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ES3038398T3 - Peptide combinations for use in the diagnosis of schizophrenia - Google Patents

Peptide combinations for use in the diagnosis of schizophrenia

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Publication number
ES3038398T3
ES3038398T3 ES16745856T ES16745856T ES3038398T3 ES 3038398 T3 ES3038398 T3 ES 3038398T3 ES 16745856 T ES16745856 T ES 16745856T ES 16745856 T ES16745856 T ES 16745856T ES 3038398 T3 ES3038398 T3 ES 3038398T3
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ES
Spain
Prior art keywords
compound
formula
amino acid
peptide
general formula
Prior art date
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Active
Application number
ES16745856T
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English (en)
Inventor
Ludmila Schechtman
Meir Shinitzky
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yeda Research and Development Co Ltd
Original Assignee
Yeda Research and Development Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yeda Research and Development Co Ltd filed Critical Yeda Research and Development Co Ltd
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Publication of ES3038398T3 publication Critical patent/ES3038398T3/es
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
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Abstract

La invención se refiere en general a una composición que comprende una combinación de al menos un péptido corto y al menos un dímero peptídico, en una proporción definida, al que se unen autoanticuerpos encontrados en niveles elevados en pacientes esquizofrénicos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Combinaciones peptídicas para su uso en el diagnóstico de esquizofrenia
Campo tecnológico
La invención se refiere en general a combinaciones peptídicas novedosas para el diagnóstico de esquizofrenia.
Antecedentes de la técnica
La esquizofrenia es un síndrome que abarca una variedad de síntomas mentales como alucinaciones auditivas, paranoia, delirios, catatonía, comportamiento extraño y abstinencia emocional. La esquizofrenia afecta aproximadamente al 1% de la población total y sus cargas económicas así como sociales sobre la sociedad son enormes. La aparición de la enfermedad se produce en edad temprana y, por tanto, los pacientes necesitan típicamente supervisión médica y psiquiátrica de por vida. La esquizofrenia se estima, por lo tanto, como una de las enfermedades más costosas en el mundo industrial.
Se ha demostrado que la esquizofrenia implica un proceso autoinmune y últimamente se demostraron autoanticuerpos y células T citotóxicas contra plaquetas en pacientes esquizofrénicos. La reacción de células T citotóxicas en pacientes esquizofrénicos se evaluó mediante una prueba cutánea en el que la mayoría de los pacientes esquizofrénicos reaccionaban positivamente contra sus plaquetas autólogas, mientras que sólo un número muy pequeño de individuos no esquizofrénicos probados reaccionaban positivamente en esta prueba[1].
Además, se observaron niveles elevados de autoanticuerpos contra plaquetas en pacientes esquizofrénicos pero no en pacientes que padecían trastorno maníaco depresivo, depresión, trastornos de personalidad y trastorno esquizoafectivo[2, 3].
Estudios previos demostraron varias proteínas que se unen a autoanticuerpos que se encuentran en niveles elevados en fluidos corporales de pacientes esquizofrénicos[4].Estas proteínas reaccionaban con autoanticuerpos purificados derivados de plaquetas (PAA) de pacientes esquizofrénicos pero no podían diferenciar entre muestras de plasma o sangre de individuos esquizofrénicos y no esquizofrénicos. La digestión enzimática de una de estas proteínas, la enzima enolasa, dio como resultado un fragmento que se unía a un nivel sustancialmente más alto a muestras de plasma de pacientes esquizofrénicos en comparación con muestras de plasma de individuos no esquizofrénicos. Sobre la base de este fragmento se sintetizaron varios péptidos adicionales y se aislaron aquellos que tenían una alta actividad de unión a PAA de individuos esquizofrénicos. Cada uno de estos péptidos sintetizados están compuestos de al menos 7 aminoácidos.
También se estudió el efecto de la clozapina y otros antipsicóticos sobre el nivel de PAA en niños con esquizofrenia[5].
La referencia[6]se refiere a un péptido específico que, según se informa, se une a una muestra de fluido corporal obtenida de un paciente esquizofrénico a un nivel más alto que su unión a una muestra de fluido corporal obtenida de un paciente esquizofrénico
REFERENCIAS
[1] WO99/30163
[2] Shinitzky M, Deckmann M, Kessler A, Sirota P, Rabbs A, Elizur A. Platelet autoantibodies in dementia and schizophrenia. Possible implication for mental disorders.Ann N Y Acad Sci.1991 ;621:205-17.
[3] Deckmann M, Shinitzky M, Leykin I, Cheng D, Guy J, Sirota P, et al. Humoral and cellular response against autologous platelets in schizophrenia-clinical and pathophysiological implications.Ital J Psych Behav Sci,1996; 6: 29-34.
