ES2970792T3 - Derivados de androstano con actividad como estimuladores puros o predominantemente puros de SERCA2A para el tratamiento de la insuficiencia cardíaca - Google Patents

Abstract

Se divulgan compuestos y composiciones para la activación de SERCA2a. En particular, se proporcionan compuestos que actúan como activadores de SERCA2a predominantemente puros o puros, inhibiendo sólo moderadamente la Na+/K+ ATPasa. En general, los compuestos descritos son derivados de androstano que tienen la fórmula (I). También se describen en el presente documento composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más de los compuestos de fórmula (I) para su uso en el tratamiento de la insuficiencia cardíaca. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de androstano con actividad como estimuladores puros o predominantemente puros de SERCA2A para el tratamiento de la insuficiencia cardíaca

Campo

La presente invención se refiere al campo de los productos farmacéuticos, en particular, a los derivados de androstano para uso en el tratamiento de la insuficiencia cardíaca aguda.

Antecedentes de la invención

La prevalencia de la insuficiencia cardíaca (IC) depende de la edad y oscila entre menos del 2 % de las personas menores de 60 años a más del 10 % de los sujetos mayores de 75 años (Metra M & Teerlink JR, Lancet 2017, 390:1981-1995). La mayoría de los pacientes con IC tienen antecedentes de hipertensión, arteriopatía coronaria, miocardiopatías, valvulopatías o una combinación de estos trastornos (Metra M & Teerlink JR, Lancet 2017, 390:1981-1995). Se espera que aumente el riesgo calculado de desarrollar IC a lo largo de la vida y las personas con hipertensión tienen un riesgo mayor (Lloyd-Jones DM et al. Circulation 2002,106:3068-3072). Los pacientes con IC tienen mal pronóstico, con altas tasas de ingreso hospitalario y mortalidad.

Los síntomas clínicos de la IC están causados por una doble característica patológica cardíaca que consiste en una anomalía inotrópica, que provoca una disminución del vaciado sistólico (disfunción sistólica) y una anomalía de la distensibilidad en la que se deteriora la capacidad de los ventrículos para aspirar sangre del sistema venoso (disfunción diastólica). Esto, a su vez, provoca una reducción de la cantidad de sangre disponible para la contracción sistólica (deterioro del llenado del ventrículo izquierdo (VI)). El deterioro de la contractilidad y la relajación es consecuencia de una distribución anómala del Ca2+ intracelular, como resultado de una captación reducida de Ca2+ por el retículo sarcoplásmico (RS), que es el almacén intracelular de Ca2+ (Bers DM et al. Ann N.Y Acad Sci 2006, 1080:165-177). Este último es operado por la Ca2+ ATPasa de la membrana del RS (SERCA2a), que es un transporte activo de membrana. La actividad de SERCA2a está fisiológicamente limitada por su interacción con el fosfolamban (PLN) (Bers DM. Annu Rev Physiol 2008, 70:23-49; MacLennan DH & Kranias EG, Nat Rev Mol Cell Biol 2003, 4(7): 566-577); dicha restricción se alivia normalmente mediante la fosforilación del PLN por la proteína cinasa A (PKA), que es una vía de señalización que se encuentra gravemente deprimida como consecuencia de la remodelación de la IC (Lohse M et al. Circ Res 2003, 93:896-906). Así pues, la función de SERCA2a está alterada en el miocardio insuficiente (Bers DM et al. Ann N.Y Acad Sci 2006, 1080:165-177) y, por tanto, es el principal responsable de la reducción de la captación de Ca2+ por el RS. Además de sus consecuencias sobre la contractilidad y relajación de los miocitos, la distribución anormal de Ca2+también facilita las arritmias cardíacas (Zaza & Rocchetti, Curr Pharm Des 2015, 21:1053-1061) y, a largo plazo, acelera la pérdida de miocitos por apoptosis (Nakayama H et al. J Clin Invest 2007, 117:2431-44). La función reducida de SERCA2a también aumenta el coste energético de la contracción porque requiere un aumento compensatorio de la extrusión de Ca2+ a través del intercambiador de Na-Ca (NCX), que es menos eficiente energéticamente (Lipskaya L et al. Expert Opin Biol Ther 2010, 10:29-41). Numerosas pruebas indican que la normalización de la función de SERCA2a restablece la homeostasia del Ca2+ intracelular y mejora la contractilidad y la relajación de los cardiomiocitos y del corazónin situ(Byrne MJ et al. Gene Therapy 2008, 15:1550-1557; Sato et al. JBC 2001, 276:9392-99). En resumen, la recuperación de la función de SERCA2a en la IC puede mejorar la relajación cardíaca y, posiblemente, la contractilidad, al tiempo que minimiza las arritmias, el consumo miocárdico de oxígeno y la muerte de miocitos (Lipskaya L et al. Expert Opin Biol Ther. 2010, 10:29-41). Esto pone de relieve la necesidad de activadores "puros" de SERCA2a. De hecho, la activación de SERCA2a, debido a un mejor secuestro de Ca2+, puede elevar el umbral intra-RS para la generación de ondas de Ca2+ ejerciendo una retroalimentación negativa sobre la liberación de Ca2+ inducida por Ca2+ que sostiene las ondas (Fernández-Tenorio M & Niggli E J, Mol Cell Cardiol 2018, 119:87-95). Por lo tanto, una activación pura o predominantemente pura de SERCA2a podría permitir un riesgo arritmogénico reducido y, por lo tanto, justifica el interés por compuestos con acción estimulante de SERCA2a.

En conclusión, nuevas moléculas capaces de mejorar la función de SERCA2a por sí solas podrían mejorar la función cardíaca general en la IC. Esto supone una fuerte motivación para la búsqueda de nuevos compuestos con dicho perfil farmacodinámico.

El tratamiento actual a largo plazo de la IC tiene por objeto prevenir el "remodelado miocárdico" (p. ej. betabloqueantes, inhibidores de la ECA y antagonistas de la aldosterona), que es una respuesta crónica inadaptada a la contractilidad reducida que amplifica el daño inicial y subyace a la evolución de la enfermedad (Heineke J & Molkentin D, Nat Rev 2006, 7:589-600). Aunque este enfoque tiene un mérito indiscutible, no se centra en las alteraciones de la "contractilidad" y la "relajación", que son los trastornos funcionales que definen la IC y son responsables de sus síntomas. De hecho, sobre todo en las fases avanzadas de la enfermedad, los fármacos que aumentan la contractilidad/relajación miocárdica ("agentes inotrópicos/lusitrópicos") siguen siendo ampliamente utilizados y cruciales para el manejo de los pacientes (Metra M & Teerlink JR, Lancet 2017, 390:1981-1995). Entre ellos se encuentran las aminas simpaticomiméticas (dobutamina) y el levosimendán, que es un sensibilizador del Ca2+ con un fuerte efecto vasodilatador. Lamentablemente, estos agentes actúan mediante mecanismos con componentes potencialmente nocivos, como la facilitación de arritmias potencialmente mortales, el aumento del consumo miocárdico de oxígeno y el deterioro de un flujo sanguíneo coronario ya insuficiente debido a la caída de la presión arterial causada por la vasodilatación (Ashkar H, Makaryus AN StatPearls. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing, 2018 Jan-2017 D ec-19 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK470431/); Gong B. et al. J Cardiothorac Vase Anesth 2015, 29: 1415 25 EDITORIAL). Esto limita el uso de agentes inotrópicos a las últimas fases de la enfermedad, con lo que se pierden los beneficios potenciales de aumentar la contractilidad en las fases iniciales. Además, estos agentes no mejoran el pronóstico ni la supervivencia de los pacientes, por lo que su uso terapéutico debe controlarse cuidadosamente (Ashkar H & Makaryus AN, StatPearls. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing, 2018 Jan-2017 D ec-19) (Gong B. et al. J Cardiothorac Vase Anesth 2015, 29: 1415-25 EDITORIAL).

Entre los inótropos positivos, el glucósido cardíaco Digoxina, un inhibidor de la actividad enzimática Na+/K+ATPasa, ha sido uno de los medicamentos más recetados en el pasado. Sin embargo, su uso ha ido disminuyendo en las últimas décadas debido a la dificultad de mantener la Digoxina dentro de unos rangos de concentración sérica (0,5 0,7 ng/ml) en los que la Digoxina despliega sus efectos beneficiosos sin alcanzar el nivel umbral de 0,9 ng/ml, por encima del cual se ha observado un aumento del riesgo de muerte, principalmente por arritmias (Packer M, Journal of Cardiac Failure 2016, 22:726-730; Packer M, Eur J Heart Failure 2018, 20:851-852).

También se está investigando intensamente el desarrollo de fármacos para la IC con mecanismos de acción distintos de la inotropía positiva. Entre muchos, los agentes más investigados y en fase de desarrollo clínico son: SERELAXINA-mediador recombinante de relaxina 2; ULARITIDA-péptido natriurético recombinante; OMECAMTIV MECARBILO-activador de la miosina cardíaca; BMS986231-donante de NO; ADRECIZUMAB-inhibidor de la adrenomedulina; ANX-042-variante empalmada de NP; TD1439-inhibidor de la neprilisina (NEP). Sin embargo, cuando se han evaluado en ensayos clínicos de fase 2-3, ninguno de estos nuevos agentes ha alcanzado el criterio de valoración primario sin problemas de seguridad.

La evolución clínica y el pronóstico de un paciente con IC crónica (ICC) son mucho peores tras un episodio de IC aguda (ICA) (Solomon Sd et al. Circulation 2007, 116:1482-87). El SICA puede definirse como la aparición o reaparición de síntomas y signos de IC que requieren una evaluación y un tratamiento urgentes y que dan lugar a una asistencia no programada o a un ingreso hospitalario. La mitad de los pacientes con SICA presentan una función sistólica reducida (IC-FEr), lo que representa un objetivo para posibles terapias futuras (Braunwald E. Lancet 2015; 385:812-24). Los tratamientos del SICA en pacientes con fracción de eyección reducida (FEr) se han centrado en aliviar la congestión con vasodilatadores, diuréticos o ultrafiltración, o en aumentar el gasto cardíaco con inótropos positivos. Aunque esta estrategia terapéutica ha reducido el riesgo de muerte súbita cardíaca, la tasa de eventos tras el alta sigue siendo inaceptablemente alta en los pacientes hospitalizados por SICA. La terapia disponible puede causar muchos efectos secundarios cardiovasculares no deseados, como isquemia miocárdica, lesión cardíaca y arritmias consecuentes a la terapia inotrópica, particularmente en pacientes con enfermedad arterial coronaria (EAC) (Abraham WT et al. J Am Coll Cardiol 2005, 46:57-64; Flaherty JD et al. J Am Coll Cardiol. 2009, 53(3):254-63), hipotensión y baja perfusión de los órganos periféricos (riñón) causada por los vasodilatadores, sobre todo en pacientes con IC y presión arterial baja. En consecuencia, el objetivo principal durante la hospitalización es mejorar el gasto cardíaco sin causar lesiones cardíacas y/o renales. Además, se ha prestado poca atención al examen o el tratamiento de la alteración de la relajación diastólica del ventrículo izquierdo (VI) que, en el 50% restante de los pacientes con IC pero FE conservada, es responsable de los síntomas de IC. Además, los pacientes con SICA con FE reducida también presentan un deterioro de la relajación ventricular que contribuye al fallo general de la función cardíaca. Se han desarrollado diversos índices ecocardiográficos para medir la capacidad de relajación cardíaca tanto en modelos animales como en pacientes con IC (p. ej. disminución de la velocidad tisular temprana del anillo mitral [e'] y disminución del tiempo de desaceleración [DT] temprana del flujo de entrada mitral [E]), junto con parámetros ecocardiográficos de aumento de la presión de llenado del VI (p. ej. relación E/e'). Aunque la correspondencia de los cambios individuales de los índices no se superpone perfectamente en algunos modelos animales y en pacientes, sus cambios globales en modelos animales de alteración de la relajación ventricular son ciertamente trasladables a la condición humana y se utilizan para estudiar el efecto de los fármacos en el SICA (Shah SA et al. Am Heart J 2009, 157:1035-41).

Recientemente se han investigado varios enfoques terapéuticos que aumentan la función de SERCA2a. Entre ellas se incluye la sobreexpresión de SERCA2a mediante transferencia génica (Byrne et al. Gene Therapy 2008, 15:1550-1557), la inactivación de PLN mediante la expresión de mutantes con dominancia negativa (Hoshijima M et al. Nat. Med. 2002, 8: 864-871; Iwanaga Y et al. J Clin Investig 2004, 113: 727-736), AdV-shRNA (Suckau L et al. Circulation 2009, 119: 1241-1252), microARN (Gropl et al. PLoS One 2014, 9: e92188), o anticuerpos (Kaye DM et al. J. Am. Coll. Cardiol. 2007, 50:253-260). Como ponen de relieve los resultados negativos del mayor ensayo clínico de fase IIb que aplica la administración del gen SERCA2a en la IC (CUPID 2), estos enfoques adolecen de problemas importantes en la administración del constructo (vectores virales, etc.) y el ajuste de la dosis que están lejos de resolverse (Hulot JS, Eur Heart J 2016, 19:1534-1541). Recientemente se ha descrito una molécula pequeña (derivado de piridona) inhibidora del PLN, que es estructuralmente diferente de la Istaroxima (Kaneko M. et al. Eur J Pharmacol 2017, 814:1-7).

Por lo tanto, el desarrollo de un activador de SERCA2a de molécula pequeña sería ventajoso para tratar la IC y sigue representando una estrategia muy prometedora.

La Istaroxima es un nuevo fármaco de molécula pequeña en fase de desarrollo clínico para el tratamiento del SICA. La istaroxima se desvela enEP0825197y en S. De Munari et al. (J. Med. Chem. 2003, 64:3644-3654) y es el compuesto (3Z,5a)-3-[(2-aminoetoxi)imino] androstano-6,17-diona. La Istaroxima tiene un doble mecanismo de acción de inhibición de la bomba Na+/K+ (Micheletti et al. J Pharmacol Exp Ther 2002, 303:592-600) al tiempo que activa la SERCA2a (Rocchetti M et al. J Pharmacol Exp Ther. 2005, 313:207-15). Al mismo nivel de inotropía, el efecto proarrítmico de la Istaroxima es considerablemente menor que el de la Digoxina, que es un inhibidor puro de la bomba de Na+/K+ (Rocchetti M et al. J Pharmacol Exp Ther. 2005, 313:207-15). Esto sugiere que al mejorar el aclaramiento de Ca2+del citosol (Alemanni, J Mol Cell Cardiol 2011, 50:910-8), la estimulación de SERCA2a también puede minimizar el efecto proarrítmico del bloqueo de la bomba de Na+/K+ (Rocchetti M et al. J Pharmacol Exp Ther. 2005, 313:207-15; Zaza & Rocchetti, Curr Parm Des 2015, 21: 1053-1061), preservando su efecto inotrópico. La reducción del efecto proarrítmico por la Istaroxima se ha confirmado en estudios clínicos (Gheorghiade M et al. J Am Coll Cardiol 2008, 51:2276-85).

En pacientes con IC, la infusión de Istaroxima mejoró las funciones sistólica y diastólica (estudio Horizon) (Gheorghiade M et al. J Am Coll Cardiol 2008, 51:2276-85; Shah SA et al.Am Heart J 2009, 157: 1035-41). La mejoría de la función sistólica se detectó mediante un aumento de la velocidad tisular sistólica (s') y de la pendiente de la elastancia telesistólica (pendiente ESPVR); el aumento de la distensibilidad diastólica se reveló mediante un incremento de la velocidad tisular diastólica (e'); y la disminución de la elastancia telediastólica final (pendiente EDPVR) (Shah SA et al.Am Heart J 2009, 157: 1035-41).

Aunque está dotada de un excelente perfil farmacodinámico, la Istaroxima no es óptima para la administración crónica debido a su mala absorción gastrointestinal (GI) y a su elevada tasa de eliminación. Por lo tanto, la istaroxima se ha desarrollado únicamente para infusión intravenosa en pacientes hospitalizados con SICA y su administración requiere personal médico bien formado (Dec GW, J Am Coll Cardiol. 2008, 51:2286-88; Shah SA et al. Am Heart J 2009, 157: 1035-41). WO 2007/118830 A1 desvela nuevos derivados azaheterociclilo de androstanos y androstenos para el tratamiento de trastornos cardiovasculares. Sin embargo, se demostró que estos compuestos tienen afinidad por la actividad enzimática de la Na+,K+-ATPasa y la inhiben.

En consecuencia, existe una necesidad percibia desde hace tiempo de un compuesto para utilizar en el tratamiento de la IC dotado de un efecto lusitrópico positivo y que pueda administrarse preferentemente por vía oral (Butler J et al. Eur J Heart Failure 2018, 20:839-841; Wagner S et al. Circ Res 2015, 116:1956-1970; Hasenfuss G & Teerlink JR. Eur Heart J. 2011,32(15): 1838-45).

Es posible que un activador "puro" de SERCA2a pueda mejorar la función diastólica. Sin embargo, a pesar de la intensa investigación para descubrir pequeñas moléculas o terapias génicas destinadas a activar selectivamente la SERCA2a, hasta ahora no se han alcanzado resultados clínicos prometedores.

La presente invención satisface las necesidades anteriores y supera el problema de la técnica anterior.

Resumen de la invención

Ahora se ha descubierto que ciertos derivados del androstano exhiben una activación pura o predominantemente pura de SERCA2a. En otras palabras, los derivados de androstano proporcionados en la presente memoria activan significativamente la SERCA2a, pero no inhiben, o sólo lo hacen moderadamente, la bomba Na+/K+ ATPasa. En general, estos derivados del androstano contienen un grupo funcional unido a través de un enlazador de carbono en el carbono-3 (C3) y grupos funcionales en C6 y/o C7. La estructura de estos activadores de SERCA2a puros o predominantemente puros tiene la fórmula general(I)que aquí se muestra:

En el que X es uno cualquiera de los ácidos carboxílicos, ésteres carboxílicos y sus bioisósteros (por ejemplo, sulfato, ácido sulfónico, fosfato, fosfonato y anillos heterocíclicos que contienen nitrógeno, como triazoles y tetrazoles), alcohol primario, éteres o un grupo amina (por ejemplo, amina primaria, amina secundaria o amina cíclica);

n es 1, 2, 3, 4 o 5;

la línea discontinua C3-C1' representa un doble enlace exocíclico opcional C=C;

la línea discontinua C2-C3 representa un doble enlace endocíclico opcional C=C;

Y en C6 es un hidroxilo (OH) en la configuración a o p o un hidroximetilo (CH<2>OH) en la configuración a;

Z en C7 puede ser -H o -OH en una configuración a o una cetona. La línea discontinua representa un grupo carbonilo opcional (C=O) en dicha posición.

Los compuestos desvelados en la presente memoria pueden incluir sus sales, solvatos o hidratos farmacéuticamente aceptables.

Algunos compuestos de fórmula(I), especialmente los ésteres, también pueden ser profármacos de las formas activas.

Cuando los compuestos de fórmula(I)pueden presentar tautomería, la fórmula pretende abarcar todos los tautómeros; la invención incluye dentro de su alcance todos los posibles estereoisómeros, isómeros Z y E y sus mezclas.

También las sales farmacéuticas aceptables están incluidas en el alcance de la invención. Las sales farmacéuticamente aceptables son sales que conservan la actividad biológica del compuesto base y se derivan de ácidos farmacológicamente aceptables conocidos como, por ejemplo, los ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, fosfórico, nítrico, fumárico, succínico, oxálico, málico, tartárico, maleico, cítrico, metanosulfónico o benzoico y otros comúnmente utilizados en la técnica; véase, por ejemplo, Pharmaceutical Salts and Co-crystals, Editors: Johan Wouters, Luc Quéré, RSC Publishing, 2011.

Otro objeto de la presente invención son dichos compuestos de fórmula general (I) para uso como medicamentos, en particular para el tratamiento del HF.

En algunas realizaciones, el compuesto de la reivindicación 1 se selecciona del grupo que consiste en: ácido (E)-4-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico; ácido (Z)-4-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden) butírico; ácido (E)-4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden) butírico; ácido (Z)-4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden) butírico; (E)-3-[2-(azetidin-3-il)etiliden]-6-alfa-hidroxiandrostano-17-ona; (Z)-3-[2-(azetidin-3-il)etiliden]-6-alfahidroxiandrostano-17-ona; (E)-3-(4-aminobutil)-6-alfa-hidroxiandrost-2-eno-17-ona Yodhidrato; 3-[2-(piperidin-4-il)etil]-6- alfa-hidroxiandrost-2-eno-17-ona Yodhidrato; (EZ)-3-(4-aminobutiliden]-6alfa-hidroxidrostano-17-ona; (E)-3-[2-(piperidin-4-il)etiliden]-6alfa-hidroxidrostano-17-ona; (Z)-3-[2-(piperidin-4-il)etiliden]-6alfa-hidroxidrostano-17-ona; 3beta-[2-(piperidin-4-il)etil]-6alfa-hidroxidrostano-17-ona; Acetato de etilo (6-alfa-hidroxi-17-ketoandrostano-3beta-ilo); ácido 4-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)butírico; ácido 4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)butírico; ácido 2-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)acético; butirato de etilo 4-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il); caproato de etilo 6-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il); ácido caproico 6-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il); (EZ)-3-(5-N-metilaminopentiliden]-6-alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona; (EZ)-3-[2-(pirrolidin-3-il)etiliden]-6-alfahidroximetilandrostano-7,17-diona; (EZ)-3-[2-(azetidin-3-il)etiliden]-6-alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona; (EZ)-3-[2-(piperidin-4-il)etiliden]-6-alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona; (EZ)-3-(5-N-metilaminopentiliden)-6-alfahidroximetil-7-alfa-hidroxiandrostano-17-ona; 3beta-[2-(azetidin-3-il)etil]-6-alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona; 3beta-[2-(azetidin-3-il)etil]-6-alfa-hidroximetil-7-alfa-hidroxidrostano-17-ona; 3beta-[2-(pirrolidin-3-il)etil]-6-alfahidroximetillandrostano-7,17-diona; 3beta-[2-(pirrolidin-3il)etil]6-alfa-hidroximetil-7-alfa-hidroxiandrostano-17-ona; 3beta-[2-(piperidin-4-il)etil]-6-alfa-hidroximetillandrostano-7,17-diona; y 3beta-[2-(piperidin-4-il)etil]-6-alfa-hidroximetil-7- alfa-hidroxiandrostano-17-ona.

Otro objeto de la presente invención son las composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más de los compuestos de fórmula(I), opcionalmente en combinación con otros ingredientes terapéuticamente activos. A su vez, estas composiciones farmacéuticas pueden formularse para administración oral, inyección intravenosa o intramuscular, inhalación, inyección intravítrea y similares. En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas aquí descritas se utilizan en el tratamiento de la IC.

Lo anterior y otros objetos de la invención presente ahora serán desvelados en detalle también por medio de ejemplos y Figuras.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1muestra los efectos de 1 pM de CVie216 sobre los parámetros de captación de Ca2+ del retículo sarcoplásmico (RS) en miocitos ventriculares de rata aislados de ratas STZ (protocolo de carga). Los parámetros de captación de Ca2+ del SR incluyeron la amplitud del transitorio de Ca2+ (CaT) (Panel A); la ganancia de la liberación de Ca2+ inducida por Ca2+ (CICR) (Panel B) y la constante de tiempo<( t )>de la descomposición de Ca2 (Panel C). Las diferencias entre las curvas de control (N=16-18) y CVie216 (N=20-23) fueron estadísticamente significativas (p<0,05, ANOVA bilateral en los paneles A-C.

La figura 2muestra los efectos de 1 pM de CVie214 sobre los parámetros de captación de Ca2+ del retículo sarcoplásmico (RS) en miocitos ventriculares de rata aislados de ratas STZ (protocolo de carga). Los parámetros de captación de Ca2+ del RS incluyeron la amplitud del transitorio de Ca2+ (CaT) (Panel A); la ganancia de la liberación de Ca2+ inducida por Ca2+ (CICR) (Panel B) y la constante de tiempo<( t )>de la descomposición de Ca2 (Panel C). Las diferencias entre las curvas de control (N=14) y CVie214 (N=11) fueron estadísticamente significativas en el panel B (p<0,05) y cercanas a la significación en el panel C (p=0,05).

La figura 3muestra el efecto del CVie216 sobre el potencial de acción (PA) y la variabilidad a corto plazo (VCP) de la duración del potencial de acción (DPA) a distintas velocidades de estimulación (Hz) en miocitos ventriculares de cobaya. En los paneles A, de izquierda a derecha, se muestra la velocidad dependiente de la duración del potencial de acción al 90% de repolarización (DPA<90>) (panel izquierdo), el potencial de membrana diastólico (Ediast) (panel central) y la velocidad máxima de despolarización (dV/dtmax) (panel derecho) en condiciones basales (CTR, círculos cerrados; N>13) o en presencia de 1 pM de CVie216 (círculos abiertos; N>11). Las diferencias medidas entre el grupo de control y el grupo CVie216 no fueron estadísticamente significativas para todos los parámetros. En el panel B, se muestra la correlación lineal entre la VCP y la DPA<90>media para el grupo control (CTR, círculos cerrados) y CVie216 (círculos abiertos). Los datos de todas las frecuencias de estimulación se agruparon en cada grupo para ampliar la evaluación de la VCP a un amplio intervalo de DPA. Las líneas continuas son ajustes lineales de los puntos de datos (pendiente de control = 0,013 frente a pendiente de CVie216 = 0,009, NS) para indicar que CVie216 no alteró la sensibilidad de la VCP a la prolongación de la DPA.

La figura 4muestra el efecto del CVie214 sobre el potencial de acción (PA) y la variabilidad a corto plazo (VCP) de la duración del potencial de acción (DPA) a distintas velocidades de estimulación (Hz) en miocitos ventriculares de cobaya. En los paneles A, de izquierda a derecha, se muestra la velocidad dependiente de la duración del potencial de acción al 90% de repolarización (APD<90>) (panel izquierdo), el potencial de membrana diastólico (Ediast) (panel central) y la velocidad máxima de despolarización (dV/dtmax) (panel derecho) en condiciones basales (CTR, círculos cerrados; N>17) o en presencia de 1 pM de CVie214 (círculos abiertos; N>17). Las diferencias medidas entre el grupo de control y el grupo CVie214 no fueron estadísticamente significativas para todos los parámetros. En el panel B, se muestra la correlación lineal entre la VCP y la DPA<90>media para el grupo control (CTR, círculos cerrados) y CVie214 (círculos abiertos). Los datos de las frecuencias de estimulación se agruparon en cada grupo para ampliar la evaluación de la VCP a un amplio intervalo de DPA. Las líneas continuas son ajustes lineales de los puntos de datos (pendiente de control = 0,012 frente a pendiente de CVie214 = 0,014, NS) para indicar que CVie214 no alteró la sensibilidad de la VCP a la prolongación de la DPA.

Descripción detallada de la invención

Se desvelan aquí composiciones y los compuestos de la invención para uso en procedimientos para el tratamiento de la insuficiencia cardíaca. En particular, se proporcionan composiciones que comprenden nuevos derivados de androstano. Además, hay un grupo de nuevos derivados de androstano descritos en la presente memoria que activan SERCA2a, mientras que sólo inhiben moderadamente la bomba Na+/K+ ATPasa. Este grupo de derivados de androstano, denominados estimuladores de SERCA2a "predominantemente puros", tienen la fórmula general (I) con un grupo funcional que contiene amina en el carbono C3. Otro grupo de nuevos derivados del androstano descritos en la presente memoria muestran una fuerte activación de la SERCA2a sin ninguna inhibición significativa de la bomba Na+/K+ATPasa. Este grupo de derivados de androstano, denominados estimuladores "puros" de SERCA2a, tienen la fórmula general (I) con un grupo funcional que contiene ácido carboxílico/éster alineado a través de un espaciador en el carbono C3. En otras realizaciones, los estimuladores de SERCA2a predominantemente puros o puros de fórmula general (I) pueden incluir un grupo funcional que contenga alcohol, sulfato o fosfato en el carbono C3. Como tales, estas composiciones están dotadas de características lusitrópicas positivas y pueden utilizarse para activar selectivamente la SERCA2a evitando al mismo tiempo el efecto proarrítmico de la inhibición de la bomba Na+/K+ATPasa. A continuación se describirán con más detalle las composiciones y compuestos para uso en los procedimientos terapéuticos aquí descritos,

Definiciones

A menos que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente memoria tienen el mismo significado que los comúnmente entendidos por una persona con conocimientos ordinarios en la técnica a la que pertenece esta invención. Se utilizan técnicas estándar a menos que se especifique lo contrario. Los materiales, procedimientos y ejemplos son meramente ilustrativos y no pretenden ser limitativos.

Tal como se utilizan en la presente memoria, las formas singulares "un", "una/uno" y "el/la" incluyen los referentes plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

El término "aproximadamente" se refiere a la variación en el valor numérico de una medida, por ejemplo, volumen, tiempo, presión, concentración, etc. debido a las tasas de error típicas del dispositivo utilizado para obtener esa medida. En una realización, el término "aproximadamente" significa dentro del 5% del valor numérico notificado, preferentemente, el término "aproximadamente" significa dentro del 3% del valor numérico notificado.

El término "insuficiencia cardíaca" se refiere a un síndrome clínico caracterizado por síntomas típicos (por ejemplo, disnea, hinchazón de tobillos y fatiga) que pueden ir acompañados de signos (por ejemplo, presión venosa yugular elevada, crepitaciones pulmonares y edema periférico) causados por una anomalía cardíaca estructural y/o funcional, que da lugar a un gasto cardíaco reducido y/o presiones intracardíacas elevadas en reposo o durante el esfuerzo.

Los términos "insuficiencia cardíaca aguda" o "ICA" se utilizan indistintamente en la presente memoria y se refieren en general a una rápida aparición o empeoramiento de síntomas y/o signos de IC que requieren tratamiento y hospitalización inmediatos. La definición actual de "insuficiencia cardíaca aguda" es bastante inespecífica y puede incluir un amplio espectro de afecciones con varios fenotipos caracterizados por una presentación clínica, etiología, factores precipitantes, enfoque terapéutico y pronóstico diferentes. Además, una gran proporción de pacientes presenta un curso subagudo de la enfermedad con un empeoramiento progresivo de los signos y síntomas de IC que podría desarrollarse días antes del ingreso hospitalario.

