FI66596B - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara prlinderivat - Google Patents

Description

f., KUULUTUSJULKAISU „ , Λ 4ΒΓα ^ ^ UTLÄGGNINGSSKItlFT 6 6596 (51) KvJtVo.3 C 07 D 207/16 SUOMI—FINLAND ί*1) 770A37 (22) HiMipM.AMBlnMH 10.02.77 (23) AHcupihrt—GlltigH«tadaf 1Q Q2 (41) Mk juBUmIuI — MMt a>m|g ^ qq

Patentti- |a rakictarlhallittit ^ i mrf juttuhan r_____

Patent· och l af itfty releen ' ’ Amok»» uti^d oc* «tUkrlte» puMeend 31.07.84 (32K33X31) Pyyd-tr «-ft·..-·*·*priori 13.02.76 21.06.76, 22.12.76 USA(US) 657792 698432 751851 (71) E.R. Squibb S Sons, Inc., Lawrencevi1le-Princeton Road, Princeton, New Jersey, USA(US) (72) Miguel Angel Ondetti, Princeton, New Jersey, David Wayne Cushman, Trenton, New Jersey, USA(US) (74) Oy Kolster Ab (54) Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten proliinijohdannaiSten valmistamiseksi - Förfarande för framställning av terapeutiskt användbara prolinderivat

Keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten proliinijohdannaisten valmistamiseksi, joiden kaava on (I) R3 ' *1 f] R2-S-(CH)n-CH-CO-N__L_C0R (I) 2 66596 jossa R on hydroksi tai alempi alkoksi, ja R^ tarkoittavat toisistaan riippumatta vetyä, alempaa alkyyliä tai fenyyli-alempi-alkyyliä ja R^ voi lisäksi olla fenyyli, R^ on vety, hydroksi tai alempi alkyyli, R2 on vety, alempi alkyyli, fenyyli-alempi-alkyyli, trifenyylimetyyli tai R^CO-, jossa Rt- on alempi alkyyli, fenyyli tai fenyyli-alempi alkyyli ja n on 0,1 tai 2.

Keksinnön mukaisia yhdisteitä valmistetaan yleensä asy-loimalla yhdiste, jonka kaava on (II) R3 Λ HN-!—COR (II) hapolla, jonka kaava on R4 Rp I I1 R0 - S - (CH) - CH - COOH (III) 2 n tai sen kemiallisella ekvivalentilla.

Siten lopputuote voidaan valmistaa ei ainoastaan suoraan asyloimalla kaavan III mukaisella hapolla, vaan myös välituotteella kuten a) 6iP*-halogeenialkaanihapolla, jonka kaava on Ru Rl I I1 X-(CH) - CH - COOH (Ula) n jossa X on bromi, kloori tai jodi, tai 3 6 65 9 6 b) tosyylioksialkaanihapolla, jolloin X kaavassa Ilia on tosyylioksi <Ce.H©~0,« tai c) substituoidulla akryylihapolla, jonka kaava on R4 rx

Ah = £ - COOH (Illb) Tässä asyloimisessa saatu yhdiste saatetaan sen jälkeen korvausta! additio-reaktioon tiolin tai tiohapon anionin kanssa, jonka kaava on

R2 - SH, ts. R2S

Asyloiminen voidaan myös suorittaa tiolaktonilla, jonka kaava on

Ru Ri I" I1 (CH,) -CH (IV) | 2 n | S-c.

N) jossa n on 1 tai 2, tai merkaptoalkaanihapolla, jonka kaava on Y - S - (CH)n- CH COR (Illd) jossa Y on R2, tai lisäksi jos halutaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R2 on vety, silloin Y voi myös olla suojaryhmä kuten a) CH30-^^—CH2-, b) , c) CH3CONHCH2 , d) R-O-C-CH- (CH) - S - n “ 66596 tai muu rikin suojaryhmä. Suojaryhmän poistaminen voidaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla, kuten käsittelemällä kuumalla tri-fluorietikkahapolla, kylmällä trifluorimetaanisulfonihapolla, mer-kuriasetaatilla, natriumilla nestemäisessä ammoniakissa, sinkillä ja kloorivetyhapolla tai senkaltaisella. Nämä menetelmät on kuvattu julkaisussa: Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl),

Voi. XV, osa I, sivulta 736 alkaen (1974).

Käytettäessä kaavan III mukaista happoa asyloimisaineena voidaan asyloiminen suorittaa kytkentäaineen, kuten disykloheksyyli-karbodi-imidin tai senkaltaisen läsnäollessa, tai happo voidaan aktivoida muodostamalla sen seka-anhydridi, symmetrinen anhydridi, happokloridi tai happoesteri, tai käyttämällä Woodward-reagenssia K, N-etoksikarbonyyli-2-etoksi-l,2-dihydroksinoliinia tai senkaltaista, (Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl), Voi. XV, osa II, sivulta 1 alkaen (1974)).

Kaavan II mukaisiin yhdisteisiin kuuluvat esim. proliini, hydroksiproliini, 4-metyyliproliini sekä niiden alemmat alkyyli-esterit. Sellaisten yhdisteiden asyloiminen on kuvattu yksityiskohtaisesti jälempänä.

Edullisen suoritusmuodon mukaan valmistettaessa kaavan I mukaisia yhdisteitä, erikoisesti silloin kun R2 on R^-CO-, kytketään kaavan II mukainen happo tai esteri halogeenialkaanihapon kanssa, jonka kaava on ί4 Ϊ1 X - (CH)n - CH - COOH (Ula) jossa X on halogeeni, edullisesti kloori tai bromi. Tämä voidaan suorittaa käyttämällä jotain tunnettua menetelmää, jossa happo Ula aktivoidaan ennen reaktiota hapon II kanssa, käsittäen seka-an-hydridin, symmetrisen anhydridin, happokloridin tai aktiivisen esterin muodostamisen tai Woodward-reagenssin K, EEDQ (N-etoksi-karbonyyli-2-etoksi-l,2-dihydroksikinoliini) tai senkaltaisen käytön.

Tässä reaktiossa saatu tuote on yhdiste, jonka kaava on I3 X - (CH) - CH - CO - N__COR (V) n s 66596

Kaavan V mukainen yhdiste saatetaan korvausreaktioon tiohapon an-ionin kanssa, jonka kaava on R2“SH, (ts. r2s ) jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava on R3 *1 r- R„ - S - (CH) - CH - CO - N--COR (I) 2 n

Kun R0 on R.CO, tämä yhdiste voidaan sen jälkeen muuttaa yhdisteeksi R3 i3 HS - (CH) - CH - CO - N_LcOR (Ia) n ammonolyysin avulla. Kun R2 on suojaryhmä, silloin kaavan Ia mukainen yhdiste voidaan saada poistamalla suojaryhmä edellä kuvatulla tavalla. Kun R on esteriryhmä (R on alempi alkoksi) voidaan esteriryhmä poistaa, esim. silloin kun R on tert.-butoksi tai tert.-amyylioksi, käsittelemällä kaavan I tai Ia mukaista esteriä trifluorietikkahapolla ja anisolilla vastaavan vapaan hapon saamiseksi. Kun muita alkoksiryhmiä on läsnä, saadaan vastaava happo alkaalisella hydrolyysillä.

Tämän menetelmän muunnoksen mukaisesti käytetään lähtöaineena akryylihappoa, jonka kaava on R* Rl CH=C-C00H (Illb) Tämä akryylihappo muutetaan ensin happohalogenidiksi ja annetaan sen jälkeen reagoida kaavan II mukaisen yhdisteen kanssa yhdisteen saamiseksi, jonka kaava on R3 I3

il I

CH=C - CO - N-—COR

ja tämä välituote saatetaan additio-reaktioon tiolin tai tiohapon kanssa edellä kuvatulla tavalla.

Tosyylioksialkaanihappoa, jonka kaava on /^\ h

CH3 S02°'(CH)n “ CH ' C00H

6 6 6 5 9 6 voidaan myös käyttää kaavan II mukaisen hapon asyloimisaineena ja saatu asyloitu tuote saatetaan senjälkeen korvaus-reaktioon esim. edellä kuvatulla tavalla.

Kaavan Illb mukainen akryylihappo voidaan vaihtoehtoisesti saattaa esim. reagoimaan tiohappoanionin R2S kanssa yhdisteen saamiseksi, jonka kaava on ?l r2-s-ch-ch-cooh joka muutetaan sen happohalogenidiksi, esim. tionyylikloridin avulla, senjälkeen kytketään kaavan II mukaiseen yhdisteeseen ja seurataan samaa reaktiojärjestystä kuin edellä.

Kaavan II mukainen happo tai esteri voidaan myös asyloida (xr —merkaptoalkaanihapon suojatulla muodolla, jonka kaava on ^4 ^1 RÖ-S-(CH) -CH-COOH (VI) o n jossa Rg on suojaryhmä. Nämä suojaryhmät voivat olla edellä kuvattuja.

Asyloimisen jälkeen tuotteesta voidaan poistaa suojaryhmä sinänsä tunnetulla tavalla.

Asyloimisaineena voi myös olla tiolaktoni, esim. /?-pro-piotiolaktoni tai ^,-metyyli-/^-propiotiolaktoni.

Yksityiskohtaisia tietoja keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistusmenetelmistä löytyy seuraavassa selostuksessa ja suoritus-esimerkeissä.

Erikoisen edullisen suoritusmuodon mukaisesti kaavan II mukainen happo tai esteri asyloidaan halogeenialkanoyylihalogeni-dilla, jonka kaava on *4 ίΐ X-(CH) -CH-COX n jossa kumpikin X riippumatta toisistaan on halogeeni, edullisesti kloori tai bromi, R^ on vety, alempi alkyyli tai fenyyli-alempi-alkyyli ja n on 0, 1 tai 2. Tämä reaktio suoritetaan alkaalisessa väliaineessa, esim. laimeassa alkalimetallihydroksidiliuoksessa, 7 66596 alkalimetallibikarbonaatti- tai alkalimetallikarbonaattiliuoksessa alennetussa lämpötilassa, esim. noin 0-15°C:ssa. Reaktiotuote saatetaan korvaus-reaktioon käyttäen edellä esitettyä tiolin tai tiohapon anionia myöskin alkaalisessa väliaineessa, edullisesti alkalimetallikarbonaattiliuoksessa ja sen jälkeen käsitellään tavanomaisella tavalla. Reaktiossa saatu yhdiste, jonka kaavassa I substituentti R2 on R^-CO, muutetaan yhdisteeksi, jossa R2 on vety, ammonolyysin avulla, esim. alkoholipitoisen ammoniakin tai väkevän ammoniumhydroksidiliuoksen avulla tai alkaalisen hydrolyysin avulla käyttäen esim. metallihydroksidiliuosta. Käytettäessä kaavan II mukaista happoa lähtöaineena lopputuote saadaan vapaana karboksyylihappona, joka voidaan senjälkeen muuttaa esteriksi, esim. esteröimällä diatsoalkaanin kuten diatsometaanin, l-alkyyli-3-p-tolyyli-triatseenin, kuten l-n-butyyli-3-p-tolyylitriatseenin tai sen kaltaisen kanssa.

Toisen suoritusmuodon mukaisesti kaavan II mukaista esteriä, edullisesti t-butyyliesteriä käsitellään vedettömässä väliaineessa, kuten dikloorimetaanissa, tetrahydrofuraanissa tai dioksaanissa tioalkaanihapolla, jonka kaava on Ϊ1

R0-S-CCH9) - CH - COOH

l In disykloheksyylikarbodi-imidin, N,N'-karbonyyIibisimidatsolin, etok-siasetyleenin, difenyylifosforyyliatsidin tai senkaltaisten kytkentä-aineiden läsnäollessa lämpötila-alueella noin 0-10°C. Esteriryhmä (R) voidaan senjälkeen poistaa esim. käsittelemällä trifluorietik-kahapolla ja anisolilla suunnilleen huoneen lämpötilassa.

Kun kaavan II mukainen esteri (esim. R on alempi alkoksi, erikoisesti t-butoksi) asyloidaan tiolaktonilla, esim. /3-propiotio-laktonilla tai ^-metyyli- ft>-propiotiolaktonilla, reaktio voidaan suorittaa vedettömässä liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, dioksaanissa tai metyleenikloridissa noin 0°C:n ja huoneen lämpötilan välillä. Esteriryhmä voidaan poistaa anisolilla ja tri-fluorietikkahapolla edellä kuvatulla tavalla.

8 66596

Kaavan I mukaisissa yhdisteissä on yksi tai useampia asymmetrisiä hiiliatomeja. Kun R^, R3 tai R^ tarkoittavat muuta kuin vetyä, niin hiili, johon ne ovat kiinnittyneet, on asymmetrinen.

Näitä hiiliatomeja on merkitty tähdellä kaavassa I. Yhdisteet ovat näinollen stereoisomeerissä muodoissa tai niiden raseemisina seoksina. Kaikki nämä muodot kuuluvat keksinnön piiriin. Edellä kuvatuissa menetelmissä voidaan käyttää lähtöaineina rasemaattia tai enantiomeeriä. Käytettäessä raseemista lähtöainetta edellä kuvatussa synteesissä yhdisteeseen sisältyvät stereoisomeerit voidaan erottaa tunnetuilla kromatograafisilla tai jakokiteyttämis-menetelmillä. Yleensä L-isomeeri aminohapon hiilen suhteen käsittää edullisen isomeerisen muodon. Myös D-isomeerjL asyylisivuketjun -hiileen (hiili, jossa on R][) nähden on edullinen.

