ES2909316T3

ES2909316T3 - Reguladores de CFTR y métodos de uso de los mismos

Info

Publication number: ES2909316T3
Application number: ES16880160T
Authority: ES
Inventors: Alan Verkman; Marc Levin; Onur Cil; Sujin Lee
Original assignee: University of California Berkeley; University of California San Diego UCSD
Current assignee: University of California Berkeley; University of California San Diego UCSD
Priority date: 2015-12-24
Filing date: 2016-12-23
Publication date: 2022-05-06
Anticipated expiration: 2036-12-23
Also published as: CO2018007237A2; KR20180102590A; BR112018012949A2; US11230535B2; RU2018126958A; AU2016379444B2; CN108848668A; EP3394040A4; BR112018012949B1; RU2749834C2; US20180327369A1; NZ743726A; JP7297827B2; JP2019505502A; US20230357170A1; JP2021185183A; CA3009510A1; ZA201804230B; RU2018126958A3; EP3394040A1

Abstract

Un compuesto de la fórmula I: **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es -O-; R2 es haloalquilo C2-C4, en el que R2 se sustituye con al menos cuatro átomos de flúor; R3 es hidrógeno; R4 es -CH3 o -CH2CH3; y R1, R5, R6, R7, R8 y R9 son hidrógeno.

Description

DESCRIPCIÓN

Reguladores de CFTR y métodos de uso de los mismos

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

Esta solicitud reivindica la prioridad y el beneficio de la solicitud provisional de los Estados Unidos No. 62/387,590, presentada el 24 de diciembre de 2015.

Declaración acerca de los derechos a las invenciones realizadas de conformidad con la investigación y el desarrollo patrocinados federalmente

Esta invención se realizó con el apoyo del gobierno de conformidad con las subvenciones números TR000004, EY023981, EY013574, EB000415, DK035124, DK072517 y DK101373, otorgadas por los Institutos Nacionales de Salud. El gobierno tiene determinados derechos en la invención.

Antecedentes de la invención

El estreñimiento es una queja clínica común en adultos y niños que afecta negativamente la calidad de vida. Se ha estimado que la prevalencia del estreñimiento crónico es del 15 % en la población de los Estados Unidos, con costes de atención médica estimados en aproximadamente 7 mil millones de dólares anuales, con más de 500 millones de dólares gastados en laxantes. El pilar de la terapia del estreñimiento incluye laxantes y muchos de ellos están disponibles sin receta (fibra soluble, polietilenglicol, probióticos, etc.). Hay dos activadores de los canales de cloruro aprobados por la FDA, lubiprostona y linaclotida, para el tratamiento del estreñimiento, pero los ensayos clínicos mostraron una eficacia variable y poco impresionante de ambos fármacos. A pesar del amplio rango de opciones terapéuticas, subsiste una necesidad continua de fármacos seguros y eficaces para tratar el estreñimiento.

El ojo seco es un trastorno heterogéneo de la película lagrimal que produce malestar ocular, alteración visual y patología de la superficie ocular, y sigue siendo una necesidad no satisfecha en la enfermedad ocular con opciones terapéuticas eficaces limitadas disponibles. El ojo seco es un importante problema de salud pública en una población que envejece y afecta hasta a un tercio de la población mundial, que incluye 5 millones de estadounidenses de 50 años o más. Las lágrimas artificiales sin receta y los tapones lagrimales implantables se utilizan con frecuencia para el alivio sintomático. Los enfoques terapéuticos implican reducir la inflamación de la superficie ocular o aumentar la secreción lagrimal/mucina. El único medicamento actualmente aprobado para el ojo seco es la ciclosporina tópica, un antiinflamatorio que no elimina todos los síntomas en la mayoría de los pacientes con ojo seco. De acuerdo con lo anterior, se necesitan tratamientos adicionales para el ojo seco de moderado a severo. En el presente documento se describen, entre otras cosas, soluciones a estos y otros problemas de la técnica. Ma Tonghui et al., Journal of Biological Chemistry (2002), vol. 277, 40, 37235-37241 describe activadores de alta afinidad del Regulador de conductancia de transmembrana de fibrosis quística (CFTR). Jong Yeon Hwang et al., Biorganic & Medicinal Chemistry Letters 23 (2013) 6467-6473, divulga pirazoles 1,3,4-trisustituidos como inhibidores de la entrada del virus de la hepatitis C. Dudley et al., Journal of the American Chemical Society, vol. 73, 7, página 2988 (1951) describe una serie de 2,4-dialcoxi-6-amino-s-triazinas. El documento WO2009/091388 describe triazinas que tienen actividad antiviral. El documento WO2005/009980 describe análogos de piridin-2-ilamina sustituidos. El documento US2004/209880 divulga compuestos de triazina y su uso en el tratamiento de enfermedades que incluyen enfermedades relacionadas con la proliferación celular no deseada.

Breve resumen de la invención

La presente invención se define por las reivindicaciones. En un aspecto, la invención proporciona compuestos que tienen la fórmula:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En el compuesto de la fórmula I, X es -O-; R²es haloalquilo C2-C4, en el que R²se sustituye con al menos cuatro

átomos de flúor; R³es hidrógeno; R⁴es -CH3 o -CH2CH3; y R¹, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunas realizaciones el compuesto es

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En el presente documento también se proporcionan composiciones farmacéuticas. En un aspecto es una composición

farmacéutica que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable, y un compuesto de la fórmula I, o sal

farmacéuticamente aceptable del mismo.

Adicionalmente, se divulgan, pero no se reivindican, los métodos para activar un Regulador de Conductancia de

Transmembrana de Fibrosis Quística (CFTR). El método incluye poner en contacto el CFTR con una cantidad eficaz

de un compuesto descrito en el presente documento, activando de este modo el CFTR.

Adicionalmente, se divulgan, pero no se reivindican, los métodos para tratar una enfermedad o trastorno en un sujeto

en necesidad del mismo al administrar a dicho sujeto una cantidad eficaz de un compuesto descrito en el presente

documento (por ejemplo, un compuesto de la fórmula I).

En un aspecto se proporciona un compuesto de la fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para

uso en tratar el estreñimiento, tratar un trastorno del ojo seco, aumentar la lagrimación, activar un Regulador de

Conductancia de Transmembrana de Fibrosis Quística (CFTR), tratar una enfermedad colestásica del hígado, o tratar

una enfermedad o trastorno pulmonar.

En las realizaciones, la enfermedad o trastorno pulmonar es enfermedad pulmonar obstructiva crónica (por ejemplo,

bronquitis, asma, disfunción pulmonar inducida por el humo del cigarrillo). En las realizaciones, tratar el estreñimiento

comprende adicionalmente administrar un agente anti-estreñimiento. En las realizaciones, tratar un trastorno del ojo

seco comprende adicionalmente administrar un agente anti-ojo seco. En las realizaciones, el estreñimiento es

estreñimiento inducido por opioides, estreñimiento idiopático crónico o síndrome del intestino irritable con predominio

de estreñimiento. En las realizaciones, el trastorno del ojo seco es un trastorno de la glándula lagrimal, o en el que la

enfermedad o trastorno pulmonar es enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis, asma, y disfunción

pulmonar inducida por el humo del cigarrillo.

Breve descripción de los dibujos

FIG. 1. Estrategia para el desarrollo preclínico de activadores de CFTR para la terapia del ojo seco. Los activadores de CFTR de tipo silvestre humano identificados mediante cribado de alto rendimiento se confirman y caracterizan utilizando ensayos electrofisiológicos y bioquímicos, y luego se prueban en ratones vivos para detectar actividad en la superficie ocular mediante mediciones de diferencia de potencial y secreción de fluido lagrimal. Los mejores compuestos luego se prueban para las propiedades farmacocinéticas y la eficacia de en un modelo de roedor con ojo seco.

FIGS. comparativas 2A-2D. Caracterización in vitro de activadores de CFTR. FIG. 2A) (Superior) Estructuras químicas. (Inferior) Corriente de cortocircuito representativa (Isc) medida en células de tiroides de rata Fischer (FRT) que expresan CFTR de tipo silvestre. La corriente de CFTR se estimuló por los compuestos de prueba y forskolina, se inhibió por CFTRinh-172 (10 |^jM). FIG. 2B) Dependencia de la concentración de los activadores de CFTR (cada conjunto de datos se deriva de un único experimento de dosis-respuesta como en A y se ajusta utilizando una curva exponencial). La activación de CFTR al cien por cien se define como aquella producida por forskolina 20 j M. FIG. 2C) Medición de Isc para VX-770 realizada como en A. FIG. 2D) Concentración de cAMP celular en células FRT en respuesta a la incubación durante 10 min con compuestos de prueba 5 j M sin o con forskolina (fsk, 100 nM). Los controles positivos incluyeron forskolina (100 nM y 20 j M) y forskolina más 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX, 100 j M) (media ± Ee M, n= 4-8).

FIGS. 3A-3E. Mediciones de diferencia de potencial (PD) de activadores de CFTR en la superficie ocular en ratones vivos. FIG. 3A) (Izquierda) Fotografía de un ratón anestesiado que demuestra perfusión de la superficie ocular para la medición de PD. El catéter de perfusión, adherido al electrodo de medición, se orienta perpendicular a la superficie ocular. Las pinzas de sujeción cruzada retraen el párpado superior para exponer la córnea y la conjuntiva bulbar/palbebral para perfusión. El electrodo de referencia se conecta a tierra a través de una aguja de mariposa subcutánea. (Derecha) Esquema del rastreo de PD para un experimento típico que prueba la actividad de CFTR, como se describe en Resultados. FIG. comparativa 3B) Mediciones de PD de la superficie ocular representativas en ratones de tipo silvestre. Las composiciones de la solución se detallan en la Ref. 22. Concentraciones: amilorida, 100 j M; forskolina y CFTRinh-172, 10 ^jM; compuestos de prueba, 1 - 10 ^jM como se indica. FIG. comparativa 3C) Estudio como en C, pero con VX-770, 1 - 10 j M, como se indica. FIG. comparativa 3D) Resumen de APD en ratones de tipo silvestre producidos por forskolina (20 j M) o compuestos de prueba o VX-770 (cada uno de 1 j M). Los PD se registraron en presencia de amilorida 100 j M y en presencia de un gradiente de Cf apical externo (media ± EEM, 8 20 ojos por agonista probado). FIG. comparativa 3e ) Mediciones de PD de la superficie ocular representativas en ratones C^f. Estudio como en B y C, CFTRact-K032, 1-10 ^jM como se indica.

FIGS. comparativas 4A-4D. Medición de la secreción de fluido lagrimal de activadores de CFTR en ratones vivos. FIG.

4A) El fluido lagrimal se midió justo antes y en los tiempos indicados después de la aplicación tópica de una sola dosis del vehículo (PBS, polisorbato al 0.5 %, DMSO al 0.5 %), toxina del cólera (0.1 jg/ml), forskolina (20 j M) o forskolina IBMX (250 j M). El efecto de la toxina del cólera se midió después de anestesiar previamente la superficie ocular con lidocaína al 4% para suprimir la irritación y la secreción lagrimal refleja (media ± EEM, 6-10 ojos por condición). FIG. 4B) Evolución temporal de la secreción lagrimal tras el suministro tópico del compuesto indicado. Concentraciones: CFTRact-B074, 100 ^jM; CFTRact-J027, 50 ^jM; CFTRact-K089, 50 ^jM; VX-770, 10 ^jM (media ± EEM, 6-18 ojos). FIG. 4C) Efecto de la dosificación repetida. CFTRact-J027 (0.1 nmol) se aplicó tópicamente tres veces al día durante dos días. Las mediciones del fluido lagrimal se realizaron después de la Dosis 1 y Dosis 2 el día 1, y la Dosis 5 el día 2 (media ± EEM, n = 6 ojos). FIG. 4D) Falta de efecto de los activadores de CFTR sobre la secreción de fluido lagrimal en ratones CF, con compuestos probados a las mismas concentraciones que en B.

FIGS. comparativas 5A-5C. Farmacología del compuesto. FIG. 5A) Determinación por cromatografía líquida/espectroscopia de masas (LC/MS) de la cantidad de CFTRact-K089 en el fluido lagrimal en los tiempos indicados después de la administración de una dosis única (0.1 nmol). Áreas picos sustraídas de fondo representativas de los lavados de lágrimas (izquierda) y medias de la cantidad correspondiente recuperada (derecha) (media ± EEM, 4 ojos por punto de tiempo). Las líneas discontinuas denotan las cantidades calculadas superior e inferior de CFTRact-K089 requeridas para alcanzar la concentración EC50. FIG. 5B) Tinción con verde lisamina de la córnea en ratones BALB/c, medida en una escala de 12 puntos (véase Métodos) después de 14 días de tratamiento tres veces al día con activadores de CFTR (0.1 nmol) o vehículo (media ± EEM, 6 ojos por grupo). Como control positivo se muestran las puntuaciones de los ratones tratados con vehículo luego de la escisión de la glándula lagrimal (LGE) el Día 0 (n=11 ojos; *P< 0.001 en comparación con otros grupos). FIG. 5C) Citotoxicidad medida por el ensayo Azul Alamar en células FRT incubadas con compuestos de prueba durante 1 o 24 h (DMSO al 10% como control positivo; *P< 0.05 en comparación con las células no tratadas; P= 0.02 y 0.0006 durante 1 y 24 h, respectivamente) (media ± EEM, n = 4).

FIGS. comparativas 6A-6C. El CFTRact-K089 tópico restaura la secreción lagrimal y evita la disrupción del epitelio corneal después de LGE. FIG. 6A) Secreción lagrimal basales después de LGE extraorbital en ratones BALB/c, comparando los ojos tratados con CFTRact-K089 (media ± EEM, 15 ojos) con vehículo (n= 11 ojos). El volumen lagrimal se midió inmediatamente antes de la LGE y luego una hora después de la primera dosis diaria en los Días 4, 10 y 14 después de la LGE. *P< 0.001. FIG. 6B) Fotografías representativas de los ojos antes de LGE (izquierda) y el Día 14 después de la LGE (derecha) en ojos tratados con vehículo (superior) y ojos tratados con CFTRact-K089 (inferior). FIG.

6C) Disrupción del epitelio corneal después de LGE medida por puntuación de LG en una escala de 12 puntos en los mismos ojos que en A (media ± EEM). *P< 0.001.

La FIG. comparativa 7. Un resumen de los valores EC50 y Vmáx para los compuestos cribados frente a CFTC. Un cribado de alto rendimiento funcional basado en células de 120,000 compuestos a 10 pM identificó 20 clases químicas de activadores de molécula pequeña de CFTR de tipo silvestre que produjeron >95 % de la activación de CFTR máxima. El cribado se realizó en células epiteliales FRT que coexpresan CFTr de tipo silvestre humano y un sensor de haluro de YFP citoplásmico en formato de 96 pozos (26, 31, 32). Los detalles del cribado principal se informarán por separado. El cribado secundario implicó la medición de Isc en células FRT que expresan CFTR tratadas previamente con forskolina submáxima (50 nM). Veintiún compuestos de ocho clases químicas produjeron grandes aumentos en Isc a 1 pM (>75 % de la corriente máxima producida por forskolina 20 pM).

FIGS. 8A-8D. Identificación de activadores de CFTR de molécula pequeña. FIG. 8A. Descripción general del proyecto. FIG. 8B. Cribado del activador de CFTR utilizando células FRT que coexpresan la proteína de detección de yoduro CFTR y YFP de tipo silvestre humano. Se agregaron compuestos de prueba a 10 pM durante 10 min a temperatura ambiente en presencia de forskolina (125 nM) antes de la adición de yoduro. Ejemplos de datos de pozos individuales de una placa de 96 pozos que muestran la activación de CFTR mediante cFTRact-J027. FIG. comparativa 8C. Estructuras de activadores de CFTR que emergen del cribado. FIG. comparativa 8D. Síntesis de CFTRact-J027.

FIGS. comparativas 9A-9E. Caracterización de la activación de CFTR mediante CFTRact-J027. Corriente de cortocircuito medida en células FRT que expresan CFTR de tipo silvestre humano (FIG. 9A) y AF508-CFTR (FIG. 9C) que muestran respuestas a las concentraciones indicadas de forskolina (fsk), CFTRact-J027 y VX-770. Las células FRT que expresan AF508-CFTR - se corrigieron con VX-809 3 pM a 37 °C durante 24 h antes de la medición. Se agregó CFTRinh-172 (Inh-172, 10 pM) donde se indica. FIG. 9B. Activación dependiente de concentración de CFTRact-J027 de la corriente de Cl- de CFTR de tipo silvestre (E.E.; n = 3 cultivos). FIG. 9D. Corriente de cortocircuito en colon de ratón que muestra las respuestas a las concentraciones indicadas de forskolina (fsk), CFTRact-J027 y CFTRinh-172. FIG. 9E. Ensayo de la concentración de cAMP en células FRT medida después de 10 minutos de incubación con las concentraciones indicadas de forskolina y CFTRact-J027 5 pM. Los controles positivos incluyeron forskolina (100 nM y 20 pM) y forskolina más 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX, 100 pM) (media ± e E, n=4-8).

FIGS. comparativas. 10A-10D. CFTRact-J027 normaliza la producción de heces y el contenido de agua en ratones tratados con loperamida. FIG. 10A. Modelo de estreñimiento de ratón con loperamida (izquierda). Peso de las heces a las tres horas, número de gránulos y contenido de agua en las heces en ratones (media ± E.E., 6 ratones por grupo). FIG. 10B. Mismo estudio que en A, pero con ratones con fibrosis quística que carecen de función CFTR (3-6 ratones por grupo). FIG. 10C. El mismo estudio en A, pero con un análogo químico inactivo de CFTRact-J027 (estructura mostrada). FIG. 10D. Respuesta a la dosis para la administración intraperitoneal de CFTRact-J027 en ratones tratados con loperamida (4-6 ratones por grupo). Se utilizó análisis de varianza de una vía para A y B, se utilizó la prueba t de Student para C, *p< 0.05, ***p< 0.001, ns: no significativo.

FIGS. comparativas 11A-11C. El CFTRact-J027 administrado por vía oral normaliza la producción de heces y el contenido de agua en ratones tratados con loperamida. FIG. 11A. Protocolo de estudio (izquierda) y producción de heces, número de gránulos y contenido de agua como se muestra en la FIG. 3 (media ± E.E., 6 ratones por grupo). FIG. 11B. Estudio de dosis-respuesta de CFTRact-J027 administrado por vía oral en ratones tratados con loperamida (4-6 ratones por grupo). FIG. 11C. Mismo estudio en la FIG. 11A, pero con lubiprostona oral (0.5 mg/kg) o linaclotida (0.5 mg/kg) (5-6 ratones por grupo). Análisis de varianza de una vía, *p< 0.05, **p<0.01, ***p< 0.001, ns: no significativo.

FIGS. comparativas 12A-12D. Acciones de CFTRact-J027 sobre la motilidad, absorción y secreción de fluidos intestinales. FIG. 12A. Tiempo de tránsito del intestino completo en ratones control y tratados con loperamida de tipo silvestre (izquierda) y con fibrosis quística (derecha) (media ± E.E., 3-5 ratones por grupo). Cuando se indicó, se administró loperamida (0.3 mg/kg) y CFTRact-J027 (10 mg/kg) por vía intraperitoneal en el tiempo 0 (media ± E.E., 6 ratones por grupo). Análisis de varianza de una vía, **p< 0.01, ***p< 0.001, ns: no significativo. FIG. 12B. Contracción de tiras intestinales aisladas. Se suspendieron tiras de íleon y colon (~2 cm) en tampón Krebs-Henseleit con 0.5 g y 0.2 g de tensión, respectivamente. Cuando se indicó CFTRact-J027, se agregaron loperamida y carbacol a la cámara del órgano. FIG. 12C. Secreción de fluido intestinal medida en asas yeyunales medias cerradas en ratones de tipo silvestre (panel superior). Las asas se inyectaron con 100 pl de vehículo o 100 pg de CFTRact-J027. El peso/longitud del asa se midió a los 90 min (media ± E.E., 4 asas por grupo). Experimentos similares realizados en ratones con fibrosis quística (panel inferior). FIG. 12D. Absorción de fluido intestinal medida en asas yeyunales medias en ratones con fibrosis quística. Las asas se inyectaron con 100 pl de vehículo o 0.1 mg de CFTRact-J027. El peso/longitud del asa se midió a los 30 min. Resumen de absorción de fluidos (media ± E.E., 4 asas por grupo). Prueba t de Student, **p< 0.01, ***p< 0.001, ns: no significativo.

FIGS. comparativas 13A-13E. FIG. 13A. Estabilidad metabólica in vitro de CFTRact-J027 ensayada en microsomas de hígado de ratón después de incubación durante tiempos específicos. FIG. 13B. Curva de concentración plasmática estándar para LC-MS (izquierda) y cinética de la concentración de CFTRact-J027 en plasma determinada por LC/MS después de la administración intraperitoneal u oral en bolo de 10 mg/kg de CFTRact-J027 en el tiempo cero (derecha, media ± E.E., 3 ratones por grupo). FIG. 13C. Toxicidad in vitro medida por el ensayo Azul Alamar en células FRT. FIG. 13D. Peso corporal y relación de peso húmedo/seco de los pulmones en ratones que recibieron 10 mg/kg de CFTRact-J027 por vía oral durante 7 días (media ± E.E., 5 ratones por grupo). FIG. 13E. Protocolo de administración crónica (izquierda) y eficacia de CFTRact-J027 oral después de la administración de 7 días (media ± E.E., 5 ratones por grupo). Prueba t de Student, *p< 0.05, **p< 0.01, ***p< 0.001, ns: no significativo.

FIGS. 14A-14B. Análisis estructura-actividad de los activadores de CFTR de aminofenil-1,3,5-triazina. FIG. comparativa 14A. Estructura química de CFTRact-K089 (1). FIG. 14B. Análisis de SAR preliminar basado en análogos comerciales (véase la Tabla 2 para obtener datos sobre todos los análogos comerciales).

FIGS. 15A-15B. Medición de la corriente de cortocircuito de la activación de CFTR mediante 6k y 12. FIG. 15A. Mediciones realizadas en células FRT que expresan CFTR de tipo silvestre humano que muestran respuestas a las concentraciones indicadas de forskolina, 6k o 12, e inhibidor de CFTR CFTRinh-172 10 pM. FIG. 15B. Activación de CFTR dependiente de concentración (media ± E.E.M., n=3).

FIGS. 16A-16E. Caracterización de 6k y 12. FIG. 16A. cAMP celular en células FRT después de incubación durante 10 min con 6k o 1210 pM, sin o con forskolina 90 nM (fsk), así como forskolina sola (90 nM y 20 pM) y forskolina (20 pM) IBMX (100 pM) (media ± E.E.M., n=4). FIG. 16B. Calcio citoplasmático medido por fluorescencia Fluo-4. Las células FRT se trataron previamente durante 5 min con 6k o 12 10 pM (o control), con ATP 100 pM agregado como un agonista de calcio como se indica. FIG. 16C. Actividad de TMEM16A medida en células FRT que expresan YFP que no muestra inhibición (izquierda, adición de yoduro ATP) o activación (derecha, adición de yoduro) por 6k o 12 10 pM. FIG. 16D. Actividad de CaCC medida en células HT-29 que expresan YFP que no muestran activación (adición de yoduro) o inhibición (adición de yoduro ATP) por 6k o 12 10 pM. FIG. 16E. (izquierda) Corriente de cortocircuito en cultivos primarios de células epiteliales bronquiales humanas en respuesta a agonistas e inhibidores que se dirigen a procesos clave de transporte de iones: amilorida 20 pM (ami); forskolina 20 pM (fsk); CFTRinh-172 10 pM; ATP 100 pM. Los experimentos se realizaron sin activador o después de una incubación previa de 10 min con 6k o 12 10 pM (derecha). Activación de CFTR por 12 después de forskolina 100 nM (amilo 20 pM, CFTRinh-172 10 pM, ATP 100 pM). Los estudios en B-E son representativos de 2-4 conjuntos separados de experimentos.

FIGS. 17A-17B. Farmacología del compuesto. FIG. 17A. La citotoxicidad se midió mediante el ensayo Azul Alamar en células FRT incubadas durante 8 h con 6k o 1210 pM, con DMSO al 33 % como control positivo (media ± E.E.M., n = 8). FIG. 17B. Estabilidad metabólica in vitro. Los compuestos a 5 pM se incubaron durante los tiempos indicados con 1 mg/ml de microsomas hepáticos en presencia de NADPH y el compuesto original se ensayó mediante LC/MS (media ± E.E.M., n=3). Perfil de LC/MS de 12 mostrado a la derecha con tiempo de elución en el eje x para tiempos de incubación de 0, 15 y 60 min.

FIGS. 18A-18C. Volumen de fluido lagrimal en ratones después de administración ocular de 1 o 12. FIG. 18A. El volumen lagrimal se midió justo antes y en los momentos indicados después del suministro ocular única del vehículo, 1 (250 pmol) o 12 (250 pmol) en un volumen de 2.5 pl. FIG. 18B. Estudio como en A pero en ratones CF que carecen de CFTR funcional. FIG. 18C. Estudio de dosis única como en A con diferentes cantidades de 12. Datos informados como media ± E.E.M., 5 ratones, 10 ojos por condición, * p< 0.05, ** p< 0.01 en comparación con el control del vehículo.

Descripción detallada de la invención

Las abreviaturas utilizadas en el presente documento tienen su significado convencional dentro de las técnicas químicas y biológicas. Las estructuras y fórmulas químicas establecidas en el presente documento se construyen de acuerdo con las reglas estándar de valencia química conocidas en las técnicas químicas.

Cuando los grupos sustituyentes se especifican mediante sus fórmulas químicas convencionales, escritas de izquierda a derecha, abarcan igualmente los sustituyentes químicamente idénticos que resultarían de escribir la estructura de derecha a izquierda, por ejemplo, -CH2O- es equivalente a -OCH2-.

El término “alquilo”, por sí mismo o como parte de otro sustituyente, significa, a menos que se indique lo contrario, una cadena de carbono lineal (es decir, no ramificada) o ramificada (o carbono), o combinación de las mismas, que puede se completamente saturada, mono- o poliinsaturada y pueden incluir radicales mono-, di- y multivalentes, que tienen el número de átomos de carbono designado (es decir, C1-C10 significa uno a diez carbonos). El alquilo es una cadena no ciclada. Ejemplos de radicales de hidrocarburo saturado incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, (ciclohexil)metilo, homólogos e isómeros de, por ejemplo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, y similares. Un grupo alquilo insaturado es uno que tiene uno o más enlaces dobles o enlaces triples. Ejemplos de grupos alquilo insaturados incluyen, pero no se limitan a, vinilo, 2-propenilo, crotilo, 2-isopentenilo, 2-(butadienilo), 2,4-pentadienilo, 3-(1,4-pentadienilo), etinilo, 1-y 3-propinilo, 3-butinilo, y los homólogos e isómeros superiores. Un alcoxi es un alquilo adherido al resto de la molécula a través de un conector de oxígeno (-O-).

El término “alquileno”, por sí mismo o como parte de otro sustituyente, significa, a menos que se indique lo contrario, un radical divalente derivado de un alquilo, como se ejemplifica, pero no se limita a, - CH2CH2CH2CH2-. Normalmente, un grupo alquilo (o alquileno) tendrá desde 1 hasta 24 átomos de carbono, se prefiere en la presente invención aquellos grupos que tengan 10 átomos de carbono o menos. Un “alquilo inferior” o “alquileno inferior” es un grupo alquilo o alquileno de cadena más corta, que generalmente tiene ocho átomos de carbono o menos. El término “alquenileno”, solo o como parte de otro sustituyente, significa, a menos que se indique lo contrario, un radical divalente derivado de un alqueno.

El término “heteroalquilo”, solo o en combinación con otro término, significa, a menos que se indique lo contrario, una cadena lineal o ramificada estable, o combinaciones de las mismas, que incluyen al menos un átomo de carbono y al menos un heteroátomo (por ejemplo, seleccionados del grupo que consiste en O, N, P, Si y S), y en el que los átomos de nitrógeno y azufre se pueden oxidar opcionalmente y el heteroátomo de nitrógeno se puede cuaternizar opcionalmente. Los heteroátomos (por ejemplo, O, N, P, S, B, As y Si) se pueden colocar en cualquier posición interior del grupo heteroalquilo o en la posición en la que el grupo alquilo se adhiere al resto de la molécula. El heteroalquilo es una cadena no ciclada. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a: -CH2-CH2-O-CH3, -CH2-CH2-NH-CH3, -CH2-CH²-N(CH³)-CH³, -CH2-S-CH2-CH3, -CH2-CH2, -S(O)-CH³, -CH²-CH²-S(O)²-CH³, -CH=CH-O-CH³, -Si(CH³)³, -CH2-CH=N-OCH3, -CH=CH-N(CH3)-CH3, -O-CH3, -O-CH2-CH3, y -CN. Hasta dos o tres heteroátomos pueden ser consecutivos, tales como, por ejemplo, -CH2-NH-OCH3 y -CH2-OSi(CH3)3.

De manera similar, el término “heteroalquileno”, por sí mismo o como parte de otro sustituyente, significa, a menos que se indique lo contrario, un radical divalente derivado de heteroalquilo, como se ejemplifica, pero no se limita a, -CH2-CH2-S-CH2-CH2- y -CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-. Para los grupos heteroalquileno, los heteroátomos también pueden ocupar uno o ambos extremos de la cadena (por ejemplo, alquilenoxi, alquilendioxi, alquilenamino, alquilendiamino y similares). Aún adicionalmente, para los grupos de conexión alquileno y heteroalquileno, no se implica la orientación del grupo de conexión por la dirección en la que se escribe la fórmula del grupo de conexión. Por ejemplo, la fórmula -C(O)2R'- representa tanto -C(O)2R'- como -R'C(O)2-. Como se describió anteriormente, los grupos heteroalquilo, como se utilizan en el presente documento, incluyen aquellos grupos que se adhieren al resto de la molécula a través de un heteroátomo, tal como -C(O)R', -C(O)NR', -NR'R”, -OR', -SR', y/o -SO2R'. Cuando se menciona “heteroalquilo”, seguido de enumeraciones de grupos heteroalquilo específicos, tales como -NR'R” o similares, se entenderá que los términos heteroalquilo y -NR'R” no son redundantes ni mutuamente excluyentes. Más bien, los grupos heteroalquilo específicos se enumeran para agregar claridad. Por lo tanto, el término “heteroalquilo” no se debe interpretar en el presente documento como excluyente de grupos heteroalquilo específicos, tales como -NR'R” o similar.

Los términos “cicloalquilo” y “heterocicloalquilo”, solos o en combinación con otros términos, significan, a menos que se indique lo contrario, versiones cíclicas de “alquilo” y “heteroalquilo”, respectivamente. El cicloalquilo y el heteroalquilo no son aromáticos. Adicionalmente, para heterocicloalquilo, un heteroátomo puede ocupar la posición en la que el heterociclo se adhiere al resto de la molécula. Ejemplos de cicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 1-ciclohexenilo, 3-ciclohexenilo, cicloheptilo, y similares. Ejemplos de heterocicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, 1-(1,2,5,6-tetrahidropiridilo), 1 -piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo, 4-morfolinilo, 3-morfolinilo, tetrahidrofuran- 2-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo, tetrahidrotien-2-ilo, tetrahidrotien-3-ilo, 1-piperazinilo, 2-piperazinilo, y similares. Un “cicloalquileno” y un “heterocicloalquileno”, solos o como parte de otro sustituyente, significan un radical divalente derivado de un cicloalquilo y un heterocicloalquilo, respectivamente.

Los términos “halo” o “halógeno”, por sí mismos o como parte de otro sustituyente, significan, a menos que se indique lo contrario, un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. Adicionalmente, los términos tales como “haloalquilo” significan que incluyen monohaloalquilo y polihaloalquilo. Por ejemplo, el término “haloalquilo (C1-C4)” incluye, pero no se limita a, fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 4-clorobutilo, 3-bromopropilo y similares.

El término “acilo” significa, a menos que se indique lo contrario, -C(O)R en donde R es un alquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido.

El término “arilo” significa, a menos que se indique lo contrario, un sustituyente de hidrocarburo aromático, poliinsaturado, que puede tener un solo anillo o anillos múltiples (preferiblemente de 1 a 3 anillos) que se fusionan entre sí (es decir, un arilo de anillo fusionado o conectado covalentemente. Un arilo de anillo fusionado se refiere a varios anillos fusionados entre sí, en los que al menos uno de los anillos fusionados es un anillo de arilo. El término “heteroarilo” se refiere a grupos arilo (o anillos) que contienen al menos un heteroátomo tal como N, O u S, en el que los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados y los átomos de nitrógeno están opcionalmente cuaternizados. Por lo tanto, el término “heteroarilo” incluye grupos heteroarilo de anillo fusionado (es decir, múltiples anillos fusionados entre sí en los que al menos uno de los anillos fusionados es un anillo heteroaromático). Un heteroarileno de anillo 5,6-fusionado se refiere a dos anillos fusionados, en los que un anillo tiene 5 miembros y el otro anillo tiene 6 miembros, y en los que al menos un anillo es un anillo de heteroarilo. Del mismo modo, un heteroarileno de anillo 6,6-fusionado se refiere a dos anillos fusionados, en los que un anillo tiene 6 miembros y el otro anillo tiene 6 miembros, y en los que al menos un anillo es un anillo heteroarilo. Y un heteroarileno de anillo 6,5- fusionado se refiere a dos anillos fusionados, en los que un anillo tiene 6 miembros y el otro anillo tiene 5 miembros, y en los que al menos un anillo es un anillo de heteroarilo. Un grupo heteroarilo se puede adherir al resto de la molécula a través de un carbono o un heteroátomo. Ejemplos no limitantes de grupos arilo y heteroarilo incluyen fenilo, naftilo, pirrolilo, pirazolilo, piridazinilo, triazinilo, pirimidinilo, imidazolilo, pirazinilo, purinilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, furilo, tienilo, piridilo, pirimidilo, benzotiazolilo, benzoxazoil bencimidazolilo, benzofurano, isobenzofuranilo, indolilo, isoindolilo, benzotiofenilo, isoquinolilo, quinoxalinilo, quinolilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 4-bifenilo, 1 -pirrolilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 3-pirazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, pirazinilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 2-fenil-4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5- tiazolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-pirimidilo, 4-pirimidilo, 5-benzotiazolilo, purinilo, 2-bencimidazolilo, 5-indolilo, 1 -isoquinolilo, 5-isoquinolilo, 2-quinoxalinilo, 5-quinoxalinilo, 3-quinolilo, y 6-quinolilo. Los sustituyentes para cada uno de los sistemas de anillos de arilo y heteroarilo indicados anteriormente se seleccionan del grupo de sustituyentes aceptables descritos a continuación. Un “arileno” y un “heteroarileno”, solos o como parte de otro sustituyente, significan un radical divalente derivado de un arilo y heteroarilo, respectivamente. Un sustituyente del grupo heteroarilo puede ser un -O- unido a un heteroátomo de nitrógeno en el anillo.

Un “arilo-heterocicloalquilo de anillo fusionado” es un arilo fusionado a un heterocicloalquilo. Un “heteroariloheterocicloalquilo de anillo fusionado” es un heteroarilo fusionado a un heterocicloalquilo. Un “heterocicloalquilcicloalquilo de anillo fusionado” es un heterocicloalquilo fusionado a un cicloalquilo. Un “heterocicloalquilheterocicloalquilo de anillo fusionado” es un heterocicloalquilo fusionado a otro heterocicloalquilo. El arilheterocicloalquilo de anillo fusionado, el heteroaril-heterocicloalquilo de anillo fusionado, el heterocicloalquilcicloalquilo de anillo fusionado o el heterocicloalquil-heterocicloalquilo de anillo fusionado pueden estar cada uno independientemente sustituido o no sustituido con uno o más de los sustituyentes descritos en el presente documento. El aril-heterocicloalquilo de anillo fusionado, el heteroaril-heterocicloalquilo de anillo fusionado, el heterocicloalquilcicloalquilo de anillo fusionado o el heterocicloalquil-heterocicloalquilo de anillo fusionado se pueden nombrar cada uno independientemente de acuerdo con el tamaño de cada uno de los anillos fusionados. De esta manera, por ejemplo, el anillo fusionado con 6,5 aril-heterocicloalquilo describe una fracción de arilo de 6 miembros fusionado a un heterocicloalquilo de 5 miembros. Los anillos espirocíclicos son dos o más anillos en los que los anillos adyacentes están unidos a través de un solo átomo. Los anillos individuales dentro de los anillos espirocíclicos pueden ser idénticos o diferentes. Los anillos individuales en los anillos espirocíclicos pueden estar sustituidos o no y pueden tener diferentes sustituyentes de otros anillos individuales dentro de un conjunto de anillos espirocíclicos. Los posibles sustituyentes para anillos individuales dentro de anillos espirocíclicos son los posibles sustituyentes para el mismo anillo cuando no forma parte de los anillos espirocíclicos (por ejemplo, sustituyentes para anillos cicloalquilo o heterocicloalquilo). Los anillos espirocíclicos pueden ser cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquileno sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heterocicloalquileno sustituido o no sustituido, y los anillos individuales dentro de un grupo de anillo espirocíclico pueden ser cualquiera de la lista inmediatamente anterior, que incluyen aquellos que tienen todos los anillos de un tipo (por ejemplo, todos los anillos son heterocicloalquileno sustituido, en el que cada anillo puede ser el mismo o diferente heterocicloalquileno sustituido). Cuando se hace referencia a un sistema de anillos espirocíclicos, los anillos espirocíclicos heterocíclicos significan anillos espirocíclicos en los que al menos un anillo es un anillo heterocíclico y en los que cada anillo puede ser un anillo diferente. Cuando se hace referencia a un sistema de anillos espirocíclicos, anillos espirocíclicos sustituidos significa que al menos un anillo se sustituye y cada sustituyente puede ser opcionalmente diferente.

El término “oxo”, como se utiliza en el presente documento, significa un oxígeno que tiene un doble enlace con un átomo de carbono.

Cada uno de los términos anteriores (por ejemplo, “alquilo”, “heteroalquilo”, “arilo” y “heteroarilo”) incluye formas tanto sustituidas como no sustituidas del radical indicado. Los sustituyentes preferidos para cada tipo de radical se proporcionan a continuación.

Los sustituyentes para los radicales alquilo y heteroalquilo (que incluyen aquellos grupos a menudo denominados alquileno, alquenilo, heteroalquileno, heteroalquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, cicloalquenilo, y heterocicloalquenilo) pueden ser uno o más de una variedad de grupos seleccionados de, pero no limitado a, -OR', =O, =NR', =N-OR', -NR'R”, -SR', -halógeno, -SiR'R”R'”, -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R”, -OC(O)NR'R”, -NR”C(O)R', -NR'-C(O)NR”R'”, -NR”C(O)²R', -NR-C(NR'R”R'”)=NR””, -NR-C(NR'R”)=NR'”, -S(O)R', -S(O)²R', -S(O)2NR'R”, -NRSO2R', -NR'NR”R'”, -ONR'R”, -NR'C=(O)NR”NRR””, -CN, -NO2, -NR'SO2R”, -NR'C=(O)R”, - NR'C(O)-OR”, -NR'OR”, en un número que va desde cero hasta (2m'+1), donde m' es el número total de átomos de carbono en dicho radical. R, R', R”, R'”, y R”” cada uno preferible e independientemente se refiere a hidrógeno, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido (por ejemplo, arilo sustituido con 1-3 halógenos), heteroarilo sustituido o no sustituido, alquilo sustituido o no sustituido, grupos alcoxi, o tioalcoxi, o grupos arilalquilo. Cuando un compuesto de la invención incluye más de un grupo R, por ejemplo, cada uno de los grupos R se selecciona independientemente como son cada uno del grupo R', R”, R'”, y R”” cuando más de uno de estos grupos está presente. Cuando R' y R” se adhieren al mismo átomo de nitrógeno, se pueden combinar el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 4, 5, 6 o 7 miembros. Por ejemplo, -NR'R” incluye, pero no se limita a, 1 -pirrolidinilo y 4-morfolinilo. A partir de la discusión anterior de los sustituyentes, un experto en la técnica entenderá que el término “alquilo” significa que incluye grupos que incluyen átomos de carbono unidos a grupos diferentes de grupos hidrógeno, tales como haloalquilo (por ejemplo, -CF3 y -CH2CF3) y acilo por ejemplo, -C(O)CH3, -C(O)CF3, -C(O)CH2OCH3, y similares).

Similar a los sustituyentes descritos para el radical alquilo, los sustituyentes para los grupos arilo y heteroarilo son ^{variados y se seleccionan de, por ejemplo: -OR', -NR'R”, -SR', -halógeno, - SiR'R”R'”,}-oC(O)R', ^{-C(O)R', -CO}2^{R', -}CONR'R”, -OC(O)NR'R”, -NR”C(O)R', -NR'-C(O)NR”R'”, -NR”C(O)²R', -NR-C(NR'R”R'”)=NR””, -NR-C(NR'R”)=NR'”, -S(O)R', -S(O)²R', - S(O)²NR'R”, -NRSO²R', -NR'NR”R'”, -ONR'R”, -NR'C=(O)NR”NR-R””, -CN, -NO², -R', -N3, -CH(Ph)2, fluoroalcoxi (C1-C4), y fluoroalquilo (C1-C4), -NR'SO2R”, -NR'C=(O)R”, -NR'C(O)-OR”, -NR'OR”, en un número que varía desde cero hasta el número total de valencias abiertas sobre el sistema de anillos aromáticos; y en donde R', R”, R'”, y R”” se seleccionan preferible e independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, y heteroarilo sustituido o no sustituido. Cuando un compuesto de la invención incluye más de un grupo R, por ejemplo, cada uno de los grupos R se selecciona independientemente como son cada uno de los grupos R', R”, R'”, y R”” cuando más de uno de estos grupos está presente.

Los sustituyentes para los anillos (por ejemplo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquileno, heterocicloalquileno, arileno o heteroarileno) se pueden representar como sustituyentes sobre el anillo en lugar de en un átomo específico de un anillo (comúnmente denominado sustituyente flotante). En tal caso, el sustituyente se puede adherir a cualquiera de los átomos del anillo (obedeciendo las reglas de valencia química) y en el caso del anillo fusionado o anillos espirocíclicos, un sustituyente representado como asociado con un miembro de los anillos fusionados o anillos espirocíclicos (un sustituyente flotante sobre un solo anillo), puede ser un sustituyente sobre cualquiera de los anillos fusionados o anillos espirocíclicos (un sustituyente flotante en múltiples anillos). Cuando un sustituyente se adhiere a un anillo, pero no a un átomo específico (un sustituyente flotante), y un subíndice para el sustituyente es un entero mayor que uno, los múltiples sustituyentes pueden estar sobre el mismo átomo, mismo anillo, diferentes átomos, diferentes anillos fusionados, diferentes anillos espirocíclicos y cada sustituyente puede ser opcionalmente diferente. Cuando un punto de adhesión de un anillo al resto de una molécula no se limita a un solo átomo (un sustituyente flotante), el punto de adhesión puede ser cualquier átomo del anillo y, en el caso de un anillo fusionado o un anillo espirocíclico, cualquier átomo de cualquiera de los anillos fusionados o anillos espirocíclicos mientras obedecen las reglas de valencia química. Cuando un anillo, anillos fusionados o anillos espirocíclicos contienen uno o más heteroátomos en el anillo y el anillo, anillos fusionados o anillos espirocíclicos se muestran con uno más sustituyentes flotantes (que incluyen, pero no se limitan a, puntos de adhesión al resto de la molécula), los sustituyentes flotantes se pueden unir a los heteroátomos. Cuando los heteroátomos del anillo se muestran unidos a uno o más hidrógenos (por ejemplo, un nitrógeno del anillo con dos enlaces a los átomos del anillo y un tercer enlace a un hidrógeno) en la estructura o fórmula con el sustituyente flotante, cuando el heteroátomo se une al sustituyente flotante, se entenderá que el sustituyente sustituye al hidrógeno, obedeciendo las reglas de la valencia química.

Se pueden unir opcionalmente dos o más sustituyentes para formar grupos arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo. Dichos sustituyentes llamados que forman anillos se encuentran normalmente, aunque no necesariamente, adheridos a una estructura de base cíclica. En una realización, los sustituyentes que forman anillo se adhieren a miembros adyacentes de la estructura base. Por ejemplo, dos sustituyentes que forman anillos unidos a miembros adyacentes de una estructura de base cíclica crean una estructura de anillo fusionado. En otra realización, los sustituyentes que forman anillo se adhieren a un solo miembro de la estructura base. Por ejemplo, dos sustituyentes que forman anillos adheridos a un solo miembro de una estructura de base cíclica crean una estructura espirocíclica. En aún otra realización más, los sustituyentes que forman el anillo se adhieren a miembros no adyacentes de la estructura base.

Dos de los sustituyentes sobre átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo pueden formar opcionalmente un anillo de fórmula -TC(O)-(CRR')qU-, en la que T y U son independientemente -NR-, -O-, - CRR'-, o un enlace sencillo, y q es un entero de 0 a 3. Alternativamente, dos de los sustituyentes sobre los átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo se pueden reemplazar opcionalmente con un sustituyente de la fórmula -A-(CH2)rB-, en la que A y B son independientemente -CRR'-, -O-, -NR-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR'-, o un enlace sencillo, y r es un entero de 1 a 4. Uno de los enlaces sencillos del nuevo anillo formado de esta manera se puede sustituir opcionalmente por un enlace doble. Alternativamente, dos de los sustituyentes sobre átomos adyacentes del anillo de arilo o heteroarilo se pueden reemplazar opcionalmente con un sustituyente de la fórmula -(CRR')sX'- (C”R”R'”)d-, en donde s y d son independientemente enteros desde 0 hasta 3, y X' es -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, o -S(O)2NR'-. Los sustituyentes R, R', R”, y R'” se seleccionan preferible e independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, y heteroarilo sustituido o no sustituido.

Como se utiliza en el presente documento, los términos “heteroátomo” o “heteroátomo de anillo” incluyen oxígeno (O), nitrógeno (N), azufre (S), fósforo (P), boro (B), arsénico (As) y silicio (Si).

Un “grupo sustituyente”, como se utiliza en el presente documento, significa un grupo seleccionado de las siguientes fracciones:

(A) oxo, halógeno, -CF3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO2C -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC=(O)NHNH2, -NHC=(O) NH2, -NHSO2H, -NHC=(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCHF2, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, y

(B) alquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo, sustituido con al menos un sustituyente seleccionado de:

(i) oxo, halógeno, -CF3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO2Cl, -SO3H, -SO4H, - SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC=(O)NHNH2, -NHC=(O)NH2, -NHSO2H, -NHC=(O)H, - NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCHF2, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, y

(ii) alquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo, sustituido con al menos un sustituyente seleccionado de:

(a) oxo, halógeno, -CF3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO2Cl, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC=(O)NHNH2, -NHC=(O) NH2, -NHSO2H, -NHC=(O)H, - NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCHF2, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, y

(b) alquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, o heteroarilo, sustituido con al menos un sustituyente seleccionado de: oxo, halógeno, -CF3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, - SH, -SO2C -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC=(O)NHNH2, -NHC=(O) NH2, - NHSO2H, -NHC= (O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCHF2, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, y heteroarilo no sustituido.

Un “sustituyente limitado en tamaño” o “grupo sustituyente limitado en tamaño”, como se utiliza en el presente documento, significa un grupo seleccionado de todos los sustituyentes descritos anteriormente para un “grupo sustituyente”, en el que cada alquilo sustituido o no sustituido es un alquilo C1-C20 sustituido o no sustituido, cada heteroalquilo sustituido o no sustituido es un heteroalquilo de 2 a 20 miembros sustituido o no sustituido, cada cicloalquilo sustituido o no sustituido es un cicloalquilo C3-C8 sustituido o no sustituido, cada heterocicloalquilo sustituido o no sustituido es un heterocicloalquilo de 3 a 8 miembros sustituido o no sustituido, cada arilo sustituido o no sustituido es un arilo C6-C10 sustituido o no sustituido, y cada heteroarilo sustituido o no sustituido es un heteroarilo de 5 a 10 miembros sustituido o no sustituido.

Un “sustituyente inferior” o “grupo sustituyente inferior”, como se utiliza en el presente documento, significa un grupo seleccionado de todos los sustituyentes descritos anteriormente para un “grupo sustituyente”, en el que cada alquilo sustituido o no sustituido es un alquilo C1-C8 sustituido o no sustituido, cada heteroalquilo sustituido o no sustituido es un heteroalquilo de 2 a 8 miembros sustituido o no sustituido, cada cicloalquilo sustituido o no sustituido es un cicloalquilo C3-C7 sustituido o no sustituido, cada heterocicloalquilo sustituido o no sustituido es un heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o no sustituido, cada arilo sustituido o no sustituido es un arilo C6-C10 sustituido o no sustituido, y cada heteroarilo sustituido o no sustituido es un heteroarilo de 5 a 9 miembros sustituido o no sustituido.

En algunas realizaciones, cada grupo sustituido descrito en los compuestos en el presente documento se sustituye con al menos un grupo sustituyente. Más específicamente, en algunas realizaciones, cada alquilo sustituido, heteroalquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, heterocicloalquilo sustituido, arilo sustituido, heteroarilo sustituido, alquileno sustituido, heteroalquileno sustituido, cicloalquileno sustituido, heterocicloalquileno sustituido, arileno sustituido, y/o heteroarileno sustituido descritos en los compuestos en el presente documento se sustituyen con al menos un grupo sustituyente. En otras realizaciones, al menos uno o todos de estos grupos se sustituyen con al menos un grupo sustituyente de tamaño limitado. En otras realizaciones, al menos uno o todos de estos grupos se sustituyen con al menos un grupo sustituyente inferior.

