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ES2814227T3 - Anticuerpos anti-CD123 y conjugados de los mismos - Google Patents

Anticuerpos anti-CD123 y conjugados de los mismos Download PDF

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ES2814227T3
ES2814227T3 ES16808263T ES16808263T ES2814227T3 ES 2814227 T3 ES2814227 T3 ES 2814227T3 ES 16808263 T ES16808263 T ES 16808263T ES 16808263 T ES16808263 T ES 16808263T ES 2814227 T3 ES2814227 T3 ES 2814227T3
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Spain
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seq
amino acid
variable region
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May Kung Sutherland
Lori Westendorf
Django Sussman
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Seagen Inc
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Abstract

Un compuesto de conjugado anticuerpo anti-CD 123-fármaco que tiene la fórmula: **(Ver fórmula)** o una sal, solvato o solvato de la sal farmacéuticamente; en donde el subíndice n es 1 o 3; el subíndice m es de 2 a 5, particularmente en donde m es 5, Ab es un anticuerpo anti-CD 123 intacto o un fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:1; y una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:2; el subíndice p es un número entero de 1 a 4, particularmente en donde p es 1 o 2.

Description

DESCRIPCIÓN
Anticuerpos anti-CD123 y conjugados de los mismos
Antecedentes
CD123 es la cadena alfa transmembrana de la proteína de 70 kD del receptor de IL-3 y también se denomina como IL3R-alfa. Se conoce que CD123 se expresa en muestras de AML primaria y se ha reportado en varias células malignas. La presente invención proporciona anticuerpos CD123 y conjugados de los mismos de acuerdo con las reivindicaciones.
El documento WO 2014/138805 describe un anticuerpo anti-CD123, 7G3. El documento US 2012/189540 describe composiciones farmacéuticas que comprenden conjugados de anticuerpos anti-CD123 y un agente citotóxico para el tratamiento del cáncer.
Breve descripción de la invención reivindicada
La invención se define por las reivindicaciones. En la presente descripción se proporcionan anticuerpos anti-CD123 y conjugados anticuerpo-fármaco dirigidos a CD123. En particular, en la presente descripción se proporcionan conjugados anticuerpo-fármaco de pirrolobenzodiazepina ("PBD") dirigidos a CD123 y métodos para usar dichos conjugados para tratar trastornos que expresan CD123. Los anticuerpos anti-CD123 son formas humanizadas del anticuerpo 7G3 murino (Sun y otros, Blood, 1996, 87(1):83-92). El anticuerpo 7G3 murino comprende una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:8 y una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:9. Los anticuerpos 7G3 humanizados preferidos para su uso en la presente descripción son anticuerpos construidos mediante el uso de la secuencia de la línea germinal humana hIGHv1-2 y el exón J, Jh-1, para la región variable de la cadena pesada y la secuencia de la línea germinal humana hIGKv4-1 y el exón J, Jk-2, para las regiones variables de la cadena ligera. Los anticuerpos 7G3 humanizados comprenden la región variable de la cadena pesada que se establece en la SEQ ID NO:1 y la región variable de la cadena ligera que se establece en la SEQ ID NO:2.
Los anticuerpos para su uso en la presente invención comprenden la región variable de la cadena pesada que se establece en la SEQ ID NO:1 y la región variable de la cadena ligera que se establece en la SEQ ID NO:2, y pueden ser anticuerpos intactos o fragmentos de unión a antígeno de los mismos. El anticuerpo 7G3 humanizado puede tener una región variable de la cadena pesada madura fusionada a una región constante de la cadena pesada y una región variable de la cadena ligera madura fusionada a una región constante de la cadena ligera. La región constante de la cadena pesada puede ser una forma de origen natural o mutante de una región constante humana (por ejemplo, la SEQ ID NO:5, una región constante IgG1 de la cadena pesada donde una cisteína sustituye a la serina en la posición 239, (S239C) o SEQ ID NO:6). La región constante de la cadena pesada puede ser del isotipo IgG1. Una secuencia de aminoácidos de la región constante de la cadena ligera ilustrativa se establece en la SEQ ID NO:7
Los anticuerpos 7G3 humanizados descritos en la presente descripción se conjugan con enlazadores de fármacos, lo que incluye los enlazadores de fármaco PBD para proporcionar conjugados de anticuerpo anti CD123-fármaco. La unión puede realizarse a través de métodos de conjugación convencionales o sitio específicos. Una unión ilustrativa es a través de una cisteína diseñada por ingeniería genética en la posición 239 de la región constante de la cadena pesada, de acuerdo con el índice EU como se establece en Kabat. Los conjugados anticuerpo-fármaco dirigidos a CD123 se usan para tratar la enfermedad que expresa CD123, lo que incluye los cánceres que expresan CD123, tales como la AML.
En otras modalidades, los anticuerpos 7G3 humanizados descritos en la presente descripción se conjugan con enlazadores de fármacos, lo que incluye los enlazadores de fármacos MMAE pegilados con glucurónido para proporcionar conjugados anticuerpo-fármaco contra CD123.
En una modalidad adicional, el enlazador de fármaco unido al anticuerpo 7G3 humanizado tiene la fórmula:
Figure imgf000003_0001
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Z representa una porción orgánica que tiene un sitio reactivo capaz de reaccionar con un grupo funcional en el anticuerpo para formar una unión covalente al mismo, n se encuentra en el intervalo de 8 a 36, RPR es hidrógeno o un grupo protector, R21 es una unidad de bloqueo para la porción de polietilenglicol.
En algunas modalidades de esta descripción, el valor de n puede encontrarse en el intervalo de 8 a 14. En otra modalidad de esta descripción, el valor de n se encuentra en el intervalo de 10 a 12. En una modalidad adicional de esta descripción, el valor de n es 12. En otra modalidad, R21 es -CH3 o -CH2CH2CO2H.
En otra modalidad, cualquiera de los conjugados anticuerpo-fármaco MMAE pegilado descritos tiene un valor de p de 8. En otra modalidad, el enlazador de fármaco se une al anticuerpo a través de los residuos de cisteína de los enlaces disulfuro intercadena del anticuerpo.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 muestra el resultado de un ensayo de citotoxicidad in vitro que prueba el conjugado anticuerpo-fármaco 7G3ec SGD-1910 humanizado contra una línea celular de AML positiva para MDR+, KG-1, que expresa pocas copias de CD123 en comparación con CD33. A pesar del número de copias bajo, el conjugado anticuerpo-fármaco h7G3ec SGD-1910 mostró una potente actividad.
La Figura 2 muestra el resultado de un ensayo de citotoxicidad in vitro que prueba el conjugado anticuerpo-fármaco 7G3ec SGD-1910 humanizado contra una línea celular de AML positiva para MDR+, Kasumi-1, que expresa bajas copias de CD123 en comparación con CD33. A pesar del número de copias bajo, el conjugado anticuerpo-fármaco h7G3ec SGD-1910 mostró una potente actividad.
La Figura 3 muestra los resultados de un modelo de xenoinjerto de AML, THP-1, que muestra que el conjugado anticuerpo-fármaco 7G3ec SGD-1910 humanizado exhibió una potente actividad a pesar del número de copias bajo. La actividad fue comparable a los conjugados anticuerpo-fármaco contra CD33 a pesar del número de copias bajo.
La Figura 4 muestra los resultados de un modelo de xenoinjerto de AML, KG1-INV, que muestra que el conjugado anticuerpo-fármaco 7G3ec SGD-1910 humanizado exhibió una actividad potente y una actividad comparable a un conjugado anticuerpo-fármaco contra CD33 a pesar del número de copias bajo.
La Figura 5 muestra las secuencias de aminoácidos para la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 7G3 murino y la cadena pesada vHA, vHB y vHC humanizada y las secuencias de la región variable del aceptor de la línea germinal humana seleccionado.
La Figura 6 muestra las secuencias de aminoácidos para la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 7G3 murino y la cadena ligera vLA y vLB humanizada y las secuencias de la región variable del aceptor de la línea germinal humana seleccionado.
La Figura 7 muestra los resultados de un modelo de xenoinjerto de AML, HNT-34, que muestra que el conjugado anticuerpo-fármaco 7G3ec SGD-1910 humanizado exhibió una potente actividad citotóxica.
La Figura 8 muestra los resultados de un modelo de xenoinjerto de AML, el modelo de AML diseminada Molm-13, que muestra que el conjugado anticuerpo-fármaco 7G3ec SGD-1910 humanizado exhibió una potente actividad citotóxica.
La Figura 9 muestra los resultados de un modelo de xenoinjerto de AML, un modelo de AML primaria diseminada MDR+, que muestra que el conjugado anticuerpo-fármaco 7G3ec SGD-1910 humanizado exhibió una potente actividad citotóxica.
Definiciones
El término "anticuerpo monoclonal", como se usa en la presente descripción, se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos esencialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos, excepto por posibles mutaciones naturales que pueden estar presentes en cantidades menores. El modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos esencialmente homogénea, y no debe interpretarse como que requiere la producción del anticuerpo por algún método en particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales que se usarán de acuerdo con la presente invención pueden prepararse mediante el método de hibridoma descrito primero por Kohler y otros, (1975) Nature 256:495, o puede hacerse mediante métodos de ADN recombinante (ver, por ejemplo, la patente de los Estados Unidos núm. 4816567). Los "anticuerpos monoclonales" también pueden aislarse de bibliotecas de anticuerpos de fago con el uso de las técnicas descritas en Clackson y otros, (1991) Nature, 352:624-628 y Marks y otros, (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597, por ejemplo, o puede realizarse con otros métodos. Los anticuerpos descritos en la presente descripción son anticuerpos monoclonales.
Los anticuerpos se proporcionan típicamente en forma aislada. Esto significa que un anticuerpo es típicamente al menos 50 % p/p puro de proteínas interferentes y otros contaminantes que surgen de su producción o purificación, pero no excluye la posibilidad de que el anticuerpo se combine con un exceso de portador(es) farmacéuticamente aceptable(s) u otro vehículo destinado a facilitar su uso. A veces, los anticuerpos son al menos 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 o 99 % p/p puro de proteínas y contaminantes interferentes de la producción o purificación. Los anticuerpos, incluyendo los anticuerpos aislados, pueden conjugarse con agentes citotóxicos y proporcionarse como conjugados de fármaco y anticuerpos.
Un polinucleótido "aislado" se refiere a un polinucleótido que se ha identificado y separado y/o recuperado a partir de componentes de su naturaleza.
La unión específica de un anticuerpo monoclonal a su antígeno objetivo significa una afinidad de al menos 106, 107, 108, 109 o 1010 M-1. La unión específica es detectablemente mayor en magnitud y puede distinguirse de la unión no específica que se produce al menos a un objetivo no relacionado. La unión específica puede ser el resultado de la formación de enlaces entre los grupos funcionales particulares o ajustes espaciales particulares (por ejemplo, tipo llave y cerradura), mientras que la unión no específica es generalmente el resultado de las fuerzas de van der Waals. Los conjugados anticuerpo-fármaco dirigidos a CD123 y los anticuerpos anti-CD123 se unen específicamente a CD123.
La unidad estructural básica del anticuerpo es un tetrámero de subunidades. Cada tetrámero incluye dos pares idénticos de cadenas de polipéptidos, cada par tiene una cadena "ligera" (aproximadamente 25 kDa) y una "pesada" (aproximadamente 50-70 kDa). La porción amino terminal de cada cadena incluye una región variable de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos principalmente responsables del reconocimiento de antígeno. Esta región variable se expresa inicialmente unida a un péptido señal escindible. La región variable sin el péptido señal se denomina frecuentemente como una región variable madura. Por lo tanto, por ejemplo, una región variable madura de la cadena ligera significa una región variable de la cadena ligera sin el péptido señal de la cadena ligera. Las cadenas ligeras se clasifican como kappa o lambda. Las cadenas pesadas se clasifican como gamma, mu, alfa, delta o épsilon, y definen el isotipo del anticuerpo como IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. Dentro de las cadenas ligeras y pesadas, las regiones subíndices o constantes están unidas por una región "J" de aproximadamente 12 o más aminoácidos, y la cadena pesada también incluye una región "D" de aproximadamente 10 o más aminoácidos. (Ver generalmente, Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 2da ed. Raven Press, NY, 1989, capítulo. 7). Las regiones maduras variables de cada par de cadena ligera /pesada forman el sitio de unión del anticuerpo. Por lo tanto, un anticuerpo intacto tiene dos sitios de unión. Todas las cadenas exhiben la misma estructura general de regiones marco relativamente conservadas (FR) unidas por tres regiones hipervariables, también denominadas regiones determinantes de complementariedad o las CDR. Las CDR de las dos cadenas de cada par están alineadas por las regiones marco, lo que permite la unión a un epítopo específico. Desde el terminal N al terminal C, tanto las cadenas ligeras como las pesadas comprenden los dominios FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 y FR4. La asignación de aminoácidos a cada dominio está de acuerdo con las definiciones de Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (Institutos Nacionales de Salud, Bethesda, MD, 1987 y 1991), o Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia y otros, Nature 342:878-883 (1989). Kabat también proporciona una convención de numeración ampliamente usada (sistema de numeración Kabat) en la que a los residuos correspondientes entre diferentes regiones variables de la cadena pesada o entre diferentes regiones variables de la cadena ligera se les asigna el mismo número. La numeración de la región constante de la cadena pesada se realiza a través del índice EU como se establece en Kabat (Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (Institutos Nacionales de Salud, Bethesda, MD, 1987 y 1991).
