ES3034676T3

ES3034676T3 - Inhibitors of arg1 and/or arg2

Info

Publication number: ES3034676T3
Application number: ES19884624T
Authority: ES
Inventors: Joel Beatty; Corinne Nicole Foley; Rebecca Louise Grange; Tezcan Guney; Steven Donald Jacob; Jaroslaw Kalisiak; Manmohan Reddy Leleti; Erick Allen Lindsey; Debashis Mandal; Eric Thomas Newcomb; Jay Patrick Powers; Brandon Reid Rosen; Yongli Su; Anh Thu Tran
Original assignee: Arcus Biosciences Inc
Current assignee: Arcus Biosciences Inc
Priority date: 2018-11-16
Filing date: 2019-11-15
Publication date: 2025-08-21
Anticipated expiration: 2039-11-15
Also published as: US12226425B2; EP3880685A2; AU2019379808A1; AU2019379808B2; EP3880685A4; TW202033203A; EP3880685B1; EP3880685C0; JP2022507474A; US20220016143A1; WO2020102646A3; CA3120196A1; TWI828800B; CN113382998A; WO2020102646A2; UY38476A; AU2019379808C1; JP7461350B2; KR102718333B1; KR20210108954A

Abstract

Se describen aquí compuestos inhibidores de al menos uno de los genes ARG1 y ARG2, así como composiciones que los contienen y métodos para sintetizarlos. También se describe el uso de dichos compuestos y composiciones para el tratamiento de diversas enfermedades, trastornos y afecciones, incluyendo trastornos oncológicos e inmunitarios mediados, al menos en parte, por ARG1 y ARG2. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Inhibidores de ARG1 y/o ARG2

Antecedentes de la invención

La arginasa juega un papel fundamental en el ciclo hepático de la urea, metabolizando la L-arginina en L-omitina y urea. Además, se ha demostrado que la arginasa es o bien responsable o bien participa en la disfunción inmunitaria provocada por la inflamación, el escape inmunitario del tumor, la inmunosupresión y la inmunopatología de enfermedades infecciosas [Bronte V, Zanovello P (2005b). Regulation of immune responses by L-arginine metabolism.Nat Rev Immunol5:641-654],

En los seres humanos, existen dos isoenzimas de arginasa, la arginasa I (ARG-1) y la arginasa II (ARG-2). Catalizan la misma reacción bioquímica pero difieren en la expresión celular, la regulación y la localización subcelular [Jenkinson et al. (1996). Comparative properties of arginases.Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol114: 107-132], ARG-1 agota la arginina del microentorno tumoral, lo que conduce a una función deteriorada de los linfocitos T, tal como la detención de la proliferación y la secreción de citocinas. [Rodriguez et al (2002). Regulation of T cell receptor CD3zeta chain expression by L-arginine. J Biol Chem 277: 21123-21129; Munder, Arginase in the Immune System, British Journal of Pharmacology (2009) 158638-651]. Se han encontrado altos niveles de arginasa en pacientes con diversos tipos de cáncer, incluyendo cánceres gástricos, de colon, de mama y de pulmón [Suer et al (1999). Arginase and ornithine, as markers in human non-small cell lung carcinoma. Cancer Biochem Biophys 17:125-31; Singh et al (2000). Arginase activity in human breast cancer cell lines: N(omega)-hydroxy-L-arginine selectively inhibits cell proliferation and induces apoptosis in MDA-MB-468 cells. Cancer Res 60:3305-12]. El documento WO 2016/210106 A1 se refiere a compuestos y métodos para inhibir la actividad de la arginasa.

Como tal, existe una necesidad en la técnica de inhibidores de la arginasa. La presente invención aborda esta necesidad y también proporciona ventajas relacionadas.

Breve sumario de la invención

La presente invención se refiere a compuestos que inhiben la arginasa y a composiciones (por ejemplo, composiciones farmacéuticas) que comprenden los compuestos. Dichos compuestos, incluidos los métodos para su síntesis, y las composiciones, se describen en detalle a continuación.

La presente invención también se refiere a tales compuestos y composiciones para su uso en el tratamiento y/o la prevención de una amplia gama de enfermedades, trastornos y afecciones mediados, en su totalidad o en parte, por arginasa. Dichas enfermedades, trastornos y afecciones se describen en detalle en otra parte en el presente documento. A menos que se indique otra cosa, cuando los usos de los compuestos de la presente invención se describen en el presente documento, debe entenderse que tales compuestos pueden estar en forma de una composición (por ejemplo, una composición farmacéutica).

Como se analiza a continuación, aunque se cree que los compuestos de la presente invención efectúan su actividad mediante la inhibición de la arginasa, no se precisa una comprensión precisa del mecanismo de acción subyacente de los compuestos para poner en práctica la invención.

La arginasa es una enzima que existe en los mamíferos en dos isoformas: ARG-1 se encuentra en el citosol y se expresa principalmente en el hígado, mientras que ARG-2 se encuentra en las mitocondrias y se expresa en el riñón, intestino delgado, cerebro, monocitos y macrófagos. La arginasa cataliza la conversión del aminoácido L-arginina en ornitina y urea, que es un precursor importante de las vías metabólicas posteriores que permiten la regeneración de tejidos, la proliferación celular y las respuestas antiinflamatorias. La L-arginina también puede ser metabolizada por la óxido nítrico sintasa (NOS), dando como resultado óxido nítrico, un compuesto altamente reactivo importante en el mecanismo citotóxico de los macrófagos. Se cree que ARG-1 se expresa preferentemente en tumores infiltrantes de células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), dando como resultado un agotamiento de la arginina del microambiente tumoral. Este agotamiento da como resultado adicionalmente una pérdida de expresión de la cadena zeta de TCR, el principal elemento de transducción de señales de TCR, causando una proliferación deteriorada y una disminución de la producción de citocinas. Como tal, ciertas realizaciones de la presente invención proporcionan compuestos y compuestos para su uso en métodos de tratamiento del cáncer aumentando los niveles de arginina en un microentorno tumoral, permitiendo así la activación de los linfocitos T citotóxicos del cuerpo. Véase,

Timosenko, Modulation of cancer-specific immune responses by amino acid degrading enzymes. Immunotherapy (2017) 9(1), 83-97.

En un aspecto particular, la presente invención proporciona compuestos que tienen la Fórmula (I):

o una sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde,

X es N o CR<4a>;

cada R<1>es independientemente H o alquilo C<1-8>;

R<2>es H o CH<3>;

cada R<3>es independientemente H o alquilo C<1-8>; o dos grupos R<3>se unen entre sí para formar un anillo de 5 o 6 miembros que está sin sustituir o sustituido con de 1 a 4 R<a>;

cada R<4a>, R<4b>, R<4c>y R<4d>se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, halógeno, CN, alquilo C<1-8>, alcoxi C<1-8>, hidroxialquilo C<1-8>, haloalquilo C<1-8>, haloalcoxi C<1-8>, -X<1>-Y, -X<1>-SO<2>R<5a>y -X<1>-NR<5b>R<5c>;

cada R<5a>, R<5b>y R<5c>se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, alquilo C<1-8>, haloalquilo C<1-8>, alquil C<1-8>-C(O)-, cicloalquilo C<3-7>, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros, arilo, heteroarilo y un aminoácido, o R<5b>y R<5c>se unen entre sí para formar un anillo de 4 a 6 miembros; y en donde cada uno del anillo de 4 a 6 miembros, cicloalquilo C<3-7>o heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros, arilo y heteroarilo, está sin sustituir o sustituido con de 1 a 4 R;

cada X<1>es un enlace, -O-, alquileno C<1-6>u -O-alquileno C<1-6>, en donde las porciones de alquileno están sin sustituir o sustituidas con 1 a 4 R<c>y 0 o 1 oxo;

cada R<a>, Ry R<c>es independientemente halógeno, CN, OH, NH<2>, CO<2>H, alquilo C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>y fenilo, o dos R<c>se combinan para formar un cicloalquilo C<3-6>que está sin sustituir o sustituido con 1 a 3 R<d>; cada Y es independientemente fenilo, un heteroarilo de 5 o 6 miembros, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros o cicloalquilo C<3-6>, cada uno de los cuales está sin sustituir o sustituido con 1 a 3 R<d>; y

cada R<d>es independientemente halógeno, alquilo C<1-4>, amino, amino-alquilo C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, OH e hidroxialquilo C<1-4>.

En algunas realizaciones, la presente invención contempla compuestos para su uso en métodos para el tratamiento o la prevención del cáncer en un sujeto (por ejemplo, un ser humano) que comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la arginasa descrito en el presente documento. En algunas realizaciones, la presente invención incluye compuestos para su uso en métodos de tratamiento o prevención de un cáncer en un sujeto administrando al sujeto al menos uno de los compuestos descritos en el presente documento en una cantidad eficaz para revertir, detener o ralentizar la progresión de la inmunosupresión mediada por arginasa. En algunas realizaciones, la inmunosupresión mediada por arginasa está mediada por una célula supresora derivada de mieloides (MDSC).

Los ejemplos de los cánceres que pueden tratarse utilizando los compuestos y composiciones descritos en el presente documento incluyen, pero sin limitación: cánceres de la próstata, colorrectal, páncreas, cuello del útero, estómago, endometrio, cerebro, hígado, vejiga, ovario, testículos, cabeza, cuello, piel (incluidos melanoma y carcinoma basal), recubrimiento mesotelial, glóbulos blancos (incluidos linfoma y leucemia) de esófago, mama, músculo, tejido conectivo, pulmón (incluido carcinoma microcítico de pulmón y carcinoma no microcítico de pulmón), glándula suprarrenal, tiroides, riñón o hueso; glioblastoma, mesotelioma, carcinoma de células renales, carcinoma gástrico, sarcoma, coriocarcinoma, carcinoma basocelular cutáneo y seminoma testicular. En algunas realizaciones de la presente invención, el cáncer es melanoma, cáncer de colon, cáncer de páncreas, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, leucemia, un tumor cerebral, linfoma, sarcoma, cáncer de ovario, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de cuello de útero o sarcoma de Kaposi. Los cánceres que son candidatos para el tratamiento con los compuestos y composiciones de la presente invención se analizan adicionalmente a continuación.

La presente invención contempla compuestos para su uso en métodos de tratamiento de un sujeto que recibe un trasplante de médula ósea o un trasplante de células madre de sangre periférica, mediante la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la arginasa.

En determinadas realizaciones, la presente invención contempla compuestos para su uso en métodos para el tratamiento o la prevención un trastorno infeccioso (por ejemplo, una infección vírica) en un sujeto (por ejemplo, un ser humano) que comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la arginasa (por ejemplo, un inhibidor novedoso de la presente invención). En algunas realizaciones, el trastorno infeccioso es una infección vírica (por ejemplo, una infección vírica crónica), una infección bacteriana, una infección fúngica o una infección parasitaria. En determinadas realizaciones, la infección vírica es el virus de la inmunodeficiencia humana o el citomegalovirus.

En otras realizaciones más, la presente invención contempla compuestos para su uso en métodos para el tratamiento o la prevención de una enfermedad, trastorno o afección inmunomediada en un sujeto (por ejemplo, un ser humano), que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la arginasa descrito en el presente documento. A continuación, se describen ejemplos de enfermedades, trastornos y afecciones inmunomediadas.

Otras enfermedades, trastornos y afecciones que pueden tratarse o prevenirse, en su totalidad o en parte, por la modulación de la actividad da la arginasa son indicaciones candidatas para los compuestos inhibidores de la arginasa de la presente invención.

La presente invención contempla además el uso de los inhibidores de la arginasa descritos en el presente documento en combinación con uno o más agentes adicionales. Los uno o más agentes adicionales pueden funcionar a través de distintos mecanismos de acción. En algunas realizaciones, tales agentes comprenden radiación (por ejemplo, radioterapia localizada o radioterapia de todo el cuerpo) y/u otras modalidades de tratamiento de naturaleza no farmacológica. Cuando se utiliza una terapia combinada, el/los compuesto(s) descrito(s) en el presente documento y el/los agente(s) adicional(es) pueden estar en forma de una única composición o de múltiples composiciones, y las modalidades de tratamiento pueden administrarse de forma simultánea, de forma secuencial, o mediante algún otro régimen. A modo de ejemplo, la presente invención contempla un régimen de tratamiento en donde una fase de radiación va seguida de una fase quimioterapéutica. La terapia combinada puede tener un efecto aditivo o sinérgico. Otros beneficios de la terapia combinada se describen a continuación.

En realizaciones particulares, la presente invención contempla el uso de inhibidores de la arginasa descritos en el presente documento en combinación con inhibidores de puntos de control inmunitario. El bloqueo de los puntos de control inmunitarios, que da como resultado la amplificación de las respuestas de los linfocitos T específicos de antígeno, se ha demostrado que es un enfoque prometedor en tratamientos del cáncer humano. Los ejemplos de puntos de control inmunitarios (ligandos y receptores), algunos de los cuales están regulados al alza de forma selectiva en diversos tipos de células tumorales, que son candidatos para el bloqueo, incluyen PD1 (proteína muerte celular programada 1); PDL1 (ligando de PD1); BTLA (atenuador de linfocitos B y T); CTLA4 (antígeno asociado a linfocitos T citotóxicos 4); HM3 (proteína 3 de membrana de linfocitos T); LAG3 (gen de activación de linfocitos 3); TIGIT (inmunorreceptor de linfocitos T con dominios Ig e ITIM); y receptores inhibidores de células NK. Los inhibidores de puntos de control inmunitario y la terapia combinada con ellos, se analizan en detalle en otra parte en el presente documento.

En otras realizaciones, la presente invención proporciona compuestos para su uso en métodos para el tratamiento del cáncer en un sujeto, que comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la arginasa y al menos un agente quimioterapéutico, incluyendo tales agentes, pero sin limitación, agentes alquilantes (por ejemplo, mostazas nitrogenadas tales como clorambucilo, ciclofosfamida, isofamida, mecloretamina, melfalán y mostaza de uracilo; aziridinas tales como tiotepa; ésteres de metanosulfonato tales como busulfán; análogos de nucleósidos (por ejemplo, gemcitabina); nitrosoureas tales como carmustina, lomustina y estreptozocina; inhibidores de la topoisomerasa 1 (por ejemplo, irinotecán); complejos de platino tales como cisplatino, carboplatino y oxaliplatino; alquilantes biorreductores tales como mitomicina, procarbazina, dacarbacina y altretamina); terapias basadas en antraciclinas (por ejemplo, doxorrubicina, daunorrubicina, epirrubicina e idarrubicina); agentes de rotura de cadenas de ADN (por ejemplo, bleomicina); inhibidores de topoisomerasa II (por ejemplo, amsacrina, dactinomicina, daunorrubicina, idarrubicina, mitoxantrona, doxorrubicina, etopósido y tenipósido); agentes de unión al surco menor del ADN (por ejemplo, plicamidina); antimetabolitos (por ejemplo, antagonistas de folatos tales como metotrexato y trimetrexato; antagonistas de pirimidinas tales como fluorouracilo, fluorodesoxiuridina, CB3717, azacitidina, citarabina y floxuridina; antagonistas de purinas tales como mercaptopurina, 6-tioguanina, fludarabina, pentostatina; asparagina; e inhibidores de la ribonucleótido reductasa tales como hidroxiurea); agentes interactivos con tubulina (por ejemplo, vincristina, estramustina, vinblastina, docetaxol, derivados de epotilona y paclitaxel); agentes hormonales (por ejemplo, estrógenos; estrógenos conjugados; etinilestradiol; dietilestilbesterol; clortrianiseno; idenestrol; progestinas tales como caproato de hidroxiprogesterona, medroxiprogesterona y megestrol; y andrógenos tales como testosterona, propionato de testosterona, fluoximesterona y metiltestosterona); corticoesteroides suprarrenales (por ejemplo, prednisona, dexametasona, metilprednisolona y prednisolona); agentes liberadores de la hormona luteinizante o antagonistas de la hormona liberadora de gonadotropina (por ejemplo, acetato de leuprolida y acetato de goserelina); y antígenos antihormonales (por ejemplo, tamoxifeno, agentes antiandrógenos tales como flutamida; y agentes antisuprarrenales tales como mitotano y aminoglutetimida). La presente invención también contempla el uso de inhibidores de la arginasa en combinación con otros agentes conocidos en la técnica (por ejemplo, trióxido de arsénico) y otros agentes quimioterapéuticos desarrollados en el futuro.

En algunas realizaciones referidas a compuestos para su uso en métodos de tratamiento del cáncer, la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la arginasa descrito en el presente documento en combinación con al menos un agente quimioterapéutico da como resultado una tasa de supervivencia al cáncer mayor que la tasa de supervivencia al cáncer observada administrando cualquiera de ellos solo. En realizaciones adicionales referidas a compuestos para su uso en métodos de tratamiento del cáncer, la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la arginasa descrito en el presente documento en combinación con al menos un agente quimioterapéutico da como resultado una reducción del tamaño del tumor o una ralentización del crecimiento del tumor mayor que la reducción del tamaño del tumor o el crecimiento del tumor observado mediante la administración de un agente solo.

En realizaciones adicionales, la presente invención contempla compuestos para su uso en métodos para el tratamiento o la prevención del cáncer en un sujeto, que comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la arginasa descrito en el presente documento y al menos un inhibidor de la transducción de señales (STI). En una realización particular, el al menos un STI se selecciona del grupo que consiste en inhibidores de la bcr/abl cinasa, inhibidores del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF), inhibidores del receptor her-2/neu e inhibidores de la farnesil transferasa (los IFT). En otras partes del presente documento se exponen otros agentes STI candidatos.

La presente invención también contempla compuestos para su uso en métodos para aumentar el rechazo de células tumorales en un sujeto, que comprende administrar un inhibidor de la arginasa junto con al menos un agente quimioterapéutico y/o radioterapia, en donde el rechazo de células tumorales resultante es mayor que el obtenido al administrar el inhibidor de la arginasa, el agente quimioterapéutico o la radioterapia solos.

En realizaciones adicionales, la presente invención proporciona compuestos para su uso en métodos para el tratamiento del cáncer en un sujeto, que comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la arginasa y al menos un inmunomodulador distinto de un inhibidor de la arginasa. En realizaciones particulares, el al menos un inmunomodulador se selecciona del grupo que consiste en CD4OL, B7, B7RP1, anti-CD40, anti-CD38, anti-ICOS, un ligando de 4-IBB, vacuna contra el cáncer de células dendríticas, IL2, IL12, ELC/CCL19, SLC/CCL21, MCP-1, IL-4, IL-18, TNF, IL-15, MDC, IFN-a/-13, M-CSF, IL-3, GM-CSF, IL-13, anti-IL-10, inhibidores de la indoleamina 2,3-dioxigenasa 1 (IDO1) y antagonistas de los receptores de adenosina 2. En otras partes del presente documento se exponen otros agentes inmunomoduladores candidatos.

La presente invención contempla realizaciones que comprenden compuestos para su uso en métodos para el tratamiento o la prevención un trastorno infeccioso (por ejemplo, una infección vírica) en un sujeto (por ejemplo, un ser humano) que comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la arginasa descrito en el presente documento y una cantidad terapéuticamente eficaz de un(os) agente(s) antinfeccioso(s)

En algunas realizaciones de la presente invención, el agente terapéutico adicional es una citocina, incluyendo, por ejemplo, el factor estimulante de las colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) o el ligando de flt3. La presente invención también contempla compuestos para su uso en métodos para el tratamiento o la prevención de una infección vírica (por ejemplo, una infección vírica crónica) que incluyen, pero sin limitación, el virus de la hepatitis C (VHC), virus del papiloma humano (VPH), citomegalovirus (CMV), virus Epstein Barr (VEB), virus varicela zóster, virus de Coxsackie y virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Los compuestos descritos en el presente documento para su uso en el tratamiento (o bien solos o bien como un componente de una terapia combinada) de la infección se analizan adicionalmente a continuación.

En realizaciones adicionales, el tratamiento de un trastorno infeccioso se efectúa mediante la coadministración de una vacuna en combinación con la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la arginasa de la presente invención. En algunas realizaciones, la vacuna es una vacuna antivírica, incluyendo, por ejemplo, una vacuna contra el VIH. En otras realizaciones, la vacuna es eficaz contra la tuberculosis o la malaria. En otras realizaciones más, la vacuna es una vacuna contra tumores (por ejemplo, una vacuna eficaz contra el melanoma); la vacuna contra tumores puede comprender células tumorales modificadas genéticamente o una línea celular modificada genéticamente, incluyendo células tumorales modificadas genéticamente o una línea celular modificada genéticamente que se ha transfectado para expresar el factor estimulante de granulocitos y macrófagos (GM-CSF). En realizaciones particulares, la vacuna incluye uno o más péptidos inmunogénicos y/o células dendríticas.

En algunas realizaciones, la presente invención contempla los compuestos descritos en el presente documento para su uso en combinación con uno o más agentes antimicrobianos.

En determinadas realizaciones referidas al tratamiento de una infección mediante la administración de un inhibidor de la arginasa y al menos un agente terapéutico adicional, un síntoma de infección observado después de administrar tanto el inhibidor de la arginasa como el agente terapéutico adicional mejora con respecto al mismo síntoma de infección observado después de administrar cualquiera de los dos solo. En algunas realizaciones, el síntoma de infección observado puede ser una reducción de la carga vírica, un aumento del recuento de linfocitos T CD4+, una disminución de infecciones oportunistas, un aumento del tiempo de supervivencia, la erradicación de una infección crónica, o una combinación de los mismos.

Descripción detallada de la invención

Antes de describir adicionalmente la presente invención, debe entenderse que la invención no se limita a las realizaciones particulares expuestas en el presente documento, y también debe entenderse que la terminología usada en el presente documento es únicamente con el fin de describir realizaciones particulares y no se pretende que sea limitante.

Cuando se proporciona un intervalo de valores, se entiende que cada valor intermedio, hasta el décimo de la unidad del límite inferior, a menos que el contexto indique claramente lo contrario, entre el límite superior e inferior de ese intervalo y cualquier otro valor declarado o intermedio en el intervalo indicado, está comprendido dentro de la invención.

Los límites superior e inferior de estos intervalos más pequeños pueden estar incluidos independientemente en los intervalos más pequeños, y también están comprendidos dentro de la invención, sujetos a cualquier límite específicamente excluido en el intervalo indicado. Cuando el intervalo indicado incluye uno o ambos límites, también se incluyen en la invención intervalos que excluyen alguno de los límites incluidos o ambos. A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que entiende habitualmente un experto habitual en la materia a la que pertenece la presente invención.

Como se usan en el presente documento, las formas en singular "un", "uno/a", y "el" o "la", incluyen las referencias en plural a menos que el contexto dicte claramente lo contrario. Se observa además que las reivindicaciones pueden redactarse para excluir cualquier elemento opcional. Como tal, esta afirmación pretende servir como fundamento para el uso de tal terminología excluyente, tal como "únicamente", "solo" y similar en relación con la recitación de los elementos de las reivindicaciones o el uso de una limitación "negativa".

Las publicaciones analizadas en el presente documento se proporcionan únicamente para su divulgación antes de la fecha de presentación de la presente solicitud. Además, las fechas de publicación proporcionadas pueden ser distintas de las fechas de publicación reales, que pueden necesitar ser confirmadas de forma independiente.

General

En el presente documento se proporcionan, por ejemplo, compuestos y composiciones para la inhibición de la arginasa, y composiciones farmacéuticas que comprenden los mismos. En el presente documento también se proporcionan, por ejemplo, compuestos para su uso en métodos de tratamiento o prevención de una enfermedad, trastorno o afección, o un síntoma de los mismos, mediada por la inhibición de la arginasa.

Definiciones

A menos que se indique otra cosa, los siguientes términos pretenden tener el significado que se establece a continuación. Otros términos se definen en otras partes de la memoria descriptiva.

El término "alquilo", por sí mismo o como parte de otro sustituyente, medios, a menos que se indique lo contrario, un radical de hidrocarburo de cadena lineal o ramificada, que tiene el número de átomos de carbono designado (es decir,

C<1-8>significa de uno a ocho carbonos). Alquilo puede incluir cualquier número de carbonos, tal como C<1-2>, C<1-3>, C<1-4>,

C<1-5>, C<1-6>, C<1-7>, C<1-8>, C<1-9>, Cl-10, C<2-3>, C<2-4>, C<2-5>, C<2-6>, C<3-4>, C<3-5>, C<3-6>, C<4-5>, C<4-6>y C<5-6>. incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo y similares.

El término "alquileno" se refiere a un radical alifático saturado, lineal o ramificado, que tiene el número de átomos de carbono indicado y que une al menos dos de otros grupos, es decir, un radical de hidrocarburo divalente. Los dos restos unidos al alquileno pueden unirse al mismo átomo o a átomos diferentes del grupo alquileno. Por ejemplo, un alquileno de cadena lineal puede ser el radical bivalente

de -(CH<2>)<n>- donde n es 1, 2, 3, 4, 5 o 6. Los grupos alquileno representativos incluyen, pero sin limitación, metileno, etileno, propileno, isopropileno, butileno, isobutileno, sec-butileno, pentileno y hexileno. Los grupos alquileno, denominados a menudo grupos X<1>en la presente solicitud, pueden estar sustituidos o sin sustituir. Cuando un grupo que comprende X<1>está opcionalmente sustituido, se entiende que las sustituciones opcionales pueden estar en la porción de alquileno del resto.

Como se usan en el presente documento, una línea ondulada, "<j w v>", que cruza un enlace sencillo, doble o triple en cualquier estructura química representada en el presente documento, representa el punto de unión del enlace sencillo, doble o triple al resto de la molécula. Adicionalmente, un enlace que se extiende hasta el centro de un anillo (por ejemplo, un anillo de fenilo) está destinado a indicar unión en cualquiera de los vértices de anillo disponibles. Un experto en la materia comprenderá que múltiples sustituyentes que se muestran unidos a un anillo ocuparán los vértices del anillo que proporcionan compuestos estables y, por lo demás, son estéricamente compatibles. Para un componente divalente, se pretende que una representación incluya una u otra orientación (hacia adelante o hacia atrás). Por ejemplo, el grupo "-C(O)NH-" pretende incluir un enlace en cualquier orientación: -C(O)NH- o -NHC(O)- y de forma similar, "-O-CH<2>CH<2>-" pretende incluir tanto -O-CH<2>CH<2>- como -CH<2>CH<2>-O-.

Los términos "halo" o "halógeno", por sí mismos o como parte de otro sustituyente, media, a menos que se indique lo contrario, un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. Adicionalmente, términos tales como "haloalquilo", pretenden incluir monohaloalquilo y polihaloalquilo. Por ejemplo, la expresión "haloalquilo C<1-4>" pretende incluir trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 4-clorobutilo, 3-bromopropilo y similares.

El término "arilo" significa, a menos que se indique lo contrario, un grupo hidrocarburo poliinsaturado, típicamente aromático, que puede ser un único anillo o múltiples anillos (hasta tres anillos) que están fusionados entre sí o unidos covalentemente. Los ejemplos no limitantes de grupos arilo incluyen fenilo, naftilo y bifenilo.

Los términos anteriores (por ejemplo, "alquilo", y "arilo"), en algunas realizaciones, estarán opcionalmente sustituidos. A continuación se proporcionan sustituyentes seleccionados para cada tipo de radical.

