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ES3034251T3 - Substituted vinyl piperazine-piperidine urea derivatives as anticancer agents - Google Patents

Substituted vinyl piperazine-piperidine urea derivatives as anticancer agents

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Publication number
ES3034251T3
ES3034251T3 ES21201359T ES21201359T ES3034251T3 ES 3034251 T3 ES3034251 T3 ES 3034251T3 ES 21201359 T ES21201359 T ES 21201359T ES 21201359 T ES21201359 T ES 21201359T ES 3034251 T3 ES3034251 T3 ES 3034251T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
compound
formula
piperazine
carboxamide
substituted
Prior art date
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Active
Application number
ES21201359T
Other languages
English (en)
Inventor
Simona Collina
Daniela Rossi
Pasquale Linciano
Giacomo Rossino
Roberta Listro
Marco Peviani
Silvia Stefania Rossi
Barbara Vigani
Guido Angelo Cavaletti
Mariarosaria Miloso
Alessio Malacrida
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universita degli Studi di Pavia
Universita degli Studi di Milano Bicocca
Original Assignee
Universita degli Studi di Pavia
Universita degli Studi di Milano Bicocca
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Publication of ES3034251T3 publication Critical patent/ES3034251T3/es
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Abstract

La presente invención se enmarca en el campo de la química medicinal y se relaciona con compuestos de vinil piperazina-piperidina urea sustituida, que presentan una gran eficacia como agentes antitumorales. En particular, son adecuados para el tratamiento del glioblastoma (GB), el mieloma múltiple (MM) y el cáncer de páncreas (CP). (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados de vinil piperazina-piperidina urea sustituidos como agentes antineoplásicos
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se enmarca en el campo de la química médica y está relacionada con una novedosa serie de derivados de urea como agentes antitumorales.
ESTADO DE LA TÉCNICA
La enfermedad del cáncer representa una de las principales causas de muerte a nivel mundial. A pesar de los importantes avances logrados por el mundo académico y las compañías farmacéuticas en el diagnóstico y tratamiento del cáncer, hoy en día varios tumores son considerados incurables y representan una necesidad médica urgente. Entre los diferentes tipos de cáncer, el glioblastoma (GB), el mieloma múltiple (MM) y el cáncer de páncreas (CP) se investigan principalmente por su impacto en la sociedad en términos de calidad de vida de los pacientes, dificultad de diagnóstico, aumento de la incidencia y mortalidad.
El GB es un tumor astrocítico maligno recidivante muy común (grado IV de acuerdo con la clasificación de la OMS) en adultos con una incidencia anual de 3,1 por 100.000 personas y el 70 % de los casos se diagnostican en edades comprendidas entre los 45 y los 70 años. A menudo es agresivo y crece alrededor de los tejidos cerebrales normales. La causa del tumor no se conoce, excepto en el caso de irradiación cerebral terapéutica realizada como terapia para otras enfermedades.
Partiendo del origen del tumor, se han reconocido dos tipos de GB: GB primario (de novo) o GB secundario (que se desarrolla a partir de un tumor astrocítico benigno). Los síntomas son inespecíficos (tales como cefalea y náuseas) y los signos neurológicos son secundarios a hipertensión intracraneal, asociada a cambios de conducta o déficit neurológico focal. La cirugía, la quimioterapia y la radioterapia permiten alargar la vida de los pacientes.
La ejecución del tratamiento quirúrgico, incluyendo tanto la biopsia como la resección parcial o completa, depende de la ubicación del tumor y de la edad de los pacientes. Después de la resección inicial del tumor, se han empleado radioterapia y quimioterapia en el tratamiento del GB y, específicamente, la temozolomida, un agente alquilante oral, es el fármaco de primera elección utilizado. Los problemas más limitantes de esta patología son la agresividad tumoral y la facilidad para tener recidivas tumorales, la dificultad para alcanzar el tumor y la resistencia a los fármacos.
Por lo tanto, la identificación de nuevos agentes eficaces, utilizados también en combinación con la cirugía, representan un tratamiento médico necesario para mejorar la guerra contra el GB.
El MM es un trastorno neoplásico hematológico caracterizado por una proliferación anómala de células plasmáticas monoclonales en la médula ósea. Su propagación se ha mantenido bastante estable a lo largo del tiempo, con 30.770 casos nuevos diagnosticados anualmente en EE. UU. (46,7 % mujeres, 53,3 % hombres). Los factores genéticos y ambientales se correlacionan con el inicio de esta enfermedad y la progresión se debe a diferentes cambios en el microentorno de la médula ósea como el aumento de la angiogénesis, la supresión de la respuesta inmunitaria y el aumento de la resorción ósea.
Los pacientes con MM a menudo muestran los criterios CRAB típicos: hipercalcemia, insuficiencia renal, anemia, lesiones óseas. Desafortunadamente, los pacientes en fases tempranas de la patología no presentan signos o síntomas preocupantes y, por lo tanto, el diagnóstico se confirma demasiado tarde. El diagnóstico de MM se puede realizar a través de los niveles séricos de proteínas totales, globulinas, nivel de albúmina y viscosidad plasmática. El tratamiento de primera elección es la quimioterapia que incluye melfalán, prednisona, ciclofosfamida, vincristina y doxorrubicina. Recientemente se han evaluado otros fármacos para la terapia del MM como lenalidomida, pomalidomida, dexametasona y talidomida. También se investigan anticuerpos monoclonales y dianas innovadoras como el proteasoma y se ha demostrado que nuevos inhibidores borónicos del proteasoma (bortezomib, carfilzomib, ixazomib) son fármacos de eficacia prometedora contra el MM a pesar de que presentan efectos secundarios neurológicos. La radioterapia también puede utilizarse en el tratamiento del MM, mientras que la cirugía se reserva para eliminar el plasmocitoma solitario o en caso de compresión de la columna vertebral que causa parálisis o debilidad excesiva. Hoy en día todavía no existe una cura concreta, por lo que son necesarias terapias alternativas. El CP es uno de los tumores más letales y su pronóstico no ha mejorado en los últimos 20 años. La incidencia de la tasa estandarizada por edad (ASR) fue más alta en Europa, América del Norte y Oceanía (respectivamente 7,7 por 100.000 personas, 7,6 por 100.000 personas y 6,4 por 100.000 personas). La incidencia y mortalidad del CP se correlaciona con el aumento de la edad y es ligeramente más común en hombres que en mujeres. Se estima que la incidencia aumentará e incluirá 355.317 casos nuevos en 2040. La etiología del CP ha sido ampliamente estudiada y se han identificado diversos factores de riesgo, que se han dividido en modificables (tales como el tabaquismo, la obesidad, el alcohol, etc.) y no modificables (tales como la diabetes mellitus, factores genéticos, infecciones, etc.). En los últimos años, la pancreatitis crónica preexistente (debida al abuso de alcohol o factores hereditarios), representa un fuerte factor de riesgo de CP.
