ES2955410T3 - Tecnología de nanocodificación para el seguimiento de información en muestras líquidas - Google Patents
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Abstract
En la presente invención, las propiedades de fluorescencia de los puntos cuánticos se utilizan para crear o proporcionar un vínculo químico entre muestras de líquidos biológicos y su información digital asociada; facilitando así un acceso fácil y bajo demanda a toda la información asociada a la muestra biológica líquida. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Tecnología de nanocodificación para el seguimiento de información en muestras líquidas
Campo de la invención
La presente invención se refiere a puntos cuánticos, y más particularmente al uso de puntos cuánticos para etiquetar muestras biológicas líquidas.
Antecedentes de la invención
Los puntos cuánticos, incluyendo sus propiedades ópticas y físicas y métodos de fabricación, se conocen bien y se describen en las siguientes publicaciones:
1. Warren C. W. Chan, Shuming Nie, “Quantum Dot Bioconjugates for Ultrasensitive Nonisotopic Detection”, Science 281 (5385):2016
2. Marcel Burchez Jr., Mario Moronne, Peter Gin, Shimon Weiss, A. Paul Alivisatos, “Semiconductor nanocrystals as Fluorescent Biological Labels”, 281 (5385):2013
3. L. E. Brus, Applied Physics A 53, 465 (1991)
4. W. L. Wilson, P. F. Szajowski, L. E. Brus, Science 262, 1242 (1993)
5. A. Henglein, Chem. Rev. 89, 1861 (1989)
6. H. Weller, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 32, 41 (1993)
7. M. A. Hines and P. Guyot-Sionnest, J. Phys. Chem. 100, 468 (1996)
8. B. 0. Dabbousi, et al., J. Phys. Chem. B 101, 9463 (1997)
9. C. B. Murray, D. J. Norris, M. G. Bawendi, J. Am. Chem. Soc. 115,8706 (1993)
10. X. G. Peng, J. Wickham, A. P. Alivasatos, J. Am. Chem. Soc. 120,5343 (1998)
11. L. M. Lizmarzan, M. Giersig, P. Mulvaney, Langmuir 12, 4329 (1996)
12. M. A. CorreaDuarte, M. Giersig, L. M. LizMarzan, Chem. Phys. Lett. 286,497 (1998)
13. Marcel Bruchez Jr., Mario Moronne, Peter Gin, Shimon Weiss, and A. Paul Alivisatos, “Semiconductor Nanocrystals as Fluorescent Biological Labels” Science 25 de septiembre de 1998;281:2013-2016.
14. Warren C. W. Chan and Shuming Nie, “Quantum Dot Bioconjugates for Ultrasensitive Nonisotopic Detection” Science 1998 September 25;281:2016-2018.
15. J. Wang, et al: “Electrochemical coding technology for simultaneous detection of multiple DNA targets”, J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 11, 3214-3215.
Las publicaciones anteriores describen métodos para fabricar puntos cuánticos tales como cristales de tamaño nanométrico de CdSe-CdS y CdSe con los extremos ocupados con ZnS. Las publicaciones también describen propiedades físicas y ópticas de estos puntos cuánticos.
En el presente documento y por primera vez, se usan las propiedades de fluorescencia de puntos cuánticos para crear o proporcionar una unión química entre muestras líquidas biológicas y su información digital asociada.
Breve descripción de la invención
Un aspecto de la invención se refiere a un método para crear una unión química entre muestras biológicas líquidas y su información digital asociada, que comprende el etiquetado de muestras de una muestra biológica líquida con una composición de nanofirma química que comprende una combinación de al menos una referencia de puntos cuánticos y al menos 2, 3, 4, 5 o más trazadores de puntos cuánticos, en el que dicha unión se crea preferiblemente usando la siguiente razón:
Intensidad de fluo. del trazador
Intensidad de fluo. de la referencia
para normalizar la intensidad de fluorescencia de cada trazador de la composición y ordenar dichos valores normalizados para dar un número de dígitos/firma únicos de 2, 3, 4, 5, 6 o más, en el que dicho número de dígitos/firma debe leerse e introducirse en una base de datos en un punto de fabricación o punto de aplicación para crear una unión química entre la muestra biológica líquida etiquetada con la composición, y su información digital asociada.
