-sulfoni A. bentsyyli-6-bromi-6-hydroksimetyylipenisilla-naatti

Liuos, jossa oli 44,9 g bentsyyli-6,6-dibromipenisil-lanaattia 600 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, jäähdytet-20 tiin -78°C:seen ja lisättiin pisaroittain 56,4 ml t-butyyli-magnesiumkloridia samalla voimakkaasti sekoittaen inertissä atmosfäärissä samalla kun lämpötila pidettiin -60°C:ssa.

Sen jälkeen kun oli sekoitettu 30 minuuttia -78°C:ssa käsiteltiin liuosta kaasumaisella formaldehydillä typpivirrassa 25 siihen saakka kunnes oli lisätty 5 molaarista ekvivalenttia.

Reaktioseos jäähdytettiin -78°C:seen lisäämällä 5,7 ml etikka-happoa pisaroittain 25 minuutin aikana. Reaktioliuoksen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan ja väkevöitiin tyhjössä. Jäännökseen lisättiin 200 ml vettä ja 200 ml etyyliasetaat-30 tia. Orgaaninen kerros erotettiin ja vesikerros uutettiin uudelleen etyyliasetaatilla.

23 71 1 5 6

Orgaaniset faasit yhdistettiin, pestiin peräkkäin vedellä (100 ml), natriumbikarbonaatin 5 %:11a vesiliuoksella (200 ml) ja suolaliuoksella (200 ml) ja kuivattiin magnesium-sulfaatilla. Poistettaessa liuotin vähennetyssä paineessa 5 saatiin 38,2 g haluttua tuotetta, joka oli epimeerinen asemassa C-6.

B. bentsyyli-6/0-hydroksimetyylipenisillanaatti

Liuosta, jossa oli 10 g bentsyyli-6-bromi-6-hydroksi- metyylipenisillanaattia, 6,9 ml tri-n-butyylitina-hydridiä 10 ja jälkiä atsobisisobutyronitriilistä 200 mlrssa bentseeniä, kuumennettiin paluujäähdyttäen 5 tuntia typpiatmosfäärissä. Reaktioseos jäähdytettiin ja väkevöitiin tyhjössä. Jäännös sekoitettiin heksaanin kanssa ja kromatografoitiin silika-geelillä käyttäen eluanttia tolueeni/etyyliasetaattia (2:1), 15 jolloin saatiin 7,5 g tuotetta.

C. bentsyyli-6/2-hydroksimetyylipenisillanaatti-sulfoni 1,8 g m-klooriperbentsoehappoa lisättiin liuokseen, jossa oli 7,5 g bentsyyli-6/9 -hydroksimetyylipenisillanaat-20 tia 600 ml:ssa metyleenikloridia jäähdytettynä 0-5°C:seen. Liuoksen annettiin sitten lämmetä huoneen lämpötilaan ja sekoitettiin 5 tuntia. Liuotin poistettiin tyhjössä ja jäännös jaettiin 200 ml:n kesken vettä ja 200 ml:n kesken etyyliasetaattia. Seoksen pH säädettiin arvoon 7 lisäämällä kylläs-25 tettyä natriumbikarbonaattiliuosta ja riittävästi natrium-bisulfiittia lisättiin negatiivisen peroksidikokeen (tärkkelys- jodidi) saamiseksi. Kerrokset erotettiin ja vesipitoinen kerros pestiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros ja pesunesteet yhdistettiin, pestiin peräkkäin vedel-30 lä, 5 %:lla natriumbikarbonaattiliuoksella ja suolaliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin vähennetyssä paineessa saatiin vaahtoa, joka kromatografoi- 2„ 71156 tiin silikageelillä (kloroformi/etyyliasetaatti 20:3), jolloin saatiin 3,5 g haluttua välituotetta.

D. kalsium- 6/» -hydroksimetyylipenisillanaatti-sulfoni 5 30 ml:aan veden ja metanolin liuosta (1:1) lisät tiin 3,5 g 5 %:sta palladiumia kalsiumkarbonaatilla ja ka-talyytti esihydrattiin paineessa 3,3 kg/cm hydrauslaittees-sa. Saatuun katalyyttiin lisättiin 3,5 g bentsyyli-6^-hydrok-simetyylipenisillanaatti-sulfonia 10 ml:ssa metanolia 10 ja 20 ml:ssa tetrahydrofuraania ja seosta ravisteltiin ve- 2 tyatmosfäärissä paineessa 3,4 kg/cm 30 minuuttia. Katalyytti suodatettiin apuaineen lävitse ja suodos väkevöitiin tyhjössä. Vesipitoinen jäännös uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 100 ml) ja jäähdytyskuivattiin, jolloin saatiin 3,0 g 15 haluttua tuotetta kalsiumsuolana.

NMR-spektri (CDClg-vapaa happo) osoitti absorptiota kohdissa 1,49 (s, 3H), 1,6 (s, 3H), 4,1 (m, 3H), 4,32 (s, 1H) ja 4,9 (d, 1H, J=4Hz) ppm.

Esimerkki 2 2 0 6/?-Zl(S)hydroksietyyli7penisillaanihappo-sulfoni A. bent syy li-6^ -bromi-6otZ~l(S)hydroksietyyli7peni-sillanaatti

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 9 g bentsyyli-6,6-dibromipenisillanaattia 200 ml:ssa kuivaa tolueenia -78°C:ssa 25 argon-atmosfäärissä, lisättiin pisaroittain 15 ml t-butyy-lilitiumia pentaanissa. Vihertävänkeltaista liuosta sekoitettiin 50 minuuttia -78°C:ssa ja sen jälkeen lisättiin 10 ml vedettömän sinkkikloridin IM liuosta tetrahydrofuraanissa. Seosta sekoitettiin 45 minuuttia -78°C:ssa ja lisättiin 5 ml 30 asetaldehydiä samalla kun lämpötila pidettiin -78°C:ssa.

Sen jälkeen kun oli vielä sekoitettu 1 tunti reaktioseos jäähdytettiin lisäämällä 5 ml etikkahappoa 50 ml:ssa eetteriä -78°C:ssa ja annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan. Tolueeni poistettiin tyhjössä ja jäännös jaettiin veden 35 ja etyyliasetaatin kesken. Orgaaninen faasi erotettiin ja 25 71 1 5 6 vesipitoinen faasi uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 100 ml). Yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestiin 5 %:11a natriumbi-karbonaattiliuoksella ja sen jälkeen kyllästetyllä suolaliuoksella. Sitten ne kuivattiin· magnesiumsulfaatilla ja 5 väkevöitiin öljyksi, joka kromatografoitaessa silikagee-lillä käyttäen tolueeni/etyyliasetaattia eluanttina (10:2) antoi 3,5 g bentsyyli-6o£bromipenisillanaattia ja 39 g haluttua tuotetta. Analyyttinen näyte puhdistettiin uudel-leenkiteyttämällä eetteristä, sp. 224-125°C.

10 NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdis sa 1,42 (s, 3H), 1,45 (d, 3H, J=6Hz), 1,67 (s, 3H), 2,55 (s, 1H), 4,3 (q, 1H, J=6Hz), 4,6 (s, 1H), 5,3 (s, 2H), 5,5 (s, 1H) ja 7,4 (s, 5H) ppm.

B. bentsyyli-6^-/.KS)hydroksietyyli7penisillanaatti 15 20 ml:aan metanoli/vettä (1:1) lisättiin 1,1 g 5 %:sta palladiumia kalsiumkarbonaatilla ja saatu seos 2 hydrattiin paineessa 3,3 kg/cm 20 minuuttia. Saatuun mustaan lietteeseen lisättiin 1,1 g bentsyyli-6^ -bromi-6·£- /1(S)hydroksietyyldjpenisillanaattia ja hydrausta jatket- 2 20 tiin paineessa 3,3 kg/cm 30 minuuttia. Käytetty katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos väkevöitiin vähennetyssä paineessa. Se säädettiin pH-arvoon 8 ja uutettiin metyleenikloridilla. Orgaaninen faasi erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin öljyksi. Jäljel-25 le jäänyt öljy kromatografoitiin käyttäen 150 g silikagee-liä ja eluanttina kloroformi/etyyliasetaattia (10:1). Fraktiot 23-33 yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 148 mg haluttua tuotetta.

NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdis-30 sa 1,35 (d, 3H), 1,4 (s, 3H), 1,58 (s, 3H), 2,5 (m, 1H), 3,45 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 4,2 (m, 1H), 4,38 (s, 1H), 5,13 (s, 2H), 538 (d, 1H, J=4Hz) ja 7,33 (s, 5H) ppm.

C. bentsyyli-6^-/1(S)hydroksietyyli/penisillanaat-ti-sulfoni 35 Liuokseen, jossa oli 148 mg bentsyyli-6^-Z.KS)- hydroksietyyli/penisillanaattia 20 ml:ssa metyleeniklori- 26 71 1 5 6 dia 0-5°C:ssa, lisättiin pisaroittain 223 mg m-klooriper-bentsoehappoa. Saadun reaktioseoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa yli yön. Liukenemattomat aineet suodatettiin ja suodos haihdutettiin vähennetyssä paineessa 5 kuiviin. Jäännös jaettiin 5 %:sen natriumbikarbonaatti-liuoksen ja etyyliasetaatin kesken. Natriumbisulfiittia lisättiin voimakkaasti sekoitettuun seokseen siihen saakka kunnes saatiin negatiivinen peroksidi-koe (tärkke-lys-jodidi). Orgaaninen kerros erotettiin ja vesipitoinen 10 kerros uutettiin lisäämällä etyyliasetaattia. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestiin peräkkäin kyllästetyllä natrium-bikarbonaattiliuoksella ja suolaliuoksella ja sen jälkeen kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin tyhjössä saatiin 160 mg tuotetta öljynä.