En la fase inicial de la patología, el CP habitualmente es clínicamente asintomático y los pacientes presentan síntomas inespecíficos durante el avance de la enfermedad. Entre los diferentes síntomas inespecíficos, son muy comunes los signos de obstrucción dentro del árbol biliar (tales como dolor abdominal, ictericia, prurito, orina oscura y acólica), anorexia, disnea y depresión. Dependiendo del tipo y la fase del CP, las opciones de tratamiento pueden incluir cirugía, radiación, quimioterapia e inmunoterapia. La cirugía ofrece una baja tasa de curación y habitualmente se utiliza la radioterapia como tratamiento postoperatorio. Respecto a la quimioterapia, las terapias combinadas (tales como gemcitabina con cisplatino, oxaliplatino y paclitaxel) muestran beneficios prometedores pero se observan varios efectos secundarios debido al tratamiento inespecífico. Por lo tanto, es esencial identificar nuevas opciones terapéuticas alternativas para mejorar la tasa de supervivencia de los pacientes y tratar de limitar el fenómeno típico de la quimiorresistencia.
Dado que la quimioterapia ha sido el tratamiento de primera elección contra los tumores, el descubrimiento de nuevos fármacos eficaces representa una necesidad urgente.
El documento WO2007054623A1 en la figura 1, el documento WO2007076055A1 en las páginas 185 y 191 y el documento WO2006074025A1 en el ejemplo 1 divulga en la figura 1 compuestos sin cadenas laterales de alquilo ramificadas.
El documento WO2019142126A1 divulga compuestos antineoplásicos basados en 1-(fenilpropargilaminocarbonil)-4-etenilcarbonil-piperazinas (ejemplos 1 a 47).
RESUMEN DE LA INVENCIÓN
La presente invención se basa en derivados de vinil piperazina-piperidina urea sustituidos, en particular, en un compuesto que tiene la fórmula general (I) y sales o hidratos o cocristales del mismo:
en donde:
Z es N o CH,
n es 1, 2, 3, 4 o 5,
R<1>es alquilo C1-C3 lineal o ramificado,
R<2>y R<4>son independientemente un arilo sustituido o no sustituido o un resto cíclico sustituido o no sustituido, R<3>es hidrógeno o alquilo C1-C3 lineal o ramificado.
Se ha descubierto de hecho sorprendentemente que dicho compuesto de fórmula (I) es útil para prevenir, tratar y diagnosticar enfermedades tumorales, en particular, entre otros cánceres, es un agente activo altamente eficaz contra el glioblastoma (GB) y el mieloma múltiple (MM).
De hecho, se ha descubierto que los derivados de vinil piperazina-piperidina urea sustituidos, que combinan un resto de vinilo sustituido con un resto de piperazina urea o piperidina urea, proporcionan el efecto de la invención, es decir, son eficaces contra los cánceres y, en particular, son muy eficaces activamente contra el glioblastoma (GB) y el mieloma múltiple (MM).
Por lo tanto, la presente invención se refiere a derivados de vinil piperazina-piperidina urea sustituidos antineoplásicos prometedores de fórmula (I), descritos anteriormente, o sales, hidratos o cocristales de los mismos. Otro aspecto es un proceso para la preparación del compuesto de fórmula (I).
Un tercer aspecto de la presente invención son composiciones farmacéuticas que comprenden un derivado de vinil piperazina-piperidina urea sustituido de fórmula (I) o una sal de adición del mismo con ácidos orgánicos e inorgánicos farmacéuticamente aceptables, y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable. Finalmente, otro aspecto es el compuesto de fórmula (I) o composiciones farmacéuticas del mismo, para su uso en medicina, en particular, para su uso en métodos de tratamiento del cáncer, es decir, para su uso como agentes antineoplásicos, más en particular, para su uso en el tratamiento del glioblastoma (GB) o del mieloma múltiple (MM).
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
Las figuras 1 y 2 representan, respectivamente, la RMN de 1H y el RMN de 13C del compuesto 20, las figuras 3 y 4 representan, respectivamente, el RMN de 1H y el RMN de 13C del compuesto 21 y las figuras 5 y<6>representan, respectivamente, el RMN de 1H y el RMN de 13C del compuesto 24.
Las figuras 7 y<8>representan, respectivamente, la viabilidad celular de las células U87-MG y RPMI 8226.
La figura 9 representa ensayos de migración celular en células U87-MG.
La figura 10 representa la invasión celular de células U87-MG y RPMI 8226.
La figura 11 representa los resultados de la actividad del proteasoma en células U87-MG y RPMI 8226.
La figura 12 crecimiento de neuritas de cultivos organotípicos de DRG embrionarios de rata.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Un objeto de la presente invención es un compuesto de fórmula (I) y sales o hidratos o cocristales del mismo:
en donde:
Z es N o CH,
n es 1, 2, 3, 4 o 5,
R<1>es alquilo C1-C3 lineal o ramificado,
R<2>y R<4>son independientemente un arilo sustituido o no sustituido o un resto cíclico sustituido o no sustituido, R<3>es hidrógeno o alquilo C1-C3 lineal o ramificado.
Como se dijo anteriormente, de hecho se ha descubierto sorprendentemente que la combinación de un resto de vinilo sustituido con una piperazina urea o con un resto de piperidina urea proporciona el efecto de los compuestos de vinil piperazina-piperidina urea sustituidos de fórmula (I) de la invención, es decir, ser eficaz contra los cánceres y, en particular, ser un activo muy eficaz contra el glioblastoma (GB) y el mieloma múltiple (MM). Específicamente, el compuesto de fórmula (I) mostró actividad antitumoral hacia líneas celulares, entre ellas las líneas celulares humanas RPMI-8226, U87 y Panc-1, induciendo cambios en la morfología, disminuyendo el número de células vitales y desencadenando eventos de apoptosis (véase la parte experimental para más detalles).
En el compuesto de fórmula (I), Z puede ser nitrógeno N o CH, proporcionando de este modo, respectivamente, un anillo de piperazina o de piperidina, y por tanto, un compuesto de piperazina o de piperidina.
De acuerdo con una realización preferida, Z es N, por tanto se prefiere el compuesto de anillo de piperazina (I). En el compuesto de fórmula (I), n es un número entero, comprendido entre 1 y 5. Por lo tanto, n puede ser 1,2, 3, 4 o 5. De acuerdo con una realización preferida, n es 1,2 o 3, más preferentemente n es 1.
En el compuesto de fórmula (I), R<3>puede ser hidrógeno o alquilo C1-C3 lineal o ramificado, es decir, puede ser metilo, etilo, n-propilo o isopropilo. De acuerdo con una realización preferida, R<3>es hidrógeno.
