ES3036193T3 - Crystalline form of tlr8 agonist - Google Patents

Abstract

Se describe una forma cristalina de un agonista del receptor tipo Toll 8 (TLR8), representada por la fórmula (I), y su método de preparación. Además, se describe la aplicación de la forma cristalina en la preparación de un fármaco para el tratamiento de una enfermedad que responde al agonista de TLR8. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Forma cristalina del agonista de TLR8

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

La presente solicitud reivindica la prioridad y el beneficio para la solicitud de Patente Chinese Patent Application No. 202010193418.4 presentada ante The National Intellectual Property Administration, PRC el 18 de marzo de 2020.

Campo Técnico

La presente solicitud pertenece al campo de la química médica y se refiere a una forma cristalina de un agonista de TLR8 (receptor de tipo Toll 8) de Fórmula (I) y un método para preparar la misma, así como al uso de la forma cristalina para preparar un medicamento para tratar una enfermedad que responde al agonismo de TLR8.

Antecedentes

Los receptores de tipo Toll (TLRs) son una clase importante de moléculas de proteína implicadas en la inmunidad no específica (inmunidad innata), y también son un puente que une la inmunidad no específica y la inmunidad específica. Los TLRs son proteínas no catalíticas transmembrana individuales que se expresan principalmente en una variedad de células inmunitarias tales como células dendríticas, macrófagos, monocitos, células T, células B y células NK. Los TLRs son capaces de reconocer moléculas con estructuras conservadas derivadas de microorganismos. Pueden reconocer los microorganismos y activar el cuerpo para generar respuestas de células inmunitarias cuando los microorganismos atraviesan las barreras físicas del cuerpo, tales como la piel y la mucosa. Por ejemplo, TLR1, TLR2, TLR4, TLR5 y TLR6 reconocen principalmente estímulos extracelulares tales como lipopolisacárido, lipopéptido y flagelina de bacterias, mientras que TLR3, TLR7, TLR8 y TLR9 funcionan en endosomas celulares, tales como la unión a sus ligandos después de la fagocitosis y la disolución de la envoltura y reconocimiento de ácidos nucleicos de microorganismos.

Entre los diferentes subtipos de TLR, TLR8 tiene funciones únicas: TLR8 se expresa principalmente en monocitos, macrófagos y células dendríticas mieloides. La ruta de señalización de TLR8 puede activarse mediante el RNA monocatenario de bacterias, agonistas de molécula pequeña y microRNAs. La activación de TLR8 da como resultado la producción de citocinas polares Th1 tales como IL-12, IL-18, TNF-a e IFN-y , y diversos factores co-estimuladores tales como CD80 y CD86. Estas citocinas pueden activar y amplificar respuestas inmunitarias innatas y adaptativas y proporcionar un régimen de tratamiento beneficioso para enfermedades que implican antivirus, anti-infección, autoinmunidad, tumores y similares. Por ejemplo, con respecto a la hepatitis B, la activación de TLR8 en células presentadoras de antígeno y otras células inmunitarias en el hígado puede activar citocinas tales como IL-12, que a su vez activa células T y células NK específicas que están agotadas por el virus, reconstituyendo de este modo la inmunidad antiviral en el hígado.

Compendio

En un aspecto, la presente solicitud proporciona una forma cristalina de un compuesto de Fórmula (I),

En algunas realizaciones de la presente solicitud, se proporciona una forma cristalina A del compuesto de Fórmula (I), que tiene picos de difracción característicos en los siguientes ángulos 20 en un patrón de difracción de rayos X en polvo: 10,50 ± 0,20°, 20,72 ± 0,20° y 22,34 ± 0,20°.

En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene picos de difracción característicos en los siguientes ángulos 20 en un patrón de difracción de rayos X en polvo: 8,86 ± 0,20°, 10,50 ± 0,20°, 11,38 ± 0,20°, 17,80 ± 0,20°, 20,72 ± 0,20° y 22,34 ± 0,20°.

En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene picos de difracción característicos en los siguientes ángulos 20 en un patrón de difracción de rayos X en polvo: 8,86 ± 0,20°, 10,50 ± 0,20°, 11,38 ± 0,20°, 13,18 ± 0,20°, 17,80 ± 0,20°, 20,72 ± 0,20°, 22,34 ± 0,20° y 26,86 ± 0,20°.

En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene picos de difracción característicos en los siguientes ángulos 20 en un patrón de difracción de rayos X en polvo: 8,86 ± 0,20°, 10,50 ± 0,20°, 11,38 ± 0,20°, 13,18 ± 0,20°, 16,48 ± 0,20°, 17,80 ± 0,20°, 20,36 ± 0,20°, 20,72 ± 0,20°, 22,34 ± 0,20°, 24,42 ± 0,20° y 26,86 ± 0,20°.

En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene picos de difracción característicos en los siguientes ángulos 20 en un patrón de difracción de rayos X en polvo: 8,86 ± 0,20°, 10,50 ± 0,20°, 11,38 ± 0,20°, 13,18 ± 0,20°, 16,04 ± 0,20°, 16,48 ± 0,20°, 17,80 ± 0,20°, 19,96 ± 0,20°, 20,36 ± 0,20°, 20,72 ± 0,20°, 21,92 ± 0,20°, 22,34 ± 0,20°, 23,00 ± 0,20°, 24,42 ± 0,20°, 26,12 ± 0,20°, 26,86 ± 0,20° y 28,68 ± 0,20°. En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene datos de un patrón de XRPD como se muestra en la Tabla 1:

Tabla 1. Datos del patrón de XRPD para la forma cristalina A del compuesto de Fórmula (I)

En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene un patrón de XRPD como se muestra en la Figura 1.

En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene un punto inicial de un pico endotérmico a 228,0 ± 5°C en una curva de calorimetría diferencial de barrido (DSC).

