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CN105979945A - 葡糖神经酰胺合酶抑制剂 - Google Patents

葡糖神经酰胺合酶抑制剂 Download PDF

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CN105979945A
CN105979945A CN201480075230.2A CN201480075230A CN105979945A CN 105979945 A CN105979945 A CN 105979945A CN 201480075230 A CN201480075230 A CN 201480075230A CN 105979945 A CN105979945 A CN 105979945A
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Application number
CN201480075230.2A
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J·P·莱纳德
J-F·德勒兹
J-M·伊捷
C·奥尔西尼
G·雷特莱库勒
S·维亚勒
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Genzyme Corp
Original Assignee
Genzyme Corp
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Abstract

本申请涉及葡糖神经酰胺合酶(GCS)抑制剂，其可单独或与酶代替疗法联合用于治疗代谢病例如溶酶体贮积病。

Description

葡糖神经酰胺合酶抑制剂
对相关申请的交叉引用
本申请要求2013年12月11日提交的美国临时专利申请61/914,842的优先权，将其全部内容通过引用的方式并入本申请。
技术领域
本申请大体上涉及针对代谢病的治疗领域。更具体地，本申请涉及葡糖神经酰胺合酶(glucosylceramide synthase,GCS)抑制剂，其可单独或与酶代替疗法联合用于治疗代谢病诸如溶酶体贮积病(lysosomal storage disease)。
发明内容
法布里病(FD)是一种罕见的X-连锁溶酶体贮积障碍，其特征在于由GLA基因编码的酶α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)的活性缺乏。酶缺乏导致糖鞘脂[主要为神经酰胺三己糖苷(GL-3)]在各种细胞类型和组织(包括肾脏、心脏、肝脏、脾脏、皮肤及外周和中枢神经系统)中的进行性细胞内蓄积。
尽管多种器官特异性细胞类型蓄积GL-3且需要着重考虑且不受理论的束缚，但是在毛细血管内皮细胞中的系统性蓄积被认为在以下一般病理过程中发挥主要作用，所述一般病理过程导致疾病的破坏性肾血管、心血管和脑血管临床表现及显著减少的寿命预期。FD是一种进行性障碍，其需要若干年发展成主要在半合子男性中的末期器官衰竭。尽管αGAL基因突变由X染色体携带，但是女性具有范围为无症状至症状与男性患者同样严重的可变表型。FD的初始迹象和症状常常在儿童期开始且通常包括肢体神经性疼痛、少汗、血管角质瘤和胃肠不适。糖鞘脂的进行性蓄积历时数十年损害关键的器官功能，这使患有FD的患者面临发展出肾衰竭、心血管功能障碍和中风的风险。然而，目前明确的是，在心脏和肾脏中的组织损伤诸如纤维化在发生器官衰竭前已经开始。
FD的心脏表现可包括进行性左心室肥大、心律不齐、传导缺陷、瓣膜功能障碍和咽峡炎。随着疾病进展而发展出可导致威胁生命的心脏事件的心肌纤维化。
用重组α-GalA(半乳糖苷酶β和半乳糖苷酶α)进行的酶代替疗法(ERT)代表了唯一获批用于治疗法布里病的疾病特异性治疗措施。已经显示半乳糖苷酶β在所评价的全部组织的毛细血管内皮中、在肾小球膜细胞和间质细胞中持续清除GL-3沉积物并以剂量依赖性方式在足细胞中清除GL-3。相反地，在对接受心脏活组织检查的患者进行治疗5和12个月后，心肌细胞中的GL-3沉积物不能通过半乳糖苷酶β减少，尽管心内膜心肌活组织检查显示出GL-3从间质毛细血管内皮细胞中的有效清除。因此，至今尚未显示出GL-3从法布里病患者的心肌细胞中的清除。
底物减少疗法(SRT)是一种通过抑制葡糖神经酰胺合酶(GCS)减少到达溶酶体的脂质合成的措施，而葡糖神经酰胺合酶为在鞘糖脂合成中的限速酶。由于GL-1用作用于合成更复杂的糖鞘脂的中心构造块(central building block)，使用GCS抑制剂的SRT提供了一种针对其他鞘糖脂病包括法布里病的潜在的治疗策略。
SRT已经在α-Gal A缺陷小鼠(法布里病的鼠模型)中评价，其在各种组织中蓄积GL-3。公开的报道已经显示GCS抑制可在法布里病小鼠的血浆和尿中延迟组织GL-3的蓄积并降低GL-3。然而，GL-3在法布里病小鼠中的细胞分布无法反映出在法布里病患者中所观察到的，这是因为GL-3无法在心肌细胞中蓄积且这些小鼠不能随着年龄发展心脏功能障碍。
因此，需要开发新的疗法以清除在法布里病心肌细胞中的GL-3蓄积。具体地，理想的是开发使用靶标心脏中心肌细胞的小分子的SRT并能够防止心肌细胞中的GL-3蓄积。还需要开发新的法布里病模型以评价治疗候选物对细胞GL3蓄积的作用。