En el compuesto de fórmula (I), R<1>junto con R<2>proporciona la sustitución de la función vinilo, proporcionando de este modo la parte del nombre de "vinilo sustituido" al compuesto de fórmula (I).
En el compuesto de fórmula (I), Ri es un alquilo C1-C3 lineal o ramificado, es decir, puede ser metilo, etilo, n-propilo o isopropilo. De acuerdo con una realización preferida, Ri es metilo.
En el compuesto de fórmula (I), R<2>y R<4>son independientemente un arilo sustituido o no sustituido o un resto cíclico sustituido o no sustituido.
Debe quedar claro que R<2>y R<4>pueden ser iguales o diferentes entre sí. El término significa independientemente que R<2>y R<4>pueden tener cualquier significado de modo que pueden ser iguales o diferentes.
En la presente descripción y en las reivindicaciones que siguen, el término "arilo o resto cíclico" para R<2>y R<4>significa, por ejemplo, fenilo, 3-metoxifenilo, naftilo, 4-metoxinaftilo, trifluorometilfenilo, p-tolilo, 2,6-difluorofenilo, 3,5-difluorofenilo, 4-(trifluorometil)fenilo, 3-fluorofenilo, 3-clorofenilo, 2,4-metoxifenilo, 3,5-metoxinaftilo, 3,5-metoxifenilo y 4.6- metoxinaftilo, 5-metoxifenilo, 6-metoxinaftilo, ciclohexano, ciclopentano y decahidronaftaleno.
En el compuesto de fórmula (I), R2 y R4 pueden ser un arilo sustituido o no sustituido, tal como, derivados de fenilo, naftilo, bifenilo o binaftilo, etc.
Además, R<2>y R<4>pueden ser un resto cíclico sustituido o no sustituido, tal como anillos de cinco o seis miembros derivatizados (solos o condensados), cicloalquilo C3-C12 sustituido o sustituido, etc. De acuerdo con una realización preferida, en el compuesto de fórmula (I), R<4>es cicloalquilo C5-C6 sustituido o no sustituido o es fenilo sustituido o no sustituido. Más preferentemente, R<4>es ciclopentilo no sustituido, ciclohexilo no sustituido, fenilo, 4-metilfenilo, 2.6- difluorofenilo o 4-trifluorometilfenilo.
De acuerdo con una realización preferida de la invención, R<2>es un arilo sustituido o no sustituido. De acuerdo con una realización más preferida, R2 es fenilo sustituido o no sustituido o naftilo sustituido o no sustituido, proporcionando de este modo derivados de vinilnaftalen piperazina-piperidina urea de la invención. De nuevo, más preferentemente, R2 es 2-naftilo sustituido o no sustituido, proporcionando de este modo derivados de vinil-2-naftaleno piperazina-piperidina urea de la invención.
En particular, para el compuesto de fórmula (I), R2 es 2-naftilo sustituido o no sustituido que tiene la siguiente fórmula (II):
en donde,
R5, R6, R7, R8, R9, R1o, R11, son independientemente hidrógeno, alquilo C1-C4 lineal o ramificado, alcoxi C1-C4 lineal o ramificado o halógeno.
De acuerdo con una realización preferida, en el compuesto de fórmula (I), con referencia al nafilo (II), R5, R6, R7, R8, Rio, R<11>, son hidrógeno y R<9>es hidrógeno, flúor, cloro o metoxi.
Por lo tanto, de acuerdo con una realización preferida de la invención, R2 es un arilo sustituido o no sustituido y R4 es cicloalquilo C3-C12 sustituido o no sustituido. Más preferentemente, R<2>es un naftilo sustituido o no sustituido y R<4>es cicloalquilo C5-C6 sustituido o no sustituido o es fenilo sustituido o no sustituido. De nuevo, más preferentemente, R<2>es un 2-naftilo sustituido o no sustituido y R<4>es ciclopentilo no sustituido, ciclohexilo no sustituido, fenilo, 4-metilfenilo, 2,6-difluorofenilo o 4-trifluorometilfenilo.
De acuerdo con una realización de nuevo más preferida, en el compuesto de fórmula (I), con referencia al nafilo (II), R5, R6, R7, R8, R10, R11, son hidrógeno y R9 es hidrógeno, flúor o metoxi y R4 es ciclopentilo no sustituido, ciclohexilo no sustituido, fenilo, 4-metilfenilo, 2,6-difluorofenilo o 4-trifluorometilfenilo.
Por lo tanto, los siguientes compuestos incluidos en el alcance del compuesto de fórmula (I), son particularmente preferidos:
- (E)-4-(3-(6-fluoronaftalen-2-il)pent-2-en-1-il)-N-(4-fluorofenil)piperazina-1-carboxamida,
- (E)-N-(3,5-difluorofenil)-4-(3-(6-metoxinaftalen-2-il)pent-2-en-1-il)piperidina-1-carboxamida,
- (E)-N-ciclohexil-4-(3-(6-fluoronaftalen-2-il)pent-2-en-1-il)piperidina-1-carboxamida,
- (E)-4-(3-(naftalen-2-il)but-2-en-1 -il)-N-fenilpiperazina-1-carboxamida,
- (E)-4-(3-(naftalen-2-il)but-2-en-1-il)-N-(4-(trifluorometil)fenil)piperazina-1-carboxamida,
- (E)-N-ciclopentil-4-(3-(naftalen-2-il)but-2-en-1 -il)piperazina-1-carboxamida,
- (E)-N-cidohexil-4-(3-(naftalen-2-il)but-2-en-1-il)piperazina-1-carboxamida,
- (E)-4-(3-(naftalen-2-il)but-2-en-1-il)-N-(p-tolil)piperazina-1-carboxamida,
- (E)-4-(3-(6-metoxinaftalen-2-il)but-2-en-1-il)-N-(4-(trifluorometil)fenil)piperazina-1-carboxamida,
- (E)-N-(2,6-difluorofenil)-4-(3-(6-metoxinaftalen-2-il)but-2-en-1-il)piperazina-1-carboxamida.
Las sales o hidratos o cocristales del compuesto de fórmula (I) también son eficaces en el tratamiento del cáncer. De acuerdo con una realización preferida, las sales se forman con ácidos inorgánicos y orgánicos farmacéuticamente aceptables. En particular, los compuestos de fórmula (I) que son útiles de acuerdo con la presente invención se usan preferentemente como sales de adición con ácidos orgánicos o inorgánicos farmacéuticamente aceptables. Preferentemente, los ácidos orgánicos farmacéuticamente aceptables se seleccionan del grupo que consiste en ácido oxálico, ácido maleico, ácido metanosulfónico, ácido para-toluenosulfónico, ácido succínico, ácido clorhídrico, ácido málico y ácido tartárico. Preferentemente, los ácidos inorgánicos farmacéuticamente aceptables se seleccionan del grupo que consiste en ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico y ácido sulfúrico. Los hidratos son complejos del compuesto (I) con una o más moléculas de agua. Los cocristales son complejos sólidos del compuesto de fórmula (I) con uno o más compuestos (coformadores) que pueden ser disolventes (proporcionando de este modo solvatos) o cualquier compuesto capaz de proporcionar complejos con el compuesto de fórmula (I).