En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene un patrón de DSC como se muestra en la Figura 2.

En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene una pérdida de peso del 0,2261% a 250,00 ± 3°C en una curva de análisis termogravimétrico (TGA).

En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene un patrón de TGA como se muestra en la Figura 3.

La presente solicitud también proporciona un método para preparar la forma cristalina A del compuesto de Fórmula (I), que comprende:

1) añadir el compuesto de Fórmula (I) en una mezcla de disolventes de acetona y agua; y

2) precipitar un sólido, y llevar a cabo la filtración para obtener la forma cristalina A.

En algunas realizaciones de la presente solicitud, en el método para preparar la forma cristalina A, se selecciona una relación en volumen de acetona a agua de 1:1 a 1:10; preferiblemente 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9 y 1:10 o un intervalo formado por cualquiera de los valores.

En algunas realizaciones de la presente solicitud, la etapa 1) del método para preparar la forma cristalina A comprende además llevar a cabo la agitación a una temperatura seleccionada de 25°C a 60°C, preferiblemente de 30°C a 55°C, y más preferiblemente de 40°C a 50°C.

En algunas realizaciones de la presente solicitud, la etapa 1) del método para preparar la forma cristalina A comprende además llevar a cabo la agitación durante un período de tiempo seleccionado de 1 hora a 72 horas, preferiblemente de 4 horas a 52 horas, y más preferiblemente de 8 horas a 32 horas.

En algunas realizaciones de la presente solicitud, en el método para preparar la forma cristalina A, la relación en peso del compuesto de Fórmula (I) a los disolventes se selecciona de 1:1 a 1:30.

Algunas otras realizaciones de la presente solicitud se derivan de cualquier combinación de las variables como se ha descrito anteriormente.

En otro aspecto, la presente solicitud proporciona una composición cristalina, que comprende la forma cristalina de la presente solicitud, en donde la forma cristalina representa el 50% o más, preferiblemente el 80% o más, más preferiblemente el 90% o más, y lo más preferiblemente el 95% o más, del peso de la composición cristalina.

En otro aspecto, la presente solicitud proporciona una composición farmacéutica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de la forma cristalina de la presente solicitud, y opcionalmente un excipiente farmacéuticamente aceptable.

La presente solicitud también proporciona una composición farmacéutica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición cristalina de la forma cristalina de la presente solicitud, y opcionalmente un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Cualquier referencia a métodos de tratamiento en los párrafos posteriores de esta divulgación debe interpretarse como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico).

En otro aspecto, la presente solicitud proporciona el uso de la forma cristalina, la composición cristalina de la misma o la composición farmacéutica de la misma para tratar una enfermedad que responde al agonismo de TLR8.

En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un método para agonizar TLR8, que comprende administrar a un individuo (preferiblemente un ser humano) que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz de la forma cristalina, la composición cristalina de la misma o la composición farmacéutica de la misma de la presente solicitud.

En otro aspecto, la presente solicitud proporciona el uso de la forma cristalina, la composición cristalina de la misma o la composición farmacéutica de la misma de la presente solicitud para preparar un medicamento para tratar una enfermedad que responde al agonismo de TLR8.

En algunas realizaciones de la presente solicitud, la enfermedad que responde al agonismo de TLR8 se selecciona de infección viral.

En algunas realizaciones de la presente solicitud, la infección viral se selecciona de infección por el virus de la hepatitis B (HBV).

Efectos técnicos

El compuesto descrito en la presente memoria tiene actividad agonista significativa para TLR8. El compuesto descrito en la presente memoria muestra una actividad agonista deseable y una selectividad específica para TLR8. El compuesto descrito en la presente memoria muestra una actividad deseable para inducir las citocinas específicas de la ruta de TLR8 (IL-12p40, IFN-y ).

El estudio farmacocinético en ratones muestra que el compuesto descrito en la presente memoria tiene una biodisponibilidad oral y una exposición a fármacos moderadas y, por lo tanto, la administración oral es factible. El agonista de TLR8 es un inmunomodulador, y su exposición excesiva puede dar como resultado una sobreactivación inmunitaria del cuerpo, conduciendo a efectos secundarios impredecibles.

La forma cristalina A de la presente solicitud está fácilmente disponible y tiene una buena estabilidad física y estabilidad química. Además, tiene buenas propiedades farmacéuticas y es adecuada para ser utilizada como medicamento, y por lo tanto, tiene un gran valor de aplicación industrial y un gran valor económico.

Definiciones y Descripción

A menos que se indique lo contrario, los siguientes términos y frases usados en la presente memoria pretenden tener los siguientes significados. Una frase o término particular, a menos que se defina específicamente de otro modo, no debe considerarse incierto o poco claro, sino que debe interpretarse según su significado común. Cuando se hace referencia a un nombre comercial, se pretende hacer referencia a su producto comercial correspondiente o a su principio activo.

Los compuestos intermedios de la presente solicitud pueden prepararse mediante una variedad de métodos sintéticos bien conocidos por los expertos en la técnica, incluyendo las realizaciones específicas indicadas a continuación, realizaciones formadas por combinaciones de las mismas con otros métodos sintéticos químicos, y equivalentes de los mismos conocidos por los expertos en la técnica. Las realizaciones preferidas incluyen, pero no se limitan a, los ejemplos de la presente solicitud.

Las reacciones químicas de las realizaciones descritas en la presente memoria se llevan a cabo en un disolvente apropiado que debe ser adecuado para los cambios químicos en la presente solicitud y los reactivos y materiales requeridos. Para adquirir los compuestos descritos en la presente memoria, a veces es necesario para los expertos en la técnica modificar o seleccionar un procedimiento de síntesis o un esquema de reacción basado en las realizaciones existentes.

La presente solicitud se describe en detalle a continuación a modo de ejemplos, que no pretenden limitar la presente solicitud de ninguna manera.

