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ES2824110T3 - Troponina como marcador de fibrilación auricular intermitente - Google Patents

Troponina como marcador de fibrilación auricular intermitente Download PDF

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ES2824110T3 ES16175468T ES16175468T ES2824110T3 ES 2824110 T3 ES2824110 T3 ES 2824110T3 ES 16175468 T ES16175468 T ES 16175468T ES 16175468 T ES16175468 T ES 16175468T ES 2824110 T3 ES2824110 T3 ES 2824110T3
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atrial fibrillation
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intermittent
cardiac troponin
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Dietmar Zdunek
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F Hoffmann La Roche AG
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Abstract

Un procedimiento para diagnosticar fibrilación auricular intermitente en un sujeto humano que se sospecha que padece fibrilación auricular intermitente, que comprende determinar la cantidad de una troponina cardíaca en una muestra de dicho sujeto y comparar la cantidad determinada de dicha troponina cardíaca con una cantidad de referencia, con lo que se diagnostica fibrilación auricular intermitente, en el que se diagnostica fibrilación auricular intermitente en ausencia de un episodio de fibrilación auricular.

Description

DESCRIPCIÓN
Troponina como marcador de fibrilación auricular intermitente
La fibrilación auricular (FA) con frecuencia no se reconoce por el paciente. Este es el caso en aproximadamente un 40 % de los pacientes, lo que indica que la anamnesis es insensible para el diagnóstico de fibrilación auricular (Kamel H. et al, Curr Atheroscler Rep 2011: 13: 338 - 343). Aunque estos números se refieren a fibrilación auricular persistente, la fibrilación auricular paroxística es incluso más difícil de diagnosticar y solo se puede registrar por telemetría cardíaca hospitalaria o incluso monitorización Holter. Esto último tiene la ventaja de que se registra el ECG y posteriormente se puede revisar por un médico experimentado.
Usando ECG Holter la fibrilación auricular previamente no reconocida paroxística fue más frecuente que la fibrilación auricular persistente (Rizos T. et al. Cerebrovasc. Dis 2011: 32: 276 - 282). Para capturar la fibrilación auricular paroxística/isquémica de manera fiable, parece necesario un seguimiento con Holter de 72 h (Gumbinger C et al, Europ. J of Neurology 2011 antes de su publicación). Por tanto, el reconocimiento de fibrilación auricular paroxística es un desafío importante, específicamente porque al menos un 1 % de la población general tiene fibrilación auricular persistente y la frecuencia se incrementa con la edad (Rizos T. et al).
Foreman et al. analizan la concentración plasmática de troponina I cardíaca en caballos normales y en caballos con arritmias y toxicidades (JOURNAL OF VETERINARY INTERNAL MEDICINE, 2005, vol. 19, n.° 3, página 478) Finsterer et al. analizaron el nivel de troponina en pacientes con trastornos neuromusculares (CLINICAL RESEARCH IN CARDIOLOGY (2006) vol. 96, n.° 2, ISSN 1861-0692, páginas 109-113).
Bugnicourt et al. divulgan que las troponinas cardíacas pueden predecir la fibrilación auricular de reciente aparición en pacientes con apoplejía isquémica (NEUROLOGY, 2010, vol. 63, n.° 1, páginas 24-28).
Brugts et al. analizaron el valor predictivo de biomarcadores cardíacos en el pronóstico y estratificación del riesgo de los pacientes con fibrilación auricular (CURRENT OPINION IN CARDIOLOg Y, 2011, vol. 26, n.° 5, páginas 449-456). Van des Bos et al. divulgan que elevaciones menores en troponina I están asociadas con mortalidad y acontecimientos cardíacos adversos en pacientes con fibrilación auricular (EUROPEAN HEART JOURNAL, 2011, vol. 32, n.° 5, páginas 611-617).
Goette et al. divulgan que la taquiarritmia auricular aguda induce estrés oxidativo mediado por receptores de tipo 1 de la angiotensina II y anomalías del flujo microvascular en ventrículos (EUROPEAN HEART JOURNAL, 2009 vol. 30, n.° 11, páginas 1411-1420).
Latini et al. divulgan una evaluación de biomarcadores cardiovasculares circulantes en fibrilación auricular recurrente (JOURNAL OF INTERNAL MEDICINE, 2011, vol. 269, páginas 160-171).
Los autores de la invención han descubierto que la determinación de una troponina cardíaca permite diagnosticar fibrilación auricular. De forma interesante, los pacientes con FA intermitente también habían incrementado los niveles de troponina cardíaca. Por lo tanto, también se pueden identificar pacientes que presentan FA intermitente determinando la cantidad de troponina cardíaca.
En consecuencia, el presente procedimiento para diagnosticar fibrilación auricular intermitente en un sujeto humano que se sospecha que padece fibrilación auricular intermitente, comprende determinar la cantidad de una troponina cardíaca en una muestra de dicho sujeto, y comparar la cantidad determinada de dicha troponina cardíaca con una cantidad de referencia, con lo que se diagnostica fibrilación auricular intermitente, en el que se diagnostica fibrilación auricular intermitente en ausencia de un episodio de fibrilación auricular.
Procedimiento para diferenciar precozmente si un sujeto padece apoplejía cardioembólica o apoplejía isquémica no cardioembólica (divulgación)
La divulgación se refiere a un procedimiento para diferenciar precozmente si un sujeto padece apoplejía cardioembólica o apoplejía isquémica no cardioembólica, que comprende
a) determinar la cantidad de una troponina cardíaca en una muestra de un sujeto que padece apoplejía isquémica, en el que la muestra se ha obtenido de inmediato después de la aparición de síntomas de apoplejía isquémica. En un modo de realización preferente, el procedimiento anterior comprende además la etapa de
b) comparar la cantidad de dicha troponina cardíaca como se determina en la etapa a con una cantidad de referencia, diferenciando de este modo si dicho sujeto padece apoplejía cardioembólica o apoplejía isquémica no cardioembólica.
Por tanto, la divulgación se refiere a un procedimiento para diferenciar precozmente si un sujeto padece apoplejía cardioembólica o apoplejía isquémica no cardioembólica, que comprende
a) determinar la cantidad de una troponina cardíaca en una muestra de un sujeto que padece apoplejía isquémica, obtenida de inmediato después de la aparición de síntomas de apoplejía isquémica, y
b) comparar la cantidad de dicha troponina cardíaca como se determina en la etapa a) con una cantidad de referencia, con lo que se diferencia si dicho sujeto padece apoplejía isquémica cardioembólica o apoplejía isquémica no cardioembólica.
Preferentemente, se diferencia si un sujeto padece apoplejía isquémica cardioembólica o apoplejía isquémica no cardioembólica llevando a cabo la otra etapa de c) diagnosticar si un sujeto padece apoplejía isquémica cardioembólica o apoplejía isquémica no cardioembólica, en base a resultados de la comparación llevada a cabo en la etapa b).
En un modo de realización preferente del procedimiento de la presente invención, la etapa a) comprende además la determinación de la cantidad de un péptido natriurético en la muestra del sujeto obtenida de inmediato después de la aparición de apoplejía isquémica. Preferentemente, por tanto, la cantidad determinada de péptido natriurético se compara en la etapa b) con una cantidad de referencia para un péptido natriurético.
Por tanto, la divulgación también se refiere a un procedimiento para diferenciar precozmente si un sujeto padece apoplejía cardioembólica o apoplejía isquémica no cardioembólica, que comprende
a) determinar la cantidad de una troponina cardíaca y de péptido natriurético en una muestra de un sujeto que padece apoplejía isquémica, obtenida de inmediato después de la aparición de síntomas de apoplejía isquémica, y b) comparar la cantidad de dicha troponina cardíaca como se determina en la etapa a) con una cantidad de referencia para la troponina cardíaca, y la cantidad de dicho péptido natriurético con una cantidad de referencia para el péptido natriurético, con lo que se diferencia si dicho sujeto padece apoplejía cardioembólica o apoplejía isquémica no cardioembólica.
El procedimiento de la presente invención, preferentemente, es un procedimiento ex vivo. Además, puede comprender etapas además de las mencionadas de forma explícita anteriormente. Por ejemplo, otras etapas se pueden referir a pretratamientos de muestras o evaluación de los resultados obtenidos por el procedimiento. El procedimiento se puede llevar a cabo manualmente o asistido por automatización. Preferentemente, la etapa (a) y/o (b) puede estar asistida totalmente o en parte por automatización, por ejemplo, por un equipo robótico o sensitivo adecuado para la determinación en la etapa (a) o una comparación implementada por ordenador y/o diferenciación basada en dicha comparación en la etapa (b).
El término "diferenciar" como se usa en el presente documento quiere decir distinguir entre apoplejía cardioembólica y apoplejía no cardioembólica en un paciente que padece apoplejía isquémica. El término como se usa en el presente documento, preferentemente, incluye diagnosticar diferencialmente apoplejía isquémica cardioembólica y apoplejía isquémica no cardioembólica en un sujeto. Como se entenderá por los expertos en la técnica, dicha evaluación normalmente no pretende ser correcta para un 100 % de los sujetos que se van a diagnosticar diferencialmente. Sin embargo, el término requiere que una parte estadísticamente significativa de sujetos se pueda diagnosticar correctamente. Si un diagnóstico/diferenciación es correcto se puede confirmar por procedimientos bien conocidos en la técnica. Además, se puede determinar sin más si una parte es estadísticamente significativa por el experto en la técnica usando diversas herramientas de evaluación estadística bien conocidas, por ejemplo, determinación de intervalos de confianza, determinación del valor de p, prueba de la t de Student, prueba de Mann-Whitney, etc. Se encuentran detalles en Dowdy y Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983. Los intervalos de confianza preferentes son de al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 %. Los valores de p son, preferentemente, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 o 0,0001.
El término "sujeto", como se usa en el presente documento, se refiere a animales, preferentemente mamíferos, y más preferentemente, seres humanos. Preferentemente, el sujeto padece o no infecciones agudas. Además, se prevé además que el sujeto no padezca síndrome coronario agudo y/o insuficiencia renal crónica. En particular, el sujeto en el contexto del procedimiento mencionado anteriormente tendrá una función renal normal. Además, el sujeto es, preferentemente, un sujeto que se presenta en una unidad de urgencias.
La definición de sujeto dada en el presente documento, preferentemente, se aplica al sujeto que se va a someter a prueba de acuerdo con el procedimiento de la presente invención así como al sujeto/sujetos del que se deriva la cantidad de referencia.
El sujeto que se va a someter a prueba de acuerdo con el procedimiento anterior para diferenciar precozmente si un sujeto padece apoplejía cardioembólica o apoplejía isquémica no cardioembólica padecerá apoplejía isquémica. El término "apoplejía isquémica" (en el presente documento también denominado "apoplejía") es bien conocido por el experto en la técnica (véanse, por ejemplo, Adams et al., Guidelines for the Early Management of Adults With Ischemic Stroke, A Guideline From the American Heart Association/ American Stroke Association Stroke Council, Clinical Cardiology Council, Cardiovascular Radiology and Intervention Council, and the Atherosclerotic Peripheral Vascular Disease and Quality of Care Outcomes in Research Interdisciplinary Working Groups in Stroke. 2007;38:1655; o Stroke Genetics, editado por Hugh S. Markus, capítulo 1 "An introduction to stroke, Oxford University Press, incorporado, fecha de publicación 06/03)
Como se usa en el presente documento, el término, preferentemente, se refiere a apoplejía isquémica cerebral. La apoplejía isquémica está provocada por una reducción en el flujo sanguíneo al cerebro o partes del mismo que da lugar a una reducción en el suministro (suministro insuficiente) de oxígeno a las células cerebrales. La apoplejía isquémica se puede caracterizar por anemia tisular provocada por obstrucción de la entrada de sangre arterial. Puede dar lugar a daño tisular irreversible debido a la muerte de células cerebrales.
Existen diversos sistemas de clasificación para la apoplejía isquémica. La clasificación del Oxford Community Stroke Project (OCSP, también conocida como clasificación de Bamford u Oxford) se basa principalmente en los síntomas iniciales; en base a la extensión de los síntomas, el episodio de apoplejía se clasifica como infarto de circulación anterior total (TACI), infarto de circulación anterior parcial (PACI), infarto lagunar (LACI) o infarto de circulación posterior (POCI). Estas cuatro entidades predicen la extensión de la apoplejía, el área del cerebro afectada, la causa subyacente y el pronóstico.
Preferentemente, los llamados criterios TOAST se aplican en el presente documento. Para los criterios TOAST, véase por ejemplo, Donnan GA, Fisher M, Macleod M, Davis SM (mayo 2008). "Stroke". Lancet 371 (9624): 1612-23 o "Classification of subtype of acute ischemic stroke. Definitions for use in a multicenter clinical trial. TOAST. Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment". Stroke 24 (1): 35-41.