En una realización preferida del aspecto anterior de la invención, dichos trazadores de puntos cuánticos pueden seleccionarse de una lista que comprende o que consiste en cualquiera de los siguientes o cualquier combinación de los mismos:
a. puntos cuánticos de aleación de CdSeS/ZnS;
b. puntos cuánticos de aleación de CdSeS/ZnS;
c. puntos cuánticos de tipo núcleo-cubierta de CdSe/ZnS;
d. puntos cuánticos de tipo núcleo-cubierta de CdSe/ZnS estabilizados con ligandos de octadecilamina; y/o e. puntos cuánticos de tipo núcleo de CdTe funcionalizados con C00H.
En otra realización preferida del aspecto anterior de la invención, dicha referencia de puntos cuánticos son puntos cuánticos de tipo núcleo de PbS, preferiblemente recubiertos con ácido oleico.
En aún otra realización preferida del aspecto de la invención anterior, la composición está en forma de una disolución, preferiblemente en forma de disoluciones madre.
Un aspecto adicional de la invención se refiere a un método para seguir la información en muestras biológicas líquidas, que comprende:
a. crear una unión química entre muestras biológicas líquidas y su información digital asociada según el aspecto anterior de la invención; y
b. leer el espectro de emisión de fluorescencia a la longitud de onda correspondiente a cada trazador para descodificar el número de dígitos/firma para acceder a la información digital de la muestra biológica líquida. Preferiblemente, dicha medición de fluorescencia se logra usando un fluorímetro de múltiples longitudes de onda (de sobremesa o portátil) o un dispositivo móvil equipado con microscopía de fluorescencia sin lentes.
Breve descripción de las figuras
Figura 1. Esta figura muestra que la información relacionada con una muestra puede clasificarse en al menos tres categorías: C0NTENID0 ANALÍTIC0 - Información relacionada con el contenido de la muestra, tal como composición química y bioquímica, pH, presencia/ausencia de una entidad dada, etc. C0NTENID0 C0NTEXTUAL -Información y metadatos relacionados con el entorno de la muestra, tal como el lugar donde se recogió la muestra, el nombre del paciente, etc. y C0NTENID0 HISTÓRIC0 - información relacionada con la reconstrucción de las preguntas sobre el pasado, el presente y el futuro tales como estudios forenses, investigaciones paleontológicas o estudios evolutivos.
Figura 2. Esta figura indica las principales etapas conectadas con la tecnología de nanocodificación de la presente invención:
1. Etiquetado de muestra con una firma de puntos cuánticos (QD) única
2. Lectura de fluorescencia de muestra
3. Desconvolución de firma de QD en una dirección de base de datos única
4. Acceso, recuperación y actualización de la información de muestra
Figura 3. Esta figura muestra una posible regla para determinar la adición de trazadores a una muestra biológica líquida y para crear una unión química entre las muestras líquidas biológicas y su información digital asociada. Figura 4. Esta figura muestra la adquisición simple y el procedimiento de desconvolución logrados leyendo el
espectro de emisión de fluorescencia a la longitud de onda correspondiente a cada trazador y atribuyendo un valor racional finito para cada uno de los máximos de emisión.
Figura 5. Esta figura muestra el espectro de emisión y la desconvolución de etiquetas de firma de puntos cuánticos. Para cada etiqueta, se midió la emisión de fluorescencia relativa a 525 nm, 565 nm, 605 nm, 665 nm y 705 nm. Se normaliza la intensidad de fluorescencia relativa considerando la intensidad de Qdot705 como el 100 %. Se analizaron las siguientes firmas de puntos cuánticos: (5A) etiqueta de nanofirma que codifica para la secuencia numérica {1,9,6,9}, (5B) etiqueta de nanofirma que codifica para la secuencia numérica {4,1,4,3}, (5C) etiqueta de nanofirma que codifica para la secuencia numérica {3,1,4,1}, (5D) etiqueta de nanofirma que codifica para la secuencia numérica {2,7,1,8}
Descripción detallada de la invención
Según la invención, las propiedades de fluorescencia de los puntos cuánticos se usan para crear o proporcionar una unión química entre muestras líquidas biológicas y su información digital asociada; facilitando de ese modo un fácil acceso y bajo demanda a toda la información asociada con la muestra biológica líquida; en particular, la presente invención se refiere a un método para crear una unión química entre muestras biológicas líquidas y su información digital asociada, que comprende, el etiquetado de muestras de una muestra biológica líquida con una composición de nanofirma química que comprende una combinación de al menos una referencia de puntos cuánticos y al menos 2, 3, 4, 5 o más trazadores de puntos cuánticos, donde dicha unión se crea usando la siguiente razón:
Intensidad de fluo. del trazador
Intensidad de fluo. de la referencia
para normalizar la intensidad de fluorescencia de cada trazador de la composición y ordenar dichos valores normalizados en un número de dígitos/firma únicos de 2, 3, 4, 5, 6 o más, en el que dicho número de dígitos/firma debe leerse e introducirse en una base de datos en un punto de fabricación o punto de aplicación de aplicación para crear una unión química entre la muestra biológica líquida etiquetada con la composición, y su información digital asociada.