如在实施例中所示，本申请的发明人已经发现本申请进一步描述的葡糖神经酰胺合酶(GCS)的抑制剂能够防止在心肌细胞(例如法布里病诱导的多能干细胞(iPSC)-衍生的心肌细胞)中的GL-3蓄积。本申请因此至少部分基于以下发现，即葡糖神经酰胺合酶(GCS)的抑制剂有效治疗患有鞘糖脂疾病或障碍或面临具有所述疾病或病症的风险的受试者中的心肌细胞。因此，本申请描述了使用GCS抑制剂治疗心肌细胞的方法。本申请还描述了用于治疗心肌细胞的组合物。
在一些方面，本申请提供使用本申请所述的化合物治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法。
在一些方面，本申请提供使用本申请所述的化合物治疗心肌细胞中的代谢病(例如溶酶体贮积病)的方法。
在一些方面，本申请提供使用本申请所述的化合物治疗心肌细胞中的GL-3疾病或障碍的方法。
在一些方面，本申请提供使用本申请所述的化合物治疗心肌细胞中的增加的GL-3的方法。
在一些方面，本申请提供使用本申请所述的化合物治疗心肌细胞中的GL-3蓄积的方法。
在一些实施方案中，鞘糖脂疾病或障碍与在心肌细胞中相比于健康心肌细胞(例如来自健康或非法布里病受试者的心肌细胞)而言增加的神经酰胺三己糖苷(GL-3)相关。在相关的实施方案中，增加的GL-3至少部分存在于心肌细胞的溶酶体中。
在一些实施方案中，给予所述化合物保持(例如防止GL-3水平的进一步增加或防止进一步GL-3蓄积)在心肌细胞中的GL-3水平。在相关的实施方案中，所述化合物保持(例如防止GL-3水平的进一步增加或防止进一步GL-3蓄积)在心肌细胞的溶酶体中的GL-3水平。
在一些实施方案中，给予所述化合物降低在心肌细胞中的GL-3。在相关的实施方案中，所述化合物降低在心肌细胞的溶酶体中的GL-3。
在一些实施方案中，鞘糖脂疾病或障碍与在心肌细胞中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积相关。在相关的实施方案中，GL-3蓄积存在于心肌细胞的溶酶体中。
在一些实施方案中，给予所述化合物抑制在心肌细胞中的GL-3蓄积。在相关的实施方案中，给予所述化合物抑制在心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
在一些实施方案中，给予所述化合物降低在心肌细胞中的GL-3蓄积。在相关的实施方案中，给予所述化合物降低在心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
在一些实施方案中，给予所述化合物防止在心肌细胞中的GL-3蓄积。在相关的实施方案中，给予所述化合物防止在心肌细胞中的GL-3蓄积。
在以上方面和实施方案中，给予所述化合物可抑制葡糖神经酰胺合酶(GCS)活性。
在以上方面和实施方案中，心肌细胞可存在于受试者的心脏中。
在一些实施方案中，所述受试者患有鞘糖脂疾病或障碍或面临患有鞘糖脂疾病或障碍的风险。在一些实施方案中，鞘糖脂疾病或障碍为代谢性障碍。在一些实施方案中，鞘糖脂疾病或障碍为代谢性障碍。在一些实施方案中，鞘糖脂疾病或障碍为溶酶体贮积病(例如戈谢病、法布里病、GM1神经节苷脂贮积病、GM2活化因子缺乏症、泰-萨克斯病和桑德霍夫病)。在一些实施方案中，鞘糖脂疾病或障碍为GL-3疾病或障碍。在一些实施方案中，鞘糖脂疾病或障碍为法布里病。
在以上方面和实施方案中，所述方法可进一步涉及对所述受试者给予治疗有效量的溶酶体酶(例如葡糖脑苷脂酶、α-半乳糖苷酶A、己糖胺酶A、己糖胺酶B和GM1-神经节苷脂-β-半乳糖苷酶)。在一些实施方案中，溶酶体酶为α-半乳糖苷酶A。
在一些实施方案中，所述受试者在治疗前具有升高水平的溶酶体底物(例如神经酰胺三己糖苷和溶血神经酰胺三己糖苷或其组合)。在一些实施方案中，正在进行治疗的受试者与单独用所述溶酶体酶或化合物治疗的受试者相比在尿和血浆中具有较低组合量的所述溶酶体底物。
在一些方面，本申请提供用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积的方法。所述方法涉及对所述受试者给予有效量的本申请所述的化合物。
在一些实施方案中，给予所述化合物抑制在受试者的心肌细胞中的GL-3蓄积。在相关的实施方案中，给予所述化合物抑制在心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
在一些实施方案中，给予所述化合物降低在受试者的心肌细胞中的GL-3蓄积。在相关的实施方案中，给予所述化合物降低在心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
在一些实施方案中，给予所述化合物防止在受试者的心肌细胞中的GL-3蓄积。在相关的实施方案中，给予所述化合物防止在心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
在以上方面和实施方案中，给予所述化合物可抑制葡糖神经酰胺合酶(GCS)活性。
在一些方面，本申请提供用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法。所述方法涉及对所述受试者给予有效量的本申请所述的化合物。在一些实施方案中，受试者具有与健康心肌细胞相比增加的GL-3。在相关的实施方案中，增加的GL-3至少部分存在于心肌细胞的溶酶体中。
在一些实施方案中，给予所述化合物保持(例如防止GL-3水平的进一步增加或防止进一步GL-3蓄积)在心肌细胞中的GL-3水平。在相关的实施方案中，给予所述化合物保持(例如防止GL-3水平的进一步增加或防止进一步GL-3蓄积)在心肌细胞的溶酶体中的GL-3水平。
在一些实施方案中，给予所述化合物降低在心肌细胞中的GL-3。在相关的实施方案中，给予所述化合物降低在心肌细胞的溶酶体中的GL-3。