15 NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdis sa 1,27 (s, 3H), 1,35 (d, 3H, J=6Hz), 1,5 (s, 3H), 3,2 (m, 1H), 3,85 (dd, 1H, J=ll, 5Hz), 4,53 (s, 1H), 4,77 (m, 1H), 4,77 (d, 1H, J=5Hz), 5,28 (ABq, 2H, J=12Hz) ja 7,43 (s, 5H) ppm.

20 D. 6y£-£l(S)hydroksietyyli/penisillaanihappo-sulfoni

Suspensio, jossa oli 160 mg 5 %:sta palladiumia kalsiumkarbonaatilla 20 ml:ssa metanoli/vettä (1:1), θειο hydrattiin paineessa 3,3 kg/cm 20 minuuttia. Saatuun suspensioon lisättiin 160 mg bentsyyli-6/3-ZKS)hydroksi- 25 etyyli7penisillanaatti-sulfonia ja hydrausta jatkettiin o paineessa 3,6 kg/cm 1 tunti. Käytetty katalyytti poistettiin ja suodoksen pH säädettiin arvoon 8. Sen jälkeen vesipitoinen kerros uutettiin etyyliasetaatilla, pH säädettiin arvoon 1,8 ja lisättiin uutta etyyliasetaattia. Etyyliase-30 taattikerros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin öljyksi (90 mg), öljy kiteytettiin, jolloin saatiin valkoista ainetta, sp. 160-161,5°C, hajosi.

NMR-spektri (CDClg-DMSO-Dg) osoitti absorptiota kohdissa 1,2 (d, 3H, J=6Hz), 1,42 (s, 3H), 1,52 (s, 3H), 35 3,80 (dd, 1H, J=10, 5Hz), 4,28 (s, 1H), 4,5 (m, 1H) ja 5,20 (d, 1H, J=5Hz) ppm.

27 71156

Esimerkki 3 6/0 -ri(R)hydroksietyyli7penisillaanihappo-sulfoni A. bentsyyli- - bromi - 6 «fc-ΖΊ (R) hy dro ks i e t y y 1 i.7 pe -nisillanaatti 5 50 ml:aan tolueenia jäähdytettynä -78°C:seen lisät tiin hitaasti 70 ml dietyyli-sinkkiä myöskin jäähdytettynä -78°C:seen. Sen jälkeen reaktioseokseen lisättiin 45 g bentsyyli-6,6-dibromisillanaattia 250 ml:ssa tolueenia 45 minuutin aikana. Sen jälkeen kun oli sekoitettu 10 1 tunti kylmässä lisättiin reaktioseokseen 17 ml asetalde- hydiä ja sekoittamista jatkettiin 1 tunti. Reaktioseos jäähdytettiin lisäämällä 11,5 ml etikkahappoa 100 ml:ssa dietyylieetteriä. Jäähdytyshaude poistettiin ja reaktio-seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Reaktio-15 seokseen lisättiin yhtä suuri tilavuus vettä ja etyyliasetaattia ja annettiin seistä 5 minuuttia. Orgaaninen faasi erotettiin ja pestiin peräkkäin vedellä (3 x 75 ml), kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella (3 x 75 ml) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (1 x 100 ml). Orgaani-20 nen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin tyhjössä öljyksi, joka kromatografoitiin käyttäen 500 g silikageeliä ja eluanttina kloroformi/etyyliasetaattia (10:1). Fraktiot 13-29 yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 20 g raakaa välituotetta, 25 joka kiteytettiin uudelleen etyylieetteri/heksaanista, jolloin saatiin 12,7 g tuotetta, sp. 109-110°C. Eristetty aine sisälsi myös bentsyyli-6/5-bromi-6~«Z-Z."I(S Jhydroksi-etyyldj penisillanaattia.

B. bentsyyli-6/0-Zl(R)hydroksietyyli7penisillanaat- 30 ti

Liuosta, jossa oli 1,0 g bent s yy li -6/5 -bromi -6*<-Zl(R)hydroksietyyli7penisillanaattia ja 1,4 ml tri-n-butyy-litina-hydridiä 35 mlissa bentseeniä, kuumennettiin palautuksella typpiatmosfäärissä 40 minuuttia. Sitten reaktio-35 seos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja liuotin poistet- 28 71 1 56 tiin vähennetyssä paineessa. Jäännös sekoitettiin useita kertoja heksäänin kanssa. Jäännös kromatografoitiin käyttäen 100 g silikageeliä ja eluanttina kloroformi/etyyliasetaattia (20:1). Fraktiot 82-109 yhdistettiin ja haih-5 dutettiin, jolloin saatiin 750 ml haluttua tuotetta.

NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdissa 1,18 (d, 3H, J=6Hz), 1,38 (s, 3H), 1,62 (s, 3H), 2,6 (n, 1H), 3,1+5 (dd, 1H, J = 9, 4Hz), 4,2 (m, 1H), 4,43 (s, 1H), 5,16 (s, 2H), 5,33 (d, 1H, J=4Hz) ja 7,33 10 (s, 5H) ppm.

C. bentsyyli-6/£ -/l(R)hydroksietyyli7penisilla-naatti-sulfoni

Seoksen, jossa oli 335 mg bentsyyli-6^-/1( R)-hydroksietyyli7penisillanaattia ja 507 mg m-klooriper-15 bentsoehappoa 50 ml:ssa metyleenikloridia, annettiin seistä yli yön huoneen lämpötilassa. Kiinteät aineet suodatettiin ja liuotin poistettiin suodoksesta. Jäännös jaettiin 50 ml:n kesken vettä ja 50 ml:n kesken etyyliasetaattia. Sekoitettuun seokseen lisättiin vähitellen natriumbi-20 sulfiittia siihen saakka kunnes kaikki peroksidi oli hajonnut, jota osoitti negatiivinen tärkkelys-jodidi-koe, Orgaaninen faasi erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tyhjössä. Jäännöstä käytettiin seuraavassa vaiheessa puhdistamatta.

25 D. 6 /3-ZJ.(R)hydroksietyyli7penisillaanihappo-sulfoni

Suspensio, jossa oli 1,78 g 5 %:ista palladiumia kalsiumkarbonaatilla 40 ml:ssa metanoli/vettä (1:1), hydrattiin 20 minuuttia paineessa 3,5 kg/cm . Saatuun suspensioon lisättiin 1,67 g bentsyyli-6/^-/fl(R)hydroksi- 30 etyyli7penisillanaatti-sulfonia ja hydrausta jatkettiin 2 paineessa 3,5 kg/cm 1 tunti. Metanoli poistettiin vähennetyssä paineessa ja vesipitoinen jäännös uutettiin etyyliasetaatilla. Vesipitoinen kerros tehtiin happameksi pH-arvoon 2 ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen 35 faasi pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin 71156 29 magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin valkoiseksi kiinteäksi aineeksi (1,0 g), sp. 182-183°C, hajosi.

NMR-spektri (DMSO - Dg) osoitti absorptiota kohdissa 1,15 (d, 3H, J=6Hz), 1,37 (s, 3H), 1,47 5 (s, 3H), 3,87 (dd, 1H, J=10, 5Hz), 4,28 (s, 1H), 4,5 (m, 1H), 5,11 (d, 1H, J=5Hz) ja 5,5 (m, 4H).

Esimerkki 4 6/i -/l(S)hydroksietyyli/penisillaanihappo-sulfoni A. bentsyyli-6/£ -bromi-6o(-/i(S)hydroksietyyli7 - 10 penisillanaatti-sulfoni 500 ml:aan metyleenikloridia pidettynä 5°C:ssa typ-piatmos fäärissä lisättiin 14,7 g bentsyyli-6/>-bromi-6q4-/l(S)hydroksietyyli_7penisillanaattia (esimerkki 2A) ja 17,8 g m-klooriperbentsoehappoa ja saadun reaktioseoksen 15 annettiin seistä yli yön. Lisättiin vielä 200 mg perhappoa ja sekoittamista jatkettiin vielä 2,5 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja suodos väkevöitiin valkoiseksi aineeksi. Jäännökseen lisättiin yhtä suuri tilavuus vettä ja etyyliasetaattia ja pH säädettiin arvoon 7,4 kyllästetyllä 20 natriumbikarbonaattiliuoksella. Orgaaninen faasi erotettiin, lisättiin tuoreeseen veteen ja pH säädettiin arvoon 8,2 kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella. Etyyliasetaattikerros pestiin kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella (3 x 400 ml) ja sen jälkeen suolaliuok-25 sella. Orgaaninen faasi erotettiin, kuivattiin magnesium-sulfaatilla ja haihdutettiin öljyksi (18,2 g).

NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdissa 1,28 (s, 3H), 1,43 (d, 3H, J=6Hz), 1,55 (s, 3H), 4,3 (q, 1H, J = 6Hz), 4,57 (s, 1H), 4,85 (s, 1H), 5,23 30 (ABq, 2H, J=12Hz) ja 7,38 (s, 5H) ppm.

B. bentsyyli-6^ -Zl(S)hydroksietyyli7penisillanaatti-sulfoni

Liuokseen, jossa oli 740 mg bentsyyli-6/£ -bromi-6o4-Zi(S)hydroksietyyli7penisillanaatti-sulfonia 10 ml:ssa 30 71 1 5 6 bentseeniä typpiatmosfäärissä, lisättiin 0,52 ml tri-n-bu-tyylitina-hydridiä ja saatua seosta kuumennettiin paluu-jäähdyttäen 3 tuntia. Bentseeni poistettiin tyhjössä ja jäännös sekoitettiin heksaanin kanssa. Heksaani dekantoi-5 tiin ja jäännöstä käytettiin seuraavassa vaiheessa puhdistamatta.

C. 6/» -/1(S)hydroksietyyli7penisillaanihappo-sulfoni 1 g 5 %:sta palladiumia kalsiumkarbonaatil- la 20 mltssa vettä esipelkistettiin vedyllä paineessa 3,5 2 .