Keksinnön mukaiset yhdisteet muodostavat emäksisiä suoloja erilaisten epäorgaanisten ja orgaanisten emäksien kanssa ja ne kuuluvat myös keksinnön piiriin. Sellaisia suoloja ovat ammoniumsuolat, alkalimetallisuolat kuten natrium- ja kaliumsuolat (jotka ovat edullisia), maa-alkalimetallisuolat kuten kalsium- ja magnesiumsuolat, suolat epäorgaanisten emästen kanssa, esim. disykloheksyyliamiini-suola, bentsatsiini-, N-metyyli-D-glukamiini-, hydrabamiinisuolat, suolat aminohappojen, kuten arginiinin ja lysiinin kanssa. Ei-myr-kylliset, fysiologisesti hyväksyttävät suolat ovat edullisia, vaikkakin muut suolat ovat myös käyttökelpoisia, esim. eristettäessä tai puhdistettaessa tuote siten kuin on kuvattu disykloheksyyliamii-ni-suolan yhteydessä suoritusesimerkeissä.

Suoloja muodostetaan sinänsä tunnetulla tavalla antamalla tuotteen vapaan happomuodon reagoida emäksen ekvivalentin kanssa halutun kationin aikaansaamiseksi, liuottimessa tai väliaineessa, johon suola liukenee, tai vedessä ja sen jälkeen poistamalla vesi jäähdytyskuivaamalla. Neutraloitaessa suola liukenemattomalla hapolla, kuten kationinvaihtohartsilla vetymuodossa (esim. polystyreeni-sulfonihappohartsi, kuten Dowex 50), tai vesipitoisella hapolla ja uuttamalla orgaanisella liuottimena, esim. etyyliasetaatilla, di-kloorimetaanilla tai senkaltaisella voidaan saada vapaa happo ja haluttaessa muodostaa toinen suola.

Keksinnön mukaiset yhdisteet estävät dekapeptidi-angioten-siinin I muuttumisen angiotensiiniksi II ja sen vuoksi ne ovat käyttökelpoisia lievennettäessä tai poistettaessa angiotensiinin aiheuttamaa kohonnutta verenpainetta. Entsyymi-reniinin vaikutus 9 66596 angiotensinogeeniin, veriplasmassa olevaan pseudoglobuliiniin aikaansaa angiotensiinin I. Angiotensiini I muuttuu angiotensiinia tuottavan entsyymin (ACE) vaikutuksesta angiotensiiniksi II. Viimeksimainittu on aktiivinen painetta aikaansaava aine, jonka on todettu aiheuttavan verenpainetaudin erilaisia muotoja eri nisäkkäissä, esim. rotissa ja koirissa. Keksinnön mukaiset yhdisteet vaikuttavat muutossarjaan angiotensiini(reniini)angiotensiini I-* angiotensiini II estämällä angiotensiiniä muuttavan entsyymin vaikutuksen ja vähentämällä tai poistamalla painetta aiheuttavan angiotensiinin II muodostumisen. Niinpä annostelemalla koostumusta, joka sisältää yhtä tai useampaa kaavan I mukaista yhdistettä tai sen fysiologisesti hyväksyttävää suolaa parannetaan nisäkkäissä esiintyvää angiotensiinistä riippuvaista liiallista verenpainetta. Yksinkertainen annos tai edullisesti 2-4 jaettua päivittäistä annosta määrässä noin 0,1-100 mg kg kohti päivässä, edullisesti noin 1-50 mg kg kohti päivässä on sopiva vähentämään verenpainetta, kuten on osoitettu eläinkokeilla, jotka on kuvattu julkaisussa: S.L. Engel, T. R. Schaeffer, M.H. Waugh ja B. Rubin, Proc. Soc.

Exp. Biol. Med. 143, 483 (1973). Ainetta annetaan edullisesti suun kautta, mutta myös voidaan käyttää parenteraalista annostusta, kuten laskimonsisäistä, lihaksensisäistä, ihonalaista tai intraperitone-aalista annostusta.

Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää verenpaineen alentamiseksi muodostamalla koostumuksia, kuten tabletteja, kapseleita tai nesteitä suun kautta annettavaksi tai steriilejä liuoksia tai suspensioita parenteraalista annostelua varten. Noin 10-500 mg kaavan I mukaista tai yhdistettä yhdisteiden seosta tai fysiologisesti hyväksyttävää suolaa yhdistetään fysiologisesti hyväksyttävän väliaineen, kantoaineen, lisäaineen, sideaineen, säilöntäaineen, stabiloimisaineen, makua antavan aineen jne. kanssa yksikköannosmuotoon hyväksytyn farmaseuttisen käytännön mukaisesti. Aktiivisen aineen määrä näissä koostumuksissa tai valmisteissa on sellainen, että saadaan sopiva ainemäärä esitetyllä alueella.

Kuvaavia lisäaineita, joita voidaan käyttää tablettien, kapselien, ja senkaltaisten yhteydessä ovat seuraavat: sideaine kuten tragakantti, akasia, maissitärkkelys tai gelatiini; lisäaine kuten dikalsiumfosfaatti; hajoamista edistävä aine kuten maissitärkkelys, perunatärkkelys, alginiinihappo ja senkaltainen; liukkaaksitekevä 10 66596 aine kuten magnesiumstearaatti; makeuttamisaine kuten sakkaroosi, laktoosi tai sakkariini; makua antava aine kuten piparminttu, wintergreen-öljy tai kirsikka. Kun annosyksikkömuoto on kapseli, se voi sisältää edellä mainittujen aineiden lisäksi nestemäistä kantoainetta kuten rasvaöljyä. Erilaisia muita aineita voi olla läsnä päällysteenä tai yksikköannoksen fysikaalisen muodon muuta modifioimista varten. Esim. tabletit voidaan päällystää shellakal-la, sokerilla tai molemmilla. Siirappi tai eliksiiri voi sisältää aktiivista yhdistettä, sakk roosia makeuttamisaineena, metyyli- ja propyyli-parabeenia säilöntäaineena, väriainetta ja makeuttamis-ainetta kuten kirsikka tai pomeranssiesanssia.

Sopivia koostuaukfcia injektiota varten saadaan tavanomaisen farmaseuttisen käytännön1 mukaisesti liuottamalla tai suspensoimalla aktiivinen aine väliaineeseen, kuten veteen injektiota varten, luonnosta saataviin kasvisöljyihin, kuten seesamöljyyn, maapähkinäöljyyn, kookospähkinäöljyyn, puuvillasiemenöljyyn jne tai synteettiseen rasva-väliaineeseen, kuten etyylioleaattiin tai senkaltaiseen. Puskuriaineita, säilöntäaineita, hapetuksenestoaineita ja senkaltaisia voidaan lisätä tarvittaessa.

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksinnön mukaista menetelmää ja erikoisesti edullisia suoritusmuotoja. Kaikki lämpötilat on ilmoitettu Celsiusasteina.

Esimerkki 1 1-(2-bentsovvlitioasetvvli)-L-proliini L-proliini (5,75 g) liuotetaan N natriumhydroksidiin (50 ml) ja liuos jäähdytetään jää-vesihauteella. Lisätään natrium-hydroksidia 2N (26 ml) ja klooriasetyylikloridia (5,65 g) ja seosta sekoitetaan voimakkaasti huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Lisätään suspensio, jossa on tiobentsoehappoa (7,5 g) ja kaliumkarbonaattia (4,8 g) vedessä (50 ml). Sen jälkeen kun on sekoitettu 18 tuntia huoneenlämpötilassa tehdään reaktioseos happameksi ja uutetaan etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros pestään vedellä, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja väkevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös (14,6 g) liuotetaan etyyliasetaattiin (150 ml) ja lisätään disyklo-heksyyliamiinia (11 ml). Kiteet suodatetaan ja kiteytetään uudelleen etyyliasetaatista, jolloin saadaan 5,7 g, sp. 151-152°C.

Suolan muuttamiseksi hapoksi kiteet liuotetaan seokseen, jossa on 5-%:ista kaliumbisulfaattia (100 ml) ja etyyliasetaattia (300 ml). Orgaaninen faasi pestään kerran vedellä, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja väkevöidään kuiviin tyhjössä, saanto 3,45 g.

11 66596

Esimerkki 2 1-(2-merkaptoasetyyli)-L-proliini l-(2-bentsoyylitioasetyyli)-L-proliini (3,4 g) liuotetaan veden (10,5 ml) ja väkevän ammoniakin (6,4 ml) seokseen. Tunnin kuluttua reaktioseos laimennetaan vedellä ja suodatetaan. Suodos uutetaan etyyliasetaatilla ja tehdään happameksi väkevällä kloori-vetyhapolla, kyllästetään natriumkloridilla ja uutetaan kahdesti etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiuutteet pestään kyllästetyllä natriumkloridilla ja väkevöidään kuiviin, saanto 1,5 g. Tuote 1-(2-merkaptoasetyyli)-L-proliini kiteytetään etyyliasetaatista (sp. 133-135°).

Esimerkki 3 1-(2-bentsotiopropanoyyli)-L-proliini L-proliini (5,75 g) liuotetaan vesipitoiseen N natriumhydrok-sidiin (50 ml) ja liuos jäähdytetään jäähauteella samalla sekoittaen. Lisätään 2N natriumhydroksidia (25 ml) ja 2-bromipropionyyli-kloridia (8,57 g) tässä järjestyksessä ja seos poistetaan jäähau-teelta ja sekoitetaan huoneen lämpötilassa 1 tunti. Lisätään tiobent-soehapon (7,5 g) ja kaliumkarbonaatin (4,8 g) seos vedessä (50 ml) ja seosta sekoitetaan yli yön huoneen, lämpötilassa. Sen jälkeen kun on tehty happameksi väkevällä kloorivetyhapolla , vesiliuos uutetaan etyyliasetaatilla ja orgaaninen faasi pestään vedellä, kuivataan ja väkevöidään kuiviin. Jäännös (14,7 g) kromatografoidaan kolonnissa, jossa on 440 g silikageeliä, bentseeni/etikkahapon seoksella (7:1). Fraktiot, jotka sisältävät halutun aineen, otetaan talteen väkevöidään kuiviin ja jäännös saostetaan kahdesti eetteri/heksaa-nilla ja muutetaan disykloheksyyliamiinisuolaksi eetteri/heksaanista, jolloin saadaan 9,4 g tuotetta. Sp. 148-156°. Disykloheksyyliamii-nisuola muutetaan takaisin hapoksi esimerkin 1 mukaisesti, saanto 5,7 g.

Esimerkki 4 _ 1-(2-merkaptopropanoyyli)-L-proliini l-(2-bentsoyylitiopropanoyyli)-L-proliini (5,7 g) liuotetaan veden (12 ml) ja väkevän ammoniumhydroksidin (9 ml) seokseen samalla sekoittaen. Tunnin kuluttua seos laimennetaan vedellä (10 ml) ja'suodatetaan. Suodos uutetaan kahdesti etyyliasetaatilla, väkevöidään 1/3 tilavuuteen, tehdään happameksi väkevällä kloorivetyhapolla ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestään kylläs- 12 66596 tetyllä natriumkloridilla, kuivataan ja väkevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös l-(2-merkaptopropanoyyli)-L-proliini kiteytetään etyyli-asetaatti/heksaanista, saanto 3 g, sp. (105) 115-120°C.

Esimerkki 5 1-(3-bentsoyylitiopropanoyyli)-L-proliini L-proliini (5,75 g) liuotetaan IN natriumhydroksidiin (50 ml) ja liuos-jäähdytetään jäähauteella.’ Lisätään 3-bromipropionyyliklo-ridia (8,5 g) ja 2N natriumhydroksidia (27 ml) ja seosta sekoitetaan 10 minuuttia jäähauteella ja 3 tuntia huoneen lämpötilassa. Lisätään suspensio, jossa on tiobentsoehappoa (7,5 g) ja kaliumkarbonaattia (4,5 g) vedessä (50 ml) ja seosta sekoitetaan 18 tuntia huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen kun on tehty happameksi väkevällä kloorivetyhapolla,vesipitoinen faasi uutetaan kahdesti etyyliasetaatilla. Orgaaniset kerrokset kuivataan magnesiumsulfaatilla ja väkevöidään kuiviin tyhjössä, jolloin saadaan 7,1 g 1-(3-bentsoyylitio-propanoyyli)-L-proliinia, sp. 101-102° (etyyliasetaatti/heksäani).

Esimerkki 6 L-proliini-tert.-butyyliesteri L-proliini (230 g) liuotetaan seokseen, jossa on vettä (1 1) ja 5N natriumhydroksidia (400 ml). Liuos jäähdytetään jäähauteella ja lisätään samalla voimakkaasti sekoittaen 5N natriumhydroksidia ja (460 ml) ja bentsyylioksikarbonyylikloridia (340 ml) viidessä yhtäsuuressa osassa 1/2 tunnin aikana. Senjälkeen kun on sekoitettu tunti huoneen lämpötilassa, seos uutetaan kahdesti eetterillä ja tehdään happameksi väkevällä kloorivetyhapolla. Sakka suodatetaan ja kuivataan. Saanto 442 g, sp. 78-80°.

