ES2880123T3 - Acido (25,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxilisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico cristalino y usos del mismo - Google Patents

Abstract

Una forma cristalina de ácido libre de ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)- 4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico (I') donde la forma cristalina se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos de difracción a valores de 2θ de 6,51 ± 0,20, 11,62 ± 0,20, 13,05 ± 0,20, 15,07 ± 0,20 y 23,28 ± 0,20.

Description

DESCRIPCIÓN

Ácido (2S,4R) -5-(5'-cloro-2'-fluoro- [1,1 '-bifenil] -4-il)-2-(etoximetil) -4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido) -2-metilpentanoico cristalino y usos del mismo

REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS

Esta solicitud reivindica el beneficio de Solicitud Provisional de EE. UU. n°s 62/305.393 y 62/346.336, depositadas el 8 de marzo de 2016 y el 6 de junio de 2016, respectivamente.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a una novedosa forma cristalina que tiene actividad inhibidora de neprilisina. La invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto, procedimiento de preparación del compuesto y compuestos para su uso en procedimientos de uso del compuesto para tratar enfermedades tales como hipertensión, insuficiencia cardíaca y enfermedad renal.

ESTADO DE LA TÉCNICA

La neprilisina (endopeptidasa neutra, EC 3.4.24.11) (NEP), es una metalopeptidasa de Zn2+ unida a la membrana endotelial que se encuentra en muchos órganos y tejidos, incluidos el cerebro, los riñones, los pulmones, el tracto gastrointestinal, el corazón y la vasculatura periférica. NEP degrada e inactiva varios péptidos endógenos, tales como encefalinas, bradicinina circulante, péptidos de angiotensina y péptidos natriuréticos, los últimos de los cuales tienen varios efectos que incluyen, por ejemplo, vasodilatación y natriuresis/diuresis, así como inhibición de la hipertrofia cardíaca y fibrosis ventricular. Por lo tanto, NEP desempeña un papel importante en la homeostasis de la presión arterial y la salud cardiovascular.

Los inhibidores de NEP, tales como tiorfan, candoxatril y candoxatrilat, se han estudiado como posibles tratamientos. También se conocen compuestos que inhiben tanto NEP como la enzima convertidora de angiotensina-I (ECA), e incluyen omapatrilat, gempatrilat y sampatrilat. Esta última clase de compuestos, denominados inhibidores de vasopeptidasa, se describe en Robl y col. (1999) Exp Opin. Ther. Patents 9(12):1665-1677.

Varios inhibidores de NEP se describen en la patente de EE. UU. n.° 9.126.956 de Fleury y col. Muchos de estos compuestos tienen una o más propiedades deseables. Sin embargo, para usar eficazmente un compuesto inhibidor de NEP como agente terapéutico, sería deseable tener una forma en estado sólido que se pueda fabricar fácilmente y que tenga una estabilidad química y física aceptable. Por ejemplo, sería muy deseable tener una forma física que sea térmicamente estable a una temperatura razonablemente alta, facilitando así el procesamiento y almacenamiento del material, y un tamaño de cristal pequeño que aumente la disolución, biodisponibilidad y absorción, permitiendo así características favorables de suministro de fármacos. Los sólidos cristalinos se prefieren generalmente a las formas amorfas, para mejorar la pureza y estabilidad del producto fabricado. Sin embargo, la formación de formas cristalinas de compuestos orgánicos es muy impredecible. No existen procedimientos fiables para predecir qué forma de un compuesto orgánico, si es que hay alguna, será cristalina. Además, no existen procedimientos para predecir qué forma cristalina, si es que la hay, tendrá las propiedades físicas deseadas para su uso como agentes farmacéuticos. En consecuencia, existe la necesidad de una forma cristalina estable que tenga un punto de fusión razonablemente alto y un tamaño de cristal pequeño.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona una novedosa forma cristalina del Compuesto I, que se ha descubierto que posee actividad inhibidora de la enzima neprilisina (NEP). En consecuencia, se espera que este compuesto sea útil y ventajoso como agente terapéutico para tratar afecciones tales como hipertensión, hipertensión pulmonar, insuficiencia cardíaca y enfermedad renal. La estructura del Compuesto I es:

La invención se refiere a una forma cristalina de ácido libre de ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico donde la forma cristalina se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos de difracción a valores de 20 de 6,51 ± 0,20, 11,62 ± 0,20, 13,05 ± 0,20, 15,07 ± 0,20 y 23,28 ± 0,20. (Compuesto I'). En una realización, el Compuesto I' es anhidro, no higroscópico o ambos. El Compuesto I' también puede denominarse forma cristalina I'.

Otro aspecto de la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables y el Compuesto I'. Tales composiciones pueden contener opcionalmente otros agentes terapéuticos, que incluyen, pero no se limitan a, un antagonista del receptor AT1 , un inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina, un inhibidor de fosfodiesterasa (PDE), un inhibidor de renina, un diurético, o combinaciones de los mismos.15*20

El Compuesto I' de la invención posee actividad inhibidora de la enzima NEP y, por lo tanto, se espera que sea útil como agente terapéutico para tratar a pacientes que padecen una enfermedad o trastorno que se trata inhibiendo la enzima NEP o aumentando los niveles de sus sustratos peptídicos. Otro aspecto de la invención se refiere al Compuesto I' para su uso en un procedimiento de tratamiento de hipertensión, hipertensión pulmonar, insuficiencia cardíaca o enfermedad renal, que comprende administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del Compuesto I'.

Otro aspecto más de la invención se refiere a procedimientos útiles para preparar la forma cristalina, el Compuesto I'.

Otro aspecto más de la invención se refiere a la forma cristalina, el Compuesto I', para su uso en terapia. Otros aspectos y realizaciones de la invención se describen en esta invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

Diversos aspectos de la presente invención se ilustran con referencia a los dibujos adjuntos.

La Fig. 1 muestra un patrón de difracción de rayos X en polvo (PXRD) de ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico cristalino (I').

La Fig. 2 muestra un termograma de calorimetría diferencial de barrido (DSC) de la forma cristalina ( I').

La Fig. 3 muestra un perfil de gravimetría térmica para la forma cristalina (I').

La Fig. 4 muestra una isoterma de sorción de humedad dinámica (DMS) de la forma cristalina (I').

La Fig. 5 es una imagen de microscopio de luz polarizada (PLM) de la forma cristalina (I').

La Fig. 6 muestra el cambio del valor inicial en el cGMP plasmático medio (nM) en sujetos sanos que no recibieron ninguna dosis o recibieron una dosis única de 50 mg, 100 mg, 200 mg, 400 mg y 600 mg durante 24 horas. La Fig. 7 ilustra el cambio n veces mayor en cGMP del valor inicial frente a la dosis (mg) para los datos generados en un estudio de dosis única ascendente.

La Fig. 8 es la concentración de Compuesto I (ng/ml) frente al tiempo (h) para los datos generados en un estudio de dosis única ascendente.

La Fig. 9 muestra el % de eliminación renal de sacubitrilo frente al Compuesto I en sujetos sanos.

La Fig. 10 muestra el cambio n veces mayor del valor inicial en el cGMP plasmático medio (nM) en el día 14 en sujetos adultos y ancianos sanos que no recibieron ninguna dosis o recibieron una dosis única de 10 mg, 50 mg, 100 mg y 200 mg durante 24 horas.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

En un aspecto, la invención se refiere al ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico cristalino donde la forma cristalina se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos de difracción a valores de 20 de 6,51 ± 0,20, 11,62 ± 0,20, 13,05 ± 0,20, 15,07 ± 0,20 y 23,28 ± 0,20 (Compuesto I').

El Compuesto I' de la invención contiene dos centros quirales y, por lo tanto, un compuesto de tal estructura puede existir en diversas formas estereoisoméricas. Específicamente, los átomos de carbono pueden tener una configuración (R,R), (S,S), (S,R) o (R,S) particular o están enriquecidos en una forma estereoisomérica que tiene dicha configuración. El Compuesto I', como se muestra y se nombra se encuentra en la configuración (2S,4R). Los expertos en la materia entenderán que pueden estar presentes cantidades menores de los otros estereoisómeros en las composiciones de la invención salvo que se indique lo contrario, siempre que la utilidad de la composición en su conjunto no se elimine por la presencia de dichos otros isómeros. Los estereoisómeros individuales pueden obtenerse mediante varios procedimientos que son bien conocidos en la técnica, incluida la cromatografía quiral usando una fase estacionaria quiral adecuada o un soporte, o convirtiéndolos químicamente en diastereoisómeros, separando los diastereoisómeros por medios convencionales tales como cromatografía o recristalización, y a continuación regenerando el estereoisómero original.

El Compuesto I' de la invención posee actividad inhibidora de neprilisina (NEP), es decir, el compuesto es capaz de inhibir la actividad catalítica enzimática. Una medida de la capacidad de un compuesto para inhibir la actividad NEP es la constante de inhibición (pKⁱ). El valor de pKⁱ es el logaritmo negativo de base 10 de la constante de disociación (Kⁱ), que se indica típicamente en unidades molares. El compuesto de la invención tiene un pKⁱ de NEP > 9,0. Se pueden demostrar otras propiedades y utilidades del Compuesto I' usando ensayos in vitro e in vivo que son bien conocidos por los expertos en la materia, que incluyen, entre otros, los descritos en Patente de EE. UU. n° 9.126.956.

El Compuesto I', así como los compuestos usados en su síntesis, también pueden incluir compuestos marcados isotópicamente, es decir, donde uno o más átomos se han enriquecido con átomos que tienen una masa atómica diferente de la masa atómica que se encuentra predominantemente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos descritos en esta invención, por ejemplo, incluyen, pero no se limitan a, ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷O, ³⁵S, ³⁶C1 y ¹⁸F. De particular interés es el Compuesto I' enriquecido en tritio o carbono-14 que se puede utilizar, por ejemplo, en estudios de distribución de tejidos; el Compuesto I' enriquecido en deuterio, especialmente en un sitio de metabolismo, que resulta, por ejemplo, en un compuesto que tiene una mayor estabilidad metabólica; y el compuesto I' enriquecido en un isótopo emisor de positrones, tales como ¹C, ¹⁸F, ¹⁵O y ¹³N, que se puede utilizar, por ejemplo, en estudios de topografía de emisión de positrones (PET).

Las estructuras químicas se nombran en esta invención según las convenciones de la IUPAC implementadas en el software ChemDraw (Perkin Elmer, Inc., Cambridge, MA).

DEFINICIONES

Al describir el compuesto, las composiciones, los procedimientos y los procedimientos de la invención, los siguientes términos y expresiones tienen los siguientes significados salvo que se indique lo contrario. Además, como se usa en esta invención, las formas singulares «un», «una» y «el/la» incluyen las formas plurales correspondientes salvo que el contexto de uso indique claramente lo contrario. Las expresiones «que comprende», «que incluye» y «que tiene» pretenden ser inclusivas y significan que puede haber elementos adicionales distintos de los elementos enumerados. Salvo que se indique lo contrario, todos los números que expresan cantidades de ingredientes, propiedades tales como peso molecular, condiciones de reacción, etc., usados en esta invención, deben entenderse modificados en todos los casos por el término «aproximadamente». En consecuencia, los números expuestos en esta invención son aproximaciones que pueden variar dependiendo de las propiedades deseadas que se buscan obtener mediante la presente invención. Al menos, y no como un intento de limitar la aplicación de la doctrina de equivalentes al alcance de las reivindicaciones, cada número debe interpretarse al menos a la luz de los dígitos significativos indicados y aplicando técnicas de redondeo habituales.

El término «aproximadamente» o «aproximadamente» cuando se usa en el contexto del comportamiento térmico del Compuesto I'. se define como ± 1-3 °C. El término "aproximado" cuando se usa en el contexto de % de dosis de Compuesto I' excretado en la orina se define por un margen de error que típicamente es aproximadamente el doble de la desviación estándar o la mitad del ancho de un intervalo de confianza del 95 por ciento. El término «aproximado» en otras áreas de la descripción puede usarse para indicar la desviación estándar o la cantidad de variación o dispersión de un conjunto de valores de datos.

La expresión «liberación controlada», como se usa en esta invención, es sinónimo de liberación sostenida y liberación prolongada y se refiere a la cantidad de fármaco suministrado durante un período de tiempo prolongado en un sujeto. Generalmente, los comprimidos y cápsulas de liberación controlada liberan el activo en el sujeto durante períodos de tiempo de aproximadamente 8, 12, 16 y 24 horas. Por otro lado, la expresión «liberación inmediata» se refiere a la liberación del activo en un sujeto dentro de un pequeño período de tiempo, típicamente menos de aproximadamente 30 minutos. La expresión «liberación retardada» se refiere a comprimidos y cápsulas que liberan la dosis farmacéutica después de un período de tiempo establecido. Estas formas de dosificación suelen tener un recubrimiento entérico para evitar la liberación en el estómago, pero permiten la liberación en el tracto intestinal.

Como se usa en esta invención, la frase «de fórmula» o «que tiene la fórmula» o «que tiene la estructura» no pretende ser limitante y se usa de la misma manera que la expresión «que comprende» se usa comúnmente. Por ejemplo, si se representa una estructura, se entiende que se abarcan todas las formas de estereoisómeros y tautómeros, salvo que se indique lo contrario.

En general, al describir sólidos farmacéuticos, el término «no solvatado» implica «sin disolvente». Por lo tanto, cuando la forma cristalina de la invención se describe como "no solvatada", se quiere decir que las partículas cristalinas contienen esencialmente solo moléculas de ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifen¡l]-4-¡l)-2-(etox¡met¡l)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico; la forma no contiene cantidades significativas de otras moléculas de disolvente incluidas en la red o, en otras palabras, el disolvente no se incorpora de forma significativa en la red cristalina. La expresión «no solvatado» es sinónimo del término "no hidratado" cuando el agua es el disolvente. El término «anhidro» significa que el cristal contiene una cantidad insignificante o nula de agua, especialmente agua de cristalización. Una cantidad insignificante de agua significa el límite de detección en el que se puede medir el agua. Por ejemplo, la medición del contenido de agua por Karl Fischer (% p/p) en esta solicitud puede tener un límite de cuantificación (LDC) del 0,20 % p/p. Por lo tanto, la cantidad de agua que se encuentra en el

Compuesto I' se presentaría como < LDC o <0,20 % p/p. Además, una sustancia higroscópica es aquella que atrae fácilmente el agua de su entorno, ya sea por absorción o adsorción. La expresión «no higroscópico» se usa para describir cristales que tienen poca o ninguna tendencia a adsorber humedad en sus superficies o absorber agua en su red cristalina.

El término «punto de fusión», como se usa en esta invención, significa la temperatura a la que se observa el flujo de calor endotérmico máximo mediante calorimetría diferencial de barrido, para la transición térmica que corresponde al cambio de fase de sólido a líquido.

La expresión «farmacéuticamente aceptable» se refiere a un material que no es biológicamente o de otro modo inaceptable cuando se usa en la invención. Por ejemplo, el término «vehículo farmacéuticamente aceptable» se refiere a un material que puede incorporarse a una composición y administrarse a un paciente sin causar efectos biológicos inaceptables o interactuar de manera inaceptable con otros componentes de la composición. Tales materiales farmacéuticamente aceptables típicamente han cumplido los estándares requeridos de pruebas toxicológicas y de fabricación e incluyen aquellos materiales identificados como ingredientes inactivos adecuados por la Administración de Fármacos y Alimentos de los EE. UU.

El término «sal farmacéuticamente aceptable» significa una sal preparada a partir de una base o un ácido que es aceptable para la administración a un paciente, tal como un mamífero (por ejemplo, sales que tienen una seguridad aceptable para mamíferos para un régimen de dosificación dado). Sin embargo, se entiende que no se requiere que las sales cubiertas por la invención sean sales farmacéuticamente aceptables, tales como sales de compuestos intermedios que no están destinados a la administración a un paciente. Las sales farmacéuticamente aceptables se pueden derivar de bases inorgánicas u orgánicas farmacéuticamente aceptables y de ácidos orgánicos o inorgánicos farmacéuticamente aceptables. Además, cuando un compuesto contiene tanto un resto básico, tal como una amina, piridina o imidazol, como un resto ácido, tal como un ácido carboxílico o tetrazol, se pueden formar iones híbridos y se incluyen dentro del término «sal» como se usa en esta invención. Las sales derivadas de bases inorgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de amonio, calcio, cobre, férrico, ferroso, litio, magnesio, mangánico, manganoso, potasio, sodio y zinc, y similares. Las sales derivadas de bases orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, incluidas aminas sustituidas, aminas cíclicas, aminas de origen natural y similares, tales como arginina, betaína, cafeína, colina, W,W-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares. Las sales derivadas de ácidos inorgánicos farmacéuticamente aceptables incluyen sales de ácidos bórico, carbónico, halohídrico (bromhídrico, clorhídrico, fluorhídrico o yodhídrico), nítrico, fosfórico, sulfámico y sulfúrico. Las sales derivadas de ácidos orgánicos farmacéuticamente aceptables incluyen sales de ácidos hidroxílicos alifáticos (por ejemplo, ácidos cítrico, glucónico, glicólico, láctico, lactobiónico, málico y tartárico), ácidos monocarboxílicos alifáticos (por ejemplo, ácidos acético, butírico, fórmico, propiónico y trifluoroacético), aminoacidos (por ejemplo, ácidos aspártico y glutámico), ácidos carboxílicos aromáticos (por ejemplo, ácidos benzoico, p-clorobenzoico, difenilacético, gentísico, hipúrico y trifenilacético), ácidos hidroxílicos aromáticos (por ejemplo, ácidos o-hidroxibenzoico, p-hidroxibenzoico, 1-hidroxinaftaleno-2-carboxílico y 3-hidroxinaftaleno-2-carboxílico), ácidos ascórbico, dicarboxílico (por ejemplo, ácidos fumárico, maleico, oxálico y succínico), ácidos glucurónico, mandélico, múcico, nicotínico, orótico, pamoico, pantoténico, sulfónico (por ejemplo, ácidos bencenosulfónico, camfosulfónico, edisílico, etanosulfónico, isetiónico, metanosulfónico, naftalenosulfónico, naftaleno-1,5-disulfónico, naftaleno-2,6-disulfónico y p-toluenosulfónico), ácido xinafoico, y similares.

El término «cantidad terapéuticamente efectiva» significa una cantidad suficiente para efectuar el tratamiento cuando se administra a un paciente que lo necesita, es decir, la cantidad de fármaco necesaria para obtener el efecto terapéutico deseado. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente efectiva para tratar la hipertensión es una cantidad de compuesto necesaria para, por ejemplo, reducir, suprimir, eliminar o prevenir los síntomas de la hipertensión o para tratar la causa subyacente de la hipertensión. En una realización, una cantidad terapéuticamente efectiva es la cantidad de fármaco necesaria para reducir la presión arterial o la cantidad de fármaco necesaria para mantener la presión arterial normal. Por otro lado, el término «cantidad efectiva» significa una cantidad suficiente para obtener un resultado deseado, que puede no ser necesariamente un resultado terapéutico. Por ejemplo, al estudiar un sistema que comprende una enzima NEP, una «cantidad efectiva» puede ser la cantidad necesaria para inhibir la enzima.

El término «tratar» o «tratamiento» como se usa en esta invención significa el trato o tratamiento de una enfermedad o afección médica (tal como la hipertensión) en un paciente, tal como un mamífero (particularmente un ser humano) que incluye uno o más de los siguientes: (a) prevenir que se produzca la enfermedad o afección médica, es decir, prevenir la reaparición de la enfermedad o afección médica o el tratamiento profiláctico de un paciente que está predispuesto a la enfermedad o afección médica; (b) mejorar la enfermedad o afección médica, es decir, eliminar o provocar la regresión de la enfermedad o afección médica en un paciente; (c) suprimir la enfermedad o afección médica, es decir, ralentizar o detener el desarrollo de la enfermedad o afección médica en un paciente; o (d) aliviar los síntomas de la enfermedad o afección médica en un paciente. Por ejemplo, la expresión «tratar la hipertensión» incluiría evitar que se produzca la hipertensión, mejorar la hipertensión, suprimir la hipertensión y aliviar los síntomas de la hipertensión (por ejemplo, reducir la presión sanguínea). El término «sujeto» o «paciente» pretende incluir aquellos mamíferos, tales como los seres humanos, que necesitan tratamiento o prevención de enfermedades o que actualmente están siendo tratados para la prevención de enfermedades o el tratamiento de una enfermedad o afección médica específica, así como sujetos de prueba en los que el compuesto cristalino se evalúa o se usa en un ensayo, por ejemplo, un modelo animal.

Se pretende que todos los demás términos y expresiones utilizados en esta invención tengan su significado habitual tal como lo entienden los expertos en la materia a la que pertenecen.

PROCEDIMIENTOS DE SÍNTESIS GENERALES

La forma cristalina del Compuesto I de la invención se puede sintetizar a partir de materiales de partida fácilmente disponibles como se describe a continuación y en los Ejemplos. Se apreciará que cuando se dan condiciones de procedimiento típicas o preferidas (es decir, temperaturas de reacción, temperaturas de cristalización, tiempos, relaciones molares de reactivos, disolventes, presiones, etc.), también se pueden usar otras condiciones de procedimiento salvo que se indique lo contrario. En algunos casos, las reacciones o cristalizaciones se realizaron a temperatura ambiente y no se tomó ninguna medida de temperatura real. Se entiende que la temperatura ambiente significa una temperatura dentro del intervalo comúnmente asociado con la temperatura ambiente en un entorno de laboratorio, y típicamente estará en el intervalo de aproximadamente 15 °C a aproximadamente 30 °C, tal como de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 25 °C. En otros casos, las reacciones o cristalizaciones se realizaron a temperatura ambiente y la temperatura se midió y registró realmente.

Cualquier relación molar descrita en los procedimientos de la invención puede determinarse fácilmente mediante diversos procedimientos disponibles para los expertos en la materia. Por ejemplo, tales relaciones molares se pueden determinar fácilmente mediante RMN 1H. Alternativamente, se pueden utilizar procedimientos de análisis elemental y HPLC para determinar la relación molar.

En una realización, el Compuesto I puede prepararse (a) acoplando clorhidrato de (2S,4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-2-metilpentanoato de bencilo con ácido 3-((4-metoxibencil)oxi)isoxazol-5-carboxílico en un disolvente en una relación molar de aproximadamente 1:1 para dar (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-((4-metoxibencil)oxi)isoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoato de bencilo; y (b) desprotegiendo (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1 '-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-((4-metoxibencil)oxi)isoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoato de bencilo para formar ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico (I).

En una realización, la etapa (a) incluye además la adición de un agente de acoplamiento peptídico y una base en una relación molar de aproximadamente 1:3:1:1 de agente de acoplamiento a base a clorhidrato de (2S,4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-2-metilpentanoato de bencilo a ácido 3-((4-metoxibencil)oxi)isoxazol-5-carboxílico.

Los ejemplos representativos de agentes de acoplamiento peptídico incluyen, pero no se limitan a, hexafluorofosfato de O-(Benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HBTU), tetrafluoroborato de O-(Benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (TBTU), hexafluorofosfato de O-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU), tetrafluoroborato de O-(7-Azabenzotriazol-1-il)- N,N,N',N'-tetrametiluronio (TATU), hexafluorofosfato de O-(6-Clorobenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HCTU) y tetrafluoroborato de O-[(Etoxicarbonil)cianometilenamino]-N,N,N',N'-tetra metiluronio (TOTU). En una realización preferida de la invención, el agente de acoplamiento peptídico es HATU, HBTU y HCTU, siendo HCTU el más preferido. Un ejemplo de una base que se puede usar en la reacción es DIPEA.