10 kg/cm . Saatuun lietteeseen lisättiin raakaa bentsyyli- 6/£ -/i(S)hydroksietyyli7penisillanaatti-sulfonia 20 mltssa metanolia (esimerkki 4B) ja hydraus jatkettiin 1 tunti paineessa 3,5 kg/cm. Lisättiin raakaa bentsyyli-6^-^l(S)-hydroksietyyli7penisillanaatti-sulfonia 20 mltssa metano-15 lia (esimerkki 4B) ja hydrausta jatkettiin 1 tunti pai- 9 neessa 3,5 kg/cm . Lisättiin 500 mg katalyyttiä ja reaktiota jatkettiin 45 minuuttia. Käytetty katalyytti suodatettiin ja suodos uutettiin (2 x 50 ml) etyyliasetaatilla. Vesipitoinen kerros peitettiin tuoreella etyyliasetaatilla 20 ja pH säädettiin arvoon 1,5. Orgaaninen faasi erotettiin ja vesipitoinen kerros uutettiin etyyliasetaatilla (7 x 100 ml). Etyyliasetaattihappouutteet yhdistettiin, pestiin suolaliuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja väke-vöitiin tyhjössä kuiviin (230 mg).

25 NMR-spektri oli identtinen esimerkin 2D mukaan valmistetun tuotteen spektrin kanssa.

Esimerkki 5 -£l(R)hydroksietyyli7penisillaanihappo-sulfoni A. bentsyyli-6/i-bromi-6eC-/l(R)hydroksietyyli7peni-30 sillanaatti-sulfoni

Liuokseen, jossa oli 2,9 g bent syy li-6/^-bromi-6·^-Zl(R)hydroksietyyli_7penisillanaattia (esimerkki 3A) 100 ml:ssa metyleenikloridia jäähdytettynä 0-5°C:seen, lisättiin 3,6 g m-klooriperbentsoehappoa ja saadun reak-35 tioseoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa yli yön.

31 71156

Liuotin poistettiin vähennetyssä paineessa ja jäännös liuotettiin yhtä suuriin tilavuuksiin vettä ja etyyliasetaattia. Seoksen pH säädettiin arvoon 7,4 kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella ja orgaaninen kerros erotet-5 tiin. Orgaaninen faasi pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin öljyksi, joka kiteytyi (4,0 g).

NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdissa 1,25 (s, 3H), 1,28 (d, 3H, J=6Hz), 1,5 (s, 3H), 2,9 10 (m, 1H), 3,7 (dd, 1H, J=10, 5Hz), 4,43 (s, 1H), 4,6 (m, 1H), 4,57 (d, 1H, J=5Hz), 5,17 (ABq, 2H, J=12Hz) ja 7,32 (s, 5H) ppm.

B. bentsyyli-6/S» -^1(R)hydroksietyyli7penisillanaat-ti-sulfoni 15 Seosta, jossa oli 3,0 g bentsyyli- 6/* -bromi- 6*-

Zl(R)hydroksietyyli7penisillanaatti-sulfonia ja 2,9 ml tri-n-butyylitina-hydridiä 100 mlrssa bentseeniä, kuumennettiin paluujäähdyttäen typpiatmosfäärissä 30 minuuttia. Liuotin poistettiin tyhjössä ja jäännös uutettiin useita 20 kertoja heksaanilla. Jälelle jäänyt aine kromatografoltiin käyttäen 250 g silikageeliä, jolloin saatiin 1,67 g haluttua tuotetta, jota käytettiin seuraavassa vaiheessa.

C. 6/5 -Z1(R)hydroksietyyli7penisillaanihappo-sulfoni 25 1,7 g 5 %:ista palladiumia kalsiumkarbonaatil la 40 ml:ssa 5 %:ista metanoli/vettä pelkistettiin pai- 2 neessa 3,5 kg/cm 20 minuutin ajan. Saatuun suspensioon lisättiin 1,67 g bentsyyli-6/3 -/Tl/’R)hydroksietyyli/peni-sillanaatti sulfonia ja hydrausta jatkettiin 1 tunti.

30 Katalyytti poistettiin ja metanoli poistettiin tyhjössä suodoksesta. Vesipitoinen jäännös uutettiin vedellä ja sen jälkeen säädettiin pH-arvoon 2,0 g. Hapan vesipitoinen kerros uutettiin useita kertoja etyyliasetaatilla ja yhdistetyt uutteet pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella 35 ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin saatiin 1,0 g tuotetta, joka ei eronnut misään suhteessa esimerkin 3D mukaan valmi stet usi a tuot teestä.

32 71156

Esimerkki 6 6/>-/l(S)hydroksibentsyylij penisillaanihappo- sulfoni ja -/Ί (R) hydroks i bent sy yli? peni s illaanihappo-5 sulfoni A. bentsyyli-6^-bromi-6/5 -Cl(R)- ja (S)hydroksi-bentsyyli/penisillanaatti

Liuokseen, jossa oli 9,0 g bentsyyli-6,6-dibromi-penisillanaattia 200 ml:ssa kuivaa tolueenia jäähdytet-10 tynä -78°C:seen ja pidettynä argon-atmosfäärissä, lisättiin 14 ml t-butyylilitiumia jäähdytettynä -67°C:seen.

Sen jälkeen kun oli sekoitettu kylmässä 45 minuuttia lisättiin 2 ml bentsaldehydiä ja reaktioseoksen annettiin seistä 1 tunti. Sitten lisättiin liuos, jossa oli 1,2 ml 15 etikkahappoa 50 ml:ssa dietyylietyyliä, 10 minuutin aikana ja seosta sekoitettiin -78°C:ssa 30 minuuttia. Lisättiin vettä (100 ml) ja dietyylietyyliä (100 ml) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Orgaaninen kerros erotettiin ja vesipitoinen kerros pestiin eetteril-20 lä. Orgaaninen kerros ja eetteri-pesunesteet yhdistettiin ja pestiin peräkkäin vedellä (1 x 50 ml), kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella (2 x 50 ml) ja kyllästetyllä suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin, jolloin saatiin 10,3 g 25 öljyä.

Jäljelle jäänyt aine kromatografoitiin käyttäen 450 g silikageeliä ja eluanttina kloroformi/etyyliasetaattia (20:1). Fraktiot 71-101 yhdistettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 1,97 g puolikiinteätä tuotetta.

30 B. bentsyyli-6 /5-£l(R)hydroksibentsyylijpenisilla- naatti ja bentsyyli-6/5-ZTl(S) hydroks i bent syy 147 penisilla-naatti

Liuosta, jossa oli 1,9 g bentsyyli-6 »4-bromi-6/5 -35 £1(R) ja -(S)hydroksibentsyyli7penisillanaattia ja 1,1 ml tri-n-butyyli-tina-hydridiä 30 ml:ssa kuivaa bentseeniä 33 71 1 5 6 typpiatmosfäärissä, kuumennettiin paluujäähdyttäen 3,5 tuntia. Lisättiin vielä 1,0 ml hydridiä ja kuumentamista jatkettiin yli yön. Bentseeni poistettiin tyhjössä ja jäännös lietettiin heksaanin kanssa. Heksaani dekantoi-5 tiin ja 850 mg jäiselle jäänyttä öljyä kromatografoitiin käyttäen 100 g silikageeliä ja eluanttina kloroformi/etyyliasetaattia (20:3). Fraktiot 20-34 yhdistettiin ja liuotin poistettiin, jolloin saatiin 495 mg bentsyyli-6^-/l(R)hydroksibentsyyli7penisillanaattia.

10 NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdis sa 1,42 (s, 3H), 1,67 (s, 3H), 3,2 (m, 1H), 3,9 (dd, 1H, J= 4, 10Hz), 4,42 (s, 1H), 5,2 (s, 2H), 5,2 (m, 1H), 5,4 (d, 1H, J=4Hz) ja 7,35 (m, 10H) ppm.

Fraktiot 35-58 yhdistettiin ja väkevöitiin tyhjös-15 sä, jolloin saatiin 380 mg bentsyyli-6^-Zl(S)hydroksi-bentsyyli7 penisillanaattia.

NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdissa 1,33 (s, 3H), 1,67 (s, 3H), 3,4 (m, 1H), 3,85 (dd, 1H, J = 4, 10Hz), 4,42 (s, 1H), 5,10 (d, 1H, J = 4Hz), 20 5,10 (s, 2H), 5,10 (m, 1H) ja 7,35 (m, 10H) ppm.

C . bentsyyli-6/^ -Z!i(R)hydroksibentsyyli7penisilla-naatti-sulfoni

Liuokseen, jossa on 490 mg bentsyyli- 6y3-^(R)-hydroksibentsyylijpenisillanaattia 50 ml:ssa metyleeniklo-25 ridia jäähdytettynä -5°C:seen, lisättiin 1,35 g m-kloori-perbentsoehappoa ja saadun reaktioseoksen annettiin seistä yli yön. Liuotin poistettiin tyhjössä ja jäännöstä käsiteltiin yhtä suurella tilavuudella etyyliasetaattia ja vettä. Seoksen pH säädettiin arvoon 7,2 kyllästetyllä natrium-30 bikarbonaattiliuoksella ja lisättiin riittävästi natrium-bisulfiittia ylimääräisen perhapon hajottamiseksi (negatiivinen tärkkelys-jodidi-koe). Orgaaninen faasi erotettiin ja pestiin peräkkäin vedellä pH-arvossa 8,2, kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella ja suolaliuoksella. 35 Orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaa- 34 71156 tiliä ja väkevöitiin, jolloin saatiin 39,5 mg valkoista ainetta. Tuote kromatografoitiin käyttäen 100 g silika-geeliä ja eluanttina tolueeni/etyyliasetaattia (10:12). Fraktiot 18-27 yhdistettiin ja väkevöitiin, jolloin saa-5 tiin 48 mg tuotetta öljynä.