Muestras de compuestos biológicos, orgánicos o inorgánicos son los materiales de partida básicos de muchas industrias tales como medicina humana y veterinaria, diagnóstico clínico, alimentos y bebidas, conservación en biobancos, conservación ecológica, reconstrucción climática y minería. Tal como se representa en la figura 1, la información relacionada con una muestra puede clasificarse en al menos tres categorías:
• C0NTENID0 ANALÍTIC0 - Información relacionada con el contenido de la muestra, tal como composición química y bioquímica, pH, presencia/ausencia de una entidad dada, etc.
• C0NTENID0 C0NTEXTUAL - Información y metadatos relacionados con el entorno de la muestra, tal como el lugar donde se recogió la muestra, el nombre del paciente, etc.
• C0NTENID0 HISTÓRIC0 - información relacionada con la reconstrucción de las preguntas sobre el pasado, el presente y el futuro tales como estudios forenses, investigaciones paleontológicas o estudios evolutivos.
El valor de la recogida de muestras recae en la capacidad de recuperar, fácil, rápidamente y bajo demanda toda la información asociada con ella, para tomar decisiones económica, social o medioambientalmente importantes tales como diagnóstico clínico, seguridad alimentaria, cambio climático, gestión de epidemias, etc.
Puesto que las diversas fuentes de información asociadas con una muestra dada se generan mediante diferentes actores, en diferentes ubicaciones (sitio de recogida, sitio de procesamiento, sitio de almacenamiento), y en diferentes puntos en el tiempo, es muy difícil acceder, analizar y presentar esta información. Esta situación es particularmente problemática para muestras recogidas en ubicaciones remotas y/o en ámbitos de pocos recursos.
En el presente documento se describe un flujo de trabajo o una metodología nuevos para crear una unión química entre muestras, preferiblemente muestras biológicas líquidas, y su información digital asociada. El flujo de trabajo se denomina NETTALLIS, en lugar de “Tecnología de nanocodificación para el seguimiento de información en muestras líquidas”. Tal como se indica en la figura 2, se basa en 4 etapas principales:
1. Etiquetado de muestra con una firma de puntos cuánticos (QD) única
2. Lectura de fluorescencia de muestra
3. Desconvolución de firma de QD en una dirección de base de datos única
4. Acceso, recuperación y actualización de la información de muestra
NETTALIS es ventajoso porque permite un seguimiento de muestras de por vida, consulta de muestras múltiple (fase previa, posterior y analítica de diagnóstico), identificación de contaminación cruzada de la muestra, y facilita la gestión de muestras, la conservación en biobancos y el intercambio de datos.
El uso de puntos cuánticos según el método de la invención se ilustra en los ejemplos explicados a continuación. Sin embargo, cabe señalar que una muestra biológica líquida etiquetada con puntos cuánticos para proporcionar una unión química entre dicha muestra líquida biológica y su información digital asociada, puede fabricarse usando cualquier tipo de puntos cuánticos. En este sentido, en el presente documento cabe señalar que los puntos cuánticos son partículas semiconductoras muy pequeñas, de sólo varios nm de tamaño, tan pequeñas que sus propiedades ópticas y electrónicas difieren de las de partículas más grandes. Muchos tipos de punto cuántico emitirán luz de frecuencias específicas si se les aplica electricidad o luz, y estas frecuencias pueden ajustarse con precisión cambiando el tamaño, la forma y el material de los puntos, dando lugar a muchas aplicaciones. Los puntos cuánticos presentan propiedades que son intermedias entre las de semiconductores a granel y las de moléculas discretas. Sus propiedades optoelectrónicas cambian en función de tanto el tamaño como de la forma. Los QD más grandes (radio de 5-6 nm, por ejemplo) emiten longitudes de onda más largas que dan como resultado colores de emisión tales como naranja o rojo. Los QD más pequeños (radio de 2-3 nm, por ejemplo) emiten longitudes de onda más cortas que dan como resultado colores como azul y verde, aunque los colores y tamaños específicos varían dependiendo de la composición exacta del QD.
