ES2871416T3

ES2871416T3 - Inhibidores de glucosilceramida sintasa

Info

Publication number: ES2871416T3
Application number: ES14824245T
Authority: ES
Inventors: John P Leonard; Jean-François Deleuze; Jean-Michel Itier; CéCILE ORSINI; Gwénaëlle Ret-Lecuelle; Sandra Viale
Original assignee: Genzyme Corp
Current assignee: Genzyme Corp
Priority date: 2013-12-11
Filing date: 2014-12-09
Publication date: 2021-10-28
Anticipated expiration: 2034-12-09
Also published as: US20220409595A1; EP3079695A1; PL3079695T3; US20190046509A1; PT3079695T; EP3079695B1; CA2931981C; SG10201804952QA; CA2931981A1; CN105979945A; IL245737A0; IL245737B; US20160361301A1; CN117679415A; WO2015089067A1

Abstract

Un compuesto para usar en un método para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde la administración del compuesto inhibe la acumulación de GL-3 en un cardiomiocito del sujeto, en donde dicho compuesto se representa mediante la siguiente fórmula estructural, **(Ver fórmula)** o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este, en donde: n es 1, 2 o 3; m es 0 o 1; p es 0 o 1; t es 0, 1 o 2; y es 1 o 2; z es 0, 1 o 2; E es S, O, NH, NOH, NNO2, NCN, NR, NOR o NSO2R; X1 es CR1 cuando m es 1 o N cuando m es 0; X2 es O, -NH, -CH2-, SO2, NH-SO2;CHalquilo (C1-C6) o -NR2; X3 es O, -NH, -CH2-, CO, -CHalquilo (C1-C6), SO2NH, -CO-NH- o -NR3; X4 es CR4R5, CH2 CR4R5 o CH2 -alquilo (C1-C6)-CR4R5; X5 es una unión directa, O, S, SO2, CR4R5; alquilo(C1-C6), alquiloxi(C1-C6), alquenilo(C1-C6), alqueniloxi(C1-C6); R es arilo(C6-C12), heteroarilo(C2-C9), alquilo(C1-C6), heteroarilo(C2-C9)alquilo(C1-C6); R1 es H, CN, alquilcarbonilo(C1-C6) o alquilo(C1-C6); R2 y R3 son cada uno independientemente -H, alquilo(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, alquilo(C1-C6), arilo(C6-C12), heteroarilo(C2-C9), alquilo(C1- C6)arilo(C6-C12), haloarilo(C6-C12) y haloheteroarilo(C2-C9), u opcionalmente cuando X2 es -NR2 y X3 es -NR3, R2 y R3 pueden tomarse junto con los átomos de nitrógeno a los que están acoplados para formar un anillo heterocíclico no aromático opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno, alquilo(C1-C6), arilo(C6- C12), heteroarilo(C2-C9), alquilo(C1-C6)arilo(C6-C12), haloarilo(C6-C12) y haloheterarilo(C2-C9); R4 y R5 se seleccionan independientemente de H, alquilo(C1-C6), o se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C3-C10) espiro o anillo cicloalcoxi(C3-C10) espiro; R6 es -H, halógeno, -CN, arilo(C6-C12), ariloxi(C6-C12), alquiloxi(C1-C6); alquilo(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a cuatro halo o alquilo(C1-C6); A1 es alquinilo(C2-C6); cicloalquilo(C3-C10), arilo(C6-C12), heteroarilo(C2-C9), heterocicloalquilo(C2-C9) o benzo heterocicloalquilo(C2-C9) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, alquilo(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alquenilo(C1-C6), amino, alquilamino(C1-C6), dialquilamino(C1-C6), alcoxi(C1-C6), nitro, CN, -OH, alquiloxi(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alcoxicarbonilo(C1-C6) y alquilcarbonilo(C1-C6); A2 es H, cicloalquilo(C3-C10), arilo(C6-C12), heteroarilo(C2-C9), heterocicloalquilo(C2-C9) o benzo heterocicloalquilo(C2- C9) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, alquilo(C1- C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alquenilo(C1-C6), amino, alquilamino(C1-C6), dialquilamino(C1-C6), alcoxi(C1-C6), O(cicloalquilo C3-C6), cicloalcoxi(C3-C6), nitro, CN, OH, alquiloxi(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; cicloalquilo (C3-C6), alcoxicarbonilo(C1-C6), alquilcarbonilo(C1-C6), haloalquilo(C1-C6); con la condición de que la suma de n + t + y + z no sea mayor que 6; con la condición de que cuando p es 0; X2 sea NH-SO2 y X3 sea NH; con la condición de que cuando n es 1; t es 0; y es 1; z es 1; X2 es NH; E es O; X3 es NH; A2 es H; y X5 es una unión directa; A1 no sea fenilo, halofenilo o isopropenil fenilo insustituido; con la condición de que cuando n es 1; t es 0; y es 1; z es 1; X2 es O; E es O; X3 es NH; A1 es arilo(C6-C12) y X5 es una unión directa; A2 es H y R4 es H entonces R5 no sea ciclohexilo; y con la condición de que cuando n es 1; t es 0; y es 1; z es 1; X2 es NH; E es O; X3 es CH2; R4 y R5 son ambos hidrógeno; A2 es H y X5 es una unión directa; entonces A1 no sea fenilo insustituido.

Description

DESCRIPCIÓN

Inhibidores de glucosilceramida sintasa

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se relaciona generalmente con el campo de agentes terapéuticos para enfermedades metabólicas. Más específicamente, la invención se relaciona con inhibidores de glucosilceramida sintasa (GCS) útiles para el tratamiento de enfermedades metabólicas, tales como enfermedades de almacenamiento lisosómico, ya sea solos o en combinación con terapia de reemplazo enzimático.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona compuestos para usar en un método según la reivindicación 1 adjunta.

La enfermedad de Fabry (FD, por sus siglas en inglés) es un trastorno del almacenamiento lisosómico raro vinculado con el cromosoma X caracterizado por la actividad deficiente de la enzima a-galactosidasa A (a-Gal A) codificada por el gen GLA. La deficiencia enzimática resulta en la acumulación intracelular progresiva de glucoesfingolípidos, en su mayoría globotriaosilceramida (GL-3) en una variedad de tipos celulares y tejidos, incluidos el riñón, corazón, hígado, bazo, piel, así como los sistemas nervioso periférico y central.

Si bien múltiples tipos de células específicas de un órgano acumulan GL-3 y es importante tenerlos en consideración y sin ánimo de ceñirse a la teoría, se cree que la acumulación sistémica en células endoteliales capilares tiene una función esencial en el proceso patológico general que conduce a las devastadoras manifestaciones clínicas renales, cardíacas y cerebrovasculares de la enfermedad y a disminuir sustancialmente la esperanza de vida. La FD es un trastorno progresivo que lleva años hasta avanzar hasta la falla orgánica de estadio terminal principalmente en personas de sexo masculino homocigóticas. Aunque el cromosoma X porta la mutación génica de aGAL, las personas de sexo femenino tienen un fenotipo variable, que varía de asintomático a una presentación tan grave como la de pacientes masculinos. Los signos y síntomas iniciales de FD a menudo comienzan durante la infancia e incluyen, frecuentemente, dolor neuropático en las extremidades, deshidratación, angioqueratomas y malestar gastrointestinal. Durante un período de décadas, la acumulación progresiva de glucoesfingolípidos altera la función de órganos vitales, lo que pone a los pacientes con FD en riesgo de desarrollar insuficiencia renal, disfunción cardiovascular y accidente cerebrovascular. Sin embargo, ahora está claro que el daño tisular, tal como la fibrosis en el corazón y riñón, comienza bastante antes de la aparición de la falla orgánica.

Las manifestaciones cardíacas de la FD pueden incluir hipertrofia progresiva del ventrículo izquierdo, arritmia, defectos de conducción, disfunción valvular y angina. A medida que la enfermedad avanza, se desarrolla fibrosis miocárdica que pueden conducir a eventos cardíacos potencialmente mortales.

La terapia de reemplazo enzimático (ERT, por sus siglas en inglés) con a-GalA recombinante (agalsidasa beta y agalsidasa alfa) representa la única propuesta terapéutica específica para la enfermedad aprobada para el tratamiento de la enfermedad de Fabry. Se ha demostrado que la agalsidasa beta despeja depósitos de GL-3 de manera consistente en el endotelio capilar en todos los tejidos evaluados, en células mesangiales e intersticiales renales y despeja GL-3 en podocitos de manera dependiente de la dosis. En cambio, los depósitos de GL-3 en cardiomiocitos no se redujeron mediante agalsidasa beta después de 5 y 12 meses de tratamiento en pacientes que se sometieron a biopsias cardíacas, a pesar del aclaramiento eficaz de GL-3 desde células endoteliales capilares intersticiales en biopsias endomiocárdicas. Por lo tanto, hasta la fecha no se ha demostrado el aclaramiento de GL-3 desde cardiomiocitos de pacientes con Fabry.

La terapia de reducción de sustrato (SRT, por sus siglas en inglés) es una propuesta que reduce la síntesis de lípidos que llegan al lisosoma a través de la inhibición de glucosilceramida sintasa (GCS), la enzima que limita la velocidad en la síntesis de glucoesfingolípidos. Dado que GL-1 sirve como el componente básico central para la síntesis de glucoesfingolípidos más complejos, la SRT con inhibidores de GCS ofrece una posible estrategia terapéutica para otras glucoesfingolipidosis, incluida la enfermedad de Fabry.

La SRT se ha evaluado en ratones con déficit de a-Gal A (modelo murino de la enfermedad de Fabry) que acumulan GL-3 en una variedad de tejidos. Los informes publicados han mostrado que la inhibición de GCS puede retrasar la acumulación de GL-3 tisular y bajar GL-3 en el plasma y orina de ratones con Fabry. Sin embargo, la distribución celular de GL-3 en los ratones con Fabry no refleja la observada en pacientes con GL-3 ya que no se acumula en cardiomiocitos y estos ratones no desarrollan disfunción cardíaca a medida que envejecen.

Por consiguiente, existe la necesidad de desarrollar nuevas terapias para despejar la acumulación de GL-3 en cardiomiocitos de pacientes con Fabry. En particular, sería deseable desarrollar una SRT con una molécula pequeña dirigida a cardiomiocitos en el corazón, y que sea capaz de prevenir la acumulación de GL-3 en cardiomiocitos. También existe una necesidad de desarrollar nuevos modelos de la enfermedad de Fabry para evaluar los efectos de los candidatos terapéuticos sobre la acumulación celular de GL3.

Como se muestra en los ejemplos, los inventores de la presente solicitud descubrieron que un inhibidor de glucosilceramida sintasa (GCS), descrito adicionalmente en la presente memoria, es capaz de prevenir la acumulación de GL-3 en cardiomiocitos (p. ej., cardiomiocitos derivados de células madre pluripotentes inducidas (iPSC, por sus siglas en inglés) por la enfermedad de Fabry). La presente invención, por lo tanto, se basa al menos en parte, en el hallazgo de que inhibidores de glucosilceramida sintasa (GCS) son eficaces en el tratamiento de cardiomiocitos en un sujeto que padece o está en riesgo de padecer una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípidos. Por consiguiente, la invención presenta métodos para usar inhibidores de GCS para tratar cardiomiocitos. La invención también presenta composiciones para usar en el tratamiento de cardiomiocitos.

En aspectos, la invención se relaciona con métodos para tratar una enfermedad o trastorno de GL-3 en un cardiomiocito al usar un compuesto descrito en la presente memoria.

En aspectos, la invención se relaciona con métodos para tratar el aumento de GL-3 en un cardiomiocito al usar un compuesto descrito en la presente memoria.

En aspectos, la invención se relaciona con métodos para tratar la acumulación de GL-3 en un cardiomiocito al usar un compuesto descrito en la presente memoria.

En realizaciones, la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípidos se asocia con un aumento de globotriaosilceramida (GL-3) en el cardiomiocito en comparación con un cardiomiocito sano (p. ej., cardiomiocito de un sujeto sano o que no padece Fabry). En realizaciones relacionadas, el aumentado de GL-3 está presente, al menos en parte, en el lisosoma del cardiomiocito.

En algunas realizaciones, la administración del compuesto mantiene (p. ej., previene el aumento adicional en los niveles de GL-3 o previene la acumulación de GL-3 adicional) los niveles de GL-3 en el cardiomiocito. En realizaciones relacionadas, el compuesto mantiene (p. ej., previene el aumento adicional en los niveles de GL-3 o previene la acumulación de GL-3 adicional) los niveles de GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

En algunas realizaciones, la administración del compuesto reduce la GL-3 en el cardiomiocito. En realizaciones relacionadas, el compuesto reduce la GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

En realizaciones, la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípidos se asocia con la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el cardiomiocito. En realizaciones relacionadas, la acumulación de GL-3 está presente en el lisosoma del cardiomiocito.

En algunas realizaciones, la administración del compuesto inhibe la acumulación de GL-3 en el cardiomiocito. En realizaciones relacionadas, la administración del compuesto inhibe la acumulación de GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

En algunas realizaciones, la administración del compuesto reduce la acumulación de GL-3 en el cardiomiocito. En realizaciones relacionadas, la administración del compuesto reduce la acumulación de GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

En algunas realizaciones, la administración del compuesto previene la acumulación de GL-3 en el cardiomiocito. En realizaciones relacionadas, la administración del compuesto previene la acumulación de GL-3 en el cardiomiocito.

En los aspectos y realizaciones indicados anteriormente, la administración del compuesto puede inhibir la actividad de la glucosilceramida sintasa (GCS).

En los aspectos y realizaciones indicados anteriormente, el cardiomiocito puede estar en el corazón de un sujeto.

En realizaciones, el sujeto padece o está en riesgo de padecer la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípidos. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípidos es un trastorno metabólico. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípidos es un trastorno metabólico. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípidos es una enfermedad de almacenamiento lisosómico (p. ej., Gaucher, Fabry, GM1-gangliosidosis, deficiencia de activador Gm², Tay-Sachs y Sandhoff). En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípidos es una enfermedad o trastorno de GL-3. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípidos es la enfermedad de Fabry.

En los aspectos y realizaciones indicados anteriormente, el método puede implicar, además, administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una enzima lisosómica (p. ej., glucocerebrosidasa, alfa-galactosidasa A, Hexosaminidasa A, Hexosaminidasa B y GM1-gangliósido-p-galactosidasa) al sujeto. En realizaciones, la enzima lisosómica es alfagalactosidasa A.

En realizaciones, el sujeto tiene niveles elevados de un sustrato lisosómico (p. ej., globotriaosilceramida y lisoglobotriaosilceramida, o una combinación de estas) antes del tratamiento. En algunas realizaciones, el sujeto que se somete al tratamiento tiene cantidades combinadas del sustrato lisosómico en la orina y el plasma más bajas que un sujeto tratado con la enzima lisosómica o el compuesto solos.

En aspectos, la invención se relaciona con métodos para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry. Los métodos implican administrar una cantidad eficaz de un compuesto descrito en la presente memoria al sujeto.

En algunas realizaciones, la administración del compuesto inhibe la acumulación de GL-3 en un cardiomiocito del sujeto. En realizaciones relacionadas, la administración del compuesto inhibe la acumulación de GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

En algunas realizaciones, la administración del compuesto reduce la acumulación de GL-3 en un cardiomiocito del sujeto. En realizaciones relacionadas, la administración del compuesto reduce la acumulación de GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

En algunas realizaciones, la administración del compuesto previene la acumulación de GL-3 en un cardiomiocito del sujeto. En realizaciones relacionadas, la administración del compuesto previene la acumulación de GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

En aspectos, la invención se relaciona con métodos para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry. Los métodos implican administrar una cantidad eficaz de un compuesto descrito en la presente memoria al sujeto. En realizaciones, el sujeto tiene un aumento de GL-3 en comparación con cardiomiocitos sanos. En realizaciones relacionadas, el aumentado de GL-3 está presente, al menos en parte, en los lisosomas de los cardiomiocitos.

En algunas realizaciones, la administración del compuesto mantiene (p. ej., previene el aumento adicional en los niveles de GL-3 o previene la acumulación de GL-3 adicional) los niveles de GL-3 en los cardiomiocitos. En realizaciones relacionadas, la administración del compuesto mantiene (p. ej., previene el aumento adicional en los niveles de GL-3 o previene la acumulación de GL-3 adicional) los niveles de GL-3 en el lisosoma de los cardiomiocitos.

En algunas realizaciones, la administración del compuesto reduce la GL-3 en los cardiomiocitos. En realizaciones relacionadas, la administración del compuesto reduce la GL-3 en el lisosoma de los cardiomiocitos.

En los aspectos y realizaciones indicados anteriormente, los cardiomiocitos del sujeto pueden contener GL-3 acumulada. En realizaciones, la GL-3 acumulada está presente en los lisosomas de los cardiomiocitos.

En los aspectos y realizaciones indicados anteriormente, los métodos pueden implicar, además, administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de alfa-galactosidasa A al sujeto. En realizaciones, el sujeto puede tener niveles elevados de globotriaosilceramida, liso-globotriaosilceramida o combinaciones de estas antes del tratamiento. En algunas realizaciones, el sujeto que se somete al tratamiento tiene cantidades combinadas de globotriaosilceramida o liso-globotriaosilceramida en la orina y el plasma más bajas que un sujeto tratado con la alfa-galactosidasa A o el compuesto solos.

En los aspectos y realizaciones indicados anteriormente, la administración del compuesto enlentece la progresión de la enfermedad o trastorno, reduce la intensidad de los síntomas asociados con la enfermedad o trastorno, retrasa la aparición de síntomas asociados con la enfermedad o trastorno, retrasa la mortalidad, o combinaciones de estos.

En los aspectos y realizaciones indicados anteriormente, la administración del compuesto reduce los niveles de GL-3 o la acumulación de GL-3 en al menos aproximadamente 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o cualquier número intermedio en el cardiomiocito (o el lisosoma del cardiomiocito).

En aspectos, la invención proporciona una composición farmacéutica para usar en cualquiera de los métodos descritos en la presente memoria. En realizaciones, la composición farmacéutica comprende, además, un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

En aspectos, la invención proporciona un compuesto descrito en la presente memoria para usar en cualquiera de los métodos descritos en la presente memoria.

En los aspectos y realizaciones indicados anteriormente, el compuesto se representa mediante la siguiente fórmula estructural,

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este, en donde:

n es 1,2 o 3;

m es 0 o 1;

p es 0 o 1;

t es 0, 1 o 2;

y es 1 o 2;

z es 0, 1 o 2;

E es S, O, NH, NOH, NNO2, NCN, NR, NOR o NSO2R;

X¹es CR¹cuando m es 1 o N cuando m es 0;

X²es O, -NH, -CH2-, SO2, NH-SO2;CHalquilo (C1-C6) o -NR²;

X³es O, -NH, -CH2-, CO, -CHalquilo (C1-C6), SO2NH, -CO-NH- o -NR³;

X⁴es CR⁴R⁵, CH2 CR⁴R⁵o CH2 -alquilo (C1-C6)-CR⁴R⁵;

X⁵es una unión directa, O, S, SO2, CR⁴R⁵; alquilo(C1-C6), alquiloxi(C1-C6), alquenilo(C1-C6), alqueniloxi(C1-C6); R es arilo(C6-C12), heteroarilo(C²-C⁹), alquilo(C1-C6), heteroarilo(C²-C⁹)alquilo(C¹-C⁶);

R¹es H, CN, alquilcarbonilo(C1-C6) o alquilo(C1-C6);

R²y R³son cada uno independientemente -H, alquilo(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, alquilo(C1-C6), arilo(C6-C12), heteroarilo(C²-C⁹), alquilo(C1-C6)arilo(C6-C12), haloarilo(C6-C12) y haloheteroarilo(C²-C⁹), u opcionalmente cuando X²es -NR²y X³es -NR³, R²y R³pueden tomarse junto con los átomos de nitrógeno a los que están acoplados para formar un anillo heterocíclico no aromático opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno, alquilo(C1-C6), arilo(C⁶-C12), heteroarilo(C²-C⁹), alquilo(C1-C6)arilo(C6-C12), haloarilo(C6-C12) y haloheterarilo(C²-C⁹);

R⁴y R⁵se seleccionan independientemente de H, alquilo(C1-C6), o tomados junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro;

R⁶es -H, halógeno, -CN, arilo(C6-C12), ariloxi(C6-C12), alquiloxi(C1-C6); alquilo(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a cuatro halo o alquilo(C1-C6);

A¹es alquinilo(C2-C6); cicloalquilo(C³-C¹⁰), arilo(C6-C12), heteroarilo(C²-C⁹), heterocicloalquilo(C²-C⁹) o benzo heterocicloalquilo(C²-C⁹) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, alquilo(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alquenilo(C1-C6), amino, alquilamino(C1-C6), dialquilamino(C1-C6), alcoxi(C1-C6), nitro, CN, -OH, alquiloxi(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alcoxicarbonilo(C1-C6) y alquilcarbonilo(C1-C6);

A²es H, cicloalquilo(C³-C¹⁰), arilo(C6-C12), heteroarilo(C²-C⁹), heterocicloalquilo(C²-C⁹) o benzo heterocicloalquilo(C2-C9) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, alquilo(C1-C⁶) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alquenilo(C1-C6), amino, alquilamino(C1-C6), dialquilamino(C1-C6), alcoxi(C1-C6), O(cicloalquilo C3-C6), cicloalcoxi(C³-C⁶), nitro, Cn , OH, alquiloxi(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; cicloalquilo (C3-C6), alcoxicarbonilo(C1-C6), alquilcarbonilo(C1-C6), haloalquilo(C1-C6);

con la condición de que la suma de n t y z no sea mayor que 6;

con la condición de que cuando p es 0; X²sea NH-SO2 y X³sea NH;

con la condición de que cuando n es 1; t es 0; y es 1; z es 1; X²es NH; E es O; X³es NH; A²es H; y X⁵es una unión directa; A¹no sea fenilo, halofenilo o isopropenil fenilo insustituido;

con la condición de que cuando n es 1; t es 0; y es 1; z es 1; X²es O; E es O; X³es NH; A¹es arilo(C6-C12) y X⁵es una unión directa; A²es H y R⁴es H entonces R⁵no sea ciclohexilo; y con la condición de que cuando n es 1; t es 0; y es 1; z es 1; X²es NH; E es O; X³es CH2; R⁴y R⁵son ambo hidrógeno; A²es H y X⁵es una unión directa; entonces A¹no sea fenilo insustituido.

En algunas realizaciones, el compuesto puede ser

En algunas realizaciones, el compuesto puede ser

La presente invención se refiere a un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural,

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este, en donde:

n es 1, 2 o 3;

m es 0 o 1;

p es 0 o 1;

t es 0, 1 o 2;

y es 1 o 2;

z es 0, 1 o 2;

E es S, O, NH, NOH, NNO2, NCN, NR, NOR o NSO2R;

X¹es CR¹cuando m es 1 o N cuando m es 0;

X²es O, -NH, -CH2-, SO2, NH-SO2; CHalquilo (C1-C6) o -NR²;

X³es O, -NH, -CH2-, CO, -CHalquilo (C1-C6), SO2NH, -CO-NH- o -NR³;

X⁴es CR⁴R⁵, CH2 CR⁴R⁵o CH2 -alquilo (C1-C6)-CR⁴R⁵;

R¹es H, CN, alquilcarbonilo(C1-C6) o alquilo(C1-C6);

R⁴y R⁵se seleccionan independientemente de H, alquilo(C1-C6), o se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro;

A¹es alquinilo(C2-C6); arilo(C6-C12), heteroarilo(C²-C⁹), heterocicloalquilo(C²-C⁹) o benzo heterocicloalquilo(C²-C⁹) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, alquilo(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alquenilo(C1-C6), amino, alquilamino(C1-C6), dialquilamino(C1-C6), alcoxi(C1-C6), nitro, CN, -OH, alquiloxi(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alcoxicarbonilo(C1-C6) y alquilcarbonilo(C1-C6);

A²es H, arilo(C6-C12), heteroarilo(C²-C⁹), heterocicloalquilo(C²-C⁹) o benzo heterocicloalquilo(C²-C⁹) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, alquilo(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alquenilo(C1-C6), amino, alquilamino(C1-C6), dialquilamino(C1-C6), alcoxi(C1-C6), O(cicloalquilo C3-C6), cicloalcoxi(C³-C⁶), nitro, CN, OH, alquiloxi(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; cicloalquilo (C3-C6), alcoxicarbonilo(C1-C6), alquilcarbonilo(C1-C6), haloalquilo(C1-C6);

con la condición de que la suma de n t y z no sea mayor que 6;

con la condición de que cuando p es 0; X²sea NH-SO2 y X³sea NH;

con la condición de que cuando n es 1; t es 0; y es 1; z es 1; X²es O; E es O; X³es NH; A¹es arilo(C6-C12) y X⁵es una unión directa; A²es H y R⁴es H entonces R⁵no sea ciclohexilo; y

con la condición de que cuando n es 1; t es 0; y es 1; z es 1; X²es NH; E es O; X³es CH2; R⁴y R⁵son ambos hidrógeno; A²es H y X⁵es una unión directa; entonces A¹no sea fenilo insustituido. Ciertos aspectos de la invención incluyen administrar el compuesto indicado anteriormente a un paciente como parte de terapia de combinación que incluye una terapia de reemplazo enzimático (ERT) y terapia de molécula pequeña (SMT) para reducir la cantidad de e/o inhibir la acumulación de sustrato en un paciente diagnosticado con una enfermedad de almacenamiento lisosómico.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula en donde n es 1; t es 0; y es 1 y z es 1. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula en donde n es 1; t es 1; y es 1 y z es 1. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula en donde n es 2; t es 0; y es 1 y z es 1. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula en donde n es 2; t es 1; y es 1 y z es 1. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula en donde n es 3; t es 0; y es 1 y z es 1. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula en donde n es 1; t es 2; y es 1 y z es 1.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; t es 0; y es 1 y z es 0. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; t es 1; y es 1 y z es 0. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 2; t es 0; y es 1 y z es 0. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 2; t es 1; y es 1 y z es 0. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 3; t es 0; y es 1 y z es 0. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; t es 2; y es 1 y z es 0. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; t es 1; y es 2 y z es 0. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 2; t es 0; y es 2 y z es 0. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde m es 1 y X¹es CR¹.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde m es 0 y X¹es N.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde m es 1; E es O; X²es O y X³es NH.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde m es 1; E es O; X²es NH y X³es NH.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde m es 1; E es O; X²es CH²y X³es NH.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde m es 1; E es O; X²es NH y X³es CH².

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde m es 1; E es S; X²es NH y X³es NH.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde m es 0; E es O; X¹es NH y X³es NH.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde m es 1; E es O; X²es NH y X³es CO-NH.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde m es 1; p es 0; X²es NH-SO2 y X³es NH.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde R⁴y R⁵son cada uno alquilo(C1-C⁶) o se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹ü) espiro.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde R⁴y R⁵son cada uno metilo. La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo ciclopropilo espiro.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A¹es alquinilo(C2-C6) o arilo(C⁶-C¹²).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A¹es heteroarilo(C2-Cg). La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A¹es tiofeno, tiazol, isotiazol, furano, oxazol, isoxazol, pirrol, imidazol, pirazol, triazol, piridina, pimiridina, piridazina, indol, benzotiazol, benzoisoxazol, benzopirazol, benzoimidazol, benzofurano, benzooxazol o benzoisoxazol.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A¹es heterocicloalquilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A¹es pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piranilo, tiopiranilo, aziridinilo, azetidinilo, oxiranilo, metilenodioxilo, cromenilo, barbiturilo, isoxazolidinilo, 1,3-oxazolidin-3-ilo, isotiazolidinilo, 1,3-tiazolidin-3-ilo, 1,2-pirazolidin-2-ilo, 1,3-pirazolidin-1-ilo, piperidinilo, tiomorfolinilo, 1,2-tetrahidrotiazin-2-ilo, 1,3-tetrahidrotiazin-3-ilo, tetrahidrotiadiazinilo, morfolinilo, 1,2-tetrahidrodiazin-2-ilo, 1,3-tetrahidrodiazin-1 -ilo, tetrahidroazepinilo, piperazinilo, piperizin-2-onilo, piperizin-3-onilo, cromanilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, imidazolidinilo, 2-imidazolidinilo, 1,4-dioxanilo, 8-azabiciclo[3.2.1]octanilo, 3-azabiciclo[3.2.1]octanilo, 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2.5- diazabiciclo[2.2.2]octanilo, octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazinilo, 3-azabiciclo[4.1.0]heptanilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hexanilo, 2-azaspiro[4.4]nonanilo, 7-oxa-1-aza-spiro[4.4]nonanilo, 7-azabiciclo[2.2.2]heptanilo u octahidro-1 H-indolilo.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A¹es benzoheterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A¹es 2,3-dihidrobenzo[b][1,4] dioxina o 2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde R⁶es H.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, X⁵es una unión directa.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, X⁵es un CR⁴R⁵.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde R⁴y R⁵son cada uno metilo.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A²es piridina.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A²es heterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A²es pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piranilo, tiopiranilo, aziridinilo, azetidinilo, oxiranilo, metilenodioxilo, cromenilo, barbiturilo, isoxazolidinilo, 1,3-oxazolidin-3-ilo, isotiazolidinilo, 1,3-tiazolidin-3-ilo, 1,2-pirazolidin-2-ilo, 1,3-pirazolidin-1-ilo, piperidinilo, tiomorfolinilo, 1,2-tetrahidrotiazin-2-ilo, 1,3-tetrahidrotiazin-3-ilo, tetrahidrotiadiazinilo, morfolinilo, 1,2-tetrahidrodiazin-2-ilo, 1,3-tetrahidrodiazin-1 -ilo, tetrahidroazepinilo, piperazinilo, piperizin-2-onilo, piperizin-3-onilo, cromanilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, imidazolidinilo, 2-imidazolidinilo, 1,4-dioxanilo, 8-azabiciclo[3.2.1]octanilo, 3-azabiciclo[3.2.1]octanilo, 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2.5- diazabiciclo[2.2.2]octanilo, octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazinilo, 3-azabiciclo[4.1.0]heptanilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hexanilo, 2-azaspiro[4.4]nonanilo, 7-oxa-1-aza-spiro[4.4]nonanilo, 7-azabiciclo[2.2.2]heptanilo u octahidro-1 H-indolilo.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A²es benzoheterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, donde R¹es hidrógeno o metilo.