在以上方面和实施方案中，受试者的心肌细胞可含有蓄积的GL-3。在一些实施方案中，蓄积的GL-3存在于心肌细胞的溶酶体中。
在以上方面和实施方案中，给予所述化合物可抑制葡糖神经酰胺合酶(GCS)活性。
在以上方面和实施方案中，所述方法可进一步涉及对所述受试者给予治疗有效量的α-半乳糖苷酶A。在一些实施方案中，受试者在治疗前可具有升高水平的神经酰胺三己糖苷、溶血神经酰胺三己糖苷或其组合。在一些实施方案中，正在进行治疗的受试者与单独用α-半乳糖苷酶A或所述化合物治疗的受试者相比在尿和血浆中具有较低组合量的所述神经酰胺三己糖苷或溶血神经酰胺三己糖苷。
在以上方面和实施方案中，给予所述化合物减缓疾病或病症的进展、降低与疾病或病症相关的症状的强度、延迟与疾病或病症相关的症状的发作、推迟发病率或其组合。
在以上方面和实施方案中，给予所述化合物使心肌细胞(或心肌细胞的溶酶体)中的GL-3水平或GL-3蓄积降低至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或其间的任何数值。
在一些方面，本申请提供用于本申请所述的任何方法的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物还包含药用载体、稀释剂或赋形剂。
在一些方面，本申请提供用于本申请所述的任何方法的本申请所述的化合物。
在以上方面和实施方案中，化合物可由以下结构式表示：
或其药用盐或前药，其中：
n为1、2或3；
m为0或1；
p为0或1；
t为0、1或2；
y为1或2；
z为0、1或2；
E为S、O、NH、NOH、NNO2、NCN、NR、NOR或NSO2R；
当m为1时，X1为CR1，或当m为0时，X1为N；
X2为O、-NH、-CH2-、SO2、NH-SO2、CH(C1-C6)烷基或-NR2；
X3为O、-NH、-CH2-、CO、-CH(C1-C6)烷基、SO2NH、-CO-NH-或-NR3；
X4为CR4R5、CH2CR4R5或CH2-(C1-C6)烷基-CR4R5；
X5为直接键、O、S、SO2、CR4R5、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)烯基氧基；
R为(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C9)杂芳基(C1-C6)烷基；
R1为H、CN、(C1-C6)烷基羰基或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立为-H；(C1-C6)烷基，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基，或任选当X2为-NR2且X3为-NR3时，R2和R3可与它们所连接的氮原子一起形成非芳族杂环，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基；
R4和R5独立选自H、(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；
R6为-H、卤素、-CN、(C6-C12)芳基、(C6-C12)芳基氧基、(C1-C6)烷基氧基；(C1-C6)烷基，其任选被一至四个卤素或(C1-C6)烷基取代；
A1为(C2-C6)炔基、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、硝基、CN、-OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烷氧基羰基和(C1-C6)烷基羰基；
A2为H、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、O(C3-C6环烷基)、(C3-C6)环烷氧基、硝基、CN、OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)卤代烷基；
条件是n+t+y+z的和不大于6；
条件是当p为0时，X2为NH-SO2且X3为NH；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为NH、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基、卤代苯基或异丙烯基苯基；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为O、E为O、X3为NH、A1为(C6-C12)芳基且X5为直接键、A2为H且R4为H时，R5不为环己基；且
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为CH2、R4和R5都为氢、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基。
在一些实施方案中，化合物可为
在一些实施方案中，化合物可为
本申请涉及由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药：
其中：
n为1、2或3；
m为0或1；
p为0或1；
t为0、1或2；
y为1或2；
z为0、1或2；
E为S、O、NH、NOH、NNO2、NCN、NR、NOR或NSO2R；
当m为1时，X1为CR1，或当m为0时，X1为N；
X2为O、-NH、-CH2-、SO2、NH-SO2、CH(C1-C6)烷基或-NR2；
