ES2825625T3 - Anticuerpos anti-CD38 específicos para tratar cánceres humanos - Google Patents

Abstract

Un anticuerpo monoclonal humanizado que se une específicamente a CD38 para el uso en el tratamiento de mieloma múltiple recidivante y/o refractario en un sujeto humano, en donde: dicho mieloma múltiple es recidivante o refractario desde un tratamiento previo con lenalidomida y bortezomib; dicho anticuerpo comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera; dicha cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO: 50; dicha cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO: 52; dicho anticuerpo es capaz de destruir una célula CD38+ en el sujeto humano mediante inducción de apoptosis, citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC) y citotoxicidad dependiente del complemento (CDC); y dicho anticuerpo se ha de administrar a un sujeto humano en una dosis terapéutica segura de 10 mg/kg o 20 mg/kg una vez cada dos semanas.

Description

DESCRIPCIÓN

Anticuerpos anti-CD38 específicos para tratar cánceres humanos

Campo de la invención

La presente divulgación trata de un tratamiento de una enfermedad usando anticuerpos. Más específicamente, se refiere al uso de anticuerpos anti-CD38 como un medicamento o en la elaboración de un medicamento para tratar cánceres, tales como mieloma múltiple.

Antecedentes

CD38 es una glicoproteína transmembranaria de tipo II de 45 kD con un dominio extracelular C-terminal largo y un dominio citoplásmico N-terminal corto. La proteína CD38 es una ectoenzima bifuncional que puede catalizar la conversión de NAD+ en ADP-ribosa cíclica (cADPR) y también hidrolizar cADPR en ADP-ribosa.

CD38 se regula al alza en muchas enfermedades malignas hematológicas y en líneas celulares derivadas de diversas enfermedades malignas hematológicas. Por otra parte, la mayoría de las células madre pluripotentes primitivas del sistema hematológico son CD38-. La expresión de CD38 en enfermedades malignas hematológicas y su correlación con la progresión de la enfermedad en la leucemia linfocítica crónica (CLL) hace de CD38 una diana atractiva para la terapia con anticuerpos.

Se han descrito previamente anticuerpos anti-CD38, que reconocen específicamente CD38, por ejemplo en la solicitud de patente internacional WO2006/099875. Sin embargo, estos anticuerpos no inducen la apoptosis cuando se usan como un solo agente y se incuban con células que expresan CD38+.

Los anticuerpos monoclonales específicos anti-CD38, tales como 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 y 38SB39, se han descrito previamente en la solicitud de patente internacional WO2008/047242. El documento WO2008/047242 describe las tres actividades citotóxicas, apoptosis, ADCC y CDC, de estos anticuerpos anti-CD38 específicos.

Por otra parte, el uso de estos anticuerpos anti-CD38+ específicos en combinación con agentes citotóxicos, tales como, citarabina, vincristina, ciclofosfamida y melfalano, se ha presentado en las solicitudes de patente internacional WO2010/061357, WO2010/061358, WO2010/061359 y WO2010/061360. Sin embargo, no se ha presentado el uso de anticuerpos anti-CD38 como un agente individual.

Sumario de la invención

En una realización, la presente divulgación se refiere a un anticuerpo que se une específicamente a CD38 para el uso como un medicamento, en donde el anticuerpo se ha de administrar a un sujeto humano en una dosis terapéutica segura de 20 mg/kg o inferior.

En otro aspecto, la dosis terapéutica segura del anticuerpo divulgado es aproximadamente 5 mg/kg, o aproximadamente 10 mg/kg, o aproximadamente 20 mg/kg.

En otra realización, la presente divulgación también se refiere a un anticuerpo que se une específicamente a CD38 o una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo que se une específicamente a CD38, en donde el anticuerpo o la composición farmacéutica se puede usar como un medicamento en el tratamiento de mieloma múltiple recidivante y/o refractario, en donde el anticuerpo se ha de administrar a un sujeto humano en una dosis terapéutica segura de aproximadamente 20 mg/kg o menos.

En otra realización, la presente divulgación también se refiere al uso de anticuerpos anti-CD38 como un agente individual que reduce la carga del paciente con productos quimioterapéuticos.

En otra realización, la presente divulgación se refiere además a una dosis terapéutica segura para un sujeto humano de un anticuerpo que se une específicamente a CD38, en donde dicha dosis terapéutica segura es 20 mg/kg o menos, o aproximadamente 20 mg/kg o menos.

En otra realización, la divulgación también se ocupa de un método para tratar una enfermedad maligna hematológica CD38+ en un sujeto humano que necesite del mismo, comprendiendo dicho método administrar a dicho sujeto humano un anticuerpo que se une específicamente a CD38 en una cantidad terapéuticamente eficaz de 20 mg/kg o menos, o aproximadamente 20 mg/kg o menos.

En otro aspecto, la divulgación también se ocupa de un método para tratar mieloma múltiple CD38+ en un sujeto humano que necesite del mismo, comprendiendo dicho método administrar a dicho sujeto humano una cantidad eficaz de un anticuerpo que se une específicamente a CD38.

En otro aspecto, la divulgación también se ocupa del uso de dicho anticuerpo que se une específicamente a CD38 para la fabricación de un medicamento, en donde dicho anticuerpo se administra a un sujeto humano en una dosis terapéutica segura de 20 mg/kg o menos, o aproximadamente 20 mg/kg o menos.

En una realización, el medicamento es para el tratamiento de una enfermedad maligna hematológica CD38+, en particular mieloma múltiple, lo más particularmente mieloma múltiple CD38+ recidivante y/o refractario.

En otra realización, la presente divulgación se ocupa además del uso de dicho anticuerpo que se une específicamente a CD38 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de mieloma múltiple CD38+, en particular mieloma múltiple CD38+ recidivante y/o refractario.

En una realización, se divulga un anticuerpo o fragmento de unión a epítopo del mismo capaz de unirse específicamente a CD38 para el uso como un medicamento, en donde el anticuerpo o fragmento de unión a epítopo no desencadena la producción de autoanticuerpos contra dicho anticuerpo o fragmento de unión a epítopo por un sujeto humano cuando el anticuerpo o fragmento de unión a epítopo se administra al sujeto humano en una dosis de aproximadamente 20 mg/kg o menos.

En otra realización, se divulga un anticuerpo o fragmento de unión a epítopo del mismo capaz de unirse específicamente a CD38 para el uso como un medicamento, en donde el anticuerpo o fragmento de unión a epítopo es capaz de exhibir ocupación del receptor de CD38 detectable en un sujeto humano cuando se administra al sujeto humano en un nivel de dosis de aproximadamente 1 mg/kg cada dos semanas.

En otra realización, se divulga un anticuerpo o fragmento de unión a epítopo del mismo capaz de unirse específicamente a CD38 para el uso como un medicamento, en donde el anticuerpo o fragmento de unión a epítopo es capaz de exhibir al menos aproximadamente 84,1% de ocupación del receptor de CD38 en un sujeto humano cuando se administra al sujeto humano un nivel de dosis de aproximadamente 10 mg/kg cada dos semanas

En otra realización, se divulga un anticuerpo o fragmento de unión a epítopo del mismo capaz de unirse específicamente a CD38 para el uso como un medicamento, en donde el anticuerpo o fragmento de unión a epítopo es capaz de exhibir al menos aproximadamente 97,7% de ocupación del receptor de CD38 en un sujeto humano cuando se administra al sujeto humano un nivel de dosis de aproximadamente 10 mg/kg cada dos semanas.

En otro aspecto, se divulga un anticuerpo o fragmento de unión a epítopo del mismo capaz de unirse específicamente a CD38 para el uso como un medicamento, en donde el anticuerpo o fragmento de unión a epítopo es capaz de inhibir el crecimiento tumoral en un sujeto humano cuando se administra al sujeto humano en un nivel de dosis que varía de aproximadamente 5 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg cada dos semanas, o cada semana.

En otra realización, se divulga un anticuerpo o fragmento de unión a epítopo del mismo capaz de unirse específicamente a CD38 para el uso como un medicamento, en donde el anticuerpo o fragmento de unión a epítopo es capaz de inhibir el crecimiento tumoral en un sujeto humano cuando se administra al sujeto humano en un nivel de dosis que varía de aproximadamente 10 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg cada dos semanas, o cada semana.

En otro aspecto, también se divulga una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los anticuerpos divulgados y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

En otro aspecto, la presente divulgación proporciona una forma de dosificación unitaria que comprende la composición farmacéutica divulgada en la presente.

En otro aspecto, la presente divulgación también proporciona un artículo de fabricación que comprende la composición farmacéutica divulgada en la presente y un recipiente.

En otro aspecto, los métodos divulgados pueden ser adecuados para tratar a un sujeto humano que tenga una enfermedad o un trastorno en los que CD38 está anormalmente regulada al alza. Estos métodos pueden incluir, entre otras etapas, administrar al sujeto humano un anticuerpo o fragmento de unión a epítopo del mismo capaz de unirse específicamente a CD38, en donde el anticuerpo es capaz de inhibir el crecimiento tumoral en el sujeto humano cuando se administra al sujeto humano en un nivel de dosis que varía de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg cada dos semanas, o cada semana. En un aspecto, esta enfermedad o trastorno es una enfermedad maligna hematológica CD38+. En otro aspecto, esta enfermedad o trastorno es un mieloma múltiple CD38+.

La invención se define mediante las reivindicaciones.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1: Gráfica que muestra la respuesta a lo largo del tiempo en pacientes con mieloma múltiple (N=17) que se trataban con el anticuerpo anti-CD38 específico hu38SB19 a diferentes dosis (1,3, 5 y 10 mg/kg). (Algunos pacientes se excluían después de un corto período de tratamiento debido a una enfermedad progresiva. Sin embargo, varios pacientes se estabilizaban durante el tratamiento y otros con niveles de dosis de 1 mg/kg y 10 mg/kg muestran una respuesta parcial. PR = respuesta parcial, MR = respuesta mínima, SD = enfermedad estable o PD = enfermedad progresiva).

Descripción detallada

En el contexto de la divulgación, el término "CD38" se refiere a una proteína CD38 que es una glicoproteína transmembranaria de tipo II de 45 kD con un dominio extracelular C-terminal largo y un dominio citoplásmico N-terminal corto. La proteína de CD38 es una ectoenzima bifuncional que puede catalizar la conversión de NAD+ en ADP-ribosa cíclica (cADPR) y también hidrolizar cADPR en ADP-ribosa. Durante la ontogenia, CD38 aparece sobre células madre CD34+ comprometidas y progenitores comprometidos con el linaje de células linfoides, eritroides y mieloides. La expresión de CD38 persiste principalmente en el linaje linfoide con niveles de expresión variables en diferentes fases de desarrollo de células T y B.

El papel de CD38+ en la transducción de señales se ha descrito adicionalmente en la solicitud de patente internacional WO2008/047242. En particular, CD38 se refiere a una proteína transmembranaria de tipo II, que comprende, por ejemplo, una secuencia de aminoácidos como en el número de registro del Genbank NP_001766.2 (según estaba disponible el 7 de octubre de 2013).

CD38 es regulada al alza en muchas enfermedades malignas hematológicas y en líneas celulares derivadas de diversas enfermedades malignas hematológicas.

"Enfermedades malignas hematológicas" son los tipos de cáncer que afectan a la sangre, la médula ósea y los nódulos linfáticos. Como los tres están íntimamente conectados a través del sistema inmunitario, una enfermedad que afecte a uno de los tres podría afectar también a los otros. Enfermedades malignas hematológicas incluyen linfoma no hodgkiniano NHL) (incluyendo, p. ej. linfoma de Burkitt (BL) y linfoma de células T (TCL)), mieloma múltiple (MM), leucemia linfocítica crónica (CLL) (tal como, p. ej., leucemia linfocítica crónica B (B-CLL) y leucemia tricoleucemia (HCL)), leucemia linfocítica aguda (ALL) B y T, leucemia mieloide aguda (AML), linfoma de Hodgkin (HL) y leucemia mieloide crónica (CML).