[4] WO99/51725
[5] Ebert T, Schechtman M, Midbari Y, Weizman A, Shinitzky M, Spivak B. Effect of Clozapina and Other Antipsychotics on the Level of Platelet-Associated Autoantibodies in Children with Schizophrenia: A Longitudinal Follow-Up Study.Neuropsychobiology.9 de abril de 2015; 71(2):120-124.
[6] WO02/074793
[7] NIH POLICY AND GUIDELINES ON THE INCLUSION OF CHILDREN AS PARTICIPANTS IN RESEARCH INVOLVING HUMAN SUBJECTS. 6 de marzo, 1998. Enlace: http://grants.nih.gov/grants/guide/noticefiles/not98-024.html. Véase también el cambio en esta política, con fecha del el 13 de octubre de 2015. Enlace: http://grants.nih.gov/grants/guide/notice-files/NOT-OD-16-010.html.
DESCRIPCIÓN GENERAL
La presente invención proporciona una composición que comprende una combinación de al menos un péptido corto y al menos un dímero peptídico en una proporción definida, a los que se unen autoanticuerpos hallados en niveles elevados en pacientes esquizofrénicos. Las combinaciones particulares permiten que los autoanticuerpos se unan a los materiales basados en péptidos, haciendo de este modo que las composiciones de la invención sean más útiles en el diagnóstico de esquizofrenia. Por tanto, aunque los péptidos de la técnica anterior[4,6]eran capaces de unirse a autoanticuerpos presentes a niveles más altos en pacientes esquizofrénicos en comparación con individuos no esquizofrénicos, las combinaciones peptídicas de la presente invención demuestran una afinidad ampliamente mejorada y características únicas que permiten una detección más eficaz y temprana de esquizofrenia en niños (es decir, de menos de 18 años de edad, según la política de NIH[7]y adultos jóvenes, de 18-19 años de edad).
Como se demuestra en la presente memoria, los ensayos de la técnica exhibieron una sensibilidad que es, en el mejor de los casos, de aproximadamente 20%, mientras que la combinación de la presente invención demostró una sensibilidad de aproximadamente 80%.
Por tanto, la invención contempla una herramienta de diagnóstico en forma de una combinación que comprende dos materiales con actividad diagnóstica: al menos un péptido y al menos un dímero de dicho péptido. Como se muestra adicionalmente a continuación, el al menos un péptido comprende un aminoácido que tiene al menos un átomo de azufre, por ejemplo cisteína, y el dímero de dicho al menos un péptido se forma mediante formación de un enlace covalente entre un átomo de azufre presente en cada uno de dicho al menos un péptido. Por lo tanto, el dímero comprende un enlace -S-S-.
En un primer aspecto, la presente invención proporciona una composición que comprende un compuesto de la Fórmula general (I) en combinación con un compuesto de la Fórmula general (Ia) y/o (Ib):
X3-X-X1-S-S-X2-X'-X4 (I),
X<3>-X-X<1>-S-H (Ia),
H-S-X2-X'-X4 (Ib),
en donde:
- S-S- designa un grupo disulfuro o un grupo que comprende un disulfuro;
S designa azufre; y H designa hidrógeno;
el al menos un compuesto de la Fórmula general (Ia) y/o (Ib) comprende cisteína, y
el compuesto que tiene la Fórmula general (I) se forma mediante formación de un enlace covalente entre un átomo de azufre presente en cada uno de dicho al menos un compuesto de la Fórmula general (Ia) y/o (Ib);
cada uno de dichos X, X', X<1>, X<2>, X<3>y X<4>es como se define en la reivindicación 1;
cada uno de "-" es un enlace,
en donde, en las Fórmulas (Ia) y (Ib), cada uno de X, X<1>, X<2>, X<3>, X<4>y X' se seleccionan como en la Fórmula (I); y en donde la relación entre el compuesto de la Fórmula (I) y el compuesto de la Fórmula (Ia) o la Fórmula (Ib) o una combinación de los mismos está entre 1:1 y 10:1. Se ha observado que las combinaciones de dímero y monómero en este intervalo producen resultados de ensayo cada vez más robustos y reproducibles.