X3为O、-NH、-CH2-、CO、-CH(C1-C6)烷基、SO2NH、-CO-NH-或-NR3；
X4为CR4R5、CH2CR4R5或CH2-(C1-C6)烷基-CR4R5；
X5为直接键、O、S、SO2、CR4R5、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)烯基氧基；
R为(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C9)杂芳基(C1-C6)烷基；
R1为H、CN、(C1-C6)烷基羰基或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立为-H；(C1-C6)烷基，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基，或任选当X2为-NR2且X3为-NR3时，R2和R3可与它们所连接的氮原子一起形成非芳族杂环，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基；
R4和R5独立选自H、(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；
R6为-H、卤素、-CN、(C6-C12)芳基、(C6-C12)芳基氧基、(C1-C6)烷基氧基；(C1-C6)烷基，其任选被一至四个取代卤素或(C1-C6)烷基；
A1为(C2-C6)炔基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、硝基、CN、-OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烷氧基羰基和(C1-C6)烷基羰基；
A2为H、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、O(C3-C6环烷基)、(C3-C6)环烷氧基、硝基、CN、OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)卤代烷基；
条件是n+t+y+z的和不大于6；
条件是当p为0时，X2为NH-SO2且X3为NH；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为NH、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基、卤代苯基或异丙烯基苯基；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为O、E为O、X3为NH、A1为(C6-C12)芳基且X5为直接键、A2为H且R4为H时，R5不为环己基；且
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为CH2、R4和R5都为氢、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基。本申请某些方面包括将上述化合物作为联合疗法的一部分给药于患者以在被诊断患有溶酶体贮积病的患者中减小底物蓄积量和/或抑制底物蓄积，所述联合疗法包含酶代替疗法(ERT)和小分子疗法(SMT)。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1；t为0；y为1且z为1。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1；t为1；y为1且z为1。
本申请还涉及式I化合物，其中n为2；t为0；y为1且z为1。
本申请还涉及式I化合物，其中n为2；t为1；y为1且z为1。
本申请还涉及式I化合物，其中n为3；t为0；y为1且z为1。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1；t为2；y为1且z为1。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1；t为0；y为1且z为0。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1；t为1；y为1且z为0。
本申请还涉及式I化合物，其中n为2；t为0；y为1且z为0。
本申请还涉及式I化合物，其中n为2；t为1；y为1且z为0。
本申请还涉及式I化合物，其中n为3；t为0；y为1且z为0。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1；t为2；y为1且z为0。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1；t为1；y为2且z为0。
本申请还涉及式I化合物，其中n为2；t为0；y为2且z为0。
本申请还涉及式I化合物，其中m为1且X1为CR1。
本申请还涉及式I化合物，其中m为0且X1为N。
本申请还涉及式I化合物，其中m为1；E为O；X2为O且X3为NH。
本申请还涉及式I化合物，其中m为1；E为O；X2为NH且X3为NH。
本申请还涉及式I化合物，其中m为1；E为O；X2为CH2且X3为NH。
本申请还涉及式I化合物，其中m为1；E为O；X2为NH且X3为CH2。
本申请还涉及式I化合物，其中m为1；E为S；X2为NH且X3为NH。
本申请还涉及式I化合物，其中m为0；E为O；X1为NH且X3为NH。