NMR-spektri (CDC13) osoitti absorptiota kohdissa 1,22 (s, 3H), 1,5 (s, 3H), 2,6 (m, 1H), 4,07 (dd, 1H, J=10, 5Hz), 4,47 (s, 1H), 4,67 (d, 1H, J=5Hz), 5,2 (ABq, 2H), 5,63 (d, 1H, J=10Hz) ja 7,37 (m, 10H) ppm.

10 CT. bentsyyli- 6/> -Zl(S)hydroksibentsyyli7penisil- lanaatti-sulfoni

Esimerkin 9C mukainen menetelmä toistettiin lähtemällä bentsyyli-6/> -/l(S)hydroksibentsyyli7penisillanaa-tista, jolloin saatiin haluttu tuote.

15 NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdis sa 1,19 (s, 3H), 1,5 (s, 3H), 2,8 (m, 1H), 4,20 (dd, 1H, J=10, 5Hz), 4,38 (d, 1H, J=5Hz), 4,43 (s, 1H), 5,20 (ABq, 2H), 5,77 (d, 1H, J=10Hz) ja 7,37 (m, 10H) ppm.

D. 6/>-/l(R)hydroksibentsyyli7penisillaanihappo-20 sulfoni

Suspensioon, jossa oli 148 mg 5 %:sta palladiumia kalsiumkarbonaatilla 20 mlrssa vesi/metanolia (1:1) esi- 2 hydrattuna paineessa 3,3 kg/cm 20 minuuttia, lisättiin 140 mg bentsyyli-6/>-/l(R)hydroksibentsyyli7penisil- 25 lanaatti-sulfonia ja hydrausta jatkettiin alkupainees- 2 sa 3,3 kg/cm 40 minuuttia. Lisättiin vielä 140 mg katalyyttiä ja pelkistystä jatkettiin 30 minuuttia. Sen jälkeen lisättiin lopuksi 140 mg katalyyttiä ja pelkistystä jatkettiin vielä 30 minuuttia. Käytetty katalyytti suoda-30 tettiin ja suodos uutettiin etyyliasetaatilla. Vesipitoinen kerros erotettiin, pH säädettiin arvoon 1,5 ja lisättiin tuoretta etyyliasetaattia. Etyyliasetaattiuutteet pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin tyhjössä saatiin 90 mg tuotetta 35 öljynä.

35 71 1 5 6 NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdissa 1,50 (s, 3H), 1,67 (s, 3H), 4,1 (dd, 1H, J=10, 5Hz), 4,45 (s, 1H), 4,78 (d, 1H, J=5Hz), 5,7 (d, 1H, J=10Hz) ja 7,4 (m, 5H).

5 D' . 6/>-/"l(S )hydroksibentsyyli/penisillaanihappo- sulfoni

Suspensioon, jossa oli 170 mg esipelkistet-tyä 5 %:sta palladiumia kalsiumkarbonaatilla 20 ml:ssa vesi/metanolia (1:1), lisättiin 170 mg bentsyyli-6/^ -10 Zl(S)hydroksibentsyyli7penisillanaatti-sulfonia ja hyd-rausta jatkettiin paineessa 3,3 kg/cm 40 minuuttia. Lisättiin vielä 340 mg katalyyttiä ja pelkistystä jatkettiin 3 tuntia. Katalyytti suodatettiin, pestiin tetra-hydrofuraani/vedellä (1:1) ja yhdistetyt suodos ja pesu-15 nesteet väkevöitiin. Jä3jslle jäänyt vesi uutettiin etyyliasetaatilla ja sen jälkeen tehtiin vesipitoinen kerros happameksi pH-arvoon 1,5 ja sen jälkeen uutettiin tuoreella etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Poistetta-20 essa liuotin tyhjössä saatiin 100 mg tuotetta, sp. 164-165°C, hajosi.

NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdissa 1,40 (s, 3H), 1,55 (s, 3H), 4,0 (dd, 1H, J=5, 10Hz), 4,4 (d, 1H, J=5Hz), 4,4 (s, 1H), 5,7 (d, 1H, J=10Hz) 25 ja 7,4 (m, 5H) ppm.

Esimerkki 7 .

6/£ -£i(S )hydroksi-2-fenetyyli7penisillaanihappo- sulfoni ja 6^-£i(R)hydroksi-2-fenetyyli7 penisillaanihappo-30 sulfoni A. bent syy li-6 et· bromi-6 /^-ZTl(R)hydroksi-2-fenetyy-li^penisillanaatti ja bentsyyli-B/J-bromi-S·^-ZH(S)hydroksi-2-fenetyyli7penisillanaatti

Liuokseen, jossa oli 9,0 g bentsyyli-6,6-dibromi-35 penisillanaattia 200 ml:ssa tolueenia jäähdytettynä -78°C:seen ja pidettynä argon-atmosfäärissä, lisät- 36 71 1 5 6 tiin 9,2 ml t-butyylilitiumin 2,5 M liuosta ja saadun reaktioseoksen annettiin seistä 40 minuuttia. Sen jälkeen lisättiin 2,34 ml fenyyliasetaldehydiä. Sen jälkeen kun oli sekoitettu 1 tunti lisättiin 1,2 ml etikkahap-5 poa 25 ml:ssa dietyylieetteriä ja sekoittamista jatkettiin -78°C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan, minkä jälkeen lisättiin yhtä suuri tilavuus vettä. Orgaaninen kerros erotettiin ja otettiin talteen ja vesipitoinen kerros uutettiin etyy-10 liasetaatilla. Orgaaninen kerros ja uutteet yhdistettiin, pestiin peräkkäin vedellä, kyllästetyllä natriumbikarbo-naattiliuoksella ja suolaliuoksella ja kuivattiin magnesium-sulfaatilla. öljymäinen jäännös (11,0 g), joka jäi jäljelle sen jälkeen kun liuotin oli poistettu tyhjössä, kroma-tografoitiin käyttäen 500 g silikageeliä ja eluanttina 15 kloroformi/etyyliasetaattia (20:0,2).

Fraktiot 150-154 yhdistettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 67 0 mg bentsyyli-6e^bromi- -£l (R) hydroks i - 2-fenetyyl47 penisillanaattia.

NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdis-20 sa 1,35 (s, 1H), 1,53 (s, 1H), 2,85 (m, 3H), 4,23 (m, 1H), 4,41 (s, 1H), 5,13 (s, 2H), 5,57 (s, 1H) ja 7,33 (m, 10H) ppm.

Fraktiot 155-195 yhdistettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 4,84 g bentsyyli-6/^ -bromi-6oC-Zl(S)hydroksi-25 2-fenetyylx7penisillanaattia.

NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdissa 1,35 (s, 3H), 1,60 (s, 3H), 2,85 (m, 3H), 4,23 (m, 1H), 4,41 (s, 1H), 5,08 (s, 2H), 5,42 (s, 1H) ja 7,33 (m, 10H) ppm.

30 B. bentsyyli-6/J-Zl/lR)hydroksi-2-fenetyyli/penisil- lanaatti ja bent syy li-6/J -/Tl(S )hydroksi-2-fenetyyli7peni-sillanaatti

Bentseeniliuosta (80 ml), jossa oli 5,51 g bentsyy-35 li-6 bromi-6/¾ -Zl(R)hydroksi-2-fenetyyli?penisillanaat- 37 71 1 5 6 tia ja bentsyyli- 6/> -bromi-6 ·(-£!( S )hydroksi-2-fenetyyli7 -penisillanaattia eristettynä esimerkin 10A mukaisesti, käsiteltiin 3,2 ml:11a tri-n-butyyli-tina-hydridiä ja reaktioseosta kuumennettiin paluujäähdyttäen typpiatmos-5 fäärissä 4 tuntia. Liuotin poistettiin vähennetyssä paineessa ja jäännös pestiin useita kertoja heksaanil-la. 4,2 g jäännöstä kromatografoitiin käyttäen 500 g silikageeliä ja eluanttina kloroformi/etyyliasetaattia (20:3).

10 Fraktiot 50-61 yhdistettiin ja väkevöitiin, jol loin saatiin 596 mg bentsyyli-6/^ -Z”l(S )hydroksi-2-fene-tyyli7penisillanaattia.

NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdissa 1,35 (s, 3H), 1,69 (s, 3H), 2,8 (m, 2H), 3,1 (m, 1H), 15 3,55 (dd, 1H, J=4, 10Hz), 4,23 (m, 1H), 4,40 (s, 1H), 5,15 (s, 1H), 5,35 (d, 1H, J=4Hz), 7,22 (s, 5H) ja 7,3 (s, 5H) ppm.

Fraktiot 65-75 yhdistettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 1,5 g bentsyyli-6^ -/l(R)hydroksi-2-fenetyyli7pe-20 nisillanaattia.

NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdissa 1,35 (s, 3H), 1,6 (s, 3H), 2,78 (m, 2H), 2,9 (m, 1H), 3,43 (dd, 1H, J=5,9Hz), 4,30 (m, 1H), 4,40 (s, 1H), 5,12 (s, 1H), 5,22 (d, 1H, J=5Hz), 7,19 25 (s, 5H) ja 7,3 (s, 5H) ppm.

C. bentsyyli-6/>-Zl(S)hydroksi-2-fenetyyli7peni-sillanaatti-sulfoni Jäähdytettyyn (0-5°C) liuokseen, jossa oli 300 mg bentsyyli- 6 A -/.HS )hydroksi-2-fenetyyli/penisillanaat-30 tia 50 ml:aan metyleenikloridia, lisättiin 630 mg m-kloori-perbentsoehappoa ja saatua reaktioseosta sekoitettiin yli yön. Liuotin poistettiin tyhjössä ja jäännöstä käsiteltiin yhtä suurella tilavuudella vettä ja etyyliasetaattia. Seoksen pH säädettiin arvoon 7,2 kyllästetyllä natriumbi-35 karbonaattiliuoksella ja lisättiin riittävästi natrium- 38 71156 bisulfiittia negatiivisen tärkkelys-jodidi-kokeen saamiseksi. Orgaaninen faasi erotettiin, käsiteltiin yhtä suurella tilavuudella vettä ja pH säädettiin arvoon 8,2 edellä kuvatulla tavalla. Orgaaninen faasi erotettiin, 5 pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin saatiin 320 mg tuotetta öljynä.

NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdissa 1,22 (s, 1H), 1,5 (s, 1H), 2,8 (m, 2H), 3,8 (dd, 1H, J=5, 10Hz), M-, 4 2 (s, 1H), 4,6 (d, 1H, J = 5Hz), 4,75 10 (m, 1H) 5,18 (ABq, 2H), 7,2 (s, 5H) ja 7,3 (s, 5H) ppm.

C. bentsyyli-6^-£l(R)hydroksi-2-fenetyyli7-penisillanaatti-sulfoni Käyttämällä esimerkin 7C mukaista menetelmää ja lähtemällä 7 00 mg:sta bentsyyli-6/£-Zl(R)hydroksi-2-fene-15 tyyli7penisillanaattia ja 850 mg m-klooriperbentsoehappoa saatiin 610 mg haluttua tuotetta öljynä.

NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdissa 1,25 (s, 1H), 1,52 (s, 1H), 2,8 (m, 2H), 3,7 (dd, 1H, J = 5, 10Hz), 4,42 (s, 1H), 4,55 (d, 1H, J = 5Hz, 20 4,80 (m, 1H), 5,18 (ABq, 2H), 7,22 (s, 5H) ja 7,3 (s, 5H) ppm.

D. Qft-Zl-(R)hydroksi-2-fenetyyl£7penisillaani-happo-sulfoninatriumsuola

Suspensioon, jossa oli 600 mg 5 %:sta palladiumia • · 2 25 kalsiumkarbonaatilla, esihydrattun paineessa 3,4 kg/cm 20 minuuttia 20 ml:ssa vesi/metanolia (1:1), lisättiin 600 mg bentsyyli-6/3-ZTl(R)hydroksi-2-fenetyyli7- penisillanaatti-sulfonia. Sen jälkeen kun oli jatkettu 2 hydrausta 35 minuuttia paineessa 3,4 kg/cm lisättiin 30 vielä 600 mg katalyyttiä ja hydrausta jatkettiin painees- 2 sa 3,4 kg/cm 10 minuuttia. Käytetty katalyytti suodatettiin ja pestiin vesi/metanolilla (1:1). Suodos ja pesunesteet yhdistettiin ja metanoli poistettiin vähennetyssä paineessa. Jäljelle jäänyt vesipitoinen liuos (pH = 8,0) 35 uutettiin etyyliasetaatilla ja kerrokset erotettiin. Vesi- 39 71 1 5 6 pitoinen kerros tehtiin happameksi pH-arvoon 1,8 ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi erotettiin, pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin tyhjössä saatiin 390 mg tuotetta 5 valkoisena aineena.

Vapaa happo liuotettiin etyyliasetaattiin, joka sisälsi pienen määrän dietyylieetteriä. Tähän liuokseen lisättiin 177 mg natrium-2-etyyliheksanoaattia ja liuoksen annettiin seistä 1 tunti. Saostunut tuotteen kiinteä nat-10 riumsuola suodatettiin ja kuivattiin (250 mg), sp. 205-208°C, hajosi.

NMR-spektri (Dg0) osoitti absorptiota kohdissa 1,42 (s, 3H), 1,65 (s, 3H), 2,9 (m, 2H), 4,0 (dd, 1H, J = 5, 10Hz), 4,3 (s, 1H), 4,9 (m, 1H), 5,0 (d, 1H, 15 J=5Hz) ja 7,3 (s, 5H) ppm.

D' . 6^ - A( S ) hydroksi-2-fenetyyli7penisillaanihappo-sulfoni

Suspensioon, jossa oli 320 mg esipelkistettyä 5 %:sta palladiumia kalsiumkarbonaatilla 20 ml:ssa vesi/metano- 20 lia (1:1), lisättiin 320 mg bentsyyli-6/0 -/l(S)hydroksi-2- fenetyylijpenisillanaatti-sulfonia ja saatua seosta ravis- 2 teltiin vetyatmosfäärissä alkupaineessa 3,3 kg/cm 30 minuuttia. Katalyytti suodatettiin, pestiin vesi/metanolil-la ja pesunesteet ja suodos yhdistettiin. Vesipitoinen 25 jäännös, joka jäi jäljelle metanolin poistamisen jälkeen tyhjössä, uutettiin etyyliasetaatilla ja sen jälkeen uutettiin uudella etyyliasetaatilla. Uute pestiin suolaliuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin öljyksi, jolloin saatiin 80 mg kiinteätä ainetta, sp. 80-30 85°C, hajosi.

NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdissa 1,42 (s, 1H), 1,65 (s, 1H), 2,9 (m, 2H), 4,0 (dd, 1H, J=5, 10Hz), 4,3 (s, 1H), 4,8 (m, 1H), 4,85 (d, 1H, J=5Hz) ja 7,3 (s, 5H) ppm.

40 71156

Esimerkki 8 6 fö-β- (R)hydroksi-3-fenyylipropyyli7penisillaani- happo-sulfoni ja 6 />-n(S)hydroksi-3-fenyylipropyyli7penisillaani-5 happo-sulfoni A. bentsyyli-6eirbromi-6/>-Z!l(R)- ja -(S)hydroksi- 3-fenyylipropyyli7 penisillanaatti 4,5 g bentsyyli-6,6-dibromipenisillanaattia liuotettiin 100 mitään kuivaa tolueenia ja saatu liuos jäähdy-10 tettiin -70°C:seen. Jäähdytettyyn liuokseen lisättiin 7,3 ml t-butyylilitiumia. Sen jälkeen kun oli sekoitettu kylmässä 20 minuuttia lisättiin 1,3 ml hydrokinnamaldehydiä ja sekoittamista jatkettiin 20 minuuttia. Lisättiin 0,57 ml etikkahappoa ja reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen 15 lämpötilaan. Tolueeni poistettiin tyhjössä ja lisättiin yhtä suuri tilavuus kloroformia ja vettä. Orgaaninen faasi erotettiin, pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin saatiin 5,3 g tuotetta öljynä. Tuote puhdistettiin kromatografoimalla 20 silikageelillä käyttäen eluanttina kloroformi/etyyliase-taattia (20:1).

Fraktiot 88-155 yhdistettiin ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin 3,2 tuotetta.

Anal, laskettu yhdisteelle C24H20°4NSBr: 25 C, 57,2; H, 5,2; N, 2,8.

Löydetty: C, 56,5; H, 5,2; N, 2,9.

B. bentsyyli-6/J -/l(R)hydroksi-3-fenyylipropyyli7-penisillanaatti ja bentsyyli-6/£-Zl(S)hydroksi- 3-fenyylipropyyli7penisillanaatti 30 Liuosta, jossa oli 1,5 g bentsyyli-6o£-bromi-6/£- £1(R)- ja -(S)hydroksi-3-fenyylipropyyli7penisillanaat-tia ja 1,72 ml tri-n-butyylitina-hydridiä 100 ml:ssa bentseeniä, kuumennettiin paluujäähdyttäen typpiatmosfäärissä 2 tuntia ja 40 minuuttia. Liuotin poistettiin tyh-35 jössä ja jäännös (3,7 g) kromatografoitiin käyttäen 150 g m - 71 156 silikageeliä ja eluanttina kloroformi/etyyliasetaattia (20:1).

Fraktiot 63-80 yhdistettiin ja liuotin poistettiin, jolloin saatiin 2*44 mg bentsyyli-6/> -Zl(S)hydroksi-3-5 fenyylipropyyli.7penisillanaattia öljynä.

NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdissa 1,40 (s, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,8 (m, 2H), 2,8 (m, 3H), 3,59 (dd, 1H, J=4, 10Hz), 4,1 (m, 1H), 4,43 (s, 1H), 5,20 (s, 2H), 5,43 (d, 1H, J=4Hz), 7,25 (s, 5H) ja 7,4 10 (s, 5H) ppm.

Fraktiot 114-133 yhdistettiin ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 369 mg bentsyyli-6/J-Zl(R)-hydroksi-3-fenyylipropyyli7penisillanaattia öljynä.

NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdis-15 sa 1,38 (s, 3H), 1,60 (s, 3H), 1,8 (m, 2H), 2,8 (m, 3H), 3,55 (dd, 1H, J=4,9Hz), 4,1 (m, 1H), 4,43 (s, 1H), 5,20 (s, 2H), 5,35 (d, 1H, J=4Hz), 7,25 (s, 5H) ja 7,4 (s, 5H) ppm.

C. bentsyyli-6/^ -Zl(R)hydroksi-3-fenyylipropyyli7-20 penisillanaatti-sulfoni

Liuokseen, jossa oli 585 mg bentsyyli-6/4-Zl(R)-hydroksi-3-fenyylipropyyli7penisillanaattia 35 ml:ssa me-tyleenikloridia jäähdytettynä 0-5°C:seen, lisättiin 700 mg m-klooriperbentsoehappoa ja reaktioseoksen annettiin seis-25 tä yli yön. Liuotin poistettiin vähennetyssä paineessa ja jäännöstä käsiteltiin yhtä suurella tilavuudella vettä ja etyyliasetaattia. pH säädettiin arvoon 7,2 kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella ja orgaaninen kerros erotettiin. Etyyliasetaattikerrokseen lisättiin yhtä suuri 30 tilavuus vettä ja pH säädettiin uudelleen arvoon 8,4. Etyyli-asetaattikerros erotettiin, pestiin kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella (3 x 50 ml) ja suolaliuoksella ja sen jälkeen kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin saatiin 678 mg tuotetta öljynä, joka kiteytyi seis- 42 71156 tessa, sp. 142-143°C.

NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdissa 1,30 (s, 3H), 1,6 (s, 3H), 1,8 (m, 2H), 2,8 (m, 2H), 3,83 (dd, 1H, J=5,9Hz), 4,50 (s, 1H), 4,55 5 (d, 1H, J = 5Hz), 4,75 (m, 1H), 5,2 (ABq, 2H), 7,2 (s, 5H) ja 7,38 (s, 5H) ppm.

C ’ . bentsyyli-6/£-2fl(S )hydroksi-3-fenyylipropyyli7-penisillanaatti-sulfoni

Seurattiin esimerkin 8C mukaista menetelmää lähte-10 mällä 300 mg:sta bentsyyli-6/9-/l(S)hydroksi-3-fenyyli-propyyli/penisillanaattia ja 361 mg:sta m-klooriperbent-soehappoa 35 ml:ssa metyleenikloridia, jolloin saatiin 346 mg tuotetta öljynä.

NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdis-15 sa 1,28 (s, 3H), 1,52 (s, 1H), 1,8 (m, 2H), 2,80 (m, 2H), 3,9 (dd, 1H, J=S,10Hz), 4,45 (s, 1H), 4,62 (m, 1H), 4,67 (d, 1H, J=5Hz), 5,22 (ABq, 2H), 7,22 (s, 5H) ja 7,38 (s, 5H) ppm.

D. 6/> -Zl(R)hydroksi-3-fenyylipropyyli7penisillaa-20 nihappo-sulfoni 67 8 mg bentsyyli-6/3-ZTl(R)hydroksi-3-fenyylipro-pyyli7penisillanaatti-sulfonia lisättiin suspensioon, jossa oli 700 mg esihydrattua 5 %:sta palladiumia kalsium- karbonaatilla 20 ml:ssa vesi/metanolia (1:1). Seosta ra- 2

25 visteltixn vetyatmosfäärissä alkupameessa 3,6 kg/cm 1 tunti. Sen jälkeen lisättiin 700 mg katalyyttiä ja hydrausta jatkettiin 1 tunti. Katalyytti suodatettiin ja pestiin vesi/metanolilla. Pesunesteet ja suodos yhdistettiin ja metanoli poistettiin tyhjössä. Vesipitoinen 30 jäännös uutettiin etyyliasetaatilla ja sen jälkeen pH

säädettiin arvoon 1,5 ja uutettiin tuoreella etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin saatiin 304 mg tuotetta, sp. 138-140°C, hajosi.

35 Vapaan hapon näyte (190 mg) liuotettiin etyyli asetaattiin ja käsiteltiin sen jälkeen 99 mg:11a natrium-2- « 71156 etyyliheksanoaattia. Sen jälkeen kun oli sekoitettu yli yön suodatettiin halutun tuotteen natriumsuola ja kuivattiin (165 mg).

Vapaan hapon NMR-spektri (DMSO-Dg) osoitti 5 absorptiota kohdissa 1,45 (s, 1H), 1,53 (s, 1H), 1,8 (m, 2H), 2,80 (m, 2H), 3,85 (dd, 1H, J=5,9Hz), 4,35 (s, 1H), 4,60 (d, 1H, J = 5Hz), 4,75 (m, 1H) ja 7,23 (s, 5H) ppm.

D' . 6y£-Z7l(S)hydroksi-3-fenyylipropyyli7penisil-10 laanihappo-sulfoni

Esimerkin 8D mukainen menetelmä toistettiin käyttämällä 346 mg bentsyyli-6/^ -£l(S)hydroksi-3-fenyylipro-pyyli7penisillanaatti-sulfonia ja 350 mg 5 %:sta palladiumia kalsiumkarbonaatilla 20 ml:ssa vesi/metanolia (1:1), 15 jolloin saatiin 196 mg haluttua tuotetta, sp. 146-148°C, hajosi.

126 mg 6/>-Zl(S)hydroksi-3-fenyylipropyyli/peni-sillaanihappo-sulfonia liuotettiin pieneen määrään etyyliasetaattia ja sen jälkeen käsiteltiin 57 mg:11a natrium-20 2-etyyliheksanoaattia. Lisättiin hiukan dietyylieetteriä ja saatu sakka suodatettiin ja kuivattiin, jolloin saatiin 57 mg halutun tuotteen natriumsuolaa.

Vapaan hapon NMR-spektri (DMS0-Dg) osoitti absorptiota kohdissa 1,47 (s, 1H), 1,60 (s, 1H), 2,0 25 (m, 2H), 2,8 (m, 2H), 3,9 (dd, 1H, J=5,10Hz), 4,40 (s, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,70 (d, 1H) ja 7,2 (s, 5H) ppm.

Esimerkki 9 6/> -£l(R)hydroksi-l-(2’-pyridyyli)metyyli7penisil-laanihappo-sulfoni ja 30 6/£ -£l(S)hydroksi-l-(2'pyridyyli)metyyli7penisil- laanihappo-sulfoni A. bentsyyli-6/0 -/1(R)- ja (S)hydroksi-l-(2'-pyridyyli )-metyyli7 penisillanaatti Jäähdytettyyn (-78°C) liuokseen, jossa oli 9,0 g 35 bentsyyli-6,6-dibromipenisillanaattia 200 ml:ssa toluee-nia argon-atmosfäärissä, lisättiin 11,8 ml t-butyyli- 44 71156 litiumia ja saadun vihreän liuoksen annettiin seistä 30 minuuttia. Lisättiin 1,9 ml 2-pyridyylikarboksialdehydiä ja reaktioseosta sekoitettiin kylmässä 45 minuuttia.

Sen jälkeen lisättiin 1,2 ml etikkahappoa 25 ml:ssa di-5 etyylieetteriä 20 minuutissa. Seoksen annettiin seistä kylmässä 30 minuuttia ja sitten annettiin lämmetä 10°:seen. Reaktioseos kromatografoitiin florisil-kolonnissa käyttäen eluanttina tolueeni/etyyliasetaattia (2:1). Fraktiot (kukin 300 ml) 3-5 yhdistettiin ja haihdutettiin, jolloin 10 saatiin 4,8 g öljyä.

öljy liuotettiin 60 ml:aan kuivaa bentseeniä, johon sitten lisättiin 3,2 ml tri-n-butyylitina-hydridiä. Saatua reaktioseosta kuumennettiin sitten paluujäähdyttä-en typpiatmosfäärissä 2,5 tuntia. Lisättiin vielä 2,0 ml 15 hydridiä ja sen jälkeen kuumentamista jatkettiin yli yön. Bentseeni poistettiin tyhjössä ja jäännös lietettiin heksaaniin useita kertoja. Saatu öljy kromatografoitiin käyttäen 500 g silikageeliä ja eluanttina tolueeni/etyyliasetaatti (2:1).

20 Fraktiot 104-131 yhdistettiin ja liuotin poistet tiin vähennetyssä paineessa, jolloin saatiin 480 mg bent-syyli-6/^-Z”l(R)-hydroksi-l-( 2 ’ -pyridyyli )metyyli/penisi 11a-naattia öljynä.

NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdissa 25 1,45 (s, 3H), 1,73 (s, 3H), 3,87 (dd, 1H, J=4, 10Hz), 4,53 (s, 1H), 4,65 (m, 1H), 5,20 (m, 1H), 5,23 (s, 2H), 5,48 (d, 1H), J=4Hz), 7,4 (s, 5H), 7,5 (m, 3H) ja 8,6 (m, 1H) ppm.

Fraktiot 136 - 190 yhdistettiin ja liuotin poistet-30 tiin tyhjössä, jolloin saatiin 950 mg bentsyyli-6/^- 2T1(S )hydroksi-l-(2 ’ -pyridyylDmetyyldJpenisillanaattia ölj ynä.

NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdissa 1,40 (s, 3H), 1,68 (s, 3H), 4,0 (m, 1H), 4,05 (dd, 1H, 35 J = 4,9Hz), 4,55 (s, 1H), 5,2 (s, 2H), 5,22 (m, 1H), 5,46 (d, 1H, J = 4Hz), 7,3 (s, 5H), 7,4 (m, 3H) ja 8,5 (m, 1H) ppm.

45 71156 B. bentsyyli-6/9-Zl(R)hydroksi-l-(21-pyridyyli)-metyyl47 penisillanaatti-sulfoni Lisättiin typpiatmosfäärissä 500 mg m-klooriper-bentsoehappoa liuokseen, jossa oli 480 mg bentsyyli-6/3 -5 £l(R)hydroksi-l-(2'-pyridyyli)metyyli7 penisillanaat- tia 40 ml:ssa metyleenikloridia ja jäähdytettynä 0-5°C:seen. Tunnin sekoittamisen jälkeen liuotin poistettiin tyhjössä ja jäännöstä käsiteltiin yhtä suurella tilavuudella vettä ja etyyliasetaattia. pH säädettiin arvoon 7,2 kyllästet-10 tyllä natriumbikarbonaattiliuoksella ja sen jälkeen lisättiin riittävästi natriumbisulfiittia negatiiviseen tärk-kelys-jodidikokeeseen saakka. Sen jälkeen kun vesipitoinen kerros oli erotettu lisättiin uutta etyyliasetaattia ja pH säädettiin arvoon 8,2. Etyyliasetaattikerros erotet-15 tiin, pestiin natriumbikarbonaattiliuoksella ja suolaliuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin saatiin 480 mg öljyä, joka sen jälkeen kromatogra-foitiin käyttäen 50 g silikageeliä ja eluanttina etyyliasetaattia. Fraktiot 22-55 yhdistettiin ja liuotin poistet-20 tiin tyhjössä, jolloin saatiin 125 mg tuotetta.

NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdissa 1,22 (s, 3H), 1,50 (s, 3H), 4,40 (s, 1H), 4,79 (m, 1H), 4,80 (d, 1H, J=4Hz), 5,18 (ABq, 2H, J=12Hz), 5,6 (m, 1H), 7.2 (m, 3H), 7,25 (s, 5H) ja 8,1 (m, 1H) ppm.

25 B'. bentsyyli-6/>-/TKS)hydroksi-l-(2,-pyridyyli)- metyylij penisillanaatti-sulfoni Käyttäen 250 mg bentsyyli-6/3-£l(S)hydroksi-l-(2'-pyridyyli)metyyli7penisillanaattia ja 320 mg m-kloori-perbentsoehappoa 25 mlrssa metyleenikloridia ja seuraa-30 maila esimerkin 9B mukaista menetelmää saatiin 240 mg haluttua tuotetta valkoisena aineena, sp. 140-145°C.

NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdissa 1,23 (s, 3H), 1,59 (s, 3H), 4,6 (s, 1H), 4,8 (m, 2H), 5.3 (ABq, 2H, J=12Hz), 5,95 (m, 1H), 7,4 (s, 5H), 7,5 35 (m, 3H) ja 8,4 (m, 1H) ppm.

4P 7115 6 C. 6//-A- (R)hydroksi-1-(2 ' -pyridyyli )metyyli7penis illaanihappo-sulfoni Suspensioon, jossa oli 120 mg esipelkistet-tyä 5 %:sta palladiumia kalsiumkarbonaatilla 2 0 ml:ssa 5 metanoli/vettä (1:1), lisättiin 120 mg bentsyyli-6/>~ A(R)hydroksi-1-(2 ’ -pyridyyli)metyyli7penisillanaatti- sulfonia ja seosta ravisteltiin vetyatmosfäärissä alku- 2 . .....

paineessa 3,3 kg/cm 30 minuuttia. Lisättiin vielä 120 mg katalyyttiä ja hydrausta jatkettiin 45 minuuttia painees-2 10 sa 3,3 kg/cm . Katalyytti suodatettiin, pestiin metanoli/-vedellä ja pesunesteet ja suodos yhdistettiin. Metanoli poistettiin tyhjössä ja vesipitoinen jäännös uutettiin etyyliasetaatilla. Vesipitoinen kerros jäähdytyskuivattiin, jolloin saatiin 90 mg haluttua tuotetta kalsiumsuo-15 lana.

Kalsiumsuolan NMR-spektri (D2O) osoitti absorptiota kohdissa 1,50 (s, 3H), 1,65 (s, 3H), 5,35 (s, 1H), 4,70 (m, 1H), 5,18 (d, 1H, J=4Hz), 5,65 (d, 1H, J=llHz), 7,7 (m, 3H) ja 8,6 (leveä d, 1H, J=Hz) ppm.

20 C. 6/J-A(S)hydroksi-l-(2'-pyridyyli)metyyli7pe- nisillaanihappo-sulfoni

Toistettiin esimerkin 9C mukainen menetelmä käyttämällä 2 40 mg bentsyyli-6^ -A(S )hydroksi-l-( 2 ’-pyridyyli )metyyli7penisillanaattia 480 mg kalsiumkarbonaatilla 25 olevaa palladiumia 20 ml:ssa metanoli/vettä, jolloin saatiin 170 mg halutun tuotteen kalsiumsuolaa.

47 71156

Esimerkki 10 6/3-asetoksimetyylipenisillaanihappo-sulfoni A. bentsyyli-6/3-asetoksimetyylipenisillanaatti-sulfoni 5 Liuokseen, jossa oli 500 mg bentsyyli-6/3-hydroksi- metyylipenisillanaatti-sulfonia ja 0,196 ml trietyyli-amiinia 20 ml:ssa metyleenikloridia jäähdytettynä 0-5°C:seen, lisättiin 0,1 ml asetyylikloridia ja 10 mg 4-dimetyyli-aminopyridiiniä. 20 minuutin sekoittamisen jälkeen liuotin 10 poistettiin tyhjössä ja lisättiin jäännökseen etyyliasetaattia. Saadut kiinteät aineet suodatettiin ja suodos pestiin perättäin vedellä, vedellä pH-arvossa 1,0, kyllästetyllä natriumbikarbonaatti liuoksella ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja liuotin 15 poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin 600 mg tuotetta öljynä.

NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdissa 1,30 (s, 3H), 1,59 (s, 3H), 2,1 (s, 3H), 4,2 (m, 1H), 4,5 (s, 1H), 4,6 (m, 2H), 3,65 (d, 1H, J=Hz), 5,22 20 (ABq, 2H, J=12Hz) ja 7,4 (s, 5H) ppm.

B. 6/5 -asetoksimetyylipenisillaanihappo-sulfoni Suspensioon, jossa oli 600 mg 5 %:sta palladiumia kalsiumkarbonaatilla esipelkistettynä 20 ml:ssa vesi/ve- tyä paineessa 3,5 kg/cm 20 minuutin aikana, lisät- 2 5 tiin 600 mg bentsyyli-6/£ -asetoksimetyylipenisillaanihap- po-sulfonia. Saatua seosta ravisteltiin vetyatmosfäärissä 2 alkupainessa 3,5 kg/cm 45 minuuttia. Katalyytti suodatettiin ja pestiin metanoli/vedellä. Suodos ja pesunesteet yhdistettiin ja jäähdytyskuivattiin, jolloin saa-30 tiin 360 mg haluttua tuotetta kalsiumsuolana.

Kalsiumsuolan NMR-spektri (D2O) osoitti absorptiota kohdissa 1,5 (s, 3H), 1,61 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), us 7115 6 4,25 (s, 1H), 5,3 (m, 1H), 4,60 (m, 2H) ja 5,07 (d, 1H, J=4Hz) ppm.

Esimerkki 11 6 /fr-stearoyylioksimetyylipenisillaanihappo-sulfoni 5 A. bentsyyli- 6/> -stearoyylioksimetyylipenisilla- naatti-sulfoni Käyttäen 500 mg bentsyyli- */> -hydroksimetyylipeni-sillanaatti-sulfonia, 430 mg stearoyylikloridia, 0,196 ml trietyyliamiinia ja 10 mg 4-dimetyyliaminopyridiiniä ja 10 seuraamalla esimerkin 14A mukaista menetelmää saatiin 784 mg haluttua tuotetta öljynä.

NMRspektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdissa 1,4 (m, 3H), 2,4 (m, 2H), 4,2 (m, 1H), 4,52 (s, 1H), 4,60 (m, 2H), 4,63 (d, 1H, J=4Hz), 5,22 (ABq, 2H, 15 J=12Hz) ja 7,4 (s, 5H) ppm.

B. -stearoyylioksimetyylipenisillaanihappo-sulfoni

Seuraamalla esimerkin 10B mukaista menetelmää ja käyttämällä 77 6 mg bentsyyli-6/0-stearoyylioksimetyylipe-20 nisillanaatti-sulfonia ja 880 mg 5 %:ista palladiumia kalsiumkarbonaatilla 25 ml:ssa metanoli/vettä (1:1) saatiin 524 mg halutun tuotteen kalsiumsuolaa. Kalsiumsuola suspensoitiin sen jälkeen 200 ml:aan etyyliasetaattia ja 200 ml:aan vettä ja käsiteltiin riittävällä määrällä 25 6N kloorivetyhappoa pH-arvoon 2,0. Etyyliasetaattikerros eroitettiin, pestiin suolaliuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin saatiin 260 mg haluttua tuotetta valkoisena aineena.

NMR-spektri (CDClg ja DMS0 - Dg) osoitti 30 absorptiota kohdissa 1,4 (m, 3H), 2,35 (m, 2H), 4,2 (m, 1H), 4,39 (s, 1H), 4,60 (m, 2H) ja 4,63 (d, 1H, J = 4Hz ) ppm.

49 71156

Esimerkki 12 6 $ -bentsoyylioksimetyylipenisillaanihappo-sulfoni A. bentsyyli-bentsoyylioksimetyylipenisillaanihappo- 5 sulfoni

Liuokseen, jossa oli 300 mg bentsyyli-6 -hydroksi-metyylipenisillanaatti-sulfonia ja 0,11 ml trietyyliamiinia 25 mlrssa metyleenikloridia jäähdytettynä 0-5°C:seen, lisättiin 0,094 ml bentsoyylikloridia ja 10 mg 4-dimetyyli-10 aminopyridiiniä. Sen jälkeen kun oli sekoitettu kylmässä 30 minuuttia liuos pestiin perättäin vedellä, vedellä pH-arvossa 1,0, kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin magnesium-sulfaatilla ja liuotin poistettiin tyhjössä. Jäännös kroma-15 tografoitiin käyttäen 20 g silikageeliä ja eluanttina tolu-eeni/etyyliasetaattia (8:1). Fraktiot 15-30 yhdistettiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin 280 mg tuotetta öljynä.

NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdissa 1,26 20 (s, 3H), 1,53 (s ,3H), 4,2 (m, 1H), 4,57 (s, 1H), 4,79 (d, 1H, J = 4Hz), 4,9 (m, 2H), 5,2 (ABq, 2H, J = 12Hz), 7,4 (s, 5H), 7,5 (m, 3H) ja 8,2 (m, 2H) ppm.

B. 6 β-bentsoyylioksimetyylipenisillaanihapposulfoni

Suspensioon, jossa oli 270 mg esipelkistettyä 5%:sta 25 palladiumia kalsiumbikarbonaatilla 15 mlrssa vesi/metanolia (1:1), lisättiin 270 mg bentsyyli-6 /3 -bentsoyylioksimetyyli- penisillaanihappo-sulfonia ja saatua seosta ravisteltiin 2 vetyatmosfäärissä alkupaineessa 3,5 kg/cm 40 minuuttia. Katalyytti suodatettiin ja etanoli haihdutettiin. Jäljelle 30 jäänyt vesipitoinen kerros uutettiin etyyliasetaatilla ja sen jälkeen jäähdytyskuivattiin, jolloin saatiin 200 mg tuotteen kalsiumsuolaa.