El término "anticuerpo" incluye anticuerpos intactos y fragmentos de unión a antígeno de los mismos. Un "anticuerpo intacto" es uno que comprende una región variable de unión al antígeno, así como un dominio constante de la cadena ligera (Cl) y dominios constantes de la cadena pesada, Ch1, Ch2, Ch3 y Ch4, según sea apropiado para la clase de anticuerpos. Los dominios constantes pueden ser dominios constantes de secuencia nativa (por ejemplo, dominios constantes de secuencia nativa humana) o una variante de secuencia de aminoácidos de los mismos. Los fragmentos de anticuerpos compiten con el anticuerpo intacto del que se derivaron para la unión específica al objetivo, incluyendo cadenas pesadas separadas, cadenas ligeras Fab, Fab', F(ab')2, F(ab)c, diacuerpos, Dabs, nanocuerpos y Fv. Los fragmentos pueden producirse por técnicas de ADN recombinante, o por separación enzimática o química de inmunoglobulinas intactas. El término "anticuerpo" también incluye un diacuerpo (fragmento Fv homodimérico) o un minicuerpo (Vl-Vh-Ch3), un anticuerpo biespecífico o similar. Un anticuerpo biespecífico o bifuncional es un anticuerpo híbrido artificial que tiene dos pares de cadenas pesadas/ligeras diferentes y dos sitios de unión diferentes (ver, por ejemplo, Songsivilai y Lachmann, Clin. Exp. Immunol., 79:315-321 (1990); Kostelny y otros, J. Immunol., 148:1547-53 (1992)).
El término "paciente" incluye sujetos humanos y otros mamíferos que reciben tratamiento ya sea profiláctico o terapéutico.
Para propósitos de clasificar las sustituciones de aminoácidos como conservativas o no conservativas, los aminoácidos se agrupan de la siguiente manera: Grupo I (cadenas laterales hidrofóbicas): met, ala, val, leu, ile; Grupo II (cadenas laterales hidrofílicas neutras): cys, ser, thr; Grupo III (cadenas laterales ácidas): asp, glu; Grupo IV (cadenas laterales básicas): asn, gln, his, lys, arg; Grupo V (residuos que influyen en la orientación de la cadena): gly, pro; y Grupo VI (cadenas laterales aromáticas): trp, tyr, phe. Las sustituciones conservativas implican sustituciones entre aminoácidos en la misma clase. Las sustituciones no conservativas constituyen el intercambio de un miembro de una de estas clases por un miembro de otra.
El porcentaje de identidades de secuencia se determina con secuencias de anticuerpos alineadas al máximo por la convención de numeración de Kabat. Después de la alineación, si una región de anticuerpo sujeto (por ejemplo, la región variable madura completa de una cadena pesada o ligera) se compara con la misma región de un anticuerpo de referencia, el porcentaje de identidad de secuencia entre el sujeto y las regiones de anticuerpo de referencia es el número de posiciones ocupadas por el mismo aminoácido tanto en el sujeto como en la región de anticuerpo de referencia dividido por el número total de posiciones alineadas de las dos regiones, con espacios sin contar, multiplicados por 100 para convertir a porcentaje.
Las composiciones o métodos que "comprenden" uno o más elementos enumerados pueden incluir otros elementos no específicamente enumerados. Por ejemplo, una composición que comprende anticuerpos puede contener el anticuerpo solo o en combinación con otros ingredientes.
El término "cantidad terapéuticamente eficaz" o "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad del conjugado anticuerpofármaco que es eficaz para tratar una enfermedad o trastorno en un mamífero. En el caso del cáncer, una cantidad terapéuticamente eficaz del conjugado puede reducir la cantidad de células cancerosas; reducir el tamaño del tumor; inhibir (es decir, retrasar hasta cierto punto y, preferentemente, detener) la infiltración de células cancerosas en órganos periféricos; inhibir (es decir, retrasar hasta cierto punto y, preferentemente, detener) la metástasis tumoral; inhibir el crecimiento tumoral; y/o aliviar uno o más de los síntomas asociados con el cáncer. Para la terapia contra el cáncer, la eficacia puede, por ejemplo, medirse evaluando el tiempo hasta la progresión de la enfermedad (TTP) y/o determinando la tasa de respuesta (RR). El término "régimen eficaz" se refiere a una combinación de la cantidad de conjugado que se administra y la frecuencia de dosificación adecuada para lograr el tratamiento del trastorno.
Los términos "tratar" o "tratamiento", a menos que el contexto indique lo contrario, se refieren al tratamiento terapéutico en donde el objeto es inhibir o desacelerar (disminuir) un cambio o trastorno fisiológico no deseado, como el desarrollo o la propagación del cáncer. Los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero no se limitan a, alivio de los síntomas, disminución de la extensión de la enfermedad, un estado estabilizado de la enfermedad (es decir, que no empeora), retraso o ralentización de la progresión de la enfermedad, mejora o paliación del estado de la enfermedad, y remisión (ya sea parcial o completa), ya sea detectable o indetectable. "Tratamiento" también puede significar prolongar la supervivencia en comparación con la supervivencia esperada si no recibe tratamiento. Aquellos que necesitan tratamiento incluyen aquellos con enfermedad detectable. Aquellos que necesitan tratamiento también pueden incluir aquellos con enfermedad indetectable, por ejemplo, pacientes que han logrado una respuesta completa después del tratamiento para el trastorno que expresa CD123 pero que necesitan terapia para prevenir una recaída.
El término "farmacéuticamente aceptable" significa aprobado o aceptado por una agencia reguladora del gobierno federal o estatal o que figura en la farmacopea de Estados Unidos u otra farmacopea generalmente reconocida para su uso en animales, y más particularmente en humanos. El término "ingrediente farmacéuticamente compatible" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable con el que se administra a un sujeto un anticuerpo anti-CD123 o un conjugado anticuerpo-fármaco.
La frase "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales orgánicas o inorgánicas farmacéuticamente aceptables. Las sales ilustrativas incluyen sales de sulfato, citrato, acetato, oxalato, cloruro, bromuro, yoduro, nitrato, bisulfato, fosfato, fosfato ácido, isonicotinato, lactato, salicilato, citrato ácido, tartrato, oleato, tanato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucuronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p toluenosulfonato y pamoato (es decir, 1,1' metilen bis -(2 hidroxi 3 naftoato)). Una sal farmacéuticamente aceptable puede implicar la inclusión de otra molécula, como un ion acetato, un ion succinato u otro contraión. El contraión puede ser cualquier porción orgánica o inorgánica que estabilice la carga en el compuesto original. Además, una sal farmacéuticamente aceptable puede tener más de un átomo cargado en su estructura. Los ejemplos donde múltiples átomos cargados son parte de la sal farmacéuticamente aceptable pueden tener múltiples iones contrarios. Por lo tanto, una sal farmacéuticamente aceptable puede tener uno o más átomos cargados y/o uno o más contraiones.
Los solvatos en el contexto de la invención son aquellas formas de los compuestos de la invención que forman un complejo en estado sólido o líquido a través de la coordinación con moléculas solventes. Los hidratos son una forma específica de solvatos, en la que la coordinación se lleva a cabo con agua. Los solvatos preferidos en el contexto de la presente invención son hidratos.
A menos que sea evidente por el contexto, el término "aproximadamente" abarca valores dentro de una desviación estándar de un valor establecido.
Descripción detallada
I. General
La presente invención se basa, en parte, en el descubrimiento de que los conjugados anticuerpo-fármaco, que incluyen los conjugados anticuerpo-fármaco de PBD dirigidos a CD123, son particularmente eficaces para destruir las células que expresan CD123+. En particular, se descubrió que podía construirse un anticuerpo 7G3 humanizado de alta afinidad mediante el uso como la secuencia aceptora de la región variable de la cadena pesada, la línea germinal hIGHv1-2 y el exón J, Jh-1, y para la secuencia aceptora de la región variable de la cadena ligera, la línea germinal hIGKv4-1 y el exón J, Jk-2, y por mutación de los residuos en uno o más sitios clave de vuelta al anticuerpo murino o secuencia de la línea germinal murina. Para la cadena pesada, estos sitios clave incluían una o más de las posiciones H20, H38, H48, H66, H67, H69, H71, H73, H81, H82A y H93. Para la cadena ligera, estos sitios clave incluían una o más de las posiciones L2, L19, L21, L22 y L38. Notablemente, el anticuerpo 7G3 humanizado de alta afinidad se construyó sin la necesidad de realizar la maduración de la afinidad y al mismo tiempo retener la identidad de las CDR del anticuerpo murino. El anticuerpo 7G3 humanizado de alta afinidad también fue eficaz en el suministro de fármacos como parte de un conjugado anticuerpo fármaco. Cuando se conjugó a un enlazador de fármaco PBD SGD-1910, el conjugado resultante h7G3ec PBD fue altamente activo contra un panel de líneas celulares de AML y muestras de AML primaria independientemente del número de copias bajo de CD123 y el estado MDR+. La designación "ec" después de h7G3 indica que el anticuerpo tiene una sustitución de cisteína en la posición 239 de la cadena pesada (la numeración es por el índice EU como se establece en Kabat)
II. Moléculas objetivo
A menos que se indique lo contrario, CD123 e IL-3R alfa se usan indistintamente y se refieren a CD123 o IL-3R alfa humanos. A una secuencia humana ilustrativa se le asigna el número de acceso de UniProtKB/Swiss-Prot P26951. III. Anticuerpos de la invención
Los anticuerpos de la invención comprenden la región variable de la cadena pesada que se establece en la SEQ ID NO:1 y la región variable de la cadena ligera que se establece en la SEQ ID NO:2. Un anticuerpo humanizado es un anticuerpo genéticamente modificado en el que las CDR de un anticuerpo "donador" no humano se injertan en las secuencias de anticuerpos "aceptores" humanos (ver, por ejemplo, Queen, US 5,530,101 y 5,585,089; Winter, US 5,225,539; Carter, US 6,407,213; Adair, US 5,859,205; y Foote, US 6,881,557). Las secuencias de anticuerpos aceptores pueden ser, por ejemplo, una secuencia de anticuerpos humanos maduros, un compuesto de tales secuencias, una secuencia de consenso de las secuencias de anticuerpos humanos o una secuencia de la región de línea germinal.