Proceso para la preparación del compuesto de fórmula (I) como se ha descrito anteriormente:
que comprende la reacción del compuesto (A):
con el compuesto de fórmula (B):
en donde n, Z, R<1>, R<2>, R<3>y R<4>tienen el mismo significado que el compuesto de fórmula (I). Este proceso se aplica a cualquiera de las realizaciones preferidas mencionadas anteriormente con referencia al compuesto (I).
Otro objeto son composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto de fórmula (I) o sales o hidratos o cocristales del mismo y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
De hecho, normalmente, los compuestos de vinil piperazina-piperidina urea sustituidos de fórmula (I) se administran en forma de una composición farmacéutica.
Preferentemente, la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención se prepara en formas farmacéuticas adecuadas que comprenden una cantidad eficaz del compuesto de fórmula (I) o una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Ejemplos de formas farmacéuticas adecuadas son comprimidos, comprimidos recubiertos, cápsulas, gránulos, polvos, soluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes, gotas y chicles para administración oral; soluciones, cremas, geles, pastas y pomadas para administración tópica; parches medicinales para administración transdérmica; supositorios para administración rectal; y soluciones estériles inyectables.
Ejemplos de excipientes farmacéuticamente aceptables son, por ejemplo, diluyentes, aglutinantes, deslizantes, disgregantes, conservantes, estabilizantes, tampones, tensioactivos, solubilizantes, sales para regular la presión osmótica, emulsionantes, edulcorantes, colorantes, saborizantes y similares.
La cantidad de los derivados de vinil piperazina-piperidina urea sustituidos de fórmula (I) o de las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de los mismos en la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención puede variar sobre la base de factores tales como, por ejemplo, el tipo de patología a tratar, la gravedad de la dolencia, el peso del paciente, la forma farmacéutica, la vía de administración seleccionada, el número de administraciones al día y la eficacia de los compuestos de vinil piperazina-piperidina urea sustituidos de fórmula (I). Sin embargo, un experto en la materia puede determinar la cantidad óptima de los diferentes derivados de fórmula (I) que son útiles de acuerdo con la presente invención de forma sencilla y rutinaria.
Se pueden preparar formas farmacéuticas adecuadas para administrar los compuestos que son útiles de acuerdo con la presente invención mediante técnicas conocidas en la técnica y que comprenden mezcla, granulación, compresión, disolución, esterilización y similares.
Otro aspecto es el compuesto de fórmula (I) o sales o hidratos o cocristales o composiciones farmacéuticas del mismo para su uso en medicina.
Particularmente, el compuesto de fórmula (I) o sales o hidratos o cocristales o composiciones farmacéuticas son adecuados para su uso en un método de prevención o tratamiento o diagnóstico del cáncer. Más particularmente, el compuesto de fórmula (I) es para su uso en la prevención, el tratamiento o el diagnóstico de enfermedades cancerosas. El compuesto de fórmula (I) o sales o hidratos o cocristales o composiciones farmacéuticas pueden utilizarse como agentes antineoplásicos.
De acuerdo con una realización preferida, el compuesto de fórmula (I) o sales o hidratos o cocristales o composiciones farmacéuticas son para su uso en un método de tratamiento del cáncer, en donde el cáncer es glioblastoma (GB), mieloma múltiple (MM) o cáncer de páncreas (CP).
Preferentemente, los compuestos de fórmula (I) mencionados anteriormente son para su uso en el diagnóstico de cáncer, más preferentemente glioblastoma, mieloma múltiple o cáncer de páncreas.
Ventajosamente, para el diagnóstico del cáncer, los compuestos de fórmula (I) mencionados anteriormente se marcan con isótopos radiactivos de semividas corta, por ejemplo carbono-11 (11C), nitrógeno-13 (13N) u oxígeno-15 (15O).
Los expertos en la materia conocen métodos para el diagnóstico de cáncer que utilizan compuestos marcados con isótopos radiactivos y comprenden, por ejemplo, la tomografía por emisión de positrones (PET).
Ejemplos no limitantes de los compuestos de fórmula (I) que son útiles de acuerdo con la presente invención se representan en la tabla 1 a continuación.
Tabla 1
Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar la presente invención sin, sin embargo, limitarla de ningún modo.
EJEMPLOS
Entre los diversos compuestos de vinil piperazina-piperidina urea sustituidos, los derivados depiperazina urease sintetizan y prueban en diferentes líneas de células cancerosas.
1. SÍNTESIS GENERAL DEL COMPUESTO DE FÓRMULA (I)
Los compuestos de fórmula (I) se prepararon mediante la ruta sintética que se explica a continuación.
Etapa (a). La reacción de Heck se realizó con compuestos de arilo (i) y crotonato de etilo (ii) a través de un catalizador de paladio como acetato de paladio microencapsulado en matriz de poliurea (Pd EnCat®40), cloruro de tetraetilamonio (TEAC), una base fuerte, tal como acetato de sodio (NaOAc) y utilizando N,N-dimetilformamida como disolvente de reacción. La mezcla de reacción, mantenida en medio inerte y bajo agitación magnética, se calienta a reflujo con un baño de aceite, obteniéndose el intermedio (iii).
Etapa (b). El éster alílico (iii) se sometió a una reacción de reducción con hidruro de aluminio y litio (LiAlH<4>) en un disolvente adecuado, por ejemplo, éter dietílico anhidro (Et<2>O) o tetrahidrofurano (THF). La reacción se realizó en un baño de hielo a 0 °C, hasta obtener el intermedio de fórmula (iv).
Etapa (c). El intermedio alcohólico (iv) se sometió a una reacción Sn2 usando el disolvente adecuado, por ejemplo tetrahidrofurano anhidro (THF). Se usaron trifenilfosfina (PPh<3>) y N-bromosuccinimida (NBS) para producir un intermedio reactivo que, después de la adición del intermedio (iv), y trietilamina (TEA) y N-Boc-piperazina (v), da lugar a la obtención del intermedio de fórmula (vi).
Etapa (d). La desprotección del grupo terc-butiloxicarbonilo se realizó usando un ácido, por ejemplo TFA, y el disolvente adecuado tal como diclorometano (DCM), obteniéndose de este modo la piperazina desprotegida (intermedio (vii)).
Etapa (e). El intermedio de amina de fórmula (vii) se hizo reaccionar con un isocianato adecuado de fórmula (viii) en presencia de TEA y un disolvente adecuado, por ejemplo DCM anhidro, hasta que se formó el compuesto deseado de fórmula (II).