En otra realización, la etapa de desprotección (b) se realiza con un catalizador de paladio, por ejemplo paladio sobre carbono (5 % o 10 % p/p) e hidrógeno gaseoso. En realizaciones adicionales, las siguientes etapas se pueden realizar después de la etapa (b). Se elimina el catalizador de paladio, seguido de la adición de un agente oxidante tal como el peróxido de hidrógeno. A continuación, la reacción se puede agitar durante al menos 1 h o preferiblemente 2 h a una temperatura de entre aproximadamente 20 °C y 30 °C. Esta etapa puede ir seguida de destilación y lavado una o más veces y, opcionalmente, enfriamiento y envejecimiento, antes del aislamiento del Compuesto I.

La invención se refiere a una forma cristalina de ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico donde la forma cristalina se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos de difracción a valores de 20 de 6,51 ± 0,20, 11,62 ± 0,20, 13,05 ± 0,20, 15,07 ± 0,20, y 23,28 ± 0,20. (I'). En otra realización, la forma cristalina es anhidra, no higroscópica o ambas.

La preparación de la forma cristalina I' se realiza generalmente en un diluyente inerte adecuado, cuyos ejemplos incluyen, pero no se limitan a, acetona, acetonitrilo, acetato de etilo, metiletilcetona, metanol, etanol, isopropanol, isobutanol, diclorometano, metil-í-butil éter, ciclopentil metil éter, hexanos y similares, y mezclas de los mismos, que contienen opcionalmente agua. Las mezclas de diluyentes inertes (también denominados sistemas de disolventes) incluyen acetona con agua, acetonitrilo con agua, etanol y acetato de etilo, acetato de etilo y hexanos, y alcoholes inferiores (alquilo C1-6-OH) con agua, por ejemplo, metanol y agua e isopropanol y agua. Los sistemas de disolventes particularmente adecuados incluyen acetato de etilo y agua. Una vez completada la cristalización, el compuesto cristalino puede aislarse de la mezcla de reacción por cualquier medio convencional tal como precipitación, filtración, concentración, centrifugación, secado al vacío y similares.

En una realización, la forma cristalina I' se puede preparar (a) formando una solución que comprende ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico (Compuesto I) con un disolvente, que contiene opcionalmente un eliminador de metales, a una temperatura elevada; (b) enfriando la solución a una temperatura de entre aproximadamente -20 °C a 5 °C; y (c) aislando los sólidos resultantes para producir la forma cristalina I'. En otra realización, el procedimiento incluye además remover o agitar la solución a una temperatura entre aproximadamente -20 °C y 5 °C.

La etapa (a) se realiza generalmente a temperatura ambiente en un disolvente polar. El disolvente polar puede ser prótico o aprótico e incluir, por ejemplo, una mezcla de acetato de etilo y agua, acetato de etilo o etanol. La temperatura elevada en la etapa (a) está típicamente entre aproximadamente 60 °C y 95 °C y preferiblemente entre 70 °C y 85 °C, 70 °C y 80 °C o 75 °C y 85 °C. La etapa de aislamiento (c) implica filtrar, lavar con uno o más disolventes, secar al aire o al vacío, o una combinación de estas etapas. Si el Compuesto I' o la forma cristalina I' se seca al vacío, esto se puede hacer a una temperatura entre 25 °C y 70 °C, preferiblemente entre 30 °C y 60 °C, 30 °C y 50 °C, 40 °C y 60 °C o 40 °C y 50 °C.

En otra realización, el procedimiento incluye además la etapa de agitar la mezcla a una temperatura entre 0 °C y 30 °C durante al menos 5 minutos antes de elevar la temperatura entre aproximadamente 60 °C y 95 °C. Alternativamente, la agitación se puede realizar a una temperatura entre 25 °C y 35 °C durante al menos 1 h.

En otra realización adicional, la mezcla se sedimenta aún más y se aísla una fase superior no acuosa antes de elevar la temperatura. Alternativamente, la mezcla se filtra, se enjuaga y se reduce de volumen antes de elevar la temperatura.

En otra realización más, la temperatura en la etapa (b) del procedimiento anterior está independientemente entre -15 °C y -5 °C o alternativamente, independientemente entre -5 °C y 5 °C.

PROPIEDADES CRISTALINAS

Como es bien conocido en el campo del análisis de difracción de rayos X en polvo (PXRD), las alturas relativas de los picos de los patrones PXRD dependen de varios factores relacionados con la preparación de la muestra y la geometría del instrumento, mientras que las posiciones de los picos son relativamente insensibles a los detalles experimentales. Se realizaron PXRD, calorimetría diferencial de barrido (DSC), análisis gravimétricos térmicos (TGA) y evaluación de sorción dinámica de humedad (DMS) (también conocido como análisis de sorción-desorción de humedad) como se describe en esta invención.

En un aspecto, la invención se refiere a la forma cristalina de ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico (I') y se caracteriza por un patrón PXRD en el que las posiciones de los picos están sustancialmente conformes con las mostradas en la Fig. 1.

Los picos con intensidades relativas superiores al 1 % en el área se enumeran en la siguiente tabla. Este patrón muestra picos de difracción nítidos en el intervalo de 5-35° en 20. Estos y otros picos en el patrón de difracción pueden usarse para identificar esta forma.

continuación

*Los valores 20 se indican como valor ± 0,20.

Por lo tanto, la invención se refiere a la forma cristalina I' caracterizada por un patrón PXRD que comprende picos de difracción a valores de 20 de 6,51 ± 0,20, 11,62 ± 0,20, 13,05 ± 0,20, 15,07 ± 0,20 y 23,28 ± 0,20.

En otra realización, la forma cristalina I' se caracteriza por un patrón PXRD que comprende picos de difracción a valores de 20 de 6,51 ± 0,20, 11,62 ± 0,20, 13,05 ± 0,20, 15,07 ± 0,20, 17,12 ± 0,20, 23,28 ± 0,20 y 26,19 ± 0,20.

En otra realización, la forma cristalina I' se caracteriza además por tener uno o más picos de difracción adicionales a valores de 20 seleccionados de entre 6,51 ± 0,20, 11,62 ± 0,20, 13,05 ± 0,20, 15,07 ± 0,20, 15,72 ± 0,20, 17,12 ± 0,20, 20,79 ± 0,20, 21,10 ± 0,20, 23,28 ± 0,20, 24,48 ± 0,20, 25,81 ± 0,20 y 26,19 ± 0,20; y en otra realización más, el compuesto cristalino se caracteriza además por tener tres o más de tales picos de difracción adicionales.

En una realización, la forma cristalina I' se caracteriza por el termograma DSC o la traza de calorimetría diferencial de barrido sustancialmente conforme a lo que se muestra en la Fig. 2. La forma cristalina I' se caracteriza por una traza de calorimetría diferencial de barrido registrada a una velocidad de calentamiento de 10 °C por minuto que muestra un máximo en el flujo de calor endotérmico a una temperatura entre aproximadamente 214 °C y aproximadamente 218 °C. El termograma DSC o la traza de calorimetría diferencial de barrido ilustra una endoterma de fusión con un pico a aproximadamente 216,1 °C, inicio a 214,2 °C, y con un área bajo la endoterma correspondiente a 107,2 J/g. La descomposición del compuesto coincide con la fusión y no se establece la contribución de 107,2 J/g a la entalpía de fusión.

En una realización, la forma cristalina I' se caracteriza por el perfil TGA de la Fig. 3. Este perfil no muestra pérdida de masa hasta aproximadamente 240 °C; el compuesto cristalino se descompone después de la fusión, como se ve por la pérdida de peso significativa que se produce al inicio de aproximadamente 242 °C. No hay pérdida adicional de masa hasta la temperatura de descomposición, lo que indica una falta de moléculas adsorbidas tales como el agua.

En una realización, la forma cristalina I' se caracteriza por la isoterma DMS de la Fig. 4. Esta forma es un sólido no higroscópico. La ganancia de humedad total observada es inferior al 0,02 % en peso cuando se expone a una humedad relativa del 5-90 %. No se encuentra histéresis significativa entre dos ciclos consecutivos de sorción-desorción. El sólido obtenido después de los ciclos de sorción-desorción mostró el mismo patrón de PXRD que el material de partida, lo que indica que no hubo cambios en la forma después de este experimento. Estos datos indican que la forma cristalina I' no se convierte en una forma hidratada en presencia de agua. La forma cristalina I' permanece no higroscópica y, por lo tanto, puede caracterizarse como anhidra, no higroscópica o ambas.

La forma cristalina I' se puede caracterizar por la imagen PLM de la Fig. 5, que muestra esta forma como partículas cristalinas, birrefringentes, en forma de placa.

UTILIDAD

La extrapolación in vitro a in vivo del comportamiento del fármaco en un sujeto continúa mejorando (véase, por ejemplo, Chiba y col., AAPS J., junio de 2009; 11(2):262-276). En la presente invención, se evaluó la actividad inhibidora de neprilisina humana in vitro para determinar la actividad inhibidora de neprilisina del Compuesto I y la forma cristalina I'. Se alcanzó un umbral de pKⁱ > 9,0. Sin embargo, se realizaron más experimentos in vivo para predecir con mayor precisión el comportamiento del Compuesto I y la forma cristalina I' en un sujeto.

Con respecto al comportamiento in vivo, hay varias propiedades que son útiles para evaluar si se suministrará una cantidad suficiente del fármaco al plasma para lograr el beneficio terapéutico necesario, por ejemplo, aclaramiento plasmático bajo en todas las especies analizadas, biodisponibilidad oral alta, potenciación favorable de la respuesta cíclica de monofosfato de guanosina (cGMP) y aclaramiento renal bajo para aquellos sujetos con función renal comprometida.

Para la presente invención, se realizaron estudios farmacocinéticos orales e intravenosos en especies de ratas, perros y monos para determinar la biodisponibilidad oral del Compuesto I, es decir, la forma soluble del Compuesto I' (Ensayo 1). Este ensayo también se utilizó para determinar la tasa de aclaramiento plasmático de estos compuestos; se cree que una tasa de aclaramiento baja predice cuánto tiempo se espera que el compuesto permanezca en circulación, es decir, su estabilidad y persistencia in vivo sin identificar los procedimientos de eliminación individuales implicados.

Se realizaron estudios farmacocinéticos/farmacodinámicos en humanos para determinar el nivel de inhibición de neprilisina que se obtiene con el Compuesto I (Ensayo 3). En este ensayo se midió el nivel de monofosfato de guanosina cíclico (cGMP). cGMP es una molécula efectora aguas abajo de la unión al receptor de péptidos natriuréticos y, por lo tanto, sirve como un eficaz biomarcador in vivo de la actividad del péptido natriurético. El nivel de cGMP aumenta cuando a un animal se le administra un inhibidor de neprilisina en comparación con el placebo. Los niveles de ANP y cGMP se miden en orina o plasma o en ambos en un sujeto. En otra realización, el nivel de ANP o cGMP se eleva al menos > 1,1 veces, > 1,2 veces, > 1,3 veces, > 1,4 veces, > 1,5 veces, > 2 veces, > 3 veces, > 4 veces, o > 5 veces durante un período de 24 horas en un sujeto cuando se le administra una cantidad terapéuticamente efectiva del Compuesto I o la forma cristalina I'. En otro aspecto, la invención se refiere a un procedimiento para aumentar la cantidad de monofosfato de guanosina cíclico en el plasma de un ser humano, comprendiendo el procedimiento administrar al ser humano una forma cristalina de ácido libre de En un aspecto, la invención se refiere a reducir la presión arterial en un ser humano, comprendiendo el procedimiento administrar al ser humano una cantidad reductora de la presión arterial de una forma cristalina de ácido libre de ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico.

La forma cristalina I', que se disuelve en su forma soluble, el Compuesto I, en un sujeto, inhibe la enzima NEP y, por lo tanto, se espera que sea útil para el tratamiento y/o prevención de afecciones médicas que responden a la inhibición de NEP. Por lo tanto, se espera que los pacientes que padecen una enfermedad o trastorno que se trata inhibiendo la enzima NEP o aumentando los niveles de sus sustratos peptídicos puedan tratarse administrando una cantidad terapéuticamente efectiva de la forma cristalina I'. Por ejemplo, al inhibir NEP, se espera que la forma cristalina I' potencie los efectos biológicos de péptidos endógenos que son metabolizados por NEP, tales como los péptidos natriuréticos, bombesina, bradicininas, calcitonina, endotelinas, encefalinas, neurotensina, sustancia P y péptido intestinal vasoactivo. Por lo tanto, se espera que este compuesto tenga otras acciones fisiológicas, por ejemplo, sobre los sistemas renal, nervioso central, reproductivo y gastrointestinal.

Los fármacos se eliminan del organismo de un sujeto mediante varios procedimientos de eliminación que se clasifican generalmente como excreción y biotransformación. La excreción se refiere a la eliminación del fármaco no volátil intacto principalmente por vía renal (riñón) de la vejiga en la orina, mientras que otras vías de excreción incluyen bilis (hígado), sudor, saliva, leche (a través de la lactancia) u otros fluidos corporales. Los fármacos volátiles como el alcohol y los anestésicos gaseosos se excretan a través de los pulmones al aire espirado. Por otro lado, la biotransformación, o metabolismo de un fármaco, se refiere a un fármaco que se convierte químicamente en el cuerpo en un metabolito y suele ser un procedimiento enzimático. La excepción a esto es cuando un fármaco se cambia químicamente de forma no enzimática, por ejemplo, hidrólisis de éster. Las enzimas implicadas en la biotransformación de fármacos se encuentran principalmente en el hígado. Otros tejidos tales como riñón, pulmón, intestino delgado y piel también contienen enzimas metabólicas.

Los estudios farmacocinéticos también se pueden usar para investigar las vías de eliminación en un sujeto, por ejemplo, el aclaramiento renal mediante la excreción del fármaco administrado en la orina a lo largo del tiempo. La excreción renal del Compuesto I en especies de ratas, perros y monos, así como en seres humanos, se realizó para evaluar la excreción renal como vía de eliminación (Ensayos 2 y 4). Esta vía de eliminación es importante para sujetos que tienen la función renal comprometida y necesitan terapias que se eliminen mínimamente por excreción renal. En una realización, la excreción renal de la forma cristalina I' en el sujeto es aproximadamente < 15 %, < 10 %, < 5 %, < 3 %, < 2 %, < 1 % o < 0,5 % de la dosis administrada durante 24 horas.

Como se describe en la sección de ensayos a continuación, se realizaron determinaciones in vivo del aclaramiento plasmático, biodisponibilidad oral y excreción renal en múltiples especies animales. El compuesto I o la forma cristalina I' presentó una alta actividad inhibidora de neprilisina humana, una alta biodisponibilidad oral, un aclaramiento plasmático bajo, una potenciación aumentada de cGMP y una excreción renal baja que se espera que conduzca a una utilidad particular en el tratamiento de enfermedades.

Enfermedades cardiovasculares

Al potenciar los efectos de los péptidos vasoactivos como los péptidos natriuréticos y la bradicinina, se espera que la forma cristalina I' encuentre utilidad en el tratamiento y/o prevención de afecciones médicas tales como las enfermedades cardiovasculares. Véase, por ejemplo, Roques y col. (1993) Pharmacol. Rev. 45:87-146 y Dempsey y col. (2009) Amer. J. of Pathology 174(3):782-796. Las enfermedades cardiovasculares de particular interés incluyen hipertensión e insuficiencia cardíaca. La hipertensión incluye, a modo de ilustración y no de limitación: hipertensión primaria, que también se denomina hipertensión esencial o hipertensión idiopática; hipertensión secundaria; hipertensión con enfermedad renal acompañante; hipertensión severa con o sin enfermedad renal acompañante; hipertensión pulmonar, incluida hipertensión arterial pulmonar; e hipertensión resistente. La insuficiencia cardíaca incluye, a modo de ilustración y no de limitación: insuficiencia cardíaca congestiva; insuficiencia cardíaca aguda; insuficiencia cardíaca crónica, por ejemplo con fracción de eyección ventricular izquierda reducida (también denominada insuficiencia cardíaca sistólica) o con fracción de eyección ventricular izquierda conservada (también denominada insuficiencia cardíaca diastólica); e insuficiencia cardíaca descompensada aguda y crónica. Por lo tanto, una realización de la invención se refiere a una forma cristalina I' para su uso en un procedimiento para tratar la hipertensión, particularmente hipertensión primaria, hipertensión arterial pulmonar, hipertensión pulmonar tromboembólica crónica (HPTEC) o hipertensión con estenosis de la arteria renal que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de la forma cristalina I'.

Para el tratamiento de la hipertensión primaria, la cantidad terapéuticamente efectiva es típicamente la cantidad que es suficiente para reducir la presión sanguínea del paciente. En un aspecto, la invención se refiere a la reducción de la presión arterial en un ser humano, comprendiendo el procedimiento administrar al ser humano una cantidad reductora de la presión arterial de una forma cristalina de ácido libre de (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico. Esto incluiría el tratamiento tanto para la hipertensión leve a moderada como para la hipertensión severa. Cuando se usa para tratar la hipertensión, la forma cristalina I' puede administrarse en combinación con otros agentes terapéuticos tales como antagonistas de aldosterona, inhibidores de la aldosterona sintasa, inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina e inhibidores de neprilisina/enzima convertidora de angiotensina de acción dual, activadores y estimuladores de la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2), vacunas de angiotensina II, agentes anti-diabéticos, agentes anti-lípidos, agentes anti-trombóticos, antagonistas del receptor AT1 e inhibidores de neprilisina/antagonista del receptor AT1 de acción dual, antagonistas del receptor p1-adrenérgico, antagonistas del receptor a 1/antagonista del receptor padrenérgico de acción dual, bloqueadores de los canales de calcio, diuréticos, antagonistas del receptor de endotelina, inhibidores de la enzima convertidora de endotelina, inhibidores de neprilisina, péptidos natriuréticos y sus análogos, antagonistas del receptor de aclaramiento del péptido natriurético, donantes de óxido nítrico, agentes antiinflamatorios no esteroideos, inhibidores de fosfodiesterasa (específicamente inhibidores de PDE-V), agonistas del receptor de prostaglandina, inhibidores de renina, estimuladores y activadores de la guanilato ciclasa soluble y combinaciones de los mismos. En una realización particular de la invención, el compuesto de la invención se combina con un antagonista del receptor AT1, un bloqueador de los canales de calcio, un diurético o una combinación de los mismos, y se utiliza para tratar la hipertensión primaria. En otra realización particular de la invención, el compuesto de la invención se combina con un antagonista del receptor AT1, y se utiliza para tratar la hipertensión con enfermedad renal acompañante. Cuando se usa para tratar la hipertensión resistente, el compuesto se puede administrar en combinación con otros agentes terapéuticos tales como inhibidores de la aldosterona sintasa.

Para el tratamiento de la hipertensión arterial pulmonar, la cantidad terapéuticamente efectiva es típicamente la cantidad que es suficiente para reducir la resistencia vascular pulmonar. Otros objetivos de la terapia son mejorar la capacidad de ejercicio del paciente. Por ejemplo, en un entorno clínico, la cantidad terapéuticamente efectiva puede ser la cantidad que mejora la capacidad de un paciente para caminar cómodamente durante un período de 6 minutos (recorriendo una distancia de aproximadamente 20-40 metros) Cuando se usa para tratar la hipertensión arterial pulmonar, la forma cristalina I' puede administrarse en combinación con otros agentes terapéuticos tales como antagonistas del receptor a-adrenérgico, antagonistas del receptor p1-adrenérgico, agonistas del receptor p2-adrenérgico, inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina, anticoagulantes, bloqueadores de los canales de calcio, diuréticos, antagonistas del receptor de endotelina, inhibidores de PDE-V, análogos de prostaglandina, inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina y combinaciones de los mismos. En una realización particular de la invención, la forma cristalina I' se combina con un inhibidor de PDE-V o un inhibidor selectivo de la recaptación de serotonina y se utiliza para tratar la hipertensión arterial pulmonar.

Para el tratamiento de la hipertensión pulmonar tromboembólica crónica, la cantidad terapéuticamente efectiva es típicamente la cantidad que es suficiente para reducir la presión sanguínea en las arterias pulmonares, se haya formado o no una embolia pulmonar en un sujeto.

Además, para el tratamiento de la hipertensión con estenosis de la arteria renal, la cantidad terapéuticamente efectiva es típicamente la cantidad que es suficiente para reducir la presión sanguínea. Para los sujetos que tienen estenosis de la arteria renal, las arterias se estrechan debido a la aterosclerosis. Esto, a su vez, hace que el cuerpo registre menos sangre que llega a los riñones, interpretándolo como presión arterial baja, lo que a su vez indica una liberación de hormonas para aumentar la presión arterial. Con el tiempo, esto puede provocar insuficiencia renal.

Otra realización de la invención se refiere a la forma cristalina I' para su uso en un procedimiento para tratar la insuficiencia cardíaca, en particular la insuficiencia cardíaca congestiva (incluida la insuficiencia cardíaca congestiva tanto sistólica como diastólica), que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de la forma cristalina I'. Típicamente, la cantidad terapéuticamente efectiva es la cantidad que es suficiente para reducir la presión sanguínea y/o mejorar las funciones renales. En un entorno clínico, la cantidad terapéuticamente efectiva puede ser la cantidad que sea suficiente para mejorar la hemodinámica cardíaca, como por ejemplo la reducción de la presión de enclavamiento, la presión de la aurícula derecha, la presión de llenado y la resistencia vascular. En una realización, el compuesto se administra como una forma de dosificación intravenosa. Cuando se usa para tratar la insuficiencia cardíaca, la forma cristalina I' puede administrarse en combinación con otros agentes terapéuticos tales como antagonistas del receptor de adenosina, rompedores del producto final de glicación avanzada, antagonistas de aldosterona, antagonistas del receptor AT1, antagonistas del receptor p1-adrenérgico, antagonistas del receptor a-i/antagonista del receptor p-adrenérgico de acción dual, inhibidores de cimasa, digoxina, diuréticos, inhibidores de la enzima convertidora de endotelina (ECE), antagonistas del receptor de endotelina, péptidos natriuréticos y sus análogos, antagonistas del receptor de aclaramiento del péptido natriurético, donantes de óxido nítrico, análogos de prostaglandina, inhibidores de PDE-V, activadores y estimuladores de la guanilato ciclasa soluble y antagonistas del receptor de vasopresina. En una realización particular de la invención, la forma cristalina I' se combina con un antagonista de aldosterona, un antagonista del receptor p1-adrenérgico, un antagonista del receptor AT1, o un diurético, y se utiliza para tratar la insuficiencia cardíaca congestiva.

Diarrea

Como inhibidor de NEP, se espera que la forma cristalina I' inhiba la degradación de las encefalinas endógenas y, por lo tanto, tales compuestos también pueden resultar útiles para el tratamiento de la diarrea, incluida la diarrea infecciosa y secretora/acuosa. Véase, por ejemplo, Baumer y col. (1992) Gut 33:753-758; Farthing (2006) Digestive Diseases 24:47-58; y Maníais- Collado (1987) Eur. J. Pharmacol. 144(2):125-132. Cuando se usa para tratar la diarrea, la forma cristalina I' puede combinarse con uno o más agentes antidiarreicos adicionales.

Enfermedades renales

Al potenciar los efectos de los péptidos vasoactivos como los péptidos natriuréticos y la bradicinina, se espera que la forma cristalina I' mejore la función renal (véase Chen y col. (1999) Circulation 100:2443-2448; Lipkin y col. (1997) Kidney Int. 52:792-801; y Dussaule y col. (1993) Clin. Sci. 84:31-39) y encuentran utilidad en el tratamiento y/o prevención de enfermedades renales en un sujeto con insuficiencia renal. Las enfermedades renales de particular interés incluyen nefropatía diabética, enfermedad renal crónica, proteinuria y, en particular, lesión renal aguda (causada, por ejemplo, por cirugía cardiovascular, quimioterapia o el uso de colorantes de contraste en imágenes médicas) o insuficiencia renal aguda (véase Sharkovska y col. (2011) Clin. Lab. 57:507-515 y Newaz y col. (2010) Renal Failure 32:384-390). Otras enfermedades renales de particular interés incluyen síndrome nefrótico, glomeruloesclerosis focal y segmentaria (GFS) y enfermedad renal poliquística (ERP).