Por otra lado, la mayoría de las células madre pluripotentes primitivas del sistema hematológico son CD38-. La expresión de CD38 en enfermedades malignas hematológicas y su correlación con la progresión de la enfermedad convierte a CD38 en una diana atractiva para la terapia con anticuerpos.

Una "célula CD38+" es una célula que expresa la proteína CD38. En particular, la célula CD38+ es una célula de mamífero. En una realización, la célula CD38+ es una célula de linfoma no hodgkiniano (NHL), mieloma múltiple (MM), leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia linfocítica aguda (ALL) B y T, leucemia mieloide aguda (AML), linfoma de Hodgkin (HL) o leucemia mieloide crónica (CML) que expresa la proteína CD38.

"Enfermedad maligna hematológica CD38+" es así una enfermedad maligna hematológica, según se describe anteriormente, en la que las células cancerosas son o comprenden células CD38+.

En el contexto de la divulgación, la enfermedad maligna hematológica CD38+ se selecciona en particular del grupo que consiste en linfoma no hodgkiniano (NHL) (incluyendo, p. ej., linfoma de Burkitt (BL) y linfoma de células T (TCL)), mieloma múltiple (MM), leucemia linfocítica crónica (CLL) (tal como, p. ej., leucemia linfocítica crónica B (B-CLL) o tricoleucemia (HCL)), leucemia linfocítica aguda B y T (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), linfoma de Hodgkin (HL) y leucemia mieloide crónica (CML), en donde las células cancerosas son o comprender células CD38+.

En particular, enfermedades malignas hematológicas CD38+ son linfoma no hodgkiniano (NHL) de células B, mieloma múltiple (MM), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfoblástica aguda (ALL de células B) y/o leucemia linfocítica crónica (CLL), más particularmente mieloma múltiple (MM), lo más particularmente mieloma múltiple recidivante y/o refractario.

Métodos para identificar una enfermedad maligna hematológica son conocidos por los expertos en la especialidad e incluyen como una primera etapa un hemograma completo (CBC) y una prueba de gota de sangre periférica. El diagnóstico definitivo requiere habitualmente una aspiración y/o biopsia adecuada de la médula ósea para estudios morfológicos finalmente complementados por análisis citométrico de flujo, citogenética y técnicas moleculares adicionales.

Técnicas para confirmar que las células derivadas de esta enfermedad maligna hematológica son CD38+ son conocidas por los expertos en la especialidad e incluyen técnicas de biología molecular estándar tales como, por ejemplo, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y/o métodos inmunoquímicos tales análisis por transferencia Western.

En el contexto de la divulgación, "sujeto" indica un ser humano.

En particular, "sujeto" y/o "sujeto que necesite del mismo" indica en la presente un individuo que está afectado por una enfermedad maligna hematológica CD38+ y bajo cuidado o tratamiento médico. Así, la palabra sujeto se puede referir en la presente a un paciente.

El sujeto según la divulgación puede ser un hombre o una mujer.

En algunas realizaciones, el sujeto ha sido tratado previamente con una terapia anticancerosa. En particular, dicha terapia anticancerosa previa se puede seleccionar del grupo constituido por quimioterapia, terapias contra el cáncer dirigidas, radioterapia, trasplante de médula ósea y/o células madre e inmunoterapia.

"Quimioterapia" se refiere al tratamiento del cáncer con uno o más fármacos antineoplásticos citotóxicos (fármacos quimioterapéuticos) como una parte de un régimen estandarizado. Un quimiofármaco se aporta habitualmente en ciclos, en donde un período de tratamiento está seguido por un período de descanso para dar al cuerpo tiempo para que se recupere.

"Quimiofármacos", que se usan, por ejemplo, para tratar una enfermedad maligna hematológica son, sin limitación a ella, citarabina (arabinósido de citosina o ara-C) y los fármacos de antraciclina (tales como daunorrubicina y/o daunomicina, doxorrubicina y doxorrubicina liposómica, idarrubicina y mitoxantrona), gemtuzumab, clofarabina, cladribina, hidroxiurea (hydrea®), etopósido, amsacrina, inhibidores de FLT3 y agentes desmetilantes (5-azacitidina y decitabina), melfalano, ciclofosfamida, vincristina, inhibidores del proteasoma tales como bortezomib, lenalidomida, talidomida y/o pomalidomida, en particular bortezomib y/o lenalidomida.

"Terapias contra el cáncer dirigidas" se refiere a fármacos y otras sustancias que bloquean el crecimiento y la extensión del cáncer al interferir con moléculas específicas implicadas en el crecimiento y la progresión tumorales.

La "radioterapia" o "radiación" usa radiación de alta energía para retirar células cancerosas. La radioterapia se podría usar antes de un trasplante de médula ósea o células madre de sangre periférica.

"Trasplante de médula ósea y/o células madre" se refiere a un trasplante de células destinado a restaurar células madre que eran destruidas por altas dosis de quimioterapia y/o radioterapia. Fuentes de células madre incluyen la médula ósea, la sangre periférica o la sangre del cordón umbilical. Dependiendo de la fuente de células madre que se trasplante, el procedimiento se podría distinguir en trasplante de médula ósea (BMT) o trasplante de células madre de sangre periférica (PBSCT) o trasplante de sangre del cordón umbilical (UCBT). Por otra parte, trasplante de médula ósea y/o células madre se podría referir a un trasplante de células madre autólogo y/o un trasplante alogénico.

En un "trasplante autólogo", las propias células madre de un sujeto se retiran de su médula ósea o sangre periférica. Se congelan y se almacenan mientras la persona se somete a tratamiento (quimioterapia y/o radiación de alta dosis). Se puede usar un procedimiento llamado "purga" para tratar de retirar cualesquiera células leucémicas de las muestras. A continuación, las células madre se reinfunden en la sangre del sujeto después del tratamiento.

Los "trasplantes alogénicos" son trasplantes procedentes de un donante compatible. La ventaja de los trasplantes de médula ósea alogénicos es que las células trasplantadas procedentes del donante podrían establecer un nuevo sistema inmunitario, que podría detectar células leucémicas como extrañas y retirarlas. La desventaja de los trasplantes alogénicos es la limitación de donantes compatibles y los efectos secundarios.

"Inmunoterapia" se refiere a la estimulación del sistema inmunitario del sujeto para atacar a las células tumorales malignas que son responsables de la enfermedad. Esto se puede hacer bien a través de la inmunización del sujeto p. ej., al administrar una vacuna para el cáncer, en cuyo caso el propio sistema inmunitario del sujeto es entrenado para reconocer células tumorales como dianas que han de ser destruidas, o bien a través de la administración de anticuerpos terapéuticos como fármacos, en cuyo caso el sistema inmunitario del sujeto es reclutado para destruir células tumorales mediante los anticuerpos terapéuticos.

En el contexto de la divulgación, el sujeto puede haber sido tratado previamente de una enfermedad maligna hematológica mediante terapia anticancerosa estándar, según se define anteriormente, pero es recidivante y/o refractario.

Así, en una realización particular, el sujeto sufre mieloma múltiple CD38+, en particular mieloma múltiple CD38+ recidivante y/o refractario.

"Recidivante" se refiere a un sujeto en el que la enfermedad maligna hematológica se ha tratado y mejorado pero en el que la enfermedad maligna hematológica vuelve a presentarse.

"Refractario" se refiere a un sujeto en el que la enfermedad maligna hematológica se ha tratado sin ninguna mejora y así la enfermedad maligna hematológica progresa.

En una realización, el sujeto se ha tratado previamente con bortezomib y/o lenalidomida.

En una realización, el sujeto ha recibido previamente un trasplante de células madre autólogo (ASCT).

En una realización, el sujeto ha recaído dentro de 6 meses después de un trasplante autólogo.

Se sabe en la especialidad que los sujetos que tienen mieloma múltiple y ciertas características genéticas, tales como la eliminación cromosómica 17p, las translocaciones t (4, 14), t (14, 16), t (14, 20) o amplificaciones tales como >3 copias de 1q21 están asociados con un peor resultado.

Por lo tanto, en una realización, el sujeto tiene una eliminación 17p, t (4, 14), t (14, 16), t (14, 20) y/o >3 copias de 1q21.

Recientemente, los investigadores han desarrollado una prueba de perfilado genómica para sujetos con mieloma múltiple. Esta prueba permite a los médicos clasificar a los sujetos con mieloma múltiple basándose en su perfil de expresión genómica y no solo en unas pocas anormalidades cromosómicas.

En una realización, el sujeto puede tener así una firma de perfilado de expresión genética (GEP) de alto riesgo (Shaughnessy JD Jr., Zhan F, Burington BE y cols. (2007), Blood 109: 2276-2284.).

El sujeto puede representar cualquier combinación de las susodichas características.

El mieloma múltiple se puede detectar por la presencia de proteínas monoclonales (proteínas M).

"Proteína M" se refiere a una paraproteína (una proteína monoclonal o proteína M). Esta paraproteína es una inmunoglobulina o cadena ligera de inmunoglobulina que es producida en exceso por la proliferación clonal de células plasmáticas. Cantidades superiores a un cierto umbral indican mieloma múltiple. Habitualmente, la proteína M se cuantifica en el suero así como en la orina.

El nivel de proteína M en el suero se mide típicamente mediante electroforesis del suero o, por ejemplo, mediante ensayos para inmunoglobulinas específicas; sin embargo, la cuantificación de inmunoglobulinas específicas siempre sobreestima la proteína M debido a que se incluyen en el resultado inmunoglobulinas normales. Por esta razón, las medidas de referencia y seguimiento de la proteína M se deben realizar mediante el mismo método (Riches PG y cols., 1991).

En una realización, proteína M en suero de >0,5 g/dl indica mieloma múltiple. En otra realización, proteína M en suero de más de aproximadamente 0,5 g/dl indica mieloma múltiple.

La proteína M en la orina se refiere a la proteína M excretada en la orina medida a lo largo de 24 horas. La cantidad total de proteína excretada a lo largo de 24 horas se mide típicamente y se multiplica por el valor del porcentaje de proteína M en la orina que se determina mediante electroforesis de proteína en la orina concentrada.

En una realización, proteína M en la orina de >200 mg en una orina de 24 h indica mieloma múltiple. En otra realización, proteína M en la orina de más de aproximadamente 200 mg en una orina de 24 h indica mieloma múltiple.

El mieloma múltiple se podría identificar además mediante una cadena ligera de inmunoglobulina encontrada en la orina, esta paraproteína se denomina proteína de Bence Jones y es una paraproteína urinaria compuesta por cadenas ligeras libres, en donde las cadenas ligeras son cadenas ligeras libres lambda (^A ) y/o kappa (^k ). Estas cadenas ligeras libres (FLC) se pueden medir mediante pruebas comerciales. La medida de las cadenas ligeras libres se refiere a la medida de las cadenas ligeras libres FLC kappa y FLC lambda que da una relación de cadenas ligeras libres (FLC) de FLC kappa a FLC lambda (relación FLC ^k /^A ), en donde una relación FLC ^k /^A normal varía de 0,26 a 1,65.

En pacientes con mieloma múltiple, cualquiera de las cadenas ligeras, kappa o lambda, se puede producir dominantemente, lo que da como resultado cambios de la relación FLC ^k /^A .

Relaciones FLC ^k /^A anormales que indican mieloma múltiple son así relaciones FLC ^k /^A <0,26 o >1,65.

En una realización, cadenas ligeras libres (FLC) en suero elevadas con FLC >10 mg/dl y con una relación de FLC anormal indican mieloma múltiple. En otra realización, cadenas ligeras libres (FLC) en suero elevadas con FLC mayor de aproximadamente 10 mg/dl y con relaciones de FLC anormales indican mieloma múltiple.