La clasificación TOAST (Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment) se basa en síntomas clínicos así como en resultados de otras investigaciones; sobre esta base, una apoplejía se clasifica como debida a (1) embolia de origen cardíaco (apoplejía cardioembólica) (2) trombosis o embolia debida a ateroesclerosis de una arteria de gran tamaño (estenosis de arteria de gran tamaño, apoplejía aterotrombótica), (3) oclusión de un vaso sanguíneo pequeño (apoplejía lagunar) o (4) causa indeterminada (dos causas posibles: ninguna causa identificada o investigación incompleta). Por tanto, las apoplejías isquémicas no cardioembólicas preferentes son apoplejía aterotrombótica (véase 2) y apoplejía lagunar (véase 3).
Si un sujeto padece apoplejía, en particular apoplejía isquémica, se puede determinar por procedimientos bien conocidos. Además, los síntomas de apoplejía son bien conocidos en la técnica y, por ejemplo, se describen en Adams et al. (loc. cit.). Por ejemplo, los síntomas de apoplejía incluyen entumecimiento o debilidad súbita de la cara, brazo o pierna, en especial en un lado del cuerpo, confusión repentina, dificultad para hablar o comprender, problema súbito para ver en uno o ambos ojos, y problema súbito para caminar, mareo, pérdida de equilibrio o coordinación.
El término "muestra" se refiere a una muestra de un líquido corporal, a una muestra de células separadas o a una muestra de un tejido o un órgano. Se pueden obtener muestras de líquidos corporales por técnicas bien conocidas e incluyen, preferentemente, muestras de sangre, plasma, suero u orina, más preferentemente, muestras de sangre, plasma o suero. Se pueden obtener muestras de tejidos u órganos de cualquier tejido u órgano, por ejemplo, por biopsia. Se pueden obtener células separadas de los líquidos corporales o los tejidos u órganos por técnicas de separación tales como centrifugación o separación celular. Preferentemente, se obtienen muestras de células, tejidos u órganos a partir de las células, tejidos u órganos que expresan o producen los péptidos a los que se hace referencia en el presente documento.
La muestra que se va a someter a prueba en el contexto del procedimiento divulgado para diferenciar precozmente si un sujeto padece apoplejía cardioembólica o apoplejía isquémica no cardioembólica se habrá obtenido de inmediato después de la aparición de síntomas de apoplejía (así como la muestra de referencia). Preferentemente, se considera que una muestra se ha obtenido de inmediato después de la aparición de síntomas de apoplejía si se ha obtenido de dicho sujeto no más de 24 horas, en particular no más de 12 horas después de la aparición de síntomas de apoplejía. Más preferentemente, se considera que una muestra se ha obtenido de inmediato después de la aparición de síntomas de apoplejía si se ha obtenido de dicho sujeto no más de 6 horas, e incluso más preferentemente no más de 3 horas después de la aparición de síntomas de apoplejía isquémica. Se prevé además que la muestra se haya obtenido no más de una o dos horas después de la aparición de síntomas de apoplejía.
El término "troponina cardíaca" se refiere a todas las isoformas de troponina expresadas en las células del corazón y, preferentemente, las células subendocárdicas. Estas isoformas están bien caracterizadas en la técnica como se describe, por ejemplo, en Anderson 1995, Circulation Research, vol. 76, n.° 4: 681-686 y Ferrieres 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493. Preferentemente, troponina cardíaca se refiere a troponina T y/o a troponina I y, lo más preferentemente, a troponina T. Se debe entender que las isoformas de troponinas se pueden determinar en el procedimiento de la presente invención conjuntamente, es decir, simultánea o secuencialmente, o de forma individual, es decir, sin determinar la otra isoforma en absoluto. Las secuencias de aminoácidos para la troponina T humana y troponina I humana se divulgan en Anderson, loc cit y Ferrieres 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493.
La expresión "troponina cardíaca" engloba también variantes de las troponinas específicas mencionadas anteriormente, es decir, preferentemente, troponina I y más preferentemente, troponina T. Dichas variantes tienen al menos las mismas propiedades biológicas e inmunológicas esenciales que las troponinas cardíacas específicas. En particular, comparten las mismas propiedades biológicas e inmunológicas esenciales si son detectables por los mismos ensayos específicos a los que se hace referencia en la presente memoria descriptiva, por ejemplo, por ensayos ELISA usando anticuerpos policlonales o monoclonales que reconocen específicamente las dichas troponinas cardíacas. Además, se debe entender que una variante como se hace referencia de acuerdo con la presente invención, tendrá una secuencia de aminoácidos que difiere debido a al menos una sustitución, deleción y/o adición aminoacídica, en la que la secuencia de aminoácidos de la variante todavía es, preferentemente, al menos aproximadamente un 50 %, al menos aproximadamente un 60 %, al menos aproximadamente un 70 %, al menos aproximadamente un 80 %, al menos aproximadamente un 85 %, al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, o al menos aproximadamente un 99 % idéntica a la secuencia amino de la troponina específica. Preferentemente, el grado de identidad se va a determinar comparando dos secuencias óptimamente alineadas sobre una ventana de comparación, donde el fragmento de la secuencia de aminoácidos en la ventana de comparación puede comprender adiciones o deleciones (por ejemplo, huecos o salientes) en comparación con la secuencia de referencia (que no comprende adiciones o deleciones) para la alineación óptima. El porcentaje se calcula determinando el número de posiciones en las que se produce el residuo aminoacídico idéntico en ambas secuencias para proporcionar el número de posiciones emparejadas, dividiendo el número de posiciones emparejadas entre el número total de posiciones en la ventana de comparación y multiplicando el resultado por 100 para proporcionar el porcentaje de identidad de secuencia. Se puede llevar a cabo la alineación óptima de secuencias para su comparación, por ejemplo, por el algoritmo de homología local de Smith y Waterman Add. APL. Math. 2:482 (1981), por el algoritmo de alineación de homología de Needleman y Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970), por la búsqueda para el procedimiento de similitud de Pearson y Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85: 2444 (1988), por implementaciones informatizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA y TFASTA en el paquete informático Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI), o por inspección visual. Dado que se han identificado dos secuencias para su comparación, se emplean preferentemente GAP y BESTFIT para determinar su alineación óptima y, por tanto, el grado de identidad. Preferentemente, se usan los valores por defecto de 5,00 para peso de hueco y 0,30 para la longitud de peso de hueco. Las variantes pueden ser variantes alélicas o cualquier otro homólogo, parálogo u ortólogo específico de especie. Además, las variantes a las que se hace referencia en el presente documento incluyen fragmentos de las troponinas cardíacas específicas o los tipos de variantes mencionados anteriormente siempre que estos fragmentos tengan las propiedades inmunológicas y biológicas esenciales como se hace referencia anteriormente. Preferentemente, las variantes de troponina cardíaca tienen propiedades inmunológicas (es decir, composición de epítopos) comparables a las de la troponina T o troponina I humana. Por tanto, las variantes serán reconocibles por los medios o ligandos mencionados anteriormente usados para la determinación de la concentración de las troponinas cardíacas. Por tanto, las variantes serán reconocibles por los medios o ligandos mencionados anteriormente usados para la determinación de la concentración de las troponinas cardíacas. Dichos fragmentos pueden ser, por ejemplo, productos de degradación de las troponinas. Se incluyen además variantes que difieren debido a modificaciones postraduccionales tales como fosforilación o miristilación. Preferentemente, la propiedad biológica de la troponina I y su variante es la capacidad para inhibir la ATPasa de actomiosina o para inhibir la angiogénesis in vivo e in vitro, que se puede detectar, por ejemplo, en base al ensayo descrito por Moses et al. 1999 PNAS USA 96 (6): 2645-2650). Preferentemente, la propiedad biológica de la troponina T y su variante es la capacidad para formar un complejo con troponina C e I, para unirse a iones de calcio o para unirse a tropomiosina, preferentemente si está presente como complejo de troponina C, I y T o un complejo formado por troponina C, troponina I y una variante de troponina T. Es conocido que se pueden detectar concentraciones bajas de troponina cardíaca circulante en sujetos en diversas afecciones, pero se requieren otros estudios para comprender su respectivo papel y tasa (Masson et al., Curr Heart Fail Rep (2010) 7:15-21).
El término "péptido natriurético" comprende péptidos de tipo péptido natriurético auricular (ANP) y péptido natriurético cerebral (BNP) y variantes de los mismos que tienen el mismo potencial predictivo. Los péptidos natriuréticos de acuerdo con la presente invención comprenden péptidos de tipo a Np y de tipo BNP y variantes de los mismos (véase, Bonow, 1996, Circulation 93: 1946-1950). Los péptidos de tipo ANP comprenden pre-proANP, proANP, NT-proANP y ANP. Los péptidos de tipo BNP comprenden pre-proBNp, proBNP, NT-proBNP y BNP. El prepropéptido (134 aminoácidos en el caso de pre-proBNP) comprende un péptido señal corto, que se escinde enzimáticamente para liberar el propéptido (108 aminoácidos en el caso de proBNP). El propéptido se escinde además en un propéptido N terminal (NT-propéptido, 76 aminoácidos en el caso de NT-proBNP) y la hormona activa (32 aminoácidos en el caso de BNP, 28 aminoácidos en el caso de ANP). Preferentemente, los péptidos natriuréticos de acuerdo con la presente invención son NT-proANP, ANP y, más preferentemente, NT-proBNP, BNP y variantes de los mismos. ANP y BNP son las hormonas activas y tienen una semivida más corta que sus respectivos homólogos inactivos, NT-proANP y NT-proBNP. BNP se metaboliza en la sangre, mientras que NT-proBNP circula en la sangre como molécula intacta y como tal se elimina por vía renal. La semivida in vivo de NT-proBNP es 120 min más larga que la de BNP, que es de 20 min (Smith 2000, J Endocrinol. 167: 239-46). Los preanalíticos son más resistentes con NT-proBNP, lo que permite un fácil transporte de la muestra a un laboratorio central (Mueller 2004, Clin Chem Lab Med 42: 942-4). Se pueden almacenar muestras de sangre a temperatura ambiente durante varios días o se pueden enviar o despachar sin pérdida con recuperación. Por el contrario, el almacenamiento de BNP durante 48 horas a temperatura ambiente o a 4° Celsius da lugar a una pérdida en la concentración de al menos un 20 % (Mueller loc.cit.; Wu 2004, Clin Chem 50: 867-73.). Por lo tanto, dependiendo de la evolución temporal o propiedades de interés, cualquier medición de las formas activas o inactivas del péptido natriurético puede ser ventajosa. Los péptidos natriuréticos lo más preferentes de acuerdo con la presente invención son NT-proBNP o variantes de los mismos. Como se analiza en resumen anteriormente, el NT-proBNP humano, como se hace referencia de acuerdo con la presente invención, es un polipéptido que comprende, preferentemente, 76 aminoácidos de longitud correspondiente a la porción N terminal de la molécula de NT-proBNP humano. La estructura del BNP y NT-proBNP humanos ya se ha descrito en detalle en la técnica anterior, por ejemplo, documentos WO 02/089657, WO 02/083913 o Bonow loc. cit. Preferentemente, NT-proBNP humano como se usa en el presente documento es NT-proBNP humano como se divulga en el documento EP 0648 228 B1. El NT-proBNP al que se hace referencia de acuerdo con la presente invención engloba además variantes alélicas y otras de dicha secuencia específica para el NT-proBNP humano analizado anteriormente. Específicamente, se prevén polipéptidos variantes que están al nivel aminoacídico preferentemente, al menos un 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 92 %, 95 %, 97 %, 98 % o un 99 % idéntico al NT-proBNP humano, preferentemente a lo largo de la longitud completa del NT-proBNP humano. El grado de identidad entre dos secuencias de aminoácidos se puede determinar por algoritmos bien conocidos en la técnica. Preferentemente, el grado de identidad se va a determinar comparando dos secuencias óptimamente alineadas sobre una ventana de comparación, donde el fragmento de la secuencia de aminoácidos en la ventana de comparación puede comprender adiciones o deleciones (por ejemplo, huecos o salientes) en comparación con la secuencia de referencia (que no comprende adiciones o deleciones) para la alineación óptima. El porcentaje se calcula determinando el número de posiciones en las que se produce el residuo aminoacídico idéntico en ambas secuencias para proporcionar el número de posiciones emparejadas, dividiendo el número de posiciones emparejadas entre el número total de posiciones en la ventana de comparación y multiplicando el resultado por 100 para proporcionar el porcentaje de identidad de secuencia. Se puede llevar a cabo la alineación óptima de secuencias para su comparación, por ejemplo, por el algoritmo de homología local de Smith y Waterman Add. APL. Math. 2:482 (1981), por el algoritmo de alineación de homología de Needleman y Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970), por la búsqueda para el procedimiento de similitud de Pearson y Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85: 2444 (1988), por implementaciones informatizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA y TFASTA en el paquete informático Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI), o por inspección visual. Dado que se han identificado dos secuencias para su comparación, se emplean preferentemente GAP y BESTFIT para determinar su alineación óptima y, por tanto, el grado de identidad. Preferentemente, se usan los valores por defecto de 5,00 para peso de hueco y 0,30 para la longitud de peso de hueco. Las variantes a las que se hace referencia anteriormente pueden ser variantes alélicas o cualquier otro homólogo, parálogo u ortólogo específico de especie. Sustancialmente similares y también previstos son los productos de degradación proteolítica que todavía se reconocen por los medios de diagnóstico o por ligandos dirigidos contra el respectivo péptido de longitud completa. También se engloban polipéptidos variantes que tienen deleciones, sustituciones y/o adiciones aminoacídicas en comparación con la secuencia de aminoácidos de NT-proBNP humano siempre que dichos polipéptidos tengan propiedades de NT-proBNP. Las propiedades de NT-proBNP como se hace referencia en el presente documento son propiedades inmunológicas y/o biológicas. Preferentemente, las variantes de NT-proBNP tienen propiedades inmunológicas (es decir, composición de epítopos) comparables a las de NT-proBNP humano. Por tanto, las variantes serán reconocibles por los medios o ligandos mencionados anteriormente usados para la determinación de la cantidad de los péptidos natriuréticos. Las propiedades de NT-proBNP biológicas y/o inmunológicas se pueden detectar por el ensayo descrito en Karl et al. (Karl 1999, Scand J Clin Lab Invest 230:177-181), Yeo et al. (Yeo 2003, Clinica Chimica Acta 338:107-115). Las variantes también incluyen péptidos modificados postraduccionalmente tales como péptidos glucosilados. Además, una variante de acuerdo con la presente invención también es un péptido o polipéptido que se ha modificado después de la recogida de la muestra, por ejemplo por unión covalente o no covalente de un marcador, en particular un marcador radioactivo o fluorescente, al péptido.