Como se ha indicado, la invención se refiere a una composición de al menos dos materiales activos basados en péptidos. El primero es un compuesto de la Fórmula general (I), que es un dímero que contiene un enlace disulfuro; y el otro es un péptido de la Fórmula general (Ia) y/o (Ib). El dímero utilizado en una composición de la invención se selecciona normalmente para que sea un dímero del componente peptídico de la Fórmula (Ia) y/o (Ib). Por ejemplo, cuando el péptido es de la Fórmula general (la): X<3>-X-X<1>-S-H, el dímero de la Fórmula (I) es X<3>-X-X<1>-S-S-X<1>-X-X<3>. De manera similar, cuando el péptido es de la Fórmula general (Ib): H-S-X2-X'-X4, el dímero de la Fórmula (I) es X4-X'-X2-S-S-X2-X'-X4.
Dicho de otro modo, cuando se selecciona un compuesto de la Fórmula (I) y un compuesto de la Fórmula (Ia) y/o (Ib), cada uno de X, X<1>, X<2>, X<3>, X<4>y X' se seleccionan de manera idéntica, de manera que el compuesto de la Fórmula (I) es un dímero de al menos un péptido de la Fórmula (Ia) o la Fórmula (Ib) presente en la composición.
En algunas realizaciones, cuando la combinación es de un compuesto de la Fórmula (I), un compuesto de la Fórmula (Ia) y un compuesto de la Fórmula (Ib), siendo el dímero un compuesto de la Fórmula (I) que es un dímero del compuesto de la Fórmula (Ia) o el compuesto de la Fórmula (Ib).
La relación ponderal entre los al menos dos componentes de la composición, es decir, (1) un compuesto de la Fórmula general (I), y (2) un péptido de la Fórmula general (Ia) y/o (Ib) es al menos 1:1. En algunas realizaciones, el compuesto de la Fórmula general (I) está en exceso. En algunas realizaciones, el compuesto de la Fórmula general (I) se encuentra en una cantidad que es al menos el doble que la cantidad de un péptido de la Fórmula general (Ia) y/o (Ib). En algunas realizaciones, la cantidad del compuesto de la Fórmula general (I) es 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 veces mayor que la de un péptido de la Fórmula general (Ia) y/o (Ib).
En algunas realizaciones, en una composición de la invención, el compuesto de la Fórmula general (I) constituye al menos el 55 % de la combinación. En algunas realizaciones, el compuesto de la Fórmula general (I) constituye al menos el 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o al menos el 95 % de la combinación activa.
En otras realizaciones, en una composición de la invención, el compuesto de la Fórmula general (Ia) y/o (Ib) constituye como máximo el 50 %, 45 %, 40 %, 35 %, 30 %, 25 %, 20 %, 15 %, 10 % o como máximo el 5 % de la combinación activa.
En algunas realizaciones, el dímero de la Fórmula (I) es asimétrico, es decir, es un dímero de dos péptidos diferentes, el péptido de la Fórmula (Ia) y/o (Ib) puede ser cualquiera de los dos péptidos que conforman el dímero.
Por tanto, cuando se selecciona un compuesto de la Fórmula (I) para una composición de la invención, la identidad de un péptido de la Fórmula (Ia) o (Ib) puede determinarse fácilmente.
Tal como se usa en la presente memoria, un"aminoácido"es cualquier aminoácido conocido en la técnica. En algunas realizaciones, el aminoácido es uno cualquiera de los 20 aminoácidos de origen natural. En otras realizaciones, el aminoácido es cualquiera de los 20 aminoácidos de origen natural que está modificado químicamente. En realizaciones adicionales, el aminoácido es un aminoácido sintético de origen no natural.
Cuando se hace referencia a cualquier aminoácido que conforma los péptidos usados según la invención, se puede hacer referencia a los aminoácidos con su nomenclatura aceptable o con su designación de una letra, como es aceptable en la técnica. Por ejemplo, el aminoácido al que se hace referencia con la letra L es leucina. El aminoácido al que se hace referencia con la letra V es valina. El aminoácido al que se hace referencia con la letra G es glicina. El aminoácido al que se hace referencia con la letra K es lisina. El aminoácido al que se hace referencia con la letra M es metionina y el aminoácido al que se hace referencia con la letra C es cisteína. Por tanto, en el ejemplo de motivo peptídico, "LLVVG" es el péptido leucina-leucina-valina-valina-glicina. A menos que se indique específicamente, la direccionalidad de la fracción peptídica o cualquier grupo peptídico representado, puede ser C ^ N o N ^C .
En un compuesto de la Fórmula (I), cada uno de X y X', independientemente, es un pentapéptido que comprende cinco aminoácidos, estando cada uno de los aminoácidos conectado entre sí a través de un enlace peptídico.
Más específicamente, cada uno de X y X', independientemente, es un pentapéptido que consiste en los aminoácidos L, V y G, con una secuencia como se indica en la reivindicación 1.