Por lo tanto, un anticuerpo humanizado es un anticuerpo que tiene algunas o todas las CDR completa o esencialmente de un anticuerpo donador no humano y secuencias marco de la región variable y las regiones constantes, si están presentes, completa o esencialmente de las secuencias de anticuerpos humanos. De manera similar, una cadena pesada humanizada tiene al menos una, dos y generalmente las tres CDR completa o esencialmente de una cadena pesada del anticuerpo donador, y una secuencia marco de la región variable de la cadena pesada y la región constante de la cadena pesada, si está presente, esencialmente de las secuencias marco de la región variable de la cadena pesada humana y de región constante. De manera similar, una cadena ligera humanizada tiene al menos una, dos y generalmente las tres CDR completa o esencialmente de una cadena ligera del anticuerpo donador, y una secuencia marco de la región variable de la cadena ligera y la región constante de la cadena ligera, si está presente, esencialmente de las secuencias marco de la región variable de la cadena ligera humana y de región constante. Además de nanocuerpos y diacuerpos, un anticuerpo humanizado típicamente comprende una cadena pesada humanizada y una cadena ligera humanizada. Una CDR en un anticuerpo humanizado o humano es esencialmente de o esencialmente idéntica a una CDR correspondiente en un anticuerpo no humano cuando al menos 60 %, 85 %, 90 %, 95 % o 100 % de los residuos correspondientes (según lo definido por Kabat) son idénticos entre las respectivas CDR. En algunas modalidades, una CDR en un anticuerpo humanizado o anticuerpo humano es esencialmente de o esencialmente idéntica a una CDR correspondiente en un anticuerpo no humano cuando no existen más de 3 sustituciones conservativas de aminoácidos en cada CDR. Las secuencias marco de la región variable de una cadena de anticuerpos o la región constante de una cadena de anticuerpos son esencialmente de una secuencia marco de la región variable humana o región constante humana, respectivamente, cuando al menos 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % o 100 % de los residuos correspondientes definidos por Kabat son idénticos. En algunos anticuerpos humanizados, existen al menos seis retromutaciones de 7G3 murino en la región marco variable de la cadena pesada del anticuerpo y al menos dos retromutaciones de 7G3 murino en la región variable de la cadena ligera del anticuerpo.
Aunque los anticuerpos humanizados frecuentemente incorporan las seis CDR (preferentemente según lo definido por Kabat) de un anticuerpo de ratón, también pueden hacerse con menos de la totalidad de las CDR (por ejemplo, al menos 3, 4 o 5) CDR de un anticuerpo de ratón (por ejemplo, Pascalis y otros, J. Immunol. 169:3076, 2002; Vajdos y otros, Journal of Molecular Biology, 320:415-428, 2002; Iwahashi y otros, Mol. Immunol. 36:1079-1091, 1999; Tamura y otros, Journal of Immunology, 164:1432-1441, 2000).
Ciertos aminoácidos de los residuos del marco de la región variable humana pueden seleccionarse para la sustitución en función de su posible influencia en la conformación de la CDR y/o unión al antígeno. La investigación de tales posibles influencias es mediante el modelado, el examen de las características de los aminoácidos en ubicaciones particulares, o la observación empírica de los efectos de la sustitución o mutagénesis de aminoácidos particulares.
En la presente descripción se describen anticuerpos dirigidos contra el antígeno CD123. Los anticuerpos preferidos son anticuerpos quiméricos o humanizados derivados del anticuerpo 7G3 murino. Una secuencia aceptora preferida para la región variable de la cadena pesada es el exón hIGHv1-2 de la Vh de la línea germinal y para el exón J (Jh), el exón Jh-1. Para la región variable de la cadena ligera, una secuencia aceptora preferida es el exón hIGKv4-1 y para el exón J, Jk-2.
Un anticuerpo anti-CD 123 ilustrativo es un anticuerpo humanizado que incluye las CDR de la cadena pesada como se establece en la SEQ ID NO:1 y las CDR de la cadena ligera como se establece en la SEQ ID NO:2 y adicionalmente tiene una región variable de la cadena pesada madura con al menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 % o 95 % de identidad con la SEQ ID NO:1 y una región variable de la cadena ligera madura con al menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 % o 95 % de identidad con la SEQ ID NO:2. Las CDR son según lo definido por Kabat. Preferentemente, se mantienen los siguientes residuos de aminoácidos del marco de dominio variable de la cadena pesada: H48 está ocupado por I, H67 está ocupado por A, H69 está ocupado por L, H71 está ocupado por V, H73 está ocupado por R, H93 está ocupado por T y se mantienen los siguientes residuos de aminoácidos de la cadena ligera: L2 está ocupado por F, L38 está ocupado por L. En algunos aspectos, se mantienen los siguientes residuos de aminoácidos de la cadena pesada: H20 está ocupado por M, H38 está ocupado por K, H48 está ocupado por I, H66 está ocupado por K, H67 está ocupado por A, H69 está ocupado por L, h 71 está ocupado por V, H73 está ocupado por R, H81 está ocupado por H, H82A está ocupado por N, y H93 está ocupado por T y se mantienen los siguientes residuos de aminoácidos del marco de dominio variable de la cadena ligera: L2 está ocupado por F, L38 está ocupado por L. En algunos aspectos, se presentan los siguientes residuos de aminoácidos del marco de dominio variable de la cadena pesada: H20 está ocupado por M o V, H38 está ocupado por K o R, H48 está ocupado por I, H66 está ocupado por K o R, H67 está ocupado por A, H69 está ocupado por L, H71 está ocupado por V, H73 está ocupado por R, H81 está ocupado por E o H, H82A está ocupado por S o N y H93 está ocupado por T y se presentan los siguientes residuos de aminoácidos del marco del dominio variable de la cadena ligera: L2 está ocupado por F, L19 está ocupado por A o V, L21 está ocupado por I o M, L22 está ocupado por N o S, L38 está ocupado por L.
En consecuencia, se describen en la presente descripción anticuerpos humanizados que comprenden una región variable de la cadena pesada como se establece en la SEQ ID NO:1 y una región variable de la cadena ligera como se establece en la SEQ ID NO:2, siempre y cuando H20 esté ocupado por M o V, H38 esté ocupado por K o R, H48 esté ocupado por I, H66 esté ocupado por K o R, H67 esté ocupado por A, H69 esté ocupado por L, H71 esté ocupado por V, H73 esté ocupado por R, H81 esté ocupado por E o H, H82A esté ocupado por S o N, y H93 esté ocupado por T y se presentan los siguientes residuos de aminoácidos de la cadena ligera: L2 está ocupado por F, L19 está ocupado por A o V, L21 está ocupado por I o M, L22 está ocupado por N o S, y L38 está ocupado por L.
Las formas humanizadas del anticuerpo m7G3 de ratón incluyen tres regiones variables maduras de la cadena pesada humanizada ejemplificadas (HA-HC) y dos regiones variables maduras de la cadena ligera humanizada ejemplificadas (LA-LC). Las permutaciones de estas cadenas incluyen HALA, HALB, HBLA, HBLB, HCLA y HCLB. De estas permutaciones, HCLA está de acuerdo con la invención. HCLA comprende la cadena pesada que se establece en la SEQ ID NO:1 y la cadena ligera que se establece en la SEQ ID NO:2.
En algunos aspectos, la constante de disociación aparente (kd) de los anticuerpos 7G3 humanizados para el CD123 humano está preferentemente dentro del intervalo de 0,1 nM a 10 nM, aún con mayor preferencia dentro del intervalo de 0,1 nM a 5 nM, aún preferentemente dentro del intervalo de 1 nM a 3 nM o 2 nM a aproximadamente 3 nM. En algún aspecto, los anticuerpos de la presente invención tienen una constante de disociación aparente dentro del intervalo de 0,1 a 1,5 veces, o aún de 0,5 a 2 veces la constante de disociación aparente del anticuerpo 7G3 murino para el CD123 humano. En algunos aspectos, la constante de disociación aparente (kd) de los anticuerpos para el CD123 humano es de aproximadamente 2,7.
A. Selección de la Región Constante
Las regiones variables de las cadenas pesada y ligera de anticuerpos 7G3 humanizados pueden unirse al menos a una porción de una región constante humana. La elección de la región constante puede depender, en parte, de si se desea la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos, la fagocitosis celular dependiente de anticuerpos y/o la citotoxicidad dependiente del complemento. Por ejemplo, los isótopos humanos IgG1 e IgG3 tienen una fuerte citotoxicidad dependiente del complemento, el isotipo humano IgG2 tiene una citotoxicidad débil dependiente del complemento y la IgG4 humana carece de citotoxicidad dependiente del complemento. Las IgG1 e IgG3 humanas también inducen funciones efectoras mediadas por células más fuertes que las IgG2 e IgG4 humanas. Las regiones constantes de la cadena ligera pueden ser lambda o kappa. Los anticuerpos pueden expresarse como tetrámeros que contienen dos cadenas ligeras y dos pesadas, como cadenas pesadas separadas, cadenas ligeras, como Fab, Fab', F(ab')2, y Fv, o como anticuerpos de cadena sencilla en los que los dominios suscritos de cadena pesada y ligera se unen a través de un espaciador.
Las regiones constantes humanas muestran variación alotípica y variación isoalotípica entre los diferentes individuos, es decir, las regiones constantes pueden variar en los diferentes individuos en una o más posiciones polimórficas. Los isoalotipos difieren de los alotipos en que los sueros que reconocen un isoalotipo se unen a una región no polimórfica de uno o más isotipos diferentes.
Uno o varios aminoácidos en el extremo amino o carboxilo de la cadena ligera y/o pesada, tal como la lisina C-terminal de la cadena pesada, pueden faltar o derivatizarse en una proporción o en todas las moléculas. Pueden hacerse sustituciones en las regiones constantes para reducir o aumentar la función efectora, tal como citotoxicidad mediada por complemento o ADCC (ver, por ejemplo, Winter y otros, patente de los Estados Unidos núm. 5,624,821; Tso y otros, patente de los Estados Unidos núm. 5,834,597; y Lazar y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006), o para prolongar la vida media en humanos (ver, por ejemplo, Hinton y otros, J. Biol. Chem. 279:6213, 2004).
La región constante puede modificarse para permitir la conjugación sitio específica de un enlazador de fármacos. Dichas técnicas incluyen el uso de residuos de cisteína, puentes disulfuro, secuencias de polihistidina, etiquetas de glicoingeniería y secuencias de reconocimiento de transglutaminasa de origen natural o diseñados por ingeniería genética. Una sustitución ilustrativa para la conjugación sitio específica con el uso de la transglutaminasa bacteriana es N297S o N297Q. Una sustitución ilustrativa para la conjugación sitio específica con el uso de una cisteína diseñada por ingeniería genética es S239C. Los fragmentos de anticuerpos también pueden modificarse para la conjugación sitio específica de un enlazador de fármacos, ver, por ejemplo, Kim y otros, Mol Cancer Ther 2008; 7(8).
B. Expresión de anticuerpos recombinantes
Los anticuerpos 7G3 humanizados o quiméricos pueden producirse mediante expresión recombinante. Los constructos de polinucleótidos recombinantes típicamente incluyen una secuencia de control de la expresión unida operativamente a las secuencias codificantes de las cadenas de anticuerpos, que incluyen regiones promotoras heterólogas o asociadas de forma natural. Preferentemente, las secuencias de control de expresión son sistemas promotores eucariotas en vectores capaces de transformar o transfectar las células huésped eucariotas. Una vez que el vector se ha incorporado al huésped apropiado, el huésped se mantiene en condiciones adecuadas para la expresión de alto nivel de las secuencias de nucleótidos y la recolección y purificación de los anticuerpos de reacción cruzada.
Las células de mamífero son un huésped preferido para expresar segmentos de nucleótidos que codifican inmunoglobulinas o fragmentos de las mismas. Ver Winnacker, From Genes to Clones, (VCH Publishers, NY, 1987). Se han desarrollado en la materia varias líneas celulares huésped adecuadas capaces de secretar proteínas heterólogas intactas, e incluyen líneas celulares CHO (por ejemplo, DG44), varias líneas celulares COS, células HeLa, células HEK293, células L y mielomas que no producen anticuerpos, incluyendo Sp2/0 y NS0. Preferentemente, las células no son humanas. Los vectores de expresión para estas células pueden incluir secuencias de control de la expresión, tales como un origen de replicación, un promotor, un potenciador (Queen y otros, Immunol. Rev. 89:49 (1986)), y los sitios de procesamiento de la información necesarios, tales como sitios de unión a ribosomas, sitios de corte y empalme de ARN, sitios de poliadenilación y secuencias terminadoras transcripcionales. Las secuencias de control de expresión preferidas son promotores derivados de genes endógenos, citomegalovirus, SV40, adenovirus, virus del papiloma bovino, y similares. Ver Co y otros, J. Immunol. 148:1149 (1992).
Una vez expresados, los anticuerpos pueden purificarse de acuerdo con los procedimientos estándar de la materia, que incluyen la purificación por HPLc , la cromatografía en columna, la electroforesis en gel y similares (ver generalmente, Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, NY, 1982)).