Determinar la cantidad de un péptido o polipéptido como se hace referencia en esta memoria descriptiva se refiere a medir la cantidad o concentración, preferentemente, de forma semicuantitativa o cuantitativa. La medición se puede realizar de forma directa o indirecta. La medición directa se refiere a la medición de la cantidad o concentración del péptido o polipéptido en base a una señal que se obtiene a partir del propio péptido o polipéptido y con una intensidad que se correlaciona directamente con el número de moléculas del péptido presentes en la muestra. Una señal de este tipo (en ocasiones denominada en el presente documento señal de intensidad) se puede obtener, por ejemplo, midiendo un valor de intensidad de una propiedad física o química específica del péptido o polipéptido. La medición indirecta incluye la medición de una señal obtenida a partir de un componente secundario (es decir, un componente que no es el propio péptido o polipéptido) o un sistema de lectura biológica, por ejemplo, respuestas celulares, ligandos, marcadores o productos de reacción enzimáticos mensurables.
De acuerdo con la presente invención, determinar la cantidad de un péptido o polipéptido se puede lograr por todos los medios conocidos para determinar la cantidad de un péptido en una muestra. Dichos medios comprenden inmunoanálisis y procedimientos que pueden utilizar moléculas marcadas en diversos formatos de ensayo de tipo sándwich, competencia u otros. Dichos ensayos se basan preferentemente en agentes de detección tales como anticuerpos que reconocen específicamente el péptido o polipéptido que se va a determinar. Los agentes de detección podrán, directa o indirectamente, generar una señal que indique la presencia o ausencia del péptido o polipéptido.
Además, la intensidad de señal se puede correlacionar, preferentemente, de forma directa o indirecta (por ejemplo, inversamente proporcional) con la cantidad de polipéptido presente en una muestra. Otros procedimientos adecuados comprenden medir una propiedad física o química específica para el péptido o polipéptido tal como su masa molecular precisa o espectro de RMN. Dichos procedimientos comprenden, preferentemente, biosensores, dispositivos ópticos acoplados a inmunoanálisis, biochips, dispositivos analíticos tales como espectrómetros de masas, analizadores de RMN o dispositivos de cromatografía. Además, los procedimientos incluyen procedimientos basados en ELISA con microplacas, inmunoanálisis totalmente automatizados o robóticos (disponibles, por ejemplo, en analizadores Elecsys™), CBA (un ensayo enzimático de unión a cobalto, disponible, por ejemplo, en analizadores Roche-Hitachi™) y ensayos de aglutinación de látex (disponibles, por ejemplo, en analizadores Roche-Hitachi™).
Preferentemente, determinar la cantidad de un péptido o polipéptido comprende las etapas de (a) poner en contacto una célula que puede provocar una respuesta celular con una intensidad que es indicativa de la cantidad del péptido o polipéptido con dicho péptido o polipéptido durante un período de tiempo adecuado, (b) medir la respuesta celular. Para medir respuestas celulares, la muestra o muestra procesada se añade, preferentemente, a un cultivo celular y se mide una respuesta celular interna o externa. La respuesta celular puede incluir la expresión mensurable de un gen indicador o la secreción de una sustancia, por ejemplo, un péptido, polipéptido o una molécula pequeña. La expresión o sustancia generará una señal de intensidad que se correlaciona con la cantidad del péptido o polipéptido.
También preferentemente, determinar la cantidad de un péptido o polipéptido comprende la etapa de medir una señal de intensidad específica obtenible a partir del péptido o polipéptido en la muestra. Como se describe anteriormente, una señal de este tipo puede ser la intensidad de señal observada a una variable m/z específica para el péptido o polipéptido, observada en espectros de masas o un espectro de RMN específico para el péptido o polipéptido.
Determinar la cantidad de un péptido o polipéptido puede comprender, preferentemente, las etapas de (a) poner en contacto el péptido con un ligando específico, (b) (opcionalmente) retirar el ligando no unido, (c) medir la cantidad de ligando unido.
De acuerdo con un modo de realización preferente, dichas etapas de poner en contacto, retirar y medir se pueden realizar por una unidad analizadora del sistema divulgado en el presente documento. De acuerdo con algunos modos de realización, dichas etapas se pueden realizar por una única unidad analizadora de dicho sistema o por más de una unidad analizadora en comunicación funcional entre sí. Por ejemplo, de acuerdo con un modo de realización específico, dicho sistema divulgado en el presente documento puede incluir una primera unidad analizadora para realizar dichas etapas de poner en contacto y retirar y una segunda unidad analizadora, conectada de forma funcional a dicha primera unidad analizadora por una unidad de transporte (por ejemplo, un brazo robot), que realiza dicha etapa de medir.
El ligando unido, en particular, el ligando o el complejo ligando/péptido, generará una señal de intensidad. Unión de acuerdo con la presente invención incluye unión tanto covalente como no covalente. Un ligando de acuerdo con la presente invención puede ser cualquier compuesto, por ejemplo, un péptido, polipéptido, ácido nucleico o molécula pequeña, que se une al péptido o polipéptido descrito en el presente documento. Los ligandos preferentes incluyen anticuerpos, ácidos nucleicos, péptidos o polipéptidos tales como receptores o compañeros de unión para el péptido o polipéptido y fragmentos de los mismos que comprenden los dominios de unión para los péptidos, y aptámeros, por ejemplo, aptámeros de ácidos nucleicos o péptidos. Los procedimientos para preparar dichos ligandos son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, la identificación y producción de anticuerpos o aptámeros adecuados también se ofrece por proveedores comerciales. El experto en la técnica está familiarizado con procedimientos para desarrollar derivados de dichos ligandos con mayor afinidad o especificidad. Por ejemplo, se pueden introducir mutaciones aleatorias en los ácidos nucleicos, péptidos o polipéptidos. Estos derivados se pueden someter a prueba a continuación para determinar la unión de acuerdo con procedimientos de cribado conocidos en la técnica, por ejemplo, presentación en fagos. Los anticuerpos como se hace referencia en el presente documento incluyen anticuerpos tanto policlonales como monoclonales, así como fragmentos de los mismos, tales como fragmentos Fv, Fab y F(ab)2 que se pueden unir a antígeno o hapteno. La presente invención también incluye anticuerpos monocatenarios y anticuerpos híbridos humanizados en los que las secuencias de aminoácidos de un anticuerpo donante no humano que presentan una especificidad de antígeno deseada se combinan con secuencias de un anticuerpo aceptor humano. Las secuencias donantes incluirán normalmente al menos los residuos aminoacídicos de unión a antígeno del donante, pero pueden comprender además otros residuos aminoacídicos estructural y/o funcionalmente relevantes del anticuerpo donante. Dichos híbridos se pueden preparar por diversos procedimientos bien conocidos en la técnica. Preferentemente, el ligando o agente se une específicamente al péptido o polipéptido. Unión específica de acuerdo con la presente invención quiere decir que el ligando o agente no se debe unir sustancialmente a ("reaccionar de forma cruzada" con) otro péptido, polipéptido o sustancia presente en la muestra que se va a analizar. Preferentemente, el péptido o polipéptido unido específicamente se debe unir con una afinidad al menos 3 veces mayor, más preferentemente al menos 10 veces mayor e incluso más preferentemente al menos 50 veces mayor que cualquier otro péptido o polipéptido pertinente. La unión inespecífica puede ser tolerable, si todavía se puede distinguir y medir inequívocamente, por ejemplo, de acuerdo con su tamaño en una inmunotransferencia, o por su abundancia relativamente mayor en la muestra. La unión del ligando se puede medir por cualquier procedimiento conocido en la técnica. Preferentemente, dicho procedimiento es semicuantitativo o cuantitativo. Otras técnicas adecuadas para la determinación de un polipéptido o péptido se describen a continuación.
En primer lugar, la unión de un ligando se puede medir directamente, por ejemplo, por RMN o resonancia de plasmón superficial. La medición de la unión de un ligando, de acuerdo con modos de realización preferentes, se realiza por una unidad analizadora de un sistema divulgado en el presente documento. Después de esto, se puede calcular una cantidad de la unión medida por un dispositivo informático de un sistema divulgado en el presente documento. En segundo lugar, si el ligando también sirve como sustrato de una actividad enzimática del péptido o polipéptido de interés, se puede medir un producto de reacción enzimático (por ejemplo, se puede medir la cantidad de una proteasa midiendo la cantidad de sustrato escindido, por ejemplo, en una inmunoelectrotransferencia). De forma alternativa, el ligando puede presentar propiedades enzimáticas por sí mismo y el complejo "ligando/péptido o polipéptido" o el ligando que se unió por el péptido o polipéptido, respectivamente, se puede poner en contacto con un sustrato adecuado permitiendo la detección por la generación de una señal de intensidad. Para la medición de productos de reacción enzimáticos, preferentemente la cantidad de sustrato es saturante. El sustrato también se puede marcar con un marcador detectable antes de la reacción. Preferentemente, la muestra se pone en contacto con el sustrato durante un periodo de tiempo adecuado. Un periodo de tiempo adecuado se refiere al tiempo necesario para que se produzca una cantidad detectable, preferentemente mensurable, de producto. En lugar de medir la cantidad de producto, se puede medir el tiempo necesario para la aparición de una cantidad dada (por ejemplo, detectable) de producto. En tercer lugar, el ligando se puede acoplar de forma covalente o no covalente a un marcador permitiendo la detección y medición del ligando. El marcaje se puede realizar por procedimientos directos o indirectos. El marcaje directo implica el acoplamiento del marcador directamente (de forma covalente o no covalente) al ligando. El marcaje indirecto implica la unión (de forma covalente o no covalente) de un ligando secundario al primer ligando. El ligando secundario se deber unir específicamente al primer ligando. Dicho ligando secundario se puede acoplar a un marcador adecuado y/o ser la diana (receptor) del ligando terciario que se une al ligando secundario. El uso de ligandos secundarios, terciarios o incluso de orden superior se usa a menudo para incrementar la señal. Los ligandos secundarios y de orden superior adecuados pueden incluir anticuerpos, anticuerpos secundarios y el sistema de estreptavidina-biotina bien conocido (Vector Laboratories, Inc.). El ligando o sustrato también se puede "marcar" con una o más marcas como es conocido en la técnica. Dichas marcas pueden ser entonces dianas para ligandos de orden superior. Las marcas adecuadas incluyen biotina, digoxigenina, marca His, glutatión-S-transferasa, FLAG, GFP, marca myc, hemaglutinina (HA) del virus de la gripe A, proteína de unión a maltosa y similares. En el caso de un péptido o polipéptido, la marca está preferentemente en el extremo N y/o extremo C. Los marcadores adecuados son cualquier marcador detectable por un procedimiento de detección apropiado. Los marcadores típicos incluyen partículas de oro, perlas de látex, éster de acridano, luminol, rutenio, marcadores enzimáticamente activos, marcadores radiactivos, marcadores magnéticos ("por ejemplo, perlas magnéticas", incluyendo marcadores paramagnéticos y superparamagnéticos) y marcadores fluorescentes. Los marcadores enzimáticamente activos incluyen, por ejemplo, peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina, beta-galactosidasa, luciferasa y derivados de los mismos. Los sustratos adecuados para la detección incluyen di-amino-bencidina (DAB), 3,3',-5,5'-tetrametilbencidina, NBT-BCIP (cloruro de 4-nitroazul de tetrazolio y 5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato, disponible como solución madre preparada de Roche Diagnostics), CDP-Star™ (Amersham Biosciences), ECF™ (Amersham Biosciences). Una combinación enzima-sustrato adecuada puede dar como resultado un producto de reacción coloreado, fluorescencia o quimioluminiscencia, que se puede medir de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica (por ejemplo, usando una película sensible a la luz o un sistema de cámara adecuado). En cuanto a medir la reacción enzimática, los criterios dados anteriormente se aplican de forma análoga. Los marcadores fluorescentes típicos incluyen proteínas fluorescentes (tales como GFP y sus derivados), Cy3, Cy5, Texas Red, fluoresceína y los tintes Alexa (por ejemplo, Alexa 568). Otros marcadores fluorescentes están disponibles, por ejemplo, de Molecular Probes (Oregón). También se contempla el uso de puntos cuánticos como marcadores fluorescentes. Los marcadores radioactivos típicos incluyen 35S, 125I, 32P, 33P y similares. Un marcador radiactivo se puede detectar por cualquier procedimiento conocido y apropiado, por ejemplo, una película sensible a la luz o un aparato de diagnóstico con fósforo. Los procedimientos de medición adecuados de acuerdo con la presente invención también incluyen precipitación (en particular inmunoprecipitación), electroquimioluminiscencia (quimioluminiscencia electrogenerada), RIA (radioinmunoanálisis), ELISA (ensayo de inmunoadsorción enzimática), inmunoensayos enzimáticos de tipo sandwich, inmunoanálisis de tipo sandwich de electroquimioluminiscencia (ECLIA), fluoroinmunoanálisis de lantánidos potenciado por disociación (DELFIA), ensayo de proximidad de centelleo (SPA), turbidimetría, nefelometría, turbidimetría o nefelometría potenciada con látex, o inmunoensayos en fase sólida. Otros procedimientos conocidos en la técnica (tales como electroforesis en gel, electroforesis en gel 2D, electroforesis en gel de poliacrilamida SDS (SDS-PAGE), inmunoelectrotransferencia y espectrometría de masas) se pueden usar solos o en combinación con marcaje u otros procedimientos de detección como se describe anteriormente.