La presente, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹ü) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A ¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o c R4R5 y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o c R4R5 y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o c R4R5 y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o c R4R5 y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X1 es CR1; m es 1; E es O; X2 es NH; X3 es CH2; R4 y R5 se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-Ci ⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C i ⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C3-C1ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C3-C1ü) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o c R4R5 y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹ü) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o c R4R5 y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o c R4R5 y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o c R4R5 y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o c R4R5 y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹ü) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o c R4R5 y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C3-C10) espiro o anillo cicloalcoxi(C3-C10) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹ü) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C2-C9); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C⁶-C¹²).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C⁶-C¹²).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C⁶-C¹²).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹ü) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C⁶-C¹²).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C⁶-C¹²).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹ü) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C⁶-C¹²).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A ¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X1 es CR1; m es 1; E es O; X2 es NH; X3 es CH2; R4 y R5 se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-Ci ⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C i ⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹ü) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C3-C10) espiro o anillo cicloalcoxi(C3-C10) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹ü) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C3-C10) espiro o anillo cicloalcoxi(C3-C10) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heterocicloalquilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heterocicloalquilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A ¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹ü) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹ü) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C10).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C3-C10) espiro o anillo cicloalcoxi(C3-C10) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C⁶-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C10).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C⁶-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C10).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X1 es CR1; m es 1; E es O; X2 es CH2; X3 es NH; R4 y R5 son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-Ci ⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C⁶-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹ü) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C⁶-C¹²).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C⁶-C¹²).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar una anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es N; m es 0; E es O; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-C12); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X1 es CR1; m es 1; E es O; X2 es NH; X3 es CO-NH; R4 y R5 son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es arilo(C6-Ci2); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C10).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹ü) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹ü) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C6-C12).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CO-NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es arilo(C⁶-C¹²).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es c R1; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵se toman junto con carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A ¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵se toman junto con carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; p es 1; E es O; X²es O; X³es NH; R¹es H; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C3-C10); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C2-Cg); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-Cg).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es NH; X³es CH2; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹ü); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es O; X²es CH2; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C3-C10); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C3-C10).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es S; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es heteroarilo(C²-C⁹); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es cicloalquilo(C³-C¹⁰).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C²-C⁹).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X¹es CR¹; m es 1; E es SO2; X²es NH; X³es NH; R⁴y R⁵son cada uno independientemente metilo; R⁶es un hidrógeno o metilo; A¹es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X⁵es una unión directa, O o CR⁴R⁵y A²es heteroarilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X1 es N; m es 0; E es O; X3 es NH; R4 y R5 se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C3-Ci0) espiro o anillo cicloalcoxi(C3-Ci0) espiro; R6 es un hidrógeno o metilo; A1 es heteroarilo(C2-C9); X5 es una unión directa, O o CR4R5 y A2 es cicloalquilo(C3-C10).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X1 es N; m es 0; E es O; X3 es NH; R4 y R5 son cada uno independientemente metilo; R6 es un hidrógeno o metilo; A1 es heteroarilo(C2-C9); X5 es una unión directa, O o CR4R5 y A2 es cicloalquilo(C3-C1ü).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X1 es N; m es 0; E es O; X3 es NH; R4 y R5 se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C¹⁰) espiro; R6 es un hidrógeno o metilo; A1 es cicloalquilo(C3-C10); X5 es una unión directa, O o CR4R5 y A2 es heteroarilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X1 es N; m es 0; E es O; X3 es NH; R4 y R5 son cada uno independientemente metilo; R6 es un hidrógeno o metilo; A1 es cicloalquilo(C3-C10); X5 es una unión directa, O o CR4R5 y A2 es heteroarilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X1 es c R1; m es 1; E es O; X2 es NH; X3 es CO-NH; R4 y R5 se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C3-C10) espiro o anillo cicloalcoxi(C3-C10) espiro; R6 es un hidrógeno o metilo; A1 es heteroarilo(C2-C9); X5 es una unión directa, O o CR4R5 y A2 es cicloalquilo(C3-C10).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X1 es CR1; m es 1; E es O; X2 es NH; X3 es CO-NH; R4 y R5 son cada uno independientemente metilo; R6 es un hidrógeno o metilo; A1 es heteroarilo(C2-C9); X5 es una unión directa, O o CR4R5 y A2 es cicloalquilo(C3-C10).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X1 es c R1; m es 1; E es O; X2 es NH; X3 es CO-NH; R4 y R5 se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C3-C10) espiro o anillo cicloalcoxi(C3-C10) espiro; R6 es un hidrógeno o metilo; A1 es cicloalquilo(C³-C¹⁰); X5 es una unión directa, O o CR4R5 y A2 es heteroarilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde n es 1; 2 o 3; t es 0, 1 o 2; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; X1 es CR1; m es 1; E es O; X2 es NH; X3 es CO-NH; R4 y R5 son cada uno independientemente metilo; R6 es un hidrógeno o metilo; A1 es cicloalquilo(C3-C10); X5 es una unión directa, O o CR4R5 y A2 es heteroarilo(C2-C9).

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A1 es cicloalquilo(C3-C10). La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, en donde A2 es cicloalquilo(C3-C10). La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este, seleccionado del grupo que consiste en:

[2-(2,4'-difluorobifenil-4-il)propan-2-il]carbamato de 1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-ilo;

{2-[4-(1,3-benzotiazol-6-il)fenil]propan-2-il}carbamato de 1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-ilo;

{1 -[5-(4-fluorofenil)piridin-2-il]ciclopropil}carbamato de 1 -azabiciclo[3.2.2]non-4-ilo;

{1 -[3-(4-fluorofenoxi)fenil]ciclopropil}carbamato de 1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-ilo;

{1 -[4-(1,3-benzotiazol-5-il)fenil]ciclopropil}carbamato de 1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-ilo;

[1 -(4'-fluoro-3'-metoxibifenil-4il)ciclopropil]carbamato de 1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-ilo;

[3-(4'-fluorobifenil-4-il)oxetan-3-il]carbamato de 1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-ilo;

{1 -[6-(4-fluorofenoxi)piridin-2-il]ciclopropil}carbamato de 1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-ilo;

[3-(4'-fluorobifenil-4-il)pentan-3-il]carbamato de 1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-ilo;

{2-[2-(4-fluorofenil)-2H-indazol-6-il]propan-2 il}carbamato de 1-azabiciclo[2.2.2]oct-3-ilo;

{2-[2-(1 H-pirrol-1 -il)piridin-4-il]propan-2-il}carbamato de 1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-ilo;

1 -(3-etil-1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-il)-3-[1 -(4'-fluorobifenil-4-il)ciclopropil]urea;

N-(1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-il)-N'-[1 -(4'-fluorobifenil-4il)ciclopropil] etanodiamida;

(1-{4[(4,4difluorociclohexil)oxi]fenil}ciclopropil) carbamato de 1-azabiciclo[2.2.2]oct-3-ilo;

1 -(4-metil-1 -azabiciclo[3.2.2]non-4-il)-3-[1 -(5-fenilpiridin-2-il)ciclopropil]urea; 1 -[1 -(4'-fluorobifenil-4-il)ciclopropil]-1 -metil-3-(3-metil-1-azabiciclo[2.2.2]oct-3-il)urea;

1 -[1 -(4'-fluorobifenil-4-il)ciclopropil]-1 -metil-3-(3-metil-1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-il)urea;

1- {2-[4'-(2-metoxietoxi)bifenil-4-il]propan-2-il}-3-(3-metil-1-azabiciclo[2.2.2]oct-3-il)urea;

2- (1-azabiciclo[3.2.2]non-4-il)-N-[1-(5-fenilpiridin-2-il)ciclopropil]acetamida; 3-(4'-fluorobifenil-4-il)-3-metil-N-(4-metil-1-azabiciclo[3.2.2]non-4-il)butanamida;

diamida N-[2-(bifenil-4-il)propan-2-il]-N'-(3-metil-1-azabiciclo[2.2.2]oct-3-il)sulfúrica;

diamida N-[2-(4'-fluorobifenil-4-il)propan-2-il]-N'-(3-metil-1-azabiciclo[2.2.2]oct-3-il)sulfúrica;

1 -(3-butil-1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-il)-3-{2-[1 -(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il]propan-2-il}urea;

[4-(4-fluorofenil)-2-metilbut-3-in-2-il]carbamato 1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-ilo; 1 -(3-butil-1 -azabiciclo[2.2.2]oct-3-il)-3-[4-(4-fluorofenil)-2-metilbut-3-in-2-il]urea;

N-[1-(4'-fluorobifenil-4-il)ciclopropil]-1,4-diazabiciclo[3.2.2]nonano-4-carboxamida;

1 -(2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)propan-2-il)-3-(3-metil-1 -azabiciclo[3.2.2]nonan-3-il)urea;

1 -(2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)propan-2-il)-3-(4-metil-1 -azabiciclo[4.2.2]decan-4-il)urea;

1 -(2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)propan-2-il)-3-(3-metil-1 -azabiciclo[4.2.2]decan-3-il)urea; y

1 -(2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)propan-2-il)-3-(5-metil-1 -azabiciclo[4.2.2]decan-5-il)urea.

La presente invención, además, se relaciona con una composición farmacéutica para tratar una enfermedad o trastorno mediada por glucosilceramida sintasa (GCS) o una enfermedad o trastorno en el que la GCS está implicada en un sujeto que necesita dicho tratamiento que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de compuesto de Fórmula I.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno mediada por glucosilceramida sintasa (GCS) o una enfermedad o trastorno en el que la GCS está implicada en un sujeto que necesita dicho tratamiento que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de compuesto de Fórmula I. La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno tal como el cáncer. La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno tal como un trastorno metabólico.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno tal como una enfermedad neuropática.

La presente invención, además, se relaciona con un método en donde la enfermedad neuropática es enfermedad de Alzheimer.

La presente invención, además, se relaciona con un método en donde la enfermedad neuropática es enfermedad de Parkinson.

La presente invención, además, se relaciona con el método para inducir una actividad catalítica de glucosilceramida sintasa disminuida en una célula, in vitro, que comprende poner en contacto la célula con una cantidad con efecto del compuesto de Fórmula I.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de Fórmula I, (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)carbamato de (S)-quinuclidin-3-ilo, representado por la siguiente fórmula estructural,

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este.

La presente invención, además, se relaciona con el compuesto de la Fórmula I, (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)carbamato de quinuclidin-3-ilo, representado por la siguiente fórmula estructural,

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar un sujeto diagnosticado con una enfermedad de almacenamiento lisosómico, el método incluye administrar al sujeto una cantidad eficaz de compuesto de Fórmula I y, en ciertas realizaciones, el compuesto está representado por las siguientes fórmulas estructurales,

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este, o

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este.

En ciertas realizaciones de la invención, la enfermedad de almacenamiento lisosómico es el resultado de un defecto en la vía del glucoesfingolípido.

En ciertas realizaciones de la invención, la enfermedad de almacenamiento lisosómico es Gaucher, Fabry, Gm¹-gangliosidosis, deficiencia de activador de GM², Tay-Sachs o Sandhoff.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar un sujeto diagnosticado con una enfermedad de almacenamiento lisosómico, el método incluye administrar al sujeto una cantidad eficaz de compuesto de Fórmula I y administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una enzima lisosómica.

En ciertas realizaciones de la invención, la enzima lisosómica es glucocerebrosidasa, alfa-galactosidasa A, Hexosaminidasa A, Hexosaminidasa B o GM1-gangliósido-p-galactosidasa.

En ciertas realizaciones de la invención, el sujeto tiene niveles elevados de un sustrato lisosómico antes del tratamiento y una vez que se somete al tratamiento el sujeto tiene cantidades combinadas del sustrato lisosómico en la orina y el plasma más bajas que un sujeto tratado con la enzima lisosómica o el compuesto solos.

En ciertas realizaciones de la invención, el sustrato es globotriaosilceramida o liso-globotriaosilceramida y combinaciones de estos.

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la actividad de la glucosilceramida sintasa (GCS) en un sujeto diagnosticado con una enfermedad de almacenamiento lisosómico, que incluye administrar al paciente una cantidad eficaz de compuesto de Fórmula I, ya sea solo o como una terapia de combinación con una terapia de reemplazo enzimático.

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la acumulación de un material derivado de GCS en un sujeto diagnosticado con una enfermedad de almacenamiento lisosómico, que incluye administrar al paciente una cantidad eficaz de compuesto de Fórmula I, ya sea solo o como una terapia de combinación con una terapia de reemplazo enzimático.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural,

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este, en donde:

n es 1,2 o 3;

m es 0 o 1;

p es 0 o 1;

t es 0, 1 o 2;

y es 1 o 2;

z es 0, 1 o 2;

E es S, O, NH, NOH, NNO2, NCN, NR, NOR o NSO2R;

X¹es CR¹cuando m es 1 o N cuando m es 0;

X²es O, -NH, -CH2-, SO2, NH-SO2; CHalquilo(C1-C6) o -NR²;

X³es O, -NH, -CH2-, CO, -CHalquilo (C1-C6), SO2NH, -CO-NH- o -NR³;

X⁴es CR⁴R⁵, CH2 CR⁴R⁵o CH2-alquilo(C1-C6)-CR⁴R⁵;

R¹es H, CN, alquilcarbonilo(C1-C6) o alquilo(C1-C6);

R²y R³son cada uno independientemente -H, alquilo(Ci -C⁶) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, alquilo(C1-C6), arilo(C6-C12), heteroarilo(C²-C⁹), alquilo(C1-C6)arilo(C6-C12), haloarilo(C6-C12) y haloheteroarilo(C²-C⁹), u opcionalmente cuando X²es -NR²y X³es -NR³, R²y R³pueden tomarse junto con los átomos de nitrógeno a los que están acoplados para formar un anillo heterocíclico no aromático opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno, alquilo(C1-C6), arilo(C⁶-C12), heteroarilo(C²-C⁹), alquilo(C1-C6)arilo(C6-C12), haloarilo(C6-C12) y haloheterarilo(C²-C⁹);

R⁶es -H, halógeno, -CN, arilo(C6-C12), ariloxi(C6-C12), alquiloxi(C1-C6); alquilo(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno

a cuatro halo o alquilo(C1-C6);

A¹es alquinilo(C2-C6); cicloalquilo(C³-C¹⁰), arilo(C6-C12), heteroarilo(C²-C⁹), heterocicloalquilo(C²-C⁹) o benzo heterocicloalquilo(C²-C⁹) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste

en halo, alquilo(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alquenilo(C1-C6), amino, alquilamino(C1-C6), dialquilamino(C1-C6), alcoxi(C1-C6), nitro, CN, -OH, alquiloxi(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alcoxicarbonilo(C1-C6) y alquilcarbonilo(C1-C6);

A²es H, cicloalquilo(C³-C¹⁰), arilo(C6-C12), heteroarilo(C²-C⁹), heterocicloalquilo(C²-C⁹) o benzo heterocicloalquilo(C2-C9) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, alquilo(C1-C⁶) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alquenilo(C1-C6), amino, alquilamino(C1-C6), dialquilamino(C1-C6), alcoxi(C1-C6), O(cicloalquilo C3-C6), cicloalcoxi(C³-C⁶), nitro, CN, OH, alquiloxi(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno

a tres halo; cicloalquilo (C3-C6), alcoxicarbonilo(C1-C6), alquilcarbonilo(C1-C6), haloalquilo(C1-C6);

con la condición de que la suma de n t y z no sea mayor que 6;

con la condición de que cuando p es 0; X²sea NH-SO2 y X³sea NH;

con la condición de que cuando n es 1; t es

E es O; X³es NH; A²es H; y X⁵es una uni directa; A¹no sea fenilo, halofenilo o isopropenil fenilo insustituido;

con la condición de que cuando n es 1; t es 0; y es 1; z es 1; X²es NH; E es O; X³es CH2; R⁴y R⁵son ambos hidrógeno; A²es H y X⁵es una unión directa; entonces A¹no sea fenilo insustituido.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde la administración del compuesto inhibe la acumulación de GL-3 en un cardiomiocito del sujeto.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde la administración del compuesto inhibe la acumulación de GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde la administración del compuesto reduce la acumulación de GL-3 en un cardiomiocito del sujeto.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde la administración del compuesto reduce la acumulación de GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde la administración del compuesto previene la acumulación de GL-3 en un cardiomiocito del sujeto.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde la administración del compuesto previene la acumulación de GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde la administración del compuesto inhibe la actividad de glucosilceramida sintasa (GCS).

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural,

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este, en donde:

n es 1,2 o 3;

m es 0 o 1;

p es 0 o 1;

t es 0, 1 o 2;

y es 1 o 2;

z es 0, 1 o 2;

E es S, O, NH, NOH, NNO2, NCN, NR, NOR o NSO2R;

X¹es CR¹cuando m es 1 o N cuando m es 0;

X²es O, -NH, -CH2-, SO2, NH-SO2; CHalquilo(C1-C6) o -NR²;

X³es O, -NH, -CH2-, CO, -CHalquilo (C1-C6), SO2NH, -CO-NH- o -NR³;

X⁴es CR⁴R⁵, CH2 CR⁴R⁵o CH2-alquilo(Cr C6)-CR⁴R⁵;

R¹es H, CN, alquilcarbonilo(C1-C6) o alquilo(C1-C6);

A²es H, cicloalquilo(C³-Ci ⁰), arilo(C6-Ci2), heteroarilo(C²-C⁹), heterocicloalquilo(C²-C⁹) o benzo heterocicloalquilo(C2-Cg) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, alquilo(Ci -C⁶) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alquenilo(Ci -C⁶), amino, alquilamino(Ci -C⁶), dialquilamino(Ci -C⁶), alcoxi(Ci -C⁶), O(cicloalquilo C3-C6), cicloalcoxi(C³-C⁶), nitro, CN, OH, alquiloxi(Ci -C⁶) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; cicloalquilo (C3-C6), alcoxicarbonilo(Ci -C⁶), alquilcarbonilo(Ci -C⁶), haloalquilo(Ci -C⁶);

con la condición de que la suma de n t y z no sea mayor que 6;

con la condición de que cuando p es 0; X²sea NH-SO2 y X³sea NH;

con la condición de que cuando n es i ; t es 0; y es i ; z es i ; X²es NH; E es O; X³es NH; A²es H; y X⁵es una unión directa; A i no sea fenilo, halofenilo o isopropenil fenilo insustituido;

con la condición de que cuando n es i ; t es 0; y es i ; z es i ; X²es O; E es O; X³es NH; A i es arilo(C6-C i2) y X⁵es una unión directa; A²es H y R⁴es H entonces R⁵no sea ciclohexilo; y

con la condición de que cuando n es i ; t es 0; y es i ; z es i ; X²es NH; E es O; X³es CH2; R⁴y R⁵son ambos hidrógeno; A²es H y X⁵es una unión directa; entonces A i no sea fenilo insustituido.

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde los cardiomiocitos del sujeto tienen un aumento de GL-3 en comparación con cardiomiocitos sanos.

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde el aumento de GL-3 está presente en los lisosomas de los cardiomiocitos.

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde la administración del compuesto mantiene los niveles de GL-3 en los cardiomiocitos.

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde la administración del compuesto mantiene los niveles de GL-3 en el lisosoma de los cardiomiocitos.

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde la administración del compuesto reduce la GL-3 en los cardiomiocitos.

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde la administración del compuesto reduce la GL-3 en el lisosoma de los cardiomiocitos.

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde los cardiomiocitos del sujeto comprenden GL-3 acumulada.

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde la GL-3 acumulada está presente en los lisosomas de los cardiomiocitos.

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula I, en donde la administración del compuesto inhibe la actividad de glucosilceramida sintasa (GCS).

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto, en donde el compuesto es

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural:

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto, en donde el compuesto es, en donde el compuesto es

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este.

La presente invención, además, se relaciona con un método para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde el método comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de alfa-galactosidasa A al sujeto.

en donde el método comprende, además, administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de alfa-galactosidasa A al sujeto.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I y en donde antes del tratamiento el sujeto tiene niveles elevados de globotriaosilceramida, liso-globotriaosilceramida o combinaciones de estas.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de la siguiente fórmula estructural:

y en donde antes del tratamiento el sujeto tiene niveles elevados de globotriaosilceramida, liso-globotriaosilceramida o combinaciones de estas.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar la acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry para reducir la globotriaosilceramida (GL-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enfermedad de Fabry, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde el sujeto que se somete al tratamiento tiene cantidades combinadas de globotriaosilceramida o liso-globotriaosilceramida en la orina y el plasma más bajas que un sujeto tratado con la alfa-galactosidasa A o el compuesto solos.

en donde el sujeto que se somete al tratamiento tiene cantidades combinadas de globotriaosilceramida o lisoglobotriaosilceramida en la orina y el plasma más bajas que un sujeto tratado con la alfa-galactosidasa A o el compuesto solos.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural,

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este, en donde:

n es 1, 2 o 3;

m es 0 o 1;

p es 0 o 1;

t es 0, 1 o 2;

y es 1 o 2;

z es 0, 1 o 2;

E es S, O, NH, NOH, NNO2, NCN, NR, NOR o NSO2R;

X¹es CR¹cuando m es 1 o N cuando m es 0;

X²es O, -NH, -CH2-, SO2, NH-SO2; CHalquilo (C1-C6) o -NR²;

X³es O, -NH, -CH2-, CO, -CHalquilo (C1-C6), SO2NH, -CO-NH- o -NR³;

X⁴es CR⁴R⁵, CH2 CR⁴R⁵o CH2-alquilo(Cr C6)-CR⁴R⁵;

R¹es H, CN, alquilcarbonilo(C1-C6) o alquilo(C1-C6);

R⁴y R⁵se seleccionan independientemente de H, alquilo(C1-C6), o se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C³-C¹⁰) espiro o anillo cicloalcoxi(C³-C⁶) espiro;

A²es H, cicloalquilo(C³-C¹⁰), arilo(C6-C12), heteroarilo(C²-C⁹), heterocicloalquilo(C²-C⁹) o benzo heterocicloalquilo(C2-C9) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, alquilo(C1-C⁶) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; alquenilo(C1-C6), amino, alquilamino(C1-C6), dialquilamino(C1-C6), alcoxi(C1-C6), O(cicloalquilo C3-C6), cicloalcoxi(C³-C⁶), nitro, CN, OH, alquiloxi(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno a tres halo; cicloalquilo (C3-C6), alcoxicarbonilo(C1-C6), alquilcarbonilo(C1-C6), haloalquilo(C1-C6);

con la condición de que la suma de n t y z no sea mayor que 6;

con la condición de que cuando p es 0; X²sea NH-SO2 y X³sea NH;

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto representado de Fórmula I, en donde la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido comprende aumento de globotriaosilceramida (GL-3) en el cardiomiocito en comparación con un cardiomiocito sano.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde el aumento de GL-3 está presente en el lisosoma del cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde la administración del compuesto mantiene los niveles de GL-3 en el cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde el compuesto mantiene los niveles de GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde la administración del compuesto reduce la GL-3 en el cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde la administración del compuesto reduce la GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto representado de Fórmula I, en donde la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido comprende acumulación de globotriaosilceramida (GL-3) en el cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde la acumulación de GL-3 está presente en el lisosoma del cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde la administración del compuesto inhibe la acumulación de GL-3 en el cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde la administración del compuesto inhibe la acumulación de GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde la administración del compuesto reduce la acumulación de GL-3 en el cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde la administración del compuesto reduce la acumulación de GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde la administración del compuesto previene la acumulación de GL-3 en el cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde la administración del compuesto previene la acumulación de GL-3 en el lisosoma del cardiomiocito.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde la administración del compuesto inhibe la actividad de glucosilceramida sintasa (GCS).

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde el compuesto es

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este.

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde el cardiomiocito está en el corazón de un sujeto.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto representado de Fórmula I, en donde el sujeto padece o está en riesgo de padecer la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto representado de Fórmula I, en donde la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido es un trastorno metabólico.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto representado de Fórmula I, en donde la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido es una enfermedad de almacenamiento lisosómico.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde la enfermedad de almacenamiento lisosómico se selecciona del grupo que consiste en Gaucher, Fabry, GM1-gangliosidosis, deficiencia del activador de Gm², Tay-Sachs y Sandhoff.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto representado de Fórmula I, en donde la enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido es una enfermedad o trastorno de Gl-3.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde la enfermedad de almacenamiento lisosómico es Fabry.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de GCS452, en donde el método comprende, además, administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una enzima lisosómica al sujeto.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de GCS452, en donde el método comprende, además, administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una enzima lisosómica al sujeto y en donde la enzima lisosómica se selecciona del grupo que consiste en glucocerebrosidasa, alfa-galactosidasa A, Hexosaminidasa A, Hexosaminidasa B y GM1-gangliósidop-galactosidasa.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de GCS452, en donde el método comprende, además, administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una enzima lisosómica al sujeto, en donde la enzima lisosómica es alfa-galactosidasa A.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde el método comprende, además, administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una enzima lisosómica al sujeto, en donde antes del tratamiento el sujeto tiene niveles elevados de un sustrato lisosómico.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de GCS452, en donde el método comprende, además, administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una enzima lisosómica al sujeto, en donde antes del tratamiento el sujeto tiene niveles elevados de un sustrato lisosómico.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde el método comprende, además, administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una enzima lisosómica al sujeto, en donde antes del tratamiento el sujeto tiene niveles elevados de un sustrato lisosómico y en donde el sustrato lisosómico se selecciona del grupo que consiste en globotriaosilceramida y liso-globotriaosilceramida y combinaciones de estas.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de GCS452, en donde el método comprende, además, administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una enzima lisosómica al sujeto, en donde antes del tratamiento el sujeto tiene niveles elevados de un sustrato lisosómico y en donde el sustrato lisosómico se selecciona del grupo que consiste en globotriaosilceramida y liso-globotriaosilceramida y combinaciones de estas.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde el método comprende, además, administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una enzima lisosómica al sujeto, en donde antes del tratamiento el sujeto tiene niveles elevados de un sustrato lisosómico y en donde el sujeto que se somete al tratamiento tiene cantidades combinadas del sustrato lisosómico en la orina y el plasma más bajas que un sujeto tratado con la enzima lisosómica o el compuesto solos.

La presente invención, además, se relaciona con un método para tratar una enfermedad o trastorno de glucoesfingolípido en un cardiomiocito, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto de GCS452, en donde el método comprende, además, administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una enzima lisosómica al sujeto, en donde antes del tratamiento el sujeto tiene niveles elevados de un sustrato lisosómico y en donde el sujeto que se somete al tratamiento tiene cantidades combinadas del sustrato lisosómico en la orina y el plasma más bajas que un sujeto tratado con la enzima lisosómica o el compuesto solos.

La presente invención se relaciona con un método de terapia de combinación para el tratamiento de un sujeto diagnosticado con una enfermedad de almacenamiento lisosómico que comprende alternar entre la administración de una terapia de reemplazo enzimático y una SRT o terapia de molécula pequeña.

La presente invención se relaciona con un método de terapia de combinación para el tratamiento de un sujeto diagnosticado con una enfermedad de almacenamiento lisosómico que comprende administrar simultáneamente una terapia de reemplazo enzimático y una SRT o terapia de molécula pequeña.

En las diversas terapias de combinación de la descripción, se entenderá que la administración de la terapia de molécula pequeña o SRT se puede producir antes de, simultáneamente con, o después de, la administración de la terapia de reemplazo enzimático. De manera similar, la administración de la terapia de reemplazo enzimático se puede producir antes de, simultáneamente con, o después de, la administración de la terapia de molécula pequeña.

La presente invención, además, proporciona un compuesto para usar en un método para tratar la acumulación de GL-3 en un cardiomiocito según se define en la reivindicación 1 adjunta, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural,

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este, en donde:

n es 1,2 o 3;

m es 0 o 1;

p es 0 o 1;

t es 0, 1 o 2;

y es 1 o 2;

z es 0, 1 o 2;

E es S, O, NH, NOH, NNO2, NCN, NR, NOR o NSO2R;

X¹es CR¹cuando m es 1 o N cuando m es 0;

X²es O, -NH, -CH2-, SO2, NH-SO2; CHalquilo(C1-C6) o -NR²;

X³es O, -NH, -CH2-, CO, -CHalquilo(C1-C6), SO2NH, -CO-NH- o -NR³;

X⁴es CR⁴R⁵, CH2 CR⁴R⁵o CH2-alquilo(C1-C6)-CR⁴R⁵;

R¹es H, CN, alquilcarbonilo(C1-C6) o alquilo(C1-C6);

con la condición de que la suma de n t y z no sea mayor que 6;

con la condición de que cuando p es 0; X²sea NH-SO2 y X³sea NH;

con la condición de que cuando n es 1; t es 0; y es 1; z es 1; X²es O; E es O; X³

s arilo(C6-C12) y X⁵una unión directa; A²es H y R⁴es H entonces R⁵no sea ciclohexilo; y

La presente invención, además, proporciona un compuesto para usar en un método para tratar la acumulación de GL-3 en un cardiomiocito según se define en la reivindicación 1 adjunta, en donde el método comprende poner en contacto el cardiomiocito con una cantidad eficaz de un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural:

o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este.

Definiciones

Según se usa en la presente memoria, el término "sal farmacéuticamente aceptable" significa una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable o sal una sal de adición de base farmacéuticamente aceptable de un compuesto descrito en la presente memoria que se puede administrar sin ningún efecto(s) biológico(s) indeseable(s) sustancial(es) resultante(s) o ninguna interacción(es) perjudicial(es) resultante(s) con cualquier otro componente de una composición farmacéutica el que puede estar contenida.