IV. Ácidos nucleicos
Se describen en la presente descripción, además, ácidos nucleicos que codifican cualquiera de las cadenas pesadas y ligeras humanizadas descritas en la presente descripción. Típicamente, los ácidos nucleicos también codifican un péptido señal fusionado a las regiones variables maduras de la cadena pesada y ligera. Las secuencias codificantes en ácidos nucleicos pueden estar en enlace operable con las secuencias reguladoras para asegurar la expresión de las secuencias codificantes, tales como un promotor, potenciador, sitio de unión al ribosoma, señal de terminación de la transcripción y similares. Los ácidos nucleicos que codifican las cadenas pesadas y ligeras pueden aparecer en forma aislada o pueden clonarse en uno o más vectores. Los ácidos nucleicos pueden sintetizarse, por ejemplo, mediante síntesis en estado sólido o PCR de oligonucleótidos superpuestos. Los ácidos nucleicos que codifican cadenas pesadas y ligeras pueden unirse como un ácido nucleico contiguo, por ejemplo, dentro de un vector de expresión, o pueden separarse, por ejemplo, cada uno clonado en su propio vector de expresión.
En una modalidad, esta descripción proporciona un polinucleótido aislado que codifica una región variable de la cadena pesada del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos como se establece en HA, HB o HC. Por ejemplo, el polinucleótido aislado puede codificar una región variable de la cadena pesada del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:1. Este polinucleótido aislado puede codificar además una región constante de cadena pesada de IgG humana. El isotipo de la región constante de IgG es, por ejemplo, IgG1 IgG2, IgG3 o IgG4. En una modalidad, el isotipo de la región constante de IgG es IgG1. En otra modalidad, la región constante de IgG1 codificada tiene una secuencia de aminoácidos que comprende una sustitución en el residuo 239, de acuerdo con el índice UE como se establece en el sistema Kabat, es decir, S239C. La descripción también proporciona un vector de expresión que comprende el polinucleótido aislado que codifica la región variable de la cadena pesada del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos como se establece en HA, HB o HC (por ejemplo, SEQ ID NO:1 o variantes de las mismas), y además, una célula huésped que comprende ese vector de expresión. En algunas modalidades, la célula huésped es una célula huésped de mamífero, por ejemplo, una célula CHO.
En otra modalidad, esta descripción proporciona un polinucleótido aislado que codifica una región variable de la cadena ligera del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos como se establece en LA o LB. Por ejemplo, un polinucleótido aislado que codifica una región variable de la cadena ligera del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:2. Este polinucleótido aislado puede codificar además una región constante de la cadena ligera de IgG humana. El isotipo de la región constante de la cadena ligera de IgG es, por ejemplo, una región constante kappa. La descripción proporciona, además, un vector de expresión que comprende el polinucleótido aislado que codifica la región variable de la cadena ligera del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos como se establece en LA o LB (por ejemplo, la SEQ ID NO:2 o variantes de la misma), y además, una célula huésped que comprende ese vector de expresión. En algunas modalidades, la célula huésped es una célula huésped de mamífero, por ejemplo, una célula CHO.
En otra modalidad, esta descripción proporciona un polinucleótido aislado o polinucleótidos que codifica(n) una región variable de la cadena pesada del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:1 y una región variable de la cadena ligera del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2, el dominio variable de la cadena pesada y el dominio variable de la cadena ligera forman un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une específicamente al CD123 humano. Esta descripción proporciona, además, un vector de expresión que comprende el polinucleótido aislado o polinucleótidos que codifica(n) la región variable de la cadena pesada del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:1 y la región variable de la cadena ligera del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2. También se proporciona una célula huésped que comprende el vector o vectores de expresión. La célula huésped es preferentemente una célula de mamífero, por ejemplo, una célula CHO.
En otra modalidad, esta descripción proporciona un primer y un segundo vectores que comprenden un polinucleótido que codifica una región variable de la cadena pesada del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:1 y un polinucleótido que codifica una región variable de la cadena ligera del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2, el dominio variable de la cadena pesada y el dominio variable de la cadena ligera forman un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une específicamente al CD123 humano. Se proporcionan las células huésped que comprenden los vectores, preferentemente las células huésped de mamíferos, tales como una célula CHO.
V. Conjugados anticuerpo-fármaco
Los anticuerpos anti-CD123 pueden conjugarse a porciones citotóxicas o porciones citostáticas para formar conjugados anticuerpo-fármaco (ADC). Las porciones particularmente adecuadas para la conjugación con anticuerpos son los agentes citotóxicos (por ejemplo, agentes quimioterapéuticos), enzimas convertidoras de profármacos, isótopos o compuestos radiactivos, o toxinas (estas porciones se denominan colectivamente como un agente terapéutico). Por ejemplo, un anticuerpo anti-CD 123 puede conjugarse con un agente citotóxico tal como un agente quimioterapéutico o una toxina (por ejemplo, un agente citostático o citocida tal como, por ejemplo, abrina, ricina A, exotoxina de pseudomonas o toxina de la difteria). Los ejemplos de clases útiles de agentes citotóxicos incluyen, por ejemplo, agentes de unión a los surcos menores de ADN, agentes alquilantes de ADN y agentes disruptores de microtúbulos. Los agentes citotóxicos ilustrativos incluyen, por ejemplo, auristatinas, camptotecinas, calicheamicinas, duocarmicinas, etopósidos, maitansinoides (por ejemplo, DM1, DM2, DM3, DM4), taxanos, benzodiazepinas (por ejemplo, pirrolo[1,4]benzodiazepinas, indolinobenzodiazepinas, y oxazolidinobenzodiazepinas) y alcaloides de la vinca. Los conjugados anticuerpo-fármaco ilustrativos incluyen conjugados anticuerpo-fármaco basados en auristatina, lo que significa que el componente farmacológico es un fármaco auristatina, conjugados anticuerpofármaco maitansinoide, lo que significa que el componente farmacológico es un fármaco maitansinoide y conjugados anticuerpo-fármaco benzodiacepina, lo que significa que el componente farmacológico es una benzodiazepina (por ejemplo, pirrolo[1,4]benzodiazepinas, indolinobenzodiazepinas y oxazolidinobenzodiazepinas).
Las técnicas para conjugar agentes terapéuticos a anticuerpos se conocen bien. (Ver, por ejemplo, Alley y otros, Current Opinion in Chemical Biology 2010 14:1-9; Senter, Cancer J., 2008, 14(3):154-169). El agente terapéutico puede conjugarse de una manera que reduce su actividad a menos que se escinda del anticuerpo (por ejemplo, por hidrólisis, por degradación proteolítica o mediante un agente de escisión). En algunos aspectos, el agente terapéutico se une al anticuerpo con un enlazador escindible que es sensible a la escisión en el entorno intracelular de la célula cancerosa que expresa CD123 pero no es esencialmente sensible al entorno extracelular, de manera que el conjugado se escinde del anticuerpo cuando se internaliza por la célula cancerosa que expresa CD123 (por ejemplo, en el entorno endosomal o, por ejemplo, en virtud de la sensibilidad al pH o la sensibilidad a proteasas, en el entorno lisosomal o en el entorno caveolar). En algunos aspectos, el agente terapéutico, además, puede unirse al anticuerpo con un enlazador no escindible.
Los presentes inventores han descubierto que un ADC dirigido a CD123 que comprende un enlazador de fármaco PBD es particularmente eficaz para tratar trastornos que expresan CD123.
Un PBD preferido para su uso en la presente invención es el siguiente:
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o una sal, solvato o solvato de la sal farmacéuticamente; en donde el subíndice n es 1 o 3.
Un enlazador de fármaco PBD preferido para su uso en la presente invención se representa por la Fórmula I a continuación:
Figure imgf000010_0002
o una sal, solvato o solvato de la sal farmacéuticamente; en donde el subíndice n es 1 o 3 y el subíndice m es un número entero de 2 a 5.
La estereoquímica preferida del componente de fármaco PBD del enlazador de fármaco es como se muestra en la Fórmula Ia a continuación:
Figure imgf000011_0001
La estereoquímica preferida de los componentes de fármaco PBD y enlazador del enlazador de fármaco PBD SGD-1910 es como se muestra en la Fórmula Ib a continuación:
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El enlazador de fármaco PBD se conjuga a un anticuerpo CD123 humanizado de la presente invención para producir un conjugado anticuerpo-fármaco dirigido a CD123 como se muestra a continuación en las fórmulas II, IIa y IIb
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número entero de 2 a 5; y el subíndice p es un número entero de 1 a 4.
Los enlazadores de fármacos ilustrativos incluyen los enlazadores de fármacos MMAE. La incorporación de un polímero de polietilenglicol como una cadena lateral en un enlazador de fármacos MMAE con S-glucurónido escindible proporciona conjugados anticuerpo fármaco con el aclaramiento plasmático disminuido y actividad antitumoral aumentada en modelos de xenoinjerto en comparación con un control no pegilado. Por consiguiente, los enlazadores de fármacos particularmente ventajosos para la unión a los anticuerpos de la presente invención son los siguientes:
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una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
A continuación, se muestra una estereoquímica preferida para dicho enlazador de fármacos:
Figure imgf000012_0002
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en donde para las fórmulas V y Va, Z representa una porción orgánica que tiene un sitio reactivo capaz de reaccionar con un grupo funcional en el anticuerpo para formar una unión covalente al mismo, n se encuentra en el intervalo de 8 a 36 y con preferencia superlativa se encuentra en el intervalo de 8 a 14 (con preferencia superlativa 12), R21 es una unidad de bloqueo para la porción de polietilenglicol, preferentemente -CH3 o -CH2CH2CO2H.
Una porción Z preferida es una porción que contiene maleimido. Las porciones Z particularmente preferidos se muestran en los enlazadores de fármacos a continuación:
Figure imgf000013_0001
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
A continuación, se muestra una estereoquímica preferida para dichos enlazadores de fármacos:
Figure imgf000014_0001
una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde para las fórmulas VI, Vía, VII y VIIa, n se encuentra en el intervalo de 8 a 36 y con preferencia superlativa se encuentra en el intervalo de 8 a 14 (con preferencia superlativa 12), RPR es hidrógeno o un grupo protector, por ejemplo, grupo protector lábil a los ácidos, por ejemplo, BOC, R21 es una unidad de bloqueo para la porción de polietilenglicol, preferentemente -CH3 o -CH2CH2CO2H.
Como se señaló anteriormente, RPR puede ser hidrógeno o un grupo protector. Los grupos protectores como se usan en la presente descripción se refieren a grupos que bloquean selectivamente, ya sea temporal o permanentemente, un sitio reactivo en un compuesto multifuncional. Un grupo protector es un grupo protector adecuado cuando es capaz de prevenir o evitar reacciones secundarias no deseadas o pérdida prematura del grupo protector bajo las condiciones de reacción requeridas para efectuar la transformación química deseada en otra parte de la molécula y durante la purificación de la molécula recién formada cuando se desee, y puede eliminarse en condiciones que no afecten negativamente a la estructura ni la integridad estereoquímica de esa molécula recién formada. Los grupos protectores de amina adecuados incluyen grupos protectores de nitrógeno lábiles a los ácidos, incluyendo los proporcionados por Isidro-Llobel y otros, "Amino acid-protecting groups" Chem. Rev. (2009) 109: 2455-2504. Típicamente, un grupo protector de nitrógeno lábil a los ácidos transforma un grupo amino primario o secundario en su correspondiente carbamato e incluye carbamatos de t-butilo, alilo y bencilo.
Como se señaló anteriormente, R21 es una unidad de bloqueo para la porción de polietilenglicol. Como se apreciará por el experto en la materia, las unidades de polietilenglicol pueden bloquearse terminalmente con una amplia diversidad de porciones orgánicas, típicamente las que son relativamente no reactivas. Se prefieren los grupos alquilo y alquilo sustituido, que incluyen, por ejemplo, -C1-10 alquilo, -C2-10 alquil-CO2H, -C2-10 alquil-OH, -C2-10 alquil-NH2, C2-10 alquil-NH(C1-3 alquilo), o C2-10 alquil-N(C1-3 alquilo)2.
Generalmente, para los enlazadores de fármacos MMAE pegilados existen de 1 a 16 enlazadores de fármacos unidos a cada anticuerpo.
Carga de fármacos - "p"
En referencia a los conjugados anticuerpo-fármaco dirigidos a CD123 de las fórmulas II, IIa y IIb, el subíndice p representa la carga de fármaco para una molécula de anticuerpo (número de moléculas de fármaco unidas a una molécula de anticuerpo) y es un valor entero. En una composición que comprende una población de moléculas de conjugado anticuerpo-fármaco, la carga de fármaco promedio (por ejemplo, el número promedio de moléculas de enlazador de fármaco por anticuerpo en la población) es un atributo de calidad importante ya que determina la cantidad de fármaco que puede suministrarse a una célula objetivo. La carga de fármaco promedio puede ser un valor entero o no entero, pero típicamente es un valor no entero. La carga de fármaco promedio óptima variará en dependencia de la identidad del fármaco o la combinación de enlazador de fármaco.