Por lo tanto, en una realización, el sujeto que tiene mieloma múltiple tiene a) una proteína M en suero medible de más de aproximadamente 0,5 g/dl, y/o b) proteína M en la orina de más de aproximadamente 200 mg (orina de 24 h), y/o c) cadenas ligeras libres (FLC) en suero elevadas con FLC mayor de aproximadamente 10 mg/dl con una relación de FLC anormal.

En una realización, el sujeto es tolerante a productos proteínicos infundidos.

El anticuerpo en el contexto de la divulgación se une específicamente a CD38. Según una realización, los anticuerpos anti-CD38 que se van a usar en el marco de la divulgación son capaces de destruir una célula CD38+ mediante inducción de apoptosis, citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC) y citotoxicidad dependiente del complemento (CDC).

Según se usa en la presente, "apoptosis" se refiere a un proceso de muerte celular programada.

"Citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos" o "ADCC" se refiere a un mecanismo de defensa inmunitaria mediada por células por el que una célula efectora del sistema inmunitario somete a lisis activamente a una célula diana, cuyos antígenos de la superficie de la membrana se han unido con anticuerpos específicos.

"Citotoxicidad dependiente del complemento" o "CDC", en el contexto de la divulgación, se refiere a la lisis de una célula diana en presencia de proteínas del sistema del complemento.

Según se usa en la presente, "conjugado", "inmunoconjugado", "conjugado anticuerpo-fármaco" o "ADC" tienen el mismo significado y son intercambiables.

Un "anticuerpo" puede ser un anticuerpo natural o convencional en el que dos cadenas pesadas están ligadas entre sí por enlaces disulfuro y cada cadena pesada está ligada a una cadena ligera por un enlace disulfuro. Existen dos tipos de cadena ligera, lambda (A) y kappa (^k ). Existen cinco clases (o isotipos) principales de cadena pesada que determinan la actividad funcional de una molécula de anticuerpo: IgM, IgD, IgG, IgA y IgE. Cada cadena contiene distintos dominios de secuencia. La cadena ligera incluye dos dominios o regiones, un dominio variable (VL) y un dominio constante (CL). La cadena pesada incluye cuatro dominios, un dominio variable (VH) y tres dominios constantes (CH1, CH2 y CH3, denominados colectivamente CH). Las regiones variables de las cadenas tanto ligeras (VL) y como pesadas (VH) determinan el reconocimiento y la especificidad de unión al antígeno. Los dominios de región constante de las cadenas ligeras (CL) y pesadas (CH) confieren importantes propiedades biológicas tales como asociación de las cadenas del anticuerpo, secreción, movilidad transplacentaria, unión al complemento y unión a receptores de Fc (FcR). El fragmento Fv es la parte N-terminal del fragmento Fab de una inmunoglobulina y consiste en las porciones variables de una cadena ligera y una cadena pesada. La especificidad del anticuerpo reside en la complementariedad estructural y entre el sitio de combinación del anticuerpo y el determinante antigénico. Los sitios de combinación del anticuerpo están constituidos por residuos que proceden principalmente de las regiones hipervariables o determinantes de la complementariedad (CDRs). Ocasionalmente, residuos procedentes de regiones no hipervariables o marco (FR) influyen en la estructura global de los dominios y de ahí el sitio de combinación.

"Regiones determinantes de la complementariedad" o "CDRs" se refiere a secuencias de aminoácidos que conjuntamente definen la afinidad y especificidad de unión de la región Fv natural de un sitio de unión de inmunoglobulina natural. Las cadenas ligeras y pesadas de una inmunoglobulina tienen cada una tres CDRs, denominadas CDR1-L, CDR2-L, CDR3-L y CDR1-H, CDR2-H, CDR3-H, respectivamente. Por lo tanto, un sitio de unión a antígeno de un anticuerpo convencional incluye seis CDRs, que comprenden el conjunto de CDR de cada una de una región V de una cadena pesada y una ligera.

"Regiones marco" (FRs) se refiere a secuencias de aminoácidos interpuestas entre CDRs, es decir, a las porciones de regiones variables de cadenas ligeras y pesadas de inmunoglobulina que están relativamente conservadas entre diferentes inmunoglobulinas en una sola especie. Las cadenas ligeras y pesadas de una inmunoglobulina tienen cada una cuatro FRs, denominadas FR1-L, FR2-L, FR3-L, FR4-L, y FR1-H, FR2-H, FR3-H, FR4-H, respectivamente.

Según se usa en la presente, una "región marco humana" es una región marco que es sustancialmente idéntica (aproximadamente 85%, o más, en particular 90%, 95%, 97%, 99% o 100%) a la región marco de un anticuerpo humano presente en la naturaleza.

La definición de CDR/FR relativa a la cadena ligera o pesada de inmunoglobulina se da basándose en la definición de Kabat (http://www.bioinf.org.uk/abs/).

Según se usa en la presente, el término "anticuerpo" indica anticuerpos convencionales y sus fragmentos, y anticuerpos quiméricos, humanizados, biespecíficos o multiespecíficos.

El término "anticuerpo monoclonal" o "mAb" según se usa en la presente se refiere a una molécula de anticuerpo de una sola composición de aminoácidos que se dirige contra un antígeno específico, y no se considera que requiera la producción del anticuerpo mediante ningún método particular. Un anticuerpo monoclonal puede ser producido por un solo clon de células B o hibridoma, pero también puede ser recombinante, es decir producirse mediante manipulación de proteínas.

El término "anticuerpo quimérico" se refiere a un anticuerpo manipulado en el que la región constante o una porción de la misma se altera, reemplaza o intercambia, de modo que la región variable esté conectada a una región constante de una especie diferente, o perteneciente a otra clase o subclase de anticuerpo. Un anticuerpo quimérico también se refiere a un anticuerpo en el que la región variable o una porción de la misma se altera, reemplaza o intercambia, de modo que la región constante esté conectada a una región variable de una especie diferente, o perteneciente a otra clase o subclase de anticuerpo. En particular, un anticuerpo quimérico comprende un dominio VH y un dominio VL de un anticuerpo derivado de un animal no humano, en asociación con un dominio CH y un dominio CL de otro anticuerpo, en particular un anticuerpo humano. Como el animal no humano, se puede usar cualquier animal tal como un ratón, una rata, un hámster, un conejo o similares. Un anticuerpo quimérico también puede indicar un anticuerpo multiespecífico que tiene especificidad para al menos dos antígenos diferentes. En una realización, un anticuerpo quimérico tiene dominios variables de origen de ratón y dominios constantes de origen humano.

El término "anticuerpo humanizado" se refiere a un anticuerpo que inicialmente es totalmente o parcialmente de origen no humano y que se ha modificado para reemplazar ciertos aminoácidos, en particular en las regiones marco de las cadenas pesadas y ligeras, a fin de evitar o minimizar una respuesta inmunitaria en seres humanos. Los dominios constantes de un anticuerpo humanizado son la mayor parte de las veces dominios CH y CL humanos. En una realización, un anticuerpo humanizado tiene dominios constantes de origen humano.

Para anticuerpos quiméricos, la humanización implica típicamente la modificación de las regiones marco de las secuencias de regiones variables.

Los residuos de aminoácido que son parte de una CDR típicamente no se alterarán en relación con la humanización, aunque en ciertos casos puede ser deseable alterar residuos de aminoácido de CDR individuales, por ejemplo para retirar un sitio de glicosilación, un sitio de desamidación, un residuo de cisteína no deseado, un residuo de lisina en el caso de ADC. La glicosilación conectada a N se produce mediante la ligazón de una cadena de oligosacárido a un residuo de asparagina en la secuencia tripeptídica Asn-X-Ser o Asn-X-Thr, donde X puede ser cualquier aminoácido excepto Pro. La retirada de un sitio de N-glicosilación se puede alcanzar al mutar bien el residuo de Asn o bien el de Ser y/o Thr por un residuo diferente, en particular por medio de una sustitución de aminoácido conservativa. La desamidación de residuos de asparagina y glutamina se puede producir dependiendo de factores tales como el pH y la exposición superficial. Los residuos de asparagina son particularmente propensos a la desamidación, principalmente cuando están presentes en la secuencia Asn-Gly, y en un menor grado en otras secuencias dipeptídicas tales como Asn-Ala. Cuando este sitio de desamidación, en particular Asn-Gly, está presente en una secuencia de CDR, por lo tanto puede ser deseable retirar el sitio, típicamente mediante una sustitución conservativa para retirar uno de los residuos implicados. En el caso de ADC, la ligazón de un material citotóxico al mAb se podría preparar a través de enlace covalente al residuo de la cadena lateral de lisina. Este impedimento estérico puede interferir con la unión del mAb al antígeno. Por lo tanto, puede ser deseable retirar el residuo de lisina, típicamente mediante una sustitución conservativa por arginina. La sustitución en una secuencia de CDR para retirar uno de los residuos implicados también pretende estar abarcada por la presente divulgación.

El objetivo de la humanización es una reducción en la inmunogenicidad de un anticuerpo xenogénico, tal como un anticuerpo murino, para la introducción en un ser humano, mientras que se mantiene toda la afinidad y especificidad de unión a antígeno del anticuerpo. Los anticuerpos humanizados, o anticuerpos adaptados para la ausencia de rechazo por otro mamífero, se pueden producir usando varias tecnologías tales como remodelado e injerto de CDR. Según se usa en la presente, la tecnología de remodelado usa una combinación de modelado molecular, análisis estadístico y mutagénesis para alterar las superficies que no son CDR de regiones variables del anticuerpo para que se asemejen a las superficies de anticuerpos conocidos del hospedador elegido.

Estrategias y métodos para el remodelado de anticuerpos, y otros métodos para reducir la inmunogenicidad de anticuerpos dentro de un hospedador diferente, se divulgan en la Patente de EE. UU. N° 5.639.641. Brevemente, en un método preferido, (1) se generan alineamientos de posiciones de un conjunto de regiones variables de cadenas pesadas y ligeras de anticuerpo para dar un grupo de posiciones expuestas a la superficie marco de las regiones variables de cadenas pesadas y ligeras en donde las posiciones de alineamiento para todas las regiones variables son al menos aproximadamente 98% idénticas; (2) un grupo de residuos de aminoácido expuestos a la superficie marco de regiones variables de cadenas pesadas y ligeras se define para un anticuerpo de roedor (o fragmento del mismo); (3) se identifica un grupo de residuos de aminoácido expuestos a la superficie marco de regiones variables de cadenas pesadas y ligeras que es el más cercanamente idéntico al grupo de residuos de aminoácido expuestos superficialmente de roedor; (4) el grupo de residuos de aminoácido expuestos a la superficie marco de regiones variables de cadenas pesadas y ligeras definido en la etapa (2) se sustituye por el grupo de residuos de aminoácido expuestos a la superficie marco de regiones variables de cadenas pesadas y ligeras identificado en la etapa (3), excepto para los residuos de aminoácido que están dentro de 5 Á de cualquier átomo de cualquier residuo de las regiones determinantes de la complementariedad del anticuerpo de roedor; y (5) se produce el anticuerpo de roedor humanizado que tiene especificidad de unión. Así, en una realización, los anticuerpos humanizados también se pueden denominar anticuerpos "remodelados".

Los anticuerpos se pueden humanizar además usando una variedad de otras técnicas incluyendo injerto de CDR (documentos EP0239400; WO91/09967; Patentes de EE. UU. N° 5.530.101 y 5.585.089), revestimiento o remodelado (documentos EP0592106; EP0519596; Padlan (1991) Molecular Immunology 28(4/5):489-498; Studnicka y cols. (1994) Protein Engineering 7(6):805-814; Roguska y cols. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 91:969-973) e intercambio de cadenas (Patente de EE. UU. N° 5.565.332). Se pueden elaborar anticuerpos humanos mediante una variedad de métodos conocidos en la especialidad incluyendo métodos de exposición en fagos. Véanse además las Patentes de EE. UU. N° 4.444.887, 4.716.111, 5.545.806 y 5.814.318; y la solicitud de patente internacional WO98/46645, WO98/50433, WO98/24893, WO98/16654, WO96/34096, WO96/33735 y WO91/10741.