Por tanto, una nanofirma química útil o adecuada para el seguimiento de información en muestras líquidas o para crear una unión química entre muestras, preferiblemente muestras biológicas líquidas, y su información digital asociada, puede ser cualquier composición (a continuación en el presente documento, a partir de una composición de nanofirma química), preferiblemente en forma de disolución, que ensambla una combinación de al menos una referencia y al menos 2, 3, 4, 5 o más trazadores de puntos cuánticos. Dicha composición de nanofirma química debe codificar para un código de 2, 3, 4, 5 o más dígitos dependiendo del número de trazadores usados. Dicho código solo o en combinación con códigos adicionales debe conformar una unión química entre una muestra líquida biológica y su información digital asociada.
Para propósitos simplemente ilustrativos, los puntos cuánticos útiles como trazadores para crear la nanofirma química de la presente invención, pueden seleccionarse de cualquiera de los siguientes o cualquier combinación de los mismos:
• puntos cuánticos de aleación de CdSeS/ZnS;
• puntos cuánticos de aleación de CdSeS/ZnS;
• puntos cuánticos de tipo núcleo-cubierta de CdSe/ZnS;
• puntos cuánticos de tipo núcleo-cubierta de CdSe/ZnS estabilizados con ligandos de octadecilamina; y/o • puntos cuánticos de tipo núcleo de CdTe funcionalizados con C00H.
En este sentido, en una realización preferida, la invención se refiere a una composición de nanofirma química, preferiblemente en forma de disolución, útil o adecuada para el seguimiento de información en muestras líquidas o para crear una unión química entre muestras, preferiblemente muestras biológicas líquidas, y su información digital asociada, que comprende al menos 2, 3, 4, o 5 o cualquier combinación de los mismos, de los puntos cuánticos seleccionados de la siguiente lista:
• puntos cuánticos de aleación de CdSeS/ZnS;
• puntos cuánticos de aleación de CdSeS/ZnS;
• puntos cuánticos de tipo núcleo-cubierta de CdSe/ZnS;
• puntos cuánticos de tipo núcleo-cubierta de CdSe/ZnS estabilizados con ligandos de octadecilamina; y/o • puntos cuánticos de tipo núcleo de CdTe funcionalizados con C00H.
En el presente documento, cabe señalar que la composición química de nanofirma química de la presente invención debe comprender además una referencia de control. Tal referencia de control pueden ser puntos cuánticos de tipo núcleo de PbS recubiertos con ácido oleico.
Tal como se ilustra en los ejemplos de la presente invención, tal como se refleja en la siguiente razón:
Intensidad de fino, del trazador
Intensidad de fluo. de la referencia
la señal fluorescente emitida por cada trazador de la composición de nanofirma química, se normalizará (usando QREF como referencia) y se ordenará en un número de dígitos/firma únicos de 2, 3, 4, 5, 6 o más. Este número debe usarse como consulta para acceder a una dirección de base de datos única creando así una unión química entre muestras, preferiblemente muestras biológicas líquidas, y su información digital asociada. El procedimiento general se presenta en la figura 4.
En otra realización preferida de la invención, la composición de nanofirma química, preferiblemente en forma de disolución, útil o adecuada para el seguimiento de información en muestras líquidas o para crear una unión química entre muestras, preferiblemente muestras biológicas líquidas, y su información digital asociada, está en forma de disoluciones madre que comprenden cócteles únicos que contienen una combinación de 1 referencia 2, 3, 4 ó 5 o más trazadores, preferiblemente 5 trazadores, para codificar para un código de 2, 3, 4, 5 o más dígitos.