En otras realizaciones de los compuestos en el presente documento, cada alquilo sustituido o no sustituido puede ser un alquilo C1-C20 sustituido o no sustituido, cada heteroalquilo sustituido o no sustituido es un heteroalquilo de 2 a 20 miembros sustituido o no sustituido, cada cicloalquilo sustituido o no sustituido es un cicloalquilo C3-C8 sustituido o no sustituido, cada heterocicloalquilo sustituido o no sustituido es un heterocicloalquilo de 3 a 8 miembros sustituido o no sustituido, cada arilo sustituido o no sustituido es un arilo C6-C10 sustituido o no sustituido, y/o cada heteroarilo sustituido o no sustituido es un heteroarilo de 5 a 10 miembros sustituido o no sustituido. En algunas realizaciones de los compuestos en el presente documento, cada alquileno sustituido o no sustituido es un alquileno C1-C20 sustituido o no sustituido, cada heteroalquileno sustituido o no sustituido es un heteroalquileno de 2 a 20 miembros sustituido o no sustituido, cada cicloalquileno sustituido o no sustituido es un cicloalquileno C3-C8 sustituido o no sustituido, cada heterocicloalquileno sustituido o no sustituido es un heterocicloalquileno de 3 a 8 miembros sustituido o no sustituido, cada arileno sustituido o no sustituido es un arileno C6-C10 sustituido o no sustituido, y/o cada heteroarileno sustituido o no sustituido es un heteroarileno de 5 a 10 miembros sustituido o no sustituido.

En algunas realizaciones, cada alquilo sustituido o no sustituido es un alquilo C1-C8 sustituido o no sustituido, cada heteroalquilo sustituido o no sustituido es un heteroalquilo de 2 a 8 miembros sustituido o no sustituido, cada cicloalquilo sustituido o no sustituido es un cicloalquilo C3-C7 sustituido o no sustituido, cada heterocicloalquilo sustituido o no sustituido es un heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o no sustituido, cada arilo sustituido o no sustituido es un arilo C6-C10 sustituido o no sustituido, y/o cada heteroarilo sustituido o no sustituido es un heteroarilo de 5 a 9 miembros sustituido o no sustituido. En algunas realizaciones, cada alquileno sustituido o no sustituido es un alquileno C1-C8 sustituido o no sustituido, cada heteroalquileno sustituido o no sustituido es un heteroalquileno de 2 a 8 miembros sustituido o no sustituido, cada cicloalquileno sustituido o no sustituido es un cicloalquileno C3-C7 sustituido o no sustituido, cada heterocicloalquileno sustituido o no sustituido es un heterocicloalquileno de 3 a 7 miembros sustituido o no sustituido, cada arileno sustituido o no sustituido es un arileno C6-C10 sustituido o no sustituido, y/o cada heteroarileno sustituido o no sustituido es un heteroarileno de 5 a 9 miembros sustituido o no sustituido. En algunas realizaciones, el compuesto es una especie química establecida en la sección de Ejemplos, figuras o tablas a continuación.

Ciertos compuestos descritos en el presente documento poseen átomos de carbono asimétricos (centros ópticos o quirales) o enlaces dobles; los enantiómeros, racematos, diastereómeros, tautómeros, isómeros geométricos, formas estereoisométricas que se pueden definir, en términos de estereoquímica absoluta, como (R)- o (S)- o, como (D)- o (L)- para los aminoácidos, y los isómeros individuales se abarcan dentro del alcance de la presente invención. Los compuestos de la presente invención no incluyen aquellos que se sabe en la técnica que son demasiado inestables para sintetizarlos y/o aislarlos. La presente invención pretende incluir compuestos en formas racémicas y ópticamente puras. Los isómeros (R)- y (S)-, o (D)- y (L) ópticamente activos se pueden preparar utilizando sintones quirales o reactivos quirales, o se pueden resolver utilizando técnicas convencionales. Cuando los compuestos descritos en el presente documento contienen enlaces olefínicos u otros centros de asimetría geométrica, y a menos que se especifique lo contrario, se pretende que los compuestos incluyan isómeros geométricos tanto E como Z.

Como se utiliza en el presente documento, el término “ isómeros” se refiere a compuestos que tienen el mismo número y tipo de átomos y, por lo tanto, el mismo peso molecular, pero que difieren en cuanto a la disposición estructural o configuración de los átomos.

El término “tautómero”, como se utiliza en el presente documento, se refiere a uno de dos o más isómeros estructurales que existen en equilibrio y que se convierten fácilmente desde una forma isomérica hasta otra.

Será evidente para un experto en la técnica que ciertos compuestos de esta invención pueden existir en formas tautoméricas, todas dichas formas tautoméricas de los compuestos están dentro del alcance de la invención.

A menos que se indique lo contrario, las estructuras representadas en el presente documento también incluyen todas las formas estereoquímicas de la estructura; es decir, las configuraciones (R) y (S) para cada centro asimétrico. Por lo tanto, los isómeros estereoquímicos individuales así como las mezclas enantioméricas y diastereoisómeras de los presentes compuestos, generalmente reconocidos como estables por aquellos expertos en la técnica, están dentro del alcance de la invención.

A menos que se indique lo contrario, las estructuras representadas en el presente documento también incluyen compuestos que difieren solo en la presencia de uno o más átomos enriquecidos isotópicamente. Por ejemplo, los compuestos que tienen las presentes estructuras excepto el reemplazo de hidrógeno por deuterio o tritio, reemplazo de fluoruro por ¹⁸F o reemplazo de un carbono por carbono enriquecido ¹³C o ¹⁴C están dentro del alcance de esta invención.

Los compuestos de la presente invención también pueden contener proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen dichos compuestos. Por ejemplo, los compuestos pueden estar radiomarcados con isótopos radiactivos, tales como por ejemplo tritio (³H), fluoruro (¹⁸F). yodo-125 (¹²⁵I), o carbono-14 (¹⁴C). Todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, ya sea radiactivas o no, están abarcadas dentro del alcance de la presente invención.

El símbolo “ - ” denota el punto de adhesión de una fracción química al resto de una molécula o fórmula química.

Cuando una fracción se sustituye con un sustituyente R, el grupo se puede denominar “sustituido con R”. Cuando una fracción se sustituye con R, la fracción se sustituye con al menos un sustituyente R y cada sustituyente R es opcionalmente diferente. Cuando un grupo R en particular está presente en la descripción de un género químico (tal como la fórmula (I) o la fórmula I), se puede utilizar un símbolo decimal romano para distinguir cada aparición de ese grupo R en particular. Por ejemplo, cuando están presentes múltiples sustituyentes R¹³, cada sustituyente R¹³puede distinguirse como R1³¹, R¹³², R¹³³, R¹³⁴, etc., en el que cada uno de R¹³¹, R¹³², R¹³³, R¹³⁴, etc. se define dentro del alcance de la definición de R¹³y opcionalmente de manera diferente. Los términos “un” o “una”, como se utilizan en el presente documento, significan uno o más. Además, la frase “sustituido con un[a]”, como se utiliza en el presente documento, significa que el grupo especificado se puede sustituir con uno o más de cualquiera o todos los sustituyentes mencionados. Por ejemplo, cuando un grupo, tal como un grupo alquilo o heteroarilo, está “sustituido con un alquilo C1-C20 no sustituido, o heteroalquilo de 2 a 20 miembros no sustituido”, el grupo puede contener uno o más alquilos C1-C20 no sustituidos, y/ o uno o más heteroalquilos de 2 a 20 miembros no sustituidos.

La descripción de los compuestos de la presente invención se limita por los principios de enlace químico conocidos por aquellos expertos en la técnica. De acuerdo con lo anterior, cuando un grupo se puede sustituir por uno o más de un número de sustituyentes, dichas sustituciones se seleccionan para cumplir con los principios de enlace químico y para dar compuestos que no son intrínsecamente inestables y/o que serían conocidos por un experto con conocimientos básicos en la técnica probablemente sean inestables bajo condiciones ambientales, tales como acuosas, neutras y varias condiciones fisiológicas conocidas. Por ejemplo, un heterocicloalquilo o heteroarilo se une al resto de la molécula a través de un heteroátomo en el anillo de conformidad con los principios de enlace químico conocidos por aquellos expertos en la técnica, evitando así compuestos intrínsecamente inestables.

“Analógico” o “análogo” se utilizan de acuerdo con el sentido común y corriente dentro de Química y Biología y se refieren a un compuesto químico que es estructuralmente similar a otro compuesto (es decir, un llamado compuesto de “referencia”) pero difiere en la composición, por ejemplo, en el reemplazo de un átomo por un átomo de un elemento diferente, o en presencia de un grupo funcional particular, o el reemplazo de un grupo funcional por otro grupo funcional, o la estereoquímica absoluta de uno o más centros quirales del compuesto de referencia. De acuerdo con lo anterior, un análogo es un compuesto que es similar o comparable en función y apariencia pero no en estructura u origen a un compuesto de referencia.

Los términos “regulador de conductancia de transmembrana de fibrosis quística” y “CFTR” se utilizan en el presente documento de forma intercambiable y de acuerdo con su significado común y corriente y se refieren a proteínas con nombres iguales o similares y fragmentos funcionales y homólogos de las mismas. El término incluye cualquier forma recombinante o de origen natural, o variantes de la misma, que mantengan la actividad de CFTR (por ejemplo, dentro de al menos un 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % o 100 % actividad en comparación con CfTR).

El término “sales farmacéuticamente aceptables” pretende incluir sales de los compuestos activos que se preparan con ácidos o bases relativamente no tóxicos, dependiendo de los sustituyentes particulares encontrados en los compuestos descritos en el presente documento. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente ácidas, las sales de adición de base se pueden obtener al poner en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, ya sea pura o en un solvente inerte adecuado. Ejemplos de sales de adición de base farmacéuticamente aceptables incluyen sal de sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánico o magnesio, o una sal similar. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas, las sales de adición de ácido se pueden obtener al poner en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, ya sea puro o en un solvente inerte adecuado. Ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen aquellas derivadas de ácidos inorgánicos como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrogencarbónico, fosfórico, monohidrogenfosfórico, dihidrogenfosfórico, sulfúrico, monohidrogensulfúrico, yodhídrico o fosforoso y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos como acético, propiónico, isobutírico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, Itálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, oxálico, metanosulfónico y similares. También se incluyen sales de aminoácidos tales como arginato y similares, y sales de ácidos orgánicos como ácidos glucurónicos o galactunóricos y similares (véase, por ejemplo, Berge et al., “Pharmaceutical Salts”, Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Ciertos compuestos específicos de la presente invención contienen funcionalidades tanto básicas como ácidas que permiten que los compuestos se conviertan en sales de adición ya sea de bases o de ácidos.

Por tanto, los compuestos de la presente invención pueden existir como sales, tales como con ácidos farmacéuticamente aceptables. La presente invención incluye tales sales. Los ejemplos de dichas sales incluyen clorhidratos, bromhidratos, sulfatos, metanosulfonatos, nitratos, maleatos, acetatos, citratos, fumaratos, tartratos (por ejemplo, (+)-tartratos, (-)-tartratos o mezclas de los mismos, que incluyen mezclas racémicas), succinatos, benzoatos y sales con aminoácidos tales como el ácido glutámico. Estas sales se pueden preparar por métodos conocidos por aquellos expertos en la técnica.

Las formas neutras de los compuestos se regeneran preferiblemente al poner en contacto la sal con una base o ácido y aislar el compuesto original de la manera convencional. La forma original del compuesto difiere de las diversas formas de sal en ciertas propiedades físicas, tales como la solubilidad en solventes polares.

Además de las formas de sal, la presente invención proporciona compuestos que están en forma de profármaco. Los profármacos de los compuestos descritos en el presente documento incluyen aquellos compuestos que experimentan fácilmente cambios químicos o enzimáticos bajo condiciones fisiológicas para proporcionar los compuestos de la presente invención. Adicionalmente, los profármacos se pueden convertir en los compuestos de la presente invención mediante métodos químicos o bioquímicos en un entorno ex vivo. Por ejemplo, los profármacos se pueden convertir lentamente en los compuestos de la presente invención cuando se colocan en un depósito de parche transdérmico con una enzima o reactivo químico adecuado.

Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como en formas solvatadas, que incluyen las formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y están abarcadas dentro del alcance de la presente invención. Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la presente invención y se pretende que estén dentro del alcance de la presente invención.

Como se utiliza en el presente documento, el término “sal” se refiere a sales ácidas o básicas de los compuestos utilizados en los métodos de la presente invención. Ejemplos ilustrativos de sales aceptables son sales de ácidos minerales (ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico y similares), sales de ácidos orgánicos (ácido acético, ácido propiónico, ácido glutámico, ácido cítrico y similares), sales de amonio cuaternario (yoduro de metilo, yoduro de etilo, y similares) sales.

Los términos “tratar” o “tratamiento” se refieren a cualquier indicio de éxito en el tratamiento o mejora de una lesión, enfermedad, patología o afección, que incluyen cualquier parámetro objetivo o subjetivo tal como reducción; remisión; disminución de los síntomas o hacer la lesión, patología o afección más tolerable para el paciente; ralentizar la tasa de degeneración o declive; hacer que el punto final de la degeneración sea menos debilitante; o mejorar el bienestar físico o mental de un paciente. El tratamiento o la mejora de los síntomas se pueden basar en parámetros objetivos o subjetivos, que incluyen los resultados de un examen físico, exámenes neuropsiquiátricos y/o una evaluación psiquiátrica. El término “tratar” y conjugaciones del mismo incluyen la prevención de una lesión, patología, afección o enfermedad.

Una “cantidad eficaz” es una cantidad suficiente para lograr un propósito indicado (por ejemplo, lograr el efecto para el que se administra, tratar una enfermedad, reducir la actividad enzimática, aumentar la actividad enzimática, reducir uno o más síntomas de una enfermedad o afección). Un ejemplo de una “cantidad eficaz” es una cantidad suficiente para contribuir al tratamiento, la prevención o la reducción de un síntoma o síntomas de una enfermedad, que también se podría denominar “cantidad terapéuticamente eficaz”. Una “reducción” de un síntoma o síntomas (y los equivalentes gramaticales de esta frase) significa la disminución de la gravedad o la frecuencia de los síntomas, o la eliminación de los síntomas. Una “cantidad profilácticamente eficaz” de un fármaco es una cantidad de un fármaco que, cuando se administra a un sujeto, tendrá el efecto profiláctico previsto, por ejemplo, prevenir o retrasar la aparición (o recurrencia) de una lesión, enfermedad, patología o afección., o reducir la probabilidad de aparición (o recurrencia) de una lesión, enfermedad, patología o afección, o sus síntomas. El efecto profiláctico completo no ocurre necesariamente con la administración de una dosis y puede ocurrir solo después de la administración de una serie de dosis. Por lo tanto, se puede administrar una cantidad profilácticamente eficaz en una o más administraciones. Las cantidades exactas dependerán del propósito del tratamiento, y un experto en la técnica podrá determinarlas utilizando técnicas conocidas (véase, por ejemplo, Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); y Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams & Wilkins).

Para cualquier compuesto descrito en el presente documento, la cantidad terapéuticamente eficaz se puede determinar inicialmente a partir de ensayos de cultivo celular. Las concentraciones diana serán aquellas concentraciones de compuesto(s) activo(s) que son capaces de lograr los métodos descritos en el presente documento, medidos utilizando los métodos descritos en el presente documento o conocidos en la técnica.

Como es bien conocido en la técnica, las cantidades terapéuticamente eficaces para uso en humanos también se pueden determinar a partir de modelos animales. Por ejemplo, se puede formular una dosis para humanos para lograr una concentración que se haya encontrado que es efectiva en animales. La dosificación en humanos se puede ajustar al monitorizar la eficacia de los compuestos y ajustando la dosificación hacia arriba o hacia abajo, como se describió anteriormente. Ajustar la dosis para lograr la máxima eficacia en humanos basándose en los métodos descritos anteriormente y otros métodos está dentro de las capacidades del experto con conocimientos básicos en la técnica.

Las dosificaciones pueden variar dependiendo de los requisitos del paciente y del compuesto que se emplee. La dosis administrada a un paciente, en el contexto de la presente invención, debería ser suficiente para lograr una respuesta terapéutica beneficiosa en el paciente a lo largo del tiempo. El tamaño de la dosis también estará determinado por la existencia, naturaleza y extensión de cualquier efecto secundario adverso. La determinación de la dosificación apropiada para una situación particular está dentro de la habilidad del médico. Generalmente, el tratamiento se inicia con dosificaciones más pequeñas que son menores que la dosis óptima del compuesto. A partir de entonces, la dosificación se aumenta en pequeños incrementos hasta que se alcanza el efecto óptimo según las circunstancias.

Las cantidades de dosificación y los intervalos se pueden ajustar individualmente para proporcionar niveles efectivos del compuesto administrado para la indicación clínica particular que se está tratando. Esto proporcionará un régimen terapéutico que es acorde con la gravedad del estado de enfermedad del individuo.

Utilizando las enseñanzas proporcionadas en el presente documento, se puede planificar un régimen de tratamiento profiláctico o terapéutico eficaz que no cause una toxicidad sustancial y, sin embargo, sea eficaz para tratar los síntomas clínicos demostrados por el paciente particular. Esta planificación debe implicar la elección cuidadosa del compuesto activo al considerar factores tales como la potencia del compuesto, biodisponibilidad relativa, peso corporal del paciente, presencia y gravedad de los efectos secundarios adversos, modo de administración preferido y perfil de toxicidad del agente seleccionado.

“Control” o “experimento de control” se utiliza de acuerdo con su significado normal y corriente y se refiere a un experimento en el que los sujetos o reactivos del experimento se tratan como en un experimento paralelo excepto por la omisión de un procedimiento, reactivo o variable del experimento. En algunos casos, el control se utiliza como un estándar de comparación para evaluar los efectos experimentales. En realizaciones, un control es la medida de la actividad de una proteína en ausencia de un compuesto como se describe en el presente documento (que incluyen realizaciones y ejemplos).

“Poner en contacto” se utiliza de acuerdo con su significado ordinario simple y se refiere al proceso de permitir que al menos dos especies distintas (por ejemplo, compuestos químicos que incluyen biomoléculas o células) se vuelvan lo suficientemente próximas para reaccionar, interactuar o tocarse físicamente. Sin embargo, se debe apreciar que el producto de reacción resultante se puede producir directamente a partir de una reacción entre los reactivos agregados o a partir de un intermedio de uno o más de los reactivos agregados que se pueden producir en la mezcla de reacción.

El término “poner en contacto” puede incluir permitir que dos especies reaccionen, interactúen o se toquen físicamente, en el que las dos especies pueden ser un compuesto como se describe en el presente documento y una proteína o enzima. Poner en contacto puede incluir permitir que un compuesto descrito en el presente documento interactúe con una proteína o enzima que esté implicada en una ruta de señalización.

Como se define en el presente documento, el término “activación”, “activa”, “activar” y similares en referencia a una interacción proteína-activador significa afectar positivamente (por ejemplo, aumentar) la actividad o función de la proteína en relación con la actividad o función de la proteína en ausencia del activador. La activación se puede referir a la reducción de una enfermedad o síntomas de enfermedad. La activación se puede referir a un aumento en la actividad de una proteína o un ácido nucleico diana en particular. La proteína puede ser un regulador de conductancia de transmembrana de fibrosis quística. Por lo tanto, la activación incluye, al menos en parte, aumentar parcial o totalmente la estimulación, aumentar, promover o acelerar la activación, o activar, sensibilizar o regular al alza la transducción de señales o la actividad enzimática o la cantidad de una proteína.

El término “modulador” se refiere a una composición que aumenta o disminuye el nivel de una molécula diana o la función de una molécula diana o el estado físico del objetivo de la molécula.

El término “modular” se utiliza de acuerdo con su significado ordinario simple y se refiere al acto de cambiar o variar una o más propiedades. “Modulación” se refiere al proceso de cambiar o variar una o más propiedades. Por ejemplo, un modulador de una proteína diana cambia al aumentar o disminuir una propiedad o función de la molécula diana o la cantidad de la molécula diana. Un modulador de una enfermedad disminuye un síntoma, causa o característica de la enfermedad dirigida.

“Selectivo” o “selectividad” o similar de un compuesto se refiere a la capacidad del compuesto para discriminar entre dianas moleculares. “Específico”, “específicamente”, “especificidad” o similar de un compuesto se refiere a la capacidad del compuesto para causar una acción particular, como la inhibición, a una diana molecular particular con una acción mínima o nula a otras proteínas en la célula.

“Excipiente farmacéuticamente aceptable” y “portador farmacéuticamente aceptable” se refieren a una sustancia que ayuda a la administración de un agente activo y la absorción por un sujeto y se puede incluir en las composiciones de la presente invención sin causar un efecto toxicológico adverso significativo. sobre el paciente Ejemplos no limitantes de excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen agua, NaCl, soluciones salinas normales, lactato de Ringer, sacarosa normal, glucosa normal, aglutinantes, rellenos, desintegrantes, lubricantes, recubrimientos, edulcorantes, sabores, soluciones salinas (tal como solución de Ringer), alcoholes, aceites, gelatinas, carbohidratos tales como lactosa, amilosa o almidón, ésteres de ácidos grasos, hidroximetilcelulosa, polivinilpirrolidina y colores, y similares. Dichas preparaciones se pueden esterilizar y, si se desea, mezclar con agentes auxiliares tales como lubricantes, conservantes, estabilizadores, agentes humectantes, emulsionantes, sales para influir en la presión osmótica, tampones, colorantes y/o sustancias aromáticas y similares que no reaccionan de forma nociva. con los compuestos de la invención. Un experto en la técnica reconocerá que otros excipientes farmacéuticos son útiles en la presente invención.

El término “preparación” pretende incluir la formulación del compuesto activo con material de encapsulación como un portador que proporciona una cápsula en la que el componente activo con o sin otros portadores está rodeado por un portador, que por lo tanto está en asociación con este. Del mismo modo, se incluyen sellos y pastillas. Los comprimidos, polvos, cápsulas, píldoras, sellos y pastillas se pueden utilizar como formas de dosificación sólidas adecuadas para la administración oral.

Como se utiliza en el presente documento, el término “administrar” significa administración oral, administración como un supositorio, contacto tópico, administración intravenosa, parenteral, intraperitoneal, intramuscular, intralesional, intratecal, intranasal o subcutánea, o la implantación de un dispositivo de liberación lenta., por ejemplo, una minibomba osmótica, a un sujeto. La administración es por cualquier ruta, que incluye parenteral y transmucosa (por ejemplo, bucal, sublingual, palatal, gingival, nasal, vaginal, rectal o transdérmica). La administración parenteral incluye, por ejemplo, intravenosa, intramuscular, intraarteriolar, intradérmica, subcutánea, intraperitoneal, intraventricular e intracraneal. Otros modos de suministro incluyen, pero no se limitan a, el uso de formulaciones liposomales, infusión intravenosa, parches transdérmicos, etc.

Las composiciones divulgadas en el presente documento se pueden suministrar por vía transdérmica, por una ruta tópica, formuladas como barras aplicadoras, soluciones, suspensiones, emulsiones, geles, cremas, ungüentos, pastas, jaleas, pinturas, polvos y aerosoles. Las preparaciones orales incluyen comprimidos, píldoras, polvos, grageas, cápsulas, líquidos, pastillas, sellos, geles, jarabes, lechadas, suspensiones, etc., adecuados para la ingestión por del paciente. Las preparaciones en forma sólida incluyen polvos, comprimidos, píldoras, cápsulas, sellos, supositorios y gránulos dispersables. Las preparaciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones, por ejemplo, agua o soluciones de agua/propilenglicol. Las composiciones de la presente invención pueden incluir adicionalmente componentes para proporcionar liberación sostenida y/o comodidad. Dichos componentes incluyen polímeros mucomiméticos aniónicos de alto peso molecular, polisacáridos gelificantes y sustratos portadores de fármacos finamente divididos. Estos componentes se analizan con mayor detalle en las patentes de Estados Unidos Nos. 4,911,920; 5,403,841; 5,212,162; y 4,861,760. Las composiciones divulgadas en el presente documento también se pueden administrar como microesferas para una liberación lenta en el cuerpo. Por ejemplo, las microesferas se pueden administrar mediante inyección intradérmica de microesferas que contienen fármaco, que se liberan lentamente por vía subcutánea (véase Rao, J. Biomater Sci. Polym. Ed. 7:623-645, 1995; como formulaciones de gel inyectables y biodegradables (véase, por ejemplo, Gao Pharm. Res. 12:857-863, 1995), o como microesferas para administración oral (véase, por ejemplo, Eyles, J. Pharm. Pharmacol. 49:669-674, 1997). En otra realización, las formulaciones de las composiciones de la presente invención se pueden suministrar mediante el uso de liposomas que se fusionan con la membrana celular o se someten a endocitosis, es decir, al emplear ligandos de receptores adheridos al liposoma, que se unen a los receptores de proteínas de la membrana de la superficie de la célula, lo que da como resultado la endocitosis. Al utilizar liposomas, en particular cuando la superficie del liposoma lleva ligandos de receptores específicos para las células diana, o de otro modo están preferentemente dirigidos a un órgano específico, se puede centrar el suministro de las composiciones de la presente invención en las células diana in vivo (Véase, por ejemplo, Al-Muhammed, J. Microencapsul. 13:293-306, 1996; Chonn, Curr. Opin. Biotechnol. 6:698-708, 1995; Ostro, Am. J. Hosp. Pharm. 46:1576-1587, 1989). Las composiciones también se pueden suministrar como nanopartículas.

Las composiciones farmacéuticas pueden incluir composiciones en las que el ingrediente activo (por ejemplo, los compuestos descritos en el presente documento, que incluyen las realizaciones o los ejemplos) está contenido en una cantidad terapéuticamente eficaz, es decir, en una cantidad eficaz para lograr su propósito previsto. La cantidad real efectiva para una aplicación en particular dependerá, entre otras cosas, de la afección que se va a tratar. Cuando se administran en métodos para tratar una enfermedad, dichas composiciones contendrán una cantidad de ingrediente activo eficaz para lograr el resultado deseado, por ejemplo, modular la actividad de una molécula diana y/o reducir, eliminar o ralentizar la progresión de los síntomas de la enfermedad.

La dosificación y la frecuencia (dosis únicas o múltiples) administradas a un mamífero pueden variar dependiendo de una variedad de factores, por ejemplo, si el mamífero padece otra enfermedad y su ruta de administración; tamaño, edad, sexo, salud, peso corporal, índice de masa corporal y dieta del receptor; naturaleza y extensión de los síntomas de la enfermedad que se está tratando, tipo de tratamiento concurrente, complicaciones de la enfermedad que se está tratando u otros problemas relacionados con la salud. Se pueden utilizar otros regímenes o agentes terapéuticos junto con los métodos y compuestos de la invención de los Solicitantes. El ajuste y la manipulación de las dosificaciones establecidas (por ejemplo, frecuencia y duración) están dentro de la capacidad de aquellos expertos en la técnica.

Los compuestos descritos en el presente documento se pueden utilizar en combinación entre sí, con otros fármacos activos que se sabe que son útiles en el tratamiento de una enfermedad (por ejemplo, anti-estreñimiento, anti-ojo seco, anti-enfermedad pulmonar, anti-enfermedad hepática o anti-enfermedad de pulmón) o con agentes adyuvantes que pueden no ser efectivos solos, pero pueden contribuir a la eficacia del agente activo. Por lo tanto, los compuestos descritos en el presente documento se pueden coadministrar entre sí o con otros fármacos activos que se sabe que son útiles en el tratamiento de una enfermedad.

Por “coadministrar” se entiende que un compuesto descrito en el presente documento se administra al mismo tiempo, justo antes o justo después de la administración de una o más terapias adicionales, por ejemplo, un agente anti estreñimiento o anti-ojo seco como se describe en el presente documento. Los compuestos descritos en el presente documento se pueden administrar solos o se pueden administrar conjuntamente al paciente. La coadministración pretende incluir la administración simultánea o secuencial del compuesto individualmente o en combinación (más de un compuesto o agente). Por lo tanto, las preparaciones también se pueden combinar, cuando se desee, con otras sustancias activas (por ejemplo, agentes anti-estreñimiento o anti-ojo seco).

La coadministración incluye administrar un agente activo (por ejemplo, un complejo descrito en el presente documento) dentro de las 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20 o 24 horas de un segundo agente activo (por ejemplo, agentes anti estreñimiento o anti-ojo seco). También se contemplan en el presente documento realizaciones en las que la coadministración incluye administrar un agente activo dentro de las 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20 o 24 horas de un segundo agente activo. La coadministración incluye administrar dos agentes activos simultáneamente, aproximadamente simultáneamente (por ejemplo, dentro de aproximadamente 1, 5, 10, 15, 20 o 30 minutos entre uno y otro), o secuencialmente en cualquier orden. La coadministración se puede lograr mediante coformulación, es decir, preparar una única composición farmacéutica que incluye ambos agentes activos. En otras realizaciones, los agentes activos se pueden formular por separado. Los agentes activos y/o adyuvantes se pueden conectar o conjugar entre sí. Los compuestos descritos en el presente documento se pueden combinar con tratamientos para el estreñimiento y los trastornos del ojo seco.

El término “asociado” o “asociado con” en el contexto de una sustancia o actividad o función de una sustancia asociada con una enfermedad significa que la enfermedad es causada por (total o en parte), un síntoma de la enfermedad es causado por (total o en parte) la sustancia o la actividad o función de la sustancia, o un efecto secundario del compuesto (por ejemplo, toxicidad) es causado (total o en parte) por la sustancia o la actividad o función de la sustancia.

“Paciente”, “sujeto”, “paciente en necesidad del mismo” y “sujeto en necesidad del mismo” se utilizan indistintamente en el presente documento y se refieren a un organismo vivo que sufre o es propenso a una enfermedad o afección que se puede tratar mediante la administración de una composición farmacéutica como se proporciona en el presente documento. Ejemplos no limitantes incluyen humanos, otros mamíferos, bovinos, ratas, ratones, perros, monos, cabras, ovejas, vacas, ciervos y otros animales no mamíferos. En algunas realizaciones, un paciente es humano.

“Enfermedad” o “afección” se refieren a un estado de ánimo o estado de salud de un paciente o sujeto capaz de ser tratado con los compuestos o métodos proporcionados en el presente documento. La enfermedad como se utiliza en el presente documento se puede referir a estreñimiento o trastornos del ojo seco.

Ejemplos de agentes anti-estreñimiento incluyen, pero no se limitan a, difenilmetanos, Lactobacillus paracasei, linaclotida y lubiprostona. Ejemplos de agentes contra el ojo seco incluyen, pero no se limitan a, ciclosporina tópica, P321 (un inhibidor de ENaC) y diquafosol.

I. Composiciones

En las realizaciones del compuesto de la fórmula I que no se relaciona con la invención reivindicada, X es un enlace, -O-, -N(R¹⁰)-(por ejemplo, -NH-), o -S-. En las realizaciones, X es -O-, -N(R¹⁰)-(por ejemplo, NH), - o -S-. En las realizaciones, X es -O- o -S-. R¹es hidrógeno, halógeno, -CX113, -CHX112, -CH2X11, -CN, -SOn-iR1A, -SOyiNR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1a, -NR1BSO2R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -OCX113, -OCHX112, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. R²es hidrógeno, -CX213, CHX212, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido por ejemplo, haloalquilo), heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R²es hidrógeno, -CH3, -CX213, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo C2-C8 sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R²es hidrógeno, -CX213, CHX212, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido por ejemplo, haloalquilo C2-C4), heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R²es hidrógeno, -CH3, -CX213, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo C2-C8 sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido. R³es hidrógeno, -C(O)R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido. En la realización, R³es hidrógeno, -C(O)R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido. R⁴es hidrógeno, -C(O)R4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A,

C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no

sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R⁴es hidrógeno, -C(O)R4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C,

alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido,

arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido. R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar,

junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido

o no sustituido. R⁵es hidrógeno, -C(O)R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o

no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido

o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente

se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no

sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido. R⁶es hidrógeno, halógeno, -CX613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -SOnaR6A, -SOv⁶NR6BR6C, -NHNR6BR6C, - ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -N(O)m⁶, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -OR6A, -NR6BSO²R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR6D, -NR6BOR6D, -OCX⁶¹³, -OCHX612, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no

sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no

sustituido. R⁷es hidrógeno, halógeno, -CX713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -SOn/R7A, -SOv/NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m⁷, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A,

-NR7BSO2R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, -OCX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido,

heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no

sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁷es hidrógeno,

-CX⁷¹³, -CHX⁷¹², -CH2X71, -CN, -SOn⁷R7A, -SOv⁷NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m⁷, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO²R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BO^r7D, -OCX713, -O^cHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no

sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no

sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. R⁸es hidrógeno, halógeno,- CX813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -SOnsR8A, -SOv⁸NR8BR8C, -NHNR8BR8C, - ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m⁸, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO²R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -OCX⁸¹³, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no

sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituid sustituido. En las realizaciones, R⁸es hidrógeno, -CX813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -SOn⁸R8A, -SOv⁸NR8BR8C, -NHNR8BR8C, - ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m⁸, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO2R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -OCX813, -OCHX812, alquilo

sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido,

heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. R⁹

es hidrógeno, halógeno, -CX913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -SOn9R9A, -SOv9NR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m⁹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO2R9A, -NR9BC(O)R9D, -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -OCX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido,

sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. R¹y R⁶, R⁶y R⁷, R¹y R⁹, o R⁸, y R⁹

se unen opcionalmente para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, cicloalquilo sustituido o no

sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituid sustituido. R¹⁰es hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo

sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo

sustituido o no sustituido. R1A, R1B, R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, R2D, R3A, R3B, R3C, R3D, R4A, R4B, R4C, R4D, R5A, R5B, R5C,

R5D, R6A, R6B, R6C, R6D, R7A, R7B, R7C, R7D, R8A, R8B, R8C, R8D, R9A, R9B, R9C y R9D son i halógeno, -CF3, -CCl³, -CBr³, -CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2,

-NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, - OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2,

-OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo

sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C, R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, R6B, R6C, R7B, R9B y R9C unidos al mismo átomo de nitrógeno opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los

cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido. X¹¹, X²¹,

X⁶¹, X⁷¹, X⁸¹y X⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F. n1, n2, n6, n7, n8, y n9 son independientemente un entero

desde 0 hasta 4. m1, m6, m7, m8, m9, v1, v6, v7, v8 y v9 cada uno es independientemente 1 o 2.

En las realizaciones, n1 es 0. En las realizaciones, n1 es 1. En las realizaciones, n1 es 2. En las realizaciones, n1 es

3. En las realizaciones, n1 es 4. En las realizaciones, n2 es 0. En las realizaciones, n2 es 1. En las realizaciones, n2

realizacion realizacion realizacion realizacion

realizacion las realizaciones, m9 es 2. En las realizaciones, v i es 1. En las realizaciones, v i es 2. En las realizaciones, v6 es 1. En las realizaciones, v6 es 2. En las realizaciones, v7 es 1. En las realizaciones, v7 es 2. En las realizaciones, v8 es 1. En las realizaciones, v8 es 2. En las realizaciones, v9 es 1. En las realizaciones, v9 es 2.

En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n2 es 1; X²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo Ci -C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁶no es -N(O)m⁶. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n2 es 1; X²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁹no es -N(O)m9. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n2 es 1; X²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es -CH3, entonces R⁶no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n2 es 1; X²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es -CH3, entonces R⁹no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es - (CH2)n2CX213; n2 es 1; X²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁶no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n2 es 1; X²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁹no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n2 es 1; X²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es -CH3, entonces R⁶no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es - (CH2)n2CX213; n2 es 1; X²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es -CH3, entonces R⁹no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2CF3; uno de R³y R⁴es hidrógeno y uno de R³y R⁴es -CH3, entonces R⁶no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2CF3; uno de R³y R⁴es hidrógeno y uno de R³y R⁴es etilo, entonces R⁶no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2CF3; uno de R³y R⁴es hidrógeno y uno de R³y R⁴es alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R⁶no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2CF3; uno de R³y R⁴es alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R⁶no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2CF3; R³y R⁴son hidrógeno o alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R⁶no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2CF3; uno de R³y R⁴es hidrógeno y uno de R³y R⁴es -CH3, entonces R⁹no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2CF3; uno de R³y R⁴es hidrógeno y uno de R³y R⁴es etilo, entonces R⁹no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es - CH2CF3; uno de R³y R⁴es hidrógeno y uno de R³y R⁴es alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R⁹no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2CF3; uno de R³y R⁴es alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R⁹no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2CF3; R³y R⁴son hidrógeno o alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R⁹no es -NO2.

En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2(CF2)2H; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R¹no es -N(O)m1. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es - CH2(CF2)2H; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R¹no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2(CF2)2H; uno de R³y R⁴es hidrógeno y uno de R³y R⁴es -CH3, entonces R¹no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2(CF2)2H; uno de R³y R⁴es hidrógeno y uno de R³y R⁴es etilo, entonces R¹no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2(CF2)2H; uno de R³y R⁴es hidrógeno y uno de R³y R⁴es alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R¹no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es - CH2(CF2)2H; uno de R³y R⁴es alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R¹no es -NO2. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH2(CF2)2H; R³y R⁴son hidrógeno o -CH3, entonces R¹no es -NO2. Cuando X es -O-; R²es -CH2(CF2)2H; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R¹no es -NO2. Cuando X es -O-; R²es -CH2(CF2)2H; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R¹no es -NO2.

En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH(CF3)2; R³y R⁴son independientemente alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R¹no es hidrógeno. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es - CH(CF3)2; R³y R⁴son independientemente metilo o etilo, entonces R¹no es hidrógeno. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH(CF3)2; R³y R⁴son independientemente etilo, entonces R¹no es hidrógeno. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH(CF3)2; R³y R⁴son independientemente metilo, entonces R¹no es hidrógeno. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH(CF3)2; uno de R³y R⁴es metilo, uno de R³y R⁴es etilo, entonces R¹no es -hidrógeno. En las realizaciones, cuando X es -O-; R²es -CH(CF3)2; R³y R⁴son independientemente alquilo C1-C3, entonces R¹no es hidrógeno. Cuando X es -O-; R²es -CH(CF3)2; R³y R⁴son independientemente alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R¹no es hidrógeno.

En las realizaciones, cuando X es -O- y R²es alquilo sustituido con cicloalquilo sustituido o no sustituido, entonces R³y R⁴son hidrógeno. En las realizaciones, cuando X es -O- y R²es metilo sustituido con cicloalquilo de 5-7 miembros sustituido o no sustituido, entonces R³y R⁴son hidrógeno. En las realizaciones, cuando X es -O- y R²es etilo sustituido con cicloalquilo de 5-7 miembros, entonces R³y R⁴son hidrógeno. En las realizaciones, cuando X es -O- y R²es metilo sustituido con ciclohexilo sustituido o no sustituido, entonces R³y R⁴son hidrógeno. En las realizaciones, cuando X es -O- y R²es metilo sustituido con ciclohexilo, entonces R³y R⁴son hidrógeno. En las realizaciones, cuando X es -O- y R²es C1-C3 alquilo sustituido con ciclohexilo, entonces R³y R⁴son hidrógeno. En las realizaciones, cuando X es -O- y R²es etilo sustituido con ciclohexilo, entonces R³y R⁴son hidrógeno. En las realizaciones, cuando X es -O- y R²es metilo sustituido con ciclohexilo sustituido, entonces R³y R⁴son hidrógeno. En las realizaciones, cuando X es -O- y R²es etilo sustituido con ciclohexilo sustituido, entonces R³y R⁴son hidrógeno.

En las realizaciones, X es -O-, -NH- o -S-. En las realizaciones, X es -O- o -S-. En las realizaciones, X es -NH-. En las realizaciones, X es -O-.

En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno, -CX¹¹^, -CHX¹^ , -CH2X11, -CN, -N(O)m1, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -OCX¹43, -OCHX¹⁴2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno, -CX113, -CHX¹^, -CH2X11, -CN, -N(O)mi, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -OCX¹^, - OCHX112 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -N(O)m1, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -OCX113, - OCHX112 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno, -CX113, -CHX112, -CH2X11, -CN, -NO2, -NO, -C(O)R1A, -C(O)OR1D, -OCX113, -OCHX112 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R1A y R1D son independientemente hidrógeno o ^{metilo. En las realizaciones, R1 es un hidrógeno, halógeno, -CN, -NO}2^,-CoH, ^-COCH3^{, -COOCH}3^{, o -COOH. En las}realizaciones, R¹es halógeno, -NO2 o -COOH. En las realizaciones, R¹es halógeno o - NO2. En las realizaciones, R¹es halógeno o -COOH. En las realizaciones, R¹es -NO2. En las realizaciones, R¹es un halógeno.

En las realizaciones, R²es hidrógeno, -CH3, -CX213, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R²es hidrógeno, -CH3, -CX213, - (CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, o heterocicloalquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R²es hidrógeno, -CH3, -CX213, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido o heteroalquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R²es hidrógeno, -CH3, -CX213, -(CH2)n2CX213, alquilo sustituido o no sustituido por ejemplo, haloalquilo). En las realizaciones, R²es hidrógeno,-CX213, -(CH2)n2CX213, alquilo C2-C8 sustituido por ejemplo, haloalquilo C2-C8). En las realizaciones, R²es -CX213, -(CH2)n2CX213, alquilo C2-C8 sustituido por ejemplo, haloalquilo C2-C8). En las realizaciones, R²es CX213, -(CH²)n²CX²¹³, alquilo C2-C8 sustituido, o haloalquilo C2-C8. En las realizaciones, R²es -(CH2)n2CX213, alquilo C2-C8 sustituido (por ejemplo, haloalquilo C2-C8). En las realizaciones, R²es -(CH2)n2CX213 (por ejemplo, haloalquilo C2-C8). En las realizaciones, R²es -CX213. En las realizaciones, R²es -(CH2)n2CX213. En las realizaciones, R²es alquilo C2-C8 sustituido con halógeno. En las realizaciones, R²es alquilo C2-C⁸sustituido con al menos uno, dos, tres, cuatro o cinco halógenos. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C8 sustituido con al menos uno, dos, tres, cuatro o cinco halógenos. En las realizaciones, R²es -haloalquilo C2-C8. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C6. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C4. En las realizaciones, R²es alquilo C2-C4 sustituido con uno o más átomos de flúor. En las realizaciones, R²es alquilo C2-C4 sustituido con uno, dos, tres, cuatro o cinco átomos de flúor. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C4 sustituido con uno, dos, tres, cuatro o cinco halógenos. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C4 sustituido con un flúor. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C4 sustituido con dos átomos de flúor. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C4 sustituido con tres átomos de flúor. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C4 sustituido con cuatro átomos de flúor. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C4 sustituido con cinco átomos de flúor. En las realizaciones, R²es - CH2CF2CHF2. En las realizaciones, R²es -CH(CF3)2.

En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³y R⁴se unen para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³y R⁴se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁵es independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁵es independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, o heteroalquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido o arilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁵es hidrógeno o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³es -C(O)R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁴es -C(O)R4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁵es -C(O)R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido. R3A, R3B, R3C, R3D, R4A, R4B, R4C, R4D, R5A, R5B, R5C y R5D son independientemente hidrógeno o metilo.

En las realizaciones, R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido o heteroalquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno o alquilo C1-C4 sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno o alquilo C1-C4 no sustituido. En las realizaciones, R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, metilo o etilo. En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente alquilo C1-C4 sustituido o no sustituido y R⁵es hidrógeno o alquilo C1-C4 sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente hidrógeno, metilo o etilo. En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente metilo o etilo. En las realizaciones, R⁵es hidrógeno, metilo o etilo. En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente metilo o etilo, y R⁵es hidrógeno. En las realizaciones, R⁵es hidrógeno, y R³y R⁴son independientemente hidrógeno, metilo o etilo. En las realizaciones, R⁵es hidrógeno. En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente metilo. En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente etilo.

En las realizaciones, R⁶es hidrógeno, halógeno, -CXa13, -CHXa12, -CH2X61, -CN, -N(O)ma, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -OCX613, -OCHX612, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, Ra es hidrógeno, halógeno, -CX^{a 13}, -CHX612, -CH2X81, -CN, -N(O)ma, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -OCX⁶¹³, - OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, Ra es hidrógeno, halógeno, -CXa13, -CHXa12, -CH2X81, -CN, -nO, ^-C(O)R6D^{, -C(O)OR}6D^{, -OCX}613^{, -OCHX}612 ^{o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R}a ^eshidrógeno, halógeno, -CX^a13, -CHXa i2, -CH2X81, -CN, -SOnaRaA, -SOviNRaBRac, -NHNRaBRac, -ONRaBRac, -NHC(O)NHNRaBRac, -NHC(O)NRaBRaC, -NO, -NRaBRaC, -C(O)RaA, -C(O)ORaA, -C(O)NRaBRaC, -ORaA,-NRaBSO²RaA, -^NRaB^C(O)RaD^{, -NR}aB^C(O)ORaD^{, -NR}aB^ORaD^{, -OCX}a13^,-oChX612, ^{alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo}sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, Ra es hidrógeno, halógeno, -CXa l3, -CHXa l2, -CH2X81, -CN, -NO, -C(O)RaD, -C(O)ORaD, -OCXa l3, -OCHXa l2 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, RaA y RaD son independientemente hidrógeno o metilo. En las realizaciones, Ra es un hidrógeno, halógeno, -CN, -NO2, -COH, -COCH3, -COOCH3, o -COOH. En las realizaciones, Ra es halógeno, -NO2 o -COOH. En las realizaciones, Ra es halógeno o -NO2. En las realizaciones, Ra es halógeno o -COOH. En las realizaciones, Ra es -NO2. En las realizaciones, Ra es un halógeno.

En las realizaciones, R⁷es hidrógeno, -CX713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -N(O)m7, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -OCX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁷es hidrógeno,-CX713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -N(O)m7, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -OCX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁷es hidrógeno,-CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -N(O)m7, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -OCX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁷es hidrógeno,-CX713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -NO, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -OCX713, -OCHX⁷¹o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R7A y R7D son independientemente hidrógeno o metilo. En las realizaciones, R⁷es un hidrógeno, -CN, -NO2, -COH, -COCH3, -COOCH3, o -COOH. En las realizaciones, R⁷es un hidrógeno, -NO2 o -COOH. En las realizaciones, R⁷es un hidrógeno, o -NO2. En las realizaciones, R⁷es un hidrógeno o -COOH. En las realizaciones, R⁷es -NO2. En las realizaciones, R⁷es un hidrógeno.

En las realizaciones, R⁸es hidrógeno,-CX813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -N(O)m⁸, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -OCX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁸es hidrógeno,-CX813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -N(O)m⁸, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -OCX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁸es hidrógeno,-CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -N(O)m⁸, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -OCX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁸es hidrógeno,-CX813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -NO, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -OCX813, -OCHX⁸¹o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R8A y R8D son independientemente hidrógeno o metilo. En las realizaciones, R⁸es un hidrógeno, -CN, -NO2, -COH, -COCH3, -COOCH3, o -COOH. En las realizaciones, R⁸es un hidrógeno, -NO2 o -COOH. En las realizaciones, R⁸es un hidrógeno, o -NO2. En las realizaciones, R⁸es un hidrógeno o -COOH. En las realizaciones, R⁸es -NO2. En las realizaciones, R⁸es hidrógeno.

En las realizaciones, R⁹es hidrógeno, halógeno, -CX913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -N(O)m9, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -OCX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁹es hidrógeno, halógeno, -CX⁹¹³, -CHX912, -CH2X91, -CN, -N(O)m9, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -OCX⁹¹³, - OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -N(O)m9, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -OCX913, - OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁹es hidrógeno, halógeno, -CX913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -NO, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -OCX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁹es hidrógeno, halógeno, -CX913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -NO, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -OCX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R9A y R9D son independientemente hidrógeno o metilo. En las realizaciones, R⁹es un hidrógeno, halógeno, -CN, -NO2, -COH, -COCH3, -COOCH3, o -COOH. En las realizaciones, R⁹es halógeno, -NO2 o -COOH. En las realizaciones, R⁹es halógeno o -NO2. En las realizaciones, R⁹es halógeno o -COOH. En las realizaciones, R⁹es -NO2. En las realizaciones, R⁹es un halógeno.

En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno, -CX¹¹^, -CHX¹⁴2, -CH2X11, -CN, -N(O)mi, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -OCX¹43, -OCHX¹⁴2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, CX213, -CH3, -(CH2)n2CX213, alquilo C2-C8 sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -CX⁶¹³, -CHX812, -CH2X61, -CN, -N(O)m⁶, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -OCX8¹³, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno,-CX713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -N(O)m7, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -OCX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o ^{heteroarilo sustituido o no sustituido; R8 es hidrógeno, -CX}813^{, -CHX}812^{, -CH}2^X81^,-Cn, ^-N(O)m^{8, -C(O)R}8D^{, -C(O)OR}8D^,-OCX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -CX⁹¹³, -CHX912, -CH2X91, -CN, -N(O)m9, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -OCX⁹¹³, - OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno, -CX113, -CHX¹^ , -CH2X11 , -CN, -NO2, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -OCX113, -OCHX112 o alquilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -CX213, -(CH2)n2CX213, alquilo C2-C6 sustituido o haloalquilo C2-C8; R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -CX613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -NO2, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -OCX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, -CX713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -OCX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, -CX813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -OCX813, -^OCHX812 ^{o alquilo sustituido o no sustituido; y R9 es hidrógeno, halógeno, -CX}913^,-ChX912, ^-CH2^X91^{, -CN, -NO}2^{, -}C(O)R9D, -C(O)OR9D, -OCX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido, en el que R1D, R6D, R7D, R8D y R9D son independientemente hidrógeno o metilo.

En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -OCX¹43, -OCHX¹42 o alquilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -CX213, CHX212,-(CH2)n1CX213, haloalquilo C2-C4; R³y R⁴son independientemente, alquilo no sustituido; R⁵es hidrógeno; R⁶es hidrógeno, halógeno, -CX613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -NO2, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -OCX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno,-CF3, -CCl3,-CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, - OCX⁷¹³, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno,-CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -OCX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -OCX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido, en el que R1D, R6D, R7D, R8D y R9D son independientemente hidrógeno o metilo, y X¹¹, X²¹, X⁶¹, X⁷¹, X⁸¹y X⁹¹son independientemente -F.

En las realizaciones, al menos uno de R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, al menos dos de R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, al menos tres de R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, al menos cuatro de R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, al menos uno de R⁷y R⁸son hidrógeno. En las realizaciones, R⁷es hidrógeno. En las realizaciones, R⁸es hidrógeno. En las realizaciones, R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno.

En las realizaciones, X es -O-; R¹es hidrógeno, halógeno, -CX1^, -CHX1^, -CH2X11 , -CN, -NO2, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -OCX¹⁴3, -OCHX¹⁴2 o alquilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -CX213, -CH3, -(CH2)n2CX213, alquilo C2-C6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido o haloalquilo C2-C6; R³y R⁴son independientemente alquilo sustituido o no sustituido o arilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno o alquilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -CX613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -NO2, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -OCX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno,-CX713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -NO2, -^C(O)R7D^{, -C(O)OR}7D^,-oCx713, ^-OCHX712 ^{o alquilo sustituido o no sustituido; R8 es hidrógeno, -CX}813^{, -CHX}812^{, -}CH2X81, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -OCX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -CX913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -NO2, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -OCX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R1D, R6D, R7D, R8D y R9D son independientemente hidrógeno o metilo.

En las realizaciones, X es -O-; R¹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -OCF3, -OCHF2, -OCCl3, -OCBr3 o alquilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -CX213, -(CH2)n2CX213, alquilo C2-C6 sustituido, arilo sustituido o no sustituido o haloalquilo; R³y R⁴son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido o arilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno o alquilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -CX613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -OCX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno,-CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -OCX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno,- CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -OCX813, -OCHX⁸¹o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCI3, -CBra, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN,-C(O)R9D, -C(O)OR9D, -OCX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R1D, R6D, R7D, R8D y R9D son independientemente hidrógeno o metilo.

En las realizaciones, al menos dos de R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, dos de R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno y R¹es -NO2. En las realizaciones, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno y R¹es -NO2. En las realizaciones, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno y R¹es -COOH. En las realizaciones, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno y R¹es -F. En las realizaciones, R¹, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno y R⁶es -COOH. En las realizaciones, R¹, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno y R⁶es -F. En las realizaciones, R¹, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno y R⁶es -Cl. En las realizaciones, R¹, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno y R⁶es -NO2, con la condición que cuando X es -O ; R²es -CH2CF3; uno de R³y R⁴es hidrógeno y uno de R³y R⁴es alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R⁶no es -NO2. En las realizaciones, R¹, R⁶, R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno y R⁹es -COOH. En las realizaciones, R¹, R⁶, R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno y R⁹es -F. En las realizaciones, R¹, R⁶, R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno y R⁹es -Cl. En las realizaciones, R¹, R⁶, R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno y R⁹es -NO2, con la condición que cuando X es -O-; R²es -CH2CF3; uno de R³y R⁴es hidrógeno y uno de R³y R⁴es alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R⁹no es -NO2. En las realizaciones, R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R¹no es hidrógeno y R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno.

En las realizaciones, R²es -CX213, -(CH2)n2CX213, o haloalquilo C2-C8. En las realizaciones, R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno, -CX¹43, -CHX¹42, -CH2X11, -CN, -NO2, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, - OCX¹^, -OCHX¹^ o alquilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -CX613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -NO2, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -OCX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno,-CX713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -NO2, -C(O)R7D,-C(O)OR7D, -OCX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno,-CX813,-CHX812, -CH2X81, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -OCX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno,-CX913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -NO2, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -OCX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R³y R⁴alquilo sustituido o no sustituido; R⁵son ^{independientemente hidrógeno; R6 es hidrógeno, halógeno, -CX}613^,-ChX612, ^-CH2^X61^{, -CN,, -C(O)R}6D^{, -C(O)OR}6D^{, -}OcX613, ^-OCHX612 ^{o alquilo sustituido o no sustituido; R7 es hidrógeno,-CX}713^{, -CHX}712^{, -CH}2^X71^{, -CN, -NO}2^{, -C(O)R}7D^{, -C(O)OR}7D^,-oCx713, ^{- OCHX}712 ^{o alquilo sustituido o no sustituido; R8 es hidrógeno, -CX}813^{, -CHX}812^{, -}CH2X⁸¹,-CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -OCX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -CX913, -CHX912, -CH2X91, -CN,, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, - OCX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido; en el que R1D, R6D, R7D, R8D y R9D son independientemente hidrógeno o metilo, y X¹¹, X²¹, X⁶¹, X⁷¹, X⁸¹y X⁹¹son independientemente -F. En las realizaciones, R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente metilo o etilo. En la realización, R⁵es hidrógeno. En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno,-NO2, o -COOH; R⁵es hidrógeno; R⁶es hidrógeno, halógeno -NO2, o -COOH; R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno; y R⁹es hidrógeno, halógeno NO2, o -COOH. En las realizaciones, R¹, R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R¹, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R¹, R⁶, R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno.

En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente hidrógeno, metilo o etilo. En las realizaciones, R²es alquilo C2-C4 sustituido con átomos de flúor. En las realizaciones, R²es alquilo C2-C4 sustituido con al menos uno, dos, tres, cuatro o cinco átomos de flúor. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C4 sustituido con al menos uno, dos, tres, cuatro o cinco átomos de flúor. En las realizaciones, R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R1 y R6 se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un pirazolilo sustituido o no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo; R2 es haloalquilo C2-C4; R3 y R4 son independientemente hidrógeno, metilo o etilo. El compuesto de la reivindicación Error! Fuente de referencia no encontrada, en el que el compuesto se representa con

En las realizaciones, R⁵, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R²es -CH(CF3)2 o -CH²(CF²)²H.

En las realizaciones, R²es -C X 213, o haloalquilo C2-C4. En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 113, -CHX112, -CH2X11, -CN, -NO2, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -O CX113, - OCHX112 o alquilo sustituido o no sustituido; R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, o R³y R⁴opcionalmente se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -NO2, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX613,-OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno,-CX713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -O CX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno,-CX813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -O CX813,-OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -ChX912,-cH2X⁹¹, -CN, -NO2, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 113, -CH X112, -CH2X11, -CN, -NO2, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, - OCX113, -OCHX112 o alquilo sustituido o no sustituido; R³y R⁴alquilo sustituido o no sustituido; R⁵son independientemente hidrógeno; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHx612, -CH2X61, -CN, -NO2, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -O CX713, - OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, -CX813, -CHX812, -CH2X⁸¹,-CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -O CX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -NO2, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, - OCX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido; en el que R1D, R6D, R7D, R8D y R9D son independientemente hidrógeno o metilo, y X ¹¹, X ²¹, X ⁶¹, X ⁷¹, X ⁸¹y X⁹¹son independientemente -F. En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente hidrógeno, metilo o etilo. En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno,-NO2, -COOH; R⁵es hidrógeno; R⁶es hidrógeno, halógeno -NO2, o-COOH; R⁷es hidrógeno; R⁸es hidrógeno; y R⁹es hidrógeno, halógeno NO2, o -COOH. En las realizaciones, R¹es un hidrógeno, halógeno, COOH o -NO2; R²es haloalquilo C2-C4; R⁵es hidrógeno; R⁶es un hidrógeno, halógeno, COOH o -NO2; R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno; R⁹es un hidrógeno, halógeno, COOH o -NO2. En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente hidrógeno, metilo o etilo. En las realizaciones, R²es alquilo sustituido con al menos un flúor. En las realizaciones, R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno.

En las realizaciones, R¹es independientemente hidrógeno, halógeno, -C X 113, -CH X112, -CH2X11, -CN, -SOn1R1A, -SOv¹NR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A,-NR1BSO2R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX113, -OCHX112 (por ejemplo, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH,-SO3H, -SO4H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H,-NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -O CF³, -OCCl³, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2,-OCHBr2, -OCHI2), R1E-alquilo sustituido o no sustituido, R1E-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R1E-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R1E-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R1E-arilo sustituido o no sustituido, o R1E-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹es independientemente hidrógeno, halógeno, -CX¹¹³, - C H ^ ^ - C ^ X 1¹, -CN, -SOn1R1A, -SOv1NR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A,-NR1BSO2R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -OCX113, -OCHX112 (por ejemplo, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl³, -CBr³, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH,-SO³H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(o)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H,-NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2,-OCHBr2, -OCHI2), R1E-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R1E-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R1E-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R1E-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R1E-fenilo sustituido o no sustituido, o R1E-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

R1E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3,-CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(o)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, - OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, R1F-alquilo sustituido o no sustituido, R1F-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R1F-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R1F-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R1F-arilo sustituido o no sustituido, o R1F-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R1E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H,-SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H,-NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2,-OCHI2, R1F-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R1F-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R1F-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R1F-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R1F-fenilo sustituido o no sustituido, o R1F-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R²es independientemente hidrógeno, halógeno, -CX213, -CHX212, -CH2X21, -CN, -SOn2R2A, -SOv2NR2BR2C, -NHNR2BR2C, -ONR2BR2C, -NHC(O)NHNR2BR2C, -NHC(O)NR2BR2C, -N(O)m², -NR2BR2C, -C(O)R2D, -C(O)OR2D, -C(O)NR2BR2C, -OR2A,-NR2BSO2R2A, -NR2BC(O)R2D, -NR2BC(O)OR2D, -NR2BOR2D, -OCX213, -OCHX212 (por ejemplo, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH,-SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(o)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H,-NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2,-OCHBr2), -OCHI2, R2E-alquilo sustituido o no sustituido, R2E-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R2E-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R2E-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R2E-arilo sustituido o no sustituido, o R2E-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R²es independientemente hidrógeno, halógeno, -CX²¹³, -CHX212,-CH2X2¹, -CN, -SOn2R2A, -SOv2NR2BR2C, -NHNR2BR2C, -ONR2BR2C, -NHC(O)NHNR2BR2C, -NHR(O)NR2BR2C, -N(O)m², -NR2BR2C, -C(O)R2D, -C(O)OR2D, -C(O)NR2BR2C, -OR2A,-NR2BSO2R2A, -NR2BC(O)R2D, -NR2BC(O)OR2D, -NR2BOR2D, -OCX213, -OCHX212 (por ejemplo, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl³, -CBr³, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH,-SO³H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(o)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H,-NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2,-OCHBr2, -OCHI2), R2E-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R2E-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R2E-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R2E-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R2E-fenilo sustituido o no sustituido, o R2E-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R²es haloalquilo. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C8. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C6. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C4. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C4 que incluye al menos uno, dos, tres, cuatro o cinco átomos de flúor.

R2E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3,-CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH,-OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R2F-alquilo sustituido o no sustituido, R2F-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R2F-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R2F-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R2F-arilo sustituido o no sustituido, o R2F-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R2E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H,-SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H,-NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2,-OCHI2, R2F-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R2F-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R2F-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R2F-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R2F-fenilo sustituido o no sustituido, o R2F-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R³es independientemente hidrógeno, -C(O)R3D, -C(O)NHNR3BR3C,-C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, R3E-alquilo sustituido o no sustituido, R3E-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R3E-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R3E-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R3E-arilo sustituido o no sustituido, o R3E-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³es independientemente hidrógeno, R3E-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R3E-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R3E-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R3E-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R3E-fenilo sustituido o no sustituido, o R3E-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

R3E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3,-CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, NHOH,-OCFa, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCI2, -OCHBr2, -OCHI2, R3F-alquilo sustituido o no sustituido, R3F-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R3F-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R3F-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R3F-arilo sustituido o no sustituido, o R3F-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R3E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H,-SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H,-NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2,-OCHh), R3F-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R3F-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R3F-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R3F-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R3F-fenilo sustituido o no sustituido, o R3F-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R⁴es independientemente hidrógeno, -C(O)R4D, -C(O)NHNR4BR3C,-C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, R4E-alquilo sustituido o no sustituido, R4E-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R4E-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R4E-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R4E-arilo sustituido o no sustituido, o R4E-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁴es independientemente hidrógeno, R4E-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R4E-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R4E-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R4E-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R4E-fenilo sustituido o no sustituido, o R4E-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

R4E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3,-CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH,-OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R4F-alquilo sustituido o no sustituido, R4F-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R4F-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R4F-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R4F-arilo sustituido o no sustituido, o R4F-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R4E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H,-SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H,-NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2,-OCHI2, R4F-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R4F-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R4F-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R4F-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R4F-fenilo sustituido o no sustituido, o R4F-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R³y R⁴se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un cicloalquilo (por ejemplo, C3-C6) sustituido o no sustituido, un heterocicloalquilo (por ejemplo, de 3 a 6 miembros) sustituido o no sustituido, arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido o heteroarilo (por ejemplo, de 5 a 6 miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³y R⁴se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un cicloalquilo (por ejemplo, C3-C6) sustituido o no sustituido, un heterocicloalquilo (por ejemplo, de 3 a 6 miembros) sustituido o no sustituido o heteroarilo (por ejemplo, de 5 a 6 miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³y R⁴se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un cicloalquilo (por ejemplo, C3-C6) sustituido o no sustituido o un heterocicloalquilo (por ejemplo, de 3 a 6 miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³y R⁴se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo (por ejemplo, de 3 a 6 miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³y R⁴se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R3E-cicloalquilo (por ejemplo, C3-C6) sustituido o no sustituido, R3E-heterocicloalquilo (por ejemplo, de 3 a 6 miembros) sustituido o no sustituido, R3E-arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido o R3E-heteroarilo (por ejemplo, de 5 a 6 miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³y R⁴se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R3E- cicloalquilo (por ejemplo, C3-C6) sustituido o no sustituido, R3E-heterocicloalquilo (por ejemplo, de 3 a 6 miembros) sustituido o no sustituido o R3E-heteroarilo (por ejemplo, de 5 a 6 miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³y R⁴se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R3E- cicloalquilo (por ejemplo, C3-C6) sustituido o no sustituido o R3E-heterocicloalquilo (por ejemplo, de 3 a 6 miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³y R⁴se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R3E-heterocicloalquilo (por ejemplo, de 3 a 6 miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R³y R⁴se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R3E-piperidinilo sustituido o no sustituido o morfolinilo. En las realizaciones, R³y R⁴se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, piperidinilo no sustituido o morfolinilo. En las realizaciones, el compuesto es

En las realizaciones, R⁵es independientemente hidrógeno, -C(O)R5D, -C(O)NHNR5BR5C,-C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, R5E-alquilo sustituido o no sustituido, R5E-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R5E-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R5E-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R5E-arilo sustituido o no sustituido, o R5E-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁵es independientemente hidrógeno, R5E-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R5E-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R5E-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R5E-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R5E-fenilo sustituido o no sustituido, o R5E-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

R5E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(o)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH,

- OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R5F-alquilo sustituido o no sustituido, R5F-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R5F-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R5F-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R5F-arilo sustituido o no sustituido, o R5F-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R5E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H,-SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H,-NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, - OCHI2, R5F-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R5F-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R5F-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R5F-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R5F-fenilo sustituido o no sustituido, o R5F-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R⁶es independientemente hidrógeno, halógeno, -CX613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -SOn⁶R6A, -SOv⁶NR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -N(O)m⁶, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -OR6A,-NR6BSO2R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR6D, -NR6BOR6D, -OCX613, -OCHX612 (por ejemplo, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH,-SO3H, -SO4H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H,-NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF³, -OCCl³, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2,-OCHBr2, -OCHI2), R6E-alquilo sustituido o no sustituido, R6E-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R6E-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R6E-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R6E-arilo sustituido o no sustituido, o R6E-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁶es independientemente hidrógeno, halógeno, -CX⁶¹³, -CHX612,-CH2X⁶¹, -CN, -SOn⁶R6A, -SOv⁶NR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -N(O)m⁶, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -OR6A,-NR6BSO2R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR6D, -NR6BOR6D, -OCX613, -OCHX612 (por ejemplo, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl³, -CBr³, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH,-SO³H, -SO4H, -SO2NH2, -NH NHC(o)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H,-NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2,-OCHBr2, -OCHI2), R6E-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R6E-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R6E-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R6E-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R6E-fenilo sustituido o no sustituido, o R6E-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

R6E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH,

- OCF3, -OCCla, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R6F-alquilo sustituido o no sustituido, R6F-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R6F-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R6F-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R6F-arilo sustituido o no sustituido, o R6F-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R6E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF³, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, - OCHI2, R6F-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R6F-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R6F-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R6F-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R6F-fenilo sustituido o no sustituido, o R6F-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R⁷es independientemente hidrógeno, halógeno, -CX713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -SOn7R7A, -SOv/NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m⁷, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO²R7A, -NR7BC(O)R7D, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, -OCX⁷¹³, -OCHX⁷¹²

(por ejemplo, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, - SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2), R7E-alquilo sustituido o no sustituido, R7E-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R7E-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R7E-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido,

R7E-arilo sustituido o no sustituido, o R7E-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁷es independientemente hidrógeno, halógeno, -CX713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -SOn7R7A, -SOv7NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m⁷, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO2R7A, -NR7BC(O)R7D, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, -OCX713, -OCHX712 (por ejemplo, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl³, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, - SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NH NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, - OCHBr2, -OCHI2), R7E-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R7E-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R7E-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R7E-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R7E-fenilo sustituido o no sustituido, o R7E-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

R7E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH,

- OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R7F-alquilo sustituido o no sustituido, R7F-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R7F-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R7F-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R7F-arilo sustituido o no sustituido, o R7F-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R7E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF³, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, - OCHI2, R7F-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R7F-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R7F-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R7F-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R7F-fenilo sustituido o no sustituido, o R7F-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R⁸es independientemente hidrógeno, halógeno, -CX813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -SOnsR8A, -SOvsNR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m⁸, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO²R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -OCX⁸¹³, -OCHX⁸¹²

(por ejemplo, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, - SO3H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF³, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2), R8E-alquilo sustituido o no sustituido, R8E-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R8E-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R8E-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido,

R8E-arilo sustituido o no sustituido, o R8E-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁸es independientemente hidrógeno, halógeno, -CX813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -SOn⁸R8A, -SOv⁸NR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m⁸, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO2R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -OCX813, -OCHX812 (por ejemplo, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl³, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, - SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NH NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, - OCHBr2, -OCHI2), R8E-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R8E-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R8E-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R8E-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R8E-fenilo sustituido o no sustituido, o R8E-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

R8E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH,

- OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R8F-alquilo sustituido o no sustituido, R8F-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R8F-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R8F-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R8F-arilo sustituido o no sustituido, o R8F-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R8E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF³, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, - OCHI2, R8F-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R8F-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R8F-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R8F-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R8F-fenilo sustituido o no sustituido, o R8F-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R⁹es independientemente hidrógeno, halógeno, -CX913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -SOngR9A, -SOvgNR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m⁹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO²R9A, -NR9BC(O)R9D, -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -OCX9.9 3, -OCHX9.9

2 (por ejemplo, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, - SO3H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF³, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2), R9E-alquilo sustituido o no sustituido, R9E-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R9E-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R9E-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido,

R9E-arilo sustituido o no sustituido, o R9E-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁹es independientemente hidrógeno, halógeno, -CX913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -SOngR9A, -SOv9NR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m⁹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -C(O)NR9BR9C, -OR9A,

-NR9BSO2R9A, -NR9BC(O)R9D, -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -OCX913, -OCHX912 (por ejemplo, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl³, -CBr³, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, - SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, - OCHBr2, -OCHI2), R9E-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R9E-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido

o no sustituido, R9E-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R9E-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o

no sustituido, R9E-fenilo sustituido o no sustituido, o R9E-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

R9E es independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH,

- OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R9F-alquilo sustituido o no sustituido, R9F-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R9F-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R9F-heterocicloalquilo sustituido o no

sustituido, R9F-arilo sustituido o no sustituido, o R9F-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R9E es

independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF³,

-OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, - OCHI2, R9F-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R9F-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R9F-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R9F-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R9F-fenilo sustituido o no sustituido, o R9F-heteroarilo

de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R1A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R1AF-alquilo

sustituido o no sustituido, R1AF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R1AF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R1AF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R1AF-arilo sustituido o no sustituido, o R1AF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R1A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R e

alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R1AF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R1AF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R1AF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R1AF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R1AF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R1B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R1BF-alquilo

sustituido o no sustituido, R1BF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R1BF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R1BF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R1BF-arilo sustituido o no sustituido, o R1BF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R1B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R1BF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R1BF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R1BF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R1BF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R1BF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R1BF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R1C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R1CF-alquilo

sustituido o no sustituido, R1CF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R1CF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R1CF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R1CF-arilo sustituido o no sustituido, o R1CF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R1C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R1CF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R1CF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R1CF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R1CF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R1CF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido. R1B y R1C unidos al mismo

átomo de nitrógeno se pueden unir opcionalmente para formar un R1CF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido

o no sustituido o R1CF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R1D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R1DF-alquilo

sustituido o no sustituido, R1DF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R1DF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R1DF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R1DF-arilo sustituido o no sustituido, o R1DF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R1D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCI3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCI2, -OCHBr2, -OCHI2, R1DF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R1DF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R1DF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R1DF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R1DF-fenilo sustituido o no sustituido, o R1DF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R2A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R2AF-alquilo sustituido o no sustituido, R2AF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R2AF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R2AF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R2AF-arilo sustituido o no sustituido, o R2AF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R2A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, R2AF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R2AF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R2AF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R2AF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R2AF-fenilo sustituido o no sustituido, o R2AF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R2B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R2BF-alquilo sustituido o no sustituido, R2BF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R2BF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R2BF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R2BF-arilo sustituido o no sustituido, o R2BF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R2B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R2BF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R2BF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R2BF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R2BF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R2BF-fenilo sustituido o no sustituido, o R2BF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R2C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, R2CF-alquilo sustituido o no sustituido, R2CF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R2CF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R2CF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R2CF-arilo sustituido o no sustituido, o R2CF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R2C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R2CF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R2CF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R2CF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R2CF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R2CF-fenilo sustituido o no sustituido, o R2CF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido. R2B y R2C unidos al mismo átomo de nitrógeno se puede unir opcionalmente para formar un R2CF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido o R2CF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R2D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, R2DF-alquilo sustituido o no sustituido, R2DF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R2DF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R2DF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R2DF-arilo sustituido o no sustituido, o R2DF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R2D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R2DF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R2DF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R2DF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R2DF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R2DF-fenilo sustituido o no sustituido, o R2DF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R3A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R3AF-alquilo sustituido o no sustituido, R3AF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R3AF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R3AF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R3AF-arilo sustituido o no sustituido, o R3AF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R3A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R3AF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R3AF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R3AF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R3AF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R3AF-fenilo sustituido o no sustituido, o R3AF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R3B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCI3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R3BF-alquilo

sustituido o no sustituido, R3BF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R3BF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R3BF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R3BF-arilo sustituido o no sustituido, o R3BF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R3B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R3BF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R3BF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R3BF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R3BF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R3BF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R3BF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R3C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R3CF-alquilo

sustituido o no sustituido, R3CF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R3CF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R3CF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R3CF-arilo sustituido o no sustituido, o R3CF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R3C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R3CF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R3CF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R3CF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R3CF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R3CF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido. R3B y R3C unidos al mismo

átomo de nitrógeno se pueden unir opcionalmente para formar un R3CF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido

o no sustituido o R3CF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R3D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R3DF-alquilo

sustituido o no sustituido, R3DF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R3DF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R3DF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R3DF-arilo sustituido o no sustituido, o R3DF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R3D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R3DF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R3DF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R3DF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R3DF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R3DF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R4A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R4AF-alquilo

sustituido o no sustituido, R4AF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R4AF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R4AF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R4AF-arilo sustituido o no sustituido, o R4AF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R4A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R4AF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R4AF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R4AF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R4AF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R4AF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R4AF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R4B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R4BF-alquilo

sustituido o no sustituido, R4BF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R4BF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R4BF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R4BF-arilo sustituido o no sustituido, o R4BF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R4B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R4BF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R4BF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R4BF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R4BF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R4BF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R4BF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R4C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, R4CF-alquilo sustituido o no sustituido, R4CF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R4CF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R4CF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R4CF-arilo sustituido o no sustituido, o R4CF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R4C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCI3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R4CF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R4CF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R4CF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R4CF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R4CF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R4CF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido. R4B y R4C unidos al mismo

átomo de nitrógeno se pueden unir opcionalmente para formar un R4CF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido

o no sustituido o R4CF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R4D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, R4DF-alquilo

sustituido o no sustituido, R4DF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R4DF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R4DF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R4DF-arilo sustituido o no sustituido, o R4DF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R4D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R4DF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R4DF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R4DF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R4DF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R4DF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R4DF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R5A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R5AF-alquilo

sustituido o no sustituido, R5AF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R5AF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R5AF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R5AF-arilo sustituido o no sustituido, o R5AF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R5A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R5AF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R5AF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R5AF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R5AF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R5AF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R5AF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R5B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R5BF-alquilo

sustituido o no sustituido, R5BF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R5BF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R5BF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R5BF-arilo sustituido o no sustituido, o R5BF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R5B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R5BF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R5BF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R5BF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R5BF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R5BF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R5C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R5CF-alquilo

sustituido o no sustituido, R5CF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R5CF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R5CF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R5CF-arilo sustituido o no sustituido, o R5CF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R5C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R5CF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R5CF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R5CF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R5CF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R5CF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R5CF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido. R5B y R5C unidos al mismo

átomo de nitrógeno se pueden unir opcionalmente para formar un R5CF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido

o no sustituido o R5CF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R5D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NH NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R5DF-alquilo

sustituido o no sustituido, R5DF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R5DF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R5DF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R5DF-arilo sustituido o no sustituido, o R5DF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R5D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCI3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, Re

alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R5DF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R5DF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R5DF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R5DF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R5DF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R6A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R6AF sustituido o no sustituido, R6AF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R6AF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R6AF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R6AF-arilo sustituido o no sustituido, o R6AF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R6A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, R6AF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R6AF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R6AF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R6AF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R6AF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R6AF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R6B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R6BF sustituido o no sustituido, R6BF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R6BF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R6BF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R6BF-arilo sustituido o no sustituido, o R6BF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R6B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R6BF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R6BF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R6BF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R6BF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R6BF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R6BF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R6C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, R6CF sustituido o no sustituido, R6CF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R6CF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R6CF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R6CF-arilo sustituido o no sustituido, o R6CF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R6C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R6CF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R6CF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R6CF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R6CF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R6CF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R6CF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido. R6B y R6C unidos al mismo

átomo de nitrógeno se pueden unir opcionalmente para formar un R6CF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido

o no sustituido o R6CF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R6D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, R6DF sustituido o no sustituido, R6DF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R6DF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R6DF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R6DF-arilo sustituido o no sustituido, o R6DF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R6D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R6DF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R6DF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R6DF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R6DF-heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R6DF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R6DF-heteroarilo de 5 a 6 miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R7A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3,-CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO³H, -SO⁴H, -SO²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3,-OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, R7AF-alquilo

sustituido o no sustituido, R7AF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R7AF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R7AF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R7AF-arilo sustituido o no sustituido, o R7AF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R7A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R7AF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R7AF-heteroalquilo de 2 a 6 miembros sustituido o no sustituido, R7AF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R7AF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R7AF-fenilo sustituido o no sustituido, o R7AF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R7B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCI3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R7BF-alquilo sustituido o no sustituido, R7BF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R7BF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R7BF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R7BF-arilo sustituido o no sustituido, o R7BF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R7B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, R7BF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R7BF-heteroalquilo de ²a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R7BF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R7BF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R7BF-fenilo sustituido o no sustituido, o R7BF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R7C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO ³H, -SO ⁴H, -SO ²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R7CF-alquilo sustituido o no sustituido, R7CF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R7CF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R7CF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R7CF-arilo sustituido o no sustituido, o R7CF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R7C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R7CF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R7CF-heteroalquilo de ²a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R7CF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R7CF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R7CF-fenilo sustituido o no sustituido, o R7CF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido. R7B y R7C unidos al mismo átomo de nitrógeno se pueden unir opcionalmente para formar un R7CF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido o R7CF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R7D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO ³H, -SO ⁴H, -SO ²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R7DF-alquilo sustituido o no sustituido, R7DF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R7DF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R7DF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R7DF-arilo sustituido o no sustituido, o R7DF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R7D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R7DF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R7DF-heteroalquilo de ²a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R7DF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R7DF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R7DF-fenilo sustituido o no sustituido, o R7DF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R8A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO ³H, -SO ⁴H, -SO ²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, R8AF-alquilo sustituido o no sustituido, R8AF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R8AF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R8AF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R8AF-arilo sustituido o no sustituido, o R8AF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R8A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R8AF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R8AF-heteroalquilo de ²a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R8AF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R8AF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R8AF-fenilo sustituido o no sustituido, o R8AF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R8B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO ³H, -SO ⁴H, -SO ²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R8BF-alquilo sustituido o no sustituido, R8BF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R8BF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R8BF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R8BF-arilo sustituido o no sustituido, o R8BF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R8B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -O CCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R8BF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R8BF-heteroalquilo de ²a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R8BF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R8BF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R8BF-fenilo sustituido o no sustituido, o R8BF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R8C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCI3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R8CF-alquilo sustituido o no sustituido, R8CF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R8CF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R8CF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R8CF-arilo sustituido o no sustituido, o R8CF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R8C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -O CCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R8CF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R8CF-heteroalquilo de ²a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R8CF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R8CF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R8CF-fenilo sustituido o no sustituido, o R8CF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido. R8B y R8C unidos al mismo átomo de nitrógeno se pueden unir opcionalmente para formar un R8CF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido o R8CF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R8D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO ³H, -SO ⁴H, -SO ²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R8DF-alquilo sustituido o no sustituido, R8DF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R8DF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R8DF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R8DF-arilo sustituido o no sustituido, o R8DF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R8D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -O CCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R8DF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R8DF-heteroalquilo de ²a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R8DF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R8DF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R8DF-fenilo sustituido o no sustituido, o R8DF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R9A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO ³H, -SO ⁴H, -SO ²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R9AF-alquilo sustituido o no sustituido, R9AF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R9AF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R9AF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R9AF-arilo sustituido o no sustituido, o R9AF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R9A es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R e alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R9AF-heteroalquilo de ²a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R9AF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R9AF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R9AF-fenilo sustituido o no sustituido, o R9AF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R9B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO ³H, -SO ⁴H, -SO ²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, - OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R9BF-alquilo sustituido o no sustituido, R9BF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R9BF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R9BF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R9BF-arilo sustituido o no sustituido, o R9BF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R9B es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R9BF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R9BF-heteroalquilo de ²a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R9BF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R9BF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R9BF-fenilo sustituido o no sustituido, o R9BF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R9C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3,-CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO ³H, -SO ⁴H, -SO ²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3,-OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R9CF-alquilo sustituido o no sustituido, R9CF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R9CF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R9CF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R9CF-arilo sustituido o no sustituido, o R9CF-heteroarilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R9C es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCh, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R9CF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R9CF-heteroalquilo de ²a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R9CF-cicloalquilo C3-C6 sustituido o no sustituido, R9CF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R9CF-fenilo sustituido o no sustituido, o R9CF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido. R9B y R9C unidos al mismo átomo de nitrógeno se pueden unir opcionalmente para formar un R9CF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido o R9CF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido.

En las realizaciones, R9D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3,-CI3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH², -NO², -SH, -SO ³H, -SO ⁴H, -SO ²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCFa,-OCCla, -OCBr³, -OCI³, -OCHF2, -OCHCI2, -OCHBr2, -OCHI2, R9DF-alquilo

sustituido o no sustituido, R9BF-heteroalquilo sustituido o no sustituido, R9BF-cicloalquilo sustituido o no sustituido, R9BF-heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, R9DF-arilo sustituido o no sustituido, o R9DF-heteroarilo sustituido o no

sustituido. En las realizaciones, R9D es independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCI3, -CBr3, -CI3, -CN, -OH,

-NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, R9DF-alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, R9DF-heteroalquilo de ²a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R9DF-cicloalquilo

C3-C6 sustituido o no sustituido, R9BF-heterocicloalquilo de ³a ⁶miembros sustituido o no sustituido, R9DF-fenilo

sustituido o no sustituido, o R9DF-heteroarilo de ⁵a ⁶miembros sustituido o no sustituido.

R¹F ^{r 2}F ^{r 3}F ^{r 4}F ^{r 5}F ^r6F ^{r 7}F ^{r 8}F ^{r 9}F ^{r 1}AF ^{r 1}BF ^{r 1}CF RiDF ^{r 2}AF ^{r 2}BF ^{r 2}CF ^{r 2}DF ^{r 3}AF ^{r 3}BF ^{r 3}CF ^{r 3}DF ^{r 4}AF

^{r 4}BF ^{r 4}Cf ^{r 4}dF ^{r 5}AF ^{r 5}BF , ^{r 5}cF ^{r 5}Df ^{r 6}AF ^{r 6}BF ^{r 6}Cf ^{r 6}Df ^{r 7}Af ^{r 7}Bf ^{r 7}Cf ^{r 7}DF ^{r 8}aF ^{r 8}bF ^{r 8}cF ^{r 8}dF R⁹AF R⁹BF,

R9CF y R9DF son independientemente oxo, halógeno, -CF3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC=(O)NHNH2, -NHC=(O)NH2, -NHSO2H, -NHC=(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCHF2, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no

sustituido, arilo no sustituido, o heteroarilo no sustituido. En las realizaciones, R1f, R2F, R3F, R4F, R5F, R6F, R7F, R8F,

^{r 9}F ^{r 1}AF ^{r 1}BF ^{r 1}CF ^{r 1}DF ^{r 2}AF ^{r 2}BF ^{r 2}CF ^{r 2}DF ^{r 3}AF ^{r 3}BF ^{r 3}CF ^{r 3}DF ^{r 4}AF ^{r 4}BF ^{r 4}CF ^{r 4}DF ^{r 5}AF ^{r 5}BF ^{r 5}CF ^{r 5}DF

R6aF, R6BF, R6CF, R6DF, R7AF, R7BF, R7CF, R7DF, R8AF, R8BF, R8CF, R8DF, R9AF, R9BF, R9CF y R9DF s oxo, halógeno, -CF3, -CN, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC=(O)NHNH2, -NHC=(O)NH2, -NHSO2H, -NHC=(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCHF2, alquilo Ci-C⁶no

sustituido, heteroalquilo de ²a ⁶miembros no sustituido, cicloalquilo C3-C6 no sustituido, heterocicloalquilo de ³a ⁶

miembros no sustituido, fenilo no sustituido, o heteroarilo de ⁵a ⁶miembros no sustituido.

En algunas realizaciones, un compuesto como se describe en el presente documento puede incluir múltiples instancias

de R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, mi, m², m⁶, m⁷, m⁸, m⁹, ni, n², n⁶, n⁷, n⁸, n⁹, v i, v², v⁶, v⁷, v⁸, v⁹, y/u otras

variables. En dichas realizaciones, cada variable puede opcionalmente ser diferente y marcarse apropiadamente para

distinguir cada grupo para mayor claridad. Por ejemplo, cuando cada R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, m⁷, m⁸, m⁹, ni, n², n⁶, n⁷, n⁸, n⁹, v i, v², v⁶, v⁷, v⁸y/o v⁹es diferente, se pueden referir a, por ejemplo, como R¹¹

r 1.2 r 1.3 r 1.4 r 1.5 r 1.6 r 1.7 r 2.1 r 2.2 r 2.3 r 2.4 r 2.5 r 2.6 r 2.7 r 3.1 r 3.2 r 3.3 r 3.4 r 3.5 r 3.6 r 3.7 r 4.1 r 4.2 r 4.3 r 4.4 , R⁴

r 4.6 r 4.7 r 5.1 r 5.2 r 5.3 r 5.4 r 5.5 r 5.6 r 5.7 r 6.1 r 6.2 r 6.3 r 6.4 r 6.5 r 6.6 r 6.7 r 7.1 r 7.2 r 7.3 r 7.4 r 7.5 r 7.6 r 7.7 r 8.1 , R⁸²

R83, R84, R85, R86, R87, R91, R92, R9’3, R9’4, R95, R96, R97, m i1, m i2, m i3, ’m l4,’ m i5, m i6, m i7, m²1, m²2, m²3 ' m²⁴

m²5, m²6, m²7, m⁶1, m⁶2, m⁶3, m⁶4, m⁶5, m⁶6, m⁶7, m⁷1, m⁷2, m73, m⁷4, m⁷5, m⁷6, m⁷7, m⁸1, m⁸2, m⁸3, m⁸⁴m⁸⁵

m⁸6, m⁸7, m⁹1, m⁹2, m⁹3, m⁹4, m⁹5, m⁹6, m⁹7, n i1, n i2, n i3, n i4, n i5, n i6, n^{6 1}n i7, n²1, n⁶2, n⁶3, n⁶4, n⁶5, n⁶6, n⁶⁷n⁷1, n⁷2, n⁷3, n⁷4, n⁷5, n⁷6, n⁷⁷n⁸1, n⁸2, n⁸3, n⁸4, n⁸5, n⁸6, n⁸7, n⁹1, n⁹2, n⁹3, n⁹4, n⁹⁵n⁹⁶

n⁹7, v i 1, v i2, v i3, v i4, v i5, v i6, v i7, v²1, v²2, v²3, v²4, v²5, v²6, v²7, v⁶1, v⁶2, v⁶3, v⁶4, v⁶5, v⁶6, v⁶7, v i 1, v⁷2, v⁷³v⁷⁴

v⁷5, v⁷6, v⁷7, v⁸1, v⁸2, v⁸3, v⁸4, v⁸5, v⁸6, v⁸7, v⁹1, v⁹2, v⁹3, v⁹4, v⁹5, v⁹6, v⁹7, respectivamente, en los que la definición

de R¹se asume por R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17, la definición de R²se asume por R21, R22, R23, R24, R25, R²⁶

R27, la definición de R³se asume por R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, la definición de R⁴se asume por R41, R⁴

R43, R44, R45, R46, R47, la definición de R⁵se asume por R51, R52, R53, R54, R55, R56, R57, asume por R61, R62, R63, R64, R65, R66, R⁶⁷la definición de R⁷se asume por R71, R72, R73, R74, R75, R76, R⁷⁷la

definición de R⁸se asume por R81, R82, R⁸3, R⁸4, R⁸5, R86, R⁸7, la definición de R⁹se asume por R91, R⁹2, R⁹3, R94,

R95, R96, R97, la definición de m¹se asume por m i1, m i2, m i3, m i4, m i5, m i6, m i7, la definición de m²se asume por

m²1, m²2, m²3, m²4, m²5, m²6, m²7, la definición de m⁶se asume por m⁶1, m⁶2, m⁶3, m⁶4, m⁶5, m⁶6, m⁶6, la definición

de m⁷se asume por m⁷\ m⁷2, m⁷3, m⁷4, m⁷5, m⁷6, m⁷6, la definición de m⁸se asume por m⁸1, m⁸2, m⁸3, m⁸4, m⁸5,

m⁸6, m⁸7, la definición de m⁹se asume por m⁹1, m⁹2, m⁹3, m⁹4, m⁹5, m⁹6, m⁹7, la definición de n¹se asume por n i1,

n i2, n i3, n i4, n i5, n i6, n i7, la definición de n²se asume por n²1, n²2, n²3, n²4, n²5, n²6, n²7, se asume por n³\ n³2,

n³3, n³4, n³5, n³6, n³7, la definición de n⁴se asume por n⁴1, n⁴2, n⁴3, n⁴4, n⁴5, n⁴6, n⁴7, la definición de n⁵se asume

por n⁵\ n⁵2, n⁵3, n⁵4, n⁵5, n⁵6, n⁵7, la definición de n⁶se asume por n⁶1, n⁶2, n⁶3, n⁶4, n⁶5, n⁶6, n⁶7, la definición de

n⁷se asume por n /1, n⁷2, n⁷3, n⁷4, n⁷5, n⁷6, n⁷7, la definición de n⁸se asume por n⁸1, n⁸2, n⁸3, n⁸4, n⁸5, n⁸6, n⁸7, la

definición de n⁹se asume por n⁹1, n⁹2, n⁹3, n⁹4, n⁹5, n⁹6, n⁹7, la definición de v¹se asume por v i 1, v i2, v i3, v i4, v i5,

v i6, v i7, la definición de v²se asume por v²1, v²2, v²3, v²4, v²5, v²6, v²7, la definición de v³se asume por v³1, v³2, v³3,

v³4, v³5, v³6, v³7, la definición de v⁴se asume por v⁴1, v⁴2, v⁴3, v⁴4, v⁴5, v⁴6, v⁴7, la definición de v⁵se asume por v⁵\

v⁵2, v⁵3, v⁵4, v⁵5, ^v5⁶, ^v5⁷, la definición de v⁶se asume por v⁶1, v⁶2, v⁶3, v⁶4, v⁶5, v⁶6, v⁶7, la definición de v⁷se asume

por v⁷\ v⁷2, v⁷3, v⁷4, v⁷5, v⁷6, v⁷7, la definición de v⁸se asume por v⁸1, v⁸2, v⁸3, v⁸4, v⁸5, v⁸6, v⁸⁷y la definición de v⁹

se asume por v⁹1, v⁹2, v⁹3, v⁹4, v⁹5, v⁹6, v⁹7. Las variables utilizadas dentro de una definición de R1, R2, R3, R4, R5,

R6, R7, R8, R9, m1, m2, m3, m4, m5, m6, m7, m8, m9, n1, n2, n3, n4, n5, n6, n7, n8, n9, v1, v2, v3, v4, v5, v6, v7, v8, v⁹y/o otras

variables que aparecen en múltiples instancias y son diferentes se pueden marcar apropiadamente de manera similar

para distinguir cada grupo para una mayor claridad.

En las realizaciones, R¹y R6, R⁶y R7, R¹y R9, o R8, y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se

adhieren, cicloalquilo (por ejemplo, C3-C6) sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo (por ejemplo, de ³a ⁶

miembros) sustituido o no sustituido, arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o heteroarilo (por ejemplo, de

⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹y R6, R⁶y R7, R¹y R9, o R8, y R⁹se unen al

heterocicloalquilo (por ejemplo, de ³a ⁶miembros) sustituido o no sustituido, arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no

sustituido, o heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹y R6, R⁶

y R7, R¹y R9, o R8, y R⁹se unen a arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o heteroarilo (por ejemplo, de ⁵

a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹y R6, R⁶y R7, R¹y R9, o R8, y R⁹se unen al heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹y R6, R⁶y R7, R¹y R9, o R⁸y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un pirazolilo sustituido o no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo. En las realizaciones, R¹y R6, R⁶y R7, R¹y R9, o R⁸y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, pirazolilo no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo.

En las realizaciones, R¹y R⁶se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R1E-cicloalquilo (por ejemplo, C3-C6) sustituido o no sustituido, R1E-heterocicloalquilo (por ejemplo, de ³a ⁶miembros) sustituido o no sustituido, R1E-arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o R1E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹y R⁶se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R1E-heterocicloalquilo (por ejemplo, de ³a ⁶miembros) sustituido o no sustituido, R1E-arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o R1E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹y R⁶se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R1E-arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o R1E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹y R⁶se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R1E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹y R⁶se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R1E-pirazolilo sustituido o no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo. En las realizaciones, R¹y R⁶se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, pirazolilo no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo. En las

En las realizaciones, R⁶y R⁷se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R6E-cidoalquilo (por ejemplo, C3-C6) sustituido o no sustituido, R6E-heterocicloalquilo (por ejemplo, de ³a ⁶miembros) sustituido o no sustituido, R6E-arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o R6E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁶y R⁷se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R6E-heterocicloalquilo (por ejemplo, de ³a ⁶miembros) sustituido o no sustituido, R6E-arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o R6E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁶y R⁷se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R6E-arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o R6E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁶y R⁷se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R6E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁶y R⁷se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R6E-pirazolilo sustituido o no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo. En las realizaciones, R⁶y R⁷se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, pirazolilo no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo. En las

En las realizaciones, el compuesto se representa por la fórmula IB2A, IC2A, IB2A’, IC2A’, ID2A, o IE2A.

En las realizaciones, R¹y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R9E-cicloalquilo (por ejemplo, C3-C6) sustituido o no sustituido, R9E-heterocicloalquilo (por ejemplo, de ³a ⁶miembros) sustituido o no sustituido, R9E-arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o R9E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R9E-heterocicloalquilo (por ejemplo, de ³a ⁶miembros) sustituido o no sustituido, R9E-arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o R9E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R9E-arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o R9E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R9E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R9E-pirazolilo sustituido o no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo. En las realizaciones, R¹y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, pirazolilo no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo. En las realizaciones, el compuesto se representa por la fórmula IB³, IC³, ID³, o IE³(IC³)

En las realizaciones, el compuesto se representa por la fórmula

En las realizaciones, R⁸y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R8E-cicloalquilo (por ejemplo, C3-C6) sustituido o no sustituido, R8E-heterocicloalquilo (por ejemplo, de ³a ⁶miembros) sustituido o no sustituido, R8E-arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o R8E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁸y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R8E-heterocicloalquilo (por ejemplo, de ³a ⁶miembros) sustituido o no sustituido, R8E-arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o R8E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁸y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R8E-arilo (por ejemplo, fenilo) sustituido o no sustituido, o R8E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁸y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R8E-heteroarilo (por ejemplo, de ⁵a ⁶miembros) sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁸y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, R8E-pirazolilo sustituido o no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo. En las realizaciones, R⁸y R⁹se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, pirazolilo no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo. En las realizaciones, el compuesto se representa por la fórmula IB⁴, IC⁴, ID⁴, o IE⁴: (IC⁴)

En las realizaciones, el compuesto se representa por la fórmula IB4A, IC4A, IB4A’, IC4A’, ID4, o IE4:

R1, R2, R3, R4, R5, R7, R8, y/o R9 son como se describe en el presente documento. En las realizaciones, R2 es haloalquilo C2-C4, R3 y R4 son independientemente hidrógeno, metilo o etilo; R5, R7, R8 y R9 son hidrógeno. En las realizaciones, R²es C2-C6 alquilo sustituido con al menos un flúor; R³y R⁴son independientemente metilo o etilo; R5, R7, R⁸y R⁹son hidrógeno. En las realizaciones, R²es -CH(CF3)2 o - c H2(CF2)2H.

En las realizaciones, el compuesto no es

En las realizaciones, el compuesto es:

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En las realizaciones, X es -O-. En las realizaciones, R²es haloalquilo C2-C4. En las realizaciones, R³es hidrógeno. En las realizaciones, R⁴es -CH3 o -CH2CH3. En las realizaciones, R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son hidrógeno. En las realizaciones, R²se sustituye con al menos cuatro átomos de flúor. En las realizaciones, R²se sustituye con cuatro átomos de flúor. En las realizaciones, R²es -CH2(CF2)2H. En las realizaciones, X es -O-; R²es - CH2(Cf 2)2H; R³es hidrógeno; R⁴es -CH3 o -CH2CH3; y R¹, hidrógeno. En las realizaciones, el compuesto es

En las realizaciones, el compuesto es un compuesto descrito en el presente documento (por ejemplo, en un aspecto, realización, ejemplo, tabla, figura, esquema, apéndice o reivindicación).

II. Composiciones farmacéuticas

En el presente documento también se proporcionan formulaciones farmacéuticas. En las realizaciones, las formulaciones farmacéuticas incluyen los compuestos descritos anteriormente (que incluyen todas las realizaciones de los mismos) (por ejemplo, fórmulas I, IA, IB¹, IC¹, ID¹, IE¹, IB¹A, IC¹A, IB¹A', IC¹A', ID¹A, IE¹A, IB², IC², ID², IE², IB²A, IC²A, B²A', IC²A', ID²A, IE²A, IB³A, IC³A, IB³A', IC³A', ID³A, IE³A, IB⁴A, IC⁴A, IB⁴A', IC⁴A', ID⁴A y IE⁴A) y un excipiente farmacéuticamente aceptable. En un aspecto es una composición farmacéutica que incluye un compuesto descrito en el presente documento y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En las realizaciones, la composición farmacéutica comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable, y un compuesto de la Fórmula I:

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

X, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁷, R⁸, y R⁹son como se describe en el presente documento.

En las realizaciones, X es -O- o -S-. En las realizaciones, X es NH. En las realizaciones, X es -O-En la realización, R²es -C X 213, -(CH2)n2 CX213 o haloalquilo C2-C4. En las realizaciones, R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, o alquilo C2-C6 sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R1D, -C(O)OR¹d, -O CX¹^, -OCHX¹^ o alquilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -NO2, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -OCX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3,-CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -O CX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno,-CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -O CX813, -OCHX⁸¹o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R1D, R6D, R7D, R8D y R9D son independientemente hidrógeno o metilo. En las realizaciones, R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno.

En las realizaciones, el compuesto es de la fórmula IA:

, en el que R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸, y R⁹son como se describe en el presente documento.

En las realizaciones, R²es -C X 213, -(CH2)n2CX213, o haloalquilo C2-C4. En las realizaciones, R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno, -CX ¹⁴3, -CH X¹⁴2, -CH2X11, -CN, -NO2, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, - OCX¹^, -OCHX¹^ o alquilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613,-CHX612, -CH2X61, -CN, -NO2, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -O CX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, -C X 813,-CHX812, -CH2X81, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -O CX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -C^hX912, -CH2X91, -CN, -NO2, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido. En las realizaciones, R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R³y R⁴alquilo sustituido o no sustituido; R⁵son independientemente hidrógeno; R⁶es hidrógeno, halógeno, -CX613, -CHX612, -CH2X61, -CN,, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O^cX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, - OCX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, -C X 813, -CHX812,-CH2X81, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -O CX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN,, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido; en el que R1D, R6D, R7D, R8D y R9D son independientemente hidrógeno o metilo, y X ¹¹, X ²¹, X ⁶¹, X ⁷¹, X ⁸¹y X ⁹¹son independientemente -F. En las realizaciones, R³y R⁴son independientemente metilo o etilo. En las realizaciones, R¹es hidrógeno, halógeno,-NO2, o -COOH; R⁵es hidrógeno; R⁶es hidrógeno, halógeno -NO2, o -COOH; R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno; y R⁹es hidrógeno, halógeno NO2, o -COOH. En las realizaciones, en las que R³y R⁴son independientemente hidrógeno, metilo o etilo. En las realizaciones, en las que R²es alquilo C2-C4 sustituido con al menos un flúor. En las realizaciones, R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno.

En las realizaciones, R¹y R⁶se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un pirazolilo sustituido o no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo; R²es haloalquilo C2-C4; R³y R⁴son independientemente hidrógeno, metilo o etilo. En las realizaciones, el compuesto se representa con la Fórmula IB, IC, ID, o IE:

. En las realizaciones, R⁵, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno. En las realizaciones, R²es -CH(CF3)2 o -CH²(CF²)²H.

En las realizaciones, la composición farmacéutica comprende un compuesto seleccionado de



En las realizaciones de las composiciones farmacéuticas, el compuesto, o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se incluyen en una cantidad terapéuticamente eficaz.

¹. Formulaciones

La composición farmacéutica se puede preparar y administrar en una amplia variedad de formulaciones de dosificación. Los compuestos descritos se pueden administrar por vía oral, rectal o mediante inyección (por ejemplo, por vía intravenosa, intramuscular, intracutánea, subcutánea, intraduodenal o intraperitoneal).

Para preparar composiciones farmacéuticas a partir de los compuestos descritos en el presente documento, los vehículos farmacéuticamente aceptables pueden ser sólidos o líquidos. Las preparaciones en forma sólida incluyen polvos, comprimidos, píldoras, cápsulas, sellos, supositorios y gránulos dispersables. Un portador sólido puede ser una o más sustancias que también pueden actuar como diluyentes, agentes aromatizantes, aglutinantes, conservantes, agentes de desintegración de comprimidos o material de encapsulación.

En los polvos, el portador puede ser un sólido finamente dividido en una mezcla con el componente activo finamente dividido. En los comprimidos, el componente activo se puede mezclar con el portador que tiene las propiedades aglutinantes necesarias en proporciones adecuadas y compactarse en la forma y tamaño deseados.

Los polvos y comprimidos contienen preferiblemente desde ⁵% hasta ⁷⁰% del compuesto activo. Los portadores adecuados son carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azúcar, lactosa, pectina, dextrina, almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, cera de bajo punto de fusión, manteca de cacao y similares. El término “preparación” pretende incluir la formulación del compuesto activo con material de encapsulación como un portador que proporciona una cápsula en la que el componente activo con o sin otros portadores está rodeado por un portador, que por lo tanto está en asociación con el mismo. Del mismo modo, se incluyen sellos y pastillas. Los comprimidos, polvos, cápsulas, píldoras, sellos y pastillas se pueden utilizar como formas de dosificación sólidas adecuadas para la administración oral.

Para preparar supositorios, primero se funde una cera de bajo punto de fusión, tal como una mezcla de glicéridos de ácidos grasos o manteca de cacao, y el componente activo se dispersa homogéneamente en la misma, como mediante agitación. A continuación, la mezcla homogénea fundida se vierte en moldes de tamaño conveniente, se deja enfriar y, por lo tanto, se solidifica.

Las preparaciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones, por ejemplo, agua o soluciones de agua/propilenglicol. Para inyección parenteral, las preparaciones líquidas se pueden formular en solución en solución acuosa de polietilenglicol.

Las soluciones acuosas adecuadas para uso oral se pueden preparar al disolver el componente activo en agua y agregar colorantes, sabores, estabilizantes y agentes espesantes adecuados según se desee. Las suspensiones acuosas adecuadas para uso oral se pueden elaborar al dispersar el componente activo finamente dividido en agua con material viscoso, tal como gomas naturales o sintéticas, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y otros agentes de suspensión bien conocidos.

También se incluyen preparaciones en forma sólida que están destinadas a convertirse, poco antes de uso, en preparaciones en forma líquida para administración oral. Dichas formas líquidas incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Estas preparaciones pueden contener, además del componente activo, colorantes, sabores, estabilizadores, tampones, edulcorantes artificiales y naturales, dispersantes, espesantes, agentes solubilizantes y similares.

En las realizaciones, la preparación en forma líquida o la preparación en forma sólida que comprende los compuestos como se describe en el presente documento puede no incluir DMSO en las formulaciones. En las realizaciones, la preparación en forma líquida puede no incluir un agente solvatante tal como DMSO y el compuesto incluido en la preparación puede mantener las mismas o sustancialmente las mismas cantidades de compuestos disueltos o suspendidos, por ejemplo, mayor de aproximadamente ⁵⁰% en peso, ⁵⁵% en peso, ⁶⁰% en peso, ⁶⁵% en peso, ⁷⁰% en peso, ⁷⁵% en peso, ⁸⁰% en peso, ⁸⁵% en peso, ⁹⁰% en peso, ⁹⁵% en peso o ⁹⁹% en peso de los compuestos disueltos o suspendidos que se preparan en forma líquida preparación que incluye DMSO. En algunas realizaciones, la preparación en forma líquida o la preparación en forma sólida que no incluye DMSO puede exhibir la misma o sustancialmente la misma penetración del compuesto a través del moco, la membrana mucosa o la piel, por ejemplo, mayor de aproximadamente el ⁵⁰% , ⁵⁵% , ⁶⁰% , ⁶⁵% , ⁷⁰% , ⁷⁵% , ⁸⁰% , ⁸⁵% , ⁹⁰% , ⁹⁵% o ⁹⁹% de penetración de los compuestos que se preparan en la formulación que incluye DMSO, cuando se administra por vía tópica, de transmucosa o transdérmica.

La preparación farmacéutica está preferiblemente en forma de dosificación unitaria. En dicha forma, la preparación se subdivide en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas del componente activo. La forma de dosificación unitaria puede ser una preparación empacada, el empaque contiene cantidades discretas de preparación, tales como comprimidos, cápsulas y polvos empacados en viales o ampollas. También, la forma de dosificación unitaria puede ser una cápsula, comprimido, sello o pastilla en si misma, o puede ser el número apropiado de cualquiera de estos en forma empacada.

La cantidad de componente activo en una preparación de dosis unitaria se puede variar o ajustar de ^0.1mg a ¹⁰⁰⁰⁰mg de acuerdo con la aplicación particular y la potencia del componente activo. La composición, si se desea, también puede contener otros agentes terapéuticos compatibles.

Algunos compuestos pueden tener una solubilidad limitada en agua y, por lo tanto, pueden requerir un tensioactivo u otro cosolvente apropiado en la composición. Dichos cosolventes incluyen: Polisorbato ^{2 0}, ⁶⁰y ^{8 0}; Pluronic F-^{6 8}, F-⁸⁴y P -^{1 03}; ciclodextrina; y aceite de ricino polioxil ^{3 5}. Dichos cosolventes se emplean normalmente a un nivel entre aproximadamente el ^0.01% y aproximadamente el ²% en peso. Puede ser deseable una viscosidad mayor que aquella de las soluciones acuosas simples para disminuir la variabilidad en dispensar las formulaciones, para disminuir la separación física de los componentes de una suspensión o emulsión de la formulación y/o para mejorar la formulación. Dichos agentes formadores de viscosidad incluyen, por ejemplo, alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, sulfato de condroitina y sales de los mismos, ácido hialurónico y sales de los mismos, y combinaciones de los anteriores. Dichos agentes se emplean normalmente a un nivel entre aproximadamente ^0.01% y aproximadamente ²% en peso. Las composiciones farmacéuticas pueden incluir adicionalmente componentes para proporcionar liberación sostenida y/o comodidad. Dichos componentes incluyen polímeros mucomiméticos aniónicos de alto peso molecular, polisacáridos gelificantes y sustratos portadores de fármacos finamente divididos. Estos componentes se discuten con mayor detalle en las patentes de los Estados Unidos Nos. ⁴,^{9 1 1},^{9 2 0}; ⁵,^{4 0 3},^{8 4 1}; ⁵,^{2 1 2},^{16 2}; y ⁴,^{8 6 1},^{7 6 0}.

La composición farmacéutica puede estar destinada para uso intravenoso. El excipiente farmacéuticamente aceptable puede incluir tampones para ajustar el pH a un rango deseable para uso intravenoso. Se conocen muchos tampones que incluyen sales de ácidos inorgánicos tales como fosfato, borato y sulfato.

². Dosificaciones efectivas

La composición farmacéutica puede incluir composiciones en las que el ingrediente activo está contenido en una cantidad terapéuticamente eficaz, es decir, en una cantidad eficaz para lograr su propósito previsto. La cantidad real efectiva para una aplicación en particular dependerá, entre otras cosas, de la afección que se esté tratando.

La dosificación y la frecuencia (dosis únicas o múltiples) de los compuestos administrados pueden variar dependiendo de una variedad de factores, que incluye la ruta de administración; tamaño, edad, sexo, salud, peso corporal, índice de masa corporal y dieta del receptor; naturaleza y extensión de los síntomas de la enfermedad que se está tratando; presencia de otras enfermedades u otros problemas relacionados con la salud; tipo de tratamiento concurrente; y complicaciones de cualquier enfermedad o régimen de tratamiento. Se pueden utilizar otros regímenes o agentes terapéuticos junto con los métodos y compuestos divulgados en el presente documento.

Las cantidades terapéuticamente eficaces para uso en humanos se pueden determinar a partir de modelos animales. Por ejemplo, se puede formular una dosis para humanos para lograr una concentración que se haya encontrado que es efectiva en animales. La dosificación en humanos se puede ajustar al monitorizar la respuesta del estreñimiento u ojo seco al tratamiento y ajustar la dosificación hacia arriba o hacia abajo, como se describió anteriormente.

Las dosificaciones pueden variar dependiendo de los requisitos del sujeto y del compuesto que se emplee. La dosis administrada a un sujeto, en el contexto de las composiciones farmacéuticas presentadas en el presente documento, debería ser suficiente para lograr una respuesta terapéutica beneficiosa en el sujeto a lo largo del tiempo. El tamaño de la dosis también estará determinado por la existencia, la naturaleza y el grado de cualquier efecto secundario adverso. Generalmente, el tratamiento se inicia con dosificaciones más pequeñas, que son inferiores a la dosis óptima del compuesto. A partir de entonces, la dosificación se aumenta en pequeños incrementos hasta que se alcanza el efecto óptimo según las circunstancias.

Las cantidades de dosificación y los intervalos se pueden ajustar individualmente para proporcionar niveles de los compuestos administrados efectivos para la indicación clínica particular que se está tratando. Esto proporcionará un régimen terapéutico acorde con la gravedad del estado de enfermedad del individuo.

Utilizando las enseñanzas proporcionadas en el presente documento, se puede planificar un régimen de tratamiento profiláctico o terapéutico efectivo que no cause toxicidad sustancial y, sin embargo, sea completamente efectivo para tratar los síntomas clínicos demostrados por el paciente particular. Esta planificación debe implicar la elección cuidadosa del compuesto activo al considerar factores como la potencia del compuesto, la biodisponibilidad relativa, el peso corporal del paciente, la presencia y la gravedad de los efectos secundarios adversos, el modo de administración preferido y el perfil de toxicidad del agente seleccionado.

³. Toxicidad

La relación entre toxicidad y efecto terapéutico para un compuesto particular es su índice terapéutico y se puede expresar como la relación entre LD50 (la cantidad de compuesto letal en el ⁵⁰% de la población) y ED50 (la cantidad de compuesto eficaz en ⁵⁰% de la población). Se prefieren los compuestos que exhiben altos índices terapéuticos.

Los datos del índice terapéutico obtenidos a partir de ensayos de cultivos celulares y/o estudios en animales se pueden utilizar para formular un rango de dosificaciones para uso en humanos. La dosificación de dichos compuestos se encuentra preferiblemente dentro de un rango de concentraciones plasmáticas que incluyen la ED50 con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este rango dependiendo de la forma de dosificación empleada y la ruta de administración utilizada. Véase, por ejemplo, Fingl et al., In: THE PHARMACOLOGICAL BASIS

OF THERAPEUTICS, Ch.¹, p.¹, ^{19 75}. La formulación exacta, ruta de administración y dosificación puede ser elegida por el médico individual en vista de la afección paciente y el método particular en el que se utiliza el compuesto.

Cuando se necesita o se desea la aplicación parenteral, las mezclas particularmente adecuadas para los compuestos incluidos en la composición farmacéutica pueden ser soluciones estériles inyectables, soluciones oleosas o acuosas, así como suspensiones, emulsiones o implantes, que incluyen supositorios. En particular, los portadores para la administración parenteral incluyen soluciones acuosas de dextrosa, solución salina, agua pura, etanol, glicerol, propilenglicol, aceite de maní, aceite de sésamo, polímeros de bloques de polioxietileno y similares. Las ampollas son dosificaciones unitarias convenientes. Las mezclas farmacéuticas adecuadas para uso en las composiciones farmacéuticas presentadas en el presente documento pueden incluir aquellas descritas, por ejemplo, en Pharmaceutical Sciences (¹⁷a ed., Mack Pub. Co., Easton, PA) y el documento WO ⁹⁶/^{0 5 3 0 9}.

¹⁰¹¹¹. Métodos de activación

En el presente documento se proporcionan adicionalmente métodos para activar un Regulador de Conductancia de Transmembrana de Fibrosis Quística (CFTR). El método incluye poner en contacto el CFTR con una cantidad eficaz de un compuesto descrito en el presente documento, activando de esta manera el CFTR. En un aspecto, el método

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. X, R1, R2, R3,

R7, R⁸y R⁹documento.

En las realizaciones, el método incluye poner en contacto CFTR con una cantidad eficaz del compuesto como se describe en el presente documento activando de esta manera el CFTR. Se puede realizar el contacto in vitro. Se puede realizar el contacto in vivo.

IV. Métodos de tratamiento

En el presente documento se proporcionan adicionalmente métodos de tratar una enfermedad o trastorno en un sujeto en necesidad del mismo al administrar a dicho sujeto una cantidad eficaz de un compuesto como se describe en el presente documento (por ejemplo, un com uesto de la fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. X, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹se describen en el presente documento.

En un aspecto, es un método para tratar el estreñimiento en un sujeto en necesidad del mismo, el método incluye administrar al sujeto una cantidad eficaz del compuesto descrito como se describe en el presente documento (por ejemplo, un compuesto de la fórmula I). En otro aspecto, es un método para tratar un trastorno del ojo seco en un sujeto en necesidad del mismo, el método incluye administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto como se describe en el presente documento (por ejemplo, un compuesto de la fórmula I). En aún otro aspecto, es un método para aumentar la lagrimación en un sujeto en necesidad del mismo, el método incluye administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto como se describe en el presente documento (por ejemplo, un compuesto de la fórmula I).

En un aspecto, se proporciona un método para tratar una enfermedad colestásica del hígado en un sujeto en necesidad del mismo, que incluye administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto como se describe en el presente documento (por ejemplo, un compuesto de la fórmula I). En otro aspecto, se proporciona un método para tratar una enfermedad o trastorno pulmonar en un sujeto en necesidad del mismo, que incluye administrar al sujeto una cantidad eficaz de cómo se describe en el presente documento (por ejemplo, un compuesto de la fórmula I). En las realizaciones, la enfermedad o trastorno pulmonar es enfermedad pulmonar obstructiva crónica (por ejemplo, bronquitis, asma, disfunción pulmonar inducida por el humo del cigarrillo).

Otros aspectos

En el presente documento, en otro aspecto, se proporcionan composiciones y métodos para tratar una enfermedad. Las siguientes definiciones y realizaciones se aplican solo a los compuestos de fórmula (pI), esta sección (es decir, la sección V) y las realizaciones P ¹a P²⁸enumeradas en el presente documento.

Para los fines de esta sección, el término “alquilo” se refiere e incluye estructuras de hidrocarburos univalentes lineales o ramificadas y combinaciones de las mismas, que pueden ser completamente saturadas, mono o poliinsaturadas, que tienen el número de átomos de carbono designado (es decir, C1-C10 significa de uno a diez carbonos). Los grupos alquilo particulares son aquellos que tienen de ¹a ²⁰átomos de carbono (un “alquilo C1-C20”). Los grupos alquilo más particulares son aquellos que tienen de ¹a ⁸átomos de carbono (un “alquilo C1-C8”), ³a ⁸átomos de carbono (un “alquilo C3-C8”), ¹a ⁶átomos de carbono (un “alquilo C1-C6”), ¹a ⁵átomos de carbono (un “alquilo C1-C5”), o ¹a ⁴átomos de carbono (un “alquilo C1-C4”). Ejemplos de radicales de hidrocarburo saturado incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, homólogos e isómeros de, por ejemplo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, y similares. Un grupo alquilo insaturado es uno que tiene uno o más enlaces dobles o enlaces triples. Ejemplos de grupos alquilo insaturados incluyen, pero no se limitan a, vinilo, ²-propenilo, crotilo, ²-isopentenilo, ²-(butadienilo), ²,⁴-pentadienilo, ³-(¹,⁴-pentadienilo), etinilo, ¹- y ³-propinilo, ³-butinilo, y los homólogos y isómeros superiores. Ejemplos de alquilo C1-C4 saturado incluyen metilo (CH3), etilo (C2H5), propilo (C3H7) y butilo (C4H9). Ejemplos de alquilo C1-C6 saturado incluyen metilo (CH3), etilo (C2H5), propilo (C3H7), butilo (C4H9), pentilo (C5H11) y hexilo (C6H13).

Un grupo alquilo puede estar sustituido (es decir, uno o más átomos de hidrógeno se reemplazan con radicales univalentes o divalentes) con uno más sustituyentes, tales como los radicales descritos en el presente documento, por ejemplo, flúor, cloro, bromo, yodo, hidroxilo, alcoxi, tio, amino, acilamino, alcoxicarbonilamido, carboxilo, acilo, alcoxicarbonilo, sulfonilo, cicloalquilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo, y otros grupos funcionales conocidos en la técnica. Un “perfluoroalquilo” se refiere a un grupo alquilo en donde cada átomo de hidrógeno se reemplaza con un átomo de flúor. Ejemplos de perfluoroalquilo C1-C6 saturado incluyen trifluorometilo (CF3), pentafluoroetilo (C2F5), heptafluoropropilo (C3F7), nonafluorobutilo (C4F9), undecafluoropentilo (C5F11) y tridecafluorohexilo (C6F13).

Para los fines de esta sección, el término “cicloalquilo” se refiere e incluye estructuras de hidrocarburos univalentes cíclicos, que pueden ser completamente saturados, mono o poliinsaturados, que tienen el número de átomos de carbono designado (es decir, C1-C10 significa uno a diez carbonos). El cicloalquilo puede consistir en un anillo, tal como ciclohexilo, o en múltiples anillos, tales como adamantilo, pero excluye los grupos arilo. Un cicloalquilo que comprende más de un anillo puede ser fusionado, espiro o puenteado, o combinaciones de los mismos. Un cicloalquilo preferido es un hidrocarburo cíclico que tiene de ³a ¹³átomos de carbono anulares. Un cicloalquilo más preferido es un hidrocarburo cíclico que tiene de ³a ⁸átomos de carbono anulares (un “cicloalquilo C3-C8”). Ejemplos de cicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ¹-ciclohexenilo, ³-ciclohexenilo, cicloheptilo, norbornilo, y similares.

Para los fines de esta sección, el término “heterociclo” o “heterociclilo” se refiere a un grupo no aromático saturado o insaturado que tiene de ¹a ¹⁰átomos de carbono anulares y de ¹a ⁴heteroátomos anulares, tales como nitrógeno, azufre u oxígeno, y similares, en los que los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados, y los átomos de nitrógeno están opcionalmente cuaternizados. Un grupo heterociclilo puede tener un solo anillo o múltiples anillos fusionados, pero excluye los grupos heteroarilo. Un heterociclo que comprende más de un anillo puede ser fusionado, espiro o puenteado, o cualquier combinación de los mismos. En los sistemas de anillo fusionado, uno o más de los anillos fusionados pueden ser arilo o heteroarilo. Ejemplos de grupos heterociclilo incluyen, pero no se limitan a, tetrahidropiranilo, dihidropiranilo, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, tiazolinilo, tiazolidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, ²,³-dihidrobenzo[b]tiofen-²-ilo, ⁴-amino-²-oxopirimidin-¹(²H)-ilo, y similares.

Para los fines de esta sección, el término “arilo” se refiere e incluye sustituyentes de hidrocarburos aromáticos poliinsaturados. El arilo puede contener anillos fusionados adicionales (por ejemplo, de ¹a ³anillos), que incluyen adicionalmente anillos de arilo, heteroarilo, cicloalquilo y/o heterociclilo fusionados. En una variación, el grupo arilo contiene de ⁶a ¹⁴átomos de carbono anulares. Ejemplos de grupos arilo incluyen, pero no se limitan a, fenilo, naftilo, bifenilo y similares.

Para los fines de esta sección, el término “heteroarilo” se refiere e incluye grupos cíclicos aromáticos insaturados que tienen de ¹a ¹⁰átomos de carbono anulares y al menos un heteroátomo anular, que incluye, pero no se limita a, heteroátomos como nitrógeno, oxígeno y azufre., en el que los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados y los átomos de nitrógeno están opcionalmente cuaternizados. Un grupo heteroarilo se puede adherir al resto de la molécula en un carbono anular o en un heteroátomo anular. El heteroarilo puede contener anillos fusionados adicionales (por ejemplo, de ¹a ³anillos), que incluyen adicionalmente anillos arilo, heteroarilo, cicloalquilo y/o heterociclilo fusionados. Ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, pero no se limitan a, piridilo, pirimidilo, tiofenilo, furanilo, tiazolilo y similares.

Los grupos cicloalquilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo a los que se hace referencia en esta sección también pueden estar sustituidos con uno o más sustituyentes, tales como los radicales detallados en el presente documento, por ejemplo, fluoro, cloro, bromo, yodo, hidroxilo, alcoxi, tio, amino, acilamino, alcoxicarbonilamido, carboxilo, acilo, alcoxicarbonilo, sulfonilo, alquilo, cicloalquilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo, y otros grupos funcionales conocidos en la técnica.

Para los fines de esta sección, el término “portador farmacéuticamente aceptable” se refiere a un ingrediente en una formulación farmacéutica, diferente de un ingrediente activo, que no sea tóxico para un sujeto. Un portador farmacéuticamente aceptable incluye, pero no se limita a, un tampón, excipiente, estabilizador o conservante, tal como aquellos conocidos en la técnica, por ejemplo, descritos en Remington's Pharmaceutical Sciences ¹⁶th edition, Osol, A. Ed. (^{1 98 0}).

Como se utiliza en esta sección, “tratamiento” o “tratar” es un enfoque para obtener resultados beneficiosos o deseados que incluyen y preferiblemente resultados clínicos. Por ejemplo, los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero no se limitan a, uno o más de los siguientes: disminuir los síntomas resultantes de la enfermedad, aumentar la calidad de vida de quienes padecen la enfermedad, disminuir la dosis de otros medicamentos necesarios para tratar la enfermedad, retrasar la progresión de la enfermedad y/o prolongar la supervivencia de los individuos.

Como se utiliza en esta sección, la frase “retrasar el desarrollo de una enfermedad” significa diferir, dificultar, ralentizar, retardar, estabilizar y/o posponer el desarrollo de la enfermedad (tal como estreñimiento, ojo seco, enfermedad o trastorno pulmonar, enfermedad pulmonar o enfermedad hepática). Este retraso puede variar en la duración del tiempo, dependiendo de la historia de la enfermedad y/o del individuo que se está tratando. Como es evidente para un experto en la técnica, un retraso suficiente o significativo puede, en efecto, abarcar la prevención, en el sentido de que el individuo no desarrolle la enfermedad.

Como se utiliza en esta sección, una “dosificación eficaz” o “cantidad eficaz” de fármaco, compuesto o composición farmacéutica es una cantidad suficiente para lograr resultados beneficiosos o deseados. Para uso profiláctico, los resultados beneficiosos o deseados incluyen resultados tal como eliminar o reducir el riesgo, disminuir la gravedad o retrasar la aparición de la enfermedad, que incluye los síntomas bioquímicos, histológicos y/o conductuales de la enfermedad, sus complicaciones y los fenotipos patológicos intermedios que se presentan durante el desarrollo de la enfermedad. Para uso terapéutico, los resultados beneficiosos o deseados incluyen resultados clínicos tales como disminuir uno o más síntomas resultantes de la enfermedad, aumentar la calidad de vida de quienes padecen la enfermedad, disminuir la dosis de otros medicamentos necesarios para tratar la enfermedad, mejorar el efecto de otra medicación tal como a través de la focalización, retrasar la progresión de la enfermedad y/o prolongar la supervivencia. Una dosificación eficaz se puede administrar en una o más administraciones. Para los fines de esta sección, una dosificación eficaz de un fármaco, compuesto o composición farmacéutica es una cantidad suficiente para lograr un tratamiento profiláctico o terapéutico, ya sea directa o indirectamente. Como se entiende en el contexto clínico, una dosificación eficaz de un fármaco, compuesto o composición farmacéutica puede lograrse o no junto con otro fármaco, compuesto o composición farmacéutica. Por lo tanto, se puede considerar una “dosificación efectiva” en el contexto de la administración de uno o más agentes terapéuticos, y se puede considerar que un solo agente se proporciona en una cantidad efectiva si, junto con uno o más agentes, se puede lograr se logra un resultado deseable.

Como se utiliza en esta sección, “junto con” se refiere a la administración de una modalidad de tratamiento además de otra modalidad de tratamiento. Como tal, “junto con” se refiere a la administración de una modalidad de tratamiento antes, durante o después de la administración de la otra modalidad de tratamiento al individuo.

A menos que se indique claramente lo contrario, para los fines de esta sección, el término “individuo” como se utiliza en el presente documento se refiere a un mamífero, que incluye pero no se limita a, bovinos, equinos, felinos, conejos, caninos, roedores o primates (por ejemplo, humano). En algunas realizaciones, un individuo es un humano. En algunas realizaciones, un individuo es un primate no humano tal como chimpancés y otras especies de simios y monos. En algunas realizaciones, un individuo es un animal de granja tales como vacas, caballos, ovejas, cabras y cerdos; mascotas tales como conejos, perros y gatos; animales de laboratorio, que incluyen roedores, tales como ratas, ratones y conejillos de indias; y similares. Los aspectos descritos en esta sección pueden encontrar utilidad tanto en medicina humana como en el contexto veterinario.

Como se utiliza en esta sección y en las realizaciones adjuntas P ¹-P ^{2 5}, las formas singulares “un”, “un” y “el” incluyen una referencia plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

Se entiende que el aspecto y las variaciones de los aspectos descritos en esta sección incluyen “que consisten” y/o “que consisten esencialmente en” aspectos y variaciones.

La terapia del estreñimiento incluye laxantes que aumentan el volumen de las heces, tal como la fibra soluble; crear una carga osmótica, como el polietilenglicol; o estimular la contracción intestinal, tal como los difenilmetanos. También existen laxantes de superficie que ablandan las heces como el docusato de sodio y probióticos tal como el Lactobacillus paracasei [³]. El fármaco linaclotida aprobado por la FDA, un péptido agonista del receptor de guanilato ciclasa C, actúa al inhibir el dolor visceral, estimular la motilidad intestinal y aumentar la secreción intestinal. [⁴, ⁵]. Se cree que un segundo fármaco aprobado, lubiprostona, un análogo de prostaglandina E, activa un supuesto canal ClC ^{- 2}de enterocitos [⁶], aunque los datos mecanicistas son menos claros. A pesar del amplio rango de opciones terapéuticas, subsiste una necesidad continua de fármacos seguros y eficaces para tratar el estreñimiento.

Sin desear limitarse a la teoría, en las realizaciones de esta sección, la activación del canal de cloruro del regulador de transmembrana de fibrosis quística (CFTR) impulsa la secreción de fluido en el intestino, que mantiene la lubricación del contenido luminal. Se plantea la hipótesis de que la activación directa de CFTR puede causar la secreción de fluidos y revertir la deshidratación excesiva de las heces que se encuentra en el estreñimiento.

La secreción de fluido intestinal implica la secreción activa de Cl- a través del epitelio del enterocito a través del cotransportador de Na+/K+/²Cl- de la membrana basolateral (NKCC¹) y el canal de Cl- del regulador de transmembrana de fibrosis quística de la membrana luminal (CFTR) y el canal de Cl- activado por Ca2+ (CaCC). Las fuerzas electroquímicas y osmóticas creadas por la secreción de Cl- impulsan la secreción de Na+ y agua. [⁷]. En el cólera y la diarrea del viajero, el CFTR es fuertemente activado por enterotoxinas bacterianas a través de la elevación de nucleótidos cíclicos intracelulares. [⁸, ⁹]. El CFTR es una diana atractiva para aumentar la secreción de fluido intestinal en el estreñimiento, ya que se expresa fuertemente en todo el intestino y su activación aumenta fuertemente la secreción de fluido intestinal. Es poco probable que un activador que se dirige directamente a CFTR produzca la secreción masiva e incontrolada de fluido intestinal que se observa en el cólera debido a que las enterotoxinas en el cólera actúan de manera irreversible para producir una elevación sostenida del cAMP citoplasmático, que no solo activa el CFTR sino también los canales de K+ basolaterales, que aumentan la fuerza de impulsión electroquímica para la secreción de Cl-; las enterotoxinas del cólera también inhiben el intercambiador de NHE³Na+/H+ luminal implicado en la absorción intestinal de fluidos [¹⁰, ¹¹].

Motivado por estas consideraciones y la necesidad continua de una terapia con fármacos segura y eficaz para el estreñimiento, en el presente documento se informa sobre la identificación y caracterización de una potencia nanomolar, los activadores de molécula pequeña dirigidos a CFTR con acción prosecretora en el intestino y la eficacia en el estreñimiento.

Mediante cribado de alto rendimiento, se identificó un activador de CFTR de molécula pequeña con afinidad nanomolar, CFTRact-J^{0 2 7}, y se demostró que tiene acción prosecretora en el intestino de ratón y eficacia para normalizar la producción de heces en un modelo de estreñimiento de ratón inducido por loperamida. El estreñimiento sigue siendo un problema clínico importante en entornos ambulatorios y hospitalarios. El estreñimiento inducido por opioides es un efecto adverso común en pacientes después de una cirugía, sometidos a quimioterapia y con dolor crónico.

La activación dirigida a CFTR se suma a los diversos mecanismos de acción de las terapias anti-estreñimiento. Es notable que la activación pura de CFTR sea capaz de producir una respuesta robusta de secreción de fluido y corriente de Cl- en el intestino, sin causar una elevación global de la concentración de nucleótidos cíclicos, estimulación directa de la contractilidad intestinal o alteración de la absorción del fluido intestinal. Linaclotida, un péptido agonista del receptor de guanilato ciclasa C que aumenta la concentración de cGMP en las células intestinales. La linaclotida inhibe la activación de las neuronas sensoriales colónicas y activa las neuronas motoras, lo que reduce el dolor y aumenta la contracción del músculo liso intestinal; además, la elevación de la concentración de cGMP en los enterocitos puede activar CFTR y tener una acción prosecretora [⁴, ⁵]. Se cree que un segundo fármaco aprobado, el análogo de prostaglandina E lubiprostona, activa un supuesto canal ClC ^{- 2}de enterocitos. [⁶], aunque los datos mecanicistas son menos claros. En comparación con estos fármacos, un activador de CFTR puro tiene un mecanismo de acción único y bien validado y no produce una respuesta global de nucleótidos cíclicos en múltiples tipos de células. Es de destacar que la linaclotida y la lubiprostona mostraron una eficacia limitada en los ensayos clínicos. La linaclotida fue eficaz en ^{~ 20}% de los pacientes con estreñimiento crónico, de los cuales ^{~ 5}% también respondieron al placebo [¹⁵], y la lubiprostona fue eficaz en ^{~ 13}% de los pacientes con IBS-E, de los cuales ^{~ 7}% respondieron al placebo [¹⁶]. En base a nuestros datos en ratones que muestran una eficacia sustancialmente mayor de CFTRact-J⁰²⁷en comparación con las dosis supramáximas de linaclotida o lubiprostona, especulamos que los activadores de CFTR pueden tener una mayor eficacia en los ensayos clínicos.

El CFTRact-J⁰²⁷es más potente para la activación de CFTR de tipo silvestre que VX^{- 770}(ivacaftor), el fármaco aprobado por la FDA para el tratamiento de la fibrosis quística (CF) causada por ciertas mutaciones de separación de CFTR. En las células FRT que expresan CFTR de tipo silvestre, la medición de la corriente de cortocircuito mostró una activación casi completa de CFTR mediante CFTRact-J⁰²⁷a ³pM, mientras que VX ^{- 77 0}activó al máximo CFTR solo en un ¹⁵% . Sin embargo, el CFTRact-J⁰²⁷fue sustancialmente menos potente que ivacaftor como 'potenciador' de la separación defectuoso de los canales de cloruro de la mutación causante de CF más común, AF^{5 0 8}, lo que no es inesperado, ya que la eficacia del potenciador en CF es específica de mutación. Además de su posible utilidad terapéutica para el estreñimiento, un activador de molécula pequeña de CFTR de tipo silvestre puede ser útil para el tratamiento de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica y la bronquitis, el asma, la disfunción pulmonar inducida por el humo del cigarrillo, el ojo seco y la enfermedad colestásica del hígado [¹⁷- ¹⁹].

Las quinoxalinonas sustituidas se informaron como antagonistas selectivos de la proteína ¹de resistencia a múltiples fármacos del transportador de eflujo de membrana. [^{2 0}]. También se ha informado que las quinoxalinonas muestran actividad antidiabética al estimular la secreción de insulina en las células INS^-1pancreáticas. [^{2 1}], y la actividad inhibidora contra las serina proteasas para la terapia potencial de trastornos trombóticos [^{2 2}]. Recientemente, se ha informado que las quinoxalinonas inhiben la aldosa reductasa [^{2 3}]. Estos informes sugieren que el andamio de quinoxalinona tiene propiedades similares a las de los fármacos. Sintéticamente, la quinoxalinona se puede preparar en una a cuatro etapas a partir de materiales de partida disponibles comercialmente. [^{2 4}], que permite una síntesis fácil de análogos dirigidos.

Además de las acciones fuera de la diana específicas del compuesto, el perfil de efectos secundarios potenciales de un activador de CFTR podría incluir actividad prosecretora en las vías respiratorias/pulmones y varios epitelios glandulares y de otro tipo. Los efectos fuera de la diana para la terapia de estreñimiento se podrían limitar mediante la administración oral de un activador de CFTR con absorción intestinal limitada y/o depuración sistémica rápida para minimizar la exposición sistémica. El CFTRact-J⁰²⁷cuando se administró por vía oral a una dosis alta ^{( 10}mg/kg) mostró una biodisponibilidad muy baja con niveles en sangre muy por debajo de la EC50 para la activación de CFTR, lo que se puede deber al efecto de primer paso, como lo demuestra su rápido metabolismo in vitro en microsomas hepáticos. El CFTRact-J⁰²⁷no mostró una citotoxicidad in vitro significativa a una concentración de ²⁵pM, ^{> 100}veces mayor que su EC50 para la activación de CFTR, o toxicidad in vivo en ratones en un estudio de ⁷días a una dosis eficaz máxima que normalizó la producción de heces en el modelo con loperamida de estreñimiento. La acción fuera de la diana potencialmente más significativa, la estimulación de la secreción de fluidos de los pulmones/vías respiratorias, no se observó como lo demuestra el contenido normal de agua en los pulmones en los ratones tratados durante ⁷días. Estos estudios de toxicidad limitada ofrecen una prueba de concepto para la aplicación de un activador de CFTR en el estreñimiento.

En resumen, los datos presentados en el presente documento demuestran la acción prosecretora de un activador de CFTR en intestino de ratón para uso en el tratamiento de diversos tipos de estreñimiento, que podrían incluir estreñimiento inducido por opioides, estreñimiento idiopático crónico y síndrome del intestino irritable con predominio de estreñimiento.

Los trastornos del ojo seco, que incluye el síndrome de Sjogren, constituyen un problema común en la población que envejece con opciones terapéuticas efectivas limitadas disponibles. El canal de Cl- activado por cAMP de CFTR (regulador de conductancia de transmembrana de fibrosis quística) es un importante canal de cloruro prosecretor en la superficie ocular. Se investigó si los compuestos que se dirigen a CFTR pueden corregir la película lagrimal anormal en el ojo seco. Se evaluaron activadores de molécula pequeña de CFTR de tipo silvestre humano identificados mediante cribado de alto rendimiento en cultivos celulares y ensayos in vivo para seleccionar compuestos que estimulan la secreción de fluido impulsada por Cl- a través de la superficie ocular en ratones. Una aminofenil-¹,³,⁵-triazina, CFTRact-K^{0 8 9}, activó completamente CFTR en cultivos celulares con EC50 ^{~ 250}nM y produjo una hiperpolarización de ~^{8 .5}mV en la diferencia de potencial de la superficie ocular. Cuando se suministró por vía tópica, el CFTRact-K⁰⁸⁹duplicó la secreción lagrimal basal durante cuatro horas y no tuvo ningún efecto en ratones con CF. CFTRact-K⁰⁸⁹mostró una biodisponibilidad sostenida de la película lagrimal sin absorción sistémica detectable. En un modelo de ratón con ojo seco acuoso deficiente producido por la escisión de la glándula lagrimal, la administración tópica de ^0.1nmol de CFTRact-K⁰⁸⁹tres veces al día restauró la secreción lagrimal a niveles basales y evitó por completo la alteración del epitelio corneal observada en los controles tratados con vehículo. Los datos presentados en el presente documento demuestran la utilidad potencial de los activadores dirigidos a CFTR como un nuevo tratamiento prosecretor para el ojo seco.

El noventa y cuatro por ciento de los oftalmólogos encuestados consideran que se necesitan tratamientos adicionales para el ojo seco de moderado a severo (⁷).

La superficie ocular es una colección de tejidos epiteliales y glandulares anatómicamente continuos que están conectados funcionalmente para mantener la película lagrimal (⁸). Si bien la lagrimación contribuye con la mayor parte del lagrimeo reflejo, la córnea y la conjuntiva regulan el volumen y la composición de las lágrimas basales. Los principales determinantes del movimiento del agua a través de la superficie ocular hacia la película lagrimal incluyen la secreción de cloruro (Cl-) apical a través de transportadores de Cl- dependientes de cAMP y calcio (Ca2+), y la absorción de sodio (Na+) principalmente a través del canal epitelial de Na+ (ENaC).

Con respecto a los candidatos prosecretores para la terapia del ojo seco, un inhibidor de ENaC, P^{3 2 1}, ha entrado recientemente en estudios de fase ^{1 /2}(⁹). Diquafosol, un análogo de UTP que se dirige a los receptores P2Y2 del epitelio superficial y estimula la secreción de Cl- y mucina mediante la señalización de Ca2+ (¹⁰), está aprobado para el ojo seco en Japón (¹¹, ¹²) pero fracasó en los ensayos de fase III en los Estados Unidos.

El regulador de conductancia de transmembrana de fibrosis quística (CFTR) es un canal de Cl- activado por cAMP expresado en algunas células epiteliales secretoras, que incluyen aquellas de la córnea y la conjuntiva (¹⁴- ¹⁶). Encontramos una capacidad sustancial para el Cl- facilitado por CFTR activo en la superficie ocular en ratones (^{2 1}, ^{2 2}), como se mostró posteriormente en la conjuntiva de rata (^{2 3}), que proporciona una base racional para la investigación de los activadores de CFTR como una estrategia prosecretora para el ojo seco. El único activador de CFTR clínicamente aprobado, VX ^{- 770}(ivacaftor), está indicado para potenciar la separación del canal de ciertos mutantes de CFTR que causan CF, pero solo activa débilmente el CFTR de tipo silvestre (^{2 4}, ^{2 5}).

Se evaluaron nuevos activadores de molécula pequeña de CFTR de tipo silvestre identificados mediante cribado de alto rendimiento como terapia tópica potencial para el ojo seco para demostrar la eficacia de los activadores de CFTR recién identificados en un modelo de ratón con ojo seco.

Se investigó la utilidad potencial de los activadores de CFTR de molécula pequeña para la terapia del ojo seco. Después de varias fallas en el desarrollo previo, el ojo seco sigue siendo una necesidad insatisfecha en la enfermedad ocular. Se planteó la hipótesis de que los compuestos prosecretores dirigidos a CFTR podrían normalizar el volumen de la película lagrimal y las propiedades de la superficie ocular en el ojo seco (^{2 1}, ^{2 2}). En los trastornos del ojo seco, la hiperosmolaridad de la película lagrimal estimula la señalización proinflamatoria, la secreción de citocinas y metaloproteinasas y la alteración de la integridad de las células epiteliales de la córnea (³⁵- ^{3 8}). Al minimizar la hiperosmolaridad de la película lagrimal, se prevé que la activación de CFTR prevenga estos cambios que se encuentran más abajo en la superficie ocular.

Los activadores de CFTR de molécula pequeña se identificaron mediante cribado de alto rendimiento que produjo una secreción de fluido acuoso impulsada por Cl- sostenida a través de la superficie ocular mediante un mecanismo que implicaba la activación directa de CFTR en lugar de la señalización de cAMP que se encuentra más abajo. La justificación para elegir compuestos que activan CFTR directamente fue minimizar los posibles efectos fuera de la diana de la estimulación generalizada de cAMP y reducir la probabilidad de taquifilaxia para los compuestos que se dirigen a los receptores de señalización. Estos compuestos tenían una EC50 nanomolar baja para la activación de CFTR humano in vitro y produjeron una activación completa a concentraciones más altas. Se demostraron grandes hiperpolarizaciones de Pd dependientes de CFTR e hipersecreción lagrimal en ratones. Las actividades de compuestos sustanciales en ratones y humanos facilitarán la traducción de datos en el presente documento a humanos.

Se encontró que CFTRact-K⁰⁸⁹restauraba la secreción lagrimal y evitaba la alteración epitelial en un modelo de ratón experimental de insuficiencia lagrimal. Los activadores de C FT r pueden ser particularmente adecuados para los trastornos de la glándula lagrimal, tal como el síndrome de Sjogren primario, al estimular el transporte de fluidos a través del epitelio corneal y conjuntival intacto. Es probable que los activadores de CFTR ejerzan su principal efecto prosecretor en la superficie ocular, aunque existe un efecto indirecto para la expresión y función de CFTR en la glándula lagrimal (³⁹-^{4 2}). La estimulación directa de la secreción lagrimal es poco probable en los estudios en el presente documento debido a la penetración mínima del compuesto en los tejidos lagrimales después del suministro tópico y la eficacia demostrada del compuesto en un modelo de insuficiencia lagrimal. En la superficie ocular, la conjuntiva probablemente aporta la mayor parte de la secreción de fluido dada su área de superficie mucho más grande en comparación con la córnea (^{4 3}).

Se han considerado terapias prosecretoras alternativas dirigidas a diferentes canales iónicos de la superficie ocular. El único activador de CFTR aprobado por la FDA, VX-^{7 7 0}, se desarrolló como un “potenciador” para tratar la CF al corregir la separación del canal de ciertas mutaciones de CFTR (^{4 4}). Sin embargo, VX^{- 770}mostró una actividad relativamente pequeña contra CFTR de tipo silvestre en cultivos celulares y en ratones in vivo. La aplicación crónica de VX ^{- 770}también puede disminuir la expresión funcional de CFTR (^{2 4}) y causar cataratas (observadas en ratas jóvenes; ref. ^{4 2}), lo que probablemente sea un efecto fuera de la diana porque CFTR no se expresa en el cristalino. Un agonista indirecto de los canales de Cl- activados por Ca2+, diquafosol, aumenta tanto la secreción acuosa como la de mucina. Sin embargo, el dicuafosol fracasó en los ensayos de fase III, probablemente debido a la elevación transitoria de Ca2+ inducida y la activación del canal de Cl-, lo que produjo una secreción mínima del fluido neto. Los activadores de CFTR, que producen una secreción sostenida de fluido de lágrimas, superan esta limitación. CFTRact-K⁰⁸⁹y CFTRact-J⁰²⁷mostraron una farmacodinámica favorable y podían administrarse convenientemente por vía tópica varias veces al día en una formulación oftálmica estándar.

Los datos presentados en el presente documento muestran que la activación de CFTR solo facilita el flujo sostenido de Cl- hacia el exterior y la secreción de fluidos, lo que sugiere que la conductancia de K+ basal, sin nucleótidos cíclicos aumentados o señalización de Ca2+, es suficiente para soportar el transporte de fluidos en la superficie ocular. Aún de esta manera, la sinergia potencial de un agonista de CFTR y un activador de canales de K+ o un inhibidor de ENaC se podrían explorar para aumentar aún más la secreción lagrimal para la terapia del ojo seco.

La eficacia de CFTRact-K⁰⁸⁹en un modelo de ratón clínicamente relevante de enfermedad de ojo seco por deficiencia acuosa se demostró para la terapia tópica con activador de CFTR prosecretor para restaurar la secreción lagrimal basal y prevenir la patología de la superficie ocular. En comparación con los enfoques inmunosupresores, la activación de CFTR tiene la ventaja de abordar un evento temprano en la patogénesis del ojo seco. Por lo tanto, nuestros datos respaldan el potencial de desarrollo de los activadores de CFTR como la primera terapia de ojo seco de su clase. Los ejemplos en el presente documento proporcionan una divulgación adicional sobre aspectos y realizaciones de esta sección.

Aunque la sección anterior se ha descrito con cierto detalle a modo de ilustración y ejemplo con fines de claridad de comprensión, es evidente para aquellos expertos en la técnica que se practicarán ciertos cambios y modificaciones menores a la luz de la enseñanza anterior. Por lo tanto, la descripción y los ejemplos no se deben interpretar como limitantes del alcance de cualquier invención descrita en el presente documento.

Todas las referencias citadas en el presente documento, que incluyen las solicitudes de patentes y las publicaciones, se divulgan por el presente documento.

Las realizaciones contempladas en el presente documento incluyen las realizaciones P ¹a P²⁸siguientes.

Realización P ¹. Una composición farmacéutica, que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable, y un compuesto de la Fórmula I:

sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: X es O, NH o S; ni es independientemente un entero desde ⁰hasta ⁴; mi y v i son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 113,-CHX112, -CH2X11, -CN, -SOniR1A, -SOviNR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)mi, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A, -NR1BSO²R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX ¹^, -OCHX112, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -CX 213, CHX212, -(CH2)niCX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -CO R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -CO R4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -CO R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -SOniR6A, -SOviNR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -N(O)mi, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -OR6A, -NR6BSO²R6A, -NR6BC(O)R6D,-NR6BC(O)OR6D, -NR6BOR6D, -O CX⁶¹³, -OCHX⁶¹², alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X ⁷¹³, -CHX712, -CH2X71, -CN, -SOniR7A,-SOviNR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)mi, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO2R7A, -NR7AC(O)R7C,-NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, -O CX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno, -C X 813, -CHX⁸¹², -CH2X81, -CN, -SOniR8A,-SOviNR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)mi, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8B, -OR8A, -NR8BSO²R8A, -NR8BC(O)R8D,-NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -O CX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -SOniR9A, - SOviNR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)mi, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO²R9A, -NR9BC(O)R9D,-NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, OCX^9.13-OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, ^{r 1}B ^{r 1}C ^{r 1}D ^{r 2}A ^{r 2}B ^{r 2}C ^{r 2}D ^{r 3}A ^{r 3}B ^{r 3}C ^{r 3}D ^{r 4}A ^{r 4}B ^{r 4}C ^{r 4}D ^{r 5}A ^{r 5}B ^{r 5}C ^{r 5}D ^{r 6}A ^{r 6}B ^{r 6}C ^{r 6}D ^{r 7}A ^{r 7}B

R7C, R7D, R8A, R8B, R8C, R8D, R9A, R9B, R9C y R9D son independientemente hidrógeno, halógeno, -C CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2,-NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2,-NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCl3, -OCHF2,-OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C, R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, R6B, R6C, R7B, R7C, R8B, R8C, R9B y R9C unidos al mismo átomo de nitrógeno se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; y X ¹¹, X²¹, X ³¹, X ⁴¹, X ⁵¹, X ⁶¹, X ⁷¹, X ⁸¹y X ⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F; con la condición que cuando X es O; R²es -(CH2)n1CX213; n¹es ¹; X²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es metilo, entonces R⁶no es -NO2; y cuando X es O; R²es -(CH2)n1CX213; n¹es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es metilo, entonces R⁹no es -NO2.

Realización P². La composición farmacéutica de la realización PI, en la que: X es O; R¹es hidrógeno, halógeno, -CX113, -CH X112, -CH2X11 -CN, -N(O)m1, -C(O)R1D,-C(O)OR1D, -O CX ¹^, -OCHX112, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X ⁶¹³, -CHX612, -CH2X61, -CN, -N(O)m1, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O C X ⁶¹³, -OCHX612, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X⁷¹,-CN, -N(O)m1, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -O CX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno, -C X 813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -N(O)m1, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -O CX813,-OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -N(O)m1, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido.

Realización P³. La composición farmacéutica de la realización PI, en la que: X es O; R¹es hidrógeno, halógeno, -CX ¹⁴3, -CH X¹⁴2, -CH2X11, -CN, -N(O)m1, -C(O)R1D, -C(O)OR1D,-OCX¹⁴3, -OCHX¹^ o alquilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212,-(CH2)n1CX213, alquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido o haloalquilo; R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido o arilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CHzX⁶¹, -CN, -N(O)m1,-C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, - c X713, - c Hx 712, -CH2X71, -CN, -N(O)m1, -C(O)R7D, -C(O)OR7D,-OCX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno, -C X 813,-CHX812, -CH2X81, -CN, -N(O)m1, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -OCX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -CX ⁹¹³, -CHX912, -CH2X91, -CN, -N(O)m1, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX⁹¹³, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido.

Realización P⁴. La composición farmacéutica de la realización PI, en la que: X es O; R¹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -N(O)m1, -C(O)R1D,-C(O)OR1D, -O CX ¹^, -OCHX¹^ o alquilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212,-(CH2)n1CX213, alquilo sustituido, arilo sustituido o no sustituido o haloalquilo; R³y R⁴son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido o arilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno o alquilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613,-CHX612, -CH2X61, -CN, -NO, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN,-N(O)m1, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -O CX⁷¹³, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -N(O)m1, -C(O)R8D,-C(O)OR8D, -O CX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -N(O)m1, -C(O)R9D, -C(O)OR9D-O CX913, -OCHX⁹¹o alquilo sustituido o no sustituido.

Realización P⁵. La composición farmacéutica de la realización P⁴, en la que al menos dos de R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno.

Realización P⁶. Una composición farmacéutica, que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable, y un compuesto de la Fórmula IA:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: n¹es un entero desde ⁰hasta ⁴; m¹y v ¹son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X ¹⁴3, -CH X1 ^, -CH2X11 -CN, -SOn1R1A, -SOv1NR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, C(O)NR1BR1C, -OR1A,-NR1BSO2R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX13, -OCHX12, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -CX213, CHX212, -(CH2)n1CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -CO R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3B R3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -CO R4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -CO R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X ⁶¹³, -CHX612, -CH2X61, -CN, -SOn1R6A, - SOyiNR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -N(O)m¹, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -OR6A, -NR6BSO2R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR6D, -NR6BOR6D, -O CX613, -OCHX612, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX⁷¹², -CH 2X71, -CN, -SOn¹R7A, - SOv¹NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m¹, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO²R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, -O CX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno, -C X 813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -SOn1R8A, - SOv1NR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONR8BR8C, -TMC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m¹, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO²R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, OCX^8.13-OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X ⁹¹³, -CHX912, -CH2X91, -CN, -SOn1R9A, - SOv1NR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m¹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO2R9A, -NR9BC(O)R9D, -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -O CX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, R1B, R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, R2D, ^{r 3}A ^{r 3}B ^{r 3}C ^{r 3}D ^{r 4}A ^{r 4}B ^{r 4}C ^{r 4}D ^{r 5}A^{r 5}B ^{r 5}C ^{r 5}D ^{r 6}A'^{r 6}B ^{r 6}C ^{r 6}D ^{r 7}A ^{r 7}B ^{r 7}C ^{r 7}D ^{r 8}A ^{r 8}B ^{r 8}C ^{r 8}D ^{r 9}A R9B, R9C y R9D son independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO², -SH, -SO ³H, -SO ⁴H, -SO ²NH², -NHNH², -ONH², -NHC(O)NHNH², -NHC(O)NH², -NHSO²H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, - OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C, R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, R6B, R6C, R7B, R7C, R8B, R8C, R9B y R9C unidos al mismo átomo de nitrógeno se pueden unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; y X ¹¹, X ²¹, X³¹, X ⁴¹, X ⁵¹, X ⁶¹, X⁷¹, X⁸¹y X ⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F; con la condición que cuando X es O; R²es -(CH2)n1CX¹⁴3; n¹es ¹; X¹¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es metilo, entonces R⁶no es -NO2.

Realización P⁷. La composición farmacéutica de la realización P⁶, en la que R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212, -OR2A, alquilo no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido.

Realización P⁸. La composición farmacéutica de la realización P⁷, en la que: R¹es hidrógeno, halógeno, -C X ¹⁴3, -CHX¹⁴2, -CH2X11, -CN, -N(O)m1, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, - OCX¹^ , -OCHX¹^ o alquilo sustituido o no sustituido; R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido o arilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -N(O)m1, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX613, - OCHX⁶¹o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X⁷¹-CN, -N(O)m1, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -OCX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno, -C X 813, -C^hX812, -CH2X81, -CN, -N(O)m1, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -O CX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -CX913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -N(O)m1, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, - OCX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido.

Realización P⁹. La composición farmacéutica de la realización P⁶, en la que R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX⁶¹², -CH2X61, -CN, -SOn¹R6A, -SOv¹NR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -NO, -NR6BR6C, -C(O)R6A, -C(O)OR6A, -C(O)NR6BR6C -OR6A, -NR6BSO²R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR6D, -NR6BOR6D, -O CX613, -OCHX612, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido.

Realización P ¹⁰. La composición farmacéutica de la realización P⁹, en la que: R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 113, -CHX112, -CH2X11, -CN, -N(O)m1, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, - OCX113, -OCHX112 o alquilo sustituido o no sustituido; R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido o arilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -N(O)m1, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX⁶^, - OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -N(O)m1, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -O CX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno, -C X 813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -N(O)m1, -C(O)R8D, -C(O)O^r8D, -O CX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -CX913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -N(O)m1, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX913, -OCHX⁹12 o alquilo sustituido o no sustituido.

Realización P ¹¹. La composición farmacéutica de la realización P⁶, en la que R³es - COR3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido.

Realización P ¹². La composición farmacéutica de la realización P ¹¹, en la que: R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 1 ^, -CHX¹⁴2, -CH2X11, -CN, -N(O)m1, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, - OCX1 ^, -OCHX¹^ o alquilo sustituido o no sustituido; R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido o arilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X ⁶¹³, -CHX612, -CH2X61, -CN, -N(O)m1, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX⁶¹³, - OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX712, -CH 2X71, -CN, -N(O)m1, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -O CX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno, -C X 813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -N(O)m1, -C(O)R8D, -C(O)O^r8D, -O CX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -CX913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -N(O)m1, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, - OCX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido.

Realización P ¹³. La composición farmacéutica de la realización P⁶, en la que al menos dos de R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno.

Realización P ¹⁴. La composición farmacéutica de la realización P ¹³, en la que: R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 1 ^, -CHX¹⁴2, -CH2X11, -CN, -NO2, -NO, -C(O)R1A, -C(O)OR1D, - OCX¹⁴3, -OCHX¹^ o alquilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212,-(CH2)n1CX213, alquilo sustituido, arilo sustituido o no sustituido o haloalquilo; R³y R⁴son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido o arilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno o alquilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -NO, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -C^hX712, -CH2X71, -CN, -NO, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -O CX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno, -C X 813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -NO, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -O CX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -NO, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido.

Realización P ¹⁵. La composición farmacéutica de la realización P ¹⁴, en la que: R¹es un hidrógeno, halógeno o -NO2; R²es -(CH2)n1CX213 o alquilo sustituido; y R⁵es hidrógeno.

Realización P ¹⁶. La composición farmacéutica de la realización P ¹⁵, en la que R³y R⁴son independientemente hidrógeno, metilo o etilo.

Realización P ¹⁷. La composición farmacéutica de la realización P ^{1 6}, en la que R²es alquilo sustituido con al menos un flúor.

Realización P ¹⁸. La composición farmacéutica de la realización P ¹⁷, en la que R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno y R¹es -NO2.

Realización P ¹⁹. La composición farmacéutica de la realización P ¹⁷, en la que R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno.

Realización P^{2 0}. Un método para tratar el estreñimiento, que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la Fórmula estructural (I):

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es O, NH o S; ni es un entero desde ⁰hasta ⁴; mi y v i son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 113, -CH X112, -CH2X11, -CN, -SOniR1A, -SOviNR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)mi, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A, -NR1BSO²R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX¹³, -OCHX¹², alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212, -(CH2)niCX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -CO R3D, -C(O)NHNR3BR3C -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -COR4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -CO R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -SOniR6A, -SOviNR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -N(O)mi, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -OR6A, -NR6BSO²R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR⁶-NR6BOR6D, -O CX^6.13, -OCHX612, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX⁷¹², -CH 2X 71, -CN, -SOniR7A, -SOviNR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNk7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)mi, -NR7BR7C, -C(O)k7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO²R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, -O CX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno, -C X 813, -CH X¹7^ , -CH2X81, -CN, -SOniR8A, -SOviNR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONRBR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)mi, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO2R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -O CX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CH X¹^, -CH2X81, -CN, -SOniR9A, -SOviNR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)mi, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D,- C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO²R9A, -NR9BC(O)R9D, -NR9BC(O)OR⁹-NR9BOR9D, -O CX₉₁₃, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, R1B, R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, R3A, R3B, R3C, R3D, R4A, R4B, R4C, R4D, R3A, R5B, R5C, R5D, R6A, R6B, R6C, R6D, R7A, R7B, R7C, R7D, R8A, R8B, R8C, R8D, R9B, R9C y R9D son independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -NH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C,

R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, R6B, R6C, R7B, R7C, R8B, R8C, R9B y R9C unidos al mismo átomo de nitrógeno se pueden unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido;

y X ¹¹, X ²¹, X ³¹, X⁴¹, X⁵¹, X ⁶¹, X ⁷¹, X ⁸¹y X ⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F.

Realización P^{2 1}. El método de la realización P^{2 0}, comprende adicionalmente administrar al sujeto un agente anti estreñimiento.

Realización P^{2 2}. El método de la realización P^{2 0}, en el que el compuesto se administra por vía oral.

Realización P^{2 3}. El método de la realización P^{2 0}, en el que el estreñimiento es estreñimiento inducido por opioides, estreñimiento idiopático crónico o síndrome del intestino irritable con predominio de estreñimiento.

Realización P^{2 4}. Un método para tratar un trastorno del ojo seco, que comprende administrar a un sujeto en necesidad

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es O, NH o S; n¹es un entero desde ⁰hasta ⁴; m¹y v ¹son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 113, -CH X112, -CH2X11, -CN, -SOn-iR1A, -SOviNR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A, -R 1BSO2R1A, -R 1BC(O)R1D, -R 1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX ¹³, -O CHX¹², alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212, -(CH2)n1CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -CO R3D, -C(O)NHNR3BR3C -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -COR4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -CO R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -SOn1R6A, -SOv1NR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -N(O)m¹, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -OR6A, -NR6BSO2R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR6D, -NR6BOR6D, -O CX613, -OCHX612, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX⁷¹², -CH 2X71, -CN, -SOn¹R7A, -SOv¹NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m¹, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO²R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, -O CX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno, -C X 813, -CH X1 ^, -CH2X81, -CN, -SOn1R8A, -SOv1NR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m¹, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO2R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -O CX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CH X¹^, -CH2X81, -CN, -SOn1R9A, -SOv1NR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m¹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -(O)OR9D, -C(ONR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO²R9A, -NR9BC(O)R9D, -R9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -O CX913, -OCHX912,alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, R1B, R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, R2D, R3A, R3B, R3C, r ³D r ⁴A r ⁴B r ⁴C r ⁴D r ⁵A r ⁵B r ⁵C r ⁵D r ⁶A r ⁶B r ⁶C r ⁶D r ⁷A r ⁷B r ⁷C r ⁷D r ⁸A r ⁸B r ⁸C r ⁸D r ⁹A r ⁹B r ⁹C y R9D son independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCI3, -CBr3, -CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C, R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, R6B, R6C, R7B, R7C, R8B, R8C, R9By R9C unidos al mismo átomo de nitrógeno se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; y X ¹¹, X²¹, X³¹, X ⁴¹, X ³¹, X ⁶¹, X⁷¹, X ⁸¹y X ⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F.

Realización P^{2 5}. El método de la realización P^{2 4}, en el que el trastorno del ojo seco es un trastorno de la glándula lagrimal.

Realización P^{2 6}. El método de la realización P^{2 4}, comprende adicionalmente administrar al sujeto un agente anti-ojo seco.

Realización P^{2 7}. Un método para aumentar la lagrimación, que comprende administrar a un sujeto en necesidad del

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es O, NH o S; n¹es un entero desde ⁰hasta ⁴; m¹y v ¹son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 113, -CH X112, -CH2X11, -CN, -SOn1R1A, -SOv¹NR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A, -NR1BSO²R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX¹³, -OCHX¹², alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212, -(CH2)n1CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -CO R3D, -C(O)NHNR3BR3C -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -COR4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -CO R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -SOn1R6A, -SOv1NR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -N(O)m¹, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -OR6A, -NR6BSO2R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR6D, -NR6BOR6D, -O CX613, -OCHX612, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX⁷¹², -CH2X71, -CN, -SOn1R7A, -SO v1NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m¹, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO²R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, -O CX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno, -C X 813, -CH X112, -CH2X81, -CN, -SOn1R8A, -SOv1NR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m¹, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO2R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -O CX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CH X^{1 2}, -CH2X91, -CN, -SOn¹R9A, -SOv¹NR9BR9C, NHNR⁹BR9C, -ONR⁹BR9C, NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, N(O)m¹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, C(O)NR⁹BR9C, -OR9A, NR9BSO2R9A, -NR9BC(O)R ⁹9DD, -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -O CX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, R1B, R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, r ³A r ³B r ³C r ³D r ⁴A r ⁴B r ⁴C r ⁴D r ⁵A r ⁵B r ⁵C r ⁵D r ⁶A r ⁶B r ⁶C r ⁶D r ⁷A r ⁷B r ⁷C r ⁷D r ⁸A r ⁸B r ⁸C r ⁸D r ⁹A

R9B, R9C y R9D son independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C,

y X ¹¹, X ²¹, X ³¹, X⁴¹, X³¹, X ⁶¹, X ⁷¹, X ⁸¹y X ⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F.

Realización P^{2 8}. Un método para activar el Regulador de Conductancia de Transmembrana de Fibrosis Quística

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es O, NH o S; n¹es un entero desde ⁰hasta ⁴; m¹y v ¹son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 113, -CH X112, -CH2X11, -CN, -SOn1R1A, -SOv¹NR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A, -NR1BSO²R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX¹³, -OCHX¹², alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212, -(CH2)n1CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -CO R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -COR4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -CO R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴se puede unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -SOn1R6A, -SO v1NR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -N(O)m¹, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -o r 6A, -NR6BSO2R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR6D, -NR6BOR6D, -O CX613, -OCHX612, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX⁷¹², -CH2X71, -CN, -SOn¹R7A, -SO v¹NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m¹, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO²R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, -O CX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno, -C X 813, -CH X112, -CH2X81, -CN, -SOn1R8A, -SOv1NR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m¹, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO2R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -O CX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, ,1a, -CH X¹¹², -CH2X91, -CN, -SOn-iR9A, -SOyiNR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m¹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO2R9A, -NR9BC(O)R9D, -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -O CX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, R1B, R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, R2D, r ³A r ³B r ³C r ³D r ⁴A r ⁴B r ⁴C r ⁴D r ⁵A r ⁵B r ⁵C r ⁵D r ⁶A r ⁶B r ⁶C r ⁶D r ⁷A r ⁷B r ⁷C r ⁷D r ⁸A r ⁸B r ⁸C r ⁸D r ⁹A R9B, R9C y R9D son independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C, R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, R6B, R6C, R7B, R7C, R8B, R8C, R9B y R9C unidos al mismo átomo de nitrógeno se pueden unir opcionalmente para formar un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; y X ¹¹, X ²¹, X ³¹, X⁴¹, X³¹, X ⁶¹, X ⁷¹, X ⁸¹y X ⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F.

Las realizaciones adicionales contempladas en el presente documento incluyen las realizaciones ¹a ⁶⁹siguientes.

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es -O- o -S-; n¹, n², n⁶, n⁷, n⁸, y n⁹son independientemente un entero desde ⁰hasta ⁴; m¹, m⁶, m⁷, m⁸, m⁹, v ¹, v⁶, v⁷, v⁸, y v⁹son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 113, -CH X112, -CH2X11, -CN, -SOn1R1A, - SOv1NR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A, -NR1BSO2R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX113, -OCHX112, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, -CH3, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo C2-C8 sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo C2-C4 sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -C(O)R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, -C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -C(O)R4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -C(O)R5D -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX⁶¹², -CH2X61, -CN, -SOn⁶R6A, - SOv⁶NR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, —N(O)m⁶, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -OR6A, -NR6BSO²R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR6D, -NR6BOR6D, -O CX613, -OCHX612, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -SOn7R7A, -SO v7NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m⁷, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -o r 7A, -NR7BSO2R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, -O CX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno,-CX813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -SOn⁸R8A, -SOv⁸NR8BR8C, -NHNR8BR8C, -O N R 8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m⁸, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO²R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -OCX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX⁹12, -CH2X91, -CN, -SOngR9A, -SOv9NR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m⁹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO2R9A, -NR9BC(O)R9D, -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -O CX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R¹y R⁶, R⁶y R⁷, R¹y R⁹, o R⁸, y R⁹se unen opcionalmente para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, R1B, R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, R2D, R3A, R3B, R3C, R3D, R4A, R4B, R6C, R6D, R7A, R7B, R7C, R7D, R8A, R8B, R8C, R8D, R9A, R9B, R9C y R9D son independ CF3, -CC l³, -CBr³, -CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2,-NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCÍ2, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C, R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, R6B, R6C, R7B, R7C, R8B, R8C,

R9B y R9C unidos al mismo átomo de nitrógeno opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; y X ¹¹, X ²¹,

X ⁶¹, X ⁷¹, X⁸¹y X ⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F; con la condición que cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213;

n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁶no es -NO2; y cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁹no es -NO2, con la condición que cuando X es -O-; R²es -CH2(CF2)2H; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R¹no es -NO2; con la condición que cuando X es -O-; R²es - CH(CF3)2; R³y

R⁴son independientemente alquilo C1-C3 no sustituido, entonces R¹no es hidrógeno; y con la condición que cuando

X es -O- y R²es metilo sustituido con cicloalquilo, entonces R³y R⁴son hidrógeno.

Realización ². El compuesto de la realización ¹, en el que R²es -CX213, -(CH2)n2CX213 o haloalquilo C2-C4.

Realización ³. El compuesto de la realización ¹o ², en el que R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, o alquilo

C1-C4 sustituido o no sustituido.

Realización ⁴. El compuesto de la realización ^{1 , 2}o ³, en el que: R¹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, - OCX¹⁴3, -OCHX¹^ o alquilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -NO2, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -OCX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno,-CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)o R8D, - OCX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido, en el que R1D, R6D, R7D, R8D y R9D son independientemente hidrógeno o metilo.

Realización ⁵. El compuesto de la realización ⁴, en el que R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno.

Realización ⁶. El compuesto de la realización ¹, en el que el compuesto se representa por la Fórmula IA:

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización ⁷. El compuesto de la realización ⁶, en el que R²es -CX213, -(CH2)n2CX213, o haloalquilo C2-C4.

Realización ⁸. El compuesto de la realización ⁶o ⁷, en el que R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido.

Realización ⁹. El compuesto de la realización ⁶, ⁷o ⁸, en el que: R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 113, -CH X112, -CH2X11, -CN, -NO2, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -O CX113, - OCHX112 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -NO2, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX⁶^, -OCHX⁶¹o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, -C X 713, -CHX⁷12, -CH2X71, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -O CX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, -C X 813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -O CX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -C hX912, -CH2X91, -CN, -NO2, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido.

Realización ¹⁰. El compuesto de la realización ⁹, en el que R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno.

Realización ¹¹. El compuesto de la realización ⁶o ⁷, en el que: R³y R⁴son independientemente metilo o etilo; R⁵son hidrógeno; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN,, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -o Cx 713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, -C X 813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -o Cx 813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN,, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido; en el que R1D, R6D, R7D, R8D y R9D son independientemente hidrógeno o metilo, y X ¹¹, X ²¹, X ⁶¹, X ⁷¹, X ⁸¹y X ⁹¹son independientemente -F.

Realización ¹². El compuesto de la realización ¹¹, en el que: R¹es hidrógeno, halógeno,-NO2, o -COOH; R⁵es hidrógeno; R⁶es hidrógeno, halógeno -NO2, o -COOH; R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno; y R⁹es hidrógeno, halógeno NO2, o -COOH.

Realización ¹³. El compuesto de la realización ⁶o ⁷, en el que R³y R⁴son independientemente hidrógeno, metilo o etilo.

Realización ¹⁴. El compuesto de la realización ⁴, en el que R²es alquilo C2-C4 sustituido con al menos un flúor. Realización ¹⁵. El compuesto de la realización ⁶, ⁷o ¹⁴, en el que R¹, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son hidrógeno.

Realización ^{1 6}. El compuesto de la realización ⁶o ⁷, en el que R¹y R⁶se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un pirazolilo sustituido o no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo.

Realización ¹⁷. El compuesto de la realización ¹⁶, en el que R³y R⁴son independientemente hidrógeno, metilo o etilo. Realización ¹⁸. El compuesto de la realización ¹⁶, en el que el compuesto se representa con la Fórmula IB, IC, ID, o

Realización ¹⁹. El compuesto de la realización ¹⁸, en el que R7, R⁸y R⁹son hidrógeno.

Realización ^{2 0}. El compuesto de la realización ¹⁴, ¹⁵, ¹⁶, ¹⁸o ¹⁹, en el que R²es -CH(CF3)2 o -CH2(CF2)2H.

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es -O-; R²es haloalquilo C2-C4; R³es hidrógeno; R⁴es -CH3 o -CH2CH3; y R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son hidrógeno.

Realización ^{2 3}. El compuesto de la realización ^{2 2}, en el que R²se sustituye con al menos cuatro átomos de flúor.

Realización ^{2 4}. Una composición farmacéutica, que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable, y un compuesto de la Fórmula I:

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es -O- o -S-; n¹, n², n⁶, n⁷, n⁸, y n⁹son independientemente un entero desde ⁰hasta ⁴; m¹, m⁶, m⁷, m⁸, m⁹, v ¹, v⁶, v⁷, v⁸, y v⁹son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 113, -CH X112, -CH2X11, -CN, -SOn-iR1A, - SOv1NR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A, -NR1BSO2R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX113, -OCHX112, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CH3, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo C2-C8 sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -C(O)R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -C(O)R4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -C(O)R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX⁶¹², -CH2X61, -CN, -SOn⁶R6A, - SOv⁶NR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, —N(O)m⁶, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -OR6A, -NR6BSO²R6A, -NR6BC(O)R6D, NR6 NR6BOR6D, -O CX613, -OCHX612, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -SOn/R7A, -SOv/NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m⁷, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO2R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, -O CX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, -C X 813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -SOn⁸R8A, -SOv⁸NR8BR8C, -NHNR8BR8C, -O N R 8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m⁸, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO²R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -OCX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -SOngR9A, -SOvgNR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m⁹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO2R9A, -NR9BC(O)R9D, -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -O CX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R¹y R⁶, R⁶y R⁷, R¹y R⁹, o R⁸, y R⁹se unen opcionalmente para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, R1B, R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, R2D, R3A, R3B, R3C, R3D, R4A, R4B, R4C, R4D, R5A, R5B, R5C, R5D, R6A, R6B,

R6C, R6D, R7A, R7B, R7C, R7D, R8A, R8B, R8C, R8D, R9A, R9B, R9C y R9D son independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCÍ2, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C, R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, R6B, R6C, R7B, r ⁹b y r 9c unidos al mismo átomo de nitrógeno opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; y X ¹¹, X ²¹,

n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁶no es -NO2; y cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 susti sustituido, entonces R⁹no es -NO2, y con la condición que cuando X es -O- y R²es metilo sustituido con cicloalquilo, entonces R³y R⁴son hidrógeno.

Realización ^{2 5}. La composición farmacéutica de la realización ^{2 4}, en la que R²es -C X 213, -(CH2)n2CX²¹o haloalquilo

C ²-C ⁴.

Realización ^{2 6}. La composición farmacéutica de la realización ²⁴o ^{2 5}, en la que R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, o alquilo C1-C4 sustituido o no sustituido.

Realización ^{2 7}. La composición farmacéutica de la realización ^{2 4}, ²⁵o ^{2 6}, en la que: R¹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -O CX ¹^, -OCHX¹^ o alquilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -NO2, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -O CX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, -CF3, -CCh, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -O CX813, -OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -CHF2, -CH2F, -CN, -NO2, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX⁹¹³, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido, en el que R1D, R6D, R7D, R8D y R9D son independientemente hidrógeno o metilo.

Realización ^{2 8}. La composición farmacéutica de la realización ^{2 7}, en la que R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno.

Realización ^{2 9}. La composición farmacéutica de la realización ^{2 4}, en la que el compuesto se representa por la Fórmula

IA:

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización ^{3 0}. La composición farmacéutica de la realización ^{2 9}, en la que R²es -C X 213, -(CH2)n2CX²¹o haloalquilo

C ²-C ⁴.

Realización ^{3 1}. La composición farmacéutica de la realización ²⁹o ^{3 0}, en la que R³, R⁴y R⁵son independientemente hidrógeno, o alquilo C1-C4 sustituido o no sustituido.

Realización ^{3 2}. La composición farmacéutica de la realización ^{2 9}, ³⁰o ^{3 1}, en la que: R¹es hidrógeno, halógeno, -CX ¹⁴3, -CH X¹⁴2, -CH2X11, -CN, -NO2, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -O CX ¹^, -OCHX¹^ o alquilo sustituido o no sustituido;

R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -NO2, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -O CX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, -C X 813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -O CX813, - OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -C hX912, -CH2X91, -CN, -NO2, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido.

Realización ^{3 3}. La composición farmacéutica de la realización ^{3 2}, en la que R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno.

Realización ^{3 4}. La composición farmacéutica de la realización ²⁹o ^{3 0}, en la que: R³y R⁴son independientemente metilo o etilo; R⁵son independientemente hidrógeno; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -O CX613, -OCHX612 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -NO2, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -O CX713, -OCHX712 o alquilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, -CX813, -CHX812, -CH2X81, -CN, -NO2, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -O CX⁸13, - OCHX812 o alquilo sustituido o no sustituido; y R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN,-C(O)R9D, -C(O)OR9D, -O CX913, -OCHX912 o alquilo sustituido o no sustituido; en el que R1D, R6D, R7D, R8D y R9D son independientemente hidrógeno o metilo, y X ¹¹, X ²¹, X ⁶¹, X⁷¹, X⁸¹y X⁹¹son independientemente -F.

Realización ^{3 5}. La composición farmacéutica de la realización ^{3 4}, en la que: R¹es hidrógeno, halógeno,-NO2, o -COOH; R⁵es hidrógeno; R⁶es hidrógeno, halógeno -NO2, o -COOH; R⁷y R⁸son independientemente hidrógeno; y R⁹es hidrógeno, halógeno o -COOH.

Realización ^{3 6}. La composición farmacéutica de la realización ²⁹o ^{3 0}, en la que R³y R⁴son independientemente hidrógeno, metilo o etilo.

Realización ^{3 7}. La composición farmacéutica de la realización ^{3 6}, en la que R²es alquilo C2-C4 sustituido con al menos un flúor.

Realización ^{3 8}. La composición farmacéutica de la realización ^{3 7}, en la que R¹, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno.

Realización ^{3 9}. La composición farmacéutica de la realización ²⁹o ^{3 0}, en la que: R¹y R⁶se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un pirazolilo sustituido o no sustituido, oxazolilo, o tiazolilo; y R³y R⁴son independientemente hidrógeno, metilo o etilo.

Realización ^{4 0}. La composición farmacéutica de la realización ^{3 9}, en la que el compuesto se representa con la Fórmula

Realización ^{4 1}. La composición farmacéutica de la realización ^{4 0}, en la que R5, R7, R⁸y R⁹son independientemente hidrógeno.

Realización ^{4 2}. La composición farmacéutica de la realización ^{3 0}, en la que R²es -CH(CF3)2 o -CH2(CF2)2H.

Realización ^{4 3}. La composición farmacéutica de la realización ^{2 4}, en la que el compuesto se selecciona de:

 Realización ^{4 4}. Una composición farmacéutica, que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable, y el compuesto de la fórmula I:

Realización ^{4 5}. La composición farmacéutica de la realización ^{4 4}, en la que R²se sustituye con al menos cuatro átomos de flúor.

Realización ^{4 6}. Un método para tratar el estreñimiento en un sujeto en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula I:

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es -O-, -NH- o -S-; n¹, n², n⁶, n⁷, n⁸, y n⁹son independientemente un entero desde ⁰hasta ⁴; m¹, m⁶, m⁷, m⁸, m⁹, v ¹, v⁶, v⁷, v⁸, y v⁹son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 1 ^, -CH X1 ^, -CH2X11 , -CN, -SOn1R1A, -SOv1NR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, - NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A, -NR1BSO2R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX ¹⁴3, -OCHX¹⁴2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -C(O)R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -C(O)R4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -C(O)R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, - SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -SOn⁶R6A, -SOv⁶NR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -N(O)m⁶, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -OR6A, -NR6BSO²R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR6D, -NR6BOR6D, -O CX ⁶¹³, -OCHX⁶¹², alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -SOn7R7A, -SOv7NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m⁷, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO²R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR⁷-NR7BOR7D, -O CX₇₁₃, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno,- CX813, -CHX⁸¹², -CH2X81, -CN, -SOn⁸R8A, -SOv⁸NR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m⁸, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR5D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO²R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, - OCX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -SOngR9A, -SOvgNR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m⁹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO2R9A, -NR9BC(O)R9D, -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -O CX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R¹y R⁶, R⁶y R⁷, R¹y R⁹, o R⁸, y R⁹se unen opcionalmente para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, R1B, R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, R2D, R3A, R3B, R3C, R3D, R4A, R4B, R4C, R4D, R5A, R5B, R5C, R5D, R6A, R6B, R6C, R6D, R7A, R7B, R7C, R7D, R8A, R8B, R8C, R8D, R9A, R9B, R9C y R9D son independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, - OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3, -OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C, R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, R6B, R6C, R7B, R7C, R8B, R8C, R9B y R9C unidos al mismo átomo de nitrógeno opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; y X ¹¹, X²¹, X⁶¹, X ⁷¹, X ⁸¹y X⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F; con la condición que cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁶no es -NO2; y cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁹no es -NO2.

Realización ^{4 7}. El método de la realización ^{4 6}, que comprende adicionalmente administrar al sujeto u agente anti estreñimiento.

Realización ^{4 8}. El método de la realización ⁴⁶o ^{4 7}, en el que el compuesto se administra por vía oral.

Realización ^{4 9}. El método de la realización ^{4 6}, ⁴⁷o ^{4 8}, en el que el estreñimiento es estreñimiento inducido por opioides, estreñimiento idiopático crónico o síndrome del intestino irritable con predominio de estreñimiento.

Realización ^{5 0}. Un método para tratar un trastorno del ojo seco en un sujeto en necesidad del mismo, que comprende

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es -O-, -NH- o -S-; n¹, n², n⁶, n⁷, n⁸, y n⁹son independientemente un entero desde ⁰hasta ⁴; m¹, m⁶, m⁷, m⁸, m⁹, v ¹, v⁶, v⁷, v⁸, y v⁹son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X ¹⁴3, -CH X1 ^, -CH2X11 , -CN, -SOn1R1A, -SOv1NR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, C(O)NR1BR1C, -OR1A, -NR1BSO2R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX ¹^, -OCHX¹^, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -C(O)R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -C(O)R4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -C(O)R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; Ra es hidrógeno, halógeno, -C X ^a1-CHX_{a , 2}, -CH2X61, -CN, -SOnaR6A, -SOvaNRaBRaC, -NHNRaBRaC, -ONRaBRaC, -NHC(O)NHNRaBRaC, -NHC(O)NRaBRaC, N(O)ma, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)ORaD, -C(O)NRaBRaC, -ORaA, -NRaBSO²RaA, -NRaBC(O)RaD, -NRaBC(O)ORa -NR6BOR6D, -O CX⁶¹³, -OCHX⁶¹², alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -SOn7R7A, -SOv7NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, —N(O)m⁷, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO²R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR⁷-NR7BOR7D, -O CX^7.13, O CHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno,- CX813, -CHX¹¹², -CH2X81, -CN, -SOn⁸R8A, -SOv⁸NR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m⁸, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO²R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -O CX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -SOngR9A, - SOvgNR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -TMC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m⁹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO2R9A, -NR9BC(O)R9D, -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -O CX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R¹y Ra, Ra y R⁷, R¹y R⁹, o R⁸, y R⁹se unen opcionalmente para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, R1B, R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, R2D, R3A, R3B, R3C, R3D, R4A, R4B, R4C, R4D, R5A,

R5B, R5C, R5D RaA, RaB, RaC, RaD, R7A, R7B, R7C, R7D, R8A, R8B, R8C, R8D, R9A, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2 NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3,

-OCI3, -OCHF2, - OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C, R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, RaB, RaC, R7B,

R7C, R8B, R8C, R9B y R9C unidos al mismo átomo de nitrógeno opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido;

y X ¹¹X ²¹, X^{a 1}, X ⁷¹, X ⁸¹y X ⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F; con la condición que cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces Ra no es -NO2; y cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁹no es -NO2.

Realización ^{5 1}. El método de la realización ^{5 0}, en el que el trastorno del ojo seco es un trastorno de la glándula lagrimal.

Realización ^{5 2}. El método de la realización ⁵⁰o ^{5 1}, que comprende adicionalmente administrar al sujeto un agente anti-ojo seco.

Realización ^{5 3}. Un método para aumentar la lagrimación en un sujeto en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula I:

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es -O-, -NH- o -S-; n¹, n², n⁶, n⁷, n⁸, y n⁹son independientemente un entero desde ⁰hasta ⁴; m¹, m⁶, m⁷, m⁸, m⁹, v ¹, v⁶, v⁷, v⁸, y v⁹son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 113, -CH X112, -CH2X11 , -CN, -SOn1R1A, -SOv1NR1BR1C, -NHNR1BR1C, - ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A, -NR1BSO2R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX113, -OCHX112, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -C(O)R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -C(O)R4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -C(O)R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -SOn⁶R6A, -SOv⁶NR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -N(O)m⁶, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -OR6A, -NR6BSO²R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR⁶-NR6BOR6D, -O CX^6.13, -OCHX₆₁2 alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -SOn7R7A, -SOv7NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m⁷, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO2R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, - OCX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno,- CX813, -CHX⁸¹², -CH2X81, -CN, -SOn⁸R8A, -SOv⁸NR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m⁸, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO²R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -O CX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN, - SOngR9A, -SOvgNR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m⁹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO2R9A, -NR9BC(O)R9D, -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -O CX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R¹y R⁶, R⁶y R⁷, R¹y R⁹, o R⁸, y R⁹se unen opcionalmente para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, R1B R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, R2D, R3A, R3B, R3C, R3D, R4A, R4B, R4C, R4D, R5A,

R5B, R5C, R5D, R6A, R6B, R6C, R6D, R7A, R7B, R7C, R7D, R8A, R8B, R8C, R8D, R9A, R9B, R9C y R9D son independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2 NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCh, -OCBr3,

-OCI3, -OCHF2, - OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C, R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, R6B, R6C, R7B, R7C, R8B, R8C, R9B y R9C unidos al el mismo átomo de nitrógeno opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; y X ¹¹X ²¹, X ⁶¹, X ⁷¹, X ⁸¹y X ⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F; con la condición que cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁶no es -NO2; y cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁹no es -NO2.

Realización ^{5 4}. Un método para activar un Regulador de Conductancia de Transmembrana de Fibrosis Quística

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es -O-, -NH- o -S-; n¹, n², n⁶, n⁷, n⁸, y n⁹son independientemente un entero desde ⁰hasta ⁴; m¹, m⁶, m⁷, m⁸, m⁹, v ¹, v⁶, v⁷, v⁸, y v⁹son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X 113, -CH X112, -CH2X11 , -CN, -SOn1R1A, -SOv1NR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A, -NR1BSO2R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX113, -OCHX112, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -C(O)R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -C(O)R4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -C(O)R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -SOn⁶R6A, -SOv⁶NR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -N(O)m⁶, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, -C(O)NR6BR6C, -OR6A, -NR6BSO²R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR6D, -NR6BOR6D, -O CX ⁶¹³, -OCHX⁶¹², alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -SOn7R7A, -SOv7NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m⁷, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO2R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, -O CX713, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno,- CX813, -CHX¹⁴², -CH2X81, -CN, -SOn⁸R8A, -SOv⁸NR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m⁸, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO²R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -O CX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -SOn9R9A, - SOv9NR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m⁹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO2R9A, -NR9BC(O)R9D, -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -O CX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R¹y R⁶, R⁶y R⁷, R¹y R⁹, o R⁸, y R⁹se unen opcionalmente para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, R1B, R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, R2D, R3A, R3B, R3C, R3D, R4A, R4B, R4C, R4D, R5A,

R5B, R5C, R5D, R6A, R6B, R6C, R6D, R7A, R7B, R7C, R7D, R8A, R8B, R8C, R8D, R9A, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2 NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCh, -OCBr3,

-OCI3, -OCHF2, - OCHCh, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C, R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, R6B, R6C, R7B,

y X ¹¹X ²¹, X⁶¹, X ⁷¹, X ⁸¹y X ⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F; con la condición que cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁶no es -NO2; y cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido, entonces R⁹no es -NO2.

Realización ^{5 5}. Un método para tratar una enfermedad colestásica del hígado en un sujeto en necesidad del mismo, el método que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula I:

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es -O-, -NH- o -S-; n¹, n², n⁶, n⁷, n⁸, y n⁹son independientemente un entero desde ⁰hasta ⁴; m¹, m⁶, m⁷, m⁸, m⁹, v ¹, v⁶, v⁷, v⁸, y v⁹son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X ¹⁴3, -CH X1 ^, -CH2X11, -CN, -SOn1R1A, -SOv1NR1BR1C, -NHNR1BR1C, - ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A, -NR1BSO2R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX ¹⁴3, -OCHX¹⁴2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -C(O)R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -C(O)R4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D, -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -C(O)R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁶es hidrógeno, halógeno, -C X 613, -CHX612, -CH2X61, -CN, -SOn⁶R6A, -SOv⁶NR6BR6C, -NHNR6BR6C, -ONR6BR6C, -NHC(O)NHNR6BR6C, -NHC(O)NR6BR6C, -N(O)m⁶, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)OR6D, - C(O)NR6BR6C, -OR6A, -NR6BSO²R6A, -NR6BC(O)R6D, -NR6BC(O)OR6D, -NR6BOR6D, -O CX⁶¹³, -OCHX⁶¹², alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷

es hidrógeno, halógeno, CX⁷¹³-CHX⁷¹², -CH2X71, -CN, -SOn/R7A, -SOv/NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m⁷, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, NR7BSO²R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR7D, -NR7BOR7D, OCX⁷¹³-OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno,- CX813, -CHX¹¹², -CH2X81, -CN, -SOn⁸R8A, -SOv⁸NR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m⁸, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO²R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -O CX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -SOngR9A, -SOvgNR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m⁹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO2R9A, -NR9BC(O)R9D -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -O CX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R¹y R⁶, R⁶y R⁷, R¹y R⁹, o R⁸, y R⁹se unen opcionalmente para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, R1B, R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, R2D, R3A, R3B, R3C, R3D, R4A, R4B, R4A, R4D, R5A,

R5B, R5C, R5D, R6A, R6B, R6C, R6D,R7A, R7B, R7C, R7D, R8A, R8B, R8C, R8D, R9A, R9B, hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3,

-OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C, R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, R6B, R6C, R7B,

y X ¹¹, X²¹, X⁶¹, X ⁷¹, X ⁸¹y X⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F; con la condición que cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es -CH3, entonces R⁶no es -NO2; y cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es -CH3, entonces R⁹no es - NO2.

Realización ^{5 6}. Un método para tratar una enfermedad o trastorno pulmonar en un sujeto en necesidad del mismo, el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula I:

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: X es -O-, -NH- o -S-; n¹, n², n⁶, n⁷, n⁸, y n⁹son independientemente un entero desde ⁰hasta ⁴; m¹, m⁶, m⁷, m⁸, m⁹, v ¹, v⁶, v⁷, v⁸, y v⁹son cada uno independientemente ¹o ²; R¹es hidrógeno, halógeno, -C X ¹⁴3, -CH X¹⁴2, -CH2X11 , -CN, -SOn1R1A, -SOv1NR1BR1C, -NHNR1BR1C, -ONR1BR1C, -NHC(O)NHNR1BR1C, -NHC(O)NR1BR1C, -N(O)m¹, -NR1BR1C, -C(O)R1D, -C(O)OR1D, -C(O)NR1BR1C, -OR1A, -NR1BSO2R1A, -NR1BC(O)R1D, -NR1BC(O)OR1D, -NR1BOR1D, -O CX ¹⁴3, -OCHX¹⁴2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R²es hidrógeno, -C X 213, CHX212, -(CH2)n2CX213, -OR2A, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo o haloalquilo sustituido o no sustituido; R³es hidrógeno, -C(O)R3D, -C(O)NHNR3BR3C, -C(O)OR3D, -SO2R3A, C(O)NR3BR3C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁴es hidrógeno, -C(O)R4D, -C(O)NHNR4BR4C, -C(O)OR4D -SO2R4A, C(O)NR4BR4C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se unen para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁵es hidrógeno, -C(O)R5D, -C(O)NHNR5BR5C, -C(O)OR5D, -SO2R5A, C(O)NR5BR5C, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en el que R³y R⁴opcionalmente se pueden unir para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; Ra es hidrógeno, halógeno, -C X ^a1-CHX_{a , 2}, -CH2X61, -CN, -SOnaR6A, -SOvaNRaBRaC, -NHNRaBRaC, -ONRaBRaC, -NHC(O)NHNRaBRaC, -NHC(O)NRaBRaC, N(O)ma, -NR6BR6C, -C(O)R6D, -C(O)ORaD, -C(O)NRaBRaC, -ORaA, -NRaBSO²RaA, -NRaBC(O)RaD, -NRaBC(O)ORa -NR6BOR6D, -O CX⁶¹³, -OCHX⁶¹², alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁷es hidrógeno, halógeno, -C X 713, -CHX712, -CH2X71, -CN, -SOn7R7A, -SOv7NR7BR7C, -NHNR7BR7C, -ONR7BR7C, -NHC(O)NHNR7BR7C, -NHC(O)NR7BR7C, -N(O)m⁷, -NR7BR7C, -C(O)R7D, -C(O)OR7D, -C(O)NR7BR7C, -OR7A, -NR7BSO²R7A, -NR7AC(O)R7C, -NR7BC(O)OR⁷-NR7BOR7D, -O CX^7.13, -OCHX712, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁸es hidrógeno, halógeno,- CX813, -CHX⁸¹², -CH2X81, -CN, -SOn⁸R8A, -SOv⁸NR8BR8C, -NHNR8BR8C, -ONR8BR8C, -NHC(O)NHNR8BR8C, -NHC(O)NR8BR8C, -N(O)m⁸, -NR8BR8C, -C(O)R8D, -C(O)OR8D, -C(O)NR8BR8C, -OR8A, -NR8BSO²R8A, -NR8BC(O)R8D, -NR8BC(O)OR8D, -NR8BOR8D, -O CX813, -OCHX812, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R⁹es hidrógeno, halógeno, -C X 913, -CHX912, -CH2X91, -CN, -SOngR9A, -SOvgNR9BR9C, -NHNR9BR9C, -ONR9BR9C, -NHC(O)NHNR9BR9C, -NHC(O)NR9BR9C, -N(O)m⁹, -NR9BR9C, -C(O)R9D, -C(O)OR9D, -C(O)NR9BR9C, -OR9A, -NR9BSO2R9A, -NR9BC(O)R9D, -NR9BC(O)OR9D, -NR9BOR9D, -O CX913, -OCHX912, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R¹y Ra, Ra y R⁷, R¹y R⁹, o R⁸, y R⁹se unen opcionalmente para formar, junto con los átomos a los cuales se adhieren, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R1A, R1B, R1C, R1D, R2A, R2B, R2C, R2D, R3A, R3B, R3C, R3D, R4A, R4B, R4C, R4D, R5A,

R5B, R5C, R5D, RaA, RaB, RaC, RaD, R7A, R7B, R7C, R7D, R8A, R8B, R8C, R8D, R9A, R9B, R9C y R9D son independientemente hidrógeno, halógeno, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -OH, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2 NHNH2, -ONH2, -NHC(O)NHNH2, -NHC(O)NH2, -NHSO2H, -NHC(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCCl3, -OCBr3,

-OCI3, -OCHF2, -OCHCl2, -OCHBr2, -OCHI2, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; los sustituyentes R1B, R1C, R2B, R2C, R3B, R3C, R4B, R4C, R5B, R5C, RaB, RaC, R7B,

y X ¹¹, X²¹, X^{a 1}, X ⁷¹, X ⁸¹y X⁹¹son independientemente -Cl, -Br, -I o -F; con la condición que cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es -CH3, entonces Ra no es -NO2; y cuando X es -O-; R²es -(CH2)n2CX213; n²es ¹; X ²¹es flúor; R³es hidrógeno; y R⁴es -CH3, entonces R⁹no es - NO2.

Realización ^{5 7}. El método de la realización ⁵a, en el que la enfermedad o trastorno pulmonar es enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis, asma, y disfunción pulmonar inducida por el humo del cigarrillo.

Realización ^{5 8}. Un método para tratar el estreñimiento, que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto en cualquiera de las realizaciones ¹a ^{2 3}.

Realización ^{5 9}. El método de la realización ^{5 8}, que comprende adicionalmente administrar al sujeto u agente anti estreñimiento.

Realización a⁰. El método de la realización ⁵⁸o ^{5 9}, en el que el compuesto se administra por vía oral.

Realización a ¹. El método de la realización ^{5 8}, ⁵⁹o a⁰, en el que el estreñimiento es estreñimiento inducido por opiodes, estreñimiento idiopático crónico o síndrome del intestino irritable con predominio de estreñimiento.

Realización a². Un método para tratar un trastorno del ojo seco, que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto en cualquiera de las realizaciones ¹a ^{2 3}.

Realización a³. El método de la realización a², en el que el trastorno del ojo seco es un trastorno de la glándula lagrimal.

Realización a⁴. El método de la realización a²o a³, que comprende adicionalmente administrar al sujeto un agente anti-ojo seco.

Realización a⁵. Un método para aumentar la lagrimación, que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo un compuesto en cualquiera de las realizaciones ¹a ^{2 3}.

Realización ^{6 6}. Un método para activar el Regulador de Conductancia de Transmembrana de Fibrosis Quística (CFTR), que comprende poner en contacto el CFTR con un compuesto en cualquiera de las realizaciones ¹a ^{2 3}. Realización ^{6 7}. Un método para tratar una enfermedad colestásica del hígado en un sujeto en necesidad del mismo, el método que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto en cualquiera de las realizaciones ¹a ^{2 3}.

Realización ^{6 8}. Un método para tratar una enfermedad o trastorno pulmonar en un sujeto en necesidad del mismo, el método que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto en cualquiera de las realizaciones ¹a ^{2 3}.

Realización ^{6 9}. El método de la realización ^{6 8}, en el que la enfermedad o trastorno pulmonar es enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis, asma, y disfunción pulmonar inducida por el humo del cigarrillo.

Estreñimiento

¹. Ejemplo Comparativo ¹

Se realizó un cribado de alto rendimiento basado en células para ^{120 . 00 0}moléculas pequeñas sintéticas similares a fármacos. Se caracterizaron los compuestos activos para el mecanismo de acción y se probó un compuesto líder en un modelo de estreñimiento inducido por loperamida en ratones.

Se identificaron varias clases de activadores de CFTC novedosos, uno de los cuales, la fenilquinoxalinona CFTRact-J^{0 2 7}, activó por completo la conductancia del cloruro de CFTR con EC50 ^{~ 200}nM, sin causar una elevación del cAMP citoplásmico. CFTRact-J⁰²⁷administrado por vía oral normalizó la producción de heces y el contenido de agua en un modelo de estreñimiento en ratones inducido por loperamida con ED50 ~^{0 .5}mg/kg; CFTRact-J⁰²⁷no tuvo efecto en ratones con fibrosis quística que carecían de CFTR funcional. Las mediciones de corriente de cortocircuito, secreción de fluidos y motilidad en intestino de ratón indicaron una acción prosecretora de CFTRact-J⁰²⁷sin estimulación directa de la motilidad intestinal. La administración oral de ¹⁰mg/kg de CFTRact-J⁰²⁷mostró biodisponibilidad mínima, metabolismo hepático rápido y niveles en sangre ^{< 200}nM, y sin toxicidad aparente después de la administración crónica.

El CFTRact-J⁰²⁷o los activadores dirigidos a CFTR de molécula pequeña alternativos pueden ser eficaces para el tratamiento del estreñimiento.

El cribado de alto rendimiento se realizó utilizando una colección diversa de ^{120 , 000}compuestos sintéticos similares a fármacos obtenidos de ChemDiv Inc. (San Diego, California, EE.UU.) y Asinex (Winston-Salem, North Carolina, EE.UU.). Para el análisis de estructura-actividad, se probaron ^{60 0}análogos comercialmente disponibles (ChemDiv Inc.) de compuestos activos identificados en la selección primaria. Se adquirieron otros productos químicos de Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, EE.UU.) a menos que se indique lo contrario.

Síntesis de CFTRact-J⁰²⁷

A una solución de o-fenilenodiamina ⁽¹g, ^{9 .24}mmol) en DMF ^{( 30}ml) se agregó carbonato de potasio (^{2 .5}g, ^{18 .4}mmol) y bromuro de bencilo (^{0 .73}ml, ^{6 .2}mmol) luego se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con CH2Ch, se lavó con agua, se seco sobre MgSO4 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash para dar el intermedio N¹-bencilbenceno-¹,²-diamina como un líquido marrón. RMN ¹H ^{( 300}MHz, CDCla): ^{8 7}.⁴⁵- ^7.31(m, ⁵H), ⁶.⁸⁶-^{6 .6 9}(m, ⁴H), ^{4 .3 5}(s, ²H), ^{3 .50}(br, ³H); MS: m/z ¹⁹⁹(M+H). Luego, una solución del intermedio ^{( 400}mg, ²mmol) y ⁵-nitroisatina ^{( 380}mg, ²mmol) en ácido acético ^{( 5}ml) se sometió a reflujo durante ²h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el solvente se removió bajo presión reducida. El residuo se disolvió con metanol y se agregó ácido acético para cristalizar ³-(²-amino-⁵-nitrofenil)-¹-bencilquinoxalin-²(¹H)-ona (CFTRact-J^{0 2 7}) como un polvo amarillo con >^{9 9}% de pureza. r Mn ¹H ^{( 300}MHz, DMSO-d⁶): ^{8 9 .15}(d, ¹H, J = ².⁸Hz), ^{8 .07}(dd, ¹H, J = ².⁷, ^{9 .2}Hz), ^{7 .97}(dd, ¹H, J = ¹.², ^{7 .9}Hz), ^{7 .82}(brs, ²H), ⁷.⁶⁰- ^{7 .27}(m, ⁷H), ^{6 .92}(d, ¹H, J= ^{9 .2}Hz), ^{5 .59}(brs, ²H); RMN ¹³C ^{( 75}MHz, DMSO-d⁶): ^{8 155}.⁰, ¹⁵⁴.⁶, ¹⁵³.³, ¹³⁶.³, ^{1 35}.³, ^{1 32}.⁸, ^{1 32}.², ^{1 31}.⁰, ^{1 30}.⁰, ^{1 29}.⁵, ^{1 29}.¹, ^{1 27}.⁷, ¹²⁷.³, ^{1 2 6}.⁸, ^{1 24}.¹, ^{1 16}.¹, ^{1 15}.⁹, ^{1 15}.⁴, ^{4 5}.⁹; MS: m/z ³⁷³(M+H).

Cultivo de células

Se generaron células de Tiroides de Rata Fischer (FRT) que coexpresan de manera estable CFTR humano de tipo silvestre y la proteína fluorescente amarilla sensible a haluros (YFP)-H^{14 8}Q como se describió previamente [¹²]. Las células se cultivaron sobre plástico en medio Ham's F ¹²modificado por Coon suplementado con suero fetal bovino al ^{1 0}% , L-glutamina ²mM, ¹⁰⁰unidades/ml de penicilina y ¹⁰⁰pg/ml de estreptomicina. Para el cribado de alto rendimiento, las células se distribuyeron en microplacas negras de ⁹⁶pozos (Corning-Costar Corp., Corning, New York, EE.UU.) a una densidad de ^{20 , 000}células por pozo. El cribado se realizó ^{24 - 4 8}horas después de la distribución en placas.

Cribado de alto impacto

El cribado se llevó a cabo utilizando un sistema integrado Cuchilla Beckman equipado con un sistema de manipulación de líquidos y dos lectores de placas de fluorescencia FLUOstar (BMG Labtechnologies, Durham, North Carolina, EE.UU.) cada uno equipado con bombas de jeringa dual y filtros con ⁵⁰⁰± ¹⁰nm de excitación y ^{535 ± 1 5}nm de emisión (detalles en ref. ¹²). Se cultivaron células FRT que expresan CFTR e YFP a ³⁷°C/CO2 al ⁵% durante ^{24 - 48}horas después de la distribución en placas. En el momento del ensayo, las células se lavaron tres veces con solución salina tamponada con fosfato (PBS) y luego se incubaron durante ¹⁰min con ⁶⁰pl de PBS que contenía compuestos de prueba (a ¹⁰pM) y una baja concentración de forskolina ^{( 125}nM). Cada pozo se ensayó individualmente para el influjo de I- en un lector de placas al registrar la fluorescencia continuamente ^{( 200}ms por punto) durante ²s (valor de referencia) y luego durante ¹²s después de la adición rápida ^{( < 1}s) de ¹⁶⁵pl de PBS en el que Cl- ¹³⁷mM se reemplazó por I-. La tasa inicial del influjo de I- se calculó mediante el uso de regresión exponencial. Todas las placas de compuestos contenían controles negativos (vehículo DMSO) y controles positivos (forskolina ²⁰pM).

Medición de corriente de cortocircuito

La corriente de cortocircuito se midió en células FRT que expresan de forma estable CFTR humano de tipo silvestre cultivadas sobre filtros porosos como se describió [¹²]. La solución basolateral contenía NaCl ¹³⁰mM, KCl ^{2 .7}mM, KH2PO4 ^1.5mM, CaCl2 ¹mM, MgCh ^{0 .5}mM, glucosa ¹⁰mM y Na-HEPES ¹⁰mM (pH ⁷.³, ³⁷°C). En la solución apical, se reemplazó NaCl ⁶⁵mM por gluconato de Na, se aumentó el CaCh a ²mM y se permeabilizó la membrana basolateral con ²⁵⁰pg/ml de anfotericina B. Se midió la corriente de cortocircuito en colon de ratón adulto recién extraído a ³⁷°C utilizando tampón de bicarbonato de Krebs simétrico.

Ensayo de cAMP

La actividad de cAMP intracelular se midió utilizando un ensayo de luminiscencia GloSensor (Promega Corp., Madison, Wisconson, EE.UU.). Las células nulas FRT se transfectaron de forma estable con el plásmido de cAMP pGloSensor y se distribuyeron en microplacas blancas de ⁹⁶pozos y se cultivaron hasta la confluencia. Las células se lavaron tres veces con PBS y se incubaron con CFTRact-J^{027 5}pM durante ¹⁰min en ausencia y presencia de forskolina ¹⁰⁰nM. El cAMP se ensayó de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Farmacocinética

Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la UCSF. Se trataron ratones CD ¹hembra con ¹⁰mg/kg de CFTRact-J⁰²⁷(solución salina que contenía DMSO al ⁵% y Kolliphor HS ¹⁵al ¹⁰% ) ya sea por vía intraperitoneal (ip) u oral. La sangre se recolectó a los ¹⁵, ^{3 0}, ^{6 0}, ^{1 50}, ²⁴⁰y ^{36 0}min después del tratamiento mediante punción orbital y se centrifugó a ^{500 0}rpm durante ¹⁵min para separar el plasma. Las muestras de plasma ^{( 60}pl) se mezclaron con ³⁰⁰pl de acetonitrilo y se centrifugaron a ¹³⁰⁰⁰rpm durante ²⁰min, y se utilizaron ⁹⁰pl del sobrenadante para LC/MS. El sistema de solventes consistía en un gradiente lineal de acetonitrilo al ⁵a ⁹⁵% durante ¹⁶min (flujo de ^{0 .2}ml/min). Los espectros de masas se adquirieron en un espectrómetro de masas (Waters ²⁶⁹⁵y Micromass ZQ) utilizando ionización por electropulverización (+), rango de masas desde ¹⁰⁰hasta ¹⁵⁰⁰Da, voltaje de cono ⁴⁰V. Se prepararon estándares de calibración en plasma a partir de ratones no tratados a los que se les agregó cantidades conocidas de CFTRact-J^{0 2 7}.

Estabilidad metabólica in vitro

Se incubó CFTRact-J^{027 ( 5}mM) durante tiempos específicos a ³⁷°C con microsomas de hígado de ratón ⁽¹mg de proteína/ml; Sigma-Aldrich) en tampón de fosfato de potasio ^{( 100}mM) que contenía NADPH ¹mM, como se describió [¹³]. A continuación, la mezcla se enfrió sobre hielo y se agregaron ^{0 .5}ml de acetato de etilo enfriado con hielo. Las muestras se centrifugaron durante ¹⁵min a ³⁰⁰⁰rpm, el sobrenadante se evaporó hasta secado y el residuo se disolvió en ¹⁰⁰pl de fase móvil (acetonitrilo:agua, ³:¹) para LC/MS y se ensayó como se describió anteriormente. Modelo de estreñimiento de murino

Se administró loperamida (^{0 .3}mg/kg, ip, Sigma-Aldrich) a ratones hembra CD ¹(de ⁸a ¹⁰semanas de edad) para producir estreñimiento. Se proporcionaron varias cantidades de CFTRact-J⁰²⁷(⁰.¹, ⁰.³, ¹, ³y ¹⁰mg/kg) al mismo tiempo (para administración ip) o ¹h antes (para administración oral) de loperamida. Los ratones de control se trataron solo con vehículo. Algunos ratones fueron tratados por vía oral con lubiprostona (^{0 .5}mg/kg, Sigma-Aldrich) o linaclotida (^{0 .5}mg/kg, Toronto Research Chemicals Inc., Toronto, Ontario, Canadá). Después de la inyección de loperamida, los ratones se colocaron individualmente en jaulas metabólicas con comida y agua ad libitum. Se recolectaron muestras de heces durante ³h y se cuantificó el peso total de las heces y el número de gránulos fecales. Para medir el contenido de agua en las heces, las muestras de heces se secaron a ⁸⁰°C durante ²⁴h y el contenido de agua se calculó como [peso húmedo-peso seco]/peso húmedo. Se realizaron estudios similares en ratones con fibrosis quística (CF) (AF⁵⁰⁸homocigotos) que carecían de CFTR funcional. Se realizaron algunos estudios utilizando el análogo químicamente similar pero inactivo de CFTRact-J^{0 2 7}, ³-(²-amino-⁵-nitrofenil)-¹-(metil)-²(¹H)-quinoxalinona. Tránsito intestinal in vivo y contractilidad intestinal ex vivo

Se determinó el tiempo de tránsito del intestino completo utilizando un marcador administrado por vía oral ^{( 200}pl, Azul de Evans al ⁵% , goma arábiga al ⁵% ) y midiendo el tiempo de su aparición en las heces. A los ratones se les administró loperamida y CFTRact-J^{027 ( 10}mg/kg) o vehículo por vía intraperitoneal en el tiempo cero. Para las mediciones de contractilidad ex vivo, los ratones se sacrificaron mediante sobredosis de avertin ^{( 200}mg/kg, ²,²,²-tribrometanol, Sigma-Aldrich) y se aislaron segmentos de íleon y colon de ^{~ 2}cm de longitud y se lavaron con tampón Krebs-Henseleit. Los extremos de los segmentos intestinales se ataron, se conectaron a un transductor de fuerza (Biopac Systems, Goleta, CA, EE.UU.) y los tejidos se transfirieron a una cámara de órganos (Biopac Systems) que contenía tampón Krebs-Henseleit a ³⁷°C aireado con O2 al ⁹⁵% , CO2 al ⁵% . El íleon y el colon se estabilizaron durante ⁶⁰min con tensiones de reposo de ^{0 .5}y ^{0 .2}g respectivamente, y las soluciones se cambiaron cada ¹⁵min. Se registraron los efectos de CFTRact-J⁰²⁷sobre las contracciones intestinales isométricas de referencia y suprimidas con loperamida.

Secreción y absorción intestinal in vivo

A los ratones (de tipo silvestre o CF) se les dio acceso a agua con dextrosa al ⁵% pero no alimento sólido durante ²⁴h antes de los experimentos. Los ratones se anestesiaron con isoflurano y la temperatura corporal se mantuvo durante la cirugía a ^{36 - 38}°C utilizando una almohadilla térmica. Se realizó una pequeña incisión abdominal para exponer el intestino delgado, y se aislaron mediante suturas asas de yeyuno medio cerradas (longitud ^{2 - 3}cm). Las asas se inyectaron con ¹⁰⁰j l de vehículo solo o ¹⁰⁰|jg de CFTRact-J⁰²⁷en vehículo. La incisión abdominal se cerró con suturas y se permitió que los ratones se recuperaran de la anestesia. Se retiraron las asas intestinales a los ⁹⁰min y se midieron la longitud y el peso de las asas para cuantificar la secreción de fluido. La absorción intestinal se midió en ratones CF (para evitar la secreción) como se describió anteriormente, excepto que las asas se retiraron a los ⁰o ³⁰min. La absorción se calculó como ¹-(peso del asa a los ⁰min - peso del asa a los ³⁰min)/peso del asa a los ⁰min. Estudios de toxicidad y administración crónica

Se administró a los ratones ¹⁰mg/kg de CFTRact-J⁰²⁷o vehículo por vía oral una vez al día durante ⁷días. Una hora después de la dosis final, los ratones se trataron con loperamida (^{0 .3}mg/kg, ip) y se recolectaron las heces durante ³h. La toxicidad in vivo se evaluó en estos ratones al medir la relación de peso húmedo/seco de los pulmones, recuento sanguíneo completo (HEMAVET ^{9 5 0}FS, Drew Scientific Inc., Florida, E e .UU.) y química sérica (Idexx Laboratories Inc., Sacramento, California, EE.UU.) ⁴h después de la última dosis de CFTRact-J^{0 2 7}. La citotoxicidad in vitro se midió en células FRT incubadas con CFTRact-J^{02 7 25}jM durante ⁸y ²⁴h. La citotoxicidad se midió mediante el ensayo Azul Alamar de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Invitrogen, Carlsbad, California, EE.UU.).

Análisis estadístico

Los experimentos con dos grupos se analizaron con la prueba t de Student, cuando hay ³grupos o más análisis se realizó con análisis de varianza de una vía y prueba de comparaciones múltiples post-hoc Newman-Keuls. P< ^{0 .05}se tomó como estadísticamente significativo.

Ojo seco

². Ejemplo comparativo ²

Ratones

Se criaron ratones de tipo silvestre (WT) y CF (mutante AF^{5 08}-CFTR homocigoto) en un antecedente genético C D ¹en la Instalación para Animales de la Universidad de California en San Francisco (UCSF). Se utilizaron ratones de ⁸a ¹²semanas de edad ^{( 25}a ³⁵g). Se adquirieron ratones hembra BALB/c (^{7 - 8}semanas de edad) de1Harlan Laboratory (Livermore, CA, EE.UU.). Los protocolos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la UCSF y de conformidad con la Declaración ARVO para el Uso de Animales en la Investigación Oftálmica y de la Visión.

Corriente de cortocircuito

Se cultivaron células de tiroides de rata Fischer (FRT) que expresaban de forma estable CFTR humano de tipo silvestre en insertos Snapwell (Corning Costar, Corning NY, EE.UU.) para mediciones de corriente de cortocircuito (Isc). Después de ^{6 - 9}días en cultivo, cuando la resistencia transepitelial era ^{> 1 00 0}Q/cm², los insertos se montaron en un sistema de cámara Ussing (World Precision Instruments, Sarasota, FL, EE.UU.). La solución basolateral contenía NaCl ¹³⁰mM, KCl ^{2 .7}mM, KH2PO4^1.5mM, CaCh ¹mM, MgCh ^{0 .5}mM, glucosa ¹⁰mM y Na-HEPES ¹⁰mM (pH ⁷.³). En la solución de baño apical, se reemplazó NaCl ⁶⁵mM por gluconato de Na y se aumentó el CaCh a ²mM. Ambas soluciones se burbujearon con aire y se mantuvieron a ³⁷°C. La membrana basolateral se permeabilizó con ²⁵⁰jg/ml de anfotericina B (^{2 6}, ^{2 7}). Las semicámaras se conectaron a una pinza de voltaje DVC^{- 1 000}a través de electrodos Ag/AgCl y puentes de agar KCl ³M para el registro de Isc.

Ensayos de cAMP y citotoxicidad

La actividad de cAMP intracelular se midió utilizando un ensayo de luminiscencia GloSensor (Promega Corp., Madison, Wl, EE.UU.). Las células FRT transfectadas de forma estable con el plásmido cAMP pGloSensor (Promega Corp.) se cultivaron en microplacas blancas de ⁹⁶pozos (Corning Costar) durante la noche. A continuación, las células se lavaron tres veces con PBS y se incubaron con compuesto de prueba ⁵jM durante ¹⁰min en ausencia y presencia de forskolina ¹⁰⁰nM. Para ensayar la citotoxicidad, las células FRT se cultivaron durante la noche en pozos de microplaca Costar negros de ⁹⁶pozos y se incubaron con compuestos de prueba hasta ¹⁰⁰jM (la máxima solubilidad en PBS) durante ¹o ²⁴h. La citotoxicidad se midió mediante el ensayo Azul Alamar de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.).

Mediciones de la diferencia de potencial de la superficie ocular

La PD transepitelial de circuito abierto se midió continuamente en ratones anestesiados en respuesta a perfusiones en serie de diferentes soluciones sobre la superficie ocular, como se describe (^{2 1}). Los ratones se anestesiaron con Avertin (²,²,²-tribromoetanol, ¹²⁵mg/kg por vía intraperitoneal, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE.UU.), y la temperatura central se mantuvo a ³⁷°C utilizando una almohadilla térmica. Los ojos se orientaron con la córnea y la conjuntiva mirando hacia arriba y se expusieron al retraer el párpado con fórceps de acción cruzada. Las soluciones eran isosmolares ^{( 320}± ¹⁰mOsM; composiciones proporcionadas en la ref. ^{2 1}) y contenían ¹⁰p^ □ de indometacina para evitar la activación de CFTR por las prostaglandinas. La superficie ocular se perfundió a ⁶ml/min a través de un tubo de plástico utilizando un sistema de válvula de manguito de gravedad con múltiples depósitos (ALA Scientific, Westbury, NY, EE.UU.) y una bomba peristáltica de flujo variable (modelo de flujo medio; Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EE.UU.) Se fijó un catéter sonda a ¹mm por encima de la córnea utilizando un microposicionador y se colocó una cánula de succión a ³mm de la órbita. El electrodo de medición estaba en contacto con el catéter de perfusión y conectado a un voltímetro de alta impedancia (IsoMilivolt Meter; WPI). El electrodo de referencia se conectó a tierra a través de una aguja alada de calibre ²¹llena de solución salina isosmolar y se insertó por vía subcutánea en el abdomen. Los electrodos de medición y referencia consistieron en Ag/AgCl con puentes de agar KCl ³M.

Secreción lagrimal

Para medir la producción de lágrimas no estimuladas, se colocaron hilos de rojo fenol (Zone-Quick, Oasis Medical, Glendora, CA, EE.UU.) durante ¹⁰s en los cantos laterales de ratones anestesiados con isofluorano utilizando fórceps de joyero. El volumen lagrimal se midió como la longitud del hilo humedecido, tal como se visualiza bajo un microscopio de disección. Se utilizaron mediciones en serie para evaluar la farmacodinámica del compuesto después de la aplicación de gotas de ²pl de formulaciones del compuesto (compuesto ^{50 - 100}pM en PBS que contenía polisorbato al ^{0 .5}% y DMSO al ^{0 .5}% ) en comparación con el vehículo.

Tinción con verde lisamina

Para evaluar la disrupción del epitelio corneal, se aplicaron ⁵pl de tinte verde lisamina (LG) ⁽¹% ) a la superficie ocular de ratones anestesiados con isofluorano. Las fotografías del ojo se tomaron con una cámara digital Nikon adaptada a un Microscopio Estéreo con zoom Olympus (Olympus, Center Valley, PA, EE.UU.). Cada cuadrante de la córnea fue puntuado en una escala de ³puntos por un observador ciego entrenado, clasificando la extensión de la tinción en cada cuadrante como: ⁰, sin tinción; ¹, tinción esporádica (que afecta a ^{< 25}% de la superficie total); grado ², tinción punteada difusa (^{25 - 75}%); y grado ³, tinción punteada coalescente ^{( > 75}%). El grado total se informa como la suma de las puntuaciones de todos los cuatro cuadrantes, que varían desde ⁰hasta ¹².

Farmacocinética y distribución de tejidos

Para determinar el tiempo de residencia de los activadores de CFTR en la película lagrimal de ratón preocular, los compuestos se recuperaron para cromatografía líquida/espectroscopia de masas (LC/MS) después del suministro oftálmico de una sola dosis. Se recuperaron tres lavados de ojos ^{( 3}pl de PBS cada uno) de los cantos lateral y medial con tubos microcapilares de ⁵pl (Drummond Scientific Co., Broomhall, PA, EE.UU.) después del parpadeo de los párpados manual (⁹). Los lavados agrupados se diluyeron con acetonitrilo/agua (¹:¹) que contenía ácido fórmico al ^0.1% y se analizaron por LC/MS utilizando una columna Xterra MS C ¹⁸(^2.1mm x ¹⁰⁰mm, tamaño de partícula de ^{3 .5}pm) conectada a un solvente Waters ^{269 5}HPLC y un espectrómetro de masas Waters Micromass ZQ con ionización por electropulverización positiva.

Para estudiar la acumulación de compuestos en tejidos sistémicos, se analizaron sangre, cerebro, riñón e hígado de ratón después de ¹⁴días de dosificación tópica tres veces al día (^0.1nmol, ²pl, ⁵⁰pM). Se recolectaron muestras de sangre del ventrículo izquierdo en minitubos K³EDTA (Greiner, Kremsmunster, Austria) y se centrifugaron (^{2 8}). El sobrenadante se extrajo con un volumen igual de acetato de etilo y el extracto se secó con una corriente de aire. Los órganos de los ratones tratados y de control se extrajeron después de perfusión ventricular con PBS heparinizado ^{( 10}unidades/ml), se pesaron, se mezclaron con ácido acético y agua ^{( 100}pl/g de tejido) y se homogeneizaron (^{2 9}). Se agregó acetato de etilo ^{( 10}ml/g de tejido), las muestras se agitaron en vórtex y centrifugaron ^{( 300 0}rpm durante ¹⁵min) y se evaporó el sobrenadante que contenía acetato de etilo. Los residuos obtenidos a partir de extractos orgánicos de suero y homogeneizados de órganos luego se reconstituyeron y analizaron mediante LC/MS como se describió anteriormente.

Modelo de ratón con ojo seco producido por escisión de glándula lagrimal

Se adaptó un modelo de escisión de glándula lagrimal (LGE) de ojo seco acuoso deficiente a partir de un método informado (^{3 0}). La glándula lagrimal extraorbitaria se expuso a cada lado de ratones BALB/c hembra de tipo silvestre (^{7 - 8}semanas de edad) mediante incisiones cutáneas lineales de ³mm. Se cauterizaron los ductos lagrimales y se extirpó toda la glándula bilateralmente, evitando vasos y nervios faciales. Cada una de las incisiones se cerró con una única sutura de seda ^{6 - 0}interrumpida. El tejido lagrimal orbitario permaneció funcional. Se excluyeron los ojos con sensibilidad corneal reducida ^{( < 5}% de los ratones estudiados), identificados a partir de úlceras corneales neurotróficas dentro de ¹día de LGE. Los ratones se aleatorizaron para recibir tratamiento (en ambos ojos) con CFTRact-K⁰⁸⁹(^0.1nmol) o vehículo. Los ratones se trataron tres veces al día ^{( 8}AM, ²PM y ⁸PM) durante ²semanas comenzando el Día ¹después de LGE. La secreción lagrimal y la tinción de LG se realizaron inmediatamente antes y una hora después de la dosis inicial en los días ⁴, ¹⁰y ¹⁴después de la LGE.

Estadísticas

Los datos se expresan como la media ± error estándar de la media (EEM). Para las comparaciones directas entre dos medias, se utilizó la prueba t de Student bilateral. Para las mediciones longitudinales de la secreción lagrimal y las puntuaciones de LG en el estudio de prevención del ojo seco, se utilizó una regresión lineal de efectos mixtos, que ajusta la no independencia de las mediciones tomadas en el mismo ojo y en ambos ojos del mismo animal. El análisis se realizó en R v.^{3 .2}para Mac (R Foundation for Statistical Computing, Viena, Austria), utilizando los paquetes lme⁴y robustlmm.

Caracterización de activadores de CFTR de molécula pequeña

Un cribado funcional de alto rendimiento basado en células de ^{120 , 000}compuestos a ¹⁰pM identificó ²⁰clases químicas de activadores de molécula pequeña de CFTR de tipo silvestre que produjeron ^{> 95}% de la activación máxima de CFTR. El cribado se realizó en células epiteliales FRT que coexpresaban CFTR de tipo silvestre humano y un sensor de haluro de YFP citoplásmico en formato de ⁹⁶pozos (^{2 6}, ^{3 1}, ^{3 2}). El cribado secundario implicó la medición de Isc en células FRT que expresan CFTR tratadas previamente con forskolina submáxima ^{( 50}nM). Veintiún compuestos de ocho clases químicas produjeron grandes aumentos en Isc a ¹p ^ ^{( > 75}% de la corriente máxima producida por forskolina ²⁰mM). Se proporciona un resumen de los valores EC50 y Vmáx para cada compuesto en la FIG. ⁷.

Las estructuras de los activadores de las cuatro clases químicas más activas se muestran en la FIG. ²A, junto con los correspondientes datos de dependencia de la concentración de las mediciones de Isc. Cada compuesto activó por completo el CFTR, ya que una alta concentración de forskolina produjo un pequeño aumento adicional en Isc, y el aumento en Isc fue completamente inhibido por un inhibidor de CFTR, CFTRinh-^{17 2}. Los valores de EC50 variaron desde ²⁰hasta ³⁵⁰nM (FIG. ²B). VX^{- 770}mostró una actividad relativamente débil contra CFTR de tipo silvestre (FIG.

²C). CFTRact-K⁰³²y CFTRact-K⁰⁸⁹mostraron una activación de CFTR incompleta ^{( ~ 50}% Vmáx).

Se buscaron compuestos que se dirijan directamente a CFTR sin provocar una elevación del cAMP celular para minimizar los posibles efectos fuera de la diana (FIG. ²D). Los compuestos que producen elevaciones en cAMP intracelular (de las Clases O, Q y R), probablemente por inhibición de la fosfodiesterasa, se excluyeron de una consideración adicional. Se seleccionaron compuestos de potencia nanomolar de las Clases B, J y K, que no aumentaban el cAMP, para caracterización adicional en ratones vivos.

Los activadores de CFTR aumentan el cloruro de la superficie ocular y la secreción de fluidos in vivo

Se utilizó un método de diferencia de potencial (PD) de circuito abierto desarrollado en nuestro laboratorio para evaluar la actividad del compuesto en la superficie ocular in vivo, como se representa en la FIG. ³A (^{2 1}). La función del canal de Cl- se cuantificó al medir la DP durante la perfusión continua de la superficie ocular con una serie de soluciones que imponían un gradiente de Cl- transepitelial y contenían varios agonistas y/o inhibidores del canal. Primero se perfundió la superficie ocular con solución salina isosmolar para registrar la PD de referencia. Luego se agregó amilorida al perfundido, seguido de intercambio a una solución baja en Cl- en la que Cl- está con un anión impermeable, gluconato. Estas maniobras permiten la visualización directa de la activación de CFTR en respuesta a la adición de activadores de CFTR candidatos.

La FIG. ³B muestra grandes hiperpolarizaciones después de la exposición a CFTRact-B^{0 7 4}, CFTRact-J⁰²⁷y CFTRact-K^{0 8 9}, que aumentaron relativamente poco con forskolina y fueron revertidas por CFTRinh-^{1 72}. En comparación, VX-⁷⁷⁰produjo cambios mínimos en la PD de la superficie ocular (FIG. ³C). FlG. ³D resume los datos de PD para los activadores indicados, con datos para compuestos adicionales informados en la FlG. ⁷. Los estudios de control realizados en ratones CF que carecían de CFTR funcional no mostraron cambios en la PD tras la adición de cada uno de los compuestos probados, mostrándose una curva representativa para CFTRact-K⁰³²(FlG. ³E).

Los activadores de CFTR se probaron a continuación en cuanto a su eficacia para aumentar la producción de lágrimas en ratones. Los experimentos preliminares identificaron una formulación oftálmica estándar (polisorbato al ^{0 .5}% ) que aumentaba la solubilidad del compuesto y la duración de la acción. Después de una dosis tópica única, los activadores indirectos de CFTR, toxina del cólera, forskolina y ³-isobutil-¹-metilxantina (IBMX) aumentaron sustancialmente la secreción lagrimal basal a los ³⁰min, pero estos efectos fueron transitorios e indetectables después de ²horas (FlG.

⁴A). Sin embargo, los activadores de CFTR directos identificados en el presente documento, cFTRact-B^{0 7 4}, CFTRact-J⁰²⁷y CFTRact-K^{0 8 9}, aumentaron la secreción de fluido lagrimal aproximadamente al doble durante al menos cuatro horas. VX ^{- 770}produjo poca secreción lagrimal (FlG. ⁴B). Las administraciones tópicas repetidas (tres veces al día durante un máximo de ²semanas) produjeron hipersecreción lagrimal sostenida sin taquifilaxia (FlG. ⁴C). Los activadores de CFTR no aumentaron la secreción de fluido lagrimal en ratones con CF, lo que demuestra el direccionamiento selectivo de CFTR (FlG. ⁴D).

Toxicidad y farmacocinética

Los métodos de recolección de lágrimas se validaron al demostrar la recuperación reproducible de tetrametilrodamina dextrano ^{( 3}kDa) de la superficie ocular hasta seis horas después de la instilación. La farmacocinética de CFTRac-K⁰⁸⁹en la superficie ocular se determinó mediante LC/MS de lavados de lágrimas recuperados. Después de la instilación de ^0.1nmol de CFTRact-K^{089 ( 2}jl, ⁵⁰j M) en la superficie ocular, se recuperaron ^{7 .9}± ^{2 .4}pmol y ^{0 .011}± ^{0 .004}pmol a los cinco minutos y seis horas, respectivamente (FIG. ⁵A). La cantidad de CFTRact-K⁰⁸⁹requerida para la activación de CFTR al ⁵⁰% (EC50 ~ ²⁵⁰nM) se encuentra entre las líneas discontinuas, lo que refleja las concentraciones calculadas a partir de los volúmenes de lágrimas normales informados más alto y más bajo en ratones (^{3 3}, ^{3 4}). La cantidad de CFTRact-K⁰⁸⁹recuperada del fluido lagrimal predice niveles terapéuticos durante al menos seis horas. No se pudo medir la farmacocinética del fluido lagrimal de CFTRact-J⁰²⁷porque la sensibilidad de LC/MS era baja para este compuesto.

Después de dos semanas de dosificación tres veces al día, las cantidades de CFTRact-K⁰⁸⁹y CFTRact-J⁰²⁷estaban por debajo de los límites de detección ^{( ~ 10}y ^{~ 700}fmol, respectivamente) en sangre, cerebro, hígado y riñón de ratón, lo que indica mínima acumulación sistémica. Los ratones tratados crónicamente no mostraron signos de toxicidad ocular, según lo evaluado mediante evaluación con lámpara de hendidura para hiperemia conjuntival, inflamación de cámara anterior y claridad del cristalino. La tinción de l G no mostró disrupción del epitelio corneal o conjuntival (FIG.

⁵B). Los compuestos tampoco produjeron citotoxicidad in vitro apreciable en cultivos celulares a concentraciones de hasta ¹⁰⁰j M (Fig. ⁵C).

El activador de CFTR previene el ojo seco en un modelo de escisión de glándula lagrimal en ratones

Sobre la base de su farmacocinética favorable de la película lagrimal, se seleccionó CFTRact-K⁰⁸⁹para probar en un modelo de ratón con ojo seco acuoso deficiente producido por LGE. Después de LGE extraorbital en ratones BALB/c, los ratones tratados con CFTRact-K⁰⁸⁹(^0.1nmol, administrado tres veces al día) mantuvieron el volumen lagrimal basal, mientras que el volumen lagrimal de los ratones tratados con vehículo se redujo significativamente en todos los puntos de tiempo posteriores (FIG. ⁶A), y durante al menos ³⁰días. De manera similar a lo que se informó en ratones C ⁵⁷/bl⁶(^{3 0}), la disminución de la lagrimación en ratones BALB/c tratados con vehículo se asoció con una disrupción epitelial progresiva desde el Día ⁰hasta el Día ¹⁴, que se muestra pictóricamente (FIG. ⁶B superior) y cuantitativamente (FIG. ⁶C). CFTRact-K⁰⁸⁹no solo restauró la secreción lagrimal en ratones LGE sino que evitó notablemente la disrupción del epitelio de la superficie ocular en todos los puntos de tiempo (FIG. ⁶B inferior, C). Los ojos tratados con vehículo desarrollaron una epiteliopatía corneal progresiva y difusa (aumento de la puntuación LG de ^{7 .3}± ^{0 .6}en el Día ¹⁴), mientras que los ojos tratados con CFTRact-K⁰⁸⁹tenían una tinción mínima de LG en todos los puntos temporales (cambio de la puntuación LG, - ^{0 .6}± ⁰.⁶).

Ejemplo Comparativo ³- Estreñimiento II

Resumen. Antecedentes y objetivos: el estreñimiento es un problema clínico común que afecta negativamente la calidad de vida y se asocia con costes significativos de atención médica. La activación del canal de cloruro del regulador de transmembrana de fibrosis quística (CFTR) es la ruta principal que impulsa la secreción de fluido en el intestino, lo que mantiene la lubricación del contenido luminal. Presumimos que la activación directa de CFTR provocaría la secreción de fluidos y revertiría la deshidratación excesiva de las heces que se encuentra en el estreñimiento. Métodos: Se realizó un cribado de alto rendimiento basado en células para ^{120 , 000}moléculas pequeñas sintéticas similares a fármacos. Se caracterizaron los compuestos activos para el mecanismo de acción y se probó un compuesto líder en un modelo de estreñimiento inducido por loperamida en ratones. Resultados: Se identificaron varias clases de activadores de CFTC novedosos, uno de los cuales, la fenilquinoxalinona CFTRact-J^{0 2 7}, activó por completo la conductancia del cloruro de CFTR con EC50 ^{~ 200}nM, sin causar una elevación del cAMP citoplasmático. El CFTRact-J⁰²⁷administrado por vía oral normalizó la producción de heces y el contenido de agua en un modelo de estreñimiento en ratones inducido por loperamida con ED50 ~^{0 .5}mg/kg; el CFTRact-J⁰²⁷no tuvo efecto en ratones con fibrosis quística que carecían de CFTR funcional. Las mediciones de corriente de cortocircuito, secreción de fluidos y motilidad en intestino de ratón indicaron una acción prosecretora de CFTRact-J⁰²⁷sin estimulación directa de la motilidad intestinal. La administración oral de ¹⁰mg/kg de CFTRact-J⁰²⁷mostró biodisponibilidad mínima, metabolismo hepático rápido y niveles en sangre ^{< 200}nM, y sin toxicidad aparente después de la administración crónica. Conclusiones: el CFTRact-J⁰²⁷o los activadores dirigidos a CFTR de molécula pequeña alternativos pueden ser eficaces para el tratamiento del estreñimiento.

Introducción.

El estreñimiento es una queja clínica común en adultos y niños que afecta negativamente la calidad de vida. Se ha estimado que la prevalencia del estreñimiento crónico es del ¹⁵% en la población de EE.UU., con costes anuales de atención médica estimados en ^{~ 7}mil millones de dólares con ^{> 8 00}millones de dólares gastados en laxantes [¹, ²]. El pilar de la terapia del estreñimiento incluye laxantes que aumentan el volumen de las heces, tal como la fibra soluble; crear una carga osmótica, tal como el polietilenglicol; o estimular la contracción intestinal, tal como los difenilmetanos. También existen laxantes de superficie que ablandan las heces como el docusato de sodio y probióticos tales como el Lactobacillus paracasei [³]. El fármaco linaclotida aprobado por la FDA, un péptido agonista del receptor de guanilato ciclasa C, actúa al inhibir el dolor visceral, estimular la motilidad intestinal y aumentar la secreción intestinal [⁴, ⁵]. Se cree que un segundo fármaco aprobado, la lubiprostona, un análogo de la prostaglandina E, activa un supuesto canal ClC ^{- 2}de entericitos [⁶], aunque los datos mecanicistas son menos claros. A pesar del amplio rango de opciones terapéuticas, subsiste la necesidad continua de fármacos seguros y eficaces para tratar el estreñimiento.

La secreción de fluido intestinal implica la secreción activa de Cl- a través del epitelio del enterocito a través del cotransportador de Na+/K+/²Cl' de la membrana basolateral (NKCC¹) y el canal de Cl- del regulador de transmembrana de fibrosis quística de la membrana luminal (CFTR) y el canal de Cl- activado por Ca2+ (CaCC). Las fuerzas electroquímicas y osmóticas creadas por la secreción de Cl- impulsan la secreción de Na+ y agua. [⁷]. En el cólera y la diarrea del viajero, CFTR es fuertemente activado por enterotoxinas bacterianas a través de la elevación de nucleótidos cíclicos intracelulares. [⁸, ⁹]. CFTR es una diana atractiva para aumentar la secreción de fluido intestinal en el estreñimiento, ya que se expresa fuertemente en todo el intestino y su activación aumenta fuertemente la secreción del fluido intestinal. Es poco probable que un activador que se dirija directamente a CFTR produzca la secreción masiva e incontrolada del fluido intestinal que se observa en el cólera porque las enterotoxinas en el cólera actúan de manera irreversible para producir una elevación sostenida del cAMP citoplasmático, que no solo activa CFTR sino también los canales de K+ basolaterales, que aumentan la fuerza de impulsión electroquímica para la secreción de Cl-; las enterotoxinas del cólera también inhiben el intercambiador luminal NHE³Na+/H+ implicado en la absorción del fluido intestinal. [¹⁰, ¹¹].

Motivados por estas consideraciones y la necesidad continua de una terapia farmacológica segura y eficaz para el estreñimiento, en el presente documento informamos la identificación y caracterización de un activador de molécula pequeña dirigido a CFTR de potencia nanomolar, y proporcionamos una prueba de concepto para su acción prosecretora en el intestino y eficacia en el estreñimiento.

Métodos.

Materiales. El cribado de alto rendimiento se realizó utilizando una colección diversa de ^{120 , 000}compuestos sintéticos similares a fármacos obtenidos de ChemDiv Inc. (San Diego, California, EE.UU.) y Asinex (Winston-Salem, North Carolina, EE.UU.). Para el análisis de estructura-actividad, se probaron ⁶⁰⁰análogos disponibles comercialmente (ChemDiv Inc.) de compuestos activos identificados en el cribado primario. Se adquirieron otros productos químicos de Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, EE.UU.) a menos que se indique lo contrario.

Síntesis de CFTRact-J^{0 2 7}. A una solución de o-fenilenodiamina ⁽¹g, ^{9 .24}mmol) en DMF ^{( 30}ml) se agregó carbonato de potasio (^{2 .5}g, ^{18 .4}mmol) y bromuro de bencilo (^{0 .73}ml, ^{6 .2}mmol) luego se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con CH2Ch, se lavó con agua, se seco sobre MgSO4 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash para dar el intermedio N¹-bencilbenceno- ¹,²-diamina como un líquido marrón. RMN ¹H ^{( 300}MHz, CDCla): ^{8 7}.⁴⁵- ^7.31(m, ⁵H), ⁶.⁸⁶-^{6 .69}(m, ⁴H), ^{4 .35}(s, ²H), ^{3 .50}(br, ³H); MS: m/z ¹⁹⁹(M+H). Luego, una solución del intermedio ^{( 400}mg, ²mmol) y ⁵-nitroisatina ^{( 380}mg, ²mmol) en ácido acético ^{( 5}ml) se sometió a reflujo durante ²h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el solvente se removió bajo presión reducida. El residuo se disolvió con metanol y ácido acético se agregó para cristalizar ³-(²-amino- ⁵-nitrofenil)-¹-bencilquinoxalin-²(¹H)-ona (CFTRact-J^{0 2 7}) como un polvo amarillo con >⁹⁹% de pureza. RMN ¹H ^{( 300}MHz, DMSO-d⁶): ^{8 9 .15}(d, ¹H, J = ².⁸Hz), ^{8 .07}(dd, ¹H, J= ².⁷, ^{9 .2}Hz), ^{7 .97}(dd, ¹H, J = ¹.², ^{7 .9}Hz), ^{7 .82}(brs, ²H), ⁷.⁶⁰- ^{7 .27}(m, ⁷H), ^{6 . 92}(d, ¹H, J = ^{9 .2}Hz), ^{5 .59}(brs, ²H); RMN ¹³C ^{( 75}MHz, DMSO-d⁶): ^{8 1 55}.⁰, ^{1 54}.⁶, ^{1 53}.³, ^{1 36}.³, ^{1 35}.³, ^{1 32}.⁸, ^{1 32}.², ^{1 31}.⁰, ^{1 30}.⁰, ^{1 29}.⁵, ^{1 29}.¹, ^{1 27}.⁷, ^{1 27}.³, ^{1 26}.⁸, ¹²⁴.¹, ^{11 6}.¹, ^{11 5}.⁹, ^{11 5}.⁴, ^{4 5}.⁹; MS: m/z ³⁷³(M+H).

Cultivo celular. Se generaron células de Tiroides de Rata Fischer (FRT) que coexpresan de manera estable CFTR humano de tipo silvestre y la proteína fluorescente amarilla sensible a los haluros (YFP) -H ^{1 48}Q como se describió anteriormente [¹²]. Las células se cultivaron en plástico en medio Ham's F ¹²modificado por Coon complementado con suero fetal bovino al ¹⁰% , L-glutamina ²mM, ¹⁰⁰unidades/ml de penicilina y ¹⁰⁰□ g/ml de estreptomicina. Para el cribado de alto rendimiento, las células se distribuyeron en microplacas negras de ⁹⁶pozos (Corning-Costar Corp., Corning, New York, EE.UU.) a una densidad de ^{20 , 0 00}células por pozo. El cribado se realizó ^{24 - 48}horas después de la distribución en placas.

Cribado de alto rendimiento. El cribado se llevó a cabo utilizando un sistema integrado de Cuchilla Beckman equipado con un sistema de manipulación de líquidos y dos lectores de placas de fluorescencia FLUOstar (BMG Labtechnologies, Durham, North Carolina, EE.UU.), cada uno equipado con bombas de jeringa dual y filtros de ^{500 ± 1 0}nm de excitación y de ^{535 ± 1 5}nm (detalles en ref. ¹²). Se cultivaron células FRT que expresan CFTR e YFP a ³⁷°C/CO2 al ⁵% durante ^{24 - 48}horas después de la distribución en placas. En el momento del ensayo, las células se lavaron tres veces con solución salina tamponada con fosfato (PBS) y luego se incubaron durante ¹⁰min con ⁶⁰|jl de PBS que contenía compuestos de prueba (a ¹⁰jM) y una baja concentración de forskolina ^{( 125}nM). Cada pozo se analizó individualmente para el influjo de I- en un lector de placas registrando la fluorescencia continuamente ^{( 200}ms por punto) durante ²s (valor de referencia) y luego durante ¹²s después de la adición rápida ^{(< 1}s) de ¹⁶⁵j l de PBS en el que Cl- ¹³⁷mM se reemplazó por I-. La tasa inicial del influjo de I- se calculó mediante el uso de regresión exponencial. Todas las placas compuestas contenían controles negativos (vehículo DMSO) y controles positivos (forskolina ²⁰□ M).

Medida de corriente de cortocircuito. La corriente de cortocircuito se midió en células FRT que expresan de manera estable CFTR humano de tipo silvestre cultivado sobre filtros porosos como se describió [12]. La solución basolateral contenía NaCl 130 mM, KCl 2.7 mM, KH²PO⁴1.5 mM, CaCh 1 mM, MgCh 0.5 mM, glucosa 10 mM y Na-HEPES 10 mM (pH 7.3, 37 °C). En la solución apical, se reemplazó NaCl 65 mM por gluconato de Na, se aumentó el CaCh a 2 mM y se permeabilizó la membrana basolateral con 250 pg/ml de anfotericina B. Se midió la corriente de cortocircuito en colon de ratón adulto recién extraído a 37 °C utilizando tampón de bicarbonato de Krebs simétrico.

Ensayo de cAMP. La actividad de cAMP intracelular se midió utilizando un ensayo de luminiscencia GloSensor (Promega Corp., Madison, Wisconson, EE.UU.). Las células nulas FRT se transfectaron de forma estable con el plásmido cAMP pGloSensor y se distribuyeron en microplacas blancas de 96 pozos y se cultivaron hasta la confluencia. Las células se lavaron tres veces con PBS y se incubaron con CFTRact-j027 5 pM durante 10 min en ausencia y presencia de forskolina 100 nM. El cAMP se ensayó de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Farmacocinética. Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la UCSF. Los ratones CD1 hembra se trataron con 10 mg/kg de CFTRact-J027 (solución salina que contenía DMSO al 5 % y Kolliphor HS 15 al 10 % ) por vía intraperitoneal (ip) u oral. La sangre se recolectó a los 15, 30, 60, 150, 240 y 360 min después del tratamiento mediante punción orbital y se centrifugó a 5000 rpm durante 15 min para separar el plasma. Las muestras de plasma (60 pl) se mezclaron con 300 pl de acetonitrilo y se centrifugaron a 13000 rpm durante 20 min, y se utilizaron 90 pl del sobrenadante para LC/MS. El sistema solvente consistía en un gradiente lineal de 5 a 95 % de acetonitrilo durante 16 min (flujo de 0.2 ml/min). Los espectros de masas se adquirieron en un espectrómetro de masas (Waters 2695 y Micromass ZQ) utilizando ionización por electropulverización (+), rango de masas desde 100 hasta 1500 Da, voltaje de cono de 40 V. Los estándares de calibración se prepararon en plasma de ratones no tratados a los que se agregaron cantidades conocidas de CFTRact-J027.

Estabilidad metabólica in vitro. Se incubó CFTRact-J027 (5 pM) durante tiempos específicos a 37 °C con microsomas de hígado de ratón (1 mg de proteína/ml; Sigma-Aldrich) en tampón de fosfato de potasio (100 mM) que contenía NADPH 1 mM, como se describió [13]. A continuación, la mezcla se enfrió en hielo y se agregaron 0.5 ml de acetato de etilo enfriado con hielo. Las muestras se centrifugaron durante 15 min a 3000 rpm, el sobrenadante se evaporó hasta sequedad y el residuo se disolvió en 100 pl de fase móvil (acetonitrilo:agua, 3:1) para LC/MS y se ensayó como se describió anteriormente.

Modelo murino de estreñimiento. Se administró loperamida (0.3 mg/kg, ip, Sigma-Aldrich) a ratones CD1 hembra (de 8 a 10 semanas de edad) para producir estreñimiento. Se proporcionaron varias cantidades de CFTRact-J027 (0.1, 0.3, 1, 3 y 10 mg/kg) al mismo tiempo (para administración ip) o 1 h antes (para administración oral) de loperamida. Los ratones de control se trataron solo con vehículo. Algunos ratones fueron tratados por vía oral con lubiprostona (0.5 mg/kg, Sigma-Aldrich) o linaclotida (0.5 mg/kg, Toronto Research Chemicals Inc., Toronto, Ontario, Canadá). Después de la inyección de loperamida, los ratones se colocaron individualmente en jaulas metabólicas con comida y agua ad libitum. Se recolectaron muestras de heces durante 3 h y se cuantificaron el peso total de las heces y el número de gránulos fecales. Para medir el contenido de agua en las heces, las muestras de heces se secaron a 80 °C durante 24 h y el contenido de agua se calculó como [peso húmedo-peso seco]/peso húmedo. Se realizaron estudios similares en ratones con fibrosis quística (CF) (AF508 homocigotos) que carecían de CFTR funcional. Se realizaron algunos estudios utilizando el análogo químicamente similar pero inactivo de CFTRact-J027, 3-(2-amino-5-nitrofenil)-1-(metil)-2(1H)-quinoxalinona.

Tránsito intestinal in vivo y contractilidad intestinal ex vivo. El tiempo de tránsito de todo el intestino se determinó utilizando un marcador administrado por vía oral (200 pl, Azul de Evans al 5 % , goma arábiga al 5 % ) y midiendo el tiempo de su aparición en las heces. A los ratones se les administró loperamida y CFTRact-J027 (10 mg/kg) o vehículo por vía intraperitoneal en el tiempo cero. Para las mediciones de contractilidad ex vivo, los ratones se sacrificaron mediante sobredosis de avertin (200 mg/kg, 2,2,2-tribrometanol, Sigma-Aldrich) y se aislaron segmentos de íleon y colon de ~2 cm de longitud y se lavaron con tampón Krebs-Henseleit. Los extremos de los segmentos intestinales se ataron, se conectaron a un transductor de fuerza (Biopac Systems, Goleta, CA, EE.UU.) y los tejidos se transfirieron a una cámara de órganos (Biopac Systems) que contenía tampón Krebs-Henseleit a 37 °C aireado con O²al 95 % , CO ²al 5 % . El íleon y el colon se estabilizaron durante 60 min con tensiones de reposo de 0.5 y 0.2 g respectivamente, y las soluciones se cambiaron cada 15 min. Se registraron los efectos de CFTRact-J027 en las contracciones intestinales isométricas basales y suprimidas con loperamida.

Secreción y absorción intestinal in vivo. A los ratones (de tipo silvestre o CF) se les dio acceso a agua con dextrosa al 5 % pero no a alimentos sólidos durante 24 h antes de los experimentos. Los ratones se anestesiaron con isoflurano y la temperatura corporal se mantuvo durante la cirugía a 36-38 °C utilizando una almohadilla térmica. Se realizó una pequeña incisión abdominal para exponer el intestino delgado, y se aislaron asas de yeyuno medio cerradas (longitud 2-3 cm) mediante suturas. Las asas se inyectaron con 100 pl de vehículo solo o 100 pg de CFTRact-J027 en vehículo. La incisión abdominal se cerró con suturas y se permitió que los ratones se recuperaran de la anestesia. Se retiraron las asas intestinales a los 90 min y se midieron la longitud y el peso de las asas para cuantificar la secreción de fluido. La absorción intestinal se midió en ratones CF (para evitar la secreción) como se describió anteriormente, excepto que las asas se retiraron a los 0 o 30 minutos. La absorción se calculó como 1-(peso del asa a los 0 min - peso del asa a los 30 min)/peso del asa a los 0 min.

Estudios de toxicidad y administración crónica. A los ratones se les administró 10 mg/kg de CFTRact-J027 o vehículo por vía oral una vez al día durante 7 días. Una hora después de la dosis final, los ratones se trataron con loperamida (0.3 mg/kg, ip) y se recolectaron las heces durante 3 h. La toxicidad in vivo se evaluó en estos ratones al medir la relación de peso húmedo/seco de los pulmones, recuento sanguíneo completo (HEMAVET 950FS, Drew Scientific Inc., Florida, EE.UU.) y química sérica (Idexx Laboratories Inc., Sacramento, California, EE.UU.) 4 h después de la última dosis de CFTRact-J027. La citotoxicidad in vitro se midió en células FRT incubadas con CFTRact-J027 25 □ M durante 8 y 24 h. La citotoxicidad se midió mediante el ensayo Azul Alamar de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Invitrogen, Carlsbad, California, EE.UU.).

Análisis estadístico. Los experimentos con dos grupos se analizaron con la prueba t de Student, cuando hay 3 grupos o más análisis se realizó con análisis de varianza de una vía y prueba de comparaciones múltiples post-hoc Newman-Keuls. P< 0.05 se tomó como estadísticamente significativo.

Resultados.

Identificación y caracterización in vitro de activadores de CFTR de molécula pequeña. El objetivo era identificar un activador potente dirigido a CFTR con actividad prosecretora en el intestino para probar su eficacia en un modelo de estreñimiento de ratón. La FIG. 8A resume la estrategia del proyecto. Los compuestos evaluados en el presente documento incluyeron moléculas pequeñas identificadas en tamices de activador/potenciador de CFTC anteriores [14] y desde un nuevo tamiz de pequeñas moléculas sintéticas no probadas previamente. Los compuestos más activos que surgieron del tamiz, junto con los análogos químicos disponibles comercialmente, se priorizaron en base a un estudio inicial del mecanismo de acción (ensayo de elevación de cAMP), toxicidad in vitro, acción prosecretora en el intestino del ratón y eficacia en modelo de estreñimiento de ratón. La FIG. 8B muestra el método de cribado del lector de placas basado en células en el que se midió la tasa inicial de influjo de yoduro en células FRT que expresan de forma estable CFTR de tipo silvestre humano y un sensor de haluro fluorescente YFP después de la adición de yoduro extracelular. Un activador CFTR aumenta la pendiente inicial de la curva de extinción de la fluorescencia.

La FIG. 8C muestra estructuras químicas de seis clases de activadores candidatos de CFTR identificados a partir de los tamices. En base a los criterios enumerados anteriormente, centramos estudios adicionales en CFTRact-J027, una 3-fenil-quinoxalinona con propiedades similares a la del fármaco. El CFTRact-J027 se sintetizó en forma cristalina pura en dos etapas (FIG. 8D).

Las mediciones de corriente de cortocircuito en células FRT que expresan CFTR mostraron que el CFTRact-J027 activó completamente el CFTR (FIG. 9A), ya que el agonista de cAMP forskolina no produjo más aumento en la corriente, con un EC ⁵⁰~200 nM (FiG. 9B). Curiosamente, el CFTRact-J027 fue solo un potenciador débil de AF508-CFTR, como se estudió en células FRT que expresaban AF508-CFTR después de una incubación durante la noche con un corrector (FIG. 9C). La secreción de Cl- en colon de ratón recién aislado mostró un aumento dependiente de la concentración en la corriente de cortocircuito con EC ⁵⁰~300 nM (FIG. 9D). El aumento de la corriente con CFTRact-J027 alto aumentó adicionalmente con la forskolina, lo que puede ser una consecuencia de la activación de un canal de K+ sensible al cAMP de la membrana basolateral que aumenta la fuerza impulsora de la secreción de Cl- de la membrana apical. El aumento de la corriente fue completamente inhibido por un inhibidor selectivo de CFTR. La FIG. 9E muestra que CFTRact-J027 no eleva el cAMP celular cuando se agrega solo, y no aumenta adicionalmente el cAMP cuando se agrega junto con forskolina, lo que sugiere que la activación de CFTR implica un mecanismo de interacción directa en lugar de una acción indirecta a través de la elevación del cAMP.

El CFTRact-J027 normaliza la producción de heces en un modelo de estreñimiento de ratón. Se estudió CFTRact-J027 en el modelo bien establecido de estreñimiento inducido por loperamida en ratones en el que se midieron el peso de las heces, el número de gránulos y el contenido de agua durante 3 h después de la administración intraperitoneal de loperamida (FIG. 10A). La administración intraperitoneal de CFTRact-J027 a 10 mg/kg normalizó cada uno de los parámetros de las heces. CFTRact-J027 no afectó la producción de heces ni el contenido de agua en los ratones de control (no tratados con loperamida). Curiosamente el CFTRact-J027 no tuvo efecto en ratones con fibrosis quística que carecían de CFTR funcional (FIG. 10B), ni un análogo químico inactivo de CFTRact-J027 fue efectivo en ratones de tipo silvestre (FIG. 10C). Estos resultados respaldan una acción selectiva de CFTR de CFTRact-J027. Los estudios de dosis-respuesta en ratones mostraron una ED⁵⁰de 2 mg/kg en el modelo de loperamida mediante la administración ip de CFTRact-J027 (FIG. 10D).

La administración oral de 10 mg/kg de CFTRact-J027 1 h antes de la administración de loperamida también fue eficaz para normalizar la producción de heces y el contenido de agua en ratones tratados con loperamida, sin tener efecto en ratones de control (FIG. 11A). La ED⁵⁰para la administración oral fue de 0.5 mg/kg, sustancialmente más baja que aquella de la administración ip (FIG. 11B). En estudios paralelos, la administración oral de los fármacos aprobados lubiprostona o linaclotida en dosis de 250 a 500 mg/kg mayores que las administradas a humanos para el tratamiento del estreñimiento, fue menos eficaz para normalizar la producción de heces, produciendo el 50 % y el 35 % de la respuesta a CFTRact-J027 máxima, respectivamente (FiG. 11C).

Acciones de CFTRact-J027 sobre el tránsito intestinal, motilidad y transporte de fluidos. La acción de CFTRact-J027 sobre el tránsito intestinal y la motilidad se midió in vivo y en tiras intestinales aisladas, respectivamente. El tiempo de tránsito de todo el intestino, medido por la aparición de un marcador en las heces después de la sonda oral en bolo en el momento de la administración ip de loperamida y CFTRact-J027, se normalizó mediante CFTRact-J027 (FIG. 12A, panel izquierdo). El CFTRact-J027 no tuvo ningún efecto sobre el tiempo de tránsito del intestino completo en ratones con fibrosis quística (panel derecho). Las mediciones in vitro de la contracción intestinal no mostraron ningún efecto de CFTRact-J027 agregado solo o en presencia de loperamida 10 pM en tiras de íleon y colon de ratón aisladas (FIG.

12B). El CFTRact-J027 puede aumentar de esta manera el tránsito intestinal in vivo al estimular la motilidad mediante el estiramiento de la pared intestinal inducido por la secreción, sin efecto directo sobre el músculo liso intestinal. Para investigar directamente los efectos de CFTRact-J027 sobre la secreción y absorción de fluidos intestinales, se utilizó un modelo de asa intestinal cerrado in vivo. Se inyectó CFTRact-J027 en asas yeyunales medias cerradas y se midió la acumulación del fluido a los 90 min. El CFTRact-J027 produjo un aumento del 140 % en la relación peso/longitud del asa, lo que indica secreción de fluido en el lumen intestinal en ratones de tipo silvestre (FIG. 12C, panel superior), pero no tuvo efecto en ratones con fibrosis quística (panel inferior), lo que apoya un mecanismo de acción selectivo de CFTR. También se utilizó un modelo de asa cerrada para estudiar la acción de CFTRact-J027 en la absorción de fluidos intestinales. Se inyectó fluido sin o con CFTRact-J027 en asas yeyunales medias cerradas de ratones con fibrosis quística (para evitar confundir la secreción de fluido) y se midió la absorción de líquido a los 30 min. El CFTRact-J027 no afectó a la absorción de fluido intestinal (FIG. 12D).

Farmacología y toxicidad de CFTRact-J027 en ratones. La estabilidad metabólica in vitro de CFTRact-J027 se midió mediante incubación con microsomas de hígado de ratón en presencia de NADPH. El CFTRact-J027 se metabolizó rápidamente con una semivida de eliminación de ~21 min, con sólo el 7 % del compuesto original restante a los 60 min (FIG. 13A).

La farmacocinética se midió en ratones después de la administración intraperitoneal u oral en bolo de 10 mg/kg de CFTRact-J027. Después de la administración ip, la concentración sérica de CFTRact-J027 disminuyó con una semivida de eliminación de ~16 min, y fue indetectable a los 150 min (FIG. 13B). Después de administración oral, la concentración de CFTRact-J027 en suero alcanzó 180 nM a los 30 min y fue indetectable en otros puntos de tiempo (FIG. 13B).

Se realizaron estudios toxicológicos preliminares de CFTRact-J027 en cultivos celulares y de ratones. El CFTRact-J027, a una concentración de 20 pM cerca de su límite de solubilidad, no mostró citotoxicidad medida por el ensayo Azul Alamar (FIG. 13C). En los ratones tratados durante 7 días, el CFTRact-J027 no afectó la química sérica principal ni los parámetros sanguíneos (Tabla 1, Ejemplo 1), ni cambió el peso corporal ni produjo acumulación de líquido en las vías respiratorias/pulmones (FIG. 13D).

Por último, para determinar si el CFTRact-J027 administrado crónicamente conservaba la eficacia, los ratones se trataron por vía oral durante 7 días con 10 mg/kg de CFTRact-J027 o vehículo, y se les dio loperamida 1 hora después de la dosis final. La FIG. 13E muestra que CFTRact-J027 administrado de forma crónica siguió siendo eficaz para normalizar la producción de heces y el contenido de agua después de la loperamida.

Tabla 1. Recuento sanguíneo completo y química sérica de ratones tratados durante 7 días con 10 mg/kg de CFTRact-J027 o vehículo por vía oral una vez al día (media ± E.E., 5 ratones por grupo). Prueba t de Student.

Discusión.

Identificamos mediante cribado de alto rendimiento un activador de CFTR de molécula pequeña y afinidad nanomolar, CFTRact-J027, y demostramos su acción prosecretora en el intestino de ratón y su eficacia en la normalización de la producción de heces en un modelo de estreñimiento en ratón inducido por loperamida. El estreñimiento sigue siendo un problema clínico importante en entornos ambulatorios y hospitalizados. El estreñimiento inducido por opioides es un efecto adverso común en pacientes después de una cirugía, sometidos a quimioterapia y con dolor crónico.

La activación dirigida a CFTR se suma a los diversos mecanismos de acción de las terapias anti-estreñimiento. Es notable que la activación pura de CFTR sea capaz de producir una respuesta robusta de secreción de fluido y corriente de Cl- en el intestino, sin causar una elevación global de la concentración de nucleótidos cíclicos, estimulación directa de la contractilidad intestinal o reducción de la absorción del fluido intestinal. Linaclotida, un péptido agonista del receptor de guanilato ciclasa C que aumenta la concentración de cGMP en las células intestinales. La linaclotida inhibe la activación de las neuronas sensoriales colónicas y activa las neuronas motoras, lo que reduce el dolor y aumenta la contracción del músculo liso intestinal; además, la elevación de la concentración de cGMP en los enterocitos puede activar CFTR y tener una acción prosecretora [4, 5]. Se cree que un segundo fármaco avanzado, el análogo de prostaglandina E lubiprostona, activa un supuesto canal ClC-2 de enterocitos. [6], aunque los datos mecanicistas son menos claros. En comparación con estos fármacos, un activador de CFTR puro tiene un mecanismo de acción único y bien validado y no produce una respuesta global de nucleótidos cíclicos en múltiples tipos de células. Es de destacar que la linaclotida y la lubiprostona mostraron una eficacia limitada en ensayos clínicos. La linaclotida fue eficaz en ~20 % de los pacientes con estreñimiento crónico, de los cuales ~5 % también respondieron al placebo [15], y la lubiprostona fue eficaz en ~13 % de los pacientes con IBS-E, de los cuales ~7 % respondieron al placebo [16]. En base nuestros datos en ratones que muestran una mayor eficacia de CFTRact-J027 en comparación con las dosis supramáximas de linaclotida o lubiprostona, especulamos que los activadores de CFTR pueden tener una mayor eficacia en los ensayos clínicos.

El CFTRact-J027 es sustancialmente más potente para la activación de CFTR de tipo silvestre que VX-770 (ivacaftor), el fármaco aprobado por la FDA para el tratamiento de la fibrosis quística (CF) causada por ciertas mutaciones de separación de CFTR. En las células FRT que expresan CFTR de tipo silvestre, la medición de la corriente de cortocircuito mostró una activación casi completa de CFTR por parte de CFTRact-J027 a 3 □ M, mientras que VX-770 activó al máximo CFTR solo en un 15 % . Sin embargo, CFTRact-J027 fue sustancialmente menos potente que ivacaftor como un 'potenciador' de la separación defectuoso de los canales de cloruro de la mutación causante de CF más común, AF508, lo que no es inesperado, ya que la eficacia del potenciador en la CF es especifico de la mutación. Además de su posible utilidad terapéutica para el estreñimiento, un activador de molécula pequeña de CFTR de tipo silvestre puede ser útil para el tratamiento de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica y bronquitis, asma, disfunción pulmonar inducida por el humo del cigarrillo, ojo seco y enfermedad colestásica del hígado [17-19].

Las quinoxalinonas sustituidas se informaron como antagonistas selectivos de la proteína 1 de resistencia a múltiples fármacos del transportador de eflujo de membrana [20]. También se ha informado que las quinoxalinonas muestran actividad antidiabética al estimular la secreción de insulina en las células INS-1 pancreáticas. [21], y actividad inhibidora contra las serina proteasas para la terapia potencial de trastornos trombóticos [22]. Recientemente, se ha informado que las quinoxalinonas inhiben la aldosa reductasa [23]. Estos informes sugieren que el andamio de quinoxalinona tiene propiedades similares a las del fármaco. Sintéticamente, la quinoxalinona se puede preparar en una a cuatro etapas a partir de materiales de partida disponibles comercialmente [24], que permite una síntesis fácil de análogos dirigidos.

Además de las acciones fuera de la diana específicas del compuesto, el perfil de efectos secundarios potenciales de un activador de CFTR podría incluir actividad prosecretora en las vías respiratorias/pulmones y varios epitelios glandulares y de otro tipo. Los efectos fuera de la diana para la terapia del estreñimiento se podrían limitar mediante la administración oral de un activador de CFTR con absorción intestinal limitada y/o depuración sistémica rápida para minimizar la exposición sistémica. Cuando se administró CFTRact-J027 por vía oral a una dosis alta (10 mg/kg) mostró una biodisponibilidad muy baja con niveles en sangre muy por debajo de la EC ⁵⁰para la activación de CFTR, lo que se puede deber al efecto de primer paso, como lo demuestra su rápido metabolismo in vitro en microsomas hepáticos. CFTRact-J027 no mostró una citotoxicidad in vitro significativa a una concentración de 25 j M, > 100 veces mayor que su EC ⁵⁰para la activación de CFTR, o toxicidad in vivo en ratones en un estudio de 7 días a una dosis eficaz máxima que normalizó la producción de heces en el modelo de loperamida de estreñimiento. La acción fuera de la diana potencialmente más significativa, la estimulación de la secreción de fluidos de los pulmones/vías respiratorias, no se demostró como lo demuestra el contenido normal de agua en los pulmones en los ratones tratados 7 días. Estos estudios de toxicidad limitada ofrecen una prueba de concepto para la aplicación de un activador de CFTR en el estreñimiento.

En resumen, sin desear limitarse a la teoría, se considera que los datos del presente documento proporcionan evidencia de la acción prosecretora de un activador de CFTR en intestino de ratón y prueba de concepto para uso en el tratamiento de diversos tipos de estreñimiento., que podría incluir estreñimiento inducido por opioides, estreñimiento idiopático crónico y síndrome del intestino irritable con predominio del estreñimiento.

Referencias (Ejemplo Comparativo 4).

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Ejemplo Comparativo 5 - Ojo Seco -- II

Abreviaturas: CFTR, regulador de conductancia de transmembrana de fibrosis quística; cAMP, monofosfato de adenosina cíclico; ENaC, canal de sodio epitelial; YFP, proteína amarilla fluorescente; CF, fibrosis quística; células FRT, células tiroideas de rata Fischer; Isc, corriente de cortocircuito; PD, diferencia de potencial; IBMX, 3-isobutil-1-metilxantina; fsk, forskolina; LC/MS, cromatografía líquida/espectroscopia de masas; LG, verde lisamina; LGE, escisión de glándula lagrimal.

Resumen. Los trastornos del ojo seco, que incluyen el síndrome de Sjogren, constituyen un problema común en la población que envejece con opciones terapéuticas efectivas limitadas disponibles. El canal de Cl- activado por cAMP CFTR (regulador de conductancia de transmembrana de fibrosis quística) es un importante canal de cloruro prosecretor en la superficie ocular. En el presente documento, investigamos si los compuestos que se dirigen a CFTR pueden corregir la película lagrimal anormal en el ojo seco. Se evaluaron activadores de molécula pequeña de CFTR de tipo silvestre humano identificados mediante cribado de alto rendimiento en cultivos celulares y ensayos in vivo para seleccionar compuestos que estimulan la secreción de fluido impulsada por Cl- a través de la superficie ocular en ratones. Una aminofenil-1,3,5-triazina, CFTRact-K089, activó completamente CFTR en cultivos celulares con EC ⁵⁰~250 nM y produjo una hiperpolarización de ~8.5 mV en la diferencia de potencial de la superficie ocular. Cuando se suministró por vía tópica, el CFTRact-K089 duplicó la secreción lagrimal basal durante cuatro horas y no tuvo ningún efecto en ratones con CF. El CFTRact-K089 mostró una biodisponibilidad sostenida de la película lagrimal sin absorción sistémica detectable. En un modelo de ratón con ojo seco acuoso deficiente producido por la escisión de la glándula lagrimal, la administración tópica de 0.1 nmol de CFTRact-K089 tres veces al día restauró la secreción lagrimal a niveles basales y evitó por completo la disrupción epitelial de la cornea observada en los controles tratados con vehiculo. Nuestros resultados respaldan la utilidad potencial de los activadores dirigidos a CFTR como un tratamiento prosecretor novedoso para el ojo seco.

Introducción.

El ojo seco es un grupo heterogéneo de trastornos con características comunes de volumen lagrimal reducido e hiperosmolaridad del fluido lagrimal, que conducen a la inflamación en la superficie ocular. Las consecuencias clínicas, que incluyen molestias en los ojos y perturbaciones visuales, representan un importante problema de salud pública en una población que envejece. El ojo seco afecta hasta un tercio de la población mundial (1), que incluye cinco millones de estadounidenses de 50 años o más (2, 3). La carga económica del ojo seco es sustancial, con costes anuales directos de atención médica estimados en $3840 mil millones de dólares en los Estados Unidos (4).

El noventa y cuatro por ciento de los oftalmólogos encuestados consideran que se necesitan tratamientos adicionales para el ojo seco de moderado a severo (7).

La superficie ocular es una colección de tejidos epiteliales y glandulares anatómicamente continuos que están conectados funcionalmente para mantener la película lagrimal (8). Si bien la lagrimación contribuye con la mayor parte del lagrimeo reflejo, la córnea y la conjuntiva regulan el volumen y la composición de las lágrimas basales. Los principales determinantes del movimiento del agua a través de la superficie ocular hacia la película lagrimal incluyen la secreción apical de cloruro (Cl-) a través de transportadores de Cl- dependientes de cAMP y calcio (Ca2+), y la absorción de sodio (Na+) principalmente a través del canal epitelial de Na+ (ENaC).

El regulador de conductancia de transmembrana de fibrosis quística (CFTR) es un canal de Cl activado por cAMP que se expresa en algunas células epiteliales secretoras, que incluyen aquellas de la córnea y la conjuntiva (14-16). Encontramos una capacidad sustancial para el Cl- facilitado por CFTR activo en la superficie ocular en ratones (21, 22), como se mostrará posteriormente en la conjuntiva de rata (23), que proporciona una base racional para la investigación de los activadores de CFTR como una estrategia prosecretora para el ojo seco. El único activador de CFTR clínicamente aprobado, VX-770 (ivacaftor), está indicado para potenciar la separación del canal de ciertos mutantes de CFTR que causan CF, pero solo activa débilmente el CFTR de tipo silvestre (24, 25).

En el presente documento, evaluamos y priorizamos activadores de molécula pequeña de CFTR de tipo silvestre novedosos identificados por cribado de alto rendimiento como terapia tópica potencial para el ojo seco, con la estrategia de investigación resumida en la FIG. 1. El objetivo era mejorar nuestros activadores de CFTR previamente identificados (26), que carecen de la potencia y las propiedades químicas adecuadas para avanzar al desarrollo clínico, y demostrar la eficacia de los activadores de CFTR recientemente identificados en un modelo de ratón con ojo seco. Materiales y métodos.

Ratones. Se criaron ratones de tipo silvestre (WT) y CF (mutante AF508-CFTR homocigoto) en un antecedente genético CD1 en la Instalación para Animales de la Universidad de California en San Francisco (UCSF). Se utilizaron ratones de 8 a 12 semanas de edad (25 a 35 g). Se adquirieron ratones hembra BALB/c (7-8 semanas de edad) del Harlan Laboratory (Livermore, CA, EE.UU.). Los protocolos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la UCSF y de conformidad con la Declaración ARVO para el Uso de Animales en la Investigación Oftálmica y de la Visión.

Corriente de cortocircuito. Se cultivaron células de tiroides de rata Fischer (FRT) que expresan de manera estable CFTR humano de tipo silvestre en insertos Snapwell (Corning Costar, Corning NY, EE.UU.) para mediciones de corriente de cortocircuito (Isc). Después de 6-9 días en cultivo, cuando la resistencia transepitelial era >1000 Q/cm2, los insertos se montaron en un sistema de cámara Ussing (World Precision Instruments, Sarasota, FL, EE.UU.). La solución basolateral contenía NaCl 130 mM, KCl 2.7 mM, KH²PO⁴1.5 mM, CaCh 1 mM, MgCh 0.5 mM, glucosa 10 mM y Na-HEPES 10 mM (pH 7.3). En la solución de baño apical, se reemplazó NaCl 65 mM por gluconato de Na y se aumentó el CaCh a ²mM. Ambas soluciones se burbujearon con aire y se mantuvieron a 37 °C. La membrana basolateral se permeabilizó con 250 pg/ml de anfotericina B (26, 27). Las semicámaras se conectaron a una pinza de voltaje DVC-1000 a través de electrodos Ag/AgCl y puentes de agar KCl 3 M para el registro de Isc.

Ensayos de cAMP y citotoxicidad. La actividad de cAMP intracelular se midió utilizando un ensayo de luminiscencia GloSensor (Promega Corp., Madison, Wl, EE.UU.). Las células FRT transfectadas de forma estable con el plásmido cAMP pGloSensor (Promega Corp.) se cultivaron en microplacas blancas de 96 pozos (Corning Costar) durante la noche. A continuación, las células se lavaron tres veces con PBS y se incubaron con compuesto de prueba 5 pM durante 10 min en ausencia y presencia de forskolina 100 nM. Para ensayar la citotoxicidad, las células FRT se cultivaron durante la noche en pozos de microplaca Costar negros de 96 pozos y se incubaron con compuestos de prueba hasta 100 pM (la máxima solubilidad en PBS) durante 1 o 24 h. La citotoxicidad se midió mediante el ensayo Azul Alamar de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.).

Mediciones de la diferencia de potencial de la superficie ocular. La PD transepitelial de circuito abierto se midió continuamente en ratones anestesiados en respuesta a perfusiones en serie de diferentes soluciones sobre la superficie ocular, como se describe (21). Los ratones se anestesiaron con Avertin (2,2,2-tribromoetanol, 125 mg/kg por vía intraperitoneal, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE.UU.), y la temperatura central se mantuvo a 37 °C utilizando una almohadilla térmica. Los ojos se orientaron con la córnea y la conjuntiva mirando hacia arriba y se expusieron al retraer el párpado con fórceps de acción cruzada. Las soluciones eran isosmolares (320 ± 10 mOsM; composiciones proporcionadas en la ref. 21) y contenían 10 p □ □ de indometacina para evitar la activación de CFTR por las prostaglandinas. La superficie ocular se perfundió a ⁶ml/min a través de un tubo de plástico utilizando un sistema de válvula de manguito de gravedad multidepósito (ALA Scientific, Westbury, NY, EE.Uu .) y una bomba peristáltica de flujo variable (modelo de flujo medio; Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, e E.UU.). Se fijó un catéter sonda a 1 mm por encima de la córnea utilizando un microposicionador y se colocó una cánula de succión a 3 mm de la órbita. El electrodo de medición estaba en contacto con el catéter de perfusión y conectado a un voltímetro de alta impedancia (IsoMilivolt Meter; WPl). El electrodo de referencia se conectó a tierra a través de una aguja alada de calibre 21 llena de solución salina isosmolar y se insertó por vía subcutánea en el abdomen. Los electrodos de medición y referencia consistieron en Ag/AgCl con puentes de agar KCl 3 M.

Secreción lagrimal. Para medir la producción de lágrimas no estimuladas, se colocaron hilos de rojo fenol (Zone-Quick, Oasis Medical, Glendora, CA, EE.UU.) durante 10 s en los cantos laterales de ratones anestesiados con isofluorano utilizando fórceps de joyero. El volumen lagrimal se midió como la longitud del hilo humedecido, tal como se visualiza bajo un microscopio de disección. Se utilizaron mediciones en serie para evaluar la farmacodinámica del compuesto después de la aplicación de gotas de 2 □ L de formulaciones del compuesto (compuesto 50-100 pM en p Bs que contenía polisorbato al 0.5 % y DMSO al 0.5 % ) en comparación con el vehículo.

Tinción con verde lisamina. Para evaluar la disrupción del epitelio corneal, se aplicaron 5 pl de tinte de verde lisamina (LG) (1 % ) a la superficie ocular de ratones anestesiados con isofluorano. Las fotografías del ojo se tomaron utilizando una cámara digital Nikon adaptada a un Microscopio Estéreo con Zoom Olympus (Olympus, Center Valley, PA, EE.UU.). Cada cuadrante de la córnea se puntuó en una escala de 3 puntos por un observador ciego entrenado, clasificando la extensión de la tinción en cada cuadrante como: 0, sin tinción; 1, tinción esporádica (que afecta a <25 % de la superficie total); grado 2, tinción punteada difusa (25-75 %); y grado 3, tinción punteada coalescente (>75 %). La calificación total se informa como la suma de las puntuaciones de todos los cuatro cuadrantes, que varían desde ⁰hasta ^{1 2}.

Farmacocinética y distribución de tejido. Para determinar el tiempo de residencia de los activadores de CFTR en la película lagrimal preocular de ratón, los compuestos se recuperaron mediante cromatografía líquida/espectroscopia de masas (LC/m S) después del suministro oftálmico de una sola dosis. Se recuperaron tres lavados de ojos (3 pl de PBS cada uno) de los cantos lateral y medial con tubos microcapilares de 5 pl (Drummond Scientific Co., Broomhall, PA, EE.UU.) después del parpadeo manual de los párpados (9). Los lavados agrupados se diluyeron con acetonitrilo/agua (1:1) que contenía ácido fórmico al 0.1 % y se analizaron por LC/MS utilizando una columna Xterra MS C18 (2.1 mm x 100 mm, tamaño de partícula de 3.5 mm) conectada a un sistema de suministro de solventes Waters 2695 HPLC y un espectrómetro de masas Waters Micromass ZQ con ionización por electropulverización positiva.

Para estudiar la acumulación de compuestos en tejidos sistémicos, se analizaron sangre, cerebro, riñón e hígado de ratón después de 14 días de dosificación tópica tres veces al día (0.1 nmol, 2 pl, 50 pM). Se recolectaron muestras de sangre del ventrículo izquierdo en minitubos K3 EDTA (Greiner, Kremsmunster, Austria) y se centrifugaron (28). El sobrenadante se extrajo con un volumen igual de acetato de etilo y el extracto se secó con una corriente de aire. Los órganos de los ratones tratados y de control se extrajeron después de la perfusión ventricular con PBS heparinizado (10 unidades/ml), se pesaron, se mezclaron con ácido acético y agua (100 |jl/g de tejido) y se homogeneizaron (29). Se agregó acetato de etilo (10 ml/g de tejido), las muestras se agitaron en vórtex y se centrifugaron (3000 rpm durante 15 min) y se evaporó el sobrenadante que contenía acetato de etilo. Los residuos obtenidos a partir de extractos orgánicos de suero y los homogeneizados de órganos se reconstituyeron y analizaron mediante LC/MS como se describió anteriormente.

Modelo de ratón con ojo seco producido por escisión de la glándula lagrimal. Se adaptó un modelo de escisión de la glándula lagrimal (LGE) de ojo seco acuoso deficiente de un método informado (30). La glándula lagrimal extraorbitaria se expuso a cada lado de ratones BALB/c hembra de tipo silvestre (7-8 semanas de edad) mediante incisiones cutáneas lineales de 3 mm. Se cauterizaron los ductos lagrimales y se extirpó toda la glándula bilateralmente, evitando vasos y nervios faciales. Cada una de las incisiones se cerró con una única sutura de seda 6-0 interrumpida. El tejido lagrimal orbitario permaneció funcional. Se excluyeron los ojos con sensibilidad corneal reducida (<5 % de los ratones estudiados), que se identificaron a partir de úlceras corneales neurotróficas dentro de 1 día de LGE. Los ratones se aleatorizaron para recibir tratamiento (en ambos ojos) con CFTRact-K089 (0.1 nmol) o vehículo. Los ratones se trataron tres veces al día (8 AM, 2 PM y 8 PM) durante 2 semanas comenzando el Día 1 después de LGE. La secreción lagrimal y la tinción de LG se realizaron inmediatamente antes y una hora después de la dosis inicial en los días 4, 10 y 14 después de la LGE.

Estadísticas. Los datos se expresan como la media ± error estándar de la media (SEM). Para las comparaciones directas entre dos medias, se utilizó la prueba t de Student bilateral. Para las mediciones longitudinales de la secreción lagrimal y las puntuaciones LG en el estudio de prevención del ojo seco, se utilizó una regresión lineal de efectos mixtos, ajustando la no independencia de las mediciones tomadas en el mismo ojo y en ambos ojos del mismo animal. El análisis se realizó en R v.3.2 para Mac (R Foundation for Statistical Computing, Viena, Austria), utilizando los paquetes lme4 y robustlmm.

Resultados.

Caracterización de activadores de CFTR de molécula pequeña. Un tamiz de alto rendimiento funcional basado en células de 120,000 compuestos a 10 jM identificó 20 clases químicas de activadores de moléculas pequeñas de CFTR de tipo silvestre que produjeron >95 % de la activación de CFTR máxima. El cribado se realizó en células epiteliales FRT que coexpresaron CFTR de tipo silvestre humano y un sensor de haluro de YFP citoplásmico en formato de 96 pozos (26, 31, 32). El cribado secundario implicó la medición de Isc en células FRT que expresan CFTR tratadas previamente con forskolina submáxima (50 nM). Veintiún compuestos de ocho clases químicas produjeron grandes aumentos en Isc a 1 j^ (>75 % de la corriente máxima producida por forskolina 20 jM). Se proporciona un resumen de los valores de EC ⁵⁰y Vmáx para cada compuesto en la FIG. 7.

Las estructuras de los activadores de las cuatro clases químicas más activas se muestran en la FIG. 2A, junto con los correspondientes datos de dependencia de la concentración de las mediciones de Isc. Cada compuesto activó por completo el CFTR, ya que una alta concentración de forskolina produjo un pequeño aumento adicional en Isc, y el aumento en Isc fue completamente inhibido por un inhibidor de CFTR, CFTRinh-172. Los valores de EC⁵⁰variaron entre 20 y 350 nM (FIG. 2B). VX-770 mostró una actividad relativamente débil contra CFTR de tipo silvestre (FIG. 2C). CFTRact-K032 y CFTRact-K089 tenían una potencia más baja y mostraron menos activación de CFTR (~50 % Vmáx).

Se buscaron compuestos que apuntan al CFTR diana sin causar una elevación del cAMP celular para minimizar los posibles efectos fuera de la diana (FIG. 2D). Los compuestos que producen elevaciones en cAMP intracelular (de las Clases O, Q y R), probablemente por inhibición de la fosfodiesterasa, se excluyeron de una consideración adicional. Se seleccionaron compuestos de potencia nanomolar de las Clases B, J y K, que no aumentaban el cAMP, para caracterización posterior en ratones vivos.

Los activadores de CFTR aumentan el cloruro de la superficie ocular y la secreción de fluidos in vivo. Se utilizó un método de diferencia de potencial (PD) de circuito abierto desarrollado en nuestro laboratorio para evaluar la actividad del compuesto en la superficie ocular in vivo, como se representa en la FIG. 3A (21). La función del canal de Cl- se cuantificó al medir la DP durante la perfusión continua de la superficie ocular con una serie de soluciones que imponían un gradiente transepitelial de Cl- y contenían varios agonistas y/o inhibidores del canal. Primero se perfundió la superficie ocular con solución salina isosmolar para registrar la PD de referencia. A continuación, se agregó amilorida al perfundido, seguido de intercambio a una solución baja en Cl- en la que se Cl- con un anión impermeable, gluconato. Estas maniobras permiten la visualización directa de la activación de CFTR en respuesta a la adición de activadores de CFTR candidatos.

La FIG. 3B muestra grandes hiperpolarizaciones después de la exposición a CFTRact-B074, CFTRact-J027 y CFTRact-K089, que aumentaron relativamente poco con forskolina y fueron revertidas por CFTRinh-172. En comparación, VX-770 produjo cambios mínimos en la PD de la superficie ocular (FIG. 3C). La FIG. 3D resume los datos de PD para los activadores indicados, con datos para compuestos adicionales informados en la FIG. 7. Los estudios de control realizados en ratones CF que carecían de CFTR funcional no mostraron cambios en la PD tras la adición de cada uno de los compuestos probados, una curva representativa se muestra para CFTRact-K032 (FIG. 3E).

Los activadores de CFTR se probaron a continuación en cuanto a su eficacia para aumentar la producción de lágrimas en ratones. Los experimentos preliminares identificaron una formulación oftálmica estándar (polisorbato al 0.5 % ) que aumentaba la solubilidad del compuesto y la duración de la acción. Después de una dosis tópica única, los activadores indirectos de CFTR, toxina del cólera, forskolina y 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX) aumentaron sustancialmente la secreción lagrimal basal a los 30 min, pero estos efectos fueron transitorios e indetectables después de 2 horas (FIG.

4A). Sin embargo, los activadores directos de CFTR identificados en el presente documento, CFTRact-B074, CFTRact-J027 y CFTRact-K089, aumentaron la secreción de fluido lagrimal aproximadamente al doble durante al menos cuatro horas. VX-770 produjo poca secreción lagrimal (FIG. 4B). Las administraciones tópicas repetidas (tres veces al día durante un máximo de 2 semanas) produjeron hipersecreción lagrimal sostenida sin taquifilaxia (FIG. 4C). Los activadores de CFTR no aumentaron la secreción de fluido lagrimal en ratones con CF, lo que demuestra la orientación selectiva de CFTR (FIG. 4D).

Toxicidad y farmacocinética. Los métodos de recolección de lágrimas se validaron al demostrar la recuperación reproducible de tetrametilrodamina dextrano (3 kDa) de la superficie ocular hasta seis horas después de la instilación. La farmacocinética de CFTRact-K089 en la superficie ocular se determinó mediante LC/MS de lavados de lágrimas recuperados. Después de la instilación de 0.1 nmol de CFTRact-K089 (2 jl, 50 j M) en la superficie ocular, se recuperaron 7.9 ± 2.4 pmol y 0.011 ± 0.004 pmol a los cinco minutos y seis horas, respectivamente (FIG. 5A). La cantidad de CFTRact-K089 requerida para la activación de CFTR al 50 % (EC⁵⁰~250 nM) se encuentra entre las líneas discontinuas, lo que refleja las concentraciones calculadas a partir de los volúmenes lagrimales normales informados más alto y más bajo en ratones (33, 34). La cantidad de CFTRact-K089 recuperada del fluido lagrimal predice niveles terapéuticos durante al menos seis horas. No se pudo medir la farmacocinética del fluido lagrimal de CFTRact-J027 porque la sensibilidad de LC/MS era baja para este compuesto.

Después de dos semanas de dosificación tres veces al día, las cantidades de CFTRact-K089 y CFTRact-J027 estaban por debajo de los límites de detección (~10 y ~700 fmol, respectivamente) en sangre, cerebro, hígado y riñón de ratón, lo que indica mínima acumulación sistémica. Los ratones tratados crónicamente no mostraron signos de toxicidad ocular, según lo evaluado mediante evaluación con lámpara de hendidura para hiperemia conjuntival, inflamación de la cámara anterior y claridad del cristalino. La tinción de LG no mostró disrupción del epitelio corneal o conjuntival (FIG. 5B). Los compuestos tampoco produjeron citotoxicidad in vitro apreciable en cultivos celulares a concentraciones de hasta 100 j M (FIG. 5C).

El activador de CFTR previene el ojo seco en un modelo de escisión de glándula lagrimal en ratones. Sobre la base de su farmacocinética favorable de la película lagrimal, se seleccionó CFTRact-K089 para realizar pruebas en un modelo de ratón con ojo seco por deficiencia de agua producido por LGE. Después de LGE extraorbital en ratones BALB/c, los ratones tratados con CFTRact-K089 (0.1 nmol, administrado tres veces al día) mantuvieron el volumen lagrimal basal, mientras que el volumen lagrimal de los ratones tratados con vehículo se redujo significativamente en todos los puntos de tiempo posteriores (FIG. 6A), y durante al menos 30 días. De manera similar a lo que se informó en ratones C57/bl6 (30), la disminución de la lagrimación en ratones BALB/c tratados con vehículo se asoció con una alteración epitelial progresiva desde el Día 0 hasta el Día 14, que se muestra pictóricamente (FIG. 6B superior) y cuantitativamente (FIG. 6C). CFTRact-K089 no solo restauró la secreción lagrimal en ratones LGE sino que evitó notablemente la disrupción del epitelio de la superficie ocular en todos los puntos de tiempo (FIG. 6B). Los ojos tratados con vehículo desarrollaron una epiteliopatía corneal progresiva y difusa (aumento de la puntuación de LG de 7.3 ± 0.6 en el Día 14), mientras que los ojos tratados con CFTRact-K089 tenían una tinción mínima de LG en todos los puntos de tiempo (cambio de la puntuación LG, -0.6 ± 0.6).

Discusión.

Un objetivo de este estudio fue investigar la utilidad potencial de los activadores de CFTR de molécula pequeña para la terapia del ojo seco. Después de varias fallas en el desarrollo anterior, el ojo seco sigue siendo una necesidad insatisfecha en la enfermedad ocular. En los trastornos del ojo seco, la hiperosmolaridad de la película lagrimal estimula la señalización proinflamatoria, la secreción de citocinas y metaloproteinasas y la disrupción de la integridad de las células epiteliales de la córnea (35-38). Al minimizar la hiperosmolaridad de la película lagrimal, se prevé que la activación de CFTR prevenga estos cambios en la superficie ocular que se encuentra más abajo.

Identificamos activadores de CFTR de molécula pequeña mediante cribado de alto rendimiento que produjo una secreción de fluido acuoso impulsada por Cf sostenida a través de la superficie ocular mediante un mecanismo que implicaba la activación directa de CFTR en lugar de la señalización de cAMP que se encuentra más arriba. La justificación para elegir compuestos que activan CFTR directamente fue minimizar los posibles efectos fuera de la diana de la estimulación generalizada de cAMP y reducir la probabilidad de taquifilaxia para los compuestos que se dirigen a los receptores de señalización. Estos compuestos tienen una EC ⁵⁰nanomolar baja para la activación de CFTR humano in vitro y producen una activación completa a concentraciones más altas. Se demostraron grandes hiperpolarizaciones de E p dependientes de CFTR e hipersecreción lagrimal en ratones. Las actividades de compuestos sustanciales en ratones y humanos facilitarán la traducción de datos en el presente documento a humanos.

Encontramos que CFTRact-K089 restauró la secreción lagrimal y evitó la disrupción epitelial en un modelo de ratón experimental de insuficiencia lagrimal. Los activadores de C FT r pueden ser particularmente adecuados para los trastornos de las glándulas lagrimales, tal como el síndrome de Sjogren primario, al estimular el transporte de fluidos a través del epitelio corneal y conjuntival intacto. Es probable que los activadores de CFTR ejerzan su principal efecto prosecretor en la superficie ocular, aunque existe un efecto indirecto para la expresión y función de CFTR en la glándula lagrimal (39-42). La estimulación directa de la secreción lagrimal es poco probable en los estudios en el presente documento debido a la mínima penetración del compuesto en los tejidos lagrimales después del suministro tópico y la eficacia demostrada del compuesto en un modelo de insuficiencia lagrimal. En la superficie ocular, la conjuntiva probablemente aporta la mayor parte de la secreción de fluido dado en su área de superficie mucho más grande en comparación con la córnea (43).

Se han considerado terapias prosecretoras alternativas dirigidas a diferentes canales iónicos de la superficie ocular. El único activador de CFTR aprobado por la FDA, VX-770, se desarrolló como un “potenciador” para tratar la CF al corregir la activación del canal de ciertas mutaciones de CFTR (44). Sin embargo, VX-770 mostró una actividad relativamente pequeña contra CFTR de tipo silvestre en cultivos celulares y en ratones in vivo. La aplicación crónica de VX-770 también puede disminuir la expresión funcional de CFTR (24) y causar cataratas (observadas en ratas jóvenes; ref. 42), lo que probablemente sea un efecto fuera de la diana porque CFTR no se expresa en el cristalino.

CFTRact-K089 y CFTRact-J027 mostraron una farmacodinámica favorable y se podrían administrar convenientemente por vía tópica varias veces al día en una formulación oftálmica estándar.

En conclusión, sin desear limitarse a la teoría, se considera que la eficacia de CFTRact-K089 en un modelo de ratón clínicamente relevante de enfermedad de ojo seco por deficiencia acuosa proporciona una prueba de principio para terapia activadora de CFTR prosecretor tópico para restaurar la secreción lagrimal basal y prevenir la patología de la superficie ocular. En comparación con los enfoques inmunosupresores, la activación de CFTR tiene la ventaja de abordar un evento temprano en la patogénesis del ojo seco. Por lo tanto, nuestros datos respaldan el potencial de desarrollo de los activadores de C FT r como la primera terapia de ojo seco de su clase.

Referencias (Ejemplo Comparativo 5).

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Ejemplo 6. Activadores del canal de cloruro de CFTR de aminofenil-1,3,5-triazina de potencia nanomolar para la terapia prosecretora de enfermedades del ojo seco. "

La numeración de los compuestos y los sustituyentes dentro del Ejemplo 6 es solo con respecto al Ejemplo 6.

Resumen. Los trastornos del ojo seco son un problema de salud importante para el que las opciones terapéuticas disponibles son limitadas. El CFTR (regulador de conductancia de transmembrana de fibrosis quística) es un importante canal de cloruro prosecretor en la superficie ocular. Anteriormente identificamos, mediante un cribado de alto rendimiento, aminofenil-1,3,5-triazina CFTRact-K089 (1) que activaba CFTR con EC ⁵⁰~250 nM, que cuando se suministra tópicamente aumentaba la secreción de fluido lagrimal en ratones y mostró eficacia en un experimento de modelo de ojo seco. En el presente documento, el análisis funcional de los análogos de aminofenil-1,3,5-triazina sintetizados aclaró las relaciones estructura-actividad para la activación de CFTR e identificó análogos sustancialmente más potentes que 1. El compuesto más potente, 12, conductancia de cloruro de CFTR totalmente activado con EC ⁵⁰~30 nM, sin causar cAMP o elevación de calcio. 12 no era tóxico, era estable a 100 pM en un vehículo oftálmico y se metabolizaba rápidamente por los microsomas hepáticos, lo que respalda su uso tópico en la enfermedad del ojo seco. También se identificaron análogos con mayor estabilidad metabólica para el posible tratamiento de trastornos hepáticos y pulmonares. La administración tópica única de 25 pmol 12 aumentó el volumen lagrimal en ratones de tipo silvestre con acción sostenida durante 8 horas y no tuvo efecto en ratones con deficiencia de CFTR. El 12 suministrado tópicamente puede ser eficaz en las enfermedades del ojo seco en humanos.

Introducción. El CFTR (regulador de conductancia de transmembrana de fibrosis quística) es un canal de cloruro activado por cAMP con actividad prosecretora en las vías respiratorias, los órganos gastrointestinales, los testículos y las glándulas exocrinas [1-4]. Las mutaciones de pérdida de función en CFTR causan fibrosis quística, y la activación inapropiada de CFTR causa ciertas diarreas secretoras como el cólera. [5-7]. El CFTR es una importante diana de fármaco para la que se han realizado importantes avances en el desarrollo de potenciadores y correctores de CFTR mutantes en la fibrosis quística, con dos fármacos que han recibido la aprobación de la FDA [8]. Los activadores de CFTR de tipo silvestre tienen posibles indicaciones clínicas para la terapia prosecretora del estreñimiento y los trastornos del ojo seco, y posiblemente para los trastornos del hígado, el páncreas y las vías respiratorias. [9-12], y se están desarrollando inhibidores de CFTR para ciertas diarreas secretoras y enfermedad renal poliquística [13,14]. Identificamos previamente, mediante cribado de alto rendimiento, activadores de molécula pequeña de CFTR de tipo silvestre que funcionan mediante un mecanismo de activación directa [12-15]. Una clase de activadores de CFTR de fenilquinoxalinona mostró eficacia después de la administración oral en modelos de estreñimiento en ratones experimentales [9,10]. Una segunda clase de activadores de CFTR, que incluye el aminofenil-1,3,5-triazina CFTRact-K089 (compuesto 1, FIG. 14A), activó la actividad de CFTR en la superficie ocular en ratones y aumentó la secreción de fluido lagrimal después del suministro tópico. [12]. En un modelo de ratón con ojo seco acuoso deficiente producido por la escisión de la glándula lagrimal, el suministro tópico de 1 tres veces al día corrigió la secreción defectuosa del fluido lagrimal y previno los signos clínicos de la superficie ocular. Una terapia ideal para el ojo seco produciría una secreción de fluido lagrimal sostenida con una dosis diaria de una o dos veces.

En el presente documento, informamos estudios de relación estructura-actividad de activadores de CFTR de aminofenil-1,3,5-triazina con un enfoque sobre aplicaciones de ojo seco. El ojo seco es un grupo heterogéneo de trastornos asociados con la reducción del volumen lagrimal y la hiperosmolaridad del fluido lagrimal, lo que provoca inflamación de la superficie ocular, molestias oculares y perturbaciones visuales. El ojo seco es un problema de salud importante en una población que envejece, con cinco millones de pacientes en los EE.UU. mayores de 50 años.

[16,17]. Los únicos fármacos aprobados para el ojo seco, la ciclosporina tópica y el lifitegrast, actúan mediante un mecanismo antiinflamatorio. [18,19]. Los activadores de CFTR serían los primeros en su clase en terapias para el ojo seco que funcionan mediante un mecanismo prosecretor. La síntesis y la caracterización de aminofenil-1,3,5-triazinas en el presente documento produjeron posibles candidatos principales con una potencia sustancialmente mejorada y una eficacia prosecretora in vivo en comparación con 1, así como compuestos con mayor estabilidad metabólica para el tratamiento potencial de afecciones no oculares.

Química.

Síntesis general de análogos de aminofenil-1,3,5-triazina. La síntesis de análogos de aminofenil-1,3,5-triazina se logró mediante sustitución en serie de cloruro cianúrico utilizando alcóxidos fluorados, dietilamina y anilinas (Esquema 1). La sustitución del cloruro cianúrico con 1,1,1,3,3,3-hexafluoroisopropanol o 2,2,3,3-tetrafluoro-1-propanol proporcionó 2 y 3, respectivamente. La aminación de 2 y 3 utilizando dietilamina proporcionó los intermedios 4 y 5. El reflujo de 4 y 5 con anilina proporcionó 1 y 7a, respectivamente. El reflujo de anilinas sustituidas con m o p-F, Cl, NO², CO ²H con 4 y 5 proporcionó aminofenil-1,3,5-triazinas 6a-g y 7b-g, respectivamente. 5 se sometió a reflujo con 6-aminobenzotiazol, 6-aminobenzoxazol, 5-o 6-aminoindazol bajo condiciones básicas para producir 6h-6k.

Esquema 1. Síntesis de análogos de N,N-dietil-1,3,5-triazina. (a) (CF³)²CHOH, K²CO ³, THF, -80 °C, 62 % para 2. (b) CHF²C F ²CH²OH, K²CO ³, THF, -80 °C, 68 % para 3. (c) Et²NH, DIPEA, THF, 0 °C, 55 % . (d) DIPEA, THF, reflujo, 25 81 % .

Los análogos 11 y 12 de N-metilamina-1,3,5-triazina se sintetizaron como se muestra en el Esquema 2. La metilamina se sustituyó con cloruro cianúrico para producir N-metil-4,6-dicloro-1,3,5-triazina-2-amina 8 con un rendimiento del 72 % . Con el 8 a la mano, la sustitución con 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol o 2,2,3,3-tetrafluoro-1-propanol proporcionó 9 y 10, respectivamente. La sustitución de anilina en 9 y 10 proporcionó los análogos de N-metilamino-N'-fenilamino-1,3,5-triazina 11 y 12, respectivamente.

9 R = CH(CF«¡)2 11 R = CH(CF5)2

10 R = C H 2C F 2C H F 2 12 R = C H 2C F 2C H F2

Esquema 2. Síntesis de análogos de N-metilamino-N'-fenilamino-1,3,5-triazina. (a) DIPEA, THF, 0 °C, 75 % . (b) (CF³)²CHOH, K²CO³, THF, 0 °C, 43 % para 9. (c) CHF²CF ²CH²OH, K²CO ³, THF, 0 °C, 66 % para 10. (d) DIPEA, THF, reflujo, 74 % para 12; 68 % para 11.

Procedimientos generales de síntesis. Todos los solventes y productos químicos se utilizaron tal como se adquirieron sin purificación adicional. El progreso de todas las reacciones se monitorizó en placas de gel de sílice recubiertas previamente de Merck (con fluorescencia a 254 nm) utilizando acetato de etilo/n-hexano como sistema solvente. La cromatografía en columna se realizó con gel de sílice Fluka 60 (malla 230-400 ASTM) con mezclas de solventes especificadas. Los espectros de RMN de protón (¹H) y carbono (¹³C) se registraron sobre un Bruker Avance 300 o 500 (500.13 MHz para ¹H; 125.76 MHz para ¹³C) utilizando CDCh ^{( 8}7.26), CD³OD ^{( 8}= 4.87 y 3.31), acetona-da ^{( 8}2.05), o DMSO-d^{6 ( 8}2.5) como solventes. Los desplazamientos químicos se dan en partes por millón (ppm) ^{( 8}relativo al pico de solvente residual para 1H y ¹³C). El HRMS se realizó utilizando un analizador de masa orbitrap cuadrupolo híbrido, QExactive (Thermo, Bremen, Alemania), con una fuente de ionización por electropulverización. La resolución de masa se fijó en 70,000 a m/z 200 y la precisión de masa fue inferior a 3 ppm. La pureza de todos los compuestos finales fue del 95 % o superior.

N,N-Dietil-N'-fenil-6-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)-1,3,5-triazina-2,4-diamina (7a). Se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex 1:10) para producir 7a como un polvo blanco (100 mg, 38%). Rm N 1H (300 MHz, CDCk): ⁸= 7.60 (d, 2H, J= 8.4 Hz), 7.34 (t, 2H, J= 7.4 Hz), 7.08 (t, 1H, J = 7.3 Hz), 6.06 (tt, 1H, J = 4.9, 53.0 Hz), 3.68-3.59 (m, 2H), 4.78-4.70 (m, 4H), 1.28-1.20 (m, ⁶H); RMN 13C (75 MHz, CDCta): ⁸= 169.2, 165.2, 164.8, 138.6, 128.7, 123.1, 120.0, 114.4 (t, J= 26 Hz), 112.3 (t, J= 34 Hz), 109.0 (t, J = 34 Hz), 105.7 (t, J = 34 Hz), 62.1 (t, J= 30 Hz), 42.1,41.7, 13.1, 12.9; HRMS (ESI): m/z calculado para C16H20F4N5O [M H+]: 374.1599. Encontrado: 374.1597.

Ácido 3-{[4-(Dietilamino)-6-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)-1,3,5-triazin-2-il]amino}benzoico (7b). Se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex 1:5) para producir 7b como un polvo blanco (60%). RMN 1H (300 MHz, acetona-d⁶): ⁸= ^{8 .6 8}(brs, 1H), 7.92 (m, 1H), 7.74-7.71 (m, 1H), 7.46 (t, 1H, J= 7.84 Hz), 6.45 (tt, 1H, J= Hz), 4.91-4.82 (m, 2H), 3.74-3.65 (m, 4H), 1.28-1.18 (m, ⁶H); RMN 13C (75 MHz, acetona-d⁶): ⁸= 169.12, 164.68, 159.89, 157.96, 142.33, 134.51, 131.28, 125.52, 121.99, 118.77, 115.45, 115.27, 114.35, 112.35, 111.29, 111.01, 110.73, 110.07, 109.29, 109.02, 108.75, 107.31, 107.03, 106.76, 62.71, 62.37, 62.13, 61.89, 42.13, 41.84, 29.67, 13.06, 12.86, 12.77; HRMS (ESI): m/z calculado para C17H20F4N5O3 [M H+]: 418.1497. Encontrado: 418.1501.

N,N-Dietil-N'-(3-fluorofenil)-6-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)-1,3,5-triazina-2,4-diamina (7c). Se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex 1:10) para producir 7c como un polvo blanco (40%). RMN 1H (300 MHz, CDCla): ⁸= 7.73 (dt, 1H, J= 2.1, 7.73 Hz), 7.37 (brs, 1H), 7.26 (td, 1H, J = 6.31, 8.19 Hz), 7.12 (ddd, 1H, J = 0.9, 2.0, 8.16 Hz), 6.76 (ddt, 1H, J = 0.9, 2.5, 8.2 Hz), 6.02 (tt, 1H, J = 4.92, 53.01 Hz), 4.74 (tt, 2H, J = 1.6, 12.4 Hz),3.64 (sex, 4H, J = 7.02 Hz), 1.23 (m, ⁶H); RMN 13C (75 MHz, CDCta): ⁸= 169.2, 165.2, 164.8, 164.6, 161.4, 140.4, 140.3, 129.8, 129.7, 114.9, 114.9, 114.7, 114.3, 114.0, 112.7, 112.3, 111.0, 109.7, 109.47, 109.42, 109.0, 108.5, 107.3, 107.0, 105.7, 62.5, 62.1, 61.7, 42.3, 41.9, 13.0, 12.8; HRMS (ESI): m/z calculado para C16H19F5N5O [M H+]: 392.1505. Encontrado: 392.1505.

N'-(3-Clorofenil)-N,N-dietil-6-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)-1,3,5-triazina-2,4-diamina (7d). Se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex 1:10) para producir 7d como un polvo blanco (81 %). r Mn 1H (300 MHz, CDCh): ⁸= 7.99 (brs, 1H), 7.25 (m, 3H), 7.04 (dt, 1H, J= 7.01,2.01 Hz), 6.02 (t, 1H, J= 4.89 Hz), 4.73 (t, 2H, J= 12.3 Hz), 3.64 (m, 4H), 1.84 (brs, 1H), 1.25 (m, ⁶H); RMN 13C (75 MHz, CDCk): ⁸= 169.2, 165.2, 164.7, 139.9, 134.5, 129.6, 122.9, 120.0, 117.6, 114.5, 114.3, 114.1, 112.3, 111.3 , 111.0, 110.7, 109.3, 109.0, 108.8, 107.3, 107.0, 106.8, 62.4, 62.1, 61.9, 42.4, 42.0, 13.0, 12.9; HRMS (ESI): m/z calculado para C16H19ClF4N4O [M H+]: 408.1209. Encontrado: 408.1210.

N,N-Dietil-N'-(3-nitrofenil)-6-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)-1,3,5-triazina-2,4-diamina (7e). Se purificó mediante cromatografía flash (EtoAc/Hex ¹:^{1 0}) para producir 7e como un polvo amarillento (61 %). RMN 1H (300 MHz, CDCk): ⁸= 9.12 (brs, 1H), 8.15 (brs, 1H), 7.90 (dd, 1H, J = 8.20, 1.58 Hz), 7.57 (d, 1H, J= 7.57 Hz), 7.44 (t, 1H, J= 8.04 Hz), 5.96 (m, 1H), 4.75 (t, 2H, J = 12.61 Hz), 3.72 (q, 2H, J = 6.94 Hz), 3.65 (q, 2H, J = 6.94), 2.12 (brs, 1H), 1.31 (t, 3H, J= 7.09 Hz), 1.24 (t, 3H, J= 7.09 Hz); RMN 13C (75 MHz, CDCta): ⁸= 169.1, 164.9, 164.7, 148.6, 140.1, 129.2, 124.8, 117.4, 116.2, 114.6, 114.5, 114.2, 114.0, 112.3, 111.3 , 111.0, 110.7, 109.3, 109.0, 108.7, 107.3, 107.0, 106.7, 62.3, 62.1, 61.8, 42.6, 42.1, 12.9, 12.8; HRMS (ESI): m/z calculado para C16H19F4N6O3 [M H+]: 419.1450. Encontrado: 419.1449.

Ácido 4-({4-(Dietilamino)-6-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)-1,3,5-triazin-2-il}amino)benzoico (7f). Se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex ¹:^{1 0}) para producir 7f como un polvo blanco (37%). RMN 1H (300 MHz, acetona-d⁶): ⁸= 8.97 (brs, 1H), 8.04-7.96 (m, 4H), 6.45 (tt, 1H, J = 5.07, 52.41 Hz), 4.88 (t, 2H, J= 13.5 Hz), 3.74-3.64 (m, 4H), 1.29-1.19 (m, ⁶H); RMN 13C (75 MHz, acetona-d⁶): ⁸= 169.7, 166.4, 165.5, 165.4, 144.2, 130.5, 124.0, 118.8, 109.6, 109.1, 62.1, 61.7, 61.4 (t, J= Hz), 41.8, 41.5, 12.4, 12.3; HRMS (ESI): m/z calculado para C17H20F4N5O3 [M H+]: 418.1497. Encontrado: 418.1499.

N,N-Dietil-N'-(4-fluorofenil)-6-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)-1,3,5-triazina-2,4-diamina (7g). Se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex 1:10) para producir 7g como un polvo blanco (45 %). r Mn 1H (300 MHz, CDCk): ⁸= 7.53 (m, 2H), 7.36 (brs, 1H), 7.02 (m, 2H), 6.03 (m, 1H), 4.73 (m, 2H), 3.61 (m, 4H), 1.24 (m, ⁶H); RMN 13C (75 MHz, CDCta): ⁸= 169.1, 164.6, 159.8, 157.9, 142.3, 134.5, 131.2, 125.5, 121.9, 118.7, 115.4, 115.2, 114.3, 112.3, 111.2 , 111.0, 110.7, 110.07, 109.2, 109.0, 108.7, 107.3, 107.0, 106.7, 62.7, 62.3, 62.1,61.8, 42.1,41.8, 29.6, 13.0, 12.8, 12.7; HRMS (ESI): m/z calculado para C16H19F5N5O [M H+]: 392.1505. Encontrado: 392.1503.

Acido 3-({4-(dietilamino)-6-[(1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi]-1,3,5-triazin-2-il}amino)benzoico (6a). Se purifica mediante cromatografVa flash (EtOAc/Hex 1:6) para producir 6a como un polvo blanco (55 %). RMN 1H (300 MHz, acetona-d6): 8 = 9.02 (brs, 1H), 8.79 (brs, 1H), 7.90 (d, 1H, J = 8.07 Hz), 7.76 (dt, 1H, J = 1.29, 7.86 Hz), 7.48 (t, 1H, J = 7.92 Hz), 6.79 (quint, 1H, J= 6.4 Hz), 3.78-3.66 (m, 4H), 1.29-1.20 (m, 6H); RMN 13C (75 MHz, acetona-d6): 8 = 168.6, 166.8, 165.3, 139.6, 131.1, 128.7, 123.9, 123.1, 121.2, 119.3, 68.9, 68.5, 68.0, 67.6, 67.1 (quint, J = 34 Hz), 42.1.41.6, 12.35, 12.32; HRMS (ESI): m/z calculado para C17H18F6N5O3 [M H+]: 454.1309. Encontrado: 454.1311. N,N-Dietil-N'-(3-fluorofenil)-6-[(1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi]-1,3,5-triazina-2,4-diamina (6b). Se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex 1:8) para producir 6b como un polvo blanco (45 %). RMN 1H (300 MHz, CDCla): 8 = 7.69 (m, 1H), 7.48 (brs, 1H), 7.26 (m, 1H), 7.11 (d, 1H, J = 7.88 Hz), 6.79 (td, 1H, J = 8.2, 2.5 Hz), 6.31 (dt, 1H, J = 12.37, 6.27 Hz), 3.64 (m, 4H), 1.25 (m, 6H); RMN 13C (75 MHz, CDCh): 8 = 34168.5, 165.1, 164.8, 164.6, 161.3, 140.1, 139.9, 129.8, 129.7, 122.7, 118.9, 115.1, 110.0, 109.7, 107.6, 107.2, 68.8, 68.4, 67.9 (t, J = 34 Hz), 42.6, 42.2, 12.8, 12.7; HRMS (ESI): m/z calculado para C16H17F7N5O [M H+]: 428.1316. Encontrado: 428.1316.

N,N-Dietil-6-[(1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi]-N'-(3-nitrofenil)-1,3,5-triazina-2,4-diamina (6d). Polvo amarillento, 62 % de rendimiento. RMN 1H (300 MHz, CDCl3): 8 = 9.15 (brs, 1H), 8.23-7.74 (m, 2H), 7.70-7.34 (1m, 2H), 6.31 (quint, 1H, J = 6.15 Hz), 3.74 (q, 2H, J = 6.94 Hz), 3.63 (q, 2H, J = 7.04 Hz), 1.89 (brs, 1H, 1.33 (t, 3H, J = 7.09 Hz), 1.24 (t, 4H, J = 7.09 Hz); RMN 13C (75 MHz, CDCl3): 8 = 168.4, 165.1, 164.8, 148.6, 139.8, 129.3, 128.4, 126.3, 125.2, 122.6, 118.8, 115.1 (q, J = 280 Hz), 125.0, 117.8, 114.8, 68.9, 68.4, 68.0 (t, J = 34 Hz), 42.9, 42.4, 12.8, 12.7; HRMS (ESI): m/z calculado para C16H17F6N6O3 [M H+]: 455.1261. Encontrado: 455.1263.

Ácido 4-({4-(Dietilamino)-6-[(1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi]-1,3,5-triazin-2-il}amino)benzoico (6e). Se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex 1:10) para producir 6e como un polvo blanco (56%). RMN 1H (300 MHz, acetona-d6): 8 = 9.12 (brs, 1H), 8.05-7.89 (m, 4H), 6.80 (quint, 1H, J = 6.39 Hz), 3.72, (quint, 4H, J = 7.2 Hz), 1.31 1.18 (m, 7H); RMN 13C (75 MHz, acetona-d6): 8 = 168.66, 165.91, 165.44, 165.34, 137.51, 133.65, 132.32, 131.53, 126.93, 123.46, 123.20, 123.16, 121.85, 119.46, 119.42, 115.73, 113.32, 112.69, 111.18 , 109.84, 68.94, 68.44, 68.01, 67.56, 42.06, 41.55, 12.45, 12.31; HRMS (ESI): m/z calculado para C17H18F6N5O3 [M H+]: 454.1309. Encontrado: 454.1308.

N,N-Dietil-N'-(4-fluorofenil)-6-[(1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi]-1,3,5-triazina-2,4-diamina (6f). Se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex 1:10) para producir 6f como un polvo blanco (35 %). r Mn 1H (300 MHz, CDCla): 8 = 7.55-7.50 (m, 2H), 7.25 (brs, 1H), 7.08-7.01 (m, 2H), 6.32 (quint, 1H, J = 6.30 Hz), 3.61 (dq, 4H, J = 3.06, 7.08 Hz), 1.23 (q, 6H, J = 7.17 Hz); RMN 13C (75 MHz, CDCh): 8 = 168.5, 165.1, 160.7, 157.4, 134.2, 122.7, 122.2, 118.9, 115.5, 115.2, 69.2, 68.8, 68.3, 67.9 (quint, J = 34 Hz), 42.3, 42.0, 12.9, 12.8; HRMS (ESI): m/z calculado para C16H17F7N5O [M H+]: 428.1316. Encontrado: 428.1319.

N,N-Dietil-6-[(1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi]-N-(4-nitrofenil)-1,3,5-triazina-2,4-diamina (6g). Se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex 1:10) para producir 6g como un polvo amarillento (75%). RMN 1H (300 MHz, CDCh): 8 = 8.37 (brs, 1H), 8.24-8.19 (m, 2H), 7.84-7.79 (m, 2H), 6.33 (quint, 1H, J = 6.24 Hz), 3.71-3.60 (m, 4H), 1.27 (dt, 6H, J = 7.05, 17.33 Hz); RMN 13C (75 MHz, (CDCh): 8 = 168.4, 164.9, 164.8, 144.7, 142.7, 126.3, 122.6, 118.8, 115.1 (q, J = 281 Hz), 124.8, 119.2, 69.4, 68.9, 68.5, 68.0, 67.6 (quint, J = 34 Hz), 42.7, 42.4, 12.78, 12.75; HRMS (ESI): m/z calculado para C16H17F6N6O3 [M H+]: 455.1261. Encontrado: 455.1264.

N,N-Dietil-6-[(1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi]-N'-(1H-indazol-5-il)-1,3,5-triazina-2,4-diamina (7h). Se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex 1:6) para producir 7h como un polvo blancuzco (28%). RMN 1H (300 MHz, acetona-d6): 8 = 12.22 (brs, 1H), 8.85 (brs, 1H), 8.29 (brs,1H), 8.03 (d, 1H, J = 0.96 Hz), 7.67 (d, 1H, J = 8.94 Hz), 7.57 (d, 1H, J = 8.94 Hz), 6.79 (quint, 1H, J = 6.45 Hz), 3.68 (q, 4H, J = 6.99 Hz), 1.28-1.17 (m, 6H); RMN 13C (75 MHz, acetona-d6): 8 = 168.6, 165.9, 165.4, 165.3, 137.5, 133.6, 132.3, 131.5, 126.9, 123.4, 123.2, 123.1, 121.8, 119.46, 119.42, 115.7, 113.3, 112.6, 111.1, 109.8, 68.4, 68.0, 67.5 (quint, J = 34 Hz), 42.0, 41.5, 12.4, 12.3; HRMS (ESI): m/z calculado para C17H18F6N7O [M H+]: 450.1472. Encontrado: 450.1472.

N,N-Dietil-6-[(1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi]-N'-(1H-indazol-6-il)-1,3,5-triazina-2,4-diamina (7i). Se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex 1:6) para producir 7i como un polvo blancuzco (28%). RMN 1H (300 MHz, acetona-d6): 8 = 8.96 (brs, 1H), 8.38 (brs, 1H), 7.97 (d, 1H, J = 1.05 Hz), 7.71 (dd, 1H, J = 0.72, 8.67 Hz), 7.34 (dd, 1H, J = 1.77, 8.70 Hz), 6.79 (quint, 1H, J = 6.48 Hz), 3.79 (m, 4H), 1.32-1.21 (m, 6H); RMN 13C (75 MHz, acetona-d6): 8 = 168.6, 165.3, 162.8, 140.9, 137.7, 133.5, 126.9, 123.1, 120.4, 119.5, 115.3, 68.0, 42.1, 41.6, 12.4, 12.2; 169.12, 164.68, 159.89, 157.96, 142.33, 134.51, 131.28, 125.52, 121.99, 118.77, 115.45, 115.27, 114.35, 112.35, 111.29, 111.01, 110.73, 110.07, 109.29, 109.02, 108.75, 107.31, 107.03, 106.76, 62.71, 62.37, 62.13, 61.89, 42.13, 41.84, 29.67, 13.06, 12.86, 12.77; HRMS (ESI): m/z calculado para C17H18F6N7O [M H+]: 450.1472. Encontrado: 450.1475.

N'-(1,3-Benzoxazol-6-il)-N,N-dietil-6-[(1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi]-1,3,5-triazina-2,4-diamina (7j). Se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex 1:8) para producir 7j como un polvo púrpura (25 %). RMN 1H (300 MHz, acetona-d6): 8 = 9.08 (brs, 1H), 8.46 (brs, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.70 (d, 1H, J = 8.61 Hz), 7.63 (dd, 1H, J = 1.92, 8.61 Hz), 6.80 (quint. 1H, J = 6.75 Hz), 3.76-3.67 (m, 4H), 1.31-1.18 (m, 6H); RMN 13C (75 MHz, CDCh): 8 = 168.50, 164.53, 152.91, 149.69, 136.08, 134.72, 123.52, 121.96, 119.88, 119.68, 112.77, 97.34, 68.99, 68.70, 68.45, 42.71, 42.36, 12.92, 12.85; HRMS (ESI): m/z calculado para C17H17F6N6O2 [M H+]: 451.1312. Encontrado: 451.1313.

N'-(1,3-Benzotiazol-6-il)-N,N-dietil-6-[(1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi]-1,3,5-triazina-2,4-diamina (7k). Se purificó mediante cromatografía flash (1:7 EtOAc/Hex) para producir 7k como un polvo blancuzco (40%). RMN 1H (300 MHz, CDCla): 8 = 8.93 (brs, 1H), 8.47 (brs, 1H), 8.02 (d, 1H, J = 8.51 Hz), 7.52 (dd, 2H, J = 8.83, 2.21 Hz), 6.30 (m, 1H), 3.66 (m, 4H), 1.27 (m, 6H); RMN 13C (75 MHz, CDCla): 8 = 168.5, 164.5, 152.9, 149.6, 136.0, 134.7, 123.5, 121.9, 119.8, 119.6, 112.7, 97.3, 68.9, 68.7, 68.4, 42.7, 42.3, 12.9, 12.8; HRMS (ESI): m/z calculado para C17H17F6N6OS [M H+]: 467.1083. Encontrado: 467.1089.

Resultados

Análisis preliminar de estructura-actividad de análogos disponibles comercialmente. La evaluación inicial de la actividad del compuesto se realizó utilizando un ensayo de lector de placas basado en células de la función CFTR. La FIG. 14B resume el análisis SAR preliminar de los ensayos funcionales en 91 análogos disponibles comercialmente de 1 (datos para todos los compuestos comerciales proporcionados en la Tabla 2). Los análogos comerciales de 1,3,5-triazina probados en el presente documento estaban tri-sustituidos en las posiciones 2, 4 y 6 con varios sustituyentes, que incluyen alcóxido, anilina (aminofenilo) y aminas primarias o secundarias. El análisis SAR reveló que las 1,3,5-triazinas trisustituidas cuyos tres sustituyentes contienen un alcóxido fluorado (R1), una anilina (R2) y una alquilamina (R3) dieron la mejor potencia (compuestos K032, K059 y K089, Tabla 2). Los análogos con sustituyentes de dos alcóxidos o alcóxidos no fluorados reducen considerablemente la actividad (K010-018, K023). Adicionalmente, la anilina orto-sustituida (R2) redujo la actividad en comparación con la sustitución en meta y para (K007, K032, K059). Los grupos donantes de electrones que incluyen metoxi, acetilo, trifluorometoxi (K001, K024-028, K079) redujeron la actividad en comparación con el grupo atractor de electrones tal como el nitro como en K032. Finalmente, las alquiaminas estéricamente voluminosas (R3) que incluyen actividad reducida de cíclica, tert-butil- e isobutilamina (K029, K056, K060-065). Las alquilaminas cortas tal como la metilamina y la dietilamina dieron la mayor actividad.

Para los compuestos >80 % de activación, se midieron las EC ⁵⁰a partir del ensayo de respuesta a dosis completa. Debido a que los datos iniciales de SAR de los análogos comerciales estaban limitados y confundidos por variaciones simultáneas en R1, R2 y R3, sintetizamos análogos de 1,3,5-triazina trisustituida diana. Los valores de EC ⁵⁰para la activación de CFTR para los compuestos sintetizados se resumen en las Tablas 3-5. Los compuestos activos produjeron una activación completa de CFTR, como se ve por la actividad similar producida por la forskolina máxima (20 j M), pero con diferentes valores de EC ⁵⁰.

Modificaciones de anilinas sustituidas y alcóxidos fluorados. Dado que tanto el alcóxido fluorado (R1) como la alquilamina corta (R3) parecían ser cruciales para la actividad, primero preparamos N-aril-1,3,5-triazina aminas con R3 como dietilamina y exploramos la actividad de dos alcóxidos fluorados, 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol y 2,2,3,3-tetrafluoro-1-propanol. Como se muestra en la Tabla 3, el hexafluoroisopropanol (1) fue más potente que el tetrafluoropropanol (7a). Con varios sustituyentes arilo (R2), los análogos de hexafluoroisopropanol (6a-6f) fueron ~3 a 8 veces más potentes que los correspondientes análogos de tetrafluoropropanol (7b-7g). Para investigar los sustituyentes de anilina (R2), se prepararon análogos de anilina sustituidos en meta y para con grupos neutros en electrones y atractores de electrones. En general, las anilinas sustituidas en meta (6a y 6b) fueron más activas que los análogos de anilina sustituidas en para (6e y 6f). Entre las anilinas sustituidas en meta, F- (6b), NO²- (6d) y CO ²H-anilina (6a) tenían una potencia comparable o ligeramente mejor que la anilina no sustituida (1), pero la cloroanilina (6c) tenía una actividad significativamente reducida. Con este resultado, planteamos la hipótesis de que la formación de enlaces de hidrógeno es importante para la actividad, por lo que nos mantuvimos enfocados en la fracción de anilina (R2) y sintetizamos más análogos en R2.

Tabla 3. Estructuras de análogos de N,N-dietil-N'-aril-1,3,5-triazina diamina y su EC ⁵⁰(j M).

R1= OCH(CF3)2

0.16 0.14 2.8 0.2

R1 =OCH2(CF2)2H 7b 7c 7d 7e

0.5 1.6 5.4 1.2

R1 =OCH)CF3)2

0.9 0.7 18 0.24 R1 = OCH2(CF2)2H 7f 7g 7a 2.5 4.8 2.0 Modificaciones de anilinas bicíclicas. Para investigar adicionalmente los sustituyentes de anilina, se sintetizaron compuestos con anilinas bicíclicas en la posición R2 con dietilamina (R3) y hexafluoroisopropanol (R1), que incluyen 5-o 6-aminoindazol (6h y 6i), 6-aminobenzoxazol (6j) y 6-aminobenzotiazol. (6k). Como se muestra en la Tabla 4, el análogo de indazol 6h fue ~3 veces más potente que su regioisómero 6i, lo que también respalda la conclusión de que la formación de enlaces de hidrógeno en la posición meta aumenta la actividad. El reemplazo de indazol (6h) por benzoxazol (6j) fue más potente que 1. En particular, el reemplazo de benzoxazol (6j) por benzotiazol (6k) aumentó la potencia en ~3 veces a EC ⁵⁰~50 nM, lo que respalda la importancia de la función aceptora de enlaces de hidrógeno.

Tabla 4. Sustitución con anilinas bicíclicas y su actividad.

ECso = 0.9 EC ⁵⁰= 28 EC50 = 0.15 EC ⁵⁰= 0.05 Modificaciones con N-metilamina. Finalmente, la N,N-dietilamina en R³se reemplazó por metilamina con dos alcóxidos fluorados (Tabla 5). En particular, la N-metilamina-2,2,3,3-tetrafluoro-1-propanoxi-1,3,5-triazina 12 tenía una EC50~50 veces mejor que el análogo de dietilamina ⁶a. Curiosamente, para los análogos de dietilamina (R3), el hexafluoropropanol (1) es más potente que el tetrafluoropropanol (7a), mientras que para los análogos de metilamina (R3), el análogo 12 de tetrafluoropropanol fue ~3 veces más potente que el análogo 11 de hexafluoropropanol. Los compuestos más potentes que emergieron de los análisis SAR se eligieron para caracterizaciones biológicas y estudios de eficacia.

Tabla 5. Análogos de N-metil-N’-fenil-1,3,5-triazina diamina y su actividad

Biología

Caracterización in vitro de amino-fenil-1,3-5-triazinas. Las mediciones de corriente de cortocircuito se realizaron sobre células FRT que expresan CFTR utilizando un gradiente de cloruro transepitelial y después de la permeabilización de la membrana basolateral de la célula, de modo que la magnitud de la corriente de cortocircuito proporciona una medida lineal cuantitativa de la conductancia de cloruro de CFTR. Datos representativos en la FIG. 15A para ⁶k y 12 muestra un pequeño aumento en la corriente con la adición de una baja concentración de forskolina, seguido de aumentos dependientes de la concentración en la corriente después de las adiciones del compuesto. Los compuestos produjeron una activación completa de CFTR, ya que se observó un pequeño aumento adicional en la corriente luego de una concentración máxima de forskolina. Los valores de EC ⁵⁰fueron 30 nM para ⁶k y 31 nM para 12 (FIG. 15B).

Se investigaron los posibles efectos fuera de la diana sobre la señalización celular y los canales iónicos no CFTR relevantes. ⁶k y 12 a 10 |j M no elevaron el cAMP celular (FIG. 16A), no aumentaron el calcio citoplasmático ni inhibieron la elevación del calcio citoplasmático estimulada por ATP (FIG. 16B). También, ⁶k y 12 a 10 j M ni inhibieron ni activaron los canales de cloruro activados por calcio en células FRT que expresan TMEM16A (FIG. 16C) o células HT-29 (FIG. 16D). Para investigar más a fondo la especificidad, se estudiaron las principales rutas de transporte de iones en células epiteliales bronquiales humanas (HBE) mediante corriente de cortocircuito. Las células HBE se trataron secuencialmente con amilorida para inhibir el canal de sodio epitelial (ENaC), forskolina para activar CFTR, CFTRinh-172 para inhibir CFTR y ATP para activar CaCC, lo que produjo los cambios anticipados en la corriente de cortocircuito en las células de control (FIG. 16E izquierda). El pretratamiento de las células durante 10 min con ⁶k o 12 10 j M no alteró las respuestas de corriente de cortocircuito a ENaC, forskolina máxima o ATP, lo que indica que el compuesto no afecta a ENaC o CaCC, ni a los transportadores de células epiteliales de apoyo necesarios para generar corriente (NKCC1, canales epiteliales de K+, bomba de Na+/K+). 12 no activó CFTR en células HBE en ausencia de fosforilación de CFTR basal producida por forskolina (FIG. 16E, parte superior derecha), mientras que 120.1 pM activó completamente CFTR después de forskolina 100 nM (FIG. 16E, parte inferior derecha).

Propiedades farmacológicas y eficacia in vivo.

Los compuestos se estudiaron adicionalmente en cuanto a su solución y estabilidad metabólica, y toxicidad celular. La FIG. 17A muestra que ⁶k y 12 no produjeron toxicidad significativa utilizando un ensayo de azul Alamar, con DMSO al 33 % como control positivo. Cuando se disolvió a 100 pM en un vehículo oftálmico que contenía CMC al 0.3 % en solución de Ringer, el 12 permaneció químicamente estable durante 24 h a 40 °C según lo ensayado por LC/MS (datos no mostrados). Para evaluar la estabilidad metabólica, se incubaron compuestos a 5 pM con microsomas hepáticos de rata en presencia de NADPH. La FIG. 17B muestra la cinética del metabolismo del compuesto, y los perfiles de LC/MS de 12. 1 y 12, que contienen anilinas no sustituidas, se metabolizaron rápidamente con < 40 % de los compuestos originales restantes a los 15 min, mientras que ⁶j y ⁶k, que contenían anilinas bicíclicas, se metabolizaron lentamente quedando ~60 % de los compuestos originales a los 60 min. El análogo que contiene benzoxazol ⁶j mostró una mayor estabilidad metabólica que el análogo de benzotiazol ⁶k, lo que puede deberse a la labilidad relativa del sulfuro en el benzotiazol frente al oxígeno en el benzoxazol. Es deseable una baja estabilidad metabólica para un tratamiento del ojo seco para minimizar la exposición sistémica después de la absorción potencial, mientras que es deseable una alta estabilidad metabólica para la aplicación de activadores de CFTR en el hígado y los pulmones donde se necesita exposición sistémica y acumulación en órganos.

Se realizaron mediciones del volumen de fluido lagrimal después de una dosificación oftálmica única del compuesto de prueba en 2.5 pl de un vehículo oftálmico, o vehículo solo como control. El compuesto 12 se seleccionó después de la prueba preliminar de la eficacia del compuesto a las ⁶horas. A 100 pM (250 pmol) 12 produjo un aumento sostenido en el volumen lagrimal durante ⁸horas que volvió al valor de referencia durante 12-24 h, con una cinética mejorada en comparación con 1 (FIG. 18A). Como se evidencia para la especificidad del compuesto, 12 no aumentó el volumen lagrimal en ratones CF, que carecen de CFTR funcional (FIG. 18B). Se realizó un estudio de dosisrespuesta para determinar la cantidad mínima de 12 que produjo una secreción de fluido lagrimal sostenida. La FIG.

18C muestra una actividad similar de ^{1 2}a dosis de hasta 25 pmol con un volumen lagrimal máximo a las 1-3 horas y un efecto sostenido a las ⁸horas.

Discusión

El estudio de estructura-actividad en el presente documento identificó análogos de 1 con una potencia de activación de CFTR sustancialmente mayor, con el compuesto 12 más potente que tiene EC ⁵⁰~30 nM, selectividad de CFTR y eficacia in vivo sostenida durante al menos ⁸horas en ratones. La selectividad de CFTR se demostró en estudios celulares y por la falta de aumento en el volumen de fluido lagrimal en ratones con deficiencia de CFTR. 12 era químicamente estable, incluso cuando se formulaba en un vehículo oftálmico estándar. Se prevé una exposición sistémica mínima de ^{1 2}en base a la pequeña cantidad necesaria para estimular la secreción lagrimal y su rápido metabolismo hepático previsto. Se necesitarán estudios adicionales que respalden su desarrollo clínico, tales como la farmacocinética del tejido ocular, la toxicidad a largo plazo y la tolerabilidad del paciente, que están más allá del alcance de este estudio de química médica. Cabe destacar que los análogos sintetizados ⁶j y ⁶k tenían una estabilidad metabólica in vitro sustancialmente mayor que ¹o ^{1 2}y, por lo tanto, tienen una utilidad potencial en la terapia de enfermedades hepáticas y pulmonares en las que es necesaria la exposición sistémica.

Se han informado diversas actividades biológicas para el armazón de 1,3,5-triazinas. La atrazina, una clorotriazina con dos sustituyentes de alquilamina, es un herbicida ampliamente utilizado²⁰. Se encontró que algunas N,N-diaminobencil-N-isopropil-1,3,5-triazinas tienen actividades antitubulina in vitro e in vivo²¹. Además, se informó que las triazinas que contienen sustituciones voluminosas de piperazinilo y ciclohexilamino tienen actividad inhibidora de la catepsina. [22]. Los sustituyentes en estas triazinas biológicamente activas son muy diferentes de los que confirieron la activación de CFTR en este estudio. El análisis de estructura-actividad de las aminofenil-1,3,5-triazinas comerciales y sintetizadas determinó que se necesitan tres sustituyentes específicos - alcóxido, alquilamina y fenilamina - sobre la triazina para la actividad de CFTR. Para cada uno de los sustituyentes, (i) los alcóxidos fluorados mostraron una actividad superior a los alcóxidos no fluorados; (ii) las alquilaminas cortas y lineales son cruciales para la actividad, mientras que las aminas voluminosas reducen en gran medida la actividad; y (iii) fenilaminas que contienen grupos atractores de electrones, que incluyen nitro, ácido carboxílico o fluoruro, en la posición meta de mayor actividad. Es de destacar que el compuesto ^{1 2}tiene propiedades similares a las de un fármaco, incluido un peso molecular favorable (331 Da), área de superficie polar topológica (70.3 Á2) y cLogP (4.51), este último muy mejorado en comparación con cLogP de 5.99 para 1.

CFTR es una diana convincente para la terapia del ojo seco, ya que se expresa en los epitelios de la córnea y la conjuntiva en la superficie ocular [23-26] donde funciona como un canal de cloruro prosecretor [27,28]. Mientras que CFTR es en gran medida inactivo bajo condiciones basales, cuando se activa tiene la capacidad de impulsar la secreción de fluido lagrimal sobre la superficie ocular. Por analogía, CFTR es en gran medida inactivo en el intestino bajo condiciones basales, pero cuando es activado por enterotoxinas bacterianas como en el cólera, puede promover la secreción masiva de líquido en el lumen intestinal. Dado que los activadores de CFTR suministrados tópicamente actúan principalmente sobre el epitelio de la superficie ocular, se prevé que sean eficaces en el ojo seco producido por múltiples etiologías, que incluyen los trastornos que afectan a las glándulas lagrimales, tales como el síndrome de Sjogren. Sin embargo, se observa que un agente terapéutico prosecretor puro reemplaza principalmente el compartimento acuoso de la película lagrimal, que también contiene componentes de lípidos y mucina. Esta limitación potencial también se aplica a las terapias antiabsorción en desarrollo dirigidas al canal de sodio ENaC. [29]. A pesar de esta limitación potencial, la demostración de eficacia en modelos de roedores [30] y la patogenia conocida del ojo seco en el que la hiperosmolalidad de la película lagrimal produce una patología que se encuentra más abajo [31,32] respaldan la utilidad de la terapia con activador de CFTR en el ojo seco humano.

En conclusión, se prevé que la terapia con activador de CFTR tenga amplias indicaciones clínicas para la terapia prosecretora del ojo seco causado por una variedad de etiologías, que incluyen el ojo seco 'idiopático'. Debido a su mecanismo de acción único, los activadores de CFTR se pueden combinar con inmunosupresores aprobados y posibles productos terapéuticos futuros, tales como los inhibidores de ENaC. En comparación con los fármacos inmunosupresores, la terapia con activador de CFTR rescata un evento iniciador temprano en la patogénesis del ojo seco de una manera agnóstica desde el punto de vista de la etiología. Las aminofenil-1,3,5-triazinas sintetizadas y probadas en el presente documento son compuestos principales candidatos para un mayor desarrollo preclínico. Detalles experimentales y datos

Procedimientos de síntesis

Procedimientos Generales. Todos los solventes y productos químicos se utilizaron tal como se compraron sin purificación adicional. El progreso de la reacción se monitorizó sobre placas de gel de sílice recubiertas previamente de Merck (con fluorescencia a 254 nm) utilizando acetato de etilo/n-hexano como sistema solvente. La cromatografía en columna se realizó con gel de sílice Fluka 60 (malla 230-400). Los espectros de RMN de protón (¹H) y carbono (¹³C) se registraron sobre un Bruker Avance 300 o 500 (500.13 MHz para ¹H; 125.76 MHz para ¹³C) utilizando CDCh ^{( 8}7.26), CD³OD ^{( 8}= 4.87 y 3.31), acetona-d^{6 ( 8}2.05), o DMSO-d^{6 ( 8}2.5) como solventes. Los desplazamientos químicos se dan en partes por millón (ppm) ^{( 8}relativo al pico de solvente residual para 1H y ¹³C). La HRMS se realizó utilizando un analizador de masas híbrido Orbitrap de cuadrupolo, QExactive (Thermo, Bremen, Alemania), con una fuente de ionización por electropulverización. La resolución de masa se fijó en 70,000 a m/z 200 y la precisión de masa fue inferior a 3 ppm. La pureza de todos los compuestos finales fue del 95 % o superior. A continuación, informamos datos analíticos y de síntesis para los compuestos intermedios y finales representativos 1 y 12. Los datos analíticos para ⁶a-⁶k, 7a-7g y 11 se informan en Información de Apoyo.

2.4- Dicloro-6-[(1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi]-1,3,5-triazina (2). A una solución de cloruro cianúrico (2 g, 10.84 mmol) en THF (50 ml) a -80 °C se agregó carbonato de potasio (3.0 g, 21.74 mmol). Luego se agregó en forma de gotas una solución de 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (1.36 ml, 10.30 mmol) en THF (20 ml) durante 30 min. La mezcla se agitó durante 30 min adicionales a -80 °C y se apagó con agua. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con solución de HCl 1N. La capa orgánica se lavó con solución salina y se seco sobre MgSO⁴. El solvente se retiro bajo presión reducida para producir un sólido blanco (1.5 g, 62%). El residuo se utilizó para una reacción adicional sin purificación.

2.4- Dicloro-6-[(2,2,3,3-tetrafluoropropan)oxi]-1,3,5-triazina (3). A una solución de cloruro cianúrico (2 g, 10.84 mmol) en THF (50 ml) a -80 °C se agregó carbonato de potasio (3 g, 21.74 mmol). Una solución de 2,2,3,3-tetrafluoropropanol (1.2 ml, 10.3 mmol) en THF (20 ml) luego se agregó en forma de gotas durante 30 min. La mezcla se agitó durante 30 min adicionales a -80 °C y se apagó con agua. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y la capa orgánica se lavó con solución salina y se seco sobre MgSO⁴. El solvente se retiró bajo presión reducida para producir un sólido blanco (1.3 g, ^{6 8}%). El residuo se utilizó para una reacción adicional sin purificación. RMN 1H (300 MHz, CDCh): ⁸= 6.01 (tt, 1H, J = 3.96, 52.9 Hz), 4.90-4.79 (m, 2H); RMN 13C (75 MHz, CDCla): ⁸= 168.5, 165.1, 165.0, 138.4, 128.7, 123.4, 122.7, 120.3, 119.0, 68.3 (t, 34 Hz), 42.4, 42.0, 12.9, 12.8; LRMS-ESI: m/z 279.

4-Cloro-N,N-dietil-6-[(1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi]-1,3,5-triazin-2-amina (4). A una solución de 2 (1.6 g, 5.06 mmol) en THF (40 ml) se agregó diisopropiletilamina (1.06 ml, 6.08 mmol) y dietilamina (0.5 ml, 5.0 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 1 h a 0 °C, luego se apagó con agua. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc, se lavó con agua y solución salina, y se seco sobre MgSO⁴. El solvente se retiro bajo presión reducida para producir un sólido blanco (950 mg, 55 %).

4-Cloro-N,N-dietil-6-[(2,2,3,3,-tetrafluoropropan)oxi]-1,3,5-triazin-2-amina (5). A una solución de 3 (1.3 g, 5 mmol) en THF (30 ml) se agregó diisopropiletilamina (1 ml, ⁶mmol) y dietilamina (0.5 ml, 5.0 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 1 h a 0 °C, luego se apagó con agua. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc, se lavó con agua y solución salina, y se seco sobre MgSO⁴. El solvente se retiró bajo presión reducida para producir un aceite amarillo (900 mg, 57%).

Los análogos ⁶a-⁶k y 7a-7g se prepararon como se describe para 1, con varias anilinas sustituidas y 4 o 5.

N,N-Dietil-6-[(1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi]-N'-fenil-1,3,5-triazina-2,4-diamina (1). A una solución de 4 (500 mg, 1.42 mmol) en THF (30 ml) se agregó diisopropiletilamina (0.49 ml, 2.83 mmol) y anilina (0.15 ml, 1.7 mmol). La mezcla se sometió a reflujo durante 16 h. Después de enfriar a temperatura ambiente la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc, se lavó con solución salina y se seco sobre MgSO⁴. El solvente se retiró bajo presión reducida y se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/Hex 1:10) para producir 1 como un polvo blanco (280 mg, 48%). RMN 1H (300 MHz, CDCla): ⁸= 7.61 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 7.55 (brs, 1H), 7.35 (t, 1H, J = 7.5 Hz), 7.11 (t, 1H, J = 7.4 Hz), 6.37 (sep, 1H, J = 6.2 Hz), 3.69-3.58 (m, 4H), 1.29-1.20 (m, ⁶H); RMN 13C (75 MHz, CDCla): ⁸= 168.5, 165.1, 165.0, 138.4, 128.7, 123.4, 122.7, 120.3, 119.0, 68.3 (t, 34 Hz), 42.4, 42.0, 12.9, 12.8; HRMS (ESI): m/z calculado para C-^H -^N aO [M H+]: 410.1410. Encontrado: 410.1411.

4,6-Dicloro-N-metil-1,3,5-triazina-2-amina (⁸). A una solución de cloruro cianúrico (5 g, 27.3 mmol) en acetona (30 ml) a 0 °C se agregó metilamina (13.7 ml, 2 M en THF) en forma de gotas durante 30 min. La mezcla se agitó durante 1 h a 0 °C y luego se agregó hielo picado. El precipitado resultante se filtró y se lavó con agua para producir ⁸como un sólido blanco (3.7 g, 75.7%), que se utilizó para una reacción adicional sin purificación. RMN 1H (300 MHz, CDCh) ⁸= 6.21-5.81 (m, 1H), 4.81-4.67 (m, 2H), 3.06-3.03 (m, 3H); RMN 13C (75 MHz, CDCh) ⁸= 170.8, 169.2, 168.4, 108.9, 63.3, 25.5.

4-Cloro-6-((1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-il)oxi)-N-metil-1,3,5-triazin-2-amina (9). A una solución de ⁸(2 g, 11.17 mmol) en THF (40 ml) a 0 °C se agregó carbonato de potasio (11.56 g, 83.8 mmol) y 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (1.4 ml, 13.4 mmol). La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, y luego la capa orgánica se lavó con solución salina y se seco sobre MgSO⁴. El solvente se retiro bajo presión reducida. Se obtuvo un sólido blanco (1.4 g, 43 %).

4-Cloro-6-[(2,2,3,3-tetrafluoropropan)oxi]N-metil-1,3,5-triazina-2-amina (10). A una solución de ⁸(630 mg, 3.52 mmol) en THF (30 ml) a 0 °C se agregó carbonato de potasio (970 mg, 7.04 mmol). Se agregó en forma de gotas una solución de 2,2,3,3-tetrafluoropropanol (0.31 ml, 3.52 mmol) en THF (20 ml) durante 30 min. La mezcla se agitó durante 30 min adicionales a 0 °C, luego se apagó con agua. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, y la capa orgánica se lavó con solución salina y se seco sobre MgSO⁴. Se retiro el solvente bajo presión reducida para producir un sólido blanco (640 mg, ^{6 6}%). El residuo se utilizó para una reacción adicional sin purificación. RMN 1H (300 MHz, CDCh): ⁸= 6.98 5.79 (m, 1H), 4.87-4.69 (m, 2H), 3.05 (d, 3H,).

N-metil-N'-fenil-6-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)-1,3,5-triazina-2,4-diamina (12). A una solución de 10 (70 mg, 0.26 mmol) en THF (3 ml) se agrega diisopropiletilamina (0.09 ml, 0.51 mmol) y anilina (0.03 ml, 0.31 mmol). La mezcla se sometió a reflujo durante 16 h. Despuis de enfriar a temperatura ambiente la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc, se lava con solución salina y se seco sobre MgSO⁴. Se retiro el solvente bajo presión reducida y se purificó mediante cromatografía flash (1:2 EtOAc/Hex) para producir 12 como un polvo blanco (63 mg, 74%). Rm N 1H (300 MHz, CDCh): ⁸= 7.61 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 7.55 (brs, 1H), 7.35 (t, 1H, J = 7.5 Hz), 7.11 (t, 1H, J = 7.4 Hz), 6.37 (sep, 1H, J = 6.2 Hz), 3.69-3.58 (m, 4H), 1.29-1.20 (m, ⁶H); RMN 13C (75 MHz, CDCh): ⁸= 168.5, 165.1, 165.0, 138.4, 128.7, 123.4, 122.7, 120.3, 119.0, 68.3 (t, 34 Hz), 42.4, 42.0, 12.9, 12.8; HRMS (ESI): m/z calculado para C ^ H ^ ^ O [M H+]: 332.1129. Encontrado: 332.1127.

Ratones. Se criaron ratones de tipo silvestre y CF (mutante AF508-CFTR homocigoto) en un antecedente genético CD1 en la Instalación para Animales de la Universidad de California en San Francisco (UCSF). Se utilizaron ratones de ⁸a 12 semanas de edad (25 a 35 g). Los protocolos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la UCSF y de conformidad con la Declaración ARVO para el Uso de Animales en la Investigación Oftálmica y Visual.

Cultivo celular. Se cultivaron células de Tiroides de Rata Fischer (FRT) que coexpresan de manera estable CFTR de tipo silvestre humano o TMEM16A y la proteína fluorescente amarilla sensible a haluros (YFP)-H148Q como se describió [15,33]. HT-29 que expresa YFP se cultivaron como se describió [34]. Los cultivos primarios de células epiteliales bronquiales humanas (HBE) se mantuvieron en una interfaz aire-líquido como se describió anteriormente [35].

Ensayos de lectura de placas de la función del canal de cloruro. La actividad de CFTR se ensayó como se describió [15]. Las células FRT que coexpresan YFP y CFTR de tipo silvestre se lavaron con solución salina tamponada con fosfato (PBS) y luego se incubaron durante 10 min con compuestos de prueba en PBS que contenía forskolina 125 nM. El influjo de I- se midió en un lector de placas con una lectura de valor de referencia inicial durante 2 s y luego durante 12 s después de la adición rápida de una solución que contenía I-. La actividad de TMEM16A se ensayó de manera similar a como se describió [33] utilizando células FRT que coexpresan YFP y TMEM16A. La actividad de CaCC no TMEM16A se ensayó como se describió [34] en células HT-29 que expresan y Fp . En cada ensayo, las tasas iniciales de influjo de I- se calcularon como una medida lineal de la función del canal.

Medida de corriente de cortocircuito. Las mediciones de corriente de cortocircuito se realizaron como se describió [9]. Brevemente, se montaron insertos Snapwell (Corning Costar, Corning, NY) que contenían células FRT que expresan CFTR o células epiteliales bronquiales humanas en cámaras Ussing (Physiological Instruments, San Diego, CA). Para las células FRT, las hemicámaras se llenaron con 5 ml de solución tamponada con HCO³(basolateral) y solución de Cl media (apical), y la membrana basolateral se permeabilizó con 250 pg/ml de anfotericina B. Las soluciones tamponadas con HCO³simétricas se utilizado para células epiteliales bronquiales humanas. Las soluciones se burbujearon con O²al 95 % /C O ²al 5 % y se mantuvieron a 37 °C, y la corriente de cortocircuito se midió sobre una pinza de voltaje DVC-1000 (World Precision Instruments Inc., Sarasota, FL) utilizando electrodos Ag/AgCl y 3 Puentes de agar M KCl.

Ensayos de cAMP y Ca2+. Las células FRT que expresan CFTR de tipo silvestre se cultivaron en placas de 12 pozos. Después de lavar con PBS, las células se incubaron durante 10 min con compuestos en ausencia o presencia de forskolina 90 nM y luego se lisaron. Se ensayó el contenido de cAMP en los lisados utilizando un kit de inmunoensayo de cAMP (Parameter cAMP Immunoassay Kit, R&D Systems, Minneapolis, MN). Para las mediciones de calcio citoplasmático, se cargaron células FRT en microplacas de paredes negras de 96 pozos con Fluo-4 NW (Invitrogen, Carlsbad, CA) y se midió la fluorescencia de Fluo-4 con un lector de placas equipado con bombas de jeringa y monocromadores.

Citotoxicidad. Las células FRT se cultivaron durante la noche en microplacas Costar negras de 96 pozos y se incubaron con compuestos de prueba hasta 10 pM (la máxima solubilidad en PBS) durante ⁸h. La citotoxicidad se midió mediante el ensayo Azul Alamar (Invitrogen, Carlsbad, CA).

Volumen lagrimal. El volumen lagrimal se midió utilizando hilos de rojo fenol (Zone-Quick, Oasis Medical, Glendora, CA) como se describió [36]. Se colocaron hilos durante 10 s en los cantos laterales de ratones anestesiados con isofluorano utilizando fórceps de joyero. El volumen lagrimal se determinó a partir de la longitud del hilo humedecido como se visualiza bajo un microscopio de disección. Se realizaron mediciones en serie para evaluar la farmacodinámica del compuesto después de la aplicación tópica de una sola gota de 2.5 pl de formulación oftálmica que contenía 0-100 pM de 1 o 12 en solución de Ringer con carboximetilcelulosa al 0.3 % (alta viscosidad, VWR, Radnor, PA), conservante de cloruro de benzalconio al 0.015 % y DMSO al 1 % . Ambos ojos de cada ratón recibieron el mismo tratamiento para controlar los posibles efectos contralaterales de un tratamiento dado.

Estabilidad metabólica in vitro. Los compuestos (5 pM cada uno) se incubaron durante tiempos específicos a 37 °C con microsomas de hígado de rata (1 mg/ml; Sigma-Aldrich) en tampón de fosfato de potasio que contenía NADPH 1 mM, como se describe 14. Luego se agregó EtOAc helado y la mezcla Se centrifugó durante 15 min a 3000 rpm. El sobrenadante se analizó mediante espectrometría de masas de baja resolución utilizando un sistema LC/MS (Waters 2695 HPLC con Micromass ZQ). La CL se realizó en una columna Xterra MS C18 (2.1 mm x 100 mm, 3.5 pm) con 0.2 ml/min de agua/acetonitrilo (que contenía ácido fórmico al 0.1 %), gradiente lineal de 12 min, acetonitrilo al 5 a 95 % . La absorbancia UV se detectó a 254 nm.

Estadísticas. El análisis estadístico se realizó utilizando el paquete de software Prism 5 GraphPad (San Diego, CA). Las mediciones del volumen lagrimal en serie se analizaron mediante ANOVA de dos vías con análisis post-hoc de Dunnett. Los datos se presentan como media ± error estándar de la media (E.E.M.), y la significación estadística se estableció en p < ^{0 .0 1}(*).

Abreviaturas. CFTR, regulador de conductancia de transmembrana de fibrosis quística; cAMP, monofosfato de adenosina cíclica; YFP, proteína amarilla fluorescente; CF, fibrosis quística; células FRT, células de tiroides de rata Fischer; LC/MS, cromatografía líquida/espectrometría de masas; fsk, forskolina; SAR, relaciones estructura-actividad. Referencias (Ejemplo ⁶).

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Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

en el que:

X es -O-;

R²es haloalquilo C ²-C ⁴, en el que R²se sustituye con al menos cuatro átomos de flúor;

R³es hidrógeno;

R⁴es -CH ³o -CH ²CH³; y

R¹, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸y R⁹son hidrógeno.

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho compuesto se selecciona de

, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, en el que dicho compuesto es

. o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. Una composición farmacéutica, que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable, y un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

5. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en tratar el estreñimiento, tratar un trastorno del ojo seco, aumentar la lagrimación, activar un Regulador de Conductancia de Transmembrana de Fibrosis Quística (CFTr ), tratar una enfermedad colestásica del hígado, o tratar una enfermedad o trastorno pulmonar.

⁶. El compuesto para el uso de la reivindicación 5, en el que tratar el estreñimiento comprende adicionalmente administrar u agente anti-estreñimiento; o en el que tratar un trastorno del ojo seco comprende adicionalmente administrar un agente anti-ojo seco.

7. El compuesto para el uso de la reivindicación 5, en el que el estreñimiento es estreñimiento inducido por opioides, estreñimiento idiopático crónico o síndrome del intestino irritable con predominio de estreñimiento, o en el que el trastorno del ojo seco es un trastorno de la glándula lagrimal, o en el que la enfermedad o trastorno pulmonar es enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis, asma, y disfunción pulmonar inducida por el humo del cigarrillo.