Según se usa en la presente memoria, el término "profármaco" significa un derivado farmacológico de una molécula de fármaco original que requiere biotransformación, ya sea espontánea o enzimática, dentro del organismo para liberar el fármaco activo. Por ejemplo, los profármacos son variaciones o derivados de los compuestos de Fórmula I que tienen grupos escindibles en ciertas condiciones metabólicas, que cuando se escinden, se convierten en los compuestos de Fórmula I. Dichos profármacos después se activan farmacéuticamente in vivo, cuando experimentan solvólisis en condiciones fisiológicas o experimentan degradación enzimática. Los compuestos profármacos en la presente memoria pueden denominarse simple, doble, triple, etc., dependiendo de la cantidad de etapas de biotransformación necesarias para la liberación del fármaco activo dentro del organismo, y el número de funcionalidades presentes en una forma de tipo precursor. Las formas de profármacos a menudo ofrecen ventajas de solubilidad, compatibilidad con tejido o liberación retrasada en el organismo de mamífero (ver, Bundgard, Design of Prodrugs, págs. 7-9, 21-24, Elsevier, Ámsterdam 1985 y Silverman, The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, págs. 352-401, Academic Press, San Diego, Calif., 1992). Los profármacos conocidos comúnmente en la técnica incluyen derivados ácidos conocidos, tales como, por ejemplo, ésteres preparados mediante reacción de los ácidos originales con un alcohol adecuado, amidas preparadas mediante reacción del compuesto ácido original con una amina, grupos básicos que hacen reacción para formar un derivado base aculado, etc. Claro está que otros derivados de profármaco se pueden combinar con otras características descritas en la presente memoria para potenciar la biodisponibilidad. Como tal, los expertos en la técnica apreciarán que ciertos compuestos de los descritos en la presente descripción que tienen grupos amino, amido, hidroxi o carboxílico libres se pueden convertir en profármacos. Los profármacos incluyen compuestos que tienen un residuo aminoacídico o una cadena polipeptídica de dos o más (p. ej., dos, tres o cuatro) residuos aminoacídicos que se ligan covalentemente a través de uniones peptídicas a grupos amino, hidroxi o ácido carboxílico libres de los compuestos descritos en la presente descripción.

Los residuos aminoacídicos incluyen los 20 aminoácidos de origen natural comúnmente designados por símbolos de tres letras y también incluyen 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, 3-metilhistidina, norvalina, betaalanina, ácido gamma-aminobutírico, citrulina, homocisteína, homoserina, ornitina y metionina sulfona. Los profármacos también incluyen compuestos que tienen un resto carbonato, carbamato, amida o alquil éster unido covalentemente a cualquiera de los sustituyentes indicados anteriormente descritos en la presente memoria.

Según se usa en la presente memoria, el término "alquilo(C1-C6)" significa un radical libre lineal o ramificado saturado que consiste esencialmente en 1 a 6 átomos de carbono y una cantidad correspondiente de átomos de hidrógeno. Los grupos alquilo(C1-C6) ilustrativos incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, etc. Claro está que otros grupos alquilo(C1-C6) serán evidentes sin inconvenientes para los expertos en la técnica dado el beneficio de la presente descripción.

Según se usa en la presente memoria, el término "cicloalquilo(C³-C¹⁰)" significa un radical libre saturado no aromático que forma al menos un anillo que consiste esencialmente en 3 a 10 átomos de carbono y una cantidad correspondiente de átomos de hidrógeno. Como tal, los grupos cicloalquilo(C³-C¹⁰) pueden ser monocíclicos o multicíclicos. Los anillos individuales de dichos grupos cicloalquilo multicíclicos pueden tener diferentes conectividades, p. ej., fusionados, puenteados, espiro, etc. además de la sustitución de unión covalente. Los grupos cicloalquilo(C3-C10) ilustrativos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, norbornanilo, biciclo[3.2.1]octanilo, octahidro-pentalenilo, espiro[4.5]decanilo, ciclopropilo sustituido con ciclobutilo, ciclobutilo sustituido con ciclopentilo, ciclohexilo sustituido con ciclopropilo, etc. Claro está que otros grupos cicloalquilo(C³-C¹⁰) serán evidentes sin inconvenientes para los expertos en la técnica dado el beneficio de la presente descripción.

Según se usa en la presente memoria, el término "heterocicloalquilo(C²-C⁹)" significa un radical libre no aromático que tiene 3 a 10 átomos (es decir, átomos del anillo) que forman al menos un anillo, en donde 2 a 9 de los átomos del anillo son carbono y el(los) átomo(s) del anillo restante(s) (es decir, hetero átomo(s) del anillo) se selecciona(n) del grupo que consiste en nitrógeno, azufre y oxígeno. Como tal, los grupos heterocicloalquilo(C²-C⁹) pueden ser monocíclicos o multicíclicos. Los anillos individuales de dichos grupos heterocicloalquilo multicíclicos pueden tener diferentes conectividades, p. ej., fusionados, puenteados, espiro, etc. además de la sustitución de unión covalente. Los grupos heterocicloalquilo(C²-C⁹) ilustrativos incluyen pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piranilo, tiopiranilo, aziridinilo, azetidinilo, oxiranilo, metilenodioxilo, cromenilo, barbiturilo, isoxazolidinilo, 1,3-oxazolidin-3-ilo, isotiazolidinilo, 1,3-tiazolidin-3-ilo, 1,2-pirazolidin-2-ilo, 1,3-pirazolidin-1 -ilo, piperidinilo, tiomorfolinilo, 1,2-tetrahidrotiazin-2-ilo, 1,3-tetrahidrotiazin-3-ilo, tetrahidrotiadiazinilo, morfolinilo, 1,2-tetrahidrodiazin-2-ilo, 1,3-tetrahidrodiazin-1 -ilo, tetrahidroazepinilo, piperazinilo, piperizin-2-onilo, piperizin-3-onilo, cromanilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, imidazolidinilo, 2-imidazolidinilo, 1,4-dioxanilo, 8-azabiciclo[3.2.1]octanilo, 3-azabiciclo[3.2.1]octanilo, 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.2]octanilo, octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazinilo, 3-azabiciclo[4.1.0]heptanilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hexanilo, 2-azaspiro[4.4]nonanilo, 7-oxa-1 -aza-spiro[4.4]nonanilo, 7-azabiciclo[2.2.2]heptanilo, octahidro-1 H-indolilo, etc. En general, el grupo heterocicloalquilo(C²-C⁹) se acopla típicamente a la estructura principal a través de un átomo de carbono o un átomo de nitrógeno. Claro que está que otros grupos heterocicloalquilo(C²-C⁹) serán evidentes sin inconvenientes para los expertos en la técnica dado el beneficio de la presente descripción.

Según se usa en la presente memoria, el término "heteroarilo(C²-C⁹)" significa un radical libre aromático que tiene 5 a 10 átomos (es decir, átomos del anillo) que forman al menos un anillo, en donde 2 a 9 de los átomos del anillo son carbono y el(los) átomo(s) del anillo restante(s) (es decir, hetero átomo(s) del anillo) se selecciona(n) del grupo que consiste en nitrógeno, azufre y oxígeno. Como tal, los grupos heteroarilo(C²-C⁹) pueden ser monocíclicos o multicíclicos. Los anillos individuales de dichos grupos heteroarilo multicíclicos pueden tener diferentes conectividades, p. ej., fusionados, puenteados, espiro, etc. además de la sustitución de unión covalente. Los grupos heteroarilo(C²-C⁹) ilustrativos incluyen furilo, tienilo, tiazolilo, pirazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, pirrolilo, triazolilo, tetrazolilo, imidazolilo, 1,3,5-oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,3,5-tiadiazolilo, 1,2,3-tiadiazolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, piridilo, pirimidilo, pirazinilo, piridazinilo, 1,2,4-triazinilo, 1,2,3-triazinilo, 1,3,5-triazinilo, pirazolo[3,4-b]piridinilo, cinnolinilo, pteridinilo, purinilo, 6,7-dihidro-5H-[1]pirindinilo, benzo[b]tiofenilo, 5,6,7,8-tetrahidro-quinolin-3-ilo, benzoxazolilo, benzotiazolilo, benzisotiazolilo, benzisoxazolilo, benzimidazolilo, tianaftenilo, isotianaftenilo, benzofuranilo, isobenzofuranilo, isoindolilo, indolilo, indolizinilo, indazolilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalazinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo y benzoxazinilo, etc. En general, el grupo heteroarilo(C²-C⁹) se acopla típicamente a la estructura principal a través de un átomo de carbono, sin embargo, los expertos en la técnica observarán cuando ciertos otros átomos, p. ej., heteroátomos del anillo, pueden acoplarse a la estructura principal. Claro está que otros grupos heteroarilo(C²-C⁹) serán evidentes sin inconvenientes para los expertos en la técnica dado el beneficio de la presente descripción.

Según se usa en la presente memoria, el término "arilo(C6-C12)" significa un grupo funcional o sustituyente que tiene 6 a 12 átomos de carbono que forman al menos un anillo.

Según se usa en la presente memoria, el término "arilo(C6-C1ü)" significa un grupo funcional o sustituyente que tiene 6 a 12 átomos de carbono que forman al menos un anillo, incluido fenilo o naftilo.

Según se usa en la presente memoria, el término "halo" significa flúor, cloro, bromo o yodo.

Según se usa en la presente memoria, el término "amino" significa un radical libre que tiene un átomo de nitrógeno y 1 a 2 átomos de hidrógeno. Como tal, el término amino generalmente se refiere a aminas primarias y secundarias. En este sentido, según se usa en la presente memoria y en las reivindicaciones adjuntas, una amina terciaria se representa por la fórmula general RR'N-, en donde R y R' son radicales carbono que pueden ser idénticos o no. Sin embargo, el término "amino" generalmente puede usarse en la presente memoria para describir una amina primaria, secundaria o terciaria, y los expertos en la técnica podrán determinar sin inconvenientes la identificación de esta dependiendo del contexto en el que se usa este término en la presente descripción.

Según se usa en la presente memoria, el término "terapia de combinación" significa tratar a un paciente con dos o más plataformas terapéuticas (p. ej., terapia de reemplazo enzimático y terapia de molécula pequeña) en pautas de tratamiento rotativas, alternantes y/o simultáneas. Los ejemplos de pautas de tratamiento pueden incluir, pero no se limitan a: (1) terapia de reemplazo enzimático, después terapia con molécula pequeña; (2) terapia con molécula pequeña, después terapia de reemplazo enzimático; (3) terapia de reemplazo enzimático con terapia de molécula pequeña simultánea, y (4) y cualquier combinación de las anteriores. La terapia de combinación puede proporcionar una superposición temporal de plataformas terapéuticas, según sea necesario, dependiendo de la evolución clínica de una enfermedad de almacenamiento dada en un sujeto dado.

Según se usa en la presente memoria, el término "terapia de reemplazo enzimático'' o "ERT" significa administrar una enzima natural o recombinante producida exógenamente a un paciente que lo necesita. En el caso de una enfermedad de almacenamiento lisosómico, por ejemplo, el paciente acumula niveles dañinos de un sustrato (es decir, material almacenado) en lisosomas debido a una deficiencia o defecto en una enzima responsable de metabolizar el sustrato, o debido a una deficiencia en un activador enzimático necesario para el funcionamiento adecuado de la enzima. La terapia de reemplazo enzimático se proporciona al paciente para reducir los niveles de (es decir, disminuir el volumen) sustrato acumulado en los tejidos afectados. La Tabla 1 proporciona una lista de enfermedades de almacenamiento lisosómico e identifica la deficiencia enzimática correspondiente y el sustrato acumulado para cada enfermedad. Se conocen terapias de reemplazo enzimático para tratar enfermedades de almacenamiento lisosómico en la técnica. Según una terapia de combinación de la invención, las enzimas lisosómicas identificadas en la Tabla 1 se pueden usar para la terapia de reemplazo enzimático para reducir los niveles de sustrato correspondientes en un paciente diagnosticado con la enfermedad de almacenamiento lisosómico respectiva.

Según se usa en la presente memoria, "cantidad eficaz" de una enzima o molécula pequeña, cuando se suministra a un sujeto en una terapia de combinación de la invención, es una cantidad suficiente para mejorar la evolución clínica de una enfermedad de almacenamiento lisosómica, donde la mejora clínica se mide mediante cualquiera de la variedad de parámetros definidos conocidos para el experto en la técnica.

Abreviaturas químicas

ACN se refiere a acetonitrilo.

DMF se refiere a N,N-dimetilformamida.

DMSO se refiere a dimetilsulfóxido.

EtOAc se refiere a acetato de etilo.

EtOH se refiere a etanol.

Base de Hunig se refiere a diisopropiletilamina ("DIPEA").

MeOH se refiere a metanol.

NaOH se refiere a hidróxido de sodio.

THF se refiere a tetrahidrofurano.

TFA se refiere a ácido trifluoroacético.

Serán evidentes características y ventajas adicionales de los compuestos descritos en la presente memoria a partir de la siguiente descripción detallada de ciertas realizaciones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

Figura 1A y 1B. Expresión de proteínas contráctiles cardíacas en cuerpos embrioides (EB, por sus siglas en inglés) con latidos de un mes naturales (WT, por sus siglas en inglés) y con enfermedad de Fabry (FD) y células disociadas. (A) Inmunohistoquímica de EB con latidos. Se agregaron fibroblastos de ratón (células grandes, flechas verdes) a los EB (células pequeñas y compactadas, flechas marrones) para facilitar la manipulación de las muestras. Se usaron anticuerpos dirigidos contra actina, troponina I y a-actinina para identificar los cardiomiocitos contenidos en los EB. En los EB WT y en los EB con Fabry de las tres líneas de células madre pluripotentes inducidas (iPSC) por FD, más del 90 % de las células expresan un alto nivel de proteínas contráctiles cardíacas. (B) Fibras contráctiles, reveladas por un anti-a-actinina, son menos numerosas, más desorganizadas y localizadas en la periferia de células derivadas de iPSC con FD.

Figura 2A-2D. Acumulación lisosómica de globotriaosilceramida (GL-3) en cardiomiocitos derivados de iPSC con Fabry de un mes. (A) Acumulación de GL-3 en células disociadas a partir de EB con Fabry con latidos. El anti-GL-3 revela zonas del glucoesfingolípido dispersadas en el citoplasma celular. (B) Vacuolas frecuentes observables en el examen microscópico con campo claro y un nivel más elevado de GL-3 en células derivadas de iPSC con Fabry. (C) Acumulación de GL-3 en cardiomiocitos derivados de iPSC con Fabry. Expresión de a-actinina y GL-3 en la misma célula. (D) GL-3 se acumula en lisosomas. Colocalización de GL-3 y Lamp2, un marcador de membranas de lisosomas (ver fotografía unificada y comparar las flechas amarillas en la máxima ampliación). Las señales de GL-3 y de Lamp2 son más altas cerca de los núcleos y disminuyen en la periferia de la célula

Figuras 3A y 3B. Microscopía electrónica de EB derivados de iPSC con Fabry de un mes. (A) Diferenciación de cardiomiocitos e inclusiones de almacenamiento lisosómico en EB derivados de iPSC con Fabry. Las flechas azules indican miofibrillas con bandas de Z prominentes. Las flechas rojas indican inclusiones membranosas, multilamelares (lisosomas con almacenamiento de sustrato), las flechas amarillas indican intersecciones intercelulares, y N = núcleo. (B) Vista de ampliación más alta de un cardiomiocito diferenciado. El recuadro en la Figura 3B es una vista en ampliación mayor de inclusiones de almacenamiento lisosómico

Figura 4. Cinética de la acumulación de GL-3 en EB con Fabry con latidos determinada mediante espectrometría de masas. Los días se calculan a partir del inicio de la diferenciación cardíaca. El contenido de GL-3 se determinó al cuantificar nueve isoformas de GL-3 distintas y normalizar los niveles de GL-3 total con respecto a fosfatidilcolina (PC) total. Cada muestra se trató por replicado. Las relaciones de GL-3/PC se promediaron en todos los clones con Fabry. Número de muestras con Fabry: día 16, n=4; día 23, n=8; día 30, n=17; día 45, n=8. Número de muestras W T: día 30, n=4; día 45, n=5.

Figuras 5A-5C. Efecto de tratamiento con pM de GCS452 o 3pg/mL de agalsidasa beta sobre la acumulación y aclaramiento de GL-3 en cardiomiocitos con Fabry. (A, B) Espectrometría de masas de contenido de GL-3 en EB. Cada muestra se trató por replicado. T0: EB antes del inicio del tratamiento. (A) Prevención contra la acumulación: tratamiento el día 18 después del inicio de la diferenciación cardíaca. Número de muestras sin tratar/tratadas con GCS452: WT, n=3/5; C658T-4, n=4/6; G485A-10, n=2/3; G485A-56, n=3/5. T0 promedio en EB con Fabry de las tres iPSC el día 16, n=4. (B) Aclaramiento: tratamiento el día 28 después del inicio de la diferenciación cardíaca. Número de muestras sin tratar/tratadas con GCS452/tratadas con agalsidasa beta: WT, n=3/5/2; C658T-4, n=2/5/3; G485A-10, n=3/7/3; G485A-56, n=3/9/4. T0 WT, n=4; T0 promedio en EB con Fabry de las tres iPSC, n=17. (C) El contenido de GL-3 y la colocalización de Lamp2 se determinaron mediante inmunocitoquímica en cardiomiocitos de un mes derivados de iPSC con Fabry tratados y en comparación con células testigo sin tratar. La GL-3 no fue detectable o de manera muy ligera al finalizar el tratamiento. Al mismo tiempo, se redujo la cantidad de vacuolas de Lamp2 y la intensidad de la señal.

Figuras 6A-6C. Electrofisiología de cardiomiocitos con Fabry. (A) Representa la matriz de microelectrodos (MEA, por sus siglas en inglés) usada para evaluar la electrofisiología de células. (B) Muestra la electrofisiología de cardiomiocitos derivados de iPSC WT. (C) Muestra la electrofisiología de cardiomiocitos derivados de iPSC con Fabry.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

La invención se basa, al menos en parte, en el hallazgo de que la terapia de reducción de sustrato a través de la inhibición de glucosilceramida sintasa es capaz de prevenir la acumulación y aclarar la GL-3 lisosómica acumulada en cardiomiocitos (p. ej., un cardiomiocito permanente). La invención presenta métodos para usar inhibidores de glucosilceramida sintasa para reducir o prevenir la acumulación de GL-3 en un cardiomiocito de un sujeto. La invención también presenta composiciones para usar en la reducción o prevención de la acumulación de GL-3 en un cardiomiocito de un sujeto.

Si bien se describirán ahora realizaciones específicas de la presente descripción con referencia a las preparaciones y esquemas, se entenderá que dichas realizaciones son a modo de ejemplo solamente y meramente ilustrativas de apenas un pequeño número de las muchas realizaciones específicas posibles que pueden representar aplicaciones de los principios de la presente descripción. Varios cambios y modificaciones serán obvios para los expertos en la técnica dado el beneficio de la presente descripción y se consideran dentro del espíritu y alcance de la presente descripción como se define adicionalmente en las reivindicaciones adjuntas.

Inhibidores de glucosilceramida sintasa

La glucosilceramida sintasa (GCS) es una enzima fundamental que cataliza la etapa de glicosilación inicial en la biosíntesis de glucoesfingolípidos (GSL, por sus siglas en inglés) basados en glucosilceramida, en concreto, a través de la transferencia fundamental de glucosa desde UDP-glucosa (UDP-Glc) a ceramida para formar glucosilceramida. La GCS es una proteína integral de tipo III, transmembranaria localizada en el Golgi cis/medial. Se cree que los glucoesfingolípidos (GSL) integran la dinámica de muchos eventos de la membrana celular, incluidas interacciones, la señalización y el tráfico celulares. Se ha mostrado que la síntesis de estructuras de GSL (ver, Yamashita et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96(16), 9142-9147) es esencial para el desarrollo embrionario y para la diferenciación de algunos tejidos. La ceramida tiene una función central en el metabolismo de los esfingolípidos y se ha mostrado que la reducción de la actividad de GCS tiene efectos marcados sobre el patrón de esfingolípidos con expresión disminuida de los glucoesfingolípidos. Los esfingolípidos (SL, por sus siglas en inglés) tienen una función biomoduladora en afecciones fisiológicas, así como en cardiovasculares patológicas. En particular, los esfingolípidos y sus enzimas reguladoras parecen tener una función en las respuestas adaptativas a la hipoxia crónica en el corazón de rata neonatal (ver, El Alwanit et al., Prostaglandins & Other Lipid Mediators 2005, 78(1-4), 249-263).

Se han propuesto inhibidores de GCS para el tratamiento de una variedad de enfermedades (ver, por ejemplo, WO2005068426). Dichos tratamientos incluyen el tratamiento de enfermedades de almacenamiento de glucolípidos (p. ej., Tay Sachs, Sandhoffs, deficiencia del activador de GM2, GM1 gangliosidosis y enfermedad de Fabry), enfermedades asociadas con acumulación de glucolípidos (p. ej., enfermedad de Gaucher; Miglustat (Zavesca), se ha aprobado un inhibidor de GCS para terapia en pacientes con enfermedad de Gaucher tipo 1, ver, Treiber et al., Xenobiotica 2007, 37(3), 298-314), enfermedades que causan hipertrofia o hiperplasia renal tales como nefropatía diabética; enfermedades que causan hiperglucemia o hiperinsulinemia; cánceres donde la síntesis de glucolípidos es anormal, enfermedades infecciosas causadas por organismos que usan glucolípidos de superficie celular como receptores, infecciosas donde la síntesis de glucosilceramida es esencial o importante, enfermedades donde la síntesis de glucosilceramida es esencial o importante, enfermedades donde se produce una síntesis excesiva de glucolípidos (p. ej., ateroesclerosis, enfermedad de riñón poliquístico e hipertrofia renal), trastornos neuronales, lesión neuronal, enfermedades inflamatorias o trastornos asociados con la reunión y activación de macrófagos (p. ej., artritis reumatoide, enfermedad de Crohn, asma y sepsis) y diabetes mellitus y obesidad (ver la publicación internacional núm. WO 2006053043).

Por ejemplo, se ha mostrado que la sobreexpresión de GCS participa en la resistencia a múltiples fármacos e interrumpe la apoptosis inducida por ceramida. Por ejemplo, Turzanski et al., Experimenta1Hematology 2005, 33(1), 62-72 han mostrado que la ceramida induce apoptosis en células de leucemia mieloide aguda (AML, por sus siglas en inglés) y que P-glicoproteína (p-gp) confiere resistencia a la apoptosis inducida por ceramida, donde la modulación de la vía de ceramida-glucosilceramida hace una contribución marcada a esta resistencia en células TF-1. Por lo tanto, los inhibidores de GCS pueden ser útiles para el tratamiento de trastornos proliferativos al inducir la apoptosis en células enfermas.

Compuestos

A menos que se defina de cualquier otra manera, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente memoria tienen el mismo significado según lo entiende comúnmente un experto en la técnica a la que pertenece la presente descripción. Si bien otros compuestos o métodos pueden usarse en la práctica o evaluación, ahora se describen ciertos métodos preferidos en el contexto de las siguientes preparaciones y esquemas.

En la reacción 1 de la Preparación A, el compuesto de fórmula A-7 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula A-1, en donde X es OH, al reducir A-7 con un agente reductor, preferiblemente, hidruro de litio aluminio en disolvente aprótico tal como tetrahidrofurano. La reacción se agita a una temperatura entre 0 °C y temperatura ambiente durante un período de tiempo entre aproximadamente 15 minutos a aproximadamente 2 horas, preferiblemente, aproximadamente 30 minutos. Alternativamente, el compuesto de fórmula A-7 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula A-1, en donde X es OH, al reducir A-7 en aproximadamente 1 atmósfera de hidrógeno en presencia de un catalizador, preferiblemente, óxido de platino, y un disolvente polar tal como metanol o etanol durante un período de 2 horas a 6 horas, preferiblemente, 4 horas. Alternativamente, el compuesto de fórmula A-7 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula A-1, en donde X es NH, al hacer reaccionar A-7 con clorhidrato de hidroxilamina y acetato de sodio en un disolvente polar tal como etanol, metanol, isopropanol, preferiblemente, isopropanol. La mezcla de reacción se agitó a una temperatura entre 50-80 °C durante un período de 2 horas a 7 horas, preferiblemente, 3 horas. Posteriormente, el compuesto formado de este modo anteriormente se convierte en el compuesto de fórmula A-1 con un agente reductor, preferiblemente, sodio metálico en un disolvente prótico polar tal como etanol, metanol, propanol, preferiblemente, n-propanol. La reacción se agita durante la noche at 50-80 °C, preferiblemente, a temperatura de reflujo del disolvente.

En la reacción 2 de la Preparación A, el compuesto de fórmula A-7 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula A-5, en donde R1, n y z son como se definieron anteriormente, al agregar una disolución de R1-bromuro de magnesio en éter a una disolución de A-7 en un disolvente aprótico, tal como éter, a una temperatura entre aproximadamente -60° C a aproximadamente -90° C, preferiblemente aproximadamente -78° C durante un período de tiempo entre aproximadamente 1 hora a aproximadamente 4 horas, preferiblemente aproximadamente 2 horas. Alternativamente, el compuesto de fórmula A-7 puede hacerse reaccionar con R1 -litio para proporcionar el compuesto de fórmula A-5.

En la reacción 3 de la Preparación A, el compuesto de fórmula A-5 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula A-4, en donde R1, n y z son como se definieron anteriormente, al tratar A-5 con un ácido fuerte, preferiblemente ácido sulfúrico, en presencia de acetonitrilo. La reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente.

En la reacción 4 de la Preparación A, el compuesto de fórmula A-4 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula A-3, en donde R1, n y z son como se definieron anteriormente, al tratar A-4 con un ácido, preferiblemente, ácido clorhídrico. La reacción se agita a reflujo durante un período de 18 horas a 72 horas, preferiblemente, 24 horas y se basifica hasta pH=8 mediante tratamiento con una base inorgánica en disolución acuosa, tal como hidróxido de sodio.

En la reacción 5 de la Preparación A, el compuesto de fórmula A-7 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula A-6, en donde R1, n y z son como se definieron anteriormente, al tratar A-7 con un fosfonio de trifenilo para proporcionar el correspondiente compuesto alqueno de fórmula A-6. La reacción se agita a temperatura ambiente durante la noche.

En la reacción 6 de la Preparación A, el compuesto de fórmula A-6 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula A-3, en donde R1, n y z son como se definieron anteriormente, al reducir A-6 en aproximadamente 1 atmósfera de hidrógeno en presencia de un catalizador, preferiblemente paladio sobre carbono, y un disolvente polar, tal como metanol, etanol o acetato de etilo. La reacción se agita a temperatura ambiente durante un período de tiempo entre aproximadamente 2 horas a aproximadamente 24 hora, preferiblemente, aproximadamente 18 horas. Posteriormente, el compuesto formado de este modo se trata con una base, preferiblemente, hidróxido de litio, en una mezcla de disolvente tal como tetrahidrofurano, metanol y agua para proporcionar el compuesto de A-3. La reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente.

En la reacción 1 de la Preparación B, el compuesto de fórmula B-2 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula B-1, al reducir B-2 con un agente reductor, preferiblemente, hidruro de litio aluminio en disolvente aprótico tal como tetrahidrofurano. La reacción se agita a una temperatura entre 0 °C y temperatura ambiente durante un período de tiempo entre aproximadamente 15 minutos a aproximadamente 2 horas, preferiblemente, aproximadamente 30 minutos.

En la reacción 1 de la Preparación C, el compuesto de C-4 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula C-3, en donde X es bromo o cloruro, al hacer reaccionar C-4 con ácido borónico en presencia de un catalizador, preferiblemente, 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio(II)-dicloruro y carbonato de potasio. La reacción se coloca en un microondas en una mezcla de dimetoxietano y agua a una temperatura entre aproximadamente 130 °C a aproximadamente 170 °C, preferiblemente, aproximadamente 150 °C, durante un período de tiempo entre aproximadamente 15 min a aproximadamente 1 hora, preferiblemente, aproximadamente 30 min. Alternativamente, la reacción se puede llevar a cabo al usar un disolvente tal como dioxano y agitar durante la noche at 100 °C con calentamiento convencional.

En la reacción 2 de la Preparación C, el compuesto de C-3 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula C-1, en donde f es 1 a 8 y A1, X5 y A2 son como se definieron anteriormente, al agregar bromuro de etil magnesio por goteo a una mezcla de C-3 e isopropóxido de titanio en éter. La reacción se agita a una temperatura entre aproximadamente -50 °C a aproximadamente -90 °C, preferiblemente aproximadamente -70 °C. La mezcla de reacción resultante se deja entibiar hasta aproximadamente 20 °C a aproximadamente 30 °C, preferiblemente, aproximadamente 25 °C, y se deja agitar durante un período de tiempo adicional entre aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 2 horas, preferiblemente, aproximadamente 1 hora. Después de agrega eterato de boro trifluoruro dietilo a la mezcla por goteo a una temperatura entre aproximadamente 20 °C a aproximadamente 30 °C, preferiblemente, aproximadamente 25 °C.

En la reacción 3 de la Preparación C, el compuesto de C-3 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula C-2, en donde A1, X5 y A2 son como se definieron anteriormente, al agitar primero una suspensión de cloruro de cerio (III) en un disolvente aprótico, tal como tetrahidrofurano, a temperatura ambiente durante un período de tiempo entre aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 2 horas, preferiblemente, aproximadamente 1 hora. La suspensión resultante se enfría hasta una temperatura entre aproximadamente -60 °C a aproximadamente -90 °C, preferiblemente, aproximadamente -78 °C y se agrega un agente de organolitio, preferiblemente, metil litio en una disolución de éter. Se deja que el complejo de organocerio resultante se forme durante un período de tiempo entre aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 2 horas, preferiblemente, aproximadamente 1 hora, con posterior adición de C-3 en un disolvente aprótico, tal como tetrahidrofurano. La mezcla de reacción resultante después se entibia hasta temperatura ambiente y se deja agitar durante un período de tiempo adicional entre aproximadamente 16 horas a aproximadamente 20 horas, preferiblemente, aproximadamente 18 horas.

En la reacción 1 de la Preparación D, el compuesto de D-5, en donde R es CO2Et o CN y X es bromo o cloruro, se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula D-3, al hacer reaccionar D-5 con un dihaluro de alquilo tal como 1,2-dibromoetano. Posteriormente, el compuesto formado de este modo se trata con una base inorgánica tal como hidróxido de litio o hidróxido de potasio, en una mezcla de disolvente tal como tetrahidrofurano, metanol, glicol y agua para proporcionar el compuesto de D-3, en donde f es 1 a 8. La reacción se agita durante la noche a una temperatura entre 25 °C y 130 °C. Alternativamente, para formar el compuesto correspondiente de fórmula D-3, en donde X es X5-A2, D-5 debo primero hacerse reaccionar según el procedimiento descrito anteriormente en la reacción 1 de la Preparación C.