En otras realizaciones, cada uno de X y X' puede ser o no el mismo. En algunas otras realizaciones, X y X' son diferentes entre sí.
En composiciones de referencia, la composición comprende un compuesto de la Fórmula (I) que se selecciona entre compuestos que tienen la estructura:
X3-Xi-S-S-X2-X'-X4,
X<3>-X<1>-S-S-X<2>-X<4>,
X<3>-X-X<1>-S-S-X<2>-X<4>,
en donde, en cada una de las fórmulas anteriores, X<3>, X<1>, X<2>y X<4>son como se definen.
En composiciones de referencia, el compuesto de la Fórmula (I) es un compuesto en donde X está ausente y X' es como se define anteriormente, o un compuesto en donde tanto X como X' están ausentes o un compuesto en donde X es como se define anteriormente y X' está ausente.
En las fórmulas anteriores, cada uno de X<1>, X<2>, X<3>y X<4>, independientemente entre sí, puede estar ausente o es un aminoácido, un diaminoácido o un triaminoácido como se define en la reivindicación 1.
Como se usa en la presente memoria, un diaminoácido es un dipéptido, es decir, dos aminoácidos conectados entre sí a través de un enlace peptídico; un triaminoácido es un tripéptido, es decir, tres aminoácidos conectados entre sí a través de enlaces peptídicos; en donde el aminoácido en cada uno de "aminoácido", "diaminoácido" y "triaminoácido" es como se define en la presente memoria.
En composiciones de referencia, cada uno de los aminoácidos indicados en la Fórmula general (I) puede estar sustituido por al menos un grupo de aminoácidos. El”al menos un grupo de aminoácidos”es un único aminoácido o una cadena de aminoácidos que están conectados entre sí, en algunas realizaciones, a través de enlace(s) peptídico(s); o un grupo que comprende uno o más aminoácidos.
Como referencia, el grupo de aminoácidos sustituyente es o comprende un aminoácido seleccionado de C, K y M. El al menos un grupo de aminoácidos puede ser C, K o M. El al menos un grupo de aminoácidos puede comprender uno o más de C, K y M.
Por ejemplo, el grupo de aminoácidos es C. Por ejemplo, el grupo de aminoácidos es K. Por ejemplo, el grupo de aminoácidos es M.
En algunas realizaciones, el grupo disulfuro se deriva de cistina. En algunas realizaciones, la cistina está sustituida por al menos un aminoácido.
Cada uno de X<1>, X<2>, X<3>y X<4>, independientemente, es un aminoácido, un diaminoácido o un triaminoácido que comprende un aminoácido seleccionado de K, C y M. En algunas realizaciones, el aminoácido es K.
Más específicamente, cada uno de X<1>y X<2>, independientemente, es un aminoácido, un diaminoácido o un triaminoácido que comprende un aminoácido seleccionado de K, C y M y X<3>y X<4>están ausentes.
Como referencia se divulga una composición que comprende un compuesto que tiene la Fórmula general (I), en donde cada uno de X<1>, X<2>, X<3>y X<4>está ausente; siendo el compuesto de la Fórmula general (II):
X-S-S-X' (II)
en donde cada uno de X y X' son como se definen anteriormente.
En algunas realizaciones, el grupo disulfuro en el compuesto de la Fórmula (II) es una cistina; en los ejemplos divulgados, el compuesto es de la Fórmula general (III):
X-C(O)-CHY-CH2-S-S-CH2-CHY'-C(O)-X' (III)
en donde cada uno de X y X' son como se definen anteriormente, -C(O)- designa un grupo carbonilo (-C=O), y cada uno de Y e Y', independientemente entre sí, es al menos un aminoácido, como se define en la presente memoria. Por ejemplo, cada uno de Y e Y', independientemente, se selecciona de K, C y M.
Como referencia se divulga una composición que comprende un compuesto de la Fórmula general (I) que tiene una Fórmula general (IV):
X-C(O)-CHY-CH2-S-S-X' (IV).
Como referencia se divulga una composición que comprende un compuesto de la Fórmula (I) que tiene la estructura de la Fórmula (V):
X-S-S-CH2-CHY'-C(O)-X' (V)
en donde cada uno de X y X' son como se definen anteriormente, e Y' es al menos un aminoácido.
Como se requiere en la reivindicación 1, cada uno de X y X', independientemente del otro, es un pentapéptido que comprende al menos un aminoácido L, al menos un aminoácido V y al menos un aminoácido G. En particular cada uno de X y X', independientemente entre sí, es un pentapéptido que comprende al menos dos aminoácidos L. En particular, cada uno de X y X', independientemente entre sí, es un pentapéptido que comprende al menos dos aminoácidos V. Más específicamente, cada uno de X y X', independientemente entre sí, es un pentapéptido seleccionado de LGVVVL y LVVGL. Estos se incluyen en la siguiente Tabla 1, junto con un número de pentapéptidos adicionales que se proporcionan simplemente como referencia.