Un sujeto con insuficiencia renal que tiene enfermedad renal crónica (ERC) puede clasificarse según las Pautas de la Iniciativa de Calidad de Resultados de la Enfermedad Renal de la National Kidney Foundation (Fundación Nacional del Riñón) (ICRER NKF). Una vez que se establece la enfermedad renal crónica, es decir, daño renal o tasa de filtración glomerular (TFG) <60 ml/min/1,73 m2 durante > 3 meses, la etapa de la enfermedad puede asignarse según la clasificación ERC ICRER. Estos incluyen la Etapa 1 (daño renal con TFG normal o aumentada): TFG > 90; la Etapa 2 (daño renal con leve disminución de TFG): TFG 60-89; la Etapa 3 (moderada disminución de TFG): TFG 30-59; la Etapa 4 (disminución grave de TFG): TFG 15-29; y la Etapa 5 (insuficiencia renal): TFG < 15 (o diálisis). La TFG se define en unidades de ml/min/1,73 m2.

Una realización incluye la forma cristalina I' para su uso en un procedimiento de tratamiento de un sujeto con insuficiencia renal que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de la forma cristalina I'. Este uso incluye además el tratamiento de un sujeto con insuficiencia renal con hipertensión o insuficiencia cardíaca.

Cuando se usa para tratar la enfermedad renal, la forma cristalina I' se puede administrar en combinación con otros agentes terapéuticos tales como inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina, antagonistas del receptor AT i y diuréticos.

Otra realización incluye la forma cristalina I' para su uso en un procedimiento de tratamiento de un sujeto con insuficiencia renal que tiene enfermedad renal crónica con una tasa de filtración glomerular estimada (TFGe) entre 60 ml/min/1,73 m2 y 15 ml/min/1,73 m2 que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de la forma cristalina I'.

Otra realización incluye la forma cristalina I' para su uso en un procedimiento de tratamiento de un sujeto con insuficiencia renal que tiene enfermedad renal crónica con una tasa de filtración glomerular estimada (TFGe) > 90 ml/min/1,73 m2 (Etapa 1) o una TGFe < 15 ml/min/1,73 m2 (Etapa 5) que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de la forma cristalina I'. Para los fines de esta invención, la enfermedad renal grave puede clasificarse como una TGFe < 30 ml/min/1,73 m2. En otra realización más, se incluye la forma cristalina I' para su uso en un procedimiento de tratamiento de un sujeto con insuficiencia renal que tiene enfermedad renal crónica clasificada como Etapa 1, Etapa 2, Etapa 3, Etapa 4, Etapa 5 o intervalos de TGFe que cubren una o más de estas etapas la forma cristalina I'.

Terapia preventiva

Al potenciar los efectos de los péptidos natriuréticos, también se espera que el Compuesto 1 sea útil en la terapia preventiva, debido a los efectos antihipertróficos y antifibróticos de los péptidos natriuréticos (véase Potter y col. (2009) Handbook of Experimental Pharmacology 191:341-366), por ejemplo para prevenir la progresión de la insuficiencia cardíaca después de un infarto de miocardio, prevenir la restenosis arterial después de una angioplastia, prevenir el engrosamiento de las paredes de los vasos sanguíneos después de operaciones vasculares, prevenir la aterosclerosis y prevenir la angiopatía diabética.

Glaucoma

Al potenciar los efectos de los péptidos natriuréticos, se espera que la forma cristalina I' sea útil para tratar el glaucoma. Véase, por ejemplo, Diestelhorst y col. (1989) International Ophthalmology 12:99-101. Cuando se usa para tratar el glaucoma, el Compuesto 1 se puede combinar con uno o más agentes antiglaucoma adicionales.

Alivio del dolor

Como inhibidor de NEP, se espera que la forma cristalina I' inhiba la degradación de las encefalinas endógenas y, por lo tanto, tal compuesto también puede resultar útil como analgésico.

Véase, por ejemplo, Roques y col. (1980) Nature 288:286-288 y Thanawala y col. (2008) Current Drug Targets 9:887-894. Cuando se usa para tratar el dolor, la forma cristalina I' puede combinarse con uno o más fármacos antinociceptivos adicionales tales como aminopeptidasa N o inhibidores de la dipeptidil peptidasa III, agentes antiinflamatorios no esteroideos, inhibidores de la recaptación de monoamina, relajantes musculares, antagonistas del receptor NMDA, agonistas del receptor de opioide, agonistas del receptor de serotonina 5-HT1D y antidepresivos tricíclicos.

Otras utilidades

Debido a sus propiedades de inhibición de NEP, también se espera que la forma cristalina I' sea útil como agente antitusivo, así como que encuentre utilidad en el tratamiento de la hipertensión portal asociada con cirrosis hepática (véase Sansoe y col. (2005) J. Hepatol. 43:791-798), cáncer (véase Vesely (2005) J. Investigative Med. 53:360-365), depresión (véase Noble y col. (2007) Exp. Opin. Ther. Targets 11:145-159), trastornos menstruales, parto prematuro, preeclampsia, endometriosis, trastornos reproductivos (por ejemplo, infertilidad masculina y femenina, síndrome de ovario poliquístico, fallo de implantación) y disfunción sexual masculina y femenina, incluida la disfunción eréctil masculina y el trastorno de la excitación sexual femenina. Más específicamente, se espera que la forma cristalina I' sea útil en el tratamiento de la disfunción sexual femenina (véase Pryde y col. (2006) J. Med. Chem. 49:4409-4424), que a menudo se define como la dificultad o incapacidad de una paciente para encontrar satisfacción en la expresión sexual. Esto cubre una variedad de diversos trastornos sexuales femeninos que incluyen, a modo de ilustración y no de limitación, el trastorno del deseo sexual hipoactivo, el trastorno de la excitación sexual, el trastorno orgásmico y el trastorno por dolor sexual. Cuando se usa para tratar tales trastornos, especialmente la disfunción sexual femenina, el compuesto de la invención puede combinarse con uno o más de los siguientes agentes secundarios: inhibidores de PDE-V, agonistas de dopamina, agonistas y/o antagonistas del receptor de estrógeno, andrógenos y estrógenos. Debido a su propiedad de inhibición de NEP, también se espera que la forma cristalina I' tenga propiedades antiinflamatorias, y se espera que tenga utilidad como tal, particularmente cuando se usa en combinación con estatinas.

Los estudios recientes sugieren que la NEP desempeña un papel en la regulación de la función nerviosa en la diabetes por deficiencia de insulina y la obesidad inducida por la dieta. Coppey y col. (2011) Neuropharmacology 60:259-266. Por lo tanto, debido a su propiedad de inhibición de NEP, también se espera que la forma cristalina I' sea útil para proporcionar protección contra el deterioro nervioso causado por la diabetes o la obesidad inducida por la dieta.

La cantidad de forma cristalina I' administrada por dosis o la cantidad total administrada por día puede predeterminarse o puede determinarse para cada paciente individual teniendo en cuenta numerosos factores, incluida la naturaleza y gravedad de la afección del paciente, la afección que se está tratando, la edad, peso y salud general del paciente, la tolerancia del paciente al agente activo, la vía de administración, consideraciones farmacológicas tales como la actividad, eficacia, perfiles farmacocinéticos y toxicológicos del compuesto y cualquier agente secundario que se esté administrando, y similares. El tratamiento de un paciente que padece una enfermedad o afección médica (tal como hipertensión) puede comenzar con una dosis predeterminada o una dosis determinada por el médico tratante, y continuará durante un período de tiempo necesario para prevenir, mejorar, suprimir, o aliviar los síntomas de la enfermedad o afección médica. Los pacientes que se someten a tal tratamiento se controlarán normalmente de forma habitual para determinar la eficacia de la terapia. Por ejemplo, en el tratamiento de la hipertensión, se pueden usar mediciones de la presión arterial para determinar la eficacia del tratamiento.

Los indicadores similares para otras enfermedades y afecciones descritas en esta invención son bien conocidos y están fácilmente disponibles para el médico tratante. El monitoreo continuo por parte del médico asegurará que la cantidad óptima de forma cristalina I' se administrará en cualquier momento, además de facilitar la determinación de la duración del tratamiento. Esto es de particular valor cuando también se administran agentes secundarios, ya que su selección, dosis y duración de la terapia también pueden requerir un ajuste. De esta manera, el régimen de tratamiento y el programa de dosificación se pueden ajustar durante el transcurso de la terapia de modo que se administre la cantidad más baja de agente activo que presente la eficacia deseada y, además, esa administración se continúe solo mientras sea necesario para tratar con éxito la enfermedad o afección médica.

El compuesto I encuentra utilidad como intermedio útil para la preparación de la forma cristalina I'

Herramientas de investigación

Dado que la forma cristalina I' posee actividad inhibidora de la enzima NEP, también es útil como herramienta de investigación para investigar o estudiar sistemas biológicos o muestras que tienen una enzima NEP, por ejemplo, para estudiar enfermedades en las que la enzima NEP o sus sustratos peptídicos desempeña un papel. Se puede emplear cualquier sistema biológico adecuado o muestra que tenga una enzima NEP en tales estudios que se pueden realizar in vitro o in vivo. Los sistemas biológicos o muestras representativos adecuados para tales estudios incluyen, pero no se limitan a, células, extractos celulares, membranas plasmáticas, muestras de tejido, órganos aislados, mamíferos (tales como ratones, ratas, cobayas, conejos, perros, cerdos, seres humanos, etc.), y similares, siendo los mamíferos de particular interés. En una realización particular de la invención, la actividad de la enzima NEP en un mamífero se inhibe administrando una cantidad inhibidora de NEP de la forma cristalina I'.

Cuando se utiliza como herramienta de investigación, un sistema biológico o una muestra que comprende una enzima NEP se pone en contacto típicamente con una cantidad inhibidora de la enzima NEP de la forma cristalina I'. Después de que el sistema biológico o la muestra se exponen al compuesto, los efectos de inhibir la enzima NEP se determinan usando procedimientos y equipos convencionales, tales como midiendo la unión del receptor en un ensayo de unión o midiendo los cambios mediados por ligando en un ensayo funcional. La exposición abarca poner en contacto células o tejidos con el compuesto, administrar el compuesto a un mamífero, por ejemplo, por vía ip, po, iv, sc,o administración inhalada, etc. Esta etapa de determinación puede implicar la medición de una respuesta (un análisis cuantitativo) o puede implicar la realización de una observación (un análisis cualitativo). Medir una respuesta implica, por ejemplo, determinar los efectos del compuesto en el sistema biológico o la muestra usando procedimientos y equipos convencionales, tales como ensayos de actividad enzimática y medir cambios en ensayos funcionales mediados por el sustrato enzimático o el producto. Los resultados del ensayo pueden usarse para determinar el nivel de actividad así como la cantidad de compuesto necesaria para lograr el resultado deseado, es decir, una cantidad inhibidora de la enzima NEP. Típicamente, la etapa de determinación implicará determinar los efectos de inhibir la enzima NEP.

Además, la forma cristalina I' puede usarse como una herramienta de investigación para evaluar otros compuestos químicos y, por lo tanto, también es útil en ensayos de cribado para descubrir, por ejemplo, nuevos compuestos que tengan actividad inhibidora de NEP. De esta manera, la forma cristalina I' se usa como patrón en un ensayo para permitir la comparación de los resultados obtenidos con un compuesto de prueba y con la forma cristalina I' para identificar aquellos compuestos de prueba que tienen una actividad aproximadamente igual o superior, si es que la tienen. Por ejemplo, los datos de pKⁱ para un compuesto de prueba o un grupo de compuestos de prueba se compara con los datos de pKⁱ para la forma cristalina I' para identificar aquellos compuestos de prueba que tienen las propiedades deseadas, por ejemplo, compuestos de prueba que tienen un valor de pKⁱ igual o superior al compuesto de la invención. Este aspecto de la invención incluye, como realizaciones separadas, tanto la generación de datos de comparación (usando los ensayos apropiados) como el análisis de datos de prueba para identificar compuestos de prueba de interés.

Por lo tanto, un compuesto de prueba puede evaluarse en un ensayo biológico, mediante un procedimiento que comprende las etapas de: (a) realizar un ensayo biológico con un compuesto de prueba para proporcionar un primer valor de ensayo; (b) realizar el ensayo biológico con la forma cristalina I' para proporcionar un segundo valor de ensayo; donde la etapa (a) se realiza antes, después o al mismo tiempo que la etapa (b); y (c) comparar el primer valor de ensayo de la etapa (a) con el segundo valor de ensayo de la etapa (b). Los ensayos biológicos ejemplares incluyen un ensayo de inhibición de la enzima NEP.

Otro aspecto más de la invención se refiere a un procedimiento para estudiar un sistema biológico o muestra que comprende una enzima NEP, comprendiendo el procedimiento: (a) poner en contacto el sistema biológico o muestra con la forma cristalina I'; y (b) determinar los efectos provocados por el compuesto sobre el sistema biológico o la muestra.

COMPOSICIONES Y FORMULACIONES FARMACÉUTICAS

La forma cristalina I' se administra típicamente a un paciente en forma de una composición o formulación farmacéutica. Tales composiciones farmacéuticas se pueden administrar al paciente mediante cualquier vía de administración aceptable que incluye, pero no se limita a, modos de administración por vía oral, rectal, vaginal, nasal, inhalado, tópico (incluyendo transdérmico), ocular y parenteral. Además, la forma cristalina I' puede administrarse, por ejemplo, por vía oral, en múltiples dosis al día (por ejemplo, dos, tres o cuatro veces al día), en una única dosis diaria o en una única dosis semanal. Se entenderá que cualquier forma de forma cristalina I', (es decir, base libre, ácido libre, sal farmacéuticamente aceptable, solvato, etc.) que sea adecuada para el modo particular de administración puede usarse en las composiciones farmacéuticas analizadas en esta invención.

En consecuencia, en una realización, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y el Compuesto 1'. La composición puede contener otros agentes terapéuticos y/o de formulación si se desea. Cuando se habla de composiciones, la "forma cristalina I'" también puede denominarse en esta invención "agente activo", para distinguirla de otros componentes de la formulación, tal como el vehículo.

Por lo tanto, se entiende que el término "agente activo" incluye la forma cristalina I' así como sus sales farmacéuticamente aceptables.

Las composiciones farmacéuticas de la invención contienen típicamente una cantidad terapéuticamente efectiva de la forma cristalina I'. Los expertos en la materia reconocerán, sin embargo, que una composición farmacéutica puede contener más de una cantidad terapéuticamente efectiva, tal como en composiciones a granel, o menos de una cantidad terapéuticamente efectiva, es decir, dosis unitarias individuales diseñadas para la administración múltiple para lograr una cantidad terapéuticamente efectiva. Típicamente, la composición contendrá de aproximadamente el 0,01-99 % en peso de agente activo, dependiendo la cantidad real de la propia formulación, la vía de administración, la frecuencia de dosificación, etc. En una realización, una composición adecuada para una forma de dosificación oral, por ejemplo, puede contener aproximadamente el 10-99 % en peso, o aproximadamente el 50-99 % en peso de agente activo.

Se puede usar cualquier vehículo o excipiente convencional en las composiciones farmacéuticas de la invención. La elección de un vehículo o excipiente particular, o combinaciones de vehículos o excipientes, dependerá del modo de administración que se use para tratar a un paciente particular o tipo de afección médica o patología. A este respecto, la preparación de una composición adecuada para un modo de administración particular está dentro del alcance de los expertos en la técnica farmacéutica. Además, los vehículos o excipientes usados en tales composiciones están disponibles en el mercado. A modo de ilustración adicional, las técnicas de formulación convencionales se describen en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); y HC Ansel y col., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7a edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).

Los ejemplos representativos de materiales que pueden servir como vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa, tal como celulosa microcristalina, y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa de sodio, etilcelulosa y acetato de celulosa; sales de ácidos grasos, tales como estearato de magnesio; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja; glicoles, tales como propilenglicol; polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tamponadores, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua libre de pirógenos; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico; soluciones de tampón fosfato; gases propulsores comprimidos, tales como clorofluorocarbonos e hidrofluorocarbonos; y otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en composiciones farmacéuticas.

En una realización de la invención, el vehículo farmacéuticamente aceptable es estearato de magnesio. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede comprender la forma cristalina I' y estearato de magnesio en una relación de aproximadamente 3:1 a aproximadamente 10:1 de la forma cristalina I' a estearato de magnesio. Otras relaciones de la forma cristalina I' a estearato de magnesio incluyen, pero no se limitan a, 1:1, 5:1, 15:1, 20:1,25:1, 30:1 y 50:1. En otra realización, la cantidad de forma cristalina I' a estearato de magnesio puede expresarse como % en peso. Por ejemplo, una composición farmacéutica puede comprender el 99 % en peso de la forma cristalina I' y el 1 % en peso de estearato de magnesio. En otra realización, la relación de peso de la forma cristalina I' a estearato de magnesio está entre 85:15 y 99:1, respectivamente. En una realización preferida de la invención, la relación de peso de la forma cristalina I' a estearato de magnesio está entre 95:5 y 99:1, preferiblemente 99:1.

Las composiciones farmacéuticas se preparan típicamente mezclando o combinando completa e íntimamente el agente activo con un vehículo farmacéuticamente aceptable y uno o más ingredientes opcionales. A continuación, la mezcla resultante uniformemente mezclada puede moldearse o cargarse en comprimidos, cápsulas, píldoras, botes, cartuchos, dispensadores y similares utilizando procedimientos y equipos convencionales.

En una realización, las composiciones farmacéuticas son adecuadas para la administración por vía oral. Las composiciones adecuadas para la administración por vía oral pueden estar en forma de cápsulas, comprimidos, píldoras, pastillas para chupar, obleas, grageas, polvos, gránulos; soluciones o suspensiones en un líquido acuoso o no acuoso; emulsiones líquidas de aceite en agua o agua en aceite; elixires o jarabes; y similares; conteniendo cada uno una cantidad predeterminada del agente activo.

Cuando están destinadas a la administración por vía oral en una forma de dosificación sólida (cápsulas, comprimidos, píldoras y similares), la composición comprenderá típicamente el agente activo y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, tales como citrato de sodio, fosfato dicálcico o estearato de magnesio. Las formas de dosificación sólidas también pueden comprender cargas o extensores, tales como almidones, celulosa microcristalina, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y/o ácido silícico; aglutinantes, tales como carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y/o goma arábiga; humectantes, tales como glicerol; agentes desintegrantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, determinados silicatos y/o carbonato de sodio; agentes retardadores de la solución, tales como parafina; aceleradores de la absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes humectantes, tales como alcohol cetílico y/o monoestearato de glicerol; absorbentes, tales como caolín y/o arcilla bentonita; lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato de sodio y/o mezclas de los mismos; agentes colorantes; y agentes tamponadores. Para la finalidad de esta invención, los términos "vehículos farmacéuticamente aceptables" incluyen todos los términos tales como vehículos, cargas o extensores, aglutinantes, humectantes, agentes retardadores de la solución, agentes humectantes, absorbentes, lubricantes, agentes colorantes y agentes tamponadores descritos anteriormente.

Los agentes de liberación, agentes humectantes, agentes de recubrimiento, edulcorantes, aromatizantes y agentes perfumantes, conservantes y antioxidantes también pueden estar presentes en las composiciones farmacéuticas. Los agentes de recubrimiento ejemplares para comprimidos, cápsulas, píldoras y similares, incluyen los usados para recubrimientos entéricos, tales como acetato ftalato de celulosa, acetato ftalato de polivinilo, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, copolímeros de ácido metacrílico-éster de ácido metacrílico, trimelitato acetato de celulosa, carboximetil etil celulosa, hidroxipropil succinato de acetato de metilcelulosa y similares. Los ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfato de sodio, sulfito de sodio y similares; antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol y similares; y agentes quelantes de metales, tales como ácido cítrico, ácido etilendiaminotetraacético, sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y similares.

Las composiciones también se pueden formular para proporcionar una liberación lenta o controlada del agente activo usando, a modo de ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa en proporciones variables u otras matrices poliméricas, liposomas y/o microesferas. Además, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden contener agentes opacificantes y pueden formularse de modo que liberen el agente activo solo, o preferencialmente, en una determinada porción del tracto gastrointestinal, opcionalmente, de manera retardada. Los ejemplos de composiciones de incrustación que se pueden usar incluyen sustancias poliméricas y ceras. El agente activo también puede estar en forma microencapsulada, opcionalmente con uno o más de los excipientes descritos anteriormente.

Una realización de la invención incluye una forma de dosificación oral que comprende la forma cristalina I' en una cápsula, comprimido, líquido o suspensión. Otra realización de la invención se refiere a una forma de dosificación oral en la que una liberación de la forma cristalina I' en un sujeto es una liberación inmediata, controlada o retardada. Si se usa una cápsula como forma de dosificación oral, otra realización incluye que la cápsula esté compuesta de gelatina, polisacáridos o polímeros sintéticos. En una realización particular, la cápsula comprende hidroxipropilmetilcelulosa.

Los materiales de cápsula adecuados según la invención se seleccionan de entre gelatina, derivados de celulosa, almidón, derivados de almidón, quitosano y plásticos sintéticos. Si se usa gelatina como material de cápsula, se puede usar en mezcla con otros aditivos seleccionados de entre polietilenglicol (PEG), glicerol, sorbitol, polipropilenglicol, copolímeros de bloque de PEO-PPO y otros polialcoholes y poliéteres. Cuando se usa un derivado de celulosa como material de cápsula, los polímeros preferidos son hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, metilcelulosa, hidroximetilcelulosa e hidroxietilcelulosa. Si se utilizan plásticos sintéticos como material de cápsula, los materiales preferidos son polietileno, policarbonato, poliéster, polipropileno y tereftalato de polietileno. El polietileno, policarbonato o tereftalato de polietileno son particularmente preferidos.

Las formas de dosificación líquidas adecuadas para la administración por vía oral incluyen, a modo de ilustración, emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Las formas de dosificación líquidas comprenden típicamente el agente activo y un diluyente inerte, tal como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites (por ejemplo, aceites de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán y mezclas de los mismos. Las suspensiones pueden contener agentes de suspensión tales como, por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilensorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, y mezclas de los mismos.

Cuando están destinadas a la administración por vía oral, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden envasarse en una forma de dosificación unitaria. El término "forma de dosificación unitaria" se refiere a una unidad físicamente discreta adecuada para dosificar a un paciente, es decir, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada del agente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado ya sea solo o en combinación con una o más unidades adicionales. Por ejemplo, tales formas de dosificación unitaria pueden ser cápsulas, comprimidos, píldoras y similares.

En otra realización, las composiciones de la invención son adecuadas para la administración por inhalación y, típicamente, estarán en forma de aerosol o polvo. Tales composiciones se administran generalmente usando dispositivos de suministro bien conocidos, tales como un nebulizador, polvo seco o inhalador de dosis medidas. Los dispositivos nebulizadores producen una corriente de aire a alta velocidad que hace que la composición se pulverice como una bruma que se lleva al tracto respiratorio del paciente. Una formulación de nebulizador ejemplar comprende el agente activo disuelto en un vehículo para formar una solución, o micronizado y combinado con un vehículo para formar una suspensión de partículas micronizadas de tamaño respirable. Los inhaladores de polvo seco administran el agente activo como un polvo de flujo libre que se dispersa en la corriente de aire del paciente durante la inspiración. Una formulación de polvo seco ejemplar comprende el agente activo mezclado en seco con un excipiente tal como lactosa, almidón, manitol, dextrosa, ácido poliláctico, polilactida-co-glicólido y combinaciones de los mismos. Los inhaladores de dosis medidas descargan una cantidad medida del agente activo usando gas propulsor comprimido. Una formulación de dosis medida ejemplar comprende una solución o suspensión del agente activo en un propulsor licuado, tal como un clorofluorocarbono o hidrofluoroalcano. Los componentes opcionales de tales formulaciones incluyen codisolventes, tales como etanol o pentano, y tensioactivos, tales como trioleato de sorbitán, ácido oleico, lecitina, glicerina y laurilsulfato de sodio. Tales composiciones se preparan típicamente añadiendo hidrofluoroalcano enfriado o presurizado a un recipiente adecuado que contiene el agente activo, etanol (si está presente) y el tensioactivo (si está presente). Para preparar una suspensión, el agente activo se microniza y a continuación se combina con el propulsor. Alternativamente, se puede preparar una formulación en suspensión secando por pulverización un recubrimiento de tensioactivo sobre partículas micronizadas del agente activo. A continuación, la formulación se carga en un bote de aerosol, que forma una parte del inhalador.