Los términos "insuficiencia cardíaca crónica" o "ICC" se utilizan indistintamente en la presente memoria y se refieren a la clasificación clínica actual de la IC crónica basada en la presencia de signos y síntomas de IC y la fracción de eyección ventricular izquierda (FEVI), reconociendo tres categorías: "insuficiencia cardíaca con fracción de eyección reducida» o "IC-FEr", que se caracteriza por una FEVI inferior al 40% aproximadamente; "insuficiencia cardíaca con fracción de eyección media" o "IC-FEm" o "IC-FEr", que se caracteriza por una FEVI de entre el 40% y el 49% aproximadamente e "insuficiencia cardíaca con fracción de eyección conservada" o "IC-FEp", que se caracteriza por una FEVI igual o superior al 50% aproximadamente. Los términos "IC-FEm» e "IC-FEp" incluyen dos criterios adicionales, a saber, niveles elevados de péptidos natriuréticos (BNP >35 pg/ml y/o NT-proBNP >125 pg/ml) asociados a la evidencia de cardiopatía estructural y/o funcional (hipertrofia ventricular izquierda y/o agrandamiento de la aurícula izquierda y/o evidencia de disfunción diastólica). La eficacia de los medicamentos basados en la evidencia para la IC sólo se ha confirmado en pacientes con "IC-FEr", mientras que en la "IC-FEP" ningún tratamiento ha demostrado una mejora significativa de los resultados.

El término "tratar" se refiere a cualquier indicio de éxito en el tratamiento o mejora de la enfermedad o afección. Tratar puede incluir, por ejemplo, reducir o aliviar la gravedad de uno o más síntomas de la enfermedad o afección, o puede incluir reducir la frecuencia con la que los síntomas de una enfermedad, defecto, trastorno o afección adversa, y similares, son experimentados por un sujeto, como un paciente humano.

El término "prevenir" se refiere a la prevención de la enfermedad o afección, por ejemplo, insuficiencia cardíaca aguda, en un sujeto, como un paciente humano. Por ejemplo, si un sujeto en riesgo de desarrollar insuficiencia cardíaca es tratado con los compuestos de la presente invención y no desarrolla posteriormente insuficiencia cardíaca, entonces la enfermedad se ha prevenido en ese sujeto.

El término "tratar o prevenir" se utiliza a veces en la presente memoria para referirse a un procedimiento que da lugar a algún nivel de tratamiento o mejoría de la enfermedad o afección y contempla una gama de resultados dirigidos a ese fin, incluida, pero no limitada a, la prevención de la afección por completo.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a una composición química con la que puede combinarse un compuesto activo, como un derivado de androstano que tiene la fórmula general(I) y que, tras la combinación, puede utilizarse para administrar el compuesto a un mamífero.

Como se utiliza en la presente memoria, el término sal, solvato, hidrato o éster "farmacéuticamente aceptable" significa una forma de sal, solvato, hidrato o éster del ingrediente activo que es compatible con cualquier otro ingrediente de la composición farmacéutica, que no es nocivo para el sujeto al que se va a administrar la composición. El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere además a una forma de sal de un compuesto que conserva la actividad biológica del compuesto base y que se deriva de un ácido farmacológicamente aceptable.

El término "parámetro", tal como se utiliza aquí para referirse a la medición de la función cardíaca, significa cualquier función cardíaca que sea observable o medible utilizando técnicas de medición adecuadas disponibles en la técnica. Una lista no limitativa de "parámetros" ejemplares de la función cardíaca incluye la amplitud del transitorio de calcio (CaT), la liberación de calcio inducida por calcio (CICR), la constante de tiempo de descomposición del calcio, la dependencia de la velocidad de la duración del potencial de acción al 90% de repolarización (APD<90>), el potencial de membrana diastólico (Ediast), la velocidad máxima de despolarización (dV/dtmax), la frecuencia cardíaca, la tensión arterial, la relajación diastólica, la contracción sistólica, la fracción de eyección del ventrículo izquierdo (FEVI), la presión arterial diastólica, la presión arterial sistólica, el gasto cardíaco, el volumen sistólico, la velocidad de contracción (s'),la velocidad de relajación temprana (e'), la velocidad de relajación tardía (a'), el índice de presión de llenado del ventrículo izquierdo (E/e'), el tiempo de desaceleración de la onda E (DT), índice de desaceleración mitral (DT/E), la pendiente de desaceleración (E/DT), el índice cardíaco, la velocidad de entrada mitral, etc. Como comprenderá cualquier experto en la técnica, la medición de uno o más "parámetros" de la función cardíaca puede utilizarse para detectar una disfunción cardíaca en comparación con los "parámetros" normales promedio y también puede utilizarse para determinar si la función cardíaca ha mejorado después del tratamiento o durante él.

El término "predominantemente puro" en relación con la activación o estimulación de la SERCA2a se refiere a un compuesto, como un derivado del androstano, que tiene la capacidad de estimular de manera estadísticamente significativa la actividad de la SERCA2a en un sistema libre de células (microsomas cardíacos SR de cobaya, perro, rata, etc.) mientras que sólo inhibe moderadamente la Na+/K+ ATPasa purificada de riñón de perro en el sistema libre de células (es decir, con una IC5o mayor de aproximadamente 0,5 ^M, preferentemente superior a aproximadamente 1 |jM).

El término "puro" en relación con la activación o estimulación de la SERCA2a se refiere a un compuesto, como un derivado del androstano, que tiene la capacidad de estimular de forma estadísticamente significativa la actividad de la SERCA2a en un sistema libre de células (microsomas cardíacos SR de cobaya, perro, rata, etc.) sin mostrar una inhibición significativa de la bomba Na+/K+ ATPasa (es decir, tener una IC50 superior a unos 100 ^M).

Los términos ingrediente o compuesto "terapéuticamente activo" o "activo" se refieren a una sustancia que proporciona un efecto beneficioso al sujeto al que se administra la sustancia. Una "cantidad terapéuticamente eficaz" o "dosis terapéuticamente eficaz" es la cantidad de una composición o principio activo suficiente para proporcionar un efecto beneficioso al sujeto al que se administra la composición o principio activo.

Derivados de androstano con actividad estimuladora de SERCA2a predominantemente pura o pura

La presente invención se basa en el descubrimiento de derivados de androstano con actividad estimuladora de SERcA2a predominantemente pura o pura. En otras palabras, se trata de derivados que muestran una estimulación de la SERCA2a con una inhibición moderada o nula de la bomba de Na+/K+ ATPasa.

Estos nuevos derivados de androstano se funcionalizan en el carbono C-3 con un enlazador de carbono que lleva una variedad de grupos funcionales, como el grupo funcional que contiene amina o ácido carboxílico/éster. Además, estos nuevos derivados de androstano también se funcionalizan en los carbonos C-6 y/o C-7, como por ejemplo con un grupo hidroxilo, hidroximetilo o cetona. Preferentemente, cada uno de los nuevos derivados de androstano adecuados para uso en la presente memoria tendrá la fórmula general(I):

En el que X es uno cualquiera de los ácidos carboxílicos, ésteres carboxílicos y sus bioisósteros (por ejemplo, sulfato, ácido sulfónico, fosfato, fosfonato y anillos heterocíclicos que contienen nitrógeno, como triazoles y tetrazoles), alcohol primario, éteres o un grupo amina (por ejemplo, amina primaria, amina secundaria o amina cíclica);

el enlazador de carbono en C6 tendrá uno o más carbonos representados por n, que es un número entero entre 1 y 5 (por ejemplo, 1,2, 3, 4 o 5);

la línea discontinua representa un doble enlace opcional (C=C en C3-C1' o C2-C3) y C=O en C7;

el grupo Y en C6 es un hidroxilo (OH) en la configuración alfa o beta o un hidroximetilo (CH<2>OH) en la configuración alfa; y

el grupo Z en C7 puede ser -H o -OH en una configuración a o una cetona (C=O).

En ciertas realizaciones, se puede desear un estimulador de SERCA2a predominantemente puro. Como tales, los derivados de androstano adecuados para uso en la presente memoria pueden incluir aquellos que tienen la fórmula general(I)en la que X es un grupo funcional amina (por ejemplo, amina primaria, amina secundaria o amina cíclica). Sin embargo, en algunas realizaciones, puede ser deseable seleccionar un estimulador SERCA2a puro. Como tales, los derivados de androstano adecuados para uso pueden incluir aquellos que tienen la fórmula general(I), excepto que la X no es un grupo de función amina (por ejemplo, amina primaria, amina secundaria o amina cíclica). En una realización preferente, el estimulador puro de SERCA2a tendrá la fórmula general(I)con un ácido carboxílico o un éster carboxílico en X.

Es preferente que los derivados de androstano desvelados en la presente memoria contengan un grupo funcional que contenga oxígeno en Z o Y o en ambos.

También son adecuados para uso en la presente memoria las sales, solvatos y/o hidratos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la invención. Además, algunos compuestos de fórmula(I), especialmente los ésteres, también pueden ser profármacos de las formas activas. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, fosfórico, nítrico, fumárico, succínico, oxálico, málico, tartárico, maleico, cítrico, metanosulfónico o benzoico y otros comúnmente utilizados en la técnica (véase, por ejemplo, Pharmaceutical Salts and Co-crystals, Editors: Johan Wouters, Luc Quéré, RSC Publishing, 2011).

Cuando los compuestos de fórmula(I)pueden presentar tautomería, la fórmula pretende abarcar todos los tautómeros, incluidos, entre otros, todos los posibles estereoisómeros, isómeros Z y E, isómeros ópticos, enantiómeros y sus mezclas.

Los derivados de androstano particulares adecuados para uso en la presente memoria incluyen:

Ácido (E)-4-(6alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico(CVie201)

Ácido (Z)-4-(6alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-ilideno)butírico(CVie202)

Ácido (E)-4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-ilideno)butírico(CVie203)

Ácido (Z)-4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-ilideno)butírico(CVie204)

(E)-3-[2-(azetidin-3-il)etilideno]-6-alfa-hidroxiandrostano-17-ona(CVie205)

(Z)-3-[2-(azetidin-3-il)etilideno]-6-alfa-hidroxiandrostano-17-ona(CVie206)

Yodhidrato de (E)-3-(4-aminobutilo)-6-alfa-hidroxiandrost-2-eno-17-ona(CVie207)

Yodhidrato de 3-[2-(piperidin-4-ilo)etilo]-6-alfa-hidroxiandrost-2-eno-17-ona(CVie208)

(EZ)-3-(4-aminobutilideno]-6alfa-hidroxidrostano-17-ona(CVie209)

(E)-3-[2-(piperidin-4-il)etilideno]-6-alfa-hidroxiandrostano-17-ona(CVie210)

(Z)-3-[2-(piperidin-4-il)etilideno]-6-alfa-hidroxiandrostano-17-ona(CVie211)

3beta-[2-(piperidin-4-il)etilo]-6alfa-hidroxiandrostano-17-ona(CVie212)

Acetato de etilo (6-alfa-hidroxi-17-cetoandrostano-3beta-ilo)(CVie213)

ácido 4-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)butírico(CVie214)

ácido 4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)butírico(CVie215)

ácido 2-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)acético(CVie216)

butirato de 4-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)etilo(CVie217)

Caproato de 6-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)etilo(CVie218)

ácido 6-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)caproico(CVie219)

(E,Z)-3-(5-N-metilaminopentilideno]-6-alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona(CVie401)

(E,Z)-3-[2-(pirrolidin-3il)etilideno]-6-alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona(CVie402)

(E,Z)-3-[2-(azetidin-3-il)etilideno]-6-alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona(CVie403)

(E,Z)-3-[2-(piperidin-4-il)etilideno]-6-alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona(CVie405)

(E,Z)-3-(5-N-metilaminopentilideno)-6-alfa-hidroximetilo-7-alfa-hidroxiandrostano-17-ona(CVie406)

3beta-[2-(azetidin-3-ilo)etilo]-6-alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona(CVie407)

3beta-[2-(azetidin-3-ilo)etilo]-6-alfa-hidroximetilo-7-alfa-hidroxiandrostano-17-ona(CVie408)

3beta-[2-(pirrolidin-3ilo)etilo]-6alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona(CVie409)

3beta-[2-(pirrolidin-3ilo)etilo]6-alfa-hidroximetilo-7-alfa-hidroxandrostano-17-ona(CVie410)

3beta-[2-(piperidin-4-ilo)etilo]-6alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona(CVie411)

3beta-[2-(piperidin-4-il)etilo]-6-alfa-hidroximetilo-7-alfa-hidroxiandrostano-17-ona(CVie412)

También es un objeto de la presente invención utilizar las propiedades de activación de SERCA2a del compuesto de fórmula (I) para tratar, mejorar, revertir, o reducir o disminuir los síntomas de, o prevenir enfermedades asociadas con una activación disminuida de SERCA2a, como la insuficiencia cardíaca (ICA y/o ICC). Dado que la distribución intracelular defectuosa de Ca2+desempeña un papel en el proceso de remodelación miocárdica, su corrección mediante la estimulación de SERCA2a puede contrarrestarlo. De este modo, puede prevenirse la evolución de una alteración inicial y compensada de la contractilidad a una insuficiencia cardíaca manifiesta.

Como se mencionó anteriormente, los derivados de androstano desvelados en la presente memoria actúan como activadores de SERCA2a puros o predominantemente puros. Como se muestra en los ejemplos siguientes, estos compuestos muestran una activación de SERCA2a. Los activadores puros de SERCA2a, como CVie201-204 y CVie213-219 no inhiben significativamente la Na+/K+ATPasa. Por ejemplo, estos compuestos mostraron valores de IC<50>superiores a 100 ^M en la Na+/K+ATPasa renal canina aislada (véaseel Ejemplo 3). Por otra parte, los activadores de SERCA2a predominantemente puros, como CVie205-212 y CVie401-412, sólo inhiben moderadamente la Na+/K+ATPasa. Por ejemplo, estos compuestos presentan valores de IC<50>de al menos 0,8 |<j>M sobre la Na+/K+ATPasa renal canina aislada; preferentemente, tendrán valores de IC<50>de al menos 1 ^M sobre la Na+/K+ ATPasa renal canina aislada(Ejemplo 3). Además, los activadores de SERCA2a predominantemente puros presentan una inhibición de la Na+/K+ ATPasa entre 6 y 170 veces menor que la istaroxima.

En algunas realizaciones, los activadores de SERCA2a predominantemente puros y puros pueden diferenciarse por sus respectivos grupos funcionales unidos al enlazador de carbono C3(es decir,X en la fórmula(I)). En algunas realizaciones, los activadores de SERCA2a puros tendrán un ácido carboxílico o un éster carboxílico en el enlazador de carbono C3. En otras realizaciones, los activadores de SERCA2a predominantemente puros tendrán un grupo funcional amina (por ejemplo, amina primaria, amina secundaria o amina cíclica) en el enlazador de carbono C3.

Los compuestos activadores de SERCA2a puros o predominantemente puros proporcionados en la presente memoria pueden utilizarse para tratar la insuficiencia cardíaca. Esta capacidad de activar la SERCA2a sin inhibir significativamente la Na+/K+ ATPasa permite a estos compuestos proporcionar un efecto lusitrópico en el corazón para mejorar la función cardíaca sin aumentar el riesgo de arritmias o daños en los cardiomiocitos asociados a la inhibición de la Na+/K+ ATPasa. Como tales, estos compuestos pueden utilizarse como medicamentos para el tratamiento de la insuficiencia cardíaca (aguda o crónica) y en procedimientos de tratamiento o prevención de la insuficiencia cardíaca. Como tales, pueden incluirse en composiciones farmacéuticas formuladas para diferentes vías de administración utilizando técnicas de síntesis y formulación bien comprendidas en el ámbito de quien tenga conocimientos ordinarios en la técnica. Las composiciones farmacéuticas y los procedimientos de tratamiento terapéutico que utilizan los activadores de SERCA2a puros o predominantemente puros desvelados en la presente memoria se tratarán ahora con más detalle.

Composiciones farmacéuticas

Los compuestos de fórmula(I)como agentes terapéuticos pueden administrarse solos o como un componente de una formulación farmacéutica (composición). Como tal, se desvela aquí una composición farmacéutica que comprende el compuesto de fórmula(I), o cualquiera de los derivados particulares desvelados aquí, en una mezcla con al menos un vehículo y/o excipiente farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede formularse para administrarse a un sujeto por vía parenteral, tópica, subcutánea, intramuscular, oral o por administración local, como por aerosol o transdérmica. En una realización particular, la vía de administración es oral.

Las composiciones farmacéuticas pueden formularse de cualquier manera y pueden administrarse en una variedad de formas de dosificación unitarias dependiendo de la afección o enfermedad y el grado de enfermedad, la condición médica general de cada paciente, el procedimiento de administración preferente resultante y similares. Los detalles sobre las técnicas de formulación y administración están bien descritos en la literatura científica y de patentes; véase, porejemplo,la última edición de Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co, Easton PA.

Los compuestos pueden formularse para su administración de cualquier forma conveniente para uso en medicina humana o veterinaria. También pueden estar presentes en las composiciones agentes humectantes, emulsionantes y lubricantes, como lauril sulfato de sodio y estearato de magnesio, así como también colorantes, agentes desmoldeantes, agentes de revestimiento, edulcorantes, aromatizantes y perfumantes, tampones, conservantes y antioxidantes.

Las formulaciones de las composiciones de acuerdo con la presente invención incluyen las adecuadas para la administración oral, nasal, tópica, parenteral -por ejemplo mediante inyección intramuscular o intravenosa- rectal, subcutánea y/o intravaginal. Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria y pueden prepararse por cualquier procedimiento bien conocido en la técnica de la farmacia. La cantidad de principio activo que puede combinarse con un material de soporte para producir una única forma de dosificación variará en función del sujeto tratado y/o del modo de administración concreto. La cantidad de principio activo que puede combinarse con un material de soporte para producir una única forma de dosificación será generalmente aquella cantidad del compuesto que produzca un efecto terapéutico.

Las formulaciones farmacéuticas proporcionadas en la presente memoria pueden prepararse de acuerdo con cualquier procedimiento conocido en la técnica de fabricación de productos farmacéuticos. Estas fórmulas pueden contener edulcorantes, aromatizantes, colorantes y conservantes. Una formulación puede mezclarse con excipientes no tóxicos farmacéuticamente aceptables que sean adecuados para la fabricación. Las formulaciones pueden comprender uno o más diluyentes, emulsionantes, conservantes, tampones, excipientes, etc. y pueden presentarse en forma de líquidos, polvos, emulsiones, polvos liofilizados, aerosoles, cremas, lociones, formulaciones de liberación controlada, comprimidos, píldoras, geles, en parches, en implantes, etc.

Las formulaciones farmacéuticas para administración oral pueden formularse utilizando transportadores farmacéuticamente aceptables bien conocidos en la técnica en dosis apropiadas y adecuadas. Tales transportadores permiten que los productos farmacéuticos se formulen en formas de dosificación unitarias como comprimidos, comprimidos de gel, píldoras, polvos, grageas, cápsulas, líquidos, pastillas, geles, jarabes, suspensiones espesas, suspensiones, etc. adecuadas para su ingestión por el paciente. Los preparados farmacéuticos para uso oral pueden formularse como un excipiente sólido, moliendo opcionalmente una mezcla resultante y procesando la mezcla de gránulos tras añadir compuestos adicionales adecuados, si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de grageas. Los excipientes sólidos adecuados son rellenos de carbohidratos o proteínas, por ejemplo, azúcares, como lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol; almidón de maíz, trigo, arroz, patata u otras plantas; celulosa, como metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa o carboximetilcelulosa sódica; gomas, como arábiga y tragacanto y proteínas, como gelatina y colágeno. Pueden añadirse agentes desintegrantes o solubilizantes, como la polivinilpirrolidona reticulada, el agar, el ácido algínico o una sal de estos (por ejemplo, alginato sódico).

Los núcleos de las grageas son proporcionados con revestimientos adecuados, como soluciones concentradas de azúcares, que también pueden contener goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol, dióxido de titanio, soluciones de laca y/o disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes. Pueden añadirse colorantes o pigmentos a los comprimidos o a los revestimientos de las grageas para identificar el producto o para caracterizar la cantidad de compuesto activo (es decir, la dosis). Las preparaciones farmacéuticas utilizadas para los usos y procedimientos proporcionados en la presente memoria también pueden administrarse por vía oral utilizando, por ejemplo, cápsulas de gelatina con cierre a presión, así como también cápsulas blandas y selladas de gelatina y un revestimiento como glicerol o sorbitol. Las cápsulas con cierre a presión pueden contener agentes activos mezclados con un relleno o aglutinantes como lactosa o almidones, lubricantes como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizantes. En las cápsulas blandas, los agentes activos pueden disolverse o suspenderse en líquidos adecuados, como aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicol líquido con o sin estabilizantes.

Las suspensiones acuosas pueden contener un agente activo (por ejemplo, una composición utilizada para poner en práctica los usos y procedimientos previstos en la presente memoria) en mezcla con excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Tales excipientes incluyen un agente de suspensión, como carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma acacia; y agentes dispersantes o humectantes como un fosfátido natural (por ejemplo, lecitina), un producto de condensación de un óxido de alquileno con un ácido graso (por ejemplo estearato de polioxietileno), un producto de condensación de óxido de etileno con un alcohol alifático de cadena larga (por ejemplo, heptadecaetileno oxicetanol), un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial derivado de un ácido graso y un hexitol (por ejemplo, monooleato de sorbitol polioxietilenado) o un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial derivado de un ácido graso y un anhídrido de hexitol (por ejemplo, monooleato de sorbitán polioxietilenado). La suspensión acuosa también puede contener uno o más conservantes, como p-hidroxibenzoato de etilo o n-propilo, uno o más colorantes, uno o más aromatizantes y uno o más edulcorantes, como sacarosa, aspartamo o sacarina o eritritol, o rebaudiósido A. Las formulaciones pueden ajustarse en función de la osmolaridad.

Los productos farmacéuticos a base de aceite son particularmente útiles para administrar agentes activos hidrófobos adecuados en los usos y procedimientos proporcionados en la presente memoria. Las suspensiones oleosas pueden formularse suspendiendo un agente activo en un aceite vegetal, como el aceite de arachis, el aceite de oliva, el aceite de sésamo o el aceite de coco, o en un aceite mineral como la parafina líquida o en una mezcla de éstos.Véase, por ejemploPatente de los Estados Unidos Núm. 5.716.928 en la que se describe el uso de aceites esenciales o componentes de aceites esenciales para aumentar la biodisponibilidad y reducir la variabilidad interindividual e intraindividual de compuestos farmacéuticos hidrófobos administrados por vía oral; véasetambiénPatente de los Estados Unidos Núm. 5.858.401. Las suspensiones de aceite pueden contener un agente espesante, como cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Pueden añadirse agentes edulcorantes para proporcionar una preparación oral de sabor agradable, como glicerol, sorbitol o sacarosa, eritritol o rebaudiósido A. Estas formulaciones pueden conservarse mediante la adición de un antioxidante, como el ácido ascórbico. Como ejemplo de vehículo oleoso inyectable, véase Minto J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997, 281:93-102. Las formulaciones farmacéuticas proporcionadas en la presente memoria también pueden presentarse en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal o un aceite mineral, como se ha descrito anteriormente o una mezcla de ellos. Entre los agentes emulsionantes adecuados se incluyen gomas naturales, como la goma acacia y la goma tragacanto; fosfátidos naturales, como la lecitina de soja; ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, como el monooleato de sorbitán y productos de condensación de estos ésteres parciales con óxido de etileno, como el monooleato de sorbitán polioxietilenado. La emulsión también puede contener agentes edulcorantes y aromatizantes, como en la formulación de jarabes y elixires. Tales formulaciones también pueden contener un demulcente, un conservante o un colorante.

De acuerdo con la presente invención, los compuestos farmacéuticos también pueden administrarse por vía intranasal, intraocular e intravaginal, incluidos supositorios, insuflaciones, polvos y formulaciones en aerosol (para ejemplos de inhalantes esteroideos, véase Rohatagi, J. Clin. Pharmacol. 1995, 35:1187-1193; Tjwa, Ann. Allergy Asthma Immunol.

1995, 75:107-111). Las formulaciones para supositorios pueden prepararse mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado que sea sólido a temperaturas normales pero líquido a temperaturas corporales y que, por tanto, se funda en el cuerpo para liberar el fármaco. Tales materiales son la manteca de cacao y los polietilenglicoles.

De acuerdo con la presente invención, los compuestos farmacéuticos pueden administrarse por vía transdérmica, por vía tópica, formulados como bastoncillos aplicadores, soluciones, suspensiones, emulsiones, geles, cremas, ungüentos, pastas, jaleas, pinturas, polvos y aerosoles.

De acuerdo con la presente invención, los compuestos farmacéuticos de fórmula (I)pueden administrarse por inhalación; por ejemplo, en realizaciones alternativas los compuestos de fórmula(I)para inhalación se preparan para dispersión seca, por ejemplo, secando por pulverización una solución que contiene el ingrediente activo,es decir,el compuesto de fórmula(I), por ejemplo, utilizando procedimientos como los descritos en Patente de EE.UU. Núm.

6.509.006; 6.592.904; 7.097.827y 6.358.530. Los excipientes de polvo seco ejemplares incluyen carbohidratos o polipéptidos de bajo peso molecular que se mezclan con el compuesto de fórmula(I) para facilitar la dispersión. En realizaciones alternativas, los tipos de excipientes farmacéuticos que son útiles como transportadores para la dispersión de polvo seco incluyen estabilizadores como la seroalbúmina humana (HSA), que también es un agente de dispersión útil, agentes de carga como carbohidratos, aminoácidos y polipéptidos; ajustadores de pH o tampones; sales como cloruro de sodio y similares. Estos transportadores pueden estar en forma cristalina o amorfa o ser una mezcla de ambas. Los dispositivos que pueden utilizarse para suministrar formulaciones en polvo o aerosol incluyen los descritos, por ejemplo, en las patentes estadounidenses Núm. 5.605.674 y 7.097.827.

De acuerdo con la presente invención, los compuestos farmacéuticos también pueden administrarse como nanopartículas o microesferas para su liberación lenta en el organismo. Por ejemplo, las nanopartículas o microesferas pueden administrarse mediante inyección intradérmica o subcutánea del fármaco que se libera lentamente por vía subcutánea; véase Rao J. Biomater, Sci. Polym. Ed. 1995, 7:623-645 como formulaciones de gel biodegradables e inyectables,véase,por ejemplo, Gao, Pharm. Res. 1995, 12:857-863 o como microesferas para administración oral,véase, por ejemplo,Eyles, J. Pharm. Pharmacol. 1997, 49:669-674.

De acuerdo con la presente invención, los compuestos farmacéuticos de fórmula(I) pueden administrarse por vía parenteral, por administración intramuscular (IM) o intravenosa (IV) o en una cavidad corporal o en la luz de un órgano. Estas formulaciones pueden comprender una solución de agente activo disuelta en un transportador farmacéuticamente aceptable. Los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse son agua, dextrosa en agua y solución de Ringer, que es un cloruro de sodio isotónico. Además, pueden emplearse aceites fijos estériles como disolventes o medios de suspensión. Para ello, puede emplearse cualquier aceite fijo insípido, incluidos los monoglicéridos o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos como el ácido oleico también pueden utilizarse en la preparación de inyectables. Estas soluciones son estériles y generalmente están libres de materias indeseables. Estas formulaciones pueden esterilizarse mediante técnicas de esterilización convencionales y bien conocidas. Las formulaciones pueden contener sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables, de acuerdo con lo que se requiera para aproximarse a las condiciones fisiológicas, tales como agentes de ajuste y amortiguación del pH, agentes de ajuste de la toxicidad, por ejemplo, acetato de sodio, cloruro de sodio, cloruro de potasio, cloruro de calcio, lactato de sodio y similares. La concentración de agente activo en estas formulaciones puede variar ampliamente y se seleccionará principalmente en función de los volúmenes de fluidos, viscosidades, peso corporal y similares, de acuerdo con el modo de administración particular seleccionado y las necesidades del paciente. Para la administración IV, la formulación puede ser una preparación inyectable estéril, como una suspensión acuosa u oleosa inyectable estéril. Esta suspensión puede formularse utilizando aquellos agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una suspensión en un diluyente o disolvente no tóxico aceptable para la administración parenteral, como una solución de 1,3-butanodiol. La administración puede ser en bolo o en infusión continua (por ejemplo, introducción sustancialmente ininterrumpida en un vaso sanguíneo durante un periodo de tiempo determinado).

Los compuestos farmacéuticos y las formulaciones proporcionados en la presente memoria pueden liofilizarse. Se proporciona una formulación liofilizada estable que comprende una composición tal como se proporciona en la presente memoria, que puede hacerse liofilizando una solución que comprende un producto farmacéutico tal como se proporciona en la presente memoria y un agente de carga, por ejemplo, manitol, trehalosa, rafinosa y sacarosa o mezclas de los mismos. Existen muchos otros agentes liofilizantes convencionales. Entre los azúcares, la lactosa es el más común. También se utilizan ácido cítrico, carbonato de sodio, EDTA, alcohol bencílico, glicina, cloruro de sodio, etc. (véase, por ejemplo, Journal of Excipients and Food Chemistry Vol. 1, Issue 1 (2010) pp 41-54; Solicitud de Patente de los Estados Unidos con Núm. de publicación 20040028670).

Indicaciones medicinales

De acuerdo con la presente invención, los compuestos de fórmula (I) proporcionados en la presente memoria pueden utilizarse para tratamientos profilácticos y/o terapéuticos. En aplicaciones terapéuticas, las composiciones farmacéuticas se administran a un sujeto que ya padece una afección o enfermedad en una cantidad terapéuticamente eficaz. En otras realizaciones, las composiciones farmacéuticas aquí proporcionadas se administran en una cantidad suficiente para tratar, prevenir o mejorar la afección o enfermedad en un sujeto que las necesite. El esquema de dosificación y las cantidades efectivas para este uso, es decir, el "régimen de dosificación", dependerán de una variedad de factores, incluyendo el estadio de la enfermedad o afección, la severidad de la enfermedad o afección, el estado general de salud del paciente, el estado físico del paciente, la edad y similares. Al calcular la pauta posológica para un paciente, también se tiene en cuenta el modo de administración.