Siten saatu bentsoyylioksikarbonyyli-L-proliini (180 g) liuotetaan seokseen, jossa on dikloorimetaania (300 ml), nestemäistä isobutyleeniä (800 ml) ja väkevää rikkihappoa (7,2 ml). Liuosta ravistellaan painepullossa 72 tuntia. Paine poistetaan, isobuty-leenin annetaan haihtua ja liuos pestään 5-%:isella natriumkarbo-tilla, vedellä, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja väkevöidään kuiviin tyhjössä, jolloin saadaan 205 g bentsyylioksikarbonyyli-L-pro-liini-tert.-butyyliesteriä.

Bentsyylioksikarbonyyli-L-proliini-tert.-butyyliesteri (205 g) liuotetaan absoluuttiseen etanoliin (1,2 1) ja hydrataan normaalipaineessa käyttäen 10 % Pd hiilellä (10 g) siihen saakka kunnes todetaan vain jälkiä hiilidioksidista vetypoistokaasussa (24 tuntia). Katalysaattori suodatetaan pois ja suodos väkevöidään tyhjössä paineessa 30 mm Hg. Jäännös tislataan tyhjössä L-pro- 13 66596 liini-tert.-butyyliesterin saamiseksi, ^ρ.^^ 50-51°.

Esimerkki 7 l-(3-asetvvlitiopropanovvli)-L-proliini-tert.-butyyliesteri L-proliini-tert.-butyyliesteri (5,13 g) liuotetaan dikloori-metaaniin (40 ml) ja liuos jäähdytetään jää-vesihauteella. Lisätään liuos, jossa on disykloheksyylikarbodi-imidiä (6,18 g) di-kloorimetaanissa (20 ml) ja sen jälkeen välittömästi 3-asetyyli-tiopropionihappoa (4,45 g). Senjälkeen kun on sekoitettu 15 minuuttia jää-vesihauteella ja 16 tuntia huoneenlämpötilassa, sakka suodatetaan ja suodos väkevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös liuotetaan etyyliasetaattiin ja pestään neutraaliksi. Orgaaninen kerros kuivataan magnesiumsulfaatilla ja väkevöidään kuiviin tyhjössä, jolloin saadaan 9,8 g 1-(3-asetyylitiopropanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyli-esteriä.

Esimerkki 8 1-(3-asetvylitiopropanoyyli)-L-proliini 1-(3-asetyylitiopropanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyliesteri (4,7 g) liuotetaan seokseen, jossa on anisolia (34 ml) ja trifluo-rietikkahappoa (68 ml), ja seosta pidetään huoneen lämpötilassa l tunti. Liuottimet poistetaan tyhjössä ja jäännös saostetaan eetteri/hek-saanista useita kertoja. Jäännös (3,5 g) liuotetaan asetonitrii-liin (25 ml) ja lisätään disykloheksyyliamiinia (2,8 ml). Kiteinen suola suodatetaan ja kiteytetään uudelleen isopropanolista. Saanto 3,8 g, sp. 176-177°. Suola muutetaan uudelleen 1-(3-asetyylitio-propanoyyli)-L-proliiniksi esimerkissä 1-kuvatulla tavalla, saanto 1,25 g, sp. 89-90° (etyyliasetaatti/heksaani).

.Esimerkki 9 1-(3-merkaptopropanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyliesteri

Liuokseen, jossa on L-proliini-tert.-butyyliesteriä (3,42 g) vedettömässä tetrahydrofuraanissa (10 ml) jäähdytettynä jäähauteella, lisätään propiotiolaktonia (1,76 g). Sen jälkeen kun on pidetty 5 minuuttia jäähauteella ja 3 tuntia huoneen, lämpötilassa, reaktioseos laimennetaan etyyliasetaatTllä:'’r2"ÖÖ ml) ja’’pestään 5-%: isella ka-liumbisulfaatilla ja vedellä. Orgaaninen kerros kuivataan magnesium-sulfaatilla ja väkevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös l-(3-merkapto-propanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyliesteri kiteytetään eetteri/ heksaanista, saanto 3,7 g, sp. 57-58°.

λ·> 66596

Esimerkki 10 1-(3-merkaptopropanovvli)-L-proliini

Menetelmä A

l-(3-bentsoyylitiopropanoyyli)-L-proliini (H,9 g) liuotetaan seokseen, jossa on vettä (8 ml) ja väkevää ammoniumhydroksidia (5,6 ml), ja liuosta pidetään samalla sekoittaen argon-atmosfäärissä 1 tunti. Reaktioseos laimennetaan vedellä, suodatetaan ja suodos uutetaan etyyliasetaatilla. Vesipitoinen faasi tehdään happameksi väkevällä kloorivetyhapolla, kyllästetään natriumkloridilla ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaniset kerrokset pestään kyllästetyllä natriumkloridilla, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja väkevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös 1-(3-merkaptopropanoyyli)-L-proliini kiteytetään etyyliasetaatti/heksaanista, saanto 2,5 g, sp. 68-70°.

Menetelmä B

l-(3-asetyylitiopropanoyyli)-L-proliini (0,8 g) liuotetaan 5,5 N metanolipitoiseen ammoniakkiin (5 ml) ja liuosta pidetään argon-atmosfäärissä huoneen lämpötilassa. Kahden tunnin kuluttua liuotin poistetaan tyhjössä, jäännös liuotetaan veteen ja johdetaan ioninvaihtokolonniin, joka on H+-vaiheessa £t>owex 50 (analyyttinen laatu)J? ja eluoidaan vedellä. Fraktiot, jotka antavat tioli-positii-visen reaktion, otetaan talteen ja väkevöidään kuiviin, saanto 0,6 g. Tämä tuote kiteytetään etyyliasetaatti/heksaanista menetelmän A mukaisesti 1-(3-merkaptopropanoyyli)-L-proliinin saamiseksi.

Menetelmä C

l-(3-merkaptopropanoyyli)-L-proliini-t-butyyliesteri (2,3 g) liuotetaan seokseen, jossa on anisolia (20 ml) ja trifluorietikka-happoa (45 ml). Sen jälkeen kun on pidetty 1 tunti huoneen lämpötilassa argon-atmosfäärissä, reaktioseos väkevöidään kuiviin tyhjössä ja jäännös saostetaan etyyliasetaatti/heksaanista useita kertoja. Jäännös (1,9 g) liuotetaan etyyliasetaattiin (30 ml) ja lisätään disykloheksyyliamiinia (85 ml). Kiteinen suola suodatetaan ja kiteytetään uudelleen isopropanolista, saanto 2 g, sp. 187-188°.

Suola muutetaan hapoksi esimerkin 1 mukaisesti, saanto 1,3 g. Tuote kiteytetään etyyliasetaatti/heksaanista menetelmän A mukaisesti.

Suolat

Natrium l-(3-merkaptopropanoyyli)-L-proliini (500 mg) liuotetaan •f 15 66596 seokseen, jossa on vettä (2,5 ml) ja N natriumhydroksidia (2,5 ml). Liuos jäähdytyskuivataan natriumsuolan saamiseksi.

Magnesium l-(3-merkaptopropanoyyli)-L-proliinia (500 mg), magnesium-oksidia (*+9,5 mg) ja vettä (10 ml) sekoitetaan samalla lievästi kuumentaen täydellisen liuoksen muodostumiseen saakka. Sen jälkeen liuotin poistetaan jäähdytyskuivaamalla magnesiumsuolan saamiseksi.

Kalium l-(3-merkaptopropanoyyli)-2-proliini (500 mg) liuotetaan seokseen, jossa on kalsiumhydroksidia (91 mg) ja vettä (10 ml), ja liuos jäähdytyskuivataan kalsiumsuolan saamiseksi.

Kalium 1-(3-merkaptopropanoyyli)-L-proliini (500 mg) liuotetaan seokseen, jossa on kaliumbikarbonaattia (246 mg) ja vettä (10 ml), ja jäähdytyskuivataan kaliumsuolan saamiseksi.

N-metyyli-D-glukamiini l-(3-merkaptopropanoyyli)-L-proliini (500 mg) ja N-metyyli-D-glukamiini (480 mg) liuotetaan veteen (10 ml) ja jäähdytyskuivataan N-metyyli-D-glukamiini-suolan saamiseksi.

Esimerkki 11 1-(3-merkaptopropanovvli)-L-hydroks iproliini Käyttämällä L-hydroksiproliinia esimerkin 3 mukaisessa menetelmässä L-proliinin asemesta ja sen jälkeen käsittelemällä tuotetta esimerkin 10 mukaisella menetelmällä A saadaan l-(3-bent-soyylitiopropanoyyli)-L-hydroksiproliini ja 1-(3-merkaptopropano-yyli)-L-hydroksiproliini vastaavasti (viimemainitun j*p. 193,5 -195°C disykloheksyylianiinisuolana).

« 66596

Esimerkki JL2_ 1-(3-merkaptoppopanoyyli)-D-proliini Käyttämällä D-proliinia esimerkin 5 mukaisessa menetelmässä L-proliinin asemesta ja sen jälkeen käsittelemällä tuotetta esimerkin 10 mukaisella menetelmällä A saadaan 1-(3-bentsoyylitiopro-panoyyli)-D-proliinia l-(3-merkaptopropanoyyli)-D-proliini, sp. 68-70°.

.Esimerkki 13 A. 3-asetvvlitio-2-metvvlipropanonihappo

Seosta, jossa on tioetikkahappoa (50 g) ja metakryylihappoa (40,7 g), kuumennetaan höyryhauteella 1 tunti ja sen jälkeen pidetään huoneen .lämpötilassa 18 tuntia. Senjälkeen kun MNR-spektro-kopiolla on todettu, että metakryylihappo on täydellisesti reagoinut, reaktioseos tislataan tyhjössä ja haluttu 3-asetyylitio-2-metyyli-propanonihappo erotetaan fraktiossa, jonka kp. 128,5 - 131° (2,6 mm Hg) ,* saanto 64 g.

B. 1-(3-asetyylitio-2-netyylipropanoyyli)-L-proliini-tert.- butyyliesteri L-proliini-tert.-butyyliesteri (5,1 g) liuotetaan dikloori-metaaniin (40 ml) ja liuosta sekoitetaan ja jäähdytetään jäähauteel-la. Disykloheksyylikarbodi-imidi (6,2 g) liuotettuna dikloorime-taaniin (15 ml) lisätään ja sen jälkeen lisätään välittömä sti liuos, jossa on 3-asetyylitio-2-metyylipropanonihappoa (4,9 g) dikloorime-taanissa (5 ml). Sen jälkeen kun on sekoitettu 15 minuuttia jäähau-teella ja 16 tuntia huoneen lämpötilassa, sakka suodatetaan ja suodos väkevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös liuotetaan etyyliasetaattiin ja pestään neutraaliksi. Orgaaninen faasi kuivataan magnesiumsulfaatilla j-a väkevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös 1-(3-asetyylitio-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyliesteri puhdistetaan ko-lonnikromatografiän (silikageeli/kloroforini) avulla, saanto 7,9 g öljynä.

Esimerkki 114 l-(3-asetyylitio-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini

Menetelmä A

Esimerkin 13B mukainen 1-(3-asetyylitio-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyliesteri (7,8 g) liuotetaan seokseen, jossa on anisolia (55 ml) ja trifluorietikkahappoa (110 ml). Sen jälkeen kun on pidetty tunti huoneen lämpötilassa, liuotin poistetaan tyhjössä 17 66596 ja jäännös seostetaan useita kertoja eetteri/heksaanista. Jäännös (6,8 g) liuotetaan asetonitriiliin (40 ml) ja lisätään disyklo-heksyyliamiinia (H,5 ml). Kiteistä suolaa keitetään tuoreen asetonit-riilin (100 ml) kanssa, jäähdytetään huoneen lämpötilaan ja suodatetaan, saanto 3,8 g, sp. (165) 187-188°. Tämä aine kiteytetään uudelleen isopropanolista -67° (C 1,4, EtOH). Kiteinen disyklohek- syyliamiini-suola suspensoidaan seokseen, jossa on 5-%-ista kalium-disulfaattia ja etyyliasetaattia. Orgaaninen faasi pestään vedellä ja väkevöidään kuiviin. Jäännös kiteytetään etyyliasetaatti/heksaanista 1-(3-asetyylitio-2-D-metyylipropanoyyli-L-proliinin saamiseksi, sp. 83-8 162 (c, 1,7, EtOH).

Menetelmä B

3-asetyylitio-2-metyylipropaanihappoa (8,1 g) ja tionyyli-kloridia (7 g) sekoitetaan ja suspensiota sekoitetaan 16 tuntia huoneen lämpötilassa. Reaktioseos väkevöidään kuiviin ja tislataan tyhjössä (kp. 80°). Tämä 3-asetyylitio-2-metyylipropaanihappoklo-ridi (5,4 g) ja 2N natriumhydroksidi (15 ml) lisätään liuokseen, jossa on L-proliinia (3,45 g) IN natriumhydroksidissä (30 ml) jäähdytettynä jää-vesihauteella. Sen jälkeen kun on sekoitettu 3 tuntiahuoneen lämpötilassa, seos uutetaan eetterillä, vesipitoinen faasi tehdään happameksi ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi kuivataan magnesiumsulfaatilla ja väkevöidään kuiviin 1-(3-asetyylitio-2-DL-metyylipropanoyyli-L-proliinin saamiseksi .