本申请还涉及式I化合物，其中m为1；E为O；X2为NH且X3为CO-NH。
本申请还涉及式I化合物，其中m为1；p为0；X2为NH-SO2且X3为NH。
本申请还涉及式I化合物，其中R4和R5各自为(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环。
本申请还涉及式I化合物，其中R4和R5各自为甲基。
本申请还涉及式I化合物，其中R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环。
本申请还涉及式I化合物，其中R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺环丙基环。
本申请还涉及式I化合物，其中R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷氧基环。
本申请还涉及式I化合物，其中A1为(C2-C6)炔基或(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中A1为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中A1为噻吩基、噻唑基、异噻唑基、呋喃基、噁唑基、异噁唑基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、苯并三唑基、苯并异噁唑基、苯并吡唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噁唑基或苯并异噁唑基。
本申请还涉及式I化合物，其中A1为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中A1为吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢吡喃基、吡喃基、噻喃基、氮丙啶基、氮杂环丁烷基、环氧乙烷基、亚甲二氧基、色烯基、丙二酰脲基(barbituryl)、异噁唑烷基、1,3-噁唑烷-3-基、异噻唑烷基、1,3-噻唑烷-3-基、1,2-吡唑烷-2-基、1,3-吡唑烷-1-基、哌啶基、硫吗啉基、1,2-四氢噻嗪-2-基、1,3-四氢噻嗪-3-基、四氢噻二嗪基、吗啉基、1,2-四氢二嗪-2-基、1,3-四氢二嗪-1-基、四氢氮杂基、哌嗪基、哌嗪-2-酮基、哌嗪-3-酮基、色满基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、咪唑烷基、2-咪唑烷基、1,4-二氧杂环己烷基、8-氮杂二环[3.2.1]辛烷基、3-氮杂二环[3.2.1]辛烷基、3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷基、2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂二环[2.2.2]辛烷基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂二环[4.1.0]庚烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己烷基、2-氮杂螺[4.4]壬烷基、7-氧杂-1-氮杂-螺[4.4]壬烷基、7-氮杂二环[2.2.2]庚烷基或八氢-1H-吲哚基。
本申请还涉及式I化合物，其中A1为苯并(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中A1为2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯基或2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯基。
本申请还涉及式I化合物，其中R6为H。
本申请还涉及式I化合物，X5为直接键。
本申请还涉及式I化合物，X5为CR4R5。
本申请还涉及式I化合物，其中R4和R5各自为甲基。
本申请还涉及式I化合物，其中R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环。
本申请还涉及式I化合物，其中R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺环丙基环。
本申请还涉及式I化合物，其中R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷氧基环。
本申请还涉及式I化合物，其中A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中A2为吡啶基。
本申请还涉及式I化合物，其中A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中A2为吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢吡喃基、吡喃基、噻喃基、氮丙啶基、氮杂环丁烷基、环氧乙烷基、亚甲二氧基、色烯基、丙二酰脲基、异噁唑烷基、1,3-噁唑烷-3-基、异噻唑烷基、1,3-噻唑烷-3-基、1,2-吡唑烷-2-基、1,3-吡唑烷-1-基、哌啶基、硫吗啉基、1,2-四氢噻嗪-2-基、1,3-四氢噻嗪-3-基、四氢噻二嗪基、吗啉基、1,2-四氢二嗪-2-基、1,3-四氢二嗪-1-基、四氢氮杂基、哌嗪基、哌嗪-2-酮基、哌嗪-3-酮基、色满基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