La heterogeneidad de una composición de conjugado anticuerpo- fármaco dependerá, en algunos aspectos, de la tecnología de conjugación usada para conjugar moléculas de enlazador de fármaco a moléculas de anticuerpo. Por ejemplo, en algunos aspectos, la tecnología de conjugación usada para conjugar las moléculas de enlazador de fármaco a las moléculas de anticuerpo dará como resultado una composición de conjugado anticuerpo-fármaco que es heterogénea con respecto a la distribución de moléculas de enlazador de fármaco en el anticuerpo y/o con respecto al número de enlazadores de fármacos en las moléculas de anticuerpos (por ejemplo, cuando se conjuga a través de disulfuros intercadena mediante el uso de tecnología que no es sitio específica). En otros aspectos, la tecnología de conjugación usada para conjugar las moléculas de enlazador de fármaco dará como resultado una composición de conjugado anticuerpo-fármaco que es esencialmente homogénea con respecto a la distribución de moléculas de enlazador de fármaco en las moléculas de ligando y/o con respecto al número de moléculas de enlazador de fármaco en las moléculas de anticuerpos (por ejemplo, cuando se usa tecnología de conjugación sitio específica). Con los métodos sitio específicos y no sitio específicos, típicamente también habrá un pequeño porcentaje de moléculas de anticuerpos no conjugadas. El porcentaje de moléculas de anticuerpo no conjugadas se incluye en el valor de carga de fármaco promedio.
En aspectos preferidos de la presente invención, la carga de fármaco promedio cuando se refiere a una composición que comprende una población de compuestos de conjugado anticuerpo-fármaco es de aproximadamente 2 a aproximadamente 14, preferentemente de aproximadamente 2 a aproximadamente 10. Para los conjugados anticuerpo-fármaco de PBD, tales como los ejemplificados en la presente, una carga de fármaco promedio particularmente preferida es aproximadamente 2. En algunos aspectos, la carga real de fármaco para las moléculas de anticuerpos individuales en la población de compuestos de conjugado anticuerpo-fármaco es de 1 a 4, de 1 a 3 o de 1 a 2 con una carga de fármaco predominante de 2. En aspectos preferidos, la carga de fármaco promedio de aproximadamente 2 se logra mediante técnicas de conjugación sitio específicas (por ejemplo, cisteínas diseñadas por ingeniería genética introducidas en el anticuerpo)
En algunos otros aspectos de la presente invención, la carga de fármaco promedio cuando se refiere a una composición que comprende una población de compuestos de conjugados anticuerpo-fármaco es aproximadamente 3 o aproximadamente 4 y la carga real de fármaco para moléculas de anticuerpo individuales en la población de compuestos conjugados anticuerpo-fármaco es de 1 a 8.
Para los ADC PEGilados con MMAE, como los ejemplificados en la presente, una carga de fármaco promedio particularmente preferida es aproximadamente 8. En modalidades ilustrativas, los enlazadores de fármacos se conjugan con los residuos de cisteína de los disulfuros intercadena reducidos. En algunos aspectos, la carga real de fármaco para las moléculas de anticuerpos individuales en la población de compuestos conjugados de anticuerpofármaco es de 1 a 10 (o de 6 a 10 o de 6 a 8) con una carga de fármaco predominante de 8. Puede lograrse una mayor carga de fármaco, por ejemplo, si, además de los disulfuros intercadena, el enlazador de fármacos se conjuga con los residuos de cisteína introducidos (como un residuo de cisteína introducido en la posición 239, de acuerdo con el índice EU).
Los ADC ilustrativos incluyen lo siguiente:
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una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde n se encuentra en el intervalo de 8 a 36 y con preferencia superlativa se encuentra en el intervalo de 8 a 14 (con preferencia superlativa 12), RPR es hidrógeno o un grupo protector, por ejemplo, un grupo protector lábil a ácidos, por ejemplo, BOC, R21 es una unidad de bloqueo para la porción de polietilenglicol, preferentemente -CH3 o -CH2CH2CO2H, Ab representa un anticuerpo anti-CD123 y p representa un número entero que se encuentra en el intervalo de 1 a 16, preferentemente de 1 a 14, 6 a 12, 6 a 10 u 8 a 10 cuando se refiere a moléculas de anticuerpo individuales o a una carga de fármaco promedio de aproximadamente 4 o aproximadamente 6 a aproximadamente 14, preferentemente aproximadamente 8 cuando se refiere a una población de moléculas de anticuerpos.
Como se señaló anteriormente, la porción de PEG (polietilenglicol) del enlazador de fármacos puede encontrarse en el intervalo de 8 a 36, sin embargo, se ha encontrado que un PEG de 12 unidades de óxido de etileno es particularmente preferido. Se ha descubierto que las cadenas de PEG más largas pueden dar como resultado un aclaramiento más lento, mientras que las cadenas de PEG más cortas pueden provocar una disminución de la actividad. Por consiguiente, el subíndice n en todas las modalidades anteriores es preferentemente de 8 a 14, de 8 a 12, de 10 a 12 o de 10 a 14 y con preferencia superlativa es 12.
Pueden usarse los PEG polidispersos, PEG monodispersos y PEG discretos para preparar los conjugados anticuerpofármaco PEGilados de la presente invención. Los PEG polidispersos son una mezcla heterógena de tamaños y pesos moleculares, mientras que los PEG monodispersos se purifican típicamente de mezclas heterogéneas y, por lo tanto, proporcionan una longitud de cadena única y un peso molecular. Las unidades de PEG preferidas son los PEG discretos, compuestos que se sintetizan por etapas y no a través de un proceso de polimerización. Los PEG discretos proporcionan una sola molécula con una longitud de cadena definida y especificada. Al igual que con el subíndice "p", cuando se hace referencia a las poblaciones de conjugados anticuerpo-fármaco, el valor para el subíndice "n" puede ser un número promedio y puede ser un número entero o no entero.
En modalidades preferidas, la unión covalente del anticuerpo al enlazador del fármaco se logra a través de un grupo funcional sulfhídrilo del anticuerpo que interactúa con un grupo funcional maleimida de un enlazador de fármaco para formar una succinimida sustituida con tio. El grupo funcional sulfhídrilo puede estar presente en la unidad de ligando en el estado natural del ligando, por ejemplo, en un residuo natural (reside el disulfuro intercatenario), o puede introducirse en el ligando mediante la modificación química o por ingeniería biológica, o una combinación de las dos. Se entenderá que una succinimida sustituida con el anticuerpo puede existir en forma(s) hidrolizada(s). Por ejemplo, en modalidades preferidas, un ADC se compone de una porción succinimida que, cuando se une al anticuerpo, está representado por la estructura de
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está compuesto por su correspondiente porción ácido-amida que cuando está unido al anticuerpo está representado por la estructura de:
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La línea ondulada indica un enlace con la porción del enlazador de fármaco.
El número promedio de unidades de enlazador de fármaco por unidad de ligando en una preparación a partir de una reacción de conjugación puede caracterizarse por medios convencionales tales como espectroscopía de masas, ensayo ELISA, HlC y HPLC. También puede determinarse la distribución cuantitativa de los conjugados Ligando-Enlazador-Fármaco en términos de p. En algunos casos, la separación, purificación y caracterización de conjugados de ligando-fármaco homogéneos, donde p es un cierto valor del conjugado ligando-fármaco con otras cargas de fármaco, puede lograrse por medios tales como HPLC de fase inversa o electroforesis.
VI. Aplicaciones terapéuticas
Los conjugados anticuerpo-fármaco dirigidos a CD123 descritos en la presente descripción pueden usarse para tratar un trastorno que expresa CD123, tal como un cáncer que expresa CD123. Típicamente, dichos cánceres muestran niveles detectables de CD123 medido a nivel de proteína (por ejemplo, mediante inmunoensayo) o de ARN. Algunos de dichos cánceres muestran niveles elevados de CD123 con respecto al tejido no canceroso del mismo tipo, preferentemente del mismo paciente. Opcionalmente, se mide un nivel de CD123 en un cáncer antes de realizar el tratamiento.
Los ejemplos de cánceres asociados con la expresión de CD123 incluyen enfermedades mieloides tales como leucemia mieloide aguda (AML) y síndrome mielodisplásico (MDS). Otros cánceres incluyen leucemia linfoblástica aguda de células B (B-ALL), leucemia de células pilosas, anemia de Fanconi, neoplasia de células dendríticas plasmocitoides blásticas (BPDCN), enfermedad de Hodgkin, leucemia linfoblástica aguda de células T inmaduras (T-ALL inmadura), linfoma de Burkitt, linfoma folicular, leucemia linfocítica crónica (CLL) o linfoma de células del manto. Los métodos de la presente descripción incluyen el tratamiento de un paciente que tiene un cáncer que expresa CD123 que comprende administrar al paciente un conjugado anticuerpo-fármaco de la presente invención. El cáncer puede ser cualquier cáncer que exprese CD123, lo que incluye, por ejemplo, AML, MDS, B-ALL, leucemia de células pilosas, anemia de Fanconi, BPDCN, enfermedad de Hodgkin, T-ALL inmadura, linfoma de Burkitt, linfoma folicular, CLL o linfoma de células del manto.
Algunas células cancerosas desarrollan resistencia a un agente terapéutico después de que el aumento de la expresión de una proteína aumenta el flujo del agente terapéutico fuera de la célula cancerosa. Dichas proteínas incluyen la glicoproteína P, la proteína asociada a la resistencia a múltiples fármacos, la proteína relacionada con la resistencia pulmonar y la proteína de resistencia del cáncer de mama. La detección de resistencia a fármacos en las células cancerosas puede realizarse por los expertos. Los anticuerpos o ensayos que detectan proteínas en el flujo están disponibles comercialmente de, por ejemplo, Promega, Millipore, Abcam y Sigma-Aldrich. El cáncer a tratar con los presentes métodos puede ser un cáncer multirresistente que expresa CD123. En algunos aspectos, el cáncer será una AML CD123+ resistente a múltiples fármacos.
Los conjugados anticuerpo-fármaco dirigidos a CD123 se administran en un régimen eficaz, lo que significa una dosis, ruta de administración y frecuencia de administración que retrasa el inicio, reduce la gravedad, inhibe un mayor deterioro y/o mejora al menos un signo o síntoma del cáncer.
Las dosis ilustrativas para los conjugados dirigidos a CD123 incluyen de aproximadamente 1,0 pg/kg a aproximadamente 10 mg/kg, 1,0 pg/kg a aproximadamente 5 mg/kg, 1,0 pg/kg a aproximadamente 5 mg/kg, de aproximadamente 1,0 pg/kg a aproximadamente 1,0 mg/kg, de aproximadamente 10 pg/kg a aproximadamente 3 mg/kg, de aproximadamente 10 pg/kg a aproximadamente 2 mg/kg, de aproximadamente 1,0 pg/kg a 1,0 mg/kg, o de aproximadamente 1,0 pg/kg a 500,0 pg/kg o de aproximadamente 1,0 pg/kg a 80,0, 100,0 o 200,0 pg/kg.
Las dosis ilustrativas para los conjugados de PBD dirigidos a CD123 son generalmente de aproximadamente 1,0 pg/kg a 1,0 mg/kg, o de aproximadamente 1,0 pg/kg a 500,0 pg/kg o de aproximadamente 1,0 pg/kg a 80,0, 100,0 o 200,0 pg/kg, aunque se contemplan dosis alternativas.
La administración puede ser por una variedad de rutas de administración. En ciertas modalidades, los conjugados se administran parenteralmente, tales como por la vía intravenosa, intramuscular o subcutánea. Para la administración de un ADC para el tratamiento del cáncer, el suministro puede realizarse en la circulación sistémica mediante la administración intravenosa o subcutánea. En una modalidad particular, la administración se suministra por la vía intravenosa. La administración intravenosa puede ser, por ejemplo, por infusión durante un período tal como 30-90 minutos o por una única inyección en bolo. En algunos aspectos, la administración será a través de un pulso IV lento (es decir, durante 30-60 segundos) en un catéter central insertado periféricamente.