Los sustituyentes opcionales para los radicales alquilo (incluidos los grupos a menudo denominados alquileno, alquenilo y alquinilo) pueden ser una diversidad de grupos seleccionados entre:

halógeno, -OR', -NR'R", -SR', -SiR'R"R'", -OC(O)R', -C(O)R', -CO<2>R', -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R"', -NR"C(O)<2>R', -NH-C(NH<2>)=NH, -NR'C(NH<2>)=NH, -NH-C(NH<2>)=NR', -S(O)R', -S(O)<2>R', -S(O)<2>NR'R", -NR'S(O)<2>R", -CN (ciano), -NO<2>, arilo, ariloxi, oxo, cicloalquilo y heterocicloalquilo en un número que varía de cero a (2m' l), donde m' es el número total de átomos de carbono en dicho radical. R', R" y R"' se refieren, cada uno, independientemente a hidrógeno, alquilo C<1-8>sin sustituir, arilo sin sustituir, arilo sustituido con 1-3 halógenos, grupos alcoxi C<1-8>o tioalcoxi C<1-8>, o grupos aril-alquilo C<1-4>no sustituidos. Cuando R' y R" están unidos al mismo átomo de nitrógeno, se pueden combinar con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 3, 4-, 5-, 6 o 7 miembros. Por ejemplo, -NR'R" pretende incluir 1 -pirrolidinilo y 4-morfolinilo.

De forma similar, los sustituyentes opcionales para grupos arilo son variados y generalmente se seleccionan entre: -halógeno, -OR', -OC(O)R', -NR'R", -SR', -R', -CN, -NO<2>, -CO<2>R', -CONR'R", -C(O)R', -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR"C(O)<2>R', -NR'-C(O)NR"R"', -NH-C(NH<2>)=NH, -NR'C(NH<2>)=NH, -NH-C(NH<2>)=NR', -S(O)R', -S(O)<2>R', -S(O)<2>NR'R", -NR'S(O)<2>R", -N<3>, perfluoroalcoxi (C<1>-C<4>) y perfluoroalquilo (C<1>-C<4>), en un número que varía entre cero y el número total de valencias abiertas en el sistema de anillo aromático; y donde R', R" y R'" se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilo C<1-8>, haloalquilo C<1-8>, cicloalquilo C<3-6>, alquenilo C<2-8>y alquinilo C<2-8>. Otros sustituyentes adecuados incluyen cada uno de los sustituyentes arilo anteriores unidos a un átomo del anillo mediante un enlace alquileno de 1-6 átomos de carbono.

Dos de los sustituyentes de los átomos adyacentes del anillo de arilo pueden reemplazarse opcionalmente con un sustituyente de fórmula -T-C(O)-(CH<2>)<q>-U-, en donde T y U son independientemente -NH-, -O-, -CH<2>- o un enlace sencillo, y q es un número entero de 0 a 2. Como alternativa, dos de los sustituyentes en átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo pueden estar opcionalmente reemplazados por un sustituyente de la fórmula -A-(CR<f>R<g>)<r>-B-, en donde A y B son independientemente -CH<2>-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)<2>-, -S(O)<2>NR'- o un enlace sencillo, r es un número entero de 1 a 3, y R<f>y R<g>son cada uno independientemente H o halógeno. Uno de los enlaces sencillos del nuevo anillo así formado puede reemplazarse opcionalmente con un doble enlace. Como alternativa, dos de los sustituyentes de los átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo pueden reemplazarse opcionalmente con un sustituyente de fórmula -(CH<2>)<s>-X-(CH<2>)<t>-, donde s y t son independientemente números enteros de 0 a 3 y X es -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)<2>- o -S(O)<2>NR'-. El sustituyente R' en -NR'- y -S(O)<2>NR'- se selecciona entre hidrógeno o alquilo C<1-6>no sustituido.

Como se usan en el presente documento, el término "heteroátomo" pretende incluir oxígeno (O), nitrógeno (N), azufre (S) y silicio (Si).

La expresión "sales farmacéuticamente aceptables" pretende incluir las sales de los compuestos activos que se preparan con ácidos o bases relativamente no tóxicos, dependiendo de los sustituyentes particulares que se encuentren en los compuestos descritos en el presente documento. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente ácidas, se pueden obtener sales de adición de base poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, puro o en un disolvente inerte adecuado. Los ejemplos de sales procedentes de bases inorgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen de aluminio, amonio, calcio, cobre, férricas, ferrosas, litio, magnesio, mangánicas, manganosas, potasio, sodio, cinc y similares. Las sales derivadas de bases orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, que incluyen las aminas sustituidas, aminas cíclicas, aminas de origen natural y similares, tales como arginina, betaína, cafeína, colina, N,N'-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas, pueden obtenerse sales de adición de ácido poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, puro o en un disolvente inerte adecuado. Los ejemplos de sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables incluyen los procedentes de ácidos inorgánicos como ácidos clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrogenocarbónico, fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico, yodhídrico o fosforoso, y similares, así como las sales procedentes de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos como acético, propiónico, isobutírico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, mandélico, Itálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico y similares. También se incluyen sales de aminoácidos tales como arginato y similares y sales de ácidos orgánicos como ácidos glucurónico o galacturónico y similares (véase, por ejemplo, Berge, S.M., et al., "Pharmaceutical Salts",Journal of Pharmaceutical Science,1977, 66, 1-19). Determinados compuestos específicos de la presente invención contienen funcionalidades tanto básicas como ácidas que permiten que los compuestos se conviertan en sales de adición de base o de ácido.

Las formas neutras de los compuestos se pueden regenerar poniendo en contacto la sal con una base o un ácido y aislando el compuesto precursor de la forma convencional. La forma original del compuesto difiere de las diversas formas de sal en ciertas propiedades físicas, tales como la solubilidad en disolventes polares, pero por lo demás, las sales son equivalentes a la forma original del compuesto para los fines de la presente invención. Además de las formas de sal, la presente invención proporciona compuestos que están en forma de profármaco. Los profármacos de los compuestos descritos en el presente documento son aquellos compuestos que experimentan fácilmente cambios químicos en condiciones fisiológicas para proporcionar los compuestos de la presente invención. Adicionalmente, los profármacos pueden convertirse en los compuestos de la presente invención mediante métodos químicos o bioquímicos en un entornoex vivo.Por ejemplo, los profármacos pueden convertirse lentamente en los compuestos de la presente invención cuando se colocan en un depósito de parche transdérmico con una enzima o un reactivo químico adecuado. Los profármacos se describen con más detalle en cualquier otra parte en el presente documento.

Además de las formas de sal, la presente invención proporciona compuestos que están en forma de profármaco. Los profármacos de los compuestos descritos en el presente documento son aquellos compuestos que experimentan fácilmente cambios químicos en condiciones fisiológicas para proporcionar los compuestos de la presente invención. Adicionalmente, los profármacos pueden convertirse en los compuestos de la presente invención mediante métodos químicos o bioquímicos en un entornoex vivo.Por ejemplo, los profármacos pueden convertirse lentamente en los compuestos de la presente invención cuando se colocan en un depósito de parche transdérmico con una enzima o un reactivo químico adecuado.

Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como en formas solvatadas, que incluyen las formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y pretenden incluirse dentro del alcance de la presente invención. Determinados compuestos de la presente invención pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados en la presente invención y se pretende que estén dentro del alcance de la presente invención.

Determinados compuestos de la presente invención poseen átomos de carbono asimétricos (centros ópticos) o dobles enlaces; los racematos, diastereómeros, isómeros geométricos, regioisómeros e isómeros individuales (por ejemplo, enantiómeros separados) están todos destinados a estar incluidos dentro del alcance de la presente invención. Cuando se muestra una representación estereoquímica, se entiende que se refiere al compuesto en el que está presente uno de los isómeros y sustancialmente libre del otro isómero. 'Sustancialmente libre de' otro isómero indica al menos una proporción del 80/20 de los dos isómeros, más preferentemente 90/10 o 95/5 o más. En algunas realizaciones, uno de los isómeros estará presente en una cantidad de al menos el 99 %.

Los compuestos de la presente invención también pueden contener proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen dichos compuestos. Las proporciones no naturales de un isótopo pueden definirse como que van desde la cantidad encontrada en la naturaleza hasta una cantidad que consiste en el 100 % del átomo en cuestión. Por ejemplo, los compuestos pueden incorporar isótopos radiactivos, tales como, por ejemplo, tritio (3H), yodo-125 (125I) o carbono-14 (14C), o isótopos no radiactivos, tales como deuterio (2H) o carbono 13 (13C). Dichas variaciones isotópicas pueden proporcionar utilidades adicionales a las descritas en cualquier otro sitio de esta solicitud. Por ejemplo, las variantes isotópicas de los compuestos de la invención pueden encontrar una utilidad adicional, incluyendo, pero sin limitación, en forma de reactivos de diagnóstico y/o de formación de imágenes o como agentes terapéuticos citotóxicos/radiotóxicos. Adicionalmente, las variantes isotópicas de los compuestos de la invención pueden tener características farmacocinéticas y farmacodinámicas alteradas que pueden contribuir a potenciar la seguridad, la tolerabilidad o la eficacia durante el tratamiento. Todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, ya sean radioactivas o no, pretenden incluirse dentro del alcance de la presente invención.

Los términos "paciente" o "sujeto" se usan indistintamente para referirse a un ser humano o a un animal no humano (por ejemplo, un mamífero).

Los términos "administración", "administrar" y similares, como se aplican a, por ejemplo, un sujeto, célula, tejido, órgano o fluido biológico, se refiere el contacto de, por ejemplo, un inhibidor de la arginasa, una composición farmacéutica que lo comprende, o un agente de diagnóstico con el sujeto, célula, tejido, órgano o fluido biológico. En el contexto de una célula, la administración incluye el contacto (por ejemplo,in vitrooex vivo)de un reactivo con una célula, así como el contacto de un reactivo con un líquido, en que el líquido está en contacto con la célula.

Los términos "tratar", "que trata", "tratamiento", y similares, se refieren a un curso de acción (tal como la administración de un inhibidor de la arginasa o una composición farmacéutica que lo comprenda) iniciado después de que una enfermedad, trastorno o afección, o un síntoma de los mismos, se haya diagnosticado, observado, y similares, para eliminar, reducir, suprimir, mitigar o mejorar, ya sea de manera temporal o permanente, al menos una de las causas subyacentes de una enfermedad, trastorno o afección que aqueja a un sujeto, o al menos uno de los síntomas asociados con una enfermedad, trastorno, afección que aqueja a un sujeto. Por lo tanto, el tratamiento incluye inhibir (por ejemplo, detener el desarrollo o el desarrollo posterior de la enfermedad, trastorno o afección, o la asociación de síntomas clínicos con los mismos) una enfermedad activa.

La expresión "que necesita tratamiento", como se usa en el presente documento, se refiere a la decisión, tomada por un médico u otro profesional sanitario, de que un sujeto necesita o se beneficiará del tratamiento. Esta decisión se basa en una diversidad de factores que están en el ámbito de la experiencia del médico o profesional sanitario.

El término "prevenir", "que previene", "prevención", y similares, se refieren a un curso de acción (tal como administrar un inhibidor de la arginasa o una composición farmacéutica que lo comprende) iniciado de una manera (por ejemplo, antes del inicio de una enfermedad, trastorno, afección o síntoma de los mismos) para prevenir, suprimir, inhibir o reducir, ya sea de manera temporal o permanente, el riesgo de un sujeto de desarrollar una enfermedad, trastorno, afección o similar (según lo determinado por, por ejemplo, la ausencia de síntomas clínicos) o retrasar su aparición, generalmente en el contexto de un sujeto predispuesto a tener una enfermedad, trastorno o afección particular. En determinados casos, los términos también se refieren a ralentizar la progresión de la enfermedad, trastorno o afección, o a inhibir la progresión de la misma a un estado nocivo o de otro modo no deseado.

La expresión "que necesita prevención", como se usa en el presente documento, se refiere a la decisión, tomada por un médico u otro profesional sanitario, de que un sujeto necesita o se beneficiará del tratamiento preventivo. Esta decisión se basa en una diversidad de factores que están en el ámbito de la experiencia de un médico o profesional sanitario.

La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la administración de un agente a un sujeto, ya sea solo o como parte de una composición farmacéutica y en una sola dosis o como parte de una serie de dosis, en una cantidad capaz de tener un efecto positivo detectable sobre cualquier síntoma, aspecto o característica de una enfermedad, trastorno o afección cuando se administra al sujeto. La cantidad terapéuticamente eficaz puede determinarse midiendo los efectos fisiológicos pertinentes y puede ajustarse con respecto al régimen de dosificación y al análisis diagnóstico de la afección del sujeto, y similares. A modo de ejemplo, la medición del nivel sérico de un inhibidor de la arginasa (o, por ejemplo, un metabolito del mismo) en un momento particular posadministración puede ser indicativa de si se ha utilizado una cantidad terapéuticamente eficaz.

La expresión "en una cantidad suficiente para efectuar un cambio" significa que hay una diferencia detectable entre un nivel de un indicador medido antes (por ejemplo, un nivel basal) y después de la administración de una terapia particular. Los indicadores incluyen cualquier parámetro objetivo (por ejemplo, concentración sérica) o parámetro subjetivo (por ejemplo, la sensación de bienestar de un sujeto).

La expresión "moléculas pequeñas" se refiere a compuestos químicos que tienen un peso molecular que es inferior a aproximadamente 10kDa, inferior a aproximadamente 2 kDa o inferior a aproximadamente 1 kDa. Las moléculas pequeñas incluyen, pero sin limitación, moléculas inorgánicas, moléculas orgánicas, moléculas orgánicas que contienen un componente inorgánico, moléculas que comprenden un átomo radioactivo y moléculas sintéticas. Desde el punto de vista terapéutico, una molécula pequeña puede ser más permeable en las células, menos susceptible a la degradación y tener menos probabilidad de inducir una respuesta inmunitaria que las moléculas grandes.

El término "ligando" se refiere a, por ejemplo, un péptido, un polipéptido, una molécula asociada a membrana o unida a membrana, o un complejo de los mismos, que puede actuar como agonista o antagonista de un receptor. Un ligando abarca ligandos naturales y sintéticos, por ejemplo, las citocinas, variantes de citocinas, análogos, muteínas y composiciones de unión obtenidos de anticuerpos, así como moléculas pequeñas. La expresión también abarca un agente que no es ni agonista ni antagonista, pero que puede unirse a un receptor sin influir significativamente en sus propiedades biológicas, por ejemplo, la señalización o la adhesión. Además, la expresión incluye un ligando unido a membrana que se ha cambiado mediante, por ejemplo, métodos químicos o recombinantes, a una versión soluble del ligando unido a membrana. Un ligando o receptor puede ser completamente intracelular, es decir, puede residir en el citosol, el núcleo o algún otro compartimento intracelular. El complejo de un ligando y receptor se denomina "complejo ligando-receptor".

Los términos "inhibidores" y "antagonistas", o "activadores" y "agonistas", se refieren a moléculas inhibidoras o activadoras, respectivamente, por ejemplo, para la activación de, por ejemplo, un ligando, receptor, cofactor, gen, célula, tejido u órgano. Los inhibidores son moléculas que disminuyen, bloquean, prevenir, retrasan la activación, inactivan, desensibilizan o regulan a la baja, por ejemplo, un gen, proteína, ligando, receptor o célula. Los activadores son moléculas que aumentan, activar, facilitan, potencian la activación, sensibilizan o regulan al alza, por ejemplo, un gen, proteína, ligando, receptor o célula. Un inhibidor también puede definirse como una molécula que reduce, bloquea o inactiva una actividad constitutiva. Un "agonista" es una molécula que interactúa con una diana para provocar o estimular un aumento en la activación de la diana. Un "antagonista" es una molécula que se opone a la(s) acción(es) de un agonista. Un antagonista impide, reduce, inhibe o neutraliza la actividad de un agonista, y un antagonista también puede impedir, inhibir o reducir la actividad constitutiva de una diana, por ejemplo, un receptor diana, incluso cuando no hay un agonista identificado.

Los términos "modular", "modulación" y similares se refieren a la capacidad de una molécula (por ejemplo, un activador 0 un inhibidor) para aumentar o disminuir la función o actividad de la arginasa, ya sea directa o indirectamente. Un modulador puede actuar solo, o puede usar un cofactor, por ejemplo, una proteína, ion metálico o molécula pequeña. Los ejemplos de moduladores incluyen compuestos de molécula pequeña y otras moléculas bioorgánicas. Están disponibles en el mercado numerosas bibliotecas de compuestos de molécula pequeña (por ejemplo, bibliotecas combinatorias) y pueden servir como punto de partida para la identificación de un modulador. El experto en la materia puede desarrollar uno o más ensayos (por ejemplo, ensayos bioquímicos o basados en células) en los que tales bibliotecas de compuestos pueden cribarse para identificar uno o más compuestos que tengan las propiedades deseadas; posteriormente, el farmacoquímico experto es capaz de optimizar uno o más de tales compuestos mediante, por ejemplo, la síntesis y evaluación de análogos y derivados de los mismos. Además, pueden utilizarse estudios de modelado sintético y/o molecular en la identificación de un activador.

La "actividad" de una molécula puede describir o referirse a la unión de la molécula con un ligando o con un receptor; a la actividad catalítica; a la capacidad de estimular la expresión génica o la señalización celular, diferenciación o maduración; a la actividad antigénica; a la modulación de actividades de otras moléculas; y similares. El término "actividad proliferativa" abarca una actividad que estimula, que es necesaria para, o que está específicamente asociada con, por ejemplo, la división celular normal, así como con el cáncer, tumores, displasia, la transformación celular, metástasis y angiogénesis.

Como se usan en el presente documento, "comparable", "actividad comparable", "actividad comparable a", "efecto comparable", "efecto comparable a", y similares, son expresiones relativas que pueden verse desde un punto de vista cuantitativo y/o cualitativo. El significado de las expresiones depende con frecuencia del contexto en el que se utilizan. A modo de ejemplo, puede considerarse que dos agentes que activan un receptor tienen un efecto comparable desde una perspectiva cualitativa, pero se puede considerar que los dos agentes carecen de un efecto comparable desde una perspectiva cuantitativa si un agente solo puede lograr el 20 % de la actividad del otro agente según lo determinado en un ensayo aceptado en la técnica (por ejemplo, un ensayo de respuesta a la dosis) o en un modelo animal aceptado en la técnica. Al comparar un resultado con otro resultado (por ejemplo, un resultado con un patrón de referencia), "comparable" con frecuencia (aunque no siempre) significa que un resultado se desvía de un patrón de referencia en menos del 35 %, en menos del 30 %, en menos del 25 %, en menos del 20 %, en menos del 15 %, en menos del 10 %, en menos del 7 %, en menos del 5 %, en menos del 4 %, en menos del 3 %, en menos del 2 % o en menos del 1 %. En realizaciones particulares, un resultado es comparable a un patrón de referencia si se desvía en menos del 15 %, en menos del 10 % o en menos del 5 % del patrón de referencia. A modo de ejemplo, pero sin limitación, la actividad o efecto puede referirse a la eficacia, estabilidad, solubilidad o inmunogenicidad.

"Sustancialmente puro" indica que un componente constituye más de aproximadamente el 50 % del contenido total de la composición, y normalmente más de aproximadamente el 60 % del contenido total de polipéptidos. Más normalmente, "sustancialmente puro" se refiere a composiciones en que al menos el 75 %, al menos el 85 %, al menos el 90 % o más de la composición total es el componente de interés. En algunos casos, el polipéptido constituirá más de aproximadamente el 90 %, o más de aproximadamente el 95 % del contenido total de la composición.

Las expresiones "se une específicamente" o "se une selectivamente", cuando hace referencia a un ligando/receptor, anticuerpo/antígeno u otro par de unión, indica una reacción de unión que es determinante de la presencia de la proteína en una población heterogénea de proteínas y otros productos biológicos. Por lo tanto, en las condiciones designadas, un ligando específico se une con un receptor en particular y no se une en una cantidad significativa con otras proteínas presentes en la muestra. El anticuerpo, o composición de unión procedente del sitio de unión a antígeno de un anticuerpo, del método contemplado, se une a su antígeno, o una variante o muteína del mismo, con una afinidad que es al menos dos veces mayor, al menos diez veces mayor, al menos 20 veces mayor o al menos 100 veces mayor que la afinidad con cualquier otro anticuerpo o composición de unión procedente del mismo. En una realización particular, el anticuerpo tendrá una afinidad que es mayor que aproximadamente 109 litros/mol, según se determina mediante, por ejemplo, Scatchard analysis (Munsen, et al. 1980 Analyt. Biochem. 107:220-239).

El término "respuesta", por ejemplo, de una célula, tejido, órgano u organismo, abarca un cambio en el comportamiento bioquímico o fisiológico, por ejemplo, concentración, densidad, adhesión o migración dentro de un compartimento biológico, tasa de expresión génica o estado de diferenciación, donde el cambio se correlaciona con la activación, estimulación o tratamiento, o con mecanismos internos tales como la programación genética. En determinados contextos, los términos "activación", "estimulación", y similares, se refieren a la activación celular regulada por mecanismos internos, así como por factores externos o ambientales; mientras que las expresiones "inhibición", "regulación a la baja", y similares, se refieren a los efectos opuestos.

Los términos "polipéptido", "péptido", y "proteína", utilizados de manera indistinta en el presente documento, se refieren a una forma polimérica de aminoácidos de cualquier longitud, que puede incluir aminoácidos codificados genéticamente y no codificados genéticamente, aminoácidos modificados o derivatizados químicamente o bioquímicamente y polipéptidos que tienen estructuras principales polipeptídicas modificadas. Los términos incluyen proteínas de fusión, incluyendo, pero sin limitación, proteínas de fusión con una secuencia de aminoácidos heteróloga, proteínas de fusión con secuencias líder heterólogas y homólogas, con o sin restos de metionina en el extremo N; proteínas etiquetadas inmunológicamente; y similares.

Como se usan en el presente documento, los términos "variantes" y "homólogos" se utilizan indistintamente para referirse a secuencias de aminoácidos o de ADN que son similares a las secuencias de aminoácidos o de ácidos nucleicos de referencia, respectivamente. El término abarca variantes de origen natural y variantes de origen no natural. Las variantes de origen natural incluyen homólogos (polipéptidos y ácidos nucleicos que difieren en la secuencia de aminoácidos o nucleótidos, respectivamente, de una especie a otra) y variantes alélicas (polipéptidos y ácidos nucleicos que difieren en la secuencia de aminoácidos o nucleótidos, respectivamente, de un individuo a otro dentro de una especie). Por lo tanto, las variantes y homólogos abarcan secuencias de ADN de origen natural y proteínas codificadas por ellas y sus isoformas, así como variantes de corte y empalme de una proteína o gen. Los términos también abarcan secuencias de ácido nucleico que varían en una o más bases con respecto a una secuencia de ADN de origen natural pero que aún se traducen en una secuencia de aminoácidos que corresponde a la proteína de origen natural debido a la degeneración del código genético. Las variantes y homólogos de origen no natural incluyen polipéptidos y ácidos nucleicos que comprenden un cambio en la secuencia de aminoácidos o de nucleótidos, respectivamente, en que el cambio en la secuencia se introduce artificialmente (por ejemplo, muteínas); por ejemplo, el cambio se genera en el laboratorio mediante la intervención humana ("por la mano de hombre"). Por lo tanto, variantes y homólogos de origen no natural también puede referirse a las que difieren de las secuencias de origen natural en una o más sustituciones conservativas y/o etiquetas y/o conjugados.

El término "muteínas" como se usa en el presente documento se refiere ampliamente a proteínas recombinantes mutadas. Estas proteínas portan habitualmente sustituciones de aminoácidos únicas o múltiples y, con frecuencia, proceden de genes clonados que se han sometido a mutagénesis específica del sitio o al azar, o de genes completamente sintéticos.

Los términos "ADN", "ácido nucleico", "molécula de ácido nucleico", "polinucleótido" y similares, se usan indistintamente en el presente documento para referirse a una forma polimérica de nucleótidos de cualquier longitud, ya sean desoxirribonucleótidos o ribonucleótidos, o análogos de los mismos. Los ejemplos no limitantes de polinucleótidos incluyen ácidos nucleicos lineales y circulares, ARN mensajero (ARNm), ADN complementario (ADNc), polinucleótidos recombinantes, vectores, sondas, cebadores y similares.

Arginasa e inhibición de la misma

Como se ha expuesto anteriormente, para poner en práctica la invención no se necesita una comprensión precisa del mecanismo de acción subyacente de los compuestos por el cual los compuestos de la presente invención efectúan su actividad, se cree que los compuestos (o un subconjunto de los mismos) inhiben la arginasa. Aunque los compuestos de la invención se denominan generalmente en el presente documento inhibidores de la arginasa, debe entenderse que el término "inhibidores de la arginasa" abarca compuestos que actúan individualmente a través de la inhibición de la arginasa, pero también actúan a través de mecanismos adicionales.

Identificación de inhibidores de la arginasa que poseen características deseables

La presente invención se refiere, en parte, a la identificación de inhibidores de la arginasa con al menos una propiedad o característica de importancia terapéutica. Los inhibidores candidatos se pueden identificar utilizando, por ejemplo, un ensayo o modelo aceptado en la técnica, cuyos ejemplos se describen en el presente documento.

Después de la identificación, los inhibidores candidatos pueden evaluarse adicionalmente utilizando técnicas que proporcionan datos con respecto a las características de los inhibidores (por ejemplo, parámetros farmacocinéticos, medios para determinar la solubilidad o la estabilidad). Las comparaciones de los inhibidores candidatos con un patrón de referencia (que puede ser el "mejor de su clase" de los inhibidores actuales) son indicativas de la viabilidad potencial de tales candidatos.

Compuestos de la invención

En el presente documento se proporcionan compuestos que tienen la Fórmula (I)

X es N o CR<4a>;

cada R<1>es independientemente H o alquilo C<1-8>;

R<2>es H o CH<3>;

cada R<4a>, R<4b>, R<4c>y R<4d>se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, halógeno, CN, alquilo C<1-8>, alcoxi C<1-8>, hidroxialquilo C<1-8>, haloalquilo C<1-8>, haloalcoxi C<1-8>, -X<1>-Y, -X<1>-SO<2>R<5a>y -X<1>-NR<1>-R<5c>;

En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula (I), o una sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, son aquellos compuestos en donde:

X es N o CR<4a>;

cada R<1>es independientemente H o alquilo C<1-8>

R<2>es H o CH<3>;

cada R<4a>, R<4b>, R<4c>y R<4d>se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, halógeno, CN, alquilo C<1.8>, alcoxi C<1.8>, hidroxialquilo C<1.8>, haloalquilo C<1.8>, -X<1>-Y, -X<1>-SO<2>R<5a>y -X<1>-NR<5b>R<5c>;

cada X<1>es un enlace o alquileno C<1-6>que está sin sustituir o sustituido con 1 a 4 R<c>;

cada R<a>, Ry R<c>es independientemente halógeno, CN, OH, NH<2>, alquilo C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>y fenilo, o dos R<c>se combinan para formar un cicloalquilo C<3-6>;

cada Y es independientemente fenilo o un heteroarilo de 5 o 6 miembros, cada uno de los cuales está sin sustituir o sustituido con 1 a 3 R<d>; y

En algunas realizaciones de fórmula (I), X es CR<4a>. En otras realizaciones de Fórmula (I), X es N.