La forma cristalina I' y sus composiciones también se pueden administrar por vía parenteral, por ejemplo, mediante inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular o intraperitoneal. Para tal administración, el agente activo se proporciona en una solución, suspensión o emulsión estéril. Los disolventes ejemplares para preparar tales formulaciones incluyen agua, solución salina, electrolitos, alcoholes de bajo peso molecular tales como propilenglicol y polietilenglicol, aceites, aminoácidos, gelatina, azúcares, ésteres de ácidos grasos tales como oleato de etilo y similares. Las formulaciones parenterales también pueden contener uno o más antioxidantes, solubilizantes, estabilizadores, conservantes, agentes humectantes, emulsionantes y agentes dispersantes. Los tensioactivos, agentes estabilizadores adicionales o agentes de ajuste del pH (ácidos, bases o tampones) y antioxidantes son particularmente útiles para proporcionar estabilidad a la formulación, por ejemplo, para minimizar o evitar la hidrólisis de enlaces éster y amida que pueden estar presentes en el compuesto. Estas formulaciones se pueden esterilizar mediante el uso de un medio inyectable estéril, un agente esterilizante, filtración, irradiación o calor.

Los vehículos acuosos fisiológicamente aceptables representativos incluyen, a modo de ejemplo, agua estéril para inyección, USP; inyección de dextrosa, USP (por ejemplo, dextrosa al 2,5, 5,0,10, 20 %, incluyendo inyección de dextrosa al 5 % (D5/W)); inyección de dextrosa y cloruro de sodio, USP (por ejemplo, dextrosa que varía del 2,5 al 10 % y cloruro de sodio que varía del 0,12 (19 mEq de sodio) al 0,9 % (154 mEq de sodio)); inyección de manitol, USP, (por ejemplo, manitol al 5, 10, 15, 20 y 25 %); inyección de Ringer, USP (por ejemplo, 147 mEq de sodio, 4 mEq de potasio, 4,5 mEq de calcio y 156 mEq de cloruro por litro); inyección de lactato de Ringer, USP (por ejemplo, 2,7 mEq de calcio, 4 mEq de potasio, 130 mEq de sodio y 28 mEq de lactato por litro); inyección de cloruro de sodio, USP (por ejemplo, cloruro de sodio al 0,9 %) y similares.

Cuando se administra a un paciente, la forma cristalina I' se diluirá típicamente en aproximadamente 0,5 ml a aproximadamente 10 ml del vehículo acuoso por mg de la forma cristalina I', tal como de aproximadamente 0,6 a aproximadamente 8 ml por mg.

En una realización particular, la formulación parenteral comprende una solución acuosa de ciclodextrina como vehículo farmacéuticamente aceptable. Las ciclodextrinas adecuadas incluyen moléculas cíclicas que contienen seis o más unidades de a-D-glucopiranosa unidas en las posiciones 1,4 mediante enlaces como en amilasa, p-ciclodextrina o cicloheptaamilosa. Las ciclodextrinas ejemplares incluyen derivados de ciclodextrina tales como hidroxipropil y sulfobutil éter ciclodextrinas tales como hidroxipropil-p-ciclodextrina y sulfobutil éter p-ciclodextrina. Los tampones ejemplares para tales formulaciones incluyen tampones a base de ácido carboxílico tales como soluciones tampón de citrato, lactato y maleato. En una realización de la invención, una forma de dosificación intravenosa comprende la forma cristalina I' en una solución tamponada.

En una realización, la forma cristalina I' o una composición farmacéutica de la misma es un polvo liofilizado. Típicamente, el polvo liofilizado es estéril y se envasa en un vial o ampolla herméticamente cerrado o en un recipiente similar.

La forma cristalina I' también se puede administrar por vía transdérmica usando sistemas y excipientes de suministro transdérmico conocidos. Por ejemplo, la forma cristalina I' puede mezclarse con potenciadores de la permeación, tales como propilenglicol, monolaurato de polietilenglicol, azacicloalcan-2-onas y similares, e incorporarse en un parche o sistema de suministro similar. Si se desea, pueden usarse excipientes adicionales que incluyen agentes gelificantes, emulsionantes y tampones en tales composiciones transdérmicas.

Agentes secundarios

La forma cristalina I' puede ser útil como único tratamiento de una enfermedad o puede combinarse con uno o más agentes terapéuticos adicionales para obtener el efecto terapéutico deseado. Por lo tanto, en una realización, las composiciones farmacéuticas de la invención contienen otros fármacos que se administran conjuntamente con la forma cristalina I'. Por ejemplo, la composición puede comprender además uno o más fármacos (también denominados "agente(s) secundario(s)"). Tales agentes terapéuticos son bien conocidos en la técnica e incluyen antagonistas del receptor de adenosina, antagonistas del receptor a-adrenérgico, antagonistas del receptor p1-adrenérgico, agonistas del receptor p2-adrenérgico, antagonistas del receptor a 1/antagonista del receptor p-adrenérgico de acción dual, rompedores del producto final de glicación avanzada, antagonistas de aldosterona, inhibidores de la aldosterona sintasa, inhibidores de aminopeptidasa N, andrógenos, inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina e inhibidores de neprilisina/enzima convertidora de angiotensina de acción dual, activadores y estimuladores de la enzima convertidora de angiotensina 2, vacunas de angiotensina-II, anticoagulantes, agentes anti-diabéticos, agentes antidiarreicos, agentes anti-glaucoma, agentes anti-lípidos, agentes antinociceptivos, agentes anti-trombóticos, antagonistas del receptor AT1 e inhibidores de neprilisina/antagonista del receptor AT1 de acción dual y bloqueadores multifuncionales del receptor de angiotensina, antagonistas del receptor de bradicinina, bloqueadores de los canales de calcio, inhibidores de cimasa, digoxina, diuréticos, agonistas de dopamina, inhibidores de la enzima convertidora de endotelina, antagonistas del receptor de endotelina, inhibidores de la HMG-CoA reductasa, estrógenos, agonistas y/o antagonistas del receptor de estrógeno, antagonistas del receptor de mineralocorticoide, inhibidores de la recaptación de monoamina, relajantes musculares, péptidos natriuréticos y sus análogos, antagonistas del receptor de aclaramiento del péptido natriurético, inhibidores de neprilisina, donantes de óxido nítrico, agentes anti-inflamatorios no esteroideos, antagonistas del receptor de N-metil d-aspartato, agonistas del receptor de opioide, inhibidores de fosfodiesterasa (por ejemplo, PDE5 y PDE9), análogos de prostaglandina, agonistas del receptor de prostaglandina, inhibidores de renina, inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina, bloqueadores de los canales de sodio, estimuladores y activadores de la guanilato ciclasa soluble, antidepresivos tricíclicos, antagonistas del receptor de vasopresina y combinaciones de los mismos. Los ejemplos específicos de estos agentes se detallan en esta invención.

Una realización específica incluye una composición farmacéutica que comprende la forma cristalina I' o forma cristalina de la misma y un antagonista del receptor AT1, un inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina, un inhibidor de fosfodiesterasa (PDE), un inhibidor de renina, un diurético o combinaciones de los mismos, y opcionalmente uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.

En consecuencia, en otro aspecto más de la invención, una composición farmacéutica comprende la forma cristalina I', un segundo agente activo y un vehículo farmacéuticamente aceptable. También se pueden incluir en la composición agentes activos terceros, cuartos, etc. En la terapia de combinación, la cantidad de forma cristalina I' que se administra, así como la cantidad de agentes secundarios, puede ser menor que la cantidad administrada típicamente en monoterapia.

La forma cristalina I' se puede mezclar físicamente con el segundo agente activo para formar una composición que contenga ambos agentes; o cada agente puede estar presente en composiciones distintas y separadas que se administran al paciente simultáneamente o en momentos separados. Por ejemplo, la forma cristalina I' se puede combinar con un segundo agente activo usando procedimientos y equipos convencionales para formar una combinación de agentes activos que comprenden la forma cristalina I' y un segundo agente activo. Además, los agentes activos se pueden combinar con un vehículo farmacéuticamente aceptable para formar una composición farmacéutica que comprende la forma cristalina I', un segundo agente activo y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En esta realización, los componentes de la composición se mezclan o combinan típicamente para crear una mezcla física. A continuación, la mezcla física se administra en una cantidad terapéuticamente efectiva utilizando cualquiera de las vías descritas en esta invención.

Alternativamente, los agentes activos pueden permanecer separados y distintos antes de la administración al paciente. En esta realización, los agentes no se mezclan físicamente antes de la administración, sino que se administran simultáneamente o en momentos separados como composiciones separadas. Tales composiciones se pueden envasar por separado o se pueden envasar juntas en un kit. Cuando se administra en momentos separados, el agente secundario se administrará típicamente menos de 24 horas después de la administración de la forma cristalina I', variando desde concurrente con la administración del compuesto de la invención hasta aproximadamente 24 horas después de la dosis. Esto también se conoce como administración secuencial. Por lo tanto, la forma cristalina I' se puede administrar por vía oral de forma simultánea o secuencial con otro agente activo usando dos comprimidos, con un comprimido para cada agente activo, donde secuencial puede significar administrarse inmediatamente después de la administración de la forma cristalina I' o en algún momento predeterminado después (por ejemplo, una hora después o tres horas después). También se contempla que el agente secundario se pueda administrar más de 24 horas después de la administración de la forma cristalina I'. Alternativamente, la combinación puede administrarse por diferentes vías de administración, es decir, una por vía oral y la otra por inhalación.

En una realización, el kit comprende una primera forma de dosificación que comprende la forma cristalina I' y al menos una forma de dosificación adicional que comprende uno o más de los agentes secundarios expuestos en esta invención, en cantidades suficientes para llevar a cabo los usos en los procedimientos de la invención. La primera forma de dosificación y la segunda (o tercera, etc.) forma de dosificación comprenden juntas una cantidad terapéuticamente efectiva de agentes activos para el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección médica en un paciente.

El(los) agente(s) secundario(s), cuando se incluyen, están presentes en una cantidad terapéuticamente efectiva de manera que se administran típicamente en una cantidad que produce un efecto terapéuticamente beneficioso cuando se administran conjuntamente con la forma cristalina I' de la invención. El agente secundario puede estar en forma de sal, solvato, estereoisómero ópticamente puro, etc., farmacéuticamente aceptables. El agente secundario también puede estar en forma de profármaco, por ejemplo, un compuesto que tiene un grupo ácido carboxílico que ha sido esterificado. Por lo tanto, los agentes secundarios enumerados en esta invención pretenden incluir todas estas formas y están disponibles en el mercado o pueden prepararse usando procedimientos y reactivos convencionales.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un antagonista del receptor de adenosina, cuyos ejemplos incluyen naxifilina, rolofilina, SLV-320, teofilina y tonapofilina.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un antagonista del receptor a-adrenérgico, cuyos ejemplos incluyen doxazosina, prazosina, tamsulosina y terazosina.

La forma cristalina I' también se puede administrar en combinación con un antagonista del receptor p1-adrenérgico ("p1-bloqueador"), cuyos ejemplos incluyen acebutolol, alprenolol, amosulalol, arotinolol, atenolol, befunolol, betaxolol, bevantolol, bisoprolol, bopindolol, bucindolol, bucumolol, bufetolol, bufuralol, bunitrolol, bupranolol, bubridina, butofilolol, carazolol, carteolol, carvedilol, celiprolol, cetamolol, cloranolol, dilevalol, epanolol, esmolol, indenolol, labetolol, levobunolol, mepindolol, metipranolol, metoprolol tal como succinato de metoprolol y tartrato de metoprolol, moprolol, nadolol, nadoxolol, nebivalol, nipradilol, oxprenolol, penbutolol, perbutolol, pindolol, practolol, pronetalol, propranolol, sotalol, sufmalol, talindol, tertatolol, tilisolol, timolol, toliprolol, xibenolol y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el antagonista de p1 se selecciona de entre atenolol, bisoprolol, metoprolol, propranolol, sotalol y combinaciones de los mismos. Típicamente, el p1-bloqueador se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 2-900 mg por dosis.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un agonista del receptor p2-adrenérgico, cuyos ejemplos incluyen albuterol, bitolterol, fenoterol, formoterol, indacaterol, isoetarina, levalbuterol, metaproterenol, pirbuterol, salbutamol, salmefamol, salmeterol, terbutalina, vilanterol y similares. Típicamente, el agonista del receptor p2-adrenérgico se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 0,05-500 pg por dosis.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un rompedor de producto final de glicación avanzada (FGA), cuyos ejemplos incluyen alagebrium (o ALT-711) y TRC4149.

En otra realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un antagonista de aldosterona, cuyos ejemplos incluyen eplerenona, espironolactona y combinaciones de los mismos. Típicamente, el antagonista de aldosterona se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 5-300 mg por día.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con una aminopeptidasa N o inhibidor de dipeptidil peptidasa III, cuyos ejemplos incluyen bestatina y PC18 (2-amino-4-metilsulfonil butano tiol, metionina tiol).

La forma cristalina I' también se puede administrar en combinación con un inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina (ECA), cuyos ejemplos incluyen acupril, alacepril, benazepril, benazeprilat, captopril, ceranapril, cilazapril, delapril, enalapril, enalaprilat, fosinopril, fosinoprilat, imidapril, lisinopril, moexipril, monopril, moveltipril, pentopril, perindopril, quinapril, quinaprilat, ramipril, ramiprilat, acetato de saralasina, espirapril, temocapril, trandolapril, zofenopril y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el inhibidor de la ECA se selecciona de entre: benazepril, captopril, enalapril, lisinopril, ramipril y combinaciones de los mismos. Típicamente, el inhibidor de ECA se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 1-150 mg por día.

En otra realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un inhibidor de neprilisina/enzima convertidora de angiotensina (NEP/ECA) de acción dual, cuyos ejemplos incluyen: AVE-0848 (ácido (4S,7S,12bR)-7-[3-metil-2(S)-sulfanilbutiramido]-6-oxo-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahidropirido[2,1-a] [2]-benzazepina-4-carboxílico); AVE-7688 (ilepatril) y su compuesto original; BMS-182657 (ácido (2-2-oxo-3(S)-[3-fenil-2(S)-sulfanilpropionamido]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-1-benzazepin-1-il]acético); CGS-35601 (N-[1-[4-metil-2(S)-sulfanilpentanamido]ciclopentilcarbonil]-L-triptófano); fasidotril; fasidotrilato; enalaprilat; ER-32935 (ácido (3R,6S,9aR)-6-[3(S)-metil-2(S)-sulfanilpentanamido]-5-oxoperhidrotiazolo[3,2-a]azepina-3-carboxílico); gempatrilat; MDL-101264 (ácido (4S,7S,12bR)-7-[2(S)-(2-morfolinoacetiltio)-3-fenilpropionamido]-6-oxo-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahidropirido[2,1-a][2] benzazepina-4-carboxílico); MDL-101287 (ácido [4S-[4a,7a(R*),12b6/]-7-[2-(carboximetil)-3-fenilpropionamido]-6-oxo-1,2,3,4,6,7,8,12boctahidropirido[2,1-a][2]benzazepina-4-carboxílico); omapatrilat; RB-105 (N-[2(S)-(mercaptometil)-3(R)-fenilbutil]-L-alanina); sampatrilat; SA-898 ((2R,4R)-N-[2-(2-hidroxifenil)-3-(3-mercaptopropionil)tiazolidin-4-ilcarbonil]-L fenilalanina); Sch-50690 (N-[7('S)-carbox¡-2-[N2-(metanosulfon¡l)-L-l¡s¡lam¡no]et¡l]-L-valil-L-t¡ros¡na); y combinaciones de los mismos, también pueden incluirse. En una realización particular, el inhibidor de NEP/ECA se selecciona de entre: AVE-7688, enalaprilat, fasidotril, fasidotrilato, omapatrilat, sampatrilat y combinaciones de los mismos.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un activador o estimulador de la enzima convertidora de angiotensina 2 (ECA2).

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con una vacuna de angiotensina-II, cuyos ejemplos incluyen ATR12181 y CYT006-AngQb.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un anticoagulante, cuyos ejemplos incluyen: cumarinas tales como warfarina; heparina; e inhibidores directos de la trombina tales como argatrobán, bivalirudina, dabigatrán y lepirudina.

En otra realización más, la forma cristalina I' se administra en combinación con un agente antidiabético, cuyos ejemplos incluyen fármacos inyectables así como fármacos efectivos por vía oral y combinaciones de los mismos. Los ejemplos de fármacos inyectables incluyen insulina y derivados de insulina. Los ejemplos de fármacos por vía oral efectivos incluyen: biguanidas tales como la metformina; antagonistas del glucagón; inhibidores de a-glucosidasa tales como acarbosa y miglitol; inhibidores de la dipeptidil peptidasa IV (inhibidores de DPP-IV) tales como alogliptina, denagliptina, linagliptina, saxagliptina, sitagliptina y vildagliptina; meglitinidas tales como repaglinida; oxadiazolidinedionas; sulfonilureas tales como clorpropamida, glimepirida, glipizida, gliburida y tolazamida; tiazolidinedionas tales como pioglitazona y rosiglitazona; y combinaciones de los mismos.

En otra realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con tratamientos antidiarreicos. Las opciones de tratamiento representativas incluyen soluciones de rehidratación oral (SRO), loperamida, difenoxilato y subsalicilato de bismuto.

En otra realización más, la forma cristalina I' se administra en combinación con un agente anti-glaucoma, cuyos ejemplos incluyen: agonistas a-adrenérgicos tales como brimonidina; antagonistas del receptor p1-adrenérgico; p1-bloqueadores tópicos tales como betaxolol, levobunolol y timolol; inhibidores de la anhidrasa carbónica tales como acetazolamida, brinzolamida o dorzolamida; agonistas colinérgicos tales como cevimelina y DMXB-anabaseína; compuestos de epinefrina; mióticos tales como pilocarpina; y análogos de prostaglandina.

En otra realización más, la forma cristalina I' se administra en combinación con un agente anti-lípido, cuyos ejemplos incluyen: inhibidores de la proteína de transferencia de éster de colesterilo (PTEC) tales como anacetrapib, dalcetrapib y torcetrapib; estatinas tales como atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pravastatina, rosuvastatina y simvastatina; y combinaciones de los mismos.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un agente antitrombótico, cuyos ejemplos incluyen: aspirina; agentes antiplaquetarios tales como clopidogrel, prasugrel y ticlopidina; heparina y combinaciones de los mismos.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un antagonista del receptor AT1 , también conocido como bloqueadores del receptor de angiotensina II tipo 1 (BRA). Los BRA representativos incluyen abitesartán, azilsartán (por ejemplo, azilsartán medoxomilo), bencilosartán, candesartán, candesartán cilexetilo, elisartán, embusartán, enoltasosartán, eprosartán, EXP3174, fonsartán, forasartán, glicilosartán, irbesartán, isoteolina, losartán, medoxomilo, milfasartán, olmesartán (por ejemplo, olmesartán medoxomilo), opomisartán, pratosartán, ripisartán, saprisartán, saralasina, sarmesina, TAK-591, tasosartán, telmisartán, valsartán, zolasartán y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el BRA se selecciona de entre azilsartán medoxomilo, candesartán cilexetilo, eprosartán, irbesartán, losartán, olmesartán medoxomilo, saprisartán, tasosartán, telmisartán, valsartán y combinaciones de los mismos. Los ejemplos de sales y/o profármacos incluyen candesartán cilexetilo, mesilato de eprosartán, sal de potasio de losartán y olmesartán medoxomilo. Típicamente, el BRA se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 4-600 mg por dosis, con dosis diarias ejemplares que varían entre 20-320 mg por día.

La forma cristalina I' también se pueden administrar en combinación con un agente de acción dual, tal como un inhibidor del inhibidor de neprilisina/antagonista del receptor AT1 (NEP/BRA), cuyos ejemplos incluyen los compuestos descritos en la patente de los EE.UU. n.° 7.879.896 y 8.013.005, tal como el compuesto, ácido 4'-{2-etoxi-4-etil-5-[((2^Sj-2-mercapto-4-metilpentanoilamino)-metil]imidazol-1-ilmetil}-3'-fluorobifenil-2-carboxílico.

La forma cristalina I' también se puede administrar en combinación con bloqueadores multifuncionales del receptor de angiotensina como se describe en Kurtz y Klein (2009) Hypertension Research 32:826-834.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un antagonista del receptor de bradicinina, por ejemplo, icatibant (HOE-140). Se espera que esta terapia de combinación pueda presentar la ventaja de prevenir el angioedema u otras consecuencias no deseadas de los niveles elevados de bradicinina.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un bloqueador de los canales de calcio, cuyos ejemplos incluyen amlodipino, anipamilo, aranipino, barnidipino, benciclano, benidipino, bepridilo, clentiazem, cilnidipino, cinarizina, diltiazem, efonidipino, elgodipino, etafenona, felodipina, fendilina, flunarizina, galopamilo, isradipino, lacidipino, lercanidipina, lidoflazina, lomerizina, manidipina, mibefradilo, nicardipino, nifedipino, niguldipino, niludipina, nilvadipina, nimodipino, nisoldipino, nitrendipina, nivaldipina, perhexilina, prenilamina, riosidina, semotiadilo, terodilina, tiapamilo, verapamilo y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el bloqueador de los canales de calcio se selecciona de entre amlodipino, bepridilo, diltiazem, felodipina, isradipino, lacidipino, nicardipino, nifedipino, niguldipino, niludipino, nimodipino, nisoldipino, riosidina, verapamilo, y combinaciones de los mismos. Típicamente, el bloqueador de los canales de calcio se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 2-500 mg por dosis.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un inhibidor de cimasa, tal como TPC-806 y 2-(5-formilamino-6-oxo-2-fenil-1,6-dihidropirimidina-1-il)-N-[{3,4-dioxo-1-fenil-7-(2-piridiloxi)}-2-heptil]acetamida (NK3201).

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un diurético, cuyos ejemplos incluyen: inhibidores de la anhidrasa carbónica tales como acetazolamida y diclorfenamida; diuréticos de asa, que incluyen derivados de sulfonamida tales como acetazolamida, ambusida, azosemida, bumetanida, butazolamida, cloraminofenamida, clofenamida, clopamida, clorexolona, disulfamida, etoxzolamida, furosemida, mefrusida, metazolamida, piretanida, torsemida, tripamida y xipamida, así como diuréticos que no son sulfonamida tales como ácido etacrínico y otros compuestos de ácido fenoxiacético tales como ácido tienílico, indacrinona y quincarbato; diuréticos osmóticos tales como manitol; diuréticos ahorradores de potasio, que incluyen antagonistas de aldosterona tales como espironolactona e inhibidores de los canales de Na+ tales como amilorida y triamtereno; tiazida y diuréticos de tipo tiazida tales como altiazida, bendroflumetiazida, bencilhidroclorotiazida, benztiazida, butiazida, clortalidona, clorotiazida, ciclopentiazida, ciclotiazida, epitiazida, etiazida, fenquizona, flumetiazida, hidroclorotiazida, hidroflumetiazida, indapamida, metilclotiazida, meticrano, metolazona, paraflutizida, politiazida, quinetazona, teclotiazida y triclorometiazida; y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el diurético se selecciona de entre amilorida, bumetanida, clorotiazida, clortalidona, diclorfenamida, ácido etacrínico, furosemida, hidroclorotiazida, hidroflumetiazida, indapamida, metilclotiazida, metolazona, torsemida, triamtereno y combinaciones de los mismos. El diurético se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 5-50 mg por dosis, más típicamente 6-25 mg por día, siendo las dosis comunes de 6,25 mg, 12,5 mg o 25 mg por día.