Síntesis de los compuestos de fórmula (I) - Compuestos 20-24
Los compuestos 20, 21, 22, 23 y 24 se preparan mediante la ruta sintética que se describe a continuación.
Etapa (a). En un matraz de fondo redondo de dos bocas, conservando las condiciones anhidras, se añaden rápidamente los reactivos sólidos. Después de la adición de acetato de sodio (AcONa, 2 equiv.), se añade paladio EnCat® (carga 0,4 mmol/g, 1 %, 0,01 equiv.) con cloruro de tetraetilamonio (TEAC, 2 equiv.). Posteriormente se añaden también el reactivo líquido (E)-but-2-enoato de etilo (1,5 equiv.; d= 0,918 g/ml) y el disolvente seco N,N-dimetilformamida (DMF).
Por separado, en un matraz de fondo redondo, se prepara una solución de bromuro de arilo (Ar-Br, 1 equiv.) en DMF seca. Esta solución se transfiere a un embudo de decantación, obteniendo una concentración final en la atmósfera de reacción cercana a 0,35 M. Esta mezcla de reacción, mantenida en un medio inerte y bajo agitación magnética, se calienta a reflujo con un baño de aceite hasta alcanzar una temperatura de 105 °C. Tras casi cinco horas, la reacción se completa. La mezcla de reacción se diluye y se extrae tres veces con éter dietílico (Et<2>O). Las fases orgánicas recogidas se lavan con agua, se secan con sulfato de sodio (Na<2>SO<4>) anhidro, se filtran y se evaporan a sequedad a presión reducida. El aceite crudo de color marrón oscuro obtenido después de la evaporación del disolvente se purifica mediante cromatografía sobre gel de sílice con un rendimiento del 55-60 %.
Etapa (b). En un matraz de fondo redondo de una boca, conservando las condiciones anhidras, se solubiliza el éster alílico (1 equiv.) de la etapa sintética anterior en Et<2>O seco bajo agitación magnética. Una vez que la solución sea homogénea, el matraz de reacción se coloca en un baño de hielo a 0 °C. Posteriormente se añade lentamente y gota a gota a la mezcla de reacción hidruro de aluminio y litio (LiAlH<4>, 1 equiv., solución 1 M en THF seco). Después de 1 hora, la reacción se extingue añadiendo unas gotas de acetato de etilo (AcOEt) y, después, un poco de solución acuosa saturada de cloruro de amonio (NH<4>CI). El procedimiento de elaboración sigue con tres extracciones con Et<2>O y lavado de las fases orgánicas recogidas con salmuera. Posteriormente, la fase orgánica se seca con Na<2>SO<4>anhidro, se filtra y se evapora a sequedad a presión reducida. Dependiendo de la pureza del producto crudo, como se informa a continuación, este se purifica mediante cromatografía en gel de sílice o se usa directamente en la reacción posterior.
Etapa (c). En un matraz de fondo redondo de una boca, se solubiliza una mezcla de alcohol alílico (1 equiv.) y trifenilfosfina (PPh<3>, 1,5 equiv.) en THF seco bajo agitación magnética, conservando las condiciones anhidras y en baño de hielo a -18 °C. La mezcla de reacción se trata con N-bromosuccinimida (NBS, 1,4 equiv.): esta operación debe hacerse con cuidado, añadiendo la NBS poco a poco en seis fracciones iguales cada 5-10 minutos. Mientras tanto, en otro matraz de fondo redondo anhidro, se solubilizan en seco las aminas 1-Boc-piperazina (1,2 equiv.) y trietilamina (TEA, 2 equiv.). Esta solución se añade posteriormente al matraz de reacción, previamente enfriado de nuevo a -18 °C. Tras la adición de estos últimos reactivos, el matraz se retira del baño de hielo una vez más y se deja reaccionar durante la noche a temperatura ambiente bajo agitación magnética. El producto crudo se elabora mediante dilución con Et<2>O, filtración directamente en el embudo de decantación y lavado tres veces con una solución acuosa saturada de Na<2>CO<3>. A continuación, la fase orgánica lavada se seca con Na<2>SO<4>anhidro, se filtra y se evapora a sequedad a presión reducida. De esta forma se obtiene un aceite crudo oscuro que se purifica mediante cromatografía sobre gel de sílice.
Etapa (d). En un matraz de fondo redondo de dos bocas del volumen apropiado, se disolvió el intermedio protegido con Boc en diclorometano (DCM) y posteriormente se añadió ácido trifluoroacético (TFA, 10 equiv.). Se evaporó el disolvente y los productos de-Boc resultantes se usaron sin purificación adicional.
Etapa (e). En un matraz de fondo redondo de una boca, se solubiliza una mezcla de trietilamina (TEA, 5 equiv.) e intermedio piperazina (1 equiv.) en DCM bajo agitación magnética. A continuación, se añadieron los isocianatos correspondientes (1,5 equiv.). Después de 1-2 horas, el producto crudo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice hasta que se formó el compuesto deseado de fórmula (III).
Los compuestos 20, 21, 22, 23 y 24 se prepararon usando la ruta sintética descrita anteriormente, mostrando el sustituyente notificado en la tabla 2:
Tabla 2
Ejemplos de caracterización de compuestos de fórmula (III):
Caracterización del compuesto 20: sólido blanco, 90 %,Rf= 0,26 (DCM/MeOH 9:1), UHPLC-ESI-MS:
Rt = 2,33,m/z= 378,2 [M H]+. RMN de 1H (300 MHz, CDCk) 87,84 - 7,78 (m, 4H), 7,56 (dd,J= 1,9 Hz,J= 8,6 Hz, 1H), 7,48 - 7,44 (m, 2H), 6,02 (dt,J= 1,1 Hz,J= 7,2 Hz, 1H), 4,07 (dd,J= 6,8 Hz,J= 13,5 Hz, 1H), 3,55 -3,48 (m, 5H), 2,82 -2,79 (m, 5H), 2,18 (d,J= 0,9 Hz, 3H), 2,03 - 1,93 (m, 2H), 1,67 - 1,56 (m, 4H), 1,39 - 1,28 (m, 2H) ppm;
RMN de 13C (100 MHz, CDCla) 8 157,2, 141,0, 139,6, 133,2, 132,8, 128,1, 127,9, 127,5, 126,2, 126,0, 124,6, 124,0, 120,4, 55,6, 52,6, 51,7, 42,6, 33,4, 23,6, 16,4 ppm.