Tabla 1:posibles combinaciones de 5-aminoácidos [pentapéptidos).
La conectividad peptídica puede leerse de derecha a izquierda o de izquierda a derecha.
En los ejemplos divulgados, cada X y X', independientemente entre sí, se selecciona de los residuos de aminoácidos: LLVVG (SEQ ID NO: 1), LLVGV (SEQ ID NO: 2), LLGVV (SEQ ID NO: 3), LVLVG (SEQ ID NO: 4), LVLGV (SEQ ID NO: 5), LGLVV (SEQ ID NO: 6), LVVLG (SEQ ID NO: 7), LVGLV (SEQ ID NO: 8), LGVLV (SEQ ID NO: 9), LVGVL (SEQ ID NO: 11), VLLVG (SEQ ID NO: 13), VLLGV (SEQ ID NO: 14), GLLVV (SEQ ID NO: 15), VLVLG (SEQ ID NO: 16), VLGLV (SEQ ID NO: 17), GLVLV (SEQ ID NO: 18), VLVGL (SEQ ID NO: 19), VLGVL (SEQ ID NO: 20), GLVVL (SEQ ID NO: 21), VVLLG (SEQ ID NO: 22), VGLLV (SEQ ID NO: 23), GVLLV (SEQ ID NO: 24), VVLGL (SEQ ID NO: 25), VGLVL (SEQ ID NO: 26), GVLVL (SEQ ID NO: 27), VVGLL (SEQ ID NO: 28), VGVLL (SEQ ID NO: 29) y GVVLL (SEQ ID NO: 30).
En los ejemplos divulgados, cada X y X', independientemente entre sí, se selecciona de LLVVG, VLLVG, VLLGV, VVLLG, VGLLV y GVLLV.
En los ejemplos divulgados, cada X y X', independientemente entre sí, se selecciona de VLVGL, VLGVL, LVVLG, LVGLV, LGVLV y GVLLV.
En los ejemplos divulgados, cada X y X', independientemente entre sí, se selecciona de VLLGV, GLLVV, VVLGL, VGLVL, LLVVG y LLVGV.
En la presente invención, cada X y X', independientemente entre sí, se selecciona de LGVVL y LVVGL. En algunas realizaciones, uno o ambos de X y X' en una cualquiera de las Fórmulas (I)-(V) es -LGVVL.
Como referencia se divulga una composición que comprende un compuesto de la Fórmula (I) que tiene la Fórmula general (VI) o (VII):
X-C(O)-CHY-CH2-S-S-CH2-CHY'-C(O)-LGVVL (VI)
LVVGL-C(O)-CHY-CH2-S-S-CH2-CHY'-C(O)-X' (VII)
en donde cada uno de X, X', Y e Y', independientemente entre sí, es como se definió anteriormente.
Por ejemplo, uno o ambos Y e Y' en las Fórmulas (IM)-(VM) es el aminoácido K. Por ejemplo, Y = Y' en las Fórmulas (NI)-(VN) y es el aminoácido K.
En particular, X y X' en una cualquiera de las fórmulas descritas para referencia, independientemente, es un pentapéptido seleccionado de LLVVG, LLVGV, LLGVV, LVLVG, LVLGV, LGLVV, LVVLG, LVGLV, LGVLV, LVGVL, VLLVG, VLLGV, GLLVV, VLVLG, VLGLV, GLVLV, VLVGL, VLGVL, GLVVL, VVLLG, VGLLV, GVLLV, VVLGL, VGLVL, GVLVL, VVGLL, VGVLL y GVVLL.
En los ejemplos divulgados, X y X' de una cualquiera de las fórmulas de la invención, independientemente, es un pentapéptido seleccionado de VVGLL, VG<l>L<v>, GLLVV, LVGVL, GVLVL. En la presente invención, X y X', independientemente entre sí, se seleccionan de LGVVL y LVVGL. En algunas composiciones divulgadas como referencia, la composición comprende un compuesto (VI), como se define en la presente memoria, en combinación con LVVGL-C(O)-CHY-CH<2>-S-H o H-S-CH<2>-CHY'-C(O)-X'.