En realizaciones particulares, los compuestos de fórmula(I)son para utilizar en el tratamiento de un sujeto con insuficiencia cardíaca. En las realizaciones preferentes, el sujeto presenta síntomas de insuficiencia cardíaca aguda o se le ha diagnosticado tal insuficiencia. Si bien el sujeto puede ser un animal no humano, en una realización preferente, el sujeto es un paciente humano, como un paciente humano que sufre de insuficiencia cardíaca. En otras realizaciones, los compuestos proporcionados en la presente memoria son para utilizar para la estimulación de SERCA2a en un sujeto.

En general, los compuestos de fórmula(I)y las composiciones farmacéuticas aquí descritas pueden utilizarse para el tratamiento de la insuficiencia cardíaca o la insuficiencia cardíaca aguda. Un procedimiento de terapia en el que se pueden utilizar los compuestos de la invención incluye la provisión o presentación al sujeto que padece insuficiencia cardíaca o insuficiencia cardíaca aguda. En algunos casos, primero se lleva a cabo un etapa de medición para determinar la función cardíaca basal del sujeto. La etapa de medición puede incluir la medición de uno o más parámetros de la función cardíaca, tales como, entre otros, la frecuencia cardíaca, la presión arterial, la relajación diastólica, la contracción sistólica, la fracción de eyección del ventrículo izquierdo (FEVI), la presión arterial diastólica, la presión arterial sistólica, el gasto cardíaco, el volumen sistólico, la pendiente de desaceleración (E/DT), la velocidad de contracción (s'), la velocidad de relajación temprana (e'), la velocidad de relajación tardía (a'), el índice de presión de llenado del ventrículo izquierdo (E/e'), las relaciones E/Ea o E/A, relación Ea, el tiempo de desaceleración de la onda E (DT), el índice de desaceleración mitral (DT/E), la pendiente de desaceleración (E/DT), el índice cardíaco, la velocidad de entrada mitral y similares. En un sujeto con insuficiencia cardíaca o función cardíaca alterada, los parámetros medidos pueden incluir uno o más de los siguientes: disminución de la frecuencia cardíaca, disminución de la presión cardíaca, disminución de la presión arterial sistólica y/o diastólica, reducción del volumen y la función telediastólica/sistólica del ventrículo izquierdo (FEVI), o aumento de las relaciones E/Ea o E/A, reducción de la relación Ea, disminución del volumen sistólico. La etapa de medición también puede utilizarse para determinar la eficacia de la administración de las composiciones farmacéuticas (es decir, el restablecimiento o restablecimiento parcial de la función cardíaca) y/o para controlar el estado del sujeto durante el tratamiento. Como tal, el etapa de medición puede realizarse antes, durante o después de la administración de la composición farmacéutica. Como podrá apreciar cualquier experto en la técnica, cualquier técnica de medición adecuada disponible en la técnica en el momento de la medición es adecuada para utilizar en la presente memoria y está dentro del ámbito de dicho experto seleccionar una técnica de medición adecuada correspondiente al parámetro de interés. Una lista no limitativa de equipos/técnicas de medición adecuados incluye análisis de sangre, ecocardiografía (incluidas imágenes doppler tisulares), cateterismo cardíaco, prueba de esfuerzo nuclear, tomografía axial computarizada, ventriculografía con radionúclidos, estetoscopio, esfigmomanómetro y similares. Por ejemplo, la relajación diastólica puede medirse mediante ecocardiografía o PCWP

Los compuestos de la invención para uso en los procedimientos desvelados en la presente memoria también incluyen administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula general(I). En las realizaciones preferentes, el compuesto está en una composición farmacéutica, como cualquiera de las combinaciones discutidas anteriormente. El compuesto se administra en una dosis terapéuticamente eficaz como se describe en la presente memoria, por ejemplo, entre aproximadamente 1 mg/kg y aproximadamente 20 mg/kg. En una realización más preferente, la vía de administración es oral. La etapa de medición puede realizarse antes, durante o después de la etapa de administración. Por ejemplo, se puede desear monitorizar continuamente uno o más de los parámetros de la función cardíaca durante el tratamiento y durante un periodo de tiempo posterior.

El régimen de dosificación también toma en consideración parámetros farmacocinéticos bien conocidos en la técnica,es decir,la tasa de absorción, biodisponibilidad, metabolismo, aclaramiento y similares de los agentes activos (véase, por ejemplo, Hidalgo-Aragones (1996) J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 58:611-617; Groning (1996) Pharmazie 51:337-341; Fotherby (1996) Contraception 54:59-69; Johnson (1995) J. Pharm. Sci. 84:1144-1146; Rohatagi (1995) Pharmazie 50:610-613; Brophy (1983) Eur. J. Clin. Pharmacol. 24:103-108; el último de Remington, supra). El estado de la técnica permite al clínico determinar el régimen de dosificación para cada paciente individual, agente activo y enfermedad o afección tratada. Las directrices proporcionadas para composiciones similares utilizadas como productos farmacéuticos pueden utilizarse como guía para determinar el régimen de dosificación,es decir, elesquema de dosis y los niveles de dosificación, administrados de acuerdo con los procedimientos proporcionados en la presente memoria son correctos y apropiados.

Pueden administrarse una o varias formulaciones en función de la dosis y la frecuencia requeridas y toleradas por el paciente. Las formulaciones deben proporcionar una cantidad suficiente de agente activo para tratar, prevenir o aliviar eficazmente las afecciones, enfermedades o síntomas descritos en la presente memoria. Por ejemplo, una formulación farmacéutica ejemplar para la administración oral de las composiciones utilizadas para practicar los procedimientos y usos que se proporcionan en la presente memoria puede estar en una cantidad diaria de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20, 50, 100 o 1000 o más pg/kg de peso corporal por día o de una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.

Una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula(I)o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o hidrato del mismo, administrado a un sujeto necesitado de dicho tratamiento comprende el uso de diversos esquemas de dosificación, por ejemplo: A) en caso de SICA, para rescatar al paciente hospitalizado, puede administrarse un compuesto de fórmula(I) por infusión intravenosa durante 12h, 24h, 48h, 72h o más y en dosis que oscilan entre 0,1 y 0,5 y aproximadamente 10, 50 o 100 o más pg/kg de peso corporal por minuto; B) en pacientes rescatados de un SICA y dados de alta del hospital, el esquema de dosificación para el mantenimiento del efecto terapéutico puede ser en la cantidad diaria de entre 1, 10, 50 o 100 o 1000 o más pg/kg de peso corporal.

Los compuestos de fórmula(I)útiles para poner en práctica la invención pueden administrarse para aportar una dosis de entre 1 ng/kg y 50 mg/kg de peso corporal como bolo único o una dosis oral o intravenosa de entre 1 pg y aproximadamente 20 mg o en un régimen repetido o una combinación de ellos de acuerdo con determine fácilmente el experto en la técnica. En ciertas realizaciones, la dosificación comprende al menos 0,05 mg/kg, 0,1 mg/kg, o al menos 0,2 mg/kg, o al menos 0,3 mg/kg, o al menos 0,4 mg/kg, o al menos 0,5 mg/kg, o al menos 0,6 mg/kg, o al menos 0,7 mg/kg, o al menos 0,8 mg/kg, o al menos 0,9 mg/kg, o al menos 1 mg/kg, o al menos 2 mg/kg, o al menos 3 mg/kg, o al menos 4 mg/kg, o al menos 5 mg/kg, o al menos 6 mg/kg, o al menos 7 mg/kg, o al menos 8 mg/kg, o al menos 9 mg/kg, o al menos 10 mg/kg o al menos 15 mg/kg, o al menos 20 mg/kg, o al menos 25 mg/kg, o al menos 30 mg/kg, o al menos 35 mg/kg, o al menos 40 mg/kg, o al menos 45 mg/kg, o al menos 50 mg/kg, diariamente o con otra pauta periódica adecuada.

Se proporciona la administración intravenosa o subcutánea de un compuesto de fórmula general(I), tal como se describe en la presente memoria, a una dosis terapéuticamente eficaz comprendida entre aproximadamente 0,125 mg/kg y aproximadamente 10 mg/kg, porejemplo0.125 mg/kg, 0,25 mg/kg, 0,5 mg/kg, 0,75 mg/kg, 1 mg/kg, 1,25 mg/kg, 1,5 mg/kg, 1,75 mg/kg, 2 mg/kg, 2,25 mg/kg, 2,5 mg/kg, 2,75 mg/kg, 3 mg/kg, 3,25 mg/kg, 3,5 mg/kg, 3,75 mg/kg, 4 mg/kg, 4,25 mg/kg, 4,5 mg/kg, 4,75 mg/kg, 5 mg/kg, 5.25 mg/kg, 5,5 mg/kg, 5,75 mg/kg, 6 mg/kg, 6,25 mg/kg,

6.5 mg/kg, 6,75 mg/kg, 7 mg/kg, 7,25 mg/kg, 7,5 mg/kg, 7,75 mg/kg, 8 mg/kg, 8,25 mg/kg, 8,75 mg/kg, 9 mg/kg, 9,25 mg/kg, 9,5 mg/kg, 9,75 mg/kg o 10 mg/kg. Preferentemente, el compuesto se administra por vía intravenosa o subcutánea (por ejemplo, por inyección o infusión) a una dosis terapéuticamente eficaz comprendida entre 0,25 mg/kg y 5 mg/kg. Preferentemente, la dosis terapéuticamente eficaz oscila entre 0,5 mg/kg y 5 mg/kg. En otra realización, la dosis terapéuticamente eficaz oscila entre 0,5 mg/kg y 4 mg/kg o entre 0,5 mg/kg y 3 mg/kg.

Se proporciona la administración intramuscular de un compuesto de fórmula general(I), tal como se describe en la presente memoria, a una dosis terapéuticamente eficaz comprendida entre aproximadamente 0,25 mg/kg y aproximadamente 50 mg/kg, por ejemplo 0,25 mg/kg, 0,5 mg/kg, 1 mg/kg, 1,5 mg/kg, 2 mg/kg, 2,5 mg/kg, 3 mg/kg, 3,5 mg/kg, 4 mg/kg, 4,5 mg/kg, 5 mg/kg, 5,5 mg/kg, 6 mg/kg, 6,5 mg/kg, 7 mg/kg, 7,5 mg/kg, 8 mg/kg, 8,5 mg/kg, 9 mg/kg,

9.5 mg/kg, 10 mg/kg, 10,5 mg/kg, 11 mg/kg, 11,5 mg/kg, 12 mg/kg, 12,5 mg/kg, 13 mg/kg, 13,5 mg/kg, 14 mg/kg, 14,5 mg/kg, 15 mg/kg, 15,5 mg/kg, 16 mg/kg, 16,5 mg/kg, 17 mg/kg, 17,5 mg/kg, 18 mg/kg, 18,5 mg/kg, 19 mg/kg, 19,5 mg/kg, 20 mg/kg, 20,5 mg/kg, 21 mg/kg, 21,5 mg/kg, 22 mg/kg, 22,5 mg/kg, 23 mg/kg, 23,5 mg/kg, 24 mg/kg, 24,5 mg/kg, 25 mg/kg, 26 mg/kg, 27 mg/kg, 28 mg/kg, 29 mg/kg, 30 mg/kg, 31 mg/kg, 32 mg/kg, 33 mg/kg, 34 mg/kg, 35 mg/kg, 36 mg/kg, 37 mg/kg, 38 mg/kg, 39 mg/kg, 40 mg/kg, 41 mg/kg, 42 mg/kg, 43 mg/kg, 44 mg/kg, 45 mg/kg, 46 mg/kg, 47 mg/kg, 48 mg/kg, 49 mg/kg o 50 mg/kg. Preferentemente, el derivado de androstano se administra por vía intramuscular (por ejemplo, por inyección) a una dosis terapéuticamente eficaz comprendida entre aproximadamente

0,25 mg/kg y aproximadamente 35 mg/kg. Preferentemente, la dosis terapéuticamente eficaz está comprendida entre

0,25 mg/kg y 30 mg/kg. Más preferentemente, la dosis terapéuticamente eficaz está comprendida entre 0,25 mg/kg y

10 mg/kg. Aún más preferentemente, la dosis terapéuticamente eficaz se sitúa entre 0,25 mg/kg y 5 mg/kg.

Se proporciona la administración intravítrea de un compuesto de fórmula general(I), tal como se describe en la presente memoria, a una dosis terapéuticamente eficaz comprendida entre aproximadamente 1 y aproximadamente

10 mg,por ejemplo,1 |jg, 1,25 |jg, 1,5 |jg, 1,75 |jg, 2 |jg, 2,25 |jg, 2,5 |jg, 2,75 |jg, 3 |jg, 3,25 |jg, 3,5 |jg, 3,75 |jg, 4 |jg,

4,25 jig, 4,5 jig, 4,75 jig, 5 jig, 5,25 jig, 5,5 jig, 5,75 jig, 6 jig, 6,25 jig, 6,5 jig, 6,75 jig, 7 jig, 7,25 jig, 7,5 jig, 7,75 jig,

8 jig, 8,25 jig, 8,5 jig, 8,75 jig, 9 jig, 9,25 jig, 9,5 jig, 9,75 jig, 10 jig, 20 jig, 30 jig, 40 jig, 50 jig, 60 jig, 70 jig, 80 jig,

90 jig, 100 jig, 150 jig, 200 jig, 250 jig, 300 jig, 350 jig, 400 jig, 450 jig, 500 jig, 800 jig, 850 jig, 900 jig, 950 jig, 1 mg, 1,2 mg, 1,5 jig, 1,5 jig.1 mg, 1,2 mg, 1,3 mg, 1,4 mg, 1,5 mg, 1,6 mg, 1,7 mg, 1,8 mg, 1,9 mg, 2 mg, 2,1 mg, 2,2 mg, 2,3 mg, 2,4 mg, 2,5 mg, 2,6 mg, 2,7 mg, 2,8 mg, 2,9 mg, 3 mg, 3.5 mg, 4 mg, 4,5 mg, 5 mg, 5,5 mg, 6 mg, 6,5 mg, 7 mg, 7,5 mg, 8 mg, 8,5 mg, 9 mg, 9,5 mg o 10 mg; preferentemente, la dosis está comprendida entre 1 jig y 2.000 jig aproximadamente, por ejemplo, de 1 jig a 2.000 jig, o de 100 jig a 1.500 jig, o de 500 jig a 1.200 jig, o de 500 jig a 1.000 jig. Preferentemente, la dosis terapéuticamente eficaz del compuesto administrado por vía intravítrea es de al menos 0,02 mg, porejemplo,al menos aproximadamente 0,02 mg, 0,03 mg,

0,04 mg, 0,05 mg, 0,06 mg, 0,07 mg, 0,08 mg, 0,09 mg, 0,1 mg, 0,15 mg, 0,2 mg, 0,25 mg, 0,3 mg, 0,35 mg, 0,4 mg,

0,45 mg, 0,5 mg, 0,55 mg, 0,6 mg, 0,65 mg, 0,7 mg, 0,75 mg, 0,8 mg, 0,85 mg, 0,9 mg, 0,95 mg o 1 mg.

Se proporciona la administración oral de un compuesto de fórmula general(I), tal como se describe en la presente memoria, a una dosis terapéuticamente eficaz comprendida entre aproximadamente 1 mg/kg y aproximadamente 20 mg/kg, por ejemplo, 1 mg/kg, 1,5 mg/kg, 2 mg/kg, 2,5 mg/kg, 3 mg/kg, 3,5 mg/kg, 4 mg/kg, 4,5 mg/kg, 5 mg/kg, 5,5 mg/kg, 6 mg/kg, 6,5 mg/kg, 7 mg/kg, 7,5 mg/kg, 8 mg/kg, 8,5 mg/kg, 9 mg/kg, 9,5 mg/kg, 10 mg/kg, 10,5 mg/kg, 11 mg/kg, 11,55 mg/kg, 12 mg/kg, 12,5 mg/kg, 13 mg/kg, 13,5 mg/kg, 14 mg/kg, 14,5 mg/kg, 15 mg/kg, 15,5 mg/kg, 16 mg/kg, 16,5 mg/kg, 17 mg/kg, 17,5 mg/kg, 18 mg/kg, 18,5 mg/kg, 19 mg/kg, 19,5 mg/kg o 20 mg/kg. Preferentemente, el compuesto se administra por vía oral a una dosis terapéuticamente eficaz comprendida entre aproximadamente 1 mg/kg y aproximadamente 10 mg/kg. Por ejemplo, un compuesto de fórmula general (I) se administra por vía oral a un ser humano a una dosis de aproximadamente 1 y 5 mg/kg. La dosis oral aquí descrita puede administrarse una vez. También puede administrarse diariamente.

Preferentemente, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto con fórmula general(I), como se describe en la presente memoria, se administra a un sujeto por infusión de acuerdo con esquemas de dosificación, como, de aproximadamente 0,1 de aproximadamente 0,1 jig/kg/min a aproximadamente 5,0 jig/kg/min, por ejemplo, 0,1 jig/kg/min, 0,2 jig/kg/min, 0,3 jig/kg/min, 0,4 jig/kg/min, 0,5 jig/kg/min, 0,6 jig/kg/min, 0,7 jig/kg/min, 0,8 jig/kg/min, 0,9 jig/kg/min, 1,0 jig/kg/min, 1,1 jig/kg/min, 1,2 jig/kg/min, 1,3 jig/kg/min, 1,4 jig/kg/min, 1,5 jig/kg/min, 1,6 jig/kg/min, 1,7 jig/kg/min, 1,8 jig/kg/min, 1,9 jig/kg/min, 2,0 jig/kg/min, 2,1 jig/kg/min, 2,2 jig/kg/min, 2,3 jig/kg/min, 2,4 jig/kg/min, 2,5 jig/kg/min, 2,6 jig/kg/min, 2,7 jig/kg/min, 2,8 jig/kg/min, 2,9 jig/kg/min, 3,0 jig/kg/min, 3,1 jig/kg/min, 3,2 jig/kg/min, 3,3 jig/kg/min, 3,4 jig/kg/min, 3,5 jig/kg/min, 3,6 jig/kg/min, 3,7 jig/kg/min, 3.8 jig/kg/min, 3,9 jig/kg/min, 4,0 jig/kg/min, 4,1 jig/kg/min, 4,2 jig/kg/min, 4,3 jig/kg/min, 4,4 jig/kg/min, 4,5 jig/kg/min, 4,6 jig/kg/min, 4,7 jig/kg/min, 4,8 jig/kg/min, 4,9 jig/kg/min, o 5,0 jig/kg/min. Por ejemplo, el compuesto se administra por infusión a una dosis efectiva de aproximadamente 0,2 jig/kg/min a aproximadamente 2,0 jig/kg/min, o de aproximadamente 0,2 jig/kg/min a aproximadamente 1,5 jig/kg/min, o de aproximadamente 0,25 jig/kg/min a aproximadamente 1,0 jig/kg/min, o de aproximadamente 0,5 jig/kg/min a aproximadamente 1,0 jig/kg/min.

Una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula(I), o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, administrado a un sujeto necesitado de dicho tratamiento puede individualizarse basándose en la monitorización de la presión capilar pulmonar en cuña (PCWP), mediciones de imágenes Doppler tisulares (TDI), disnea, congestión venosa periférica y pulmonar, volumen urinario, capacidad de ejercicio, biomarcadores séricos como NT-proBNP y troponina cardíaca de alta sensibilidad (hs-cTnT).

Uno de fórmula(I), o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, administrado a un sujeto necesitado de dicho tratamiento puede estar en una cantidad suficiente para mantener la tolerancia normal al ejercicio sin disnea.

Una cantidad efectiva se demuestra por la reducción de la PCWP, la ortopnea, la disnea paroxística nocturna, el aumento de la tolerancia al ejercicio, la reducción de la congestión venosa periférica y pulmonar, como crepitaciones o estertores pulmonares, la reducción de la hinchazón de los tobillos, la reducción de biomarcadores urinarios como NT-proBNP y Troponina cardíaca de alta sensibilidad (hs-cTnT).

Se pueden utilizar dosis más bajas de un compuesto de fórmula(I)o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, cuando se administra en el torrente sanguíneo o IV o IM (en contraste con la administración, por ejemplo, oral, por inhalación o subcutánea), por ejemplo, como una administración IV o IM, o en una cavidad corporal o en la luz de un órgano. Se pueden utilizar dosis sustancialmente más altas en la administración tópica, por pulverización, inhalación u oral, o mediante polvos, aerosoles o inhalación. Los procedimientos reales para preparar formulaciones administrables por vía parenteral o no parenteral serán conocidos o evidentes para los expertos en la técnica y se describen con más detalle en publicaciones como la de Remington (véase Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co, Easton PA).

Uno de fórmula(I), o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o hidrato de esta, puede administrarse crónicamente, por ejemplo, desde el día del diagnóstico y hasta el último día de vida del paciente o hasta que la enfermedad haya remitido. Puede ser necesario ajustar la dosis al pasar de una fase de tratamiento a un periodo de mantenimiento mediante el seguimiento periódico de biomarcadores específicos conocidos convencionalmente o de signos clínicos de la enfermedad.

Para evaluar la eficacia de un tratamiento, un régimen de tratamiento o una dosis concreta o para determinar si debe administrarse un tratamiento frente a una dosis de mantenimiento, los sujetos, por ejemplo, los pacientes afectados por ICA o ICC, pueden someterse a revisiones periódicas regulares para detectar la presencia y el grado de afectación o daño de órganos y tejidos, por ejemplo, corazón (dilatación ventricular, hipertrofia cardíaca con tercer ruido cardíaco), fatiga, cansancio, disminución de la tolerancia al ejercicio, aumento del tiempo de recuperación tras el ejercicio, riñón (insuficiencia renal, oliguria), pulmón (ortopnea, disnea paroxística nocturna, taquipnea), hinchazón de tobillos, elevación de la presión venosa yugular. Debe realizarse una exploración física exhaustiva en un intervalo de tiempo elegido por los expertos en el tratamiento de enfermedades cardiovasculares, en particular de la ICA o la ICC, que se centrará en las funciones cardíaca, pulmonar y circulatoria periférica. En consecuencia, preferentemente la terapia con un compuesto de fórmula(I), o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, se instaura lo antes posible, preferentemente en caso de urgencia, para prevenir la rápida evolución de los síntomas y se continúa tras el alta del paciente durante años, preferentemente durante toda la vida del paciente o al menos durante un periodo coherente con la forma en que se utilizan otros fármacos en la IC.

Los usos y procedimientos proporcionados en la presente memoria pueden comprender además la coadministración con otros medicamentos o productos farmacéuticos. De hecho, el tratamiento aquí descrito corrige selectivamente una función bioquímica cardíaca deprimida (a saber, la actividad de SERCA2a). Esto contribuye sin duda a aliviar los síntomas clínicos de la IC existente, con menos efectos secundarios no deseados que los de las terapias disponibles (sólo por la selectividad antes mencionada). No obstante, dado que la ICC y la ICA son síndromes clínicos complejos, el tratamiento descrito en la presente memoria puede asociarse a clases de fármacos existentes y futuros y/o a fármacos específicos, como por ejemplo a) clases de fármacos como inhibidores de la ECA, AIRB, diuréticos, bloqueadores de los canales de Ca2+, bloqueadores p, digitálicos, donantes de NO, vasodilatadores, estimuladores de la SERCA2a, inhibidores de la neprilisina (NEP), activadores de los filamentos de miosina, mediadores de relaxina-2 recombinantes, proteína NP recombinante, activadores de la guanilato ciclasa soluble (sGC), ligando beta-arrestina del receptor de angiotensina II; b) fármacos específicos: hidroclorotiazida, furosemida, verapamilo, diltiazem, carvedilol, metoprolol, hidralazina, eplerenona, espironolactona, lisinopril, ramipril, nitroglicerina, nitratos, digoxina, valsartán, olmesartán, telmisartán, candesartán, losartán, entresto, omecamtiv, sacubitrilo, serelaxina, ularitida, levosimendán, cinaciguat.

Los compuestos de la presente invención, tal como se utilizan como agentes terapéuticos, en particular para tratar la IC, pueden combinarse con otros agentes terapéuticos utilizados en el tratamiento de la misma enfermedad. Otros agentes terapéuticos ejemplares son los diuréticos, por ejemplo la furosemida, la bumetanida y la torasemida. Metolazona, un antagonista de la aldosterona, como la espironolactona o la eplerenona; diuréticos tiazídicos, como la hidroclorotiazida, la metolazona y la clortalidona. Otros agentes son los inhibidores de la ECA, por ejemplo el lisinopril y el ramipril. También pueden tenerse en cuenta los bloqueadores de los receptores de la angiotensina II (ARB), como el valsartán, el candesartán y el losartán. Se incluyen inhibidores de los receptores de angiotensina/neprilisina (IRAN), como el sacubitrilo. Otros agentes pueden seleccionarse entre bloqueadores beta, como carvedilol y metoprolol, por ejemplo o vasodilatadores, por ejemplo hidralazina, opcionalmente combinada con dinitrato de isosorbida, hidralazina, nitratos, como nitroglicerina, amlodipino y felodipino, no dihidropiridinas como diltiazem o verapamilo. Los compuestos de la presente invención también pueden combinarse con digoxina, si es necesario. Pueden considerarse otros fármacos, como la ivabradina y otros anticoagulantes. También, otros medicamentos pueden incluir OMECAMTRIV MECARBIL.

Los compuestos de la presente invención pueden combinarse con otros agentes terapéuticos, en particular agentes útiles para tratar enfermedades cardiovasculares, más en particular en la terapia combinada de la IC. Los principios activos combinados pueden administrarse de acuerdo con distintos protocolos, decididos por el médico. La terapia combinada puede llevarse a cabo administrando los compuestos de fórmula(I) al mismo tiempo o en momentos diferentes del ingrediente o ingredientes terapéuticamente activos adicionales. En caso de administración concomitante, el compuesto de la presente invención y el ingrediente o ingredientes activos adicionales pueden formularse cada uno en una composición farmacéutica respectiva. En este caso, la presente invención proporciona un kit, en particular para el tratamiento de la insuficiencia cardíaca, que comprende composiciones farmacéuticas separadas que contienen el compuesto de la presente invención y el ingrediente o ingredientes activos adicionales, respectivamente. En otra realización, la presente invención proporciona un kit de forma de dosificación unitaria farmacéutica, en particular para el tratamiento de la IC, que comprende el compuesto de la presente invención y el ingrediente o ingredientes activos adicionales.

Nanopartículas, Nanolipopartículas y Liposomas

También se proporcionan nanopartículas, nanolipopartículas, vesículas y membranas liposómicas que comprenden los compuestos proporcionados en la presente memoria, por ejemplo, para administrar compuestos y composiciones farmacéuticamente activos de acuerdo con se proporciona en la presente memoria (un compuesto de fórmula(I)o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo) a un sujeto necesitado de dicho tratamiento. En realizaciones alternativas, estas composiciones están diseñadas para dirigirse a moléculas específicas, incluidas moléculas biológicas, como polipéptidos, incluidos polipéptidos de la superficie celular, porejemplo,para dirigirse a un tipo celular deseado, porejemplo,un miocito o célula cardíaca, una célula endotelial y similares.

Se proporcionan liposomas multicapa que comprenden compuestos utilizados para practicar los procedimientos de la presente divulgación, porejemplo,como se describe en Park et al. Publicación de Patente de los Estados Unidos Núm. 20070082042. Los liposomas multicapa pueden prepararse utilizando una mezcla de componentes de fase oleosa que comprenden escualeno, esteroles, ceramidas, lípidos o aceites neutros, ácidos grasos y lecitinas, con un tamaño de partícula de aproximadamente 200 a 5000 nm, para atrapar una composición utilizada para practicar los usos y procedimientos proporcionados en la presente memoria.

Los liposomas pueden fabricarse utilizando cualquier procedimiento, por ejemplo, como se describe en la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.534.899; Publicación de Patente Núm. 20070042031, la presente invención comprende un procedimiento para producir un liposoma encapsulando un agente activo de acuerdo con la presente invención (o una combinación de agentes activos), comprendiendo el procedimiento la provisión de una solución acuosa en un primer depósito, una solución lipídica orgánica en un segundo depósito y luego mezclar la solución acuosa con la solución lipídica orgánica en una primera región de mezcla para producir una solución liposómica, en la que la solución lipídica orgánica se mezcla con la solución acuosa para producir sustancialmente de forma instantánea un liposoma que encapsula al agente activo e inmediatamente después mezclar la solución liposómica con una solución tampón para producir una solución liposómica diluida.

En una realización, las composiciones liposómicas usadas para practicar usos y procedimientos como los proporcionados en la presente memoria comprenden un amonio sustituido y/o polianiones, por ejemplo, para la administración dirigida de un compuesto de fórmula(I)o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o hidrato del mismo usado para practicar procedimientos como los proporcionados en la presente memoria a un tipo celular deseado, como se describe, por ejemplo, en Publicación de Patente de los Estados Unidos Núm. 20070110798.

Se proporcionan nanopartículas que comprenden compuestos de acuerdo con la presente invención utilizados para practicar usos y procedimientos tal como se proporcionan en la presente memoria en forma de nanopartículas que contienen agente activo (por ejemplo, una nanopartícula secundaria), tal como se describe, porejemplo,en Publicación de Patente de los Estados Unidos Núm. 20070077286. En una realización, se proporcionan nanopartículas que comprenden un agente activo liposoluble utilizado para practicar un uso y un procedimiento como los previstos en la presente memoria o un agente activo hidrosoluble liposolubilizado para actuar con una sal metálica bivalente o trivalente.

En una realización, las suspensiones de lípidos sólidos pueden utilizarse para formular y suministrar composiciones utilizadas para practicar usos y procedimientos como los proporcionados en la presente memoria a células de mamíferoin vivo, in vitroo exvivo,como se describe, por ejemplo, en Publicación de Patente de los Estados Unidos Núm. 20050136121.

Las composiciones y formulaciones utilizadas para poner en práctica los usos y procedimientos proporcionados en la presente memoria pueden administrarse mediante el uso de liposomas o nanoliposomas. Mediante el uso de liposomas, en particular cuando la superficie del liposoma lleva ligandos específicos para las células diana, o se dirigen de otro modo preferentemente a un órgano específico, se puede concentrar la administración del agente activo en las células dianain vivo. Véase, por ejemploPatentes de los Estados Unidos Núm. 6.063.400; 6.007.839; Al-Muhammed, J. Microencapsul. 1996, 13:293-306; Chonn, Curr. Opinen. Biotechnol. 1995, 6:698-708; Ostro, Am. J. Hosp. Pharm.

1989, 46:1576-1587.