En la reacción 2 de la Preparación D, el compuesto de D-3 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula D-1 al hacer reaccionar D-3 con una base tal como trietilamina y azida de difenilfosforilo en disolvente aprótico tal como tolueno. La reacción se calentó hasta una temperatura en el rango entre 80 °C-110 °C, preferiblemente, a 110 °C durante 15 min a 1 hora, preferiblemente, 30 minutos. El intermediario formado de este modo después se trata con alcohol ferc-butílico durante el período de la noche a 60-110 °C, preferiblemente 90 °C. Posteriormente, el carbamato formado de este modo se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula D-1, en donde f es 1 a 8, mediante un tratamiento en medios ácidos al usar preferiblemente ácido trifluoroacético en diclorometano a temperatura ambiente durante un período de 30 min a 5 horas, preferiblemente 2 horas.

En la reacción 3 de la Preparación D, el compuesto de D-5, en donde R es CO2Et o CN y X es bromo o cloruro, se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula D-4, al hacer reaccionar D-5 con un haluro de alquilo tal como Mel. Posteriormente, el compuesto formado de este modo se trata con una base inorgánica tal como hidróxido de litio o hidróxido de potasio, en una mezcla de disolvente tal como tetrahidrofurano, metanol, glicol y agua para proporcionar el compuesto de D-4. La reacción se agita durante la noche a una temperatura entre 25 °C y 130 °C. Alternativamente, para formar el compuesto correspondiente de fórmula D-4, en donde X es X5-A2, D-5 debo primero hacerse reaccionar según el procedimiento descrito anteriormente en la reacción 1 de la Preparación C.

En la reacción 4 de la Preparación D, el compuesto de D-4 se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula D-2, al hacer reaccionar D-4 con una base tal como trietilamina y azida de difenilfosforilo en disolvente aprótico tal como tolueno. La reacción se calentó hasta una temperatura en el rango entre 80 °C-110 °C, preferiblemente, a 110 °C durante 15 min a 1 hora, preferiblemente, 30 minutos. El intermediario formado de este modo después se trata con alcohol ferc-butílico durante el período de la noche a 60-110 °C, preferiblemente 90 °C. Posteriormente, el carbamato formado de este modo se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula D-1 mediante un tratamiento en medios ácidos al usar, preferiblemente, ácido trifluoroacético en diclorometano a temperatura ambiente durante un período de 30 min a 5 horas, preferiblemente, 2 horas.

En la reacción 1 de la Preparación E, el compuesto de fórmula E-2, en donde X es bromuro o cloruro, se convierte en el compuesto correspondiente de fórmula E-1, al hacer reaccionar E-2 con bromuro de metil magnesio en éter, a una temperatura entre aproximadamente -60° C a aproximadamente -90° C, preferiblemente aproximadamente -78° C durante un período de tiempo entre aproximadamente 30 min a aproximadamente 3 horas, preferiblemente, aproximadamente 2 horas. Alternativamente, para formar el compuesto correspondiente de fórmula E-1, en donde X es X5-A2, E-2 debo primero hacerse reaccionar según el procedimiento descrito anteriormente en la reacción 1 de la Preparación C.

En la reacción 2 de la Preparación E, el compuesto de fórmula E-1 se convierte en el compuesto correspondiente de D-2 al tratar E-1 con un ácido fuerte, preferiblemente ácido sulfúrico, en presencia de cloroacetonitrilo. La reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente. Posteriormente, el compuesto formado de este modo se trata con tiourea en un disolvente prótico polar tal como etanol durante un el período de la noche a 80 °C para formar el compuesto correspondiente de fórmula D-2. Alternativamente, E-1 se trata con azida de sodio y ácido trifluoroacético en un disolvente aprótico tal como diclorometano en un rango de temperatura de -10 °C a temperatura ambiente, preferiblemente, 0 °C. El compuesto formado de este modo se reduce en presencia de trifenilfosfina en una disolución de tetrahidrofurano y agua para formar el compuesto correspondiente de fórmula D-2. La reacción se agita en un rango de temperatura de 25-80 °C, preferiblemente, a temperatura ambiente, durante un período de 2 horas a 24 horas, preferiblemente, 18 horas.

En la reacción 1 del Esquema 1, los compuestos de fórmula A-1 o A-2 se convierten en los compuestos correspondientes de Fórmula II, en donde f es 1 a 8, o III, respectivamente, al agregar trifosgeno a una suspensión de C-1 o C-2 y trietilamina en un disolvente aprótico, tal como tetrahidrofurano. La reacción se agita a temperatura ambiente durante un período de tiempo entre aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 20 minutos, preferiblemente, aproximadamente 15 minutos, y se agregó una pequeña cantidad de éter. La sal de trietilamonio generada se separa por filtración. Por separado, se agrega hidruro de sodio a una suspensión de A-1 o A-2, en donde X es OH o NH, en un disolvente aprótico, tal como tetrahidrofurano, a 0 °C o temperatura ambiente. La reacción se agita a temperatura ambiente durante un período de tiempo entre aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 20 minutos, preferiblemente, aproximadamente 15 minutos, y la disolución de isocianato tetrahidrofurano/éter formada de este modo anteriormente se agrega por goteo. Alternativamente, los compuestos de Fórmula II y III se pueden formar al hacer reaccionar los compuestos D3 o D4 con A-1 y A-2 en presencia de una base tal como trietilamina y azida de difenilfosforilo en disolvente aprótico tal como tolueno como se describe en el procedimiento descrito anteriormente en la reacción 4 de la Preparación D.

En la reacción 1 del Esquema 2, los compuestos de fórmula A-1, A-2 o B-1 se convierten en los compuestos correspondientes de Fórmula IV, V, VI y VII, en donde f es 1 a 8, respectivamente, al agregar trifosgeno a una suspensión de C-1, C-2, D-1 o D-2 y trietilamina en un disolvente aprótico, tal como tetrahidrofurano o tolueno. La reacción se agita a temperatura ambiente durante un período de tiempo entre aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 20 minutos, preferiblemente, aproximadamente 15 minutos, y se agregó una pequeña cantidad de éter. Posteriormente, A-1 o A-2, en donde X es NH, se agrega a la disolución de isocianato formada de este modo anteriormente y la reacción se agita en un rango de temperatura de 25-100 °C, preferiblemente, a temperatura ambiente, durante un período de aproximadamente 2 horas a 24 horas, preferiblemente, 18 horas.

En la reacción 1 del Esquema 3, el compuesto de fórmula A-3 se convierte en los compuestos correspondientes de Fórmula VIII, en donde f es 1 a 8, y IX, respectivamente, al hacer reaccionar A3 con C1, C-2, D-1 o D-2 a través de acoplamiento peptídico al usar un agente acoplador de carbodiimida tal como 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida y 1-hidroxi-benzotriazol o hexafluorofosfato 2-(1H-7-Azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil uronio en disolvente tal como tetrahidrofurano o dimetilformamida. La reacción se agita a temperatura ambiente durante la noche.

A m enos que se defina de cualquier otra m anera, todos los términos técnicos y científicos usado s en la presente m em oria tienen el mismo significado según lo entiende com únm ente un experto en la técnica a la que pertenece la presente descripción. S i bien otros com puestos o métodos pueden u sarse en la práctica o evaluación, ahora se describen ciertos métodos preferidos en el contexto de las siguientes preparaciones y esquem as.

To d as las sa les, profárm acos, tautómeros, hidratos y solvatos farm acéuticam ente aceptables de los com puestos descritos en la presente descripción también se encuentran dentro del a lcance de la presente descripción.

L o s com puestos descritos en la presente descripción que son de naturaleza b ásica son generalm ente ca p a ce s de form ar una am plia variedad de sa le s diferentes con diversos ácidos inorgánicos y/u orgánicos. S i bien dichas sa les son generalm ente farm acéuticam ente aceptables para la adm inistración a anim ales y seres hum anos, a menudo es d eseab le en la práctica a isla r inicialm ente un com puesto a partir de la m ezcla de reacción como una sal farm acéuticam ente inaceptable y d esp ués sim plem ente convertir esta última nuevam ente en el com puesto de base libre mediante tratamiento con un reactivo alcalino y, posteriormente, convertir la base libre en una sal de adición de ácido farm acéuticam ente aceptable. La s sa le s de adición de ácido de los com puestos b ase se pueden preparar sin inconvenientes al u sar técnicas convencionales, p. ej., al tratar el com puesto b ase con una cantidad sustancialm ente equivalente del mineral o ácido orgánico elegido en un medio disolvente acuoso o en un disolvente orgánico adecuado tal como, por ejemplo, metanol o etanol. D esp ués de la cu id ad o sa evaporación del disolvente, se obtiene la sal sólida deseada.

Los ácidos que pueden u sarse para preparar las sa le s de adición de ácido farm acéuticam ente aceptables de los com puestos base son aquellos que pueden formar sa le s de adición de ácido no tóxicas, e s decir, sa le s que contienen aniones farm acológicam ente aceptables, tales como sa le s de cloruro, bromuro, yoduro, nitrato, sulfato o bisulfato, fosfato o fosfato ácido, acetato, lactato, citrato o citrato ácido, tartrato o bitartrato, succinato, maleato, fumarato, gluconato, sacarato, benzoato, metanosulfonato y pamoato [es decir, ¹,¹'-m etileno-bis-(²-h idroxi-³-naftoato)].

Los com puestos descritos en la presente descripción que son de naturaleza ácida, p. ej., contienen un resto C O O H o tetrazol, son generalm ente ca p a ce s de formar una am plia variedad de sa le s diferentes con d iversas b ase s inorgánicas y/u orgánicas. S i bien d ichas sa le s son generalm ente farm acéuticam ente aceptables para la adm inistración a anim ales y se re s hum anos, a menudo e s deseable en la práctica a isla r inicialm ente un com puesto a partir de la m ezcla de reacción como una sal farm acéuticam ente inaceptable y d esp ués sim plem ente convertir esta última nuevam ente en el com puesto de ácido libre mediante tratamiento con un reactivo ácido y, posteriormente, convertir el ácido libre en una sal de adición de base farm acéuticam ente aceptable. E stas sa le s de adición de base se pueden preparar sin inconvenientes al u sar técnicas convencionales, p. ej., al tratar los com puestos ácidos correspondientes con una disolución a cu o sa que contiene los cationes farm acológicam ente aceptables desead o s y, d esp ués, evaporar la disolución resultante hasta se ca rse, preferiblemente, a presión reducida. Alternativamente, también se pueden preparar al m ezclar d isoluciones a lcan ó licas inferiores de los com puestos ácidos y el alcóxido de metal alcalino deseado entre s í y, después, evaporar la disolución resultante hasta se ca rse del mism o modo que anteriormente. En cualquier caso, se em plean cantidades estequiom étricas de reactivos, preferiblemente, para garantizar que se complete la reacción y los rendimientos m áxim os de producto de la sal sólida deseada.

La s b a se s que se pueden u sar para preparar las sa le s de adición de base farm acéuticam ente aceptables de los com puestos b ase son aquellas que pueden formar sa le s de adición de base no tóxicas, e s decir, sa le s que contienen cationes farm acológicam ente aceptables, tales como, cationes de metal alcalino (p. ej., potasio y sodio), cationes de metal alcalinotérreo (p. ej., calcio y m agnesio), amonio u otras sa le s de adición de am ina solubles en agua tales como N-m etilglucam ina-(m eglum ina), alcanolam onio inferior y otras de d ich as b ase s de am inas orgánicas.

Los com puestos etiquetados isotópicamente también se encuentran dentro del a lcance de la presente descripción. Según se u sa en la presente m emoria, un "compuesto etiquetado isotópicamente" se refiere a un com puesto descrito en la presente descripción incluidas sa le s y profárm acos farm acéuticos de estos, cad a uno como se describe en la presente memoria, en el que uno o m ás átomos se reem plazan por un átomo que tiene una m asa atóm ica o un número de m asa diferente a la m asa atóm ica o el número de m asa que se encuentra habitualmente en la naturaleza. Los ejem plos de isótopos que se pueden incorporar en com puestos descritos en la presente descripción incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como ²H, ³H, ¹¹C , ¹⁴C , ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷O, ³¹P, ³²P, ³⁵S , 18F y ³⁶Cl, respectivam ente.

Al etiquetar isotópicamente los com puestos descritos en la presente descripción, los com puestos pueden ser útiles en e n sayo s de distribución tisular de fárm aco y/o sustrato. Los com puestos tritiados (³H) y etiquetados con carbono ^{- 14}(¹⁴C ) se prefieren particularmente por su fácil preparación y detectabilidad. A dem ás, la sustitución con isótopos m ás p esado s tales como deuterio (²H) puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas que son el resultado de una m ayor estabilidad metabólica, por ejemplo, m ayor sem ivida in vivo o m enores requisitos de dosificación y, por lo tanto, se pueden preferir en algunas circunstancias. Los com puestos etiquetados isotópicam ente descritos en la presente descripción, incluidas sa le s y profárm acos farm acéuticos de estos, se pueden preparar mediante cualesq uiera medios conocidos en la técnica.

Los estereoisómeros (p. ej., isómeros en cis y trans) y todos los isómeros ópticos de un compuesto descrito en la presente descripción (p. ej., los enantiómeros R y S), así como mezclas racémicas, diastereoméricas y otras de dichos isómeros se encuentran dentro del alcance de la presente descripción.

Los compuestos, sales, profármacos, hidratos y solvatos descritos en la presente descripción pueden existir en diversas formas tautoméricas que incluyen la forma enol e imina, y la forma ceto y enamina e isómeros geométricos y mezclas de estos. Los tautómeros existen como mezclas de un conjunto tautomérico en disolución. En forma sólida, habitualmente predomina un tautómero. Aunque se puede describir un tautómero, todos los tautómeros se encuentran dentro del alcance de la presente descripción.

Los atropisómeros también se encuentran dentro del alcance de la presente descripción. Los atropisómeros se refieren a compuestos que se pueden separar en isómeros rotacionalmente restringidos.

La presente descripción también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden al menos un compuesto descrito en la presente descripción y al menos un portador farmacéuticamente aceptable. El portador farmacéuticamente aceptable puede ser cualquier portador conocido en la técnica, incluidos los descritos en, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985). Se pueden preparar composiciones farmacéuticas de los compuestos descritos en la presente descripción mediante medios convencionales conocidos en la técnica que incluyen, por ejemplo, mezclar al menos un compuesto descrito en la presente descripción con un portador farmacéuticamente aceptable.

Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente descripción se pueden usar en un animal o ser humano. Por lo tanto, un compuesto descrito en la presente descripción se puede formular como una composición farmacéutica para administración oral, bucal, parenteral (p. ej., intravenosa, intramuscular o subcutánea), tópica, rectal o intranasal o en una forma adecuada para la administración mediante inhalación o insuflación.

Los compuestos descritos en la presente descripción también se pueden formular para el suministro prolongado según métodos conocidos para los expertos en la técnica. Los ejemplos de dichas formulaciones se pueden encontrar en las patentes estadounidenses núms. 3.119.742, 3.492.397, 3.538.214, 4.060.598 y 4.173.626.

Para la administración oral, la composición farmacéutica puede adoptar la forma de, por ejemplo, un comprimido o cápsula preparado por medios convencionales con un excipiente(s) farmacéuticamente aceptable(s) tales como un agente aglutinante (p. ej., almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona o hidroxipropilmetilcelulosa); carga (p. ej., lactosa, celulosa microcristalina o fosfato de calcio); lubricante (p. ej., estearato de magnesio, talco o sílice); desintegrante (p. ej., almidón de papa o glicolato de almidón sódico); y/o agente humectante (p. ej., lauril sulfato sódico). Los comprimidos se pueden recubrir mediante métodos conocidos en la técnica. Las preparaciones líquidas para administración oral pueden adoptar la forma de, por ejemplo, disolución, jarabe o suspensión, o pueden presentarse como un producto seco para su constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Dichas preparaciones líquidas se pueden preparar por medios convencionales con un aditivo(s) farmacéuticamente aceptable(s) tal como un agente de suspensión (p. ej., jarabe de sorbitol, metilcelulosa o grasas comestibles hidrogenadas); agente emulsionante (p. ej., lecitina o acacia); vehículo no acuoso (p. ej., aceite de almendras, ésteres oleosos o alcohol etílico); y/o conservante (p. ej., p-hidroxibenzoatos de metilo o propilo o ácido sórbico).

Para la administración bucal, la composición puede adoptar la forma de comprimidos o grageas formuladas de manera convencional.

Los compuestos descritos en la presente descripción pueden formularse para administración parenteral por inyección, incluso el uso de técnicas de cateterización convencionales o infusión. Las formulaciones para inyección se pueden presentar en forma de dosificación unitaria, p. ej., en ampollas o en contenedores de múltiples dosis, con un conservante agregado. Las composiciones pueden adoptar formas tales como suspensiones, disoluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener un agente formulador tal como un agente para suspender, estabilizar y/o dispersar reconocido por los expertos en la técnica. Alternativamente, el ingrediente activo se puede encontrar en forma de polvo para su reconstitución con un vehículo adecuado, p. ej., agua libre de pirógenos estéril, antes de su uso.

Para la administración tópica, un compuesto descrito en la presente descripción se puede formular como un ungüento o crema.

Los compuestos descritos en la presente descripción también se pueden formular en composiciones rectales tales como supositorios o enemas de retención, p. ej., que contienen bases de supositorios convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos.

Para la administración intranasal o administración por inhalación, los compuestos descritos en la presente descripción se pueden suministrar de manera conveniente en forma de una disolución o suspensión desde un contenedor con bomba de pulverización que el paciente aprieta o bombea o como una presentación en aerosol desde un contenedor presurizado o un nebulizador, con el uso de un propulsor adecuado, p. ej., diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse al proporcionar una válvula para suministrar una cantidad medida. El contenedor presurizado o nebulizador puede contener una disolución o suspensión del com puesto descrito en la presente descripción. La s cá p su la s y cartuchos (hechos de, por ejemplo, gelatina) para u sar en un inhalador o insuflador pueden form ularse para contener una m ezcla en polvo de un com puesto descritos en la presente descripción y una base en polvo ad ecuad a tal como lactosa o almidón.

U n a dosis propuesta de un com puesto descrito en la presente descripción para adm inistración oral, parenteral o bucal para el adulto hum ano promedio para el tratamiento o prevención de un estado de enferm edad relacionado con T P O e s aproxim adam ente ^{0 , 1}mg a aproxim adam ente ^{2 0 0 0}mg. E n ciertas realizaciones, la dosis propuesta e s de aproxim adam ente ^{0 , 1}mg a aproxim adam ente ^{2 00}mg del ingrediente activo por dosis unitaria. Independientemente de la cantidad de la dosis propuesta, la adm inistración del com puesto puede producirse, por ejemplo, ¹a ⁴ve ces por día.

La s form ulaciones en aerosol para el tratamiento o prevención de las afecciones m encionadas anteriormente en el adulto hum ano promedio se disponen preferiblemente para que cad a dosis m edida o "nube" de aerosol contenga aproxim adam ente ²⁰mg a aproxim adam ente ^{10 . 0 00}mg, preferiblemente, aproxim adam ente ²⁰mg a aproxim adam ente ^{1 00 0}mg de un com puesto descrito en la presente descripción. La dosis diaria global con un aerosol estará dentro del rango de aproxim adam ente ^{10 0}mg a aproxim adam ente ¹⁰⁰mg. En ciertas realizaciones, la dosis diaria global con un aerosol generalm ente estará dentro del rango de aproxim adam ente ¹⁰⁰mg a aproxim adam ente ¹⁰mg. La adm inistración puede se r varias ve ce s al día, por ejem plo ², ³, ⁴u ⁸ve ces, al dar, por ejem plo, ¹, ²u ³dosis ca d a vez.

La s form ulaciones de com binación en aerosol para el tratamiento o prevención de las afecciones m encionadas anteriormente en el adulto hum ano promedio se disponen preferiblemente para que ca d a dosis m edida o "nube" de aerosol contenga de aproxim adam ente ^{0 , 01}mg a aproxim adam ente ^{1 00 0}mg de una com binación que com prende un com puesto descrito en la presente descripción. En ciertas realizaciones, cad a dosis m edida o "nube" de aerosol contiene aproxim adam ente ^{0 , 01}mg a aproxim adam ente ¹⁰⁰mg de una com binación que com prende un com puesto descrito en la presente descripción. En ciertas realizaciones, ca d a dosis m edida o "nube" de aerosol contiene aproxim adam ente ¹mg a aproxim adam ente ¹⁰mg de una com binación que com prende un com puesto descrito en la presente descripción. La adm inistración puede se r varias ve ce s al d ía, por ejem plo ², ³, ⁴u ⁸veces, al dar, por ejem plo, ^{1 , 2}u ³dosis cad a vez.

La s com posiciones farm acéuticas y métodos de tratamiento o prevención que com prenden adm inistrar profárm acos de al m enos un com puesto descrito en la presente descripción también se encuentran dentro del a lcan ce de la presente descripción.

Ensayo de glucosilceramida sintasa

Un ensayo enzim ático con el uso de m icrosom as como fuente de actividad de g lucosilceram ida sintasa. El sustrato de ceram ida fluorescente se sum inistra a la enzim a unida a m em brana como un com plejo con albúm ina. D espués de la reacción, la ceram ida y la glucosilceram ida se separan y cuantifican mediante H P L C de fase inversa con detección de la fluorescencia.

Procedimiento

Preparación de m icrosom as a partir de cé lu las de m elanom a hum ano A ^{3 7 5}:

La suspensión celu lar se sonicó sobre hielo hasta la lisis celu lar com pleta con posterior centrifugación e inactivación a ^{10 . 0 00}g durante ¹⁰min. a ⁴°C . El sobrenadante se aclaró mediante centrifugación nuevam ente a ^{1 0 0 . 00 0}g durante ¹hora a ⁴° C en el. El granulado se resuspendió en tampón de lisis, se dividió en a lícuotas y se alm acenó a ^{- 80}°C . En sayo de g lucosilceram ida sintasa

El sustrato y el m icrosom a se com binaron ¹:¹, se m ezclaron bien en un agitador de placa, se selló la placa y se incubó ¹hora a temperatura ambiente en la oscuridad

S e detuvo con disolución para detener en la p laca de reacción y se transfirió a la p laca de aná lis is ;

A ná lis is de R P -H P L C

- colum na: M ercuryM S™ (Phenom enex) cartucho reem plazable (Luna Cs, ³pm, ^{2 0}x ⁴mm)

- sistem a: Agilent ^{1 10 0}con detector de fluorescencia de la serie Agilent ^{1 20 0}

- fase móvil: ácido fórmico al ¹% en ⁸¹% de metanol, ¹⁹% de agua, velocidad de flujo ^{0 , 5}mL/min, ejecución isocrática, ⁴min

- diluyente de m uestra: ^{0 , 1}mM C ⁸ceram id a (bloqueador de adsorción) en ⁵⁰% de isopropanol, ⁵⁰% de agua (v/v) - detección de fluorescencia: Aex = ^{4 7 0}nm, Aem = ^{5 3 0}nm

- en estas condiciones, NBD C6 GluCer tuvo un tiempo de retención de aproximadamente 1,7 min y NBD C6 Cer se ejecutó a aproximadamente 2,1 min; los picos estuvieron claramente separados del valor de referencia y se integraron automáticamente mediante el programa informático de HPLC

- el % de conversión del sustrato en producto se usó como la lectura para la prueba del inhibidor para evitar la variabilidad debido a un error de dilución o a la evaporación de la muestra

Todos los compuestos ejemplificados tuvieron un valor de CI⁵⁰menor que 5 pM en el ensayo de indicador.

SECCIÓN EXPERIMENTAL

Procedimiento general A: Formación de carbamato/urea con trifosgeno

A una suspensión de clorhidrato de amina (1 equivalente) y trietilamina (3-4 equivalentes) en THF (concentración ~ 0,2 M) a temperatura ambiente se agregó trifosgeno (0,35 equivalente). La mezcla de reacción se agitó durante 10 min y se agregó una pequeña cantidad de éter (1-2 mL). La sal de trietilamonio se retiró por filtración para proporcionar una disolución transparente de isocianato en THF/éter.

A una disolución de alcohol (1,5 equivalentes) en THF (concentración ~ 0,2 M) a temperatura ambiente se agregó NaH [60 %, aceite] (1,5 equivalentes). La mezcla de reacción se agitó durante 15 min y la disolución anterior (isocianato en THF/éter) se agregó por goteo.

En procesamiento estándar, la reacción se inactivó con salmuera. La disolución se extrajo con EtOAc y la capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El material bruto se purificó en combiflash (cartucho de SiO², CHCl3 y NH³2N en MeOH) para proporcionar el carbamato correspondiente.

Alternativamente: A una suspensión de clorhidrato de amina A (1 equivalente) y trietilamina (3-4 equivalentes) en THF (concentración ~ 0,2 M) a temperatura ambiente se agregó trifosgeno (0,35 equivalente). La mezcla de reacción se agitó durante 10 min y se agregó una pequeña cantidad de éter (1-2 mL). La sal de trietilamonio se retiró por filtración para proporcionar una disolución transparente de isocianato en THF/éter.

A una disolución de amina B (1 equivalentes) en THF (concentración ~ 1,0 M) a temperatura ambiente se agregó la disolución anterior (isocianato en THF/éter) por goteo. La reacción se agitó durante un período de 18 h y se concentró. El material bruto se purificó en combiflash (cartucho de SiO², CHCta y NH³2N en MeOH) para proporcionar la urea correspondiente.

Procedimiento general B: Alquilación con organocerio

Una suspensión de CeCh (4 equivalentes) en THF (concentración ~ 0,2M) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La suspensión se enfrió hasta -78 °C y se agregó MeLi /Éter [1,6M] (4 equivalentes) por goteo. Se dejó que el complejo de organocerio se formara durante un período de 1 h y se agregó una disolución de nitrilo (1 equivalente) en THF (concentración 2,0M) por goteo. La mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 18 h. La disolución se enfrió hasta 0 °C y se inactivó con agua (~ 1 mL) con posterior adición de disolución acuosa al 50 % de hidróxido de amonio (~ 3 mL) hasta que se formó un precipitado y se asentó en el fondo del matraz. La mezcla se filtró a través de una almohadilla de celite y se concentró. El material bruto se trató con una disolución de HCl/dioxano [4,0M]. El intermediario clorhidrato de arilpropan-2-amina se trituró en éter y se usó como tal para la siguiente etapa. Alternativamente, la amina base libre bruta se purificó en combiflash (cartucho de SiO², CHCl3 y NH³2N en MeOH) para proporcionar la arilpropilamina correspondiente.

Procedimiento general C: Formación de urea con carbonil diimidazol (CDI)

Una disolución de amina A (1 equivalente) y CDI (1,3 equivalentes) en THF (concentración ~ 0,15M) se agitó a reflujo durante 1 h. Se agregó una disolución de amina B (1,3 equivalentes) en THF y la mezcla de reacción se agitó durante 1,5 h adicionales. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se diluyó con éter. El compuesto deseado precipitó y se retiró por filtración. El material bruto se purificó en combiflash (cartucho de AbO3 básico, CHCl3 y MeOH) o (cartucho de SiO², CHCh y NH³2N en MeOH) para proporcionar la urea correspondiente.

Procedimiento general D: Formación de urea con trifosgeno

A una suspensión de amina A (1 equivalente) y trietilamina (4 equivalentes) en THF (concentración ~ 0,15 M) a temperatura ambiente se agregó trifosgeno (0,35 equivalente). La mezcla de reacción se agitó durante 15 min y se agregó amina B (1,1 equivalentes). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h y después se diluyó con EtOAc. La capa orgánica se lavó con NaOH acuoso [1,0 M], se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El material bruto se purificó en combiflash (cartucho de SiO², CHCh y NH³2N en MeOH) para proporcionar la urea correspondiente.

Procedimiento general E: Acoplamiento de Suzuki

A una disolución de haluro de arilo (1 equivalente) en una mezcla de DME/agua [4:1] (concentración ~ 0,2M) se agregó ácido borónico (2 equivalentes), catalizador de paladio (0,1-0,25 equivalente) y carbonato de sodio (2 equivalentes). La mezcla de reacción se colocó en un microondas 25 min a 150 °C. Después de la filtración a través de un tapón de celite y la concentración, el producto bruto se purificó en combiflash (cartucho de SiO², CHCta y NH³2N en MeOH) para proporcionar el aducto de acoplamiento correspondiente.

Alternativamente: A una disolución de haluro de arilo (1 equivalente) en una mezcla de tolueno/agua [20:1] (concentración ~ 0,2M) se agregó ácido borónico (1,3-2,5 equivalentes), catalizador de paladio (0,05-0,15 equivalente), triciclohexilfosfina (0,15-0,45 equivalente) y fosfato de potasio (5 equivalentes). La mezcla de reacción se colocó en un microondas 25 min a 150 °C. Después de la filtración a través de un tapón de celite y la concentración, el producto bruto se purificó en combiflash (cartucho de SiO², CHCb y NH³2N en MeOH) para proporcionar el aducto de acoplamiento correspondiente.

Procedimiento general F: Hidrogenación

A una disolución de sustrato en metanol, etanol o EtOAc (concentración ~ 0,2M) se agregó catalizador de paladio (20 % p/p de sustrato). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente en 1 atm de H²hasta completarse. La reacción se filtró a través de un tapón de celite y posteriormente dos enjuagues con cloroformo. El producto bruto se concentró y se purificó en combiflash (cartucho de SiO², CHCta y NH³2N en MeOH) para proporcionar el producto hidrogenado. Alternativamente, el material final se purificó mediante precipitación o recristalización.

Procedimiento general G: Ciclopropanación

A una mezcla de arilnitrilo (1 equivalente) y Ti(Oi-Pr)4 (1,7 equivalentes) en agitación a -70 °C, se agregó por goteo EtMgBr [3,0 M en éter] (1,1 equivalentes). La mezcla de reacción se dejó calentar hasta 25 °C y se agitó durante 1 h. A la mezcla anterior se agregó BF³-Et²O (3 equivalentes) por goteo a 25 °C. Después de la adición, la mezcla se agitó durante otras 2 h y después se inactivó con HCl acuoso [2M]. La disolución resultante después se basificó al agregar NaOH acuoso [2M]. El material orgánico se extrajo con éter de etilo. Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El material bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (elución con éter de petróleo/EtOAc: 10/1 a 1/1) para proporcionar la 1-aril-ciclopropanamina correspondiente.