Todos los disolventes usados en la presente solicitud están disponibles comercialmente y pueden usarse sin purificación adicional.

En esta solicitud se usan las siguientes abreviaturas:

Tal y como se usa en la presente memoria, la difracción de rayos X en polvo (XRPD) en la presente solicitud se lleva a cabo en un difractómetro de rayos X DX-2700BH de Dandong Haoyuan con un tubo de rayos X: Cu, ka (A = 1,54184 Á).

Tal y como se usa en la presente memoria, la calorimetría diferencial de barrido (DSC) en la presente solicitud se lleva a cabo en un calorímetro diferencial de barrido TA2500.

Tal y como se usa en la presente memoria, el análisis termogravimétrico (TGA) en la presente solicitud se lleva a cabo en un analizador termogravimétrico TA TGA550.

Debe observarse que en el patrón de difracción de rayos X en polvo, la posición y la intensidad relativa de un pico pueden variar debido a los instrumentos de medición, métodos/condiciones de medición y otros factores. Para cualquier forma cristalina particular, la posición de un pico puede tener un error, y la medición de 20 puede tener un error de ± 0,2°. Por lo tanto, debe considerarse este error cuando se determina cada forma cristalina, y las formas cristalinas dentro de este margen de error están dentro del alcance de la presente solicitud.

Tal y como se usa en la presente memoria, la intensidad relativa de un pico en el patrón de XRPD puede calcularse a partir de la altura del pico o el área del pico. Las intensidades relativas en la "Tabla 1. Datos analíticos del patrón de XRPD para la forma cristalina A del compuesto de Fórmula (I)" están calculados a partir de las alturas de los picos.

Debe observarse que, para la misma forma cristalina, la posición de un pico endotérmico en el patrón de DSC puede variar debido a los instrumentos de medición, métodos/condiciones de medición y otros factores. Para cualquier forma cristalina particular, la posición de un pico endotérmico puede tener un error de ± 5°C o ± 3°C. Por lo tanto, este error debe considerarse cuando se determina cada forma cristalina, y las formas cristalinas dentro de este margen de error están dentro del alcance de la presente solicitud.

Debe observarse que, para la misma forma cristalina, la posición de una temperatura de pérdida de peso en el patrón de TGA puede variar debido a los instrumentos de medición, métodos/condiciones de medición y otros factores. Para cualquier forma cristalina particular, la posición de una temperatura de pérdida de peso puede tener un error de ± 5°C o ± 3°C. Por lo tanto, este error debe considerarse al determinar cada forma cristalina, y las formas cristalinas dentro de este margen de error están dentro del alcance de la presente solicitud.

La palabra "comprender" y variaciones de la misma tales como "comprende" o "que comprende" se entenderán en un sentido abierto, no exclusivo, es decir, "que incluye pero no se limita a".

El término "farmacéuticamente aceptable" se usa en la presente memoria para aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del alcance del criterio médico razonable, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otros problemas o complicaciones, y proporcional a una relación beneficio/riesgo razonable. El término "excipiente farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sustancia inerte administrada con un principio activo para facilitar la administración del principio activo, incluyendo, pero sin limitarse a, cualquier deslizante, edulcorante, diluyente, conservante, colorante/agente colorante, potenciador del sabor, tensioactivo, agente humectante, dispersante, disgregante, agente de suspensión, estabilizante, agente isotonizante, disolvente o emulsionante aceptable para su uso en seres humanos o animales (por ejemplo, animales domésticos) tal como lo permite the National Medical Products Administration, PRC.

El término "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla que consiste en uno o más de los compuestos descritos en la presente memoria o las sales de los mismos y un excipiente farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica pretende facilitar la administración del compuesto a una entidad orgánica.

Las dosificaciones terapéuticas del compuesto descrito en la presente memoria o la forma cristalina del mismo pueden determinarse, por ejemplo, mediante el uso específico de un tratamiento, la vía de administración del compuesto, la salud y el estado de un paciente, y el criterio de un médico prescriptor. La proporción o concentración del compuesto descrito en la presente memoria en una composición farmacéutica puede no ser constante y depende de una variedad de factores que incluyen dosificaciones, propiedades químicas (por ejemplo, hidrofobicidad) y vías de administración.

La frecuencia de dosificación de la forma cristalina de la presente solicitud depende de las necesidades de un paciente individual, por ejemplo, una o dos veces al día o más veces al día. La administración puede ser intermitente, por ejemplo, en un período de varios días, el paciente recibe una dosis diaria de la forma cristalina, y en el siguiente período de varios días o más días, el paciente no recibe la dosis diaria de la forma cristalina.

El término "que trata" o "tratamiento" se refiere a administrar el compuesto o formulación descrita en la presente memoria para mejorar o eliminar una enfermedad o uno o más síntomas asociados con la enfermedad, e incluye:

(i) inhibir una enfermedad o estado de enfermedad, es decir, detener su desarrollo; y

(ii) aliviar una enfermedad o estado de enfermedad, es decir, provocar su regresión.

Para fármacos y agentes activos farmacológicos, el término "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un fármaco o un medicamento que es suficiente para proporcionar el efecto deseado y no es tóxica.

La determinación de la cantidad eficaz varía de persona a persona. Depende de la edad y el estado general de un sujeto, así como de la sustancia activa particular usada. La cantidad eficaz apropiada en un caso puede ser determinada por aquellos expertos en la técnica a la luz de pruebas convencionales.

A menos que se especifique claramente lo contrario en la presente memoria, los términos singulares abarcan términos plurales, y viceversa.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es un patrón de XRPD de la forma cristalina A del compuesto de Fórmula (I).

La Figura 2 es un patrón de DSC de la forma cristalina A del compuesto de Fórmula (I).

La Figura 3 es un patrón de TGA de la forma cristalina A del compuesto de Fórmula (I).

Descripción detallada

Para comprender mejor el contenido de la presente solicitud, se proporciona una descripción adicional con referencia a ejemplos específicos, pero las realizaciones específicas no pretenden limitar el contenido de la presente solicitud.

Ejemplo 1

Preparación del intermedio 1-10:

Etapa A: se disolvieron 1-1 (50 g, 412,54 mmol) y titanato de tetraetilo (94,10 g, 412,54 mmol, 85,55 mL) en THF (500 mL) a 20-30°C, y a la solución se le añadió 2-hexanona (41,32 g, 412,54 mmol, 51,01 mL). La mezcla de reacción se calentó a 65°C y se agitó durante 48 horas, y la mezcla de reacción resultante se usó directamente en la siguiente etapa.

Etapa B: la mezcla de reacción en la etapa A se enfrió a temperatura ambiente, se suplementó con THF (1000 mL), después se añadió bromuro de alilo (196,33 g, 1,62 mol) y se añadió lentamente polvo de cinc (53,06 g, 811,43 mmol) en porciones. La mezcla de reacción se agitó a 20-30°C durante 12 horas en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se filtró a través de diatomita, y al filtrado se le añadió salmuera saturada (100 mL), se agitó y se filtró a través de diatomita. El filtrado resultante se secó con un evaporador rotatorio. El residuo se disolvió en acetato de etilo (100 mL). La fase orgánica separada se lavó con salmuera saturada (300 mL x 1), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar un producto crudo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (SiO<2>, PE/EtOAc = 15/1 a 5/1) para dar 1-3.

1H NMR (400 MHz, CDCla) 55,96-5,75 (m, 1H), 5,23-5,08 (m, 2H), 3,20 (s, 1H), 2,39-2,20 (m, 2H), 1,74 (sa, 1H), 1,56-1,42 (m, 2H), 1,40-1,15 (m, 14H), 0,96-0,86 (m, 3H).

Etapa C: se disolvió 1-3 (15 g, 61,12 mmol) en metanol (150 mL), y la solución se enfrió a 0°C y se le añadió lentamente una solución de ácido clorhídrico en dioxano (4 M, 91,68 mL) a 0-20°C. La mezcla de reacción se agitó a 25°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró directamente a presión reducida para dar 1 -4.

Etapa D: se disolvieron 1-4 (clorhidrato, 13 g, 73,15 mmol) y bicarbonato de sodio (55,31 g, 658,36 mmol) en dioxano (90 mL) y H<2>O (60 mL) y la solución se enfrió a 0°C y después se le añadió lentamente CbzCl (74,87 g, 438,91 mmol, 62,40 mL) gota a gota. La mezcla de reacción se calentó a 20-30°C, se agitó durante 2 horas y se extrajo con acetato de etilo (100 mL x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (150 mL x 1), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar un producto crudo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (SiO<2>, PE/EtOAc = 1/0 a 100/1) para dar 1-5. 1H NMR (400 MHz, CDCls) 57,30-7,26 (m, 5H), 5,76-5,62 (m, 1H), 5,08 4,91 (m, 4H), 2,47-2,34 (m, 1H), 2,32-2,20 (m, 1H), 1,72-1,57 (m, 1H), 1,50-1,42 (m, 1H), 1,30-1,10 (m, 7H), 0,76-0,76 (m, 1H), 0,76-0,76 (m, 1H), 0,82 (t,J =7,0 Hz, 2H).

Etapa E: se disolvió 1-5 (20,8 g, 75,53 mmol) en acetonitrilo (100 mL), H<2>O (150 mL) y tetracloruro de carbono (100 mL), y la solución se enfrió a 0°C y se añadió lentamente peryodato de sodio (64,62 g, 302,12 mmol), seguido de la adición del trihidrato de tricloruro de rutenio (394,99 mg, 1,51 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 25°C y se agitó durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de diatomita y se extrajo con DCM (200 mL x 1). La fase orgánica se lavó con una solución acuosa saturada de sulfito de sodio (200 mL x 1) y salmuera saturada (200 mL x 1) secuencialmente, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar 1-6 crudo, que se usó directamente en la siguiente etapa. 1H NMR (400 MHz, CDCla) 57,40-7,35 (m, 5H), 5,19 (s, 1H), 5,08 (s, 2H), 2,89 (da,J =14,5 Hz, 1H), 2,69 (da,J =14,4 Hz, 1H), 1,90-1,77 (m, 1H), 1,74-1,62 (m, 1H), 1,43-1,20 (m, 7H), 0,90 (t,J =6,9 Hz, 3H).

Etapa F: se disolvieron 1-6 (20 g, 68,18 mmol) y trietilamina (10,35 g, 102,26 mmol, 14,23 mL) en THF (250 mL), y a la solución se le añadió cloroformiato de isobutilo (9,78 g, 71,59 mmol, 9,40 mL) gota a gota a -10°C en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a -10-0°C durante 30 minutos. A la mezcla de reacción se le añadió lentamente amoniaco acuoso (63,70 g, 454,41 mmol, 70 mL, 25%) y se agitó a 0-5°C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y se extrajo con acetato de etilo (200 mL x 1). La fase orgánica se lavó con salmuera saturada (100 mL x 2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar un producto crudo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (SD<2>, PE/EtOAc = 10/1 a 1/1) para dar 1-7. 1H NMR (400 MHz, CDCh) 57,41 -7,28 (m, 5H), 5,62 (sa, 1H), 5,30-5,12 (m, 2H), 5,11-5,01 (m, 2H), 2,76 (d,J =13,2 Hz, 1H), 2,44 (d,J =13,3 Hz, 1H), 1,85-1,74 (m, 1H), 1,73-1,62 (m, 3H), 1,39-1,29 (m, 5H), 0,90 (t,J= 7,0 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z: 293,3 [M+H]+.

Etapa G: 1-7 (15,34 g, 52,47 mmol) y W,W-dimetilformamida dimetil acetal (134,55 g, 1,13 mol, 150 mL) se agitaron a 120°C durante 2 horas, se concentraron a presión reducida y se disolvieron en ácido acético (250 mL) y a la solución se le añadió lentamente hidrato de hidrazina (25,75 g, 504,09 mmol, 25 mL, 98%). La mezcla de reacción se agitó a 90°C durante 2 horas en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se añadió H<2>O (400 mL) y se extrajo con DCM (200 mL x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (200 mL x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar 1-8 crudo. 1H NMR (400 MHz, CDCta) 57,95 (s, 1H), 7,43-7,29 (m, 5H), 5,08 (s, 2H), 4,90 (sa, 1H), 3,42 (da,J =13,9 Hz, 1H), 3,12 (d,J = 14,3Hz, 1H), 1,87-1,77 (m, 1H), 1,68-1,58 (m, 1H), 1,41-1,17 (m, 7H), 0,90 (ta,J= 6,5 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z: 317,2 [M+H]+.

Etapa H: se disolvieron 1-8 (15,20 g, 48,04 mmol) y DIPEA (12,42 g, 96,08 mmol, 16,74 mL) en DCM (160 mL), y a la solución se le añadió lentamente trifenilclorometano (20,09 g, 72,06 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 25°C durante 2 horas. A la mezcla de reacción se le añadió H<2>O (100 mL), se añadió ácido clorhídrico diluido 2 N para ajustar el pH (7-8), y se extrajo con DCM (100 mL x 1). La fase orgánica se lavó con salmuera saturada (100 mL x 2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar un producto crudo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (SiO<2>, PE/EtOAc = 20/1 a 5/1) para dar 1-9. 1H NMR (400 MHz, CDCh) 57,89 (s, 1H), 7,37-7,27 (m, 14H), 7,18-7,07 (m, 6H), 5,72 (sa, 1H), 5,16-4,93 (m, 2H), 3,07 (d,J =14,2 Hz, 1H), 2,90 (d,J =14,2 Hz, 1H), 1,80-1,61 (m, 4H), 1,33 (s, 3H), 0,90-0,84 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z: 559,3 [M+H]+.

Etapa I: se disolvió 1-9 (12,75 g, 22,82 mmol) en isopropanol (300 mL) y a la solución se le añadió Pd/C (6 g) en atmósfera de nitrógeno. La suspensión se desgasificó al vacío y se purgó con hidrógeno tres veces, y se agitó a 25°C durante 16 horas en atmósfera de hidrógeno (15 psi) (103,4 kPa). La mezcla de reacción se filtró a través de diatomita y se lavó con DCM (300 mL), y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 1-10.

1H NMR (400 MHz, CDCh) 57,91 (s, 1H), 7,37-7,28 (m, 9H), 7,17-7,11 (m, 6H), 2,87 (s, 2H), 1,45-1,24 (m, 6H), 1,12 (s, 3H), 0,92-0,84 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z: 425,2 [M+H]+.

Síntesis del clorhidrato del compuesto de Fórmula (I):

Etapa A: los compuestos 1-10 (1,91 g, 4,50 mmol) y 1-11 (900 mg, 4,50 mmol) se disolvieron en THF (9 mL) y a la solución se le añadió DIPEA (9,00 mmol, 1,57 mL). La mezcla de reacción se agitó a 70°C durante 3 horas en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para dar el compuesto 1 12 crudo. LCMS (ESI) m/z: 588,42 [M+H]+.

Etapa B: se disolvieron 1-12 crudo (3,60 g, 6,12 mmol) y 2,4-dimetoxibencilamina (3,01 mg, 18,00 mmol, 2,71 mL) en 1,4-dioxano (30 mL) y a la solución se le añadió DIPEA (8,99 mmol, 1,57 mL) en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a 100°C durante 12 horas. A la mezcla de reacción se le añadieron agua (20 mL) y acetato de etilo (50 mL) para la separación de líquidos. La fase orgánica se lavó con salmuera saturada (20 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar un producto crudo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (SiÜ<2>, DCM/MeOH = 100/1 a 15/1) para dar 1-13. LCMS (ESI) m/z: 719,7 [M+H]+.

Etapa C: el compuesto 1 -13 (2,00 g, 2,78 mmol) y trietilsilano (970,50 mg, 8,35 mmol, 1,33 mL) se disolvieron en TFA (41,81 mL), y la solución se agitó a 28°C durante 12 horas. La mezcla de reacción se concentró directamente a presión reducida y se purificó mediante p-HPLC (columna: Phenomenex luna C18250 x 50 mm *x 10 pm; fluidez: [agua (HCl al 0,05%)-acetonitrilo]; % de acetonitrilo: 10%-40%, 28 min, 50% min) para dar el clorhidrato del compuesto de Fórmula (I). 1H NMR (400 MHz, CD<3>OD) 59,15 (s, 1H), 8,90 (s, 1H), 8,59 (d,J =5,6 Hz, 1H), 8,26 (d,J =5,5 Hz, 1H), 4,11 (d,J= 14,8 Hz, 1H), 3,53 (d,J =14,9 Hz, 1H), 2,60 (dt,J =4,1, 12,8 Hz, 1H), 1,79 (dt,J =4,2, 12,8 Hz, 1H), 1,58 (s, 3H), 1,52-1,19 (m, 4H), 0,92 (t,J =7,2 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z: 327,1 [M+H]+.

Ejemplo 2: Preparación de la Forma Cristalina A del Compuesto de Fórmula (I)

El clorhidrato del compuesto de Fórmula (I) (1,4 g) se añadió a agua (50 mL) y el pH se ajustó a 9-10 con carbonato de sodio sólido. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 mL x 2). El extracto se concentró y se añadieron acetona (10 mL) y agua (10 mL) al concentrado. La mezcla se agitó a 25°C durante 1 hora, se concentró a presión reducida para eliminar la acetona (aproximadamente 8 mL), y se agitó a temperatura ambiente (15-25°C) durante aproximadamente 1 hora, y precipitó un sólido. La mezcla se filtró, y la torta de filtración se secó en un horno de secado al vacío (45°C, 16 horas) para dar la forma cristalina A como un sólido blanco. La Figura 1 muestra un patrón de XRPD de la forma cristalina, la Figura 2 muestra un patrón de DSC de la forma cristalina, y la Figura 3 muestra un patrón de TGA de la forma cristalina.

Ejemplo Experimental 1: Cribado para determinar la actividad de unión al receptorin vitrodel receptor 7 de tipo Toll humano (TLR7) y el receptor 8 de tipo Toll humano (TLR8)

Las líneas celulares HEK-Blue™ hTLR7 (No. de catálogo: hkb-htlr7) y HEK-Blue™ hTLR8 (no de catálogo: hkbhtlr8) usadas en este experimento se adquirieron de InvivoGen. Las dos líneas celulares se construyeron mediante una línea celular 293 de riñón embrionario humano que co-transfectó de manera estable hTLR7 o hTLR8 e indujo la expresión del gen indicador de fosfatasa alcalina secretada (SEAP), en donde el gen indicador de SEAP estaba regulado por un promotor de IFN-p. El promotor se fusionó con los sitios de unión de NF-kB y AP-1. El agonista de hTLR7 o hTLR8 pudo activar NF-kB y AP-1 e inducir la expresión y secreción de SEAP. La actividad agonista del compuesto para los receptores hTLR7 y hTLR8 se identificó midiendo el nivel de expresión de SEAP usando el reactivo QUANTI-Blue™.

Procedimientos:

1. El compuesto se añadió a una placa celular en un gradiente de 3 veces, con 10 concentraciones (5000 nM, 1667 nM, 556 nM, 185 nM, 62 nM, 21 nM, 6,9 nM, 2,3 nM, 0,76 nM y 0,25 nM) obtenidas, y se establecieron dos pocillos duplicados para cada concentración. Se añadió 1 gl de DMSO a cada pocillo de control negativo.

2. Las células cultivadas en un matraz T150 se sacaron de una incubadora de CO<2>, y el sobrenadante del cultivo celular se desechó. Las células resultantes se lavaron una vez con solución salina tamponada con fosfato (DPBS) de Dulbecco. Al matraz se le añadieron aproximadamente 10 mL del medio de cultivo y se golpearon para separar las células. La masa celular resultante se pipeteó suavemente de manera uniforme. Las células se contaron y la suspensión celular se ajustó a 500000 células/mL con el medio de cultivo. Después se añadieron 100 gl de células diluidas (50000 células/pocillo) a cada pocillo de una placa de 96 pocillos que contenía el compuesto.

3. El compuesto y las células se incubaron conjuntamente en una incubadora a 37°C con CO<2>al 5% durante 24 horas.

4. Ensayo de actividad sobre el compuesto: se añadieron 20 gl del sobrenadante celular inducido de cada pocillo a una placa de cultivo celular que contenía 180 gl del reactivo QUANTI-Blue™, y después de la incubación a 37°C durante 1 hora, se analizó la absorbancia de densidad óptica a 650 nm (OD<650>) para cada pocillo usando un lector de microplacas multifuncional.

5. Ensayo de actividad sobre las células: se detectó la señal de luciferasa (RLU) usando un lector de microplacas multifuncional según el procedimiento descrito en las instrucciones de ATPlite 1Step.

6. Análisis de datos: actividad del compuesto: los valores de OD<650>se analizaron usando un software GraphPad Prism y las curvas de dosis-respuesta del compuesto se ajustaron para calcular los valores de EC<50>(concentración que genera la mitad del efecto máximo) para el compuesto.

Resultados experimentales: los resultados se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2

Conclusión: el compuesto descrito en la presente memoria muestra una actividad agonista de TLR8 deseable y, en términos de TLR8 y TLR7, tiene selectividad específica para TLR8.

Ejemplo Experimental 2: Procedimiento experimental para células mononucleares de sangre periférica

TLR8 es un receptor para el sistema inmunitario innato para detectar patógenos exógenos, y puede reconocer RNA monocatenario viral exógeno y provocar la liberación de una serie de citocinas tales como TNF-a, IL-12 e IFN-y para provocar una respuesta inmunitaria antiviral; TLR7 es otro receptor para el sistema inmunitario innato para detectar patógenos exógenos y, cuando se activa, produce principalmente dichas citocinas antivirales tales como IFN-a. En este experimento, se usó un compuesto potencial de agonista de TLR8 para estimular las células mononucleares de sangre periférica humana (hPBMCs), y se midieron los niveles de TNF-a, IL-12p40, I FN-y e IFN-a anteriores para reflejar la activación del compuesto en el receptor de TLR8 y su selectividad por TLR8/TLR7.

Procedimientos:

1. Se recogió sangre fresca de voluntarios sanos y se anticoagularon con un tubo de anticoagulación EDTA-K2 (No. de catálogo: BD-8516542);

2. Las hPBMCs en la capa intermedia similar a la nube se separaron después de la centrifugación en gradiente de densidad con Ficoll, y se lavaron dos veces con RPMI1640 (fuente: Gibco, No. de catálogo: 224400-089) que contenía suero al 10%, y el medio de cultivo se volvió a suspender hasta 10 mL. Después de que las células se contaran con un contador de células Vi-cell, la concentración de suspensión celular se ajustó a 2 x 106/mL;

3. El compuesto se disolvió en DMSO a 100 mM, y se diluyó a 50 mM y 2 mM con DMSO, que sirvieron como concentraciones iniciales. Después, las soluciones se diluyeron cada una secuencialmente en un gradiente de 3 veces (muestra a una concentración previa (5 pl) DMSO (10 pl)) para obtener 8 gradientes. Las soluciones resultantes se sometieron cada una a dilución de 500 veces con el medio de cultivo para preparar las soluciones de trabajo del compuesto;

4. Se añadieron 100 pL de suspensión de hPBMC y 100 pL de solución de trabajo del compuesto a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en U, siendo las concentraciones finales 2000 nM, 666,7 nM, 222,2 nM, 74,1 nM, 24,7 nM, 8,2 nM, 2,7 nM y 0,9 nM, respectivamente, y se incubaron durante 24 horas. Después, los sobrenadantes se recogieron y crioconservaron a -20°C para la detección de las citocinas TNF-a, IFN-y e IL-12p40. El otro grupo de muestras del compuesto, con las concentraciones finales de 50 pM, 16,7 pM, 5,6 pM, 1,9 pM, 0,6 pM, 0,2 pM, 0,1 pM y 0,02 pM, respectivamente, se incubaron durante 24 horas. Los sobrenadantes se recogieron y crioconservaron a -20°C para la detección de las citocinas IFN-a;

5. Se detectaron IL-12p40, TNF-a e I FN-y en el sobrenadante mediante una matriz de microesferas en citometría de flujo (CBA); IFN-a en el sobrenadante celular se detectó mediante ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA).

6. Análisis de datos: actividad del compuesto: los valores de EC<50>(concentración que genera la mitad del efecto máximo) se analizaron usando un software GraphPad Prism y las curvas de dosis-respuesta del compuesto se ajustaron para calcular los valores de EC<50>para el compuesto.

Resultados experimentales: los resultados se muestran en la Tabla 3.

Tabla 3

Conclusión: el compuesto descrito en la presente memoria tiene una actividad de inducción deseable para las citocinas IL-12p40, TNF-a e I FN-y específicas de la ruta de TLR8, y una actividad de inducción relativamente baja para la citocina IFN-a específica de la ruta de TLR7, que muestra selectividad deseablemente específica para la activación de la ruta de TLR8.

Ejemplo Experimental 3: Estudio farmacocinético en ratones

Este experimento pretende evaluar el comportamiento farmacocinético del compuesto después de una sola inyección intravenosa o administración intragástrica en ratones. Inyección intravenosa: el compuesto de prueba se preparó en una solución transparente de 0,5 mg/mL, siendo el vehículo DMSO al 5%/hidroxiestearato de polietilenglicol-15 al 5%/agua al 90%; administración intragástrica: el compuesto de prueba se preparó en una suspensión de 2 mg/mL, siendo el vehículo carboximetilcelulosa de sodio al 0,5%/tween 80 al 0,2%/agua al 99,3%.

La concentración del compuesto de prueba en plasma se determinó mediante cromatografía líquida de alta resolución acoplada a espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS). Los tiempos de retención del compuesto y el patrón interno, las adquisiciones de cromatograma y las integrales de cromatogramas se procesaron usando el software Analyst (Applied Biosystems), y las estadísticas de datos se procesaron usando el software Watson LIMS (Thermo Fisher Scientific) o Analyst (Applied Biosystems).

Las concentraciones en plasma se procesaron usando un modelo no compartimental de WinNonlin™ Versión 6.3 (Pharsight, Mountain View, CA), un software farmacocinético y los parámetros farmacocinéticos se calcularon usando un método trapezoidal lineal-logarítmico.

Los parámetros farmacocinéticos relacionados en los ratones a una inyección intravenosa de 1 mg/kg y una administración intragástrica oral de 5 mg/kg del clorhidrato del compuesto de Fórmula (I) se muestran en la Tabla 4 a continuación.

Tabla 4

Ejemplo Experimental 4: Ensayo de estabilidad

1. Pruebas de factores influyentes

Muestra de prueba:

la forma cristalina A del compuesto de Fórmula (I)

1) Ensayo de fotoestabilidad

Se usaron dos muestras de prueba (una como muestra de prueba de 5 días, la otra como muestra de prueba de 10 días) y dos controles (uno como control de 5 días, el otro como control de 10 días). Las muestras de prueba se extendieron como capas delgadas sobre vidrios de reloj limpios y se cubrieron con cubiertas de vidrio de cuarzo. Los controles se envasaron de la misma manera que las muestras de prueba excepto que los vidrios de reloj se cubrieron con una película de aluminio.

Condiciones de ensayo: un medidor de fotoestabilidad.

Los resultados del ensayo de fotoestabilidad se detallan en la Tabla 5.

Tabla 5. Resultados del ensayo de fotoestabilidad

Los resultados anteriores muestran que no hubo cambios significativos en los elementos de prueba de 5 días y 10 días con respecto a los valores iniciales en condiciones de iluminación, lo que indica que la forma cristalina A tiene buena fotoestabilidad.

2) Ensayo del efecto de la temperatura

Cada muestra se colocó en un vidrio de reloj abierto y se probó en condiciones de alta temperatura (60°C). Los resultados del ensayo a alta temperatura se detallan en la Tabla 6.

Tabla 6. Resultados del ensayo a alta temperatura (60°C)

Los resultados anteriores muestran que no hubo cambios significativos en los elementos de prueba de 5 días, 10 días y 30 días con respecto a los valores iniciales en condiciones de alta temperatura, lo que indica que la forma cristalina A tiene buena estabilidad a alta temperatura.

3) Ensayo del efecto de la humedad

Cada muestra se colocó en una botella de pesaje abierta de forma baja y se probó en condiciones de alta humedad (25°C/92,5 RH).

Los resultados del ensayo de alta humedad se detallan en la Tabla 7.

Tabla 7. Resultados del ensayo para el efecto de alta humedad (25°C/92,5 RH)

Los resultados anteriores muestran que no hubo cambios significativos en los elementos de prueba de 5 días, 10 días y 30 días con respecto a los valores iniciales en condiciones de alta humedad, lo que indica que la forma cristalina A tiene buena estabilidad a alta humedad.

2. Ensayo acelerado

Muestra de prueba:

la forma cristalina A del compuesto de Fórmula (I)

La forma de envasado:

Envase interno: una bolsa médica de polietileno de baja densidad de doble capa; envase externo: una bolsa de papel de aluminio.

Condiciones de ensayo: 40 ± 2°C/75 ± 5% RH.

Los resultados del ensayo acelerado se detallan en la Tabla 8.

Tabla 8. Resultados del ensayo acelerado (40 ± 2°C/75 ± 5% RH)

Nota: N/A indica que no hay detección.

Los resultados de XRPD muestran que no hubo un cambio significativo en el mes 3 con respecto a los valores iniciales, lo que indica que la forma cristalina A permanece estable en condiciones aceleradas.

Claims (15)

1. REIVINDICACIONES 1. Una forma cristalina de un compuesto de Fórmula (I),
2. 2. La forma cristalina según la reivindicación 1, en donde la forma cristalina tiene picos de difracción característicos en los siguientes ángulos 20 en un patrón de difracción de rayos X en polvo: 10,50 ± 0,20°, 20,72 ± 0,20° y 22,34 ± 0,20°; o la forma cristalina tiene picos de difracción característicos en los siguientes ángulos 20 en el patrón de difracción de rayos X en polvo: 8,86 ± 0,20°, 10,50 ± 0,20°, 11,38 ± 0,20°, 17,80 ± 0,20°, 20,72 ± 0,20° y 22,34 ± 0,20°; o la forma cristalina tiene picos de difracción característicos en los siguientes ángulos 20 en el patrón de difracción de rayos X en polvo: 8,86 ± 0,20°, 10,50 ± 0,20°, 11,38 ± 0,20°, 13,18 ± 0,20°, 17,80 ± 0,20°, 20,72 ± 0,20°, 22,34 ± 0,20° y 26,86 ± 0,20°; o la forma cristalina tiene picos de difracción característicos en los siguientes ángulos 20 en el patrón de difracción de rayos X en polvo: 8,86 ± 0,20°, 10,50 ± 0,20°, 11,38 ± 0,20°, 13,18 ± 0,20°, 16,48 ± 0,20°, 17,80 ± 0,20°, 20,36 ± 0,20°, 20,72 ± 0,20°, 22,34 ± 0,20°, 24,42 ± 0,20° y 26,86 ± 0,20°; o la forma cristalina tiene picos de difracción característicos en los siguientes ángulos 20 en un patrón de difracción de rayos X en polvo: 8,86 ± 0,20°, 10,50 ± 0,20°, 11,38 ± 0,20°, 13,18 ± 0,20°, 16,04 ± 0,20°, 16,48 ± 0,20°, 17,80 ± 0,20°, 19,96 ± 0,20°, 20,36 ± 0,20°, 20,72 ± 0,20°, 21,92 ± 0,20°, 22,34 ± 0,20°, 23,00 ± 0,20°, 24,42 ± 0,20°, 26,12 ± 0,20°, 26,86 ± 0,20° y 28,68 ± 0,20°
3. 3. La forma cristalina según una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, en donde la forma cristalina tiene un patrón de XRPD como se muestra en la Figura 1.
4. 4. La forma cristalina según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la forma cristalina tiene un punto inicial de un pico endotérmico a 228,0 ± 5°C en una curva de calorimetría diferencial de barrido.
5. 5. La forma cristalina según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la forma cristalina tiene un patrón de DSC como se muestra en la Figura 2.
6. 6. La forma cristalina según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde la forma cristalina tiene una pérdida de peso del 0,2261% a 250,00 ± 3°C en una curva de análisis termogravimétrico.
7. 7. La forma cristalina según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la forma cristalina tiene un patrón de TGA como se muestra en la Figura 3.
8. 8. Un método para preparar la forma cristalina según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, que comprende: 1) añadir el compuesto de Fórmula (I) a una mezcla de disolventes de acetona y agua; y 2) precipitar un sólido, y llevar a cabo la filtración para obtener la forma cristalina.
9. 9. El método según la reivindicación 8, en donde una relación en volumen de acetona a agua se selecciona de 1:1 a 1:10; preferiblemente 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9 y 1:10 o un intervalo formado por cualquiera de los valores.
10. 10. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 8 y 9, en donde la etapa 1) comprende además llevar a cabo la agitación a una temperatura seleccionada de 25°C a 60°C, preferiblemente de 30°C a 55°C, y más preferiblemente de 40°C a 50°C.
11. 11. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en donde la etapa 1) comprende además llevar a cabo la agitación durante un período de tiempo seleccionado de 1 hora a 72 horas, preferiblemente de 4 horas a 52 horas, y más preferiblemente de 8 horas a 32 horas.
12. 12. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, en donde una relación en peso del compuesto de Fórmula (I) a los disolventes se selecciona de 1:1 a 1:30.
13. 13. Una composición cristalina, que comprende la forma cristalina según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la forma cristalina representa el 50% o más, preferiblemente el 80% o más, más preferiblemente el 90% o más, y lo más preferiblemente el 95% o más, del peso de la composición cristalina.
14. 14. Una composición farmacéutica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de la forma cristalina según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o la composición cristalina según la reivindicación 13, y opcionalmente un excipiente farmacéuticamente aceptable.
15. 15. La forma cristalina según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, la composición cristalina según la reivindicación 13 o la composición farmacéutica según la reivindicación 14 para su uso en un método para tratar una enfermedad que responde al agonismo de TLR8, siendo seleccionada preferiblemente la enfermedad que responde al agonismo de TLR8 de una infección viral, y más preferiblemente siendo seleccionada la infección viral de la infección por el virus de la hepatitis B.