Vehículos de suministro

En realizaciones alternativas, puede utilizarse cualquier vehículo de suministro para poner en práctica los usos y procedimientos proporcionados en la presente memoria, por ejemplo, para administrar los compuestos proporcionados en la presente memoria a un sujeto necesitado de dicho tratamiento. Por ejemplo, los vehículos de suministro que comprenden policationes, polímeros catiónicos y/o péptidos catiónicos, como los derivados de polietilenimina, pueden utilizarse como se describe, por ejemplo, en la Publicación de Patente Núm. 20060083737.

En una realización, un complejo polipéptido-surfactante desecado se utiliza para formular una composición utilizada para practicar un uso y procedimiento de acuerdo con se proporciona en la presente memoria, como se describe, por ejemplo, en Publicación de Patente de los Estados Unidos Núm. 20040151766.

En una realización, una composición utilizada para practicar usos y procedimientos como los proporcionados en la presente memoria puede aplicarse a células utilizando vehículos con conjugados peptídicos permeantes de membrana celular, por ejemplo, como se describe en Patentes de los Estados Unidos Núm. 7.306.783; 6.589.503. En un aspecto, la composición a administrar se conjuga con un péptido permeante de la membrana celular. En una realización, la composición a administrar y/o el vehículo de administración se conjugan con un péptido mediador del transporte, por ejemplo, como se describe en la Patente de EE.UU. Núm. 5.846.743 en la que se describen péptidos mediadores del transporte que son altamente básicos y se unen a polifosfoinosítidos.

En una realización, se utiliza la electropermeabilización como un medio primario o complementario para entregar la composición a una célula utilizando cualquier sistema de electroporación como, por ejemplo, como se describe en las Patentes de los Estados Unidos Núm. 7.109.034; 6.261.815; 5.874.268.

Preparación de los compuestos de la fórmula (I)

Los compuestos de la presente invención pueden sintetizarse por muchos procedimientos disponibles para los expertos en la técnica de la química orgánica. A continuación se describen esquemas sintéticos generales y ejemplares para preparar compuestos de la presente invención. Estos esquemas son ilustrativos y no pretenden limitar las posibles técnicas que un experto en la técnica puede utilizar para preparar los compuestos desvelados en la presente memoria. Diferentes procedimientos para preparar los compuestos de la presente invención serán evidentes para los expertos en la técnica. Además, las diversas etapas de la síntesis pueden realizarse en una secuencia alternativa para obtener el compuesto o compuestos deseados.

Los ejemplos de compuestos de la presente invención preparados de acuerdo con los procedimientos descritos en los esquemas generales se dan en la sección de ejemplos que se expone a continuación.

Los compuestos de la presente invención pueden sintetizarse utilizando los procedimientos descritos a continuación, junto con procedimientos sintéticos conocidos en la técnica de la química orgánica sintética, o mediante variaciones de los mismos apreciadas por los expertos en la técnica. Las reacciones se llevan a cabo en un disolvente o mezcla de disolventes apropiado para los reactivos y materiales empleados y adecuado para las transformaciones que se efectúan. Los expertos en la técnica de la síntesis orgánica entenderán que la funcionalidad presente en la molécula debe ser coherente con las transformaciones propuestas.

Además, el experto en la técnica puede alterar fácilmente los reactivos y las condiciones de reacción ejemplificadas en los esquemas que se presentan a continuación para incluir cualquier combinación de sustituyentes como se ha definido anteriormente. Además, el experto en la técnica puede utilizar fácilmente etapas intercambiables para cada proceso sintético e incorporar etapas de aislamiento y/o purificación según se considere necesario.

Los materiales de partida e intermediarios útiles para preparar compuestos de la invención están disponibles comercialmente o pueden prepararse mediante procedimientos sintéticos bien conocidos.

Los productos finales obtenidos por la síntesis descrita a continuación pueden purificarse mediante técnicas comúnmente conocidas por un experto en la técnica, como cromatografía preparatoria, cromatografía en capa fina, HPLC o cristalización.

En la presente memoria se describen procesos ejemplares para la síntesis de los compuestos de la invención.

En las siguientes preparaciones, los compuestos químicos, disolventes, reactivos y cualquier otro material proceden de fuentes comerciales, salvo que se indique lo contrario. Generalmente, los compuestos de fórmula (I) pueden prepararse mediante síntesis de diversas etapas a partir de dehidroepiandrosterona (prasterona). La dehidroepiandrosterona es un producto comercial o puede prepararse de acuerdo con procedimientos bien conocidos a partir de la 4-androsten-3,17-diona (androstenediona).

Preparación de 5a-Andmstano-3p,6a,17@-triol

Un intermediario adecuado para la síntesis de 6-a-3,17 androstanediona(2)se produjo a partir de dehidroepiandrosterona1por hidroboración seguida de oxidación como se describe en De Munari, et al. (J. Med. Chem. 2003, 46(17):3644-54). Brevemente, una solución de dehidroepiandrosterona1(5 g, 17,5 mmol, 1 eq.) en THF (85 ml) se agitó a -20 °C bajo Ar. A continuación, se añadió a la solución agitada complejo BH3 THF 1M en THF (44 ml, 44 mmol, 2,5 eq.) y se continuó agitando a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadió gota a gota H2O (85 ml) y a continuación se añadió gota a gota NaBO34H2O (5,4 g, 35 mmol, 2 eq). Tras agitar a temperatura ambiente durante toda la noche, se filtró la mezcla. El sólido se lavó con THF y luego se desechó. Los destilados se saturaron con NaCl y se extrajeron con THF (3 * 40 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre NaCl y Na2SO4, se filtraron y se evaporaron a sequedad. El producto bruto 5a-Androstano-3p,6a,17p-triol2se cristalizó de EtOAc/MeOH (2/1, 10 ml/g) para dar un sólido blanco (3,8 g, 70%).

Preparación de 6a-hidroxiandrostano-3,17-diona

El intermediario3se obtuvo a partir de2por oxidación selectiva en las posiciones C3 y C17. Se añadió NBS (3,4 g, 19,5 mmol, 3 eq) a una disolución agitada de 5a-Androstano-3p,6a,17p-triol2(2 g, 6,5 mmol, 1 eq) en dioxano/H20/piridina (54/10/1 ml) a 0°C. Tras la adición, la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La solución naranja se diluyó con agua (50 ml) y se inactivó con Na2S2O3 (350 mg). El disolvente orgánico se evaporó al vacío hasta que apareció un sólido blanco. El sólido se filtró y se lavó con agua. Tras secar a 40 °C, se obtuvo 6a-hidroxiandrostano-3,17-diona3como un sólido blanco (1,3 g, 70%).

Síntesis de adrostan-3-metilen-17-ona

La 6-a-3,17 androstanediona3se convirtió entonces en el derivado exo-metano6(adrostano-3-metileno-17-ona) mediante una reacción de Wittig selectiva sobre el carbonilo C3 seguida del acoplamiento por metátesis cruzada con ácido 5-pentenoico a una suspensión de bromuro de metiltrifenilfosfonio (1,66 g, 6 mmol, 4 eq.) en THF (10 ml) a -5°C se añadió t-BuOK (670 mg, 6 mmol, 4 eq.). La solución cambió inmediatamente de color a naranja brillante. Transcurridos 10 minutos, se añadió 6a-hidroxi androstano-3,17-diona3(450 mg, 1,5 mmol, 1 eq.) mientras se mantenía la temperatura por debajo de 0°C. Inmediatamente después de la adición, la reacción se inactivó mediante la adición de solución acuosa. HCl 1M (15 ml) y se extrajo con EtOAc (3x20ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na<2>SO<4>y se evaporaron a sequedad. Los extractos brutos se purificaron mediante cromatografía en columna (eluyente EtoAc: Petroleum spirit 4:6) para producir 376 mg (83%) de adrostano-3-metilen-17-ona6como espuma blanca.

Síntesis directa de CVie 201 y 202 a partir del precursor 6 por metátesis cruzada

Se añadió catalizador Hoveyda-Grubbs de segunda generación (12 mg, 0,015 mmol, 0,05 eq.) a una solución de androstano-3-metileno-17-ona6(100 mg, 0,33 mmol, 1 eq) en DCM (1 ml). A continuación, la solución se calentó a reflujo y se trató con 10 pl de ácido 4-pentenoico cada 20 minutos (total 330 pl, 3,3 mmol, 10 eq.). Una vez finalizada la adición, la mezcla se sometió a reflujo durante 2 h más. La mezcla de reacción se concentróin vacuoy se purificó mediante cromatografía flash (Eluyente Acetona: éter de petróleo 3:7+0,1% HCO<2>H) para obtener dos sólidos blancos diferentes ácido (E)-4-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico (4,8 mg, 4%)(CVie201 )y ácido (Z)-4-(6-alfahidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico (7,2 mg, 6%)(CVie202).

Alternativamente,CVie201yCVie202se obtuvieron variando la reacción de Wittig. En un procedimiento (Vía A), se estabilizó un intermediario de betaína mediante el uso de un disolvente polar, como DMSO, y una base, como NaH. El segundo enfoque (Vía B) permitió la estabilización de un intermediario ciclo-oxafosfetano utilizando un disolvente aprótico, como THF, como base. La vía A produjo una mezcla de diastereómeros (60% de Z/synCVie202;30% E/antiCVie201), mientras que la vía B proporcionóCVie202derivado del intermediario ciclo-oxafosfato. Cualquiera de los dos procedimientos requiere la producción de los diastereómeros7y/o8como se describe a continuación.Síntesis alternativa de CVie 201 y 202 mediante la reacción de Wittig

Se añadió cuidadosamente NaH 60% en aceite mineral (100 mg, 2,56 mmol, 8 eq.) a DMSO seco (1 ml) bajo atmósfera de Ar. La solución resultante se agitó a 60°C durante 20 minutos. Tras enfriar a temperatura ambiente, se añadió bromuro de (3-carboxipropil)trifenilfosfonio (550 mg, 1,28 mmol, 4 eq.). Inmediatamente apareció un color naranja brillante. La solución se agitó durante 2 h. A continuación, se añadió a la mezcla 6a-hidroxiandrostano-3,17 diona3(100 mg, 0,32 mmol, 1 eq.). Se permitió que la solución resultante se agitara a temperatura ambiente durante 4 h más. La mezcla de reacción diluida con EtoAc (25 ml) se lavó con HCl 1M acuoso (3 x 30ml). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>y se evaporó a sequedad obteniéndose 25 mg de material bruto.

El material bruto se disolvió primero en MeOH (1,5 ml), seguido de la adición de clorhidrato de EDC (115 mg, 0,6 mmol, 2eq.) y DMAP (5 mg, 0,03 mmol, 0,1 eq.). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Tras la concentraciónal vacío.El sólido bruto se disolvió en EtOAc (15 ml) y se lavó con HCl 1M acuoso (3 x<10>ml). El producto bruto se purificó mediante cromatografía flash sobre gel de sílice (Acetona:Pet.Sp 3:7) para obtener 25 mg de un aceite claro (20%) que comprende una mezcla de diastereoisómeros7y8.

Se añadió cuidadosamente una solución 1M de LiHMDS en THF (40 ml, 40 mmol, 12 eq.) a una suspensión seca de THF (33 ml) de bromuro de (3-carboxipropil)trifenilfosfonio (8,5 g, 20 mmol, 6 eq.) en atmósfera de Ar a -40°C. Se agitó la solución a -40°C hasta que apareció un color naranja brillante. La solución se agitó a -40°C hasta que apareció un color naranja brillante. A continuación, se añadió 6a-hidroxiandrostano-3,17 diona3(1 g, 3,3 mmol, 1 eq.) a la solución a -40°C. Después de agitar a temperatura ambiente durante toda la noche, la mezcla de reacción se inactivó con solución acuosa de 6a-hidroxiandrostano-3,17 diona 3 (1 g, 3,3 mmol, 1 eq.). Se extrajo HCl 1M (300 ml) con EtOAc (3 x3 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se evaporaron a sequedad.

El material bruto se disolvió en EtOH absoluto (17 ml) y después se añadieron clorhidrato de EDC (1,26 mg, 6,6 mmol, 2 eq.) y DMAP (50 mg, 0,3 mmol, 0,1 eq.). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción diluida con EtOAc (25 ml) se lavó con HCl 1M acuoso (3 x 30 ml). El producto bruto se purificó mediante cromatografía flash sobre gel de sílice (Acetona:Pet.Sp 3:7) para obtener 910mg (72%) del compuesto8.

Hidrólisis final de esteres metílicos (o etílicos)

Se añadió una solución acuosa de LiOH 1M (150 pl, 2,5 eq.) a una solución de los ésteres metílicos7y8(25 mg, 0,06 mmol, 1eq.) en THF (600 pl) y agua (200 pl). Tras 2h, la reacción se diluyó con agua (10 ml) y se inactivó añadiendo HCl 1M hasta que la solución alcanzó pH 1. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se evaporaron a sequedad. El bruto se purificó mediante cromatografía flash (AcOEt:Pet.Sp. 7:3 1% HCOOH). Se obtuvieron dos sólidos blancos correspondientes a los diastereoisómeros E (7 mg, 31%) y Z (12 mg, 54%)(CVie201yCVie202, respectivamente).

Vía sintética a los CVie 203 y 204: síntesis del compuesto intermediario 12

Para prepararCVie203yCVie204, el precursor12se produjo primero a partir de 6-a-3,17 androstanediona3. Los carbonilos de la 6-a-3,17 androstanediona3se protegieron como diacetales por reacción con etilenglicol en combinación con catálisis ácida (p-tSA o ácido canfosulfónico) en tolueno, obteniéndose el compuesto9. La oxidación del compuesto9con PCC u otros oxidantes dio el compuesto10, que luego se redujo con NaBH4 o KBH4 para producir el alcohol protegido11con el grupo C6-hidroxilo selectivamente en la configuración p. La escisión final de los diacetales cíclicos mediante tratamiento ácido como se describe en De Munari et al. (J. Med. Chem. 2003, 46(17):3644-54) en acetona se obtuvo el precursor12.

Brevemente, una solución de 6a-hidroxiandrostano-3,17-diona (1,5 g, 4,9 mmol, 1 eq), etilenglicol (10,5 ml, 88 mmol, 36 eq) y PTSA (561 mg, 2,9 mmol, 0,6 eq) en tolueno (160 ml) se agitó a reflujo durante 12 h con una trampa Dean-Stark. Tras enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se neutralizó con solución acuosa de NaHCO<3>al 5%. La capa orgánica se separó y se lavó con H2O (2 x 40 ml), se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a sequedad para producir 3,3:17,17-Bis(etilendioxi)androstano-6a-ol9como un compuesto sólido blanco (1,9 g, 98%).

Se añadió PCC (148 mg, 0,69 mmol, 4 eq.) a una solución de 3,3:17,17-bis(etilendioxi)androstano-6a-ol (3 g, 14 mmol, 1 eq.)9y ascorbato de sodio (1,2 g, 14 mmol, 4 eq.) en CH<2>Ch seco (87 ml) a 0°. La mezcla se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. La mezcla se lavó con HCl ac. 1M (3 x 30 ml) y agua (3 x 30 ml). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>y se evaporó a sequedad. El bruto se purificó mediante cromatografía flash sobre una columna de gel de sílice (eluyente acetona: éter de petróleo 2:8). Se obtuvo 3,3:17,17-bis(etilendioxi)androstano-6-ona10como un sólido blanco (1,53 g (96%)).

Se añadió NaBH<4>(144 mg, 3 mmol, 1,2 eq) a una suspensión agitada de 3,3:17,17-bis(etilendioxi)androstano-6-ona10(1 g, 2,5 mmol, 1 eq) en MeoH (13 ml) a 0 °C. Después de 2 h a 0 °C, se añadió gota a gota<h>2<o>(40 ml). La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 40 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobreNa<2>SO<4>, se filtraron y se evaporaron a sequedad para dar un sólido blanco, que fue 3,3:17,17-Bis(etilendioxi)androstano-6p-ol11(915 mg, 92%).

Se añadió PTSA (2,26 g, 11,5 mmol, 5 eq) en pequeñas porciones durante 5 minutos a una solución de 3,3:17,17-bis(etilendioxi)androstano-6|3-ol11(910 mg, 2,3 mmol, 1 eq) en acetona (46 ml). Tras agitar a temperatura ambiente durante 1 h, la solución se inactivó mediante la adición de 5% NaHCO<3>acuoso hasta pH 7. Tras agitar durante 5 minutos, apareció un sólido blanco. Los volátiles se eliminaronal vacío.La suspensión se extrajo con CH<2>Cl<2>(3 x 30 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (40 ml), se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se evaporaron. El sólido obtenido se agitó con n-hexano/EtOAc 8/2 (10 ml) durante 45 minutos y después se recogió por filtración. El sólido se secó a 45 °C durante 3 horas. Se obtuvieron 568 mg (81%) de un sólido blanco (es decir, 6phidroxiandrostano-3,17-diona12).

Conversión de 12 en CVie final 203 y 204

A continuación se obtuvieronCVie203yCVie204a partir del precursor12mediante la reacción de Wittig utilizando los mismos procedimientos descritos anteriormente paraCVie201yCVie202. Las configuraciones en el doble enlace C3-C1' se identificaron en los dos isómeros mediante experimentos NOESY.

Brevemente, se añadió cuidadosamente NaH 60% en aceite mineral (100 mg, 2,56 mmol, 8 eq.) a DMSO seco (1 ml) bajo atmósfera de Ar. La solución resultante se agitó a 60°C durante 20 minutos. Tras enfriar a temperatura ambiente, se añadió bromuro de (3-carboxipropil)trifenilfosfonio (550 mg, 1,28 mmol, 4 eq.). Inmediatamente apareció un color naranja brillante. La solución se agitó durante 2 h. A continuación, se añadió a la mezcla 6p-hidroxiandrostano-3,17-diona12(100 mg, 0,32 mmol, 1 eq.). Se permitió que la solución resultante se agitara a temperatura ambiente durante 4 h más. La mezcla de reacción diluida con EtOAc (25 ml) se lavó con HCl 1M acuoso (3 x 30 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a sequedad para obtener 25 mg de material bruto.

A continuación, el material bruto se disolvió en MeOH (1,5 ml). Se añadieron clorhidrato de EDC (115 mg, 0,6 mmol, 2 eq.) y DMAP (5 mg, 0,03 mmol, 0,1 eq.). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Tras la concentraciónal vacío.El sólido bruto se disolvió en EtOAc (15 ml) y se lavó con HCl 1M acuoso (3 x 10 ml). El producto bruto se purificó mediante cromatografía flash sobre gel de sílice (Acetona:Pet.Sp 3:7) para obtener una mezcla de diastereoisómeros13y14con un rendimiento del 17% y del 30%, respectivamente.

La mezcla de reacción se concentróin vacuoy se purificó mediante cromatografía flash (eluyente acetona: éter de petróleo 3:7+0,1% HCO2H) para obtener dos sólidos blancos diferentes (ácido (E)-4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico(CVie203)y ácido (Z)-4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico(CVie204).

Producción de CVie214, CVie215 y CVie217 mediante hidrogenación e hidrólisis de ésteres

El compuestoCVie217se produjo a partir de la mezcla de diastereómeros7+8descrita anteriormente. Brevemente, la hidrogenación de los dobles enlaces C3-C1' de los diastereómeros se llevó a cabo en EtOAc utilizando catálisis de Pd-C. El compuesto resultante fueCVie217. La configuración del centro estereogénico formado en C3 se identificó mediante experimentos NOESY. A continuación, el compuestoCVie217se hidrolizó con LiOH 1M o NaOH en THF para producirCVie214. De forma similar, los diastereómeros13+14se hidrogenaron en EtOAc utilizando catálisis Pd-C para producir el compuesto éster19, que luego se hidrolizó con LiOH 1M o NaOH en THF para producirCVie215.

Producción de CVie213 y CVie216 mediante reacción de Wittig seguida de hidrogenación C=C e hidrólisis de ésteres

El compuesto 6-a-3,17 androstanediona3también se utilizó como punto de partida para la síntesis deCVie2l3yCVie216mediante una reacción de Horner-Emmons. En primer lugar, se añadió cuidadosamente trietilfosfonoacetato (6,5 ml, 33 mmol, 5 eq) a una suspensión de NaH 60% en aceite mineral (1,3 g, 33 mmol, 5 eq) en DMF (200 ml) bajo atmósfera de Ar a 0°C. La solución resultante se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 20 minutos. A continuación, se añadió 6-a-3,17 androstanediona3(2 g, 6,5 mmol, 1 eq) a 0°C. Después de agitar toda la noche a temperatura ambiente, la reacción se inactivó añadiendo cuidadosamente H<2>O (100 ml) y se extrajo con Et2O (3 * 150 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4y se evaporaronal vacío.El bruto se purificó mediante cromatografía flash sobre una columna de gel de sílice (acetona: alcohol de petróleo 3:7) para producir 2,1 g (86%) de una mezcla oleosa límpida de dos diastereoisómeros (compuestos21).

Bajo atmósfera de Ar, se añadió Pd-C al 10% (700 mg) a una solución desgasificada del diastereoisómero del compuesto21(2 g, 5,3 mmol, 1 eq) en EtOAc (200 ml). Tras tres ciclos de vacío/hidrógeno, se permitió que la reacción se agitara a temperatura ambiente durante toda la noche en atmósfera de H<2>. Tras eliminar el hidrógeno por vacío/ciclo de AR, la mezcla de reacción se filtró sobre CELITE®. La solución filtrada se evaporó a sequedad. El productoCVie213se obtuvo sin purificación a 1,8 g (90%). La hidrólisis posterior deCVie213con LiOH 1M o NaOH en THF produjoCVie216.

Producción de CVie218 y CVie219 mediante reacción de Wittig seguida de hidrogenación C=C e hidrólisis de ésteres

De forma similar, al hacer reaccionar la 6-a-3,17 androstanediona3con la sal de trifenilfosfonio adecuada (por ejemplo, bromuro de 5-carboxitrifenilfosfonio, LiHMDS, THF y luego EtOH (o MeOH)) se produjo el compuesto24. A continuación, la hidrogenación catalítica del compuesto24mediante catálisis Pd-C en presencia de hidrógeno produjoCVie218, que incluía una cadena C6 en la posición C-3. La hidrólisis deCVie218con LiOH 1M o NaOH en THF produjoCVie219.

Síntesis de derivados con grupos amina primarios a partir del precursor 6 mediante reacción de metátesis con aminas protegidas con Boc seguida de desprotección con Boc

Para la síntesis de los derivados con un grupo amina primaria como sustituyente X en la fórmula (I), se llevó a cabo una reacción de metátesis cruzada en el precursor 6 utilizando las mismas condiciones experimentales descritas anteriormente para la síntesis de CVie201 y CVie202.

Brevemente, se añadió un catalizador Hoveyda-Grubbs de segunda generación a una solución de androstano-3-metileno-17-ona 6 en DCM. A continuación, la androstano-3-metileno-17-ona 6 se combinó con un grupo exo-metileno con la amina protegida con Boc apropiada (por ejemplo, pent-4-en-1-ilo carbamato de terc-butilo oN-Boc-4-pentino-1-amina)para producir los diastereoisómeros 25 (rendimiento del 25%). El compuesto 25 (50 mg, 0,1 mmol, 1 eq) se trató con 500 pl de una mezcla 1:1 TFA/DCM ácido trifluoroacético en DCM) y se agitó a temperatura ambiente para escindir directamente el grupo Boc. Tras agitar a temperatura ambiente durante 1 minuto, la reacción se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (3x30ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó a sequedad para producir (EZ)-3-(4-aminobutiliden]-6alfa-hidroxidrostano-17-ona (CVie209) como sólido blanco (28 mg, 75%).

Alternativamente, la reacción del compuesto 25 con yoduro de trimetilsililo en disolvente alcohólico (por ejemplo, MeOH) dio lugar a la escisión de Boc acompañada de la migración del doble enlace exocíclico para producir CVie207, que tiene un doble enlace endocíclico entre C2 y C3. Brevemente, se añadió 1M TMSI en DCM (100 pl, 0,1 mmol, 1 eq.) a una solución de diastereoisómeros 25 (50 mg, 0,1 mmol, 1eq.) a temperatura ambiente. Tras agitar 2 h a la misma temperatura, el disolvente se eliminóal vacío.Se añadió metanol (2 ml) al residuo y se dejó durante 1h a temperatura ambiente. Tras la eliminación del disolventeal vacío, se obtuvo CVie207 sin purificación adicional.

Síntesis de derivados de aminas cíclicascon insaturaciones exocíclicas:CVie205, CVie206, CVie210 y CVie211

Los derivados de amina cíclica se sintetizaron mediante una reacción de Wittig de hidruro de sodio (NaH)-DMSO como se ha descrito anteriormente paraCVie203yCVie204utilizando una sal de fosfonio N-protegida apropiada, tal como yoduro de N-Boc-4-(2-trifenilfosfonioetil)azetidina para producir los compuestos26y27o yoduro deN-Boc3-(2-trifenilfosfonioetil)piperidina para producir los compuestos28y29. Tras la purificación de la mezcla diastereoisomérica, el grupo N-Boc se escindió por hidrólisis ácida con TFA para producirCVie205,CVie206,CVie210yCVie211.

Síntesis de CVie208 con una insaturación endocíclica (migración del doble enlace C=C durante la desprotección de Boc)

El tratamiento posterior de los compuestos28y29con TMSI como se ha descrito anteriormente para la síntesis deCVie207produjoCVie208.

Hidrogenación y escisión de Boc con TFA para producir CVie212

Alternativamente, la hidrogenación catalítica (H2, Pd-C, EtOAc) de los dobles enlaces de los compuestos28y29para sintetizar el compuesto30seguido de escisión de Boc con TFA en DCM produjoCVie212.

La síntesis de los compuestos que llevan una 6-alfa-hidroximetillandrostano-7,17-diona se logró partiendo del intermediario común37. El propio compuesto37se sintetizó a partir de la 4-androsteno-3,17-diona31, mediante protección de los dos átomos cetónicos por el acetal cíclico32y migración simultánea del doble enlace, oxidación de la posición alílica por dicromato de sodio33, formación del éter silil enol35, hidroximetilación con Me3Al y formaldehído(36) y escisión final de los acetales en condiciones ácidas. La síntesis se describe con más detalle en los siguientes pasajes.

Síntesis del compuesto 32: (20S,7R)-7,20-dimetildispiro[1,3-dioxolano-2,5'-tetraciclo[88.7.0.0<2J>.0<11,15>]heptadecano-14',2"-1,3-dioxolano]-12-eno

Una mezcla de androst-4-eno-3,17-diona31(400,0 g, 1,4 mol) y PTSA-H2O (13,3 g, 70,0 mmol) en etilenglicol (8,0 l) se agitó a 100 °C hasta que la reacción fue clara. Se destilaron al vacío aproximadamente 5,0 L de glicol, de modo que la temperatura de ebullición se situara en torno a 80-85 °C. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente. La mezcla se ajustó a pH~9. A continuación, se vertió la mezcla en agua helada. La mezcla se filtró y el sólido se lavó con agua, se recogió y se trituró con acetona para obtener el compuesto32bruto (469,0 g, 89%) como un sólido amarillo.

Síntesis del compuesto 33: (20S,7R)-7,20-dimetildispiro[1,3-dioxolano-2,5'-tetraciclo[8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-14',2 "-1,3-dioxolano]-12-en-14-ona

32 33

Una mezcla del compuesto 32 (440,0 g, 1,2 mol), HOSU (541,2 g, 4,7 mol) y Na<2>Cr<2>O<7>H<2>O (527,5 g, 1,8 mol) en acetona (8,0 l) se agitó vigorosamente a 50 °C durante 2 días. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se extinguió con solución acuosa de Na2SO3 y se agitó durante 20 min. La mezcla se vertió en agua helada. La mezcla resultante se agitó durante 20 min y después se filtró. El filtrado sólido se lavó con agua, se recogió y se secó al vacío para obtener el compuesto 33 bruto (390,0 g, 85%) como un sólido amarillo.

Síntesis del compuesto 34: (7S,20S)-7,20-dimetildispiro[1,3-dioxolano-2,5'-tetraciclo[8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-14',2 "-1,3-dioxolano]-14-ona

3334

Se añadió una mezcla del compuesto 33 (50,0 g, 128,9 mmol) en EtOAc (1250 ml) a Pd/C (16,0 g). A continuación, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche bajo H2. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se filtró, se concentró y se purificó por cromatografía flash (PE/eA = 2/1) para obtener el compuesto 34 (25,0 g, 50,0%) como sólido blanco.

Síntesis del compuesto 35: 1-((20S,7R)-7,20-dimetildispiro[1,3-dioxolano-2,5'-tetraciclo[8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-14',2 "-1,3-dioxolano]-13-en-14-iloxi)-1,1-dimetil-1-silaetano

Una mezcla del compuesto 34 (20,0 g, 51,3 mmol) en THF seco (100,0 ml) se agitó a -78 °C y después se añadió gota a gota 1,5 M LDA en tolueno (205,2 ml, 307,8 mmol). Tras agitar a la misma temperatura durante 1 h, se añadió gota a gota Me3SiCl (50,0 ml, 400,1 mmol). Tras agitar a -70 °C durante 3 h, se elevó la temperatura a -30 °C y se añadió trietilamina (33,5 g, 331,5 mmol). Tras agitar a la misma temperatura durante 1 h, la mezcla se calentó a temperatura ambiente y se añadieron agua (200,0 ml) y EtOAc (100,0 ml). La fase acuosa separada se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron a sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía flash (PE/EA = 2/1) para obtener el compuesto 35 (14,3 g, 60,3 %) como un sólido blanco.

Síntesis del compuesto 36: (13S,20S,7R)-13-(hidroximetil)-7,20-dimetildispiro[1,3-dioxolano-2,5'-tetraciclo[8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-14;2"-1,3-dioxolano]-14-ona

Se añadió gota a gota una mezcla de 2,6-difenilfenol (10,0 g, 27,6 mmol) en DCM seco (450,0 ml) a una solución de Me3Al en tolueno (41,4 ml, 82,9 mmol) mientras se enfriaba con un baño de hielo/agua de modo que la temperatura no superara la temperatura ambiente. Tras agitar a temperatura ambiente durante 1 h, la solución se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota una solución de trioxano (24,8 g, 276,0 mmol) en DCM seco (100,0 ml). La solución de color amarillo claro se agitó durante 1 h más a 0 °C y después la temperatura se enfrió hasta -78 °C. Se añadió una solución del compuesto35(10,0 g, 27,6 mmol) en DCM seco (125 ml). Tras agitar a -78 °C durante 1 h, la temperatura se elevó a -20 °C y la mezcla de reacción se agitó a esa temperatura durante toda la noche. Se añadió NaHCO<3>acuoso (85,0 ml) a temperatura ambiente. La mezcla gelatinosa se filtró a través de una almohadilla CELITE® lavando exhaustivamente con DCM. La capa orgánica separada se lavó con agua y se evaporó. Se añadió al residuo aproximadamente 1M de TBAF en THF (24,0 ml) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. La solución se lavó con agua, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó a sequedad. El residuo se purificó por cromatografía flash para dar el compuesto36(6,5 g, 71,4%) como un sólido amarillo.