Procedimiento general H: Acoplamiento a través de reordenamiento de Curtius in-situ

Una mezcla de ácido (1 equivalente), trietilamina (2,5 equivalentes), DPPA (1,0 equivalente) en tolueno (concentración ~0,3M) se calentó a reflujo durante 30 min. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se agregó alcohol (1 equivalente). Después de la adición, la mezcla se calentó a 90 °C durante 18 h. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc y se lavó con dicarbonato de sodio acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se concentró y se purificó mediante TLC prep (EtOAc/MeOH 5:1, que contenía 1 % de TEA) para proporcionar el carbamato correspondiente.

Procedimiento general I: Formación de amida al usar EDCI

A una disolución de amina (1 equivalente) en DMF o THF (concentración ~ 0,3M) se agregó EDCI (1,2-2,5 equivalentes), HOBT (1,2-2,5 equivalentes), DIPEA (1,2-2,5 equivalentes) y trietilamina (unas pocas gotas). La mezcla de reacción se agitó y se agregó el ácido (1,2 equivalentes). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h y después se concentró. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El material bruto se purificó mediante HPLCMS prep o mediante combiflash (cartucho de SiO², CHCla y NH³2N en MeOH).

Preparación A

Intermediario 1

Clorhidrato de 2-(3-bromofenil)propan-2-amina

A una disolución de 3-bromobenzoato de metilo (15,0 g, 69,8 mmol) en THF (140 mL) a -78 °C se agregó por goteo una disolución de MeMgBr/éter dietílico [3,0M] (58 mL). La mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. La disolución se vertió en una disolución saturada acuosa de cloruro de amonio y el material orgánico se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar el alcohol correspondiente (14,9 g) que se usó sin purificación adicional.

A una disolución de 2-(3-bromofenil)propan-2-ol (17,2 g, 79,8 mmol) en cloroacetonitrilo (160 mL) se agregó ácido acético (14 mL). La mezcla de reacción se enfrió hasta 0 °C y se agregó H²SO⁴(14 mL) por goteo. La mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 18 h. La reacción después se vertió en hielo y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con disolución de NaOH acuosa [1,0M] y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para proporcionar la cloroacetamida correspondiente (21,4 g) que se usó sin purificación adicional.

A una disolución de N-(2-(3-bromofenil)propan-2-il)-2-cloroacetamida (20,3 g) en etanol (120 mL) se agregó ácido acético (20 mL). La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 18 h. La disolución se enfrió hasta temperatura ambiente y el precipitado se retiró por filtración sobre una almohadilla de celite. El filtrado se concentró y el residuo se disolvió en EtOAc. La capa orgánica se trató con disolución de NaOH acuosa [1,0M], se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El material bruto se trató con una disolución de HCl/dioxano [4M]. El intermediario clorhidrato de 2-(3-bromofenil)propan-2-amina se trituró en éter y se usó como tal para la siguiente etapa (7,50 g, 43 %). 1H NMR (400 MHz, CD³OD) 57,69 (q, J = 1,8 Hz, 1H), 7,55 (ddd, J = 1,0, 1,8, 7,9 Hz, 1H), 7,49 (ddd, J = 1,0, 2,0, 8,0 Hz, 1H), 7,38 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 1,71 (s, 6H) ppm.

Preparación B

Intermediario 2

Clorhidrato de 2-(5-bromo-2-fluorofenil)propan-2-amina

A una disolución de ácido 5-bromo-2-fluorobenzoico (4,85 g, 22,8 mmol) en metanol (45 mL) se agregó H²SO⁴(4,5 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h y la disolución se concentró. El residuo se trató con una disolución de NaOH acuosa [10 % p/v] y el material orgánico se extrajo con CHCta. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar el éster correspondiente (4,69 g, 91 %) que se usó sin purificación adicional.

El intermediario de éster (4,69 g, 20,1 mmol) se convirtió en el intermediario 2 al usar el mismo procedimiento expuesto en el ejemplo del intermediario 1 para proporcionar la sal de amonio correspondiente (3,94 g, 67 % de rendimiento total) como un sólido blanco. 1H NMR (400 MHz, CD³OD) 57,67 - 7,57 (m, 2H), 7,21 (dd, J = 8,7, 12,3 Hz, 1H), 1,77 (s, 6H) ppm.

Intermediario 3

Clorhidrato de 2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-amina

Se transformó ácido 5-bromo-2-fluorobenzoico en el intermediario 3 al usar el mismo procedimiento expuesto en el ejemplo del intermediario 2 para proporcionar la sal de amonio correspondiente (2,79 g, 49 % de rendimiento total) como un sólido blanco.

Intermediario 4

2-(3-bromo-2-fluorofenil)propan-2-amina

Se transformó ácido 3-bromo-2-fluorobenzoico en el intermediario 4 al usar el mismo procedimiento expuesto en el ejemplo del intermediario 2 para proporcionar la amina correspondiente como un aceite amarillo pálido.

Intermediario 5

Clorhidrato de 2-(4-bromofenil)propan-2-amina

Al usar el procedimiento general B, se convirtió bromobenzonitrilo (2,00 g, 11,0 mmol) en la 2-(4-bromofenil)propan-2-amina correspondiente, que se proporcionó como un aceite marrón (1,20 g, 51 %).

Preparación C

Intermediario 6

1,4-Diazabiciclo[3.2.2]nonano

A una disolución agitada de 1,4-diazabiciclo[3.2.2]nonan-3-ona (1,0 g, 7,2 mmol) en 1,4-dioxano (7,2 mL) a temperatura ambiente se agregó hidruro de litio aluminio [2,0M/THF] (4,1 mL, 8,2 mmol). La mezcla de reacción después se calentó a reflujo durante 6 horas antes de enfriarse hasta temperatura ambiente. La reacción se inactivó mediante la adición gradual de 200 pL de H²O, 200 pL de NaOH acuoso al 15 % y 600 pL de H²O. La mezcla se filtró a través de Celite que posteriormente se lavó con EtOAc. El filtrado combinado se concentró al vacío para proporcionar el producto (0,82 g, 90 %) que se usó sin purificación adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCta) 53,28-3,25 (m, 1H), 2,99 2,95 (m, 8H), 1,86-1,80 (m, 3H), 1,69-1,64 (m, 2H) ppm.

Preparación D

Intermediario 7

2-Metilquinuclidin-3-ol

Se disolvió una disolución de carbonato de potasio (11,4 g, 82,8 mmol) e hidrato de quinuclidina (5,00 g, 20,4 mmol) en H²O (15,6 mL). Cuando se disolvió completamente, se agregó diclorometano (20,4 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo cloroformo (3 x 50 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El producto se usó sin purificación adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCta) 2,79 (s, 1H), 5,19 (s, 1H), 3,14-3,06 (m, 2H), 2,99-2,91 (m, 2H), 2,57-2,55 (m, 1H), 1,98-1,93 (m, 4H) ppm.

La 2-metilenoquinuclidin-3-ona (3,50 g) en etanol (30 mL) se redujo en Pd/C al 10 % (50 % en peso) en una atmósfera de H². Cuando se consideró que se había completado mediante TLC (~3 días), el catalizador se retiró por filtración y la torta de filtro se lavó con acetato de etilo. El disolvente se retiró al vacío para proporcionar el producto deseado (2,80 g, 80 %) que se obtuvo y se usó sin purificación adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCh) 3,37-3,31 (m, 1H), 3,21 -3,13 (m, 2H), 3,09-3,00 (m, 1H), 2,97-2,89 (m, 1H), 2,46-2,43 (m, 1H), 2,05-1,91 (m, 4H), 1,34 (d, J = 7,6 Hz, 3H) ppm.

A 2-metilquinuclidin-3-ona (0,50 g, 3,60 mmol) en 1,4-dioxano (18 mL) a temperatura ambiente se agregó hidruro de litio aluminio [1,0M/THF] (4,1,4,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. La reacción se inactivó mediante la adición gradual de 116 pL de H²O, 116 pL de NaOH acuoso al 15 % y 348 pL de H²O. La mezcla se filtró a través de Celite que posteriormente se lavó con EtOAc. El disolvente se retiró al vacío para proporcionar el producto (0,48 g, 95 %), que se usó sin purificación adicional como una mezcla 2:1 de diastereómeros.

Preparación E

Intermediario 8

1 -azabiciclo[3.2.2]nonan-4-ol

A 1 -azabiciclo[3.2.2]nonan-4-ona (0,20 g, 1,4 mmol) en 1,4-dioxano (2,8 mL) a 0 °C se agregó hidruro de litio aluminio [1,0M/THF] (1,7 mL, 1,7 mmol). La mezcla de reacción se mantuvo a 0°C durante 15 minutos. La reacción se inactivó mediante la adición gradual de 46 pL de H²O, 46 pL de NaOH acuoso al 15 % y 138 pL de H²O. La mezcla se filtró a través de Celite que posteriormente se lavó con EtOAc. El disolvente se retiró al vacío para proporcionar el producto (0,19 g, 96 %), que se usó sin purificación adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCh) 5 3,90-3,86 (m, 1H), 3,09-3,03 (m, 1H), 2,96-2,91 (dd, J = 9,2, 6,8 Hz, 1H), 2,86-2,75 (m, 3H), 2,71 -2,64 (m, 1H), 2,34-2,27 (bs s, 1H), 1,98-1,86 (m, 3H), 1,71-1,59 (m, 3H), 1,51-1,35 (m, 1H) ppm.

Preparación F

Intermediario 9

1 -Azabiciclo[2.2.1]heptan-3-ol

A una mezcla de metóxido de sodio (2,00 g, 37,9 mmol) en metanol (9 mL) a 0 °C se agregó clorhidrato de glicina metil éster (4,76 g, 37,9 mmol) e itaconato de dimetilo (5,00 g, 31,6 mmol.) La reacción se calentó a reflujo durante 16 horas antes de enfriarse hasta temperatura ambiente. El sólido se retiró por filtración y se lavó con diclorometano. El filtrado se concentró y el residuo se diluyó con HCl 5N (50 mL). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (4 x 50 mL), se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. El producto se usó sin purificación adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCla) 54,04 (dd, J = 82,0, 17,6 Hz), 3,74-3,64 (m, 8H), 3,32-3,24 (m, 1H), 2,77-2,63 (m, 2H) ppm.

A 1-(2-metoxi-2-oxoetil)-5-oxopirrolidina-3-carboxilato de metilo (3,40 g, 16,0 mmol) en THF (20 mL) a 0 °C se agregó borano-THF [1,0M/THF] (32,0 mL, 32,0 mmol). La reacción se agitó a reflujo durante 1 hora y después se enfrió hasta temperatura ambiente donde se dejó en agitación durante 12 horas adicionales. La reacción se inactivó mediante la adición de una disolución saturada de carbonato de potasio (5,52 g en 20 mL de H²O) y se calentó a reflujo durante 1 hora adicional antes de enfriarse hasta temperatura ambiente. El disolvente se retiró al vacío y el residuo se volvió ácido mediante la adición de HCl 5N (25 mL). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 30 mL). El pH de la capa acuosa después se volvió básico mediante la adición de carbonato de potasio sólido. La capa acuosa se extrajo adicionalmente con diclorometano (5 x 30 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El producto se usó sin purificación adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 5 3,66 (s, 3H), 3,63 (s, 3H), 3,29 (ABq, 2H, J = 24,0, 16,8 Hz), 3,06-3,02 (m, 2H), 2,87-2,81 (m, 1H), 2,71-2,65 (m, 1H), 2,56-2,50 (m, 1H), 2,09-2,04 (m, 2H) ppm.

A una disolución en reflujo de ferc-butóxido de potasio (2,46 g, 22,0 mmol) en tolueno (32 mL) se agregó por goteo una disolución de 1-(2-metoxi-2-oxoetil)pirrolidina-3-carboxilato de metilo (2,00 g, 10,0 mmol) en tolueno (10 mL) durante 1 hora. La reacción se dejó en agitación y 3 horas adicionales a reflujo antes del primer enfriamiento hasta temperatura ambiente después se enfrió hasta -10 °C. Después se agregó ácido acético (1,3 mL) con agitación. La capa de tolueno se extrajo con HCl 5N (4 x 50 mL). Las capas acuosas combinadas se calentaron a 110 °C durante 8 horas. La reacción después se enfrió hasta temperatura ambiente y el volumen se redujo a la mitad al vacío. El pH de la mezcla de reacción se volvió básico mediante la adición de carbonato de potasio sólido. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (5 x 50 mL) y las capas orgánicas combinadas se concentraron al vacío. Al producto bruto se agregó éter de etilo. El sólido se retiró por filtración para proporcionar el producto deseado (0,30 g, 27 %), que se usó sin purificación adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 53,05-2,96 (m, 3H), 2,76 (s, 2H), 2,72-2,66 (m, 2H), 2,09-2,01 (m, 1H), 1,78-1,71 (m, 1H) ppm.

La 1-azabiciclo[2.2.1]heptan-3-ona (0,30 g, 2,7 mmol) en etanol (2-3 mL) se redujo en PtÜ²(50 % en peso) en una atmósfera de H². Después de agitar 4 horas, el catalizador se retiró por filtración y la torta de filtro se lavó con etanol. El etanol se retiró al vacío para proporcionar el producto deseado (0,29 g, 95 %). 1H NMR (400 MHz, CDCta) 54,36 4,35 (m, 1H), 3,10-3,05 (m, 1H), 2,95-2,88 (m, 1H), 2,72-2,66 (m, 1H), 2,63-2,57 (m, 2H), 2,48-2,44 (dd, J = 10,0, 3,2 Hz, 1H), 2,11-2,05 (m, 2H), 1,51-1,44 (m, 1H) ppm.

Preparación G

Intermediario 10

(ft)-3-metilquinuclidin-3-amina y (S)-3-metilquinucMdin-3-amina

A una disolución bien agitada de MeLi [3,0M/éter dietílico] (67,0 mL, 201 mmol) en éter dietílico anhidro (150 mL) a -78 °C se agregó, por goteo, una disolución de quinuclidin-3-ona (12,5 g, 100 mmol) en éter dietílico (100 mL). La disolución resultante se mantuvo a -78 °C durante 1 hora, después a temperatura ambiente durante 18 horas. Se agregó agua (60 mL) por goteo a 0 °C y la mezcla se concentró al vacío para proporcionar un residuo, que se purificó mediante cromatografía en columna de óxido de aluminio neutra (0-20 % de MeOH en CHCh) para proporcionar 3-metilquinuclidin-3-ol (10,0 g, 71 %) como un sólido amarillo claro. A acetonitrilo agitado (250 mL) a 0 °C se agregó lentamente ácido sulfúrico concentrado (100 mL). La disolución resultante se agregó por goteo a una mezcla de 3-metilquinuclidin-3-ol (9,10 g, 64,5 mmol) en acetonitrilo (250 mL) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 60 horas, después se enfrió con un baño de hielo y se basificó con disolución de hidróxido de sodio acuosa hasta pH 10. La mezcla se extrajo con 5:1 (v/v) CHCl³//-PrOH. La capa orgánica se concentró para proporcionar un residuo que se diluyó con HCl 2N ac. y se lavó con 5:1 (v/v) CHCl³//'-PrOH. La capa acuosa restante después se basificó con NaOH 2N y se extrajo con 5:1 (v/v) CHCh/Z-PrOH. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron (Na2SO4) y se concentraron para proporcionar 9,5 g (82 %) del compuesto deseado como un aceite amarillo claro. Los 2 enantiómeros del intermediario anterior se separaron entre sí al usar una columna quiral en un sistema de cromatografía de fluido supercrítico (SFC, por sus siglas en inglés).

Una disolución del intermediario acetamida quiral anterior (9,50 g, 52,0 mmol) en HCl conc. (100 mL) se calentó a reflujo durante 3 días, se enfrió con un baño de hielo y se neutralizó con una disolución de hidróxido de sodio acuosa hasta pH 1. La mezcla se lavó con 5:1 (v/v) CHCl3//-PrOH. La capa acuosa después se basificó con NaOH 2N y se extrajo con 5:1 (v/v) CHCb/Z-PrOH). Los extractos combinados se lavaron con agua, se secaron (Na2SO4) y se concentraron para proporcionar 5,00 g (69 %) del compuesto quiral deseado como un semisólido amarillo claro. 1H NMR (500 MHz, DMSO-afe) 5 2,72-2,39 (m, 6H), 2,01-1,96 (m, 1H), 1,67-1,61 (m, 1H), 1,43-1,36 (m, 2H), 1,23-1,17 (m, 1H), 1,09 (s, 3H) ppm. 13C NMR (125 MHz, DMSO-afe) 565,3, 48,3, 46,6, 46,4, 34,2, 30,0, 24,8, 22,8 ppm. Pureza: >99 % (g C-MS); tiempo de retención 6,63 min; (M) 140,1.

Preparación H

Intermediario 11

2- (3-(4-fluorofenil)isotiazol-5-il)propan-2-amina

A una suspensión agitada de 4-fluorobenzamida (70,00 g, 503,1 mmol) en tolueno (900 mL) se agregó cloruro de clorocarbonil sulfenilo (83,0 mL, 1,00 mol). La mezcla se calentó durante la noche a 60 °C y se concentró. El sólido tostado resultante se trituró con cloruro de metileno (200 mL), se recogió mediante filtración por succión y se enjuagó con cloruro de metileno adicional (4 x 70 mL). El producto bruto se impregnó en sílice (100 g) y se cromatografió en un embudo de filtro grande cargado en seco con sílice al usar un gradiente de hexano/acetato de etilo. El producto 5-(4-fluorofenil)-1,3,4-oxatiazol-2-ona se proporcionó como un sólido blanquecino (55,98 g, 56 %).

A una disolución agitada de 5-(4-fluorofenil)-1,3,4-oxatiazol-2-ona (42,80 g, 217,1 mmol) en o-diclorobenceno (600 mL) se agregó propiolato de etilo (66,0 mL, 651 mmol). La mezcla se calentó durante la noche a 135 °C y se concentró. El aceite residual se purificó mediante cromatografía rápida al usar un gradiente de hexano/acetato de etilo para proporcionar 3-(4-fluorofenil)isotiazol-5-carboxilato de etilo como un sólido dorado pálido (17,35 g, 32 %). El isómero 3- (4-fluorofenil)isotiazol-4-carboxilato de etilo más polar (generado en una relación ~57/43 con respecto al producto deseado) se descartó.

A una disolución agitada y enfriada (0 °C) de 3-(4-fluorofenil)isotiazol-5-carboxilato de etilo (38,50 g, 153,2 mmol) en THF (400 mL) se agregó una disolución de bromuro de metilmagnesio en éter dietílico (3,0 M, 128 mL, 384 mmol), por goteo en 20 minutos. Después de otras 1,5 horas a 0 °C, la reacción se inactivó mediante la adición lenta de acetato de etilo (20 mL) y se concentró. El residuo se recogió en NH4Cl acuoso (400 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 150 mL). Los extractos combinados se secaron (Na2SO4) y se concentraron. El jarabe ámbar resultante se purificó mediante cromatografía rápida al usar un gradiente de hexano/acetato de etilo para proporcionar 2-(3-(4-fluorofenil)isotiazol-5-il)propan-2-ol como un sólido dorado suave (29,02 g, 80 %).

Se recogió el 2-(3-(4-fluorofenil)isotiazol-5-il)propan-2-ol (29,00 g, 122,2 mmol) en cloruro de tionilo (75 mL). La mezcla se enfrió (baño de hielo) brevemente y se agitó. Después de 4 horas, la reacción se concentró y el residuo se dividió entre acetato de etilo (200 mL) y NaHCO3 acuoso (300 mL). La capa orgánica se combinó con una reextracción de la capa acuosa (acetato de etilo, 1 x 100 mL), se secó (Na2SO4) y se concentró para proporcionar una mezcla de producto de 5-(2-cloropropan-2-il)-3-(4-fluorofenil)isotiazol y el subproducto de eliminación de 3-(4-fluorofenil)-5-(prop-1-en-2-il)isotiazol (relación ~63/39) como un aceite ámbar oscuro (29,37 g). Este material se usó en la siguiente reacción sin purificación.

A una disolución agitada del producto de la etapa anterior en DMSO (80 mL) se agregó azida de sodio (14,89 g, 229,0 mmol). La mezcla se calentó a 50 °C durante la noche, se diluyó con acetato de etilo (250 mL) y se lavó con agua (6 x 400 mL). La capa orgánica se secó (Na2SO4) y se concentró para proporcionar una mezcla de 5-(2-azidopropan-2-il)-3-(4-fluorofenil)isotiazol y 3-(4-fluorofenil)-5-(prop-1-en-2-il)isotiazol (relación ~56/44) como un aceite ámbar oscuro (29,10 g). Este material se usó en la siguiente reacción sin purificación.

El producto de la etapa anterior se combinó con paladio al 10 % sobre carbono (50 % de agua; 7,50 g) y se recogió en metanol (350 mL). La suspensión agitada se cicló entre vacío y una purga de nitrógeno tres veces. Después de una evacuación adicional, la reacción se recargó con gas hidrógeno (reservorio en globo) y se agitó durante la noche. La reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se combinó con enjuagues con metanol del Celite y se concentró. El aceite ámbar oscuro resultante se purificó mediante cromatografía rápida al usar un gradiente de cloruro de metileno/metanol para proporcionar 2-(3-(4-fluorofenil)isotiazol-5-il)propan-2-amina como un aceite ámbar viscoso (14,23 g, 49 % en 3 etapas).

Se usan o siguen varias propuestas para el tratamiento de las LSD, cuya mayoría se centra en la terapia de reemplazo enzimático para usar sola en el tratamiento de la enfermedad. Hay disponibles comercialmente numerosas terapias de reemplazo enzimático aprobadas para tratar las LSD (p. ej., Myozyme® para la enfermedad de Pompe, Aldurazyme® para la Mucopolisacaridosis I, Cerezyme® para la enfermedad de Gaucher y Fabrazyme® para la enfermedad de Fabry). Además, los inventores han identificado varias moléculas pequeñas para usar solas en el tratamiento de las LSD. Los métodos terapéuticos descritos en la presente memoria proporcionan opciones de tratamiento al médico que se enfrenta al tratamiento de varias enfermedades de almacenamiento lisosómico, como se describen en detalle a continuación.

En ciertos aspectos de la descripción, los compuestos de la presente descripción se pueden usar para tratar una enfermedad metabólica, tal como una enfermedad de almacenamiento lisosómico (LSD), ya sean solos o como una terapia de combinación con una terapia de reemplazo enzimático. En otros aspectos de la descripción, los compuestos de la presente descripción se pueden usar para inhibir o reducir la actividad de GCS en un sujeto diagnosticado con una enfermedad metabólica, tal como una LSD, ya sean solos o como una terapia de combinación con una terapia de reemplazo enzimático. En otros aspectos de la descripción, los compuestos de la presente descripción se pueden usar para reducir e/o inhibir la acumulación de un material almacenado (p. ej., sustrato lisosómico) en un sujeto diagnosticado con una enfermedad metabólica, tal como una LSD. En ciertas realizaciones de los aspectos anteriores, la LSD es Gaucher (tipo 1, tipo 2 o tipo 3), Fabry, Gwn-gangliosidosis o GM2-gangliosidosis (p. ej., deficiencia de activador de GM2, Tay-Sachs y Sandhoff). La Tabla 1 reúne numerosas LSD e identifica la enzima deficiente correspondiente que se puede usar como una ERT en los aspectos anteriores de la descripción.

En otros escenarios, puede ser necesario proporcionar una SMT a un paciente cuya afección requiere la reducción de sustratos en el cerebro y, por lo tanto, no se puede tratar mediante administración sistémica de ERT. Si bien la administración intracerebroventricular o intratecal directa puede reducir los niveles de sustrato en el cerebro, la administración sistémica de la ERT no es adecuada para LSD con afectación del sistema nervioso central (SNC) debido a su incapacidad para cruzar la barrera hematoencefálica (BHE) y la SMT puede ser beneficiosa en pacientes que tienen actividades enzimáticas residuales en el SNC.

Según la presente descripción, la SMT se proporciona a un paciente para tratar un cáncer y/o enfermedad metabólica, tal como, una enfermedad de almacenamiento lisosómico. La SMT puede incluir una o más moléculas pequeñas. La SMT incluye administrar al paciente compuestos de la presente descripción. En realizaciones particulares, el compuesto es (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)carbamato de (S)-quinuclidin-3-ilo o (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)carbamato de quinuclidin-3-ilo o combinaciones de estos.

En ciertas realizaciones, los compuestos de la descripción, tales como, por ejemplo, (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)carbamato de (S)-quinuclidin-3-ilo y (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)carbamato de quinuclidin-3-ilo se pueden usar para el tratamiento de prácticamente cualquier enfermedad de almacenamiento que resulta de un defecto en la vía de glucoesfingolípidos (p. ej., Gaucer (es decir, tipo 1, tipo 2 tipo 3), Fabry, GM1-gangliosidosis, Gm²-gangliosidosis (p. ej., deficiencia de activador de GM2, Tay-Sacs y Sandhoff)). En una realización preferida particularmente, el (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)carbamato de (S)-quinuclidin-3-ilo o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de este se usa para inhibir y/o reducir la acumulación de Gb3 y/o liso-Gb3 en un paciente con enfermedad de Fabry, ya sea solo o como una terapia de combinación con terapia de reemplazo enzimático. En una realización preferida, la terapia de reemplazo enzimático incluye administrar alfa-galactosidasa A al paciente con Fabry. De hecho, se ha demostrado que un inhibidor de GCS de la invención reduce eficazmente el almacenamiento de Gb3 y lyso-Gb3 en un modelo de ratón de la enfermedad de Fabry, lo que respalda, por lo tanto, su uso como una propuesta viable para el tratamiento de la enfermedad de Fabry. Ver la publicación internacional núm. WO2012/129084. Además, los datos de terapia de combinación in vivo proporcionados en los Ejemplos de ver la publicación internacional núm. WO2012/129084 indican firmemente que una propuesta terapéutica combinada podría ser aditiva y complementaria.

En ciertas realizaciones, los compuestos de la descripción, tales como, por ejemplo, (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)carbamato de (S)-quinuclidin-3-ilo y (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)carbamato de quinuclidin-3-ilo pueden usarse para reducir el nivel de GluCer y GluSph en el cerebro de un sujeto diagnosticado con enfermedad de Gaucer neuropática, ya sea solos o en combinación con una ERT (p. ej., administración de glucocerebrosidasa).

El médico generalmente determina los regímenes de dosificación para un componente de terapia con molécula pequeña de la terapia de combinación de la invención y se espera que varíen significativamente dependiendo de la enfermedad de almacenamiento particular que se va a tratar y el estado clínico del individuo afectado particular. Los principios generales para determinar un régimen de dosificación para una SMT dada de la invención para el tratamiento de cualquier enfermedad de almacenamiento son conocidos para el experto en la técnica. Se puede obtener orientación sobre los regímenes de dosificación a partir de cualquiera de las muchas referencias conocidas en la técnica sobre este tema. Se encuentra orientación adicional disponible, in te ra lia , en una revisión de las referencias específicas citadas en la presente memoria. En ciertas realizaciones, dichas dosificaciones pueden variar de aproximadamente 0,5 mg/kg a aproximadamente 300 mg/kg, preferiblemente, de aproximadamente 5 mg/kg a aproximadamente 60 mg/kg (p. ej., 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15, mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, 55 mg/kg y 60 mg/kg) mediante administración intraperitoneal, oral o equivalente de una a cinco veces al día. Dichas dosificaciones pueden variar de aproximadamente 5 mg/kg a aproximadamente 5 g/kg, preferiblemente, de aproximadamente 10 mg/kg a aproximadamente 1 g/kg mediante administración oral, intraperitoneal o equivalente de una a cinco veces al día. En una realización, las dosis varían de aproximadamente 10 mg/día a aproximadamente 500 mg/día (p. ej., 10 mg/día, 20 mg/día, 30 mg/día, 40 mg/día, 50 mg/día, 60 mg/día, 70 mg/día, 80 mg/día, 90 mg/día, 100 mg/día, 110 mg/día, 120 mg/día, 130 mg/día, 140 mg/día, 150 mg/día, 160 mg/día, 170 mg/día, 180 mg/día, 190 mg/día, 200 mg/día, 210 mg/día, 220 mg/día, 230 mg/día, 240 mg/día, 250 mg/día, 260 mg/día, 270 mg/día, 280 mg/día, 290 mg/día, 300 mg/día). Un rango de dosis oral particularmente preferido es de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 100 mg, en donde la dosis se administra dos veces al día. Un rango de dosis oral particular para un compuesto de la presente invención es de aproximadamente 5 mg/kg/día a aproximadamente 600 mg/kg/día. En un rango de dosis oral particular para un compuesto de la presente invención es de aproximadamente 1 mg/kg/día a aproximadamente 120 mg/kg/día, p. ej., 1 mg/kg/día, 5 mg/kg/día, 10 mg/kg/día, 15 mg/kg/día, 20 mg/kg/día, 25 mg/kg/día, 30 mg/kg/día, 35 mg/kg/día, 40 mg/kg/día, 45 mg/kg/día, 50 mg/kg/día, 55 mg/kg/día o 60 mg/kg/día, 65 mg/kg/día, 70 mg/kg/día, 75 mg/kg/día, 80 mg/kg/día, 85 mg/kg/día, 90 mg/kg/día, 95 mg/kg/día, 100 mg/kg/día, 105 mg/kg/día, 110 mg/kg/día, 115 mg/kg/día o 120 mg/kg/día.

En ciertas realizaciones, la invención se relaciona con terapias de combinación de SMT al usar compuestos de la invención y terapia ERT para el tratamiento de enfermedades de almacenamiento lisosómico. Una lista parcial de enfermedades de almacenamiento lisosómico conocidas que se pueden tratar según la descripción se establece en la Tabla 1, incluido el nombre común de la enfermedad, el material almacenado y la deficiencia enzimática correspondiente (adaptado de la Tabla 38-4 de Kolodny et al., 1998, Id.).