Menetelmä C

Metakryloyylikloridia (4,16 g) lisätään liuokseen, jossa on L-proliinia (3,45 g) veden (100 ml) ja natriumbikarbonaatin (12 g) seoksessa jäähdytettynä jää-vesihauteella, samalla voimakkaasti sekoittaen. Lisäyksen päätyttyä seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 2 tuntia ja senjälkeen uutetaan eetterillä. Vesipitoinen faasi tehdään happameksi N-kloorivetyhapolla ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi väkevöidään kuiviin tyhjössä, jäännös sekoitetaan tiolietikkahapon (3,5 g) kanssa, lisätään muutama kide atso-bisisobutyronitriiliä ja seosta kuumennetaan höyryhauteella 2 tuntia. Reaktioliuos liuotetaan bentseeni/etikkahappoon (75:25) ja johdetaan silikageeli-kolonniin. Eluoitaessa samalla liuotinseoksella saadaan 1-(3-asetyylitio-2-DL-metyylipropanoyyli)-L-proliini.

66596 18

Esimerkki 15 1-(3-merkapto-2-D-metyylipropanoyyli)-L-proliini 1-(3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini saadaan käsittelemällä esimerkin 14 mukaista yhdistettä seuraavasti:

Tioesteri (0,85 g) liuotetaan 5,5 N metanolipitoiseen ammoniakkiin ja liuosta pidetään huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Liuotin poistetaan tyhjössä ja jäännös liuotetaan veteen, syötetään ioninvaihtokolonniin, joka on H+-vaiheessa (Dowex 50, analyyttinen laatu), ja eluoidaan vedellä. Fraktiot, jotka antavat positiivisen tioli-reaktion, otetaan talteen ja jäähdytyskuivataan. Jäännös kiteytetään etyyliasetaatti/heksaanista, saanto 0,3 g. 1-(3-merkap-to-2-D-metyylipropanoyyli-L-proliini sulaa 103-104°:ssa, C^JD

-131 (C, 2, EtOH). „ . ...

Esimerkki 16 A · 3-asetyylitio-2-bentsyylipropaanihappo Käyttämällä 2-bentsyyliakryylihappoa esimerkinl3A mukaisessa menetelmässä metakryylihapon asemesta saadaan 3-asetyylitio-2-bentsyylipropaanihappo.

b. ^11 -asetyylitio-2-bentsyylipropanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyliesteri Käyttämällä 3-asetyylitio-2-bentsyylipropaanihappoa esimerkin 7 mukaisessa menetelmässä 3-asetyylitiopropaani hapon asemesta saadaan l-(3-asetyylitio-2-bentsyylipropanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyliesteri.

C. 1-(3-asetyylitio-2-bentsyylipropanoyyli)-L-proliini

Edellisen kohdan B mukaista tuotetta käytetään l-(3-asetyylitio-2-metyylipropanoyyli-L-proliini)-tert.-butyyliesterin asemesta esimerkin 14 menetelmässä A, jolloin saadaan l-(3-asetyylitio-2-bentsyyli-propanoyyli)-L-proliini.

1-(3-merkapto-2-bentsvvlipropanoyyli)-L-proli ini l-(3-asetyylitio-2-bentsyylipropanoyyli)-L-proliinia käsitellään metanolipitoisella ammoniakilla esimerkin 15 mukaisesti, jolloin saadaan l-(3-merkapto-2-bentsyylipropanoyyli)-L-proliini öljynä, Rf = 0,47 (silikageeli, bentseeni/etikkahappo 75:25).

Esimerkki 17 1-(3-merkapto-2-metvvlipropanoyyli)-L-hydroksiproliini Käyttämällä L-hydroksi-proliini-tert.-butyyliesteriä esimerkin 13 mukaisessa menetelmässä, käsittelemällä saatua tuotetta esimerkin 14 menetelmän A mukaisesti ja sen jälkeen käsittelemällä edelleen esimerkin 15 mukaisesti saadaan vastaavasti 1-(3-asetyyli- is 66596 tio-2-metyylipropanoyyli)-L-hydroksiproliini-tert.-butyyliesteri, tert.-butyyli-eetteri-l-(3-asetyylitio-2-metyylipropanoyyli)-L-hydroksiproliini ja 1-(3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)-L-hydroksi-proliini, viime mainittu amorfisena aineena L^J^ -61,90 (c = 2, metanoli).

fEsimerkki 18 1-(4-bentsoyylitiobutanoyyli)-L-proliini

Liuokseen, jossa on L-proliinia (2,88 g) IN natrium-hydroksidissa (25-ml) jäähdytettynä jäähauteella, lisätään 2N natriumhydroksidia (12,5 ml) ja 4-klooributyryylikloridia (3,5 g). Reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 3,5 tuntia ja lisätään tiobentsoehapon (3,75 g) ja kaliumkarbonaatin (2,4 g) suspensio vedessä (25 ml). Senjälkeen kun on sekoitettu yli yön huoneen lämpötilassa, reaktioseos tehdään happameksi väkevällä kloorivetyhapolla ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivataan magnesium-sulfaatilla ja väkevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös kromatografoi-daan silikageeli-kolonnissa eluoimalla bentseeni/etikkahapolla (7:1). Fraktiot, jotka sisältävät halutun aineen, otetaan talteen ja väkevöidään kuiviin, saanto 1,35 g. Pieni määrä tätä ainetta liuotetaan etyyliasetaattiin ja lisätään disykloheksyyliamiinia pH-arvoon 8-10 (märällä pH-paperilla) saakka. Disykloheksyyliamiini-suola kiteytyy välittömästi, sp. 159-161°.

Esimerkki 19.

1-(4-merkaptobutanoyyli)-L-proliini l-(4-bentsyylitiobutanoyyli)-L-proliini (1,08 g) liuotetaan veden (4 ml) ja väkevän ammoniakin (2,7 ml) seokseen. Sen jälkeen kun on sekoitettu 1 tunti huoneen lämpötilassa, seos laimennetaan vedellä, suodatetaan, uutetaan etyyliasetaatilla ja vesipitoinen faasi väkevöidään tyhjössä. l-(4-merkaptobutanoyyli)-L-proliinin ammonium-suola puhdistetaan ioninvaihto-kromatografiän avulla käyttäen di-etyyliaminoetyyli-Sephadex(ristikytketty dekstraanilla) kolonnia ja eluoimalla ammoniumbikarbonaatilla, saanto 0,7 g. Ammoniumsuola liuotetaan veteen (2 ml) ja johdetaan Dowex 50 sulfonihappohartsin (analyyttinen laatu) kolonniin, joka on vety-muodossa, ja vapaa happo eluoidaan vedellä. Fraktiot, jotka sisältävät halutun aineen (sulfhydryyli-reagenssi ja karboksyyli-reagenssi positiivisia) otetaan talteen ja jäähdytyskuivataan 1-(4-merkaptobutanoyyli)-L-proliinin saamiseksi. Disykloheksyyliammonium-suola saadaan esimerkin 18 mukaan, sp. 157-158°.

665 9 6

Esimerkki 20 A. 1-(3-asetyylitiobutanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyliesteri

Disykloheksyylikarbodi-imidi (6,2 g) ja 3-asetyylitiovoihappo (4,86 g) lisätään L-proliini-tert.-butyyliesterin (5,1 g) liuokseen dikloorimetaanissa (60 ml) sekoitettuna jäähauteella. 15 minuutin kuluttua jäähaude poistetaan ja seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 16 tuntia. Sakka suodatetaan, suodos väkevöidään kuiviin ja jäännös kromatografoidaan silikageeli-kolonnissa eluoimalla kloroformilla, jolloin saadaan 1-(3-asetyylitiobutanoyyli^L-proliini-tert . -butyyliesteri , saanto 5,2 g.

B. 1-(3-asetyylitiobutanoyyli)-L-proliini

Edellisen kohdan A mukainen 1-C^-asetvvlitiobutanoyylii-L-proliini· tert.-butyyliesteri (5,2 g) liuotetaan trifluorietikkahapon (60 ml) ja anisolin (30 ml) seokseen ja liuosta pidetään huoneen lämpötilassa sa 1 tunti. Liuottimet poistetaan tyhjössä ja l-(3-asetyylitiobuta-noyyli)-L-proliini saostetaan uudelleen eetteri/heksaanista useita kertoja, saanto 4 g. Disykloheksyyliamidi-suola valmistetaan esimerkin 44 mukaisesti, sp. 175-176°.

Esimerkki 21 1-(3-merkaptobutanoyyli)-L-proliini

Esimerkin 20B mukaista 1-(3-asetyylitiobutanoyyli)-L-proliinia (0,86 g) liuotetaan 5,5 N metanolipitoiseen ammoniakkiin (20 ml) ja reaktioseosta pidetään huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Liuotin poistetaan tyhjössä ja jäännös kromatografoidaan käyttäen ioninvaihto-kolonnia (Dowex 50) ja eluoimisaineena vettä. Fraktiot, jotka sisältävät halutun 1-(3-merkaptobutanoyyli)-L-proliinin, otetaan talteen ja lyofilisoidaan, saanto 0,6 g. Disykloheksyyliamiini-suola valmistetaan esimerkin 19 mukaisesti, sp. 183-184°C.

Esimerkki 22 1-/3-/(etoksi)tiokarbonyyli/tio/propanoyyli/-L-proliini

Vesipitoista 2N hatriumhydroksidia (25 ml) ja 3-bromipropio- 2i 66596 nyylikloridia (8,5 g) lisätään liuokseen, jossa on L-proliinia (5,75 g) N-natriumhydroksidissa (50 ml), samalla jäähdyttäen ja sekoittaen jäähauteella. 5 minuutin kuluttua jäähaude poistetaan ja sekoittamista jatketaan huoneenlämpötilassa. 3 tunnin kuluttua lisätään etyyli-5-ksantogeenihappo-kaliumsuolaa (9,6 g) ja seosta sekoitetaan yli yön huoneenlämpötilassa. Liuos tehdään happameksi väkevällä kloorivetyhapolla ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros väkevöidään kuiviin ja jäännös kromatografoidaan silikageeli-kolonnissa eluoimalla bentseeni/etikkahapolla (7:1), jolloin saadaan 1-/3-//( etoksi)tiokarbonyyli/tio?propanoyyli/-L-proliini, sp. 99-95°.

Esimerkki 23 3-//( metyyliamino)tiokarbonyyli/tiQ7propionihappo Metyyli-isotiosyanaattia (9 g) lisätään liuokseen, jossa on 3-merkaptopropionihappoa (5,3 g) pyridiinin (250 ml) ja 0,5N nat-riumhydroksidin (100 ml) seoksessa. Liuosta pidetään 90°:ssa 2 tuntia ja väkevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös liuotetaan veteen (100 ml), tehdään happameksi väkevällä kloorivetyhapolla ja uutetaan eetterillä. Orgaaninen faasi väkevöidään kuiviin, jolloin saadaan S-ZZCmetyyliaminoitiokarbonyyli^tiq^propionihappo, sp. 86-87°.

Esimerkki 29 1- /3-//( me tyyliamino)t iokarbonyyli/t io/propanoyyliZ-L-proliini-tert.-butyyliesteri

Liuokseen, jossa on L-proliini-tert.-butyyliesteriä (1,71 g) ja hydroksibentsotriatsolia (1,35 g) dikloorimetaanissa (10 ml) jäähdytettynä ja sekoitettuna jäähauteella, lisätään disykloheksyy-likarbodi-imidiä (2,06 g) ja 3-metyyliaminotiokarbonyylitiopropio-nihappoa (1,79 g). 19 minuutin kuluttua kylpy poistetaan ja sekoittamista jatketaan yli yön. Sakka suodatetaan ja suodos laimennetaan etyyliasetaatilla ja pestään neutraaliksi. Orgaaninen faasi väkevöidään kuiviin, jolloin saadaan l-/3-//(metyyliamino)tiokarbonyyll·)'-tio7propanoyyli/-L-proliini-tert.-butyyliesteri, sp. 129-130°.

Esimerkki 25 .,1-/3- //(metyy liamino) t iokarbonyy1 i/1 io/ pr opanoyy 1 i/~- L- pr oi i ini 1-(metyy1iaminot iokarbonyy1it iopropanoyy1i)-L-proli in i-tert.-butyyliesteriä (0,98 g) liuotetaan anisolin (3,6 ml) ja trifluorietikkahapon (7,5 ml) seokseen. Tunnin kuluttua huoneen lämpötilassa seisottämisen jälkeen seos väkevöidään kuiviin tyhjössä ja jäännös saoste-taan kolmesti eetteri/heksaanista. Saatu aine kromatografoidaan sili-kageeli-kolonnissa eluoimalla bentseeni/etikkahapon seoksella (75:25), jolloin saadaan l-/3-/7^irie'tyyiiemino)tiokarbonyyli7‘ti^-propanoyyli/-L-prol iini , R^. = 0,9 /silikageeli-bentseeni : etikka-happo (75:25)/. Disykloheksyyliammoniumsuola sulaa 127-129°:ssa.

22 66596 t κ

Esimerkki -2L· 1-(3-metvvlitiopropanovvli)-L-proliini

Metyyli-3-metyylitiopropionaatti (51 g) saippuoidaan 10 %:sella natriumhydroksidiliuoksella (150 ml, 30 minuuttia 100°:ssa). Jäähdytetty liuos uutetaan eetterillä ja tehdään happameksi. Siten saatu raakahappo tislataan ja muutetaan happokloridiksi tionyyli-kloridilla.