Síntesis del compuesto 37: (6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetildecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3,7,17(2H,4H,8H)-triona

Se añadió una mezcla del compuesto36(8,0 g, 19,0 mmol) en acetona (100,0 ml) a HCl acuoso al 10% (50,0 ml). A continuación, la mezcla se calentó a 70 °C durante 1 h. La<t>L<c>mostró que la reacción se había completado. La mezcla se inactivó con 5% NaOH acuoso y se extrajo con DCM (50,0 ml * 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50,0 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, se concentraron y se purificaron por cromatografía flash (DCM/EA = 4/1) para obtener el producto bruto, que se trituró con éter para obtener el producto puro37(3,3 g, 52,4 %) como un sólido blanco.

Síntesis del compuesto 38: (13S,14S,20S,7R)-13-(hidroximetil)-7,20-dimetildispiro[1,3-dioxolano-2,5'-tetraddo[8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-14',2"-1,3-dioxolano]-14-ol

Se añadió lentamente NaBH4 (4,0 g, 104,8 mmol) a una mezcla de compuesto36(22,0 g, 52,4 mmol) en MeOH (1000,0 ml) a 0 °C. A continuación, la mezcla se agitó a TA durante 1 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se extinguió con NaH2PO4 acuoso al 5% (220,0 ml) y se extrajo con DCM (300,0 ml * 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (200,0 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, se concentraron y se purificaron por cromatografía flash (D<c>M/EA = 4/1) para obtener el producto bruto, que se trituró con éter para obtener el compuesto38(7,5 g, 34,1 %) como un sólido blanco.

Síntesis del compuesto 39: (8S,9S,15S,2R)-9-hidroxi-8-(hidroximetil)-2,15-dimetiltetraddo[8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-5,14-diona

Se añadió HCl acuoso al 10% (35,0 ml) a una mezcla del compuesto38(5,7 g, 13,5 mmol) en acetona (70,0 ml). A continuación, la mezcla se calentó a 70 °C durante 1 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se extinguió con NaOH acuoso al 5% y se extrajo con DCM (50,0 ml * 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía flash (DCM/eA = 4/1) para obtener el producto bruto, que se trituró con éter para obtener el producto puro39(1,8 g, 40,0 %) como un sólido blanco.

Síntesis del compuesto 40: terc-butil-(2-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxododecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,10H)-ilideno)etilo)azetidina-1-carboxilato

A una solución de sal de fosfonio (2,57 g, 4,5 mmol) en THF (25 ml), se añadió una solución de n-BuLi en THF (2,5 M, 3,6 ml, 9,0 mmol) a -78 °C. La mezcla se agitó a 30 °C durante 1 hora. A continuación, se añadió el compuesto37(500 mg, 1,5 mmol) a la mezcla a -20 °C y después se calentó a 30 °C durante 2 horas. La mezcla se extinguió con n H<4>CIsat.(25 ml) y se extrajo con EtOAc (25 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (hexano/EtOAc = 1/1) para dar el compuesto bruto. El compuesto se purificó por columna inversa para obtener el compuesto puro40(60 mg, 8%) como un sólido blanco.Síntesis del compuesto 41: terc-butil-3-(2-((3S,6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxohexadecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-ilo)etil)azetidina-1-carboxilato

Se añadió Pd/C (60 mg) a la solución del compuesto40(60 mg, 0,12 mmol) en EA (3 ml). A continuación, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche bajo H2. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró para producir el compuesto41(52 mg, 86%) como un sólido blanco.

Síntesis de CVie407: (3S,6S,10R,13S)-3-(2-(azetidin-3-ilo)etilo)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetildodecahidro-lH-ciclopenta[a]fenantreno-7,17(2H,8H)-diona

Una solución del compuesto41(52 mg, 0,10 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se diluyó con NaHCO3sat.para ajustar el pH a 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCvie407(13 mg, 32%) como un sólido blanco.

Síntesis del compuesto 42: terc-butil-3-((E)-2-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxododecahidro-H-ciclopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,10H)-ilideno)etil)azetidina-1 -carboxilato

Se añadió una solución de n-BuLi en THF (2,5 M, 0,7 ml, 1,80 mmol) a una solución de sal de fosfonio compuesta (514 mg, 0,90 mmol) en THF (5 ml) a -78 °C. La mezcla se agitó a 40 °C durante 1 hora. A continuación, se añadió el compuesto39(100 mg, 0,30 mmol) a la mezcla a 0 °C y después se calentó a 40 °C durante la noche. La reacción se repitió nueve veces. La mezcla se extinguió con NH4Clsat.(80 ml) y se extrajo con EtOAc (100 m * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuesto42(20 mg, 1%) como un sólido amarillo.

Síntesis de CVie403: (6S,10R,13S)-3-(2-(azetidin-3-ilo)etilideno)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetildodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-7,17(2H,8H)-diona

La solución del compuesto40(130 mg, 0,26 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se basificó con NaHCO3sat.hasta pH 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (30 ml *3). La capa orgánica combinada se concentró y el residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie403(13 mg, rendimiento 13%) como un sólido amarillo.

Síntesis del compuesto 43: 3-(2-((6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-17-oxohexadecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-il)etil)azetidina-1-carboxilato

Una mezcla del compuesto42(20 mg, 0,04 mmol), Pd/C (10%, 20 mg) y Pd(OH)2 (20%, 20 mg) en EtOAc (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante una noche bajo H2 (en globo). La mezcla se filtró y el filtrado se concentró para dar el compuesto43bruto (20 mg, 100%) como un sólido marrón.

Síntesis de CVie408: (6S,7S,10R,13S)-3-(2-(azetidin-3-ilo)etilo)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetiltetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-17(2H)-ona

Una mezcla del compuesto43(20 mg, 0,04 mmol) en TFA/DCM (1:1, 2 ml) se agitó a 0 °C durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con NaHCO3sat.para ajustar el pH a 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie408(6,4 mg, 40%) como un sólido amarillo.

Síntesis del compuesto 44: terc-butil-3-(2-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxododecahidro-1H-cidopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,10H)-ilideno)etil)pirrolidina-1 -carboxilato

Se añadió una disolución de n-BuLi en THF (2,5M, 1,57 ml, 3,94 mmol) a una disolución de sal de fosfonio compuesta (1,5 g, 2,62 mmol) en THF (15 ml) a -78 °C. La mezcla de reacción se agitó a 35 °C durante 1 hora. A continuación, se añadió una solución del compuesto37(350 mg, 1,05 mmol) a la mezcla a -20 °C y se calentó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se extinguió con NH4Clsat.(25 ml) y se extrajo con EtOAc (25 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó mediante cromatografía flash (hexano:EA = 1:1) para dar el compuesto bruto. A continuación, el compuesto se purificó mediante columna inversa para obtener el compuesto puro44(53 mg, 10%) como un sólido blanco.

Síntesis de CVie402: (6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(2-(pirrolidin-3-il)etihden)dodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-7,17(2H,8H)-diona

Una solución del compuesto44(89 mg, 0,173 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se diluyó con NaHCO3sat.para ajustar el pH = 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml *3). La capa orgánica combinada se concentró y el residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie402(38 mg, 53%) como un sólido blanco.

Síntesis del compuesto 45: terc-butil-3-(2-((3S,6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxohexadecahidrolH-ciclopenta[a]fenantreno-3-ilo)etilo)pirrolidina-1-carboxilato

Se añadió una solución del compuesto44(53 mg, 0,103 mmol) en EA (3 ml) a Pd/C (60 mg). A continuación, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche bajo H2. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró para producir el compuesto45(50 mg, 94%) como un sólido blanco.

Síntesis de CVie409: (3S,6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(2-(pirrolidin-3-ilo)etilo)dodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-7,17(2H,8H)-diona

[Una solución del compuesto45(50 mg, 0,09 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se diluyó con NaHCO<3>sat.para ajustar el pH a 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie409(12 mg, 32%) como un sólido blanco.

Síntesis del compuesto 46: terc-butil-3-(2-((6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-17-oxododecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,1oH)-ilideno)etil)pirrolidina-1-carboxilato

Se añadió una disolución de n-BuLi en THF (2,5 M, 0,7 ml, 1,80 mmol) a una disolución de sal de fosfonio compuesta (527 mg, 0,90 mmol) en THF (5 ml) a -78 °C. La mezcla de reacción se agitó a 35 °C durante 1 hora. A continuación, se añadió el compuesto39(100 mg, 0,30 mmol) a la mezcla a 0 °C y después se calentó a 35 °C durante la noche. La reacción se repitió cuatro veces. La mezcla se extinguió con NH<4>Clsat.(80 ml) y se extrajo con EtOAc (100 m * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó por prep-HPLC para dar el compuesto46(26 mg, 3%) como un sólido blanco.

Síntesis del compuesto 47: terc-butil-3-(2-((6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-17-oxohexadecahidro- 1H-cidopenta[a]fenantreno-3-ilo)etilo)pirrolidina-1 -carboxilato

Una mezcla del compuesto46(26 mg, 0,05 mmol), Pd/C (10%, 30 mg), y Pd(OH)2 (20%, 30 mg) en EtOAc (3 ml) se agitó a temperatura ambiente durante la noche bajo H2 (en globo). La mezcla se filtró y el filtrado se concentró para dar el compuesto bruto47(26 mg, 100%) como un sólido amarillo.

Síntesis de CVie410: (6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(2-(pirrolidina-3-ilo)etilo)tetradecahidro- 1H-ciclopenta[a]fenantreno- 17(2H)-ona

Una solución del compuesto47(26 mg, 0,05 mmol) en TFA/DCM (1:2, 2 ml) se agitó a 0 °C durante 1 hora. La mezcla se diluyó con NaHCO3sat.para ajustar el pH a 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (20 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie410(9 mg, 43%) como un sólido amarillo.

Síntesis del compuesto 48: terc-butil-4-(2-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxododecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,10H)-ilideno)etilo)piperidina-1-carboxilato

Se añadió una disolución de n-BuLi en THF (2,5 M, 2,90 ml, 7,20 mmol) a una mezcla de sal de fosfonio compuesta (2,16 g, 3,60 mmol) en THF (16 ml) a -78 °C. La mezcla de reacción se agitó a 30 °C durante 1 hora. A continuación, se añadió el compuesto37(400 mg, 1,20 mmol) a la mezcla a -20 °C. La mezcla se agitó a -20 °C durante 30 minutos y después se calentó a 30 °C durante 2 horas. La mezcla se extinguió con NH4Clsat.(15 ml) y se extrajo con EtOAc (30 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó por prep-HPLC para dar el compuesto48(28 mg, 4%) como un sólido amarillo.

Síntesis de CVie405: (6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(2-(pipen'dina-4-ilo)etilideno)dodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-7,l7(2H,8H)-diona

Una solución del compuesto46(80 mg, 0,152 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se basificó con NaHCO3sat.hasta pH = 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml *3). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie405(30 mg, 46%) como un sólido amarillo.

Síntesis del compuesto 49: terc-butil-4-(2-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxohexadecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3-ilo)etilo)piperidina- 1-carboxilato

Una mezcla del compuesto48(28 mg, 0,05 mmol) y Pd/C (10%, 50 mg) en EtOAc (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante la noche bajo H<2>(en globo). La mezcla se filtró y el filtrado se concentró para dar el compuesto49bruto (28 mg, 100%) como un sólido amarillo.

Síntesis de CVie411: (6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(2-(pipen'dina-4-ilo)etilo)dodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-7,17(2H,8H)-diona

Una solución del compuesto49(28 mg, 0,05 mmol) en TFA/DCM (1ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con NaHCO3sat.para ajustar el pH a 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie411(10 mg, 43%) como un sólido amarillo.

Síntesis del compuesto 50: terc-butil-4-(2-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxododecahidro-1H-ddopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,10H)-ilideno)etil)piperídina-1 -carboxilato

Se añadió n-BuLi en THF (2,5 M, 0,70 ml, 1,80 mmol) a una solución de sal de fosfonio (540 mg, 0,90 mmol) en THF (5 ml) a -78 °C. La mezcla de reacción se agitó a 40 °C durante 1 hora. A continuación, se añadió el compuesto39(100 mg, 0,30 mmol) a la mezcla a 0 °C y después se calentó a 40 °C durante 2 horas. La reacción se repitió cinco veces. La mezcla se extinguió con NH4Clsat.(80 ml) y se extrajo con EtOAc (100 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó por prep-HPLC para dar el compuesto50bruto (35 mg, 4%) como un sólido blanco.

Síntesis del compuesto 51: terc-butil-4-(2-((6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-17-oxohexadecahidro- 1H-cidopenta[a]fenantreno-3-ilo)etilo)piperidina-1 -carboxilato

Una mezcla del compuesto50(35 mg, 0,07 mmol), Pd/C (10%, 40 mg), y Pd(OH)2 (20%, 40 mg) en EtOAc (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante la noche bajo H2 (en globo). La mezcla se filtró y el filtrado se concentró para dar el compuesto bruto51(35 mg, 100%) como un sólido marrón.

Síntesis de CVie412: (6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(2-(pipen'dina-4-ilo)etilo)tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-17(2H)-ona

La solución del compuesto51(35 mg, 0,07 mmol) en TFA/DCM (1:2, 2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con NaHCO<3>sat.para ajustar el pH a 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie412(13 mg, 46%) como un sólido amarillo.

Síntesis del compuesto 52: terc-butil((E)-5-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxododecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,10H)-ilideno)pentilo)(metil)carbamato

A una mezcla de yoduro de N-Boc-N-metil-5-trifenilfosfoniopentenamina (4,26 g, 7,23 mmol) en THF (50 ml), se añadió gota a gota n-BuLi (3,18 ml, 7,95 mmol) a -78 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 20 minutos. Después, la mezcla se enfrió a -30 °C. A continuación, se añadió el compuesto37(800 mg, 2,41 mmol) a la mezcla de reacción. La mezcla se agitó a TA durante toda la noche. La mezcla de reacción se extinguió con H2O y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (PE/EtOAc = 1/2) y luego se purificó por prep-HPLC para producir el compuesto52(36 mg, 200 mg) como aceite incoloro.

Síntesis de CVie401: (6S,10R,13S,E)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(5-(metilamino)pentilideno)dodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-7,17(2H,8H)-diona

Una mezcla del compuesto52(60 mg,0,116 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después, la mezcla se concentró y se diluyó con EtOAc, se lavó con Na2CO3 sat. se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para producir el compuestoCVie401(38 mg, 79%) como aceite amarillo.

Síntesis del compuesto 53: terc-butil(5-((6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-17-oxododecahidro-1H-cidopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,10H)-ilideno)pentilo)(metil)carbamato

A una mezcla de yoduro de N-Boc-N-metil-5-trifenilfosfoniopentenamina (4,39 g, 7,45 mmol) en THF (45 ml), se añadió gota a gota a -78°C una solución de nBuLi en THF (4,46 ml, 2,5 N, 11,16 mmol). Después, la mezcla se agitó a 0°C durante 20 min. La mezcla se enfrió a -50°C y se añadió el compuesto39(830 mg, 2,48 mmol). La mezcla se agitó a TA durante toda la noche. La mezcla se inactivó con H2O, se concentró y se purificó por cromatografía en columna (PE/EtOAc = 1/1) y después se purificó por prep-HPLC para dar el compuesto53(80 mg, 300 mg) como un sólido blanco.

Síntesis de CVie406: (6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(5-(metilamino)pentildeno)tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-17(2H)-ona

Una solución del compuesto53(80 mg, 0,155 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. La mezcla se basificó con NaHCO<3>sat.hasta pH = 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml *2). La capa orgánica combinada se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró. El residuo se purificó por prep-HPLC para dar el compuestoCVie406(60 mg, 94%) como un sólido amarillo.

Los siguientes ejemplos ilustran mejor la presente invención.

Ejemplo 1:Preparación de los compuestos de la fórmula (I)

En los siguientes ejemplos, los compuestos químicos, disolventes, reactivos y cualquier otro material proceden de fuentes comerciales, salvo que se indique lo contrario. En general, los compuestos de la fórmula(I) se prepararon mediante síntesis de diversas etapas a partir de dehidroepiandrosterona (prasterona). La dehidroepiandrosterona es un producto comercial o puede prepararse de acuerdo con procedimientos bien conocidos a partir de la 4-androsteno-3,17-diona (androstenediona).

Preparación de 5a-Andmstano-3p,6a,17@-triol

Un intermediario adecuado para la síntesis de 6-a-3,17 androstanediona(2) se produjo a partir de dehidroepiandrosterona1por hidroboración seguida de oxidación como se describe en De Munari, et al. (J. Med. Chem. 2003, 46(17):3644-3654). Brevemente, una solución de dehidroepiandrosterona1(5 g, 17,5 mmol, 1 eq.) en THF (85 ml) se agitó a -20 °C bajo Ar. A continuación, se añadió a la solución agitada complejo BH3^ THF1M en THF (44 ml, 44 mmol, 2,5 eq.) y se continuó agitando a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadió cuidadosamente H2O gota a gota (85 m) y a continuación se añadió gota a gota NaBO3^ 4H2O (5,4 g, 35 mmol, 2 eq). Tras agitar a temperatura ambiente durante toda la noche, se filtró la mezcla. El sólido se lavó con THF y luego se desechó. Los destilados se saturaron con NaCl y se extrajeron con THF (3 x 40 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre NaCl y Na2SO4, se filtraron y se evaporaron a sequedad. El producto bruto 5a-Androstano-3p,6a,17p-triol2se cristalizó de EtOAc/MeOH (2/1, 10 ml/g) para dar un sólido blanco (3,8 g, 70%).

Datos espectroscópicos del 5a-Androstano-3p,6a,17|3-triol2: 1H RMN (DMSO-d6) 54,44 (m, 1H, OH), 4,42 (m, 1H, OH), 4,24 (d, 1H, OH), 3,42 (dt, 1H, 16-Ha), 3,26 (m, 1H, 3-H), 3,12 (m, 1H, 6-H), 0,72 (s, 3H, CH<3>), 0,60 (s, 3H, CH<3>). p.f. 232-234 °C.

Preparación de 6a-hidroxiandrostano-3,17-diona

El intermediario3se obtuvo a partir de2por oxidación selectiva en las posiciones C3 y C17. Se añadió NBS (3,4 g, 19,5 mmol, 3 eq) a una disolución agitada de 5a-Androstano-3p,6a,17p-triol2(2 g, 6,5 mmol, 1 eq) en dioxano/H2O/piridina (54/10/1 ml) a 0°C. Tras la adición, la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La solución naranja se diluyó con agua (50 ml) y se inactivó con Na2S2O3 (350 mg). El disolvente orgánico se evaporó al vacío hasta que apareció un sólido blanco. El sólido se filtró y se lavó con agua. Tras secar a 40 °C, se obtuvo 6a-hidroxiandrostano-3,17-diona3como un sólido blanco (1,3 g, 70%).

Datos espectroscópicos de 6a-hidroxiandrostano-3,17-diona3: 1H RMN (acetona-d6) 53,61 (d, 1H, OH), 3,48 (m, 1H, 6-H), 1,11 (s, 3H,CHs), 0,86 (s, 3H,CHs). p.f. 204-206 °C lit.

206-207 (Hammerschmidt & Spiteller, 1973)

Síntesis de adrostano-3-metileno-17-ona

La 6-a-3,17 androstanediona3se convirtió entonces en el derivado exo-metano6(adrostano-3-metileno-17-ona) mediante una reacción de Wittig selectiva sobre el carbonilo C3 seguida del acoplamiento por metátesis cruzada con ácido 5-pentenoico a una suspensión de bromuro de metiltrifenilfosfonio (1,66 g, 6 mmol, 4 eq.) en THF (10 ml) a -5°C se añadió t-BuOK (670 mg, 6 mmol, 4 eq.). La solución cambió inmediatamente de color a naranja brillante. Transcurridos 10 minutos, se añadió 6a-hidroxi androstano-3,17-diona3(450 mg, 1,5 mmol, 1 eq.) mientras se mantenía la temperatura por debajo de 0°C. Inmediatamente después de la adición, la reacción se extinguió mediante la adición de solución acuosa de HCl 1M (15 ml) y se extrajo con EtOAc (3x20ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na<2>SO<4>y se evaporaron a sequedad. Los extractos brutos se purificaron mediante cromatografía en columna (eluyente EtOAc: Éter de petróleo 4:6) para producir 376 mg (83%) de adrostano-3-metileno-17-ona6como una espuma blanca.

Datos espectroscópicos de adrostano-3-metileno-17-ona6:

1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 54,63 (dt, 2H, 3a-CH2), 3,47 (td, 1H, 6-H), 2,55 (ddd, 1H, 16Ha), 2,44 (ddd, 1H, 16-Hb), 0,89 (s, 3H,CHs), 0,86 (s, 3H,CHs), 0,80 - 0,70 (m, 1H, 5-H).

13C RMN (101 MHz, cloroformo-d) 5220,79 (17-C), 148,22 (3-C), 107,40 (<3>-CH<2>), 69,85 (6-C), 13,79 (CH<3>), 12,91 (CH<3>).

Síntesis directa de CVie 201 y 202 a partir del precursor 6 por metátesis cruzada

Se añadió catalizador Hoveyda-Grubbs de segunda generación (12 mg, 0,015 mmol, 0,05 eq.) a una solución de androstano-3-metileno-17-ona6(100 mg, 0,33 mmol, 1 eq) en DCM (1 ml). A continuación, la solución se calentó a reflujo y se trató con 10 pl de ácido 4-pentenoico cada 20 minutos (total 330 pl, 3,3 mmol, 10 eq.). Una vez finalizada la adición, la mezcla se sometió a reflujo durante 2 h más. La mezcla de reacción se concentróin vacuoy se purificó mediante cromatografía flash (Eluyente Acetona: éter de petróleo 3:7+0.1% HCO<2>H) para obtener dos sólidos blancos diferentes (E)-4-(ácido 6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-ilideno)butírico (4,8 mg, 4%)(CVie201) y ácido (Z)-4-(6-alfahidroxi-17-oxoandrostano-3-ilideno)butírico (7,2 mg, 6%)(CVie202).

Datos espectroscópicos deCVie201:

1H RMN (cloroformo-d) 55,10 (t, J = 7,3 Hz, 1H, 3a-H), 3,50 (td, J = 10,3, 9,8, 6,0 Hz, 1H, 6-H), 2,91 (d, 1H, 16-Ha), 0,89 (s, 3H,CHs), 0,86 (s, 3H,CHs), 0,73 (m, 1H, 5-H).

13C RMN (101 MHz, cloroformo-d) 5221,30 (17-C), 178,72 (CO<2>), 139,71 (3-C), 119,89(3a-C), 69,95(6-C), 54,03 (5-C), 24,03 (16-C), 13,93(CHs), 13,06(CHs).

MS (ESI) calculado para C<23>H<33>O<4>M-] 373,2. Hallado: 373,4

Datos espectroscópicos deCVie202:

1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 5,10 (t, 1H, 3a -H), 3,50 (td, 1H, 6-H), 2,91 (d, 1H, 16-Ha), 0,89 (s, 3H,CH3), 0,86 (s, 3H,CH3), 0,73 (t, 1H, 5-H).

13C RMN (101 MHz, cloroformo-d) 5220,86 (17-C), 177,66 (CO<2>), 139,84 (C-3), 119,47 (Ca), 70,08 (C-6), 13,78(CH3), 12,91 (CH<3>).

Alternativamente,CVie201yCVie202se obtuvieron variando la reacción de Wittig. En un procedimiento (Vía A), se estabilizó un intermediario de betaína mediante el uso de un disolvente polar, como DMSO, y una base, como NaH. El segundo enfoque (Vía B) permitió la estabilización de un intermediario ciclo-oxafosfetano utilizando un disolvente aprótico, como THF, como base. La vía A produjo una mezcla de diastereómeros (60% de Z/synCVie202; 30% E/antiCVie201), mientras que la vía B proporcionóCVie202derivado del intermediario ciclo-oxafosfato. Cualquiera de los dos procedimientos requiere la producción de los diastereómeros7y/o8como se describe a continuación.

Síntesis alternativa de los CVie 201 y 202 mediante la reacción de Wittig

Se añadió cuidadosamente NaH 60% en aceite mineral (100 mg, 2,56 mmol, 8 eq.) a DMSO seco (1 ml) bajo atmósfera de Ar. La solución resultante se agitó a 60°C durante 20 minutos. Tras enfriar a temperatura ambiente, se añadió bromuro de (3-carboxipropil)trifenilfosfonio (550 mg, 1,28 mmol, 4 eq.). Inmediatamente apareció un color naranja brillante. La solución se agitó durante 2 h. A continuación, se añadió a la mezcla 6a-hidroxiandrostano-3,17 diona3(100 mg, 0,32 mmol, 1 eq.). Se permitió que la solución resultante se agitara a temperatura ambiente durante 4 h más. La mezcla de reacción diluida con EtOAc (25 ml) se lavó con HCl 1M acuoso (3 * 30 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a sequedad obteniéndose 25 mg de material bruto.

El material bruto se disolvió primero en MeOH (1,5 ml), seguido de la adición de clorhidrato de EDC (115 mg, 0,6 mmol, 2eq.) y DMAP (5 mg, 0,03 mmol, 0,1 eq.). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Tras la concentraciónal vacío.El sólido bruto se disolvió en EtOAc (15 ml) y se lavó con HCl 1M acuoso (3 x 10 ml). El producto bruto se purificó mediante cromatografía flash sobre gel de sílice (Acetona:Pet.Sp 3:7) para obtener 25 mg de un aceite límpido (20%) que comprende una mezcla de diastereoisómeros7y8.

Datos espectroscópicos para los dos diastereoisómeros7y8:

1H RMN (cloroformo-d) 55,16-4,96 (m, 1H, 3a-H), 3,66 (s, 3H,CHsO), 3,47 (m, 1H, 6-OH), 0,89 (s, 3H,CHs), 0,86 (s, 3H,CHs), 0,74 (m, 1H, 5-H).

Se añadió cuidadosamente una solución 1M de LiHMDS en THF (40 ml, 40 mmol, 12 eq.) a una suspensión seca de THF (33 ml) de bromuro de (3-carboxipropil)trifenilfosfonio (8,5 g, 20 mmol, 6 eq.) en atmósfera de Ar a -40°C. Se agitó la solución a -40°C hasta que apareció un color naranja brillante. A continuación, se añadió 6a-hidroxiandrostano-3,17 diona3(1 g, 3,3 mmol, 1 eq.) a la solución a -40°C. Después de agitar a temperatura ambiente durante toda la noche, la mezcla de reacción se inactivó con solución acuosa de 6a-hidroxiandrostano-3,17 diona 3 (1 g, 3,3 mmol, 1 eq.). Se extrajo HCl 1M (300 ml) con EtOAc (3 x350 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na<2>SO<4>y se evaporaron a sequedad.

El material bruto se disolvió en EtOH absoluto (17 ml) y después se añadieron clorhidrato de EDC (1,26 mg, 6,6 mmol, 2 eq.) y DMAP (50 mg, 0,3 mmol, 0,1 eq.). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción diluida con EtOAc (25 ml) se lavó con HCl 1M acuoso (3 x<3 0>ml). El producto bruto se purificó mediante cromatografía flash sobre gel de sílice (Acetona:Pet.Sp 3:7) para obtener 910 mg (72%) del compuesto8.

Datos espectroscópicos del compuesto8:

1H RMN (cloroformo-d) 5 5,07 (t, 1H, 3a-H), 4,10 (q, 2H,OCH2), 3,47 (td, 1H, 6-H), 2,91 (d, 1H), 0,88 (s, 3H,CHs), 0,85 (s, 3H,CHs), 0,71 (m, 1H, 5-H).

13C RMN (101 MHz, cloroformo-d) 5 173,67 (17-C), 139,60 (3a-C), 119,94(3-C), 69,98 (6-C), 60,41 (<0>CH<2>), 51,33 (5-C), 40,37 (CH<3>), 13,92 (CH<3>), 13,08 (CH<3>).

Hidrólisis final de ésteres metílicos (o etílicos)

Se añadió una solución acuosa de LiOH 1M (150 pl, 2,5 eq.) a una solución de los ésteres metílicos7y8(25 mg, 0,06 mmol, 1eq.) en THF (600 pl) y agua (200 pl). Tras 2h, la reacción se diluyó con agua (10 ml) y se extinguió añadiendo HCl 1M hasta que la solución alcanzó pH 1. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 x<15>ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na<2>SO<4>y se evaporaron a sequedad. El bruto se purificó mediante cromatografía flash (AcOEt:Pet.Sp. 7:3 1 dos sólidos blancos correspondientes a los diastereoisómeros E (7 mg, 31%) y Z (12 mg, 54%) (CVie201yCVie202, respectivamente).

1H RMN (cloroformo-d) 55,12 (bt, 1H, 3a-H), 3,51-3,42 (m, 1H, 6-H), 0,90 (s, 3H,CH3), 0,86 (s, 3H,CH3), 0,79-0,69 (m, 1H, 5-H).

Vía sintética a los CVie 203 y 204: síntesis del compuesto intermediario 12

Para prepararCVie203yCVie204, el precursor12se produjo primero a partir de 6-a-3,17 androstanediona3. Los carbonilos de la 6-a-3,17 androstanediona3se protegieron como diacetales por reacción con etilenglicol en combinación con catálisis ácida (p-tSA o ácido canfosulfónico) en tolueno, obteniéndose el compuesto9. La oxidación del compuesto9con PCC u otros oxidantes dio el compuesto10, que luego se redujo con NaBH4 o KBH4 para producir el alcohol protegido11con el grupo C<6>-hidroxilo selectivamente en la configuración p. La escisión final de los diacetales cíclicos mediante tratamiento ácido como se describe en De Munari et al. (J. Med. Chem.2003, 46(17):3644-54) en acetona se obtuvo el precursor12.