TABLA 1

Enfermedades de almacenamiento lisosómico

Enfermedad Material almacenado Deficiencia enzimática

Esfinaolioidosis

Gaucher Glucocerebrósido, glucosil Glucocerebrosidasa

esfingosina

Niemann-Pick Esfingomielina Esfingomielinasa

Niemann-Pick B Esfingomielina Esfingomielinasa

Farber Ceramida Ceramidasa

GM1-gangliosidosis GM1-gangliósido, glicoproteína GM1-gangliósido-p-galactosidasa

GM2-gangliosidosis (Sandhoff) GM2-gangliósido, globosida Hexosaminidasa A y B

Tay-Sachs GM2-gangliósido Hexosaminidasa A

Krabbe Galactosilceramida p-Galactocerebrosidasa

Enfermedades de almacenamiento lisosómico

Enfermedad Material almacenado Deficiencia enzimática Mucooolisacaridosis

Hurler-Scheie (MPS I) Sulfato de dermatán, sulfato de a-L-iduronidasa

heparina

Hunter (MPS II) Sulfato de dermatán, sulfato de Iduronato sulfatasa

heparina

SanfiliDDo (MPS III)

Tipo A Sulfato de heparán Heparán-N-sulfatasa

Tipo B Sulfato de heparán N-acetil-a-glucosaminidasa

Tipo C Sulfato de heparán Acetil CoA:a-glucosaminida acetiltransferasa

Tipo D Sulfato de heparán N-acetil-a-glucosamina-6-sulfatasa Marquio (MPS IV)

Tipo A Sulfato de queratán Galactosamina-6-sulfatasa

Tipo B Sulfato de queratán p-galactosidasa

Maroteaux-Lamy (MPS VI) Sulfato de dermatán Galactosamina-4-sulfatasa (aril sulfatasa B) Sly (MPS VII) Sulfato de dermatán, sulfato de p-glucuronidasa

heparán

Mucosulfatidosis Sulfatidas, mucopolisacáridos Arilsulfatasa A, B y C, otras sulfatasas Mucolioidosis

Sialidosis Sialiloligosacáridos, glicoproteínas a-neuraminidasa

Mucolipidosis II Sialiloligosacáridos, Enzimas altas en suero, bajas en glicoproteínas, glicolípidos fibroblastos; N-acetilglucosamina-1 -fosfato transferasa

Mucolipidosis III Glicoproteínas, glicolípidos Igual que el anterior

Mucolipidosis IV Glicolípidos, glicoproteínas Proteína transmembranaria Mcoln1 Otras enfermedades de metabolismo comoleio de carbohidratos

Fabry Globotriaosilceramida(Gb3), a-galac liso-Gb3 a-galactosidasa A

Schindler Glicopéptidos enlazados a O a-N-acetilgalactosaminidasa

Pompe Glucógeno a-glucosidasa

Enfermedad de Ácido siálico libre Desconocida

almacenamiento de ácido

siálico

Fucosidosis Fucoglicolípidos, a-fucosidasa

fucosiloligosacáridos

Manosidosis Manosil oligosacáridos a-manosidasa Aspartilglucosamina Aspartilglusoaminuria Aspartilglucosamina amidasa

Wolman Ésteres de colesterilo, Triglicéridos Lipasa ácida

Enfermedades de almacenamiento lisosómico

Enfermedad Material almacenado Deficiencia enzimática

Lipofuscinosis ceroide neuronal (NCL)*

NCL infantil Depósitos osmófilos granulares, Palmitoil-proteína tioesterasa (PPT1)

Saposinas A y D tioesterasa

Infantil tardía Perfiles curvilíneos, ATP sintasa Tripeptidil proteasa 1 (TPP 1)

subunidad c

Variante finesa Perfiles de huella CLN5

digital/rectilíneos, ATP sintasa

subunidad c

Variante Perfiles de huella CLN6

digital/rectilíneos, ATP sintasa

subunidad c

Juvenil Perfil de huella digital, ATP sintasa CLN3

subunidad c

Adulta Variable Desconocida

Epilepsia norteña Perfil rectilíneo, ATP sintasa CLN8

subunidad c

Variante turca Perfiles de huella Desconocida

digital/Rectilíneos - constituyentes

desconocidos

Enfermedades lisosómicas de transporte y metabolismo de colesterol

Niemann-Pick tipo C Colesterol no esterificado NPC1 o NPC2

* Davidson et al., The Neuronal Ceroid Lipofuscinosis, Clinical Features and Molecular Basis of Disease. In Barranger JA and Cabrera-Salazar MA (Eds) Lysosomal Storage Disorders. 2007. págs. 371-388. Springer, Nueva York, EE. UU.

Se puede usar cualquier método conocido por el experto en la técnica para monitorizar el estado de enfermedad y la eficacia de una terapia de combinación de la invención. Los monitores clínicos del estado de enfermedad pueden incluir, pero no se limitan a, volumen orgánico (p. ej. hígado, bazo), hemoglobina, recuento de eritrocitos, hematocrito, trombocitopenia, caquexia (demacración) y niveles de quitinasa en plasma (p. ej., quitotriosidasa). Se sabe que la quitotriosidasa, una enzima de la familia quitinasa, es producida por macrófagos en niveles altos en sujetos con enfermedades de almacenamiento lisosómico (ver Guo et al., 1995, J. Inherit. Metab. Dis. 18, 717-722; den Tandt et al., 1996, J. Inherit. Metab. Dis. 19, 344-350; Dodelson de Kremer et al., 1997, Medicina (Buenos Aires) 57, 677-684; Czartoryska et al., 2000, Clin. Biochem. 33, 147-149; Czartoryska et al., 1998, Clin. Biochem. 31,417-420; Mistry et al., 1997, Baillieres Clin. Haematol. 10, 817-838; Young et al., 1997, J. Inherit. Metab. Dis. 20, 595-602; Hollak et al., 1994, J. Clin. Invest. 93, 1288-1292). La quitotriosidasa preferiblemente se mide junto con la enzima convertidora de angiotensina y fosfatasa ácida no resistente a tartrato para monitorizar la respuesta al tratamiento de pacientes con Gaucher.

Los métodos y formulaciones para administras las terapias de combinación de la invención incluyen todos los métodos y formulaciones conocidos en la técnica (ver, p. ej., Remington's Pharmaceutical Sciences, 1980 y años posteriores, 16a ed. y ediciones posteriores, A. Oslo editor, Easton Pa.; Controlled Drug Delivery, 1987, 2a rev., Joseph R. Robinson & Vincent H. L. Lee, eds., Marcel Dekker, ISBN: 0824775880; Encyclopedia of Controlled Drug Delivery, 1999, Edith Mathiowitz, John Wiley & Sons, ISBN: 0471148288; la patente estadounidense núm. 6.066.626 y referencias citadas en ella; ver también las referencias citadas en las secciones a continuación).

Según la invención, las siguientes propuestas generales se proporcionan para terapia de combinación en el tratamiento de enfermedades de almacenamiento lisosómico. Cada propuesta general implica combinar terapia de reemplazo enzimático con terapia de molécula pequeña de una manera que está en consonancia con la optimización del beneficio clínico, mientras se minimizan las desventajas asociadas con el uso de cada terapia sola.

En una realización de la invención, la terapia de reemplazo enzimático (sola o en combinación con terapia de molécula pequeña) se administra para iniciar el tratamiento (es decir, para reducir el volumen en el sujeto), y la terapia de molécula pequeña se administra después de la fase de reducción del volumen para lograr y mantener un efecto terapéutico estable, a largo plazo sin la necesidad de inyecciones de ERT intravenosas frecuentes. Por ejemplo, la terapia de reemplazo enzimático se puede administrar por vía intravenosa (p. ej., en un período de una a dos horas) una vez, semanalmente, una vez cada dos semanas, o una vez cada dos meses, durante varias semanas o meses, o por más tiempo (p. ej., hasta que un órgano indicador implicado tal como el bazo o hígado muestra una disminución en su tamaño). Además, la fase de ERT de tratamiento de reducción de volumen inicial se puede llevar a cabo sola o en combinación con una terapia de molécula pequeña. Un componente terapéutico de molécula pequeña se prefiere particularmente cuando la molécula pequeña es compatible con la administración oral y, por lo tanto, proporcionar un alivio adicional a la intervención intravenosa frecuente.

Alternar entre ERT y SMT, o complementar SMT con ERT según sea necesario, proporciona una estrategia para aprovechar simultáneamente las virtudes y resolver las debilidades asociadas con cada terapia cuando se usa sola. Una ventaja de ERT, ya sea si se usa para reducir el volumen y/o para atención a largo plazo, es la experiencia clínica mucho más amplia disponible para que el médico tome decisiones informadas. Además, se puede valorar eficazmente a un sujeto con ERT durante la fase de reducción de volumen, por ejemplo, al monitorizar los metabolitos bioquímicos en la orina u otras muestras corporales o al medir el volumen del órgano afectado. Una desventaja de ERT, sin embargo, es la frecuencia de administración necesaria, que típicamente implica una inyección intravenosa semanalmente o bisemanalmente dada la constante reacumulación del sustrato. El uso de terapia de molécula pequeña para reducir la cantidad de o inhibir la acumulación de sustrato en un paciente, a su vez, puede reducir la frecuencia de administración de ERT. Por ejemplo, se puede ofrecer a un régimen de dosificación de terapia de reemplazo enzimático bisemanalmente un "descanso de ERT" (p. ej., al usar una SMT) para que las inyecciones frecuentes de enzima no sean una terapia necesaria. Además, el tratamiento de una enfermedad de almacenamiento lisosómico con terapia de combinación puede proporcionar propuestas terapéuticas complementarias. De hecho, una terapia de combinación de SMT y ERT puede proporcionar mejoras significativas a cualquier plataforma terapéutica sola. Ver la publicación internacional núm. WO2012/129084. La terapia de combinación al usar SMT y ERT puede ser aditiva y complementaria. En una realización, la ERT se puede usar como una estrategia de reducción del volumen (es decir, para iniciar el tratamiento), posteriormente o simultáneamente complementada con SMT al usar un compuesto de la presente invención. En otra realización, se trata primero a un paciente con SMT al usar un compuesto de la presente invención, posteriormente o simultáneamente complementada con ERT. En otras realizaciones, se usa una SMT para inhibir o reducir la acumulación adicional de sustrato (o la reacumulación de sustrato si se usa después de la reducción de volumen con ERT) en un paciente con una enfermedad de almacenamiento lisosómica y, opcionalmente, se proporciona ERT según sea necesario para reducir cualquier acumulación adicional de sustrato. En una realización, la presente invención proporciona un método de terapia de combinación para el tratamiento de un sujeto diagnosticado con una enfermedad de almacenamiento lisosómico que comprende alternar entre la administración de una terapia de reemplazo enzimático y una terapia de molécula pequeña. En otra realización, la presente invención proporciona un método de terapia de combinación para el tratamiento de un sujeto diagnosticado con una enfermedad de almacenamiento lisosómico que comprende administrar simultáneamente una terapia de reemplazo enzimático y una terapia de molécula pequeña. En las diversas terapias de combinación de la invención, se entenderá que la administración de la terapia de molécula pequeña se puede producir antes de, simultáneamente con, o después de, la administración de la terapia de reemplazo enzimático. De manera similar, la administración de la terapia de reemplazo enzimático se puede producir antes de, simultáneamente con, o después de, la administración de la terapia de molécula pequeña.

En cualquiera de las realizaciones de la invención, la enfermedad de almacenamiento lisosómico es enfermedad de Fabry.

Además, la ERT proporciona una cantidad eficaz de al menos una de las siguientes enzimas; glucocerebrosidasa, esfingomielinasa, ceramidasa, GM1-gangliósido-beta-galactosidasa, hexosaminidasa A, hexosaminidasa B, betagalactocerebrosidasa, alfa-L-iduronidasa, iduronato sulfatasa, heparán-N-sulfatasa, N-acetil-alfa-glucosaminidasa, acetil CoA:alfa-glucosaminida acetil-transferasa, N-acetil-alfa-glucosamina-6-sulfatasa, galactosamina-6-sulfatasa, beta-galactosidasa, galactosamina-4-sulfatasa (arilsulfatasa B), beta-glucuronidasa, arilsulfatasa A, arilsulfatasa C, alfa-neuraminidasa, N-acetil-glucosamina-1-fosfato transferasa, alfa-galactosidasa A, alfa-N-acetilgalactosaminidasa, alfa-glucosidasa, alfa-fucosidasa, alfa-manosidasa, aspartilglucosamina amidasa, lipasa ácida, palmitoil-proteína tioesterasa (CLN-1), PPT1, TPP1, CLN3, CLN5, CLN6, CLN8, NPC1 o NPC2 .

Según la invención, la SMT y/o la ERT producen una disminución en al menos uno de los siguientes materiales almacenados; glucocerebrósido, esfingomielina, ceramida, GM1-gangliósido, GM2-gangliósido, globosida, galactosilceramida, sulfato de dermatán, sulfato de heparán, sulfato de queratán, sulfatidas, mucopolisacáridos, sialiloligosacáridos, glicoproteínas, sialiloligosacáridos, glicolípidos, globotriaosilceramida, glicopéptidos enlazados a O, glucógeno, ácido siálico libre, fucoglicolípidos, fucosiloligosacáridos, manosiloligosacáridos, aspartilglucosamina, ésteres de colesterilo, triglicéridos, depósitos osmófilos granulares - Saposinas A y D, ATP sintasa subunidad c, NPC1 o NPC2.

En ciertas realizaciones de la invención, la terapia de molécula pequeña comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)carbamato de (S)-quinuclidin-3-ilo:

En otras realizaciones, la terapia de molécula pequeña comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de (2-(4'-fluoro[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)carbamato de quinuclidin-3-ilo:

La terapia de molécula pequeña puede incluir administrar a un sujeto uno o más compuestos. En ciertas realizaciones, al menos uno de los compuestos es un compuesto de la presente invención, tal como (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)carbamato de (S)-quinuclidin-3-ilo y/o (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)carbamato de quinuclidin-3-ilo.

La terapia de reemplazo enzimático puede provocar respuestas inmunitarias indeseadas. Por consiguiente, se pueden usar agentes inmunosupresores junto con un componente de terapia de reemplazo enzimático de una terapia de combinación de la invención. Dichos agentes también se pueden usar con un componente de terapia de molécula pequeña, pero la necesidad de intervención aquí es generalmente menos probable. Se puede emplear cualquier agente inmunosupresor conocido por el experto en la técnica junto con una terapia de combinación de la invención. Dichos agentes inmunosupresores incluyen, pero no se limitan a, ciclosporina, FK506, rapamicina, CTLA4-Ig y agentes anti-TNF tales como etanercept (ver, p. ej. Moder, 2000, Ann. Allergy Asthma Immunol. 84, 280-284; Nevins, 2000, Curr. Opin. Pediatr. 12, 146-150; Kurlberg et al., 2000, Scand. J. Immunol. 51, 224-230; Ideguchi et al., 2000, Neuroscience 95, 217-226; Potteret al., 1999, Ann. N.Y. Acad. Sci. 875, 159-174; Slavik et al., 1999, Immunol. Res.

19, 1-24; Gaziev et al., 1999, Bone Marrow Transplant. 25, 689-696; Henry, 1999, Clin. Transplant. 13, 209-220; Gummert et al., 1999, J. Am. Soc. Nephrol. 10, 1366-1380; Qi et al., 2000, Transplantation 69, 1275-1283). El anticuerpo anti-receptor de IL2 (subunidad .alfa.) daclizumab (p. ej., Zenapax.TM.), que se ha demostrado que es eficaz en pacientes con trasplante, también se puede usar como agente inmunosupresor (ver, p. ej. Wiseman et al., 1999, Drugs 58, 1029-1042; Beniaminovitz et al., 2000, N. Engl. J. Med. 342, 613-619; Ponticelli et al., 1999, Drugs R. D. 1,55-60; Berard et al., 1999, Pharmacotherapy 19, 1127-1137; Eckhoff et al., 2000, Transplantation 69, 1867-1872; Ekberg et al., 2000, Transpl. Int. 13, 151-159). Los agentes inmunosupresores adicionales incluyen, pero no se limitan a, anti-CD2 (Branco et al., 1999, Transplantation 68, 1588-1596; Przepiorka et al., 1998, Blood 92, 4066-4071), anti-CD4 (Marinova-Mutafchieva et al., 2000, Arthritis Rheum. 43, 638-644; Fishwild et al., 1999, Clin. Immunol. 92, 138 152) y anti-ligando de CD40 (Hong et al., 2000, Semin. Nephrol. 20, 108-125; Chirmule et al., 2000, J. Virol. 74, 3345 3352; Ito et al., 2000, J. Immunol. 164, 1230-1235).

Se puede emplear cualquier combinación de agentes inmunosupresores conocidos por el experto en la técnica junto con una terapia de combinación de la invención. Una combinación de agente inmunosupresor de utilidad particular es tacrolimus (FK506) más sirolimus (rapamicina) más daclizumab (anticuerpo anti-subunidad alfa del receptor de IL2). Está comprobado que está combinación es eficaz como una alternativa a los esteroides y la ciclosporina, y cuando se dirige específicamente al hígado. Además, recientemente se mostró que esta combinación permite hacer trasplantes satisfactorios de células de islotes pancreáticos. Ver Denise Grady, The New York Times, sábado, 27 de mayo de 2000, páginas A1 y A11. Ver también A. M. Shapiro et al., Jul. 27, 2000, "Islet Transplantation In Seven Patients With Type 1 Diabetes Mellitus Using A Glucocorticoid-Free Immunosuppressive Regimen", N. Engl. J. Med. 343, 230-238; Ryan et al., 2001, Diabetes 50, 710-719. También se puede usar plasmaféresis mediante cualquier método conocido en la técnica para retirar o agotar anticuerpos que se pueden desarrollar contra varios componentes de una terapia de combinación.

Los indicadores del estado inmunitario que se pueden usar con la invención incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos y cualquiera de las citocinas conocidas para el experto en la técnica, p. ej., las interleucinas, CSF e interferones (ver generalmente, Leonard et al., 2000, J. Allergy Clin. Immunol. 105, 877-888; Oberholzer et al., 2000, Crit. Care Med.

28 (4 Compl.), N3-N12; Rubinstein et al., 1998, Cytokine Growth Factor Rev. 9, 175-181). Por ejemplo, los anticuerpos específicamente inmunorreactivos con la enzima de reemplazo se pueden monitorizar para determinar el estado inmunitario del sujeto. Entre las aproximadamente dos docenas de interleucinas conocidas, los indicadores del estado inmunitario particularmente preferidos son IL-1.alfa., IL-2, IL-4, IL-8 e IL-10. Entre los factores estimulantes de colonias (CSF, por sus siglas en inglés), los indicadores de estado inmunitario particularmente preferidos son G-CSF, GM-CSF y M-CSF. Entre los interferones, uno o más alfa, beta o gama interferones se prefieren como indicadores del estado inmunitario.

En las secciones a continuación, se proporcionan varios componentes que se pueden usar para ocho enfermedades de almacenamiento lisosómico específicas (es decir, Gaucher (incluidos los tipos 1, 2 y 3), Fabry, Niemann-Pick B, Hunter, Morquio, Maroteaux-Lamy, Pompe y Hurler-Scheie). En las secciones posteriores, se proporciona una descripción más completa de los componentes de la terapia de reemplazo enzimático y terapia de molécula pequeña de una terapia de combinación de la invención.

Gaucher

Según se indicó anteriormente, la enfermedad de Gaucher es causada por la deficiencia de la enzima glucocerebrosidasa (beta-D-glucosil-N-acilesfingosina glucohidrolasa, EC 3.2.1.45) y la acumulación de glucocerebrósido (glucosilceramida). Para un componente de la terapia de reemplazo enzimático de una terapia de combinación de la descripción para el tratamiento de la enfermedad de Gaucher, existen varias referencias disponibles que establecen regímenes de dosificación satisfactorios y otra información útil relacionada con el tratamiento (ver Morales, 1996, Gaucher's Disease: A Review, The Annals of Pharmacotherapy 30, 381-388; Rosenthal et al., 1995, Enzyme Replacement Therapy for Gaucher Disease: Skeletal Responses to Macrophage-targeted Glucocerebrosidase, Pediatrics 96, 629-637; Barton et al., 1991, Replacement Therapy for Inherited Enzyme Deficiency--Macrophage-targeted Glucocerebrosidase for Gaucher's Disease, New England Journal of Medicine 324, 1464-1470; Grabowski et al., 1995, Enzyme Therapy in Type 1 Gaucher Disease: Comparative Efficacy of Mannoseterminated Glucocerebrosidase from Natural and Recombinant Sources, Annals of Internal Medicine 122, 33-39; Pastores et al., 1993, Enzyme Therapy in Gaucher Disease Type 1: Dosage Efficacy and Adverse Effects in 33 Patients treated for 6 to 24 Months, Blood 82, 408-416); y Weinreb et al., Am. J. Med.;113(2):112-9 (2002).

En una realización de la descripción, se proporciona un régimen de dosificación de ERT de 2,5 unidades por kilogramo (U/kg) tres veces a la semana hasta 60 U/kg una vez cada dos semanas, donde la enzima se administra por infusión intravenosa durante 1-2 horas. Una unidad de glucocerebrosidasa se define como la cantidad de enzima que cataliza la hidrólisis de un micromol del sustrato sintético para-nitrofenil-p-D-glucopiranósido por minuto a 37 °C. En otra realización de la descripción, se proporciona un régimen de dosificación de 1 U/kg tres veces a la semana hasta 120 U/kg una vez cada dos semanas. En todavía otra realización de la descripción, se proporciona un régimen de dosificación de 0,25 U/kg diarios o tres veces a la semana hasta 600 U/kg una vez cada dos a seis semanas.

Desde 1991, ha estado disponible alglucerasa (Ceredase®) de Genzyme Corporation. La alglucerasa es una forma modificada de glucocerebrosidasa derivada de la placenta. En 1994, también se lanzó imiglucerasa (Cerezyme®) de Genzyme Corporation. La imiglucerasa es una forma modificada de glucocerebrosidasa derivada de la expresión de ADN recombinante en un sistema de cultivo celular de mamífero (células de ovario de hámster chino). La imiglucerasa es una glicoproteína monomérica de 497 aminoácidos que contiene cuatro sitios de glicosilación enlazados por N. La imiglucerasa tiene las ventajas de un suministro teóricamente ilimitado y una posibilidad reducida de contaminantes biológicos con respecto a la aglucerasa derivada de placenta. Estas enzimas están modificadas en sus sitios de glicosilación para exponer residuos manosa, una maniobra que mejora el direccionamiento lisosómico a través del receptor de manosa-6-fosfato. La imiglucerasa difiere de la glucocerebrosidasa de placenta en un aminoácido en la posición 495 donde la histidina está sustituida por arginina. Se conocen varios regímenes de dosificación eficaces de estos productos (ver Morales, 1996, Id.; Rosenthal et al., 1995, Id.; Barton et al., 1991, Id.; Grabowski et al., 1995, Id.; Pastores et al., 1993, Id.). Por ejemplo, un régimen de dosificación de 60 U/kg una vez cada dos semanas proporciona beneficio clínico a sujetos con enfermedad moderada a grave. Las referencias citadas anteriormente y los prospectos del envase para estos productos deben ser consultados por el médico experto para acceder a información adicional sobre el régimen de dosificación y la administración. Ver también las patentes estadounidenses núms. 5.236.838 y 5.549.892 asignada a Genzyme Corporation.

Según se indicó anteriormente, la enfermedad de Gaucher surge de una deficiencia de la enzima glucocerebrosidasa (GC) lisosómica. En el fenotipo más común de la enfermedad de Gaucher (tipo 1), la patología se limita a los sistemas reticuloendotelial y esquelético y no hay síntomas neuropáticos. Ver Barranger, Glucosylceramide lipidosis: Gaucher disease. En: Scriver CR BA, Sly WS, Valle D, editor. The Metabolic Basis of Inherited Disease. Nueva York: McGraw-Hill. pp. 3635-3668 (2001). En la enfermedad de Gaucher neuropática (nGD, por sus siglas en inglés), subdividida en enfermedad de Gaucher tipo 2 y tipo 3, la deficiencia de glucocerebrosidasa (GC) provoca que la glucosilceramida (GluCer; GL-1) y la glucosilesfingosina (GluEsf) se acumulen el cerebro, lo que conduce a una alteración neurológica. La enfermedad de Gaucher tipo 2 se caracteriza por aparición temprana, progresión rápida, patología extensa en las vísceras y el sistema nervioso central, y muerte habitualmente a los 2 años de edad. La enfermedad de Gaucher tipo 3, también conocida como nG D subaguda, e s un fenotipo intermedio con edad de aparición variable y diferentes grados de gravedad y velocidades de progresión. G o ker-A lpan et al., T h e Journal of Pediatrics 143 : 273 -276 (2003). Un desarrollo reciente ha producido el modelo de ratón K 14 lnl/lnl de la enferm edad de G a u ch e r tipo 2 (denom inado de a q u í en adelante, el "ratón K14"); este modelo de ratón se a sem eja estrecham ente con la enferm edad hum ana que m uestra ataxia, crisis epilépticas, espasticidad y una m ediana de esp eran za de vida reducida de solo 14 d ías. Enquist et al., P N A S 104 : 17483 -17488 (2007).

Com o en los pacientes con nG D , varios m odelos de ratón de la enferm edad tienen niveles aum entados de G lu C e r y G lu Sp h en el cerebro debido a la deficiencia de la actividad de G C . Liu et al., P N A S 95: 2503 -2508 (1998) y N ilsson, J. Neurochem 39: 709 -718 (1982). Los ratones "K14" exhiben un fenotipo neuropático que comparte m uchas ca racterísticas patológicas con la enferm edad de G a u ch e r tipo 2, tales como la neurodegeneración, la astrogliosis, la proliferación microglial y niveles m ayores de G lu C e r y G lu Sp h en regiones cerebrales e sp ecíficas. Enquist et al. (2007).

El tratamiento clínico de pacientes afectados por n G D plantea un desafío para los m édicos tratantes debido tanto a la gravedad de la enferm edad de tipo 2 como a la incapacidad de las terapias actuales de cruzar la barrera hem atoencefálica (BH E). El tratamiento actual de no n G D se b a sa en el sum inistro intravenoso de glucocerebrosidasa hum ana recombinante (Im iglucerase; C e re z y m e ™ ) para reem plazar la enzim a faltante o la adm inistración de inhibidores de glucosilceram ida sin tasa para atenuar la producción de sustrato (G L -1) . S in em bargo, estos fárm acos no cruzan la barrera hem atoencefálica y, por lo tanto, no se esp era que proporcionen beneficio terapéutico a pacientes con nG D . No e s probable que los inhibidores de glucosilceram ida sintasa de m olécula pequeña actuales traten en la c lín ica los fenotipos neuropáticos de nG D . U n a evaluación de un com puesto de la presente invención, (2-(4'-fluoro-[1,1'-b ifenil]-3-il)pro pan-2-il)carbam ato de quinuclidin-3-ilo (de a q uí en adelante, "G z161"), en el modelo de ratón K 14 de la enferm edad de G a u ch e r tipo 2 demostró que, de hecho, podría reducir G lu C e r y G lu Sp h en el cerebro. V e r los Ejem plos 122 -125 de la publicación internacional núm. W O 2012 /129084. Tam bién redujo la neuropatología cerebral y extendió la esp eran za de vida de este modelo. A dem ás, una propuesta com binada al u sar el reem plazo enzim ático y la reducción de sustrato con m olécula pequeña puede representar una terapia superior para la enferm edad de G a u ch e r tipo 2.

Fabry

Según se indicó anteriormente, la enferm edad de Fabry e s ca u sa d a por la deficiencia de la enzim a a lfa-g alactosidasa A lisosóm ica. El defecto enzim ático conduce al depósito sistém ico de glucoesfingolípidos que tienen restos alfagalactosilo term inales, predominantemente globotriaosilceram ida (G L3 o G b3) y, en menor m edida, galabiosilceram ida y glucoesfingolípidos de grupo sang uíneo B.

Existen varios e n sayo s disponibles para monitorizar la progresión de la enferm edad y para determ inar cuándo cam biar de una modalidad de tratamiento a otra. En una realización, se puede u sar un ensayo para determ inar la actividad e sp e cífica de alfa -g alacto sid asa A en una muestra de tejido. En otra realización, se puede u sar un ensayo para determ inar la acum ulación de G b 3. En otra realización, el médico puede som eter a en sayo el depósito de sustratos de glucoesfingolípido en fluidos corporales y en lisosom as de cé lu las va sc u la re s endoteliales, periteliales y de m úsculo liso de v a so s sang uíneos. Otras m anifestaciones c lín icas que pueden se r indicadores útiles del tratamiento de la enferm edad incluyen la proteinuria, u otros signos de alteración renal tales como eritrocitos o glóbulos lipídicos en la orina y ta sa de sedim entación de eritrocitos e levada. Tam bién se puede monitorear la anem ia, la concentración de hierro en suero dism inuid, la concentración alta de beta-tromboglobulina y recuentos de reticulocitos o aglom eración plaquetaria e levado s. De hecho, se puede u sar cualquier propuesta para monitorizar la progresión de la enferm edad conocida para el experto en la técnica (Ver, generalm ente, D esn ick RJ et al., 1995, a lp h a-G ala cto sid a se A Deficiency: Fabry D isease, En: Th e Metabolic and M olecular B a se s of Inherited D isease, Scriver et al., eds., M cGraw -H ill, N .Y., 7.sup.th ed., páginas 2741-2784 ). Un m arcador sustituto preferido e s el dolor para monitorizar el tratamiento de la enferm edad de Fabry. Otros métodos preferidos incluyen la medición del aclaram iento total de la enzim a y/o sustrato de un fluido corporal o m uestra de biopsia. Un régimen de dosificación preferido para la terapia de reem plazo enzim ático en la enferm edad de Fabry e s 1 - 10 mg/kg i.v. ca d a dos d ías. S e puede u sar un régimen de dosificación de 0,1 a 100 mg/kg i.v. con una frecuencia de ca d a dos d ía s a una vez a la sem ana o cad a dos sem anas.