Una "sustitución de aminoácido conservativa" es una en la que un residuo de aminoácido se sustituye por otro residuo de aminoácido que tiene un grupo R de cadena lateral con propiedades químicas similares (p. ej., carga o hidrofobia). En general, una sustitución de aminoácido conservativa no cambiará sustancialmente las propiedades funcionales de una proteína. Ejemplos de grupos de aminoácidos que tienen cadenas laterales con propiedades químicas similares incluyen 1) cadenas laterales alifáticas: glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina; 2) cadenas laterales alifáticashidroxiladas: serina y treonina; 3) cadenas laterales que contienen amida: asparagina y glutamina; 4) cadenas laterales aromáticas: fenilalanina, tirosina y triptófano; 5) cadenas laterales básicas: lisina, arginina e histidina; 6) cadenas laterales ácidas: ácido aspártico y ácido glutámico; y 7) cadenas laterales que contienen azufre: cisteína y metionina. Grupos de sustituciones de aminoácidos conservativas son: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina-triptófano, lisina-arginina, alanina-valina, glutamato-aspartato y asparagina-glutamina.

"Fragmentos" de anticuerpos (convencionales) comprenden una porción de un anticuerpo intacto, en particular la región de unión a antígeno o región variable del anticuerpo intacto. Ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen Fv, Fab, F(ab')2, Fab', dsFv, (dsFv)2, scFv, sc(Fv)2, diacuerpos, anticuerpos biespecíficos y multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpo.

El término "Fab" indica un fragmento de anticuerpo que tiene un peso molecular de aproximadamente 50.000 Da y actividad de unión a antígeno, en el que aproximadamente la mitad del lado N-terminal de la cadena H y toda la cadena L, junto con fragmentos obtenidos al tratar la IgG con una proteasa, papaína, están unidos entre sí a través de un enlace disulfuro.

El término "F(ab')2" se refiere a un fragmento de anticuerpo que tiene un peso molecular de aproximadamente 100.000 Da y actividad de unión a antígeno, que es ligeramente mayor que el Fab unido a través de un enlace disulfuro a la región de bisagra, junto con fragmentos obtenidos al tratar la IgG con una proteasa, pepsina.

El término "Fab"' se refiere a un fragmento de anticuerpo que tiene un peso molecular de aproximadamente 50.000 Da y actividad de unión a antígeno, que se obtiene al cortar un enlace disulfuro de la región de bisagra del fragmento F(ab')2.

Un polipéptido de Fv monocatenario ("scFv") es un heterodímero VH::VL ligado covalentemente que habitualmente se expresa a partir de una fusión génica que incluye genes que codifican VH y VL ligados por un conector que codifica el péptido. El fragmento scFv humano de la divulgación incluye CDRs que se mantienen en una conformación apropiada, en particular al usar técnicas de recombinación génica. Se pueden formar fragmentos de anticuerpo divalentes y multivalentes bien espontáneamente por asociación de scFvs monovalentes, o bien se pueden generar al acoplar scFvs monovalentes mediante un conector peptídico, tal como sc(Fv)2 divalente.

"dsFv" es un heterodímero de VH::VL estabilizado mediante un enlace disulfuro.

"(dsFv)2" indica dos dsFv acoplados mediante un conector peptídico.

El término "anticuerpo biespecífico" o "BsAb" indica un anticuerpo que combina los sitios de unión a antígeno de dos anticuerpos dentro de una sola molécula. Así, los BsAbs son capaces de unirse a dos antígenos diferentes simultáneamente. La manipulación genética se ha usado con frecuencia creciente para diseñar, modificar y producir anticuerpos o derivados de anticuerpo con un conjunto deseado de propiedades de unión y funciones efectoras según se describe, a modo de ejemplo, en el documento EP 2050 764 A1.

El término "anticuerpo multiespecífico" indica un anticuerpo que combina los sitios de unión a antígeno de dos o más anticuerpos dentro de una sola molécula.

El término "diacuerpos" se refiere a pequeños fragmentos de anticuerpo con dos sitios de unión a antígeno, fragmentos que comprenden un dominio variable de cadena pesada (VH) conectado a un dominio variable de cadena ligera (VL) en la misma cadena polipeptídica (VH-VL). Al usar un conector que sea demasiado corto para permitir el apareamiento entre los dos dominios en la misma cadena, los dominios son forzados a aparearse con los dominios complementarios de otra cadena y crear dos sitios de unión a antígeno.

El anticuerpo que se va a usar en el marco de la divulgación puede ser uno de los anticuerpos monoclonales anti-CD38 denominados 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 y 38SB39, que se describen en el documento WO2008/047242, o derivados de los mismos obtenidos a través de la tecnología de remodelado.

En particular, el anticuerpo anti-CD38 en el contexto de la divulgación comprende al menos una cadena pesada que comprende CDR-H1 de secuencia SEQ ID NO: 1, CDR-H2 de secuencia s Eq ID NO: 2 y CDR-H3 de secuencia SEQ ID NO: 3, y al menos una cadena ligera que comprende tres CDRs secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos que consisten en SEQ ID NOS: 4, 5 y 6. En particular, dicho anticuerpo tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende SEQ ID NO: 44 y un dominio variable de cadena ligera que comprende la cadena de SEQ ID NO: 38.

En particular, el anticuerpo anti-CD38 en el contexto de la divulgación comprende al menos una cadena pesada que comprende CDR-H1 de secuencia SEQ ID NO: 7, CDR-H2 de secuencia s Eq ID NO: 8 y CDR-H3 de secuencia SEQ ID NO: 9, y al menos una cadena ligera que comprende tres CDRs secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos que consisten en SEQ ID NOS: 10, 11 y 12. En particular, dicho anticuerpo tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende SEQ ID NO: 45 y un dominio variable de cadena ligera que comprende la cadena de SEQ ID NO: 39.

En particular, el anticuerpo anti-CD38 en el contexto de la divulgación comprende al menos una cadena pesada que comprende CDR-H1 de secuencia SEQ ID NO: 13, CDR-H2 de secuencia SEQ ID NO: 14 y CDR-H3 de secuencia SEQ ID NO: 15, y al menos una cadena ligera que comprende tres CDRs secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos que consisten en SEQ ID NOS: 16, 17 y 18. En particular, dicho anticuerpo tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende SEQ ID NO: 46 y un dominio variable de cadena ligera que comprende la cadena de SEQ ID NO: 40.

En particular, el anticuerpo anti-CD38 en el contexto de la divulgación comprende al menos una cadena pesada que comprende CDR-H1 de secuencia SEQ ID NO: 19, CDR-H2 de secuencia SEQ ID NO: 20 y CDR-H3 de secuencia SEQ ID NO: 21, y al menos una cadena ligera que comprende tres CDRs secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos que consisten en SEQ ID NOS: 22, 23 y 24. En particular, dicho anticuerpo tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende SEQ ID NO: 47 y un dominio variable de cadena ligera que comprende la cadena de SEQ ID NO: 41.

En particular, el anticuerpo anti-CD38 en el contexto de la divulgación comprende al menos una cadena pesada que comprende CDR-H1 de secuencia SEQ ID NO: 25, CDR-H2 de secuencia SEQ ID NO: 26 y CDR-H3 de secuencia SEQ ID NO: 27, y al menos una cadena ligera que comprende tres CDRs secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos que consisten en SEQ ID NOS: 28, 29 y 30. En particular, dicho anticuerpo tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende SEQ ID NO: 48 y un dominio variable de cadena ligera que comprende la cadena de SEQ ID NO: 42 .

En particular, el anticuerpo anti-CD38 en el contexto de la divulgación comprende al menos una cadena pesada que comprende CDR-H1 de secuencia SEQ ID NO: 31, CDR-H2 de secuencia SEQ ID NO: 32 y CDR-H3 de secuencia SEQ ID NO: 33, y al menos una cadena ligera que comprende tres CDRs secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos que consisten en SEQ ID NOS: 34, 35 y 36. En particular, dicho anticuerpo tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende SEQ ID NO: 49 y un dominio variable de cadena ligera que comprende la cadena de SEQ ID NO: 43.

También están abarcados en el contexto de la divulgación anticuerpos que comprenden una secuencia con al menos 85%, más particularmente al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% idéntica a las secuencias divulgadas en la presente.

Una secuencia "al menos 85% idéntica a la secuencia de referencia" es una secuencia que tiene, en toda su longitud, 85% o más, en particular 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad de secuencia con toda la longitud de la secuencia de referencia.

Un porcentaje de "identidad de secuencia" se puede determinar al comparar las dos secuencias, óptimamente alineadas a lo largo de un tramo de comparación, en donde la porción de la secuencia polinucleotídica o polipeptídica en el tramo de comparación puede comprender adiciones o eliminaciones (es decir, huecos) en comparación con la secuencia de referencia (que no comprende adiciones o eliminaciones) para el alineamiento óptimo de las dos secuencias. El porcentaje se calcula al determinar el número de posiciones en las que la base de ácido nucleico o el residuo de aminoácido idéntico se presenta en ambas secuencias para dar el número de posiciones coincidentes, dividir el número de posiciones coincidentes por el número total de posiciones en el tramo de comparación y multiplicar el resultado por 100 para dar el porcentaje de identidad de secuencia. Un alineamiento óptimo de secuencias para comparación se efectúa mediante alineamiento global por pares, p. ej. usando el algoritmo de Needleman y Wunsch J. Mol. Biol. 48: 443 (1970). El porcentaje de identidad de secuencia se puede determinar fácilmente, a modo de ejemplo, usando el programa Needle, con la matriz BLOSUM62, y los siguientes parámetros abertura del hueco=10, extensión del hueco=0,5.

En una realización, los anticuerpos anti-CD38 son anticuerpos anti-CD38 humanizados obtenidos a través de la tecnología de remodelado. Estos anticuerpos también se pueden denominar anticuerpos "remodelados".

En un aspecto, una versión remodelada y/o humanizada del anticuerpo comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende tres regiones determinantes de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 1, 2 y 3, y en donde dicha cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 4, 5 y 6.

En otro aspecto, una versión remodelada y/o humanizada del anticuerpo comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende tres regiones determinantes de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 7, 8 y 9, y en donde dicha cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 10, 11 y 12.

En otra realización, una versión remodelada y/o humanizada del anticuerpo comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende tres regiones determinantes de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 13, 37 y 15, y en donde dicha cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 16, 17 y 18.

En otro aspecto, una versión remodelada y/o humanizada del anticuerpo comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende tres regiones determinantes de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 19, 20 y 21, y en donde dicha cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 22, 23 y 24.

En otro aspecto, una versión remodelada y/o humanizada del anticuerpo comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende tres regiones determinantes de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 25, 26 y 27, y en donde dicha cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 28, 29 y 30.

En un aspecto adicional, una versión remodelada y/o humanizada del anticuerpo comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende tres regiones determinantes de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 31, 32 y 33, y en donde dicha cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 34, 35 y 36.

En un aspecto, esta divulgación proporciona anticuerpos remodelados y/o humanizados que comprenden una V^h que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo de SEQ ID NOS: 50 y 51. En una realización adicional, una versión remodelada y/o humanizada del anticuerpo comprende una V^h que tiene una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 50. En otro aspecto, una versión humanizada del anticuerpo comprende una V^h que tiene una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 51.

En otro aspecto, esta divulgación proporciona anticuerpos humanizados que comprenden una V^l que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo de SEQ ID NOS: 52, 53, 54 y 55. En otro aspecto, una versión humanizada del anticuerpo comprende una V^l que tiene una secuencia de aminoácidos elegida del grupo de SEQ ID NOS: 52 y 53. En otro aspecto, una versión humanizada del anticuerpo comprende una V^l que tiene una secuencia de aminoácidos elegida del grupo de SEQ ID NOS: 54 y 55.