En otras composiciones divulgadas como referencia, la composición comprende un compuesto (VII), como se define en la presente memoria, en combinación con X-C(O)-CHY-CH<2>-S-H o H-S-CH<2>-<c>H<y>'-C(O)-LGVVL. En algunas realizaciones, la composición de la invención comprende el compuesto de la Fórmula (VIII): LVVGL-CO-CH(NH-K)-CH2-S-S-CH2-CH(NH-K)-CO-LGVVL (VIII).
En el compuesto de la Fórmula (VIII), el grupo (NH-K) es colgante y está unido covalentemente al átomo de carbono de la fracción -CH-. El aminoácido K está unido solamente al grupo -NH- que está enlazando el aminoácido K y -CH-.
En algunas realizaciones, la composición comprende el compuesto de la Fórmula (VIII) en combinación con el péptido LVVGL-CO-CH(NH-K)-CH2-SH.
El compuesto de cualquiera de las Fórmulas (I) a (VIII) puede estar asociado a biotina.
Por ejemplo, los compuestos de las Fórmulas (Ia) y (Ib) pueden estar asociados a biotina.
En particular, el compuesto de la Fórmula (I) puede ser un compuesto de la Fórmula (VIII) cuando se asocia con biotina:
Biotina-LVVGL-CO-CH(NH-K)-CH<2>-S-S-CH<2>-CH(NH-K)-CO-LGVVL-Biotina.
En otro aspecto, la invención proporciona el uso de al menos un compuesto de la Fórmula (I) y al menos un compuesto de la Fórmula (Ia) y/o (Ib), para la preparación de una composición de diagnóstico.
En un aspecto adicional, se proporciona una combinación de al menos un compuesto de la Fórmula (I) y al menos un compuesto de la Fórmula (Ia) y/o (Ib) para su uso en un método de diagnóstico.
En algunas realizaciones, la composición es para el diagnóstico de esquizofrenia en un individuo que es, en algunas realizaciones, un niño de menos de 18 años de edad.
En la presente memoria se divulga como referencia un método para el diagnóstico de esquizofrenia en un sujeto, comprendiendo el método:
- poner en contacto una muestra de sangre obtenida de un sujeto sospechoso de desarrollar esquizofrenia con una composición según la invención, tal como se define en la presente memoria;
- determinar el nivel de unión de los componentes peptídicos presentes en la composición a dicha muestra, de manera que un nivel superior al nivel de unión de dichos componentes peptídicos a una muestra de individuos no esquizofrénicos indica que dicho sujeto tiene una alta probabilidad de tener esquizofrenia. Como cualquier composición de la invención puede comprender dos o más materiales basados en péptidos, tal como se define en la presente memoria, la unión puede ser de uno cualquiera o más de dichos materiales basados en péptidos.
Como se puede apreciar fácilmente por el experto en la técnica, el diagnóstico definido en la presente memoria, es decir, la determinación del nivel de unión de los componentes peptídicos presentes en la composición a dicha muestra, se puede lograr mediante una serie de métodos de detección (por ejemplo químicos, biológicos) comunes al campo pertinente de la técnica, que emplean la unión de péptidos para generar una señal mensurable, sobre cuya base se logra el diagnóstico de esquizofrenia. Algunos ejemplos no limitantes de métodos de detección que pueden usarse incluyen ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), complementación de fluorescencia bimolecular (BiFC), reticulación química seguida de espectrometría de masas de desorción/ionización por láser asistida por matriz de alta masa, ensayo de ligadura por proximidad (PLA), interferometría de polarización dual (DPI), dispersión de luz estática (SLS), resonancia de plasmón superficial, polarización/anisotropía de fluorescencia, espectroscopía de correlación de fluorescencia, transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET), acoplamiento proteína-proteína, calorimetría de titulación isotérmica (ITC) y termoforesis a microescala (MST).
Por ejemplo, el método es para su uso en la confirmación de una alta probabilidad de esquizofrenia en un individuo determinada por al menos otro ensayo diagnóstico.
En algunas realizaciones, el método de detección es ELISA.
En otro aspecto, la invención proporciona un kit para su uso en el diagnóstico de esquizofrenia, comprendiendo el kit un soporte que comprende uno o más materiales basados en péptidos definidos en la presente memoria, inmovilizados sobre un anticuerpo anti-inmunoglobulina humana (hIg) o fragmento del mismo, reactivos para llevar a cabo un ensayo de detección que comprende, por ejemplo, un anticuerpo anti-inmunoglobulina humana (hIg) o fragmento del mismo unido a una etiqueta quimioluminiscente o una enzima tal como fosfatasa alcalina o peroxidasa de rábano picante, e instrucciones de uso.