La cantidad de un péptido o polipéptido se puede determinar, también preferentemente, como sigue: (a) poner en contacto un soporte sólido que comprende un ligando para el péptido o polipéptido como se especifica anteriormente con una muestra que comprende el péptido o polipéptido y (b) medir la cantidad de péptido o polipéptido que se une al soporte. El ligando, preferentemente elegido del grupo que consiste en ácidos nucleicos, péptidos, polipéptidos, anticuerpos y aptámeros, está preferentemente presente sobre un soporte sólido en forma inmovilizada. Los materiales para fabricar soportes sólidos son bien conocidos en la técnica e incluyen, entre otros, materiales de columna disponibles comercialmente, perlas de poliestireno, perlas de látex, perlas magnéticas, partículas metálicas coloidales, superficies y chips de vidrio y/o silicio, tiras de nitrocelulosa, membranas, láminas, Duracyte, pocillos y paredes de bandejas de reacción, tubos de plástico, etc. El ligando o agente puede estar unido a muchos vehículos diferentes. Los ejemplos de vehículos bien conocidos incluyen vidrio, poliestireno, poli(cloruro de vinilo), polipropileno, polietileno, policarbonato, dextrano, nailon, amilosas, celulosas naturales y modificadas, poliacrilamidas, agarosas y magnetita. La naturaleza del vehículo puede ser soluble o bien insoluble para los propósitos de la invención. Los procedimientos adecuados para fijar/inmovilizar dicho ligando son bien conocidos e incluyen, pero no se limitan a, interacciones iónicas, hidrófobas, covalentes y similares. También se contempla el uso de "matrices de suspensión" como matrices de acuerdo con la presente invención (Nolan 2002, Trends Biotechnol. 20(1):9-12). En dichas matrices de suspensión, el vehículo, por ejemplo, una microperla o microesfera, está presente en suspensión. La matriz consiste en diferentes microperlas o microesferas, posiblemente marcadas, que portan diferentes ligandos. En general son conocidos procedimientos de producción de dichas matrices, por ejemplo, en base a la química en fase sólida y grupos protectores fotolábiles (documento US 5.744.305).
El término "cantidad" como se usa en el presente documento engloba la cantidad absoluta de un polipéptido o péptido, la cantidad o concentración relativa del dicho polipéptido o péptido así como cualquier valor o parámetro que se correlaciona con el mismo o se pueda derivar del mismo. Dichos valores o parámetros comprenden valores de señal de intensidad de todas las propiedades físicas o químicas específicas obtenidas a partir de dichos péptidos por mediciones directas, por ejemplo, valores de intensidad en espectros de masas o espectros de RMN. Además, se engloban todos los valores o parámetros que se obtienen por mediciones indirectas especificadas en otra parte en esta descripción, por ejemplo, cantidades de respuesta determinadas a partir de sistemas de lectura biológica en respuesta a los péptidos o señales de intensidad obtenidas a partir de ligandos unidos de forma específica. Se debe entender que los valores que se correlacionan con las cantidades o parámetros mencionados anteriormente también se pueden obtener por todas las operaciones matemáticas estándar. De acuerdo con modos de realización preferentes de la invención objeto, la determinación de una "cantidad" se realiza por el sistema divulgado, con lo que un dispositivo informático determina la "cantidad" en base a las etapas de contacto y medición realizadas por una o más unidades analizadoras de dicho sistema.
El término "comparar" como se usa en el presente documento engloba comparar la cantidad del péptido o polipéptido comprendido por la muestra que se va a analizar con la cantidad de una fuente de referencia adecuada en otra parte en esta descripción. Se debe entender que comparar como se usa en el presente documento se refiere a una comparación de parámetros o valores correspondientes, por ejemplo, una cantidad absoluta se compara con una cantidad de referencia absoluta mientras que una concentración se compara con una concentración de referencia o una señal de intensidad obtenida a partir de una muestra de prueba se compara con el mismo tipo de señal de intensidad de una muestra de referencia. La comparación a la que se hace referencia en la etapa (b) del procedimiento de la presente invención se puede llevar a cabo manualmente o asistida por ordenador.
Por tanto, la comparación a la que se hace referencia en la etapa (b) del procedimiento de la presente invención se puede llevar a cabo por un dispositivo informático (por ejemplo, de un sistema divulgado en el presente documento). El valor de la cantidad y la referencia se pueden comparar, por ejemplo, entre sí y dicha comparación se puede llevar a cabo automáticamente por un programa informático que ejecuta un algoritmo para la comparación. El programa informático que lleva a cabo dicha evaluación proporcionará la evaluación deseada en un formato de salida adecuado. Para una comparación asistida por ordenador, el valor de la cantidad determinada se puede comparar con valores correspondientes a referencias adecuadas que se almacenan en una base de datos por un programa informático. El programa informático puede evaluar además el resultado de la comparación, es decir, proporcionar automáticamente la evaluación deseada en un formato de salida adecuado.
Para una comparación asistida por ordenador, el valor de la cantidad determinada se puede comparar con valores correspondientes a referencias adecuadas que se almacenan en una base de datos por un programa informático. El programa informático puede evaluar además el resultado de la comparación, es decir, proporciona automáticamente la evaluación deseada en un formato de salida adecuado. Dicho resultado, preferentemente, puede servir como ayuda para diferenciar entre apoplejía isquémica cardioembólica y no cardioembólico.
Por ejemplo, un resultado de una comparación se puede dar como datos brutos (cantidades absolutas o relativas) y, en algunos casos, como indicador en forma de una palabra, frase, símbolo o valor numérico que puede ser indicativo de un diagnóstico particular.
El término "cantidad de referencia" como se usa en el presente documento se refiere a una cantidad que permite la asignación de un sujeto al grupo de sujetos que padecen apoplejía isquémica cardioembólica o bien a un grupo de sujetos que padecen apoplejía isquémica no cardioembólica. Una cantidad de referencia de este tipo puede ser una cantidad umbral que separa estos grupos entre sí. En consecuencia, la cantidad de referencia para el biomarcador troponina será una cantidad que permita la asignación de un sujeto a un grupo de sujetos que padecen apoplejía isquémica cardioembólica o a un grupo de sujetos que padecen apoplejía isquémica no cardioembólica. Una cantidad umbral adecuada que separa los dos grupos se puede calcular sin más por las pruebas estadísticas a las que se hace referencia en el presente documento en otra parte en base a cantidades de una troponina cardíaca de un sujeto o grupo de sujetos que padecen apoplejía isquémica cardioembólica o bien un sujeto o grupo de sujetos que padecen apoplejía isquémica no cardioembólica. Las cantidades referenciadas preferentes que se pueden derivar de los sujetos o grupo de sujetos mencionados anteriormente se indican en otra parte en el presente documento.
Las cantidades de referencia se pueden calcular, en principio, para una cohorte de sujetos como se especifica anteriormente en base a los valores medios o promedios para un biomarcador dado aplicando procedimientos estadísticos estándar. En particular, la exactitud de una prueba tal como un procedimiento destinado a diagnosticar un acontecimiento, o no, se describe mejor por sus características de eficacia diagnóstica (ROC) (véase en especial Zweig 1993, Clin. Chem. 39:561-577). El gráfico ROC es una curva de todos los pares de sensibilidad/especificidad resultantes de variar continuamente el valor umbral de decisión en todo el intervalo de datos observado. El rendimiento clínico de un procedimiento de diagnóstico depende de su exactitud, es decir, su capacidad para asignar correctamente los sujetos a un determinado pronóstico o diagnóstico. La curva ROC indica la superposición entre las dos distribuciones representando la sensibilidad frente a la 1-especificidad para el intervalo completo de valores umbrales adecuados para realizar una distinción. En el eje y está la sensibilidad, o la fracción de positivos verdaderos, que se define como la proporción del número de resultados de prueba positivos verdaderos con respecto al producto del número de resultados de prueba positivos verdaderos y el número de negativos falsos. Esto también se ha denominado positividad en presencia de una enfermedad o afección. Se calcula exclusivamente a partir del subgrupo afectado. En el eje x esta la fracción de positivos falsos, o 1-especificidad, que se define como la proporción del número de resultados positivos falsos con respecto al producto del número de resultados negativos verdaderos y el número positivos falsos. Es un índice de especificidad y se calcula en su totalidad a partir del subgrupo no afectado. Debido a que las fracciones de positivos verdaderos y falsos se calculan totalmente por separado, usando los resultados de prueba de dos subgrupos diferentes, la curva ROC es independiente de la prevalencia del acontecimiento en la cohorte. Cada punto en la curva ROC representa un par de sensibilidad/1-especificidad correspondiente a un valor umbral de decisión particular. Una prueba con discriminación perfecta (sin solapamiento en las dos distribuciones de resultados) tiene una curva ROC que pasa a través de la esquina izquierda superior, donde la fracción de positivos verdaderos es de 1,0, o de un 100 % (sensibilidad perfecta), y la fracción de positivos falsos es de 0 (especificidad perfecta). La curva teórica para una prueba sin discriminación (distribuciones idénticas de resultados para los dos grupos) es una línea diagonal de 45° desde la esquina izquierda inferior hasta la esquina derecha superior. La mayoría de las curvas están entre estos dos extremos. Si la curva ROC entra completamente por debajo de la diagonal de 45°, esto se remedia fácilmente invirtiendo el criterio de "positividad" de "mayor que" a "menor que" o viceversa. Cualitativamente, cuanto más cerca esté la curva de la esquina izquierda superior, mayor será la exactitud global de la prueba. Dependiendo de un intervalo de confianza deseado, se puede derivar un valor umbral de la curva ROC que permita el diagnóstico o la predicción de un acontecimiento dado con un equilibrio apropiado de sensibilidad y especificidad, respectivamente. En consecuencia, la referencia que se va a usar para el procedimiento mencionado anteriormente de la presente invención puede ser, preferentemente, una cantidad umbral o límite y se puede generar, preferentemente, estableciendo una ROC para dicha cohorte como se describe anteriormente y derivando una cantidad umbral a partir de la misma. Dependiendo de una sensibilidad y especificidad deseadas para un procedimiento de diagnóstico, la curva ROC permite derivar valores umbrales adecuados.
El diagnóstico/diferenciación al que se hace referencia en el presente documento se puede proporcionar por el dispositivo informático de un sistema divulgado en el presente documento en base a dicha comparación de la "cantidad" calculada con una referencia o un valor umbral. Por ejemplo, un dispositivo informático de un sistema puede proporcionar un indicador, en forma de una palabra, símbolo o valor numérico que sea indicativo de una apoplejía cardioembólica o una apoplejía no cardioembólica.
La cantidad de referencia aplicable para un sujeto individual puede variar dependiendo de diversos parámetros fisiológicos tales como edad, sexo o subpoblación, así como de los medios usados para la determinación del polipéptido o péptido al que se hace referencia en el presente documento. Se puede determinar una cantidad de referencia adecuada a partir de una muestra de referencia que se va a analizar conjuntamente, es decir, simultánea o posteriormente, con la muestra de prueba.