Brevemente, una solución de 6a-hidroxiandrostano-3,17-diona (1,5 g, 4,9 mmol, 1 eq), etilenglicol (10,5 ml,<88>mmol, 36 eq) y PTSA (561 mg, 2,9 mmol, 0,6 eq) en tolueno (160 ml) se agitó a reflujo durante 12 h con una trampa Dean-Stark. Tras enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se neutralizó con solución acuosa de NaHCO<3>al 5%. La capa orgánica se separó y se lavó con H2O (2 * 40 ml), se secó sobre Na<2>SO<4>y se evaporó a sequedad para producir 3,3:17,17-Bis(etilendioxi)androstano-6a-ol9como un compuesto sólido blanco (1,9 g, 98%).

Datos espectroscópicos para 3,3:17,17-Bis(etilendioxi)androstano-6a-ol9:

1H RMN (DMSO-d<6>) 54,25 (d, 1H, OH), 3,88-3,70 (m,<8>H,OCH<2>), 3,11 (m, 1H,<6>-H), 0,74 (s,<3>H,CH<3>), 0,73 (s,<3>H,CH<3>). Se añadió PCC (148 mg, 0,69 mmol, 4 eq.) a una solución de 3,3:17,17-bis(etilendioxi)androstano-6a-ol (3 g, 14 mmol, 1 eq.)9y ascorbato de sodio (1,2 g, 14 mmol, 4 eq.) en CH<2>Cl<2>seco (87 ml) a 0°. La mezcla se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. La mezcla se lavó con HCl 1M acuoso (3 * 30 ml) y agua (3 * 30 ml). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO4y se evaporó a sequedad. El bruto se purificó mediante cromatografía flash sobre una columna de gel de sílice (eluyente acetona: alcohol de petróleo 2:8). Se obtuvo 3,3:17,17-bis(etilendioxi)androstano-6-ona10como un sólido blanco (1,53 g (96%)).

Datos espectroscópicos para 3,3:17,17-Bis(etilendioxi)androstano-6-ona10:

1H RMN (Acetona-d<6>) 53,97-3,76 (m,<8>H,CH<2>O), 2,19 (dd, 1H, 16-Ha), 0,84 (s, 3H,CH3), 0,75 (s, 3H,CH3).

NaBH4 (144 mg, 3 mmol, 1,2 eq) se añadió a una suspensión agitada de 3,3.: 17,17-bis(etilendioxi)androstano-6-ona10<(1>g, 2,5 mmol, 1 eq) en MeOH (13 ml) a 0 °C. Después de 2 h a 0 °C, se añadió H<2>O gota a gota (40 ml). La mezcla se extrajo con EtoAc (3 * 40 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron a sequedad para dar un sólido blanco, que fue 3,3:17,17-Bis(etilendioxi)androstano-6p-ol11(915 mg, 92%).

Datos espectroscópicos para 3,3:17,17-Bis(etilendioxi)androstano-6p-ol11:

1H RMN (acetona-d<6>) 53,95-3,75 (m,<8>H,OCH<2>), 3,70 (m, 1H,<6>-H), 3,33 (d, 1H,<6>-OH), 1,05 (s, 3H,CH3), 0,84 (s, 3H,CHs).

Se añadió PTSA (2,26 g, 11,5 mmol, 5 eq) en pequeñas porciones durante 5 minutos a una solución de 3,3:17,17-bis(etilendioxi)androstano-<6>p-ol11(910 mg, 2,3 mmol, 1 eq) en acetona (46 ml). Tras agitar a temperatura ambiente durante 1 h, la solución se inactivó mediante la adición de 5% NaHCO<3>acuoso hasta pH 7. Tras agitar durante 5 minutos, apareció un sólido blanco. Los volátiles se eliminaronal vacío.La suspensión se extrajo con CH<2>Cl<2>(3 * 30 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (40 ml), se secaron sobre Na<2>SO4, se filtraron y se evaporaron. El sólido obtenido se agitó con n-hexano/EtOAc 8/2 (10 ml) durante 45 minutos y después se recogió por filtración. El sólido se secó a 45 °C durante 3 horas. Se obtuvieron 568 mg (81%) de un sólido blanco(esdecir, 6(3-hidroxiandrostano-3,17-diona12).

Datos espectroscópicos para la 6p-hidroxiandrostano-3,17-diona12:

1H RMN (DMSO-d<6>) 54,47 (d, 1H, OH), 3,57 (m, 1H,<6>-H), 1,13 (s, 3H,CH3), 0,81 (s, 3H,CH3).

Conversión de 12 en CVie final 203 y 204

A continuación se obtuvieronCVie203yCVie204a partir del precursor12mediante la reacción de Wittig utilizando los mismos procedimientos descritos anteriormente paraCVie201yCVie202. Las configuraciones en el doble enlace C3-C1' se identificaron en los dos isómeros mediante experimentos NOESY.

Brevemente, se añadió cuidadosamente NaH 60% en aceite mineral (100 mg, 2,56 mmol, 8 eq.) a DMSO seco (1 ml) bajo atmósfera de Ar. La solución resultante se agitó a 60°C durante 20 minutos. Tras enfriar a temperatura ambiente, se añadió bromuro de (3-carboxipropil)trifenilfosfonio (550 mg, 1,28 mmol, 4 eq.). Inmediatamente apareció un color naranja brillante. La solución se agitó durante 2 h. A continuación, se añadió a la mezcla 6p-hidroxiandrostano-3,17-diona12(100 mg, 0,32 mmol, 1 eq.). Se permitió que la solución resultante se agitara a temperatura ambiente durante 4 h más. La mezcla de reacción diluida con EtOAc (25 ml) se lavó con HCl ac. 1M (3 x 30 ml). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>y se evaporó a sequedad para obtener 25 mg de material bruto.

A continuación, el material bruto se disolvió en MeOH (1,5 ml). Se añadieron clorhidrato de EDC (115 mg, 0,6 mmol, 2 eq.) y DMAP (5 mg, 0,03 mmol, 0,1 eq.). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Tras la concentraciónal vacío.El sólido bruto se disolvió en EtOAc (15 ml) y se lavó con HCl 1M acuoso (3 x 10 ml). El producto bruto se purificó mediante cromatografía flash sobre gel de sílice (Acetona:Pet.Sp 3:7) para obtener una mezcla de diastereoisómeros13y14con un rendimiento del 17% y del 30%, respectivamente.

Datos espectroscópicos del compuesto13:

1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 5,07 (bs, 1H, 3a-H), 3,85 (d, 1H, 6-H), 3,66 (s, 3H,OCHs), 2,54 - 2,39 (m,2H, 3y-H), 1,10 (s, 3H,CHs), 0,89 (s, 3H,CHs), 0,80 - 0,69 (m, 1H, 5-H).

13C RMN (101 MHz, cloroformo-d) 5219,74 (17-C), 167,24 (CO<2>), 140,38 (3-C), 119,60 (3a-C), 71,52 (6-C), 54,45 (5-C), 51,22 (OCH<3>), 14,09 (CH<3>), 13,86 (CH<3>).

Datos espectroscópicos del compuesto14:

1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 55,07 (s, 1H, 3a-H), 3,89 (d, 1H, 6-H), 3,66 (s, 3H,OCH3), 2,46 (dd, 1H, 16-Ha), 1,10 (s, 3H,CH3), 0,89 (s, 3H,CH3), 0,79 - 0,64 (m, 1H, 5-H).

13C RMN (101 MHz, cloroformo-d) 5221,21 (17-C), 176,10 (CO<2>), 140,33 (3-C), 119,39 (3a-C), 71,75 (6-C), 54,49 (5-C), 51,20 (OCH<3>) 15,24 (CH<3>), 13,87 (CH<3>).

La mezcla de reacción se concentróal vacíoy se purificó mediante cromatografía flash (eluyente acetona: éter de petróleo 3:7+0,1% HCO2H) para obtener dos sólidos blancos diferentes (ácido (E)-4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico(CVie203)y ácido (Z)-4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico(CVie204).

Datos espectroscópicos del compuestoCVie203:

1H RMN (400 MHz,Acetona-d6) 54,84 (bt, 1H, 3a-H), 3,55 (d, 1H, 6-H), 0,90 (s, 3H,CH3), 0,61 (s, 3H,CH3), 0,51 (ddd, 1H, 5-H).

13C RMN (101 MHz, acetona-d6) 5 218,86 (17-C), 173,42(CO2), 140,74 (3-C), 119,29(3a-C), 70,18 (6-C), 14,74 (CH<3>), 13,18 (CH<3>).

Datos espectroscópicos del compuestoCVie204:

1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 55,07 (s, 1H, 3a-H), 3,88 (s, 1H, 6-H), 1,08 (s, 3H,CH3), 0,88 (s, 3H,CH3), 0,72 (s, 1H, 5-H).

13C RMN (101 MHz, acetona) 5216,39 (17-C), 173,80 (CO<2>), 135,48(3-C), 113,80 (3a-C), 66,52 (6-C), 10,07 (CH<3>), 8,70 (CH<3>).

Producción de CVie214, CVie215 y CVie217 mediante hidrogenación e hidrólisis de ésteres

El compuestoCVie217se produjo a partir de la mezcla de diastereómeros7+8descrita anteriormente. Brevemente, la hidrogenación de los dobles enlaces C3-C1' de los diastereómeros se llevó a cabo en EtOAc utilizando catálisis de Pd-C. El compuesto resultante fueCVie217. La configuración del centro estereogénico formado en C3 se identificó mediante experimentos NOESY. A continuación, el compuestoCVie217se hidrolizó con LiOH 1M o NaOH en THF para producirCVie214. De forma similar, los diastereómeros13+14se hidrogenaron en EtOAc utilizando catálisis Pd-C para producir el compuesto éster19, que luego se hidrolizó con LiOH 1M o NaOH en THF para producirCVie215. Datos espectroscópicos para el compuesto19:

<1>H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 53,83 (bs, 1H, 6-H), 3,66 (bs, 3H,OCHs), 2,44 (dd, 1H, 16-Ha), 2,28 (t, 2H, 3y-H), 0,99 (s, 3H,CHs), 0,88 (s, 3H,CHs), 0,79 - 0,70 (m, 1H, 5-H).

<13>C RMN (101 MHz, cloroformo-d) 5221,43 (17-C), 174,25 (CO<2>), 71,96 (6-C), 51,25 (OCH<3>), 15,74 (CH<3>), 13,86(CH3).

Datos espectroscópicos del compuestoCVie214:

<1>H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 53,43 (bt, 1H, 6-H), 2,44 (dd, 1H, 16Ha), 2,31 (t, 2H, 3y-H), 0,84 (s, 3H,CH<3>), 0,77 (s, 3H,CH<3>).

13C RMN (101 MHz, cloroformo-d) 5221,35 (17-C), 179,11 (CO<2>), 69,90 (6-C), 13,78 (CH<3>), 13,37(CH3) Datos espectroscópicos del compuestoCVie215:

1HRMN (400 MHz, cloroformo-d) 53,85 (s, 1H, 6-H), 2,45 (dd, 1H, 16-Ha), 2,34 (t, 2H, 3<y>-H), 1,00 (s, 3H, CH<3>), 0,89 (s, 3H, CH<3>), 0,74 (d, 1H, 5-H).

13C RMN (101 MHz, cloroformo-d) 5221,50 (17-C), 179,04 (CO<2>H), 72,03 (6-C), 15,76 (CH<3>), 13,87 (CH<3>). Datos espectroscópicos del compuestoCVie217:

1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 54,09 (q, 2H,CH2O), 3,40 (td, 1H, 6-H), 2,49 - 2,36 (dd, 1H, 16-Ha), 2,24 (t, 2H, 35-H), 0,83 (s, 3H, CH<3>), 0,76 (s, 3H,CH3).

13C RMN (101 MHz, Cloroformo-d) 5220,91 (17-C), 173,77 (CO<2>), 69,63 (6-C), 60,14 (CH<2>O), 14,23 (CH<3>), 13,76 (CH<3>), 13,36 (CH<3>).

Producción de CVie213 y CVie216 mediante reacción de Wittig seguida de hidrogenación C=C e hidrólisis de ésteres

El compuesto 6-a-3,17 androstanediona3también se utilizó como punto de partida para la síntesis deCVie213yCVie216mediante una reacción de Horner-Emmons. En primer lugar, se añadió cuidadosamente trietilfosfonoacetato (6,5 ml, 33 mmol, 5 eq) a una suspensión de NaH 60% en aceite mineral (1,3 g, 33 mmol, 5 eq) en DMF (200 ml) bajo atmósfera de Ar a 0°C. La solución resultante se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 20 minutos. A continuación, se añadió 6-a-3,17 androstanediona3(2 g, 6,5 mmol, 1 eq) a 0°C. Después de agitar toda la noche a temperatura ambiente, la reacción se inactivó añadiendo cuidadosamente H2O (100 ml) y se extrajo con Et2O (3 x 150 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4y se evaporaronal vacío.El bruto se purificó mediante cromatografía flash sobre una columna de gel de sílice (acetona: éter de petróleo 3:7) para producir 2,1 g (86%) de una mezcla oleosa límpida de dos diastereoisómeros (compuestos 21).

Datos espectroscópicos de los compuestos diastereoisómeros21:

1H RMN (Cloroformo-d) 55,60 (d,Hz, 1H, 3a-H), 4,08 (q, 2H, CH<2>O), 3,45 (dq,1H, 6-H), 2,41 (dd, 1H, 16-Ha), 0,90 (s, 3H, CH<3>), 0,82 (s, 3H, CH<3>), 0,77-0,66 (m, 1H, 5-H).

13C RMN (101 MHz, Cloroformo-d) 5220,85 (17-C), 166,81 (CO<2>), 161,87 (3-C), 113,75 (3a-C), 69,41 (6-C), 13,76 (CH<3>), 13,00 (CH<3>).

Bajo atmósfera de Ar, se añadió Pd-C al 10% (700 mg) a una solución desgasificada del diastereoisómero del compuesto21(2 g, 5,3 mmol, 1 eq) en EtOAc (200 ml). Tras tres ciclos de vacío/hidrógeno, se permitió que la reacción se agitara a temperatura ambiente durante toda la noche en atmósfera de H2. Tras eliminar el hidrógeno por vacío/ciclo de AR, la mezcla de reacción se filtró sobre CELITE®. La solución filtrada se evaporó a sequedad. El productoCVie213se obtuvo sin purificación a 1,8 g (90%). La hidrólisis posterior deCVie213con LiOH 1M o NaOH en THF produjoCVie216.

Datos espectroscópicos del compuestoCVie213:

1H RMN (Cloroformo-d) 54,12 (q, 2H, OCH<2>), 3,38 (td, 1H, 6-H), 2,42 (dd, 1H, 16-Ha), 2,27 (t, 2H, 3a-CH2), 0,82 (s, 3H, CH<3>), 0,76 (s, 3H, CH<3>).

13C RMN (101 MHz, Cloroformo-d) 5221,03 (17-C), 172,93 (CO<2>), 69,43 (6-C), 13,76 (CH<3>), 13,32(CH3). Datos espectroscópicos del compuestoCVie216:

1H RMN (400 MHz, Cloroformo-d) 53,43 (td, 1H, 6-H), 2,45 (dd, 1H, 16-Ha), 2,28 (t, 3a-H), 0,85 (s, 3H, CH<3>), 0,80 (s, 3H, CH3).

13C RMN (101 MHz, acetona) 5220,44 (17-C), 174,27 (CO<2>), 68,57 (6-C), 12,99 (CH<3>), 12,59 (CH<3>).

Producción de CVie218 y CVie219 mediante reacción de Wittig seguida de hidrogenación C=C e hidrólisis de ésteres

De forma similar, al hacer reaccionar la 6-a-3,17 androstanediona3con la sal de trifenilfosfonio adecuada (por ejemplo, bromuro de 5-carboxitrifenilfosfonio, LiHMDS, THF y luego EtOH (o MeOH)) se produjo el compuesto24. A continuación, la hidrogenación catalítica del compuesto24mediante catálisis Pd-C en presencia de hidrógeno produjoCVie218, que incluía una cadena C6 en la posición C-3. La hidrólisis deCVie218con LiOH 1M o NaOH en THF produjoCVie219.

Datos espectroscópicos del compuestoCVie218:

1H RMN (400 MHz, Cloroformo-d) 54,15 - 4,05 (m, 2H, OCH<2>), 3,40 (td, 1H, 6-H), 2,43 (dd, 1H, 16-Ha), 2,26 (td, 2H, 3<e>-H), 0,84 (s, 3H, CH<3>), 0,76 (s, 3H, CH<3>).

13C RMN (101 MHz, Cloroformo-d) 5220,91 (17-C), 173,87 (CO<2>), 69,81 (6-C), 60,14 (CH<2>O), 14,24 (CH<3>), 13,79 (CH<3>), 13,39 (CH<3>).

Datos espectroscópicos del compuestoCVie219:

1H RMN (400 MHz, Cloroformo-d) 53,47 -3,39 (bt, 1H, 6-H), 2,44 (dd, 1H, 17-Ha), 2,33 (t, 2H, 3<e>-H), 0,85 (s, 3H, CH<3>), 0,77 (s, 3H, CH<3>).

13C RMN (101 MHz, Cloroformo-d) 5221,06 (17-C), 178,93 (CO<2>), 69,91 (6-C), 13,80 (CH<3>), 13,39 (CH<3>).

Síntesis de derivados con grupos amina primarios a partir del precursor 6 mediante reacción de metátesis con aminas protegidas con Boc seguida de desprotección con Boc

Para la síntesis de los derivados con un grupo amina primaria como sustituyente X en la fórmula (I), se llevó a cabo una reacción de metátesis cruzada en el precursor 6 utilizando las mismas condiciones experimentales descritas anteriormente para la síntesis de CVie201 y CVie202.

Brevemente, se añadió un catalizador Hoveyda-Grubbs de segunda generación a una solución de androstano-3-metileno-17-ona 6 en DCM. A continuación, la androstano-3-metileno-17-ona 6 se combinó con un grupo exo-metileno con la amina protegida con Boc apropiada(por ejemplo,pent-4-en-1-il carbamato de terc-butilo oN-Boc-4-pentina-1-amina)para producir los diastereoisómeros 25 (rendimiento del 25%). El compuesto 25 (50 mg, 0,1 mmol, 1 eq) se trató con 500 pl de una mezcla 1:1 TFA/DCM ácido trifluoroacético en DCM) y se agitó a temperatura ambiente para escindir directamente el grupo Boc. Tras agitar a temperatura ambiente durante 1 minuto, la reacción se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó con EtOAc saturado. NaHCO<3>(3x30ml). La fase orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se evaporó a sequedad para producir (EZ)-3-(4-aminobutiliden]-6alfa-hidroxidrostano-17-ona (CVie209) como sólido blanco (28 mg, 75%)

Datos espectroscópicos para la mezcla de diastereoisómeros 25:<1>H RMN (400 MHz, Cloroformo-d) 55,18 - 5,03 (m, 1H, 3a -H), 3,46 (td, 1H, 6-H), 1,44 (s, 9H, t-Bu), 0,90 (d, J = 1.8 Hz, 3H, CH<3>), 0,86 (s, 3H, CH<3>), 0,74 (m, 1H, 5-H).

Datos espectroscópicos de CVie209:

<1>H RMN (400 MHz, CD<3>OD) 55,13 (d, 1H, 3a-H), 3,40 (tt, 1H, 6-H), 3,35 - 3,28 (m, 2H, 3y-H), 0,96 (s, 3H, CH<3>), 0,87 (s, 3H, CH<3>), 0,83 - 0,70 (m, 1H, 5-H).

<13>C RMN (101 MHz, CD<3>OD) 5224,41 (17-C), 143,00 (3A-C), 142,68 (3aB-C), 124,31 (3aA-C), 124,02 (3aB-C), 7275 (C-6), 16,70 (CH<3>), 15,78 (CH<3>).

Alternativamente, la reacción del compuesto 25 con yoduro de trimetilsililo en disolvente alcohólico(por ejemplo, MeOH) dio lugar a la escisión de Boc acompañada de la migración del doble enlace exocíclico para producir CVie207, que tiene un doble enlace endocíclico entre C2 y C3. Brevemente, se añadió 1M TMSI en DCM (100 pl, 0,1 mmol, 1 eq.) a una solución de diastereoisómeros 25 (50 mg, 0,1 mmol, 1eq.) a temperatura ambiente. Tras agitar 2 h a la misma temperatura, el disolvente se eliminóal vacío.Se añadió metanol (2 ml) al residuo y se dejó durante 1h a temperatura ambiente. Tras la eliminación del disolventeal vacío, se obtuvo CVie207 sin purificación adicional.

Datos espectroscópicos de CVie207:

<1>H RMN (400 MHz, CD<3>OD) 55,36 (d, 1H, H-2), 3,44 (td, 1H, 6-H), 2,94 (t, 2H, 3y-H), 2,45 (dd, 1H, 16-Ha), 0,88 (s, 3H, CH<3>), 0,79 (s, 3H, CH<3>).

<13>C RMN (101 MHz, CD<3>OD) 5222,35 (17-C), 134,89 (3-C), 119,69 (2-C), 70,31 (6-H), 12,75 (CH<3>), 12,07 (CH<3>).

Síntesis de derivados de aminas cíclicascon insaturaciones exocíclicas:CVie205, CVie206, CVie210 y CVie211

Los derivados de amina cíclica se sintetizaron mediante una reacción de Wittig de hidruro de sodio (NaH)-DMSO como se describió anteriormente paraCVie203yCVie204utilizando una sal de fosfonio N-protegida apropiada, tal como yoduro de N-Boc-4-(2-trifenilfosfonioetil)azetidina para producir los compuestos26y27o yoduro deN-Boc3-(2-trifenilfosfonioetil)piperidina para producir los compuestos28y29. Tras la purificación de la mezcla diastereoisomérica, el grupoN-Bocse escindió por hidrólisis ácida con TFA para producirCVie205,CVie206,CVie210yCVie211.

Síntesis de CVie208 con una insaturación endocíclica (migración del doble enlace C=C durante la desprotección de Boc)

El tratamiento posterior de los compuestos28y29con TMSI como se ha descrito anteriormente para la síntesis deCVie207produjoCVie208.

Hidrogenación y escisión de Boc con TFA para producir CVie212

Alternativamente, la hidrogenación catalítica (H<2>, Pd-C, EtOAc) de los dobles enlaces de los compuestos28y29para sintetizar el compuesto30seguido de escisión de Boc con TFA en DCM produjoCVie212.

La síntesis de los compuestos que llevan una 6-alfa-hidroximetillandrostano-7,17-diona se logró partiendo del intermediario común37. El propio compuesto37se sintetizó a partir de la 4-androsteno-3,17-diona31, mediante protección de los dos átomos cetónicos por el acetal cíclico32y migración simultánea del doble enlace, oxidación de la posición alílica por dicromato de sodio33, formación del éter silil enol35, hidroximetilación con Me<3>Al y formaldehído(36) y escisión final de los acetales en condiciones ácidas. La síntesis se describe con más detalle en los siguientes pasajes.

Síntesis del compuesto 32: (20S,7R)-7,20-dimetildispiro[1,3-dioxolano-2,5'-tetraddo[8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-14',2"-1,3-dioxolano]-12-eno

Una mezcla de androst-4-eno-3,17-diona31(400,0 g, 1,4 mol) y PTSAH2O(13,3 g, 70,0 mmol) en etilenglicol (8,0 l) se agitó a 100 °C hasta que la reacción fue límpida. Se destilaron al vacío aproximadamente 5,0 L de glicol, de modo que la temperatura de ebullición se situara en torno a 80-85 °C. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente. La mezcla se ajustó a pH~9. A continuación, se vertió la mezcla en agua helada. La mezcla se filtró y el sólido se lavó con agua, se recogió y se trituró con acetona para obtener el compuesto32bruto (469,0 g, 89%) como un sólido amarillo.

Síntesis del compuesto 33: (20S,7R)-7,20-dimetildispiro[1,3-dioxolano-2,5'-tetracido[8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-14',2"-1,3-dioxolano-12-en-14-ona

Una mezcla del compuesto32(440,0 g, 1,2 mol), HOSU (541,2 g, 4,7 mol) y Na2Cr2O7 H2O (527,5 g, 1,8 mol) en acetona (8,0 l) se agitó vigorosamente a 50 °C durante 2 días. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se extinguió con solución acuosa de Na2SO3 y se agitó durante 20 min. La mezcla se vertió en agua helada. La mezcla resultante se agitó durante 20 min y después se filtró. El filtrado sólido se lavó con agua, se recogió y se secó al vacío para obtener el compuesto33bruto (390,0 g, 85%) como un sólido amarillo.

Síntesis del compuesto 34: (7S,20S)-7,20-dimetildispiro[1,3-dioxolano-2,5'-tetraddo[8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-14',2"-1,3-dioxolano]-14-ona

33<34>

Se añadió una mezcla del compuesto33(50,0 g, 128,9 mmol) en EtOAc (1250 ml) a Pd/C (16,0 g). A continuación, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche bajo H2. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se filtró, se concentró y se purificó por cromatografía flash (PE/eA = 2/1) para obtener el compuesto34(25,0 g, 50,0%) como sólido blanco.

Datos espectroscópicos para (7S,20S)-7,20-dimetildispiro[1,3-dioxolano-2,5'-tetraciclo [8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-14',2"-1,3-dioxolano]-14-ona34:

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 53,85-3,75 (m, 8H), 2,44-2,35 (m, 2H), 2,08-2,03 (m, 1H), 1,87-1,79 (m, 2H), 1,70-1,49 (m, 8H), 1,41-1,28 (m, 4H), 1,17-1,10 (m, 2H), 1,03 (s, 3H), 1,00-0,97 (m, 1H), 0,76 (s, 3H).

n ess e compueso : - , - , - me spro , - oxoano- , -tetracicb[8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-14',2"- 1,3-dioxolano]-13-en- 14-iloxi)-1,1-dimetil-1 -silaetano

Una mezcla del compuesto34(20,0 g, 51,3 mmol) en THF seco (100,0 ml) se agitó a -78 °C, y después se añadió gota a gota 1,5 M LDA en tolueno (205,2 ml 307,8 mmol). Tras agitar a la misma temperatura durante 1 h, se añadió gota a gota MesSiCl (50,0 ml, 400,1 mmol). Tras agitar a -70 °C durante 3 h, se elevó la temperatura a -30 °C y se añadió trietilamina (33,5 g, 331,5 mmol). Tras agitar a la misma temperatura durante 1 h, la mezcla se calentó a temperatura ambiente y se añadieron agua (200,0 ml) y EtOAc (100,0 ml). La fase acuosa separada se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se evaporaron a sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía flash (PE/EA = 2/1) para obtener el compuesto35(14,3 g, 60,3 %) como un sólido blanco.

Síntesis del compuesto 36: (13S,20S,7R)-13-(hidroximetil)-7,20-dimetildispiro[1,3-dioxolano-2,5'-tetraciclo[8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-14',2"-1,3-dioxolano]-14-ona

Se añadió gota a gota una mezcla de 2,6-difenilfenol (10,0 g, 27,6 mmol) en DCM seco (450,0 ml) a una solución deMe3Al en tolueno (41,4 ml, 82,9 mmol) mientras se enfriaba con un baño de hielo/agua de modo que la temperatura no superara la temperatura ambiente. Tras agitar a temperatura ambiente durante 1 h, la solución se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota una solución de trioxano (24,8 g, 276,0 mmol) en DCM seco (100,0 ml). La solución de color amarillo claro se agitó durante 1 h más a 0 °C y después la temperatura se enfrió hasta -78 °C. Se añadió una solución del compuesto35(10,0 g, 27,6 mmol) en DCM seco (125 ml). Tras agitar a -78 °C durante 1 h, la temperatura se elevó a -20 °C y la mezcla de reacción se agitó a esa temperatura durante toda la noche. Se añadió NaHCO3 al 5% acuoso (85,0 ml) a temperatura ambiente. La mezcla gelatinosa se filtró a través de una almohadilla CELITE® lavando exhaustivamente con DCM. La capa orgánica separada se lavó con agua y se evaporó. Se añadió al residuo aproximadamente 1M de TBAF en THF (24,0 ml) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. La solución se lavó con agua, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó a sequedad. El residuo se purificó por cromatografía flash para dar el compuesto36(6,5 g, 71,4%) como un sólido amarillo.

Síntesis del compuesto 37: (6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetildecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3,7,17(2H,4H,8H)-triona

Se añadió una mezcla del compuesto36(8,0 g, 19,0 mmol) en acetona (100,0 ml) a HCl acuoso al 10% (50,0 ml). A continuación, la mezcla se calentó a 70 °C durante 1 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se extinguió con NaOH acuoso al 5% y se extrajo con DCM (50,0 ml * 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50,0 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, se concentraron y se purificaron por cromatografía flash (DCM/EA = 4/1) para obtener el producto bruto, que se trituró con éter para obtener el producto puro37(3,3 g, 52,4 %) como un sólido blanco.

Datos espectroscópicos para (6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetildecahidro -1H-ciclopenta[a]fenantreno-3,7, 17(2H,4H,8H)-triona37:

1H RMN (400 MHz, DMSO-^): 54,14 (t, 1H), 3,63-3,59 (m, 1H), 3,50-3,47 (m, 1H), 2,74-2,69 (m, 1H), 2,42-2,27 (m, 5H), 2,15-1.93 (m, 3H), 1,87-1,79 (m, 1H), 1,68-1,59 (m, 3H), 1,54-1,44 (m, 2H), 1,32-1,06 (m, 7H), 0,81 (s, 3H). LCMS [fase móvil: de 55% agua (0,05% FA) y 45% CH<3>CN (0,05% FA) a 55% agua (0,05% FA) y 45% CH<3>CN (0,05% FA) en 6,0 min, finalmente en estas condiciones durante 0,5 min], la pureza es >90%, Tr= 2,514 min; MS Calculado: 332.2; MS encontrado: 333.2 [M+1]+.

Síntesis del compuesto 38: (13S,14S,20S,7R)-13-(hidroximetil)-7,20-dimetidispiro[1,3-dioxolano-2,5'-tetracido[8.7.0.0<2J>.0<11,15>]heptadecano-14',2"-1,3-dioxolano-14-ol

Se añadió lentamente NaBH<4>(4,0 g, 104,8 mmol) a una mezcla de compuesto36(22,0 g, 52,4 mmol) en MeOH (1000,0 ml) a 0 °C. A continuación, la mezcla se agitó a TA durante 1 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se extinguió con NaH<2>PO<4>acuoso al 5% (220,0 ml) y se extrajo con DCM (300,0 ml * 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (200,0 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, se concentraron y se purificaron por cromatografía flash (D<c>M/EA = 4/1) para obtener el producto bruto, que se trituró con éter para obtener el compuesto38(7,5 g, 34,1 %) como un sólido blanco.