Como es fácilmente reconocido por el experto en la técnica, el kit y la composición de diagnóstico de la presente invención también pueden contener reactivos y componentes adicionales adecuados para usar dicho kit y la composición de diagnóstico en el diagnóstico de esquizofrenia descrito en la presente memoria. Algunos ejemplos no limitantes de tales reactivos y componentes incluyen un tampón, un diluyente, un vehículo, un estabilizador químico, un conservante, una sal, una enzima, un reactivo de detección, un reactivo/solución de pretratamiento, un sustrato (por ejemplo, como una solución) y una solución de parada.
El kit de la presente invención también puede contener depósitos de reactivo y cualquier componente adicional (por ejemplo pipetas desechables) requerido para usar dicho kit en el diagnóstico de esquizofrenia descrito en la presente memoria.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-hIg está complejado con un marcador detectable. En algunas realizaciones, en lugar de dicho anticuerpo anti-hIg, el kit comprende uno o más materiales basados en péptidos no unidos que se unen a PAA presente en una muestra probada, estando complejados dichos materiales basados en péptidos con un marcador detectable.
EJEMPLOS (Según la presente invención en tanto que los péptidos cumplan los requisitos de la presente reivindicación 1)
Ejemplo 1: Dimerización del péptido frente a sensibilidad del ensayo
Se usaron porciones de 10 |jl de cada una de las muestras de péptidos I-X para el análisis por MALDI-MS, para estimar la relación de mono frente a dímero formado.
Como puede verse a partir de laTabla 2,usando el sistema disolvente 20% DMSO/80% DDW, después de 8 horas, aproximadamente un 80-90% del péptido estaba en la forma dimérica.
Debe observarse que las condiciones ligeramente básicas aceleraron la dimerización/oxidación de residuos de cisteína. Para este fin se añadió solución de amoniaco antes de que se produjera la reacción. El amoniaco diluido fue útil para promover la formación completa del dímero. Todas las muestras se analizaron mediante la técnica de MALDI-MS.
Tabla 2:dimerización del péptido frente a sensibilidad del ensayo (ACN = Acetonitrilo; DDW = Agua Bidestilada; TFA = Ácido Trifluoroacético; TFE = Trifluoroetanol; DMSO = Dimetilsulfóxido). Los datos de la Tabla 2 se obtuvieron usando tubos recubiertos con estreptavidina (SA) de baja capacidad.
Los datos de la Tabla 2 se obtuvieron usando tubos recubiertos con estreptavidina (SA) de alta capacidad. En estas condiciones experimentales mejoradas, los valores de DO se aumentaron de 1,6-1,7 a más de 2,5. Se modificó el brazo espaciador entre biotina-péptido. En lugar de "LC estándar" (ácido aminohexanoico), se ha usado la secuencia -SGSG- (Serina-Glicina-Serina-Glicina).
Ejemplo 2: Uso de una mezcla que comprende un 80-90% del dímero descrito en la presente memoria en un análisis de sangre de cribado para el diagnóstico de esquizofrenia mediante la medición de los niveles de PAA en pacientes esquizofrénicos jóvenes al comienzo de la enfermedad.
Los títulos sanguíneos de PAA se evaluaron a ciegas usando una prueba ELISA optimizada, en donde los resultados se expresaron usando una escala de densidad óptica lineal (DO). Las lecturas de DO se puntuaron para muestras de sangre de pacientes pediátricos/adultos jóvenes (n = 28) (de 13-19 años de edad) diagnosticados con esquizofrenia y controles (n = 37) (de 13-19 años de edad). Las muestras de sangre de todos los participantes se analizaron anónimamente y se puntuaron bajo un número de código. Un registro de prueba por encima de 1,4 unidades de DO se definió como positivo.
LasTablas 3-5muestran los resultados de las pruebas de cribado tanto para pacientes pediátricos/adultos jóvenes (de 13-19 años de edad) como para controles.
Tabla 3:resultados de cribado para pacientes pediátricos/adultos jóvenes (13-19 años)
Tabla 4:Resultados de cribado para controles pediátricos/adultos jóvenes (13-19 años)
Tablas 5A-B:proporcionan resúmenes del estudio de cribado para pacientes pediátricos/adultos jóvenes y de control.
Como puede desprenderse de las tablas anteriores, los títulos de PAA de pacientes jóvenes con esquizofrenia, de 13 a 19 años de edad, fueron significativamente mayores que los del grupo de control (1,72 ± 0,55 unidades de DO frente a 1,06 ± 0,43;P< 1,05 x 10-6).
Ejemplo 3: Datos sobre pacientes pediátricos/adultos jóvenes no esquizofrénicos.