En una realización específica, el anticuerpo según la divulgación es el anticuerpo humanizado y/o remodelado denominado hu38SB19, que comprende una V^h que tiene una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 50 y que comprende una V^l que tiene una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 52.

En otra realización, el anticuerpo según la divulgación es daratumubab.

En una realización específica, el anticuerpo para el uso según la divulgación es un anticuerpo desnudo, es decir, no está conectado a ningún fármaco a fin de formar un conjugado de anticuerpo-fármaco.

Los anticuerpos para el uso según la divulgación se unen específicamente a CD38 y son capaces de destruir una célula CD38+ mediante inducción de apoptosis, citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC). En una realización específica, los anticuerpos para el uso según la divulgación son capaces de destruir una célula CD38+ in vitro mediante inducción de apoptosis incluso cuando las células tratadas con el anticuerpo no se hayan reticulado con anticuerpo secundario anti-IgG humana.

También son abarcados, en el contexto de la divulgación, anticuerpos humanizados que comprenden una secuencia con al menos 85%, más particularmente al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% idéntico a las secuencias divulgadas anteriormente en la presente.

Los anticuerpos según la divulgación se pueden obtener mediante técnica estándar de inmunización de animales, formación de hibridomas y selección de anticuerpos con características específicas. En particular, el anticuerpo para CD38 38SB19 se obtiene según se describe en el ejemplo 4 de la solicitud de patente internacional WO2008/047242, es decir según el siguiente protocolo de clonación y secuenciación de las cadenas ligeras y pesadas de anticuerpos anti-CD38 :

(i) preparación de ARN a partir de células de hibridoma que produce el anticuerpo 38SB19 como sigue: se obtuvieron preparaciones de ARN total a partir de 5 x 106 células de hibridoma, que producen anticuerpo 38SB19, usando el RNeasy mini kit de Qiagen. Brevemente, 5 x 106 células se nodulizaron y resuspendieron en 350 pl de tampón RLT (que contenía 1% de p-mercaptoetanol). La suspensión se homogeneizó al hacerla pasar a través de una aguja de calibre 21,5 y una jeringa alrededor de 10 - 20 veces o hasta que ya no fuera viscosa. Se añadió etanol (350 pl de etanol acuoso al 70%) al homogenado, que se mezcló bien. La solución se transfirió a una columna giratoria, se puso en un tubo de recogida de 2 ml y se hizo girar a >8000 x g durante 15 segundos. La columna se lavó dos veces con 500 pl de tampón RPE, a continuación se transfirió a un tubo reciente y se eluyó con 30 pl de agua libre de ARNasa y una rotación de 1 minuto. El eluato (30 pl) se puso de nuevo en la columna durante una segunda rotación con elución de 1 minuto. Una parte alícuota de los 30 pl de eluato se diluyó con agua y se usó para medir la absorción UV a 260 nm para la cuantificación de ARN.

(ii) Preparación de ADNc con la reacción de la transcriptasa inversa (RT) como sigue: el ADNc del anticuerpo 38SB19 de la región variable se generó a partir del ARN total usando el estuche Superscriptll de Invitrogen. Los protocolos del estuche se siguieron estrechamente, utilizando hasta 5 pg de ARN total procedente del Qianeasy mini preps. Brevemente, el ARN, 1 pl de cebadores aleatorios y 1 pl de mezcla de dNTP se llevaron hasta 12 pl con agua destilada estéril libre de ARNasa y se incubaron a 65°C durante 5 minutos. A continuación, la mezcla se puso sobre hielo durante al menos 1 minuto. A continuación, se añadieron 4 pl de 5 x tampón de reacción, 2 pl de DTT 0,1 M y 1 pl de RNaseOUT y la mezcla se incubó a 25°C durante 2 minutos en un termociclador de MJ Research. El termociclador se detuvo de modo que se pudiera añadir 1 pl de enzima Superscriptll y a continuación se reinició durante 10 minutos adicionales a 25°C antes de cambiar hasta 55°C durante 50 minutos. La reacción se termoinactivó al calentar hasta 70°C durante 15 min y el ARN se retiró al añadir 1 pl de ARNasa H e incubar a 37°C durante 20 minutos.

(iii) Reacciones de PCR degeneradas: el procedimiento para la reacción de PCR degenerada de primera ronda sobre el ADNc derivado de células de hibridoma se basaba en métodos descritos en Wang y cols. (2000) y Co y cols.(1992). Los cebadores para esta ronda (Tabla 1) contienen sitios de restricción para facilitar la clonación en los plásmidos pBluescriptll.

Tabla 1 : Cebadores usados para las reacciones de PCR degeneradas

Los cebadores usados para las reacciones de PCR degeneradas se basan en los de Wang y co ls, 2000 excepto HindKL que se basa en Co y cols. 1992. Las bases mixtas se definen como sigue: H=A+T+C, S=G+C, Y=C+T, K= G+T, M=A+C, R=A+G, W=A+T, V = A+C+G.

Los componentes de la reacción de PCR (Tabla 2) se mezclaron sobre hielo en tubos de PCR de paredes delgadas y a continuación se transfirieron a un termociclador de MJ Research precalentado y en pausa a 94°C. Las reacciones se realizaron usando un programa derivado de Wang y cols., 2000 como sigue:

Nombre: Wang45

94°C 3:00 min

94°C 0:15 s

45°C 1:00 min

72°C 2:00 min

Váyase a 229 veces

72°C 6:00 min

4°C hasta el final

Final.

A continuación, las mezclas para reacciones PCR se hicieron pasar sobre un gel de agarosa de bajo punto de fusión al 1%, las bandas de 300 a 400 pb se cortaron, se purificaron usando minicolumnas de ADN Zymo y se enviaron a Agencourt para la secuenciación. Los respectivos cebadores de PCR 5' y 3' se usaron como cebadores de secuenciación para generar los ADNcs de la región variable de 38SB19 desde ambas direcciones.

(iv) Clonación de la secuencia del extremo 5' como sigue: Puesto que los cebadores degenerados usados para clonar las secuencias de ADNc de las cadenas ligeras y las cadenas pesadas de la región variable de 38SB19 alteran las secuencias del extremo 5', eran necesarios esfuerzos de secuenciación adicionales para descifrar las secuencias completas. La secuencia de ADNc preliminar procedente de los métodos descritos anteriormente se usó para buscar el sitio IgBlast de NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/) para las secuencias germinales murinas de las que se deriva la secuencia de 38SB19. Se diseñaron cebadores de PCR (Tabla 3) para la renaturalización a la secuencia líder del anticuerpo murino de modo que una nueva reacción de PCR pudiera dar el ADNc de la región variable completa, inalterado por los cebadores de PCR. Las reacciones de PCR, las purificaciones de bandas y la secuenciación se realizaron como se describe anteriormente.

Tabla 2 : Las mezclas de reacción de PCR para cadenas ligeras y pesadas para la clonación de las secuencias de ADNc de la región variable de 38SB19.

(v) Análisis peptídico para la confirmación de secuencia como sigue: La información de la secuencia de ADNc para la región variable se combinó con la secuencia de la región constante germinal para obtener secuencias de ADNc del anticuerpo de longitud completa. A continuación, se calcularon los pesos moleculares de la cadena pesada y la cadena ligera y se compararon con los pesos moleculares obtenidos mediante análisis de LC/MS del anticuerpo 38SB19 murino. La Tabla 5 de la Patente de EE. UU. 8.153.765 da la masa calculada a partir de las secuencias de ADNc para LC y HC de 38SB19 junto con los valores medidos mediante LC/MS. Las medidas de los pesos moleculares están de acuerdo con las secuencias de ADNc para la cadena tanto ligera como pesada de 38SB19.

Tabla 3 : Los cebadores de la secuencia líder murina del extremo 5' usados para las reacciones de PCR de segunda ronda de 38SB19.

La Tabla 3 proporciona los cebadores de la secuencia líder murina del extremo 5' usados para las reacciones de PCR de segunda ronda de 38SB19. Los cebadores del extremo 3' son idénticos a los usados en las reacciones de primera ronda puesto que ceban las secuencias de las regiones constantes respectivas.

Más particularmente, los anticuerpos 38SB19 humanizados se pueden producir según se describe en el ejemplo 5 de la solicitud de patente internacional WO2008/047242, es decir según el siguiente protocolo: Las secuencias de las regiones variables para hu38SB19 se optimizaron codónicamente y fueron sintetizados por Blue Heron Biotechnology. Las secuencias estaban flanqueadas por sitios de enzimas de restricción para la clonación en el marco con las secuencias constantes respectivas en los plásmidos de expresión de mamífero tanto monocatenarios como bicatenarios en tándem. La región variable de la cadena ligera se clona en sitios EcoRI y BsiWI en los plásmidos tanto ps38SB19LCZv1.0 como ps38SB19v1.00 (FIG. 2A y 2C del documento WO2008/047242). La región variable de la cadena pesada se clona en los sitios Hindlll y Apa1 en los plásmidos tanto ps38SB19HCNv1.0 como ps38SB19v1.00 (FIG. 2 B y 2C del documento WO2008/047242). Estos plásmidos se pueden usar para expresar hu38SB19 en transfecciones bien transitorias o bien estables en células de mamífero. Se usaron construcciones de vectores de expresión similares para producir otros anticuerpos quiméricos y humanizados. Las transfecciones transitorias para expresar hu38SB19 en células HEK-293T se realizaron usando reactivos de CaPO⁴ procedentes de BD biosciences. Los protocolos suministrados se modificaron ligeramente para rendimientos de expresión mejorados. Brevemente, se sembraron 2 x 10⁶ células HEK-293T sobre placas de cultivo celular de 10 cm revestidas con polietilenimina (PEI) 24 h antes de la transfección. La transfección comenzaba al lavar las células con PBS y reemplazar el medio por 10 ml de DMEM (Invitrogen) con 1% de Ultra Low IgG FBS (Hyclone). La Solución A (10 pg de a Dn , 86,8 pl de solución de Ca²⁺ y hasta 500 pl con H²O) se añadió gota a gota a la Solución B mientras se sometía a turbulencia. La mezcla se incubó a TA durante 1 min y se añadió gota a gota 1 ml de la mezcla a cada placa de 10 cm. Aproximadamente 16 h después de la transfección, el medio se reemplazó por 10 ml de DMEM reciente con 1% de Ultra Low IgG FBS. Aproximadamente 24 horas más tarde, se añadió butirato sódico 2 mM a cada placa de 10 cm. La transfección se recogió 4 días más tarde. Se preparó sobrenadante para cromatografía de afinidad a proteína A mediante la adición de 1/10 de volumen de tampón de Tris/HCl 1 M, pH 8,0. El sobrenadante con pH ajustado se filtró a través de una membrana filtrante de 0,22 pm y se cargó sobre una columna de proteína A-Sepharose (HiTrap Protein A HP, 1 ml, Amersham Biosciences) equilibrada con tampón de unión (PBS, pH 7,3). Una precolumna de Q-Sepharose (10 ml) se conectó aguas arriba de la columna de proteína A durante la carga de la muestra para reducir la contaminación procedente de material celular tal como ADN. Después de la carga de la muestra, la precolumna se retiró y la orientación de la columna de proteína A se invirtió para el lavado y la elución. La columna se lavó con tampón de unión hasta que se obtenía un valor de referencia estable sin absorbancia a 280 nm. El anticuerpo se eluyó con tampón de ácido acético 0,1 M que contenía NaCl 0,15 M, pH 2,8, usando un caudal de 0,5 ml/min. Se recogieron fracciones de aproximadamente 0,25 ml y se neutralizaron mediante la adición de 1/10 de volumen de Tris/HCl 1 M, pH 8,0. La fracción o las fracciones máximas se dializaron durante la noche dos veces frente a PBS y el anticuerpo purificado se cuantificó mediante absorbancia a OD²⁸⁰. Los anticuerpos humanizados y quiméricos también se pueden purificar usando una columna de proteína G con procedimientos ligeramente diferentes.