La frecuencia de administración depende de muchos factores diferentes, incluyendo los medios de administración, el sitio objetivo, el estado fisiológico del paciente, si el paciente es humano o un animal, y otros medicamentos administrados. La frecuencia puede ser diaria, semanal, mensual, trimestral o a intervalos irregulares en respuesta a los cambios en la afección del paciente o la progresión del cáncer que se está tratando. Una frecuencia ilustrativa para la administración intravenosa es entre dos veces por semana y trimestralmente durante un curso continuo de tratamiento, aunque también es posible una dosificación más o menos frecuente. Otras frecuencias ilustrativas para la administración intravenosa son cada tres semanas o entre una vez a la semana o una vez al mes durante un curso continuo de tratamiento, aunque también es posible una dosificación más o menos frecuente. Para la administración subcutánea, una frecuencia de dosificación ilustrativa es diaria a mensual, aunque también es posible una dosificación más o menos frecuente.
Las composiciones farmacéuticas para la administración parenteral son preferentemente estériles y esencialmente isotónicas y se fabrican en condiciones de GMP. Las composiciones farmacéuticas pueden proporcionarse en forma de dosificación unitaria (es decir, la dosificación para una única administración). Las composiciones farmacéuticas pueden formularse con el uso de uno o más portadores, diluyentes, excipientes o auxiliares fisiológicamente aceptables. La formulación depende de la ruta de administración elegida. Para la inyección, los conjugados pueden formularse en soluciones acuosas, preferentemente en tampones fisiológicamente compatibles, tales como la solución de Hank, la solución de Ringer o la solución salina fisiológica o el tampón de acetato (para reducir las molestias en el lugar de la inyección). La solución puede contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Alternativamente, los anticuerpos pueden estar en forma liofilizada para su constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril libre de pirógenos, antes de su uso. La concentración de conjugado en una formulación líquida puede variar ampliamente. En algunos aspectos, el ADC está presente en una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 30 mg/ml, de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml, de aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml, de aproximadamente 2 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml, o de aproximadamente 2 mg/ml a aproximadamente 5 mg/ml.
El tratamiento con conjugados de la invención puede combinarse con quimioterapia, radiación, tratamiento con células madre, cirugía y otros tratamientos eficaces contra el trastorno que se está tratando, incluyendo el estándar de cuidados para el trastorno particular que se está tratando. Por consiguiente, la presente descripción abarca los métodos para tratar la enfermedad y los trastornos descritos en la presente descripción como una monoterapia o en terapia combinada con, por ejemplo, un estándar de cuidados o fármacos en investigación para el tratamiento de tales enfermedades y/o trastornos. Los métodos para el tratamiento del cáncer incluyen administrar a un paciente que lo necesita una cantidad eficaz de un conjugado anticuerpo-fármaco dirigido a CD123 de la presente invención en combinación con un agente contra el cáncer adicional u otro agente para tratar el cáncer.
Un ejemplo de una terapia combinada comprende un régimen 7+3 que implica siete días de citarabina y tres días de una antraciclina tal como (pero no limitado a) daunorrubicina o idarrubicina. En una modalidad, el régimen 7+3 de citarabina y una antraciclina se administra en una terapia combinada con un conjugado anticuerpo-fármaco dirigido a CD 123 de la presente invención. En una modalidad adicional, el régimen 7+3 de citarabina y una antraciclina se administra en una terapia combinada con un conjugado anticuerpo 7G3 humanizado-fármaco de la presente invención. En una modalidad adicional, el régimen 7+3 de citarabina y una antraciclina se administra en una terapia combinada con un h7G3EC-SGD-1910 de la presente invención. En algunas modalidades, la combinación de un conjugado anticuerpo-fármaco dirigido a CD123 y un régimen 7+3 se aplica a pacientes que tienen 60 años de edad o menos.
Otro ejemplo de una terapia combinada comprende un régimen 7+3 como se describió anteriormente más cladribina. En una modalidad, el régimen 7+3 más cladribina se administra en una terapia combinada con un conjugado anticuerpo-fármaco dirigido a CD123 de la presente invención. En una modalidad adicional, el régimen 7+3 más cladribina se administra en una terapia combinada con un conjugado anticuerpo 7G3 humanizado-fármaco de la presente invención. En una modalidad adicional, el régimen 7+3 más cladribina se administra en una terapia combinada con un h7G3EC-SGD-1910 de la presente invención.
Otro ejemplo de una terapia combinada comprende un agente hipometilante tal como (pero no limitado a) decitabina o azacitidina. En una modalidad, un agente hipometilante se administra en una terapia combinada con un conjugado anticuerpo-fármaco dirigido a CD123 de la presente invención. En una modalidad adicional, se administra un agente hipometilante en una terapia combinada con un conjugado anticuerpo 7G3 humanizado-fármaco de la presente invención. En una modalidad adicional, se administra un agente hipometilante en una terapia combinada con un h7G3EC-SGD-1910 de la presente invención.
En algunas modalidades, la combinación de un conjugado anticuerpo-fármaco dirigido a CD123 y un agente hipometilante se aplica a pacientes que no reciben tratamiento, que son refractarios a los tratamientos convencionales o que han recaído después de una respuesta a dichos tratamientos. En algunas modalidades, la combinación de un conjugado anticuerpo-fármaco dirigido a CD 123 y un agente hipometilante se usa para tratar pacientes de edad avanzada, por ejemplo, pacientes de 60 años de edad o mayores. Otros pacientes frágiles o no aptos pueden tratarse mediante el uso de la combinación de un conjugado anticuerpo-fármaco dirigido a CD123 y un agente hipometilante, por ejemplo, pacientes que rechazan o que no son candidatos para el tratamiento estándar de inducción/consolidación. Adicionalmente, los pacientes de edad avanzada con características de enfermedad de bajo riesgo también pueden tratarse mediante el uso de la combinación, dada la falta de beneficio observada con la quimioterapia intensiva. Las características de enfermedad de bajo riesgo se conocen y describen en, por ejemplo, Hou y otros, Leukemia 28:50-58 (2014).
Otros agentes y regímenes para la terapia combinada incluyen citarabina, citarabina a dosis alta, hidroxiurea, clofarabina, mitoxantrona, fludarabina, topotecan, etopósido, MEC (mitoxantrona, etopósido y citarabina), CLAG-M (cladribina, citarabina, mitoxantrona y filgrastim) y FLAG-IDA (fludarabina, citarabina, idarrubicina y filgrastim). En una modalidad, uno o más de hidroxiurea, clofarabina, mitoxantrona, fludarabina, topotecán, etopósido, MEC (mitomicina, etopósido y citarabina), CLAG-M (cladribina, citarabina, mitoxantrona y filgrastim) y FLAG-IDA (fludarabina, citarabina, idarrubicina y filgrastim) se administran en una terapia combinada con un conjugado anticuerpo-fármaco dirigido a CD 123 de la presente invención.
En una modalidad adicional, uno o más de citarabina, citarabina a dosis alta, hidroxiurea, clofarabina, mitoxantrona, fludarabina, topotecán, etopósido, MEC (mitoxantrona, etopósido y citarabina), CLAG-M (cladribina, citarabina, mitoxantrona y filgrastim), y FLAG-IDA (fludarabina, citarabina, idarrubicina y filgrastim) se administran en una terapia combinada con un conjugado anticuerpo 7G3 humanizado-fármaco de la presente invención.
En una modalidad adicional, uno o más de citarabina, citarabina a dosis alta, hidroxiurea, clofarabina, mitoxantrona, fludarabina, topotecán, etopósido, MEC (mitoxantrona, etopósido y citarabina), CLAG-M (cladribina, citarabina, mitoxantrona y filgrastim) y FLAG-IDA (fludarabina, citarabina, idarrubicina y filgrastim) se administran en una terapia combinada con un h7G3EC-SGD-1910 de la presente invención.
Ejemplos
Métodos
Ensayos de unión competitiva
Se transfirieron cien mil células positivas para CD123 a placas de 96 pocillos y se incubaron durante 1 hora en hielo con m7G3 marcado con AlexaFluor-488 5 nM y concentraciones crecientes (de 0,01 nM a 680 nM) de AcM 7G3 híbrido, humanizado o murino sin marcar. Las células se centrifugaron, se lavaron 3 veces con PBS y se resuspendieron en 125 pl de una solución de PBS BSA al 1 %. La fluorescencia se analizó mediante el uso de un citómetro de flujo, y el por ciento de señal fluorescente saturada se usó para determinar el por ciento de AcM 7G3 marcado unido. La EC50 se extrapoló mediante el ajuste de los datos a una curva dosis-respuesta sigmoidal con pendiente variable.
Ensayos de unión de saturación
Se transfirieron cien mil células positivas para CD123 (células HEK-293F transfectadas para expresar CD123 humano o de cynomolgus) a placas de 96 pocillos. Se añadió AcM CD123 marcado con AlexaFluor-488 en concentraciones que se encuentran en el intervalo de 1250 nM a 13,5 pM y las células se incubaron en hielo durante 30 minutos. Las células se sedimentaron por centrifugación, se lavaron 3 veces con una solución de PBS BSA al 1 % y se resuspendieron en 125 pl de PBS BSA al 1 %. La fluorescencia se analizó mediante el uso de un citómetro de flujo, y el por ciento de señal fluorescente saturada se usó para determinar el por ciento unido y para calcular posteriormente la Kd aparente.
Ensayo de citotoxicidad in vitro
Las líneas celulares de AML o las células de AML primaria se trataron con conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) durante 96 horas a 37 °C. En algunos experimentos, se incluyó ADC sin unión a antígeno como controles negativos. La viabilidad celular para las líneas celulares se midió mediante el uso de CelltiterGlo (Promega Corporation, Madison, WI) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las células se incubaron durante 25 minutos a temperatura ambiente con los reactivos CelltiterGlo y se midió la luminiscencia en un lector de placas Envision (Perkin Elmer, Waltham, MA). Para las células de AML primaria, la viabilidad de los blastos de AML se midió por citometría de flujo mediante el uso de Anexina V y tinción con yoduro de propidio. Los resultados se informan como IC50, la concentración de compuesto necesaria para producir una reducción del 50 % en la viabilidad en comparación con las células tratadas con vehículo (control = 100 %).
Estudio de actividad in vivo
Modelos de AML subcutánea
Ratones SCID se inocularon por vía subcutánea con células tumorales de AML, THP-1 5x106 o KG-1 2x106. El crecimiento tumoral se monitoreó con calibre y se calculó el volumen tumoral medio mediante el uso de la fórmula (0,5 x [longitud x ancho2]). Cuando el volumen tumoral medio alcanzó aproximadamente 100 mm3, los ratones (n=8/grupo) no se trataron o se dosificaron por vía intraperitoneal con una dosis única de ADC CD123 o ADC de control sin unión. Para el modelo KG-1, los ratones se trataron con IVIg humana (inyección intraperitoneal única de 10 mg/kg) aproximadamente cuatro horas antes de la administración del tratamiento terapéutico para minimizar la interacción del ADC de prueba con los receptores Fc en las células de AML. Los ratones se sacrificaron cuando los volúmenes tumorales alcanzaron aproximadamente 1000 mm3. Todos los procedimientos con animales se realizaron bajo un protocolo aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales en una instalación acreditada por la Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care.
Producción de conjugados anticuerpo-fármaco
Los conjugados anticuerpo-fármaco se prepararon como se describe en el documento WO2011/130613 mediante el uso de los anticuerpos anti-CD 123 descritos en la presente descripción. La preparación de mutantes de cisteína de AcM IgG1 se describe generalmente en el documento US20100158909. El enlazador de fármacos SGD-1910 se conjugó con el anticuerpo anti-CD 123 a través de un grupo tiol de un residuo de cisteína introducido en la posición 239 de la cadena de IgG1 del anticuerpo y la carga de fármaco promedio fue de aproximadamente 2 fármacos por anticuerpo. Los anticuerpos con cisteína en la posición 239 portan la designación e C.
Resultados
Diseño y prueba de AcM humanizados
Se construyeron varios anticuerpos 7G3 humanizados mediante el uso de la región variable de la cadena pesada hIGHv1-2.02/IGHJ1.01 de la línea germinal humana y la región variable de la cadena ligera hIGKV4-1.01/IGHJ2.01 de la línea germinal humana como las secuencias aceptoras humanas. Los anticuerpos diferían en la selección de los residuos de aminoácidos para volver a mutar al anticuerpo del ratón o la secuencia de la línea germinal del ratón. El anticuerpo designado HCLA (la cadena pesada como se establece en la SEQ ID NO:1 (vHC) y la cadena ligera como se establece en la SEQ ID NO:2 (vLA)) se seleccionó como el anticuerpo 7G3 humanizado principal en base a sus (i) características de unión, (ii) capacidad para suministrar el fármaco y (iii) número de retromutaciones en comparación con las otras variantes.