Caracterización del compuesto 21: aceite amarillo, 36%,Rf= 0,31 (DCM/MeOH 9:1), UHPLC-ESI-MS:Rt= 2,48,m/z= 392,2 [M H]+. RMN de 1H (300 MHz, CDCk) 87,82 - 7,73 (m, 4H), 7,56 (dd,J= 1,8 Hz,J= 8,6 Hz, 1H), 7,45 - 7,43 (m, 2H), 6,10 (t,J= 7,0 Hz, 1H), 5,04 (s a, 1H), 3,70 (s, 5H), 3,60 - 3,53 (m, 1H), 2,96 (s, 5H), 2,10 (s, 3H), 1,90 - 1,86 (m, 2H), 1,69 - 1,65 (m, 2H), 1,59 - 1,55 (m, 1H), 1,32 - 1,25 (m, 2H), 1,15 -1,07 (m, 3H) ppm;
RMN de 13C (100 MHz, CDCk) 8156,8, 139,1, 136,0, 133,2, 132,9, 130,9, 128,2, 127,9, 127,5, 126,3, 126,1, 124,9, 124,1, 51,4, 50,8, 49,8, 41,8, 33,6, 25,5, 25,2, 16,4 ppm.
Caracterización del compuesto 24: aceite amarillo, 12 %,Rf= 0,36 (DCM/MeOH 19:1), UHPLC-ESI-MS:Rt= 2,42,m/z= 452,2 [M H]+. RMN de 1H (300 MHz, CDCk) 87,76 -7,68 (m, 3H), 7,57 (dt,J= 1,8 Hz,J= 9,0 Hz, 1H), 7,13 -7,09 (m, 3H), 6,95 - 6,89 (m, 2H), 6,01 (t,J= 7,2 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,73 - 3,68 (m, 6H), 2,80 - 2,75 (m, 4H), 2,20 (d,J= 5,0 Hz, 3H) ppm; RMN de 13C (100 MHz, CDCk) 8159,1, 157,8 (d,J= 6,1 Hz), 154,5, 145,1, 137,4, 135,1, 134,0, 129,7, 128,8, 128,2, 127,0, 126,8, 124,5, 119,1 (d,J= 4,3 Hz), 115,6, 111,4, 105,5, 55,3, 52,1, 51,8, 43,4, 16,3 ppm.
Se realizaron espectros de masas analíticos, preparativos, de HPLC y de condición de ionización por pulverización de electrones (ESI) en un Agilent uHPLC (1290 Infinity) y un Agilent Prep-HPLC (1260 Infinity), ambos equipados con un detector de matriz de diodos y un MSD cuadrupolo utilizando gradientes de mezcla de ácido fórmico/agua/acetonitrilo como disolvente del sistema. Los espectros de masas de ionización por electropulverización de alta resolución (ESI-FTMS) se registraron en un Thermo LTQ Orbitrap (espectrómetro de masas de alta resolución de Thermo Electron) acoplado a un sistema de HPLC "Accela" suministrado con una columna "Hypersil GOLD" (Thermo Electron).
Los espectros de RMN de 1H de láminas de aluminio prerrecubiertas por TLC de Macherey Nagel se registraron a temperatura ambiente en un espectrómetro Bruker Avance que operaba a 300 MHz. Los desplazamientos químicos se dan en ppm (8) a partir del tetrametilsilano como patrón interno o pico de disolvente residual. Los datos significativos de RMN de 1H se tabulan en el siguiente orden: multiplicidad (s, singlete; d, doblete; t, triplete; c, cuadruplete; m, multiplete; dd, doblete de dobletes; dt, doblete de tripletes; td, triplete de dobletes; a, ancho), constante(s) de acoplamiento en hercios, número de protones. Los datos de RMN de 13C desacoplados de protones se adquirieron a 100 MHz. Los desplazamientos químicos de 13C se notifican en partes por millón (8, ppm). Todos los datos de RMN se recopilaron a temperatura ambiente (25 °C).
Los espectros de resonancia magnética nuclear (RMN de 1H y RMN de 13C) obtenidos para los compuestos 20, 21 y 24 se presentan en las figuras 1-6. En los espectros, el desplazamiento químico (en ppm) se notifica en el eje x y la intensidad normalizada se notifica en el eje y.
2. PERFIL ANTINEOPLÁSICO
VIABILIDAD CELULAR DESPUÉS DEL TRATAMIENTO CON COMPUESTOS
Se usó el ensayo de sulforrodamina B (SRB) para evaluar la viabilidad de las células RPMI 8226in vitro.Es un método ampliamente utilizado para evaluar la viabilidad celular y la citotoxicidad. Este método se basa en la propiedad de la SRB, que se une estequiométricamente a las proteínas en condiciones ácidas suaves. Por tanto, la cantidad de colorante unido se puede usar como medida de la proliferación celular.
Las células RPMI 8226 y U87-MG humanas se cultivaron en un medio de cultivo (DMEM bajo en glucosa para U87-MG y RPMI 1640 para RPMI 8226), suplementado con suero fetal bovino al 10 %, de L-glutamina al 1 %, penicilina y estreptomicina al 1 %. Las células se mantuvieron en una incubadora humidificada a 37 °C y el 5 % de CO<2>. Para el ensayo de SRB, se sembraron 1x104 células por pocillo en una placa de 96 pocillos y se trataron con concentraciones crecientes de los compuestos (1-20 |iM). Después de 24 horas, las células se fijaron con ácido tricloroacético al 10% y se tiñeron con solución de SRB. El exceso de colorante se eliminó lavando con ácido acético al 1 %. A continuación, el colorante unido a la proteína se disolvió en una solución base Tris 10 mM y se midió la absorbancia a 510 nm usando un lector de microplacas.
El análisis estadístico de los datos obtenidos se realizó usando el análisis de varianza de una vía (ANOVA) y la prueba post-hoc de Dunnet. Se consideraron estadísticamente significativos valores de p<0,01 (**).
Los resultados, expresados como la media ± desviación estándar, representan el porcentaje de células viables en comparación con el control no tratado (establecido arbitrariamente al 100 %).
La figura 7 representa los resultados obtenidos en células U87-MG después del tratamiento con los compuestos 20 (A), 21 (B), 22 (C) 23 (D) y 24 (E). La figura 8 representa los resultados obtenidos para las células Rp MI 8226 después del tratamiento con 20 (A), 21 (B), 22 (C) 23 (D) y 24 (E). Las células fueron tratadas durante 24 horas con concentraciones crecientes de compuestos (1, 5, 10 y 20 |iM).
Los resultados de la figura 7 demuestran que todos los compuestos fueron capaces de reducir la viabilidad celular de las células U87-MG.
Las IC<50>para las células U87-MG son 13,3±0,6 |iM (compuesto 20), 10,0±0,5 |iM (compuesto 21), 10,8±1,8 |iM (compuesto 22), 7,1±0,1 |iM (compuesto 23) y 12,2±0,3 |iM (compuesto 24).
Los resultados de la figura 8 demuestran que todos los compuestos fueron capaces de reducir la viabilidad celular de las células RPMI 8226.