Todos los anticuerpos anti-CD38 quiméricos, humanizados y/o remodelados ejemplificados se expresaron y purificaron usando procedimientos similares a los descritos anteriormente.

Los inventores determinaron para los anticuerpos de la divulgación la dosis adecuada de administración y el régimen a fin de obtener un tratamiento anticanceroso bien tolerado que permita tratar a sujetos que sufren una enfermedad maligna hematológica CD38⁺, en particular, mieloma múltiple CD38⁺, más particularmente mieloma múltiple CD38⁺ recidivante y/o refractario.

Por lo tanto, se usó un esquema de escalado de dosis acelerado para los cinco primeros niveles de dosis que varían de 0,0001 mg/kg a 0,1 mg/kg, administrados cada dos semanas, con un sujeto evaluable por nivel de dosis. Todos los niveles de dosis posteriores tales como 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg y 20 mg/kg se administraron cada 2 semanas, 10 mg/kg también se administraron cada semana, seguido por el diseño clásico de 3+3 para el escalado de dosis basado en la toxicidad con el nivel de dosis, el número mediano de ciclos variaba de 2,0 a 50,0 para la administración.

Dentro de este estudio, los inventores demostraron que el anticuerpo usado tiene un perfil de seguridad que es manejable con una dosis tolerada máxima que es mayor de 10 mg/kg.

Los estudios de inmunogenicidad realizados por los inventores mostraban que el sujeto humano no producía anticuerpos contra anticuerpo anti-CD38.

Por otra parte, los inventores pudieron mostrar que el anticuerpo de la divulgación tiene en seres humanos una alta eficacia de unión, demostrada por la alta ocupación del receptor a bajas dosis. La ocupación del receptor se detectaba, por ejemplo, a un nivel de dosis de 1 mg/kg y alcanzaba un intervalo de 84,1 a 97,7% a 10 mg/kg cada dos semanas.

La ocupación del receptor se determina típicamente usando dos anticuerpos monoclonales (mAbs) que se unen a dos epítopos diferentes del antígeno CD38. MAb1 es específico para el mismo epítopo que, p. ej., hu38SB19, y así un indicador de los sitios de CD38 libres (no ocupados por, p. ej., hu38SB19). El segundo anticuerpo monoclonal, mAb2, dirigido a un epítopo diferente al de hu38SB19, proporciona un control positivo para la presencia de células CD38⁺ y una evaluación de la cantidad de antígeno CD38 que permanece sobre la superficie celular después de la adición de fármaco in vitro. El uso de cuentas como calibradores y una detección indirecta permite un enfoque cuantitativo sin ninguna modificación de la capacidad de unión de hu38SB19. La combinación de los resultados proporciona densidad del receptor y ocupación por célula.

No había un incremento significativo de C^máx en el ciclo 2 en comparación con C^máx en el ciclo 1 para el intervalo de dosis de 0,03 a 3 mg/kg.

Los inventores demuestran además que el anticuerpo alcanzaba una inhibición del crecimiento tumoral con un umbral en Cmáx para 1 paciente en un nivel de dosis de 5 mg/kg y 5 pacientes en un nivel de dosis de 10 mg/kg.

Los inventores han demostrado en particular que un sujeto que sufría una enfermedad maligna hematológica CD38+, en particular mieloma múltiple CD38+, lo más en particular mieloma múltiple CD38+ recidivante y/o refractario, mostraba una respuesta particular cuando el anticuerpo anti-CD38 de la divulgación se administraba en una dosis de I mg/kg, 5 mg/kg y 10 mg/kg.

Los inventores observaron, en particular, que se alcanzaba un umbral de inhibición del crecimiento tumoral en Cmáx para 1 paciente a un nivel de dosis de 5 mg/kg y para 5 pacientes en un nivel de dosis de 10 mg/kg.

Según la divulgación, el anticuerpo es para el uso como un medicamento, en donde dicho anticuerpo se administra a un sujeto humano en una dosis terapéutica segura de 20 mg/kg o menor.

En una realización, el anticuerpo es para el uso para tratar una enfermedad maligna hematológica CD38+, en particular para tratar mieloma múltiple, lo más en particular para tratar mieloma múltiple recidivante y/o refractario.

Enfermedades malignas hematológicas CD38+ que se van a tratar en el contexto de la divulgación se definen en la sección "Enfermedades malignas hematológicas CD38+".

El sujeto humano se define anteriormente en la sección "sujeto".

En el contexto de la divulgación, el término "tratar" o "tratamiento", según se usa en la presente, significa invertir, aliviar, inhibir el progreso de, o prevenir el trastorno o la afección a la que se aplica este término, o uno o más síntomas de este trastorno o afección.

Por el término "tratar una enfermedad maligna hematológica CD38+" según se usa en la presente se entiende la inhibición del crecimiento de células malignas CD38+ de un tumor y/o la progresión de metástasis a partir de dicho tumor CD38+. Este tratamiento también puede conducir a la regresión del crecimiento tumoral, es decir, la disminución en el tamaño de un tumor medible. En particular, este tratamiento conduce a una regresión completa del tumor CD38+ o metástasis CD38+.

Por una "cantidad terapéuticamente eficaz" del anticuerpo, en el contexto de la divulgación, se entiende una cantidad suficiente del anticuerpo para tratar dicha enfermedad maligna hematológica CD38+ según se descubrió por los inventores y se divulga en la presente.

En un aspecto particular, dicha cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo administrada al sujeto es una dosis que varía de 0,0001 mg/kg a 20 mg/kg, en particular una dosis que varía de 1 mg/kg a 20 mg/kg, más particularmente 0,1 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 7,5 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, I I mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg o 20 mg/kg.

En un aspecto, el anticuerpo de la divulgación se puede administrar una vez a la semana o cada dos semanas.

En otro aspecto, dicha cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo administrada al sujeto es una dosis que varía de 1 mg/kg a 20 mg/kg, de 3 mg/kg a 20 mg/kg, de 5 mg/kg a 20 mg/kg o de 10 mg/kg a 20 mg/kg, por ejemplo una vez a la semana o una vez en dos semanas. En efecto, se ha mostrado que estas son seguras mientras que se ha mostrado una eficacia en algunos individuos.

En otro aspecto más, dicha cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo administrada al sujeto es una dosis de 10 mg/kg una vez a la semana, o de 20 mg/kg, por ejemplo una vez a la semana o una vez en dos semanas.

En algunos aspectos, el anticuerpo de la divulgación se puede administrar según un programa intermitente con un intervalo entre cada administración de 1 semana o 2 semanas, que se puede prolongar en de 1 a 2 semanas dependiendo de la tolerancia a la administración precedente. Sin embargo, los inventores observaban efectos secundarios que no eran graves.

Según esto, en una realización particular, la administración del anticuerpo se repite como un nuevo ciclo directamente después del ciclo previo.

Un "ciclo" según se usa en la presente se refiere en el caso de una administración 'una vez a la semana' a una semana, en el caso de una administración 'una vez en dos semanas' un ciclo corresponde a dos semanas.

En una realización, el número de ciclos de la administración puede ser de 2 a 50, en particular 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 0, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 45, 50 ciclos.

El número de ciclos de la administración del anticuerpo de la divulgación se puede seleccionar así del grupo constituido por 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 0, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 45, 50 ciclos.

El anticuerpo de la divulgación se administra intravenosamente.

En algunas realizaciones, la dosis se podría incrementar durante el tratamiento después de una evaluación de la respuesta de la enfermedad.

La dosis mínima en el contexto de la divulgación corresponde a 0,0001 mg/kg, en donde un nivel de dosis de 0,0001 mg/kg representa 10% de la ocupación teórica del receptor de CD38 en células B y T normales.

En algunas realizaciones, la administración intravenosa tiene lugar a una cierta velocidad de infusión.

En particular, el anticuerpo se administrará a una velocidad de infusión inicial de 0,042 mg/h a 250 mg/h, en particular la velocidad de infusión inicial es 0,042 mg/h.

En algunas realizaciones, la velocidad de infusión inicial depende de la dosis que se vaya a administrar.

Según esto, en un ejemplo, el anticuerpo de la divulgación se administra típicamente, por ejemplo, para una dosis de 0,0001 mg/kg a una velocidad inicial de 0,042 mg/h para un total de 3 ml, por ejemplo para una dosis de 0,001 mg/kg a una velocidad inicial de 0,42 mg/h para un total de 3 ml, por ejemplo para una dosis de 0,01 mg/kg a una velocidad inicial de 1,4 mg/h, por ejemplo para una dosis de 0,03 mg/kg a una velocidad inicial de 4,2 mg/h, por ejemplo para una dosis de 0,1 mg/kg a una velocidad inicial de 7 mg/h, por ejemplo para una dosis de 0,01 mg/kg a una velocidad inicial de 1,4 mg/h, por ejemplo para una dosis de 0,3 mg/kg a un velocidad inicial de 10,5 mg/h, por ejemplo para una dosis de 1 mg/kg a un velocidad inicial de 17,5 mg/h, por ejemplo para una dosis de 3 mg/kg a una velocidad inicial de 52,5 mg/h, por ejemplo para una dosis de 5 mg/kg a una velocidad inicial de 87,5 mg/h, por ejemplo para una dosis de 10 mg/kg a un velocidad inicial de 175 mg/h y por ejemplo para una dosis de 20 mg/kg a una velocidad inicial de 250 mg/h.

Durante la administración, típicamente, el sujeto es observado con respecto a signos de reacciones de hipersensibilidad, y la administración solo se continúa en ausencia de reacciones de hipersensibilidad.

Si embargo, se entenderá que el tiempo de administración exacto (una vez a la semana o una vez cada dos semanas), el número de ciclos y la velocidad de infusión inicial estarán dentro del intervalo de valores divulgado en la presente, pero, sin embargo, los valores exactos serán decididos por el médico responsable para cualquier sujeto particular dependiendo de factores que incluyen la enfermedad maligna hematológica CD38+ que se trate y la gravedad del trastorno; la actividad del anticuerpo específico empleado; la composición específica empleada, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del sujeto.

Se entenderá que el médico responsable podría modificar y adaptar el régimen de administración basándose en la respuesta patológica.

La "respuesta patológica" se puede determinar según criterios estándar para enfermedades malignas hematológicas y la estadificación.

Métodos para evaluar la respuesta patológica de una enfermedad maligna hematológica, en particular una enfermedad maligna hematológica CD38+, son conocidos por los expertos en la especialidad.

Típicamente, los métodos para evaluar la respuesta patológica se pueden seleccionar del grupo constituido por la evaluación del estado patológico de Karnofsky, la cuantificación de marcadores específicos, biopsia y/o aspiración de la médula ósea, obtención de imágenes radiológicas del plasmocitoma, examen del esqueleto, cuantificación de proteína M (suero y/o orina de 24 h) y niveles de cadenas ligeras libres en suero o niveles urinarios de cadenas ligeras, p2-microglobulina sérica, biopsia de nódulos linfáticos y/o determinación radiológica de tumores (mediante rayos X, exploración tomográfica digital [CT], exploración PET u obtención de imágenes por resonancia magnética [MRI]), hemograma incluyendo recuento de blastocitos.

Los mejores métodos para evaluar la respuesta patológica de una enfermedad maligna hematológica dependen del tipo de enfermedad maligna hematológica CD38+ y son conocidos por los expertos en la especialidad.

Basándose en los resultados obtenidos a partir de la evaluación de la respuesta patológica, la respuesta patológica se puede estratificar a continuación según los criterios estándar para subrayar la enfermedad y se puede clasificar en respuesta completa o remisión completa (CR), respuesta parcial (PR), enfermedad estable (SD) o enfermedad progresiva (PD).