L-proliinin (11,5 g) liuos N natriumhydroksidissa (100 ml) jäähdytetään jäähauteella ja lisätään pisaroittain 3-metyylitio-propanonihappokloridia (5,9 g) samalla voimakkaasti sekoittaen 10 minuutin aikana. 1 tunnin kuluttua reaktioseos tehdään happameksi ja uutetaan etyylieetterillä 1-(3-metyylitiopropanoyyli)-L-pro-liinin saamiseksi. Disykloheksyyliammoniumsuola valmistetaan lisäämällä disykloheksyyliamiinia vapaan hapon liuokseen etyyliasetaatissa, sp. 169-171°.

Esimerkki 27 1-(metyylitioasetyyli)-L-proliini Käyttämällä metyyli-metyylitioasetaattia metyyli-3-metyyli-tiopropionaatin asemesta esimerkin 26 menetelmässä A saadaan l-(me-tyylitioasetyyli)-L-proliini, sp. 123-124°.

Esimerkki 28 1-(bentsyylitioasetyyli)-L-prOliini Käyttämällä bentsyylitioasetyylikloridia 3-metyylitiopro-panoyylikloridin asemesta esimerkin 26 menetelmässä A saadaan l-(bent-syylitioasetyyli)-L-proliini, sp. 86-88°.

Esimerkki 29 1,1*-/ditiobis(3-propanoyyli X7-bis-L-proliini 3-merkaptopropanoyyli-L-proliinia (0,95 g) liuotetaan veteen (20 ml) ja pH säädetään arvoon 6,5 käyttäen IN natriumhydroksi-dia. Lisätään jodin etanolipitoista liuosta pisaroittain samalla kun pH pidetään arvossa 6,5 lisäämällä huoleellisesti IN natrium-hydroksidia. Kun pysyvä keltainen väri on saatu keskeytetään jodin lisäys ja väri poistetaan pienellä määrällä natriumtiosulfaattia. Reaktioseos tehdään happameksi väkevällä kloorivetyhapolla ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestään vedellä, kuivataan ja väkevöidään kuiviin 1,1'-^ditiobis(3-propanoyylir~bis-L-prolii-nin saamiseksi. Disykloheksyyliammonium-suola valmistetaan lisäämällä disykloheksyyliamiinia vapaan hapon liuokseen asetonitriilis-sä, sp. 179-180°.

23 6 6 5 9 6

Esimerkki 30 1) 11 -/ditiobis (2-D-metyyli-3-propanoyyIi )_7-bis-L-proliini Käyttämällä 3-merkapto-2-D-metyylipropanoyyli-L-proliinia esimerkin 29 mukaisessa menetelmässä 3-merkaptopropanoyyli-L-pro-liinin asemesta saadaan 1,1'-/ditiobis(2-D-metyyli-3-propanoyyli )J-bis-L-proliini. sp. 236-237°.

Esimerkki 31 A. 3-asetyylitio-2-fenyylipropaanihappo Käyttämällä 2-fenyyliakryylihappoa esimerkin 13 mukaisessa menetelmässä metakryylihapon asemesta saadaan 3-asetyylitio-2-fenyy-lipropaanihappoa.

B. 1-(3-asetyyliyio-2-fenyylipropanoyyli)-L-proliini-tert butyyliesteri Käyttämällä 3-asetyylitio-2-fenyylipropaanihappoa esimerkin 13 B mukaisessa menetelmässä 3-asetyylitio-2-fenyylipropaanihapon asemesta saadaan 1-(3-asetyylitio-2-fenyylipropanoyyli)-L-proliini- - - 2 5 o tert.-butyyliesteri, joka muutetaan vapaaksi hapoksi / + 23 (c = 1, etanoli).

Esimerkki 32 1-(3-merkapto-2-fenyylipropanoyyli)-L-proliini Käyttämällä 1-(3-asetyylitio-2-fenyylipropanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyliesteriä esimerkin 14 A mukaisessa menetelmässä 1—(3— asetyylitio-2-metyylipropanoyyli-L-proliini-tert.-butyyliesterin asemesta ja saattamalla tuote ammonolyysiin esimerkin 15 mukaisesti saadaan 1-(3-asetyylitio-2-fenyylipropanoyyli)-L-proliini ja 1-(3-merkapto-2-fenyylipropanoyyli)-L-proliini.

2 5 o +2,5° (c = 1, etanoli vastaavasti +2,5° (c = 1, etanoli). Lopputuotteen sp. 49-52°C.

Esimerkki 33 3-Z( 4-metoksifenyyli )metyylitio_7- 2-metyylipro.paaLhihappo p-metoksi-c<-tolueeni-tiolia (15,4 g, 0,1 moolia) lisätään, liuokseen, jossa on metakryylihappoa (8,6 g, o,l moolia) 50 ml:ssa 2N natriumhydroksidia. Seosta kuumennetaan höyryhauteella 3 tuntia ja sen jälkeen kuumennetaan paluujäähdyttäen 2 tuntia ja jäähdytetään. Seos uutetaan eetterillä, vesikerros tehdään happameksi väkevällä HCl:llä ja uutetaan dikloorimetaanilla. Happamet uutteet pestään suolaliuoksella, kuivataan (MgSO^) ja haihdutetaan tyhjössä.

2U 66596

Saatu puolikiinteä aine otetaan 50 ml:aan dikloorimetaania, laimennetaan 50 ml:11a heksaania ja jäähdytetään. 3-£"(4-metoksifenyyli)-metyylitio.?-2-metyylipropanonihappo otetaan talteen valkoisena kiteisenä aineena, sp. 74-82° (5,5 g).

Esimerkki 34 1-/3-(4-metoks ifenyy1i)me tyylit io7 ~ 2-metyy1ipropanoyy1i- L-proliini-tert.-butyyliesteri 3-^(4-metoksif enyyli )metyyliti<a?-2-metyylipropaanihappoa (3,6 g, 0,015 moolia), L-proliini-tert.-butyyliesteriä (2,6 g, 0,015 moolia) ja disykloheksyylikarbodi-imidiä (3,1 g, 0,015 moolia) liuotetaan 50 ml:aan dikloorimetaania ja sekoitetaan 30 minuuttia 0°:ssa. Jäähdytyshaude poistetaan ja seosta sekoitetaan yli yön (16 tuntia). Saatu suspensio suodatetaan ja suodos pestään 5-%:isella kaliumbisulfaatilla, kyllästetyllä natriumbikarbonaatilla ja suolaliuoksella, sen jälkeen kuivataan (MgSO^) ja haihdutetaan tyhjössä. Saatu kirkas öljy johdetaan 250 ml:n vetoiseen silikageelikolonniin ja kromatografoidaan käyttäen 20-%ästa etyyliasetaatti/heksaania eluoimisaineena. Pääfraktio (Rf= 0,70, silikageeli, etyyliasetaatti) haihdutetaan, jolloin saadaan 5,5 g (93 %) l-£3-(4-metoksifenyyli)-metyylitiq?-2-metyylipropanoyyli-L-proliini-tert.-butyyliesteriä kirkkaana Öljynä. R^=0,70 (silikageeli, etyyliasetaatti); R^=0,60 (silikageeli, eetteri).

Esimerkki 35_ 1-(3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini

Esimerkin 34 mukainen esteri (1,2 g, 0,003 moolia), ani-soli (5 ml) ja trifluorimetaanisulfonihappo (0,5 ml) liuotetaan 20 ml:aan trifluorietikkahappoa typpiatmosfäärissä ja saadun punaisen liuoksen annetaan seistä 1 tunti huoneen lämpötilassa. Liuos haihdutetaan tyhjössä punaiseksi jäännökseksi, joka otetaan etyyliasetaattiin ja pestään vedellä, suolaliuoksella, sitten kuivataan (MgSO^) ja haihdutetaan. Jäännöstä sekoitetaan useita kertoja heksaa-nin kanssa ja jälelle jäänyt heksaani haihdutetaan; öljymäinen jäännös on 0,4 g. Osa tästä aineesta (180 mg) saatetaan preparatiiviseen ohutkerros-kromatografiaa käyttäen 2 mm:n silikageeli-levyjä ja eluoimisaineena bentseeni/etikkahappoa 75:25. Pää-nitroprussidi-positii-vinen nauha (R^ = 0,40) otetaan talteen, jolloin saadaan 135 mg 1- (3-merkapto-2-metyylipropanyyli) -L-proli in ia öljynä . 'iQhutkerros- 25 66596 kromatografiaa käyttäen bentseeni/etikkahappoa 75:25 (Rj=0,40) ja kloroformi/metanoli/etikkahappoa 50:40:10 (R^.=0,62).

.Esimerkki 3 6 1-(3-merkapto-2-D-metvvlipropanovyli)-L-proliini Argon-atmosfäärissä lietetään l-/3-(asetyylitio)-2-D-me-tyylipropanoyyli?-L-proliinia (10,0 g) 150 ml:aan vettä 10°:ssa.

Tähän seokseen lisätään 5N natriumhydroksidia ja liuoksen pH pidetään arvossa 13 1,5 tunnin ajan. Sen jälkeen kun natriumhydroksidin kulutus on päättynyt, liuos tehdään happameksi pH-arvoon 2,0 väkevällä rikkihapolla.

Sen jälkeen vesipitoinen liuos uutetaan kolmesti metyleeni-kloridilla (3 x 150 ml) ja yhdistetyt metyleenikloridifraktiot väkevöidään öljyksi. Väkevöite otetaan etyyliasetaattiin, suodatetaan ja suodos laimennetaan heksaanilla (30 ml). Lisätään vielä heksaania 1/2 tunnin kuluttua ja seos jäähdytetään 10°:seen 1 tunnin ajaksi.

Kiteet suodatetaan ja pestään heksaanilla (2 x 25 ml) ja kuivataan vakiopainoon, jolloin saadaan 6,26 g 1-(3-merkapto-2-D-metyylipropanoyyli)-L-proliinia valkoisina kiteinä, sp. 100-102°.

Esimerkki 37 A. l-/r3-tosyylioksi-2-metvvlipropanovvli)-L-proliini Käyttämällä 3-tosyylioksi-2-metyylipropaanihappokloridia esimerkin livB mukaisessa menetelmässä 3-asetyylitio-2-metyylipropa£-nihappokloridin asemesta saadaan l-^3-tosyylioksi-2-metyylipropano-yyli7~L-proliini.

B. l-^3-asetvvlitio-2-D-metvvlipropanovvli?-L-proliini l-^3-tosyylioksi-2-metyylipropanoyyli7-L-proliinia (3,5 g) lisätään liuokseen, jossa on tiolietikkahappoa (1,14 g) ja trietyyli-amiinia (3,5 ml) etyyliasetaatissa (20 ml). Liuosta pidetään 50°:ssa 3 tuntia, jäähdytetään, laimennetaan etyyliasetaatilla (100 ml) ja pestään laimealla kloorivetyhapolla. Orgaaninen kerros kuivataan ja väkevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös liuotetaan asetonitriiliin ja lisätään disykloheksyyliamiinia. Kiteinen sakka kiteytetään uudelleen isopropanolista, jolloin saadaan l-^3-asetyylitio-2-D-metyylipropano-yyli?-L-proliini-disykloheksyyliamiinisuola, sp. 187-188°, ('·£) E>5 “67° 26 66596 (c 1,4, EtOH). Tämä suola muutetaan vapaaksi hapoksi, sp. 83-85° (isomorfisen muodon sulamispiste 104-105° saadaan jos kiteyttämis-liuos ympätään korkealla sulavalla aineella).

Esimerkki 38 1-(3-merkaptopropanovvli)-L-proliini-t-butyyliesteri

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 1,71 g (10 millimoolia) proliini-t-butyyliesteriä ja 1,35 g (10 millimoolia) 1-hydroksi-bentsotriatsoli-hydraattia 20 ml:ssa N,N-dimetyyliformamidia 0-5°:ssa, lisätään 2,06 g (10 millimoolia) N,N1-disykloheksyylikarbodi-imidiä. Seosta sekoitetaan 10 minuuttia ja sen jälkeen lisätään 1,06 g (10 millimoolia) 3-merkaptopropanonihappoa 2 ml:ssa N,N-dimetyyli-formamidia. Seosta sekoitetaan 0-5°:ssa 1 tunti ja huoneen, lämpötilassa yli yön.

Saostunut N,N'-disykloheksyyliurea suodatetaan pois ja suodos väkevöidään tyhjössä. Jäännös otetaan etyyliasetaattiin, pestään hyvin kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella, kuivataan ja väkevöidään tyhjössä, jolloin saadaan 2,5 g öljyä.

öljy otetaan etyyliasetaatti/heksaaniin 1:1 ja johdetaan silikageeli-kolonniin (100 g). Eluoitaessa etyyliasetaatti/heksaa-nilla 1:1 saadaan 1,40 g (54 %) 1-(3-merkaptopropanoyyli)-L-prolii-ni-t-butyyliesteriä öljynä, joka kiteytyy seistessä. Kiteytettäessä uudelleen eetteri/heksaanista saadaan 0,9 g väritöntä kiteistä ainetta, sp. 55-60°, joka on identtinen esimerkin 9 mukaisen yhdisteen kanssa.