、咪唑烷基、2-咪唑烷基、1,4-二氧杂环己烷基、8-氮杂二环[3.2.1]辛烷基、3-氮杂二环[3.2.1]辛烷基、3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷基、2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂二环[2.2.2]辛烷基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂二环[4.1.0]庚烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己烷基、2-氮杂螺[4.4]壬烷基、7-氧杂-1-氮杂-螺[4.4]壬烷基、7-氮杂二环[2.2.2]庚烷基或八氢-1H-吲哚基。
本申请还涉及式I化合物，其中A2为苯并(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中R1为氢或甲基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C6-C12)芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C6-C12)芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；p为1；E为O；X2为O；X3为NH；R1为H；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CH2；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为CH2；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为S；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为SO2；X2为NH；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为N；m为0；E为O；X3为NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C2-C9)杂芳基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中n为1、2或3；t为0、1或2；y为0或1；z为0、1或2；X1为CR1；m为1；E为O；X2为NH；X3为CO-NH；R4和R5各自独立为甲基；R6为氢或甲基；A1为(C3-C10)环烷基；X5为直接键、O或CR4R5且A2为(C2-C9)杂芳基。
本申请还涉及式I化合物，其中A1为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，其中A2为(C3-C10)环烷基。
本申请还涉及式I化合物，或其药用盐或前药，选自：
[2-(2,4’-二氟联苯-4-基)丙-2-基]氨基甲酸1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基酯；
{2-[4-(1,3-苯并噻唑-6-基)苯基]丙-2-基}氨基甲酸1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基酯；
{1-[5-(4-氟苯基)吡啶-2-基]环丙基}氨基甲酸1-氮杂二环[3.2.2]壬-4-基酯；
{1-[3-(4-氟苯氧基)苯基]环丙基}氨基甲酸1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基酯；
{1-[4-(1,3-苯并噻唑-5-基)苯基]环丙基}氨基甲酸1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基酯；
[1-(4’-氟-3’-甲氧基联苯-4-基)环丙基]氨基甲酸1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基酯；
[3-(4’-氟联苯-4-基)氧杂环丁烷-3-基]氨基甲酸1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基酯；
{1-[6-(4-氟苯氧基)吡啶-2-基]环丙基}氨基甲酸1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基酯；
[3-(4’-氟联苯-4-基)戊-3-基]氨基甲酸1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基酯；
{2-[2-(4-氟苯基)-2H-吲唑-6-基]丙-2-基}氨基甲酸1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基酯；
{2-[2-(1H-吡咯-1-基)吡啶-4-基]丙-2-基}氨基甲酸1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基酯；
1-(3-乙基-1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)-3-[1-(4’-氟联苯-4-基)环丙基]脲；
N-(1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)-N’-[1-(4’-氟联苯-4-基)环丙基]乙二酰胺；