La "puntuación de Karnofsky" se refiere a una puntuación de 100 a 0, en donde 100 es salud "perfecta" y 0 es la muerte.

"Marcadores" usados en el contexto de la evaluación de la respuesta pueden incluir típicamente marcadores séricos y/o plasmáticos, sin limitación a ellos, tales como Hs-CRP, factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a), IL-6, IL-1-p, IFN-A y la densidad y la ocupación del receptor de CD38.

En un ejemplo, técnicas para evaluar la respuesta patológica en un sujeto que sufra mieloma múltiple son biopsia y/o aspiración de la médula ósea, obtención de imágenes radiológicas del plasmocitoma, examen del esqueleto, cuantificación de proteína M según se explica anteriormente, y medida de p2-microglobulina sérica.

La evaluación de la respuesta patológica puede incluir además la densidad de receptores y la ocupación de receptores en células tumorales en circulación (sangre periférica), densidad de receptores y ocupación de receptores en blastocitos y células plasmáticas en la médula ósea y nivel de anticuerpos antifármaco (ADA) humanos.

El anticuerpo de la divulgación se puede administrar en la forma de una composición farmacéutica que incluye un excipiente farmacéuticamente aceptable, y opcionalmente matrices de liberación sostenida, tales como polímeros biodegradables, para formar composiciones terapéuticas.

"Farmacéutica" o "farmacéuticamente aceptable" se refiere a entidades moleculares y composiciones que no producen una reacción adversa, alérgica u otra negativa cuando se administran a un mamífero, especialmente un ser humano, según sea apropiado. Un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable se refiere a una carga, un diluyente, un material encapsulante o un adyuvante de formulación de cualquier tipo, sólido, semisólido o líquido atóxico.

La forma de la composiciones farmacéuticas que incluyen el anticuerpo de la divulgación dependen naturalmente de la afección que se vaya a tratar, la gravedad de la dolencia, la edad, el peso y el sexo del sujeto, etc.

El anticuerpo de la divulgación se formula para la administración intravenosa.

En particular, las composiciones farmacéuticas que incluyen el anticuerpo de la divulgación pueden contener vehículos que sean farmacéuticamente aceptables para una formulación capaz de ser inyectada. Estas pueden ser en particular soluciones salinas isotónicas estériles (fosfato monosódico o disódico, cloruro sódico, potásico, cálcico o magnésico y similares o mezclas de estas sales), o composiciones secas, especialmente liofilizadas, que al añadir, dependiendo del caso, agua esterilizada o solución salina fisiológica permiten la constitución de soluciones inyectables.

Para preparar composiciones farmacéuticas, una cantidad eficaz del anticuerpo de la divulgación se puede disolver o dispersar en un portador o medio acuoso farmacéuticamente aceptable.

Las formas farmacéuticas adecuadas para uso inyectable incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la forma debe ser estéril y debe ser fluida hasta el punto de que exista una fácil aplicación con jeringa. Debe ser estable bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento y se debe conservar contra la acción contaminante de microorganismos, tales como bacterias y hongos.

El portador puede ser un disolvente o un medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, un poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido, y similares) y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez apropiada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de un revestimiento, tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de una dispersión y mediante el uso de tensioactivos, agentes estabilizantes, crioprotectores o antioxidantes. La prevención de la acción de microorganismos se puede llevar a cabo mediante agentes antibacterianos y antifúngicos. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares o cloruro sódico.

Las soluciones inyectables estériles se preparan al incorporar los compuestos activos en la cantidad requerida en el disolvente apropiado con varios de los otros ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido por esterilización con filtración. Generalmente, las dispersiones se preparan al incorporar los diversos ingredientes activos esterilizados en un vehículo estéril que contiene el medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos de preparación preferidos son técnicas de secado al vacío y liofilización que dan un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional a partir de una solución de los mismos previamente filtrada estérilmente.

Tras la formulación, las soluciones se administrarán de un modo compatible con la formulación de dosificación y en tal cantidad que sea terapéuticamente eficaz. Las formulaciones se administran fácilmente en una variedad de formas de dosificación, tales como el tipo de soluciones inyectables descritas anteriormente, pero también se pueden emplear cápsulas de liberación de fármaco y similares.

Para la administración intravenosa en una solución acuosa, por ejemplo, la solución se debe tamponar adecuadamente si es necesario y el diluyente líquido se hace isotónico en primer lugar con suficiente solución salina o glucosa. Estas soluciones acuosas particulares son especialmente adecuadas para la administración intravenosa. En relación con esto, medios acuosos estériles que se pueden emplear serán conocidos por los expertos en la especialidad a la luz de la presente divulgación. Por ejemplo, una dosificación se podría disolver en 1 ml de solución de NaCl isotónica y bien añadir a 1000 ml de fluido de hipodermoclisis o bien inyectar intravenosamente en la zona de infusión propuesta, (véase, por ejemplo, "Remington's Pharmaceutical Sciences" 15a Edición, páginas 1035-1038 y 1570-1580). Será necesario que se produzca alguna variación en la dosificación dependiendo de la condición del sujeto que se trate. En cualquier caso, la persona responsable de la administración determinará la dosis apropiada para el sujeto individual.

En un ejemplo, el anticuerpo se formula para la administración intravenosa, por lo tanto, el anticuerpo se presenta como un concentrado para solución para infusión en viales, que contienen, p. ej., 5 mg/ml (100 mg/20 ml) del anticuerpo de la divulgación.

Para la administración a sujetos, el volumen apropiado de la formulación de anticuerpo típicamente se diluye en una bolsa de infusión de, por ejemplo, solución de cloruro sódico al 0,9%. El volumen de infusión final correspondiente a la dosis del anticuerpo de la divulgación se administra durante un período de tiempo que depende de la dosis que se vaya a administrar y así de la cantidad de proteína administrada por hora.

En una realización específica, el anticuerpo anti-CD38 para el uso según la divulgación se administra como un anticuerpo desnudo. El anticuerpo anti-CD38 desnudo se puede administrar solo o junto con dexametasona, o en combinación con un quimiofármaco seleccionado del grupo que consiste en lenalidomida, carfilzomib, bortezomib, melfalano, vincristina, citarabina y ciclofosfamida, opcionalmente junto con dexametasona. Si no se administra solo, el anticuerpo anti-CD38 y el otro o los otros fármacos se pueden administrar bien simultáneamente o bien separadamente (p. ej. secuencialmente a lo largo de un período).

El anticuerpo de la divulgación se puede administrar en combinación con una medicación para prevenir o controlar la fatiga, las náuseas, la pirexia, la tos, los vómitos, la hipercalcemia, la cefalea, el estreñimiento, el dolor de huesos, el refriado, la diarrea, la neumonía, la anemia, la disgeusia, la hipocalemia, la fiebre y la hiperglucemia.

En otra realización, la medicación para prevenir o controlar la fatiga, las náuseas, la pirexia, la tos, los vómitos, la hipercalcemia, la cefalea, el estreñimiento, el dolor de huesos, el refriado, la diarrea, la neumonía, la anemia, la disgeusia, la hipocalemia, la fiebre y la hiperglucemia se puede administrar antes del tratamiento con anticuerpo.

En el contexto de la divulgación, un médico puede evaluar la respuesta patológica y así adaptar el régimen de administración.

A lo largo de la presente solicitud, el término "que comprende" se ha de interpretar como que abarca todas las características específicamente mencionadas así como las opcionales, adicionales e inespecíficas. Según se usa en la presente, el uso del término "que comprende" también divulga la realización en la que no están presentes otras características distintas a las características mencionadas específicamente (es decir "que consiste en").

Sin limitar la presente divulgación, un número de aspectos de la presente divulgación se muestra adicionalmente posteriormente con propósitos de ilustración:

Punto 1: En un aspecto, se divulga un método para tratar a un paciente que tiene mieloma múltiple recidivante y/o refractario, que comprende administrar al paciente un anticuerpo que se une específicamente a CD38, en donde dicho anticuerpo se administra al paciente en una dosis terapéutica segura de 20 mg/kg o menos.

Punto 2: En otro aspecto, se divulga una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo que se une específicamente a CD38 para el uso como un medicamento en el tratamiento de mieloma múltiple recidivante y/o refractario, en donde dicho anticuerpo se ha de administrar a un sujeto humano en una dosis terapéutica segura de aproximadamente 20 mg/kg o menos.

Punto 3: En otro aspecto, se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según los Puntos 1 o 2, en donde el anticuerpo es capaz de destruir una célula CD38+ en el sujeto humano mediante inducción de la apoptosis, citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC) y citotoxicidad dependiente del complemento (CDC).

Punto 4: En otro aspecto, también se divulga el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 3, en donde el paciente tiene al menos una afección seleccionada del grupo que consiste en (a) un nivel de proteína M en suero medible mayor de aproximadamente 0,5 g/dl, (b) un nivel de proteína M en la orina mayor de aproximadamente 200 mg (orina de 24 h), (c) un nivel elevado de cadenas ligeras libres (FLC) en suero mayor de aproximadamente 10 mg/dl con relación de FLC anormal, y una combinación de los mismos.

Punto 5: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 4, en donde dicho anticuerpo comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende tres regiones determinantes de la complementariedad (CDRs) secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 13, 37, y 15, y en donde dicha cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad (CDRs) secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 16, 17 y 18.

Punto 6: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 5, en donde dicho anticuerpo comprende al menos una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 50 y al menos una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 52.

Punto 7: En otro aspecto, también se divulga

la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 6, en donde dosis terapéutica segura es de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg.

Punto 8: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 6, en donde la dosis terapéutica segura es aproximadamente 5 mg/kg, o aproximadamente 10 mg/kg, o aproximadamente 20 mg/kg.

Punto 9: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 8, en donde la dosis terapéutica segura de dicho anticuerpo se administra intravenosamente.

Punto 10: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 9, en donde la dosis terapéutica segura de dicho anticuerpo se administra una vez a la semana o una vez cada dos semanas.

Punto 11: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 10, en donde la dosis terapéutica segura es aproximadamente 10 mg/kg o aproximadamente 20 mg/kg administrados una vez cada dos semanas.

Punto 12: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 10, en donde la dosis terapéutica segura es aproximadamente 10 mg/kg o aproximadamente 20 mg/kg administrados una vez cada semana.

Punto 13: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 12, en donde la dosis terapéutica segura de dicho anticuerpo se administra a una velocidad inicial de infusión que varía de aproximadamente 0,042 mg/h a aproximadamente 250 mg/h.

Punto 14: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 13, en donde el anticuerpo se administra en combinación con dexametasona.

Punto 15: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 14, en donde dicho anticuerpo no produce autoanticuerpos contra dicho anticuerpo cuando se administra a un sujeto humano en una dosis de aproximadamente 20 mg/kg o menos.

Punto 16: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 10, en donde dicho anticuerpo es capaz de exhibir una ocupación detectable del receptor de CD38 en un sujeto humano cuando se administra a dicho sujeto humano en un nivel de dosis de aproximadamente 1 mg/kg cada dos semanas.

Punto 17: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 10, en donde dicho anticuerpo es capaz de exhibir al menos aproximadamente 84,1% de ocupación del receptor de CD38 en un sujeto humano cuando se administra a dicho sujeto humano en un nivel de dosis de aproximadamente 10 mg/kg o aproximadamente 20 mg/kg cada dos semanas.

Punto 18: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 10, en donde dicho anticuerpo es capaz de exhibir al menos aproximadamente 97,7% de ocupación del receptor de CD38 en un sujeto humano cuando se administra a dicho sujeto humano en un nivel de dosis de aproximadamente 10 mg/kg o aproximadamente 20 mg/kg cada dos semanas.

Punto 19: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 10, en donde dicho anticuerpo es capaz de inhibir el crecimiento tumoral en un sujeto humano cuando se administra a dicho sujeto humano en un nivel de dosis que varía de aproximadamente 5 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg cada dos semanas.