En algunas realizaciones seleccionadas de la Fórmula (I), y cualquiera de las realizaciones analizadas anteriormente, cada R<4a>, R<4b>, R<4c>y R<4d>se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, F, Cl, CN, alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, hidroxialquilo C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, -X<1>-Y, -X<1>-SO<2>R<5b>y -X<1>-NR<5b>R<5c>. En realizaciones adicionales, cada R<4a>, R<4b>, R<4c>y R<4d>se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, F, Cl, CN, alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, hidroxialquilo C<1.4>, haloalquilo C<1.4>y -XCNR<5b>R<5c>. En otras realizaciones adicionales, cada R<4a>, R<4b>, R<4c>y R<4d>se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, F, Cl, CN, alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, hidroxialquilo C<1.>

<4>, haloalquilo C<1.4>y -X<1>-NR<5b>R<5c>, y al menos uno de R<4a>, R<4b>y R<4c>es -X<1>-NR<5b>R<5c>. En más realizaciones adicionales, R<4c>es -X<1>-NR<5b>R<5c>.

En algunas realizaciones seleccionadas de la Fórmula (I), y cualquiera de las realizaciones analizadas anteriormente, cada uno de R<5a>, R<5b>y R<5c>se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, alquilo C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, alquil C<1-4>-C(O)-, cicloalquilo C<3-6>, heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros, fenilo, piridilo y un aminoácido, o R<5b>y R<5c>se unen entre sí para formar un anillo de 4 a 6 miembros; y en donde cada uno del anillo de 4 a 6 miembros, cicloalquilo C<3-6>o heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros, fenilo y piridilo, está sin sustituir o sustituido con de 1 a 4 R

En algunas realizaciones seleccionadas de la Fórmula (I), y cualquiera de las realizaciones analizadas anteriormente, X<1>es un enlace. En otras realizaciones seleccionadas de la Fórmula (I), y cualquiera de las realizaciones analizadas anteriormente, X<1>es un grupo metileno o etileno que está sin sustituir o sustituido con 1 o 2 R<c>. En aún otras realizaciones seleccionadas de Fórmula (I), X<1>es metileno, etileno,

En algunas realizaciones seleccionadas de la Formula (I), y cualquiera de las realizaciones analizadas anteriormente, -NR<5b>R<5c>se selecciona entre el grupo que consiste en -NH<2>, -NHCH<3>, -N(CH<3>)<2>, -NHCH<2>CF<3>, -NHCH(CH<3>)<2>, -NHC(O)CH<3>,

En algunas realizaciones seleccionadas de la Fórmula (I), y cualquiera de las realizaciones analizadas anteriormente, Y, cuando está presente, se selecciona entre el grupo que consiste en fenilo, piridilo, pirimidinilo, pirazolilo, imidazolilo, 1,2,3-triazolilo y 1,2,4-triazolilo, cada uno de los cuales está sin sustituir o sustituido con 1 a 3 Rd.

En un grupo seleccionado de realizaciones, se proporcionan compuestos de fórmula (I) que tienen la fórmula:

en donde cada R1, R2, cada R3, R4b, R4c, R4d y X tienen los significados proporcionados con referencia a la Fórmula (I), o cualquiera de las realizaciones proporcionadas anteriormente.

En otro grupo seleccionado de realizaciones, se proporcionan compuestos de fórmula (I) que tienen la fórmula:

en donde cada R1, R2, cada R3, R4a, R4b, R4cy R4d tienen los significados proporcionados con referencia a la Fórmula (I), o cualquiera de las realizaciones proporcionadas anteriormente.

en donde cada R1, R2, cada R3, R4a, R4b y R4c, tienen los significados proporcionados con referencia a la Fórmula (I), o cualquiera de las realizaciones proporcionadas anteriormente.

en donde R1, R2, cada R3, R4a, R4by R4c tienen los significados proporcionados con referencia a la Fórmula (I), o cualquiera de las realizaciones proporcionadas anteriormente.

En aún otras realizaciones seleccionadas, se proporcionan compuestos de fórmula (I) que tienen la fórmula:

en donde R1, R2, R4a, R4by R4c tienen los significados proporcionados con referencia a la Fórmula (I), o cualquiera de las realizaciones proporcionadas anteriormente.

En algunas realizaciones seleccionadas, se proporcionan compuestos de fórmula (I) que tienen la fórmula:

en donde R1, R4a, R4by R4c tienen los significados proporcionados con referencia a la Fórmula (I), o cualquiera de las realizaciones proporcionadas anteriormente.

en donde R1, cada Rc, R4b y R4c, tienen los significados proporcionados con referencia a la Fórmula (I), o cualquiera de las realizaciones proporcionadas anteriormente.

en donde R1, cada Rc, R4a y R4b, tienen los significados proporcionados con referencia a la Fórmula (I), o cualquiera de las realizaciones proporcionadas anteriormente.

En algunas realizaciones seleccionadas, el compuesto de Fórmula (I) tiene la fórmula:

en donde R<1>, cada R<c>y R<4b>tienen los significados proporcionados con referencia a la Fórmula (I), o cualquiera de las realizaciones proporcionadas anteriormente.

En realizaciones seleccionadas adicionales de fórmula (Ii), R<4b>se selecciona del grupo que consiste en H, CH<3>, CN, CF<3>, F y Cl.

en donde el subíndice n es 1, 2 o 3, y R1 y R4b tienen los significados proporcionados con referencia a la Fórmula (I), o cualquiera de las realizaciones proporcionadas anteriormente.

en donde R1 y R4b tienen los significados proporcionados con referencia a la Fórmula (I), o cualquiera de las realizaciones proporcionadas anteriormente.

En algunas realizaciones seleccionadas, el compuesto de Fórmula (I) tiene una fórmula seleccionada del grupo que consiste en:

En algunas realizaciones seleccionadas, se proporciona un compuesto cualquiera de la Tabla 1.

En algunas realizaciones seleccionadas, se proporcionan formas deuteradas de los compuestos de Fórmula (I). El deuterio puede sustituirse independientemente por hidrógeno en cualquier posición donde pueda estar presente hidrógeno.

Métodos de síntesis

En general, los compuestos proporcionados en el presente documento pueden prepararse por métodos convencionales como se describe en los Ejemplos a continuación.

Profármacos y otros medios de suministro de fármacos y/o extensión de la semivida

En algunos aspectos de la presente invención, los compuestos descritos en el presente documento se administran en forma de profármacos.

Para efectuar la extensión de la actividad terapéutica, las moléculas del fármaco pueden diseñarse para utilizar portadores para el suministro. Dichos portadores se usan o bien de manera no covalente, con el resto del fármaco formulado fisicoquímicamente en una mezcla de disolvente-transportador, o bien mediante la unión covalente permanente de un reactivo portador a uno de los grupos funcionales del resto del medicamento (véase, en general, el documento WO 20150202317).

Se favorecen varios enfoques no covalentes. A modo de ejemplo, pero sin limitación, en ciertas formas de realización se emplean formulaciones de depósito que comprenden la encapsulación de fármacos no covalentes en portadores poliméricos. En dichas formulaciones, la molécula de fármaco se combina con material de portador y se procesa de tal modo que la molécula de fármaco queda distribuida dentro del volumen del portador. Los ejemplos incluyen agregados de micropartículas de fármaco y polímero (por ejemplo, microesferas Degradex® (Phosphorex, Inc.)), que se administran como una suspensión inyectable; agregados de moléculas de fármaco polimérico formulados como geles (por ejemplo, Lupron Depot® (AbbVie Inc.)), que se administran como una inyección de bolo único; y formulaciones liposómicas (por ejemplo, DepoCyt® (Pacira Pharmaceuticals)), donde el portador puede ser una entidad polimérica o no polimérica capaz de solubilizar el fármaco. En estas formulaciones, la liberación de la molécula de fármaco puede tener lugar cuando el portador se hincha o se deteriora físicamente. En otros casos, la degradación química permite la difusión del fármaco en el entorno biológico; dichos procesos de degradación química pueden ser autohidrolíticos o catalizados por enzimas. Entre otras limitaciones, la encapsulación no covalente del fármaco requiere la prevención de la liberación incontrolada del fármaco, y la dependencia del mecanismo de liberación del fármaco respecto a la biodegradación puede causar variabilidad entre pacientes.

En realizaciones particulares, las moléculas de fármaco, las cuales incluyen tanto moléculas pequeñas como moléculas grandes, se conjugan con un transportador a través de enlaces covalentes permanentes. Ciertas terapias de moléculas pequeñas que exhiben baja solubilidad en fluidos acuosos pueden solubilizarse mediante su conjugación con polímeros hidrófilos, ejemplos de los cuales se describen más adelante en el presente documento. Con respecto a las proteínas de molécula grande, la extensión de la semivida puede lograrse, por ejemplo, mediante la modificación covalente permanente con un resto palmitoílo, y mediante la modificación covalente permanente con otra proteína que tiene una semivida extendida (por ejemplo, Albuferon®). En general, las moléculas de fármaco muestran una disminución de la actividad biológica cuando un portador se conjuga covalentemente con el fármaco.

En determinados casos, pueden abordarse con éxito las limitaciones asociadas con las moléculas de fármaco que comprenden mezclas no covalentes de polímeros o unión covalente permanente empleando un enfoque de profármacos para la conjugación química del fármaco con el portador polimérico. En este contexto, los agentes terapéuticos que son inactivos o menos activos que el propio resto de fármaco se transforman de manera predecible en entidades moleculares activas. La actividad biológica reducida del profármaco en comparación con el fármaco liberado es ventajosa si se desea una liberación lenta o controlada del fármaco. En dichos casos, la liberación del fármaco tiene lugar a lo largo del tiempo, reduciendo así la necesidad de la administración repetida y frecuente del fármaco. Un enfoque de profármaco también puede ser ventajoso cuando el resto de fármaco en sí no se absorbe, o tiene una absorción inferior a la óptima, en el tracto gastrointestinal; en estos casos, el profármaco facilita la absorción del resto de fármaco y luego se escinde en algún momento posterior (por ejemplo, a través de metabolismo de primer paso). La molécula de fármaco biológicamente activa se une típicamente al resto portador polimérico mediante un enlace temporal formado entre el resto portador y un grupo hidroxi, amino o carboxi de la molécula de fármaco.

Los enfoques descritos anteriormente están asociados con varias limitaciones. La activación del profármaco puede tener lugar mediante escisión enzimática o no enzimática del enlace temporal entre el portador y la molécula del fármaco, o una combinación secuencial de ambas (por ejemplo, un paso enzimático seguido de una modificación no enzimática). En un entornoin vitrolibre de enzimas (por ejemplo, una solución tampón acuosa), un enlace temporal como un éster o una amida puede sufrir hidrólisis, pero la tasa de hidrólisis correspondiente puede ser tal que esté fuera del rango terapéuticamente útil. En cambio, en un entornoin vivo,las esterasas o amidasas están típicamente presentes, y las esterasas y amidasas pueden causar una aceleración catalítica significativa de la cinética de la hidrólisis desde el doble hasta varios órdenes de magnitud (véase, por ejemplo, Greenwald et al., (1999) J Med Chem 42(18):3857-67).

Como se describe en el presente documento, los profármacos pueden clasificarse como i) bioprecursores y ii) profármacos ligados a portadores. Los bioprecursores no contienen un grupo portador y se activan mediante la creación metabólica de un grupo funcional. En cambio, en los profármacos unidos a un portador, la sustancia activa se conjuga con un resto portador a través de un enlace temporal en un grupo funcional de la entidad bioactiva. Los grupos funcionales preferidos son grupos hidroxilo o amino. Tanto la química de unión como las condiciones de hidrólisis dependen del tipo de grupo funcional empleado. El portador puede ser biológicamente inerte (por ejemplo, PEG) o puede tener propiedades de direccionamiento (por ejemplo, un anticuerpo). La escisión del portador de un profármaco unido al portador da como resultado la entidad bioactiva de interés, y la naturaleza del grupo funcional desprotegido de la entidad bioactiva a menudo contribuye a su bioactividad.

La bibliografía científica y de patentes describe muchos profármacos macromoleculares en los que el enlace temporal es un enlace éster lábil. En estos casos, el grupo funcional de la entidad bioactiva es un grupo hidroxilo o un ácido carboxílico (véase, por ejemplo, Cheng et al. (2003) Bioconjugate Chem 14:1007-17). Además, a menudo es ventajoso para las biomacromoléculas y ciertos fármacos de molécula pequeña unir el portador a un(os) grupo(s) amino de la entidad bioactiva (por ejemplo, los grupos amino de lisina o de extremo N terminal de las proteínas). Durante la preparación del profármaco, los grupos amino pueden abordarse de manera más quimioselectiva debido a su mayor nucleofilicidad en comparación con los grupos hidroxílicos o fenólicos. Esto es especialmente relevante en el caso de proteínas y péptidos que contienen una gran variedad de funcionalidades reactivas diferentes, donde las reacciones de conjugación no selectivas conducen a mezclas de productos no deseados que requieren una caracterización o purificación extensa, disminuyendo así el rendimiento de la reacción y la eficacia terapéutica del resto activo.

En general, los enlaces amida son más estables frente a la hidrólisis que los enlaces éster, y la tasa de escisión del enlace amida puede ser demasiado lenta para la utilidad terapéutica en un profármaco unido a un portador. Como resultado, puede ser ventajoso agregar componentes químicos estructurales para efectuar el control sobre la capacidad de escisión del enlace amida del profármaco. Estos componentes químicos adicionales para el control de la escisión que no son proporcionados ni por la entidad portadora ni por el fármaco se denominan generalmente "conectares". Los conectores de profármacos pueden tener un efecto importante sobre la velocidad de hidrólisis del enlace temporal, y la variación de la naturaleza química de los conectores a menudo da lugar a propiedades particulares. La activación de profármacos de restos biológicamente activos que contienen amina mediante enzimas específicas para una liberación dirigida requiere que la estructura del conector muestre un motivo estructural reconocido como sustrato por una correspondiente enzima endógena. En estos casos, la escisión del enlace temporal tiene lugar en un proceso de una sola etapa que es catalizado por la enzima. Por ejemplo, la liberación enzimática de citarabina es efectuada por la proteasa plasmina, cuya concentración es relativamente alta en varios tipos de masa tumoral.

La variabilidad entre pacientes es un inconveniente importante de la escisión enzimática predominante. Los niveles de enzima pueden diferir significativamente entre sujetos dando como resultado una variación biológica de la activación del profármaco por la escisión enzimática. Los niveles de enzima también pueden variar dependiendo del sitio de administración (por ejemplo, para inyección subcutánea, ciertas áreas del cuerpo producen efectos terapéuticos más predecibles que otras). Además, es difícil establecer una correlaciónin vivo-in vitrode las propiedades farmacocinéticas de los profármacos ligados a portadores dependientes de enzimas.

Otros profármacos portadores que emplean enlaces temporales a grupos amino en el resto de fármaco se basan en un mecanismo en cascada. La escisión en cascada se posibilita por compuestos enlazadores que están compuestos por una combinación estructural de un grupo de enmascaramiento y un grupo de activación. El grupo de enmascaramiento se une al grupo de activación por medio de un primer enlace temporal tal como un éster o un carbamato. El grupo activador se une a un grupo amino de la molécula de fármaco a través de un segundo enlace temporal (por ejemplo, un carbamato). La estabilidad o susceptibilidad a la hidrólisis del segundo enlace temporal depende de la presencia o ausencia del grupo de enmascaramiento. En presencia del grupo de enmascaramiento, el segundo enlace temporal es altamente estable y es poco probable que libere la molécula de fármaco con una cinética terapéuticamente útil, mientras que, en ausencia del grupo de enmascaramiento, este enlace se vuelve altamente lábil, dando como resultado una rápida escisión y liberación del resto de fármaco.

La escisión del primer enlace temporal es la etapa de limitación de velocidad en el mecanismo en cascada. La primera etapa puede inducir una reorganización molecular del grupo de activación (por ejemplo, una eliminación 1,6 como se describe en Greenwald et al. (1999) J Med Chem 42:3657-67), y la reorganización hace que el segundo enlace temporal sea mucho más lábil de modo que se induce su escisión. De forma ideal, la tasa de escisión del primer enlace temporal es idéntica a la tasa de liberación deseada para la molécula de fármaco en un escenario terapéutico dado. Además, es deseable que la escisión del segundo enlace temporal sea sustancialmente instantánea después de que su labilidad haya sido inducida por la escisión del primer enlace temporal.

Otra realización comprende profármacos poliméricos que contienen amino basados en lactonización con bloqueo de trimetilo (véase, por ejemplo, Greenwald et al. (2000) J Med Chem 43(3):457-87). En este sistema de profármacos, el ácido o-hidroxifenil-dimetilpropiónico sustituido se une a PEG mediante un grupo éster, carbonato o carbamato como un primer enlace temporal y a un grupo amino de una molécula de fármaco por medio de un enlace amida como un segundo enlace temporal. La etapa determinante de la velocidad en la liberación del fármaco es la escisión enzimática del primer enlace, que va seguida por una rápida escisión de amida por lactonización, liberando un producto secundario de lactona aromática. La desventaja principal de los sistemas de profármacos descritos por Greenwald et al. es la liberación de productos secundarios de moléculas pequeñas aromáticas altamente reactivos y potencialmente tóxicos como meturos de quinona o lactonas aromáticas después de la escisión del enlace temporal. Las entidades potencialmente tóxicas se liberan en una estequiometría 1:1 con el fármaco y pueden asumir altas concentracionesin vivo.

En ciertas realizaciones de profármacos en cascada que comprenden grupos de activación aromáticos basados en eliminación 1,6, el grupo de enmascaramiento está estructuralmente separado del portador. Esto puede efectuarse empleando un enlace estable entre el portador polimérico y el grupo activador, en donde el enlace estable no participa en el mecanismo de escisión en cascada. Si el portador no está sirviendo como un grupo de enmascaramiento y el grupo de activación está acoplado al portador por medio de un enlace estable, se evita la liberación de productos secundarios potencialmente tóxicos (tales como el grupo activador). La unión estable del grupo activador y el polímero también suprime la liberación de intermedios de fármaco-enlazador con farmacología indefinida.

Un primer ejemplo del enfoque descrito en el párrafo anterior comprende un sistema de profármacos polimérico basado en un grupo activador de ácido mandélico (véase, por ejemplo, Shabat et al. (2004) Chem Eur J 10:2626-34). En este enfoque, el grupo de enmascaramiento está unido al grupo de activación mediante un enlace carbamato. El grupo activador se conjuga permanentemente a un polímero de poliacrilamida a través de un enlace amida. Después de la activación enzimática del grupo de enmascaramiento por un anticuerpo catalítico, el grupo de enmascaramiento se escinde por ciclación y se libera el fármaco; el grupo activador sigue conectado al polímero de poliacrilamida después de la liberación del fármaco. Un sistema de profármacos similar se basa en un grupo activador de ácido mandélico y un grupo de enmascaramiento unido a éster escindible enzimáticamente (véase, por ejemplo, Lee et al. (2004) Angew Chem 116:1707-10).

Cuando se usan los enlazadores mencionados anteriormente, la etapa de eliminación 1,6 sigue generando un intermedio aromático altamente reactivo. Incluso si el resto aromático permanece unido permanentemente al portador polimérico, pueden producirse reacciones secundarias con subproductos potencialmente tóxicos o efectos inmunogénicos. Por lo tanto, es ventajoso generar tecnologías de enlazadores para formar profármacos poliméricos de agentes activos que contienen aminas usando enlazadores de profármacos alifáticos que no son dependientes de enzimas y no generan intermedios aromáticos reactivos durante la escisión. Un ejemplo de este tipo usa PEG5000-anhídrido maleico para la modificación reversible de grupos amino en activador de plasminógeno de tipo tisular y uroquinasa (véase, por ejemplo, (1987) Garman et al. FEBS Lett 223(2):361-65). La regeneración de la enzima funcional a partir del conjugado de PEG-uPA tras la incubación a un tampón de pH 7,4 mediante la escisión del enlace de ácido maleámico sigue una cinética de primer orden con una semivida de aproximadamente 6 horas. Una desventaja del enlace de ácido maleámico es la falta de estabilidad del conjugado a valores de pH más bajos.

Un enfoque adicional comprende un sistema de profármacos en cascada de PEG basado en el enlazador de N,N-bis-(2-hidroxietil)glicina amida (bicina) (véase, por ejemplo, (2004) J Med Chem 47:726-34). En este sistema, dos moléculas portadoras de PEG se unen mediante enlaces temporales a una molécula de bicina acoplada a un grupo amino de la molécula de fármaco. Las primeras etapas en la activación del profármaco implican la escisión enzimática de los primeros enlaces temporales que conectan ambas moléculas portadoras de PEG con los grupos hidroxi del grupo activador de bicina. Diferentes enlaces entre PEG y bicina dan como resultado diferentes cinéticas de activación de profármacos. La segunda etapa en la activación del profármaco implica la escisión del segundo enlace temporal que conecta el grupo activador de bicina al grupo amino de la molécula de fármaco. Una desventaja de este sistema es la lenta tasa de hidrólisis de este segundo enlace temporal de bicina amida, lo que da como resultado la liberación de un intermedio de profármaco modificado con bicina que puede mostrar diferentes propiedades farmacocinéticas, inmunogénicas, de toxicidad y farmacodinámicas en comparación con la molécula de fármaco original.

En realizaciones particulares, los dipéptidos se utilizan para el desarrollo de profármacos para el direccionamiento o el transporte dirigido, ya que son sustratos para enzimas o sistemas de biotransporte. La ruta no enzimática para la formación de profármacos dipeptídicos, es decir, la capacidad de someterse a una ciclación intramolecular para formar la dicetopiperazina (DKP) correspondiente y liberar el fármaco activo, no está bien definida.

En algunas realizaciones, los dipéptidos se unen a un resto de fármaco a través de enlaces éster, como se describió para los ésteres dipeptídicos del fármaco paracetamol (Gomes et al. (2005) Bio & Med Chem Lett). En este caso, la reacción de ciclación consiste en un ataque nucleofílico de la amina N-terminal del péptido en el átomo de carbono de éster para formar un intermedio tetraédrico, lo que va seguido por una transferencia de protones de la amina al oxianión del grupo saliente con formación simultánea de un enlace peptídico para dar el producto cíclico DKP y el fármaco libre. Este método es aplicable a fármacos que contienen hidroxiloin vitro,pero se ha descubierto que compite con la hidrólisis enzimática del enlace ésterin vivo,ya que los ésteres dipeptídicos correspondientes liberaron paracetamol a una velocidad mucho más rápida que en el tampón (Gomes et al. (Molecules 12 (2007) 2484-2506). La susceptibilidad de los profármacos basados en dipéptidos a las peptidasas puede abordarse incorporando al menos un aminoácido no natural en el motivo del dipéptido. Sin embargo, las enzimas endógenas capaces de escindir enlaces éster no se limitan a las peptidasas, y la dependencia enzimática de tal escisión de profármaco sigue dando lugar a un rendimientoin vivoimpredecible.

En algunas realizaciones, la dependencia enzimática se diseña deliberadamente en profármacos de DKP, tal como donde los profármacos de éster de dipéptido se formilan en el extremo amino del dipéptido, y se usa la desformilación enzimática para iniciar la formación de dicetopiperazina y la posterior escisión del enlace éster-dipéptido, seguido de la liberación de la molécula de fármaco (véase, por ejemplo, USP 7.163.923). A modo de ejemplo adicional, un octapéptido se une mediante un enlace éster al grupo 4-hidroxilo de vinblastina y se somete a escisión de enlace éster por formación de DKP después de la retirada enzimática específica del hexapéptido N-terminal (véase Brady et al. (2002) J Med Chem 45:4706- 15).

El alcance de la reacción de formación de DKP también se ha ampliado a los profármacos de amida. A modo de ejemplo, el documento USP 5.952.294 describe la activación de profármacos usando la formación de dicetopiperazina para profármacos de dipeptidil amida de citarabina. En este caso, el enlace temporal se forma entre el carbonilo de un dipéptido y el grupo amino aromático de citarabina.

Sin embargo, es poco probable que se pueda lograr un efecto de liberación lenta para tales conjugados debido a que no hay presente ningún portador u otro resto o funcionalidad que prolongue la semivida.

También se han descrito profármacos dipeptídicos que comprenden péptidos bioactivos tales como GLP-1 capaces de liberar el péptido a través de la formación de dicetopiperazina de la extensión dipeptídica (véase, por ejemplo, el documento WO 2009/099763). El resto de péptido bioactivo puede incluir una cadena de PEG adicional en uno de sus residuos de cadena lateral de aminoácido para lograr una circulación extendida del péptido bioactivo. Sin embargo, este enfoque está asociado con varias desventajas significativas. En primer lugar, la cadena de PEG tiene que estar unida al péptido sin comprometer su bioactividad, lo que puede ser difícil de lograr para muchos agentes bioactivos basados en péptidos. En segundo lugar, como el propio péptido pegilado es bioactivo, la proposición dipeptídica tiene un efecto sobre la bioactividad del péptido y puede afectar negativamente a sus propiedades de unión a receptor.

Las tecnologías ilustrativas específicas que pueden usarse con los compuestos de la presente invención incluyen las desarrolladas por ProLynx (San Francisco, CA) y Ascendis Pharma (Palo Alto, CA). La plataforma de tecnología ProLynx utiliza conjuntos de enlazadores novedosos que están preprogramados para escindirse a diferentes velocidades para permitir la liberación controlada, predecible y sostenida de moléculas pequeñas y péptidos a partir de conjugados macromoleculares semisólidos circulantes. La tecnología permite el mantenimiento de los niveles séricos en estado estacionario deseados de agentes terapéuticos durante semanas a meses.

La plataforma tecnológica de Ascendis combina los beneficios de las tecnologías de profármaco y de liberación sostenida para mejorar las propiedades de las moléculas pequeñas y los péptidos. Mientras están en circulación, los profármacos patentados liberan el agente terapéutico original activo no modificado a tasas predeterminadas gobernadas por condiciones fisiológicas de pH y temperatura. Debido a que el agente terapéutico se libera en su forma no modificada, conserva su mecanismo de acción original.

Modificaciones para potenciar las características de los inhibidores

Con frecuencia es beneficioso, y a veces imperativo, mejorar una o más propiedades físicas de las modalidades de tratamiento divulgadas en el presente documento y/o la forma en que se administran. Las mejoras de las propiedades físicas incluyen, por ejemplo, métodos para aumentar la solubilidad en agua, la biodisponibilidad, la semivida en suero y/o la semivida terapéutica; y/o modular la actividad biológica.

Las modificaciones conocidas en la técnica incluyen pegilación, fusión de Fc y fusión de albúmina. Aunque generalmente se asocian con agentes de molécula grande (por ejemplo, polipéptidos), tales modificaciones se han evaluado recientemente con moléculas pequeñas particulares. A modo de ejemplo, Chiang, M.et al. (J. Am. Chem. Soc.,2014, 136(9):3370-73) describen un agonista de molécula pequeña del receptor de adenosina 2a conjugado con el dominio Fc de inmunoglobulina. El conjugado de molécula pequeña-Fc retuvo potentes interacciones con el receptor de Fc y el receptor de adenosina 2a y mostró propiedades mejores en comparación con la molécula pequeña no conjugada. Además, se ha descrito la unión covalente de moléculas de PEG a agentes terapéuticos de molécula pequeña (Li, W. et al., Progress in Polymer Science, 2013 38:421-44).