Síntesis del compuesto 39: (8S,9S,15S,2R)-9-hidroxi-8-(hidroximetil)-2,15-dimetiltetraciclo[8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-5,14-diona

Se añadió HCl acuoso al 10% (35,0 ml) a una mezcla del compuesto38(5,7 g, 13,5 mmol) en acetona (70,0 ml). A continuación, la mezcla se calentó a 70 °C durante 1 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se extinguió con 5% NaOH acuoso y se extrajo con DCM (50,0 ml * 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía flash (DCM/eA = 4/1) para obtener el producto bruto, que se trituró con éter para obtener el producto puro39(1,8 g, 40,0 %) como un sólido blanco.

Datos espectroscópicos para (8S,9S,15S,2R)-9-hidroxi-8-(hidroximetil)-2,15-dimetil tetraciclo[8.7.0.0<2,7>.0<11,15>]heptadecano-5,14-diona39:

1H RMN (400 MHz,DMSO-d6): 54,37 (brs, 1H), 4,27 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,87-3,86 (m, 1H), 3,44-3,42 (m, 2H), 2,45 1,87 (m, 10H), 1,63-1,23 (m, 9H), 0,99 (s, 3H), 0,81 (s, 3H).

LCMS [fase móvil: de 55% agua (0,05% FA) y 45% CH<3>CN (0,05% FA) a 55% agua (0,05% FA) y 45% CH<3>CN (0,05% FA) en 6,0 min, finalmente en estas condiciones durante 0,5 min], la pureza es >90%, Ta= 2,515 min; MS Calculado: 334.2; MS encontrado: 352.2 [M+18]+.

Síntesis del compuesto 40: terc-butil-(2-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxododecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,10H)-ilideno)etil)azetidina-1 -carboxilato

A una solución de sal de fosfonio (2,57 g, 4,5 mmol) en THF (25 ml), se añadió una solución de n-BuLi en THF (2,5 M, 3,6 ml, 9,0 mmol) a -78 °C. La mezcla se agitó a 30 °C durante 1 hora. A continuación, se añadió el compuesto37(500 mg, 1,5 mmol) a la mezcla a -20 °C y después se calentó a 30 °C durante 2 horas. La mezcla se extinguió con<n>H<4>CIsat.(25 ml) y se extrajo con EtOAc (25 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (hexano/EtOAc = 1/1) para dar el compuesto bruto. El compuesto se purificó por columna inversa para obtener el compuesto puro40(60 mg, 8%) como un sólido blanco. Datos para el compuesto40:

Columna LCMS: C18; tamaño de columna: 4.6*30 mm 5 ^m; Dikwa Diamonsil plus; fase móvil: B(ACN) : A (0,02%NH4Ac+5%ACN); gradiente (B%) en 3 min-5-95-POS; flujo 1,5 ml/min, tiempo de detención 3 min. Tr = 1,820 min; MS Calculado: 499, MS Hallado: 400 [M+H-Boc]+.

Síntesis del compuesto 41: terc-butil-3-(2-((3S,6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxohexadecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-il)etil)azetidina-1 -carboxilato

Se añadió Pd/C (60 mg) a la solución del compuesto40(60 mg, 0,12 mmol) en EA (3 ml). A continuación, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche bajo H2. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró para producir el compuesto41(52 mg, 86%) como un sólido blanco.

Columna LCMS: C18; tamaño de columna: 4.6*30 mm 5 ^m,; Dikma Diamonsil plus; fase móvil: B(ACN) : A (0,02%NH4Ac+5%ACN); gradiente (B%) en 3 min-5-95-POS; flujo 1,5 ml/min, tiempo de detención 3 min. Ta = 1,911 min; MS Calculado: 501, MS Hallado: 402 [M+H-Boc]+.

Síntesis de CVie407: (3S,6S,10R,13S)-3-(2-(azetidin-3-il)etil)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetildodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-7,17(2H,8H)-diona

Una solución del compuesto41(52 mg, 0,10 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se diluyó con NaHCO<3>sat.para ajustar el pH a 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCvie407(13 mg, 32%) como un sólido blanco.

Datos espectroscópicos deCVie407:

1H RMN (CD<3>OD, 400 MHz):5 3,86-3,82 (m, 2H), 3,71-3,67 (m, 1H), 3,54-3,47 (m, 2H), 2,78-2,67 (m, 2H), 2.56-2,39 (m, 3H), 2,15-2,06 (m, 1H), 1,85-1,50 (m, 12H), 1,21-1,14 (m, 9H), 1,07-1,01 (m, 2H), 0,88 (s, 3H). Columna LCMS: columna: C18;tamaño de columna:4,6*50 mm; fase móvil: B (ACN) : A (0,02%NH4Ac); gradiente (B%) en 6,5 min-5-95-POS; Tr= 3,114 min;<m>S Calculado: 401, MS Hallado: 402 [M+H]+.

Síntesis del compuesto 42: terc-butil-3-((E)-2-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxododecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,10H)-ilideno)etil)azetidina-1 -carboxilato

Se añadió una solución de n-BuLi en THF (2,5 M, 0,7 ml, 1,80 mmol) a una solución de sal de fosfonio compuesta (514 mg, 0,90 mmol) en THF (5 ml) a -78 °C. La mezcla se agitó a 40 °C durante 1 hora. A continuación, se añadió el compuesto39(100 mg, 0,30 mmol) a la mezcla a 0 °C y después se calentó a 40 °C durante la noche. La reacción se repitió nueve veces. La mezcla se extinguió con NH<4>Clsat.(80 ml) y se extrajo con EtOAc (100 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuesto42(20 mg,<1>%) como un sólido amarillo.

Columna LCMS: C18; tamaño de columna: 4.6*30 mm 5 ^m; Dikwa Diamonsil plus; fase móvil: B (ACN) : A (<0>,<0 2>%NH<4>Ac+<5>%AcN); gradiente (B%) en 3 min-5-95-POS; flujo 1,5 ml/min, tiempo de detención 3 min. Ta = 1,945 min; MS Calculado: 501, MS Hallado: 402 [M+H-Boc]+.

Síntesis de CVie403: (6S,10R,13S)-3-(2-(azetidin-3-ilo)etilideno)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetildodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-7,17(2H,8H)-diona

La solución del compuesto40(130 mg, 0,26 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se basificó con NaHCO3sat.hasta pH 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (30 ml *3). La capa orgánica combinada se concentró y el residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie403(13 mg, rendimiento 13%) como un sólido amarillo.

Datos espectroscópicos deCVie403:

1H RMN (CD<3>OD, 400 MHz):5 5,00-4,96 (m, 1H), 3,92-3,81 (m, 3H), 3,66-3,62 (m, 1H), 3,54-3,52 (m, 2H), 2,77-2,73 (m, 1H), 2,67-2,61 (m, 2H), 2,49-2,43 (m, 2H), 2,38-2.29 (m, 2H), 2,23-2,18 (m, 2H), 2,06-1,96 (m, 2H), 1,83-1,76 (m, 2H), 1,71-1,61 (m, 3H), 1,51-1,35 (m, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,12-1,05 (m, 2H), 0,98-0,90 (m, 1H), 0,80 (s, 3H).

Columna LCMS: Tr= 3,964 min; MS Calculado, MS Hallado 400 [M+H]+.

Síntesis del compuesto 43: 3-(2-((6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-17-oxohexadecahidro-1H-ddopenta[a]fenantren-3-il)etil)azetidina-1-carboxilato

Una mezcla del compuesto42(20 mg, 0,04 mmol), Pd/C (10%, 20 mg) y Pd(OH)2 (20%, 20 mg) en EtOAc (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante una noche bajo H2 (en globo). La mezcla se filtró y el filtrado se concentró para dar el compuesto43bruto (20 mg, 100%) como un sólido marrón.

Columna LCMS: C18; tamaño de columna: 4.6*30 mm 5 ^m; Dikma Diamonsil plus; fase móvil: B(ACN) : A (0,02%NH4Ac+5%ACN); gradiente (B%) en 3 min-5-95-POS; flujo 1,5 ml/min, tiempo de detención 3 min. Tr 1,978 min; MS Calculado:503, MS Hallado: 404 [M+H-Boc]+.

Síntesis de CVie408: (6S,7S,10R,13S)-3-(2-(azetidin-3-ilo)etilo)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetiltetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-17(2H)-ona

Una mezcla del compuesto43(20 mg, 0,04 mmol) en TFA/DCM (1:1, 2 ml) se agitó a 0 °C durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con NaHCO3sat.para ajustar el pH a 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por prep-HpLC para producir el compuestoCVie408(6,4 mg, 40%) como un sólido amarillo.

Datos espectroscópicos deCVie408:

1H RMN (CD<3>OD, 400 MHz): 54,08 (s, 1H), 3,84 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 3,77-3,68 (m, 2H), 3,52-3,48 (m, 2H), 2,81-2,73 (m, 1H), 2,52-2,44 (m, 1H), 2,18-2,06 (m, 2H), 1,86-1.71 (m, 4H), 1,69-1,59 (m, 6H), 1,52-1,43 (m, 2H), 1,39-1,30 (m, 4H), 1,24-1,15 (m, 4H), 1,12-1,04 (m, 1H), 0,95-0,92 (m, 1H), 0,90(s, 3H), 0,87 (s, 3H). Columna LCMS: columna: C18;tamaño de columna:4,6*50 mm fase móvil: B (ACN) : A (0,02%NH4Ac); gradiente (B%) en 6,5 min-5-95-POS; Ta= 3,078 min; MS Calculado.:403, MS Hallado: 404 [M+H]+.

Síntesis del compuesto 44: terc-butil-3-(2-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxododecahidro-1H-ddopenta[a]fenantren-3(2H,4H,10H)-ilideno)etil)pirrolidin-1 -carboxilato

Se añadió una disolución de n-BuLi en THF (2,5M, 1,57 ml, 3,94 mmol) a una disolución de sal de fosfonio compuesta (1,5 g, 2,62 mmol) en THF (15 ml) a -78 °C. La mezcla de reacción se agitó a 35 °C durante 1 hora. A continuación, se añadió una solución del compuesto37(350 mg, 1,05 mmol) a la mezcla a -20 °C y se calentó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se extinguió con NH4Clsat.(25 ml) y se extrajo con EtOAc (25 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó mediante cromatografía flash (hexano:EA = 1:1) para dar el compuesto bruto. A continuación, el compuesto se purificó mediante columna inversa para obtener el compuesto puro44(53 mg, 10%) como un sólido blanco.

Columna LCMS: C18; tamaño de columna: 4,6*30 mm 5 ^m; Dikma Diamonsil plus; fase móvil: B (ACN) : A (0,02%NH4Ac+5%AcN); gradiente (B%) en 3 min-5-95-POS; flujo 1,5 ml/min, tiempo de detención 3 min. Ta = 2,017 min; MS Calculado: 513, MS Hallado: 414 [M+H-Boc]+.

Síntesis de CVie402: (6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(2-(pirrolidin-3-il)etiliden)dodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-7,17(2H,8H)-diona

Una solución del compuesto44(89 mg, 0,173 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se diluyó con NaHCO<3>sat. para ajustar el pH = 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml *3). La capa orgánica combinada se concentró y el residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie402(38 mg, 53%) como un sólido blanco.

Datos espectroscópicos deCVie402:

1H RMN (CD<3>OD, 400 MHz): 55,08-5,05 (m, 1H), 3,88-3,82 (m, 1H), 3,63-3,59 (m, 1H), 3,12-3,02 (m, 2H), 2,99-2,92 (m, 1H), 2,66-2,55 (m, 3H), 2,48-2,42 (m, 2H), 2,37-2,30 (m, 1H), 2,23-2.19 (m, 1H), 2,15-2,04 (m, 2H), 2,03-1,91 (m, 4H), 1,83-1,78 (m, 2H), 1,75-1,61 (m, 3H), 1,51-1,34 (m, 4H), 1,19-1,17 (m, 3H), 1,12-1,03 (m, 2H), 0,97-0,90 (m, 1H), 0,80 (s, 3H).

Columna LCMS: Ta 3,060 min; MS Calculado: 413, MS Hallado: 414[M+H]+.

Síntesis del compuesto 45: terc-butil-3-(2-((3S,6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxohexadecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3-il)etil)pirrolidin-1-carboxilato

Se añadió una solución del compuesto44(53 mg, 0,103 mmol) en EA (3 ml) a Pd/C (60 mg). A continuación, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche bajo H2. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró para producir el compuesto45(50 mg, 94%) como un sólido blanco.

Columna LCMS: C18; tamaño de columna: 4,6*30 mm 5 ^m; Dikma Diamonsil plus; fase móvil: B (ACN) : A (0,02%NH4Ac+5%ACN); gradiente (B%) en 3 min-5-95-POS; flujo 1,5 ml/min, tiempo de detención 3 min. Ta = 1,984 min; MS Calculado: 515, MS Hallado: 416 [M+H-Boc]+.

Síntesis de CVie409: (3S,6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(2-(pirrolidin-3-ilo)etilo)dodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-7,17(2H,8H)-diona

Una solución del compuesto45(50 mg, 0,09 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se diluyó con NaHCO3sat.para ajustar el pH a 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie409(12 mg, 32%) como un sólido blanco.

Datos espectroscópicos deCVie409:

1H RMN (CD<3>OD, 400 MHz):5 3,87-3,82 (m, 1H), 3,70-3,64 (m, 1H), 3,28-3,24 (m, 1H), 3,21-3,16 (m, 1H), 3,11-3,04 (m, 1H), 2,72-2,62 (m, 2H), 2,57-2.51 (m, 1H), 2,47-2,39 (m, 2H), 2,17-2,05 (m, 3H), 1,85-1,70 (m, 5H), 1,66-1,49 (m, 8H), 1,38-1,34 (m, 2H), 1,25-1,19 (m, 6H), 1,14-1,10 (m, 2H), 0,88 (s, 3H).

Columna LCMS: columna:C18; tamaño de columna: 4.6*50 mm; fase móvil: B(ACN) : A(0,02%NH4Ac); gradiente(B%) en 6,5 min-5-95-POS; Tr= 3,180 min; MS Calculado.:415, MS Hallado: 416 [M+H]+

Síntesis del compuesto 46: terc-butil-3-(2-((6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-17-oxododecahidro-1H-ddopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,10H)-ilideno)etil)pirrolidin-1 -carboxilato

Se añadió una disolución de n-BuLi en THF (2,5 M, 0,7 ml, 1,80 mmol) a una disolución de sal de fosfonio compuesta (527 mg, 0,90 mmol) en THF (5 ml) a -78 °C. La mezcla de reacción se agitó a 35 °C durante 1 hora. A continuación, se añadió el compuesto39(100 mg, 0,30 mmol) a la mezcla a 0 °C y después se calentó a 35 °C durante la noche. La reacción se repitió cuatro veces. La mezcla se extinguió con NH4Clsat.(80 ml) y se extrajo con EtOAc (100 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó por prep-HPLC para dar el compuesto46(26 mg, 3%) como un sólido blanco.

Columna LCMS: C18; tamaño de columna: 4,6*30 mm 5 ^m; Dikma Diamonsil plus; fase móvil: B (ACN) : A (0,02%NH4Ac+5%ACN); gradiente (B%) en 3 min-5-95-POS; flujo 1,5 ml/min, tiempo de detención 3 min. Ta 2,000 min; MS Calculado: 515, MS Hallado: 416 [M+H-Boc]+.

Síntesis del compuesto 47: terc-butil-3-(2-((6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-17-oxohexadecahidro- 1H-ciclopenta[a]fenantreno-3-il)etil)pirrolidin-1 -carboxilato

Una mezcla del compuesto46(26 mg, 0,05 mmol), Pd/C (10%, 30 mg), y Pd(OH)2 (20%, 30 mg) en EtOAc (3 ml) se agitó a temperatura ambiente durante la noche bajo H2 (en globo). La mezcla se filtró y el filtrado se concentró para dar el compuesto bruto47(26 mg, 100%) como un sólido amarillo.

Columna LCMS: C18; tamaño de columna: 4,6*30 mm 5 ^m; Dikma Diamonsil plus; fase móvil: B (ACN) : A (0,02%NH4Ac+5%ACN); gradiente (B%) en 3 min-5-95-POS; flujo 1,5 ml/min, tiempo de detención 3 min. Tr = 2,059 min; MS Calculado: 517, MS Hallado: 418 [M+H-Boc]+.

Síntesis de CVie410: (6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(2-(pirrolidina-3-ilo)etilo)tetradecahidro- 1H-ciclopenta[a]fenantreno- 17(2H)-ona

Una solución del compuesto47(26 mg, 0,05 mmol) en TFA/DCM (1:2, 2 ml) se agitó a 0 °C durante 1 hora. La mezcla se diluyó con NaHCO3sat.para ajustar el pH a 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (20 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie410(9 mg, 43%) como un sólido amarillo.

Datos espectroscópicos deCVie410:

1H RMN (CD<3>OD, 400 MHz): 53,95 (s, 1H), 3,64-3,57 (m, 2H), 3,12-3,07 (m, 1H), 3,04-2,96 (m, 1H), 2,93 2,89 (m, 1H), 2,48-2,44 (m, 1H), 2,38-2,32 (m, 1H), 2,05-1.93 (m, 4H), 1,69-1,57 (m, 5H), 1,55-1,46 (m, 4H), 1,37-1,33 (m, 4H), 1,25-1,18 (m, 5H), 1,08-0,90 (m, 3H), 0,82-0,80 (m, 1H), 0,77 (s, 3H), 0,75 (s, 3H). Columna LCMS: columna: C18;tamaño de columna:4,6*50 mm ; fase móvil: B(ACN) : A(0,02%NH4Ac); gradiente (B%) en 6,5 min-5-95-POS; Tr 3,139 min; MS Calculado:417, MS Hallado: 418 [M+h]+.

Síntesis del compuesto 48: terc-butil-4-(2-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxododecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,1 OH)-ilideno)etil)piperidin-1 -carboxilato

Se añadió una disolución de n-BuLi en THF (2,5 M, 2,90 ml, 7,20 mmol) a una mezcla de sal de fosfonio compuesta (2,16 g, 3,60 mmol) en THF (16 ml) a -78 °C. La mezcla de reacción se agitó a 30 °C durante 1 hora. A continuación, se añadió el compuesto37(400 mg, 1,20 mmol) a la mezcla a -20 °C. La mezcla se agitó a -20 °C durante 30 minutos y después se calentó a 30 °C durante 2 horas. La mezcla se extinguió con NH4Clsat.(15 ml) y se extrajo con EtOAc (30 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó por prep-HPLC para dar el compuesto48(28 mg, 4%) como un sólido amarillo.

Columna LCMS: C18; tamaño de columna: 4,6*30 mm 5 ^m; Dikma Diamonsil plus; fase móvil: B (ACN) : A (0,02%NH4Ac+5%ACN); gradiente (B%) en 3 min-30-95-POS; flujo 1,5 ml/min, tiempo de detención 3 min. Ta = 2,013 min; MS Calculado: 527, MS Hallado: 428 [M+H-Boc]+.

Síntesis de CVie405: (6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(2-(pipen'dina-4-ilo)etilideno)dodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-7,17(2H,8H)-diona

Una solución del compuesto46(80 mg, 0,152 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se basificó con NaHCO3sat.hasta pH = 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml *3). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie405(30 mg, 46%) como un sólido amarillo.

Datos espectroscópicos deCVie405:

1H RMN (CD<3>OD, 400 MHz): 55,14 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 3,88-3,80 (m, 1H), 3,74-3,66 (m, 1H), 3,09-3,06 (m, 2H), 2,67-2,49 (m, 6H), 2,45-2,38 (m, 1H), 2,33-2,26 (m, 1H), 2,19-2.04 (m, 2H), 2,01-1,83(m, 3H), 1,80-1,69 (m, 6H), 1,61-1,47 (m, 2H), 1,45-1,34 (m, 2H), 1,30-1,25 (m, 5H), 1,19-1,08(m, 4H), 1,04-0,90 (m, 1H), 0,88 (s, 3H).

Columna LCMS: Ta 3,219 min; MS Calculado:427, MS Hallado: 428 [M+H]+.

Síntesis del compuesto 49: terc-butil-4-(2-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxohexadecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3-ilo)etilo)piperidina- 1-carboxilato

Una mezcla del compuesto48(28 mg, 0,05 mmol) y Pd/C (10%, 50 mg) en EtOAc (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante la noche bajo H2 (en globo). La mezcla se filtró y el filtrado se concentró para dar el compuesto49bruto (28 mg, 100%) como un sólido amarillo.

Columna LCMS: C18; tamaño de columna: 4.6*30 mm 5 ^m; Dikwa Diamonsil plus; fase móvil: B(ACN) : A (0,02%NH4Ac+5%ACN); gradiente (B%) en 3 min-5-95-POS; flujo 1,5 ml/min, tiempo de detención 3min.Tr= 2,109 min; MS Calculado:529, MS Hallado: 430 [M+H-Boc]+.

Síntesis de CVie411: (6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(2-(pipen'dina-4-ilo)etilo)dodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-7,17(2H,8H)-diona

Una solución del compuesto49(28 mg, 0,05 mmol) en TFA/DCM (1ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con NaHCO3sat.para ajustar el pH a 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S o4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie411(10 mg, 43%) como un sólido amarillo.

Datos espectroscópicos deCVie411:

1H RMN (CD3OD, 400 MHz): 53,85-3,81 (m, 1H), 3,71-3,66 (m, 1H), 3,07-3,04 (m, 2H), 2,69 (t, J = 11,2 Hz, 1H), 2,63-2,51 (m, 3H), 2,48-2,39 (m, 2H), 2.15-2,05 (m, 1H), 1,84-1,72 (m, 7H), 1,63-1,46 (m, 4H), 1,37-1,33 (m, 6H), 1,28-1,14 (m, 7H), 1,09-0,98 (m, 3H), 0,88 (s, 3H).

Columna LCMS: columna:C18; tamaño de columna:4,6*50 mm; fase móvil: B (ACN) : A (0,02%NH4Ac); gradiente (B%) en 6,5 min-5-95-POS; Ta= 4,188 min; MS Calculado.:429, MS Hallado: 430 [M+H]+.

Síntesis del compuesto 50: terc-butil-4-(2-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxododecahidro-1H-ddopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,10H)-ilideno)etil)piperidina-1-carboxilato

Se añadió n-BuLi en THF (2,5 M, 0,70 ml, 1,80 mmol) a una solución de sal de fosfonio (540 mg, 0,90 mmol) en THF (5 ml) a -78 °C. La mezcla de reacción se agitó a 40 °C durante 1 hora. A continuación, se añadió el compuesto39(100 mg, 0,30 mmol) a la mezcla a 0 °C y después se calentó a 40 °C durante 2 horas. La reacción se repitió cinco veces. La mezcla se extinguió con NH<4>Clsat.(80 ml) y se extrajo con EtOAc (100 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó por prep-HPLC para dar el compuesto50bruto (35 mg, 4%) como un sólido blanco.

Columna LCMS: C18; tamaño de columna: 4,6*30 mm 5 ^m; Dikma Diamonsil plus; fase móvil: B(ACN) : A (0,02%NH4Ac+5%ACN); gradiente (B%) en 3 min-5-95-POS; flujo 1,5 ml/min, tiempo de detención 3 min. Ta = 2,104 min; MS Calculado: 529, MS Hallado: 430 [M+H-Boc]+.

Síntesis del compuesto 51: terc-butil-4-(2-((6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-17-oxohexadecahidro- 1H-cidopenta[a]fenantreno-3-ilo)etilo)piperidina-1 -carboxilato

Una mezcla del compuesto50(35 mg, 0,07 mmol), Pd/C (10%, 40 mg), y Pd(OH<)2>(20%, 40 mg) en EtOAc (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante la noche bajo H<2>(en globo). La mezcla se filtró y el filtrado se concentró para dar el compuesto bruto51(35 mg, 100%) como un sólido marrón.

Columna LCMS: C18; tamaño de columna: 4,6*30 mm 5 ^m; Dikma Diamonsil plus; fase móvil: B(ACN) : A (0,02%NH4Ac+5%ACN); gradiente (B%) en 3 min-5-95-POS; flujo 1,5 ml/min, tiempo de detención 3 min. Ta 2,126 min; MS Calculado:531, MS Hallado: 432 [M+H-Boc]+.

Síntesis de CVie412: (6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(2-(pipen'dina-4-ilo)etilo)tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-17(2H)-ona

La solución del compuesto51(35 mg, 0,07 mmol) en TFA/DCM (1:2, 2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con NaHCO3sat.para ajustar el pH a 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml * 3).

Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por prep-HPLC para producir el compuestoCVie412(13 mg, 46%) como un sólido amarillo.

Datos espectroscópicos deCVie412:

1H RMN (CD<3>OD, 400 MHz): 54,04 (s, 1H), 3,72-3,61 (m, 2H), 3,09-3,06 (m, 2H), 2,63 (t, J = 11,6 Hz, 2H), 2,48-2,41 (m, 1H), 2,13-2,03 (m, 2H), 1,75-1.66 (m, 5H), 1,63-1,55 (m, 5H), 1,45-1,35 (m, 3H), 1,31-1,17 (m, 10H), 1,10-1,03 (m, 2H), 0,89 (s, 1H), 0,87 (s, 3H), 0,84 (s, 3H).

Columna LCMS: columna: C18; tamaño de columna: 4,6*50 mm; fase móvil: B(ACN) : A (0,02%NH4Ac); gradiente (B%) en 6,5 min-5-95-POS; Ta= 3,203 min; MS Calculado.:431, MS Hallado: 432 [M+H]+.

Síntesis del compuesto 52: terc-butil((E)-5-((6S,10R,13S)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-7,17-dioxododecahidro-1H-ddopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,10H)-ilideno)pentilo)(metil)carbamato

A una mezcla de yoduro de N-Boc-N-metil-5-trifenilfosfoniopentenamina (4,26 g, 7,23 mmol) en THF (50 ml), se añadió gota a gota n-BuLi (3,18 ml, 7,95 mmol) a -78 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 20 minutos. Después, la mezcla se enfrió a -30 °C. A continuación, se añadió el compuesto37(800 mg, 2,41 mmol) a la mezcla de reacción. La mezcla se agitó a TA durante toda la noche. La mezcla de reacción se extinguió con H<2>O y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (PE/EtOAc = 1/2) y luego se purificó por prep-HPLC para producir el compuesto52(36 mg, 200 mg) como aceite incoloro.

Datos espectroscópicos del compuesto52:

1H RMN (CD<3>OD, 400 MHz): 5.16-5,12 (m, 1H), 3,89-3,85 (m, 1H), 3,77-3,73 (m, 1H), 3,22-3,19 (m, 2H), 2,83 (s, 3H), 2,75-2,60 (m, 2H), 2,60-2,50 (m, 2H), 2,46-2,41 (m, 1H), 2,33-2,27 (m, 1H), 2,15-2,02 (m, 4H), 1,90-1,79 (m, 2H), 1,77 1,71 (m, 3H), 1,60-1,52 (m, 4H), 1,45 (s, 9H).90-1,79 (m, 2H), 1,77-1,71 (m, 3H), 1,60-1,52 (m, 4H), 1,50 (s, 9H), 1,45 1,42 (m, 1H), 1,34-1,29 (m, 2H), 1,26 (s, 3H), 1,24-1,21 (m, 1H), 1,19-1,05 (m, 2H), 1,05-0,99 (m, 1H).

Síntesis de CVie401: (6S,10R,13S,E)-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(5-(metilamino)pentilideno)dodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-7,17(2H,8H)-diona

Una mezcla del compuesto52(60 mg,0,116 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después, la mezcla se concentró y se diluyó con EtOAc, se lavó con Na<2>CO<3>sat. se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró para producir el compuestoCVie401(38 mg, 79%) como aceite amarillo.

Datos espectroscópicos deCVie401:

1H RMN (CD<3>OD, 400 MHz): 5,36 (s, 1H), 3,89-3,86 (m, 1H), 3,71-3,67 (m, 1H), 2,80-2,77 (m, 2H), 2,73-2,67 (m, 1H), 2,55-2,39 (m, 6H), 2,15-2.01 (m, 4H),1,92-1,85 (m, 1H),1,77-1,69 (m, 4H), 1,65-1,45 (m, 7H), 1,38 1,25 (m, 6H), 1,19 (s, 3H), 0,89 (s, 4H).

LCMS: Tr= 2,128 min, [M+1]+ = 416.

Síntesis del compuesto 53: terc-butil(5-((6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-17-oxododecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3(2H,4H,10H)-ilideno)pentilo)(metil)carbamato

A una mezcla de yoduro de N-Boc-N-metil-5-trifenilfosfoniopentenamina (4,39 g, 7,45 mmol) en THF (45 ml), se añadió gota a gota a -78°C una solución de nBuLi en THF (4,46 ml, 2,5 N, 11,16 mmol). Después, la mezcla se agitó a 0°C durante 20 min. La mezcla se enfrió a -50°C y se añadió el compuesto39(830 mg, 2,48 mmol). La mezcla se agitó a TA durante toda la noche. La mezcla se inactivó con H<2>O, se concentró y se purificó por cromatografía en columna (PE/EtOAc = 1/1) y después se purificó por prep-HPLC para dar el compuesto53(80 mg, 300 mg) como un sólido blanco.

Datos espectroscópicos del compuesto53:

1H RMN (CD<3>OD, 400 MHz): 5,10-5,08 (m, 1H), 4,05 (s, 1H), 3,78-3,72 (m, 1H), 3,23-3,20 (m, 2H), 2,83 (s, 3H), 2,56 2,53 (m, 1H), 2,48-2,41 (m, 1H), 2,12-2,10 (m, 1H), 2,07-2.00 (m, 5H), 1,85-1,81 (m, 1H), 1,74-1,51 (m, 10H), 1,49 (s, 9H), 1,39-1,30 (m, 4H), 1,21-1,18 (m, 1H), 1,08-1,04 (m, 1H), 0,96 (s, 3H), 0,88 (s, 3H).

Síntesis de CVie406: (6S,7S,10R,13S)-7-hidroxi-6-(hidroximetil)-10,13-dimetil-3-(5-(metilamino)pentildeno)tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-17(2H)-ona

Una solución del compuesto53(80 mg, 0,155 mmol) en TFA/DCM (1 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. La mezcla se basificó con NaHCO3 sat. hasta pH = 8-9. La mezcla se extrajo con DCM (25 ml *2). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó por prep-HPLC para dar el compuestoCVie406(60 mg, 94%) como un sólido amarillo.