N iem an n -P ick B

Según se indicó anteriormente, la enferm edad de N iem ann-Pick B es causad o por la actividad reducida de la enzim a esfingom ielinasa ácida lisosóm ica y la acum ulación de lípido de m em brana, principalm ente esfingom ielina. Una dosificación eficaz de reem plazo de esfingo m ielinasa ácida para sum inistrar puede variar de aproxim adam ente 0,01 mg/kg a aproxim adam ente 10 mg/kg de peso corporal en una frecuencia de ca d a dos d ía s a sem analm ente, una vez ca d a dos sem a na s o una vez cad a dos m eses. En otras realizacio nes de la descripción, una dosificación eficaz puede variar de aproxim adam ente 0,03 mg/kg a aproxim adam ente 1 mg/kg; de aproxim adam ente 0,03 mg/kg a aproxim adam ente 0,1 mg/kg; y/o de aproxim adam ente 0,3 mg/kg a aproxim adam ente 0,6 mg/kg. En una realización particular de la descripción, se adm inistra a un paciente esfingo m ielinasa ácida en un régimen de dosificación escalonado en la siguientes dosis se cu en cia les: 0,1 mg/kg; 0,3 mg/kg; 0,6 mg/kg; y 1,0 mg/kg, en donde cad a dosis de esfingom ielinasa ácida se adm inistra al m enos dos veces, y ca d a dosis se adm inistra en intervalos de dos sem anas, y en donde se monitoriza al paciente para detectar efectos secundarios tóxicos antes de e levar la dosis hasta el siguiente nivel (ver la publicación de solicitud de patente estadounidense núm. 2011/0052559.

H urler-Scheie (M PS I)

La enferm edad de Hurler, S ch e ie y H urler-Scheie, también conocida como M PS I, e s ca u sa d a por la inactivación de alfa-iduronidasa y la acum ulación de sulfato de derm atán y sulfato de heparán. Existen varios e n sayo s disponibles para monitorizar la progresión de la enferm edad M PS I. Por ejem plo, la actividad de la enzim a alfa-iduronidasa se puede monitorizar en m uestras de biopsia de tejido o cé lu las cultivadas obtenidas de sangre periférica. A dem ás, una m edida conveniente de la progresión de la enferm edad en M P S I y otras m ucopolisacaridosis e s la excreción urinaria del glicosam inoglicanos sulfato de dermatán y sulfato de heparán (ver Neufeld et al., 1995, Id.). En una realización particular de la descripción, la enzim a alfa-iduronidasa se adm inistra una vez a la sem ana como una infusión intravenosa en una dosificación de 0,58 mg/kg de peso corporal.

Hunter (M PS II)

La enferm edad de Hunter (también conocida como M PS II e s ca u sa d a por la inactivación de la iduronato sulfatasa y la acum ulación de sulfato de derm atán y sulfato de heparán. La enferm edad de Hunter se presenta clínicam ente en form as grave y leve. S e prefiere un régimen de dosificación de la enzim a terapéutica de 1,5 mg/kg ca d a dos sem anas a 50 mg/kg ca d a sem ana.

Morquio (M PS IV)

El síndrom e de Morquio (también conocido como M PS IV) surge por la acum ulación de sulfato de queratán debido a la inactivación de cualquiera de dos enzim as. En M PS IVA, la enzim a inactivada e s galacto sam ina-6 -sulfatasa y en M P S IVB la enzim a inactivada e s beta-galactosidasa. S e prefiere un régimen de dosificación de la enzim a terapéutica de 1,5 mg/kg cad a dos se m a n a s a 50 mg/kg ca d a sem ana.

M aroteaux-Lam y (M PS VI)

El síndrom e de M aroteaux-Lam y (también conocido como M P S VI) e s causad o por la inactivación de alacto sam ina-4-sulfatasa (arilsulfatasa B) y la acum ulación de sulfato de dermatán. Un régimen de dosificación de 1,5 mg/kg cad a dos sem a na s a 50 mg/kg ca d a sem a na e s un rango preferido de enzim a terapéutica eficaz proporcionada mediante E R T . De m anera óptima, la dosificación em pleada es menor o igual que 10 mg/kg por sem ana. Un m arcador sustituto preferido para la progresión de la enferm edad M PS VI son los niveles de roteoglicano.

Pompe

La enferm edad de Pom pe e s causad o por la inactivación de la enzim a a lfa -g luco sid asa ácida y la acum ulación de glucógeno. El gen de a lfa -g luco sid asa ácida reside en el crom osom a humano 17 y se designa G A A . H. G . H ers propuso por prim era vez el concepto de enferm edad lisosóm ica congénita en función de sus estudios de esta enferm edad, a la que denom inaba glucogenosis tipo II (G S D II) y que ahora también se denom ina deficiencia de m altasa ácida (AMD) (ver Hers, 1965, Gastroenterology 48, 625). En una realización particular de la descripción, la G A A se adm inistra cad a 2 se m a n a s como una infusión intravenosa en una dosificación de 20 mg/kg de peso corporal.

Existen varios en sayo s disponibles para monitorizar la progresión de la enferm edad de Pom pe. S e puede u sar cualquier ensayo conocido por el experto en la técnica. Por ejem plo, se puede som eter a ensayo la acum ulación intralisosóm ica de gránulos de glucógeno, particularmente en fibras de m iocardio, hígado y m úsculo esquelético obtenidas por biopsia. La actividad de la enzim a a lfa -g luco sid asa también se puede monitorizar en m uestras de biopsia o cé lu las cultivadas obtenidas de sangre periférica. La elevación en suero de creatina c in a sa (CK , por sus sig las en inglés) se puede monitorizar como una indicación de la progresión de la enferm edad. La C K sérica puede estar elevada hasta diez ve ce s en pacientes con aparición infantil y habitualmente está e levad a en menor grado en pacientes con aparición en la edad adulta. V e r Hirschhorn R, 1995, G lycogen Storage D ise ase Type II: Acid a lp ha-g luco sidase (Acid M altase) Deficiency, En: T h e Metabolic and M olecular B a se s of Inherited D isease, Scriver et al., eds., M cGraw -H ill, N .Y., 7.sup.th ed., pág inas 2443-2464.

Te ra p ia de reem plazo enzim ático

La s siguientes seccio n es establecen una descripción e sp ecífica y realizacio nes alternativas disponibles para el com ponente de terapia de reem plazo enzim ático de una terapia de com binación de la invención. Generalm ente, el médico con experiencia determ ina los regím enes de dosificación generalm ente para un com ponente de terapia de reem plazo enzim ático de una terapia de com binación de la invención. S e proporcionan varios ejem plos de regím enes de dosificación para el tratamiento de la enferm edad de G a u ch e r con glucocerebrosidasa. Los principios generales para determ inar un régimen de dosificación para un com ponente de E R T dado de una terapia de com binación de la invención para el tratamiento de cualquier L S D serán evidentes para el experto en la técnica a partir de la información disponible públicam ente, tal como, por ejemplo, una revisión de las referencias esp e cíficas citadas en las secciones para ca d a L S D específica. Una E R T se puede adm inistrar a un paciente mediante infusión intravenosa. La infusión intracerebroventricular e/o intratecal se puede u sar (p. ej., adem ás de infusión intravenosa) para adm inistrar E R T a un paciente diagnosticado con una enferm edad de alm acenam iento lisosóm ico que tiene m anifestaciones en el S N C .

Cualquier método conocido en la técnica se puede usar para la fabricación de las enzimas usadas en un componente de terapia de reemplazo enzimático de una terapia de combinación de la invención. Muchos de dichos métodos se conocen e incluyen, pero no se limitan a, la tecnología Gen Activation desarrollada por Shire plc (ver las patentes estadounidenses núms. 5.968.502 y 5.272.071).

Terapia de molécula pequeña

La siguiente sección también establece descripciones específicas y realizaciones alternativas disponibles para el componente de terapia de molécula pequeña de una terapia de combinación de la invención. El médico generalmente determina los regímenes de dosificación para un componente de terapia con molécula pequeña de la terapia de combinación de la invención y se espera que varíen significativamente dependiendo de la enfermedad de almacenamiento particular que se va a tratar y el estado clínico del individuo afectado particular. Los principios generales para determinar un régimen de dosificación para un componente de SMT dado de cualquier terapia de combinación de la invención para el tratamiento de cualquier enfermedad de almacenamiento son conocidos para el experto en la técnica. Se puede obtener orientación sobre los regímenes de dosificación a partir de cualquiera de las muchas referencias conocidas en la técnica sobre este tema. Se encuentra orientación adicional disponible, in te r a lia , en una revisión de las referencias específicas citadas en la presente memoria.

Generalmente, los compuestos de la presente invención, tales como, por ejemplo, (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)carbamato de (S)-quinuclidin-3-ilo y (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)carbamato de quinuclidin-3-ilo se pueden usar en las terapias de combinación de la descripción para el tratamiento de prácticamente cualquier enfermedad de almacenamiento que surge de una lesión en la vía de los glucoesfingolípidos (p. ej., Gaucher, Fabry, GM¹-gangliosidosis y GM²-gangliosidosis (p. ej., deficiencia del activador de GM2, Tay-Sacs y Sandhoff)). Asimismo, se pueden usar aminoglucósidos (p. ej., gentamicina, G418) en las terapias de combinación de la descripción para cualquier enfermedad de almacenamiento individual que tiene una mutación en el codón de terminación prematura (es decir, mutación de terminación). Dichas mutaciones son particularmente prevalentes en el síndrome de Hurler. Un componente de terapia de molécula pequeña de una terapia de combinación de la descripción se prefiere particularmente cuando hay una manifestación del sistema nervioso central en la enfermedad de almacenamiento que se va a tratar (p. ej., Sandhoff, Tay-Sachs, Niemann-Pick Tipo A y Gaucher tipo 2 y 3), dado que las moléculas pequeñas pueden cruzar generalmente la barrera hematoencefálica con facilidad en comparación con otras terapias.

El experto en la técnica determina fácilmente las dosificaciones preferidas de inhibidores de sustrato usadas en la terapia de combinación de la invención. En ciertas realizaciones, dichas dosificaciones pueden variar de aproximadamente 0,5 mg/kg a aproximadamente 300 mg/kg, preferiblemente, de aproximadamente 5 mg/kg a aproximadamente 60 mg/kg (p. ej., 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15, mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, 55 mg/kg y 60 mg/kg) mediante administración intraperitoneal, oral o equivalente de una a cinco veces al día. Dichas dosificaciones pueden variar de aproximadamente 5 mg/kg a aproximadamente 5 g/kg, preferiblemente, de aproximadamente 10 mg/kg a aproximadamente 1 g/kg mediante administración oral, intraperitoneal o equivalente de una a cinco veces al día. En una realización, las dosis varían de aproximadamente 10 mg/día a aproximadamente 500 mg/día (p. ej., 10 mg/día, 20 mg/día, 30 mg/día, 40 mg/día, 50 mg/día, 60 mg/día, 70 mg/día, 80 mg/día, 90 mg/día, 100 mg/día, 110 mg/día, 120 mg/día, 130 mg/día, 140 mg/día, 150 mg/día, 160 mg/día, 170 mg/día, 180 mg/día, 190 mg/día, 200 mg/día, 210 mg/día, 220 mg/día, 230 mg/día, 240 mg/día, 250 mg/día, 260 mg/día, 270 mg/día, 280 mg/día, 290 mg/día, 300 mg/día). Un rango de dosis oral particularmente preferido es de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 100 mg, en donde la dosis se administra dos veces al día. Un rango de dosis oral particular para un compuesto de la presente invención es de aproximadamente 5 mg/kg/día a aproximadamente 600 mg/kg/día. En un rango de dosis oral particular para un compuesto de la presente invención es de aproximadamente 1 mg/kg/día a aproximadamente 100 mg/kg/día, p. ej., 1 mg/kg/día, 5 mg/kg/día, 10 mg/kg/día, 15 mg/kg/día, 20 mg/kg/día, 25 mg/kg/día, 30 mg/kg/día, 35 mg/kg/día, 40 mg/kg/día, 45 mg/kg/día, 50 mg/kg/día, 55 mg/kg/día o 60 mg/kg/día, 65 mg/kg/día, 70 mg/kg/día, 75 mg/kg/día, 80 mg/kg/día, 85 mg/kg/día, 90 mg/kg/día, 95 mg/kg/día o 100 mg/kg/día.

Se prefiere una combinación rotativa de plataformas terapéuticas (es decir, terapia de reemplazo enzimático y molécula pequeña). Sin embargo, también se puede tratar a sujetos mediante la superposición de ambas propuestas, según sea necesario, como lo determina el médico experto. Los ejemplos de pautas de tratamiento pueden incluir, pero no se limitan a: (1) SMT y posteriormente ERT; (2) ERT y posteriormente SMT; y (3) ERT y SMT proporcionadas aproximadamente al mismo tiempo. Según se indicó anteriormente, la superposición temporal de plataformas terapéuticas se puede llevar a cabo también, según sea necesario, dependiendo de la evolución clínica de una enfermedad de almacenamiento dada en un sujeto dado.

Los intervalos de tratamiento paras varias terapias de combinación pueden variar ampliamente y pueden ser generalmente diferentes entre diferentes enfermedades de almacenamiento y diferentes individuos dependiendo de cuán agresivamente se acumulan los productos de almacenamiento. Por ejemplo, la acumulación del producto de almacenamiento de Fabry puede ser lenta en comparación con la rápida acumulación de producto de almacenamiento en Pompe. La valoración de una enfermedad de almacenamiento particular en un individuo particular la lleva a cabo el experto en la técnica al monitorizar los signos clínicos de la progresión de la enfermedad y el éxito del tratamiento.

La s d iversas m acrom oléculas que se acum ulan en enferm edades de alm acenam iento lisosóm ico no están distribuidas uniformemente, sino que se depositan, en cam bio, en ciertos sitios anatóm icos preferidos para ca d a enferm edad. Sin em bargo, una enzim a sum inistrada exógenam ente e s captada generalm ente por las cé lu las del sistem a reticuloendotelial y c lasificad a h a c ia el compartimiento lisosóm ico donde actúa para hidrolizar el sustrato acum ulado. A dem ás, la captación celu lares de enzim a terapéutica se puede aum entar mediante ciertas m aniobras para aum entar el direccionam iento lisosóm ico (ver, p. ej., la patente estadounidense núm. 5.549.892 de Friedm an et al., asig nad a a G enzym e Corporation, que describe g lucocerebro sidasa recombinante que tiene mejor farm acocinética en virtud de ca d e n as laterales de oligosacárido rem odeladas reconocidas por receptores de m anosa de superficie celu lar que son endocitosadas y transportadas h a c ia lisosom as).

A lg unas m odalidades de tratamiento se dirigen a algunos órganos afectados mejor que a otros. En Fabry, por ejemplo, si la E R T no a lcan za el riñón o el corazón de m anera suficiente para un d esen lace clín ico satisfactorio, se puede usar S M T para reducir los niveles de sustrato en dichos tejidos. S e ha mostrado que la S M T puede reducir de m anera eficaz los niveles de G b 3 (es decir, el sustrato acum ulado en pacientes con Fabry) en la orina de un modelo de ratón con Fabry en m ayor m edida que la E R T . V e r la publicación internacional núm. W O 2012 /129084 , que se incorpora en la presente m em oria en su totalidad por referencia. S e cree que los riñones son la principal fuente de G b 3 en la orina. En cam bio, la E R T redujo de m anera eficaz los niveles de G b 3 en el p lasm a en m ayor m edida que la SM T. V e r la publicación internacional núm. W O 2012 /129084. Por lo tanto, una terapia de com binación de E R T y S M T proporciona una estrategia terapéutica com plem entaria que aprovecha las virtudes y resuelve las debilidades a so cia d as con cada terapia em pleada sola. La S M T e s ca p az de cruzar la B H E , lo que proporciona una propuesta poderosa, cuando se com bina con E R T , para tratar las L S D que tienen m anifestaciones en el S N C , tales como Niem ann Pick Tipo A y la enferm edad de G a u ch e r neuropática (nGD). A dem ás, la reducción del sustrato mediante S M T com binada con el reem plazo enzim ático resuelven el problem a de alm acenam iento en puntos de intervención separados y distintos, lo que puede m ejorar el desen lace clínico.

S e entenderá que la referencia a la adm inistración sim ultánea o concomitante de dos o m ás terapias no requiere que se administren al mismo tiempo, apenas que actúen en el sujeto al mism o tiempo.

EJEMPLOS

S e apreciará que la invención no debe interpretarse como limitada a los ejem plos que se describen ahora.

Ejemplo 1: Generación de iPSC de FD

P ara generar líneas de cé lu las madre pluripotentes inducidas ( iP S C ) a partir de pacientes con enferm edad de Fabry (FD), se usaron fibroblastos cutáneos de dos m uchachos ca u c á sico s sintom áticos afectados por FD . A m bos pacientes no tenían actividad detectable de a -g a la cto sid asa A (a -G a l A). Un donante, de 10 años, era hemicigótico para un único cam bio de nucleótido en el gen G L A exón 3 (G 485A). El segundo donante, de 17 años, era hemicigótico para un único cam bio de nucleótido en el gen G L A exón 5 (C658T). C a d a una de las m utaciones introduce un codón de terminación (W 162 X y R 220 X ) y se sabe que están aso cia d as con la presentación grave c lá s ic a de FD . V e r A ltarescu GM . et al., C lin . Genet. 60:46-51 (2001); G erm ain DP. et al., Mol. Med. 8 :306 -12 (2002); M eaney C . et al., Hum. Mol. Genet.

3 :1019 -20 (1994); y Maki N. et al., C lin . Nephrol. 61 :185 -90 (2004).

S e usó un único casete policistrónico que codifica los cuatro factores de reprogram ación, Oct4, Sox2, Klf4 y c-M yc, en un lentivirus, para generar m ás de 40 clones de iP S C para am bas m uestras. La s cé lu las iP S C se caracterizaron para verificar la cualidad de pluripotentes y la extinción de la expresión de los factores de reprogram ación (no se muestran los datos). S e necesita globotriaosilceram ida (G L-3) en este tipo de célu la pluripotente. S in em bargo, no se detectó acum ulación de G L -3 en iP S C con Fabry m antenidas en fase de multiplicación exponencial incluso d esp ués de varios m eses en cultivo (análisis inm unohistológicos, m icroscopía electrónica y espectrom etría de m asas, no se muestran los datos). A unque estas célu las producen G L -3 y son incap aces de degradarla (deficiencia de a -G a l A) m ientras se dividen rápidam ente, la dilución de G L -3 puede producirse durante d ivisiones su ce siva s y co m pensar la s íntesis de G L -3 , lo que protege de este modo a las cé lu las contra la acum ulación de G L -3.

Ejemplo 2: Capacidad para generar cardiomiocitos derivados de iPSC con Fabry

S e usó un protocolo de diferenciación ca rd ía ca con adición secuencial de cócteles de citocina en condiciones hipóxicas para generar cuerpos em brioides (EB) con latidos espontáneos que contienen una población enriquecida de cardiom iocitos que aparecen 10 -16 d ía s d esp ués del inicio de la diferenciación. To d as las iP S C e valu ad as (17 líneas) fueron ca p a ce s de generar EB con latidos. Tre s de las iP S C de los dos pacientes se seleccionaron para un a nálisis adicional del fenotipo de los cardiom iocitos derivados de iP S C con Fabry: G 485 A -10, G 485 A -56 y C 658 T -4. El fenotipo se com paró con el de cardiom iocitos derivados de iP S naturales (W T) generados en las m ism as condiciones en el laboratorio.

S e usó una propuesta inm unohistológica para caracterizar y cuantificar las cé lu las en los E B con latidos. Un mes d esp u és del inicio de la diferenciación, se tomaron E B y se agregaron fibroblastos de ratón (M EF) para tener E B bien a islad o s en el bloque de parafina y para facilitar la m anipulación de las m uestras durante la inclusión, corte y montaje en el portaobjetos de cristal. S e usaron anticuerpos dirigidos contra va ria s proteínas contráctiles c a rd ía ca s tales como actina, m iosionas, troponinas o a -actin in a para identificar los cardiom iocitos contenidos en los E B con latidos. Al igual que en los EB W T , m ás del 90 % de las cé lu las expresan niveles altos de proteínas contráctiles c a rd ía ca s diferentes (Figura 1A ). Estos resultados indican que el "origen Fabry'' de las cé lu las no afecta la capacidad de las iP S C con Fabry para generar cardiom iocitos de m anera eficaz.

Ejemplo 3: Fenotipo de Fabry

S e disociaron y colocaron en p lacas de cultivo E B con latidos de un m es para generar aglom eraciones b idim ensionales pequeñas de cé lu las o ca p as de cé lu las sim ples. Cuatro a siete d ía s d esp ués de ponerlas en p lacas, las cé lu las se analizaron para estudiar la organización de las fibras contráctiles en m ayor detalle y la posible acum ulación de G L -3.

En cardiom iocitos derivados iP S C W T , todas las proteínas contráctiles e valu ad as están presentes y organizadas funcionalm ente. La s fibras contráctiles se orientan en el e je longitudinal y ocupan el volum en total de las cé lu las (Figura 1B ). En los cardiom iocitos derivados de iP S C con Fabry, las proteínas contráctiles también están presentes y organizadas funcionalm ente en fibras, pero estas fibras son m enos num erosas y, para una parte significativa de las célu las, están localizadas en la periferia, cerca de la m em brana plasm ática (Figura 1B ). Este resultado sugiere que parte de las fibras contráctiles no fueron ca p a ce s de organizarse en las cé lu las de Fabry durante la diferenciación ca rd ía ca o desparecieron cuando avanzó el fenotipo de Fabry y se impidió que las fibras restantes ocuparan el centro de la célula. Este fenotipo e s muy sim ilar al ya descrito en las b iopsias de corazón de FD donde exám enes de m icroscopía electrónica ultraestructurales revelaron un desplazam iento frecuente de miofibrillas c a rd ía ca s hacia la periferia de la célu la debido a inclusiones citoplasm áticas y áreas focales de lisis miofibrillar y degradación del miofilamento con productos de degradación de troponina I. Chim enti C . et al., Am. J. Pathol. 172 :1482 -1490 (2008).

El estudio inm unocitológico (IC C ) con un anticuerpo dirigido contra G L -3 indicó que había una acum ulación de esfingolípidos en las cé lu las de FD (Figura 2A). La G L -3 pareció estar m ás e levada en cé lu las que tienen vacuo las observables durante el exam en m icroscópico con cam po claro (Figuras 2B). La señal generada por el anticuerpo co nsistía en una multitud de puntos d ispersos en el citoplasm a. La coexpresión de la proteína contráctil de fibra ca rd ía ca y G L -3 se verificó y demostró que los cardiom iocitos derivados de iP S C de FD tienen G L -3 acum ulada un m es d esp ués del inicio del protocolo de diferenciación (Figura 2C ).

Tam bién se usó una propuesta de IC C para dem ostrar que la G L -3 acum ulada se localiza en los compartimientos lisosóm icos, como en cé lu las de un paciente con FD . S e usaron anticuerpos dirigidos a G L -3 y proteína de m em brana aso cia d a con lisosom a 2 (L A M P 2/C D 107b ), un m arcador de glicoproteína de las m em branas de los lisosom as. Las se ñ ale s de fluorescencia g eneradas por los dos anticuerpos proporcionaron una tinción punteada con una densidad m ás alta cerca de los núcleos y con una densidad dism inuida cerca de la m em brana citoplasm ática. Cuand o se unificaron, las dos señ ales se superpusieron y demostraron que la acum ulación y alm acenam iento de G L -3 se produjeron en estructuras lisosóm icas (Figura 2D).

Este resultado se confirmó mediante caracterización por m icroscopía electrónica de los cardiom iocitos de FD . Los EB derivados desde iP S C con Fabry y W T contenían cé lu las con grado variable de diferenciación de cardiomiocito como se evidenció mediante las siguientes características: miofibrillas ( 1 -2 pm de ancho) organizadas en sarcóm eros con bandas Z prom inentes; abundante sarcoplasm a rico en glucógeno; y m uchas m itocondrias y uniones intercelulares, incluidos desm o som as y uniones de esp acio (estructuras sim ilares a d isco s intercaladas). Los cardiom iocitos en EB de Fabry contenían inclusiones de alm acenam iento de sustrato lisosóm ico (Figura 3). E stas inclusiones de 700-800 nm de diámetro fueron sim ilares a las estructuras lam eladas o en forma de cebolla, denom inadas cuerpos cebra, típ icas de la acum ulación de G L -3 en cé lu las de un paciente con Fabry. Elleder et al., V irchow s Arch. A Pathol. Anat. Histopathol. 417 :449 -455 (1990).

A dem ás, los E B que tenían 16, 23, 30 y 45 d ías, los E B desde el inicio de la diferenciación de cardiom iocitos se analizaron para determ inar su contenido de G L -3 mediante espectrom etría de m asas. El contenido de G L -3 se determinó al cuantificar nueve isoform as de G L -3 distintas y norm alizar los niveles de G L -3 total con respecto a fosfatidilcolina (P C) total para cad a repetición. Debido a que la P C es uno de los principales com ponentes de la m em brana celular, su cantidad no debería variar mucho en cé lu las v ivas. Cuand o estos valores se promediaron para todos los clones en ca d a punto de tiempo, se observó una acum ulación de G L -3 durante el transcurso del tiempo (Figura 4). A la segunda sem a na de diferenciación, la cantidad de G L -3 ca si se duplicó. A la tercera sem ana, los EB de Fabry tienen un aumento de 5,5 v e ce s de G L -3 en com paración con el testigo natural. Al d ía 30, tenían un aumento de aproxim adam ente 11 a 12 v e ce s del contenido de G L -3. Dos sem a na s d esp ués (día 45), la cantidad de G L -3 no fue significativam ente diferente. Debido a que los cardiom iocitos dejan de dividirse una vez que com ienzan a latir, estos resultados indican que la G L -3 se acum uló rápidamente cuando las cé lu las ya no se dividían ni diluían el esfingolípido presente en las cé lu las secundarias. No se observó globotriaosilesfingosina (liso -G L -3) (no se muestran los datos). En general, el a ná lis is basado en espectrom etría de m a sas respalda los resultados de IC C y m uestran que la G L -3 se acum ula en E B de Fabry.

Ejemplo 4: Terapia de reducción de sustrato

S e evaluó G C S 452 [(2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il) carbam ato de (S)-quinuclidin-3-ilo], un inhibidor de g lucosilceram ida sintasa selectivo, para determ inar su potencial para prevenir la acum ulación de G L -3 en cardiom iocitos derivados de iP S C con Fabry. Los E B se trataron dieciocho d ía s d esp ués de la inducción de la diferenciación cardíaca. En este punto de tiempo, la acumulación fue baja en los cardiomiocitos de FD (Figura 4). Los cardiomiocitos de FD y WT se trataron con 1pM de GCS452 durante l5 días. Mientras los cardiomiocitos de FD sin tratar mostraron un aumento de 12 a 15 veces de GL-3 en comparación con WT, los niveles de GL-3 en células de FD tratadas fueron cercanos a los niveles fisiológicos de células WT sin tratar. Estos resultados sugieren que GCS452 puede prevenir la acumulación adicional de GL-3 y podría servir para mejorar los niveles abundantes de esfingolípidos en los cardiomiocitos de FD (Figura 5A).

A continuación, se determinó si el compuesto podría reducir los niveles de GL-3 acumulada cuando había acumulación significativa de GL-3 presente en el inicio del tratamiento (Figura 4). Se trataron veintiocho EB con latidos después del inicio de la diferenciación con 1pM de GCS452 durante 15 días. Los EB se disociaron y colocaron en placas al final del tratamiento y se llevó a cabo análisis de ICC. Se observó una reducción significativa del etiquetado con GL-3 en las células tratadas, hasta prácticamente la desaparición de las señales punteadas características de la acumulación de esfingolípidos (Figura 5C). De manera interesante, se observó una disminución concomitante en la intensidad de la señal de Lamp2, lo que sugiere que el nivel elevado de Lamp2 en cardiomiocitos de FD sin tratar se debe a la acumulación de GL-3 y que la mayoría de los lisosomas contenía predominantemente GL-3. La reducción de GL-3 en EB de Fabry tratados se confirmó mediante espectrometría de masas. Mientras hubo un aumento de 13 a 18 veces de GL-3 en cardiomiocitos de FD sin tratar en comparación con WT, los niveles de GL-3 aumentaron 4,5 a 5,5 veces en cardiomiocitos de FD tratados después de 15 días de tratamiento con GCS452. Esto corresponde a una reducción de 2,3 a 2,8 veces en la GL-3 acumulada en comparación con los niveles de GL-3 en el punto de inicio (T0) del tratamiento (Figura 5B).

El examen con microscopía electrónica de los EB reveló inclusiones de almacenamiento raras a relativamente escasas en EB de Fabry tratados en comparación con EB sin tratar en dos puntos de tiempo diferentes (18 y 28 días después del inicio de la diferenciación). Los EB naturales tratados o sin tratar no mostraron inclusiones de almacenamiento de sustrato (no se muestran los datos).

En paralelo, se investigó si la agalsidasa beta podría aclarar la GL-3 acumulada en cardiomiocitos con Fabry de un mes. Los EB se trataron con 0,3 pg/mL de agalsidasa beta durante 5 días y se analizó el contenido de GL-3 como se describió para GCS452. No se detectaron vacuolas de GL-3 en cardiomiocitos con Fabry tratados al usar ICC (Figura 5C). El aclaramiento completo se confirmó mediante espectrometría de masas. Los cardiomiocitos con Fabry tratados presentaron una reducción de 6,4 a 18 veces en los niveles de GL-3 en comparación con células con Fabry sin tratar, lo que fue similar al nivel cardiomiocitos naturales sin tratar (Figura 5B).

Ejemplo 5: Electrofisiología de cardiomiocitos derivados de Fabry

Se colocaron en placas cardiomiocitos derivados de iPSC de un mes sobre los electrodos de una MicroElectrode Array (MEA; Figura 6A) para investigar la señal eléctrica asociada con la actividad contráctil de las células. En cardiomiocitos derivados de iPSC naturales, la señal eléctrica es estable y reproducible a lo largo del tiempo (Figura 6B). Se observó electrofisiología alterada con alta frecuencia, arritmias o modificación esporádica de la intensidad de la señal sin modificación del ritmo en células de Fabry (Figura 6C).