Las IC<50>para las células RPMI 8226 son 7,9±0,7 |iM (compuesto 20), 6,4±0,3 |iM (compuesto 21), 3,7±0,6 |iM (compuesto 22), 4,8±0,1 |iM (compuesto 23) y 4,5±0,2 |iM (compuesto 24).
En la tabla 3 se notifican los valores IC20, IC50 e IC80 de las células U87-MG y RPMI 8226. Estos resultados demuestran que todos los compuestos analizados perjudicaron significativamente la viabilidad celular de ambas líneas celulares de manera dependiente de la dosis en comparación con los controles no tratados.
Tabla 3 - IC<20>, IC<50>y IC<80>de células U87-MG y RPMI 8226 en el ensayo SRB
MIGRACION CELULAR
El ensayo de cicatrización de heridas por rasguño evalúa la capacidad de las células para cerrar un espacio creado manualmente en la monocapa celularin vitro.Este ensayo es indicativo de la motilidad celular y la capacidad de las células para propagarse localmente.
Las células se sembraron en placas de 6 pocillos y se incubaron hasta alcanzar la confluencia. En este punto, usando una punta de plástico, se creó manualmente un rasguño en la superficie de la monocapa de células. A continuación, el medio de cultivo se reemplazó con medio fresco con o sin tratamientos. Las células se trataron con concentraciones crecientes de los compuestos (1-10 |iM). Se tomaron microfotografías inmediatamente después del rasguño (t0) y 24 horas después (t24). El área del rasguño se midió utilizando el software ImageJ y el área de migración celular se calculó restando el área t24 del área t0.
El análisis estadístico de los datos obtenidos se realizó usando el análisis de varianza de una vía (ANOVA) y la prueba post-hoc de Dunnet. Se consideraron estadísticamente significativos valores de p<0,01 (**).
Los resultados, expresados como la media ± desviación estándar, representan el porcentaje del área de migración celular en comparación con el control no tratado (establecido arbitrariamente al 100 %).
Los resultados de la Figura 9 demuestran que el compuesto 20 tenía una capacidad débil para reducir la migración. Por el contrario, los compuestos 21, 22, 23 y 24 son fuertes inhibidores de la migración celular y su efecto dependía de la dosis.
INVASIÓN CELULAR
La invasión celular se evalúa mediante la cámara de Boyden. En la cámara de Boyden, las células atraídas por un quimioatrayente pasan a través de una membrana porosa recubierta con gelatina. Este ensayoin vitroes indicativo de la capacidad de las células para atravesar un sustrato extracelular e invadir los tejidos circundantes. Las células U87-MG y RPMI se resuspendieron en medio sin FBS, con o sin tratamientos. La IC<20>obtenida en el ensayo de SRB se utilizó como concentración de tratamiento del compuesto, para no afectar a los resultados de invasión con una mortalidad demasiado alta. Se sembraron 5x103 células/pocillo en el compartimento superior de la cámara de Boyden. En el compartimento inferior se colocó un medio completo suplementado con FBS al 10 %. Se usó FBS como quimioatrayente. Entre los dos compartimentos se colocó una membrana de policarbonato recubierta de gelatina con poros de 8 |im. La cámara de Boyden, así configurada, se colocó a 37 °C en una incubadora durante 24 horas (células RPMI 8226) o durante 16 horas (células U87-MG). Después de la incubación, se retiró la membrana y las células en la superficie inferior de la membrana se fijaron y se tiñeron con el kit de tinción Diffquick. Se tomaron microfotografías y se contaron las células usando el software ImageJ.
El análisis estadístico de los datos obtenidos se realizó usando el ANOVA y la prueba post-hoc de Dunnet. Se consideraron estadísticamente significativos valores de p<0,01 (**).
Los resultados, expresados como la media ± desviación estándar, representan el porcentaje de células que pueden atravesar la membrana en comparación con el control no tratado (establecido arbitrariamente al 100 %).
Los resultados de la figura 10A demuestran que el compuesto 22 es muy eficaz para reducir la invasión celular de U87-MG. El compuesto 23 también redujo la invasión celular, pero fue menos eficaz que el compuesto 22. Los compuestos 20 y 21 tuvieron un efecto débil contra la invasión celular de U87-MG, mientras que el compuesto 24 no es eficaz.
Los resultados de la figura 10B demuestran que dichos compuestos tenían la capacidad de reducir la invasión celular de las células RPMI 8226. Los compuestos 20, 21 y 24 tuvieron un efecto débil (aproximadamente el 80 % en comparación con el control no tratado). La reducción de la invasión celular inducida por los compuestos 22 y 23 fue estadísticamente significativa, sin embargo menor que la obtenida en células U87-MG.
Estos resultados demuestran que los compuestos 22 y 23 son significativamente capaces de inhibir la invasión de células U87-MG.
ACTIVIDAD INHIBIDORA DEL PROTEASOMA
El proteasoma es un complejo celular responsable de la degradación de una gran cantidad de proteínas intracelulares reguladoras, mal plegadas o dañadas. Se considera un objetivo importante para la terapia contra el cáncer.
La actividad del proteasoma se evaluó mediante una sonda fluorescente 7-amido-4-metilcumarina.
Las células U87-MG y RPMI 8226 se cultivaron en placas de 6 pocillos a una densidad de 25x104 células/pocillo y se trataron con una concentración IC<50>de cada compuesto (calculada en el ensayo de SRB). Después de 24 horas de tratamiento, se recogieron las células y se obtuvieron extractos de proteínas totales. El tampón de lisis (Hepes 5 mM pH 7,5, NaCl 150 mM, glicerol al 10 %, Triton X100 al 1 %, MgCh 1,5 mM, EGTA 5 mM) no se complementó con inhibidores de proteasas y fosfatasas. El contenido de proteína se cuantificó usando el método de Bradford. Se mezclaron 40 |ig de proteínas con tampón de proteasoma (Hepes 250 mM pH 7,5, EDTA 5 mM, NP-40 al 0,5 %, SDS al 0,01 %) y 7-amido-4-metilcumarina 2,2 mM. Después de 2 horas de incubación a 37 °C, se cuantificó la fluorescencia en un lector de microplacas (excitación 380 nm, emisión 460 nm).
El análisis estadístico de los datos obtenidos se realizó usando el ANOVA y la prueba post-hoc de Dunnet. Se consideraron estadísticamente significativos valores de p<0,01 (**).
Los resultados, expresados como la media ± desviación estándar, representan el porcentaje de actividad del proteasoma en comparación con el control no tratado (establecido arbitrariamente al 100 %).
Los resultados de la figura 11A demuestran que los compuestos 21 y 24 son fuertes inhibidores del proteasoma (inhibición superior al 50 %) para las células U87-MG. Los compuestos 20 y 22 son menos eficaces que los anteriores (aproximadamente 50 % de inhibición). El compuesto 23 únicamente tiene un efecto inhibidor débil.