El término "aproximadamente" en el contexto de la presente invención quiere decir /- 20 %, /- 10 %, /- 5 %, /- 2 % o /- 1 % de dichos valores. Esto también tiene en cuenta las desviaciones habituales provocadas por técnicas de medición, estadísticas y similares.
Procedimiento para diagnosticar fibrilación auricular (de acuerdo con la presente invención)
Como se expone anteriormente, los autores de la invención han descubierto que la determinación de una troponina cardíaca permite diagnosticar fibrilación auricular. De forma interesante, los pacientes con FA intermitente también habían incrementado los niveles de troponina cardíaca. Por lo tanto, también se pueden identificar pacientes que presentan FA intermitente determinando la cantidad de troponina cardíaca.
Las definiciones y explicaciones dadas en el presente documento anteriormente, en particular en relación con el procedimiento anterior para diferenciar precozmente si un sujeto padece apoplejía cardioembólica o apoplejía isquémica no cardioembólica, se aplican mutatis mutandis a los siguientes modos de realización de la presente invención.
La presente invención se refiere a un procedimiento para diagnosticar fibrilación auricular intermitente en un sujeto humano que se sospecha que padece fibrilación auricular intermitente, que comprende determinar la cantidad de una troponina cardíaca en una muestra de dicho sujeto, y comparar la cantidad determinada de dicha troponina cardíaca con una cantidad de referencia, con lo que se diagnostica fibrilación auricular intermitente, en el que se diagnostica fibrilación auricular intermitente en ausencia de un episodio de fibrilación auricular.
Preferentemente, se diagnostica si un sujeto padece fibrilación auricular, o no, llevando a cabo la otra etapa c) de diagnosticar si el sujeto padece fibrilación auricular o no, con lo que se diagnostica fibrilación auricular intermitente.
En consecuencia, la presente invención en particular se refiere a un procedimiento para diagnosticar fibrilación auricular intermitente en un sujeto que se sospecha que padece fibrilación auricular, que comprende
a) determinar la cantidad de una troponina cardíaca en una muestra de dicho sujeto,
y
b) comparar la cantidad así determinada de dicha troponina cardíaca con una cantidad de referencia, con lo que se diagnostica fibrilación auricular intermitente.
En un modo de realización preferente del procedimiento, la etapa a) comprende además la determinación de la cantidad de un péptido natriurético en la muestra del sujeto. Preferentemente, por tanto, la cantidad determinada de péptido natriurético se compara en la etapa b) con una cantidad de referencia para un péptido natriurético.
Por tanto, la presente divulgación también se refiere a un procedimiento para diagnosticar fibrilación auricular en un sujeto que se sospecha que padece fibrilación auricular, que comprende
a) determinar la cantidad de una troponina cardíaca y de péptido natriurético en una muestra de dicho sujeto, y
b) comparar la cantidad de dicha troponina cardíaca como se determina en la etapa a) con una cantidad de referencia para la troponina cardíaca, y la cantidad de dicho péptido natriurético con una cantidad de referencia para el péptido natriurético, con lo que se diagnostica fibrilación auricular.
El término "fibrilación auricular" es bien conocido en la técnica. La fibrilación auricular se revisa, por ejemplo, por Fuster et al. (Fuster V, Rydén LE, Asinger RW, et al. ACC/AHA/ESC Guidelines for the Management of Patients With Atrial Fibrillation: Executive Summary A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines and the European Society of Cardiology Committee for Practice Guidelines and Policy Conferences (Committee to Develop Guidelines for the Management of Patients With Atrial Fibrillation) Developed in Collaboration With the North American Society of Pacing and Electrophysiology. Circulation. 23 octubre 2001;104(17):2118-50). La fibrilación auricular es un ritmo cardíaco anómalo que implica las dos cavidades superiores del corazón. En un ritmo cardíaco normal, el impulso generado por el nódulo sinoauricular se propaga a través del corazón y provoca la contracción del miocardio y el bombeo de sangre. En la fibrilación auricular, los impulsos eléctricos regulares del nódulo sinoauricular se reemplazan por impulsos eléctricos rápidos desorganizados que dan como resultado latidos cardíacos irregulares.
La fibrilación auricular (FA) puede ser permanente, persistente o intermitente (para una explicación de estos términos, véase también Fuster et al. (loc. cit.).
Un sujeto, preferentemente, padece FA permanente, si la FA ha persistido durante más de un año. En particular, no se produce la conversión de nuevo al ritmo sinusal (o solo si se trata).
Un sujeto, preferentemente, padece FA persistente, si la FA dura más de 7 días y puede requerir intervención farmacológica o bien eléctrica para terminar la fibrilación auricular. Por tanto, la FA persistente se produce en episodios, pero la arritmia no se convierte de nuevo en ritmo sinusal espontáneamente.
Un sujeto, preferentemente, padece FA intermitente (con frecuencia también denominada FA paroxística), si existen episodios de fibrilación auricular que terminan espontáneamente. Los episodios de fibrilación auricular pueden durar de segundos a días. Preferentemente, los episodios duran menos de una hora.
En el contexto del procedimiento mencionado anteriormente, se diagnostica fibrilación auricular intermitente.
La fibrilación auricular permanente y persistente se puede diagnosticar fácilmente, por ejemplo, en un electrocardiograma. Los hallazgos característicos son, preferentemente, la ausencia de ondas P, actividad eléctrica desorganizada en su lugar e irregularidad del intervalo R--R debido a la conducción irregular de impulsos a los ventrículos. La fibrilación auricular intermitente es más difícil de diagnosticar, puesto que un diagnóstico solo es posible durante el episodio de fibrilación auricular.
Los autores de la invención han descubierto sorprendentemente que la determinación de una troponina cardíaca (y, opcionalmente de péptido natriurético) en una muestra de un sujeto que se sospecha que padece fibrilación auricular permite el diagnóstico de fibrilación auricular. En particular, un incremento en los niveles de una troponina cardíaca son indicativos de un sujeto que padece FA, mientras que una disminución en los niveles de una troponina cardíaca son indicativos de un sujeto que no padece FA. Además, la determinación de una troponina cardíaca también permite el diagnóstico de FA intermitente, incluso en ausencia de un episodio de FA (en el momento en el que se obtiene la muestra). Por tanto, llevando a cabo el procedimiento mencionado anteriormente, la fibrilación auricular intermitente se diagnostica, preferentemente, en ausencia de un episodio de fibrilación auricular, en particular en el momento en el que se obtiene la muestra. Por tanto, el sujeto, preferentemente, no padece un episodio de FA cuando se obtiene la muestra.
El sujeto de acuerdo con el procedimiento mencionado anteriormente de la presente invención se sospechará que padece fibrilación auricular. Un sujeto que se sospecha que padece fibrilación auricular (por ejemplo, fibrilación auricular intermitente), preferentemente, es un sujeto que tiene uno o más factores de riesgo de fibrilación auricular. Estos factores de riesgo son bien conocidos en la técnica e incluyen cardiopatía, incluyendo problemas valvulares y antecedentes de infarto de miocardio y cirugía cardíaca, hipertensión sistémica, en especial si no está bien controlada con cambios en el estilo de vida o medicamentos, y consumo de alcohol. Preferentemente, el sujeto sospechoso pertenece a un grupo de riesgo. En particular, se prevé que el sujeto sea un sujeto con trastornos cardíacos probados o sospechosos, incluyendo sujetos que tienen factores de riesgo que predisponen a trastornos cardíacos tales como hipertensión arterial o sistémica, diabetes mellitus, fumadores, individuos con hiperlipemia o signos del síndrome metabólico, en particular si el sujeto está en edad avanzada (más de 60, 65, 70 y preferentemente 75 años). De forma alternativa o adicional, el sujeto puede, preferentemente, padecer trastornos valvulares, preferentemente trastornos de la válvula mitral. Se prevé además que el sujeto que se sospecha que padece FA padece hipertiroidismo.
En un modo de realización preferente del procedimiento de la presente invención, el sujeto que se sospecha que padece fibrilación auricular, preferentemente padece apoplejía isquémica, en particular apoplejía isquémica cardioembólica (para una explicación de estos términos, véase en otra parte en el presente documento). Si el sujeto que se va a someter a prueba de acuerdo con el procedimiento mencionado anteriormente padece apoplejía isquémica, la muestra se obtiene, preferentemente, de inmediato después de la aparición de síntomas de apoplejía como se describe en el contexto del procedimiento para diferenciar precozmente si un sujeto padece apoplejía cardioembólica o apoplejía isquémica no cardioembólica.
Sin embargo, también es preferente que el sujeto que se va a someter a prueba no padezca apoplejía isquémica.
Preferentemente, la cantidad de referencia en relación con el procedimiento mencionado anteriormente se deriva de un sujeto que se sabe que padece fibrilación auricular (o de un grupo de sujetos), y en el que una cantidad idéntica de troponina cardíaca (y, opcionalmente, del péptido natriurético), o una cantidad de la troponina cardíaca (y, opcionalmente, del péptido natriurético) que se incrementa en comparación con la cantidad de referencia, indica que el sujeto padece fibrilación auricular. De forma adicional o alternativa, la cantidad de referencia se deriva de un sujeto que se sabe que no padece fibrilación auricular o de un grupo de dichos sujetos, en el que una cantidad idéntica de troponina cardíaca (y, opcionalmente, del péptido natriurético), o una cantidad de la troponina cardíaca (y, opcionalmente, del péptido natriurético) que disminuye en comparación con la cantidad de referencia, indica que el sujeto no padece fibrilación auricular.
Además, la cantidad de referencia puede definir una cantidad umbral para la troponina cardíaca (y, opcionalmente, para el péptido natriurético), con lo que una cantidad de troponina (y, opcionalmente, del péptido natriurético) en la muestra del sujeto de prueba mayor que el respectivo valor umbral será indicativa de fibrilación auricular, mientras que una cantidad de troponina (y, opcionalmente, del péptido natriurético) en la muestra del sujeto de prueba menor que el respectivo valor umbral indicará que el sujeto no padece fibrilación auricular.
Las cantidades de referencia preferentes se indican en el presente documento a continuación:
Una cantidad de referencia preferente que indica fibrilación auricular es una cantidad de una troponina cardíaca, en particular de una troponina T de aproximadamente 6 pg/ml a aproximadamente 40 pg/ml y, más preferentemente, de 8 a 30 pg/ml, o de aproximadamente 10 a aproximadamente 20 pg/ml, incluso más preferentemente de aproximadamente 15 a 20 pg/ml. Incluso más preferentemente, la referencia es una cantidad de aproximadamente 10 pg/ml, o lo más preferentemente, aproximadamente 7 pg/ml. Una cantidad de prueba que es esencialmente idéntica o está incrementada será indicativa de fibrilación auricular mientras que una disminución en la cantidad en la muestra de prueba en comparación con la cantidad de referencia indicará que el sujeto no padece fibrilación auricular. Preferentemente, las cantidades de referencia mencionadas anteriormente se derivan de un sujeto o un grupo de sujetos que se sabe que padecen fibrilación auricular.
Una cantidad de referencia preferente que indica fibrilación auricular es una cantidad de un péptido natriurético, en particular, de NT-proBNP de aproximadamente 300 pg/ml a aproximadamente 1500 pg/ml y, más preferentemente, de 400 a 1300 pg/ml, incluso más preferentemente de aproximadamente 500 a 1000 pg/ml. Incluso más preferentemente, la referencia es una cantidad de aproximadamente 500, 400, o lo más preferentemente, de aproximadamente 300 pg/ml. Una cantidad de prueba que es esencialmente idéntica o está incrementada será indicativa de fibrilación auricular mientras que una disminución en la cantidad en la muestra de prueba en comparación con la cantidad de referencia indicará que el sujeto no padece fibrilación auricular. Preferentemente, las cantidades de referencia mencionadas anteriormente se derivan de un sujeto o un grupo de sujetos que se sabe que padecen fibrilación auricular.
Como se expone anteriormente, el diagnóstico de fibrilación auricular intermitente es complicado, mientras que el diagnóstico de fibrilación auricular permanente o persistente es bastante fácil. Puesto que los sujetos con fibrilación auricular permanente y persistente se pueden identificar sin más, es de particular interés identificar a los sujetos que no padecen fibrilación auricular permanente o persistente, pero que padecen fibrilación auricular intermitente.
De forma interesante, se ha demostrado en el contexto de los estudios de la presente invención que los niveles de troponinas cardíacas y de péptidos natriuréticos son menores en sujetos con fibrilación auricular intermitente que en sujetos con fibrilación auricular persistente o permanente. Esto es ventajoso, puesto que la determinación de una troponina cardíaca y, opcionalmente, un péptido natriurético permite identificar a los pacientes que padecen fibrilación intermitente.
Por lo tanto, en un modo de realización preferente de la presente invención se diagnosticará fibrilación auricular intermitente, en particular en un sujeto que se sospecha que padece fibrilación auricular intermitente.
Para permitir el diagnóstico de FA intermitente, la cantidad de la troponina cardíaca y, opcionalmente, la cantidad del péptido natriurético, como se determina en la etapa a), se comparará en la etapa b) con dos cantidades de referencia.