La forma cristalina I' también se puede administrar en combinación con un inhibidor de la enzima convertidora de endotelina (ECE), cuyos ejemplos incluyen fosforamidón, CGS 26303 y combinaciones del mismo.

En una realización particular, la forma cristalina I' se administra en combinación con un antagonista del receptor de endotelina, cuyos ejemplos incluyen: antagonistas selectivos del receptor de endotelina que afectan a los receptores de la endotelina A, tales como avosentán, ambrisentán, atrasentán, BQ-123, clazosentán, darusentán, sitaxentán y zibotentán; y antagonistas duales del receptor de endotelina que afectan a los receptores de la endotelina A y B, tales como bosentán, macitentán y tezosentán.

En otra realización más, la forma cristalina I' se administra en combinación con uno o más inhibidores de la HMG-CoA reductasa, que también se conocen como estatinas. Las estatinas representativas incluyen atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina y simvastatina.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un inhibidor de la recaptación de monoamina, cuyos ejemplos incluyen inhibidores de la recaptación de norepinefrina tales como atomoxetina, bupropión y el metabolito de bupropión hidroxibupropión, maprotilina, reboxetina y viloxazina; inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (ISRS) tales como citalopram y el metabolito de citalopram desmetilcitalopram, dapoxetina, escitalopram (por ejemplo, oxalato de escitalopram), fluoxetina y el metabolito de desmetilfluoxetina norfluoxetina, fluvoxamina (por ejemplo, maleato de fluvoxamina), paroxetina, sertralina y el metabolito de sertralina dimetilsertralina; inhibidores duales de la recaptación de serotonina-norepinefrina (IRSN) tales como bicifadina, duloxetina, milnaciprán, nefazodona y venlafaxina; y combinaciones de los mismos.

En otra realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un relajante muscular, cuyos ejemplos incluyen: carisoprodol, clorzoxazona, ciclobenzaprina, diflunisal, metaxalona, metocarbamol y combinaciones de los mismos.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un péptido o análogo natriurético, cuyos ejemplos incluyen: carperitida, CD-NP (Nile Therapeutics), CU-NP, nesiritida, PL-3994 (Palatin Technologies, Inc.), ularitida, cenderitida y compuestos descritos en Ogawa y col (2004) J.Biol.Chem. 279:28625-31. Estos compuestos también se denominan agonistas del receptor A del péptido natriurético (RPN-A). En otra realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un antagonista del receptor de aclaramiento del péptido natriurético (NPR-C) tal como SC-46542, cANF (4-23) y AP-811 (Veale (2000) BioorgMed Chem Lett 10:1949-52). Por ejemplo, AP-811 ha mostrado sinergia cuando se combina con el inhibidor de NEP, tiorfan (Wegner (1995) Clin.Exper.Hypert. 17:861-876).

En otra realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un inhibidor de neprilisina (NEP), cuyos ejemplos incluyen: AHU-377; candoxatril; candoxatrilat; dexecadotril (éster bencílico de (+)-N-[2(R)-(acetiltiometil)-3-fenilpropionil]glicina); CGS-24128 (ácido 3-[3-(bifenil-4-il)-2-(fosfonometilamino)propionamido]propiónico); CGS-24592 (ácido (S)-3-[3-(bifenil-4-il)-2-(fosfonometilamino)propionamido]propiónico); Cg S-25155 (éster bencílico de N-[9(R)-(acetiltiometil)-10-oxo-1-azaciclodecan-2(S)-ilcarbonil]-4(R)-hidroxi-L-prolina); derivados del ácido 3-(1-carbamoilciclohexil)propiónico descritos en el documento WO 2006/027680 de Hepworth y col. (Pfizer Inc.); JMV-390-1 (2(R)-bencil-3-(N-hidroxicarbamoil)propionil-L-isoleucil-L-leucina); ecadotril; fosforamidón; retrotiorfan; RU-42827 (2-(mercaptometil)-N-(4-piridinil)bencenopropionamida); RU-44004 (N-(4-morfolinil)-3-fenil-2-(sulfanilmetil)propionamida); SCH-32615 ((S)-N-[N-(1-carboxi-2-feniletil)-L-fenilalanil]-p-alanina) y su profármaco SCH-34826 ((S)-N-[N-[1-[[(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi]carbonil]-2-feniletil]-L-fenilalanil]-p-alanina); sialorfina; SCH-42495 (éster etílico de N-[2(S)-(acetilsulfanilmetil)-3-(2-metilfenil)propionil]-L-metionina); espinorfina; SQ-28132 (N-[2-(mercaptometil)-1-oxo-3-fenilpropil]leucina); SQ-28603 (N-[2-(mercaptometil)-1-oxo-3-fenilpropil]-p-alanina); SQ-29072 (ácido 7-[[2-(mercaptometil)-1-oxo-3-fenilpropil]amino]heptanoico); tiorfan y su profármaco racecadotrilo; UK-69578 (ácido cis-4-[[[1-[2-carboxi-3-(2-metoxietoxi)propil]ciclopentil]carbonil]amino]ciclohexanocarboxílico); UK-447,841 (ácido 2-{1-[3-(4-clorofenil)propilcarbamoil]-ciclopentilmetil}-4-metoxibutírico); UK-505.749 (ácido (R)-2-metil-3- {1-[3-(2-metilbenzotiazol-6-il)propilcarbamoil]ciclopentil}propiónico); ácido 5-bifenil-4-il-4-(3-carboxipropionilamino)-2-metilpentanoico y éster etílico del ácido 5-bifenil-4-il-4-(3-carboxipropionilamino)-2-metilpentanoico; daglutril [ácido (3S,2'R)-3- {1-[2'-(etoxicarbonil)-4'-fenilbutil]-ciclopentan-1-carbonilamino}-2,3,4,5-tetrahidro-2-oxo-1H-1-benzazepina-1-acético] descrito en el documento WO 2007/106708 de Khder y col. (Novartis AG); y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el inhibidor de NEP se selecciona de entre AHU-377, candoxatril, candoxatrilat, CGS-24128, fosforamidón, SCH-32615, SCH-34826, SQ-28603, tiorfan y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el inhibidor de NEP es un compuesto tal como daglutril o CGS-26303 (ácido [N-[2-(bifenil-4- il)-1(S)-(1H-tetrazol-5-il)etil]amino]metilfosfónico), que tienen actividad como inhibidores de la enzima convertidora de endotelina (ECE) y de ⁿ E^p . También se pueden utilizar otros compuestos NEP/ECE de acción dual. El inhibidor de NEP se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 20-800 mg por día, con dosis diarias típicas que varían entre 50-700 mg por día, más comúnmente 100-600 o 100-300 mg por día.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un donante de óxido nítrico, cuyos ejemplos incluyen: nicorandil; nitratos orgánicos tales como tetranitrato de pentaeritritol; y sidnoniminas tales como linsidomina y molsidomina.

En otra realización más, la forma cristalina I' se administra en combinación con un agente antiinflamatorio no esteroideo (AINE), cuyos ejemplos incluyen: acemetacina, ácido acetilsalicílico, alclofenac, alminoprofeno, amfenac, amiprilosa, aloxiprina, anirolac, apazona, azapropazona, benorilato, benoxaprofeno, bezpiperilona, broperamol, ácido buclóxico, carprofeno, clidanaco, diclofenaco, diflunisal, diftalona, enolicam, etodolac, etoricoxib, fenbufeno, fenclofenac, ácido fenclózico, fenoprofeno, fentiazac, feprazona, ácido flufenámico, flufenisal, fluprofeno, flurbiprofeno, furofenac, ibufenac, ibuprofeno, indometacina, indoprofeno, isoxepac, isoxicam, ketoprofeno, ketorolaco, lofemizol, lornoxicam, meclofenamato, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, meloxicam, mesalamina, miroprofeno, mofebutazona, nabumetona, naproxeno, ácido niflúmico, oxaprozina, oxpinac, oxifenbutazona, fenilbutazona, piroxicam, pirprofeno, pranoprofeno, salsalato, sudoxicam, sulfasalazina, sulindac, suprofeno, tenoxicam, tiopinac, ácido tiaprofénico, tioxaprofeno, ácido tolfenámico, tolmetina, triflumidato, zidometacina, zomepirac y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el AINE se selecciona de entre etodolac, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, ketoprofeno, ketorolaco, meloxicam, naproxeno, oxaprozina, piroxicam y combinaciones de los mismos.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un antagonista del receptor de N-metil daspartato (NMDA), cuyos ejemplos incluyen amantadina, dextrometorfano, dextropropoxifeno, ketamina, cetobemidona, memantina, metadona, etc.

En otra realización más, la forma cristalina I' se administra en combinación con un agonista del receptor de opioide (también denominados analgésicos opioides). Los agonistas del receptor de opioide representativos incluyen: buprenorfina, butorfanol, codeína, dihidrocodeína, fentanilo, hidrocodona, hidromorfona, levalorfano, levorfanol, meperidina, metadona, morfina, nalbufina, nalmefeno, nalorfina, naloxona, naltrexona, nalorfina, oxicodona, oximorfona, pentazocina, propoxifeno, tramadol y combinaciones de los mismos. En determinadas realizaciones, el agonista del receptor de opioide se selecciona de entre codeína, dihidrocodeína, hidrocodona, hidromorfona, morfina, oxicodona, oximorfona, tramadol y combinaciones de los mismos.

En una realización particular, la forma cristalina I' se administra en combinación con un inhibidor de fosfodiesterasa (PDE), particularmente un inhibidor de PDE-V. Los inhibidores representativos de PDE-V incluyen avanafilo, lodenafilo, mirodenafilo, sildenafilo (Revatio®), tadalafilo (Adcirca®), vardenafilo (Levitra®) y udenafilo

En otra realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un análogo de prostaglandina (también denominados prostanoides o análogos de prostaciclina). Los análogos de prostaglandina representativos incluyen beraprost de sodio, bimatoprost, epoprostenol, iloprost, latanoprost, tafluprost, travoprost y treprostinilo, siendo de particular interés bimatoprost, latanoprost y tafluprost.

En otra realización más, la forma cristalina I' se administra en combinación con un agonista del receptor de prostaglandina, cuyos ejemplos incluyen bimatoprost, latanoprost, travoprost, etc.

La forma cristalina I' también se puede administrar en combinación con un inhibidor de renina, cuyos ejemplos incluyen aliskiren, enalkiren, remikiren y combinaciones de los mismos.

En otra realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un inhibidor selectivo de la recaptación de serotonina (ISRS), cuyos ejemplos incluyen: citalopram y el metabolito del citalopram desmetilcitalopram, dapoxetina, escitalopram (por ejemplo, escitalopram oxalato), fluoxetina y el metabolito de desmetilfluoxetina norfluoxetina, fluvoxamina (por ejemplo, fluvoxamina maleato), paroxetina, sertralina y el metabolito de sertralina demetilsertralina, y combinaciones de los mismos.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un agonista del receptor de serotonina 5-HT-^id , cuyos ejemplos incluyen triptanos tales como almotriptán, avitriptán, eletriptán, frovatriptán, naratriptán, rizatriptán, sumatriptán y zolmitriptán.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un bloqueador de los canales de sodio, cuyos ejemplos incluyen carbamazepina, fosfenitoína, lamotrigina, lidocaína, mexiletina, oxcarbazepina, fenitoína y combinaciones de los mismos.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un estimulador o activador de la guanilato ciclasa soluble, cuyos ejemplos incluyen ataciguat, riociguat y combinaciones de los mismos.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un antidepresivo tricíclico (ATC), cuyos ejemplos incluyen amitriptilina, amitriptilinóxido, butriptilina, clomipramina, demexiptilina, desipramina, dibenzepina, dimetacrina, dosulepina, doxepina, imipramina, imipraminóxido, lofepramina, melitraceno, metapramina, nitroxazepina, nortriptilina, noxiptilina, pipofezina, propizepina, protriptilina, quinupramina y combinaciones de los mismos.

En una realización, la forma cristalina I' se administra en combinación con un antagonista del receptor de vasopresina, cuyos ejemplos incluyen conivaptán y tolvaptán.

Los agentes terapéuticos secundarios combinados también pueden ser útiles en una terapia de combinación adicional con el compuesto de la invención. Por ejemplo, el compuesto de la invención se puede combinar con un diurético y un BRA, o un bloqueador de los canales de calcio y un ^b R^a , o un diurético y un inhibidor de ECA, o un bloqueador de los canales de calcio y una estatina. Los ejemplos específicos incluyen una combinación del inhibidor de ECA enalapril (en forma de sal de maleato) y el diurético hidroclorotiazida, que se comercializa con la marca Vaseretic®, o una combinación del bloqueador de los canales de calcio amlodipino (en forma de sal de besilato) y el BRA olmesartán (en forma del profármaco olmesartán), o una combinación de un bloqueador de los canales de calcio y una estatina, todos se pueden utilizar también con el Compuesto I. Los agonistas del receptor a²-adrenérgico ejemplares incluyen clonidina, dexmedetomidina y guanfacina.

Las siguientes formulaciones ilustran composiciones farmacéuticas representativas de la invención.

Cápsulas de gelatina dura ejemplares para la administración por vía oral

Se mezclan a fondo el compuesto de la invención (50 g), 440 g de lactosa secada por pulverización y 10 g de estearato de magnesio. A continuación, la composición resultante se carga en cápsulas de gelatina dura (500 mg de composición por cápsula). Alternativamente, la forma cristalina I' (20 mg) se mezcla a fondo con almidón (89 mg), celulosa microcristalina (89 mg) y estearato de magnesio (2 mg). A continuación, la mezcla se pasa a través de un tamiz de malla n.° 45 de EE.UU. y se carga en una cápsula de gelatina dura (200 mg de composición por cápsula).

Alternativamente, la forma cristalina I' (30 g), un agente secundario (20 g), 440 g de lactosa secada por pulverización y 10 g de estearato de magnesio se mezclan a fondo y se procesan como se ha descrito anteriormente.

Formulación de cápsula de gelatina ejemplar para la administración por vía oral La forma cristalina I' (100 mg) se mezcla a fondo con monooleato de polioxietilensorbitán (50 mg) y almidón en polvo (250 mg). A continuación, la mezcla se carga en una cápsula de gelatina (400 mg de composición por cápsula). Alternativamente, el compuesto 1 (70 mg) y un agente secundario (30 mg) se mezclan a fondo con monooleato de polioxietilensorbitán (50 mg) y almidón en polvo (250 mg), y la mezcla resultante se carga en una cápsula de gelatina (400 mg de composición por cápsula). Alternativamente, la forma cristalina I' (40 mg) se mezcla a fondo con celulosa microcristalina (Avicel PH 103; 259,2 mg) y estearato de magnesio (0,8 mg). A continuación, la mezcla se carga en una cápsula de gelatina (tamaño n.° 1, blanca, opaca) (300 mg de composición por cápsula).

Cápsula de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) ejemplar para la administración por vía oral

La forma cristalina I' (50 mg o 100 m g), se carga directamente en una cápsula de HPMC.

Formulación de comprimido ejemplar para la administración por vía oral

La forma cristalina I' (10 mg), el almidón (45 mg) y la celulosa microcristalina (35 mg) se pasan a través de un tamiz de malla n.° 20 de EE.UU. y se mezclan a fondo. Los gránulos así producidos se secan a 50-60 °C y se pasan a través de un tamiz de malla n.° 16 de EE.UU. Una solución de polivinilpirrolidona (4 mg en forma de una solución al 10 % en agua estéril) se mezcla con carboximetil almidón de sodio (4,5 mg), estearato de magnesio (0,5 mg) y talco (1 mg), y esta mezcla se pasa a continuación a través de un tamiz de malla n.° 16 de EE.UU. A continuación, se añaden a los gránulos el carboximetil almidón de sodio, el estearato de magnesio y el talco. Después de mezclar, la mezcla se comprime en una máquina para hacer comprimidos para producir un comprimido que pesa 100 mg.

Alternativamente, la forma cristalina I' (250 mg) se mezcla a fondo con celulosa microcristalina (400 mg), dióxido de silicio ahumado (10 mg) y ácido esteárico (5 mg). A continuación, la mezcla se comprime para formar comprimidos (665 mg de composición por comprimido).

Alternativamente, la forma cristalina I' (400 mg) se mezcla a fondo con almidón de maíz (50 mg), croscarmelosa de sodio (25 mg), lactosa (120 mg) y estearato de magnesio (5 mg). A continuación, la mezcla se comprime para formar un comprimido de una sola ranura (600 mg de composición por comprimido).

Alternativamente, la forma cristalina I' (100 mg) se mezcla a fondo con almidón de maíz (100 mg) con una solución acuosa de gelatina (20 mg). La mezcla se seca y se muele hasta obtener un polvo fino. A continuación, se mezclan celulosa microcristalina (50 mg) y estearato de magnesio (5 mg) con la formulación de gelatina, se granulan y la mezcla resultante se comprime para formar comprimidos (100 mg del compuesto de la invención por comprimido).

Formulación de suspensión ejemplar para la administración por vía oral

Los siguientes ingredientes se mezclan para formar una suspensión que contiene 100 mg de la forma cristalina I' por 10 ml de suspensión:

Ingredientes Cantidad

Forma cristalina I' 1,0 g

Ácido fumárico 0,5 g

Cloruro de sodio 2,0 g

Metilparabeno 0,15 g

Propilparabeno 0,05 g

Azúcar granulado 25,5 g

Sorbitol (solución al 70 %) 12,85 g

Veegum®K (silicato de aluminio y magnesio) 1,0 g

Saborizante 0,035 ml

Colorante 0,5 mg

Agua destilada cs hasta 100 ml

Formulación líquida ejemplar para la administración por vía oral

Una formulación líquida adecuada es aquella con un tampón a base de ácido carboxílico, tales como soluciones tampón de citrato, lactato y maleato. Por ejemplo, la forma cristalina I' (que se puede mezclar previamente con DMSO) se mezcla con un tampón de citrato de amonio 100 mM y el pH se ajusta a pH 5, o se mezcla con una solución de ácido cítrico 100 mM y el pH se ajusta a pH 2. Tales soluciones también pueden incluir un excipiente solubilizante tal como una ciclodextrina, por ejemplo, la solución puede incluir hidroxipropil-p-ciclodextrina al 10 % en peso.

Otras formulaciones adecuadas incluyen una solución de NaHCO3 al 5 %, con o sin ciclodextrina.

Formulación parenteral IV ejemplar para la administración por inyección

La forma cristalina I' (0,2 g) se mezcla con una solución tampón de acetato de sodio 0,4 M (2,0 ml). El pH de la solución resultante se ajusta a pH 4 usando ácido clorhídrico acuoso 0,5 N o hidróxido de sodio acuoso 0,5 N, según sea necesario, y a continuación se añade suficiente agua para inyección para proporcionar un volumen total de 20 ml. A continuación, la mezcla se filtra a través de un filtro estéril (0,22 micrómetros) para proporcionar una solución estéril adecuada para la administración por inyección.

Las siguientes formulaciones ilustran composiciones farmacéuticas representativas de la presente invención.

Ejemplo de formulación A

Una solución congelada adecuada para preparar una solución inyectable se prepara de la siguiente manera:

Ingredientes_____________________Cantidad___________

Compuesto activo I' De 10 a 1000 mg

Excipientes (por ejemplo, dextrosa) De 0 a 50 g

Solución de agua para inyección De 10 a 100 ml

Procedimiento representativo: Los excipientes, si los hay, se disuelven en aproximadamente el 80 % del agua para inyección y se añade y disuelve el Compuesto activo I'. El pH se ajusta con hidróxido de sodio 1 M de 3 a 4,5 y a continuación el volumen se ajusta al 95 % del volumen final con agua para inyección. El pH se verifica y ajusta, si es necesario, y el volumen se ajusta al volumen final con agua para inyección. A continuación, la formulación se filtra de forma estéril a través de un filtro de 0,22 micrómetros y se coloca en un vial estéril en condiciones asépticas. El vial se tapa, se etiqueta y se almacena congelado.

Ejemplo de formulación B

Un polvo liofilizado o un sólido cristalino adecuado para preparar una solución inyectable se prepara de la siguiente manera:

Ingredientes_____________________________ Cantidad_________________ Compuesto activo I' De 10 a 1000 mg

Excipientes (por ejemplo, manitol y/o sacarosa) De 0 a 50 g

Agente tamponador (por ejemplo, citrato) De 0 a 500 mg

Agua para inyección De 10 a 100 ml

Procedimiento representativo: Los excipientes y/o agentes tamponadores, si los hay, se disuelven en aproximadamente el 60 % del agua para inyección. El compuesto activo I' se añade y se disuelve y el pH se ajusta con hidróxido de sodio 1 M de 3 a 4,5 y el volumen se ajusta al 95 % del volumen final con agua para inyección. El pH se verifica y ajusta, si es necesario, y el volumen se ajusta al volumen final con agua para inyección. A continuación, la formulación se filtra de forma estéril a través de un filtro de 0,22 micrómetros y se coloca en un vial estéril en condiciones asépticas. A continuación, la formulación se liofiliza usando un ciclo de liofilización apropiado. El vial se tapa (opcionalmente bajo vacío parcial o nitrógeno seco), se etiqueta y se almacena en refrigeración.

Ejemplo de formulación C

Se prepara una solución inyectable para la administración intravenosa a un paciente a partir del Ejemplo de Formulación B anterior de la siguiente manera:

Procedimiento representativo: El polvo liofilizado del Ejemplo de Formulación B (por ejemplo, que contiene de 10 a 1000 mg de Compuesto activo I') se reconstituye con 20 ml de agua estéril y la solución resultante se diluye aún más con 80 ml de solución salina estéril en una bolsa de infusión de 100 ml. A continuación, la solución diluida se administra al paciente por vía intravenosa durante 30 a 120 minutos.

Composiciones ejemplares para la administración por inhalación

El Compuesto I' (0,2 mg) se microniza y a continuación se mezcla con lactosa (25 mg). A continuación, esta mezcla combinada se carga en un cartucho de inhalación de gelatina. El contenido del cartucho se administra utilizando, por ejemplo, un inhalador de polvo seco.

Alternativamente, el Compuesto I' micronizado (10 g) se dispersa en una solución preparada disolviendo lecitina (0,2 g) en agua desmineralizada (200 ml). La suspensión resultante se seca por pulverización y a continuación se microniza para formar una composición micronizada que comprende partículas que tienen un diámetro medio inferior a aproximadamente 1,5 pm. A continuación, la composición micronizada se carga en cartuchos de inhalador de dosis medidas que contienen 1,1,1,2-tetrafluoroetano presurizado en una cantidad suficiente para proporcionar aproximadamente de 10 pg a aproximadamente 500 pg del compuesto de la invención por dosis cuando se administra mediante el inhalador.

Alternativamente, el Compuesto I' (25 mg) se disuelve en solución salina isotónica tamponada con citrato (pH 5) (125 ml). La mezcla se agita y se somete a ultrasonidos hasta que se disuelve el compuesto. El pH de la solución se verifica y se ajusta, si es necesario, a pH 5 añadiendo lentamente NaOH 1 N acuoso. La solución se administra usando un dispositivo nebulizador que proporciona aproximadamente de 10 pg a aproximadamente 500 pg de Compuesto I' por dosis.

EJEMPLOS

Los siguientes Esquemas de Reacción/Preparaciones y Ejemplos se proporcionan para ilustrar realizaciones específicas de la invención. Sin embargo, estas realizaciones específicas no pretenden limitar el alcance de la invención de ninguna manera salvo que se indique específicamente.