Esimerkki 39 l-(3-merkaptopropanovvli)-L-proliini

Liuokseen, jossa on 75 mg (0,27 millimoolia) 1-(3-etyyli-amino)karbonyyli?tiq7propanoyyli,?-L~proliinia 1 ml:ssa väkevää am-moniumhydroksidia ja 1 ml:ssa vettä, annetaan seistä huoneen lämpötilassa 18 tuntia argon-atmosfäärissä. Liuos laimennetaan pienellä määrällä vettä ja uutetaan eetterillä. Vesipitoinen kerros tehdään happameksi kylmällä väkevällä kloorivetyhapolla ja uutetaan etyyliasetaatilla. Yhdistetyt uutteet kuivataan ja väkevöidään tyhjössä, jolloin saadaan esimerkin 10 mukaisen tuotteen kanssa identtinen yhdiste., Öhutkerroskromatografia (silikageeli,bentseeni: etikkahappo 7:3) R ^.=0,4.

27 66596

Esimerkki jfetakryloyyli-L-proliini L-proliini (23,0 g, 0,2 moolia) liuotetaan 100 ml:aan vettä ja sekoitetaan jäähauteella, Lisätään pisaroittain 3 tunnin aikana metakryloyylikloridia (19,6 ml, 0,2 moolia) 25 ml:ssa metyyli-isobu-tyyliketonia. Samanaikaisesti lisätään natriumhydroksidiliuosta (2N) ja pH pidetään arvossa 7,0. Emäksen lisäämistä jatketaan 4 tuntia senjälkeen kun happokloridin lisäys on päättynyt. Reaktioseos säädetään pH-arvoon 5 väkevällä HCl:llä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Vesipitoinen kerros tehdään happameksi pH-arvoon 2,5 ja uutetaan hyvin etyyliasetaatilla. Happamet uutteet pestään suolaliuoksella ja kuivataan (MgSO^). Etyyliasetaattiliuosta käsitellään disykloheksyy-liamiinilla (40 ml) ja jäähdytetään yli yön. Saatu valkoinen sakka suodatetaan ja kuivataan, jolloin saadaan 29 g (39 %) valkoista ainetta, sp. 202-210°. Aine kiteytetään 1,5 litrasta asetonitriili/ isopropanolia 3:1, jolloin saadaan 19,7 g metakryloyyli-L-proliini-disykloheksyyliamiinisuolaa hienoina valkoisina neulasina, sp. 202-210°.

Suola liuotetaan vesi/etyyliasetaattiin ja seos tehdään happameksi väkevällä HCl:llä. Saatu suspensio suodatetaan hienon valkoisen sakan poistamiseksi, joka pestään hyvin etyyliasetaatilla.

Suodos kyllästetään natriumkloridilla ja uutetaan hyvin etyyliasetaatilla. Uutteet pestään suolaliuoksella, kuivataan (MgSO^) ja haihdutetaan kirkkaaksi öljyksi, joka jähmettyy. Kiteytettäessä etyyliasetaatti/heksaanista saadaan 7,5 g (83 %) metakryloyyli-L-pro-liinia valkoisena kiteisenä aineena, sp. 89-93°. Analyyttinen näyte saadaan kiteyttämällä uudelleen, sp. 95-98°.

Esimerkki 41 1-(3-asetyylitio-2-D-metyylipropanoyyli)-L-proliini

Metakryloyyli-L-proliini (183 mg, 0,001 moolia) liuotetaan tiolietikkahappoon (0,5 ml) ja annetaan seistä huoneen lämpötilassa 16 tuntia. Liuos haihdutetaan tyhjössä keltaiseksi jäännökseksi. Preparatiivisella ? ohutkerroskromatografiällä (silikageeli, dikloori-metaani/metanoli/etikkahappo 90:5:5) voidaan eristää kirkas öljy(240 mg) pääfraktiora. Sbitkeirostax^natografia (dikloarimetaani/metanoli/etikkahanoo 90:5:5) osoittaa tämän aineen olevan 1-(3-asetyylitio-2-DL-metyyli- 28 6 6 5 9 6 propanoyyli-L-proliinia vastaten esimerkin 14 mukaista tuotetta.

= 0,35, (bentseeni/etikkahappo 75:25) R^ = 0,38.

Öljy liuotetaan 3 ml:aan asetonitriiliä, käsitellään disyklo-heksyyliamiinilla siihen saakka kunnes liuos on emäksinen ja jäähdytetään. Valkoinen kiteinen aine (106 mg) otetaan talteen, sp. 175-181°. Kiteytettäessä isopropanolista saadaan 1-(3-asetyylitio-2-D-metyylipropanoyyli)-L-proliini-disykloheksyyliamiinisuola, sp. 187-188°, joka on identtinen esimerkin 14 mukaisen tuotteen kanssa.

Esimerkki 42 1-(3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini Sinkkipölyä (10,0 g) lisätään lietteeseen, jossa on l-/’(ditiobis-(2-metyyli-3-propanoyyli)7bis-L-proliinia (5,0 g) 100 ml:ssa 1,0N rikkihappoa, ja seosta sekoitetaan 18°:ssa 4 tuntia typpi-atmosfäärissä. Liuos suodatetaan, sinkki pestään vedellä (20 ml) ja yhdistetyt suodokset uutetaan metyleeniklori-dilla (3 x 75 ml). Metyleenikloridin pesunesteet uutetaan vedellä (25 ml) ka sen jälkeen orgaaninen liuos väkevöidään öljyksi. Tämä öljy otetaan etyyliasetaattiin (20 ml) ja suodatetaan. Lisätään heksaania (15 ml) suodokseen ja seosta sekoitetaan 15 minuuttia. Sen jälkeen lisätään vielä heksaania (30 ml) ja liuos jäähdytetään 1 tunnin ajaksi 5°:seen. Sitten seos suodatetaan ja tuote pestään heksaanilla (2 x 10 ml) ja kuivataan, jolloin saadaan 4,17 g 1-(3-merkapto-2-metyy1ipropanoyyli)-L-pro1iinia valkoisina kiteinä. TLC, R^ = 0,60 (liuotinjärjestelmä: bentseeni/etikkahappo 75:25).

Esimerkki 43 A. 3-bentsyylitiö-2-metyylipropaanihanpo_ Käyttämällä c£-tolueenitiolia esimerkin 33 mukaisessa menetelmässä p-metoksi-o(.-tolueenitiolin asemesta saadaan 3-bentsyyii_ tio-2-metyylipropaanihappo.

29 6 6 5 9 6 B. l-/3-(bentsvvlitio)-2-metvvlipropanovvlO-L-proliini-tert. -butyyliesteri Käyttämällä 3-bentsyylitio-2-metyylipropaanihappoa esimerkin 34 mukaisessa menetelmässä 3-f(4-metoksifenyyli)metyylitiQ?-2-metyylipropaanihapon asemesta saadaan l-£3-(bentsyylitio)-2-metyy-lipropanoyyli?-L-proliini-tert.-butyyliesteri.

C. 1-/3-(bentsvvlitio)-2-metyvlipropanovvli7-L-proliini 1-/3- (bentsyylitio)-2-metyylipropanoyylO,-L-proliini-tert. - butyyliesteri (7,8 g) liuotetaan anisolin (55 ml) ja trifluorietik-kahapon (110 ml) seokseen. Sen jälkeen kun on pidetty 1 tunti huoneen lämpötilassa, liuotin poistetaan tyhjössä ja jäännös liuotetaan eetteriin, pestään useita kertoja kyllästetyllä natriumkloridilla, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin tyhjössä, jolloin saadaan 1-/3-( bent syylitio)-2-metyylipropanoyyl:u7-L-prolii-ni. R^ = 0,5 (silikageeli, bentseeni/etikkahappo 3:1), Rf = 0,5 (silikageeli, metyyli-etyyliketoni/etikkahappo/pyridiini/vesi 14:1:2:1).

Esimerkki 44 1-(3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini 1-/3-(bentsyylitio)-2-metyylipropanoyyli/-L-proliinia (0,1 g) suspendoidaan kiehuvaan nestemäiseen ammoniakkiin (10 ml) ja lisätään pieniä palasia natriumia samalla sekoittaen pysyvään siniseen väriin saakka. Väri poistetaan lisäämällä muutamia kiteitä ammoniumsulfaattia ja ammoniakin annetaan haihtua typpivirrassa. Jäännös liuotetaan laimean kloorivetyhapon ja etyyliasetaatin seokseen. Orgaaninen kerros kuivataan ja väkevöidään kuiviin tyhjössä, jolloin saadaan l-(3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini.

R^:0,5 (silikageeli; bentseeni/etikkahappo 3:1); R^ 0,5 (silikageeli; metyylietyyliketoni/etikkahappo/pyridiini/vesi 14:1:2:1), mikä on identtinen esimerkin 15 mukaisen yhdisteen kanssa.

Esimerkki 45 3-trifenyylimetyylitio-2-metyylipropaanihappo Liuosta, jossa on 3-merkapto-2-metyylipropaanihappoa (1,2 g) ja trityylikloridia (2,9 g) metyleenikloridissa (50 ml), pidetään 30 6 6 5 9 6 huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Seosta lämmitetään höyryhauteella 20 minuuttia ja senjälkeen haihdutetaan kuiviin tyhjössä ja jäännös liuotetaan kyllästettyyn natriumbikarbonaattiin ja liuos pestään etyyliasetaatilla. Vesipitoinen faasi tehdään happameksi pH-arvoon 3 ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivataan ja vä-kevöidään kuiviin 3-trifenyylietyylitio-2-metyylipropaanihapon saamiseksi. Rf 0,8 (silikageeli, bentseeni/etikkahappo 3:1).

Esimerkki 46 A. 1-(trifenyylimetyylitio)-2-metyylipropanoyylj}-L-proliini-tert.-butyyliesteri Käyttämällä 3-trifenyylimetyylitio-2-metyylipropaanihappoa esimerkin 34 mukaisessa menetelmässä 3-f(4-metoksifenyyli)metyyli-tio7-2-metyylipropaanihapon asemesta saadaan l-£3-(trifenyylimetyy-litio)-2-metyylipropanoyyli_)-L-proliini-tert.-butyyliesteri.

B . 1-/3- (ΐΓΐ1βηγγ1ίπΐ6ΐγγ1ίΐϊο)-2-ΐΛ6Ργγϋρρορ3ηογγ1:ί7-1.-ρρο1ϋηί 3-trifenyylimetyylitio-2-metyylipropaanihappoa (1,8 g) ja N,NT-karbonyylidi-imidatsolia (0,8 g) liuotetaan tetrahydrofuraa-niin (10 ml) samalla sekoittaen huoneen -lämpötilassa. 20 minuutin kuluttua liuos lisätään seokseen, jossa on L-proliinia (0,6 g) ja N-metyylimorfoliinia (1 g) dimetyyliasetamidissa (20 ml). Saatua seosta sekoitetaan yli yön huoneen lämpötilassa, väkevöidään kuiviin ja jäännös liuotetaan etyyliasetaatin ja 10 -%:isen kaliumbisulfaatin seokseen. Orgaaninen kerros erotetaan ja kuivataan ja väkevöidään kuiviin tyhjössä, jolloin saadaan l-^3-(trifenyylimetyylitio)-2-metyylipropanoyylO-L-proliini. Rf: 0,4 (silikageeli, bentseeni/ etikkahappo 3:1); Rf 1,0 (silikageeli, metyylietyyliketoni/etikka-happo/pyridiini/vesi 14:1:2:1).(2,4 g) ja juuri tislattua 2,3-di-hydro-4H-pyraania (1,9 g) bentseenissä (60 ml), lisätään booritri-fluoridieteraattia (2,8 g). 2 tunnin kuluttua lisätään kaliumkarbonaattia (4 g) seosta sekoitetaan ja suodatetaan. Suodos väkevöidään kuiviin 3-(tetrahydropyrani-2-yylitio)-2-metyylipropaanihapon . saamiseksi.

66596 31

Esimerkki *4 7 l-/~3-merkapto-2-metyylipropanoyyli7-L-proliini l-/C3-(trifenyylimetyylitio)-2-metyylipropanoyyli_7-L-proliini-tert.-butyyliesteriä (5 g) liuotetaan anisolin (55 ml) ja trifluori-etikkahapon (110 ml) seokseen. Sen jälkeen kun on pidetty 1 tunti huoneen lämpötilassa, liuotin poistetaan tyhjössä ja jäännös johdetaan silikageeli-kolonniin, joka on tasapainotettu bentseeni/etikka-hapolla (75:25) ja joka eluoidaan samalla liuottimena. Fraktiot vastaten komponenttia Rf 0,40 (TLCsilikageeli samalla järjestelmällä) otetaan talteen ja väkevöidään kuiviin, jolloin saadaan 1-/3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)7-L-proliini. Rf 0,62 (silikageeli, kloroformi/metanoli/etikkahappo/vesi 50:40:10 identtinen esimerkin 15 mukaisen yhdisteen kanssa.

Esimerkki 48 A. 3-(tetrahydropyran-2-yylitio)-2-metyylipropaanihappo

Liuokseen, jossa on 3-merkapto-2-metyylipropaanihappoa (2,4 g) ja juuri tislattua 2,3-dihydro-4H-pyraania (1,9 g) bentsee-nissä (60 ml), lisätään booritrifluoridieteraattia (2,8 g). 2 tun nin kuluttua lisätään kaliumkarbonaattia (4 g), seosta sekoitetaan ja suodatetaan. Suodos väkevöidään kuiviin 3-(tetrahydro-pyran-2-yylitio)-2-metyylipropaanihapon saamiseksi.