Otras modificaciones conocidas incluyen la deuteración para mejorar la farmacocinética, la farmacodinámica y los perfiles de toxicidad. Debido a la mayor masa atómica del deuterio, la escisión del enlace carbono-deuterio requiere más energía que la del enlace carbono-hidrógeno. Debido a que estos enlaces más fuertes son más difíciles de romper, la tasa del metabolismo del fármaco es más lenta en comparación con las formas no deuteradas, lo que permite una dosificación menos frecuente y puede reducir adicionalmente las toxicidades. (Charles Schmidt,Nature Biotechnology,2017, 35(6): 493-494; Harbeson, S. y Tung, R.,Medchem News,2014(2): 8-22).

Usos terapéuticos y profilácticos

La presente invención contempla el uso de los inhibidores de la arginasa descritos en el presente documento para su uso en el tratamiento o la prevención de una amplia gama de enfermedades, trastornos y/o afecciones, y/o de los síntomas de los mismos. Si bien los usos particulares se describen en detalle a continuación, debe entenderse que la presente invención no se limita a ellos. Además, aunque a continuación se exponen categorías generales de enfermedades, trastornos y afecciones particulares, algunas de las enfermedades, trastornos y afecciones pueden pertenecer a más de una categoría y otros pueden no ser miembros de ninguna de las categorías divulgadas.

En algunas realizaciones, las enfermedades, trastornos y/o afecciones descritos en el presente documento están mediados, al menos en parte, por la arginasa.

En algunas realizaciones, los inhibidores de la arginasa descritos en el presente documento se administran en una cantidad eficaz para revertir, detener o ralentizar la actividad de la inmunosupresión mediada por arginasa.

Trastornos relacionados con la oncología. En concordancia con la presente invención, un inhibidor de la arginasa puede ser para su uso en el tratamiento o la prevención de una afección o trastorno proliferativo, incluyendo un cáncer, por ejemplo, cáncer del útero, cuello del útero, mama, próstata, testículos, del tracto gastrointestinal (por ejemplo, esófago, la orofaringe, estómago, intestino delgado o grueso, colon o recto), riñón, de célula renal, vejiga, hueso, médula ósea, piel, de cabeza o cuello, hígado, vesícula biliar, corazón, pulmón, páncreas, glándula salival, glándula suprarrenal, tiroides, de cerebro (por ejemplo, gliomas), de ganglios, de sistema nervioso central (SNC) y de sistema nervioso periférico (SNP), y cánceres del sistema hematopoyético y del sistema inmunitario (por ejemplo, bazo o timo). La presente invención también proporciona compuestos para su uso en métodos de tratamiento o prevención de otras enfermedades, trastornos o dolencias relacionados con el cáncer, incluyendo, por ejemplo, tumores inmunógenos, tumores no inmunógenos, tumores inactivos, cánceres inducidos por virus (por ejemplo, cánceres de células epiteliales, cánceres de células endoteliales, carcinomas de células escamosas y virus del papiloma), adenocarcinomas, linfomas, carcinomas, melanomas, leucemias, mielomas, sarcomas, teratocarcinomas, cánceres inducidos químicamente, metástasis y angiogénesis. La invención contempla la inhibición de la arginasa para revertir el agotamiento de la arginina que priva a los linfocitos T y evita su activación y proliferación (Rodriguez et al (2004), La producción de la arginasa I en el microentorno tumoral por células mieloides maduras inhibe la expresión del receptor de linfocitos T y las respuestas de linfocitos T específicas de antígeno.Cáncer Res.64(16), 5839-5849). En realizaciones particulares, el tumor o cáncer es cáncer de colon, cáncer de ovario, cáncer de mama, melanoma, cáncer de pulmón, glioblastoma o leucemia. El uso del/de los término(s) enfermedades, trastornos y afecciones relacionadas con el cáncer tiene la intención de referirse ampliamente a las afecciones que están asociadas, directa o indirectamente, con el cáncer, e incluye, por ejemplo, angiogénesis y afecciones precancerosas tales como displasia.

En determinadas realizaciones, un cáncer puede ser metastásico o estar en riesgo de convertirse en metastásico, o puede tener lugar en un tejido difuso, incluyendo cánceres de la sangre o de la médula ósea (por ejemplo, leucemia). En algunas realizaciones adicionales, los compuestos de la invención se pueden usar para superar la tolerancia de los linfocitos T.

En algunas realizaciones, la presente invención proporciona compuestos para su uso en métodos para el tratamiento de una afección proliferativa, cáncer, un tumor o una afección precancerosa con un inhibidor de la arginasa y al menos un agente terapéutico o de diagnóstico adicional, ejemplos de los cuales se exponen en otra parte en el presente documento.

Trastornos inmunomediados e inflamatorios. Como se usan en el presente documento, expresiones tales como "enfermedad inmunitaria", "afección inmunitaria", "trastorno inmunitario", enfermedad inflamatoria, "afección inflamatoria", "trastorno inflamatorio" y similares están destinados a abarcar ampliamente cualquier afección relacionada con la inmunidad (por ejemplo, una enfermedad autoinmune) o un trastorno con un componente inflamatorio que puede tratarse con los inhibidores de arginasa descritos en la presente memoria de tal modo que se obtiene algún beneficio terapéutico. Dichas afecciones con frecuencia están estrechamente relacionadas con otras enfermedades, trastornos y afecciones anteriormente mencionadas. A modo de ejemplo, una "afección inmunitaria" puede referirse a afecciones proliferativas, tal como cáncer, tumores y angiogénesis; incluyendo infecciones (agudas y crónicas), tumores y cánceres que resisten la erradicación por el sistema inmunitario.

Los inhibidores de la arginasa de la presente invención pueden usarse para aumentar o potenciar una respuesta inmunitaria; para mejorar la inmunización, incluyendo aumentar la eficacia de la vacuna; y para aumentar la inflamación. Las inmunodeficiencias asociadas con enfermedades de inmunodeficiencia, tratamiento médico inmunosupresor, infección aguda y/o crónica y envejecimiento pueden tratarse usando los compuestos divulgados en el presente documento. Los inhibidores de la arginasa también se pueden usar para estimular el sistema inmunitario de pacientes que adolecen de supresión inmunitaria inducida iatrogénicamente, incluyendo aquellos que se han sometido a trasplantes de médula ósea, quimioterapia o radioterapia.

En realizaciones particulares de la presente divulgación, los inhibidores de la arginasa se usan para aumentar o potenciar una respuesta inmunitaria a un antígeno proporcionando actividad adyuvante. En una realización particular, se administra al menos un antígeno o vacuna a un sujeto en combinación con al menos un inhibidor de la arginasa de la presente invención para prolongar una respuesta inmune al antígeno o vacuna. También se proporcionan composiciones terapéuticas que incluyen al menos un agente antigénico o componente de vacuna, incluyendo, pero sin limitación, virus, bacterias y hongos, o porciones de los mismos, proteínas, péptidos, antígenos específicos de tumor y vacunas de ácido nucleico, en combinación con al menos un inhibidor de la arginasa de la presente invención.

Un listado no limitante de enfermedades, trastornos y afecciones inmunomediadas o inflamatorias que pueden tratarse o prevenirse con los compuestos y composiciones de la presente invención incluyen, artritis (por ejemplo, artritis reumatoide), insuficiencia renal, lupus, asma, psoriasis, colitis, pancreatitis, alergias, fibrosis, complicaciones quirúrgicas (por ejemplo, cuando las citocinas inflamatorias impiden la cicatrización), anemia y fibromialgia. Otras enfermedades y trastornos que pueden estar asociados con la inflamación crónica incluyen enfermedad de Alzheimer, insuficiencia cardíaca congestiva, ictus, estenosis de la válvula aórtica, arteriesclerosis, osteoporosis, enfermedad de Parkinson, infecciones, enfermedad inflamatoria del intestino (por ejemplo, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa), dermatitis alérgica de contacto y otros eccemas, esclerosis sistémica, trasplante y esclerosis múltiple.

Entre otros trastornos inmunomediados, se contempla que la inhibición de la función de la arginasa también puede desempeñar un papel en la tolerancia inmunitaria y la prevención del rechazo fetal en el útero.

En algunas realizaciones, un inhibidor de la arginasa descrito en el presente documento se puede combinar con un agente inmunosupresor para reducir el número de células inmunitarias efectoras.

Algunas de las enfermedades, trastornos y afecciones mencionados anteriormente para los que un inhibidor de la arginasa puede ser particularmente eficaz (debido a, por ejemplo, limitaciones de las terapias actuales) se describen con más detalle a continuación.

La artritis reumatoide (AR), que generalmente se caracteriza por una inflamación crónica en el revestimiento membranoso (la membrana sinovial) de las articulaciones, afecta aproximadamente al 1 % de la población de los EE.UU. (~2,1 millones de personas). Una mayor comprensión del papel de las citocinas, incluidas TNF-a e IL-1, en el proceso inflamatorio, ha permitido el desarrollo y la introducción de una nueva clase de fármacos antirreumáticos modificadores de la enfermedad (FARME). Los agentes (algunos de los cuales se superponen con las modalidades de tratamiento para la AR) incluyen ENBREL (etanercept), REMICADE (infliximab), HUMIRA (adalimumab) y KINERET (anakinra). Aunque algunos de estos agentes alivian los síntomas, inhiben la progresión del daño estructural y mejoran la función física en poblaciones particulares de pacientes, todavía existe la necesidad de agentes alternativos con una eficacia mejorada, mecanismos de acción complementarios y menos efectos adversos o menos graves.

Psoriasis, una constelación de enfermedades cutáneas crónicas comunes inmunomediadas, afecta a más de 4,5 millones de personas en los EE.UU., de los cuales se considera que 1,5 millones tienen una forma de la enfermedad de moderada a grave. Además, más del 10 % de los pacientes con psoriasis desarrollan artritis psoriásica, que daña el hueso y el tejido conjuntivo alrededor de las articulaciones. Una mejor comprensión de la fisiología subyacente de la psoriasis ha dado como resultado la introducción de agentes que, por ejemplo, se dirigen a la actividad de los linfocitos T y las citocinas responsables de la naturaleza inflamatoria de la enfermedad. Dichos agentes incluyen los inhibidores de TNF-a (también utilizados en el tratamiento de la artritis reumatoide (AR)), incluyendo ENBREL (etanercept), REMICADE (infliximab) y HUMIRA (adalimumab)), e inhibidores de linfocitos T tales como AMEVIVE (alefacept) y RAPTIVA (efalizumab). Aunque varios de estos agentes son eficaces hasta cierto punto en determinadas poblaciones de pacientes, ninguno ha demostrado poder tratar de forma eficaz a todos los pacientes.

Trastornos relacionados con microbios. La presente invención contempla el uso de los inhibidores de la arginasa descritos en la presente memoria en el tratamiento y/o prevención de cualquier enfermedad, trastorno o afección infecciosa vírica, bacteriana, fúngica, parasitaria u otra para la cual el tratamiento con un inhibidor de la arginasa puede ser beneficioso.

Los ejemplos de enfermedades, trastornos y afecciones víricas que se contemplan incluyen, pero sin limitación, el virus de la hepatitis B (HBV), el virus de la hepatitis C (VHC), virus del papiloma humano (VPH), VIH, SIDA (incluidas sus manifestaciones tales como caquexia, demencia y diarrea), el virus del herpes simple (VHS), virus Epstein Barr (VEB), virus varicela zóster, virus de Coxsackie y citomegalovirus (CMV).

Ejemplos adicionales de tales enfermedades y trastornos incluyen infecciones por estafilococos y estreptococos (por ejemplo,Staphylococcus aureusyStreptococcus sanguinis,respectivamente),Leishmania, Toxoplasma, Trichomonas, Giardia, Candida Albicans, Bacillus AnthracisyPseudomonas Aeruginosa.En algunas realizaciones, enfermedades o trastornos incluyen una infección porMycobacterium(por ejemplo,Mycobacterium lepraeoMycobacterium tuberculosis)o una infección provocada porListeria monocytogenesoToxplasma gondii.Los compuestos de la invención se pueden usar para tratar la sepsis, disminuir o inhibir el crecimiento bacteriano y reducir o inhibir las citocinas inflamatorias.

Realizaciones adicionales contemplan el tratamiento de una infección parasitaria que incluye, pero sin limitación,Leishmania donovani, Leishmania tropica, Leishmania major, Leishmania aethiopica, Leishmania mexicana, Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovaleoPlasmodium malariae.Con frecuencia, la terapia antiparasitaria se administra profilácticamente (por ejemplo, antes de que un sujeto viaje a una zona con una alta frecuencia de una infección parasitaria).

Otros trastornos. Las realizaciones de la presente invención contemplan la administración de los inhibidores de la arginasa descritos en el presente documento a un sujeto para su uso en el tratamiento o prevención de cualquier otro trastorno que pueda beneficiarse de al menos algún nivel de inhibición de arginasa. Dichas enfermedades, trastornos y afecciones incluyen, por ejemplo, trastornos cardiovasculares (por ejemplo, isquemia cardíaca), gastrointestinales (por ejemplo, enfermedad de Crohn), metabólicos (por ejemplo, diabetes), hepáticos (por ejemplo, fibrosis hepática, NASH y NAFLD), pulmonares (por ejemplo, EPOC y asma), oftalmológicos (por ejemplo, retinopatía diabética) y renales (por ejemplo, insuficiencia renal).

Composiciones farmacéuticas

Los inhibidores de la arginasa de la presente invención pueden estar en forma de composiciones adecuadas para la administración a un sujeto. En general, tales composiciones son "composiciones farmacéuticas" que comprenden un(os) inhibidor(es) de la arginasa y uno o más diluyentes, transportadores o excipientes farmacéuticamente aceptables o fisiológicamente aceptables. En determinadas realizaciones, los inhibidores de la arginasa están presentes en una cantidad terapéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas pueden ser para su uso en los métodos de la presente invención; por lo tanto, por ejemplo, las composiciones farmacéuticas pueden administrarseex vivooin vivoa un sujeto para poner en práctica los métodos y usos terapéuticos y profilácticos descritos en el presente documento.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden formularse para que sean compatibles con el método o la vía de administración previstos; en el presente documento se exponen vías de administración de ejemplo. Además, las composiciones farmacéuticas pueden utilizarse en combinación con otros agentes o compuestos terapéuticamente activos como se describe en el presente documento para tratar o prevenir las enfermedades, trastornos y afecciones contempladas por la presente invención.

Las composiciones farmacéuticas que contienen el principio activo (por ejemplo, un inhibidor de la función de la arginasa) pueden estar en una forma adecuada para el uso oral, por ejemplo, como comprimidos, cápsulas, trociscos, pastillas para chupar, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras o blandas, o jarabes, soluciones, microperlas o elixires. Las composiciones farmacéuticas destinadas al uso oral pueden prepararse de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas, y tales composiciones pueden contener uno o más agentes tales como, por ejemplo, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y agentes conservantes, para proporcionar preparaciones sabrosas y farmacéuticamente elegantes. Los comprimidos, cápsulas y similares contienen el principio activo mezclado con excipientes no tóxicos farmacéuticamente aceptables que son adecuados para la fabricación de los comprimidos. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes de granulación y disgregación, por ejemplo, almidón de maíz o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidón, gelatina o goma arábiga y agentes lubricantes, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico o talco.

Los comprimidos, cápsulas y similares adecuados para la administración oral pueden estar sin recubrir o pueden recubrirse mediante técnicas conocidas para retrasar la disgregación y absorción en el tracto gastrointestinal y, de ese modo, proporcionar una acción sostenida. Por ejemplo, puede emplearse un material de retardo temporal tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Además, pueden recubrirse mediante técnicas conocidas en la técnica para formar comprimidos terapéuticos osmóticos para la liberación controlada. Los agentes adicionales incluyen partículas biodegradables o biocompatibles o una sustancia polimérica tal como poliésteres, ácidos de poliamina, hidrogel, polivinilpirrolidona, polianhídridos, ácido poliglicólico, etilen-vinilacetato, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, sulfato de protamina o copolímeros de lactida/glicolida, copolímeros de polilactida/glicolida o copolímeros de etilenvinilacetato, para controlar el suministro de una composición administrada. Por ejemplo, el agente oral puede quedar atrapado en microcápsulas preparadas mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial, mediante el uso de hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina o microcápsulas de poli(metacrilato de metilo), respectivamente, o en un sistema coloidal de suministro de fármacos. Los sistemas de dispersión coloidal incluyen complejos de macromoléculas, nanocápsulas, microesferas, microperlas y sistemas a base de lípidos, incluyendo emulsiones de aceite en agua, micelas, micelas mixtas y liposomas. Los métodos para la preparación de las formulaciones mencionadas anteriormente serán evidentes para los expertos en la materia.

Las formulaciones para uso oral también se pueden presentar en forma de cápsulas de gelatina dura en donde el principio activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio, caolín o celulosa microcristalina, o como cápsulas de gelatina blanda en donde el principio activo se mezcla con agua o un medio oleoso, por ejemplo, aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva.

Las suspensiones acuosas contienen los materiales activos mezclados con excipientes adecuados para la fabricación de las mismas. Dichos excipientes pueden ser agentes de suspensión, por ejemplo, carboximetilcelulosa, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma arábiga; agentes de dispersión o humectantes, por ejemplo, un fosfátido natural (por ejemplo, lecitina) o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos (por ejemplo, estearato de polioxietileno), o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga (por ejemplo, para heptadecaetilenoxicetanol), o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol (por ejemplo, monooleato de polioxietilen sorbitol), o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol (por ejemplo, monooleato de polietileno sorbitano). Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservantes.

Pueden formularse suspensiones oleosas suspendiendo el principio activo en un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de maní, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco, o en un aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones oleosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo, cera de abeja, parafina dura o alcohol cetílico. Para proporcionar una preparación oral de sabor agradable, se pueden añadir agentes edulcorantes tal como los expuestos anteriormente y agentes saborizantes.

Los polvos y gránulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua proporcionan el principio activo en premezcla con un agente dispersante o humectante, un agente de suspensión y uno o más conservantes. En el presente documento se ejemplifican agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de oliva o aceite de maní, o un aceite mineral, por ejemplo, parafina líquida o mezclas de estos. Los agentes emulsionantes adecuados pueden ser gomas de origen natural, por ejemplo, goma arábiga o goma de tragacanto; fosfátidos de origen natural, por ejemplo, soja, lecitina, y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos; anhídridos de hexitol, por ejemplo, monooleato de sorbitán; y productos de condensación de ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo, monooleato de polioxietilen sorbitán.

Las composiciones farmacéuticas normalmente comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la arginasa contemplado por la presente invención y uno o más agentes de formulación farmacéutica y fisiológicamente aceptables. Los diluyentes, transportadores o excipientes farmacéuticamente aceptables o fisiológicamente aceptables adecuados incluyen, pero sin limitación, antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico y bisulfato de sodio), conservantes (por ejemplo, alcohol bencílico, metil parabenos, etilo o n-propilo, p-hidroxibenzoato), agentes emulsionantes, agentes de suspensión, agentes dispersantes, disolventes, cargas, agentes de carga, detergentes, tampones, vehículos, diluyentes y/o adyuvantes. Por ejemplo, un vehículo adecuado puede ser solución salina fisiológica o solución salina tamponada con citrato, posiblemente complementada con otros materiales comunes en composiciones farmacéuticas para la administración parenteral. La solución salina tamponada neutra o la solución salina mezclada con seroalbúmina son vehículos de ejemplo adicionales. Los expertos en la materia reconocerán fácilmente una diversidad de tampones que pueden utilizarse en las composiciones farmacéuticas y las formas farmacéuticas contempladas en el presente documento. Los tampones típicos incluyen, pero sin limitación, ácidos débiles farmacéuticamente aceptables, bases débiles o mezclas de los mismos. Como un ejemplo, los componentes tamponantes pueden ser materiales hidrosolubles tales como ácido fosfórico, ácidos tartáricos, ácido láctico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido acético, ácido ascórbico, ácido aspártico, ácido glutámico y sales de los mismos. Los agentes tamponantes aceptables incluyen, por ejemplo, un tampón de Tris, ácido N-(2-hidroxietil)piperazin-N'-(2-etanosulfónico) (HEPES), ácido 2-(N-morfolino)etanosulfónico (MES), sal de sodio de ácido 2-(N-morfolino)etanosulfónico (MES), ácido 3-(N-morfolino)propanosulfónico (MOPS) y ácido N-tris[hidroximetil]metil-3-aminopropanosulfónico (TAPS).

Una vez que se ha formulado una composición farmacéutica, puede almacenarse en viales estériles como una solución, suspensión, gel, emulsión, sólido o polvo deshidratado o liofilizado. Dichas formulaciones pueden almacenarse en una forma lista para su uso, una forma liofilizada que precisa reconstitución antes del uso, una forma líquida que precisa dilución antes del uso u otra forma aceptable. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica se proporciona en un recipiente de un solo uso (por ejemplo, un vial, ampolla, jeringa o autoinyector de un solo uso (similar a, por ejemplo, a un EpiPen®)), mientras que en otras realizaciones se proporciona un recipiente de múltiples usos (por ejemplo, un vial de múltiples usos).

Las formulaciones también pueden incluir transportadores para proteger la composición frente a la degradación o eliminación rápida del organismo, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo liposomas, hidrogeles, profármacos y sistemas de suministro microencapsulados. Por ejemplo, pueden emplearse un material de retardo temporal tal como monoestearato de glicerilo o estearato de glicerilo, solo o en combinación con una cera. Para suministrar un inhibidor de la arginasa puede utilizarse cualquier aparato para el suministro de fármacos, incluyendo sistemas de implantes (por ejemplo, bombas implantables) y catéteres, bombas y dispositivos de inyección lenta, todos los cuales son bien conocidos por los expertos en la materia.

Para liberar los inhibidores de la arginasa divulgados en el presente documento durante un período de tiempo definido también pueden utilizarse inyecciones de absorción lenta, las que generalmente se administran por vía subcutánea o intramuscular. Las inyecciones de absorción lenta son habitualmente a base de aceite o sólido y generalmente comprenden al menos uno de los componentes de formulación expuestos en el presente documento. Un experto en la materia está familiarizado con las posibles formulaciones y usos de las inyecciones de absorción lenta.

Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una suspensión oleosa o acuosa inyectable estéril. Esta suspensión puede formularse de acuerdo con la técnica conocida utilizando los agentes de dispersión o humectantes adecuados y agentes de suspensión mencionados en el presente documento. La preparación inyectable estéril puede ser también una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, en forma de una solución en 1,3-butanodiol. Los diluyentes, disolventes y medios de dispersión que pueden emplearse incluyen agua, solución de Ringer, solución isotónica de cloruro de sodio, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, NJ) o solución salina tamponada con fosfato (PBS), etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido) y mezclas adecuadas de los mismos. Además, estériles, se usan convencionalmente en forma de un disolvente o un medio de suspensión. Para este fin puede emplearse cualquier aceite suave no volátil, incluyendo monoglicéridos o diglicéridos sintéticos. Además, ácidos grasos tales como ácido oleico, encuentran uso en la preparación de inyectables. Puede conseguirse la absorción prolongada de formulaciones inyectables particulares incluyendo un agente que retarde la absorción (por ejemplo, monoestearato de aluminio o gelatina).

La presente invención contempla la administración de los inhibidores de la arginasa en forma de supositorios para administración rectal. Los supositorios pueden prepararse mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado que sea sólido a temperaturas normales pero líquido a la temperatura rectal y, por lo tanto, se funda en el recto para liberar el fármaco. Dichos materiales incluyen, pero sin limitación, manteca de cacao y polietilenglicoles.

Los inhibidores de la arginasa contemplados por la presente invención pueden estar en forma de cualquier otra composición farmacéutica adecuada (por ejemplo, nebulizadores para su uso nasal o por inhalación) conocida actualmente o desarrollada en el futuro.

Vías de administración

La presente invención contempla la administración de inhibidores de la arginasa y composiciones de los mismos de cualquier manera apropiada. Las vías de administración adecuadas incluyen oral, parenteral (p. ej., intramuscular, intravenosa, subcutánea (por ejemplo, inyección o implante), intraperitoneal, intracisternal, intraarticular, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimatosa) e intracerebroventricular), nasal, vaginal, sublingual, intraocular, rectal, tópica (por ejemplo, transdérmica), bucal e inhalación. Para liberar los inhibidores de la arginasa divulgados en el presente documento durante un período de tiempo definido también pueden utilizarse inyecciones de absorción lenta, las que generalmente se administran por vía subcutánea o intramuscular.

Realizaciones particulares de la presente invención contemplan la administración oral.

Terapia combinada

La presente invención contempla el uso de inhibidores de la arginasa solos o en combinación con uno o más agentes terapéuticos activos. Los agentes terapéuticos activos adicionales pueden ser moléculas químicas pequeñas; macromoléculas tales como proteínas, anticuerpos, pepticuerpos, péptidos, ADN, ARN o fragmentos de dichas macromoléculas; o terapias celulares o génicas. En tal terapia combinada, los diversos agentes activos tienen con frecuencia distintos mecanismos de acción complementarios. Dicha terapia combinada puede ser especialmente ventajosa al permitir una reducción de la dosis de uno o más de los agentes, reduciendo o eliminando de este modo los efectos adversos asociados con uno o más de los agentes. Además, tal terapia combinada puede tener un efecto terapéutico o profiláctico sinérgico sobre la enfermedad, trastorno o afección subyacente.

Como se usan en el presente documento, "combinación" pretende incluir terapias que se pueden administrar por separado, por ejemplo, formuladas por separado para administración separada (por ejemplo, como se puede proporcionar en un kit), y terapias que se pueden administrar juntas en una única formulación (es decir, una "coformulación").

En determinadas realizaciones, los inhibidores de la arginasa se administran o aplican secuencialmente, por ejemplo, cuando un agente se administra antes que uno o más de otros agentes. En otras realizaciones, los inhibidores de la arginasa se administran simultáneamente, por ejemplo, cuando se administran dos o más agentes al mismo tiempo o aproximadamente; los dos o más agentes pueden estar presentes en dos o más formulaciones separadas o combinados en una sola formulación (es decir, una coformulación). Independientemente de si los dos o más agentes se administran de forma secuencial o simultánea, para los fines de la presente invención se considera que se administran en combinación.

Los inhibidores de la arginasa de la presente invención pueden utilizarse en combinación con al menos otro agente (activo) de cualquier manera apropiada según las circunstancias. En una realización, el tratamiento con al menos un agente activo y al menos un inhibidor de la arginasa de la presente invención se mantiene durante un período de tiempo. En otra realización, el tratamiento con al menos un agente activo se reduce o se interrumpe (por ejemplo, cuando el sujeto está estable), mientras que el tratamiento con un inhibidor de la arginasa de la presente invención se mantiene en un régimen de dosificación constante. En una realización adicional, el tratamiento con al menos un agente activo se reduce o se interrumpe (por ejemplo, cuando el sujeto está estable), mientras que el tratamiento con un inhibidor de la arginasa de la presente invención se reduce (por ejemplo, una dosis más baja, una dosificación menos frecuente o un régimen de tratamiento más corto). En otra realización más, el tratamiento con al menos un agente activo se reduce o se interrumpe (por ejemplo, cuando el sujeto está estable), y se aumenta el tratamiento con el inhibidor de la arginasa de la presente invención (por ejemplo, una dosis más alta, una dosificación más frecuente o un régimen de tratamiento más largo). En otra realización más, el tratamiento con al menos un agente activo se mantiene y se reduce o interrumpe el tratamiento con el inhibidor de la arginasa de la presente invención (por ejemplo, una dosis más baja, una dosificación menos frecuente o un régimen de tratamiento más corto). En otra realización más, el tratamiento con el al menos un agente activo y el tratamiento con el inhibidor de la arginasa de la presente invención se reducen o interrumpen (por ejemplo, una dosis más baja, una dosificación menos frecuente o un régimen de tratamiento más corto).