Las siguientes abreviaturas tienen los siguientes significados salvo que se indique lo contrario y cualquier otra abreviatura utilizada en esta invención y no definida tiene su significado estándar y generalmente aceptado: ACN = acetonitrilo

CPME = Ciclopentil metil éter

d = día(s)

DCC = N,N '-diciclohexilcarbodiimida

DCM = diclorometano o cloruro de metileno

DIPE = Éter diisopropílico

DIPEA = N,N-diisopropiletilamina

DMF = N,N-dimetilformamida

EDTA = ácido etilendiaminotetraacético

EtOH = etanol

EtOAc = = acetato de etilo

g = gramo(s)

h = hora(s)

H2 = gas hidrógeno

H2O2 = peróxido de hidrógeno

HCTU = hexafluorofosfato de 2-(6-cloro-1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (V) HATU = hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronio

HCl = cloruro de hidrógeno

NaBH4 = borohidruro de sodio

NaCl = cloruro de sodio

NaHCO3 = bicarbonato de sodio

Na2CO3 = carbonato de sodio

NaHMDS = bis(trimetilsilil)amida de sodio o hexametildisilazida de sodio

NaOH = hidróxido de sodio

Na2SO4 = sulfato de sodio

NH4Cl = cloruro de amonio

NMM = n-metilformolina

MeI = yoduro de metilo

(continuación)

MeOH = metanol

min = minuto(s)

MgSO4 = sulfato de magnesio

Pd(PPha)4 = tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0)

Pd/C = paladio sobre carbón activado, carga al 10 %

PE = éter de petróleo

SiO2 = dióxido de silicio o sílice

TFA = ácido trifluoroacético

THF = tetrahidrofurano

Salvo que se indique lo contrario, todos los materiales, tales como reactivos, materiales de partida y disolventes, se adquirieron de proveedores comerciales (tales como Sigma-Aldrich, Fluka Riedel-de Haen y similares) y se usaron sin purificación adicional.

Las reacciones se llevaron a cabo en atmósfera de nitrógeno, salvo que se indique lo contrario. El progreso de las reacciones se controló mediante cromatografía en capa fina (TLC), cromatografía líquida analítica de alta resolución (HPLC anal.) y espectrometría de masas, cuyos detalles se dan en ejemplos específicos. Las condiciones de HPLC analítica representativas fueron las siguientes:

A. Condiciones de HPLC analítica - Procedimiento A

continuación

B. Condiciones de HPLC analítica - Procedimiento B

Las reacciones se elaboraron como se describe específicamente en cada preparación, por ejemplo; comúnmente, las mezclas de reacción se purificaron mediante extracción y otros procedimientos de purificación tales como cristalización y precipitación dependientes de la temperatura y del disolvente. Además, las mezclas de reacción se purificaron de forma habitual mediante HPLC preparativa, típicamente usando empaquetaduras de columna Microsorb C18 y Microsorb BDS y eluyentes convencionales. El progreso de las reacciones se midió típicamente mediante cromatografía líquida y espectrometría de masas (LCMS). La caracterización de los isómeros se realizó mediante espectroscopía de efecto Nuclear Overhauser (NOE). La caracterización de los productos de reacción se llevó a cabo de forma habitual mediante espectrometría de masas y RMN-1 H. Para la medición RMN, las muestras se disolvieron en disolvente deuterado (CD3OD, CDCb, o DMSO-cfe), y los espectros de RMN-1H se adquirieron con un instrumento Varian Gemini 2000 (400 MHz) en condiciones de observación estándar. La identificación espectrométrica de masas de los compuestos se realizó típicamente utilizando un procedimiento de ionización por electropulverización (ESMS) con un instrumento modelo API 150 EX de Applied Biosystems (Foster City, CA) o un instrumento LC/MSD modelo 1200 de Agilent (Palo Alto, CA).

TÉCNICAS DE MEDICIÓN

Difracción de rayos X en polvo

El análisis de difracción de rayos X en polvo se realizó usando un difractómetro de rayos X Bruker D8-Advance. La fuente de rayos X fue radiación Cu-K^a con tensión de salida de 40 kV y corriente de 40 mA. El instrumento fue operado en geometría Bragg-Brentano y utilizó espejos Goebel para obtener rayos X paralelos. Cualquier divergencia en el haz estaba limitada por una hendidura de divergencia vertical de 0,2° en la fuente y las hendiduras de Soller (2,5°) en la fuente y el detector. Para la medición, se presionó suavemente una pequeña cantidad de polvo (5-25 mg) sobre un portamuestras de silicio de fondo cero para formar una superficie lisa y se sometió a exposición de rayos X. Las muestras se escanearon en modo acoplado 0-20 de 2° a 35° en 20 con un tamaño de paso de 0,02° y una velocidad de escaneado de 0,3 segundos por paso. La adquisición de datos fue controlada por el software Bruker DiffracSuite y analizada por el software Jade (versión 7.5.1). El instrumento se calibró con un patrón de corindón, dentro de un ángulo 20 ± 0,02°.

Debe tenerse en cuenta que la geometría de Bragg-Brentano utilizada en la recopilación de datos es propensa a la orientación preferida. En estas condiciones, es posible que las intensidades relativas de los picos de difracción no representen las verdaderas intensidades relativas que se obtendrían de una distribución idealizada de partículas esféricas o de un patrón de difracción simulado a partir de datos de un solo cristal. También es posible que algunos picos no se vean en algunos patrones de difracción debido a la amplia orientación preferida.

Calorimetría diferencial de barrido

Las mediciones de DSC se realizaron utilizando un módulo TA Instruments modelo Q-100 con un controlador Thermal Analyst. Los datos se recopilaron y analizaron utilizando el software TA Instruments Universal Analysis. Se pesó con precisión una muestra en una bandeja de aluminio cubierta. Después de un período de equilibrio isotérmico de 5 minutos a 5 °C, la muestra se calentó usando una rampa de calentamiento lineal de 10 °C/min desde 0 °C a 250 °C.

Análisis termogravimétrico

Las mediciones de gravimetría térmica se realizaron utilizando un módulo TA Instruments modelo Q-500 equipado con capacidad de alta resolución. Los datos se recopilaron usando el controlador TA Instruments Thermal Analyst y se analizaron usando el software TA Instruments Universal Analysis. Se colocó una muestra pesada en una bandeja de platino y se escaneó con una velocidad de calentamiento de 10 °C/min desde la temperatura ambiente hasta 300 °C. Las cámaras de equilibrio y del horno se purgaron con flujo de nitrógeno durante el uso.

Microscopía de luz polarizada

Para los estudios de microscopio de luz polarizada (PLM), las muestras se examinaron bajo un microscopio óptico (Olympus BX51) con filtro de luz de polarización cruzada. Las imágenes se recopilaron con una cámara PaxCam controlada por PaxIt Imaging Software (versión 6.4). Las muestras se prepararon en portaobjetos de vidrio con aceite mineral ligero como medio de inmersión. Dependiendo del tamaño de las partículas, se utilizó un objetivo de 4x, 10x o 20x para la ampliación.

Evaluación dinámica de la sorción de humedad

Las mediciones de DMS se realizaron usando una microbalanza atmosférica VTI, sistema SGA-100 (VTI Corp., Hialeah, FL 33016). Se utilizó una muestra pesada y la humedad fue el valor más bajo posible (cerca de 0 % de humedad relativa) al inicio del análisis. El análisis DMS consistió en una tasa de exploración del 5 % de humedad relativa/paso sobre el intervalo de humedad total del 5-90 %. La ejecución de DMS se realizó de forma isotérmica a 25 °C.

Esquemas de reacción de síntesis

El (3S, 5R)-5-[[4-(5-cloro-2-fluorofenil)fenil]metil]-3-(hidroximetil)-3-metilpirrolidin-2-ona (A) empleado en esta invención se puede preparar a partir de materiales de partida y reactivos utilizando los procedimientos descritos en el Ejemplo 1 y como se muestra en Esquema A:

Esquema A:

Las etapas de reacción generales en el Esquema A son las siguientes. El grupo amina del compuesto 1 se protege primero disolviendo 1 en disolvente con una base acuosa bajo una atmósfera inerte a baja temperatura seguido de la adición de un agente protector de amina en disolvente a temperatura ambiente antes del aislamiento. Puede usarse una equivalencia molar de aproximadamente 1:2:1 de 1 a base a agente protector de amina. Los disolventes que pueden usarse para la reacción de 1 con el agente protector de amina incluyen, pero no se limitan a, disolventes apróticos polares, tales como acetonitrilo. Las bases incluyen, pero no se limitan a, bases fuertes que incluyen LiOH, NaOH y KOH. Las bajas temperaturas son típicamente de -10 °C o menos.

A continuación, el compuesto 2 se acopla con 3 en disolvente con la adición de un compuesto anfótero, por ejemplo, NaHCO3 en agua, y un catalizador tal como Pd(PPh3)4 bajo una atmósfera inerte. Esto da como resultado el derivado 4 que a continuación se hace reaccionar con 5 en un disolvente aprótico con un catalizador nucleófilo bajo una atmósfera inerte. Además, se usa un agente de acoplamiento de péptidos para formar el compuesto 6. A continuación, el compuesto 6 se coloca en disolvente con un ácido débil en atmósfera inerte y se añade un agente reductor a baja temperatura (a -5 °C o menos).

Esta mezcla se deja agitar durante varias horas antes de inactivarla con salmuera. A continuación, el compuesto 7 se aísla mediante extracción con una solución de una base débil y se seca con un agente secante antes de la concentración al vacío.

A continuación, el compuesto 7 se metila en un disolvente aprótico con base débil usando un agente de metilación tal como MeI. El sólido formado se aísla y se disuelve adicionalmente en disolvente antes de secarse con un agente secante y concentrarse al vacío para producir el compuesto 8. El compuesto 8 se hace reaccionar adicionalmente con ácido en un disolvente de éter para producir el compuesto 9, que a continuación se concentra y se lava con disolvente adicional para producir el compuesto 9'. A continuación, el compuesto 9' se coloca bajo una atmósfera inerte en un disolvente aprótico polar y se hace reaccionar con 10 a bajas temperaturas (< -5 °C) para dar el intermedio 11. El compuesto A se forma al reaccionar 11 con una base orgánica seguido de reacción con 10 a baja temperatura y reducción con un agente reductor.

El 4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-2-metilpentanoato de (2S, 4R)-bencilo (B) empleado en esta invención se puede preparar a partir del material de partida (A) y los reactivos previamente elaborados usando los procedimientos descritos en el Ejemplo 2 y como se muestra en el Esquema B:

Las etapas de reacción generales en el Esquema B son las siguientes. El compuesto A se hace reaccionar primero con 3,4-dihidro-2H-pirano en un disolvente que contiene un ácido antes de la neutralización y el aislamiento. La mezcla bruta resultante se coloca en un disolvente de éter y se agita a baja temperatura para formar una suspensión. La suspensión se enjuaga aún más, se seca y se concentra hasta un aceite viscoso 12 antes de proteger el nitrógeno del anillo con dicarbonato de di-ferc-butilo para formar 13 en condiciones estándar. El grupo éter en 13 se escinde adicionalmente con un ácido fuerte para formar un grupo alcohol como se muestra en 14. A continuación, el compuesto 14 se hace reaccionar con etilviniléter mediante la adición de un ligando orgánico heterocíclico, por ejemplo, 1,10­ fenantrolina, en una atmósfera inerte, seguido de la adición de un catalizador metálico, por ejemplo, un catalizador de paladio. El grupo alqueno en el producto purificado 15 se reduce utilizando, por ejemplo, H2 y Pd/C al 10 %, para producir 16. La apertura del anillo de la pirrolidona (saponificación) en 16 se logra con una base acuosa antes de la purificación y el aislamiento para producir el compuesto 17. El grupo carboxilato en 17 se protege adicionalmente, por ejemplo, con bromuro de bencilo, en condiciones estándar para formar 18. Esto se hace antes de desproteger el grupo amina de 18 para formar el compuesto B.

Como se analizó anteriormente, las condiciones de reacción ejemplares para los Esquemas A y B se describen a continuación en los Ejemplos 1 y 2, respectivamente.

EJEMPLO 1

Síntesis de (3S, 5Rj-5-[[4-(5-Cloro-2-fluorofenil)fenil]metil]-3-(hidroximetil)-3-metilpirrolidin-2-ona (A)

Etapa A-1:

Una solución de ácido (2Rj-2-amino-3-(4-bromofenil)propanoico (1) (3300 g, 13,52 mol) en acetonitrilo (46,2 l) se colocó en un reactor de 250 l que se purgó y se mantuvo con un atmósfera inerte de nitrógeno. Se añadió una solución de NaOH (1081 g, 27,02 mol) en agua (46,2 l) en varios lotes a -10 °C. Esto fue seguido de la adición de una solución de dicarbonato de di-ferc-butilo (2948 g, 13,51 mol) en ACN (6,6 l). La solución resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente y se concentró adicionalmente al vacío. Esta solución resultante se diluyó con 45 l de agua/hielo y el valor de pH de la solución se ajustó a pH 2 con HCl 1 N. A continuación, la solución resultante se extrajo con 3 x 50 l de DCM y las capas orgánicas se combinaron. La mezcla resultante se lavó con 1 x 50 l de salmuera y se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró al vacío. Esto dio como resultado 3720 g (80 %) de ácido (2R)-3-(4-bromofenil)-2-[[(ferc-butoxi)carbonil]amino]propanoico (2) en forma de un sólido blanco.

Etapa A-2:

Una solución de ácido (2R)-3-(4-bromofenil)-2-[[(ferc-butoxi)carbonil]amino]propanoico (2) (530 g, 1,54 mol) en dioxano (9,54 l), ácido (5-cloro-2-fluorofenil)borónico (3) (348 g, 2,00 mol), una solución de Na2CO3 (228 g, 2,15 mol) en agua (1,06 l) y Pd(PPh3)4 (8,89 g, 7,69 mmol) se colocó en un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 20 l que se purgó y se mantuvo con una atmósfera inerte de nitrógeno. La solución resultante se calentó a reflujo durante 2,5 h en un baño de aceite y a continuación se enfrió a temperatura ambiente con un baño de agua/hielo. La solución resultante se diluyó con 15 l de EtOAc y se lavó con 1 x 5 l de HCl 1 N y 4 x 5 l de salmuera. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 anhidro y se concentraron al vacío. El residuo se lavó con 2 x 1 l de PE. Esto dio como resultado 510 g (84 %) de ácido (2R)-2-[[(ferc-butoxi)carbonil]amino]-3-[4-(5-cloro-2-fluorofenil)fenil] propanoico (4) como un aceite marrón.

Etapa A-3:

Una solución de ácido (2R)-2-[[(ferc-butoxi)carbonil]amino]-3-[4-(5-cloro-2-fluorofenil)fenil] propanoico (4) (510 g, 1,29 mol) en DCM (5000 ml), 2,2-dimetil-1,3-dioxano-4,6-diona (5) (205 g, 1,42 mol) y 4-dimetilaminopiridina (237 g, 1,94 mol) se colocó en un recipiente de fondo redondo de 4 bocas de 10 l purgado y mantenido con una atmósfera inerte de nitrógeno. Esto fue seguido de la adición de una solución de DCC (294 g, 1,43 mol) en DCM (600 ml) gota a gota con agitación a -10 °C. La solución resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente y los sólidos se eliminaron por filtración. El filtrado se lavó con HCl 1 N (2 l) y salmuera (3 l). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 anhidro y los sólidos se eliminaron por filtración. El filtrado, N-[(2Rj-3-[4-(5-cloro-2-fluorofenil)fenil]-1-(2,2-dimetil-4,6-dioxo-1,3-dioxano -5-il)-1-oxopropan-2-il]carbamato de ferc-butilo (6), se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.

Etapa A-4:

Una solución de N-[(2Rj-3-[4-(5-cloro-2-fluorofenil)fenil]-1-(2,2-dimetil-4,6-dioxo-1,3-dioxano -5-il)-1-oxopropan-2-il]carbamato de ferc-butilo (6) en DCM (7 l) y AcOH (600 ml) se colocó en un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 20 l purgado y mantenido con una atmósfera inerte de nitrógeno. Esto fue seguido de la adición de NaBH4 (88,8 g, 2,35 mol) en varios lotes a -5 °C. La solución resultante se agitó durante 3 h a -5 °C en un baño de hielo/sal y a continuación se inactivó mediante la adición de 1 l de salmuera gota a gota. La solución resultante se diluyó con 2 l de salmuera y se lavó con 2 x 2 l de agua y 1 x 1 l de Na2CO3 y 1 x 2 l de salmuera. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 anhidro y se concentraron al vacío. Esto dio como resultado 520 g (79 %) de N-[(2Sj-1-[4-(5-cloro-2-fluorofenil)fenil]-3-(2,2-dimetil-4,6-dioxo-1,3-dioxan-5-il)propan-2-il]carbamato de ferc-butilo (7) como un aceite amarillo.

Etapa A-5:

Una solución de N-[('2SJ-1-[4-(5-cloro-2-fluorofenil)fenil]-3-(2,2-dimetil-4,6-dioxo-1,3-dioxan-5-il)propan-2-il]carbamato de ferc-butilo (7) (520 g, 1,03 mol) en acetona/DMF (1:1) (5,2 l), Na2CO3 (163 g, 1,54 mol) y MeI (219 g, 1,54 mol) se colocó en un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 10 l purgado y mantenido con una atmósfera inerte de nitrógeno. La solución resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente y a continuación se diluyó con 15 l de agua. Después de agitar durante 1 h, se recogieron los sólidos por filtración. El residuo se disolvió en 5 l de DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 anhidro y se concentraron al vacío. Esto dio como resultado 520 g (97 %) de N-[(2RJ-1-[4-(5-cloro-2-fluorofenil)fenil]-3-(2,2,5-trimetil-4,6-dioxo-1,3-dioxan-5-il)propan-2-il]carbamato de ferc-butilo (8) en forma de un sólido amarillo.

Etapas A-6 y A-7:

Una solución de N-[(2RJ-1-[4-(5-cloro-2-fluorofenil)fenil]-3-(2,2,5-trimetil-4,6-dioxo-1,3-dioxan-5-il)propan-2-il]carbamato de ferc-butilo (8) (520 g, 1,00 mol, 1,00 equiv.) en CPME (2,6 l) se colocó en un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 10 l purgado y mantenido con una atmósfera inerte de nitrógeno. Esto fue seguido de la adición de HCl/CPME (4 N) (2,6 l) a -5 °C. La solución resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla resultante se concentró a la mitad del volumen al vacío. Los sólidos se recogieron por filtración y se lavaron adicionalmente con EtOAc/DIPE (1:2). Esto dio como resultado 220 g (61 %) de ácido (3R, 5R)-5-[[4-(5-cloro-2-fluorofenil)fenil]metil]-3-metil-2-oxopirrolidin-3-carboxílico (9') en forma de un sólido blanquecino.

Etapas A-8 y A-9:

Una solución de ácido (3R, 5R)-5-[[4-(5-cloro-2-fluorofenil)fenil]metil]-3-metil-2-oxopirrolidin-3-carboxílico (9') (218 g, 602,55 mmol) en THF (4 l), ⁿ M^m (170 g, 1,68 mol) se colocó en un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 10 l purgado y mantenido con una atmósfera inerte de nitrógeno. Esto fue seguido de la adición de cloroformiato de 2­ metilpropilo (164,4 g, 1,20 mol) gota a gota con agitación a -5 °C. La solución resultante se agitó durante 20 min más a -5 °C en un baño de hielo/sal. Se añadió gota a gota una solución de NaBH4 (91,5 g, 2,42 mol) en agua (400 ml) con agitación a -5 °C y se agitó durante 1 h más a temperatura ambiente. A continuación, la reacción se inactivó mediante la adición gota a gota de 2,6 l de HCl 11 N. La mezcla resultante se agitó aún más durante 1 h y a continuación se concentró al vacío para eliminar el THF. A continuación, la mezcla residual se agitó durante 1 h más y a continuación se recogieron los sólidos por filtración. El sólido se lavó con agua, se disolvió en THF, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró al vacío. Esto dio como resultado 170 g (81 %) de (3S, 5R)-5-[[4-(5-cloro-2-fluorofenil)fenil]metil]-3-(hidroximetil)- -3-metilpirrolidin-2-ona (A) en forma de un sólido blanco.

EJEMPLO 2

Síntesis de 4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-2-metilpentanoato de (2S, 4R)-Bencilo (B)

Etapa B-1:

En un matraz de fondo redondo con camisa de 5000 ml, se añadieron (3S, 5R)-5-((5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)metil]-3-(hidroximetil)-3-metilpirrolidin-2-ona (A) (121,0 g, 348 mmol) y DCM (2420 ml) para dar una solución transparente homogénea que a continuación se enfrió a 0 °C con agitación. Se añadieron 3,4-dihidro-2H-pirano (71,0 ml, 783 mmol) y ácido 4-metilbencenosulfónico (20,97 g, 122 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 18,5 °C durante una noche para lograr una conversión > 98 %. A continuación, la mezcla de reacción se inactivó con 2420 ml de NaHCO3 saturado, las fases se separaron lentamente, la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el disolvente. A continuación, la mezcla bruta se colocó en DIPE (1815 ml) con agitación a 21 °C durante 1 h, a continuación se enfrió y se agitó a 0-5 °C durante 5 h para producir una suspensión blanca. La suspensión se filtró y se enjuagó con 1X volumen de DIPE frío (0 °C) y se filtró. Los sólidos resultantes se secaron durante una noche para producir 113,8 g; pureza por HPLC del 99,1 %. El filtrado se secó adicionalmente para producir un aceite espeso que pesaba 24 g. Se añadió DIPE (96 ml) y la mezcla se agitó durante una noche a 0-5 °C para producir (3S, 5R)-5-((5'-Cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)metil)-3-metil-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)metil)pirrolidin-2-ona (12).

Etapa B-2:

En un matraz de fondo redondo con camisa de 5000 ml, se añadieron (3S, 5R)-5-((5'-Cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)metil)-3-metil-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)metil)pirrolidin-2-ona (12) (113,8 g, 263 mmol) y THF (1707 ml) con agitación para dar una solución transparente homogénea que se purgó con nitrógeno y se enfrió a -10 °C. Se añadió gota a gota NaHMDS 1 M en THF (290 ml, 290 mmol) a una temperatura por debajo de 0 °C y la mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. Se disolvió dicarbonato de di-ferc-butilo (69,0 g, 316 mmol) mediante adición gota a gota en 3 veces su volumen en THF (207 ml) a una temperatura por debajo de 10 °C. La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante una noche y se inactivó con una solución de cloruro de amonio al 20 % (2731 ml). Se añadió EtOAc (1821 ml) y las fases se separaron en una capa acuosa (pH 9) y una capa orgánica. La capa orgánica se lavó con salmuera (2731 ml) y las fases se separaron nuevamente en una fase acuosa (pH 7) y una capa orgánica, donde la capa orgánica se secó con Na2SO4 antes de la filtración.

El disolvente se eliminó produciendo un aceite espeso. Después de secar aún más durante una noche, se produjo el sólido que contiene espuma de 5-((5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)metil)-3-metil-2-oxo-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)metil)pirrolidin-1-carboxilato de (3S, 5R)-terc-butilo (13) (146,5 g, 275 mmol, rendimiento del 105 %, pureza del 98,76 %).

Etapa B-3:

A un matraz de fondo redondo de 3000 ml se añadieron 5-((5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)metil)-3-metil-2-oxo-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)metil)pirrolidin-1 -carboxilato de (3S, 5R)-terc-butilo (13) (146,5 g, 275 mmol) y MeOH (1465 ml).