En el presente documento, cabe señalar además que dicha composición de nanofirma química puede comprender además cualquier tipo de puntos cuánticos, siempre que estos (cada tipo de punto cuántico) actúe como trazador que emite una señal fluorescente o un espectro de emisión a una longitud de onda particular, en el que dicha señal fluorescente o intensidad debe normalizarse para cada uno de los trazadores que conforman la nanofirma química y debe ordenarse en el número de dígitos/firma unitarios mencionado anteriormente. En este sentido, y sólo con simple ejemplo de la invención, los puntos cuánticos pueden fabricarse de cualquier de puntos cuánticos CdSe rodeados por una caperuza de ZnSe. Los puntos cuánticos de CdSe con los extremos ocupados con ZnSe se preparan mediante métodos conocidos, y tienen una distribución de tamaños y propiedades ópticas de luz emitidos por los puntos cuánticos distintivas. Por ejemplo, puede emplearse centrifugación para separar puntos cuánticos según el tamaño debido a tasas de precipitación dependientes del tamaño.
Además, y tal como se describe en los ejemplos, una vez que la muestra biológica líquida se ha etiquetado con la nanofirma química de la invención con una firma de puntos cuánticos (QD) única, se logra la desconvolución leyendo el espectro de emisión de fluorescencia a la longitud de onda correspondiente a cada trazador y atribuyendo un valor racional finito para cada uno de los máximos de emisión. Esta medición de fluorescencia puede lograrse usando un fluorímetro de múltiples longitudes de onda (de sobremesa o portátil) o un dispositivo móvil equipado con microscopía de fluorescencia sin lentes.
Puesto que el patrón de fluorescencia en cada trazador es único y una mezcla de puntos cuánticos conforma así una firma única, deben leerse los patrones de fluorescencia para cada nanofirma química de la presente invención e introducirse en una base de datos en un punto de fabricación o punto de aplicación. Luego en el punto de venta o en los puntos de distribución, pueden leerse los patrones de fluorescencia y corresponderse con patrones en la base de datos, creando o proporcionando de este modo la unión química entre muestras líquidas biológicas y su información digital asociada.
Debe entenderse que incluso aunque diversas realizaciones y ventajas de la presente invención se han expuesto en la descripción anterior, la divulgación anterior es únicamente ilustrativa, y pueden realizarse cambios en detalles, y aún permanecer dentro de los amplios principios de la invención. Por tanto, la presente invención estará limitada únicamente por las reivindicaciones adjuntas.
Ejemplos
Ejemplo 1 - Creación de firmas de puntos cuánticos (QD) únicas
Los puntos cuánticos son partículas semiconductoras muy pequeñas, de sólo varios nm de tamaño, tan pequeñas que sus propiedades ópticas y electrónicas difieren de las de partículas más grandes. Muchos tipos de punto cuántico emitirán luz de frecuencias específicas si se les aplica electricidad o luz, y estas frecuencias pueden ajustarse con precisión cambiando el tamaño, la forma y el material de los puntos, dando lugar a muchas aplicaciones. Los puntos cuánticos presentan propiedades que son intermedias entre las de semiconductores a granel y las de moléculas discretas. Sus propiedades optoelectrónicas cambian en función de tanto el tamaño como de la forma. Los QD más grandes (radio de 5-6 nm, por ejemplo) emiten longitudes de onda más largas que dan como resultado colores de emisión tales como naranja o rojo. Los QD más pequeños (radio de 2-3 nm, por ejemplo) emiten longitudes de onda más cortas que dan como resultado colores como azul y verde, aunque los colores y tamaños específicos varían dependiendo de la composición exacta del QD.
Para el propósito de crear firmas únicas, se usaron diversas clases de puntos cuánticos adquiridos en Sigma Aldrich:
Tabla 1
Se prepararon disoluciones madre (500X, 1 mM) de referencia (QREF) y trazadores (QDA, QDB, QDC, QDE y QDF) en tolueno, y se almacenaron congelados a -20 °C. Se usaron disoluciones madre para ensamblar cócteles únicos que contienen una combinación de 1 referencia 5 trazadores para codificar para un código de 5 dígitos. Tal como se muestra en la figura 3, la regla que determina la adición de trazadores era la siguiente:
Tabla 2
Ejemplo 2 - Desconvolución de firmas de QD en una dirección de base de datos y acceso a la información
La desconvolución se logra leyendo el espectro de emisión de fluorescencia a la longitud de onda correspondiente a cada trazador y atribuyendo un valor racional finito para cada uno de los máximos de emisión. Esta medición de fluorescencia puede lograrse usando un fluorímetro de múltiples longitudes de onda (de sobremesa o portátil) o un dispositivo móvil equipado con microscopía de fluorescencia sin lentes.