Los resultados de la figura 11 B demuestran que los compuestos 20 y 22 son fuertes inhibidores del proteasoma (inhibición superior al 50 %) para las células RPMI 8226. Los compuestos 23 y 24 únicamente tienen un efecto inhibidor débil. El compuesto 21 no tiene efecto inhibidor.
Estos resultados demuestran que los compuestos 20 y 22 son capaces de inhibir la actividad del proteasoma en dos líneas de células tumorales que no solo derivan de tumores diferentes sino que también tienen características biológicas diferentes. Es interesante señalar que, para los compuestos 21 y 24 t, la capacidad de inhibir el proteasoma depende de la línea celular. Finalmente, el compuesto 23 únicamente tiene una actividad inhibidora débil en ambas líneas celulares.
EFECTO NEUROTÓXICO
Se realizó una evaluación de los crecimientos de neuritas inducidos por NGF en los ganglios de la raíz dorsal (DRG) de ratas Sprague-Dawley embrionarias de 15 días de edad. Brevemente, los DRG se recogieron asépticamente y se sembraron en placas recubiertas de colágeno. Los DRG se cultivaron en medio AN<2>suplementado con 5 ng/ml de NGF en una incubadora humidificada con CO<2>al 5 % a 37 °C. Después de 2 horas, los DRG se trataron con concentraciones crecientes de compuestos, correspondientes a IC<20>, IC<50>e ICs<0>en el ensayo de SRB con U87-MG. Se tomaron microfotografías de DRG después de 24 y 72 horas de tratamiento y se midió manualmente la elongación de las neuritas usando el software ImageJ.
El análisis estadístico de los datos obtenidos se realizó usando el ANOVA y la prueba post-hoc de Dunnet. Se consideraron estadísticamente significativos valores de p<0,01 (**).
Los resultados, expresados como la media ± desviación estándar, representan el porcentaje de crecimiento de neuritas en comparación con el control no tratado (establecido arbitrariamente al 100 %).
De acuerdo con este método de evaluación de neurotoxicidadin vitro,un compuesto puede considerarse neurotóxico si la longitud de las neuritas es inferior al 50 % del control.
La figura 12 representa los resultados obtenidos con los compuestos 20 (A), 21 (B), 22 (C) 23 (D) y 24 (E). Los resultados de la figura 12 demuestran que el compuesto 20 no es neurotóxico hasta 13 |iM. Por el contrario, a la concentración más alta evaluada, sí lo es. Los compuestos 21, 22 y 23 no son neurotóxicos a todas las concentraciones y puntos temporales evaluados. El compuesto 24 reduce significativamente la longitud de las neuritas, pero el porcentaje es superior al 50 % a todas las concentraciones evaluadas y puede considerarse no neurotóxicoin vitro.
Estos resultados demuestran que los compuestos 21, 22, 23 y 24 no son neurotóxicos a todas las concentraciones evaluadas, mientras que el compuesto 20 no es neurotóxico únicamente hasta 13 |iM.

Claims (15)

  1. REIVINDICACIONES 1. Compuesto de fórmula (I):
    en donde: Z es N o CH, n es 1, 2, 3, 4 o 5, Ri es alquilo C1-C3 lineal o ramificado, R<2>y R<4>son independientemente un arilo sustituido o no sustituido o un resto cíclico sustituido o no sustituido, R<3>es hidrógeno o alquilo C1-C3 lineal o ramificado.
  2. 2. Compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, en donde Z es N.
  3. 3. Compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en donde n es 1.
  4. 4. Compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde R<3>es hidrógeno.
  5. 5. Compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde R<4>es ciclopentilo no sustituido, ciclohexilo no sustituido, fenilo, 4-metilfenilo, 2,6-difluorofenilo o 4-trifluorometilfenilo. <6>.
  6. Compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde R<1>es metilo.
  7. 7. Compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a<6>, en donde R<2>es naftilo sustituido o no sustituido. <8>. Compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde R<2>es 2-naftilo sustituido o no sustituido que tiene la siguiente fórmula (II):
  8. en donde, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>, R<10>, R<11>, son independientemente hidrógeno, alquilo C1-C4 lineal o ramificado, alcoxi C1-C4 lineal o ramificado o halógeno.
  9. 9. Compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación<8>, en donde R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<10>, R<11>, son hidrógeno y R9 es hidrógeno, flúor, cloro o metoxi.
  10. 10. Compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 seleccionado en el siguiente grupo: - (E)-4-(3-(6-fluoronaftalen-2-il)pent-2-en-1 -il)-N-(4-fluorofenil)piperazina-1-carboxamida, - (E)-N-(3,5-difluorofenil)-4-(3-(6-metoxinaftalen-2-il)pent-2-en-1-il)piperidina-1-carboxamida, - (E)-N-ciclohexil-4-(3-(6-fluoronaftalen-2-il)pent-2-en-1 -il)piperidina-1 -carboxamida, - (E)-4-(3-(naftalen-2-il)but-2-en-1 -il)-N-fenilpiperazina-1-carboxamida, - (E)-4-(3-(naftalen-2-il)but-2-en-1-il)-N-(4-(trifluorometil)fenil)piperazina-1-carboxamida, - (E)-N-ciclopentil-4-(3-(naftalen-2-il)but-2-en-1 -il)piperazina-1-carboxamida, - (E)-N-ciclohexil-4-(3-(naftalen-2-il)but-2-en-1-il)piperazina-1-carboxamida, - (E)-4-(3-(naftalen-2-il)but-2-en-1-il)-N-(p-tolil)piperazina-1-carboxamida, - (E)-4-(3-(6-metoxinaftalen-2-il)but-2-en-1-il)-N-(4-(trifluorometil)fenil)piperazina-1-carboxamida, - (E)-N-(2,6-difluorofenil)-4-(3-(6-metoxinaftalen-2-il)but-2-en-1-il)piperazina-1-carboxamida.
  11. 11. Proceso para la preparación del compuesto de fórmula (I):
    como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, que comprende la reacción del compuesto (A):
    con el compuesto de fórmula (B):
    en donde n, Z, Ri, R<2>, R<3>y R<4>tienen el mismo significado del compuesto de fórmula (I).
  12. 12. Composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones<1>a<10>y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
  13. 13. Compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 o composiciones farmacéuticas de acuerdo con la reivindicación<1 2>, para su uso en medicina.
  14. 14. Compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 o composiciones farmacéuticas de acuerdo con la reivindicación<1 2>, para su uso en un método de tratamiento del cáncer o para su uso en el diagnóstico del cáncer.
  15. 15. Compuesto de fórmula (I) para su uso de acuerdo con la reivindicación 14, en donde el cáncer es glioblastoma (GB), mieloma múltiple (MM) o cáncer de páncreas (CP).
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