Trastornos relacionados con la oncología. La presente invención proporciona compuestos para su uso en métodos para el tratamiento y/o la prevención de una afección proliferativa, cáncer, tumor o enfermedad, trastorno o afección precancerosa, con un inhibidor de la arginasa y al menos un agente terapéutico o de diagnóstico adicional. En algunas realizaciones, el agente terapéutico o de diagnóstico adicional es radiación, un agente inmunomodulador o un agente quimioterapéutico, o un agente de diagnóstico. Los agentes inmunomoduladores adecuados que pueden utilizarse en la presente invención incluyen CD4OL, B7 y B7RP1; activación de anticuerpos monoclonales (mAb) para receptores estimulantes, tales como, anti-CD40, anti-CD38, ligando anti-ICOS y ligando de 4-IBB; carga de antígeno de células dendríticas(in vitrooin vivo);vacunas contra el cáncer tales como vacunas contra el cáncer de células dendríticas; citocinas/quimiocinas, tales como, ILL IL2, IL12, IL18, ELC/CCL19, SLC/CCL21, MCP-1, IL-4, IL-18, TNF, IL-15, MDC, IFNa/b, M-CSF, IL-3, GM-CSF, IL-13 y anti-IL-10; lipopolisacáridos bacterianos (LPS); inhibidores de la indoleamina 2,3-dioxigenasa 1 (IDO1) y oligonucleótidos inmunoestimulantes.

En determinadas realizaciones, la presente invención proporciona compuestos para su uso en métodos para la supresión tumoral del crecimiento tumoral que comprende la administración de un inhibidor de la arginasa descrito en el presente documento en combinación con un inhibidor de transducción de señales (STI) para lograr la supresión aditiva o sinérgica del crecimiento tumoral. Como se usan en el presente documento, la expresión "inhibidor de la transducción de señales" se refiere a un agente que inhibe selectivamente una o más etapas de en una ruta de señalización. Los inhibidores de la transducción de señales (STI) de la presente invención incluyen: (i) inhibidores de la cinasa bcr/abl (por ejemplo, GLEEVEC); (ii) inhibidores del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF), incluyendo inhibidores de cinasas y anticuerpos; (iii) inhibidores del receptor her-2/neu (por ejemplo, HERCEPTIN); (iv) inhibidores de las quinasas de la familia Akt o la ruta de Akt (por ejemplo, rapamicina); (v) inhibidores de cinasas del ciclo celular (por ejemplo, flavopiridol); y (vi) inhibidores de la fosfatidil inositol cinasa. Los agentes implicados en la inmunomodulación también se pueden usar en combinación con los inhibidores de la arginasa descritos en el presente documento para la supresión del crecimiento tumoral en pacientes con cáncer.

Los ejemplos de agentes quimioterápicos incluyen, pero sin limitación, agentes alquilantes tales como tiotepa y ciclofosfamida; alquilsulfonatos, tales como busulfán, improsulfán y piposulfán; aciridinas, tales como benzodopa, carbocuona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilmelaminas, incluyendo altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilolomelamima; mostazas nitrogenadas tales como clorambucilo, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, melfalán, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosoureas, tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina; antibióticos tales como aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, caliqueamicina, carabicina, caminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina, epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinas, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, cinostatina, zorrubicina; antimetabolitos tales como metotrexato y 5-fluorouracilo (5-FU); análogos del ácido fólico tales como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina tales como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, 5-FU; andrógenos, tales como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; antisuprarrenales, tales como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; reabastecedor de ácido fólico tal como ácido frolínico; aceglatona; glucósido de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diacicuona; elformitina; acetato de eliptinio; etoglúcido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinano; lonidamina; mitoguazona; mitoxantrona; mopidamol; nitracrina; pentostatina; fenamet; pirarrubicina; ácido podofilínico; 2-etilhidracida; procarbazina; razoxano; sizofirano; espirogermanio; ácido tenuazónico; triazicuona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinósido (Ara-C); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides, por ejemplo, paclitaxel y doxetaxel; clorambucilo; gemcitabina; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; platino y complejos de coordinación de platino, tales como cisplatino, carboplatino y oxaliplatino; vinblastina; etopósido (VP-16); ifosfamida; mitomicina C; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina; navelbina; novantrona; tenipósido; daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; CPT11; inhibidores de la topoisomerasa; difluorometilornitina (DMFO); ácido retinoico; esperamicinas; capecitabina; antraciclinas; y sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.

Los agentes quimioterapéuticos también incluyen agentes antihormonales que actúan regulando o inhibiendo la acción hormonal sobre tumores tales como los antiestrógenos, incluyendo, por ejemplo, tamoxifeno, raloxifeno, 4(5)-imidazoles inhibidores de aromatasa, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, onapristona, y toremifeno; y antiandrógenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida, y goserelina; y sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores. En determinadas realizaciones, la terapia de combinación comprende un régimen de quimioterapia que incluye uno o más agentes quimioterapéuticos. En determinadas realizaciones, la terapia combinada comprende la administración de una hormona o agente hormonal relacionado.

Las modalidades de tratamiento adicionales que se pueden utilizar en combinación con un inhibidor de la arginasa incluyen radioterapia, un anticuerpo monoclonal contra un antígeno tumoral, un complejo de un anticuerpo monoclonal y una toxina, un adyuvante de linfocitos T, trasplante de médula ósea o células presentadoras de antígenos (por ejemplo, terapia con células dendríticas), incluyendo agonistas de TLR que se usan para estimular tales células presentadoras de antígenos.

En determinadas realizaciones, la presente invención contempla el uso de los compuestos descritos en el presente documento en combinación con la terapia celular adoptiva, una forma nueva y prometedora de inmunoterapia personalizada en la que se administran células inmunitarias con actividad antitumoral a pacientes con cáncer. La terapia celular adoptiva se está explorando utilizando linfocitos infiltrantes de tumores (TIL) y linfocitos T diseñados para expresar, por ejemplo, receptores de antígenos quiméricos (CAR) o receptores de linfocitos T (TCR). La terapia celular adoptiva implica generalmente recolectar linfocitos T de un individuo, modificándolos genéticamente para que se dirijan a un antígeno específico o para potenciar sus efectos antitumorales, amplificándolos a un número suficiente, y a la infusión de los linfocitos T modificados genéticamente en un paciente con cáncer. Los linfocitos T pueden recogerse del paciente al que se reinfunden posteriormente las células expandidas (por ejemplo, autólogas) o pueden recogerse de pacientes donantes (por ejemplo, alogénicas).

En determinadas realizaciones, la presente invención contempla el uso de los compuestos descritos en el presente documento en combinación con terapias basadas en interferencia de ARN para silenciar la expresión génica. La iARN comienza con la escisión de los ARN de doble cadena más largos en ARN de interferencia pequeños (ARNip). Una hebra del ARNip se incorpora en un complejo de ribonucleoproteína conocido como complejo de silenciamiento inducido por ARN (RISC), que después se usa para identificar moléculas de ARNm que son al menos parcialmente complementarias a la cadena de ARNip incorporada. RISC puede unirse a o escindir el ARNm, y ambas cosas inhiben la traducción.

En determinadas realizaciones, la presente invención contempla el uso de los compuestos descritos en el presente documento en combinación con agentes que modulan el nivel de adenosina. Dichos agentes terapéuticos pueden actuar sobre los ectonucleótidos que catalizan la conversión de ATP en adenosina, incluyendo el ectonucleósido trifosfato difosfohidrolasa 1 (ENTPD1, también conocido como CD39 o Grupo de Diferenciación 39), que hidroliza ATP a ADP y ADP a AMP, y la 5'-nucleotidasa, ecto (NT5E o 5NT, también conocida como CD73 o Grupo de Diferenciación 73), que convierte AMP en adenosina. Las actividades enzimáticas de CD39 y CD73 juegan un papel estratégico en la calibración de la duración, la magnitud y la naturaleza química de las señales purinérgicas suministradas a diversas células (por ejemplo, células inmunitarias). La alteración de estas actividades enzimáticas puede cambiar el curso o dictar el resultado de varios eventos fisiopatológicos, incluyendo cáncer, enfermedades autoinmunitarias, infecciones, aterosclerosis y lesión por isquemia-reperfusión, lo que sugiere que estas ectoenzimas representan dianas terapéuticas novedosas para gestionar una variedad de trastornos.

Como alternativa, tales agentes terapéuticos pueden ser antagonistas del receptor de adenosina 2 (A<2>R). La adenosina puede unirse a y activar cuatro receptores acoplados a proteína G diferentes: A<1>R, A<2a>R, A<2b>R y A3R. La unión de adenosina al receptor A<2a>R, que se expresa en los linfocitos T, linfocitos citolíticos naturales y células mieloides tales como células dendríticas, conduce a niveles intracelulares aumentados de AMP cíclico y al deterioro de la maduración y/o activación de tales células. Este proceso perjudica significativamente la activación del sistema inmunitario contra células cancerosas. Además, A<2>AR se ha visto implicado en la potenciación selectiva de citocinas antiinflamatorias, en promover la regulación positiva de PD-1 y CTLA-4, promover la generación de linfocitos T reguladores LAG-3 y Foxp3+, y mediar la inhibición de los linfocitos T reguladores, PD-1, CTLA-4 y otros puntos de control inmunitarios que se analizan adicionalmente en el presente documento. La combinación de antagonistas de A2R en las combinaciones descritas en el presente documento puede proporcionar al menos un efecto aditivo en vista de sus diferentes mecanismos de acción.

En determinadas realizaciones, la presente invención contempla el uso de los compuestos descritos en el presente documento en combinación con inhibidores de fosfatidilinositol 3-quinasas (PI3K), particularmente la isoforma PI3Ky. Los inhibidores de PI3K<y>pueden estimular una respuesta inmunitaria anticancerígena a través de la modulación de células mieloides, tal como inhibiendo las células mieloides supresoras, amortiguando los macrófagos infiltrantes de tumores inmunosupresores o estimulando los macrófagos y las células dendríticas para producir citoquinas que contribuyen a las respuestas efectivas de los linfocitos T que conducen a la disminución del desarrollo y la propagación del cáncer.

En determinadas realizaciones, la presente invención contempla el uso de los compuestos descritos en el presente documento en combinación con inhibidores del factor inducible por hipoxia (HIF). Los factores de transcripción de HIF son una parte integrante de las vías de señalización usadas para detectar y responder a niveles bajos de oxígeno. Se sabe que el microentorno de los tumores sólidos es hipóxico y requiere la inducción de genes asociados con el metabolismo, el crecimiento, la proliferación y la angiogénesis para que las células tumorales sobrevivan y metastaticen. En particular, la isoforma HIF-2a se ha correlacionado con el cáncer, las afecciones inflamatorias e inmunomoduladoras.

Inhibidores de puntos de control inmunitario. La presente invención contempla el uso de los inhibidores de la función de la arginasa descritos en el presente documento en combinación con inhibidores de puntos de control inmunitario.

La enorme cantidad de alteraciones genéticas y epigenéticas que son características de todos los cánceres proporciona un conjunto diverso de antígenos que el sistema inmunitario puede utilizar para distinguir las células tumorales de sus equivalentes normales. En el caso de los linfocitos T, la amplitud final (por ejemplo, los niveles de producción o proliferación de citocinas) y la calidad (por ejemplo, el tipo de respuesta inmunitaria generada, tal como el patrón de producción de citocinas) de la respuesta, que se inicia a través del reconocimiento de antígenos por el receptor de linfocitos T (TCR), está regulada por un equilibrio entre señales coestimulantes e inhibidoras (puntos de control inmunitario). En condiciones fisiológicas normales, los puntos de control inmunitario son cruciales para la prevención de la autoinmunidad (es decir, el mantenimiento de la autotolerancia) y también para la protección de los tejidos del daño cuando el sistema inmunitario responde a una infección patógena. Los tumores pueden desregular la expresión de las proteínas de puntos de control inmunitario como un importante mecanismo de resistencia inmunitaria.

Los linfocitos T han sido el foco principal de los esfuerzos para manipular terapéuticamente la inmunidad antitumoral endógena debido a i) su capacidad para el reconocimiento selectivo de péptidos derivados de proteínas en todos los compartimentos celulares; ii) su capacidad para reconocer y destruir directamente las células que expresan antígenos (por los linfocitos T efectores CD8+; también conocidos como linfocitos T citotóxicos (los CTL); y iii) su capacidad para orquestar diversas respuestas inmunitarias por parte de los linfocitos T auxiliares CD4+, que integran mecanismos efectores adaptativos e innatos.

En el contexto clínico, el bloqueo de los puntos de control inmunitarios - que da como resultado la amplificación de las respuestas de linfocitos T específicos de antígeno - ha demostrado ser un enfoque prometedor en los tratamientos del cáncer humano.

La inmunidad mediada por linfocitos T incluye múltiples etapas secuenciales, cada una de las cuales está regulada contrarrestando señales estimulantes e inhibidoras para optimizar la respuesta. Si bien casi todas las señales inhibidoras en la respuesta inmunitaria modulan en última instancia rutas de señalización intracelular, muchas se inician a través de receptores de membrana, cuyos ligandos están unidos a membrana o son solubles (citocinas). Si bien los ligandos y receptores coestimulantes e inhibidores que regulan la activación de los linfocitos T con frecuencia no se sobreexpresan en los cánceres con respecto a los tejidos normales, los ligandos y receptores inhibidores que regulan las funciones efectoras de los linfocitos T en los tejidos se sobreexpresan comúnmente en las células tumorales o en las células no transformadas asociadas con el microentorno tumoral. Las funciones de los puntos de control inmunitario de ligando-receptor soluble y unido a la membrana se pueden modular utilizando anticuerpos agonistas (para las vías coestimulantes) o anticuerpos antagonistas (para las vías inhibidoras). Por lo tanto, a diferencia de la mayoría de los anticuerpos aprobados actualmente para la terapia del cáncer, los anticuerpos que bloquean los puntos de control inmunitario no se dirigen directamente a las células tumorales, sino que se dirigen a receptores de linfocitos o sus ligandos para potenciar la actividad antitumoral endógena. [Véase Pardoll, (abril de 2012) Nature Rev. Cancer 12:252-64].

Los ejemplos de puntos de control inmunitarios (ligandos y receptores), algunos de los cuales están regulados al alza de forma selectiva en diversos tipos de células tumorales, que son candidatos para el bloqueo, incluyen PD1 (proteína muerte celular programada 1); PDL1 (ligando de PD1); BTLA (atenuador de linfocitos B y T); CTLA4 (antígeno asociado a linfocitos T citotóxicos 4); HM3 (proteína 3 de membrana de linfocitos T); LAG3 (gen de activación de linfocitos 3); TIGIT (inmunorreceptor de linfocitos T con dominios Ig e ITIM); y receptores inhibidores de linfocitos NK, los cuales pueden dividirse en dos clases basándose en sus características estructurales: i) receptores de tipo inmunoglobulina de linfocitos citolíticos naturales (los KIR), y ii) receptores de lectina de tipo C (miembros de la familia de receptores transmembrana de tipo II). En la bibliografía se han descrito otros puntos de control inmunitario menos bien definidos, incluyendo tanto receptores (por ejemplo, el receptor 2B4 (también conocido como CD244)) como ligandos (por ejemplo, determinados ligandos inhibidores de la familia B7 como B7-H3 (también conocido como CD276) y B7-H4 (también conocido como B7-S1, B7x y VCTN1)). [Véase Pardoll, (abril de 2012) Nature Rev. Cancer 12:252-64].

La presente invención contempla el uso de los inhibidores de la función de la arginasa descritos en el presente documento en combinación con inhibidores de los ligandos y receptores de puntos de control inmunitarios mencionados anteriormente, así como ligandos y receptores de puntos de control inmunitarios aún por describir. Actualmente se encuentran disponibles determinados moduladores de puntos de control inmunitarios, mientras que otros están en fases finales de desarrollo. A modo ilustrativo, cuando se aprobó para el tratamiento del melanoma en 2011, el anticuerpo monoclonal CTLA4 completamente humanizado ipilimumab (YERVOY; Bristol-Myers Squibb) se convirtió en el primer inhibidor de puntos de control inmunitario en recibir aprobación reglamentaria en los EE.UU. Las proteínas de fusión que comprenden CTLA4 y un anticuerpo (Ig para CTLA4; abatcept (ORENCIA; Bristol-Myers Squibb)) se han utilizado para el tratamiento de la artritis reumatoide y se ha demostrado que otras proteínas de fusión son eficaces en pacientes con trasplante renal sensibilizados frente al virus de Epstein Barr. Se están desarrollando anticuerpos contra PD1 (por ejemplo, nivolumab (Bristol-Myers Squibb) y lambrolizumab (Merck)), y también se están evaluando anticuerpos anti-PDL1 (por ejemplo, MPDL3280A (Roche)). Nivolumab se ha mostrado prometedor en pacientes con melanoma, cáncer de pulmón y riñón.

En un aspecto de la presente invención, los inhibidores de la arginasa reivindicados se combinan con un agente inmunooncológico que es (i) un agonista de un receptor estimulante (incluido uno coestimulante) o (ii) un antagonista de una señal inhibidora (incluida una coinhibidora) en linfocitos T, dando ambos como resultado la amplificación de respuestas de linfocitos T específicos de antígeno. Determinadas moléculas estimulantes e inhibidoras son miembros de la superfamilia de las inmunoglobulinas (IgSF). Una familia importante de ligandos unidos a membrana que se unen a receptores coestimulantes o coinhibidores es la familia B7, que incluye B7-1, B7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-Dc (PD-L2), B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5 (VISTA) y B7-H6. Otra familia de ligandos unidos a membrana que se unen a receptores coestimulantes o coinhibidores es la familia TNF de moléculas que se unen a miembros de la familia del receptor de TNF análogos, que incluye CD40 y CD4OL, OX-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD3OL, 4-1BBL, CD137 (4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LT13R, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, Linfotoxina a/TNF13, TNFR2, TNFa, LT13R, Linfotoxina a 1132, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY, NGFR

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es una citocina que inhibe la activación de linfocitos T (por ejemplo, IL-6, IL-10, TGF-B, VEGF y otras citocinas inmunosupresoras) o una citocina que estimula la activación de linfocitos T, para estimular una respuesta inmunitaria.

En un aspecto, las respuestas de linfocitos T pueden estimularse mediante una combinación de los inhibidores de la arginasa divulgados y uno o más de (i) un antagonista de una proteína que inhibe la activación de linfocitos T (por ejemplo, inhibidores de puntos de control inmunitario) tal como CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, TIM-3, Galectina 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, Galectina-1, HGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1 y TIM-4, y/o (ii) un agonista de una proteína que estimula la activación de linfocitos T tal como B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, 0X40, OX4OL, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, DIG y CD2. Otros agentes que pueden combinarse con los inhibidores de la arginasa de la presente invención para el tratamiento del cáncer incluyen antagonistas de receptores inhibidores en linfocitos NK o agonistas de receptores activadores en linfocitos NK. Por ejemplo, los compuestos de la presente pueden combinarse con antagonistas de KIR, tales como lirilumab.

Otros agentes más para terapias combinadas incluyen agentes que inhiben o reducen macrófagos o monocitos, incluyendo, pero sin limitación, antagonistas de CSF-1R, tales como anticuerpos antagonistas de CSF-1R, incluyendo RG7155 (documentos W011/70024, WO 11/107553, WO11/131407, WO13/87699, WO13/119716, WO13/132044) o FPA-008 (documentos W011/140249; WO13169264; WO14/036357).

En otro aspecto, los inhibidores de la arginasa divulgados se pueden usar con uno o más agentes agonistas que se ligan a receptores coestimulantes positivos, agentes bloqueantes que atenúan la señalización a través de receptores inhibidores, antagonistas y uno o más agentes que aumentan sistémicamente la frecuencia de linfocitos T antitumorales, agentes que superan rutas supresoras inmunitarias definidas en el microambiente tumoral (por ejemplo, bloquean la interacción con receptor inhibidor (por ejemplo, interacciones PD-L1/PD-1), agotan o inhiben los Treg (por ejemplo, usando un anticuerpo monoclonal anti CD25 (por ejemplo, daclizumab) o mediante agotamiento de perlas anti CD25ex vivo),o invierten/impiden la anergia o el agotamiento de los linfocitos T) y agentes que desencadenan la activación inmunitaria innata y/o la inflamación en los sitios de tumor.

En un aspecto, el agente inmunooncológico es un antagonista de CTLA-4, tal como un anticuerpo antagonista de CTLA-4. Los anticuerpos de CTLA-4 adecuados incluyen, por ejemplo, YERVOY (ipilimumab) o tremelimumab.

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un antagonista de PD-1, tal como un anticuerpo antagonista de PD-1. Los anticuerpos de PD-1 adecuados incluyen, por ejemplo, OPDIVO (nivolumab), KEYTRUDA (pembrolizumab) o MEDI-0680 (a Mp -514; WO2012/145493). El agente inmunooncológico también puede incluir pidilizumab (CT-011), aunque su especificidad para la unión a PD-1 se ha puesto en duda. Otro enfoque para dirigirse al receptor de PD-1 es la proteína recombinante compuesta del dominio extracelular de PD-L2 (B7-DC) fusionado con la porción Fc de IgG1, denominada AMP-224.

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un antagonista de PD-L1, tal como un anticuerpo antagonista de PD-L1. Los anticuerpos de PD-L1 adecuados incluyen, por ejemplo, MPDL3280A

(RG7446; documento WO2010/077634), durvalumab (MEDI4736), BMS-936559 (documento W02007/005874) y MSB0010718C (documento W02013/79174).

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un antagonista de LAG-3, tal como un anticuerpo antagonista de LAG-3. Los anticuerpos de LAG3 adecuados incluyen, por ejemplo, BMS-986016 (documentos W010/19570, WO14/08218), o IMP-731 o IMP-321 (W008/132601, WO09/44273).

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un agonista de CD137 (4-1BB), tal como un anticuerpo agonista de CD137. Los anticuerpos de CD137 adecuados incluyen, por ejemplo, urelumab y PF-05082566 (documento W012/32433).

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un agonista de GITR, tal como un anticuerpo agonista de GITR. Los anticuerpos de GITR adecuados incluyen, por ejemplo, BMS-986153, BMS-986156, TRX-518 (documentos W006/105021, WO09/009116) y MK-4166 (documento WO11/028683).

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un agonista de OX40, tal como un anticuerpo agonista de OX40. Los anticuerpos de OX40 adecuados incluyen, por ejemplo, MEDI-6383 o MEDI-6469.

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un antagonista de OX4OL, tal como un anticuerpo antagonista de 0X40. Los antagonistas de OX4OL adecuados incluyen, por ejemplo, RG-7888 (documento W006/029879).

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un agonista de CD40, tal como un anticuerpo agonista de CD40. En otra realización más, el agente inmunooncológico es un antagonista de CD40, tal como un anticuerpo antagonista de CD40. Los anticuerpos de CD40 adecuados incluyen, por ejemplo, lucatumumab o dacetuzumab.

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un agonista de CD27, tal como un anticuerpo agonista de CD27. Los anticuerpos de CD27 adecuados incluyen, por ejemplo, varlilumab.

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es MGA271 (para B7H3) (documento W011/109400).

La presente invención abarca sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.

Enfermedades metabólicas y cardiovasculares. La presente invención proporciona compuestos para su uso en métodos para el tratamiento y/o la prevención de determinadas enfermedades, trastornos y afecciones cardiovasculares o metabólicas, así como los trastornos asociados a los mismos, con un inhibidor de la arginasa y al menos un agente terapéutico o de diagnóstico adicional.

Los ejemplos de agentes terapéuticos útiles en la terapia combinada para el tratamiento de la hipercolesterolemia (y también de la ateroesclerosis) incluyen estatinas (por ejemplo, CRESTOR, LESCOL, LPTOR, MEVAC<o>R, PRAVACOL y ZOCOR), que inhiben la síntesis enzimática del colesterol; resinas de ácido biliar (por ejemplo, COLESTID, LO-CHOLEST, PREVALITE, QUESTRAN y WELCHOL), que secuestran el colesterol e impiden su absorción; ezetimiba (ZETIA), que bloquea la absorción del colesterol; ácido fíbrico (por ejemplo, TRICOR), que reduce los triglicéridos y puede aumentar moderadamente la HDL; niacina (por ejemplo, NIACOR), que reduce moderadamente el colesterol de las LDL y los triglicéridos; y/o una combinación de los mencionados anteriormente (por ejemplo, VYTORIN (ecetimiba con simvastatina). Los tratamientos alternativos para el colesterol que pueden ser candidatos para su uso en combinación con los inhibidores de la arginasa descritos en el presente documento incluyen diversos complementos y plantas medicinales (por ejemplo, ajo, policosanol y guggul).

Trastornos inmunomediados e inflamatorios. La presente invención proporciona compuestos para su uso en métodos para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades, trastornos y afecciones relacionadas con el sistema inmunitario; y enfermedades, trastornos y afecciones que tienen un componente inflamatorio; con un inhibidor de la arginasa y al menos un agente terapéutico o de diagnóstico adicional.

Los ejemplos de agentes terapéuticos útiles en la terapia combinada incluyen, pero sin limitación, las siguientes: fármaco antinflamatorio no esteroideo (AINE) tal como aspirina, ibuprofeno y otros derivados del ácido propiónico (alminoprofeno, benoxaprofeno, ácido buclóxico, carprofeno, fenbufeno, fenoprofeno, fluprofeno, flurbiprofeno, indoprofeno, cetoprofeno, miroprofeno, naproxeno, oxaprocina, pirprofeno, pranoprofeno, suprofeno, ácido tiaprofénico y tioxaprofeno), derivados del ácido acético (indometacina, acemetacina, alclofenaco, clidanaco, diclofenaco, fenclofenaco, ácido fenclózico, fentiazaco, fuirofenaco, ibufenaco, isoxepac, oxpinaco, sulindaco, tiopinaco, tolmetina, cidometacina y zomepiraco), derivados del ácido fenámico (por ejemplo, ácido flufenámico, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, ácido niflúmico y ácido tolfenámico), derivados del ácido bifenilcarboxílico (por ejemplo, diflunisal and flufenisal), oxicámicos (isoxicam, piroxicam, sudoxicam y tenoxican), salicilatos (ácido acetilsalicílico, sulfasalacina) y pirazolonas (apazona, benzpiperilona, feprazona, mofebutazona, oxifenbutazona, fenilbutazona). Otras combinaciones incluyen inhibidores de la ciclooxigenasa-2 (COX-2).

Otros agentes activos para la combinación incluyen esteroides tales como prednisolona, prednisona, metilprednisolona, betametasona, dexametasona o hidrocortisona. Dicha combinación puede ser especialmente ventajosa ya que uno o más efectos adversos del esteroide pueden reducirse o incluso eliminarse disminuyendo gradualmente la dosis de esteroide necesaria.