Columna LCMS: Tr= 0,370 min;MS Calculado:417, MS Hallado: 418[M+H]+.

Ejemplo 2.Procedimientos generales de medición de la actividad biológica.

Ejemplo de cuidado de los animales

La investigación se ajusta a la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio publicada por el Instituto Nacional de Salud (NIH publicación Núm. 85-23, revisada en 1996) y a las directrices para el cuidado de animales aprobadas por las instituciones participantes.

Mediciones en cardiomiocitos aislados del ventrículo izquierdo

Los compuestos se caracterizaron por su efecto sobre (i) la función de captación de Ca2+ del RS y (ii) el potencial de acción (PA) en miocitos recién disociados de ventrículos de rata y cobayo, respectivamente, mediante perfusión coronaria retrógrada con solución enzimática (Rocchetti M et al. J Pharmacol Exper Therap 2005, 313(1):207-215). Análisis estadístico

Experimentos con animales enteros:Datos expresados como media ± DE. El análisis estadístico se realizó mediante la prueba t de Student (prueba t pareada).

Experimentos con miocitos aislados:Los datos se expresan como media ± SE. Las curvas que incluían múltiples medias se compararon mediante ANOVA bilateral para mediciones repetidas; los cambios inducidos por fármacos en la inclinación global de la curva se definieron de acuerdo con la significación de la interacción "factor X grupo". Debido a un ajuste monoexponencial inadecuado de la descomposición del Ca2+, no se estimó el Tdescomposición en unas pocas células para las que se presentan datos de TaC; el tamaño de la muestra (N) se indica en las figuras correspondientes.

La dependencia de la VCP de la DPA media se cuantificó mediante regresión lineal. P<0,05 se consideró estadísticamente significativo en todas las comparaciones.

Ejemplo 3.Cribado in vitro de compuestos de la Fórmula (I)

Inhibición de la actividad de la Na+/K+ ATPasa renal canina

Como se indica en otra parte de la presente memoria, los compuestos de la presente invención son estimuladores SERCA2a puros o predominantemente puros. Como tales, estos compuestos mostrarán poca o ninguna inhibición de la actividad enzimática de la Na+/K+ ATPasa. De este modo, se comprobó el efecto inhibidor de los compuestos sobre la enzima renal canina Na+/K+ATPasa.

La purificación de la Na+/K+ ATPasa renal se realizó de acuerdo con el procedimiento descrito por J<0>rgensen (Methods Enzymol. Se extirparon riñones de perros beagle machos de 1-3 años (WuXi AppTec, Suzhou Co. Ltd. 1318 Wuzhong Ave. 1318 Wuzhong Ave. Wuzhong District Suzhou, 215104 P.R. China) bajo anestesia con pentobarbital (Autorización de importación del Ministerio de Sanidad italiano 0009171-09/04/2015-DGSAF-CODJJO-P, 2015). Se cortaron los riñones y se diseccionó la médula externa y se suspendió (1g/10 ml) en una solución de sacarosa-histidina que contenía 250 mM de sacarosa, 30 mM de histidina y 5 mM de EDTA, pH 7,2. El tejido se homogeneizó utilizando un homogeneizador Ultra Turrax. La muestra se centrifugó a 6.000 g durante 15 min. A continuación, se decantó el sobrenadante y se centrifugó a 48.000 g durante 30 min. El pellet se suspendió en el tampón de sacarosa-histidina y se incubó durante 20 min con una solución de dodecilsulfato de sodio (SDS) disuelta en un tampón gradiente que contenía 25 mM de imidazol y 1 mM de EDTA, pH 7,5. La muestra se colocó en la parte superior de un gradiente discontinuo de sacarosa (10, 15 y 29,4 %) y se centrifugó a 60.000 g durante 115 min. El pellet se suspendió en el tampón del gradiente.

La actividad de Na+/K+ATPasa se analizóin vitromidiendo la liberación de 32P a partir de 32P-ATP, como se describió (Ferrandi M. et al. Hypertension 1996, 28: 1018-25). Se incubaron concentraciones crecientes del ouabaína estándar o del compuesto probado, con 0,3 |jg de enzima de riñón de perro purificada durante 10 min a 37°C en 120 j l de volumen final de un medio que contenía 140 mM NaCl, 3 mMMgCh, 50 mM Hepes-Tris, 3 mM ATP, pH 7,5. A continuación, se añadieron 10 j l de una solución que contenía 10 mM de KCl y 20 nCi de 32P-ATP (3-10 Ci/mmol, Perkin Elmer). Se dejó que la reacción continuara durante 15 minutos a 37°C y después se detuvo mediante acidificación con ácido perclórico helado al 20% v/v. El 32P se separó por centrifugación con carbón activado (Norit A, Serva) y se contó la radiactividad. La actividad inhibidora se expresó como porcentaje de las muestras de control realizadas en ausencia de ouabaína o del compuesto analizado. La concentración del compuesto que causa una inhibición del 50% de la actividad de la Na+/K+ ATPasa (<1>C<50>) se calculó utilizando un programa de regresión no lineal de múltiples parámetros (KaleidagraphTM, Sinergy Software).

Los compuestos CVie201, CVie202, CVie203, CVie204, CVie213, CVie214, CVie215, CVie216, CVie217, CVie218 y CVie219 no inhibieron la actividad enzimática de la Na+/K+ATPasa purificada y la IC<50>, expresada en jM , fue > 100 jM , como se muestra en la Tabla 1. Los compuestos CVie205, Cvie206, CVie207, CVie208, CVie209, CVie210, CVie211, CVie212, CVie401, CVie402, CVie403, CVie404, CVie405, CVie406, CVie407, CVie408, CVie409, CVie410, CVie411 y CVie412 sólo inhibieron modestamente a la Na+/K+ ATPasa (intervalo de IC<50>entre 0,8 y 24 jM )(Tabla 1).

Los compuestos se han comparado con los fármacos de referencia Digoxina (IC<50>0,18 jM ) e Istaroxima (IC<50>0,14 jM )(Tabla 1).

Tabla 1. Inhibición de la Na+/K+ATPasa renal canina

Actividad de la ATPasa SERCA2a en microsomas de RS derivados de corazón de cobayo normal

Los compuestos desvelados aquí también fueron probados por su capacidad para estimular la actividad de SERCA2a en microsomas del RS derivados de tejido cardíaco normal de cobayo sobre un intervalo de concentraciones de 1-200 nM. Se utilizaron cobayo de dos meses de edad (350-450 g de Envigo, Udine, Italia) para la preparación de microsomas SERCA2a cardíacos. Los cobayos fueron sacrificados bajo anestesia con pentobarbital. Los ventrículos izquierdos (VI) se diseccionaron rápidamente y se congelaron de inmediato en nitrógeno líquido. Los tejidos del VI se procesaron de acuerdo con el procedimiento descrito por Nediani C. et al. (J Biol Chem. 1996, 271:19066-7). El tejido se suspendió en 4 volúmenes de un tampón que contenía 10 mM de NaHCO<3>, pH 7, 1 mM de PMSF, 10 pg/ml de aprotinina y leupeptina y, a continuación, se homogeneizó utilizando un homogeneizador Ultra Turrax. La muestra se centrifugó a 12.000 g durante 15 minutos. El sobrenadante obtenido se filtró y centrifugó a 100.000 g durante 30 min. Las proteínas contráctiles se extrajeron suspendiendo el pellet con 0,6 M KCl, 30 mM histidina, pH 7 y centrifugando de nuevo a 100.000 g durante 30 min. El pellet final se reconstituyó con sacarosa 0,3 M, 30 mM de histidina, pH 7 y se almacenó en alícuotas a -80°C hasta su uso.

La actividad de SERCA2a se midióin vitrocomo hidrólisis de 32P-ATP a diferentes concentraciones de Ca2+ (100-4000 nM) en ausencia y presencia de los compuestos probados, como se describe (Micheletti R. et al. Am J Card 2007, 99:24A-32A). Se preincubaron concentraciones crecientes de cada compuesto (de 1 a 200 nM) con 2 pg de microsomas enriquecidos en SERCA2a durante 5 min a 4°C en 80 pl de una solución que contenía 100 mM KCl, 5 mM MgCl<2>, 1 pM A23187, 20 mM Tris, pH 7,5. A continuación, se añadieron 20 pl de Tris-ATP 5 mM que contenían 50 nCi de 32P-ATP (3-10 Ci/mmol, Perkin Elmer). La hidrólisis de ATP continuó durante 15 min a 37°C y la reacción se detuvo mediante acidificación con 100 pl de ácido perclórico al 20% v/v enfriado en hielo. El 32P se separó por centrifugación con carbón activado (Norit A, SERVA) y se midió la radiactividad. La actividad dependiente de SERCA2a se identificó como la porción de la actividad hidrolítica total inhibida por 10 pM de ácido ciclopiazónico (Seidler NW et al. J Biol Chem. 1989, 264:17816-23).

Las curvas dosis-respuesta se ajustaron utilizando una ecuación sigmoidal y se calcularon la actividad a la velocidad máxima (Vmax) y la Kd para Ca2+ (Synergy Software KaleidaGraph 3.6). El efecto de los compuestos en preparaciones normales de cobayo se expresó como el % de disminución de la Kd Ca2+ (lo que implica un aumento de la afinidad por el Ca2+) de una muestra de control realizada en ausencia del compuesto(Tabla 2). Este efecto indica que los compuestos aumentan la actividad de SERCA2a en un intervalo fisiológico de concentraciones de Ca2+ (Rocchetti M et al. J Pharmacol Exp Ther. 2005, 313:207-15; Rocchetti M et al. J Pharmacol Exp Ther. 2008, 326:957-65; Ferrandi M et al. Br J Pharmacol 2013, 169:1849-1861). Los datos son la media ± DE, n = número de experimentos, *al menos p< 0,05.

A concentraciones nanomolares, los compuestos probados disminuyeron la Kd Ca2+de SERCA2a de las curvas de respuesta a la dosis de Ca2+ en microsomas de preparaciones de corazón de cobayo(Tabla 2). Estos resultados indicaron que los compuestos aumentaron la actividad SERCA2a en un intervalo fisiológico de concentraciones de Ca2+y sugirieron un efecto lusitrópico. La Istaroxima se ha utilizado como comparador indicando su capacidad para estimular la SERCA2a(Tabla 2). En contraste con esto, la digoxina no estimuló la actividad de SERCA2a (Ferrandi M et al. Br J Pharmacol 2013, 169:1849-61; Rocchetti M et al. J Pharmacol Exp Ther 2005, 313:207-215).

Tabla 2.Efecto de los compuestos evaluados sobre la Kd Ca2+ de SERCA2a en microsomas de RS derivados de corazón de cobayo normal

Ejemplo 4.Estudios sobre CVie214 y CVie216 en miocitos ventriculares aislados

Función de captación de Ca2+ del RS en miocitos ventriculares de rata

Para probar los efectos de los compuestos en un modelo de disfunción diastólica, se hicieron diabéticas ratas macho Sprague Dawley (150-175 g) mediante una inyección única en la vena de la cola de estreptozotocina (STZ 50 mg/kg, Sigma-Aldrich). La STZ se preparó fresca en tampón citrato sódico 0,1 M a pH 4,5. La glucemia en ayunas se midió al cabo de 1 semana y las ratas con valores > 300 mg/dl se consideraron diabéticas. Se evaluaron los efectos de los fármacos sobre la función de captación de Ca2+ del RS en miocitos del ventrículo izquierdo aislados 9 semanas después de la inyección de STZ. Los miocitos se incubaron durante al menos 30 minutos en presencia de un fármaco específico para garantizar su permeación en la membrana celular. El análisis estadístico se realizó mediante un modelo de "comparación de grupos".

Los efectos de los fármacos sobre la tasa de captación de Ca2+ del RS se evaluaron con un "protocolo de carga" del RE diseñado específicamente para descartar la contribución del intercambiador Na/Ca (NCX) y para evaluar la tasa de captación a partir de niveles bajos de carga de Ca2+ del RE. En condiciones de pinzamiento de voltaje, la concentración intracelular de Ca2+ se midió dinámicamente mediante epifluorescencia (Fluo4-AM). Simultáneamente se registró la corriente de membrana, cuyo componente dependiente del tiempo reflejaba principalmente la I<col>El protocolo de carga del RS consistió en vaciar el RS mediante un breve pulso de cafeína y luego rellenarlo progresivamente mediante etapas de voltaje que activaban la afluencia de Ca2+ a través del canal de Ca2+ del sarcolema (I<col>). La NCX se bloqueó omitiendo el Na+ de las soluciones intracelular y extracelular. El procedimiento coincide con los procedimientos publicados, con pequeñas modificaciones (Rocchetti M et al. J Pharmacol Exper Therap 2005, 313:207-215).

Los efectos de los fármacos sobre la captación de Ca2+ del RS se analizaron considerando múltiples parámetros: la velocidad a la que 1) la amplitud del transitorio de Ca2+ (CaT) y 2) la ganancia de la liberación de Ca2+ inducida por Ca2+ (CICR) aumentaban durante el protocolo de carga, reflejando la velocidad a la que el RS se rellenaba y la ganancia del sistema, 3) la constante de tiempo de descomposición del Ca2+ citosólico (Tdescomposición) dentro de cada pulso, reflejando la velocidad neta de transporte deCa2+ (por SERCA2a) a través de la membrana del SR (una disminución del Tdescomposición) corresponde a una mayor captación de Ca2+por el RS).

La especificidad del "protocolo de carga" en la deteccion de la activacion de SERCA2a fue apoyada por la observacion de que no detectó ningún efecto de la Digoxina, un agente inotrópico que bloquea la bomba Na+/K+ ATPasa, pero carente de efecto estimulante de SERCA2a (Rocchetti M et al. J Pharmacol Exp Ther 2005, 313:207-215; Alemanni M et al. JMCC 2011, 50:910-918).

CVie216 (1<|j>M) incrementó la tasa de incremento del transitorio de Ca2+ (CaT) durante la recarga del RS (Fig. 1A); esto se asoció con un incremento en la ganancia CICR (Fig. 1B) y una reducción del Tdescomposición (Fig. 1C).

CVie214 (1<j>M) cambió los parámetros CaT durante el protocolo de carga del RS de manera similar a CVie216 (Fig. 2). La ganancia CICR (Fig. 2B) y el Tdescomposición (Fig. 2C) se vieron afectados por el fármaco, como era de esperar por la mejora de SERCA2a. CVie2l4 no consiguió aumentar significativamente la tasa de incremento de CaT durante la recarga del RS (Fig. 2A). Sin embargo, el incremento en la ganancia de CICR sugirió que esto podría reflejar la inhibición concomitante de Icol, en lugar de anular el efecto sobre SERCA2a.

Los resultados en la Fig. 1 y 2 convergen para indicar que CVie216 y CVie214 aumentaron significativamente la captación de Ca2+ por el RS. Bajo las condiciones experimentales aplicadas, la captación deCa2+ por el Rs fue totalmente apoyada por la SERCA2a; por lo tanto, los resultados son coherentes con la activación de la SERCA2a por ambos agentes.

Mediciones del potencial de acción

Los efectos de Cvie216 y Cvie214 sobre los parámetros del potencial de acción fueron evaluados a la concentración de 1 j M modulando SERCA2a en miocitos de cobaya. El contorno del potencial de acción (PA) proporciona una estimación de primera línea de la función integrada de los canales iónicos de membrana y sus cambios pueden desvelar acciones auxiliares, lo que podría dar lugar a efectos adversos del compuesto. Para aumentar la sensibilidad del contorno del PA como informador, también se probaron los efectos sobre la dependencia de la velocidad de los parámetros del PA, proporcionando así un enfoque multiparamétrico (más estricto). Los PAse registraron en miocitos ventriculares de cobayo porque el contorno de los PA reproduce los PA humanos. Los miocitos se incubaron durante al menos 30 min en presencia del fármaco para garantizar la ausencia de efectos, incluso tras tiempos de exposición prolongados. El análisis estadístico se realizó mediante un modelo de "comparación de grupos".

Los PAse registraron en solución normal de Tyrode a 36,5°C en miocitos ventriculares de cobayo. Se midieron los siguientes parámetros a 4 velocidades de estimulación (0,5-1-2-4 Hz): potencial diastólico de membrana (Ediast), velocidad máxima de despolarización (dV/dtmax), duración del potencial de acción (DPA al 90% de la repolarización). La variabilidad de la DPA a corto plazo (VCP) durante la estimulación en estado estacionario, un índice de estabilidad de la repolarización, se midió como la suma de las desviaciones ortogonales absolutas de la línea de identidad en el gráfico APDn<+1>(gráfico de Poincare) (Altomare C et al. Circulation A&E 2015, 8:1265-1275).

CVie216 (Fig. 3A) y CVie214 (Fig. 4A) a 1 j M no afectaron la duración del potencial de acción (APD<90>), el potencial de membrana diastólico (Ediast), la velocidad máxima de despolarización (dV/dtmax) y la dependencia de la velocidad de cada parámetro AP.

La variabilidad de la DPA a corto plazo (VCP) es un marcador de inestabilidad eléctrica y se correlaciona con el riesgo arritmogénico. La VCP es una función de la DPA media; por lo tanto, la VCP se midió a múltiples frecuencias de estimulación (0,5-1-2 y 4 Hz) para ampliar su evaluación a un amplio intervalo de DPA. La VCP y su dependencia de la DPA media no se vieron afectadas significativamente ni por CVie216 (Fig. 3B) ni por CVie214 (Fig. 4B).

En conjunto, el enfoque multiparamétrico utilizado para el análisis del potencial de acción garantiza la ausencia de efectos indeseados del fármaco sobre la actividad eléctrica cardíaca. Así pues, de acuerdo con este análisis, CVie216 y Cvie214 ejercen la modulación de SERCA2a de forma selectiva (fármaco lusitrópico positivo), esdecir,sin afectar a la actividad eléctrica ni a las corrientes de membrana implicadas.

Ejemplo 5.Estudios in vivo sobre CVie214 y CVie216

Biodisponibilidad en ratas

La biodisponibilidad en ratas fue medida por Sundia MediTech Service, China. En particular, se midió la biodisponibilidad de las sales de CVie214 y CVie216 en ratas tras una inyección intravenosa (i.v.) a 1 mg/kg y una administración oral (os) a 10 mg/kg. Las concentraciones plasmáticas de los compuestos probados CVie214-sal y CVie216-sal se midieron a intervalos desde el tiempo 0 hasta el tiempo 24h y se detectaron por el procedimiento LC-MS. Se ha calculado el valor F (%) y ha resultado ser del 41,5% y del 16,9% para CVie214-sal y CVie216-sal, respectivamente.

Toxicidad aguda en el ratón

La toxicidad aguda del compuesto ensayado CVie214-sal y CVie216-sal se ha determinado en el ratón (Albino Swiss CD-1, peso corporal 30 g). Los compuestos se han administrado por vía oral o se han inyectado por vía intravenosa a dosis crecientes para identificar la dosis que causa un 50% de mortalidad. La mortalidad se produjo a los 30 minutos de la administración y la supervivencia a las 24h.

Los resultados para la toxicidad aguda de CVie214-sal y CVie216-sal se reportan en laTabla 3. Como comparación, también se incluyó la toxicidad aguda para los compuestos de referencia Digoxina e Istaroxima. Digoxina se refiere alos datos de la bibliografía (www.lookchem.com, Reference for Digoxin intravenous: Afifi AM, Ammar EM. Pharmacological Research Communications. Vol. 6, Pg. 417, 1974; Referencia para Digoxina oral: Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. Vol. 153, Pg. 436, 1965) (Tabla 3).

Tabla 3. Toxicidad aguda (LD50) de CVie214-sal y CVie216-sal en el ratón

Hemodinámica en ratas diabéticas por estreptozotocina (ecocardiografía 2M-Doppler-Doppler tisular)

CVie214 y CVie216 fueron probados en un modelo de rata diabética. Brevemente, se inyectó a las ratas estreptozotocina (STZ). Tras 7-9 semanas desde la inyección de STZ, las ratas fueron sometidas a una evaluación ecocardiográfica transtorácica y Doppler realizada bajo anestesia con uretano. Se utilizaron registros en modo M guiados bidimensionalmente para obtener mediciones en el eje corto del diámetro telediastólico del ventrículo izquierdo (DTDVI), el diámetro telesistólico del ventrículo izquierdo (DTSVI) y el grosor de la pared posterior (PW) y septal (SW) en la diástole de acuerdo con las directrices de la Sociedad Estadounidense de Ecocardiografía (Lang RM et al. Eur J Echocardiography 2006, 7:79-108). El acortamiento fraccional se calculó como FS=(DTDVI-DTSVI))/DTDVI. El grosor relativo de la pared se calculó como PWTd+IVSTd/DTDVI. El flujo de entrada mitral se midió mediante Doppler pulsado en las puntas de las valvas mitrales desde una vista apical de 4 cámaras para obtener las velocidades de llenado precoz y tardío (E, A) y el tiempo de desaceleración de la velocidad de llenado precoz (DT). La pendiente de desaceleración se calculó como la relación E/DT. El índice de desaceleración mitral se calculó como la relación DT/E. La imagen Doppler tisular (TDI) se evaluó desde la vista apical de 4 cámaras para registrar los movimientos del anillo mitrale al nivel del tabique, es decir, la velocidad sistólica miocárdica máxima (s') y la velocidad diastólica temprana y tardía (e' y a').

Después de tomar las mediciones hemodinámicas basales, se administró a las ratas Digoxina, CVie214, CVie216 y se compararon con el control. La digoxina, utilizada como fármaco de referencia, se infundió por vía intravenosa a 0,11 mg/kg/min durante 15 min y los parámetros ecocardiográficos se midieron al cabo de 1 h. Se infundieron por vía intravenosa CVie214-sal y CVie216-sal en ratas diabéticas STZ a 0,2 mg/kg/min y se midieron los parámetros ecocardiográficos al cabo de 15 min y 30 min.

Las Tablas 4-6 muestran los parámetros hemodinámicos en ratas diabéticas STZ para Digoxina, CVie214-sal y Cvie216-sal. Los datos que se presentan en las Tablas 4-6 son medias ± DE; los valores con asterisco son estadísticamente significativos con al menos p< 0,05.

Los datos indican que el modelo de rata diabética por estreptozotocina se caracteriza por una disfunción diastólica en comparación con las ratas de control sanas (control n=18 ratas; STZ n=20 ratas) (Tabla 4). En particular, las ratas STZ mostraron un aumento de DT, DT/E y disminución de E, DT/E, e', HR. CVie214-sal y CVie216-sal mejoraron la función diastólica, deteriorada en STZ frente a los controles (Tabla 4), induciendo una disminución significativa de DT, DT/E y un aumento de E/DT y e' asociado a una mejora de SV y CO (Tablas 5-6). E/e' se redujo significativamente después de 30 min de la infusión de CVie216-sal (Tabla 6). Sólo el CVie214 aumentó de manera modesta pero significativa la s' y la FC después de 15 min (Tabla 5). La digoxina, tomada como compuesto de referencia, mejoró la función diastólica, disminuyendo DT, DT/E y aumentando E/DT, e' y la función sistólica (FS, s'), pero no afectó a la función cardíaca global, como VS y CO (Tabla 4).

Tabla 4. Parámetros hemodinámicos en ratas diabéticas de control y STZ y efecto de la infusión IV de Digoxina en ratas STZ

Tabla 5. Parámetros hemodinámicos tras la infusión IV de CVie214-sal en ratas diabéticas STZ

Tabla 6. Parámetros hemodinámicos tras la infusión IV de CVie216-sal en ratas diabéticas STZ

Ensayo de unión a receptores

La unión del radioligando a un panel de receptores fue llevada a cabo por Eurofins en preparaciones de membrana cruda de acuerdo con los procedimientos publicados y utilizando el estándar de referencia apropiado (Eurofin, Taiwán, código de compuesto CVie216-3 (1226840), estudio # TW04-0004235, cita # TW04-0004235-Q04, para Cvie Therapeutics Limited, Taiwán). La sal de CVie216 se probó a una concentración de 10 pM. No se documentó ninguna interacción significativa en un panel de receptores, como se muestra en la Tabla 7.

Tabla 7 Ensayo de unión a receptores para Cvie216-sal

Claims (15)

1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto que tiene una fórmula (I)

   En el que: X es uno cualquiera de los siguientes: un ácido carboxílico, un éster carboxílico o un bioéster del mismo, un alcohol primario, un éter o un grupo amina, en el que el bioéster consiste en un sulfato, un ácido sulfónico, un fosfato, un fosfonato o un anillo eterocíclico que contiene nitrógeno, y en el que el grupo amina comprende opcionalmente una amina primaria, una amina secundaria o una amina cíclica; n es 1,2, 3, 4 o 5; una línea discontinua C3-C1' representa un doble enlace exocíclico opcional C=C en la posición C3-C1'; una línea discontinua C2-C3 representa un doble enlace endocíclico opcional C=C; Y en C6 es un hidroxilo (OH) en la configuración alfa o beta o un hidroximetilo (CH2OH) en la configuración alfa; Z en C7 es un -H o -OH en una configuración alfa o una cetona, en la que una línea discontinua representa un grupo carbonilo opcional (C=O) en Z; o bien una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. 2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que X se selecciona del grupo que consiste en un ácido carboxílico, un éster carboxílico, una amina primaria, una amina secundaria y una amina cíclica.
3. 3. El compuesto de la reivindicación 1, en el que X es un ácido carboxílico o un éster carboxílico.
4. 4. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, seleccionado del grupo que consiste en: ácido (E)-4-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico; ácido (Z)-4-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico; ácido (E)-4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico; ácido (Z)-4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico; (E)-3-[2-(azetidin-3-il)etiliden]-6-alfa-hidroxiandrostano-17-ona; (Z)-3-[2-(azetidin-3-il)etiliden]-6-alfa-hidroxiandrostano-17-ona; yodhidrato de (E)-3-(4-aminobutil)-6-alfa-hidroxiandrost-2-eno-17-ona; yodhidrato de 3-[2-(piperidin-4-il)etil]-6-alfa-hidroxiandrost-2-eno-17-ona; (EZ)-3-(4-aminobutiliden]-6alfa-hidroxidrostano-17-ona; (E)-3-[2-(piperidin-4-il)etiliden]-6-alfa-hidroxiandrostano-17-ona; (Z)-3-[2-(piperidin-4-il)etiliden]-6-alfa-hidroxiandrostano-17-ona; 3beta-[2-(piperidin-4-il)etil]-6alfa-hidroxiandrostano-17-ona; acetato de (6-alfa-hidroxi-17-cetoandrostano-3beta-il)etilo; ácido 4-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)butírico; ácido 4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)butírico; ácido 2-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)acético; butirato de 4-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)etilo; caproato de 6-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)etilo; ácido 4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-ilo)caproico; (E,Z)-3-(5-N-metilaminopentiliden]-6-alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona; (E,Z)-3-[2-(pirrolidin-3il)etiliden]-6-alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona; (E,Z)-3-[2-(azetidin-3-il)etiliden]-6-alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona; (E,Z)-3-[2-(piperidin-4-ilo)etiliden]-6-alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona; (E,Z)-3-(5-N-metilaminopentiliden)-6-alfa-hidroximetil-7-alfa-hidroxiandrostano-17-ona; 3beta-[2-(azetidin-3-ilo)etil]-6alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona; 3beta-[2-(azetidin-3-ilo)etil]-6-alfa-hidroximetil-7-alfa-hidroxiandrostano-17-ona; 3beta-[2-(pirrolidin-3ilo)etil]-6alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona; 3beta-[2-(pirrolidin-3il)etil]6-alfa-hidroximetil-7-alfa-hidroxandrostano-17-ona; 3beta-[2-(piperidin-4-il)etil]-6alfa-hidroximetilandrostano-7,17-diona; y 3beta-[2-(piperidin-4-il)etil]-6-alfa-hidroximetil-7-alfa-hidroxiandrostano-17-ona.
5. 5. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, seleccionado del grupo que consiste en: ácido (E)-4-(6alpha-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico; ácido (Z)-4-(6alpha-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico; ácido (E)-4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico; ácido (Z)-4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-iliden)butírico; acetato de (6-alfa-hidroxi-17-cetoandrostano-3beta-il)etilo; ácido 4-(6alpha-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)butírico; ácido 4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)butírico; ácido 2-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)acético; butirato de 4-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)etilo; caproato de 6-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)etilo y ácido 4-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)caproico.
6. 6. El compuesto de la reivindicación 1, seleccionado del grupo que consiste en ácido 4-(6-alfa-hidroxi-17-oxoandrostano-3-il)butírico y ácido 2-(6beta-hidroxi-17-oxoandrostano-3-ilo)acético.
7. 7. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que la sal farmacéuticamente aceptable se selecciona de cloruro, bromuro, sulfato, fosfato, nitrato, fumarato, succinato, oxalato, malato, tartrato, maleato, citrato, metanosulfato y benzoato.
8. 8. Una composición farmacéutica que comprende uno o más de los compuestos de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en combinación con al menos un vehículo y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.
9. 9. Una composición farmacéutica para uso en un procedimiento para el tratamiento de la insuficiencia cardíaca que comprende uno o más de los compuestos de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en combinación con al menos un vehículo y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.
10. 10. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 9, formulada para inyección intravenosa, inyección intramuscular, administración enteral, administración parenteral o inhalación.
11. 11. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 9, formulada para administración oral.
12. 12. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9-11, administrada a una dosis de entre aproximadamente 1 mg/kg y aproximadamente 20 mg/kg, opcionalmente, la dosis es de entre aproximadamente 1 mg/kg y aproximadamente 10 mg/kg.
13. 13. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9-12, que comprende además uno o más ingredientes terapéuticamente activos adicionales seleccionados del grupo que consiste en inhibidores de la ECA, AIRB, diuréticos, bloqueadores de los canales de Ca2+, p-bloqueadores, digitales, donantes de NO, vasodilatadores, estimuladores de SERCA2a, inhibidores de la neprilisina (NEP), activadores del filamento de miosina, mediadores de relaxina-2 recombinante, proteína NP recombinante, activadores de la guanilato ciclasa soluble (sGC) y ligando de beta-arrestina del receptor de angiotensina II.
14. 14. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para uso como un medicamento.
15. 15. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, para uso en el tratamiento de la insuficiencia cardíaca.