Se prevé que una primera cantidad de referencia se deriva de un sujeto que se sabe que padece FA intermitente (o de un grupo de dichos sujetos), y que una segunda cantidad de referencia se deriva de un sujeto que se sabe que padece
FA permanente o, en particular, persistente (o de un grupo de dichos sujetos). Por supuesto, las cantidades de referencia se derivarán de muestras de los sujetos mencionados anteriormente.
Preferentemente, una cantidad de la troponina cardíaca y, opcionalmente, del péptido natriurético en la muestra del sujeto de prueba que es esencialmente idéntica o mayor que la cantidad de referencia (para la troponina cardíaca y, opcionalmente, para el péptido natriurético) derivada de un sujeto que se sabe que padece FA intermitente (o de un grupo de dichos sujetos), pero que es menor que la cantidad de referencia derivada de un sujeto que se sabe que padece FA permanente o persistente (o de un grupo de dichos sujetos) es indicativa para el diagnóstico de FA intermitente.
Una cantidad de referencia preferente para una troponina cardíaca, en particular para troponina T, derivada de un sujeto que se sabe que padece FA intermitente (o de un grupo de dichos sujetos) está dentro de un intervalo de aproximadamente 5 a 10 pg/ml. Preferentemente, la cantidad de referencia es de aproximadamente 9 pg/ml.
Una cantidad de referencia preferente para una troponina cardíaca, en
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particular para troponina T, derivada de un sujeto que se sabe que padece FA permanente o persistente (o de un grupo de dichos sujetos) está dentro de un intervalo de aproximadamente 12 a 25 pg/ml. Preferentemente, la cantidad de referencia es de aproximadamente
18 pg/ml.
Una cantidad de referencia preferente para un péptido natriurético, en particular para NT-proBNP, derivado de un sujeto que se sabe que padece FA intermitente (o de un grupo de dichos sujetos) está dentro de un intervalo de aproximadamente 300 a 500 pg/ml. Preferentemente, la cantidad de referencia es de aproximadamente 350 pg/ml.
Una cantidad de referencia preferente para un péptido natriurético, en particular para NT-proBNP, derivado de un sujeto que se sabe que padece FA permanente o persistente (o de un grupo de dichos sujetos) está dentro de un intervalo de aproximadamente 900 a 1500 pg/ml. Preferentemente, la cantidad de referencia es de aproximadamente
900 pg/ml.
En otro modo de realización preferente del procedimiento de diagnóstico de FA, se diagnostica FA intermitente. Se sabrá que el sujeto de acuerdo con este modo de realización preferente no padece fibrilación auricular permanente y/o persistente (lo que se puede determinar sin más, véase anteriormente).
Por tanto, también prevé un procedimiento para diagnosticar fibrilación auricular intermitente en un sujeto que se sospecha que padece fibrilación auricular intermitente, pero que se sabe que no padece fibrilación auricular persistente y/o permanente, que comprende
a) determinar la cantidad de una troponina cardíaca (y, opcionalmente, un péptido natriurético) en una muestra de dicho sujeto, y
b) comparar la cantidad así determinada de dicha troponina cardíaca (y, opcionalmente, de dicho péptido natriurético) con una cantidad(es) de referencia, con lo que se diagnostica fibrilación auricular intermitente.
El sujeto que se sospecha que padece FA intermitente, preferentemente, tiene los mismos factores de riesgo que el sujeto que se sospecha que padece FA (véase en otra parte en el presente documento). En particular, se prevé que el sujeto padece apoplejía isquémica, en particular apoplejía isquémica cardioembólica.
La cantidad de referencia que se va a aplicar en el contexto de la presente invención se derivará de un sujeto que se sabe que padece FA intermitente, o de un sujeto que se sabe que no padece FA.
Preferentemente, la cantidad de referencia en relación con el modo de realización mencionado anteriormente se deriva de un sujeto que se sabe que padece fibrilación auricular intermitente (o de un grupo de sujetos), y en el que una cantidad idéntica de troponina cardíaca (y, opcionalmente, del péptido natriurético), o una cantidad de la troponina cardíaca (y, opcionalmente, del péptido natriurético) que se incrementa en comparación con la cantidad de referencia, indica que el sujeto padece fibrilación auricular intermitente. De forma adicional o alternativa, la cantidad de referencia se deriva de un sujeto que se sabe que no padece fibrilación auricular, en el que una cantidad idéntica de troponina cardíaca (y, opcionalmente, del péptido natriurético), o una cantidad de la troponina cardíaca (y, opcionalmente, del péptido natriurético) que disminuye en comparación con la cantidad de referencia, indica que el sujeto no padece fibrilación auricular intermitente.
Una cantidad de referencia preferente que indica fibrilación auricular intermitente es una cantidad de una troponina cardíaca, en particular de troponina T de aproximadamente 5 pg/ml a aproximadamente 30 pg/ml y, más preferentemente, de 5 a 25 pg/ml, o de aproximadamente 6 a aproximadamente 10 pg/ml, incluso más preferentemente de aproximadamente 6 a 8 pg/ml. Incluso más preferentemente, la referencia es una cantidad de aproximadamente 8 pg/ml, o lo más preferentemente, aproximadamente 7 pg/ml. Una cantidad de prueba que es esencialmente idéntica o está incrementada será indicativa de fibrilación auricular intermitente mientras que una disminución en la cantidad en la muestra de prueba en comparación con la cantidad de referencia indicará que el sujeto no padece fibrilación auricular intermitente. Preferentemente, las cantidades de referencia mencionadas anteriormente se derivan de un sujeto o un grupo de sujetos que se sabe que padecen fibrilación auricular intermitente.
Una cantidad de referencia preferente que indica fibrilación auricular intermitente es una cantidad de un péptido natriurético, en particular, de NT-proBNP de aproximadamente 300 pg/ml a aproximadamente 800 pg/ml y, más preferentemente, de 300 a 700 pg/ml, incluso más preferentemente de aproximadamente 350 a 500 pg/ml. Incluso más preferentemente, la referencia es una cantidad de aproximadamente 500, 400, o lo más preferentemente, de aproximadamente 300 pg/ml. Una cantidad de prueba que es esencialmente idéntica o está incrementada será indicativa de fibrilación auricular intermitente mientras que una disminución en la cantidad en la muestra de prueba en comparación con la cantidad de referencia indicará que el sujeto no padece fibrilación auricular intermitente. Preferentemente, las cantidades de referencia mencionadas anteriormente se derivan de un sujeto o un grupo de sujetos que se sabe que padecen fibrilación auricular intermitente.
En un modo de realización preferente del procedimiento mencionado anteriormente de la presente invención, dicho procedimiento comprende además recomendar un tratamiento para dicho sujeto, si se ha diagnosticado que el sujeto padece fibrilación auricular, en particular fibrilación auricular intermitente. Los tratamientos preferentes que se pueden recomendar en un sujeto que padece fibrilación auricular se describen, por ejemplo, por Fuster et al. (Fuster et al. J Am Coll Cardiol 2001: 38: 1231, y Fuster V. et al. Circulation 2006: 114 a 257). Los tratamientos preferentes incluyeron administración de betabloqueantes, bloqueantes de los canales de calcio no dihidropiridínicos, digoxina, antagonistas de vitamina K, aspirina, ácido acetilsalicílico. Además, se puede recomendar una intervención farmacológica o eléctrica para terminar la fibrilación auricular. La intervención farmacológica, preferentemente, incluye la administración de flecainida, dofetilida, propafenona y/o ibutilida. También se prevé la administración de inhibidores del factor Xa tales como rivaroxabán y/o dabigatrán (véase Patel M.R. et al, NEJM 2011: 365: 883 - 91; Connolly S.J. et al NEJM 2010: 261: 1139 - 51).
En el procedimiento mencionado anteriormente se diagnostica fibrilación auricular intermitente.
En un modo de realización preferente, el sujeto no padece apoplejía isquémica.
En otro modo de realización preferente, el sujeto que se sospecha que padece fibrilación auricular padece apoplejía isquémica, en particular apoplejía cardioembólica, y en el que la muestra se ha obtenido de inmediato después de la aparición de síntomas de apoplejía isquémica. Preferentemente, la muestra de dicho sujeto se ha obtenido de dicho sujeto no más de 12 horas después de la aparición de síntomas de apoplejía isquémica, en particular no más de 6 horas o no más de 3 horas después de la aparición de síntomas de apoplejía isquémica.
En un modo de realización preferente, en el que se sabe que el sujeto no padece fibrilación auricular persistente y/o permanente, en particular, en el que la cantidad de referencia se deriva de un sujeto que se sabe que padece fibrilación auricular intermitente o de un grupo de dichos sujetos, y en el que una cantidad idéntica de la troponina cardíaca, o una cantidad de la troponina cardíaca que se incrementa en comparación con la cantidad de referencia, indica que el sujeto padece fibrilación auricular intermitente, y/o en el que la cantidad de referencia se deriva de un sujeto que se sabe que no padece fibrilación auricular o de un grupo de dichos sujetos, en el que una cantidad idéntica de la troponina cardíaca, o una cantidad de la troponina cardíaca que disminuye en comparación con la cantidad de referencia, indica que el sujeto no padece fibrilación auricular intermitente.
En otro modo de realización preferente, la cantidad de la troponina cardíaca en la muestra del sujeto se compara con dos cantidades de referencia, en el que la primera cantidad de referencia se deriva de un sujeto que se sabe que padece FA intermitente o de un grupo de dichos sujetos, y en el que la segunda cantidad de referencia se deriva de un sujeto que se sabe que padece FA permanente o persistente o de un grupo de dichos sujetos. Preferentemente, una cantidad de la troponina cardíaca en la muestra del sujeto que es esencialmente idéntica o mayor que la primera cantidad de referencia, pero que es menor que la segunda cantidad de referencia derivada de un sujeto que se sabe que padece FA permanente o persistente es indicativa para el diagnóstico de FA intermitente.
En un modo de realización preferente, el procedimiento comprende además la determinación de la cantidad de un péptido natriurético, en particular de un péptido natriurético cerebral, en particular de BNP y NT-proBNP.
Preferentemente, la fibrilación auricular intermitente se diagnostica en ausencia de un episodio de fibrilación auricular, en particular en el momento en el que se obtiene la muestra.
También se prevé por la presente invención el uso de una troponina cardíaca y/o de un agente de detección, que se une específicamente a una troponina cardíaca en una muestra de un sujeto humano que se sospecha que padece fibrilación auricular intermitente para diagnosticar fibrilación auricular intermitente en dicho sujeto, en el que se diagnostica fibrilación auricular intermitente en ausencia de un episodio de fibrilación auricular.
El término "agente de detección" como se usa en el presente documento se refiere a un agente que puede reconocer y unirse específicamente al biomarcador al que se hace referencia en el presente documento (una troponina cardíaca o un péptido natriurético) cuando está presente en una muestra. Además, dicho agente permitirá la detección directa o indirecta del complejo formado por dicho agente y el biomarcador. La detección directa se puede lograr incluyendo en el agente un marcador detectable. El marcaje indirecto se puede lograr por otro agente que se une específicamente al complejo que comprende el biomarcador y el agente de detección en el que dicho otro agente puede generar una señal detectable. Los compuestos adecuados que se pueden usar como agentes de detección son bien conocidos en la técnica. Preferentemente, el agente de detección es un anticuerpo o aptámero que se une específicamente al biomarcador. Los anticuerpos como se hace referencia en el presente documento incluyen anticuerpos tanto policlonales como monoclonales, así como fragmentos de los mismos, tales como fragmentos Fv, Fab y F(ab)2 que se pueden unir a antígeno o hapteno. También se prevén anticuerpos monocatenarios y anticuerpos híbridos humanizados en los que las secuencias de aminoácidos de un anticuerpo donante no humano que presentan una especificidad de antígeno deseada se combinan con secuencias de un anticuerpo aceptor humano.
La presente invención se refiere además a un dispositivo para diagnosticar fibrilación auricular intermitente en un sujeto que se sospecha que padece fibrilación auricular, comprendiendo dicho dispositivo:
a) una unidad de análisis que comprende un agente de detección de una troponina cardíaca que permite la determinación de la cantidad de dicha troponina cardíaca (y, opcionalmente, un agente de detección de un péptido natriurético que permite la determinación de la cantidad de dicho péptido natriurético); y
b) una unidad de evaluación (o una unidad analizadora) que comprende un procesador de datos que tiene implementado un algoritmo para comparar la(s) cantidad(es) determinada(s) por la unidad de análisis con la(s) cantidad(es) de referencia almacenadas en una base de datos para diagnosticar la fibrilación auricular intermitente, en la que la cantidad de referencia se deriva de una muestra de un sujeto de referencia como se describe en el presente documento en otra parte en el contexto del procedimiento para diagnosticar fibrilación auricular intermitente (en particular, fibrilación auricular intermitente), y el algoritmo es un algoritmo como se define en el contexto del procedimiento para diagnosticar fibrilación auricular (en particular fibrilación auricular),
en el que se diagnostica fibrilación auricular intermitente en ausencia de un episodio de fibrilación auricular.