Punto 20: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 10, en donde dicho anticuerpo es capaz de inhibir el crecimiento tumoral en un sujeto humano cuando se administra a dicho sujeto humano en un nivel de dosis que varía de aproximadamente 5 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg cada semana.

Punto 21: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 10, en donde dicho anticuerpo es capaz de inhibir el crecimiento tumoral en un sujeto humano cuando se administra a dicho sujeto humano en un nivel de dosis que varía de aproximadamente 10 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg cada dos semanas.

Punto 22: En otro aspecto, también se divulga en la presente el método o la composición farmacéutica según uno cualquiera de los Puntos 1 a 10, en donde dicho anticuerpo es capaz de inhibir el crecimiento tumoral en un sujeto humano cuando se administra a dicho sujeto humano en un nivel de dosis que varía de aproximadamente 10 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg cada semana.

Punto 23: En otro aspecto, también se divulga en la presente una forma de dosificación unitaria que comprende la composición farmacéutica de uno cualquiera de los Puntos 1 a 22.

Punto 24: En otro aspecto, también se divulga en la presente un artículo de fabricación que comprende la composición farmacéutica de uno cualquiera de los Puntos 1 a 22 y un recipiente.

Breve descripción de las secuencias

SEQ ID NO: 1 -3 muestra la secuencia de las CDR1 -H, CDR2-H, CDR3-H del anticuerpo "38SB13”.

SEQ ID NO: 4-6 muestra la secuencia de las CDR1 -L, CDR2-L, CDR3-L del anticuerpo "38SB13”.

SEQ ID NO: 7-9 muestra la secuencia de las CDR1 -H, CDR2-H, CDR3-H del anticuerpo "38SB18”.

SEQ ID NO: 10-12 muestra la secuencia de las CDR1 -L, CDR2-L, CDR3-L del anticuerpo "38SB18”.

SEQ ID NO: 13-15 muestra la secuencia de las CDR1 -H, CDR2-H, CDR3-H del anticuerpo "38SB19”.

SEQ ID NO: 16-18 muestra la secuencia de las CDR1 -L, CDR2-L, CDR3-L del anticuerpo "38SB19”.

SEQ ID NO: 19-21 muestra la secuencia de las CDR1 -H, CDR2-H, CDR3-H del anticuerpo "38SB30”.

SEQ ID NO: 22-24 muestra la secuencia de las CDR1 -L, CDR2-L, CDR3-L del anticuerpo "38SB30”.

SEQ ID NO: 25-27 muestra la secuencia de las CDR1 -H, CDR2-H, CDR3-H del anticuerpo "38SB31 ”.

SEQ ID NO: 28-30 muestra la secuencia de las CDR1 -L, CDR2-L, CDR3-L del anticuerpo "38SB31 ”.

SEQ ID NO: 31 -33 muestra la secuencia de las CDR1 -H, CDR2-H, CDR3-H del anticuerpo "38SB39”.

SEQ ID NO: 34-36 muestra la secuencia de las CDR1 -L, CDR2-L, CDR3-L del anticuerpo "38SB39”.

SEQ ID NO: 37 muestra la secuencia de las CDR2-H del "38SB19” humanizado.

SEQ ID NO: 38- 43 muestra las secuencias de VL de los anticuerpos.

SEQ ID NO: 44- 49 muestra las secuencias de VH de los anticuerpos.

SEQ ID NO: 50- 51 muestra las secuencias de VH secuencias de los anticuerpos humanizados.

SEQ ID NO: 52-55 muestra las secuencias de VL secuencias de los anticuerpos humanizados.

SEQ ID NO: 56-61 muestra las secuencias de cebadores usados para la reacción PCR degenerada de primera ronda para la clonación y la secuenciación de las cadenas ligeras y pesadas de anticuerpos anti-CD38.

SEQ ID NO: 62-63 muestra los cebadores de la secuencia líder murina del extremo 5' usados para las reacciones de PCR de segunda ronda de 38SB19 para la clonación y la secuenciación de las cadenas ligeras y pesadas de anticuerpos anti-CD38.

La presente divulgación se ilustrará adicionalmente mediante los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1

Los inventores determinaron para el anticuerpo hu38SB19 la dosis y el régimen de administración adecuados a fin de obtener un tratamiento anticanceroso bien tolerado que permita tratar a pacientes que sufren una enfermedad maligna hematológica CD38+ (véase la información del ensayo en Sanofi: ”Dose escalation study o f Anti-CD38 Monoclonal Antibody in patients with selected CD38+ Hematological Malignancies", según está disponible el 15 de octubre de 2013, Identificador de Ensayos Clínicos: NCT01084252), en particular, mieloma múltiple, más particularmente mieloma múltiple recidivante y/o refractario.

El siguiente ejemplo divulga así los resultados de los ensayos clínicos de Fase 1 que muestran la dosis terapéutica segura de este anticuerpo anti-CD38 específico hu38SB19 para un tratamiento eficaz de una enfermedad maligna hematológica CD38+ tal como mieloma múltiple en seres humanos.

Pacientes

Un total de 32 pacientes se trató en el ensayo. 40,6% de la población eran mujeres; la edad media era 64,8 (±8,8). El estado de Kornofsky era mayor de 60% en todos los pacientes.

Los 32 pacientes incluían 3 pacientes con linfoma no hodgkiniano (NHL) de células B, 2 con leucemia linfocítica crónica (CLL) y 27 con mieloma múltiple (MM).

El 80,0% de los pacientes con mieloma múltiple eran mujeres con una edad media de 63,6 (±8,0). Los pacientes con mieloma múltiple recibían como terapias anticancerosas bortezomib en el 100%, lenalidomida en el 92,6% y trasplante de células madre autólogo (ASCT) en el 81,5% de los casos.

Métodos

El anticuerpo monoclonal (mAb) de IgG1 humanizado desnudo hu38SB19 se administró como un solo agente por infusión IV cada semana (QW) o cada 2 semanas (Q2W) a pacientes adultos con enfermedades malignas hematológicas CD38+ seleccionadas que han progresado o después de una terapia estándar o para los que no existe una terapia estándar eficaz.

Se usó un esquema de escalado de dosis acelerado para los 5 primeros niveles de dosis (DL) (0,0001 mg/kg a 0,1 mg/kg cada 2 semanas), con un paciente evaluable por nivel de dosis a menos que se experimentara el nivel de dosis tóxico (DLT). Todos los niveles de dosis posteriores (0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, 20 mg/kg cada 2 semanas y 10 mg/kg cada semana) seguían el diseño 3+3 clásico para el escalado de dosis basándose en la toxicidad del nivel de dosis.

Los 32 pacientes eran evaluables con respecto a la determinación del criterio de valoración de la toxicidad con el nivel de dosis y 32 con respecto a la determinación de la respuesta tumoral.

El número mediano de ciclos variaba de 2,0 a 50,0.

Resultados

Se han tratado 32 pacientes a través de todos los niveles de dosis incluyendo 3 pacientes con linfoma no hodgkiniano (NHL) de células B, 2 con leucemia linfocítica crónica (CLL) y 27 con mieloma múltiple (MM).

Los estudios relativos a niveles de dosis de 20 mg/kg cada 2 semanas y una dosis de 10 mg/kg una vez a la semana se evalúan normalmente y no se ha alcanzado la dosis máxima tolerada.

Las toxicidades limitativas de la dosis se han limitado a reacciones de infusión de Grado 2 durante el ciclo 1 con 1 a un DL 0,3 mg/kg y 1 a un DL 3,0 mg/kg. Esto se mitigaba mediante el establecimiento de un pretratamiento habitual con metilprednisona, difenhidramina, ranitidina y acetaminofeno.

Los episodios adversos que se presentan más frecuentemente (> 10%) a todos los niveles de dosis, independientemente de la causalidad, son fatiga (46,9%), nauseas (31,3%), pirexia (28,1%), tos (25%), vómitos (21,9%), hipercalcemia (18,8%), con cefalea, estreñimiento, dolor de huesos, resfriado y diarrea presentándose cada uno en 15,6% de los pacientes. Además, neumonía, anemia, disgeusia e hipocalemia se presentaban cada una en 12,5% de los pacientes.

Episodios adversos graves que están relacionados con la terapia incluyen neumonía de grado 3 (6,3%) asociada con fiebre (3,1%), hiperglucemia (3,1%) y una reacción a la infusión de grado 2 (3,1%).

De los 19 pacientes tratados a un nivel de dosis 1,0 mg/kg a 10 mg/kg cada 2 semanas, 1 tenía leucemia linfocítica crónica (CLL), 1 tenía linfoma no hodgkiniano (NHL) y 17 tenían mieloma múltiple (MM).

Los 17 pacientes con mieloma múltiple eran pacientes mayores y muy pretratados; edad mediana de 64 años (intervalo: 55-74); y una mediana de siete regímenes anteriores (intervalo: 2-14). Todos los pacientes con MM habían recibido lenalidomida y bortezomib previos. El tiempo mediano desde el diagnóstico a la primera dosificación con hu38SB19 era 6,8 años (intervalo 1,8 - 16,8 años).

Las respuestas en este grupo (Figura 1), según los criterios para el mieloma múltiple del European Group for Bone Marrow and Transplant (EBMT), incluían 1 respuesta parcial (PR) con 1 mg/kg (n = 3) y 5 mg/kg (n=3) y 1 respuesta mínima (MR) con un nivel de dosis 3 mg/kg (n = 6). El nivel de dosis 10 mg/kg mostraba 3 respuestas parciales (PR) y 2 enfermedades estables (SD) entre 6 pacientes con mieloma múltiple tratados.

Para los 19 pacientes tratados con o por encima del DL 1 mg/kg, el tiempo mediano en tratamiento es 8 semanas (intervalo 2-50 semanas).

Los estudios de inmunogenicidad no muestran anticuerpos anti-hu38SB19.

La ocupación del receptor se podía detectar a partir de niveles de dosis de 1 mg/kg y alcanzaba un intervalo de 84,1 a 97,7% con 10 mg/kg.

El análisis farmacocinético (PK) muestra un incremento de exposición mayor al proporcional a la dosis a lo largo del intervalo de dosis de 0,03 a 10 mg/kg con depuración en un intervalo similar entre 5 mg/kg y 10 mg/kg.

No se observaba acumulación basada en Cmáx en el ciclo 2 a lo largo del intervalo de dosis de 0,03 a 3 mg/kg.

Claims (5)

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo monoclonal humanizado que se une específicamente a CD38 para el uso en el tratamiento de mieloma múltiple recidivante y/o refractario en un sujeto humano, en donde:

dicho mieloma múltiple es recidivante o refractario desde un tratamiento previo con lenalidomida y bortezomib; dicho anticuerpo comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera;

dicha cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO: 50;

dicha cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO: 52;

dicho anticuerpo es capaz de destruir una célula CD38+ en el sujeto humano mediante inducción de apoptosis, citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC) y citotoxicidad dependiente del complemento (CDC); y

dicho anticuerpo se ha de administrar a un sujeto humano en una dosis terapéutica segura de 10 mg/kg o 20 mg/kg una vez cada dos semanas.

2. El anticuerpo para el uso según la reivindicación 1, en donde la dosis terapéutica segura de dicho anticuerpo es para administración intravenosa.

3. El anticuerpo para el uso según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde la dosis terapéutica segura de dicho anticuerpo es para administración mediante infusión a una velocidad inicial de infusión que varía de 0,042 mg/h a 250 mg/h.

4. El anticuerpo para el uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicho anticuerpo no produce autoanticuerpos contra dicho anticuerpo cuando se administra a un sujeto humano.

5. El anticuerpo para el uso según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde dicho anticuerpo es capaz de inhibir el crecimiento tumoral en un sujeto humano cuando se administra a dicho sujeto humano a un nivel de dosis de 10 mg o 20 mg/kg cada dos semanas.