Los ejemplos adicionales de agentes activos que pueden utilizarse en combinaciones para tratar, por ejemplo, artritis reumatoide, incluyen fármacos antinflamatorios supresores de citocinas (AISC); anticuerpos para, o antagonistas de, otras citocinas o factores de crecimiento humanos, por ejemplo, TNF, LT, IL-10, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-16, IL-18, EMAP-II, GM-CSF, FGF o PDGF.

Las combinaciones particulares de agentes activos pueden interferir en distintos puntos de la cascada autoinmunitaria e inflamatoria posterior, e incluyen antagonistas del TNF tales como anticuerpos para TNF quiméricos, humanizados o humanos, REMICADE, fragmentos de anticuerpo anti-TNF (por ejemplo, CDP870) y receptores de TNF p55 o p75 solubles, derivados de los mismos, p75TNFRIgG (ENBREL.) o p55TNFRlgG (LENERCEPT), receptor de IL-13 soluble (sIL-13) y también inhibidores de la enzima convertidora de TNFa (TACE); de manera similar, Los inhibidores de IL-1 (por ejemplo, inhibidores de la enzima convertidora de interleucina-1) pueden ser eficaces. Otras combinaciones incluyen interleucina 11, anti-P7s y ligando de glicoproteína de p-selectina (PSGL). Otros ejemplos de agentes útiles en combinación con los inhibidores de la arginasa descritos en el presente documento incluyen interferón-131a (AVONEX); interferón-131b (BETASERON); copaxone; oxígeno hiperbárico; inmunoglobulina intravenosa; clabribina; y anticuerpos para, o antagonistas de, otras citocinas o factores de crecimiento humanos (por ejemplo, anticuerpos contra el ligando de CD40 y CD80).

Enfermedades microbianas. La presente invención proporciona compuestos para su uso en métodos para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades, trastornos y afecciones víricas, bacterianas, fúngicas y parasitarias, así como los trastornos asociados a los mismos, con un inhibidor de la arginasa y al menos un agente terapéutico o de diagnóstico adicional (por ejemplo, uno o más de otros agentes antivíricos y/o uno o más agentes no asociados con la terapia vírica).

Dicha terapia combinada incluye agentes antivíricos dirigidos a diversas fases del ciclo de vida vírico y que tienen distintos mecanismos de acción, incluyendo, pero sin limitación, las siguientes: inhibidores de la eliminación de la cubierta vírica (por ejemplo, amantadina y rimantidina); inhibidores de la transcriptasa inversa (por ejemplo, aciclovir, zidovudina y lamivudina); agentes que se dirigen a la integrasa; agentes que bloquean la unión de factores de transcripción al ADN vírico; agentes (por ejemplo, moléculas antisentido) que afectan la traducción (por ejemplo, fomivirsen); agentes que modulan la función de la traducción/ribozima; inhibidores de proteasas; moduladores de ensamblaje vírico (por ejemplo, rifampicina); antirretrovíricos tales como, por ejemplo, inhibidores de la transcriptasa inversa análogos de nucleósidos (por ejemplo, azidotimidina (AZT), ddl, ddC, 3TC, d4T); inhibidores de la transcriptasa inversa no nucleosídicos (por ejemplo, efavirenz, nevirapina); inhibidores de la transcriptasa inversa análogos de nucleótidos; y agentes que impiden la liberación de partículas víricas (por ejemplo, zanamivir y oseltamivir). El tratamiento y/o la prevención de determinadas infecciones víricas (por ejemplo, VIH) implica con frecuencia un grupo ("cóctel") de agentes antivíricos.

Otros agentes antivíricos contemplados para su uso en combinación con un inhibidor de la arginasa incluyen, pero sin limitación, las siguientes: abacavir, adefovir, amantadina, amprenavir, ampligen, arbidol, atazanavir, atripla, boceprevirertet, cidofovir, combivir, darunavir, delavirdina, didanosina, docosanol, edoxudina, emtricitabina, enfuvirtida, entecavir, famciclovir, fosamprenavir, foscarnet, fosfonet, http://en.wikipedia.org/wiki/Fusion_inhibitor ganciclovir, ibacitabina, imunovir, idoxuridina, imiquimod, indinavir, inosina, diversos interferones (por ejemplo, peginterferón alfa-2a), lopinavir, lovirida, maraviroc, moroxidina, metisazona, nelfinavir, nexavir, penciclovir, peramivir, pleconarilo, podofilotoxina, raltegravir, ribavirina, ritonavir, piramidina, saquinavir, estavudina, telaprevir, tenofovir, tipranavir, trifluridina, trizivir, tromantadina, truvada, valaciclovir, valganciclovir, vicriviroc, vidarabina, viramidina y zalcitabina.

La presente invención contempla el uso de los inhibidores de la función de la arginasa descritos en el presente documento en combinación con agentes antiparasitarios. Dichos agentes incluyen, pero sin limitación, tiabendazol, pamoato de pirantel, mebendazol, pracicuantel, niclosamida, bitionol, oxamniquina, metrifonato, ivermectina, albendazol, eflornitina, melarsoprol, pentamidina, benznidazol, nifurtimox y nitroimidazol. El experto en la materia conoce otros agentes que pueden resultar útiles para el tratamiento de trastornos parasitarios.

Las realizaciones de la presente invención contemplan el uso de los inhibidores de la arginasa descritos en el presente documento en combinación con agentes útiles en el tratamiento o la prevención de trastornos bacterianos. Los agentes antibacterianos pueden clasificarse de diversas maneras, incluyendo en base al mecanismo de acción, en base a la estructura química y en base al espectro de actividad. Los ejemplos de agentes antibacterianos incluyen los que se dirigen a la pared celular bacteriana (por ejemplo, cefalosporinas y penicilinas) o la membrana celular (por ejemplo, polimixinas), o que interfieren con enzimas bacterianas esenciales (por ejemplo, sulfonamidas, rifamicinas y quinolinas). La mayoría de los agentes antibacterianos que se dirigen a la síntesis de proteínas (por ejemplo, tetraciclinas y macrólidos) son bacteriostáticos, mientras que agentes tales como el aminoglucósido son bactericidas. Otro medio de categorizar los agentes antibacterianos se basa en su especificidad de diana; los agentes de "espectro estrecho" se dirigen a tipos específicos de bacterias (por ejemplo, bacterias grampositivas tales comoStreptococcus),mientras que los agentes de "amplio espectro" tienen actividad contra una gama más amplia de bacterias. El experto en la materia conoce los tipos de agentes antibacterianos que son apropiados para su uso en infecciones bacterianas específicas.

Las realizaciones de la presente invención contemplan el uso de los inhibidores de la arginasa descritos en el presente documento en combinación con agentes útiles en el tratamiento o la prevención de trastornos fúngicos. Los agentes antifúngicos incluyen polienos (por ejemplo, anfotericina, nistatina y pimaricina); azoles (por ejemplo, fluconazol, itraconazol y cetoconazol); alilaminas (por ejemplo, naftifina y terbinafina) y morfolinas (por ejemplo, amorolfina); y antimetabolitos (por ejemplo, 5-fluorocitosina).

La presente invención abarca sales, ácidos o derivados de los agentes (y miembros de las clases de agentes) indicados anteriormente farmacéuticamente aceptables.

Dosificación

Los inhibidores de la arginasa de la presente invención pueden administrarse a un sujeto en una cantidad que depende de, por ejemplo, el objetivo de la administración (por ejemplo, el grado de resolución deseado); la edad, peso, el sexo, la salud y el estado físico del sujeto al que se administra la formulación; la vía de administración; y la naturaleza de la enfermedad, trastorno, afección o síntoma de los mismos. El régimen de dosificación también puede tener en cuenta la existencia, naturaleza y alcance de cualquier efecto adverso asociado con el/los agente(s) que se administra(n). Las cantidades de dosificación y los regímenes de dosificación eficaces pueden determinarse fácilmente a partir de, por ejemplo, ensayos de seguridad y aumento de la dosis, estudiosin vivo(por ejemplo, modelos animales) y otros métodos conocidos por el experto.

En general, los parámetros de dosificación dictan que la cantidad de dosificación sea menor que una cantidad que podría ser irreversiblemente tóxica para el sujeto (la dosis máxima tolerada (DMT)) y no menor que la cantidad necesaria para producir un efecto medible en el sujeto. Dichas cantidades se determinan mediante, por ejemplo, los parámetros farmacocinéticos y farmacodinámicos asociados con la ADME, teniendo en cuenta la vía de administración y otros factores.

Una dosis eficaz (DE) es la dosis o cantidad de un agente que produce una respuesta terapéutica o el efecto deseado en alguna fracción de los sujetos que lo toman. La "dosis media eficaz" o DE50 de un agente es la dosis o cantidad de un agente que produce una respuesta terapéutica o un efecto deseado en el 50 % de la población a la cual se le administra. Aunque la DE50 se utiliza comúnmente como una medida de expectativa razonable del efecto de un agente, no es necesariamente la dosis que un médico podría considerar apropiada teniendo en cuenta todos los factores pertinentes. Por lo tanto, en algunas situaciones, la cantidad eficaz es mayor que la DE50 calculada, en otras situaciones, la cantidad eficaz es menor que la DE50 calculada y, en aún otras situaciones, la cantidad eficaz es la misma que la DE50 calculada.

Además, una dosis eficaz de los inhibidores de la arginasa de la presente invención puede ser una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un sujeto, produce un resultado deseado con respecto a un sujeto sano.

Por ejemplo, para un sujeto que padece un trastorno en particular, una dosis eficaz puede ser una que mejora un parámetro de diagnóstico, medida, marcador y similares del trastorno en al menos aproximadamente el 5 %, al menos aproximadamente el 10%, al menos aproximadamente el 20%, al menos aproximadamente el 25%, al menos aproximadamente el 30 %, al menos aproximadamente el 40 %, al menos aproximadamente el 50 %, al menos aproximadamente el 60 %, al menos aproximadamente el 70 %, al menos aproximadamente el 80 %, al menos aproximadamente el 90 %, o más del 90%, donde el 100 % se define como el parámetro de diagnóstico, m marcador, y similares, presentados por un sujeto normal.

En determinadas realizaciones, los inhibidores de la arginasa contemplados por la presente invención pueden administrarse (por ejemplo, por vía oral) a niveles de dosificación de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente

50 mg/kg, o de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 25 mg/kg, de peso corporal del sujeto por día, una o más veces al día, para obtener el efecto terapéutico deseado.

Para la administración de un agente oral, las composiciones pueden proporcionarse en forma de comprimidos, cápsulas, y similares, que contengan de 1,0 a 1000 miligramos del principio activo, particularmente 1,0, 3,0, 5,0, 10,0,

15,0, 20,0, 25,0, 50,0, 75,0, 100,0, 150,0, 200,0, 250,0, 300,0, 400,0, 500,0, 600,0, 750,0, 800,0, 900,0 y 1000,0 miligramos del principio activo.

En determinadas realizaciones, la dosificación del inhibidor de la arginasa deseado está contenida en una "forma farmacéutica unitaria". La expresión "forma farmacéutica unitaria" se refiere a unidades físicamente discretas, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada del inhibidor de la arginasa, ya sea solo o en combinación con uno o más de principios activos adicionales, suficiente para producir el efecto deseado. Se apreciará que los parámetros de una forma farmacéutica unitaria dependerán del agente particular y del efecto a conseguir.

Kits

La presente invención también contempla kits que comprenden un compuesto descrito en el presente documento y composiciones farmacéuticas del mismo. Los kits generalmente están en forma de una estructura física que aloja diversos componentes, como se describe a continuación, y pueden utilizarse, por ejemplo, en la práctica de los métodos descritos anteriormente.

Un kit puede incluir uno o más de los compuestos divulgados en el presente documento (proporcionados en, por ejemplo, un recipiente estéril), que pueden estar en forma de una composición farmacéutica adecuada para la administración a un sujeto. Los compuestos descritos en el presente documento se pueden proporcionar en una forma que esté lista para su uso (por ejemplo, un comprimido o cápsula) o en una forma que precise, por ejemplo, la reconstitución o dilución (por ejemplo, un polvo) antes de la administración. Cuando los compuestos descritos en el presente documento están en una forma que necesita ser reconstituida o diluida por un usuario, el kit puede incluir también diluyentes (por ejemplo, agua estéril), tampones, excipientes farmacéuticamente aceptables y similares, envasados con o por separado de los compuestos descritos en el presente documento. Cuando se contempla una terapia combinada, el kit puede contener los distintos agentes por separado o ya pueden estar combinados en el kit.

Cada componente del kit puede estar contenido dentro de un recipiente individual y todos los diversos recipientes pueden estar dentro de un solo envase. Un kit de la presente divulgación puede estar diseñado para las condiciones necesarias para mantener apropiadamente los componentes alojados en el mismo (por ejemplo, refrigeración o congelación).

Un kit puede contener una etiqueta o un prospecto de envase que incluya información identificativa de los componentes del mismo e instrucciones para su uso (por ejemplo, los parámetros de dosificación, la farmacología clínica del/de los principio(s) activo(s), incluyendo el mecanismo de acción, la farmacocinética y la farmacodinámica, los efectos adversos, contraindicaciones, etc.). Las etiquetas o prospectos incluyen información del fabricante, tal como números de lote y fechas de caducidad. La etiqueta o el prospecto puede estar, por ejemplo, integrado en la estructura física que aloja los componentes, contenidos por separado dentro de la estructura física o incluidos en un componente del kit (por ejemplo, una ampolla, tubo o vial).

Las etiquetas o prospectos incluyen adicionalmente, o se incorporan en, un medio legible por ordenador, tal como un disco (por ejemplo, disco duro, tarjeta, disco de memoria), disco óptico tal como CD o DVD-ROM/RAM, DVD, MP3, cinta magnética o un medio de almacenamiento eléctrico, tal como una RAM y ROM o híbridos de estos tales como medios de almacenamiento magnéticos/ópticos, medios FLASH o tarjetas de memoria. En algunas realizaciones, las instrucciones propiamente dichas no están presentes en el kit, pero se proporcionan medios para obtener las instrucciones de una fuente remota, por ejemplo, a través de Internet.

Parte experimental

Los siguientes ejemplos se presentan para proporcionar a los expertos en la materia una divulgación y descripción completas de cómo preparar y usar la presente invención, y no se pretende que limiten el alcance de lo que los presentes inventores consideran su invención, ni pretenden representar que se realizaron los experimentos a continuación o que los mismos son todos los experimentos que se pueden realizar. Ha de entenderse que las descripciones ilustrativas escritas en tiempo presente no se realizaron necesariamente, sino más bien que las descripciones se pueden realizar para generar datos y similares de una naturaleza descrita en las mismas. Se ha intentado garantizar la precisión con respecto a los números utilizados (por ejemplo, cantidades, temperatura, etc.), pero deben tenerse en cuenta algunos errores y desviaciones experimentales.

A menos que se indique lo contrario, las partes son partes en peso, el peso molecular es peso molecular promedio en peso, la temperatura está en grados Celsius (°C) y la presión es igual o cercana a la atmosférica. Se utilizan abreviaturas convencionales, que incluyen las siguientes: ts = tipo silvestre; pb = par(es) de bases; kb = kilobase(s); nt = nucleótido(s); aa = aminoácido(s); s = segundo(s); min = minuto (minutos); h = hora(s); ng = nanogramo; |jg = microgramo; mg = miligramo; g = gramo; kg = kilogramo; dl = decilitro; pl = microlitro; ml = mililitro; l = litro; pM = micromolar; mM = milimolar; M = molar; kDa = kilodalton; i.m. = (por vía) intramuscular; i.p. = (por vía) intraperitoneal; s.c. o SQ = subcutáneo (por vía subcutánea); QD = diario; BID = dos veces al día; QW = semanal; QM = mensual; HPLC = cromatografía de líquidos de alto rendimiento; PC = peso corporal; U = unidad; ns = no estadísticamente significativo; PBS = solución salina tamponada con fosfato; iHq = inmunohistoquímica; DMEM = modificación de Dulbecco del medio de Eagle; EDTA = ácido etilendiaminotetraacético.

Materiales y métodos

Se utilizaron los siguientes materiales y métodos, cuando se indique, o pueden utilizarse en los siguientes Ejemplos:

Los métodos convencionales de biología molecular se describen en la bibliografía científica (véanse, por ejemplo, Sambrook y Russell (2001) Molecular Cloning, 3.a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; y Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, vol. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. Nueva York, N.Y., que describe la clonación en células bacterianas y la mutagénesis de ADN (vol. 1), la clonación en células de mamífero y levadura (vol. 2), glucoconjugados y expresión de proteínas (vol. 3) y bioinformática (vol. 4)).

La bibliografía científica describe métodos para la purificación de proteínas, incluida la inmunoprecipitación, cromatografía, electroforesis, la centrifugación y la cristalización, así como el análisis químico, la modificación química, modificación postraduccional, la producción de proteínas de fusión y la glucosilación de proteínas (véase, por ejemplo, Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, vol. 1-2, John Wiley and Sons, Inc., NY).

Se encuentran disponibles paquetes de programa informático y bases de datos para determinar, por ejemplo, fragmentos antigénicos, secuencias líder, plegamiento de proteínas, dominios funcionales, sitios de glucosilación y alineamientos de secuencias (véase, por ejemplo, GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA); y DeCypherTM (TimeLogic Corp., Crystal Bay, NV).

En la bibliografía hay muchos ensayos y otras técnicas experimentales que pueden servir como base para la evaluación de los compuestos descritos en el presente documento. A modo de ejemplo, pueden utilizarse ensayos de unión de ligandos basados en espectrometría de masas (véase, por ejemplo, Massink, A. et al. Purinergic Signaling (2015) 11: 581. Https://doi.org/10.1007/s11302-015-9477-0; Dionisotti S. y col. J Pharmacol Exp Ther. (1996) 298: 726-732) para determinar diversas propiedades de los compuestos de la presente invención.

También se pueden emplear ensayos funcionales para evaluar los compuestos de la presente invención.

Ejemplos

Métodos generales:

Los expertos en la materia reconocerán que hay una variedad de métodos disponibles para preparar moléculas representadas en las reivindicaciones.

Se ha usado una variedad de los métodos descritos anteriormente para preparar compuestos de la invención, algunos de los cuales se ejemplifican en los ejemplos. Las formas deuteradas de los ejemplos a continuación pueden sintetizarse usando intermedios deuterados apropiados.

Ejemplo 1: Ácido rac-(1R,2S)-1-Amino-4-(aminometil)-2-[3-(dihidroxiboranil) propil]-2,3-dihidro-1H-indeno-1-carboxílico

Etapa 1: A una suspensión de 4-cianoindanona (14,6 g, 93,3 mmol) en THF anhidro (310 ml) a -78 °C se añadió LiHMDS (1 M en THF, 93,3 ml) gota a gota. La solución se agitó a -78 °C durante 30 min. En este punto, se añadió lentamente yoduro de alilo (17 ml, 186 mmol, 2 equiv.). Posteriormente, la reacción se agitó a -78 °C durante 3 h antes de calentarse gradualmente a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se inactivó mediante la adición de solución de NH4Cl saturado (70 ml) y H2O (100 ml), seguido de extracción en EtOAc (x2). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para dar un residuo en bruto que se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 10 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar el producto en forma de un aceite de color amarillo (5,75 g, 31 %). ESI MS [M+H]+ para C13H12NO, calc. 198,1, encontrado 198,2.

Etapa 2: El producto de la Etapa 1 (5,75 g, 29 mmol) se disolvió en etanol acuoso al 50 % (44 ml) y (NH4)2CO3 (20 g, 115 mmol, 4 equiv.) seguido de KCN (3,79 g, 58 mmol, 2 equiv.). La mezcla de reacción se calentó a 80 °C en un tubo de presión durante 36 h. Después del enfriamiento a temperatura ambiente, se añadió HCl 4 N lentamente hasta que se alcanzó un pH de 3. En este punto, la mezcla de reacción en bruto se concentró al vacío y se añadió EtOAc (400 ml). La capa orgánica se separó, y la capa acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc (300 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para dar un residuo en bruto que se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 70 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un aceite de color amarillo (5,0 g, 1,5:1 dr, 64 %). ESI MS [M+H]+ para C15H14N3O2, calc. 268,1, encontrado 268,0.

Etapa 3: A una solución del producto de la Etapa 2 (4,5 g, 1,5:1 dr, 16,8 mmol) en THF (125 ml) se añadió EtsN (2,5 ml, 18,1 mmol, 1,1 equiv.) y Boc2O (18,3 g, 83,9 mmol, 5 equiv.) seguido de d Ma P catalítico (0,41 g, 3,4 mmol, 20 % en moles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. En este punto, la mezcla de reacción se concentró al vacío para dar un residuo en bruto que se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 25 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar el diastereoisómero deseado en forma de un aceite incoloro (2,6 g, 33 %). ESI MS [M-Boc+H]' para C20H21N3O4, calc. 367,1, encontrado 367,2.

Etapa 4: El producto de la Etapa 3 (2,6 g, 5,55 mmol) se disolvió en DME (50 ml) y NaOH 1 N (50 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h, momento en el que la reacción se redujo al vacío (para retirar el DME) y la solución resultante se lavó con CH2Ch (15 ml). La capa acuosa se neutralizó posteriormente a pH 7 usando HCl 10 N y se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. ESI MS [M+H]+ para C14H15N2O2, calc. 243,1, encontrado 243,0.

Etapa 5: A la mezcla de reacción bruta de la Etapa 4 se le añadió NaHCO3 hasta pH 10, seguido de THF (25 ml) y BoC2O (12,1 g, 55,5 mmol). La mezcla resultante se calentó a 60 °C durante 16 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se redujo al vacío (para retirar el THF) y posteriormente se lavó con CH2Ch (15 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se acidificó a pH 3 antes de la extracción en EtOAc (x 3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para dar un residuo en bruto que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. ESI Ms [M-H]- para C19H21N2O4, calc. 341,2, encontrado 341,0.

Etapa 6: A una solución del producto en bruto de la Etapa 5 en MeCN (6 ml) se añadió Cs2CO3 (1,53 g, 11,1 mmol) y BnBr (0,79 ml, 6,66 mmol). La reacción se calentó a 50 °C durante 1 h, momento en el que el disolvente se concentró al vacío para dar un residuo en bruto que se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 10 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un aceite incoloro (0,7 g, 30 % a lo largo de 2 etapas). ESI MS [M-Boc+H2]+ para C21H21N2O2, calc. 333,2, encontrado 333,2.

Etapa 7: Una solución de [Ir(cod)Cl]2 (43,5 mg, 0,065 mmol, 4 % en moles) y 1,2-bis(difenilfosfino)etano (51,8 mg, 0,13 mmol, 8 % en moles) en CH2Ch desgasificado (3,2 ml) en atmósfera de nitrógeno se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. En este punto, la reacción se enfrió a 0 °C y se añadió una solución del producto de la Etapa 6 (700 mg, 1,62 mmol) en C ^ C h desgasificado (2,0 ml), seguido de la adición gota a gota de pinacolborano (0,35 ml, 2,4 mmol, 1,5 equiv.) y la reacción se calentó inmediatamente a temperatura ambiente y se agitó durante 1,5 h adicionales. En este punto, la reacción se inactivó mediante la adición gota a gota de H2O frío (1 ml), seguido de una adición adicional de H2O (10 ml) y EtOAc (20 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para dar un residuo en bruto que se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 40 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un aceite incoloro (725 mg, 81 %). ESI MS [M-Boc+H2]+ para C27H34BN2O4, calc. 461,3, encontrado 461,2.

Etapa 8: A una solución del producto de la Etapa 7 (210 mg, 0,38 mmol) en MeOH (3 ml) en un recipiente con agitador Parr se añadió Ni Raney (suspensión en H2O, 0,16 ml). El recipiente se vació, se rellenó con H2 (x3) y se dejó en el agitador Parr (presión de H2: 345 kPa [50 psi]) durante 24 h. En este punto, la reacción se filtró cuidadosamente sobre Celite húmedo y la torta de filtración se lavó a fondo con una mezcla de CHCh/EtOAc. El disolvente se concentró al vacío para dar un residuo en bruto que se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, CH2Ch ^ 15 % de MeOH en CH2Ch, 1 % de vol de aditivo de NH4OH) para proporcionar el producto deseado en forma de una espuma de color blanco (30 mg, 17 %). ESI MS [M+H]+ para C26H36BN2O6, calc. 483,1, encontrado 483,2.

Etapa 9: En un vial de centelleo de 40 ml equipado con un tabique, el producto de la Etapa 8 (30 mg, 0,062 mmol) se disolvió en MeOH (3 ml) y la reacción se colocó en una atmósfera de nitrógeno inerte. Se añadió Pd/C (10 % en peso, 16 mg) y el vial se vació y se rellenó con nitrógeno (x3) antes de la introducción de H2 (101 kPa [1 atm]). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. En este punto, la mezcla de reacción se filtró pasando a través de un filtro de jeringa de 0,45 pm que se lavó a fondo con MeOH. El disolvente se concentró al vacío para dar el producto deseado en forma de una espuma de color blanco (24,3 mg, cuant.). El producto se usó tal cual en la siguiente etapa sin purificación adicional. ESI MS [M+H]+ para C19H30BN2O6, calc. 393,2, encontrado 393,2.

Etapa 10: El producto de la Etapa 9 (24,3 mg, 0,062 mmol) se suspendió en HCl 4 N en dioxano (2 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El disolvente se retiró al vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (22,4 mg, cuant.). 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,56 - 7,10 (m, 3H), 4,20 (s, 2H), 3,41 - 3,33 (m, 1H), 2,84 - 2,74 (m, 1H), 2,66 -2,52 (m, 1H), 1,81 - 1,72 (m, 1H), 1,67 - 1,58 (m, 1H), 1,57 - 1,36 (m, 2H), 0,95-0,76 (m, 2H). ESI MS [M+H]+ para C14H22BN2O4, calc. 293,2, encontrado 293,8.

Ejemplo 2: Ácido rac-(1R)-6-(Aminometil)-2-[3-(dihidroxiboranil)propil]-1-(metilamino)- 2,3-dihidro-1H-indeno-1-carboxílico

El compuesto del título se sintetizó de una manera similar al Ejemplo 1. RMN de 1H (400 MHz, D2O) 87,68-7,65 (m, 2H), 7,43 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,29 (dd,J =16,8, 8,1 Hz, 1H), 2,81 (dd, J = 16,7, 10,0 Hz, 1H), 2,69 -2,56 (m, 1H), 1,69 -1,57 (m, 1H), 1,54 -1,41 (m, 1H), 1,34 (cd, J = 12,9, 7,7 Hz, 2H), 0,70 (ddt, J = 20,2, 15,4, 7,4 Hz, 2H). ESI MS [M+H]+ para C14H17BN2O4, calc. 289,1, encontrado 289,0.

Ejemplo 3: Ácido rac-(1R,2S)-1-Am¡no-6-(am¡nomet¡l)-2-[3-(d¡h¡drox¡boran¡l) prop¡l]-2,3-d¡h¡dro-1H-¡ndeno-1-carboxílico

El compuesto del título se s¡ntet¡zó de una manera s¡m¡lar al Ejemplo 1. 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,42-7,40 (m, 2H), 7,36 (t, J = 1,1 Hz, 1H), 4,16 (s, 2H), 3,31 (dd, J = 16,0, 8,2 Hz, 1H), 2,79 (dd, J = 16,0; 9,8 Hz, 1H), 2,65 - 2,52 (m, 1H), 1,79 - 1,67 (m, 1H), 1,60 (ct, J = 12,0, 6,8 Hz, 1H), 1,54 - 1,37 (m, 2H), 0,91-0,75 (m, 2H). ESI MS [M+H]+ para C14H21BN2O4, calc. 293,2, encontrado 293,2.