Adicionalmente se añadió ácido 4-metilbencenosulfónico (3,93 g, 20,65 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 16 h para lograr una conversión > 97 %. A la reacción completa, se añadió EtOAc (2930 ml) y se siguió por destilación, con la temperatura del baño por debajo de 30 °C, para lograr una reducción del volumen total a aproximadamente 293 ml. A la solución concentrada, se añadió de nuevo EtOAc (2930 ml) y se destiló hasta aproximadamente 293 ml. Se completó un lavado final añadiendo EtOAc (2930 ml) y se destiló hasta un volumen final de 1465 ml para eliminar completamente cualquier metanol residual. El ácido restante se inactivó lavando el volumen final anterior (1465 ml) con EtOAc que contenía NaHCO3 al 10 % (1465 ml) con agitación durante 30 min a una temperatura < 21 °C. Las capas se dejaron separar apagando la agitación (capa acuosa pH ~7). La capa orgánica se lavó con 1465 ml de salmuera y se dejó separar (capa acuosa pH = 7). A continuación, la capa de acetato de etilo se secó al vacío hasta ~146,5 ml antes de que se añadieran lentamente 1465 ml de hexanos hasta el punto de enturbiamiento. La solución se dejó reposar durante 1 h seguido de la adición de 1465 ml de hexanos. La mezcla se agitó durante una noche a 0 °C y los sólidos se filtraron y lavaron con 293 ml de hexanos. Los sólidos restantes se secaron durante una noche a alto vacío para producir 98,4 g de 5-((5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)metil)-3-(hidroximetil)-3-metil-2-oxopirrolidin-1-carboxilato de (3S, 5R)-terc-butilo (14); rendimiento del 80 %; pureza por HPLC del 99,3 %.

Etapa B-4:

A un matraz de fondo redondo de 100 ml se añadieron 5-((5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)metil)-3-(hidroximetil)-3-metil-2-oxopirrolidin-1-carboxilato de (3S, 5R)-terc-butilo (l4) (118,2 g, 264 mmol) y DCM (591 ml) para formar una solución incolora. Se añadieron etilvinil éter (761 ml, 7916 mmol) y 1,10-fenantrolina (4,76 g, 26,4 mmol) al recipiente y se purgó con N2 , seguido de la adición de acetato de Pd(II) (8,89 g, 39,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 h para lograr una conversión del ~81 %. El disolvente se eliminó mediante evaporación rotatoria para proporcionar un producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna. La columna se acondicionó previamente con hexanos al 100 % y el producto bruto (30 g/corrida) se disolvió en DCM y se cargó en 300 g de una columna empaquetada con gel de sílice. Se usó un gradiente isocrático con acetato de etilo al 40 %/hexanos para eluir el compuesto, produciendo 91,25 g de 5-((5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)metil)-3-metil-2-oxo-3-((viniloxi)metil)pirrolidin-1-carboxilato de (3S, 5R)-terc-butilo purificado (15).

Etapa B-5:

Se disolvió 5-((5'-cloro-2'-fluoro-[1, 1 '-bifenil]-4-il)metil)-3-metil-2-oxo-3-((viniloxi)metil)pirrolidin-1 -carboxilato de (3S, 5R)-terc-butilo (15) (185 g, 390 mmol) en THF (1900 ml) y se añadió ácido acético (11,17 ml) seguido de N2 purgado durante 10 min. A continuación, la mezcla se burbujeó con H2 y se añadió Pd/C al 10 % (o 18,5 g). Una lenta purga de H2 (gas) se continuó durante una noche a 22 °C hasta alcanzar la finalización de la reacción como se mide por HPLC. La mezcla de reacción se filtró a través de celite para producir una solución homogénea. A continuación, el filtrado se bombeó hasta sequedad a alto vacío para proporcionar 185 gramos de 5-((5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)metil)-3-(etoximetil)-3-metil-2-oxopirrolidin-1-carboxilato de (3S, 5R)-terc-butilo (16); HPLC del 89 %; rendimiento del 99 %.

Etapa B-6:

En un matraz de fondo redondo de 3000 ml se añadieron 5-((5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)metil)-3-(etoximetil)-3-metil-2-oxopirrolidin-1-carboxilato de (3S, 5R)-terc-butilo (16) (185 g, 389 mmol) y ~1205 ml de THF para dar una solución incolora. Aproximadamente 1205 ml de LiOH 1 M se añadió en H2O y la mezcla de reacción se agitó a TA durante una noche hasta la saponificación completa. Aproximadamente 1205 ml de EtOAc se añadió a la mezcla de reacción durante una noche (pH = 13) y a continuación se lavó con aproximadamente 1205 ml de NH4Cl acuoso saturado. Las fases se separaron en una fase acuosa (pH = 8) y una fase orgánica, quedando el producto en la capa orgánica. A continuación, la capa orgánica se lavó con salmuera, las capas se separaron nuevamente y la capa orgánica se secó sobre Na2SO4 antes de filtrar y secar al vacío para producir (2S, 4R)-4-((ferc-butoxicarbonil)amino)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-2-metilpentanoato de litio (17) (2l3 g, 426 mmol, rendimiento del 94,6 %).

Etapa B-7:

En un matraz de fondo redondo de 2 l se encontraban (2S, 4R)-4-((ferc-butoxicarbonil)amino)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,T-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-2-metilpentanoato de litio (17) (194,0 g, 393 mmol) y ~650 ml de DMF para dar una solución incolora. Se añadió K2CO3 (81 g, 589 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 15 min a temperatura ambiente. A continuación, se añadió bromuro de bencilo (56,1 ml, 471 mmol) en una porción y la mezcla de reacción se agitó a aproximadamente 22 °C durante una noche. La conversión completa se logró después de 20 h medida por LCMS o TLC. Se añadieron aproximadamente 3900 ml de NH4Cl y aproximadamente 650 ml de EtOAc y se agitó durante 15 min, y se separaron las fases. La capa orgánica se lavó con ~3900 ml de salmuera, las capas se separaron de nuevo y la capa orgánica se secó con sulfato de sodio seguido de la eliminación del disolvente. El producto bruto se purificó sobre SiO2 EtOAc al 0-25 %/hexanos y las fracciones purificadas combinados produjeron 4-((tercbutoxicarbonil)amino)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-2-metilpentanoato de (2S, 4R)-bencilo (18) (190 g, 322 mmol, rendimiento del 82 %). MS m/z {M+H]+ calculado para C33H39CIFNO5584,118; hallado 584,12.

Etapa B-8:

En un matraz de fondo redondo de 3 l se cargó se añadió 4-((ferc-butoxicarbonil)amino)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,T-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-2-metilpentanoato de (2S, 4R)-bencilo (18) (190,0 g, 325 mmol). Se añadió HCl 3 M en CPME (1084 ml, 3253 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 50 h para producir una suspensión con una conversión > 99 %. Se añadió aproximadamente 1084 ml de CPME nuevo y la suspensión resultante se agitó durante 3 h antes de filtrar. Los sólidos se enjuagaron con ~250 ml de CPME frío (0 °C). A continuación, los sólidos se secaron bajo gas N2 para producir un sólido blanco como 4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-2-metilpentanoato de (2S, 4R)-bencilo (B), HC l (150 g, 288 mmol, rendimiento del 89 %, pureza del 99,5 %). MS m/z {M+H]+ calculado para C28OH31CIFNO3 , 484,00; hallado 520,46 (sal de HCl).

EJEMPLO 3:

Ácido (2S, 4R)-5-(5'-Cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico (Compuesto l)

Etapa 1:

El clorhidrato de (2S, 4R)-4-am¡no-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-b¡fen¡l]-4-¡l)-2-(etox¡metil)-2-met¡lpentanoato de bencilo (B) (2,95 kg, 5668 mmol) se acopló con ác¡do 3-((4-metox¡benc¡l)ox¡)¡soxazol-5-carboxíl¡co (19) (1,48 kg, 5939 mmol) usando HCTU (2,71 kg, 6551 mmol) y DIPEA (0,28 kg, 2180 mmol) en THF (26,64 kg). La mezcla se enfr¡ó a < 10 °C. A cont¡nuac¡ón se añad¡ó DIPEA (2,24 kg, 17,332 mmol) a la mezcla a una temperatura por debajo de 10 °C y la mezcla se ajustó a una temperatura de 20 °C ± 10 °C y se ag¡tó durante al menos 1 h hasta que se completó. Se añad¡ó EtOAc (26,55 kg) junto a la mezcla, segu¡do de la ad¡c¡ón de agua USP (29,5 kg) a una temperatura por debajo de 30 °C. A cont¡nuac¡ón, la mezcla se ag¡tó durante al menos 30 m¡n a una temperatura de 20 °C ± 10 °C y se dejó reposar durante al menos 30 m¡n. La capa acuosa ¡nfer¡or se d¡v¡d¡ó en rec¡p¡entes Una soluc¡ón de NaHCOa al 5 % p/p (30,4 kg) se añad¡ó a la mezcla a una temperatura por debajo de 30 °C, se ag¡tó ad¡c¡onalmente durante al menos 30 m¡n a una temperatura de 20 °C ± 10 °C y se dejó reposar durante al menos 30 m¡n. La capa acuosa ¡nferíor se d¡v¡d¡ó en rec¡p¡entes. La etapa de NaHCO3 se rep¡t¡ó dos veces más y a cont¡nuac¡ón se tomaron muestras de la mezcla para determ¡nar el conten¡do de 6-cloro-1-h¡drox¡benzotr¡azol. Una soluc¡ón de NaHCO3 al 10 % p/p (31,6 kg) se añad¡ó a la mezcla a una temperatura por debajo de 30 °C, se ag¡tó durante al menos 30 m¡n a una temperatura de 20 °C ± 10 °C y a cont¡nuac¡ón se dejó reposar durante al menos 30 m¡n. La capa acuosa ¡nfer¡or se d¡v¡dló en rec¡p¡entes. La capa restante se dest¡ló hasta aprox¡madamente 9 l m¡entras se mantenía la temperatura del lote por debajo de 30 °C. A cont¡nuac¡ón, se añad¡ó EtOAc (39,8 kg) a la mezcla y se usó dest¡lac¡ón al vacío para reduc¡r el volumen de la mezcla a aprox¡madamente 9 l m¡entras se mantenía la temperatura del lote por debajo de 30 °C. Se añad¡ó de nuevo EtOAc (10,3 kg) a la mezcla y la mezcla se ag¡tó durante al menos 10 m¡n. A cont¡nuac¡ón, la mezcla en el primer recipiente de reacción se transfirió a través de un filtro en línea a un segundo recipiente de reacción. Se utilizó EtOAc (5,6 kg) para enjuagar el primer recipiente de reacción y se transfirió a través de un filtro en línea al segundo recipiente de reacción. El producto, (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-((4-metoxibencil)oxi)isoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoato de bencilo (20) (4,05 kg; 5663 mmol), en el recipiente de reacción dos se mezcló durante al menos 10 min y se drenó en recipientes Nalgene estériles y se almacenó entre 0­ 10 °C hasta su posterior procesamiento.

Etapa 2:

Se cargó Pd/C, 10 % p/p (0,42 kg) en el recipiente de reacción uno junto con (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-((4-metoxibencil)oxi)isoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoato de bencilo (20) (4,05 kg; 5663 mmol). A continuación, se añadió etanol desnaturalizado (27,5 kg) al recipiente de reacción uno y los componentes se mezclaron a 20-30 °C durante al menos 5 min. Se usó un lavador que contenía NaOH para procesar el gas HCl desprendido durante esta etapa. Se añadió HCl 6 M (3,1 kg) a la reacción mientras se mantenía la temperatura a < 30 °C y se mezcló durante al menos 5 min. La mezcla se desgasificó aplicando vacío y suministrando simultáneamente nitrógeno. A continuación, la temperatura de la mezcla se ajustó a 20-30 °C y se evacuó el recipiente de reacción. Se burbujeó H2 (5,0 de pureza ultra alta) a través de la mezcla hasta que se completó la reacción. Se cortó el suministro de hidrógeno, la mezcla se purgó con nitrógeno y se transfirió a través de un filtro en línea a un segundo recipiente de reacción. Se cargó etanol desnaturalizado (6,5 kg) en el primer recipiente de reacción como enjuague y se transfirió a través del filtro en línea al segundo recipiente de reacción. A continuación, la mezcla en el segundo recipiente de reacción se destiló usando vacío hasta aproximadamente 41 l mientras se mantenía la temperatura por debajo de 30 °C. La temperatura se ajustó a 20-30 °C y se añadió una solución de H2O2 al 30 % p/p (0,36 kg) a la mezcla en el segundo recipiente de reacción mientras se mantenía la temperatura < 25 °C.

La mezcla se agitó durante al menos 16 h a 20-30 °C hasta que se completó la reacción. La mezcla en el segundo recipiente de reacción se destiló usando vacío hasta aproximadamente 12 l mientras se mantenía una temperatura por debajo de 30 °C. A continuación, se añadió ACN (40,1 kg) a esta mezcla y la mezcla se destiló usando vacío hasta aproximadamente 12 l mientras se mantenía la temperatura por debajo de 30 °C (esta etapa se repitió). A continuación, se añadió de nuevo ACN (3,2 kg) a la mezcla en el segundo recipiente de reacción y se calentó a 40-50 °C durante al menos 1 h. La mezcla se enfrió a 15-25 °C durante al menos 1,5 h y se mantuvo a esa temperatura durante al menos 2 h más antes de filtrarse mediante centrifugación. A continuación se añadió ACN (13,0 kg) al primer recipiente de reacción y se usó para lavar los sólidos centrifugados. A continuación, los sólidos centrifugados se secaron al vacío a 20-30 °C durante al menos 16 h para producir ácido (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico (4.218 mmol; 2,13 kg; rendimiento del 74,5 %; pureza del 97,5 %). EJEMPLO 4:

Preparación de ácido (2S, 4R)-5-(5'-Cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico cristalino (Compuesto I)

A un recipiente de reacción A se añadieron el Compuesto I (2,0 kg; 3961 mmol), EtOAc (36,0 kg) y agua USP (20 kg) y la mezcla resultante se agitó durante al menos 30 min a 20 ± 10 °C. A continuación, el lote se sedimentó durante al menos 30 min más. La capa acuosa inferior se separó y se almacenó en recipientes mientras que la fase no acuosa restante se transfirió a través de un filtro en línea a un recipiente de reacción B. Se añadió EtOAc (3,6 kg) al recipiente de reacción A para enjuagar y se transfirió a través de un filtro en línea a la mezcla en el recipiente de reacción B. A continuación, la mezcla en el recipiente de reacción B se destiló al vacío hasta un volumen reducido (6 l). Se añadió una cantidad adicional de EtOAc (25,2 kg) al recipiente de reacción A y se transfirió a través de un filtro en línea a la mezcla en el recipiente de reacción B. A continuación, la mezcla en el recipiente de reacción B se calentó a una temperatura de 75 ± 5 °C y se agitó durante al menos 5 min hasta que se disolvieron los sólidos. A continuación, esta mezcla se enfrió a -10 ± 5 °C durante al menos 6 h y se agitó adicionalmente durante al menos 12 h a -10 ± 5 °C antes de filtrar sobre el filtro C. Se cargó una cantidad adicional de EtOAc (5,4 kg) al recipiente de reacción A, se transfirió adicionalmente a través de un filtro en línea al recipiente de reacción B y se enfrió a -10 ± 10 °C. A continuación, este disolvente se usó para lavar el filtrado sobre el filtro C. A continuación, el filtrado y el lavado se recogieron en recipientes. El filtrado o la torta húmeda se secó al vacío a 40 °C ± 10 °C durante al menos 16 h y a continuación se tomaron muestras para determinar su pureza. El Compuesto I' tenía una pureza > 98,0 % según lo medido por HPLC y EtOAc estaba presente a < 2,5 % p/p según lo medido por cromatografía de gases. El rendimiento del Compuesto I' después de la cristalización fue (1,05 kg; 2079 mmol; rendimiento del 52,5 %; pureza del 98,5 %).

EJEMPLO 5:

Preparación alternativa de ácido (2S, 4R)-5-(5'-Cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico cristalino (Compuesto I').

A un recipiente de reacción A se añadieron el Compuesto I (4,9 kg; 9705 mmol), SiliaMetS® Thiol (1,62 kg) y EtOH (100 %, 54,9 kg) y la mezcla resultante se agitó durante al menos 1 h a una temperatura de entre aproximadamente 25 °C a 35 °C. A continuación, la mezcla se filtró a través de celite y se lavó con EtOH (100 %, 7,8 kg) y se transfirió al recipiente de reacción B usando un filtro en línea de 0,22 pm y se enjuagó con EtOH (100 %, 7,8 kg). La mezcla en el recipiente B se destiló adicionalmente al vacío hasta aproximadamente el 10 % de su volumen original a una temperatura de entre aproximadamente 40 °C a 60 °C. El recipiente que contenía la mezcla restante se ajustó a > 50 °C antes de la adición de agua purificada USP filtrada (0,22 pm) (49 kg). A continuación, la mezcla se calentó a una temperatura de entre aproximadamente 75 °C a 85 °C con agitación hasta la completa disolución del producto. La mezcla se enfrió a una temperatura de entre aproximadamente -5 °C a 5 °C durante al menos 4 h y se agitó durante al menos 16 h más a la misma temperatura. A continuación, la mezcla resultante se filtró y se lavó con una mezcla enfriada previamente de EtOH (100 %, 9,8 kg) y agua USP (12,3 kg). La temperatura de la mezcla de disolvente previamente enfriada se ajustó de entre aproximadamente 0 °C a 10 °C. El filtrado restante se secó al vacío a una temperatura de entre aproximadamente 40 °C a 60 °C durante al menos 16 h y a continuación se tomaron muestras para determinar el disolvente y la pureza mediante HPLC. El rendimiento del Compuesto I' después de la cristalización fue del 90 % (4,6 kg; 9110 mmol; pureza > 97,0 %).

EJEMPLO 6:

Estudio de estabilidad de ácido (2S, 4R)-5-(5'-Cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico cristalino (I')

Un desafío en el desarrollo de fármacos farmacéuticos se refiere al descubrimiento de una forma cristalina estable de un fármaco que tiene un punto de fusión razonablemente alto. Un desafío de la presente invención fue que los pequeños cristales del ácido libre del Compuesto I eran difíciles de obtener con las propiedades físicas favorables mencionadas anteriormente. Una vez conseguidos, los pequeños cristales se fundieron a alrededor de 216 °C y se realizó un estudio de estabilidad acelerada del Compuesto I' a las temperaturas y el % de humedad relativa (HR) que se indican a continuación.

Estos datos demuestran que el Compuesto I' permanece estable durante al menos 18 meses a 25 °C, 60 % de HR y durante al menos 2 años medidos en condiciones aceleradas de 40 °C, 75 % de HR. Estos datos también muestran que no se detecta una cantidad cuantificable de agua a los 12 meses, lo que indica que los cristales permanecen no higroscópicos durante ese período de tiempo. Además, estos datos indican que no se detecta más del 1 % de impurezas totales/productos de degradación durante 18 meses (25 °C, 60 % de HR) o 2 años (condiciones aceleradas de 40 °C, 75 % de HR).

ENSAYOS

Ensayo 1: Estudio farmacocinético IV/PO en ratas, perros y monos

Cada estudio de PK en ratas, perros o monos comenzó con la formulación del compuesto de prueba. Se añadieron masas apropiadas de cada compuesto de prueba en un volumen de excipiente (por ejemplo, bicarbonato de sodio al 5 %, dextrosa al 5 % en H2O) de tal manera que la concentración final de cada compuesto era apropiada para ser dosificada.. Aunque una suspensión homogénea era aceptable para la dosificación oral, las soluciones de dosificación intravenosa se esterilizaron por filtración (0,2 pm) antes de la dosificación para asegurar que no se administraran partículas.

En el estudio de ratas, se obtuvieron ratas macho Sprague-Dawley precanuladas (3 por vía) de Harlan Laboratories o Charles Rivers Laboratories. Las ratas recibieron una dosis oral suministrada en el estómago usando una jeringa y un tubo de sonda o una dosis intravenosa (a través de la vena lateral de la cola) de la solución de dosificación. La dosis final fue de 0,5 mg/kg. Se recolectaron muestras de sangre en serie mediante la cánula implantada en la vena yugular a los 3 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h y 24 h después de la dosis. El muestreo se realizó manualmente o utilizando muestreadores de sangre automáticos. Las muestras se recogieron en tubos microtainer que contenían EDTA como anticoagulante y se procesaron a plasma mediante centrifugación refrigerada.

En el estudio con perros, los perros beagle machos con tratamiento previo (3 por vía) alojados en Agilux Laboratories (Worcester, MA) y que pesaban entre 9-14 kg recibieron una dosis oral o intravenosa. Las dosis orales se suministraron en el estómago usando una jeringa y un tubo de sonda, seguido de una descarga de agua de aproximadamente 10 ml. Las dosis orales se administraron a un volumen de 2 ml/kg. Las dosis intravenosas se administraron a través de un catéter percutáneo colocado en una vena safena seguida de un lavado de solución salina de aproximadamente 3 ml. Las dosis intravenosas se administraron a un volumen de 0,5 ml/kg. La dosis final para IV o ^pO fue de 0,1 mg/kg. Se recolectaron muestras de sangre en serie mediante punción venosa directa a los 3 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h, 12 h y 24 h después de la dosis. Todas las muestras se recogieron en tubos microtainer que contenían EDTA como anticoagulante y se procesaron a plasma mediante centrifugación refrigerada.

Se realizó un estudio de PK en monos con una masa apropiada de Compuesto I en volumen de excipiente (por ejemplo, bicarbonato de sodio al 5 %, dextrosa al 5 % en H2O, pH 7,4, para la administración oral e IV y se filtró a través de una jeringa de PDVF de 0,22 pM para IV) de modo que la concentración final se dosificó a 1,0 mg/ml tanto para IV como PO.

Los monos cynomolgus machos (3 por vía) alojados en Xenometrics (Stilwell, KS) recibieron una dosis IV o PO de Compuesto I a 1 ó 2 mg/kg. Las dosis intravenosas del Compuesto I se administraron a través de un catéter permanente en la vena cefálica seguido de un lavado de solución salina de aproximadamente 3 ml. Las dosis intravenosas se administraron a un volumen de 1 ml/kg. Las dosis orales se suministraron en el estómago usando una jeringa y un tubo de sonda, seguido de una descarga de agua de aproximadamente 10 ml. Las dosis orales se administraron a un volumen de 2 ml/kg. Se recolectaron muestras de sangre de cada animal en cada punto de tiempo (dosis previa, 0,083 h, 0,25 h, 0,5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h, 12 h y 24 h) a través de la vía cefálica. vena femoral o safena durante 48 horas. Todas las muestras se recogieron en tubos de K2EDTA y se colocaron en hielo. Las muestras se procesaron a plasma por centrifugación (3200 rpm, 10 minutos, 5 °C) y se acidificaron con una concentración final de ácido acético al 2 %. Se transfirieron alícuotas de plasma a tubos de placa de 96 pocillos y se almacenaron congelados (-70 °C) antes del bioanálisis.

Las concentraciones plasmáticas del Compuesto I se determinaron mediante LC/MS/MS. Las muestras de estudio de plasma se agitaron con formación de vórtice y se colocaron en una placa de 96 pocillos. Las muestras se extrajeron con 200 pl de acetonitrilo con un patrón interno. El extracto se centrifugó durante 10 minutos a 2809 RPM y se mezcló 50 pl de sobrenadante con 200 pl de ácido fórmico al 0,2 % en agua. Se inyectaron muestras (10-15 pl) en una columna ThermoFisher HyPURlTY™ (C18 50 x 2,1 mm) con un caudal de 0,35 ml/min. La fase móvil A consistió en agua:acetonitrilo:ácido fórmico (95:5:0,1, v:v:v) y la fase móvil B consistió en metanol:acetonitrilo:ácido fórmico (50:50:0,1, v:v:v) (perro). La fase móvil A consistió en ácido fórmico al 0,2 % en agua y la fase móvil B consistió en ácido fórmico al 0,2 % en acetonitrilo (rata y mono). Los parámetros farmacocinéticos del Compuesto I se determinaron mediante análisis no compartimental (Modelo 201 y Modelo 200 para administración IV y PO, respectivamente) usando Phoenix WinNonlin Versión 6.3 (Certara, Sunnyvale, CA) y usando perfiles de tiempo de concentración plasmática individuales de 3 animales por grupo de tratamiento.