B. 1- /~3- (tetrahydropyran-2-yylitio)2-metyylipropanoyyli7-L-proliini Käyttämällä 3-(tetrahydropyran-2-yylitio)-2-metyylipropaani-happoa esimerkin 46 B mukaisessa menetelmässä 3-trifenyylimetyyli-tio-2-metyylipropaanihapon asemesta saadaan l-/~3-(tetrahydropyran- 2-yylitio)-2-metyylipropanoyyli7-L-proliini. R^: 0,8 (silikageeli, bentseeni/etikkahappo 3:1, R^.: 0,7 5 (silikageeli, metyyli-etyylike- toni/etikkahappo/pyridiini/vesi, 14:1:2:1).

Esimerkki 49 1-(3-merkapto-2 vmetyylipropanoyyli)-L-proliini

Liuosta, jossa on l-/3-(tetrahydropyran-2-yylitio)-2-metyyli-propanoyyli).7-L-proliinia (1 g) metanolin (25 ml) ja väkevän kloori-vetyhapon (25 ml) seoksessa pidetään huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Liuottimet poistetaan tyhjössä 1-(3-merkapto-2-metyyli-propanoyyli)-L-proliinin saamiseksi. R^: 0,35 (silikageeli, bentseeni/etikkahappo, 3:1), R^ 0,5 (silikageeli, metyyli-etyyli-ketoni/etikkahappo/pyridiini/vesi 14:1:2:1), identtinen esimerkin 15 mukaisen tuotteen kanssa.

32 66596

Esimerkki 50 A. 3-asetamidometyylitio-2-metyylipropanonihappo 3-merkapto-2-metyylipropaanihappoa (2,4 g) ja N-hydroksi- metyyliasetamidia (1,8 g) liuotetaan trifluorietikkahappoon ja liuosta pidetään huoneen lämpötilassa 1 tunti. Trifluorietikka-happo poistetaan tyhjössä ja jäännös kuivataan tyhjössä kaliumhyd-oksidilla 3-asetamidometyylitio-2-metyylipropaanihapon saamiseksi.

B. l-/'3-(asetamidometyylitio) -2-metyylipropanoyyli7-L-proliini Käyttämällä 3-asetamidometyylitio-2-metyylipropaanihappoa esimerkin 48B mukaisessa menetelmässä 3-(tetrahydropyran-2-yyli-tio)-2-metyylipropaanihapon asemesta saadaan 1-/3-(asetamidometyyli-tio)-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini. R^ 0,2 (silikageeli , bentsee-ni/etikkahappo 3:1), R^ 0,3 (silikageeli, metyylietyyliketoni/ etikkahappo/pyridiini/vesi 14:1:2:1).

Esimerkki 51 1-(3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini 1-/3- (asetamidometyylitio)-2-metyylipropanoyyli7-L-proliinia (1,4 g) ja merkuriasetaattia (1,93 g) liuotetaan etikkahapon (25 ml) ja veden (25 ml) seokseen. Sen jäkeen kun on sekoitettu 1 tunti höyryhauteella annetaan vetysulfidin kuplia lävitse siihen saakka kunnes ei enää todeta merkurisulfidin sakan muodostumista. Seos suodatetaan, sakka pestään etanolilla ja suodos väkevöidään kuiviin tyhjössä, jolloin saadaan 1-(3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)-L-pro-liini. R^; 0,35 (silikageeli, bentseeni/etikkahappo 3:1), R^: 0,5 (silikageeli, metyyli-etyyliketoni/etikkahappo/pyridiini/ vesi 14:1:2:1), identtinen esimerkin 15 mukaisen yhdisteen kanssa.

Esimerkki 52 1-(3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyli- esteri

Kylmään (5°) liuokseen, jossa on 1,2 g (10 millimoolia) 3-mer-kapto-2-metyylipropaanihappoa ja 1,7 g (10 millimoolia) L-proliini-tert.-butyyliesteriä 25 ml:ssa dikloorimetaania, lisätään 2,26 g disykloheksyylikarbodi-imidiä 5 ml:ssa dikloorimetaania annoksittain. Sen jälkeen kun on pidetty 2 tuntia huoneen lämpötilassa lisätään 5 pisaraa etikkahappoa, seos suodatetaan ja suodos haihdutetaan öljy-mäiseksi jäännökseksi. Tämä jäännös otetaan 20 mitään petrolieet-teri/etyyliasetaattia (3:1) ja johdetaan 150 ml:n vetoiseen silika-geeli-kolonniin, joka on preparoitu petrolieetterillä. Petrolieet-teri/etyyliasetaatilla (1:1) eluoitu fraktio sisältää tuotteen « 66596 1-(3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyliesterin. Tämä fraktio (0,6 g) kuivataan P20gillä tyhjössä 12 tuntia.

Rj. 0,6 (silikageeli, bentseeni/etikkahappo 3:1), 0,8 (silikageeli, metyyli-etyyliketoni/etikkahappo/pyridiini/ vesi 14:1:2:1).

Es imerkki 5 3 1-(3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini Käyttämällä 1-(3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyliesteriä esimerkin 10C mukaisessa menetelmässä l-(3-mer-kaptopropanoyyli)-L-proliini-tert.-butyyliesterin asemesta saadaan 1-(3-merkapto-2-metyylipropanoyyli)-L-proliini.

R^ 0,35 (silikageeli, bentseeni/etikkahappo 3:1), R^ 0,5 (silikageeli, metyyli-etyyliketoni/etikkahappo/pyridiini/vesi 14:1:2:1), identtinen esimerkin 15 mukaisen yhdisteen kanssa.

Esimerkki 54 A. 1-(3-merkapto-2-D-metyyli-l-oksopropyyli)-4-cis-metyyli- L-pröliini Jäillä jäähdytettyyn liuokseen, jossa on 4-cis-metyyli-L-proliinihydrokloridia (2,87 g, 17,4 ramol) ja natriumhydrokloridia (3,2 N, 10,8 ml), lisätään liuos, joka sisältää 3-asetyyli-2-metyylipropionyylikloridia (2,88 g, 16 mmol) ja eetteriä (3 ml). Seosta sekoitetaan voimakkaasti 35 min. ajan pitämällä pH arvossa 8,5 natriumkarbonaatin avulla (4 N, 12 ml). Sekoitetaan vielä 1 h ajan huoneen lämpötilassa. Seos uutetaan eetterillä ja vesi-liuos tehdään happameksi väkevällä HCl:llä (4,5 ml). Happameksi tehty liuos uutetaan perinpohjin etyyliasetaatilla, etyyliasetaatti poistetaan tyhjössä ja jäänös kromatografoidaan silikageelillä (E. Merck, 175 g) paineessa 1,4 kp/cm käyttämällä bentseenin ja etikkahapon seosta (10:1) eluointiaineena. Yhdiste puhdistetaan muodostamalla disykloheksyyliamiinisuola etyyliasetaatissa. Puhdas haluttu tuote saadaan öljynä regeneroimalla disykloheksyyli- 2 5 o amiinisuola. Saanto 1,8 g eli 42 %. = -171,5 (c = 1,9,

CHClg), Rj, = 0,54 (silikageeli, bentseeni: etikkahappo 7:3). Analyysinäyte suolasta saadaan kiteyttämällä uudelleen aseto-nitriilistä. = -59,3° (c = 1,76 CHC13) sp. 182-184°C

Analyysi: Cl2H1gN01+S .disykloheksyyliamiini:

Laskettu C, 63,40, H, 9,31, N, 6,16, S, 7,05 Löydetty: C, 63,30, H, 9,37, N, 6,19, S, 7,03 3“ 66596 Β. 1-(3-merkapto-2-D-metyyli-l-oksopropyyli)-4-cis- metyyli-L-proliini

Liuokseen, jossa on yhdistettä A (1,67 g, 6,1 mmol) ja metanolia (10 ml), lisätään NaOH-vesiliuosta (IN, 15,25 ml) ja seoksen annetaan seistä argonkehassä 15 min. ajan. Liuos sentri- fugoidaanpienessä määrässä olevan suspendoituneen kiinteän aineen erottamiseksi ja metanoli poistetaan supernatantista tyhjössä.

Jäljelle jäävä vesiliuos tehdään happameksi HClrllä (3 N, 5 ml) ja uutetaan perusteellisesti etyyliasetaatilla. Etyyliasetaatti poistetaan tyhjössä ja jäännös kromatografoidaan silikageelillä 2 (E. Merck, 70 g) paineessa 1,4 kp/cm käyttämällä eluointiaineena bentseenin ja etikkahapon seosta (7:3). Pylväästä saatava tuote liuotetaan kloroformiin, kloroformi poistetaan tyhjössä, jolloin haluttu tuote saadaan viskoosisena öljynä. Saanto 950 mg (67 %), /Vip5 = -139,7° (c = 1,26, CHC13). Rf = 0,54 (silikageeli, bentseeni:etikkahappo 7:3). Yhdisteen disykloheksyyliamiinisuola saadaan käyttämällä etyyliasetaattia liuottimena. Lc^Jp = -62,6 (c = 1,07, CHClg), sp. (175°) 177-179°C.

Analyysi; C^qH^NO^S disykloheksyyliamiini

Laskettu C, 64,04, H, 9,77, N, 6,79, S, 7,77 Löydetty C, 63,67, H, 9,98, N, 6,74, S, 7,74 HS: 99,4 %

Esimerkki 55 1-(3-merkapto-2--D-metyyli-l-oksopropyyli)-4-cis-heptyyli- L-proliini A. l-/~3-(asetyylitio) - 2-D-metyyli-l-oksopropyyli7-4-cis-heptyyli-L-proliini

Sekoitettu suspensio, jossa on 3,0 g (0,013 mol) cis-4-heptyyli-L-proliinia suspendoituneena liuokseen, joka sisältää 1 g Na2C0g ja 50 ml vettä, jäähdytetään 10°C:seen ja suspensiota käsitellään annoksittain liuoksella, jossa on 2,6 g (0,014 mol) D-3-asetyylitio-2-metyylipropionyylikloridia ja 5 ml eetteriä 10 min. ajan. Tänä aikana lisätään seokseen vielä 2,5 g Na2CC>3 (annoksittain) pH:n pitämiseksiarvossa 8. Saadaan kirkas liuos. Jääkylpy poistetaan, liuoksen annetaan sekoittua 90 min. ajan huoneen lämpötilassa, liuos jäähdytetään, siihen lisätään 50 ml EtOAc ja seos tehdään happameksi 10 ml :11a 6 N kloorivetyhappoa.

35 66596

Faasit erotetaan ja vesifaasi uutetaan 25 ml:11a EtOAc. Orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan MgSO^.lla, suodatetaan ja haihdutetaan pois liuotin, jolloin saadaan 5,5 g melkein väritöntä viskoosista jäännöstä. Tämä liuotetaan 25 ml:aan EtOAc ja liuosta käsitellään liuoksella, jossa on 2,7 g disykloheksyyliamiinia ja 5 ml EtOAc. Saatu liuos ympätään, jolloin disykloheksyyliamiinisuola kiteytyy nopeasti. Sen jälkeen kun on annettu jäähtyä yli yön, saadaan 6,0 g (79 %) melkein väritöntä kiinteätä ainetta, sp. 157-159° (s. 151°). Uudelleen kiteyttämisen jälkeen 80 ml:sta CHgCN saadaan 5,4 g (71 %) melkein väritöntä kiinteää ainetta, sp. 161-163°, r -64,5° (1 % CHCl^ssa).

Analyysi C^H^NO^S.C^HjgN:

Laskettu C, 66,87, H, 10,10, N, 5,20, S, 5,95 Löydetty C, 66,68, H, 10,06, N, 5,20, S, 5,98

Saatu disykloheksyyliamiinisuola (5,4 g) muutetaan vapaaksi hapoksi suspendoimalla 60 ml;aan EtOAc ja käsittelemällä suspensiota annoksittain 60 ml 10-prosenttista KHSO^-liuosta. Kerrokset erotetaan ja vesifaasi uutetaan 30 ml:lla EtOAc (2 kertaa). Orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan MgSO^llä, suodatetaan ja liuotin haihdutetaan pois, jolloin saadaan 3,6 g (74 %) melkein väritöntä siirappia, - -105° (1 % EtOHrssa), R^. 0,26 tolueeni - 15 % etikkahappoa silikageelillä).

B. 1-(3-merkapto-2-D-metyyli-l-oksopropyyli)-4-cis- heptyyli-L-proliini

Yhdistettä A (3,3 g) käsitellään argonkehässä kylmällä liuoksella, jossa on 10 ml väkevää ammoniakkia ja 25 ml vettä. Seosta sekoitettaessa usean minuutin ajan se muuttuu liuokseksi. Liuos jäähdytetään ja uutetaan 20 ml :11a EtOAc (2 kertaa). Vesi-faasia sekoitetaan, sen päälle kaadetaan 20 ml EtOAc, tehdään happameksi 6 N kloorivetyhapolla ja kerrokset erotetaan. Vesi-faa,si uutetaan EtOAc :llä (2 kertaa). Orgaaniset faasit yhdistetään kuivataan MgSO^lla, suodatetaan ja liuotin erotetaan, jolloin saadaan 2,87 g (98 %) melkein väritöntä siirappia, = -74° (1 % EtOH:ssa), R^. 0,22 ( 85 % tolueenia - 15 % etikkahappoa silikageelillä, Rf 0,72 (95:5:5 CH2C12 - MeOH - AcOH silikageelillä) .