Ejemplo 4: Ác¡do rac-(1R,2S)-1-Am¡no-5-(am¡nomet¡l)-2-[3-(d¡h¡drox¡boran¡l) prop¡l]-2,3-d¡h¡dro-1H-¡ndeno-1-carboxíl¡co

El compuesto del título se s¡ntet¡zó de una manera s¡m¡lar al Ejemplo 1. 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,29 - 7,23 (m, 2H), 7,22 - 7,12 (m, 1H), 4,03 (s, 2H), 3,17 (dd, J = 16,0, 8,2 Hz, 1H), 2,68 (dd, J = 16,0, 9,9 Hz, 1H), 2,58 - 2,35 (m, 1H), 1,69 - 1,53 (m, 1H), 1,53 - 1,40 (m, 1H), 1,39 - 1,21 (m, 2H), 0,71 - 0,65 (m, 2H). ESI MS [M+H]+ para C14H22BN2O4, calc. 293,1, encontrado 293,2.

Ejemplo 5: Ác¡do rac-(1R,2S)-1-Am¡no-2-[3-(d¡h¡drox¡boran¡l)prop¡l]-6-metox¡-2,3-d¡h¡dro-1H-¡ndeno-1-carboxíl¡co

El compuesto del título se s¡ntet¡zó de una manera s¡m¡lar al Ejemplo 1. 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,29 - 7,25 (m, 1H), 6,99 -6,93 (m, 2H), 3,80 (d, J = 0,4 Hz, 3H), 3,21 (dd, J = 15,3, 8,1 Hz, 1H), 2,70 (dd,J =15,2, 9,7 Hz, 1H), 2,59 -2,49 (m, 1H), 1,72 (ddd,J =10,2, 8,0, 4,8 Hz, 1H), 1,64 - 1,50 (m, 1H), 1,50 - 1,35 (m, 2H), 0,83 (tc, J = 15,1, 8,7, 7,5 Hz, 2H). ESI MS [M-(0H)2]+ para C14H20BNO5, calc. 259,1, encontrado 259,1.

Ejemplo 6: Ác¡do rac-(1R,2S)-1-Am¡no-6-cloro-2-[3-(d¡h¡drox¡boran¡l)prop¡l]-2,3-d¡h¡dro-1H-¡ndeno-1-carboxíl¡co

El compuesto del título se s¡ntet¡zó de una manera s¡m¡lar al Ejemplo 1. 1H RMN (400 MHz, D2O) 86,93 - 6,91 (m, 1H), 6,90 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,84 (dd,J =8,0, 0,8 Hz, 1H), 2,80 (dd, J = 14,9; 7,0 Hz, 1H), 2,33 -2,16 (m, 2H), 1,29 -1,16 (m, 1H), 1,13 -1,00 (m, 1H), 1,00 - 0,84 (m, 2H), 0,40 - 0,20 (m, 2H). ESI MS [M+H]+ para C13H17BCINO4, calc. 298,1, encontrado 298,0.

Ejemplo7:Ácido (1R,2S)-1-Am¡no-2-[3-(d¡h¡drox¡boran¡l)prop¡l]-2,3-d¡h¡dro-1H-¡ndeno-1-carboxílico

El compuesto del título se s¡ntet¡zó de una manera s¡m¡lar al Ejemplo 1. RMN de 1H (400 MHz, D2O) 87,39-7,25 (m, 4H), 3,27 (dd, J = 15,8, 8,3 Hz, 1H), 2,77 (dd, J = 15,8, 9,7 Hz, 1H), 2,58 - 2,46 (m, 1H), 1,78 - 1,66 (m, 1H), 1,66 -1,53 (m, 1H), 1,53 - 1,37 (m, 2H), 0,91 -0,72 (m, 2H). ESI MS [M+H]+ para C13H18BNO4, calc. 264,1, encontrado 264,1.

Ejemplo 8: Ác¡do rac-(1R,2S)-4-(Am¡nomet¡l)-2-[3-(d¡h¡drox¡boran¡l)prop¡l]-1- (metilam¡no)-2,3-d¡h¡dro-1H-¡ndeno-1-carboxíl¡co

Etapa 1: A una suspens¡ón de éster bencíl¡co (170 mg, 0,39 mmol) en THF anh¡dro (1,7 ml) a 0 °C se añad¡ó NaHMDS (1 M en THF, 0,43 ml, 1,1 equ¡v.) gota a gota. La soluc¡ón se agitó a 0 °C durante 15 m¡n. En este punto, se añad¡ó lentamente yoduro metano (50 ml, 0,79 mmol, 2 equ¡v.). La reacc¡ón se calentó gradualmente a temperatura amb¡ente durante la noche. La reacc¡ón se ¡nact¡vó med¡ante la ad¡c¡ón de soluc¡ón de NH4Cl saturado (10 ml), segu¡do de extracc¡ón en EtOAc (2 x 20 ml). La capa orgán¡ca comb¡nada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para dar un res¡duo en bruto que se pur¡f¡có por cromatografía en columna (gel de síl¡ce, hex ^ 10 % de EtOAc en hexanos) para proporc¡onar el producto deseado en forma de un ace¡te ¡ncoloro (130 mg, 69 %). ESI MS [M-Boc+H]+ para C22H23N2O2, calc. 347,2, encontrado 347,2.

Etapa 2: Una soluc¡ón de [Ir(cod)Cl]2 (7,4 mg, 0,011 mmol, 4 % en moles) y 1,2-b¡s(d¡fen¡lfosf¡no)etano (8,7 mg, 0,022 mmol, 8 % en moles) en CH2Ch desgas¡f¡cado (0,8 ml) en atmósfera de n¡trógeno se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 30 m¡n. En este punto, la reacc¡ón se enfr¡ó a 0 °C y se añad¡ó una soluc¡ón del producto de la Etapa 1 (130 mg, 0,27 mmol) en C ^ C h desgas¡f¡cado (0,7 ml), segu¡do de la ad¡c¡ón gota a gota de p¡nacolborano (80 pl, 0,55 mmol, 2 equ¡v.) y la reacc¡ón se calentó ¡nmed¡atamente a temperatura amb¡ente y se agitó durante 1,5 h ad¡c¡onales. En este punto, la reacc¡ón se ¡nact¡vó med¡ante la ad¡c¡ón gota a gota de H2O frío (1 ml), segu¡do de una ad¡c¡ón ad¡c¡onal de H2O (10 ml) y EtOAc (20 ml). La capa orgán¡ca se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para dar un res¡duo en bruto que se pur¡f¡có por cromatografía en columna (gel de síl¡ce, hex ^ 35 % de EtOAc en hexanos) para proporc¡onar el producto deseado en forma de un ace¡te ¡ncoloro (70 mg, 46 %). ESI MS [M-Boc+H2]+ para C28H36BN2O4, calc. 475,3, encontrado 475,3.

Etapa 3: En un vial de centelleo de 40 ml equ¡pado con un tab¡que, el producto de la Etapa 2 (70 mg, 0,013 mmol) se d¡solv¡ó en MeOH (3 ml) y la reacc¡ón se colocó en una atmósfera de n¡trógeno ¡nerte. Se añad¡ó Pd/C (10 % en peso, 13 mg) y el vial se vac¡ó y se rellenó con n¡trógeno (x3) antes de la ¡ntroducc¡ón de H2 (101 kPa [1 atm]). La reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 16 h. En este punto, la mezcla de reacc¡ón se f¡ltró pasando a través de un f¡ltro de jer¡nga de 0,45 pm que se lavó a fondo con MeOH. El d¡solvente se concentró al vacío para dar el producto deseado en forma de una espuma de color blanco (61 mg, cuant.). El producto se usó tal cual en la s¡gu¡ente etapa s¡n pur¡f¡cac¡ón ad¡c¡onal. ESI MS [M-Boc+H]+ para C21H34BN2O4, calc. 389,3, encontrado 389,2.

Etapa 4: El producto de la Etapa 3 (61 mg, 0,013 mmol) se suspend¡ó en HCl 4 N en d¡oxano (1,5 ml) y HCl ac. 4 N. La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 2,5 h. El d¡solvente se retiró al vacío a un res¡duo en bruto que se purificó por RP-HPLC (0 a 10 % de gradiente de acetonitrilo y agua) para dar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco (22 mg, 46 %). NMR 1H (400 MHz, D2O) 87,53 - 7,22 (m, 3H),4,20 (s, 2H), 3,49 3,40 (m, 1H), 2,97 - 2,67 (m, 2H), 2,51 (s, 3H), 1,75 - 1,55 (m, 2H), 1,56 - 1,37 (m, 2H), 0,90-0,74 (m, 2H). ESI MS [M-H] para C15H22BN2O4, calc. 305,2, encontrado 305,0.

Ejemplo 9: Ácido rac-(1R,2S)-5-(Am¡nomet¡l)-2-[3-(d¡h¡drox¡boran¡l)prop¡l]-1- (met¡lam¡no)-2,3-d¡h¡dro-1H-¡ndeno-1-carboxílico

El compuesto del título se s¡ntet¡zó de una manera s¡m¡lar al Ejemplo 8. 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,27 (s, 1H), 7,21 (s, 2H), 4,03 (s, 2H), 3,27 - 3,17 (m, 1H), 2,67 (dd, J = 15,8, 8,3 Hz, 1H), 2,62 - 2,53 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 1,58 - 1,39 (m, 2H), 1,38 - 1,23 (m, 2H), 0,77-0,58 (m, 2H). ESI MS [M+H]+ para C15H24BN2O4, calc. 307,2, encontrado 307,2.

Ejemplo 10: Ác¡do rac-(1R)-6-(Am¡nomet¡l)-2-[3-(d¡h¡drox¡boran¡l)prop¡l]-1- (met¡lam¡no)-2,3-d¡h¡dro-1H-¡ndeno-1-carboxíl¡co

El compuesto del título se s¡ntet¡zó de una manera s¡m¡lar al Ejemplo 8. 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,44 (d,J= 1,1 Hz, 2H), 7,33 (s, 1H), 4,17 (s, 2H), 3,37 (dd,J =16,2, 8,1 Hz, 1H), 2,81 (dd, J = 16,1; 8,0 Hz, 1H), 2,75 -2,66 (m, 1H), 2,51 (s, 3H), 1,70 - 1,52 (m, 2H), 1,53-1,35 (m, 2H), 0,82 (tt, J = 15,8, 8,0 Hz, 2H). ESI MS [M+H]+ para C15H24BN2O4, calc.

307,2, encontrado 307,2.

Ejemplo 11: Ác¡do rac-(1R,2S)-2-[3-(D¡h¡drox¡boran¡l)prop¡l]-1-(met¡lam¡no)-4-[(met¡lam¡no)met¡l]- 2,3-d¡h¡dro-1H-¡ndeno-1-carboxíl¡co

El compuesto del título se s¡ntet¡zó de una manera s¡m¡lar al Ejemplo 8. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 87,70 - 7,15 (m, 3H), 3,48 - 3,29 (m, 1H), 3,22 - 3,04 (m, 1H), 3,04 - 2,36 (m, 2H), 2,80 - 2,47 (m, 7H), 2,04 - 1,42 (m, 4H), 1,05 - 0,77 (m, 2H). ESI MS [M-H]+ para C16H24BN2O4, calc. 319,1, encontrado 319,2.

Ejemplo 12: Ác¡do rac-(1R,2S)-5-(Am¡nomet¡l)-2-[3-(d¡h¡drox¡boran¡l)prop¡l]-6-metox¡-1- (met¡lam¡no)-2,3-d¡h¡dro-1H-¡ndeno-1-carboxíl¡co

El compuesto del título se s¡ntet¡zó de una manera s¡m¡lar al Ejemplo 8. 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,14 (s, 1H), 6,81 (s, 1H), 4,09 - 3,89 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,25 - 3,00 (m, 1H), 2,68 - 2,41 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,49 - 1,36 (m, 2H), 1,38 -1,17 (m, 2H), 0,81-0,53 (m, 2H). ESI MS [M+H]+ para C16H26BN2O5, calc. 337,2, encontrado 337,2.

Ejemplo 13: Ác¡do rac-(1R,2S)-5-(Am¡nomet¡l)-6-cloro-2-[3-(d¡h¡drox¡boran¡l)prop¡l]-1- (met¡lam¡no)-2,3-d¡h¡dro-1H-¡ndeno-1-carboxíl¡co

El compuesto del título se sintetizó de una manera similar al Ejemplo 8. *1H NMR (400 MHz, D2O) 87,47 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 4,48 -4,15 (m, 2H), 3,42 -3,23 (m, 1H), 2,87 -2,68 (m, 2H), 2,52 (s, 3H), 1,74 - 1,33 (m, 4H), 0,90 -0,67 (m, 2H). ESI MS [M+H]+ para C15H23BCIN2O4, calc. 341,1, encontrado 341,0.

Ejemplo 14: Ácido rac-(1R,2S)-1-Amino-6-(2-aminoetil)-2-[3-(dihidroxiboranil) propil]-2,3-dihidro-1H-indeno-1-carboxílico:

Etapa 1: Un vial secado a la llama que contenía éster bencílico (365 mg, 0,75 mmol, 1,0 equiv.), sal de trifluoroborato potásico (207 mg, 0,8 mmol, 1,1 equiv.), Pd(dppf)Cl22 x CH2O2 (31 mg, 0,04 mmol, 5 % en moles) y Cs2CO3 (735 mg, 2,3 mmol, 3,0 equiv.) se purgó con N2 y se diluyó con tolueno desgasificado (3,5 ml) y H2O (1,2 ml). La mezcla resultante se desgasificó con N2 durante 5 min y la mezcla de reacción resultante se calentó a 90 °C durante 20 h. Después del enfriamiento a temperatura ambiente, se añadieron EtOAc (10 ml) y NH4CI acuoso saturado (2 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (2 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, 0 ^ 40 % de EtOAc en hexano) para proporcionar el compuesto del título en forma de una espuma de color blanco (263 mg, 64 %).

Las etapas 2, 3 y 4 se llevaron a cabo de manera similar a la del Ejemplo 8. *1H NMR (400 MHz, D2O) 87,34 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,27 (dd, J = 7,8; 1,7 Hz, 1H), 7,22 (d,J= 1,5 Hz, 1H), 3,32 -3,19 (m, 3H), 2,97 (td, J = 7,0, 3,8 Hz, 2H), 2,80 - 2,70 (m, 1H), 2,60 - 2,50 (m, 1H), 1,78 - 1,65 (m, 1H), 1,65 - 1,52 (m, 1H), 1,52 - 1,36 (m, 2H), 0,89-0,74 (m, 2H). ESI MS [M-OH]+ para C15H23BN2O4, calc. 289,2, encontrado 289,2.

Ejemplo 15: Ácido rac-(1R,2S)-1-Amino-5-(2-aminoetil)-2-[3-(dihidroxiboranil) propil]-2,3-dihidro-1H-indeno-1-carboxílico

El compuesto del título se sintetizó de una manera similar al Ejemplo 14. 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,44 - 7,05 (m, 3H), 3,32 - 3,13 (m, 3H), 2,99 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,85 - 2,72 (m, 1H), 2,68 - 2,52 (m, 1H), 1,80 - 1,66 (m, 1H), 1,70 -1,53 (m, 1H), 1,50 - 1,36 (m, 2H), 0,97-0,64 (m, 2H). ESI MS [M-H2O+H]+ para C15H22BN2O3, calc. 289,2, encontrado 289,2.

Ejemplo 16: Ácido rac-(1R,2S)-1-Amino-6-(2-am¡noetil)-5-doro-2-[3- (dihidroxiboranM)propM]-2,3-dihidro-1 H-indeno-1 -carboxílico:

El compuesto del título se sintetizó de una manera similar al Ejemplo 14. 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,47 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 3,34 -3,14 (m, 4H), 3,10 -3,00 (m, 1H), 2,85 -2,74 (m, 1H), 2,61 (c, J = 10,7; 9,4 Hz, 1H), 1,80 - 1,66 (m, 1H), 1,65 - 1,51 (m, 1H), 1,51 - 1,38 (m, 2H), 0,90 - 0,74 (m, 2H). ESI MS [M-(0H)]+ para C15H22BCIN2O4, calc. 323,1, encontrado 323,0.

Ejemplo 17: Ácido (1R,2S)-6-(Am¡nomet¡l)-5-doro-2-[3-(d¡l^¡drox¡boran¡l) prop¡l]-1-(met¡lam¡no)-2,3-d¡h¡dro-1H-¡ndeno-1-carboxílico

Etapa 1: (R)-(+)-2-metil-2-propanosulfinamida (32,0 g, 264,9 mmol, 3 equiv.) se suspendió en tolueno anhidro (300 ml) y se calentó hasta 90 °C, después se añadió Ti(OEt)4 (18,3 ml, 88,3 mmol, 1 equiv.) en una porción. Se añadió 6-bromo-5-cloro-1-indanona sólida (21,5 g, 88,3 mmol, 1 equiv.) en porciones (en un plazo de 1 h). Después de la adición, la mezcla de reacción se agitó durante 1,5 h a 90 °C, después se enfrió a temperatura ambiente. Se añadieron Na2SO4x 10 H2O (28,4 g, 88,3 mmol, 1 equiv.) y Celite (20 g) y la mezcla se agitó vigorosamente durante 30 min. La suspensión de color verde oscuro se filtró a través de Celite y los sólidos se lavaron con EtOAc (3 x 100 ml). Los compuestos orgánicos combinados se evaporaron y el material en bruto se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ hex:EtOAc 6:4) para dar un sólido de color verde (25,9 g, 85 %).

Etapa 2: Pd2(dba)3 (662 mg, 0,722 mmol, 2,5 % en moles) se disolvió en THF desgasificado anhidro (100 ml) y se añadió tributilfosfina (0,723 ml, 2,9 mmol, 10 % en moles) en una porción. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. y después se enfrió a 4 °C. Se añadió carbonato de alilmetilo (6,7 ml, 57,8 mmol, 2 equiv.) seguido de TEA (8,0 ml, 57,8 mmol, 2 equiv.). Por último, se añadió imina sólida de la Etapa 1 (10 g, 28,9 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a ~1 °C durante 6 h, después se inactivó con NH4CI acuoso saturado (50 ml). La capa orgánica se separó, se desecó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó. El residuo se lavó con una cantidad pequeña de EtOAc para dar un producto en forma de un sólido de color pálido (5 g, 45 %).

Etapa 3: En un matraz de fondo redondo de 1 l, se enfrió THF anhidro (240 ml) a -78 °C. A continuación, se añadió solución 1 M de cianuro de dietilaluminio en tolueno (155 ml, 155 mmol, 1,5 equiv.) y se agitó a -78 °C durante 5 min. A continuación, se añadió gota a gota isopropanol anhidro (10,5 ml, 103 mmol, 1,0 equiv.); la mezcla se retiró inmediatamente del baño de enfriamiento y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 1 h. En un matraz de fondo redondo de 2 l separado; el producto de la Etapa 2 (40 g, 103 mmol) se disolvió en THF anhidro (560 ml). Esta mezcla se enfrió a -78 °C y la mezcla de cianuro de aluminio se añadió gota a gota a lo largo de 1 h. Tras completar la adición, la mezcla se retiró del baño de enfriamiento y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se enfrió una vez más a -78 °C y se inactivó usando NaHCO3 saturado (300 ml). Esto se calentó a temperatura ambiente y se dejó agitar durante 1 h. La mezcla se filtró sobre arena y se lavó con EtOAc (2 l). La mezcla se lavó después con salmuera, y los extractos orgánicos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 1:1 hex:EtOAc) para dar el producto deseado (33,2 g, 77 %).

Etapa 4: A una solución del nitrilo de la Etapa 3 (15 g, 36 mmol, 1,0 equiv.) en MeOH (360 ml) a -78 °C se añadió 30 % (p/p) de H2O2(ac) (9,3 ml, 90 mmol, 2,5 equiv.), gota a gota.

Esto fue seguido de la adición de K2CO3 (12,5 g, 90 mmol, 2,5 equiv.). La mezcla se dejó calentar a 0 °C y se agitó durante 12 h y se supervisó por TLC. Después de que se completara la reacción, la mezcla se vertió en agua helada (1 l) y se agitó durante 1 h. El precipitado resultante se recogió por filtración y se lavó con agua (3 x 200 ml) para proporcionar la amida en bruto (12 g) como un sólido de color blanco, que se usó sin purificación en la siguiente etapa.

Etapa 5: La solución de la amida de la Etapa 4 (11 g, 25 mmol) en MeOH (50 ml) se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota HCl 3 M en MeOH (50 ml) (en un plazo de 10 min). El baño de refrigeración se retiró y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El disolvente se retiró al vacío y el residuo se destiló azeotrópicamente con tolueno (2 x 100 ml) para dar la amida como un sólido de color parduzco pálido. El material en bruto se colocó en un recipiente a presión de pared gruesa, se diluyó con KOH 2 M (253 ml) y se calentó a 150 °C durante 60 h. La mezcla de reacción se enfrió y se filtró para retirar el KOH. El filtrado se enfrió a 0 °C y el pH se ajustó cuidadosamente a 7 usando HCl concentrado (~20 ml). La solución resultante se usó directamente en la siguiente etapa.

Etapa 6: A la solución acuosa de pH = 7 de la etapa 5, se añadió THF (253 ml), seguido de NaHCO3 sólido (16 g, 190,5 mmol) y (Boc)2O (30 g, 138 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó a 70 °C durante 20 h. Después del enfriamiento a temperatura ambiente, se añadieron EtOAc (300 ml) y NH4Cl acuoso saturado (150 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (100 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para dar producto en bruto que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

Etapa 7: A la solución de material en bruto de la Etapa 6 en MeCN (51 ml) se le añadieron Cs2CO3 (18,2 g, 55,8 milimoles, 2,2 equiv.) y bromuro de bencilo (6,0 ml, 50,7 milimoles, 2,0 equiv.). La mezcla resultante se calentó a 70 °C durante 12 h. Después del enfriamiento a temperatura ambiente, se añadieron EtOAc (400 ml) y NH4CI acuoso saturado (150 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (100 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 8:2 hex:EtOAc) para dar el éster bencílico (5 g, 38 % a lo largo de 4 etapas).

Etapa 8: La solución de éster bencílico de la Etapa 7 (5,0 g, 9,6 milimoles, 1,0 equiv.) en THF (96 ml) se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota KHMDS 1 M en MTBE (25 ml, 25 milimoles, 2,6 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 20 min, después se añadió gota a gota Mel (3 ml, 48 mmol, 5,0 equiv.). Después de 15 min más, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 3 h, después se inactivó con EtOAc (200 ml) y NH4CI acuoso saturado (50 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (20 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 9:1 hex:EtOAc) para proporcionar el compuesto del título en forma de una espuma de color blanco (3,0 g, 59 %). ESI MS [M+H]+ para C26H2gBrClNO4, calc.

534,1, encontrado 534,0.

Etapa 9: El producto de la Etapa 8 (0,50 g, 0,93 mmol, 1,0 equiv.) se destiló azeotrópicamente con tolueno tres veces antes de disolverse en THF anhidro (19 ml). La solución se enfrió a -78 °C y se añadió una solución 2,5 M de n-butillitio en hexanos (0,41 ml, 1,0 mmol, 1,1 equiv.) gota a gota. Después de agitar durante 30 min, se añadió DMF (1,0 ml) rápidamente y la mezcla de reacción resultante se agitó durante 30 min adicionales a -78 °C. El baño de hielo seco-acetona se reemplazó por un baño de hielo y la agitación continuó durante 20 min adicionales a 0 °C. La mezcla de reacción se inactivó con una solución acuosa saturada de NH4CI (100 ml) y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron por evaporación rotatoria. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 7:3 hex:EtOAc) para dar el producto deseado en forma de un aceite incoloro (0,33 g, 72 %).

Etapa 10: El producto de la Etapa 9 (0,53 g, 1,1 mmol, 1,0 equiv.) se destiló azeotrópicamente con tolueno tres veces antes de disolverse en MeCN anhidro (11 ml). Se añadieron secuencialmente carbamato de í-butilo (0,51 g, 4,4 mmol, 4,0 equiv.), trietilsilano (0,70 ml, 4,4 mmol, 4,0 equiv.) y ácido trifluoroacético (0,16 ml, 2,2 mmol, 2,0 equiv.) en atmósfera de nitrógeno y se calentaron a 65 °C. Después de 12 h, la mezcla se trató con una solución acuosa saturada de NaHCO3 (100 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ EtOAc al 35 % en hexanos) para dar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco (0,41 g, 64 %).

Etapa 11: El producto de la Etapa 10 (0,41 g, 0,70 mmol, 1,0 equiv.) se disolvió en diclorometano (7 ml) y la solución agitada se evacuó y se rellenó con nitrógeno tres veces. A esta solución se añadió dicloruro de bis(1,5-ciclooctadieno)diiridio(I) (24 mg, 0,035 mmol, 5 % en moles), seguido de 1,2-bis(difenilfosfino)etano (28 mg, 0,070 mmol, 10 % en moles), después de lo cual la mezcla resultante se evacuó y se rellenó con nitrógeno tres veces. Después de agitar durante 30 min a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota una solución de pinacolborano (0,30 ml, 1,0 mmol, 1,4 equiv.) en diclorometano (2 ml) con una bomba de jeringa a lo largo de 1,5 h. Después de la adición, el baño de hielo se retiró y la reacción se agitó durante una hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se inactivó con una solución acuosa saturada de NH4CI (50 ml) y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ EtOAc al 35 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco (0,43 g, 86 %).

Etapa 12: Al producto de la Etapa 11 (0,43 g, 0,60 mmol, 1,0 equiv.) se añadió HCl 6 N (5 ml) y la mezcla se calentó a 120 °C. Después de 15 h, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró. El producto en bruto se disolvió con agua y se concentró. Este proceso se repitió para retirar todo ácido clorhídrico residual. El producto en bruto se disolvió en agua (5 ml) y se cargó en resina DOWEX® 550-OH (7 g) que se había enjuagado con MeOH (3 x 100 ml) y agua (3 x 100 ml) antes de su uso. La mezcla se agitó durante 25 min y la resina se recogió por filtración y se lavó secuencialmente con agua (3 x 20 ml), metanol (3 x 20 ml), diclorometano (3 x 20 ml) y agua (3 x 20 ml). La resina se trató con HCl 2 N (5 ml), se agitó durante 15 min y se filtró. Después de repetir este proceso, el filtrado acuoso combinado se congeló y se liofilizó para proporcionar el producto final en forma de un sólido de color blanco (156 mg, 66 %). RMN de 1H (400 MHz, D2O) 87,54 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 4,30 (m, 2H), 3,36 (dd,J= 15,8, 8,1 Hz, 1H), 2,81 (dd, J = 17,7, 8,0 Hz, 1H), 2,76 -2,67 (m, 1H), 2,50 (s, 3H), 1,67 - 1,36 (m, 4H), 0,87 -0,72 (m, 2H). ESI MS [M-H2O+HF para C15H21BClN2O3, calc. 323,1, encontrado 323,0.