Una vez adquirida, la señal fluorescente se normalizará (usando QREF como referencia) y se ordenará en un número de dígitos/firma únicos de 6. Este número se usa como consulta para acceder a una dirección de base de datos única. El procedimiento general se presenta en la figura 4.
Ejemplo 4 - Convolución y desconvolución de etiquetas de puntos cuánticos fluorescentes
Se usaron las siguientes sondas de puntos cuánticos probes:
Convolución: se usaron puntos cuánticos puros o derivados conjugados (tal como estreptavidina, anticuerpo o conjugados de trigo) para preparar disoluciones madre que contienen fluoróforos a una concentración que oscila desde 5 hasta 50 nM, tampón fosfato, Tris o Hepes. Se midió el 100 % de fluorescencia con una disolución de Qdot 705. Además del fluoróforo de referencia Qdot705, se ensamblaron firmas añadiendo una cantidad diferente de Qdot525, Qdot565, Qdot605 y Qdot655 en la misma disolución de prueba. Para corregir variaciones debido a diferencias en la disolución/extinción de tampón, rendimiento cuántico, etc., se ajustó la cantidad de cada punto cuántico de modo que la fluorescencia emitida correspondiente sería de la forma:
n
10
siendo n un número entero de la lista 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10.
Desconvolución: se excitaron muestras con una longitud de onda de 350 nm y se registró la intensidad de emisión de fluorescencia a 525 nm, 565 nm, 605 nm, 655 nm y 705 nm. Se expresaron las señales como un porcentaje de la referencia (Qdot 705 tomado como el 100 %) y se redondearon los valores al múltiplo de diez más cercano usando las funciones de parte entera proporcionadas por el paquete de software Mathematica (Wolfram).
Ejemplo de firmas desconvolucionadas: la siguiente tabla representa algunas de las firmas generadas para demostrar las posibilidades de la tecnología NETTALIS. A continuación se presenta una table que resume las etiquetas desconvolucionadas:
Se generó una representación gráfica usando la herramienta en línea Spectra Viewer (Thermofisher) y se presenta en la figura 5.
Claims (6)
1. Método para crear una unión química entre muestras biológicas líquidas y su información digital asociada, que comprende el etiquetado de muestras de una muestra biológica líquida con una composición de nanofirma química que comprende una combinación de al menos una referencia de puntos cuánticos y al menos 2, 3, 4, 5 o más trazadores de puntos cuánticos, en el que dicha unión se crea usando la siguiente razón:
Intensidad de fluo. del trazador
Intensidad de fluo. de la referencia
para normalizar la intensidad de fluorescencia de cada trazador de la composición y ordenar dichos valores normalizados para dar un número de dígitos/firma únicos de 2, 3, 4, 5, 6 o más, en el que dicho número de dígitos/firma debe leerse e introducirse en una base de datos en un punto de fabricación o punto de aplicación para crear una unión química entre la muestra biológica líquida etiquetada con la composición, y su información digital asociada.
2. Método para seguir la información en muestras biológicas líquidas, que comprende:
a. crear una unión química entre muestras biológicas líquidas y su información digital asociada según la reivindicación 1; y
b. leer el espectro de emisión de fluorescencia a la longitud de onda correspondiente a cada trazador para descodificar el número de dígitos/firma para acceder a la información digital de la muestra biológica líquida.
3. Método según la reivindicación 2, en el que la medición de fluorescencia se logra usando un fluorímetro de múltiples longitudes de onda (de sobremesa o portátil) o un dispositivo móvil equipado con microscopía de fluorescencia sin lentes.
4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dichos trazadores de puntos cuánticos pueden seleccionarse de cualquiera de los siguientes o cualquier combinación de los mismos:
a. puntos cuánticos de aleación de CdSeS/ZnS;
b. puntos cuánticos de aleación de CdSeS/ZnS;
c. puntos cuánticos de tipo núcleo-cubierta de CdSe/ZnS;
d. puntos cuánticos de tipo núcleo-cubierta de CdSe/ZnS estabilizados con ligandos de octadecilamina; y/o e. puntos cuánticos de tipo núcleo de CdTe funcionalizados con C00H.
5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicha referencia de puntos cuánticos son puntos cuánticos de tipo núcleo de PbS, preferiblemente recubiertos con ácido oleico.
6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicha composición de nanofirma química está en forma de disolución, preferiblemente en forma de disoluciones madre.
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