El término "dispositivo" como se usa en el presente documento se refiere a un sistema que comprende las unidades mencionadas anteriormente unidas de forma funcional entre sí para permitir el diagnóstico de acuerdo con los procedimientos de la invención. Los agentes de detección preferentes que se pueden usar para la unidad de análisis se divulgan en otra parte en el presente documento. La unidad de análisis, preferentemente, comprende dichos agentes de detección en forma inmovilizada sobre un soporte sólido que se debe poner en contacto con la muestra que comprende los biomarcadores de los que su cantidad se va a determinar. Además, la unidad de análisis también puede comprender un detector que determina la cantidad de agente de detección que se une específicamente al/a los biomarcador(es). La cantidad determinada se puede transmitir a la unidad de evaluación. Dicha unidad de evaluación comprende un elemento de procesamiento de datos, tal como un ordenador, con un algoritmo implementado para llevar a cabo una comparación entre la cantidad determinada y una referencia adecuada. Las referencias adecuadas se pueden derivar de muestras de sujetos que se van a usar para la generación de cantidades de referencia como se describe en otra parte en el presente documento anteriormente. Los resultados de diagnóstico se pueden dar como salida de datos brutos de diagnóstico paramétrico, preferentemente, como cantidades absolutas o relativas. Se debe entender que estos datos pueden necesitar interpretación por el médico. Sin embargo, también se contemplan dispositivos de sistemas expertos en los que la salida comprende datos brutos de diagnóstico procesado en los que su interpretación no requiere un médico especializado. Preferentemente, el dispositivo de la presente invención se puede usar para llevar a cabo el procedimiento mencionado anteriormente de la presente invención de manera automatizada.
Un modo de realización preferente de la presente divulgación incluye un sistema para guiar el ejercicio como se expone en el presente documento. Los ejemplos de sistemas incluyen analizadores de química clínica, analizadores de química de coagulación, analizadores de inmunoquímica, analizadores de orina, analizadores de ácido nucleico, usados para detectar el resultado de reacciones químicas o biológicas o para monitorizar el progreso de reacciones químicas o biológicas. Más específicamente, los sistemas ejemplares de la presente divulgación pueden incluir sistemas Roche Elecsys™ y analizadores de inmunoanálisis Cobas®, analizadores Abbott Architect™ y Axsym™, analizadores Siemens Centaur™ e Immulite™, y analizadores Beckman Coulter UniCel™ y Acess™, o similares.
Los modos de realización del sistema pueden incluir una o más unidades analizadoras utilizadas para practicar la divulgación objeto. Las unidades analizadoras del sistema divulgadas en el presente documento están en comunicación operativa con el dispositivo informático divulgado en el presente documento a través de cualquiera de una conexión por cable, Bluetooth, LANS o señal inalámbrica, como es conocido. Adicionalmente, de acuerdo con la presente divulgación, una unidad analizadora puede comprender un aparato independiente, o módulo dentro de un instrumento más grande, que realiza una o ambas de la detección, por ejemplo, evaluación cualitativa y/o cuantitativa de muestras para propósitos de diagnóstico. Por ejemplo, una unidad analizadora puede realizar o ayudar con el pipeteo, dosificación, mezcla de muestras y/o reactivos. Una unidad analizadora puede comprender una unidad de mantenimiento de reactivos para mantener los reactivos para realizar los ensayos. Los reactivos se pueden disponer, por ejemplo, en forma de recipientes o casetes que contienen reactivos individuales o un grupo de reactivos, dispuestos en receptáculos o posiciones apropiados dentro de un transportador o compartimento de almacenamiento. Los reactivos de detección también pueden estar en forma inmovilizada sobre un soporte sólido que está en contacto con la muestra. Además, una unidad analizadora puede incluir un componente de detección y/o procedimiento que es optimizable para análisis específico.
De acuerdo con algunos modos de realización, una unidad analizadora se puede configurar para la detección óptica de un analito, por ejemplo un marcador, con una muestra. Una unidad analizadora ejemplar configurada para la detección óptica comprende un dispositivo configurado para convertir energía electromagnética en una señal eléctrica, que incluye detectores ópticos tanto de un solo elemento como de múltiples elementos o de matriz. De acuerdo con la presente divulgación, un detector óptico puede monitorizar una señal electromagnética óptica y proporcionar una señal de respuesta o señal de salida eléctrica con respecto a una señal de referencia indicativa de la presencia y/o concentración de un analito en una muestra que se localiza en una trayectoria óptica. Dichos dispositivos también pueden incluir, por ejemplo, fotodiodos, incluyendo fotodiodos de avalancha, fototransistores, detectores fotoconductores, matrices de sensores lineales, detectores CCD, detectores CMOS, incluyendo detectores de matrices CMOS, fotomultiplicadores y matrices fotomultiplicadoras. De acuerdo con determinados modos de realización, un detector óptico, tal como un fotodiodo o fotomultiplicador, puede contener dispositivos electrónicos de acondicionamiento o procesamiento de señales adicionales. Por ejemplo, un detector óptico puede incluir al menos un preamplificador, filtro electrónico o circuito integrado. Los preamplificadores adecuados incluyen, por ejemplo, preamplificadores de integración, transimpedancia y ganancia de corriente (espejo de corriente).
Adicionalmente, una o más unidades analizadoras de acuerdo con la presente divulgación pueden comprender una fuente de luz para emitir luz. Por ejemplo, una fuente de luz de una unidad analizadora puede consistir en al menos un elemento emisor de luz (tal como un diodo emisor de luz, una fuente de radiación eléctrica tal como una lámpara incandescente, una lámpara electroluminiscente, una lámpara de descarga de gas, una lámpara de descarga de alta intensidad, un láser) para medir las concentraciones de analitos con una muestra que se está sometiendo a prueba o para permitir una transferencia de energía (por ejemplo, a través de transferencia de energía de resonancia fluorescente o catalizando una enzima).
Además, una unidad analizadora del sistema puede incluir una o más unidades incubadoras (por ejemplo, para mantener una muestra o un reactivo a una temperatura o intervalo de temperatura especifico).
En algunos modos de realización, una unidad analizadora puede incluir un termociclador, incluir un termociclador en tiempo real, para someter una muestra a ciclos de temperatura repetidos y monitorizar un cambio en la cantidad de un producto de amplificación con la muestra.
Adicionalmente, una unidad analizadora del sistema divulgado en el presente documento puede comprender, o estar conectada de forma funcional a, un recipiente de reacción o unidad de alimentación de cubeta. Las unidades de alimentación ejemplares incluyen unidades de procesamiento de líquido, tales como una unidad de pipeteo, para suministrar muestras y/o reactivos a los recipientes de reacción. La unidad de pipeteo puede comprender una aguja lavable reutilizable, por ejemplo, una aguja de acero, o puntas de pipeta desechables. La unidad analizadora puede comprender además una o más unidades de mezcla, por ejemplo, un agitador para agitar una cubeta que comprende un líquido o una paleta de mezcla para mezclar líquidos en una cubeta o recipiente de reactivos.
De lo anterior se deduce que de acuerdo con algunos modos de realización de la presente divulgación, partes de algunas etapas de los procedimientos divulgados y descritos en el presente documento se pueden realizar por un dispositivo informático. Un dispositivo informático de datos puede ser un ordenador de propósito general o un dispositivo informático portátil, por ejemplo. También se debe entender que se pueden usar múltiples dispositivos informáticos juntos, tales como en una red u otros procedimientos de transferencia de datos, para realizar una o más etapas de los procedimientos divulgados en el presente documento. Los dispositivos informáticos ejemplares incluyen ordenadores de sobremesa, ordenadores portátiles, agendas electrónicas ("PDA"), tales como dispositivos de marca BLACKBERRY, teléfonos inteligentes, tabletas, servidores y similares. En general, un dispositivo informático comprende un procesador que puede ejecutar una pluralidad de instrucciones (tales como un programa informático).
Un dispositivo informático tiene acceso a una memoria. Una memoria es un medio legible por ordenador y puede comprender un único dispositivo de almacenamiento o múltiples dispositivos de almacenamiento, situados localmente con el dispositivo informático o bien accesibles al dispositivo informático a través de una red, por ejemplo. Los medios legibles por ordenador pueden ser cualquier medio disponible al que se puede acceder por el dispositivo informático e incluye medios tanto volátiles como no volátiles. Además, los medios legibles por ordenador pueden ser uno o ambos de medios extraíbles y no extraíbles. A modo de ejemplo, y sin limitación, los medios legibles por ordenador pueden comprender medios de almacenamiento informáticos. Los medios de almacenamiento informáticos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, RAM, ROM, EEPROM, memoria flash o cualquier otra tecnología de memoria, CD-ROM, disco versátil digital (DVD) u otro almacenamiento en disco óptico, casetes magnéticos, cinta magnética, almacenamiento en disco magnético u otros dispositivos de almacenamiento magnético, o cualquier otro medio que se pueda usar para almacenar una pluralidad de instrucciones a las que se puede acceder por el dispositivo informático y ejecutar por el procesador del dispositivo informático.
De acuerdo con modos de realización de la presente divulgación, el programa informático puede incluir instrucciones que, cuando se ejecutan por un procesador del dispositivo informático, pueden realizar una o más etapas de los procedimientos divulgados en el presente documento. Algunas de las instrucciones se pueden adaptar para producir señales que controlan la operación de otras máquinas y por tanto pueden operar a través de esas señales de control para transformar materiales muy alejados del propio ordenador. Estas descripciones y representaciones son los medios usados por los expertos en la técnica de procesamiento de datos, por ejemplo, para transmitir lo más eficazmente lo esencial de su trabajo a otros expertos en la técnica.
La pluralidad de instrucciones también puede comprender un algoritmo que en general está concebido como una secuencia autocoherente de etapas que da lugar a un resultado deseado. Estas etapas son las que requieren manipulaciones físicas de cantidades físicas. Normalmente, aunque no necesariamente, estas cantidades toman la forma de pulsos o señales eléctricos o magnéticos que se pueden almacenar, transferir, transformar, combinar, comparar y manipular de otro modo. En ocasiones resulta conveniente, principalmente por motivos de uso común, referirse a estas señales como valores, caracteres, datos de visualización, números o similares como una referencia a los elementos físicos o manifestaciones en que se incorporan o expresan dichas señales. Sin embargo, se debe tener en cuenta que todos estos términos y similares se deben asociar con las cantidades físicas apropiadas y se usan simplemente en el presente documento como etiquetas convenientes aplicadas a estas cantidades. De acuerdo con algunos modos de realización de la presente divulgación, un algoritmo para llevar a cabo una comparación entre una cantidad determinada de uno o más marcadores divulgados en el presente documento, y una referencia adecuada, se realiza y se lleva a cabo ejecutando las instrucciones. Los resultados se pueden dar como salida de datos brutos de diagnóstico paramétrico o como cantidades absolutas o relativas. De acuerdo con diversos modos de realización del sistema divulgado en el presente documento, se puede proporcionar un "diagnóstico" por el dispositivo informático de un sistema divulgado en el presente documento en base a dicha comparación de la "cantidad" calculada con una referencia o un valor umbral. Por ejemplo, un dispositivo informático de un sistema puede proporcionar un indicador, en forma de una palabra, símbolo o valor numérico que sea indicativo de un diagnóstico particular.
El dispositivo informático también puede tener acceso a un dispositivo de salida. Los dispositivos de salida ejemplares incluyen máquinas de fax, pantallas, impresoras y archivos, por ejemplo. De acuerdo con algunos modos de realización de la presente divulgación, un dispositivo informático puede realizar una o más etapas de un procedimiento divulgado en el presente documento, y después de esto proporcionar una salida, por medio de un dispositivo de salida, con relación a un resultado, indicación, proporción u otro factor del procedimiento.
Los siguientes ejemplos ilustrarán simplemente la invención. No se deben interpretar, en absoluto, como que limitan el alcance de la invención.
Ejemplo 1: determinación de troponina T, GDF-15 y NT-proBNP
Se determinó la troponina T usando el ensayo Elecsys Troponin T hs (de alta sensibilidad) con STAT (tiempo de obtención breve) con ELISA de electroquimioluminiscencia de tipo sandwich de Roche. La prueba emplea dos anticuerpos monoclonales dirigidos específicamente frente a troponina T cardíaca humana. Los anticuerpos reconocen dos epítopos (posición aminoacídica 125-131 y 136-147) localizados en la parte central de la proteína troponina T cardíaca, que consiste en 288 aminoácidos (sensibilidad analítica por debajo de 1,0).
Se determinó NT-proBNP usando el ensayo Elecsys proBNP II STAT (tiempo de obtención breve) con ELISA de electroquimioluminiscencia de tipo sandwich de Roche. La prueba emplea dos anticuerpos monoclonales que reconocen epítopos localizados en la parte N terminal (1-76) de proBNP (1-108).