Ejemplo 18: Ácido rac-(1R,2S)-5-cloro-2-[3-(dihidroxiboranil)propil]-1-(metilamino)-6-[(metilamino) metil]-2,3-dihidro-1 H-indeno-1 -carboxílico

HBpin, [lr(cod)CI] 2 BocHN<Me . KHMDS>dp e

THF, 0 °C ata C H 2CI2,

Etapa 1 Etap

Etapa 1: El intermedio del Ejemplo 17, la Etapa 10 (0,14 g, 0,23 mmol, 1,0 equiv.) se destiló azeotrópicamente con tolueno tres veces antes de disolverse en THF anhidro (2,3 ml). La solución agitada se enfrió a 0 °C y se añadió una solución 1,0 M de KHMDS en MTBE (0,60 ml, 0,57 mmol, 2,5 equiv.) gota a gota. Después de agitar durante 20 min, se añadió yodometano (70 pl, 1,2 mmol, 5,0 equiv.) gota a gota y la mezcla de reacción resultante se agitó durante 20 min adicionales a 0 °C. El baño de hielo se retiró y la agitación se continuó durante 30 min adicionales a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se inactivó con NH4Cl acuoso saturado (20 ml) y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, 0 ^ EtOAc al 20 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco (0,15 g, >100 %), que se usó sin purificación en la siguiente etapa.

Etapa 2: Como en el caso del Ejemplo 17, Etapa 11. El producto deseado se obtuvo en forma de un sólido de color blanco (0,13 g, 75 % a lo largo de 2 etapas).

Etapa 3: El compuesto del título se sintetizó de una manera similar al Ejemplo 17, Etapa 12. RMN de 1H (400 MHz, D2O) 87,56 (s, 1H), 7,42 (s, 1H), 4,36 (m, 2H), 3,37 (dd, J = 16,5, 8,2 Hz, 1H), 2,82 (dd,J =16,3, 8,1 Hz, 1H), 2,73 (s, 3H), 2,54-2,49 (m, 1H) 2,51 (s, 3H), 1,67 - 1,53 (m, 2H), 1,50 - 1,38 (m, 2H), 0,87-0,73 (m, 2H). ESI MS [M-H2O+H]+ para C16H23BClN2O3, calc. 337,2, encontrado 337,0.

Ejemplo 19: Ácido (1R,2S)-6-(Ammometil)-2-[3-(dihidroxiboranil)propil]-5-fluoro-1-(metilamino)-2,3-dihidro-1H-indeno-1-carboxílico

Etapa 1

Etapa 2

Etapa 1: Una solución de intermedio de 6-bromo-5-fluoro-1-indanona (324 mg, 0,625 mmol; preparada de una forma similar al intermedio del Ejemplo 17, Etapa 7) en DMF anhidro (3,1 ml) se desgasificó con N2 durante 15 minutos, después se añadieron Zn(CN)2 (73 mg, 0,625 mmol) y Pd(PPl¡3)4 (36 mg, 0,031 mmol, 5 % en moles). El vial se selló con un tapón de tabique revestido con PTFE y a 80 °C durante 3 h. Se añadieron cantidades adicionales de Pd(PPh3)4 (36 mg, 0,031 mmol, 5 % en moles) y Zn(CN)2 (73 mg, 0,625 mmol) y la reacción se agitó a 80 °C durante 2 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con H2O (10 ml) y MTBE (10 ml). La capa orgánica se lavó con H2O (2x5 ml), después las capas acuosas combinadas se extrajeron con MTBE (3x10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hexanos ^ EtOAc al 20 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un aceite de color amarillo (195 mg, 67 %).

Las etapas 2, 3 y 4 se realizaron de forma similar al Ejemplo 8. 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,36 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 4,25 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 4,18 (d,J =13,8 Hz, 1H), 3,37 (dd, J = 16,3; 7,9 Hz, 1H), 2,89 -2,67 (m, 2H), 2,51 (s, 3H), 1,69 - 1,50 (m, 2H), 1,50 -1,31 (m, 2H), 0,90 - 0,67 (m, 2H). ESI MS [M+H]+ para C15H22BFN2O4, calc. 325,2, encontrado 325,2.

Ejemplo 20: Ácido (1R,2S)-6-[(1R)-1-Aminoetil]-2-[3-(dihidroxiboranil)propil]-5- fluoro-1-(metilamino)-2,3-dihidro-1H-indeno-1-carboxílico

Etapa 1: Una solución del intermedio de 6-bromo-5-fluoro-1-indanona (500 mg, 0,964 mmol, preparada de manera similar al intermedio del Ejemplo 17, Etapa 7) en THF anhidro (9,6 ml) bajo N2 se enfrió a -78 °C y se añadió gota a gota una solución 2,5 M de w-BuLi en hexanos (1,2 ml, 1,2 mmol, 1,2 equiv.). Después de que se completara la adición, la reacción se agitó durante 30 min a -78 °C, después se añadió gota a gota [N(E),S(5)]-A-etiliden-2-metil-2-propanosulfinamida (336 mg, 1,93 mmol, 2 equiv.) en THF anhidro (1,2 ml). El baño de -78 °C se reemplazó por un baño de 0 °C y la mezcla resultante se agitó durante 45 min. La reacción se inactivó con NH4CI acuoso saturado (100 ml) y se vertió en EtOAc (150 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre MgSO4 y se filtraron. La mezcla se concentró y se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, 0 ^ 70 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de una espuma incolora (240 mg; 42 %).

La etapa 2 se realizó de manera similar al ejemplo 8.

La etapa 3 se realizó de manera similar al ejemplo 17. 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,38 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,35 (dd,J =16,5, 8,2 Hz, 1H), 2,79 (dd, J = 16,5, 7,9 Hz, 1H), 2,72 - 2,63 (m, 1H), 2,47 (s, 3H), 1,62 (d,J= 7,0 Hz, 3H), 1,63 -1,51 (m, 2H), 0,88-0,72 (m, 2H). Nota: La resonancia de protones bencílicos está oculta por H2O residual (aprox. 4,77 ppm). Esta resonancia se observa en metanol-d4(84,65 (q, J = 7,0 Hz, 1H)). ESI MS [M+H]+ para C16H25BFN2O4, calc. 339,2, encontrado 339,2.

Ejemplo 21: Ácido (1R,2S)-6-[(1R)-1-aminoetil]-2-[3-(dihidroxiboranil)propil]-5-fluoro-1- (metilamino)-2,3-dihidro-1H-indeno-1-carboxílico

El compuesto del título se sintetizó de manera similar al Ejemplo 20 usando la [N(£),S(R)]-A-etiliden-2-metil-2-propanosulfinamida. 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,39 (d,J= 6,7 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,36 (dd, J = 16,5, 8,2 Hz, 1H), 2,80 (dd, J = 16,2, 8,1 Hz, 1H), 2,75 - 2,65 (m, 1H), 2,48 (s, 3H), 1,64 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,62 - 1,51 (m, 2H), 1,52 - 1,35 (m, 2H), 0,87 - 0,72 (m, 2H). Nota: La resonancia de protones bencílicos está oculta por H2O residual (aprox. 4,77 ppm). Esta resonancia se observa en metanol-d4 (8 4,65 (q, J = 7,0 Hz, 1H)). ESI M<s>[M-0H]+ para C16H23BFN2O3, calc. 321,2, encontrado 321,2.

Ejemplo 22: Ácido (1R,2S)-6-{[(1R,2R)-2-Aminociclopentil]oxi}-2-[3-(dihidroxiboranil)propil]-5-fluoro-1- (metilamino)-2,3-dihidro-1H-indeno-1-carboxílico

Etapa 1: Una mezcla de intermedio de 6-bromo-5-fluoro-1-indanona (3,0 g, 6,8 mmol), KO Ac (2,0 g, 20,4 mmol, 3 equiv.) y B2Pin2 (2,6 g, 10,2 mmol, 1,5 equiv.) en dioxano anhidro (136 ml) se burbujeó con nitrógeno durante 10 min y después se añadió Pd(dppf)Ch (498 mg, 0,68 mmol, 10 % en moles). El burbujeo se continuó durante 5 min y después la mezcla se agitó a 100 °C durante una noche. La mezcla se enfrío a ta, se diluyó con EtOAc y se filtró a través de un lecho de Celite. El filtrado se concentró al vació y se purificó usando cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ EtOAc al 20 % en hexanos) para dar el producto deseado (1,8 g, 49 %).

Etapa 2: Una solución del intermedio de la Etapa 1 (1,6 g, 3,3 mmol) y NMO (0,43 g, 3,6 mmol, 1,1 equiv.) en dioxano (14 ml) se agitó a 80 °C durante 3 h. La mezcla se concentró al vació y se purificó usando cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ EtOAc al 40 % en hexanos) para dar el producto deseado (0,78 g, 62 %).

Etapa 3: La mezcla de intermedio de la etapa 2 (800 mg, 2,1 mmol), amino alcohol protegido con Boc (750 mg, 3,2 mmol, 1,5 equiv.) y PPhs (840 mg, 3,2 mmol, 1,5 equiv.) en THF anhidro (21 ml) se enfrió a 0 °C. Se añadió gota a gota DIAD (646 mg, 3,2 mmol, 1,5 equiv.) y la mezcla de reacción se agitó a ta durante la noche. Después de inactivar con H2O, la mezcla se extrajo con CH2Ch y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron. El residuo se purificó usando cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 40 % de EtOAc en hexanos) para dar el producto deseado (1,0 g, 83 % de rendimiento).

Etapa 4: Como en el caso del Ejemplo 17, Etapa 11. El producto deseado se obtuvo en forma de un sólido de color blanco (900 mg, 73%).

Etapa 5: Como en el caso del Ejemplo 17, Etapa 12. 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,05 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 6,94 (d,J= 7.6 Hz, 1H), 4,60 -4,53 (m, 1H), 3,67 (c, J = 7,7 Hz, 1H), 3,23 - 3,09 (m, 1H), 2,67 -2,53 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,19 -2.06 (m, 1H), 2,06 - 1,94 (m, 1H), 1,77 - 1,20 (m, 8H), 0,76 - 0,55 (m, 2H). ESI-MS [M H]+ para C19H28BFN2O5, calc.

394,2, encontrado 394,3.

Ejemplo 23: Ácido (1R,2S)-6-[1-Aminociclopropil]-2-[3-(dihidroxiboranil)propil]-5-fluoro-1- (metilamino)-2,3-dihidro-1H-indeno-1-carboxílico

Etapa 1: A una solución desgasificada de intermedio de 6-bromo-5-fluoro-1-indanona (1,8 g, 4,07 mmol) en ciclopentiimetil éter anhidro (13,5 ml) se añadió XPhos-Pd-G2 (160 mg, 0,20 mmol). Se añadió ciclopropanocarbonitrilo (0,36 ml, 4,88 mmol) gota a gota y la mezcla agitada se evacuó y se rellenó con nitrógeno tres veces. Después de agitar la mezcla de reacción durante 10 min a ta, se añadió cloruro de tetrametilpiperidinilzinc-cloruro de litio (TMPZnCl-LiCl) (1,0 M en THF, 4,88 ml, 4,88 mmol) gota a gota a lo largo de 15 min mientras se mantenía la temperatura por debajo de 30 °C. Después de agitar la mezcla de reacción durante 30 min a ta, esta se calentó a 80 °C durante 1 h. La mezcla de reacción se enfrió a ta y se trató con metanol, se filtró a través de un lecho de Celite y se concentró al vacío. El residuo se purificó usando cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 30 % de EtOAc en hexanos) para dar el producto deseado (1,26 g, 72 % de rendimiento).

Etapa 2: A una solución del nitrilo de la Etapa 1 (0,59 g, 1,38 mmol) en MeOH (14 ml) a 0 °C se añadió H al 30 % (p/p)2O2(ac.) 0,47 ml, 4,14 mmol) gota a gota, seguido de la adición de K2CO3 (0,38 g, 2,76 mmol). La mezcla se dejó calentar a ta y se supervisó por TLC. Una vez completada la reacción, la mezcla se vertió en agua y se extrajo con diclorometano. Los productos orgánicos combinados se lavaron con una solución acuosa de tiosulfato de sodio, después salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se filtraron. La mezcla se concentró y se purificó usando cromatografía en columna (gel de sílice, CH2Ch ^ 10 % de MeOH en CH2Ch) para dar el producto deseado (0,52 g, 85 % de rendimiento).

Etapa 3: A una solución de la amida de la etapa 2 (0,2 g, 0,45 mmol) en acetonitrilo (13,5 ml) y terc-butanol (1,1 ml) se añadió [bis(trifluoroacetoxi)yodo]benceno (PIFA) (0,22 g, 0,50 mmol) en una porción. La mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 2 h. Después del enfriamiento a temperatura ambiente, se añadieron EtOAc y NaHCO3 saturado (ac.). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó. El residuo se purificó usando cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 30 % de EtOAc en hexanos) para dar el producto deseado (140 mg, 62 % de rendimiento).

Etapa 4: Como en el caso del Ejemplo 17, Etapa 11. El producto deseado se obtuvo en forma de un sólido de color blanco (145 mg, 83 % de rendimiento).

Etapa 5: Como en el caso del Ejemplo 17, Etapa 12. El producto deseado se obtuvo en forma de un sólido de color blanco (74 mg, 84%). 1H RMN (400 MHz, D2O) 87,44 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 3,37 (dd, J = 16,3, 7,8 Hz, 1H), 2,90 - 2,70 (m, 2H), 2,50 (s, 3H), 1,67 - 1,53 (m, 2H), 1,53 - 1,36 (m, 4H), 1,31 -1,19 (m, 2H), 0,88 - 0,71 (m, 2H). ESI-EM [MH2O+H]+ para C17H24BFN2O3, calc. 333,2, encontrado 333,0.

Ejemplo 24: Ácido (1R,2S)-2-[3-(Dihidroxiboranil)propil]-5-fluoro-1-(metilamino)-6-[(2R)- pirrolidin-2-il]-2,3-dihidro-1H-indeno-1-carboxílico

Etapa 1: A una solución de intermedio de 6-bromo-5-fluoro-1-indanona (1,02 g, 2,31 mmol) en THF (33 ml) a -78 °C se añadió w-BuLi (2,5 M en hexanos, 0,88 ml, 0,95 equiv.) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 30 min. En este punto, una solución de (S2S)-W-[(1E)-4-clorobutilideno]-2-metilpropano-2-sulfinamida (0,97 g, 4,62 mmol, 2,0 equiv.) en THF (10,6 ml) se añadió lentamente durante un período de 15 min a la mezcla de reacción anterior. La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 1 h adicional. Posteriormente, la reacción se calentó a 0 °C y se inactivó con solución de NH4CI saturado (10 ml) y H2O (10 ml), seguido de la extracción en EtOAc (x 2). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para dar un residuo en bruto que se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 80 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar el producto en forma de un aceite de color amarillo (297 mg, 22 %). ESI MS [M+H]+ para C28H43CFN2O5S, calc. 573,2, encontrado 573,2.

Etapa 2: El producto de la etapa 1 (297 mg, 0,519 mmol) se disolvió en THF (2,2 ml). La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C antes de la adición gota a gota de LiHMDS (1 M en THF, 0,78 ml, 1,5 equiv.). La mezcla de reacción se calentó inmediatamente a ta y se agitó durante 1 hora más. En este punto, la reacción se inactivó con solución de NH4CI saturado (10 ml) y H2O (10 ml), seguido de la extracción en EtOAc (x2). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para dar un residuo en bruto que se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hex ^ 80 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar el producto en forma de un aceite incoloro (278 mg, cuant.). ESI MS [M+H]+ para C28H42FN2O5S, calc. 537,3, encontrado 537,1.

Etapa 3: Como en el caso del Ejemplo 17, Etapa 11. El producto deseado se obtuvo en forma de un aceite incoloro (240 mg, 70 %). ESI MS [M+H]+ para C34H54BFN2O7, calc. 687,2, encontrado 687,4.

Etapa 4: El producto de la Etapa 3 (240 mg, 0,36 mmol) se suspendió en HCl 6 N y la mezcla de reacción se calentó a 120 °C durante 16 h. La mezcla de reacción se enfrió a ta, el disolvente se retiró al vacío para dar un residuo en bruto que se purificó por RP-HPLC (CH3CN/H2O) para proporcionar ácido (1R,25)-2-[3-(dihidroxiboranil)propil]-5-fluoro-1-(metilamino)-6-[(2R)-pirrolidin-2-il]-2,3-dihidro-1H-indeno-1-carboxílico como un sólido de color blanco (92 mg, 76 %). 1H NMR (400 MHz, D2O) 87,31 (d, J = 6,7Hz, 1H), 7,17 -7,13 (m, 1H), 3,42 -3,21 (m, 3H), 2,79 -2,62 (m, 2H), 2,43 (s, 3H), 2,41 -2,29 (m, 1H), 2,22 -2,10 (m, 3H), 2,08 -2,00 (m, 1H), 1,58 - 1,45 (m, 2H), 1,40 -1,29 (m, 2H), 0,82 -0,60 (m, 2H). 19F NMR (376 MHz, D2O) 8 -113,7. ESI MS [M+H]+ para C18H27BFN2O4, calc. 365,2, encontrado 365,2.

Métodos analíticos

CL: Agilent 1100 series; Espectrómetro de masas: Agilent G6120BA, Single Quad

Método LC-MS: columna de LCMS Waters XSelect® HSS C183,5 um (2,1 x 75 mm), 35 °C, caudal de 0,9 ml/min, un gradiente de 2,5 min de 0 % a 100 % de B con un lavado de 0,5 min al 100 % de B; A = 0,1 % de ácido fórmico / 5 % de acetonitrilo / 94,9 % de agua; B = 0,1 % de ácido fórmico / 5 % de agua / 94,9 % de acetonitrilo

columna ultrarrápida: ISCO Rf+

HPLC de fase inversa: ISCO-EZ; Columna: Kinetex 5 pm EVO C18 100 A; 250 * 21,2 mm (Phenomenex)

Medición de la potencia del compuesto mediante ensayo enzimático acoplado a arginasa usando ARG1 y ARG2 humanos recombinantes

Se prepararon ARG1 y ARG2 humanas recombinantes purificadas en Bicina 50 mM, pH 8,5, MnCh 100 pM, glicerol al 20 % y DTT 1 mM a una concentración de reserva final de 14,4 pM y 7,56 pM, respectivamente. 2,5 nM de ARG1 o ARG2 se incubaron con concentraciones variables de compuestos en fosfato de sodio 10 mM, pH 7,4, MnCh 0,1 mM y DMSO al 2,5 % en un volumen total de 40 pl en una microplaca de 384 pocillos (Corning™ n.° 3640) a 37 °C durante 1 h. La reacción enzimática de arginasa se inició mediante la adición de 10 |jl de L-arginina 4 mM preincubada en fosfato de sodio 10 mM, pH 7,4 y MnCh a 0,1 mM a 37 °C en la mezcla de enzima y compuesto, dando las condiciones de reacción finales: 2 nM de ARG1 o ARG2 y 0,8 mM de L-arginina en fosfato de sodio 10 mM, pH 7,4, MnCh 0,1 mM y DMSO al 2 % con concentraciones variables de compuestos. A continuación de una incubación de 2 h a 37 °C, la reacción enzimática de la arginasa se detuvo mediante la transferencia de 10 j l de reacción a 10 j l de mezcla de detección (ácido amino-2-borono-6-hexanoico 204 jM , 0,25 j l de mezcla de enzimas de arginasa, 0,25 j l de revelador de arginasa, 0,25 j l de enzima convertidora de arginasa en tampón de ensayo de arginasa del kit de ensayo colorimétrido de la actividad arginasa, BioVision Inc. n.° K755-100) en una microplaca transparente de 384 pocillos (Greiner n.° 781801). La placa se colocó inmediatamente en un lector de placas (lector de microplacas multimodo Synergy™ Neo2) para supervisar la absorción a 570 nm a 37 °C. Se usaron valores de absorción a 12 ~ 20 min para calcular la potencia del compuesto. El valor del blanco de DMSO (inhibición MÍN = 100 % de actividad) se usó como control negativo. El control positivo se estableció añadiendo 8 j l de mezcla de enzima y DMSO en 10 j l de mezcla de detección seguido de la adición de 2 j l de L-arginina (inhibición MÁX = 0 % de actividad). Para calcular el porcentaje de actividad, se usó la ecuación 1. Abs 570nm es el valor a una concentración de compuesto dada:

Ecuación 1

La concentración de compuesto que dio como resultado una pérdida del 50 % de la actividad enzimática (C/50) se calculó mediante GraphPad Prism usando la Ecuación 2 donde N es el coeficiente de Hill:

Superior - Inferior

% de actividad =Inferior Ecuación 2

Se realizó un contra-cribado para identificar cualquier inhibición de las enzimas de acoplamiento por los compuestos de prueba. Se añadieron 10 j l de 0,26 mM de urea con concentraciones variables de compuestos en fosfato de sodio 10 mM, pH 7,4, MnCh 0,1 mM y DMSO al 2 % en 10 pl de mezcla de detección en lugar de la mezcla de reacción enzimática de arginasa. La absorción se supervisó a 570 nm como se ha descrito anteriormente. Los valores de un blanco sin sustrato (sin urea; inhibición Má X = 0 % de actividad) y un blanco de DMSO (inhibición MÍN = 100 % de actividad) se usaron como controles positivo y negativo respectivamente. Se esperaba una curva de respuesta a la dosis plana para los compuestos que no inhibieron ninguna enzima de acoplamiento. La inactividad en contra-cribado se usó para confirmar que los resultados reflejaban con precisión los valores de CI50 para ARG1 y ARG2.

Se prepararon y evaluaron compuestos adicionales con estructuras y actividad como se muestra en la Tabla 1, a continuación. Los métodos preparativos usaron una metodología sintética similar a los ejemplos anteriores.

Tabla 1: Ejemplos específicos (Potencia: hARGl: significa > 1 jM , + significa 100 nM a 1 jM , ++ significa < 100 nM)

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En el presente documento se describen realizaciones particulares de la esta invención, incluido el mejor modo conocido por los inventores para llevar a cabo la invención. Al leer la descripción anterior, las variaciones de las realizaciones divulgadas pueden resultar evidentes para los expertos en la materia, y se espera que esos expertos puedan emplear tales variaciones según sea apropiado dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un compuesto que tiene la fórmula (I)

o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde, X es N o CR4a; cada R1 es independientemente H o alquilo C1-8; R2 es H o CH3; cada R3 es independientemente H o alquilo C1-8; o dos grupos R3 se unen entre sí para formar un anillo de 5 o 6 miembros que está sin sustituir o sustituido con de 1 a 4 Ra; cada R4a, R4b, R4c y R4d se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, halógeno, CN, alquilo C1-8, alcoxi C1-8, hidroxialquilo C1-8, haloalquilo C1-8, haloalcoxi C1-8, -X1-Y, -X1-SO2R5a y -X1-NR5bR5c; cada R5a, R5b y R5c se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, alquilo C1-8, haloalquilo C1-8, alquil C1-8-C(O)-, cicloalquilo C3-7, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros, arilo, heteroarilo y un aminoácido, o R5b y R5c se unen entre sí para formar un anillo de 4 a 6 miembros; y en donde cada uno del anillo de 4 a 6 miembros, del cicloalquilo C3-7 o del heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros, arilo y heteroarilo, está sin sustituir o sustituido con de 1 a 4 Rb; cada X1 es un enlace, -O-, alquileno C1-6 u -O-alquileno C1-6, en donde las porciones de alquileno están sin sustituir o sustituidas con 1 a 4 Rc y 0 o 1 oxo; cada Ra, Rb y Rc es independientemente halógeno, CN, OH, NH2, CO2H, alquilo C1-4, haloalquilo C1-4, cicloalquilo C3-6 y fenilo, o dos Rc se combinan para formar un cicloalquilo C3-6 que está sin sustituir o sustituido con 1 a 3 Rd; cada Y es independientemente fenilo, un heteroarilo de 5 o 6 miembros, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros o cicloalquilo C3-6, cada uno de los cuales está sin sustituir o sustituido con 1 a 3 Rd; y cada Rd es independientemente halógeno, alquilo C1-4, amino, amino-alquilo C1-4, haloalquilo C1-4, OH e hidroxialquilo C1-4.
2. El compuesto de la reivindicación 1, o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde: X es N o CR4a; cada R1 es independientemente H o alquilo C1-8 R2 es H o CH3; cada R3 es independientemente H o alquilo C1-8; o dos grupos R3 se unen entre sí para formar un anillo de 5 o 6 miembros que está sin sustituir o sustituido con de 1 a 4 Ra; cada R4a, R4b, R4c y R4d se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, halógeno, CN, alquilo C1.8, alcoxi C1.8, hidroxialquilo C1.8, haloalquilo C1.8, -X1-Y, -X1-SO2R5a y -X1-NR5bR5c; cada R5a, R5b y R5c se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, alquilo C1-8, haloalquilo C1.8, alquil C1-8-C(O)-, cicloalquilo C3-7, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros, arilo, heteroarilo y un aminoácido, o R5b y R5c se unen entre sí para formar un anillo de 4 a 6 miembros; y en donde cada uno del anillo de 4 a 6 miembros, cicloalquilo C3-7 o heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros, arilo y heteroarilo, está sin sustituir o sustituido con de 1 a 4 Rb; cada X1 es un enlace o alquileno C1-6 que está sin sustituir o sustituido con 1 a 4 Rc; cada Ra, Rb y Rc es independientemente halógeno, CN, OH, NH2, alquilo C1-4, haloalquilo C1-4, cicloalquilo C3-6 y fenilo, o dos Rc se combinan para formar un cicloalquilo C3-6; cada Y es independientemente fenilo o un heteroarilo de 5 o 6 miembros, cada uno de los cuales está sin sustituir o sustituido con 1 a 3 Rd; y cada Rd es independientemente halógeno, alquilo C1-4, amino, amino-alquilo C1-4, haloalquilo C1-4, OH e hidroxialquilo C1-4.
3. El compuesto de las reivindicaciones 1 o 2, o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, que tiene una fórmula seleccionada entre el grupo que consiste en:
4. El compuesto de la reivindicación 3, o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, que tiene la fórmula:
5. El compuesto de la reivindicación 4, o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde R1 es H o alquilo C1-2; cada R4a y R4b se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en H, F, Cl, CN, alquilo C1-4, alcoxi C1-4, hidroxialquilo C1-4, haloalquilo C1-4 y -X1-NR5bR5c, y R4c es -X1-NR5bR5c; X1 es un grupo metileno o etileno que está sin sustituir o sustituido con 1 o 2 Rc; y -NR5bR5c se selecciona entre el grupo que consiste en -NH2, -NHCH3, -N(CHa)2, -NHCH2CF3, -NHCH(CH3)2, -NHC(O)CH3,
6. El compuesto de la reivindicación 4, o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, que tiene la fórmula:
7. El compuesto de la reivindicación 4, o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, que tiene la fórmula:
8. El compuesto de la reivindicación 7, o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde R4b se selecciona entre el grupo que consiste en H, CH3, CN, CF3, F y Cl.
9. El compuesto de la reivindicación 7, o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, que tiene la fórmula: donde n es 1, 2 o 3;
10. El compuesto de la reivindicación 9, o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, que tiene una fórmula seleccionada entre el grupo que consiste en:
11. El compuesto de las reivindicaciones 1 o 2, seleccionado del grupo que consiste en: