ES2991853T3 - Combinaciones de inhibidores del punto de control y terapéuticos para tratar el cáncer - Google Patents

Abstract

La presente divulgación surge al menos en parte del reconocimiento fundamental de que un régimen de tratamiento combinado que incluye uno o más ciclos y/o dosis de un inhibidor de puntos de control y un agente terapéutico, ya sea secuencialmente, en cualquier orden o sustancialmente de manera simultánea, puede ser más eficaz en el tratamiento del cáncer en algunos sujetos y/o puede iniciar, habilitar, aumentar, mejorar o prolongar la actividad y/o el número de células inmunes, o una respuesta médicamente beneficiosa por parte de un tumor. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Combinaciones de inhibidores del punto de control y terapéuticos para tratar el cáncer

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

Esta solicitud reivindica prioridad, con arreglo al artículo 119(e) del título 35 del Código de Estados Unidos<(USC), a la Solicitud de>E<e>.<UU. con número de serie 61/900 309, presentada el 5 de noviembre de 2013, y a>la Solicitud de EE. UU. con número de serie 61/900355, presentada el 5 de noviembre de 2013.

Campo de la invención

La invención se refiere a una combinación de inhibidores del punto de control y terapéuticos para su uso en un método de tratamiento de un glioma o para iniciar, potenciar o prolongar una respuesta antiglioma en un sujeto que la necesite.

Antecedentes de la invención

Cada vez hay más pruebas que sugieren que la capacidad de burlar la respuesta inmunitaria del organismo representa una característica distintiva del desarrollo tumoral. Por consiguiente, los investigadores han empezado a buscar formas de restablecer la respuesta inmunitaria con agentes dirigidos, básicamente tratando de forma indirecta el cáncer mediante el tratamiento del sistema inmunitario. Una estrategia especialmente prometedora para ello consiste en dirigirse a los llamados puntos de control inmunitarios, que actúan como el interruptor de apagado de las células T del sistema inmunitario.

Las terapias con inhibidores del punto de control, que "desbloquean" una respuesta inmunitaria existente o que desbloquean el inicio de una respuesta inmunitaria son muy eficaces para tratar el cáncer en un subgrupo de sujetos. Sin embargo, el subgrupo de sujetos es una población relativamente pequeña que constituye tan solo en torno al 25% de la población de sujetos con cáncer (es decir, la "población de sujetos respondedores"). Por consiguiente, aunque los inhibidores del punto de control son extremadamente eficaces para el tratamiento del cáncer en la población de sujetos respondedores, aproximadamente el 75% de los sujetos con cáncer no responderán a la terapia. Además, incluso en la población que responde, la respuesta no siempre es completa u óptima.

Dado que muchos de los puntos de control inmunitarios están regulados por interacciones entre pares específicos de receptor y ligando, pueden utilizarse anticuerpos monoclonales u otros agentes para bloquear esta interacción y evitar la inmunosupresión. Los dos receptores del punto de control que más interés han despertado en los últimos años son CTLA-4 y PD-1.

CTLA-4, PD-1 y sus ligandos son miembros de la familia CD28-B7 de moléculas de señalización conjunta, que desempeñan papeles importantes en todas las etapas de la función de las células T y otras funciones celulares. El receptor PD-1 se expresa sobre la superficie de las células T activadas (y de las células B) y, en circunstancias normales, se une a sus ligandos (PD-L1 y PD-L2) que se expresan sobre la superficie de las células presentadoras de antígenos, como las células dendríticas o los macrófagos. Esta interacción envía una señal a la célula T y básicamente la apaga o inhibe. Las células cancerosas aprovechan este sistema, impulsando altos niveles de expresión de PD-L1 en su superficie. Esto les permite obtener el control de la vía PD-1 y desactivar células T que expresan PD-1 que puedan entrar en el microentorno tumoral, suprimiendo así la respuesta inmunitaria contra el cáncer.

Una inmunoterapia de primer nivel, el ipilimumab (Yervoy), un anticuerpo monoclonal que se dirige contra el antígeno 4 asociado a linfocitos T citotóxicos (CTLA-4) en la superficie de las células T, fue aprobada para el tratamiento del melanoma. Ahora, una nueva inmunoterapia dirigida contra el receptor de células T de muerte programada-1 (PD-1) o su ligando (PD-L1 o PD-L2) puede resultar más eficaz e incluso más segura que el ipilimumab. Otras dianas de los puntos de control, como TIM-3, LAG3, varios ligandos B-7, las quinasas CHK 1 y CHK2, BTLAyA2aR, entre otras, también pueden resultar eficaces.

En la actualidad, hay al menos siete agentes inhibidores del punto de control en ensayos clínicos. Entre ellos se encuentran anticuerpos monoclonales anti-PD-1, tanto totalmente humanos como humanizados, así como un anticuerpo anti-PD-L1 totalmente humano y una proteína de fusión que combina el dominio extracelular de PD-L2 e IgG1. Cada uno de estos agentes está diseñado para bloquear la interacción entre la PD-1 y sus ligandos, y mantener así el interruptor de encendido/apagado de las células T (u otras células) en la posición de "encendido", aunque cada uno de ellos tiene mecanismos de acción ligeramente diferentes.

Otra estrategia para el tratamiento del cáncer consiste en combinar un inhibidor del punto de control con un terapéutico. Los terapéuticos biológicos, incluidos los anticuerpos y las vacunas, han demostrado su eficacia en el tratamiento del cáncer. La combinación de un inhibidor del punto de control y un terapéutico (por ejemplo, biológico) puede potenciar o prolongar una respuesta antitumoral en un sujeto. Además, la administración de un terapéutico biológico con un inhibidor del punto de control puede potenciar o prolongar los efectos del inhibidor del punto de control, permitir que un sujeto responda a un inhibidor del punto de control o permitir la reducción de la toxicidad o la dosis de un inhibidor del punto de control.

GE YAN et al: " Blockade of PD-1/PD-L1 immune checkpoint during DC vaccination induces potent protective immunity against breast cancer in hu-SCID mice " Cancer Lett. (2013) 336(2):253-9 parece divulgar la vacunación con células dendríticas (CD) en un modelo de ratón SCID-hu con un tumor de mama.

Por consiguiente, existe la necesidad de desarrollar métodos y terapias combinadas para iniciar o mejorar la eficacia de los inhibidores del punto de control en la población de sujetos tanto no respondedores como respondedores. La presente invención divulga el uso en métodos para iniciar, posibilitar, potenciar o mejorar una respuesta inmunitaria antitumoral para posteriormente posibilitar, potenciar o mejorar la respuesta del sujeto o del tumor a los inhibidores del punto de control.

Resumen de la invención

La presente divulgación surge, al menos en parte, del reconocimiento fundamental de que un régimen de tratamiento combinado que incluya uno o más ciclos y/o dosis de un inhibidor del punto de control y un terapéutico, ya sea secuencialmente, en cualquier orden, o sustancialmente de forma simultánea, puede ser más eficaz para tratar el cáncer en algunos sujetos y/o puede iniciar, permitir, aumentar, potenciar o prolongar la actividad y/o el número de células inmunitarias, o una respuesta médicamente beneficiosa por parte de un tumor.

La invención se define en las reivindicaciones. La presente invención proporciona un agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control para su uso en un método de tratamiento de un glioma o de iniciación, mejora o prolongación de una respuesta antiglioma en un sujeto que la necesite, que consiste en administrar al sujeto el agente terapéutico en combinación con el agente que es un inhibidor del punto de control. El inhibidor del punto de control es un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo totalmente humano o una combinación de estos e inhibe una proteína del punto de control, que es PDL1 o PD1 o una combinación de estas. El agente terapéutico es una vacuna de células dendríticas (CD) impulsada por lisado de glioma.

En una realización, la vacuna de células dendríticas se compone de células dendríticas autólogas y/o alogénicas. En una realización, las células dendríticas autólogas o alogénicas se cargan con lisado de glioma antes de su administración al sujeto.

La invención también proporciona un agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control para su uso en un método de tratamiento del glioma o para iniciar, mejorar o prolongar una respuesta antiglioma en un sujeto que la necesite, que consiste en administrar al sujeto el agente terapéutico en combinación con el agente que es un inhibidor del punto de control, donde el agente terapéutico es una vacuna de células dendríticas, en el que las células dendríticas de la vacuna están parcialmente maduras y el inhibidor del punto de control se selecciona del grupo compuesto por un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado y un anticuerpo totalmente humano o una combinación de estos, e inhibe una proteína del punto de control seleccionada del grupo compuesto por PD-1 y PDL1 o una combinación de estas, y en el que las células dendríticas parcialmente maduras son células dendríticas autólogas o alogénicas que captan biomarcadores de gliomain situ.En una realización adicional, el inhibidor del punto de control y el terapéutico se administran simultánea o secuencialmente, en cualquier orden. En un aspecto adicional, el terapéutico se administra antes que el inhibidor del punto de control y el inhibidor del punto de control es un inhibidor de PD1. En otra realización, el glioma es un glioblastoma maligno.

En otra realización, el uso en el método comprende además la administración de un agente quimioterapéutico, una terapia dirigida o radiación al sujeto antes, simultáneamente o después del tratamiento con la terapia combinada.

En otra realización, el sujeto tiene un glioma y el método potencia o prolonga los efectos del inhibidor del punto de control, o permite que el sujeto responda al inhibidor del punto de control, o permite reducir la toxicidad o la dosis del inhibidor del punto de control.

Breve descripción de las ilustraciones

Las Figuras 1A-C muestran que la vacuna CD promueve la infiltración linfocítica activada sin beneficio terapéutico en gliomas bien establecidos. (A) La vacuna CD promovió una infiltración tumoral de linfocitos (CD3+) significativa con respecto a los controles. (B) Una proporción significativa de estas células eran linfocitos activados (CD3+ CD8+ CD25+). (C) No se observó ninguna ventaja de supervivencia entre la vacuna CD y los grupos de control.

Las Figuras 2A-B muestran que hay un aumento de la acumulación de células mieloides inhibidoras en el microentorno tumoral tras la vacuna CD. (A) Los controles con tumores mostraron un aumento de las células mieloides que infiltraron el tumor (Thy1.2- Ly6C+). Esta población fue significativamente mayor en los ratones tratados con la vacuna CD. (B) Un porcentaje significativo de estas células mieloides expresaron PD-L1 (Thy1.2- Ly6C+ PD-L1+).

Las Figuras 3A-G muestran que el bloqueo de PD-1 impide la acumulación de células mieloides inhibidoras y promueve la infiltración linfocítica activada con beneficio terapéutico. (A) No hubo diferencias en la población de CD8+ en los ganglios linfáticos entre los ratones vacunados con CD y los ratones vacunados con CD tratados con el anticuerpo anti-PD-1 adyuvante (Vacuna CD/ Ab anti-PD-1). (B) Se encontró una población menor de células T CD8+ CD25+ activadas en los ganglios linfáticos de cada grupo de tratamiento y no fue estadísticamente distinta. (C, D) La población mieloide inhibidora se redujo de forma notable en los ratones tratados con la vacuna CD/anti-PD-1 en comparación con los grupos que recibieron únicamente la vacuna CD. (E) Hubo una población comparable de linfocitos citotóxicos activados que infiltraron el tumor en los ratones tratados con vacuna CD/anti-PD1 en comparación con los tratados con la vacuna CD solamente. (F) El tratamiento combinado de vacuna CD/anti-PD-1 mostró un beneficio de supervivencia significativo. (G) Los ratones supervivientes tratados con la vacuna CD/anti-PD-1 de (F) fueron sometidos de nuevo a un implante intracraneal contralateral de glioma murino GL261 en el día 75 sin tratamientos adicionales. Se observó un beneficio de supervivencia significativo en comparación con los ratones de control.

Las Figuras 4A-B muestran que las células dendríticas pulsadas con lisado tumoral regulan a la baja la expresión de PD-L1. (A) Histograma representativo que muestra el cambio en la expresión de PD-L1 antes y después del pulsado con lisado. (B) Células dendríticas pulsadas 24h con lisado tumoral y luego analizadas para detectar la expresión de PDL1. Se muestra en un gráfico la mediana de la intensidad de fluorescencia (MIF) de la expresión de PD-L1.

Descripción detallada de la invención

La presente divulgación surge, al menos en parte, del reconocimiento fundamental de que un régimen de tratamiento combinado que incluya uno o más ciclos y/o dosis de un inhibidor del punto de control y un terapéutico, ya sea secuencialmente, en cualquier orden, o de forma sustancialmente simultánea, puede ser más eficaz para tratar el cáncer en algunos sujetos y/o puede iniciar, permitir, aumentar, potenciar o prolongar la actividad y/o el número de células inmunitarias, o una respuesta médicamente beneficiosa por parte de un tumor.

Debe entenderse que la terminología empleada en el presente documento únicamente tiene por objeto describir realizaciones concretas y no pretende ser limitativa, ya que el alcance de la presente invención se define en las reivindicaciones.

A menos que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos aquí utilizados tienen el mismo significado que comúnmente entiende una persona con conocimientos ordinarios de la técnica a la que pertenece esta invención. Aunque en la práctica o el ensayo de la invención se pueden utilizar métodos y materiales similares o equivalentes a los aquí descritos, a continuación, se describen los métodos y materiales preferibles.

A los efectos de esta memoria y de las reivindicaciones anexas, las formas singulares "un", "una" y "el", "la" incluyen referencias al plural, a menos que el contexto dicte claramente lo contrario. Así, por ejemplo, las referencias a "el método" incluyen uno o más métodos y/o pasos como los descritos en el presente documento que resultarán evidentes para los expertos en la técnica al leer esta divulgación, etc.

A los efectos del presente documento, el término "terapéutico" o "agente terapéutico" se refiere a cualquier producto medicinal que produzca una respuesta terapéutica en un sujeto.

A los efectos del presente documento, el término "terapéutico biológico" o "biofarmacéutico" se refiere a cualquier producto medicinal fabricado con fuentes biológicas o extraído de estas. Los biofármacos son distintos de los productos farmacéuticos sintetizados químicamente. Algunos ejemplos de biofármacos son las vacunas, la sangre o sus componentes, los alérgenos, las células somáticas, las terapias génicas, los tejidos, las proteínas terapéuticas recombinantes, incluidas las terapéuticas de anticuerpos y las proteínas de fusión, y las células vivas. Los productos biológicos pueden estar compuestos por azúcares, proteínas o ácidos nucleicos, o combinaciones complejas de estas sustancias, o pueden ser entidades vivas como células y tejidos. Los productos biológicos se aíslan de diversas fuentes naturales —humanas, animales o microorganismos— y se pueden producir con métodos biotecnológicos y otras tecnologías. Algunos ejemplos específicos de terapéuticos biológicos son, entre otros, los agentes inmunoestimulantes, los factores de crecimiento de células T, las interleucinas, los anticuerpos, las proteínas de fusión y las vacunas, como las vacunas contra el cáncer.

A los efectos del presente documento, el término "anticuerpo" se refiere a una inmunoglobulina o a una parte de esta, y abarca cualquier polipéptido que comprenda un sitio de unión a antígeno, con independencia de la fuente, la especie de origen, el método de producción y las características. Los anticuerpos pueden estar compuestos por cadenas pesadas y/o ligeras o fragmentos de estas. Los anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno, variantes o derivados estos contemplados por la divulgación incluyen, entre otros, anticuerpos policlonales, monoclonales, multiespecíficos, humanos, humanizados, primatizados o quiméricos, anticuerpos de cadena simple, fragmentos de unión a epítopos, por ejemplo, Fab, Fab' y F(ab')2, Fd, Fvs, Fvs de cadena simple (scFv), anticuerpos de cadena simple, Fvs ligados a disulfuro (sdFv), fragmentos que comprenden un dominio VL o VH, fragmentos producidos por una biblioteca de expresión Fab y anticuerpos antiidiotípicos (anti Id). Las moléculas ScFv son conocidas en la técnica y se describen, por ejemplo, en la Patente de EE. UU. n.° 5 892019. Las moléculas de inmunoglobulina o anticuerpo de la invención pueden ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), clase (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) o subclase de molécula de inmunoglobulina.

Los receptores de la superficie celular son dianas habituales de las terapias con anticuerpos e incluyen el receptor del factor de crecimiento epidérmico y el HER2. Una vez unidos a un antígeno canceroso, los anticuerpos pueden inducir una citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos, activar el sistema del complemento, evitar que un receptor interactúe con su ligando o suministrar una carga de quimioterapia o radiación, pudiendo conducir todo esto a la muerte celular. Los anticuerpos aprobados como agentes terapéuticos incluyen Rituxan® (Rituximab); Zenapax® (Daclizumab); Simulect® (Basiliximab); Synagis® (Palivizumab); Remicade® (Infliximab); Herceptin® (Trastuzumab); Mylotarg® (Gemtuzumab ozogamicin); Campath® (Alemtuzumab); Zevalin® (Ibritumomab tiuxetan); Humira® (Adalimumab); Xolair® (Omalizumab); Bexxar® (Tositumomab-I-131); Raptiva® (Efalizumab); Erbitux® (Cetuximab); Avastin® (Bevacizumab); Tysabri® (Natalizumab); Actemra® (Tocilizumab); Vectibix® (Panitumumab); Lucentis® (Ranibizumab); Soliris® (Eculizumab); Cimzia® (Certolizumab pegol); Simponi® (Golimumab); Ilaris® (Canakinumab); Stelara® (Ustekinumab); Arzerra® (Ofatumumab); Prolia® (Denosumab); Numax® (Motavizumab); ABThrax® (Raxibacumab); Benlysta® (Belimumab); Yervoy® (Ipilimumab); Adcetris® (Brentuximab Vedotin); Perjeta® (Pertuzumab); Kadcyla® (Ado-trastuzumab emtansina); y Gazyva® (Obinutuzumab).

A los efectos del presente documento, el término "proteína de fusión" se refiere a moléculas quiméricas que comprenden, por ejemplo, un dominio de unión a antígeno de inmunoglobulina con al menos un sitio de unión a diana, y al menos una porción heteróloga, es decir, una porción con la que no está unida de forma natural en la naturaleza. Las secuencias de aminoácidos pueden existir normalmente en proteínas separadas que se unen en el polipéptido de fusión o pueden existir normalmente en la misma proteína, pero colocadas en una nueva disposición en el polipéptido de fusión. Las proteínas de fusión pueden crearse, por ejemplo, mediante síntesis química, o creando y transformando un polinucleótido en el que las regiones peptídicas estén codificadas en la relación deseada.

A los efectos del presente documento, el término "terapia dirigida" hace referencia a cualquier molécula terapéutica que se dirige a cualquier aspecto del sistema inmunitario.

A los efectos del presente documento, el término "cáncer" hace referencia a la amplia clase de trastornos que se caracterizan por un crecimiento celular hiperproliferativo, ya seain vitro(por ejemplo, células transformadas) oin vivo.Las afecciones que se pueden tratar o prevenir mediante el uso de los métodos de la divulgación incluyen, por ejemplo, diversas neoplasias, incluidos tumores benignos o malignos, diversas hiperplasias o similares. El uso en los métodos de la divulgación puede lograr la inhibición y/o reversión del crecimiento celular hiperproliferativo no deseado que ocurre en tales afecciones. Entre los ejemplos concretos de cáncer se incluyen la leucemia linfoblástica aguda, en adultos; la leucemia linfoblástica aguda, en niños; la leucemia mieloide aguda, en adultos; el carcinoma corticosuprarrenal; el carcinoma corticosuprarrenal, en niños; el linfoma relacionado con el SIDA; las neoplasias malignas relacionadas con el SIDA; el cáncer de ano; el astrocitoma, cerebeloso infantil; el astrocitoma, cerebral infantil; el cáncer de vías biliares, extrahepático; el cáncer de vejiga; el cáncer de vejiga, infantil; el cáncer óseo, osteosarcoma/histiocitoma fibroso maligno; el glioma de tronco encefálico, infantil; el tumor cerebral, adulto; el tumor cerebral, glioma de tronco encefálico, infantil; el tumor cerebral, astrocitoma cerebeloso, infantil; el tumor Cerebral, astrocitoma cerebral/glioma maligno, Infantil; el tumor cerebral, ependimoma, infantil; el tumor cerebral, meduloblastoma, infantil; el tumor cerebral, tumores neuroectodérmicos primitivos supratentoriales, infantil; el tumor cerebral, glioma de vías ópticas e hipotalámico, infantil; el tumor cerebral, infantil (otros); el cáncer de mama; cáncer de mama y embarazo; el cáncer de mama, infantil; el cáncer de mama, masculino; los adenomas/carcinoides bronquiales, infantil: el tumor carcinoide, infantil; el tumor carcinoide, gastrointestinal; el carcinoma, adrenocortical; el carcinoma, de células de los islotes; el carcinoma de primario desconocido; el linfoma del sistema nervioso central, primario; el astrocitoma cerebeloso, infantil; el astrocitoma cerebral/glioma maligno, infantil; el cáncer cervical; los cánceres infantiles; la leucemia linfocítica crónica; la leucemia mielógena crónica; los trastornos mieloproliferativos crónicos; el sarcoma de células claras de las vainas tendinosas; el cáncer de colon; el cáncer colorrectal, infantil; el linfoma de células T cutáneo; el cáncer de endometrio; el ependimoma, infantil; el cáncer epitelial, ovario; el cáncer de esófago; el cáncer de esófago, infantil; los tumores de la familia Ewing; el tumor extracraneal de células germinativas, infantil; el tumor extragonadal de células germinativas; el cáncer de las vías biliares extrahepáticas; el cáncer ocular, melanoma intraocular; el cáncer ocular, retinoblastoma; el cáncer de vesícula biliar; el cáncer gástrico (estómago); el cáncer gástrico (estómago), infantil; el tumor carcinoide gastrointestinal; el tumor de células germinativas, extracraneal, infantil; el tumor de células germinativas, extragonadal; el tumor de células germinativas, ovárico; el tumor trofoblástico gestacional; el glioma de tronco encefálico, infantil; el glioma de vías ópticas e hipotalámico, infantil; la leucemia de células pilosas; el cáncer de cabeza y cuello; el cáncer hepatocelular (hígado), adulto (primario); el cáncer hepatocelular (hígado), infantil (primario); el linfoma de Hodgkin, adulto; el linfoma de Hodgkin, infantil; el linfoma de Hodgkin durante el embarazo; el cáncer hipofaríngeo; el glioma hipotalámico y de vías ópticas, infantil; el melanoma intraocular; el carcinoma de células de los islotes (páncreas endocrino); el sarcoma de Kaposi; el cáncer renal; el cáncer laríngeo; el cáncer laríngeo, infantil; la leucemia linfoblástica aguda, adulto; la leucemia linfoblástica aguda, infantil; la leucemia, mieloide aguda, adulto; la leucemia, mieloide aguda, infantil; la leucemia, linfocítica crónica; la leucemia, mielógena crónica; la leucemia, de células pilosas; el cáncer de labio y cavidad oral; el cáncer de hígado, adulto (primario); el cáncer de hígado, infantil (primario); el cáncer de pulmón, no microcítico; el cáncer de pulmón, microcítico; la leucemia linfoblástica aguda, adulto; la leucemia linfoblástica aguda, infantil; la leucemia linfocítica, crónica; el linfoma, relacionado con el SIDA; el linfoma del sistema nervioso central (primario); el linfoma, cutáneo de células T; el linfoma, de Hodgkin, adulto; el linfoma, de Hodgkin, infantil; el linfoma, de Hodgkin, durante el embarazo; el linfoma, no Hodgkin, adulto; el linfoma, no Hodgkin, infantil; el linfoma, no Hodgkin, durante el embarazo; el linfoma, primario del sistema nervioso central; la macroglobulinemia, Waldenstrom; el cáncer de mama, masculino; el mesotelioma maligno, adulto; el mesotelioma maligno, infantil; el timoma maligno; el meduloblastoma, infantil; el melanoma; el melanoma, intraocular; el carcinoma de células de Merkel; el mesotelioma, maligno; el cáncer escamoso metastásico de cuello con primario oculto; el síndrome de neoplasia endocrina múltiple, infantil; el mieloma múltiple/neoplasia de células plasmáticas; la micosis fungoide; los síndromes mielodisplásicos; la leucemia mielógena, crónica; la leucemia mieloide, aguda infantil; el mieloma, múltiple; los trastornos mieloproliferativos, crónicos; el cáncer de la cavidad nasal y de senos paranasales; el cáncer nasofaríngeo; el cáncer nasofaríngeo, infantil; el neuroblastoma; el neurofibroma; el linfoma no Hodgkin, adulto; el linfoma no Hodgkin, infantil; el linfoma no Hodgkin, durante el embarazo; el cáncer de pulmón no microcítico; el cáncer de boca, infantil; el cáncer de la cavidad oral y labios; el cáncer orofaríngeo; el osteosarcoma/histiocitoma fibroso maligno en hueso; el cáncer de ovario, infantil; el cáncer epitelial de ovario; el tumor de células germinativas de ovario; el tumor de ovario de bajo potencial maligno; el cáncer de páncreas; el cáncer de páncreas, infantil, el cáncer de páncreas, células de los islotes; el cáncer de seno paranasal y cavidad nasal; el cáncer de paratiroides; el cáncer de pene; el feocromocitoma; los tumores neuroectodérmicos primitivos pineales y supratentoriales, infantil; el tumor hipofisario; la neoplasia de células plasmáticas/mieloma múltiple; el blastoma pleuropulmonar; embarazo y cáncer de mama; embarazo y linfoma de Hodgkin; embarazo y linfoma no Hodgkin; el linfoma primario del sistema nervioso central; el cáncer primario de hígado, adulto; el cáncer primario de hígado, infantil; el cáncer de próstata; el cáncer de recto; el cáncer de células renales (riñón); el cáncer de células renales, infantil; el cáncer de pelvis renal y ureteral, de células de transición; el retinoblastoma; el rabdomiosarcoma, infantil; el cáncer de glándulas salivales; el cáncer de glándulas salivales, infantil; el sarcoma, familia de tumores de Ewing; el sarcoma, de Kaposi; el sarcoma (osteosarcoma)/histiocitoma fibroso maligno de hueso; el sarcoma, rabdomiosarcoma, infantil; el sarcoma, partes blandas, adulto; el sarcoma, partes blandas, infantil; el síndrome de Sezary; el cáncer de piel; el cáncer de piel, infantil; el cáncer de piel (melanoma); el carcinoma de piel, células de Merkel; el cáncer de pulmón microcítico; el cáncer del intestino delgado; el sarcoma de tejidos blandos, adulto; el sarcoma de tejidos blandos, infantil; el cáncer escamoso de cuello con tumor primario oculto, metastásico; el cáncer de estómago (gástrico); el cáncer de estómago (gástrico), infantil; los tumores neuroectodérmicos primitivos supratentoriales, infantiles; el linfoma de células T, cutáneo; el cáncer de testículos; el timoma, infantil; el timoma, maligno; el cáncer de tiroides; el cáncer de tiroides, infantil; el cáncer de células de transición de pelvis renal y ureteral; el tumor trofoblástico, gestacional; el cáncer de sitio primario desconocido, infantil; los cánceres inusuales de la infancia; el cáncer de células de transición de la pelvis renal y ureteral; el cáncer de uretra; el sarcoma uterino; el cáncer de vagina; el glioma de vías ópticas e hipotalámico, infantil; el cáncer vulvar; la macroglobulinemia de Waldenstrom; y el tumor de Wilms.

A los efectos del presente documento, el término "mejorar la supervivencia" hace referencia a un aumento de la esperanza o la calidad de vida de un sujeto que sufre un cáncer o una enfermedad proliferativa. Por ejemplo, la mejora de la supervivencia también incluye la promoción de la remisión del cáncer, la prevención de la invasión tumoral, la prevención de la reaparición del tumor, la ralentización del crecimiento tumoral, la prevención del crecimiento tumoral, la disminución del tamaño tumoral y la disminución del recuento total de células cancerosas.

A los efectos del presente documento, el término "prevención de un trastorno" no pretende ser un término absoluto. Por el contrario, la prevención, por ejemplo, de un cáncer, se refiere al retraso de la aparición, la menor frecuencia de los síntomas, la reducción de la probabilidad de que un sujeto presente síntomas asociados a un trastorno o adquiera un trastorno en comparación con sujetos similares que no reciban al menos uno de los métodos, composiciones o tratamientos aquí descritos, o una menor gravedad de los síntomas asociados al cáncer. Por lo tanto, la prevención se refiere a un amplio conjunto de medidas profilácticas que entenderán los expertos en la técnica. En algunas circunstancias, la frecuencia y la gravedad de los síntomas se reducen a niveles no patológicos, por ejemplo, para que el individuo pueda retrasar el tratamiento invasivo del cáncer, como las quimioterapias agresivas y la cirugía.

A los efectos del presente documento, el término "tratar el cáncer" no pretende ser un término absoluto. En algunos aspectos, el uso de los métodos de la invención trata de reducir el tamaño de un tumor o el número de células cancerosas, hacer que un cáncer entre en remisión o evitar el crecimiento en tamaño o número de células cancerosas. En algunas circunstancias, el tratamiento conduce a un pronóstico mejorado.

A los efectos del presente documento, el término "sujeto que necesita tratamiento" se refiere a un individuo o sujeto al que se le ha diagnosticado un cáncer o un trastorno proliferativo celular.

Los términos "terapéuticamente eficaz", "cantidad terapéuticamente eficaz", "cantidad eficaz" o "en una cantidad eficaz" se refieren a una cantidad o dosis suficiente para promover la respuesta fisiológica deseada, como, por ejemplo, una cantidad o dosis suficiente para promover una respuesta de células T

A los efectos del presente documento, el término "anticuerpos PD-1" se refiere a anticuerpos que antagonizan la actividad y/o proliferación de linfocitos agonizando PD-1. El término "antagonizar la actividad" se refiere a un descenso (o reducción) de la proliferación o actividad de los linfocitos que al menos sea de aproximadamente el 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o más. El término "antagonizar" puede utilizarse indistintamente con los términos "inhibitorio" e "inhibir". La actividad mediada por PD1 puede determinarse cuantitativamente mediante ensayos de proliferación de células T, tal y como se describe en el presente documento.

Un aspecto de la presente divulgación proporciona anticuerpos que pueden actuar como agonistas de PD-1, modulando así las respuestas inmunitarias reguladas por PD-1. En una realización, los anticuerpos anti-PD-1 pueden ser fragmentos de unión a antígeno novedosos. Los anticuerpos anti-PD-1 aquí divulgados son capaces de unirse a la PD-1 humana incluida y agonizar la PD-1, inhibiendo así la función de las células inmunitarias que expresan PD-1. En algunas realizaciones, las células inmunitarias son linfocitos activados, como células T, células B y/o monocitos que expresan PD-1.

A los efectos del presente documento, el término "respuesta tumoral" se refiere a respuestas celulares que incluyen, entre otras, la activación de la muerte celular programada.

A los efectos del presente documento, el término "respuesta antitumoral" hace referencia a una respuesta del sistema inmunitario que incluye, entre otras cosas, la activación de las células T para atacar a un antígeno o a una célula presentadora de antígeno.

A los efectos del presente documento, el término "iniciar" se refiere a poner en marcha una primera respuesta antitumoral o a poner en marcha una segunda respuesta antitumoral "mejorada".

A los efectos del presente documento, el término "posibilitar" se refiere a permitir que un sujeto responda o una célula tumoral responda a un tratamiento aquí divulgado, en el que el sujeto o la célula tumoral anteriormente no podía responder al tratamiento o tenía una respuesta baja al tratamiento.

A los efectos del presente documento, el término "mejorar" se refiere a permitir que un sujeto o una célula tumoral mejore su capacidad de responder a un tratamiento aquí divulgado. Por ejemplo, una respuesta mejorada puede comprender un aumento de la capacidad de respuesta del 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 98% o más. A los efectos del presente documento, "mejorar" también puede referirse a aumentar el número de sujetos que responden a un tratamiento, como una terapia con inhibidores del punto de control. Por ejemplo, una respuesta mejorada puede referirse a un porcentaje total de sujetos que responden a un tratamiento en el que el porcentaje es del 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 98% o más.

A los efectos del presente documento, el término "molécula pequeña" se refiere a un compuesto orgánico de bajo peso molecular (<900 daltons), que puede ayudar a regular un proceso biológico, con un tamaño del orden de 10-9 m. La mayoría de los fármacos son moléculas pequeñas.

La presente invención describe un novedoso tratamiento combinado basado en la activación de la resistencia inmunitaria adaptativa. El mecanismo de resistencia inmunitaria adaptativa implica que un agente que puede bloquear una proteína de punto de control inmunitario inducida, será mínimamente eficaz porque sólo funcionarán cuando exista una respuesta inmunitaria antitumoral preexistente (es decir, células T activadas). En los pacientes que no tengan respuestas antitumorales preexistentes, los inhibidores de los puntos de control no serán eficaces.

Por consiguiente, un tratamiento combinado que pueda activar la actividad antitumoral (es decir, una respuesta inmunitaria antitumoral) e inhibir los puntos de control es preferible porque permitiría a los sujetos que no responden a ninguno de los dos tratamientos por sí solos beneficiarse del tratamiento combinado.

Se ha demostrado que las células dendríticas (CD) coordinan la respuesta antitumoral de las células T y se han probado estrategias de vacunación activa que utilizan CD para inducir inmunidad antitumoral en sujetos con glioblastoma. Múltiples estudios informan de una respuesta inmunitaria significativa y eficaz tras el tratamiento con vacunas de CD. Es interesante la posibilidad de seguir avanzando en esta inmunoterapia con la modulación adyuvante de los mecanismos de autorregulación endógenos.

Las células dendríticas son una población diversa de células presentadoras de antígeno que se encuentran en diversos tejidos linfoides y no linfoides. (Véase Liu, Cell 106:259-62 (2001); Steinman, Ann. Rev. Immunol.

9:271-96 (1991)). Las células dendríticas incluyen las células dendríticas linfoides del bazo, las células de Langerhans de la epidermis y las células veladas de la circulación sanguínea. Colectivamente, las células dendríticas se clasifican como un grupo basado en su morfología, altos niveles de la expresión superficial del CMH de clase II, y la ausencia de algunos otros marcadores de superficie expresados en células T, células B, monocitos y células asesinas naturales. En particular, las células dendríticas derivadas de monocitos (también denominadas células dendríticas monocíticas) suelen expresar CD11c, CD80, CD86 y son HLA-DR+, pero son CD14-.

Por el contrario, los precursores de células dendríticas monocíticas (típicamente monocitos) suelen ser CD14+. Los precursores de células dendríticas monocíticas se pueden obtener de cualquier tejido en el que residan, en particular tejidos linfoides como el bazo, la médula ósea, los ganglios linfáticos y el timo. Los precursores de células dendríticas monocíticas también pueden aislarse del sistema circulatorio. La sangre periférica es una fuente de fácil acceso de precursores de células dendríticas monocíticas. La sangre del cordón umbilical es otra fuente de precursores de células dendríticas monocíticas. Los precursores de células dendríticas monocíticas se pueden aislar de diversos organismos en los que se puede provocar una respuesta inmunitaria. Dichos organismos incluyen animales, por ejemplo, humanos y animales no humanos, como primates, mamíferos (incluidos perros, gatos, ratones y ratas), aves (incluidos pollos), así como especies transgénicas de estos. En determinadas realizaciones, los precursores de células dendríticas monocíticas y/o las células dendríticas inmaduras pueden aislarse de un sujeto sano o de un sujeto que necesita inmunoestimulación, como, por ejemplo, un sujeto con cáncer u otro sujeto para el que la inmunoestimulación celular pueda ser beneficiosa o recomendable (es decir, un sujeto que tenga una infección bacteriana o vírica, y similares). Los precursores de células dendríticas y/o las células dendríticas inmaduras también se pueden obtener de un individuo sano con HLA compatible para su activación parcial y administración a un sujeto con HLA compatible que necesite inmunoestimulación.

Los métodos para aislar y modificar los precursores de células dendríticas se pueden encontrar en la Publicación de Patente de E<e>. UU. n.° 20060057120.

Los puntos de control inmunitarios regulan la función de las células T en el sistema inmunitario. Las células T desempeñan un papel fundamental en la inmunidad mediada por células. Las proteínas de los puntos de control interactúan con ligandos específicos que envían una señal a la célula T y, básicamente, desconectan o inhiben la función de la célula T. Las células cancerosas aprovechan de este sistema, impulsando altos niveles de expresión de proteínas del punto de control en su superficie, lo que da lugar a un control de las células T que expresan proteínas del punto de control en la superficie de las células T que entran en el microentorno tumoral, suprimiendo así la respuesta inmunitaria anticáncer. Por consiguiente, la inhibición de las proteínas del punto de control daría lugar a la restauración de la función de las células T y a una respuesta inmunitaria contra las células cancerosas. Algunos ejemplos de proteínas del punto de control son, entre otras, CTLA4, PDL1, PDL2, PD1, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4 (pertenece a la familia de moléculas CD2 y se expresa en todas las células NK, y§, y las células T CD8+ (ap) de memoria), CD160 (también denominadas BY55), CGEN-15049, las quinasas CHK 1 y CHK2, A2aR y diversos ligandos de la familia B-7.

La proteína 1 de muerte celular programada (PD-1) es una molécula de proteína de superficie celular de 288 aminoácidos que se expresa en las células T y las células pro-B, y desempeña un papel en su destino/diferenciación. La PD-1 tiene dos ligandos, PD-L1 y la PD-L2, que son miembros de la familia B7. La proteína PD-L1 se regula al alza en los macrófagos y las células dendríticas (CD) en respuesta al tratamiento con LPS y GM-CSF, y en las células T y B tras la señalización del receptor de células TCR y B, mientras que, en los ratones en reposo, el ARNm de PD-L1 se puede detectar en el corazón, el pulmón, el timo, el bazo y el riñón. La PD-1 regula negativamente las respuestas de las células T.

Se ha demostrado que la PD-1 participa en la regulación del equilibrio entre la activación de las células T y la tolerancia de las células T en respuesta a antígenos crónicos. Por ejemplo, la expresión de PD-1 se ha estudiado ampliamente en la infección por VIH. Se ha descubierto que, durante la infección por VIH1, la expresión de PD-1 aumenta en las células T CD4+. Se cree que la regulación al alza de la PD-1 está ligada al agotamiento de las células T (que se define como una pérdida progresiva de las funciones efectoras clave), cuando se observa una disfunción de las células T en presencia de una exposición crónica a los antígenos, como ocurre en la infección por VIH. La regulación al alza de PD-1 también puede estar asociada a un aumento de la apoptosis en estos mismos conjuntos de células durante la infección vírica crónica (véase Petrovas et al, (2009) J Immunol. 183 (2):1120-32).

La PD-1 también desempeña un papel en la huida específica del tumor de la vigilancia inmunitaria. Se ha demostrado que la PD-1 está altamente expresada en los linfocitos T citotóxicos (LTC) específicos del tumor tanto en la leucemia mielógena crónica (LMC) como en la leucemia mielógena aguda (LMA). La PD1 también está regulada al alza en los linfocitos T infiltrantes de melanoma (TIL) (véase Dotti (2009) Blood 114 (8): 1457 58). Se ha descubierto que los tumores expresan el ligando PD1 (PDL-1 y PDL-2) que, combinado con la regulación al alza de PD-1 en los LTC, puede ser un factor que contribuya a la pérdida de funcionalidad de las células T y a la incapacidad de los LTC para mediar una respuesta antitumoral eficaz. Los investigadores han demostrado que en ratones infectados crónicamente con el virus de la coriomeningitis linfocitaria (VCML), la administración de anticuerpos anti-PD-1 bloqueó la interacción PD-1-PDL y fue capaz de restaurar cierta funcionalidad de las células T (proliferación y secreción de citocinas), y conducir a una disminución de la carga viral (Barber et al (2006) Nature 439 (9): 682-687).

Las propias células tumorales expresan PD-L1 y se cree que limitan las respuestas de las células T a través de este mecanismo. Además, se ha demostrado que la inhibición de PD-1 provoca la expansión de las células T efectoras y la restricción de la población de células T reguladoras en modelos de melanoma B16. El bloqueo de PD-1,<c>T<l>A-4 o IDO restablece la producción de IL-2 y permite una mayor proliferación de las células T CD8+ presentes en el microentorno tumoral. Se ha demostrado que el tratamiento anti-PDL1 rescata y permite la expansión de las células T CD8+ generadas por la vacuna específica de antígeno para rechazar el tumor. Estos datos sugieren que el eje PD-1/PD-L1 regula las células T específicas de tumor activadas.

Los ensayos clínicos del melanoma han mostrado respuestas antitumorales sólidas con el bloqueo anti-PD-1. También se han descrito beneficios significativos con la inhibición de PD-1 en casos de melanoma avanzado, cáncer de pulmón no microcítico, de próstata, de células renales y colorrectal. Los estudios en modelos murinos han aplicado esta evidencia a la terapia del glioma. El bloqueo anti-PD-1 adyuvante a la radiación promovió la población de células T citotóxicas y un beneficio asociado de supervivencia a largo plazo en ratones con glioma. Se ha descrito una disminución de las Tregs infiltrantes del tumor y un aumento de la supervivencia cuando se administró un tratamiento combinado de inhibidores de IDO, CTLA-4 y PD-L1.

Hay varios inhibidores de PD-1 que se están probando actualmente en ensayos clínicos. CT-01 1 es un anticuerpo monoclonal IgG1 humanizado contra PD-1. Recientemente se completó un ensayo clínico de fase II en sujetos con linfoma difuso de células B grandes (LDCBG) que se habían sometido a un trasplante autólogo de células madre. Los resultados preliminares demostraron que el 70% de los sujetos estaban libres de progresión al final del periodo de seguimiento, en comparación con el 47% del grupo de control, y el 82% de los sujetos estaban vivos, en comparación con el 62% del grupo de control. Este ensayo determinó que el CT-01 1 no sólo bloquea la función de PD-1, sino que también aumenta la actividad de las células asesinas naturales, intensificando así la respuesta inmunitaria antitumoral.

BMS 936558 es un anticuerpo monoclonal IgG4 totalmente humano dirigido contra agentes PD-1. En un ensayo de fase I, la administración quincenal de BMS-936558 en sujetos con neoplasias malignas avanzadas refractarias al tratamiento mostró regresiones parciales o completas duraderas. La tasa de respuesta más significativa se observó en sujetos con melanoma (28%) y carcinoma de células renales (27%), pero también se observó una actividad clínica sustancial en sujetos con cáncer de pulmón no microcítico (CPNM), y algunas respuestas persistieron durante más de un año. También fue relativamente bien tolerado; se produjeron acontecimientos adversos de grado >3 en el 14% de los sujetos.

BMS 936559 es un anticuerpo monoclonal IgG4 totalmente humano que se dirige al ligando de PD-1 PD-L1. Los resultados de la fase I demostraron que la administración quincenal de este fármaco producía respuestas duraderas, especialmente en sujetos con melanoma. Las tasas de respuesta objetiva oscilaron entre el 6% y el 17% en función del tipo de cáncer en sujetos con CPNM, melanoma, CCR o cáncer de ovario y algunos sujetos experimentaron respuestas que duraron un año o más.

MK 3475 es un anticuerpo monoclonal IgG4 anti-PD-1 humanizado en fase I de desarrollo en un estudio de cinco partes que evalúa la dosis, seguridad y tolerabilidad del fármaco en sujetos con carcinoma, melanoma o CPNM progresivo, localmente avanzado o metastásico.

MPDL 3280A es un anticuerpo monoclonal, que también se dirige a PD-L1, en fase I de pruebas en combinación con el inhibidor de BRAF vemurafenib en sujetos con melanoma metastásico mutante BRAF V600 y en combinación con bevacizumab, que se dirige al receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (RFCEV), con o sin quimioterapia en sujetos con tumores sólidos avanzados.

AMP 224 es una proteína de fusión del dominio extracelular del segundo ligando de PD-1, PD-L2, e IgG1, que tiene el potencial de bloquear la interacción PD-L2/PD-1. El AMP-224 se encuentra actualmente en fase I de pruebas como monoterapia en sujetos con cáncer avanzado.

Medi 4736 es un anticuerpo anti-PD-L1 en fase I de pruebas clínicas en sujetos con melanoma maligno avanzado, carcinoma de células renales, CPNM y cáncer colorrectal.

CTLA4 (proteína asociada a los linfocitos T citotóxicos) es un receptor proteico que regula a la baja el sistema inmunitario. CTLA4 se encuentra en la superficie de las células T, que dirigen el ataque inmunitario celular contra los antígenos. El ataque de las células T puede activarse estimulando el receptor CD28 de la célula T. El ataque de las células T puede desactivarse estimulando el receptor CTLA4. Una inmunoterapia de primer nivel, ipilimumab (Yervoy), un anticuerpo monoclonal dirigido a CTLA-4 en la superficie de las células T, se utilizó para el tratamiento del melanoma.

Por consiguiente, la presente invención proporciona un agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control para su uso en un método de tratamiento de un glioma o de iniciación, mejora o prolongación de una respuesta antiglioma en un sujeto que la necesite, que consiste en administrar al sujeto un agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control. El inhibidor del punto de control es un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo totalmente humano o una combinación de estos y el inhibidor del punto de control inhibe una proteína del punto de control que es PDL1 o Medí una combinación de estas. En un aspecto, el agente terapéutico es una vacuna de células dendríticas pulsada por lisado de glioma. En otro aspecto, el agente terapéutico es una vacuna de células dendríticas, en la que las células dendríticas de la vacuna están parcialmente maduras y en la que las células dendríticas parcialmente maduras son células dendríticas autólogas o alogénicas que captan biomarcadores de gliomain situ.

En otro aspecto, el inhibidor del punto de control y el terapéutico se administran simultánea o secuencialmente, en cualquier orden. En un aspecto adicional, el terapéutico se administra antes que el inhibidor del punto de control y el inhibidor del punto de control es un inhibidor de PD-1.

El uso en el tratamiento reivindicado viene determinado por un resultado clínico; un aumento, mejora o prolongación de la actividad antitumoral de las células T; un aumento del número de células T antitumorales o células T activadas en comparación con el número previo al tratamiento o una combinación de estos. En otro aspecto, el resultado clínico es la regresión del tumor; la reducción del tumor; la necrosis del tumor; la respuesta antitumoral del sistema inmunitario; la expansión, recurrencia o propagación del tumor o una combinación de estos. En un aspecto adicional, el efecto del tratamiento se predice por la presencia de células T, la presencia de una firma genética que indica inflamación de células T o una combinación de estas.

La invención reivindicada se refiere a un agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control para su uso en un método de tratamiento de un glioma o para iniciar, mejorar o prolongar una respuesta antiglioma en un sujeto que la necesite. En algunas realizaciones, el glioma es un glioblastoma maligno. En un aspecto de la divulgación, el sujeto padece cáncer. En un aspecto adicional de la divulgación que no forma parte de la invención reivindicada, el cáncer es cualquier tumor sólido o cáncer líquido, incluidos los cánceres urogenitales (como el cáncer de próstata, los cánceres de células renales, los cánceres de vejiga), los cánceres ginecológicos (como los cánceres de ovario, cánceres de cuello de útero, cánceres de endometrio), el cáncer de pulmón, cánceres gastrointestinales (como cánceres colorrectales no metastásicos o metastásicos, cánceres de páncreas, cánceres gástricos, cánceres de esófago, cánceres hepatocelulares, cánceres colangiocelulares), el cáncer de cabeza y cuello (por ejemplo, cáncer de células escamosas de cabeza y cuello), el mesotelioma maligno, cáncer de mama no metastásico o metastásico (por ejemplo, cáncer de mama metastásico refractario a las hormonas), melanoma maligno, carcinoma de células de Merkel o sarcomas óseos y de partes blandas, y neoplasias hematológicas, como el mieloma múltiple, la leucemia mielógena aguda, la leucemia mielógena crónica, el síndrome mielodisplásico y la leucemia linfoblástica aguda. En un aspecto preferible de la divulgación que no forma parte de la invención reivindicada, la enfermedad es el cáncer de pulmón no microcítico (CPNM), el cáncer de mama (por ejemplo, el cáncer de mama metastásico refractario a las hormonas), el cáncer de cabeza y cuello (por ejemplo, el cáncer de células escamosas de cabeza y cuello), los cánceres colorrectales metastásicos, el cáncer de próstata refractario o sensible a las hormonas, el cáncer colorrectal, el cáncer de ovario, el cáncer hepatocelular, el cáncer de células renales, el sarcoma de tejidos blandos o el cáncer de pulmón microcítico.

En otro aspecto, el uso del método comprende además la administración de un agente quimioterapéutico, una terapia dirigida o radiación al sujeto antes, simultáneamente o después del tratamiento con la terapia combinada. En un aspecto adicional, el tumor puede extirparse antes de la administración de la terapia y del inhibidor del punto de control.

El agente que es un inhibidor del punto de control de la invención se selecciona del grupo compuesto por un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado y un anticuerpo totalmente humano o una combinación de estos e inhibe una proteína del punto de control seleccionada del grupo compuesto por PD-1 y PDL1 o una combinación estos. Los inhibidores del punto de control de la divulgación incluyen cualquier agente que bloquee o inhiba de forma estadísticamente significativa las vías inhibitorias del sistema inmunitario. Dichos inhibidores de la divulgación pueden incluir inhibidores de moléculas pequeñas o pueden incluir anticuerpos, o fragmentos de unión a antígenos de estos, que se unen y bloquean o inhiben receptores del punto de control inmunitarios o anticuerpos que se unen y bloquean o inhiben ligandos de receptores del punto de control inmunitarios. Las moléculas de punto de control ilustrativas a las que se puede dirigir el bloqueo o la inhibición incluyen, entre otras, CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, LAG3, TIM3, VISTA, KIR, 2B4 (pertenece a la familia de moléculas CD2 y se expresa en todos los linfocitos T NK, y§ y CD8+ de memoria (ap)), CD160 (también denominado BY55), CGEN-15049, quinasas CHK 1 y CHK2, A2aR y diversos ligandos de la familia B-7. Los ligandos de la familia B7 incluyen, entre otros, B7-1,<b>7-2, B7-DC, B7-H1, B7-H2, B7-H3, B7-H4, B7-H5, B7-H6 y B7-H7. Los inhibidores del punto de control incluyen anticuerpos, o fragmentos de unión a antígenos de estos, otras proteínas de unión, terapias biológicas o moléculas pequeñas, que se unen y bloquean o inhiben la actividad de uno o más de CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, BTLA, H<v>E<m>, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160 y CGEN-15049. Entre los inhibidores del punto de control inmunitario ilustrativos se incluyen Tremelimumab (anticuerpo de bloqueo de CTLA-4), antiOX40, el anticuerpo monoclonal PD-L1 (anti-B7-H1; MEDI4736), MK-3475 (bloqueo de PD-1), Nivolumab (anticuerpo anti-PDl), CT-011 (anticuerpo anti-PD1), el anticuerpo monoclonal bY55, AMP224 (anticuerpo anti-PDL1), BMS936559 (anticuerpo anti-PDL1), MPLDL3280A (anticuerpo anti-PDL1), MSB0010718C (anticuerpo anti-PDL1) y Yervoy/ipilimumab (inhibidor del punto de control anti-CTLA-4). Los ligandos de proteínas de punto de control incluyen, entre otros, PD-L1, PD-L2, B7-H3, B7-H4, CD28, c D86 y TIM-3. Los inhibidores del punto de control que inhiben una proteína del punto de control distinta de PD-1, PDL1 o una combinación de estas no forman parte de la invención reivindicada.

La presente invención utiliza una clase específica de inhibidores del punto de control, que son fármacos que bloquean la interacción entre la proteína 1 de muerte celular programada (PD-1), receptora del punto de control inmunitario, y su ligando PDL-1. Véase A. Mullard, "New checkpoint inhibitors ride the immunotherapy tsunami", Nature Reviews: Drug Discovery (2013), 12:489-492. La PD-1 se expresa en las células T y regula su actividad. En concreto, cuando la PD-1 no está unida a la PDL-1, las células T pueden atacar y matar a las células diana. Sin embargo, cuando la PD-1 está unida a la PDL-1, hace que las células T dejen de atacar y matar células diana. Además, a diferencia de otros puntos de control, la PD-1 actúa de forma próxima, de modo que las PDL se sobreexpresan directamente en las células cancerosas, lo que provoca una mayor unión a las células T que expresan PD-1.

La invención proporciona inhibidores del punto de control que son anticuerpos que pueden actuar como agonistas de PD-1, modulando así las respuestas inmunitarias reguladas por PD1. En un aspecto de la divulgación, los anticuerpos anti-PD-1 pueden ser fragmentos de unión a antígenos. Los anticuerpos anti-PD-1 aquí divulgados son capaces de unirse a la PD-1 humana y agonizar la actividad de la PD-1, inhibiendo así la función de las células inmunitarias que expresan PD-1.

En un aspecto, que no forma parte de la invención reivindicada, la divulgación abarca el uso de una clase específica de inhibidores del punto de control, que son fármacos que inhiben CTLA-4. Los agentes antagonistas anti-CTLA4 adecuados para su uso en los métodos de la divulgación, incluyen, entre otros, anticuerpos anti-CTLA4, anticuerpos anti-CTLA4 humanos, anticuerpos anti-CTLA4 de ratón, anticuerpos anti-CTLA4 de mamífero, anticuerpos anti-CTLA4 humanizados, anticuerpos anti-CTLA4 monoclonales, anticuerpos anti-CTLA4 policlonales, anticuerpos anti-CTLA4 quiméricos, MDX-010 (ipilimumab), tremelimumab, anticuerpos anti-CD28, adnectinas anti-CTLA4, anticuerpos de dominio anti-CTLA4, fragmentos anti-CTLA4 de cadena única, fragmentos anti-CTLA4 de cadena pesada, fragmentos anti-CTLA4 de cadena ligera, inhibidores de CTLA4 que agonizan la vía coestimuladora, los anticuerpos divulgados en la Publicación PCT n.° WO 2001/014424, los anticuerpos divulgados en la Publicación PCT n.° WO 2004/035607, los anticuerpos divulgados en la Publicación de EE. UU. n.° 2005/0201994, y los anticuerpos divulgados en la Patente Europea n.° EP 1212422 B1. Otros anticuerpos CTLA-4 se describen en las Patentes de EE. UU. n.° 5811 097, 5 855887, 6051 227 y 6984720; en las Publicaciones PCT n.° WO 01/14424 y WO 00/37504; y en las Publicaciones de EE. UU. n.° 2002/0039581 y 2002/086014. Otros anticuerpos anti-CTLA-4 que pueden utilizarse en un método de la presente divulgación incluyen, por ejemplo, los divulgados en: WO 98/42752; las Patentes de EE. UU. n.°6682736 y 6207 156; Hurwitz et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95(17):10067-10071 (1998); Camacho et al., J. Clin. Oncology, 22(145): Abstract No. 2505 (2004) (anticuerpo CP675206); Mokyr et al., Cancer Res., 58:5301-5304 (1998), y las Patentes de EE. UU. n.° 5977318, 6682736, 7109003 y 7 132281.

Los antagonistas anti-CTLA4 adicionales incluyen, entre otros, los siguientes: cualquier inhibidor capaz de alterar la capacidad del antígeno CD28 de unirse a su ligando análogo, de inhibir la capacidad del CTLA4 de unirse a su ligando análogo, de aumentar las respuestas de las células T a través de la vía coestimuladora, de alterar la capacidad del B7 de unirse al CD28 y/o al CTLA4, de alterar la capacidad del B7 de activar la vía coestimuladora, de alterar la capacidad de CD80 de unirse a CD28 y/o a CTLA4, de alterar la capacidad de CD80 de activar la vía coestimuladora, de alterar la capacidad de CD86 de unirse a CD28 y/o a CTLA4, de alterar la capacidad de CD86 de activar la vía coestimuladora, y de alterar la vía coestimuladora, en general de ser activado. Esto incluye necesariamente inhibidores de moléculas pequeñas de CD28, CD80, CD86, CTLA4, entre otros miembros de la vía coestimuladora; anticuerpos dirigidos contra CD28, CD80, CD86, CTLA4, entre otros miembros de la vía coestimuladora; moléculas antisentido dirigidas contra CD28, CD80, CD86, CTLA4, entre otros miembros de la vía coestimuladora; adnectinas dirigidas contra CD28, CD80, CD86, CTLA4, entre otros miembros de la vía coestimuladora, inhibidores de ARNi (tanto de cadena simple como doble) de CD28, CD80, CD86, CTLA4, entre otros miembros de la vía coestimuladora, entre otros antagonistas anti-CTLA4.

En un aspecto específico que no forma parte de la invención reivindicada, la divulgación cubre el uso de una clase concreta de inhibidores del punto de control, que son fármacos que inhiben TIM-3. Al bloquear la activación de TIM-3 por un ligando, se produce un aumento de la activación de las células Th1. Además, TIM-3 ha sido identificado como un importante receptor inhibidor expresado por las células T CD8+ agotadas. También se ha documentado que TIM-3 es un regulador clave de la inmunidad antitumoral mediada por ácidos nucleicos. En un ejemplo, se ha demostrado que TIM-3 está regulado al alza en las células dendríticas asociadas a tumores (CDAT).

En un aspecto concreto, que no forma parte de la invención reivindicada, la divulgación se dirige al uso de agentes inmunoestimulantes, factores de crecimiento de células T e interleucinas. Los agentes inmunoestimulantes son sustancias (fármacos y nutrientes) que estimulan el sistema inmunitario, induciendo la activación o aumentando la actividad de cualquiera de sus componentes. Los inmunoestimulantes incluyen vacunas bacterianas, factores estimulantes de colonias, interferones, interleuquinas, otros inmunoestimulantes, vacunas terapéuticas, combinaciones de vacunas y vacunas virales.

Los factores de crecimiento de células T son proteínas que estimulan la proliferación de células T Algunos ejemplos de factores de crecimiento de células T son IL-2, IL-7, IL-15, IL-17, IL21 e IL-33.

Las interleucinas son un grupo de citocinas cuya expresión se observó por primera vez en los glóbulos blancos. La función del sistema inmunitario depende en gran parte de las interleucinas, y se han descrito deficiencias raras de varias de ellas, todas ellas con enfermedades autoinmunes o inmunodeficiencia. La mayoría de las interleucinas son sintetizadas por los linfocitos T CD4 auxiliares, así como por los monocitos, los macrófagos y las células endoteliales. Promueven el desarrollo y la diferenciación de los linfocitos T y B, y de las células hematopoyéticas. Algunos ejemplos de interleucinas son la IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15 e IL-17.

La IL-15 es una citocina que se une y señala a través de un complejo compuesto por la cadena beta del receptor de IL-2/IL-15 (CD122) y la cadena gamma común (gammaC, CD132). La IL-15 es secretada por los fagocitos mononucleares tras la infección por virus. Esta citocina induce la proliferación celular de las células asesinas naturales, células del sistema inmunitario innato cuya función principal es eliminar las células infectadas por virus.

La IL-7 es un factor de crecimiento hematopoyético secretado por las células estromales de la médula ósea y el timo. La IL-7 estimula la diferenciación de las células madre hematopoyéticas multipotentes y pluripotentes en células progenitoras linfoides (por oposición a las células progenitoras mieloides, en las que la diferenciación es estimulada por la IL-3). También estimula la proliferación de todas las células del linaje linfoide (células B, células T y células NK). Es importante para la proliferación durante ciertas etapas de la maduración de las células B, la supervivencia, el desarrollo y la homeostasis de las células T y NK. La IL-7 puede estar glicosilada. En determinados métodos o composiciones aquí descritos, hay un tercer, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno o décimo agente adicional. En determinadas realizaciones, el tercer, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno o décimo agente adicional es un agente quimioterapéutico, una terapia de citoquinas, una terapia de interferón (por ejemplo, INF-a), una terapia de interlucina (por ejemplo, IL-2, IL-7 o IL-11), una terapia de factor estimulante de colonias (por ejemplo, G-CSF), una terapia de anticuerpos, una terapia vírica, una terapia génica o una combinación de estas. En determinadas realizaciones, el tercer, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno o décimo agente adicional puede utilizarse antes, simultáneamente o después del tratamiento con cualquiera de los métodos o composiciones aquí descritos.

Entre los ejemplos de agentes terapéuticos del cáncer o agentes quimioterapéuticos se incluyen agentes alquilantes como la tiotepa y la ciclofosfamida (CYTOXAN); alquilsulfonatos como el busulfán, el improsulfán y el piposulfán; aziridinas como la benzodopa, la carboquona, la meturedopa y la uredopa; etileniminas y metilamelaminas como la altretamina, la trietilenemelamina, la trietilenfosforamida, la trietilentiofosforamida y la trimetilolomelamina; mostazas nitrogenadas como el clorambucilo, la clornafazina, la colofosfamida, la estramustina, la ifosfamida, la mecloretamina, el clorhidrato de óxido de mecloretamina, el melfalán, la novembichina, la fenesterina, la prednimustina, la trofosfamida, la mostaza uracilo; nitrosureas como la carmustina, la clorozotocina, la fotemustina, la lomustina, la nimustina, la ranimustina; antibióticos como las aclacinomisinas, la actinomicina, la autramicina, la azaserina, las bleomicinas, la cactinomicina, la calicheamicina, la carabicina, la caminomicina, la carzinofilina, las cromomicinas, la dactinomicina, la daunorrubicina, la detorrubicina, la 6-diazo-5-oxoL-norleucina, la doxorrubicina, epirubicina, esorubicina, idarubicina, marcelomicina, mitomicinas, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; antimetabolitos como el metotrexato y el 5-fluorouracilo (5- FU); análogos del ácido fólico como la denopterina, el metotrexato, la pteropterina, el trimetrexato; análogos de las purinas como la fludarabina, la 6-mercaptopurina, la tiamiprina, la tioguanina; análogos de la pirimidina como ancitabina, azacitidina, 6- azauridina, carmofur, citarabina, dideoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, 5-FU; andrógenos como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; antiadrenales como la aminoglutetimida, el mitotano, el trilostano; reponedores del ácido fólico como el ácido frolínico; aceglatona; glucósido de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; amsacrina; bestrabucil; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elformitina; acetato de eliptinio; etoglúcido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinan; lonidamina; mitoguazona; mitoxantrona; mopidamol; nitracrina; pentostatina; fenamet; pirarubicina; ácido podofilínico; 2-etilhidrazida; procarbazina; PSK.RTM.; razoxano; sizofiran; espirogermanio; ácido tenuazónico; triaziquona; 2, 2',2"- triclorotrietilamina; uretano; vindesina; dacarbazina; mannomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobroman; gacitosina; arabinósido ("Ara-C"); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides, como paclitaxel (TAXOL™, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.) y doxetaxel (TAXOTERE™, Rhne-Poulenc Rorer, Antony, Francia); clorambucil; gemcitabina; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos del platino como el cisplatino y el carboplatino; vinblastina; trastuzumab, docetaxel, platino; etopósido (VP-16); ifosfamida; mitomicina C; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina; navelbina; novantrona; tenipósido; daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; CPT-11; inhibidor de la topoisomerasa RFS 2000; difluorometilomitina (DMFO); derivados del ácido retinoico como Targretin ™ (bexaroteno), Panretin™ (alitretinoína); ONTAKT™ (denileucina diftitox); esperamicinas; capecitabina; y sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores. También se incluyen en esta definición los agentes antihormonales que actúan para regular o inhibir la acción hormonal sobre los tumores, como los antiestrógenos, entre los que se incluyen, por ejemplo, el tamoxifeno, el raloxifeno, los 4(5)-imidazoles inhibidores de la aromatasa, el 4-hidroxitamoxifeno, el trioxifeno, el keoxifeno, el LY117018, la onapristona y el toremifeno (Fareston); y antiandrógenos como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida y goserelina; y sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores. Otros agentes terapéuticos para el cáncer son el sorafenib y otros inhibidores de la proteína cinasa como el afatinib, el axitinib, el bevacizumab, el cetuximab, el crizotinib, el dasatinib, el erlotinib, el fostamatinib gefitinib, imatinib, lapatinib, lenvatinib, mubritinib, nilotinib, panitumumab, pazopanib, pegaptanib, ranibizumab, ruxolitinib, trastuzumab, vandetanib, vemurafenib y sunitinib; sirolimus (rapamicina), everolimus y otros inhibidores de mTOR.

Algunos ejemplos de agentes quimioterapéuticos adicionales son los inhibidores de la topoisomerasa I (por ejemplo, irinotecán, topotecán, camptotecina y sus análogos o metabolitos, y doxorrubicina); los inhibidores de la topoisomerasa II (por ejemplo, etopósido, tenipósido y daunorrubicina); los agentes alquilantes (por ejemplo, melfalán, clorambucil, busulfán, tiotepa, ifosfamida, carmustina, lomustina, semustina, estreptozocina, decarbazina, metotrexato, mitomicina C y ciclofosfamida); intercaladores del ADN (por ejemplo, cisplatino, oxaliplatino y carboplatino); intercaladores del ADN y generadores de radicales libres como la bleomicina; y miméticos de nucleósidos (por ejemplo, 5-fluorouracilo, capecitibina, gemcitabina, fludarabina, citarabina, mercaptopurina, tioguanina, pentostatina e hidroxiurea). Además, los ejemplos de agentes quimioterapéuticos que interrumpen la replicación celular incluyen: paclitaxel, docetaxel y análogos relacionados; vincristina, vinblastina y análogos relacionados; talidomida, lenalidomida y análogos relacionados (por ejemplo, CC-5013 y CC-4047); inhibidores de la proteína tirosina quinasa (por ejemplo, mesilato de imatinib y gefitinib); inhibidores del proteasoma (por ejemplo, bortezomib); inhibidores de NF-kB, incluidos los inhibidores de la quinasa IxB; anticuerpos que se unen a proteínas sobreexpresadas en los cánceres y otros inhibidores de proteínas o enzimas que se sabe que están regulados al alza, sobreexpresados o activados en los cánceres, cuya inhibición regula a la baja la replicación celular.

La presente invención utiliza una vacuna de células dendríticas pulsadas con lisado de glioma, o una vacuna de células dendríticas en la que las células dendríticas de la vacuna están parcialmente maduras y en la que las células dendríticas parcialmente maduras son células dendríticas autólogas o alogénicas que captan biomarcadores de gliomain situ.En un aspecto concreto, la presente divulgación se dirige al uso de vacunas terapéuticas, incluidas las vacunas contra el cáncer y las vacunas de células dendríticas. El objetivo de las vacunas contra el cáncer es conseguir que el sistema inmunitario monte un ataque contra las células cancerosas del organismo. En otras palabras, las vacunas contra el cáncer actúan cebando al sistema inmunitario para que ataque a las células cancerosas del organismo. Por consiguiente, en lugar de prevenir la enfermedad, las vacunas contra el cáncer pretenden conseguir que el sistema inmunitario ataque una enfermedad que ya existe. Una vacuna contra el cáncer utiliza células cancerosas, partes de células o antígenos puros para aumentar la respuesta inmunitaria contra las células cancerosas que ya se encuentran en el organismo.

Las vacunas contra el cáncer, a diferencia de las terapias tradicionales de refuerzo inmunitario, no sólo mejoran el sistema inmunitario en general, sino que también hacen que el sistema inmunitario ataque a las células con uno o más antígenos específicos y crean una "memoria de ataque" en el sistema inmunitario. Esta "memoria de ataque" permite al sistema inmunitario seguir atacando a las células cancerosas para evitar que los cánceres progresen y/o reaparezcan una vez puestos en remisión.

Las vacunas contra el cáncer pueden fabricarse a partir de células cancerosas reales que han sido extraídas de un sujeto. Una vez extraídas, las células cancerosas se modifican en el laboratorio, normalmente con radiación, para que no puedan formar más tumores. En el laboratorio, también es habitual que los científicos modifiquen aún más las células cancerosas. Por ejemplo, a menudo se modifican las células cancerosas añadiéndoles sustancias químicas o nuevos genes, para que el sistema inmunitario las considere más extrañas. A continuación, las células modificadas se inyectan de nuevo en el sujeto. El sistema inmunitario es capaz de reconocer los antígenos de estas células y, a través de procesos fisiológicos naturales, busca y ataca/mata las células que expresan el antígeno deseado.

La mayoría de las vacunas son autólogas. Las vacunas autólogas se fabrican a partir de células muertas (por ejemplo, tratadas con radiación o productos químicos para incapacitar a las células cancerosas para replicarse) tomadas de la misma persona en la que se utilizarán posteriormente. En otras palabras, las células se toman de un sujeto, se modifican y luego se vuelven a inyectar en el mismo sujeto.

Otras vacunas son alogénicas. Las vacunas alogénicas se fabrican a partir de células extraídas de un sujeto y luego inyectadas en un segundo sujeto diferente. Aunque las vacunas alogénicas son más fáciles de fabricar que las autólogas, puede ser ventajoso utilizar vacunas autólogas para evitar la introducción de células extrañas en un sujeto.

Existen múltiples tipos de vacunas contra el cáncer. Algunos ejemplos no limitantes de vacunas contra el cáncer son las vacunas de células tumorales, las vacunas de antígenos, las vacunas de células dendríticas, las vacunas de ADN y las vacunas basadas en vectores.

Las vacunas antigénicas refuerzan el sistema inmunitario utilizando uno o más antígenos, a diferencia de las células tumorales enteras que contienen muchos miles de antígenos. Estos antígenos son generalmente péptidos. Las vacunas antigénicas pueden ser específicas para un determinado tipo de cáncer porque cada tipo de tumor puede identificarse mediante perfiles antigénicos concretos. Para maximizar la eficacia de estas vacunas, puede ser beneficioso combinar múltiples antígenos en la vacuna en función del perfil antigénico de un cáncer concreto.

Las vacunas de células dendríticas suelen ser vacunas autólogas y a menudo deben fabricarse individualmente para cada sujeto. El proceso utilizado para crearlas es complejo y caro. Los médicos extraen algunas células inmunitarias de la sangre y las exponen en el laboratorio a células cancerosas o antígenos cancerosos, así como a otras sustancias químicas que las convierten en células dendríticas y las ayudan a crecer. A continuación, las células dendríticas se inyectan de nuevo en el sujeto, donde deberían provocar una respuesta inmunitaria contra las células cancerosas del organismo. Un ejemplo no limitativo de vacuna de células dendríticas es Sipuleucel-T (descrito más abajo).

Las vacunas de ADN son una tercera vacuna celular contra el cáncer no limitante. Una limitación de las vacunas tradicionales de células cancerosas es que cuando las células tumorales o los antígenos se inyectan en el organismo como una vacuna, pueden provocar la respuesta inmunitaria deseada al principio, pero pueden volverse menos eficaces con el paso del tiempo. Esto se debe a que el sistema inmunitario las reconoce como extrañas y las destruye rápidamente. Sin más estimulación, el sistema inmunitario suele volver a su estado normal de actividad (anterior a la vacuna). Una forma de promover la respuesta inmunitaria continuada es utilizar vacunas de ADN.

El ADN es la sustancia de las células que contiene el código genético de las proteínas que éstas fabrican. Se pueden diseñar vectores que contengan ADN específico que se pueda inyectar en un sujeto, para que el ADN sea captado por las células. Una vez que las células captan el ADN, este programará a las células para que fabriquen antígenos específicos, que pueden provocar la respuesta inmunitaria deseada.

La cuarta vacuna contra el cáncer no limitante es una composición vectorial. Las vacunas vectoriales pueden utilizarse para administrar el ADN de las vacunas de ADN. Los vectores son virus, bacterias, células de levadura u otras estructuras especiales que se pueden utilizar para introducir antígenos o ADN en las células de un sujeto. Los vectores son especialmente útiles porque pueden utilizarse para administrar más de un antígeno cancerígeno a la vez, lo que puede hacer que el sistema inmunitario de un sujeto tenga más probabilidades de organizar una respuesta. Los vectores también son particularmente útiles porque pueden desencadenar una respuesta inmunitaria por sí solos (sin ningún ADN o antígeno adicional), lo que producirá una respuesta inmunitaria más fuerte cuando se combinen con un ADN y/o antígeno.

Las células dendríticas pueden administrarse directamente en un tumor, en el lecho tumoral tras la extirpación o resección quirúrgica del tumor, peritumoralmente, en un ganglio linfático drenante en contacto directo con el tumor, en un vaso sanguíneo o conducto linfático que desemboque o alimente un tumor u órgano afectado por el tumor, por ejemplo, la vena porta o una vena o arteria pulmonar, y similares. La administración de células dendríticas parcialmente maduras puede ser simultánea o posterior a otros tratamientos del tumor, como la quimioterapia o la radioterapia. Además, las células dendríticas parcialmente maduras pueden coadministrarse con otro agente, que actúe como coadyuvante de la maduración de la célula dendrítica y/o del procesamiento del antígeno dentro del tumor o de la región cercana o adyacente al tumor. Además, las células dendríticas también pueden formularse o componerse en una matriz de liberación lenta para su implantación en una región dentro o alrededor del tumor o lecho tumoral, de forma que las células se liberen lentamente en el tumor, o lecho tumoral, para entrar en contacto con los antígenos tumorales.

Las células dendríticas parcialmente maduras también pueden administrarse por cualquier medio apropiado para la formulación y el modo de administración. Por ejemplo, las células se pueden combinar con un portador farmacéuticamente aceptable y administrarse con una jeringa, un catéter, una cánula y similares. Como en el caso anterior, las células pueden formularse en una matriz de liberación lenta. Cuando se administra de este modo, la formulación se puede administrar por un medio apropiado para la matriz utilizada. Otros métodos y modos de administración aplicables a la presente invención son bien conocidos por el experto en la técnica.

Las composiciones de células dendríticas se pueden utilizar por sí solas en el tratamiento de un individuo. Además, las composiciones se pueden utilizar en combinación con cualquier otro método para tratar un tumor. Por ejemplo, el uso de los métodos de la presente invención puede combinarse con la resección quirúrgica de un tumor, la quimioterapia (fármacos citotóxicos, agentes apoptóticos, anticuerpos y similares), la radioterapia, la crioterapia, la braquiterapia, la inmunoterapia (administración de células dendríticas maduras activadas específicas para antígenos, células NK, anticuerpos específicos para antígenos tumorales, etc.) y similares. Todos y cada uno de estos métodos se pueden utilizar también en cualquier combinación. Los tratamientos combinados pueden ser concurrentes o secuenciales y se pueden administrar en cualquier orden que determine el médico competente.

Un ejemplo de vacuna contra el cáncer disponible en el mercado es Sipuleucel-T o Provenge®. Se trata de una vacuna de células cancerosas que se utiliza para tratar el cáncer de próstata avanzado que no es tratable con las terapias quimioterapéuticas u hormonales tradicionales. Para esta vacuna, se aíslan las células inmunitarias del propio sujeto y a continuación se exponen las células inmunitarias a sustancias químicas para convertirlas en células dendríticas. Las células dendríticas se exponen a la fosfatasa ácida prostática (PAP) que, al reintroducirse en el sujeto, produce una respuesta inmunitaria contra el cáncer de próstata. Resulta particularmente importante el hecho de que, una vez que las células modificadas se reintroducen en el sujeto, su sistema inmunitario crea una "memoria de ataque" y transforma otras células inmunitarias del sujeto en células que atacan el cáncer.

Un ejemplo de vacuna de células dendríticas es DCVax. DCVax es una tecnología de plataforma que utiliza células dendríticas activadas (las células madre del sistema inmunitario), y está diseñada para estimular y educar al sistema inmunitario para que ataque a los cánceres. DCVax utiliza muchos agentes activos para atacar muchas dianas en el cáncer (Liau, LM et al. Journal of Neurosurgery 90: 1115-1124, 1999; Prins RM et al. J Immunother. 2013 Feb; 36(2):152-7).

Hay tres aspectos clave de las vacunas de células dendríticas, incluyendo DCVax, que hacen que las vacunas sean eficaces en el tratamiento del cáncer: (1) las vacunas de células dendríticas están diseñadas para movilizar todo el sistema inmunitario, no sólo una entre las muchas categorías diferentes de agentes inmunitarios en ese sistema general. Como se ha descrito anteriormente, DCVax está compuesta por células dendríticas activadas y educadas, y las células dendríticas son las células madre del sistema inmunitario, que movilizan o ayudan a todo el sistema inmunitario. El conjunto del sistema inmunitario implica muchos tipos de anticuerpos, y también muchos otros tipos de agentes además de los anticuerpos. Las células dendríticas movilizan todas estas diferentes categorías de agentes, que componen todo el "ejército" del sistema inmunitario, en combinación entre sí y en sus relaciones naturales entre sí; (2) las vacunas de células dendríticas están diseñadas para dirigirse no sólo a uno, sino a todo el conjunto de biomarcadores del tumor del sujeto, lo que puede dificultar que los tumores muten y hagan metástasis; (3) las vacunas de células dendríticas son personalizadas y se dirigen a los biomarcadores concretos expresados en el tumor de ese sujeto.

Para fabricar una vacuna de células dendríticas para un sujeto, se obtienen las células inmunitarias del sujeto mediante una extracción de sangre. Para la administración sistémica, los monocitos se diferencian en células dendríticas, maduradas, activadas y cargadas con biomarcadores del propio tejido tumoral del sujeto. La carga de biomarcadores en las células dendríticas "educa" a las células sobre lo que el sistema inmunitario necesita atacar. A continuación, las células dendríticas activadas y educadas se aíslan con gran pureza y se administran al sujeto mediante una sencilla inyección intradérmica en la parte superior del brazo. A continuación, las células dendríticas transmiten la información de los biomarcadores tumorales al resto de agentes del sistema inmunitario (células T, células B y otras) que se dirigen a las células con estos biomarcadores.

Para la administración intratumoral, los monocitos se diferencian en células dendríticas y maduran parcialmente. A continuación, las células se administran mediante inyección directamente en los tumores. Tras la inyección en los tumores, las células dendríticas captan los biomarcadores tumoralesin situy transmiten la información de los biomarcadores tumorales al resto de agentes del sistema inmunitario (células T, células B y otras) que, a continuación, se dirigen a las células con estos biomarcadores.

Es importante destacar que cada célula dendrítica activada y educada de la vacuna tiene un gran efecto multiplicador, movilizando cientos de células T y otras células inmunitarias. Como resultado, pequeñas dosis de dichas células dendríticas pueden movilizar respuestas inmunitarias grandes y sostenidas.

En una realización, las composiciones de células dendríticas pueden utilizarse como primer tratamiento, o como cebador para un segundo tratamiento con inhibidores del punto de control. Al administrar las composiciones de células dendríticas antes del inhibidor o los inhibidores del punto de control, el sistema inmunitario (en concreto las células T) se activa, lo que permite una respuesta mejorada a los inhibidores del punto de control.

En una realización, el inhibidor del punto de control se administra primero para "desbloquear" el inicio de una respuesta inmunitaria, seguido de una terapia de vacuna contra el cáncer. Por ejemplo, se administra un inhibidor del punto de control a un sujeto seguido de una composición de células dendríticas.

En una realización concreta, las células dendríticas y el sujeto receptor tienen el mismo haplotipo MHC (HLA). Los métodos para determinar el haplotipo HLA de un sujeto son conocidos en la técnica. En una realización relacionada, las células dendríticas parcialmente maduras son alogénicas al sujeto receptor. Las células alogénicas son típicamente compatibles con al menos un alelo MHC (por ejemplo, comparten al menos uno pero no todos los alelos MHC). En una realización menos típica, las células dendríticas y el sujeto receptor son todos alogénicos entre sí, pero todos tienen al menos un alelo del MHC en común.

La administración incluye la administración de uno o más ciclos o dosis de un inhibidor del punto de control antes, simultáneamente o después de la administración de un terapéutico, por ejemplo, interleucinas como IL-7 o IL-15 o una vacuna, como una vacuna dendrítica o viceversa. Un experto en la técnica puede determinar qué régimen terapéutico es apropiado para cada sujeto, en función de su cáncer y su estado inmunitario (por ejemplo, la actividad y/o el número de células T, B o NK).

La combinación de un inhibidor del punto de control y un terapéutico puede ser más eficaz para el tratamiento del cáncer en algunos sujetos y/o puede iniciar, permitir, aumentar, potenciar o prolongar la actividad y/o el número de células inmunitarias (incluidas las células T, las células B, las células NK y/u otras) o transmitir una respuesta médicamente beneficiosa por parte de un tumor (incluida su regresión, necrosis o eliminación).

En determinados aspectos, se induce una respuesta inmunitaria antes de la administración de un inhibidor del punto de control para iniciar o permitir una respuesta inmunitaria antitumoral utilizando células dendríticas autólogas o alogénicas cargadas con antígenos tumorales autólogos o alogénicos (por ejemplo, de líneas celulares), seguida de la administración de un inhibidor o inhibidores del punto de control.

En determinados aspectos, se induce una respuesta inmunitaria antes de la administración de un inhibidor del punto de control para potenciar una respuesta inmunitaria antitumoral preexistente utilizando células dendríticas autólogas o alogénicas cargadas con antígenos tumorales autólogos o alogénicos (por ejemplo, de líneas celulares), seguida de la administración de un inhibidor o inhibidores del punto de control.

En determinados aspectos, se induce o potencia una respuesta inmunitaria antes de la administración de un inhibidor del punto de control para potenciar una respuesta inmunitaria antitumoral preexistente mediante células T autólogas o alogénicas específicas para antígenos tumorales autólogos, seguida de la administración de un inhibidor o inhibidores del punto de control.

En determinados aspectos, se induce una respuesta inmunitaria antes de la administración de un inhibidor del punto de control para iniciar o permitir una respuesta inmunitaria antitumoral utilizando células dendríticas autólogas o alogénicas administradas directamente en un tumor o periféricamente a este para la carga de antígenosin vivo,seguida de la administración de un inhibidor o inhibidores del punto de control.

En determinados aspectos, se induce una respuesta inmunitaria antes de la administración de un inhibidor del punto de control para potenciar una respuesta inmunitaria antitumoral preexistente utilizando células dendríticas autólogas o alogénicas administradas directamente en un tumor o periféricamente a este para la carga de antígenosin vivo,seguida de la administración de un inhibidor o inhibidores del punto de control.

En determinados aspectos, se induce una respuesta inmunitaria antes de la administración de un inhibidor del punto de control para iniciar una respuesta inmunitaria antitumoral utilizando células dendríticas alogénicas cargadas con antígenos tumorales autólogos, seguida de la administración de un inhibidor o inhibidores del punto de control.

En determinados aspectos, se induce una respuesta inmunitaria antes de la administración de un inhibidor del punto de control para potenciar una respuesta inmunitaria antitumoral preexistente utilizando células dendríticas alogénicas cargadas con antígenos tumorales autólogos, seguida de la administración de un inhibidor o inhibidores del punto de control.

En determinados aspectos, se induce una respuesta inmunitaria antes de la administración de un inhibidor del punto de control para iniciar una respuesta inmunitaria antitumoral utilizando células dendríticas alogénicas administradas directamente en un tumor o periféricamente a este para la carga de antígenosin vivo,seguida de la administración de un inhibidor o inhibidores del punto de control.

En determinados aspectos, se induce una respuesta inmunitaria antes de la administración de un inhibidor del punto de control para potenciar una respuesta inmunitaria antitumoral preexistente utilizando células dendríticas alogénicas administradas directamente en un tumor o periféricamente a este para la carga de antígenosin vivo,seguida de la administración de un inhibidor o inhibidores del punto de control.

En determinados aspectos que no forman parte de la invención reivindicada, se induce una respuesta inmunitaria antes de la administración de un inhibidor del punto de control para iniciar una respuesta inmunitaria antitumoral utilizando células T autólogas antitumorales que se expanden y/o activanex vivo,seguida de la administración de un inhibidor o inhibidores del punto de control.

En determinados aspectos que no forman parte de la invención reivindicada, se induce una respuesta inmunitaria antes de la administración de un inhibidor del punto de control para potenciar una respuesta inmunitaria antitumoral preexistente mediante células T antitumorales que se expanden y/o activanex vivo,seguida de la administración de un inhibidor o inhibidores del punto de control.

En determinados aspectos de la divulgación, la vacuna terapéutica contra el cáncer o la terapia de células T adoptivas se administra cronológicamente antes que el inhibidor del punto de control. En determinados aspectos de la divulgación, la vacuna terapéutica contra el cáncer o la terapia de células T adoptivas se administra 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 11 horas, 12 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, 8 días, 9, días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días, 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días, 20 días, 21 días, 22 días, 23 días, 24 días, 25 días, 26 días, 27 días, 28 días, 29 días, 1 mes, o cualquier combinación de estos, antes de que se administre el inhibidor del punto de control.

En determinados aspectos de la presente divulgación, la vacuna terapéutica contra el cáncer o la terapia de células T adoptivas se administra cronológicamente al mismo tiempo que el inhibidor del punto de control. En determinados aspectos de la presente divulgación, la vacuna terapéutica contra el cáncer o la terapia de células T adoptivas se administra cronológicamente después del inhibidor del punto de control. En determinadas realizaciones, el inhibidor del punto de control se administra 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 11 horas, 12 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, 8 días, 9, días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días, 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días, 20 días, 21 días, 22 días, 23 días, 24 días, 25 días, 26 días, 27 días, 28 días, 29 días, 1 mes, o cualquier combinación de estos, antes de que se administre la vacuna terapéutica contra el cáncer o la terapia de células T adoptivas.

En todos los aspectos descritos anteriormente, el uso de métodos para inducir, iniciar o potenciar una respuesta antitumoral o una respuesta inmunitaria puede lograrse administrando el inhibidor del punto de control primero y el segundo agente para inducir, iniciar o potenciar una respuesta antitumoral o una respuesta inmunitaria en un punto temporal posterior.

En otra realización, la presente invención prevé su uso en un método para potenciar o prolongar los efectos de un inhibidor del punto de control, o permitir que un sujeto responda a un inhibidor del punto de control, o permitir que se reduzca la toxicidad o la dosis de un inhibidor del punto de control, que comprende la administración, a un sujeto que lo necesite, de un terapéutico en combinación con un inhibidor del punto de control, en el que el sujeto padece un cáncer.

En otro aspecto, que no forma parte de la invención reivindicada, la divulgación prevé una composición farmacéutica que comprende un inhibidor del punto de control en combinación con un terapéutico biológico. En un aspecto, el terapéutico biológico es una vacuna.

Se induce, inicia o potencia una respuesta inmunitaria utilizando una vacuna de células dendríticas como se expone en las reivindicaciones. En aspectos específicos que no forman parte de la invención reivindicada, se puede inducir, iniciar o potenciar una respuesta inmunitaria utilizando células T antitumorales. En aspectos concretos que no forman parte de la invención reivindicada, se puede inducir, iniciar o potenciar una respuesta inmunitaria mediante la inducción de células T citotóxicas.

En realizaciones concretas, el agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control se utiliza para tratar un glioma o para iniciar, potenciar o prolongar una respuesta antiglioma en un sujeto que lo necesite. Concretamente, el agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control puede utilizarse para disminuir el tamaño de un tumor sólido o disminuir el número de células cancerosas del cáncer. El agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control se puede utilizar para reducir la velocidad de crecimiento de las células cancerosas. El agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control se puede utilizar para detener la velocidad de crecimiento de las células cancerosas.

El uso de la composición terapéutica, del inhibidor del punto de control, del terapéutico biológico o farmacéutico aquí divulgado se puede administrar a un individuo por diversas vías, entre ellas, por ejemplo, por vía oral o parenteral, como por vía intravenosa, intramuscular subcutánea, intraorbitaria, intracapsular, intraperitoneal, intrarrectal, intracisternal, intratumoral, intravascular, intradérmica o por absorción pasiva o facilitada a través de la piel utilizando, por ejemplo, un parche cutáneo o iontoforesis transdérmica, respectivamente. El uso del terapéutico, el inhibidor del punto de control, el terapéutico biológico o farmacéutico también se puede administrar en el lugar de una afección patológica, por ejemplo, por vía intravenosa o intraarterial en un vaso sanguíneo que abastece a un tumor.

La cantidad total de un agente a administrar en la práctica de un método de la invención se puede administrar a un sujeto como dosis única, ya sea en bolo o por infusión durante un periodo de tiempo relativamente corto, o se puede administrar mediante un protocolo de tratamiento fraccionado, en el que se administran múltiples dosis durante un periodo de tiempo prolongado. Un experto en la técnica sabrá que la cantidad de la composición para tratar una afección patológica en un sujeto depende de muchos factores, tales como la edad y el estado general de salud del sujeto, así como la vía de administración y el número de tratamientos a administrar. En vista de estos factores, el experto en la técnica ajustará la dosis concreta según sea necesario. En general, la formulación de la composición y las vías y frecuencia de administración se determinan, inicialmente, mediante ensayos clínicos de fase I y fase II.

En determinadas realizaciones, el inhibidor del punto de control se administra en dosis de 0,01mg/kg, 0,05mg/kg, 0,1mg/kg, 0,2mg/kg, 0,3mg/kg, 0,5mg/kg, 0,7mg/kg, 1mg/kg, 2mg/kg, 3mg/kg, 4mg/kg, 5mg/kg, 6mg/kg, 7mg/kg, 8mg/kg, 9mg/kg, 10mg/kg, o cualquier combinación de estas. En determinadas realizaciones, el inhibidor del punto de control se administra una vez a la semana, dos veces a la semana, tres veces a la semana, una vez cada dos semanas o una vez al mes. En determinadas realizaciones, el inhibidor del punto de control se administra en una dosis única, en dos dosis, en tres dosis, en cuatro dosis, en cinco dosis, o en 6 o más dosis.

En determinados aspectos de la divulgación que no forman parte de la presente invención, los métodos y composiciones aquí descritos se envasan en forma de kit. En ciertos aspectos, las instrucciones para realizar los métodos y utilizar las composiciones se incluyen en los kits.

En determinados aspectos de la divulgación que no forman parte de la presente invención, se proporciona un artículo de fabricación que contiene materiales útiles para el tratamiento de los trastornos descritos anteriormente. El artículo de fabricación comprende un recipiente y una etiqueta. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, botellas, viales, jeringuillas y tubos de ensayo. Los recipientes pueden estar fabricados en diversos materiales, como vidrio o plástico. El recipiente contiene una composición eficaz para tratar la afección y puede tener un puerto de acceso estéril (por ejemplo, el recipiente puede ser una bolsa de solución intravenosa o un vial con un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica). El agente activo de la composición es el anticuerpo. La etiqueta del envase, o asociada a este, indica que la composición se utiliza para tratar la afección elegida. El artículo de fabricación puede incluir además un segundo recipiente que contenga un tampón farmacéuticamente aceptable, como solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. Puede incluir además otros materiales recomendables desde el punto de vista comercial y del usuario, como otros tampones, diluyentes, filtros, agujas, jeringas y prospectos con instrucciones de uso.

Como se muestra en las Figuras y los Ejemplos, se caracteriza el eje coestimulador PD1/PD-L1 negativo en el microentorno del glioma y se observa un aumento de las poblaciones de células reguladoras infiltrantes del tumor (Tregs, iAPCs) asociado a la vacunación con células dendríticas pulsadas por lisado. El bloqueo de este mecanismo con anticuerpo anti-PD-1 adyuvante afecta a la activación y el tráfico de células T citotóxicas hacia el tumor y promueve un entorno tumoral no inhibitorio. La vacuna CD combinada con la terapia con anticuerpo anti-PD-1 promueve una supervivencia significativa a largo plazo en modelos murinos de glioma. Estos mecanismos se han delineado y proporcionan una correlación práctica de las imágenes clínicas utilizando la RM y novedosas sondas de imagen PET para caracterizar de forma no invasiva la función inmunitariain vivo.

Concretamente, las Figuras muestran que, en ratones con gliomas intracraneales bien establecidos, la vacuna CD pulsada con lisado tumoral sigue produciendo una infiltración significativa de linfocitos T activados, pero sin ningún beneficio clínico. Además, una población de células mieloides inhibidoras se acumula dentro de los gliomas intracraneales GL261, y esta población aumenta significativamente tras la vacuna CD. El tratamiento adyuvante de anticuerpos bloqueantes de PD-1 junto con la vacuna CD pulsada con lisado tumoral evita la mayor acumulación de células mieloides inhibidoras dentro de los gliomas intracraneales GL261. El resultado es un aumento significativo de la acumulación intratumoral de linfocitos T activados, una prolongación drástica de la supervivencia y la generación de memoria inmunitaria frente al tumor. Además, el pulsado de lisado tumoral durante 24 horas de las CD activa estas células y da lugar a una reducción de la expresión de PD-L1, lo que sugiere que la activación y/o maduración reducirá la función inmunitaria inhibidora, ya que las células mieloides inhibidoras son una población precursora de CD y macrófagos derivada de la médula ósea.

Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar mejor las realizaciones de la presente invención, pero no pretenden limitar el alcance de la invención que se define en las reivindicaciones. Aunque son los que se podrían utilizar típicamente, también se pueden emplear otros procedimientos, metodologías o técnicas conocidos por los expertos en la técnica. Cualquier ejemplo que quede fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona con fines comparativos.

EJEMPLO 1

El microentorno del glioma anula la respuesta inmunitaria antitumoral promovida por la vacunación con CD Puede haber una respuesta inmunitaria endógena limitada al tumor en ratones C57BL/6 a los que se les ha implantado intracranealmente el glioma murino GL261 (Figura 1A). A los ratones se les implantó intracranealmente un glioma murino GL261 y, a continuación, se les administró PBS (1x) o una vacuna de CD pulsada por lisado, por vía subcutánea los días 3 y 13 tras el implante tumoral. El día 16, 72 horas después del segundo tratamiento, se practicó la eutanasia a los ratones y se extrajeron el bazo, la linfa y los hemisferios cerebrales para su procesamiento. La vacunación con células dendríticas pulsadas por lisado promueve una infiltración tumoral significativa de linfocitos CD3+, de los cuales una mayoría son linfocitos CD8+ CD25+ activados. Para determinar el efecto fisiológico global de estas poblaciones celulares, se mantuvieron dos grupos de ratones con glioma GL261 (control y vacunados con CD) y se controló su supervivencia. No se observó ningún beneficio de supervivencia entre los dos grupos cuando la vacunación con CD se administró a tumores intracraneales grandes (Figura 1C).

EJEMPLO 2

La interacción de las células T PD-1/PD-L1 y el glioma promueve un microentorno tumoral antiinflamatorio Para evaluar el efecto de la interacción PD-1/PD-L1 tumor-célula T, se cultivaron conjuntamente células T específicas de gp-100 de un ratón transgénico TCR Pmel-1 con células de glioma murino GL261- gp100 en presencia de mAb anti-PD-1. El sobrenadante recogido 24 h más tarde se procesó y analizó con el ensayo Luminex de citocinas/quimiocinas 32-plex de ratón. Las citocinas proinflamatorias IFN<y>y TNFa mostraron un aumento significativo, mientras que la señalización antiinflamatoria (IL-10 e IL-4) disminuyó con la inhibición de PD-1. La citotoxicidad se evaluó con el sistema xCELLigence, que ofrece una lectura en tiempo real basada en la impedancia de la destrucción tumoral por las células T. La inhibición de PD1 favoreció eficazmente un mayor porcentaje de destrucción de células tumorales en el punto temporal de las 10 horas.

EJEMPLO 3

La inhibición del eje costimulador negativo PD-1/PD-L1 en ratones con glioma promueve la respuesta antitumoral.

Se planteó la hipótesis de que la respuesta antitumoral promovida por el tratamiento de vacunación se ve mitigada por la señalización PD-1/PD-L1 en el microentorno tumoral. Había una población mieloide inhibidora significativa (Ly6C+) que expresaba PD-L1 presente en los tumores extraídos de ratones tratados con la vacuna CD que no estaba presente en los ratones de control. Para evaluar esta población, se examinaron dos terapias adicionales al control y al tratamiento con la vacuna CD: los grupos tratados con mAb anti-PD-1 y los grupos tratados con la vacuna CD combinada con mAb anti-PD-1. Se extirparon el bazo, la linfa y los hemisferios cerebrales para su procesamiento el día 16 contado desde la implantación (72 horas después del segundo tratamiento). Se observó una activación significativa de los TIL citotóxicos y de los ganglios linfáticos de los ratones tratados con la vacuna CD/anti-PD-1. Aunque la población mieloide inhibidora persistió en los ratones tratados con la vacuna CD/anti-PD-1, se redujo significativamente en comparación con el tratamiento con la vacuna CD sola. En los ratones antiPD-1, no fue significativamente detectable. Para evaluar el beneficio terapéutico, se implantaron ratones, se trataron y se monitorizó su supervivencia. El tratamiento combinado de vacuna CD/anti-PD-1 mostró un beneficio de supervivencia significativo sobre los demás grupos.

La población mieloide inhibidora se agotó utilizando anticuerpos agotadores de Ly6C o el fármaco inhibidor de CSF1r clínicamente relevante PLX3397. El agotamiento de estas células en ratones con GL261 recuperó por completo el beneficio de supervivencia observado en ratones tratados con la vacuna CD/anti-PD-1. Se extrajeron el bazo, la linfa y los hemisferios cerebrales para su procesamiento el día 16 contado desde la implantación (72 horas después del segundo tratamiento). Se confirmó la ausencia de estas células Ly6C+ PD-L1+ en el microentorno tumoral y se observó una importante población infiltrante tumoral de linfocitos activados CD3+ CD8+ CD25+. El agotamiento de las células CD8+ en los ratones tratados con la vacuna CD/anti-PD-1 eliminó todo beneficio terapéutico asociado al tratamiento (Figura 4c). Los tejidos extirpados confirmaron la ausencia de linfocitos activados tanto sistémicamente como en el lugar del tumor.

EJEMPLO 4

El uso novedoso de las modalidades de imagen PET y MR permite una evaluación no invasiva de la vacuna CD/terapia antiPD-1

Se planteó la hipótesis de que el progreso terapéutico de la terapia con la vacuna CD/anti-PD-1 podría monitorizarse utilizando técnicas de imagen de resonancia magnética (IRM) y de tomografía por emisión de positrones (PET). Se dividió a los ratones implantados intracranealmente con GL261 en cuatro grupos de tratamiento (sin tratamiento, vacuna de CD, mAb anti-PD-1 y vacuna de CD/anti-PD-1) y se les tomaron imágenes con sondas PET [18F]-Z-FAC o [18F]-D-FAC para obtener imágenes del tráfico de linfocitos activados hacia el tumor. El día 21 contado desde el implante, se tomaron imágenes de los ratones con un escáner de RM Bruker 7T (UCLA) para obtener imágenes ponderadas en T1 antes y después del contraste, mapas de T2 y datos de perfusión con contraste dinámico (DCE) y contraste dinámico de susceptibilidad (DSC). Tras la obtención de imágenes, se practicó la eutanasia a los ratones y se recogió tejido cerebral para seccionarlo y la inmunohistoquímica (IHQ). Se registraron conjuntamente los datos de PET y de RM ponderada en T1 tras el contraste para delinear el contraste positivo del tumor en RM frente a la señal positiva de la sonda PET. Los grupos tratados con la vacuna CD y con la vacuna CD/anti-PD-1 mostraron una disminución de la carga tumoral y un aumento de la infiltración inmunitaria en comparación con los otros grupos de tratamiento. La señal positiva de PET y RM se correlacionó con la tinción IHQ de CD3+ y Ki-67+, respectivamente, en secciones anatómicas equivalentes de tejido cerebral.

EJEMPLO 5

Materiales y métodos

Líneas celulares. Las líneas celulares de glioma murino, GL261 y GL261-gp100 se mantuvieron en DMEM completo (Mediatech, Inc. Herndon, VA) (suplementado con 10% de FBS (Gemini Bio-Products, West Sacramento, CA), 1% (v/v) de penicilina y estreptomicina (Mediatech Cellgro, Manassas, VA)) y se cultivaron en una atmósfera humidificada de 5% de CO2 a 37°C.

Activaciónin vitrode células T Pmel-1. Se extirparon los bazos y ganglios linfáticos de ratones transgénicos Pmel-1 TCR (n=2) y se cultivaron con IL-2 humana (100 UI/mL, NCI Preclinical Repository, Developmental Therapeutics Program) y péptido hgp10025-33 (1 ug/mL, NH2-KVPRNQDWL-OH, Biosynthesis, Inc., Lewisville, TX) en XVIVO-15 (Lonza, Walkersville, MD) suplementado con un 2% de FBS. Después de 72 horas, las células se lavaron con PBS 1x y se cultivaron en IL-2 y péptido hgp10025-33 a una concentración de 13 106 células/mL.

Inhibiciónin vitrode PD-1. Las células se cultivaron en los medios apropiados descritos anteriormente suplementados con 1uM de Ab anti-PD-1 (BioXCell, West Lebanon, NH). Durante la duración del cultivo, los medios se sustituyeron por una nueva preparación de medios con Ab anti-PD-1 cada 24 horas.

Ensayo Luminex de citocinas/quimiocinas. Se co-cultivaron células T Pmel y células GL261-gp100 en una proporción efector:diana (E:T) de 10:1 en medio DMEM completo suplementado con 1uM de Ab anti-PD-1. El sobrenadante se recogió a las 24 horas y se congeló rápidamente en nitrógeno líquido. Análisis con el ensayo Luminex de 32 citocinas/quimiocinas de ratón realizado en colaboración con la Dra. Elaine Reed (UCLA).

Ensayo de citotoxicidad en tiempo real xCELLigence. La destrucción citotóxica de células tumorales se evaluó con el sistema de análisis celular en tiempo real xCELLigence (Acea Biotechnology, San Diego, CA). Las células diana GL261-gp100 se sembraron (105 células/pocillo) en 150 mL de medio. Tras una noche de adherencia de las células tumorales al fondo del pocillo, se añadieron células efectoras (células T Pmel) en una proporción E:T de 10:1. Para el control, la liberación celular máxima se obtuvo con la adición de Tritón X-100 al 1% a pocillos adicionales que sólo contenían tumor. Los valores del índice celular (IC) (impedancia celular relativa) se recogieron durante 24 horas. Los valores se normalizaron con respecto al valor de IC máximo inmediatamente antes de la siembra de células efectoras. Se calculó la proporción del IC normalizado (ICn) en cualquier punto temporal respecto al ICn de la siembra inicial de células efectoras para delinear el porcentaje de lisis tumoral (23).

Preparación del lisado GL261. Células de glioma GL261 cultivadas y expandidas en medio DMEM completo. A continuación, las células se cosecharon y pasaron por varios ciclos de congelación-descongelación y se filtraron en suspensión. La concentración del lisado se cuantificó mediante el ensayo de proteínas de Bradford.

CD derivadas de médula ósea y vacunación. Las CD procedentes de células progenitoras de médula ósea murinas se prepararon como se había publicado anteriormente (Prins et al., Cancer Research 63:8487 (2003)). En resumen, las células de médula ósea se cultivaron en una atmósfera humidificada de 5% de CO2 a 37°C durante la noche en RPMI completo (Mediatech, Inc. Herndon, VA) (suplementado con 10% de FBS, 1% (v/v) de penicilina y estreptomicina). Al día siguiente, se recogieron las células no adherentes y se sembraron con interleucina-4 murina (IL-4, 400 UI/mL, R&D Systems, Minneapolis, MN) y factor estimulante de colonias granulocito-macrófago murino (GM-CSF, 100 ng/ml, R&D Systems, Minneapolis, MN). El día 4, las células adherentes se volvieron a alimentar con medios frescos con las mismas citoquinas. El día 7, se recogieron las CD y se resuspendieron a 13106 células/ml en RPMI completo y se pulsaron con lisado GL261 (250 mg/mL). El día 8, se recogieron las CD y se resuspendieron a 2 3 106 células/mL en PBS 1x y se prepararon inmediatamente para su inyección en 0,2 ml de suspensión celular por ratón. Las inyecciones se administraron por vía subcutánea (s.c.) en 4 puntos de la espalda.

Implantes de glioma intracraneal. Se obtuvieron ratones C57BL/6 hembra, de 6 a 10 semanas de edad, de nuestras colonias de cría institucionales. Todos los ratones se criaron y mantuvieron en condiciones libres de patógenos de flora definida en el Animal Facility aprobado por la AALAC de la División de Oncología Radioterápica Experimental de la UCLA. Los ratones se manipularon de acuerdo con la política de cuidado animal de la UCLA y los protocolos animales aprobados. Los ratones fueron anestesiados con una inyección intraperitoneal (i.p.) de ketamina/xilacina. Tras afeitar el pelo y practicar una incisión en el cuero cabelludo frotado con povidona, se practicó un orificio de fresado en el cráneo de 2,5 mm lateral al bregma utilizando una fresa dental con la cabeza del ratón fijada en un aparato estereotáctico. Se inyectaron por estereotaxis células de glioma GL261 (23 104 en 2 ml de PBS) con una jeringa Hamilton estéril provista de una aguja de calibre 26. La inyección intracraneal se produjo durante un periodo de 2 minutos y a una profundidad de 3,5 mm por debajo de la duramadre. La jeringa se mantuvo en el cerebro durante un minuto adicional tras la infusión completa de las células y después se retiró lentamente para evitar la fuga de las células al espacio leptomeníngeo. Tras la implantación del tumor intracraneal, los ratones NSG fueron distribuidos aleatoriamente en grupos de tratamiento (n=6-16).

Tratamientoin vivocon mAb anti-PD-1. Se administró mAb anti-PD-1 (i.p.) a 250 mg/kg (aproximadamente 250 mg/ratón) en los días de tratamiento apropiados.

Extracción de tejidos, inmunohistoquímica y citometría de flujo. Se cosecharon los bazos, ganglios linfáticos y tumores de los ratones el día 21. En los casos en los que se requería seccionar e inmunohistoquímica, el tejido se colocó en fijador de zinc (1x, BD Biosciences, San Jose, CA) durante 24 horas y luego se transfirió a etanol al 70% antes de incrustarlo en cera de parafina. Los bazos y los ganglios linfáticos se pasaron por coladores celulares de 70 um para generar suspensiones unicelulares. Los linfocitos se obtuvieron tras lisis hipotónica y se enumeraron mediante exclusión con azul de tripano. Para determinar el número de linfocitos infiltrantes tumorales (LIT), se pesaron cuidadosamente los hemisferios tumorales y posteriormente se cortaron con un bisturí. A continuación, el tejido se colocó en un rotador en colagenasa con DNasa durante 24 horas y después se aislaron los linfocitos utilizando un gradiente Percoll 30%:70%. Las células mononucleares pequeñas dentro del tumor se enumeraron por exclusión con azul de tripano. Se utilizaron aproximadamente 13106 linfocitos para la tinción. Los LIT se calcularon determinando el número total de células CD8+ por hemisferio tumoral. Los anticuerpos conjugados con fluorocromo para CD3, CD4, CD8, CD25, FoxP3, Ly6C, PD-1 y PD-L1 se obtuvieron de Biolegend. Todos los análisis FACS se realizaron con el uso de un LSRII (BD Biosciences). Las puertas se fijaron basándose en anticuerpos de control específicos del isotipo (datos no mostrados). Los datos se analizaron utilizando el software FlowJo.

Tomografía por emisión de positrones y resonancia magnéticain vivo.Se sedó a los ratones con 1-3% de isoflurano bajo flujo de O2/N2 y se monitorizó la respiración. Los ratones se mantuvieron calientes con agua calentada a 37 °C circulando mediante una bomba de agua TP500 (Gaymar Solid State). La administración de la sonda PET por la vena caudal se realizó 1 hora antes de la exploración. Exploración PET. Se realizó un cateterismo de la vena caudal para administrar el agente de contraste (gadolinio, xug/ratón) en el momento adecuado durante la exploración. Todas las imágenes se adquirieron en un sistema Bruker Biospec 7T con una bobina “birdcage” de r F de 2,2 cm hecha a medida. Se obtuvo una imagen bidimensional ponderada en T1 de precontraste utilizando el disparo rápido de ángulo bajo (FLASH); una exploración ponderada en T2 con eco de espín multicorte (MSME) para el cálculo de mapas cuantitativos de T2 (16 ecos con TE de 10-160 ms en intervalos de 10 ms), resolución en plano de 78um2 y grosor de corte de 1 mm; imágenes ponderadas en T1 con FLASH 3D de ángulo de volteo múltiple para el cálculo de mapas de T1 de precontraste utilizando ángulos de volteo de 2-20 grados; y una imagen ponderada en T1 de poscontraste 3D de alta resolución.

Claims (9)

1. REIVINDICACIONES 1. Un agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control para su uso en un método de tratamiento de un glioma o de iniciación, potenciación o prolongación de una respuesta antiglioma en un sujeto que la necesite, que comprende la administración al sujeto del agente terapéutico en combinación con el agente que es un inhibidor del punto de control, en el que el agente terapéutico es una vacuna de células dendríticas pulsada por lisado de glioma, y en el que el inhibidor del punto de control se selecciona del grupo compuesto por un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado y un anticuerpo totalmente humano o una combinación de estos, e inhibe una proteína del punto de control seleccionada del grupo compuesto por PD-1 y PDL1 o una combinación de estas.
2. 2. El agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control para el uso de la reivindicación 1, en el que la vacuna de células dendríticas se compone de células dendríticas autólogas y/o células dendríticas alogénicas.
3. 3. El agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control para el uso de la reivindicación 2, en el que las células dendríticas autólogas o alogénicas se cargan con lisado de glioma antes de su administración al sujeto.
4. 4. Un agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control para su uso en un método de tratamiento del glioma o para iniciar, potenciar o prolongar una respuesta antiglioma en un sujeto que la necesite, que consiste en administrar al sujeto el agente terapéutico en combinación con el agente que es un inhibidor del punto de control, en el que el agente terapéutico es una vacuna de células dendríticas, en el que las células dendríticas de la vacuna están parcialmente maduradas, y en el que el inhibidor del punto de control se selecciona del grupo compuesto por un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado y un anticuerpo totalmente humano o una combinación de estos, e inhibe una proteína del punto de control seleccionada del grupo compuesto por PD-1 y PDL1 o una combinación de estas, y en el que las células dendríticas parcialmente maduras son células dendríticas autólogas o alogénicas que captan biomarcadores de gliomain situ.
5. 5. El agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control para el uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el inhibidor del punto de control y el terapéutico se administran simultánea o secuencialmente en cualquier orden.
6. 6. El agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control para el uso de la reivindicación 1, en el que el agente terapéutico se administra antes del inhibidor del punto de control y en el que el inhibidor del punto de control es un inhibidor de PD-1.
7. 7. El agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control para el uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el glioma es un glioblastoma maligno.
8. 8. El agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control para el uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además administrar un agente quimioterapéutico, una terapia dirigida o radiación al sujeto antes, simultáneamente o después del tratamiento con la terapia combinada.
9. 9. El agente terapéutico en combinación con un agente que es un inhibidor del punto de control para el uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el sujeto tiene un glioma y el método potencia o prolonga los efectos del inhibidor del punto de control, o permite que un sujeto responda al inhibidor del punto de control, o permite reducir la toxicidad o la dosis del inhibidor del punto de control.

   FTGS.2A-2B

   FIGS. 3A-3G

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