Los anticuerpos designados HALA (anticuerpo que tiene la región variable de la cadena pesada designada vHA y la región variable de la cadena ligera designada vLA), HALB (anticuerpo que tiene la región variable de la cadena pesada designada vHA y la región variable de la cadena ligera designada vLB), HBLA (anticuerpo que tiene la región variable de la cadena pesada designada vHB y la región variable de la cadena ligera designada vLA), HBLB (anticuerpo que tiene la región variable de la cadena pesada designada vHB y la región variable de la cadena ligera designada vLB), HCLB (anticuerpo que tiene la región variable de la cadena pesada designada vHC y la región variable de la cadena ligera designada vLB) se describen, además, en la presente descripción, pero no forman parte de la presente invención. Ver las Figuras 5 y 6 para las secuencias de vHA, vHB, vHC, vLA y vLB. Las afinidades de unión para las formas quiméricas y diversas humanizadas de 7G3 son similares, ya sea que se prueben frente a una línea celular de AML que expresa CD123 (Tabla 1) o células HEK293 que sobreexpresan CD123 humano o de cynomolgus (Tabla 2).
Tabla 1- Determinaciones de unión por EC50 para variantes de AcM CD123 humanizado en células de AML Molm-13 que expresan CD123 humano
Figure imgf000022_0001
Tabla 2- Mediciones de afinidad de AcM CD123 humanizados por células que expresan CD123 humano y de cynomolgus
Figure imgf000023_0003
Actividad antitumoral in vitro de h7G3EC-SGD-1910
La actividad citotóxica del anticuerpo h7G3EC conjugado a SGD-1910 (enlazador de fármaco dímero de pirrolobenzodiazepina) se evaluó contra un panel de líneas celulares de AML que expresaban tanto CD123 como CD33. La actividad se comparó con la de un anticuerpo anti-CD33 conjugado a SGD-1910 (CD33-SGD-1910). Como se muestra en la Tabla 3, las líneas celulares de AML generalmente expresaron números de copias bajos de CD123 en comparación con CD33. El ADC h7G3EC-SGD-1910 fue activo contra 10 de 11 líneas celulares de AML positivas para CD123 (IC50 media para líneas celulares sensibles, 7 ng/ml con un intervalo de 0,02 a 38 ng/ml), mientras que CD33-SGD-1910 tuvo actividad potente frente a 12 de 12 líneas celulares de AML probadas (IC50 media, 26 ng/ml con un intervalo de 0,04 a 181 ng/ml). Las Figuras 1 y 2 representan la potente actividad de h7G3EC-SGD-1910 contra dos líneas celulares de AML positivas para MDR que expresan pocas copias de CD123 en comparación con CD33. La línea celular KG1-INV expresa 5000 copias de CD123 en comparación con las 7300 copias de CD33. La línea celular Kasumi-1 expresa 2000 copias de CD123 en comparación con las 16 000 copias de CD33. No se observó actividad citotóxica con h7G3EC-SGD-1910 contra la línea celular de AML HEL9217 que no expresaba CD123. Además, se encontró que h7G3EC-SGD-1910 era activo contra 15 de 17 muestras primarias aisladas de pacientes con AML (ver Tabla 4, IC50 media para muestras sensibles, 1 ng/ml con un intervalo de 0,06 a 6,5 ng/ml). En comparación, el CD33-SGD-1910 fue activo contra 10 de 17 muestras de AML primaria (IC50 media para muestras sensibles, 2 ng/ml con un intervalo de 0,23 a 7,7 ng/ml). No se observó actividad cuando se probó un ADC sin unión contra las líneas celulares de AML o las muestras de AML primaria (IC50 > 1000 ng/ml). En conjunto, estos datos demuestran que h7G3EC-SGD-1910 se dirigió selectivamente a las células que expresan CD123 y exhibió una potente actividad citotóxica hacia las líneas celulares de AML y las muestras de pacientes con AML primaria independientemente del estado de MDR.
Tabla 3 - Actividades in vitro de los conjugados de fármaco h7G3EC-SGD-1910 y CD33-SGD-1910 contra líneas celulares de AML
Figure imgf000023_0001
Tabla 4- Actividades in vitro de los conjugados de fármaco h7G3EC-1910 y CD33-SGD-1910 contra muestras de AML primaria
Figure imgf000023_0002
(continuación)
Figure imgf000024_0001
Actividad antitumoral in vivo de h7G3EC-SGD-1910
La actividad de h7G3EC-SGD-1910 se probó en dos modelos de xenoinjerto de AML subcutánea, THP-1 y KG-1. Los ratones SCID con tumores establecidos (~ 100 mm3) se dosificaron con h7G3EC-SGD-1910 o ADC de control sin unión (h00EC-SGD-1910) como se representa en la Figura 3 para el modelo THP-1 negativo para MDR (8000 copias de CD123; 18000 copias de CD33) y en la Figura 4 para el modelo tumoral KG-1 positivo para MDR (7000 copias de CD123, 20000 copias de CD33). El tratamiento con h7G3EC-SGD-1910 disminuyó significativamente el crecimiento tumoral en comparación con los ratones tratados con ADC de control sin unión y no tratados (p <0,0001). La actividad antitumoral observada con el ADC dirigido a CD123 fue dependiente de la dosis. Para los tumores THP-1, una dosis única de 0,1 mg/kg resultó en una regresión tumoral completa y duradera en 2 de 8 ratones tratados (Figura 3). Una dosis más alta de 0,3 mg/kg resultó en una regresión completa y duradera en 8 de los 8 ratones tratados, y al final del estudio, el día 85, no se había alcanzado la mediana del día hasta la cuadruplicación del tumor. En el modelo tumoral KG-1 positivo para MDR (Figura 4), una dosis única de h7G3EC-SGD-1910 de 0,1 mg/kg resultó en una regresión tumoral completa y duradera en 1 de 8 ratones tratados. Por otro lado, una dosis única de 0,3 mg/kg produjo 1 regresión completa y 3 regresiones tumorales completas y duraderas de 8 ratones tratados (p <0,008 en comparación con los ratones no tratados). Por el contrario, los tumores en los ratones dosificados de manera similar con el ADC de control sin unión (h00EC-SGD-1910) se habían cuadruplicado en volumen para el día 35 y no eran significativamente diferentes de los ratones no tratados. Las respuestas antitumorales de los ratones dosificados con 0,1 mg/kg o 0,3 mg/kg de CD33-SGD-1910 fueron similares a la de h7G3EC-SGD-1910 (Figura 4). Los datos demuestran que h7G3EC-SGD-1910 muestra una actividad antitumoral significativa dependiente de la dosis en modelos de xenoinjerto de AML que expresan niveles más bajos de antígeno CD123 en comparación con CD33.
Modelos de AML in vivo adicionales
Métodos
Modelo de AML subcutánea
Se inocularon ratones SCID por vía subcutánea con células tumorales de AML, HNT-345x106 El crecimiento tumoral se monitoreó con calibre y se calculó el volumen tumoral medio mediante el uso de la fórmula (0,5 x [longitud x ancho2]). Cuando el volumen tumoral medio alcanzó aproximadamente 100 mm3, los ratones (n=8/grupo) no se trataron o se dosificaron por vía intraperitoneal con una dosis única de ADC CD123 o ADC de control sin unión. Los ratones se sacrificaron cuando los volúmenes tumorales alcanzaron aproximadamente 1000 mm3. Todos los procedimientos con animales se realizaron bajo un protocolo aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales en una instalación acreditada por la Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care.
Modelos de AML diseminada
Para el modelo Molm-13, se inyectaron 5x106 células en la vena lateral de la cola de los ratones SCID y se dejaron sin tratar o se dosificaron por vía intraperitoneal con una dosis única de ADC CD123 o ADC de control sin unión 7 días más tarde. Los ratones se trataron con IVIg humana (inyección intraperitoneal única de 10 mg/kg) aproximadamente cuatro horas antes de la administración del tratamiento terapéutico para minimizar la interacción del ADC de prueba con los receptores Fc en las células de AML. Los animales se observaron y sacrificaron en busca de evidencia de enfermedad progresiva, tal como parálisis de las extremidades posteriores o pérdida de peso de más del 15 %.
Para el modelo de xenoinjerto de AML primaria, se irradiaron ratones NOD/SCID/IL-2Rynull (NSG; The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) con 1 Gy un día antes de la inyección intravenosa de 7x105 células de leucemia primaria de un paciente con AML recurrente (06227; AllCells, Emeryville, CA). La carga de la enfermedad en la sangre y la médula ósea se monitoreó periódicamente mediante tinción por citometría de flujo de células CD45+/CD33+ humanas, y el tratamiento se inició cuando la carga tumoral se acercó al 65 %. Para monitorear los efectos del tratamiento, se obtuvieron pequeñas cantidades de médula ósea de la región de la escotadura femoral entre los epicóndilos de ratones bajo anestesia y se analizaron por citometría de flujo. Los datos se trazaron y analizaron mediante el uso de GraphPad Prism.
Resultados
La actividad de h7G3EC-SGD-1910 se probó adicionalmente en un modelo de xenoinjerto de AML subcutánea, HNT-34, y dos modelos de AML diseminada, Molm-13 y un modelo de AML primario. Los ratones SCID con tumores HNT-34 MDR negativos para MDR (~ 100 mm3) establecidos (número de copias de CD123 ~ 24 000) se dosificaron con h7G3EC-SGD-1910 o ADC de control sin unión como se representa en la Figura 7. El tratamiento con h7G3EC-SGD-1910 disminuyó significativamente el crecimiento tumoral en comparación con los ratones tratados con ADC de control sin unión y no tratados (p <0,0001). La actividad antitumoral observada con el ADC dirigido a CD123 fue dependiente de la dosis. Una dosis única de 0,025 mg/kg resultó en una regresión tumoral completa y duradera en 2 de 8 ratones tratados (Figura 7). Una dosis más alta de 0,075 mg/kg resultó en una regresión completa y duradera en 7 de 8 ratones tratados. La mediana del día hasta que el tumor se cuadruplicó para los grupos ADC-CD123 no se había alcanzado al final del estudio el día 62.
En el modelo diseminado de AML Molm-13 negativo para MDR (Figura 8, número de copias de CD123 ~ 20000), una dosis única de h7G3EC-SGD-1910 de 0,01 mg/kg o 0,03 mg/kg administrada el día 7 mejoró significativamente la supervivencia de los ratones. La supervivencia de los ratones tratados con ADC-CD123 fue mayor de 80 días en comparación con 22 a 25 días para los grupos de control (p <0,0001 en comparación con ADC de control sin unión, hIVIg o no tratado). La respuesta antileucémica de ADC-CD123 también se demostró en un modelo de xenoinjerto mediante el uso de células de leucemia primaria (MDR+) de un paciente con AML recurrente. Las células de leucemia humana primaria se trasplantaron en ratones NSG y se les permitió crecer hasta una carga tumoral del 65 % en la médula ósea (número de copias de CD123 ~ 2200). Los ratones se dosificaron con 0,3 mg/kg de CD123-SGD-1910 el día 0 y el día 11 (Figura 9). La carga tumoral en los ratones tratados se redujo significativamente en el día 24 y permaneció a un nivel reducido hasta el final del estudio el día 64.