Para determinar la concentración de GDF-15 en muestras de suero y plasma, se empleó una prueba de prototipo Elecsys, usando un anticuerpo anti-IgG GDF-15 humana de cabra purificado por cromatografía de afinidad GDF-15 policlonal de R&D Systems (AF957). En cada experimento, se generó una curva estándar con GDF-15 humano recombinante de R&D Systems (957-GD/CF). Se sometieron a prueba los resultados con nuevos lotes o proteína GDF-15 recombinante en muestras de plasma estándar y se corrigió cualquier desviación por encima de un 10 % introduciendo un factor de ajuste para este ensayo. Las mediciones de GDF-15 en muestras de suero y plasma del mismo paciente proporcionaron resultados prácticamente idénticos después de la corrección de los factores de dilución finales. El límite de detección del ensayo fue de 200 pg/ml.
Ejemplo 2: cohorte de pacientes
Se sometieron a prueba un total de 255 pacientes con apoplejía isquémica (media de edad de 70 años) para determinar NT pro BNP, troponina T y GDF 15. Se presentó accidente isquémico transitorio en 23 pacientes, se diagnosticó apoplejía leve en 61 pacientes y se encontró apoplejía grave en 108 pacientes. Además, como se describe anteriormente se realizaron ecografías carotídeas y transcraneales así como electro y ecocardiografía y se clasificaron los pacientes de acuerdo con los criterios TOAST. Además, se realizó un ECG HOLTER de 7 días para identificar fibrilación auricular inadvertida en el electrocardiograma ordinario.
Ejemplo 3: resultados
Se obtuvieron los siguientes resultados (se indican los valores de mediana, el percentil 25 y el percentil 75):
Troponina T NT-pro BNP GDF 15
pg/ml pg/ml pg/ml
Estenosis de arteria de gran tamaño
N = 46 4,9 262 1146
0,0 - 16,3 110 - 611 801 - 1404
Apoplejía cardioembólica 11,6 868 1393
N = 66 3,8 - 29 365 - 1863 1005 - 2481
Vaso pequeño 6,3 222 1188
N = 32 0,0 - 9,3 79 - 412 822 - 2025
Indeterminado 5,3 152 1106
N = 97 0,0 - 10,8 63 - 371 805 - 1522
Como se describe previamente, se asoció la apoplejía cardioembólica con un incremento en los niveles de NT-pro BNP, GDF 15 no contribuyó significativamente a la clasificación de la apoplejía, sin embargo, la troponina T sensible sí lo hizo y excluyendo de este modo las dificultades de separar los péptidos natriuréticos de tipo B cardíaco y cerebral.
Estos datos se respaldan además por la clasificación relacionada con la presencia de ausencia de fibrilación auricular. Los resultados son como sigue:
Troponina T NT-pro BNP GDF 15
pg/ml pg/ml pg/ml
Fibrilación auricular
N = 44 15,8 1773 2220
8-35 996 - 2667 1288 - 3069
FA intermitente 9,2 448 1364
N = 28 4,9 - 24 321 - 802 1120 - 2214
Sin FA
N = 101 4,3 137 1069
0 - 10,6 62 - 386 765 - 1480
Los datos demuestran de nuevo la asociación de la FA con NT-pro BNP y troponina T pero en un grado mucho menor con GDF 15. Las limitaciones de NT-pro BNP que se van a usar en la clasificación también se respaldaron por el hecho de que la mediana de los niveles de NT-pro BNP se incrementaron de la presentación (331 pg/ml) a las 24 h de seguimiento hasta 437 pg/ml, que está en el intervalo de un incremento de un 30 %. No está claro en qué medida este incremento se debió a causas cardíacas o se liberó del cerebro. Por el contrario, no existió un incremento significativo de troponina T en el seguimiento. Por tanto, los niveles de troponina T se mantuvieron estables.
En resumen, se descubrió que la troponina T es una herramienta poderosa en la identificación/separación de las causas de apoplejía. Este procedimiento también se puede usar en la prevención de apoplejía en combinación con péptidos natriuréticos de tipo B. GDF 15 proporcionó sorprendentemente poca información adicional a esta importante pregunta clínica.
Ejemplo 4: estudios de casos
A un hombre de 68 años se le diagnostica AIT (accidente isquémico transitorio) en base a síntomas clínicos y una RMN posterior. Su ECG es normal. Su troponina T es de 10,2 pg/ml, su NT-pro BNP es de 520 pg/ml. Un ecocardiograma mostró disfunción ventricular izquierda leve, en las aurículas no existía formación de trombos. En base a los criterios TOAST, al sujeto se le diagnosticó apoplejía cardioembólica después de descartar otras posibilidades. Debido a la formación de trombos intraauriculares, recibe un ECG Holter durante 3 días que revela fibrilación auricular paroxística. A continuación se le pone tratamiento anticoagulante ya que no tenía contraindicaciones.
Un hombre de 72 años presenta apoplejía leve confirmada por RMN después de descartar hemorragia cerebral por TAC. Su troponina T es de 4,1 pg/ml y su NT-pro BNP es de 245 pg/ml. Una ecografía carotídea revela una estenosis de un 80 % de la bifurcación carotídea derecha. El ECG y la ecocardiografía son normales, excepto una disfunción diastólica leve. Como es poco probable que tenga FA, no se llevó a cabo un ECG Holter. Se le aconseja considerar la revisión de la carótida obstruida después de una evaluación más intensa de las arterias intra y extracerebrales.
Una mujer de 52 años informa de mareo y palpitaciones y acude a urgencias. Su troponina T es de 3 pg/ml, NT-pro BNP es de 115 pg/ml, el ECG y la ecocardiografía están dentro de lo normal. Debido a que los síntomas no se refieren a un episodio cerebral o fibrilación auricular, no se realizaron otras investigaciones que estén en concordancia con los resultados de la troponina T y NT-pro BNP. Fue dada de alta con sospecha de síndrome de ansiedad.
Un hombre de 58 años acude a urgencias por debilidad temporal de su brazo izquierdo. Su ECG es normal, su troponina T es de 11,1 pg/ml y NT-pro BNP es de 435 pg/ml. Una RMN descarta apoplejía, debido a los resultados de Troponina T y NT-pro BNP se realizó posteriormente un ECG Holter que reveló FA paroxística. Una ecocardiografía posterior incluyendo ETT reveló trombos intraauriculares. Se le diagnostica fibrilación auricular paroxística y se le administra tratamiento anticoagulante sin contraindicaciones obvias.
Un hombre de 58 años acude a urgencias por apoplejía isquémica 2 horas después del inicio de síntomas, los síntomas incluyen debilidad repentina de brazo y pierna derechos, su troponina T es de 12,5 pg/ml y NT-pro BNP es de 920 pg/ml. Se confirma la sospecha de apoplejía cardioembólica por ecocardiografía esofágica con un trombo visible en la aurícula izquierda. La angiografía asociada con tratamiento de lisis confirmó el diagnóstico. El tratamiento de lisis fue exitoso y los síntomas mejoraron, el paciente recibe anticoagulantes.
Un hombre de 58 años acude a su médico por mareo, tenía diabetes mellitus durante los últimos 8 años y había fumado la mayor parte de su vida, se le conocía hipertensión arterial durante los últimos 10 años. La obtención de imágenes excluye AIT, en la ecocardiografía presenta dilatación de aurícula izquierda sin formación de trombos, en la primera consulta su ECG es normal y se registró su ritmo sinusal. Su troponina es de 11 pg/ml, NT-pro BNP es de 480 pg/ml. Unas semanas más tarde, al paciente se le realiza un ECG Holter y se registra fibrilación auricular intermitente.
Conclusión:
La identificación de pacientes con apoplejía con apoplejía cardioembólica es de importancia, ya que refiere a otras etapas de diagnóstico y tratamiento e, incluso más importante, a la prevención de apoplejías futuras. Los péptidos natriuréticos han demostrado su utilidad en la detección de candidatos para apoplejía cardioembólica en pacientes que presentan apoplejía isquémica. Sin embargo, como se muestra aquí, los péptidos natriuréticos pueden cambiar durante el curso de la apoplejía limitando su potencial diagnóstico, este no es el caso con troponina T que no está sujeta a un cambio sustancial.
Un razonamiento similar se aplica a la detección de fibrilación auricular paroxística o intermitente. La fibrilación auricular es más frecuente en la población anciana. Puesto que los procedimientos de diagnóstico (ECG Holter y procedimientos de detección de trombos auriculares resultantes, ETE) son de disponibilidad limitada, es importante la selección de pacientes (admisión/descarte). Esto se puede lograr por la determinación de troponina T (y NT-pro BNP) y el uso de valores de cortes apropiados.
En conclusión, los autores de la invención han identificado la troponina T como un procedimiento de diagnóstico importante en la apoplejía isquémica así como en la fibrilación auricular intermitente para referir a otros procedimientos de diagnóstico y pautas de tratamiento.

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Un procedimiento para diagnosticar fibrilación auricular intermitente en un sujeto humano que se sospecha que padece fibrilación auricular intermitente, que comprende determinar la cantidad de una troponina cardíaca en una muestra de dicho sujeto y comparar la cantidad determinada de dicha troponina cardíaca con una cantidad de referencia, con lo que se diagnostica fibrilación auricular intermitente, en el que se diagnostica fibrilación auricular intermitente en ausencia de un episodio de fibrilación auricular.
2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el sujeto no padece apoplejía isquémica.
3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el sujeto que se sospecha que padece fibrilación auricular padece apoplejía isquémica, en particular apoplejía cardioembólica, y en el que la muestra se ha obtenido de inmediato después de la aparición de síntomas de apoplejía isquémica.
4. El procedimiento de la reivindicación 3, en el que dicha muestra de dicho sujeto se ha obtenido de dicho sujeto no más de 12 horas después de la aparición de síntomas de apoplejía isquémica, en particular no más de 6 horas o no más de 3 horas después de la aparición de síntomas de apoplejía isquémica.
5. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que se sabe que el sujeto no padece fibrilación auricular persistente y permanente.
6. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que la cantidad de referencia se deriva de un sujeto que se sabe que padece fibrilación auricular intermitente o de un grupo de dichos sujetos, y en el que una cantidad idéntica de la troponina cardíaca, o una cantidad de la troponina cardíaca que se incrementa en comparación con la cantidad de referencia, indica que el sujeto padece fibrilación auricular intermitente, y/o en el que la cantidad de referencia se deriva de un sujeto que se sabe que no padece fibrilación auricular o de un grupo de dichos sujetos, en el que una cantidad idéntica de la troponina cardíaca, o una cantidad de la troponina cardíaca que disminuye en comparación con la cantidad de referencia, indica que el sujeto no padece fibrilación auricular intermitente.
7. El procedimiento de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la cantidad de la troponina cardíaca en la muestra del sujeto se compara con dos cantidades de referencia, en el que la primera cantidad de referencia se deriva de un sujeto que se sabe que padece FA intermitente o de un grupo de dichos sujetos, y en el que la segunda cantidad de referencia se deriva de un sujeto que se sabe que padece FA permanente o persistente o de un grupo de dichos sujetos.
8. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que una cantidad de la troponina cardíaca en la muestra del sujeto que es esencialmente idéntica o mayor que la primera cantidad de referencia, pero que es menor que la segunda cantidad de referencia derivada de un sujeto que se sabe que padece FA permanente o persistente es indicativa para el diagnóstico de FA intermitente.
9. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende además la determinación de la cantidad de un péptido natriurético, en particular de un péptido natriurético cerebral, en particular de BNP y NT-proBNP.
10. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la fibrilación auricular intermitente se diagnostica en ausencia de un episodio de fibrilación auricular en el momento en el que se obtiene la muestra.
11. Uso de una troponina cardíaca y/o de un agente de detección, que se une específicamente a una troponina cardíaca en una muestra de un sujeto humano que se sospecha que padece fibrilación auricular intermitente para diagnosticar fibrilación auricular intermitente en dicho sujeto, en el que se diagnostica fibrilación auricular intermitente en ausencia de un episodio de fibrilación auricular.
12. Un dispositivo para diagnosticar fibrilación auricular intermitente en un sujeto que se sospecha que padece fibrilación auricular intermitente, comprendiendo dicho dispositivo:
a) una unidad de análisis que comprende un agente de detección para una troponina cardíaca que permite la determinación de la cantidad de dicha troponina cardíaca; y
b) una unidad de evaluación que comprende un procesador de datos que tiene implementado un algoritmo para comparar la cantidad determinada por la unidad de análisis con una cantidad de referencia (o cantidades de referencia) almacenada en una base de datos para diagnosticar fibrilación auricular intermitente, en la que la cantidad de referencia se deriva de una muestra de un sujeto de referencia como se define en la reivindicación 6 o 7, y el algoritmo es un algoritmo como se define en la reivindicación 6 u 8,
en el que se diagnostica fibrilación auricular intermitente en ausencia de un episodio de fibrilación auricular.
13. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, el uso de la reivindicación 11, o el dispositivo de la reivindicación 12, en el que el sujeto no padece insuficiencia renal crónica.
14. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 y 13, el uso de la reivindicación 11 o 13, o el dispositivo de la reivindicación 12 o 13, en el que la troponina cardíaca es troponina T o I.
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