Se observa la electrofisiología de cardiomiocitos con Fabry después del tratamiento con agalsidasa beta para determinar si los cardiomiocitos pueden recuperar la actividad funcional natural después del aclaramiento de GL-3.

Ejemplo 6: Dosis más bajas de agalsidasa beta y GCS452

Se tratan cardiomiocitos de 18 y 30 días con 2 dosis de GCS452 (0,1 pM y 1 pM) durante 15 días. Los cardiomiocitos de 30 días se tratan con 2 dosis de agalsidasa beta (0,3 pg/ml y 3 pg/ml de agalsidasa beta) durante 5 días. Se usa espectrometría de masas para evaluar la GL-3 contenida en las células.

Ejemplo 7: Aclaramiento de GL-3 después de 6 semanas de tratamiento con GCS452

Se tratan cardiomiocitos derivados de iPSC con Fabry de veintiocho días con 1 pM de GCS452 durante 6 semanas. Se usa espectrometría de masas para evaluar la GL-3 contenida en las células.

Resultados

La deficiencia de alfa-galactosidasa A en pacientes con Fabry es el resultado de la acumulación progresiva de GL-3 celular en una variedad de tipos celulares, incluidas células endoteliales vasculares y cardiomiocitos en el corazón. Ver Aerts et al., PNAS USA 105:2812-2817 (2008). Si bien la ERT con agalsidasa beta aclara de manera eficaz los depósitos de GL-3 en la microvasculatura en el corazón, no tiene efecto sobre la acumulación de GL-3 en cardiomiocitos. Ver Thurberg B.L. et al, Circulation 119:2561-2567 (2009). Dado que no se observa acumulación de GL-3 en los cardiomiocitos de ratón con Fabry, es deseable desarrollar un sistema in vitro humano relevante para estudiar la patología del cardiomiocito en FD que podría usarse para estudiar estrategias terapéuticas alternativas para la acumulación de GL-3. Ver Ohshima T. et al., PNAS 96:2540-2544 (1997).

Se han descrito varios protocolos para diferenciar células madre embrionarias (ESC, por sus siglas en inglés) humanas en cardiomiocitos con latidos. Sin embargo, dichos protocolos utilizan ESC no patogénicos normales que no son adecuados para estudiar las alteraciones específicas de la enfermedad asociadas con afecciones tales como FD. En 2007, Takahashi K. et al., Cell 131:861-872 (2007) notificaron sobre la generación de células similares a ESC humanas, denominadas células madre pluripotentes inducidas (iPSC), al reprogramar células terminalmente diferenciadas. Como resultado de este hallazgo, se pueden generar líneas iPSC a partir de pacientes y con protocolos apropiados se pueden usar para generar células diferenciadas que exhiben fenotipos específicos de la enfermedad. Al usar esta propuesta, se generaron varias líneas de iPSC al usar fibroblastos de dos pacientes sintomáticos con FD que portan diferentes mutaciones de inactivación en el gen GLA que se sabe que están asociadas con el fenotipo clásico de la enfermedad (Ver Altarescu GM. et al., Clin. Genet. 60:46-51 (2001); Germain DP. et al., Mol. Med. 8:306-12 (2002); Meaney C. et al., Hum. Mol. Genet. 3:1019-20 (1994); y Maki N. et al., Clin. Nephrol. 61:185-90 (2004)). La capacidad para generar cardiomiocitos con latidos a partir de líneas iPSC testigo y derivadas de Fabry fue similar donde más de 90 % de las células que expresaron proteínas de fibras contráctiles cardíacas. Por lo tanto, parece que la inactivación de GLA no afecta significativamente la capacidad de reprogramar fibroblastos en iPSC o la capacidad de diferenciar estas células en cardiomiocitos.

La acumulación de GL-3 en cardiomiocitos derivados de iPSC se evaluó al usar tres métodos complementarios: inmunohistoquímica con anticuerpos antiCD77/GL-3, LC/MS cuantitativa y microscopía electrónica. En función de la evaluación cuantitativa mediante LC/MS, los niveles de GL-3 celular aumentan a medida que las iPSC se diferencian de células pluripotentes a cardiomiocitos permanentes. Al finalizar la diferenciación celular, los niveles de GL-3 en cardiomiocitos derivados de Fabry fueron más de 10 veces más altos que los observados en cultivos testigo. El aumento de GL-3 en cardiomiocitos derivados de iPSC con FD se confirmó mediante inmunohistoquímica con un anticuerpo anti-CD77/GL-3 que reveló tinción punteada dentro del citoplasma colocalizada con un marcador lisosómico, LAMP2. El examen ultraestructural mediante microscopía electrónica confirmó las características estructurales típicas de cardiomiocitos maduros y demostró la presencia de inclusiones de almacenamiento densas con electrones (cuerpos cebra) en cultivos derivados de iPSC con FD.

A pesar de la acumulación de GL-3, las células derivadas de iPSC con FD expresaron varios marcadores clásicos de cardiomiocitos maduros, incluida la proteína contráctil a-actinina. Sin embargo, a diferencia de las células testigo donde las fibras contráctiles se extienden a lo largo del eje longitudinal de manera organizada, las fibras fueron generalmente menos numerosas en cardiomiocitos derivados de iPSC con FD de un mes y a menudo se hallaron en la periferia de la célula cerca de la membrana plasmática. Esta desorganización de las fibras contráctiles puede deberse a la presencia de lisosomas cargados con lípidos agrandados en los cardiomiocitos con FD que desplazan a las fibras del centro de la célula.

Los cambios fenotípicos observados en cardiomiocitos enfermos fueron reproducibles y similares en células generados a partir de ambas líneas de iPSC de pacientes con Fabry. Dado que estas células albergan diferentes mutaciones de inactivación en el gen GLA, el fenotipo probablemente es el resultado de una falta de actividad enzimática de agalactosidasa en cardiomiocitos diferenciados. De manera importante, la acumulación lisosómica de GL-3 y la desorganización de fibras contráctiles observadas en cardiomiocitos derivados de iPSC con FD se parece estrechamente a la patología de los miocitos cardíacos descrita en biopsias de pacientes con Fabry. Ver Chimenti C. et al., Am. J. Pathol. 172:1482-1490 (2008).

Dadas las fuertes similitudes fenotípicas con la enfermedad humana, los cardiomiocitos derivados de iPSC con Fabry se usaron para evaluar los efectos de ERT y SRT sobre la acumulación de GL-3 celular. La adición de agalsidasa beta a cardiomiocitos derivados de iPSC causó el aclaramiento de GL-3, lo que indica que la enzima recombinante es capaz de acceder y aclarar el sustrato lisosómico en células cultivadas. Este hallazgo sugiere que la incapacidad aparente de agalsidasa beta para aclarar la GL-3 de cardiomiocitos en pacientes con Fabry no se debe a un defecto inherente en la actividad enzimática en los cardiomiocitos. Sin embargo, los niveles de GL-3 en cardiomiocitos derivados de iPSC cultivados podrían ser menores que los observados en tejido cardíaco de pacientes con Fabry, dada la naturaleza crónica de la enfermedad y la falta de recambio celular de cardiomiocitos in vivo. Se notificaron reducciones modestas en la masa ventricular izquierda en pacientes con Fabry tratados con agalsidasa beta, lo que sugiere un impacto positivo del reemplazo enzimático sobre el almacenamiento de GL-3 en cardiomiocitos. Ver Weidemann F. et al., Circulation 108:1299-301 (2003) y Germain D. et al., Genetic and Medicine 23:1-8 (2013). Sin embargo, dado que se usó un método visual semicuantitativo para cuantificar GL-3 microscópicamente en biopsias cardíacas, es concebible que el método no fuera suficientemente sensible para observar cambios limitados en el almacenamiento.

La terapia de reducción de sustrato (SRT) es una propuesta alternativa que tiene el fin de reducir la síntesis de GL-3 al inhibir la GCS, la enzima que limita la velocidad en la síntesis de glucoesfingolípidos. En el modelo de ratón de Fabry, se ha mostrado que los inhibidores de GCS reducen los niveles de GL-3 en plasma, orina y tejidos. Ver Marshall J. et al., PLos One 5:e15033 (2010). Para determinar si los inhibidores de GCS pueden reducir los niveles de GL-3 en cardiomiocitos, se evaluaron los efectos de la inhibición de GCS sobre los niveles de GL-3 celular, al comienzo de la acumulación de GL-3 o cuando ya hay un almacenamiento significativo de GL-3 presente en cardiomiocitos derivados de iPSC con Fabry. La adición del inhibidor de GCS a cultivos de cardiomiocitos no tuvo efecto sobre viabilidad. Sin embargo, la acumulación marcada de GL-3 que se produce entre el día 18 y día 33 en cultivos de cardiomiocitos sin tratar se evitó mediante la inhibición de GCS. De manera importante, en cardiomiocitos de un mes que tenían un almacenamiento significativo de GL-3 en el inicio el tratamiento, mantener a las células en cultivo durante dos semanas en presencia del inhibidor de GCS dio como resultado una reducción mayor que 50 % del almacenamiento de GL-3, según se mide mediante LC/MS, así como una disminución correspondiente en el contenido de GL-3/LAMP2. Esta observación en cardiom iocitos e s bastante incitante ya que sugiere que existen v ía s alternativas para el aclaram iento de G L -3 y que e s posible reducir los niveles de G L -3 en cé lu las ca rd ía ca s perm anentes. S e debe trabajar adicionalm ente para explorar los m ecanism o s independientes de alfa -g alacto sid asa de aclaram iento de G L -3 desde estas célu las, pero las v ía s catabólicas alternativas o la d esca rg a de sustrato desde la célu la son am bas á reas de interés.

Com o tal, en la presente m em oria se describe la generación satisfactoria de cardiom iocitos derivados de iP S C con enferm edad de Fabry. Estos cardiom iocitos con FD tienen características fenotípicas que se parecen a las ca racterísticas patológicas a so cia d as con la enferm edad. Este modelo in vitro se puede u sar para explorar tanto los m ecanism o s patógenos de las m anifestaciones card íaco s en la enferm edad de Fabry, a s í como las posibles estrategias para la intervención terapéutica. Con respecto a estas últim as, los datos anteriores indican que tanto la a g a ls id a sa beta como la inhibición de G C S tienen un impacto positivo sobre el alm acenam iento de G L -3 en cardiom iocitos. Dados los datos in vitro prometedores con la inhibición de G C S en este modelo de la enferm edad y su m ecanism o de acción distinto, la S R T proporciona una propuesta alternativa o com plem entaria a la E R T para el tratamiento de m anifestaciones c a rd ía ca s de la enferm edad de Fabry.

Los resultados notificados en la presente mem oria se obtuvieron al u sar los siguientes métodos y m ateriales. Cultivo de fibroblastos

Los dos fibroblastos de Fabry no transform ados hum anos G M 00107 y G M 00881, estaban disponibles com ercialm ente y se obtuvieron de Coriell Institute for M edical R esearch. Son de dos pacientes de sexo m asculino afectados clínicam ente. Para el clon G M 00107, el paciente es hemicigótico para un cam bio G > A en el nucleótido 485 en el exón 3 del gen G L A (c.485G >A ), que da como resultado un codón de term inación (W 162X ). La edad del muestreo fue 10 años. P ara el clon G M 00881, el sujeto e s hemicigótico para un cam bio C > T en el nucleótido 658 en el exón 5 del gen G L A (c.658 C >T), que da como resultado un codón de term inación (R 220 X ). La edad del m uestreo fue 17 años. Los fibroblastos se descongelaron y cultivaron según las recom endaciones del Coriell Institute en MEM (Gibco, Carlsb ad , C A ) con 1 x MEM de am inoácidos no ese n cia le s (Gibco, Carlsb ad , C A ), 1x de Penicilina-Estreptom icina (Gibco, Carlsb ad , C A ) y suero fetal bovino al 15 % , 37 °C , C O 2 al 5 % .

Generación de iPSC

S e usó el kit de reprogram ación de lentivirus policistrónico constitutivo extirpable por C re S T E M C C A hum ano (OKSM ) (Millipore, Billerica, MA) para generar la iP S C con Fabry. Este vector incluye los factores de transcripción de reprogram ación Oct-4, Klf4, S O X -2 y c-M yc. El kit se usó según las recom endaciones del proveedor. El d ía 0, los fibroblastos se sem braron a la densidad óptima. En los d ía s 1 y 2, se infectaron con el virus. En el d ía 6, las célu las infectadas se colocaron en p lacas sobre fibroblastos alim entadores hum anos (H FF, por su s sig las en inglés) y se cultivaron en DMEM inactivado (Gibco, Carlsb ad , CA ), K O S R al 20 % (Gibco, Carlsb ad , CA ), 1x penicilinaestreptom icina (Gibco, Carlsb ad , CA ), 1x G lutam ax (G ibco, Carlsb ad , C A ), 10m M 2-m ercaptoetanol (Gibco, Carlsb ad , CA ), com plem entado con 12 ng/mL de F G F -2 (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach). La s colonias se iP S C sem analm ente se sometieron a p ase s m anualm ente durante el período de selección y expansión. S e llevó a cabo un pase de C o la g e n a sa IV (S T E M C E L L , Palo Alto, C A ) para generar un lote de iP S C para la diferenciación card íaca. Diferenciación cardíaca de iPSC hum ana

S e usó un protocolo de diferenciación 3D adaptado de Y ang L. et al., Nature 453 :524 -528 (2008) para generar cardiom iocitos derivados de iP S C . Durante los prim eros doce d ías, las cé lu las se mantuvieron en condiciones hipóxicas (oxígeno al 5 % ) y C O ²al 5 % . Las cé lu las d esp ués se cultivaron en am biente con aire y C O 2 al 5 % para com pletar la diferenciación. El medio inicial usado consistió en Stem Pro 34 SFM (Gibco, Carlsb ad , C A ), complemento de nutrientes (Gibco, Carlsb ad , CA ), 0,5 ng/mL de BM P4 (R&D System s, M inneapolis, MN), G lutam ax (Gibco, C arlsb ad , C A ) y 1x penicilina-estreptom icina (Gibco, Carlsb ad , CA ), com plem entado con diferentes cócteles de citocinas a lo largo del tiempo.

El d ía 0, los cultivos de iP S C de se is d ía s se trataron 45 minutos con co la g en asa IV (S T E M C E L L , Palo Alto, C A ). Las colonias flotantes se transfirieron y mantuvieron durante 7 d ía s en p lacas de cultivo de acoplam iento ultra bajo (Corning, Lowell, MA) para generar cuerpos em brioides (EB). D esde el d ía 1 al d ía 4, se agregaron 10 ng/m L de BMP4, 6 ng/mL de b F G F y 3 ng/m L de activina A (R&D System s, M inneapolis, MN) al medio inicial, y d esp u és se reem plazaron por 150 ng/m L de D K K 1 (Peprotech, Rocky Hill, NJ) y 10 ng/ml de V E G F (R&D System s, M inneapolis, MN) desde el d ía 4 al 8. El d ía 7, los EB se colocaron en p lacas recubiertas con matrigel (BD B io sciences, Franklin Lakes, NJ). D esde el d ía 8 al d ía 16, el medio inicial se complementó con 10 ng/m L de V E G F , 150 ng/mL de D K K 1 y 6 ng/m L de b F G F . A continuación, los cardiom iocitos se mantuvieron en el medio basal.

Inm unohistoquím ica (IHC)

S e recogieron los EB con latidos de un m es y se agregaron fibroblastos de ratón para facilitar la m anipulación de las m uestras durante la inclusión, corte y montaje en el portaobjetos de cristal. La s m uestras se fijaron en una disolución de disolución form alina al 3 ,7 % en sa lin a tam ponada con fosfato, d esp ués se deshidrataron y se em bebieron en parafina. S e prepararon seccio n es de 5 gm de espesor. S e llevó a cabo IH C c lá s ic a al u sar el instrumento automático Ventana (D iscovery X T , V entana M edical System s, Inc, Oro Valle y, A Z). S e quitó la cera de las seccio n es y se aplicó primero tampón de acondicionam iento celu lar 1 ( C C 1 ) para recuperación de antígeno (Ventana M edical System s, Inc, Oro V alley, A Z) durante 36 minutos. A continuación, las m uestras se incubaron con los anticuerpos prim arios durante 1 hora a 37 °C , posteriormente mediante glutaraldehído posfijación. Para la detección, se aplicaron anticuerpos secundarios biotinilados durante 32 minutos a tem peratura ambiente. La inmunotinción se detectó mediante D AB Map Kit (Ventana M edical System s, Inc, Oro V alley, A Z) que dio un color marrón.

Para todas las inm unotinciones, las seccio n es posteriormente se contratiñeron con Hem atoxilina durante 4 minutos y reactivo azulante durante 4 minutos (Ventana M edical System s, Inc, Oro V alley, A Z). Los portaobjetos teñidos se deshidrataron y cubrieron con cytoseal X Y L (R ichard-A llan Scientific, Kalam azoo, Michigan).

Los anticuerpos prim arios usado s fueron el anticuerpo monoclonal Ig G 1 de ratón dirigido contra a-A ctina, en la dilución final 1/200 (Lifespan, Providence, RI), el anticuerpo monoclonal Ig G 2b de ratón dirigido contra Troponina 1, en la dilución final 1/500 (Millipore, Billerica, MA) y el policlonal de conejo anti a -Actinina, en la dilución final 1/50 (Lifespan, Providence, RI) y los anticuerpos secundarios usad o s fueron de cabra biotinilado anti-IgG 1 de ratón, (Southern Biotech, Birm ingham , AL), de cabra biotinilado anti- IgG de ratón, (Jackson Im m unoresearch Laboratories, W est Grove, PA) de cabra anti-inm unoglobulina de conejo (IgG) (Jackson Im m unoresearch Laboratories, W est Grove, PA), respectivam ente. Los anticuerpos secundarios se agregaron en la dilución final 1/200.

Inm unocitoquím ica (ICC)

Los E B con latidos de un m es se recogieron y disociaron al u sar el kit de disociación de cuerpo embrioide (Miltenyi Biotech, Bergisch G ladbach). Las cé lu las d iso ciad as se colocaron en p lacas recubiertas con matrigel. C inco d ías después, las cé lu las se fijaron al u sar disolución de form aldehído al 8 % (Sigm a-A ldrich, St. Louis, MO) en D P B S (Gibco, Carlsb ad , CA ) y se perm eabilizaron en Tw een 20 al 0,05 % (Sigm a Life S cien ce, St. Louis, MO) 20 minutos a temperatura ambiente.

La s m uestras se incubaron con los anticuerpos prim arios durante la noche a 4 °C . Los anticuerpos secundarios se aplicaron una hora a temperatura ambiente.

Los anticuerpos prim arios usado s fueron monoclonal IgG1 de ratón dirigido contra - Actinina, en la dilución final 1 /1500 (Sigm a Life S cien ce, St. Louis, MO), monoclonal IgM de ratón dirigido contra G L -3 /C D 77 , en la dilución final 1/300 (Abcam , Cam bridge, E E . UU.) y monoclonal IgG 1 de ratón dirigido contra LA M P2, en la dilución final 1/500 (Santa C ruz Biotechnology, Dallas, TX ). Los anticuerpos secundarios fueron A lexa Fluor 488 de cabra anti-IgG de ratón (M olecular Probes, Carlsb ad , C A ) A lexa Fluor 555 de cabra anti-IgG de ratón (M olecular Probes, Carlsb ad , C A ) y A lexa Fluor 488 de cabra anti-IgG de rata (M olecular Probes, C arlsb ad , CA ). S e usaron en la dilución final 1/1000. M icroscopía electrónica

Los E B con latidos de un m es se fijaron en glutaraldehído al 3 % en 0,2M tampón de cacodilato (Electron M icroscopy S c ie n ce s, Hatfield, PA) y se posfijaron en tetróxido de osm io al 1 % y em bebieron en resina epon. La s secciones sem idelgadas (1 micra) se tiñeron con tinte de Richardson y se exam inaron mediante m icroscopio óptico. Las seccio n es ultradelgadas (60-80 nm) se tiñeron con uranil-acetato y se exam inaron con un m icroscopio electrónico de transm isión J E O L JE M -M 00 (JE O L U SA , Inc., Peabody, MA).

Espectrom etría de masas

Los gránulos que contenían E B se extrajeron en una disolución de acetonitrilo:metanol (1 :1) . Los extractos se inyectaron directam ente en una colum na 2 ,1 x 100m m , 1,7 pM B E H Hilic (Waters), se resolvieron con un sistem a W aters Acquity U P L C y se analizaron para detectar las isoform as de G L -3 C 16 , C 18 , C 20 , C 22 , C 23 , C 24 , C 24 :1, C 24 (O H ) y C 24 :1(O H ) y lis o -G L -3 en monitorización de múltiple reacción (MRM) y modo de ion positivo con un espectrómetro de m a sas A PI-4000 (A B Sciex, Fram ingham , MA). Los niveles de G L -3 total se cuantificaron al u sar una curva de calibración externa preparada al diluir en serie un estándar de G L -3 natural (Matreya núm. 1067) en la m ism a disolución de extracción. Los extractos se diluyeron adicionalm ente con acetonitrilo y se inyectaron en una colum na 2,0 x 100 mm, 3 pM Luna Hilic (Phenom onex), se resolvieron al u sar un W aters Acquity U P L C y se analizaron para determ inar la fosfatidilcolina (P C) total en modo de ion precursor e ion positivo con un espectrómetro de m a sas A P I-4000. Los niveles de P C total también se determinaron mediante calibración con respecto a una curva de calibración externa preparada al diluir en serie un estándar de P C natural (Matreya núm. 1044). Los niveles de G L -3 total se norm alizaron con respecto a los niveles de P C total para cad a muestra.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un com puesto para usar en un método para tratar la acum ulación de globotriaosilceram ida (G L-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enferm edad de Fabry, en donde la adm inistración del compuesto inhibe la acum ulación de G L -3 en un cardiomiocito del sujeto, en donde dicho com puesto se representa mediante la siguiente fórmula estructural,

o una sal o profármaco farm acéuticam ente aceptable de este, en donde:

n e s 1, 2 o 3;

m es 0 o 1 ;

p e s 0 o 1;

t e s 0, 1 o 2;

y es 1 o 2;

z es 0, 1 o 2;

E e s S , O, NH, N OH, N N O ², N CN , N R, N O R o N S O ²R;

X 1 es C R 1 cuando m es 1 o N cuando m es 0;

X 2 es O, -N H , -C H ²-, S O ², N H -S O ²;CH alquilo (C ¹- C ⁶) o -N R 2;

X 3 es O, -N H , -C H ²-, C O , -C H alq u ilo (C ¹- C ⁶), S O ²NH, -C O -N H - o -N R 3;

X 4 es C R 4R 5, C H ²C R 4R 5 o C H ²-alquilo ( C r C 6 ) -C R 4R 5;

X 5 es una unión directa, O, S , S O ², C R 4R 5; a lq u ilo (C ¹- C ⁶), alquiloxi(C ¹- C ⁶), a lquenilo(C ¹- C ⁶), a lqueniloxi(C ¹- C ⁶); R e s arilo(C ⁶- C ¹²), heteroarilo(C2-C9), a lq u ilo (C ¹- C ⁶), heteroarilo(C2-C9)alquilo(C1-C6);

R 1 es H, C N , a lquilcarbonilo(C ¹- C ⁶) o a lq u ilo (C ¹- C ⁶);

R 2 y R 3 son ca d a uno independientem ente -H , a lq u ilo (C ¹- C ⁶) opcionalm ente sustituido por uno o m ás sustituyentes seleccio nados del grupo que consiste en halógeno, a lq u ilo (C ¹- C ⁶), arilo(C ⁶- C ¹²), heteroarilo(C2-C9), a lq u ilo (C ¹-C ⁶)arilo (C ⁶- C ¹²), haloarilo(C ⁶- C ¹²) y haloheteroarilo(C2-C9), u opcionalm ente cuando X 2 es -N R 2 y X 3 es -N R 3, R 2 y R 3 pueden tom arse junto con los átomos de nitrógeno a los que están acoplados para formar un anillo heterocíclico no aromático opcionalm ente sustituido con uno o m ás sustituyentes seleccio nados de halógeno, a lq u ilo (C ¹- C ⁶), arilo(C6-C ¹²), heteroarilo(C2-C9), a lq u ilo (C ¹- C ⁶)arilo (C ⁶- C ¹²), haloarilo(C ⁶- C ¹²) y haloheterarilo(C2-C9);

R4 y R 5 se seleccio nan independientem ente de H, a lq u ilo (C ¹- C ⁶), o se toman junto con el carbono al que están acoplados para formar un anillo cicloalquilo(C3-C10) espiro o anillo cicloalcoxi(C3-C10) espiro;

R 6 e s -H , halógeno, -C N , arilo(C ⁶- C ¹²), ariloxi(C ⁶- C ¹²), a lquiloxi(C ¹- C ⁶); a lq u ilo (C ¹- C ⁶) opcionalm ente sustituido por uno a cuatro halo o a lq u ilo (C ¹- C ⁶);

A 1 es alquinilo(C ²- C ⁶); cicloalquilo(C3-C10), arilo(C ⁶- C ¹²), heteroarilo(C2-C9), heterocicloalquilo(C2-C9) o benzo heterocicloalquilo(C2-C9) opcionalm ente sustituido con uno o m ás sustituyentes seleccio nados del grupo que consiste en halo, a lq u ilo (C ¹- C ⁶) opcionalm ente sustituido por uno a tres halo; a lquenilo(C ¹- C ⁶), amino, a lqu ilam ino (C ¹- C ⁶), d ialquilam ino (C ¹- C ⁶), a lco x i(C ¹- C ⁶), nitro, C N , -O H , a lquiloxi(C ¹- C ⁶) opcionalm ente sustituido por uno a tres halo; a lco xicarbonilo (C ¹- C ⁶) y alquilcarbonilo(C ¹- C ⁶);

A 2 e s H, cicloalquilo(C3-C10), arilo(C ⁶- C ¹²), heteroarilo(C2-C9), heterocicloalquilo(C2-C9) o benzo heterocicloalquilo(C²-C ⁹) opcionalm ente sustituido con uno o m ás sustituyentes seleccio nados del grupo que consiste en halo, a lq u ilo (C ¹ C6) opcionalm ente sustituido por uno a tres halo; a lquenilo(Ci-C6), amino, alquilam ino (Ci-C6), d ialquilam ino(Ci-C6), a lco xi(C i-C 6 ), O(cicloalquilo C ³- C ⁶), cicloalcoxi(C3-C6), nitro, Cn , O H, alquilo xi(C ¹- C ⁶) opcionalm ente sustituido por uno a tres halo; cicloalquilo (C ³- C ⁶), alco xicarbonilo (C ¹- C ⁶), alquilcarbonilo(C ¹- C ⁶), haloalquilo(C ¹- C ⁶);

con la condición de que la sum a de n t y z no se a mayor que 6;

con la condición de que cuando p es 0; X 2 se a N H -S O ²y X 3 s e a NH;

con la condición de que cuando n es 1 ; t es 0; y es 1 ; z e s 1 ; X 2 es NH; E es O; X 3 es NH; A 2 es H; y X 5 es una unión directa; A 1 no s e a fenilo, halofenilo o isopropenil fenilo insustituido;

con la condición de que cuando n es 1 ; t es 0; y es 1 ; z e s 1 ; X 2 es O; E es O; X 3 es NH; A 1 es arilo(C ⁶- C ¹²) y X 5 es una unión directa; A 2 es H y R4 es H entonces R 5 no se a ciclohexilo; y

con la condición de que cuando n es 1 ; t es 0; y e s 1 ; z es 1 ; X 2 es NH; E es O; X 3 es C H ²; R4 y R 5 son am bos hidrógeno; A 2 es H y X 5 es una unión directa; entonces A 1 no se a fenilo insustituido.

2. El com puesto para usar según la reivindicación 1, en donde la adm inistración del com puesto inhibe la acum ulación de G L -3 en el lisosom a del cardiomiocito.

3. El com puesto para usar según la reivindicación 1, en donde la adm inistración del com puesto reduce la acum ulación de G L -3 en un cardiomiocito del sujeto.

4. El com puesto para usar según la reivindicación 3, en donde la adm inistración del com puesto reduce la acum ulación de G L -3 en el lisosom a del cardiomiocito.

5. Un com puesto para usar en un método para tratar la acum ulación de globotriaosilceram ida (G L-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enferm edad de Fabry, en donde la adm inistración del com puesto previene la acum ulación de G L -3 en un cardiom iocito del sujeto, en donde el com puesto e s como se define en la reivindicación 1.

6. El com puesto para usar según la reivindicación 5, en donde la adm inistración del com puesto previene la acum ulación de G L -3 en el lisosom a del cardiomiocito.

7. El com puesto para usar según una cualquiera de las reivindicaciones 1 -6, en donde la adm inistración del com puesto inhibe la actividad de g lucosilceram ida sin tasa (G C S ).

8. Un com puesto para usar en un método para reducir la globotriaosilceram ida (G L-3) en el corazón de un sujeto que padece o está en riesgo de padecer enferm edad de Fabry, en donde los cardiom iocitos del sujeto tienen un aumento de G L -3 en com paración con cardiom iocitos sano s, y en donde la adm inistración del com puesto reduce la G L -3 en los cardiom iocitos, en donde dicho com puesto e s como se define en la reivindicación 1.

9. El com puesto para usar según la reivindicación 8, en donde el aumento de G L -3 está presente en los lisosom as de los cardiom iocitos.

10. El com puesto para usar según la reivindicación 8 o la reivindicación 9, en donde la adm inistración del com puesto reduce la Gl -3 en el lisosom a de los cardiom iocitos.

11. El com puesto para usar según una cualquiera de las reivindicaciones 8 -10 , en donde los cardiom iocitos del sujeto com prenden G L -3 acum ulada.

12. El com puesto para usar según la reivindicación 11, en donde la G L -3 acum ulada está presente en los lisosom as de los cardiom iocitos.

13. El com puesto para usar según una cualquiera de las reivindicaciones 8 -12 , en donde la adm inistración del com puesto inhibe la actividad de g lucosilceram ida sin tasa (G C S ).

14. El com puesto para usar según una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 13 , en donde el com puesto es

o una sal o profármaco farm acéuticam ente aceptable de este.

15. El com puesto para usar según una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 13 , en donde el com puesto es

o una sal o profármaco farm acéuticam ente aceptable de este.