Los datos demuestran que h7G3EC-SGD-1910 tiene una actividad antitumoral significativa dependiente de la dosis en varios modelos de xenoinjerto de AML, lo que incluye modelos que utilizan células tumorales primarias de pacientes humanos con AML, que expresan diferentes niveles de antígeno CD123 e independientemente del estado de MDR. Listado de secuencias informal
SEQ ID NO:1, Región variable de la cadena pesada para HC QVQLVQSGAEVKKPGASVKMSCKASGYTFTDYYMKWVKQAPGQGLEWIGDIIPSNGA
TFYNQKFKGKATLTVDRSISTAYMHLNRLRSDDTAVYYCTRSHLLRASWFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:2, Región variable de la cadena ligera para LA DFVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQPPKLLIYWAS TRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYSYPYTFGQGTKLEIKR SEQ ID NO:3, Cadena pesada para HC con IgG1 mutante que tiene una sustitución de cisteína en la posición 239, de acuerdo con el índice EU como se establece en Kabat QVQLVQSGAEVKKPGASVKMSCKASGYTFTDYYMKWVKQAPGQGLEWIGDIIPSNGATFYNQKFKGKATLT VDRSISTAYMHLNRLRSDDTAVYYCTRSHLLRASWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK KVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPCVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHN AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO:4, Cadena ligera para LA DFVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSG SGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    Un compuesto de conjugado anticuerpo anti-CD 123-fármaco que tiene la fórmula:
    Figure imgf000038_0001
    o una sal, solvato o solvato de la sal farmacéuticamente; en donde
    el subíndice n es 1 o 3;
    el subíndice m es de 2 a 5, particularmente en donde m es 5,
    Ab es un anticuerpo anti-CD 123 intacto o un fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:1; y una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:2;
    el subíndice p es un número entero de 1 a 4, particularmente en donde p es 1 o 2.
    El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, que tiene la fórmula:
    Figure imgf000038_0002
    o una sal, solvato o solvato de la sal farmacéuticamente, o que tiene la fórmula:
    Figure imgf000038_0003
    o una sal, solvato o solvato de la sal farmacéuticamente.
    El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la unión a Ab es a través de un átomo de azufre de un residuo de cisteína diseñado por ingeniería genética de Ab.
    El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde Ab comprende una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:1 fusionada a una región constante de la cadena pesada humana; y una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:2 fusionada a una región constante de la cadena ligera humana, particularmente en donde Ab comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:3 y un cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:4 y la unión a Ab es a través de un átomo de azufre o un residuo de cisteína diseñado por ingeniería genética en la posición 239 de la región constante de la cadena pesada, de acuerdo con el sistema de numeración del índice EU.
    5. Una composición farmacéutica que comprende una población de moléculas de conjugado anticuerpo anti-CD123-fármaco de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores,
    en donde la carga de fármaco promedio de la composición es aproximadamente 2.
    6. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 5 en forma acuosa.
    7. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 5 en forma liofilizada.
    8. Una composición de conjugado anticuerpo-fármaco que comprende una población de moléculas de conjugado anticuerpo anti-CD 123-fármaco de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4,
    en donde la carga de fármaco promedio de la composición es aproximadamente 2.
    9. Una composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 o 6, para su uso en un método para tratar un paciente que tiene un cáncer que expresa CD123 que comprende administrar al paciente un régimen eficaz,
    particularmente en donde el cáncer es leucemia mieloide aguda (AML),
    o particularmente en donde el cáncer es síndrome mielodisplásico (SMD), leucemia linfoblástica aguda de células B (B-ALL), leucemia de células pilosas, anemia de Fanconi, neoplasia de células dendríticas plasmocitoides blásticas (BPDCN), enfermedad de Hodgkin, leucemia linfoblástica aguda de células T inmaduras (T-ALL inmaduras), linfoma de Burkitt, linfoma folicular, leucemia linfocítica crónica (CLL) o linfoma de células del manto.
    10. Un anticuerpo anti-CD 123 intacto o un fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:1, siempre y cuando H20 esté ocupado por M o V, H38 esté ocupado por K o R, H48 esté ocupado por I, H66 esté ocupado por K o R, H67 esté ocupado por A, H69 esté ocupado por L, H71 esté ocupado por V, H73 esté ocupado por R, H81 esté ocupado por E o H, H82A esté ocupado por S o N, y H93 esté ocupado por T; y una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:2 siempre y cuando L2 esté ocupado por F, L19 esté ocupado por A o V, L21 esté ocupado por I o M, L22 esté ocupado por N o S, L38 esté ocupado por L, en donde el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno comprende una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:1; y una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:2.
    11. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 10, que comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:3 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:4.
    12. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo intacto o el fragmento de unión a antígeno de conformidad con la reivindicación 10 u 11 conjugado a un agente citotóxico, particularmente
    en donde el agente citotóxico es un maitansinoide, auristatina, pirrolo[1,4]benzodiazepina, indolinobenzodiazepina u oxazolidinobenzodiazepina, particularmente
    en donde el agente citotóxico es
    Figure imgf000039_0001
    en donde el subíndice n es 1 o 3; o una sal, solvato o solvato de la sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
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IL (1) IL255526B (es)
MX (1) MX385456B (es)
TW (1) TW201709932A (es)
WO (1) WO2016201065A1 (es)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201709932A (zh) 2015-06-12 2017-03-16 西雅圖遺傳學公司 Ｃｄ１２３抗體及其共軛物
SG10201908685QA (en) 2015-06-22 2019-10-30 Bayer Pharma AG Antibody drug conjugates (adcs) and antibody prodrug conjugates (apdcs) with enzymatically cleavable groups
US11027021B2 (en) * 2016-03-15 2021-06-08 Seagen Inc. Combinations of PBD-based antibody drug conjugates with Bcl-2 inhibitors
WO2017214433A1 (en) * 2016-06-09 2017-12-14 Seattle Genetics, Inc. Combinations of pbd-based antibody drug conjugates with flt3 inhibitors
CA3027445A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Specific antibody-drug-conjugates (adcs) with ksp inhibitors and anti-cd123-antibodies
MX2019007641A (es) 2016-12-21 2019-09-09 Bayer Pharma AG Conjugados de ligando-farmaco (adcs) con grupos escindibles enzimaticamente.
WO2018114804A1 (de) * 2016-12-21 2018-06-28 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Spezifische antikörper-wirkstoff-konjugate (adcs) mit ksp-inhibitoren
KR20200032243A (ko) 2017-02-08 2020-03-25 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 피롤로벤조디아제핀-항체 컨주게이트
TW201836647A (zh) 2017-04-06 2018-10-16 美商艾伯維有限公司 抗－ｐｒｌｒ抗體藥物軛合物（ａｄｃ）及其用途
CN111065638B (zh) 2017-08-18 2021-04-09 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂䓬缀合物
PE20201255A1 (es) * 2017-10-27 2020-11-16 Pfizer Anticuerpos y conjugados de anticuerpo-farmaco especificos para cd123 y usos de los mismos
ES2920123T3 (es) * 2017-11-14 2022-08-01 Medimmune Ltd Conjugados de pirrolobenzodiazepina
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
TW202519270A (zh) 2018-06-07 2025-05-16 美商思進公司 喜樹鹼結合物
MA54088A (fr) * 2018-10-30 2022-03-16 Immunogen Inc Procédés de traitement faisant appel à des immunoconjugués anti-cd123
WO2020092344A1 (en) * 2018-10-31 2020-05-07 Health Research, Inc. Combination treatment with anti-cd123 antibody drug conjugate and parp inhibitor
IL286326B2 (en) 2019-03-15 2025-10-01 Medimmune Ltd Azatidobenzodiazepine dimers and conjugates containing them for use in the treatment of cancer
WO2020191306A1 (en) * 2019-03-21 2020-09-24 Immunogen, Inc. Methods of preparing cell-binding agent-drug conjugates
CN113853217A (zh) 2019-04-29 2021-12-28 伊缪诺金公司 包含抗cd123免疫缀合物的治疗组合
US11434297B2 (en) 2019-05-04 2022-09-06 Inhibrx, Inc. CD123-binding polypeptides and uses thereof
EP3769816A1 (en) * 2019-07-25 2021-01-27 Ospedale Pediatrico Bambino Gesù Car-cd123 vector and uses thereof
US11814428B2 (en) * 2019-09-19 2023-11-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-PTCRA antibody-drug conjugates and uses thereof
US20230173093A1 (en) 2020-04-10 2023-06-08 Seagen Inc. Charge variant linkers
EP4271709A1 (en) 2020-12-31 2023-11-08 Sanofi Multifunctional natural killer (nk) cell engagers binding to nkp46 and cd123
US12036286B2 (en) 2021-03-18 2024-07-16 Seagen Inc. Selective drug release from internalized conjugates of biologically active compounds
CN116018351A (zh) * 2021-08-16 2023-04-25 上海优替济生生物医药有限公司 靶向cd123的抗体、嵌合抗原受体及其用途
EP4493223A2 (en) 2022-03-17 2025-01-22 Seagen Inc. Camptothecin conjugates
WO2023227790A1 (en) 2022-05-27 2023-11-30 Sanofi Natural killer (nk) cell engagers binding to nkp46 and bcma variants with fc-engineering
EP4634227A1 (en) 2022-12-13 2025-10-22 Seagen Inc. Site-specific engineered cysteine antibody drug conjugates
WO2025003511A1 (en) * 2023-06-30 2025-01-02 Morphosys Ag Dual-targeting of flt3 and cd123 co-expressing tumor cells by functional complementation of cycat® halfbody molecules
WO2025117641A2 (en) * 2023-12-01 2025-06-05 Tavotek Biotherapeutics (Hong Kong) Limited ANTIBODIES TARGETING DISEASE ASSOCIATED ANTIGEN AND γδ T CELL RECEPTORS AND USES THEREOF
WO2025149947A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Seagen Inc. Antibody-drug conjugates

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
EP0590058B1 (en) 1991-06-14 2003-11-26 Genentech, Inc. HUMANIZED Heregulin ANTIBODy
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
WO2004006955A1 (en) 2001-07-12 2004-01-22 Jefferson Foote Super humanized antibodies
DE10355904A1 (de) * 2003-11-29 2005-06-30 Merck Patent Gmbh Feste Formen von anti-EGFR-Antikörpern
EP1996182A4 (en) * 2006-02-27 2009-08-12 Univ Johns Hopkins CANCER TREATMENT WITH GAMMA SECRETASE INHIBITORS
ES2523915T5 (es) 2006-12-01 2022-05-26 Seagen Inc Agentes de unión a la diana variantes y usos de los mismos
WO2008127735A1 (en) * 2007-04-13 2008-10-23 Stemline Therapeutics, Inc. Il3ralpha antibody conjugates and uses thereof
EP2014681A1 (en) 2007-07-12 2009-01-14 Pierre Fabre Medicament Novel antibodies inhibiting c-met dimerization, and uses thereof
JP2011505386A (ja) 2007-12-06 2011-02-24 シーエスエル、リミテッド 白血病性幹細胞の阻害方法
CA2789810C (en) * 2010-02-17 2020-12-01 Csl Limited Compositions and methods for targeting type 1 interferon-producing cells
NZ602932A (en) * 2010-04-15 2014-08-29 Seattle Genetics Inc Targeted pyrrolobenzodiazapine conjugates
US8920803B2 (en) * 2010-06-15 2014-12-30 Csl Limited Immunotherapeutic method involving CD123 (IL-3Rα) antibodies and immunostimulating complex
NZ604510A (en) * 2010-08-17 2013-10-25 Csl Ltd Dilutable biocidal compositions and methods of use
BR112014000630A2 (pt) * 2011-07-11 2017-02-14 Glenmark Pharmaceuticals Sa anticorpo antagonista ou fragmento do mesmo que se liga a uma ox40 humana, epítopo sobre o domínio extracelular ox40 humano, ácido nucleíco isolado, vetor, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo ou fragmento do mesmo, composição imunoconjugado, método para tratar um distúrbio mediado por ox40 em um indivíduo, uso de um anticorpo ou fragmento do mesmo, artigo de manufatura, kit e método para classificação in vitro
US20130309223A1 (en) * 2012-05-18 2013-11-21 Seattle Genetics, Inc. CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer
JP6392764B2 (ja) * 2012-10-12 2018-09-19 エイディーシー・セラピューティクス・エス・アーＡｄｃ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｓａ ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体
AU2014216959A1 (en) * 2013-02-15 2015-10-01 Perseus Proteomics Inc. Anti-CDH3 humanized antibody, drug conjugate thereof, and use thereof
WO2014130879A2 (en) * 2013-02-22 2014-08-28 Stem Centrx, Inc. Novel antibody conjugates and uses thereof
MX385713B (es) 2013-03-13 2025-03-18 Seagen Inc Ciclodextrina y formulaciones de conjugados anticuerpo-fármaco.
WO2014138805A1 (en) * 2013-03-14 2014-09-18 Csl Limited Anti il-3r alpha agents and uses thereof
EP2839842A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof
TW201709932A (zh) 2015-06-12 2017-03-16 西雅圖遺傳學公司 Ｃｄ１２３抗體及其共軛物

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EA036882B1 (ru) 2020-12-30

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