Analyysi: C]_6H29N03S . 0.2 5 H20:

Laskettu C, 60,05, H, 9,45, N, 4,38, S, 10,02, SH,10 Löydetty C, 60,44, H, 9,36, N, 4,48, S, 10,12, SH,10 36 6 6 5 9 6 Tämän yhdisteen 1-adamantaaniamiinisuola sulaa 177-179°C:ssa (EtOAc:stä).

Esimerkki 56 l-/^-(merkaptometyyli)-l-okso-9-fenyylinonyyli7-L-proliini A. l-/2-(asetyylitiometyyli)-l-okso-9-fenyylinonyyli)-L-proliini 5,0 g 3-(asetyylitio)-(2-fenyyli-n-heptyyli)-propionihappoa ja 2,38 g hydroksibentsotriatsolia liuotettuna 23 ml:aan tetra-hydrofuraania sekoitetaan jäähdyttämällä jääkylvyssä. Tähän seokseen lisätään 3,2 g disykloheksyylikarbodi-imidiä ja sitten L-... . 3 prolunin t-butyyliesteriä 100 cm :ssä tetrahydrofuraania. Reak-tioseoksen annetaan seistä yli yön huoneen lämpötilassa. Ureasivu-tuote haihdutetaan pois, suodos haihdutetaan kuiviin tyhjössä, jäännös otetaan etyyliasetaattiin ja pestään neutraaliin pH-arvoon 10-prosenttisella KHSO^jllä ja kyllästetyllä NaHCO^lla, etyyliasetaatti poistetaan ja jäännös kromatografoidaan silikageelipyl-väässä käyttämällä eluointiaineena kloroformin ja etyyliasetaatin seosta (9:1), jolloin saadaan 5 g yhdistettä t-butyyliesterinä, joka muutetaan vapaaksi hapoksi käsittelemällä 11,5 cm :llä tri-fluorietikkahappoa, jolloin saadaan 4,2 g otsikkoyhdistettä.

B. l-Zr2-(merkaptometyyli)-l-okso-9-fenyylinonyyli7-L-proliini 3

Yhdiste A otetaan 15 cm :iin kylmää metanolia argonkehässä.

. 3 Tähän lisätään 15 cm kylmää väkevää ammoniumhydroksidia. 30 min.

kuluttua reaktioseos tehdään happameksi väkevällä HCl:llä ja uutetaan etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 4 g kirkasta öljyä (sp. 104-110°C adamantyyliamiinisuolana, joka on valmistettu eetteri-heksaanista.

Esimerkki 57 1-Z~2- (merkaptometyyli )-l-oksononyyli7-L-proliini A. 1-^2-(asetyylitiometyyli)-l-oksononyyli7-L-proliini 2,46 g 3-asetyylitio-2-n-heptyylipropionihappoa ja 1,53 g hydroksibentsotriatsolia otetaan samalla sekoittaen 15 ml:aan tetrahydrofuraania jääkylvyssä. Tähän lisätään 2,06 g disyklo-hek-syylikarbodi-imidiä ja sitten 1,71 g L-proliinin t-butyyliesteriä liuotettuna 5 ml:aan tetrahydrofuraania. Jääkylpy poistetaan 15 min. kuluttua ja reaktioseoksen annetaan sekoittua yli yön huoneen lämpötilassa. Ureasivutuote poistetaan suodattamalla ja suodos haihdutetaan kuiviin ja otetaan etyyliasetaattiin ja pestään neut- 37 66596 raaliksi 10-prosenttisella KHSOl+:llä ja kyllästetyllä NaHC03:lla, minkä jälkeen etyyliasetaatti poistetaan, jolloin saadaan 3,9 g tuotetta t-butyyliesterinä. Esterituote otetaan 11,3 ml:aan anisolia ja 20 ml trifluorietikkahappoa ja annetaan seistä 1 h ajan ja haihdutetaan kuiviin tyhjössä, jolloin saadaan öljy, joka kromatografoidaan silikageelipylväässä käyttämällä eluointiainee-na bentseenin ja etyyliasetaatin seosta (7:1), jolloin saadaan 1,8 g otsikkoyhdistettä.

B. l-Z'2-merkaptome tyyli )-l-oksononyyTi.7-L-proliini 1,7 g yhdistettä A otetaan 8 ml:aan kylmää metanolia argon-kehässä ja tätä käsitellään 8 ml:11a kylmää väkevää ammoniakkia.

3Q min. kuluttua reaktioseos jäähdytetään, tehdään happameksi väkevällä HCl:llä ja uutetaan etyyliasetaatilla, jolloin kuiviin haihduttamisen jälkeen saadaan 1,5 g tuotetta öljynä (sp. 159-162° adamantyyliamiinisuolana).

Esimerkki 58 1-(3-merkapto-l-oksodekyyli)-L-proliini A. 3-/~(asetyylitio)-l-oksodekyyli7-L-proliin-t-butyyli-esteri

6,75 g (0,05 mol) hydroksibentstriatsolia, HOBT

10.3 g (0,05 mol) disykloheksyylikarbodi-imidiä, DCC

8,6 g (0,05 mol) L-proliinitributyyliesteriä 12.3 g (0,05 mol) (+)-3-(asetyylitio)dekaanihappoa 3 .

5Q0 cm etyyliasetaattia HOBT liuotetaan etyyliasetaattiin 50°;ssa ja jäähdytetään huoneen lämpötilaan. Lisätään dekaani-happo ja sitten DCC. Muutaman minuutin kuluttua alkaa kiteytyä kiteistä ainetta. Reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 2 1/2 h ajan, lisätään L-proliini-t-butyyliesteri ja sekoitetaan huoneen lämpötilassa yli yön. Kiinteä aine suodatetaan, jolloin saadaan 9,6 g disykloureaa. Etyyliasetaattisuodos pestään 2-x 200 cm3:llä 5-prosenttista NaHCO^, 1 x 200 cm3:llä kyllästettyä NaCl, 2 x 200 cm3:11a 5-prosenttista 1 x 200 cm3:llä kyllästettyä NaCl, ja kuivataan MgSO^illä. Liuotin haihdutetaan pois, jolloin saadaan 17,8 g (89 %) tuotetta.

Analyysi: C_.H NO, S

21 37 4

Laskettu C, 63,12, H, 9,33, N, 3,51 Löydetty C, 64,01, H, 9,66, N, 3,94 38 66596 B. 1-/3- (asetyylitio)-l-oksodekyyIi_/f-L-proliini 17,3 g (0,043 mol) ( + )-3-/fasetyylitio)-l-oksodekyyli-L- 3 proliini-t-butyyliesteriä kohdasta A 135 cm trifluorietikkahappoa 6 cm^ anisolia

Komponenttien muodostamaa liuosta sekoitetaan typpikehässä huoneen lämpötilassa noin 4 h ajan. Ylimäärä trifluorietikkahap- poa poistetaan 40°:ssa ja 3 mmHg paineessa, jolloin saadaan vis- koosinen jäännös (25,6 g, teoreettinen paino 14,8 g). Jäännös . 3 liuotetaan 150 cm :un eetteriä 3a lisätään liuos, jossa on 10 g . . . . 3 disykloheksyyliamunia ja 50 cm eetteriä. Muodostuu heti valkoinen, kiteinen saostuma ja lämpötila kohoaa. Jäähdytetään ja suodatetaan pois kiinteä aine, jolloin saadaan 15 g trifluorietikka-hapon disykloheksyyliamiinisuolaa (sp. 225-230°). Suodos jaetaan 10-prosenttisen KHSO^in ja veden kesken. Orgaaninen kerros pestään kyllästetyllä NaCl"llä ja kuivataan MgSO^llä. Liuottimen poistamisen jälkeen saadaan 15 g tummaa viskoosista jäännöstä. Analyysi: ci7H29N^4S:

Laskettu C, 59,44, H, 8,51, N, 4,08, S, 9,33 Löydetty C, 59,64, H, 8,60, N, 3,81, S, 9,56 C. 1-(3-merkapto-l-oksodekyyli)-L-proliini

15 g (0,043 mol) (_+ )-l-( 3-asetyylitio)-l-oksodekyyli?-L-proliinia kohdasta B 160 cm^ vettä 65 cm^ väkevää NH^OH

Komponenttien seosta sekoitetaan typpikehässä huoneen lämpötilassa noin 3 h ajan. Etyyliasetaatilla iiutetaan alkaliin liukenematonta ainetta. Vaalean keltainen vesipitoinen kerros peitetään etyyliasetaatilla ja tehdään vahvasti happameksi 20-prosentti- sella HCl:llä. Kerrokset erotetaan ja vesipitoinen kerros uute- 3 taan vielä 200 cm :llä etyyliasetaattia. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestään kyllästetyllä NaCl:llä ja kuivataan MgSO^illä.

Liuotin poistetaan, jolloin saadaan 8,7 g (67 %) jäännöstä, joka 3 . .

antaa voimakkaan SH-testm. Jäännös liuotetaan 200 cm :11η bentsee-niä ja kylmäkuivataan, jolloin saadaan 8,4 g (62 %) otsikkoyhdistet-tä viskoosisena nesteenä.

Analyysi: Ο-^^^ΝΟ^.0.5 . ^0: laskettu C, 58,02, H, 9,09, S, 10,33, N, 4,51, SH,100 % Löydetty C, 57,77, H, 9,37, S, 10,24, M, 4,47, SH,98,9%

Claims (5)

1. 39 665 9 6
2. 1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten proliini-johdannaisten valmistamiseksi, joiden kaava on (I) R3 ®4 *1 Γ| (I) R--S- (CH) -CH-CO-N__COR z n jossa R on hydroksi tai alempi alkoksi, R^ ja tarkoittavat toisistaan riippumatta vetyä, alempaa alkyyliä tai fenyyli-alempi-alkyyliä ja R1 voi lisäksi olla fenyyli, R^ on vety, hydroksi tai alempi alkyyli, R2 on vety, alempi alkyyli, fenyyli-alempi-alkyyli, trifenyylimetyyli tai R^CO-, jossa R,. on alempi alkyyli, fenyyli tai fenyyli-alempi-alkyyli ja n on 0,1 tai 2, tunnettu siitä, että asyloidaan suoraan L-proliiniyhdiste, jonka kaava on (II) R3 Λ I, <n> HN_h._COR jossa R ja R^ tarkoittavat samaa kuin edellä, a) hapolla, jonka kaava on (III) »4 R1 R--S-(CH) -CH-COOH (III) z n jossa R2 on vety tai rikin suojaryhmä mukaan luettuna edellä luetellut 1*2:n “eritykset» joka suojaryhmä voidaan myöhemmin poistaa, tai kaavan lila mukaisella hapolla, joka on hapon III välituote ?4 ?1 X-(CH) -CH-COOH (lila) n 40 66596 jossa X on kloori, bromi, jodi tai tosyylioksi, minkä jälkeen näin saatu yhdiste saatetaan reagoimaan sulfidin R^S kanssa, tai kaavan III b mukaisella yhdisteellä, joka on hapon III a de-hydrohalogenoitu muoto »4 *1 HC =C -COOH (IIIb) minkä jälkeen näin saatu yhdiste saatetaan reagoimaan sulfidin R2S kanssa, tai b) tiolaktonin kanssa, jonka kaava on (IV) *1 (CHJ —CH I 2 n I (iv) S-CO jossa tarkoittaa samaa kuin edellä ja n on 1 tai 2 ja R2 on vety.
3. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että L-proliini, jonka kaava on (Ha) O HN-L-COOH (Ha) saatetaan reagoimaan hapon kanssa, jonka kaava on (IIIc) CH, I -5 H-S-CH2-CH -COOH (IIIc) tai sen suojatun muodon tai välituotteen kanssa sellaisen yhdisteen saamiseksi, jonka kaava on (Ia) CH3 f] H-S-CH2-CH -CO-N_L-COOH (Ia)
4. 3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että valmistetaan 1-(3-merkapto-2-D-metyylipropano- yyli)-L-proliini. 41 66596
5. 1. Förfarande för framställning av terapeutiskt användbara prolinderivat med formeln (I) R3 r4 h r R0-S-(CH) -CH-CO-N-l—COR (I) λ n väri R är hydroxi eller lägre alkoxi, R^ och R^ oberoende av var-andra betecknar väte, lägre alkyl eller fenyl-lägre-alkyl och R^ dessutom kan vara fenyl, R^ är väte, hydroxi eller lägre alkyl, R2 är väte, lägre alkyl, fenyl-lägre alkyl, trifenylmetyl eller Rt-CO-, väri är lägre alkyl, fenyl eller fenyl-lägre-alkyl och är 0, 1 eller 2, kännetecknat därav, att man acylerar direkt en L-prolinförening med formeln (II) R3 HN--COR (II) väri R och har ovan angiven betydelse, a) raed en syra med formeln (III) R4 ri R2-S-(CH)n-CH-COOH (III) väri R2 är väte eller en skyddsgrupp för svavel inklusive de ovan uträknade betydelserna för R2, vilken skyddsgrupp kan senare av-lägsnas, eller raed en syra med formeln lila, vilken är en mellan-produkt av föreningen III R4 ?1 X-(CH) n-CH-COOH (Ula) väri X är klor, brom, jod eller tosyloxi, varefter man omsätter den sälunda erhällna föreningen med sulfiden R2S~, e^ler med en