Kalsiumsuolojen NMR-spektri (D20) osoitti absorptiota kohdissa 1,5 (s, 3H), 1,6 (s, 3H), 4,8 (m, 3H), 5,1 (d, 1H, 35 J=4Hz), 7,6 (m, 3H) ja 8,0 (m, 2H) ppm.

50 71156

Esimerkki 13 6 ^-4'-tolyylisulfonyylioksimetyylipenisillaani- happo-sulfoni A. bentsyyli-6/^ -4’-tolyylisulfonyylioksimetyyli- 5 penisillanaatti 1,24 g:aan 4-tolyylisulfonyylikloridia 3,5 mlrssa pyridiiniä jäähdytettynä 0°C:seen ja argon-atmosfäärissä, lisättiin pisaroittain 800 mg bentsyyli-6/^ -hydroksi-metyylipenisillanaattia 1,5 ml:ssa pyridiiniä. Sen jäl-10 keen kun oli sekoitettu kylmässä 2 tuntia lisättiin 0,80 ml vettä ja sekoittamista jatkettiin 30 minuuttia 0°C:ssa. Reaktioseos lisättiin 30 ml:aan vettä ja pH säädettiin arvoon 1,0 laimealla kloorivetyhapolla. Vesipitoinen kerros uutettiin dietyylieetterillä ja orgaaninen faasi 15 eroitettiin ja pestiin peräkkäin 1,2N kloorivetyhapolla, vedellä ja suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin öljyksi (841 mg), joka kromatografoitiin käyttäen 100 g silikageeliä ja eluanttina kloroformi/etyyliasetaattia (10:1).

20 Fraktiot 10-25 yhdistettiin ja liuotin poistet tiin tyhjössä, jolloin saatiin 680 mg tuotetta.

B. 6/>-4 ’-tolyylisulfonyylioksimetyylipenisillaa-nihappo

Suspensioon, jossa oli 680 mg esipelkistet- 25 tyä 5 %:sta palladiumia kalsiumkarbonaatilla 20 mlrssa metanoli/vettä (1:1), lisättiin 680 mg bentsyyli-6/9 -4'- tolyylisulfonyylioksimetyylipenisillanaattia ja pelkistä- 2 mistä jatkettiin paineessa 3,4 kg/cm 30 minuuttia. Lisättiin vielä 680 mg katalyyttiä ja reaktiota jatkettiin 30 vielä 30 minuuttia. Katalyytti suodatettiin ja metanoli haihdutettiin suodoksesta. Vesipitoinen jäännös uutettiin etyyliasetaatilla ja vesipitoinen kerros tehtiin happameksi pH-arvoon 2,0. Tuoretta etyyliasetaattia käytettiin hapotetun vesipitoisen kerroksen uuttamiseksi.

35 Orgaaninen faasi erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saa- si 71156 tiin 463 mg tuotetta puolikiinteänä aineena.

NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdissa 1,57 (s, 3H), 1,6 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 4,1 (m, 3H), 4,2 (s, 1H), 5,4 (d, 1H, J=4Hz) ja 7,6 (ABq, 4H, 5 J=10Hz) ppm.

C. 6/9 -4'-tolyylisulfonyylioksimetyylipenisillaani-happo-sulfoni

Vettä (20 ml) lisättiin liuokseen, jossa oli 460 mg 6^-4'-tolyylisulfonyylioksimetyylipenisillaanihap-10 poa 20 ml:ssa metyleenikloridia, ja saadun seoksen pH

säädettiin arvoon 6,9 natriumhydroksidiliuoksella. Vesipitoinen kerros erotettiin ja orgaaninen kerros uutettiin vedellä (2 x 20 ml). Yhdistettyyn vesikerrokseen ja pesunesteisiin lisättiin pisaroittain 238 mg kaliumpermag-15 naattia 5 ml:ssa vettä, joka sisälsi 0,16 ml fosfori- happoa. Reaktion aikana (45 minuuttia) pH pidettiin arvossa 6,0-6,4 lisäämällä vesipitoista natriumhydroksidia. Sitten reaktioseoksen pH säädettiin arvoon 1,5 käyttäen 6N kloorivetyhappoa ja lisättiin 20 ml etyyliasetaattia.

20 Sen jälkeen kun seos oli jäähdytetty 0°C:seen lisättiin yhdellä kertaa 460 mg natriumbisulfiittia. pH säädettiin arvoon 1,5 käyttäen 6N kloorivetyhappoa ja orgaaninen faasi erotettiin, pestiin suolaliuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin saatiin 300 mg 25 tuotetta vaahtona.

NMR-spektri (CDClg) osoitti absorptiota kohdissa 1,45 (s, 3H), 1,65 (s, 3H), 2,45 (s, 3H), 4,4 (m, 3H), 4,42 (s, 1H), 4,8 (d, 1H, J=4Hz) ja 7,6 (ABq, 4H, J=10Hz) ppm.

30 52 71156

Esimerkki 14 6 /¾ -sulfo-oksimetyylipenisillaanihappo-sulfoni A· bentsyyli-6 /b -sulfo-oksimetyylipenisillanaatti-5 sulfonipyridiniumsuola

Liuokseen, jossa oli 953 mg bentsyyli-6/^ hydroksi-metyylipenisillanaatti-sulfonia 75 ml:ssa dimetyyliasetami-dia typpiatmosfäärissä, lisättiin 860 mg rikkitrioksidi-pyridiini-kompleksia ja reaktioseoksen annettiin seistä 45 10 minuuttia huoneen lämpötilassa. Seosta sekoitettiin 400 ml: ssa heksaania ja annettiin seistä 30 minuuttia. Heksaani dekantoitiin ja lisättiin uutta heksaania. Tämä käsittely toistettiin kahdesti, jolloin saatiin 900 mg haluttua tuotetta .

15 B. 6/3 -s ulfo-oksimetyylipenisillaanihappo-sulfoni

Seos, jossa oli 5 32 mg bentsyyli-6 /3-sulfo-oksimetyyli-penisillanaatti-sulfoni-pyridiniumsuolaa 10 ml:ssa vettä, joka sisälsi 174 mg natriumbikarbonaattia, lisättiin suspensioon, jossa oli 500 mg esipelkistettyä 10%:sta palladiumia 20 hiilellä 25 ml:ssa vettä ja saatua seosta ravisteltiin vety-atmosfäärissä paineessa 3,5 kg/cm 1 tunti. Lisättiin vielä 500 mg katalyyttiä ja reaktiota jatkettiin 30 minuuttia.

Sen jälkeen lisättiin lopullinen määrä 500 mg katalyyttiä ja pelkistystä jatkettiin 30 minuuttia. Katalyytti suoda-25 tettiin ja pestiin vedellä. Suodos ja pesunesteet yhdistet tiin ja jäähdytyskuivattiin, jolloin saatiin raakatuote, joka puhdistettiin kromatografisesti Sephadex-kolonnissa käyttäen vettä eluanttina. Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja jäähdytyskuivattiin puhdistetun tuotteen saami-30 seksi.

53 71 1 5 6

Esimerkki 15

Pivaloyylioksimetyyli-6 ^-hydroksimetyylipenisillanaatti-sulfoni ^ Liuokseen, jossa oli 1,0 g 6 /3 -hydroksimetyylipenisil- laanihappo-sulfoni-natriumsuolaa 10 ml:ssa dimetyyliforma-midia ja jäähdytettynä 0-5°C:seen, lisättiin 0,52 ml kloori-metyylipivalaattia. Sen jälkeen kun oli sekoitettu yli yön huoneen lämpötilassa reaktioseos kaadettiin veden ja etyyli- 10 asetaatm seokseen. Etyyliasetaattikerros erotettiin, pestiin vedellä (3 x 100 ml) ja suolaliuoksella (3 x 50 ml) ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin 1,1 g tuotetta öljynä.

NMR-spektri (CDCl^) osoitti absorptiota kohdissa 1,27 15 (s, 9H), 1,42 (s, 3H), 1,6 (s, 3H), 2,9 (bs, 1H), 4,2 (m, 3H) , 4,58 (ε, 1H), 4,75 (m, 1H) ja 5,82 (ABq, 2H, Α-β=16Ηζ) ppm.

Claims (2)

1. 71156 !> U Patenttivaatimus Menetelmä uusien kaavan (II) mukaisten 6 z'?) -hydroksi-alkyylipenisillaanihappojohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien emässuöLojen valmistamiseksi, jotka ovat 5 -laktamaasi-inhibiittoreita, H H ,0)2 ™ -KSVY-™3 10. di) J--------N-\ to2u jossa kaavassa Y merkitsee ryhmää 0-R_ R4-iH- 15 jossa R^ on sulfo, vety, 2-18 hiiliatomia sisältävä alkanoyyli, bentsoyyli, fenyylisulfonyyli tai metyylillä substituoitu fenyylisulfonyyli, on vety, 1-4 hiiliatomia sisältävä alkyy-li, fenyyli, bentsyyli, fenetyyli tai pyridyyli, tunnet-t u siitä, että poistetaan bentsyyliryhmä hydraamalla 20 palladiumkatalysaattorin läsnäollessa yhdisteestä, jolla on kaava (O)
2. 2 H HS, CH-. Y ^ 'N‘‘eCH3 O ~N VOjCHjC6H5 jossa Y merkitsee samaa kuin edellä, ja haluttaessa (a) muodostetaan kaavan (II) mukaisen yhdisteen farmaseutti-30 sesti hyväksyttävä emässuola tavanomaisilla menetelmillä, tai (b) muodostetaan helposti hydrolysoituva esteri alkyloimalla kaavan (II) mukaisen yhdisteen emässuola 3-6 hiiliatomia sisäl-täväl1ä alkanoyy1ioksimetyy1ihalogenidi1la.