Tabla 6:Pacientes pediátricos y adultos jóvenes no esquizofrénicos. a El trastorno de la conducta (EC) es un trastorno psicológico diagnosticado en la infancia o la adolescencia (edades de 0-17) que se presenta a sí mismo a través de un patrón repetitivo y persistente de comportamiento en donde se violan los derechos básicos de otros o las principales normas apropiadas para la edad. Estos comportamientos se denominan a menudo "comportamientos antisociales". A menudo se consideran el precursor del trastorno de la personalidad antisocial, que no se diagnostica hasta que el individuo tiene 18 años de edad. b Los trastornos personales (de la personalidad) son una clase de trastornos mentales caracterizados por soportar patrones de comportamiento, cognición y experiencia interna mal adaptados, exhibidos en muchos contextos y que se desvían notablemente de los aceptados por la cultura del individuo (edades a partir de 18).
Como puede desprenderse de laTabla 6,solo 3/62 casos de pacientes pediátricos y adultos jóvenes no esquizofrénicos entre las edades de 12-19 dieron positivo usando esta prueba de diagnóstico de esquizofrenia que muestra que el método descrito en la presente memoria para diagnosticar esquizofrenia constituye un ensayo fiable (con un bajo, aproximadamente el 5%, de falsos positivos) para diferenciar entre esquizofrenia y otros trastornos no esquizofrénicos (tales como trastorno de la personalidad y la conducta).

Claims (3)

REIVINDICACIONES
1. Una composición que comprende un compuesto que tiene la Fórmula general (I):
X3-X-Xi-S-S-X2-X'-X4 (I)
y al menos un compuesto de las Fórmulas generales (Ia) y/o (Ib):
X<3>-X-X<1>-S-H (la)
H-S-X2-X'-X4 (lb)
en donde:
cada uno de X<1>y X<2>, independientemente, es un aminoácido, un dipéptido o un tripéptido que comprende un aminoácido seleccionado de K, C y M y X<3>y X<4>están ausentes;
S designa azufre, H designa hidrógeno y -S-S- designa un enlace disulfuro o un grupo que comprende un enlace disulfuro,
X y X', independientemente entre sí, se seleccionan de LGVVL y LVVGL;
cada uno de "-" es un enlace,
en donde, en las Fórmulas (Ia) y (Ib), cada uno de X, X<1>, X<2>, X<3>, X<4>y X' se seleccionan como en la Fórmula (I); en donde la relación entre el compuesto de la Fórmula (I) y el compuesto de la Fórmula (Ia) o (Ib) está entre 1:1 y 10:1,
y el al menos un compuesto de la Fórmula general (Ia) y/o (Ib) comprende cisteína, y el compuesto que tiene la fórmula general (I) se forma mediante formación de enlace covalente entre un átomo de azufre presente en cada uno de dicho al menos un compuesto de la Fórmula general (Ia) y/o (Ib).
2. La composición según la reivindicación 1, en donde, en un compuesto de la Fórmula (I) y (Ia) y (Ib), uno o ambos de X y X' es -LGVVL.
3. Un kit para su uso en el diagnóstico de esquizofrenia, comprendiendo el kit:
a) un soporte que comprende al menos un compuesto de la Fórmula (I) y al menos un compuesto de la Fórmula (Ia) y/o (Ib), en combinación
X3-X-X1-S-S-X2-X'-X4 (I)
X<3>-X-X<1>-S-H (la)
H-S-X2-X'-X4 (lb)
en donde:
cada uno de X<1>y X<2>, independientemente, es un aminoácido, un dipéptido o un tripéptido que comprende un aminoácido seleccionado de K, C y M y X<3>y X<4>están ausentes;
S designa azufre, H designa hidrógeno y -S-S- designa un enlace disulfuro o un grupo que comprende un enlace disulfuro,
X y X', independientemente entre sí, se seleccionan de LGVVL y LVVGL;
cada uno de "-" es un enlace,
en donde, en las Fórmulas (Ia) y (Ib), cada uno de X, X<1>, X<2>, X<3>, X<4>y X', se seleccionan como en la Fórmula (I), y el al menos un compuesto de la Fórmula general (Ia) y/o (Ib) comprende cisteína, y el compuesto que tiene la Fórmula general (I) se forma mediante formación de un enlace covalente entre un átomo de azufre presente en cada uno de dicho al menos un compuesto de la Fórmula general (Ia) y/o (Ib);
b) reactivos para llevar a cabo un ensayo de detección, mediante el cual dichos compuestos se unen a autoanticuerpos derivados de plaquetas (PAA) presentes en una muestra probada; e
instrucciones de uso.
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