El aclaramiento plasmático se determinó a partir de la rama intravenosa del estudio y representa la velocidad a la que el plasma se aclara del fármaco. Es igual a la dosis dividida por el área bajo la curva de concentración plasmáticatiempo. Además del aclaramiento plasmático, también es esencial que un fármaco administrado por vía oral alcance niveles sistémicos eficaces después del suministro oral. La biodisponibilidad oral es una medida de las exposiciones plasmáticas tras la administración oral en relación con las exposiciones tras la administración intravenosa.

Datos farmacocinéticos

Estos datos de ratas muestran que el Compuesto I tiene una biodisponibilidad oral de aproximadamente el 33 % a una dosis de 0,5 mg/kg. En dosis más altas (30-1000 mg/kg), la biodisponibilidad media varió entre el 49-79 % en la rata (datos no mostrados). El Compuesto I también se administró con azilsartán en la especie de rata (datos no mostrados). Estos datos de perros muestran que el Compuesto I tiene una biodisponibilidad oral limitada de aproximadamente el 17 %. En dosis más altas (100-300 mg/kg), la biodisponibilidad media varió entre el 7-13 % (datos no mostrados). Estos datos de monos muestran que el Compuesto I tiene una biodisponibilidad oral de aproximadamente el 42 %. En dosis más altas (30 y 100 mg/kg), la biodisponibilidad media para tres formulaciones diferentes varió entre el 55- 83% (datos no mostrados).

Ensayo 2: Excreción renal del Compuesto I en especies de rata, perro y mono

Un factor importante para asegurar la dosificación apropiada del fármaco a largo plazo y las concentraciones correctas del fármaco en estado estable en los pacientes es el aclaramiento del fármaco. En general, la disminución del aclaramiento del fármaco da como resultado concentraciones de fármaco más altas y mayores efectos del fármaco. Para comprender el aclaramiento renal del Compuesto I, se evaluó el porcentaje de la dosis administrada recuperada en la orina después de una única dosis IV en tres especies animales. Se realizaron tres estudios separados en ratas macho Sprague Dawley, perros beagle macho y monos cynomolgus macho, respectivamente, y el procedimiento y los resultados experimentales se describen a continuación.

Las ratas macho Sprague Dawley (N = 6, dos grupos de 3), con pesos corporales de 297 a 316 g y 294 a 311 g, recibieron una dosis IV de Compuesto I a 0,5 mg/kg (Grupo I) y 3,0 mg/kg (Grupo II) como parte de un casete de dosificación. El Compuesto I se disolvió en NaHCO3 al 5 % en D5W (dextrosa al 5 % en agua, pH 7,8) a una concentración de 0,25 mg/ml proporcionando una concentración total final de 1,0 mg/ml para suministrar una dosis intravenosa de 0,5 mg/kg. Además, el Compuesto I se disolvió en NaHCO3 al 5 % en D5W (dextrosa al 5 % en agua, pH 7,4) a una concentración de 1,5 mg/ml para suministrar una dosis intravenosa de 3 mg/kg. Ambas formulaciones se esterilizaron por filtración antes de la administración intravenosa. Las ratas tuvieron acceso a la comida en función de sus horarios de alimentación típicos antes y después de la administración del Compuesto I. Para la cohorte que recibió 0,5 mg/kg de Compuesto I, la orina se recogió en hielo seco. Después del período de recolección de orina de 24 horas, se descongelaron las muestras de orina, se registró el volumen y se mezclaron las muestras antes de retirar una alícuota (~700 pl) para el bioanálisis. Para la cohorte que recibió 3,0 mg /kg de Compuesto I, la orina se recogió como antes, pero se añadió ácido acético glacial a las alícuotas de orina recogida para producir una concentración final de ácido acético al 2 %. Todas las muestras se almacenaron congeladas (-70 °C) antes del bioanálisis.

Las concentraciones de Compuesto I en orina de rata se determinaron mediante LC/MS/MS. Las muestras de orina se descongelaron y se diluyeron 5 veces en plasma de rata con K2 EDTA. Se transfirió una alícuota de 50 pl de la orina diluida a una placa de 96 pocillos y se extrajo con 200 pl de acetonitrilo que contenía un patrón interno. La placa de 96 pocillos se centrifugó durante 10 minutos a 2809 RPM y el sobrenadante se diluyó cinco veces con ácido fórmico al 0,2 % en agua transferida a una nueva placa de 96 pocillos. El sobrenadante se diluyó en ácido fórmico al 0,2 % en agua. Las muestras (de 10 a 15 pl) se inyectaron en una columna Thermo Hypurity (C1850 x 2,1 mm) con un caudal de 0,30 o 0,35 ml/min. La fase móvil A consistió en ácido fórmico al 0,2 % en agua y la fase móvil B consistió en ácido fórmico al 0,2 % en acetonitrilo.

El intervalo de ensayo del Compuesto I fue de 0,0125 a 25 pg/ml (cohorte de 0,5 mg/kg) y de 0,0058 a 25 pg/ml (cohorte de 3,0 mg/kg).

Los perros beagle machos con tratamiento previo (N = 6, dos grupos de 3), con pesos corporales de 9,00-11,1 kg y 10,6-13,4 kg, recibieron una dosis IV de Compuesto I a 0,1 mg/kg (Grupo I) y 1,0 mg/kg (Grupo II) como parte de un casete de dosificación. El compuesto I se disolvió en PEG-200:etanol:agua (40:10:50) a una concentración de 0,2 mg/ml para una dosis a 0,1 mg /kg o a una concentración de 2 mg/ml para una dosis intravenosa a 1 mg/kg y se esterilizó por filtración antes de la administración. Los perros tuvieron acceso a la comida en sus horarios de alimentación típicos antes y después de la administración del Compuesto I. Las muestras de orina se recogieron en hielo húmedo o en paquetes fríos en recipientes pesados previamente que se llenaron previamente con ácido acético glacial. Las muestras se pesaron de nuevo y se añadió ácido acético glacial adicional si era necesario hasta una concentración final del 2 %. Las muestras se congelaron y almacenaron (-80 °C) antes del bioanálisis.

Las concentraciones de Compuesto I en orina de perro se determinaron mediante LC/MS/MS. Las muestras de estudio de orina (diluidas en plasma de perro beagle con K2 EDTA, Biochemed, Winchester, VA) se descongelaron y agitaron con formación de vórtice y se colocaron 10 o 20 pl en una placa de 96 pocillos. Las muestras se extrajeron con un volumen 6 veces mayor de acetonitrilo (60 o 120 pl) con patrón interno de crisina o gliburida. El extracto se centrifugó durante 5 minutos a 3000 RPM y ~70 % del sobrenadante (50 o 100 pl) se transfirió a una nueva placa de 96 pocillos y se combinó con un volumen igual de agua. Las muestras se inyectaron en una columna Mac Mod Ace C18 (2,1 x 50 mm, 3 pm) o una columna Waters Acquity UPLC BEH C18 (50 x 2,1 mm, 1,7 pm) con un caudal de 0,8 o 0,9 ml/min. La fase móvil A consistió en agua:acetonitrilo:ácido fórmico 95:5:0,1 (v:v:v) y la fase móvil B consistió en metanol:acetonitrilo:ácido fórmico 50:50:0,1 (v:v:v). El intervalo de ensayo del Compuesto I en orina fue de 0,0002 a 1,00 pg/ml.

Los monos cynomolgus machos con tratamiento previo (N = 3), con pesos corporales de 2,87-3,61 kg, recibieron una dosis IV de Compuesto I a 1 mg/kg. El Compuesto I se disolvió en NaHCÜ3 al 5 % en D5W (pH 7,4) y se filtró a través de un filtro de jeringa de difluoruro de polivinilo (PVDF) 0,22 pM (Millipore Millex-GV, SLGV033RB) antes de la administración. Las formulaciones se prepararon el día anterior a la dosificación y se almacenaron a -70 °C durante una noche y se descongelaron antes de la dosificación. Las dosis intravenosas del Compuesto I se administraron a través de un catéter permanente en la vena cefálica seguido de un lavado de solución salina de aproximadamente 3 ml.

Las dosis intravenosas se administraron a un volumen de 1 ml/kg. Las muestras de orina se recogieron en hielo húmedo o paquetes fríos en tubos que contenían ácido acético glacial para estabilizar cualquier conjugado de glucurónido potencial. Los volúmenes totales de muestra de orina se estimaron gravimétricamente y se obtuvieron y congelaron alícuotas (-70 °C) antes del bioanálisis.

Las concentraciones de Compuesto I en orina de mono se determinaron mediante LC/MS/MS. Las muestras de orina se descongelaron y se diluyeron 5 veces en plasma de mono con K2EDTA (Bioreclamation, Westbury, NY). Las muestras se agitaron con formación de vórtice y se transfirieron 50 pl a una placa de 96 pocillos. A continuación, las muestras se extrajeron con 200 pl de acetonitrilo con patrón interno. El extracto se centrifugó durante 10 minutos a 2809 RPM y se añadió 50 pl de sobrenadante a 200 pl de ácido fórmico al 0,2 % en agua. Las muestras (10-15 pl) se inyectaron en una columna ThermoFisher HyPURlTY™ (C18 50 x 2,1 mm) con un caudal de 0,35 ml/min. La fase móvil A consistió en ácido fórmico al 0,2 % en agua y la fase móvil B consistió en ácido fórmico al 0,2 % en acetonitrilo. El intervalo de ensayo del Compuesto I fue de 0,00125 a 5 pg/ml.

La cantidad media de orina excretada durante un período de recogida de 24 horas y el % aproximado de la dosis administrada excretada en orina se indican en la tabla siguiente.

La excreción renal del Compuesto I en la rata fue inferior al 0,02 % o inferior al 0,03 % de la dosis administrada, en el perro fue inferior al 0,02 % o inferior al 0,001 % de la dosis administrada y en el mono aproximadamente 0,670 % ± 0,593 % de la dosis administrada. Estos datos indican que el Compuesto I tiene una excreción renal baja en las tres especies probadas.

Ensayo 3: Estudio de dosis única ascendente de fase 1

Un ensayo clínico de fase 1 de dosis única ascendente (SAD) del Compuesto I' (Forma I), que se convierte o se disuelve para proporcionar su forma soluble Compuesto I en el cuerpo, se llevó a cabo para evaluar la inhibición de la neprilisina para el tratamiento de una variedad de enfermedades cardiovasculares y renales, que incluyen, por ejemplo, enfermedad renal crónica, nefropatía diabética, insuficiencia cardíaca aguda y crónica, insuficiencia cardíaca con fracción de eyección reducida, insuficiencia cardíaca con fracción de eyección conservada, disfunción ventricular izquierda asintomática postinfarto de miocardio (DVI asintomática postinfarto), insuficiencia cardíaca subaguda e hipertensión sistólica resistente y aislada. La seguridad y tolerabilidad, la farmacocinética (apoyo para la dosificación QD/BID y excreción no renal), la farmacodinámica (prueba de biomarcadores de compromiso de la diana cGMP y ANP), el efecto de los alimentos y la biodisponibilidad oral absoluta y la eliminación renal utilizando un microtrazador intravenoso de 14C, entre otros, fueron probados.

El estudio de fase 1 fue un estudio doble ciego, aleatorizado, controlado con placebo de dosis única ascendente en voluntarios sanos, hombres y mujeres, aleatorizados en una proporción de 4:1. El estudio reclutó a 56 voluntarios sanos durante varias semanas para la porción de dosis ascendente, que incluyó cohortes (n = 10/cohorte de 8 activos y 2 de placebo) a las que se les administraron dosis únicas ascendentes de 50 mg, 100 mg, 200 mg, 400 mg y 600 mg. A una sexta cohorte (n = 6) se le administró un microtrazador iv y dosis orales de 10 pg y 100 mg, respectivamente. Los datos del ensayo clínico SAD demostraron en parte que el Compuesto I fue bien tolerado después de dosis únicas de hasta 600 mg.

Ensayo 3.1: Actividad NEP en humanos (cGMP)

Un objetivo de este estudio fue determinar el mecanismo/duración de acción del Compuesto I después de la dosificación en humanos. Para ello, los niveles de cGMP, un biomarcador de compromiso diana de neprilisina, se midieron después de la dosificación con el Compuesto I' para proporcionar evidencia del efecto biológico del Compuesto I. Por ejemplo, la elevación de los niveles plasmáticos de GMPc 24 h después de la dosificación indica una duración sostenida del efecto farmacológico, análoga a los valores de aclaramiento plasmático para demostrar la persistencia farmacocinética.

La Figura 6 ilustra el cambio en el cGMP plasmático medio (nM) del valor inicial a las dosis probadas frente al tiempo. Estos datos demuestran que el Compuesto I proporciona un aumento sostenido en el cGMP plasmático medio durante 24 horas después de una dosis única, con un nivel máximo de cGMP en el intervalo de 8 h a 24 h, siendo la ventana de 8-12 h los niveles más altos de cGMP. Además, la respuesta a la dosis de cGMP en plasma demuestra un efecto casi máximo en el extremo inferior del intervalo de dosis, es decir, a niveles de dosis > 100 mg (véase la Figura 7).

Ensayo 3.2 Perfil PK, biodisponibilidad oral y excreción renal del Compuesto I' en humanos

El perfil farmacocinético del Compuesto I fue proporcional a la dosis (véase la Figura 8) y se demostró que el Compuesto I tiene una alta biodisponibilidad oral (alrededor del 80 %). Los datos del ensayo clínico SAD también sugirieron niveles bajos de eliminación renal, es decir, menos del 1 % de la dosis total de Compuesto I' administrada se eliminó a través de los riñones, según lo confirmado por la tecnología de prueba de microtrazadores intravenosos.

Curiosamente, el perfil de PK (por ejemplo, Cmáx del Compuesto I) y el perfil de PD (por ejemplo, cGMPmáx) demostraron valores máximos dentro de diferentes ventanas de tiempo. Los datos del ensayo clínico SAD sugirieron aumentos relacionados con la dosis en los niveles de cGMP en plasma y elevaciones sostenidas de cGMP durante 24 h tanto en plasma como en orina, lo que respalda el uso del Compuesto I o el Compuesto I' para la dosificación una vez al día.

Ensayo 3.3: Diferenciación del tratamiento estándar

Actualmente, el sacubitrilo usado en combinación con valsartán está indicado para reducir el riesgo de muerte cardiovascular y hospitalización por insuficiencia cardíaca en pacientes con insuficiencia cardíaca crónica y fracción de eyección reducida. Una comparación de sacubitrilo (un inhibidor de neprilisina) y el Compuesto I demuestra una diferenciación clave en la eliminación renal y el compromiso de la diana de 24 horas. Por ejemplo, el sacubitrilo se elimina en gran medida a través de los riñones (60 % de eliminación renal) mientras que el Compuesto I no (< 1 % de eliminación renal) (véase la Figura 9). Esto puede ser importante para el tratamiento de pacientes con insuficiencia renal con o sin enfermedad cardíaca. Además, el nivel de cGMP (es decir, el compromiso de la diana) no se eleva a las 24 h después de la dosis de sacubitrilo, mientras que el nivel de cGMP si lo hace después de la dosificación con el Compuesto I'. Esto permite una posible dosificación una vez al día del Compuesto I o del Compuesto I', lo que no es cierto para el sacubitrilo en combinación con valsartán, que es un régimen de dosificación dos veces al día.

Ensayo 4: Estudio de dosis ascendente múltiple de fase 1

Se llevó a cabo un ensayo clínico de fase 1 de dosis ascendente múltiple (MAD) del Compuesto I' (Forma I) para evaluar más a fondo la seguridad, tolerabilidad, farmacocinética del Compuesto I y su metabolito, farmacodinamia del Compuesto I, efecto de los alimentos, biodisponibilidad oral absoluta y eliminación renal de múltiples dosis orales ascendentes del Compuesto I' en sujetos adultos y ancianos sanos. Como se analiza a continuación, los datos indicados confirman los resultados derivados del ensayo clínico SAD.

El estudio de fase 1 fue un estudio doble ciego, aleatorizado, controlado con placebo de dosis múltiples ascendente en voluntarios sanos, hombres y mujeres, aleatorizados en una proporción de 4:1. El estudio reclutó a 50 voluntarios adultos sanos (19-55 años) y ancianos (65-80 años) durante varias semanas para la porción de dosis ascendente, que incluyó cohortes (n = 10/cohorte de 8 activos y 2 placebo) a las que se les administraron (1) dosis ascendentes de 50 mg, 100 mg y 200 mg, (2) una dosis de 10 mg estudiada en paralelo con 200 mg para PK/PK, y (3) una dosis de 100 mg para una cohorte de ancianos. Los datos del ensayo clínico MAD demostraron en parte que el Compuesto I fue generalmente bien tolerado después de múltiples dosis orales hasta 14 días. Además, la eliminación renal del Compuesto I fue insignificante después de múltiples dosis, por ejemplo, se observó <1 % en el día 1 y el día 14 para todos los sujetos.

Ensayo 4.1: Actividad de NEP en humanos (cGMP) y diferenciación del tratamiento estándar

Parte de los estudios clínicos de MAD fue para determinar el mecanismo/duración de acción del Compuesto I después de la dosificación en humanos. Para ello, los niveles de cGMP, un biomarcador de compromiso diana de neprilisina, se midieron después de la dosificación con el Compuesto I' para proporcionar evidencia del efecto biológico del Compuesto I. Por ejemplo, la elevación de los niveles plasmáticos de GMPc 24 h después de la dosificación indica una duración sostenida del efecto farmacológico, análoga a los valores de aclaramiento plasmático para demostrar la persistencia farmacocinética.

La Figura 10 ilustra el cambio en el cGMP plasmático medio (nM) desde el valor inicial a las dosis probadas frente al tiempo. Estos datos demuestran que el Compuesto I proporciona un aumento sostenido de cGMP plasmático medio durante 24 h. Estos datos ilustran que el día 14 del estudio clínico, hubo un compromiso diana de todas las dosis en la concentración mínima (0 h) así como todas las dosis medidas hasta las 24 h para una dosis de una vez al día del Compuesto I'. Esto contrasta con el tratamiento estándar donde hay poco o ningún compromiso de la diana en la concentración mínima y 24 h con un régimen de dosificación de dos veces al día (véase la página 411 de Gu y col., J. Clin. Pharmacol., 2010, vol. 50, número 4, págs 401-414).

Claims (23)

REIVINDICACIONES

1. Una forma cristalina de ácido libre de ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico (I') donde la forma cristalina se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos de difracción a valores de 20 de 6,51 ± 0,20, 11,62 ± 0,20, 13,05 ± 0,20, 15,07 ± 0,20 y 23,28 ± 0,20.

2. La forma cristalina de la reivindicación 1, donde la forma cristalina se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos de difracción a valores de 20 de 6,51 ± 0,20, 11,62 ± 0,20, 13,05 ± 0,20, 15,07 ± 0,20, 17,12 ± 0,20, 23,28 ± 0,20 y 26,19 ± 0,20.

3. La forma cristalina de la reivindicación 1, donde el patrón de difracción de rayos X en polvo comprende además uno o más picos de difracción adicionales a valores de 20 seleccionados de entre 15,72 ± 0,20, 17,12 ± 0,20, 20,79 ± 0,20, 21,10 ± 0,20, 24,48 ± 0,20, 25,81 ± 0,20 y 26,19 ± 0,20.

4. La forma cristalina de la reivindicación 1, donde la forma cristalina se caracteriza por una traza de calorimetría diferencial de barrido registrada a una velocidad de calentamiento de 10 °C por minuto que muestra un máximo en el flujo de calor endotérmico a una temperatura entre aproximadamente 214 °C y aproximadamente 218 °C.

5. Una composición farmacéutica que comprende la forma cristalina de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

6. La composición farmacéutica de la reivindicación 5, donde el vehículo farmacéuticamente aceptable es estearato de magnesio.

7. Una composición farmacéutica que comprende la forma cristalina de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un antagonista del receptor AT1, un inhibidor de fosfodiasterasa, un inhibidor de renina, un inhibidor de la guanilato ciclasa soluble, un antagonista del receptor de mineralocorticoide, un diurético o combinaciones de los mismos.

8. La composición farmacéutica de la reivindicación 7, que comprende además un vehículo farmacéuticamente aceptable.

9. Una forma de dosificación oral que comprende la forma cristalina de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en una cápsula, comprimido o suspensión.

10. La forma de dosificación oral de la reivindicación 9, donde una liberación de la forma cristalina en un sujeto es una liberación inmediata, controlada o retardada.

11. La forma de dosificación oral de la reivindicación 9, donde el material de la cápsula es gelatina, polisacárido, quitosano o polímeros sintéticos.

12. La forma de dosificación oral de la reivindicación 9, donde la cápsula es una cápsula dura que comprende gelatina, polisacáridos o polímeros sintéticos.

13. La forma de dosificación oral de la reivindicación 9, donde la cápsula comprende hidroxipropilmetilcelulosa.

14. Una forma cristalina según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en terapia.

15. Una forma cristalina según la reivindicación 14, para su uso en el tratamiento de la hipertensión, insuficiencia cardíaca o enfermedad renal.

16. El uso de una forma cristalina según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para la fabricación de un medicamento para tratar la hipertensión, insuficiencia cardíaca o enfermedad renal.

17. La forma cristalina para su uso según la reivindicación 15, donde la hipertensión es hipertensión primaria, hipertensión arterial pulmonar, hipertensión pulmonar tromboembólica crónica o hipertensión con estenosis de la arteria renal.

18. La forma cristalina para su uso según la reivindicación 15, donde la enfermedad renal es nefropatía diabética, enfermedad renal crónica, proteinuria, lesión renal aguda, síndrome nefrótico, glomerulosclerosis focal y segmentaria o enfermedad renal poliquística.

19. La forma cristalina para su uso según la reivindicación 15, donde la forma cristalina se administra al paciente una vez al día.

20. La forma cristalina para su uso según la reivindicación 19, para su uso en el tratamiento de la hipertensión, insuficiencia cardíaca o un paciente con insuficiencia renal, donde el paciente con insuficiencia renal tiene enfermedad renal crónica con una tasa de filtración glomerular estimada (TFGe) entre 60 ml/min/1,73 m2 y 15 ml/min/1,73 m2.

21. La forma cristalina para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 15 o 19, donde la forma cristalina se administra por vía parenteral.

22. Un procedimiento de preparación de la forma cristalina de la reivindicación 1, comprendiendo el procedimiento:

(a) formar una solución que comprende ácido (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-2-(etoximetil)-4-(3-hidroxiisoxazol-5-carboxamido)-2-metilpentanoico y un disolvente, opcionalmente con un eliminador de metales a temperatura elevada;

(b) enfriar la solución a una temperatura entre aproximadamente -20 °C y 5 °C; y

(c) aislar los sólidos resultantes para producir la forma cristalina.

23. El procedimiento según la reivindicación 22,

(a) donde el disolvente en la etapa (a) es un disolvente polar, por ejemplo, una mezcla de acetato de etilo y agua, acetato de etilo o etanol; o

(b) donde la temperatura en la etapa (a) está entre aproximadamente 60 °C y 95 °C, por ejemplo, entre aproximadamente 70 °C y 85 °C; o

(c) donde el aislamiento de los sólidos en la etapa (c) implica filtrar, lavar con uno o más disolventes, secar al aire o al vacío, o una combinación de estas etapas, por ejemplo, donde el disolvente es acetato de etilo y agua, acetato de etilo o etanol; y/o por ejemplo, donde el secado al vacío se realiza a una temperatura entre 25 °C y 70 °C.