(1-{4[(4,4二氟环己基)氧基]苯基}环丙基)氨基甲酸1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基酯；
1-(4-甲基-1-氮杂二环[3.2.2]壬-4-基)-3-[1-(5-苯基吡啶-2-基)环丙基]脲；
1-[1-(4’-氟联苯-4-基)环丙基]-1-甲基-3-(3-甲基-1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)脲；
1-[1-(4’-氟联苯-4-基)环丙基]-1-甲基-3-(3-甲基-1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)脲；
1-{2-[4’-(2-甲氧基乙氧基)联苯-4-基]丙-2-基}-3-(3-甲基-1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)脲；
2-(1-氮杂二环[3.2.2]壬-4-基)-N-[1-(5-苯基吡啶-2-基)环丙基]乙酰胺；
3-(4’-氟联苯-4-基)-3-甲基-N-(4-甲基-1-氮杂二环[3.2.2]壬-4-基)丁酰胺；
N-[2-(联苯-4-基)丙-2-基]-N’-(3-甲基-1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)硫二酰胺；
N-[2-(4’-氟联苯-4-基)丙-2-基]-N’-(3-甲基-1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)硫二酰胺；
1-(3-丁基-1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)-3-{2-[1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙-2-基}脲；
[4-(4-氟苯基)-2-甲基丁-3-炔-2-基]氨基甲酸1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基酯；
1-(3-丁基-1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)-3-[4-(4-氟苯基)-2-甲基丁-3-炔-2-基]脲；
N-[1-(4’-氟联苯-4-基)环丙基]-1,4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酰胺；
1-(2-(4’-氟-[1,1’-联苯]-4-基)丙-2-基)-3-(3-甲基-1-氮杂二环[3.2.2]壬-3-基)脲；
1-(2-(4’-氟-[1,1’-联苯]-4-基)丙-2-基)-3-(4-甲基-1-氮杂二环[4.2.2]癸-4-基)脲；
1-(2-(4’-氟-[1,1’-联苯]-4-基)丙-2-基)-3-(3-甲基-1-氮杂二环[4.2.2]癸-3-基)脲；和
1-(2-(4’-氟-[1,1’-联苯]-4-基)丙-2-基)-3-(5-甲基-1-氮杂二环[4.2.2]癸-5-基)脲。
本申请还涉及用于在需要所述治疗的受试者中对由葡糖神经酰胺合酶(GCS)介导的疾病或病症或其中涉及GCS的疾病或病症进行治疗的药物组合物，所述治疗包括对所述受试者给予有效量的式I化合物。
本申请还涉及用于在需要所述治疗的受试者中对由葡糖神经酰胺合酶(GCS)介导的疾病或病症或其中涉及GCS的疾病或病症进行治疗的方法，包括对所述受试者给予有效量的式I化合物。
本申请还涉及用于治疗疾病或病症例如癌症的方法。
本申请还涉及用于治疗疾病或病症例如代谢紊乱的方法。
本申请还涉及用于治疗疾病或病症例如神经病的方法。
本申请还涉及方法，其中所述神经病为阿尔茨海默病。
本申请还涉及方法，其中所述神经病为帕金森病。
本申请还涉及用于在体外细胞中使葡糖神经酰胺合酶催化活性得以降低的方法，其包括使所述细胞与有效量的式I化合物接触。
本申请还涉及由以下结构式表示的式I化合物即(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸(S)-奎宁环-3-基酯：
或其药用盐或前药。
本申请还涉及由以下结构式表示的式I化合物即(2-(4’-氟-[1,1’-联苯]-3-基)丙-2-基)氨基甲酸奎宁环-3-基酯：
或其药用盐或前药。
本申请还涉及对被诊断患有溶酶体贮积病的受试者进行治疗的方法，所述方法包括向所述受试者给药有效量的式I化合物或其药用盐或前药且在某些实施方案中，所述化合物由以下结构式表示：
在本申请某些实施方案中，溶酶体贮积病由于鞘糖脂途径中的缺陷而引起。
在本申请某些实施方案中，溶酶体贮积病为戈谢病、法布里病、GM1神经节苷脂贮积病、GM2活化因子缺乏症、泰-萨克斯病或桑德霍夫病。
本申请还涉及对被诊断患有溶酶体贮积病的受试者进行治疗的方法，所述方法包括向所述受试者给药有效量的式I化合物和向所述受试者给药治疗有效量的溶酶体酶。
在本申请某些实施方案中，溶酶体酶为葡糖脑苷脂酶、α-半乳糖苷酶A、己糖胺酶A、己糖胺酶B或GM1-神经节苷脂-β-半乳糖苷酶。
在本申请某些实施方案中，所述受试者在治疗前具有升高水平的溶酶体底物且在接受治疗后，所述受试者与单独用所述溶酶体酶或化合物治疗的受试者相比在尿和血浆中具有较低组合量的所述溶酶体底物。
在本申请某些实施方案中，所述底物为神经酰胺三己糖苷或溶血神经酰胺三己糖苷及其组合。
本申请还涉及在被诊断患有溶酶体贮积病的受试者中降低葡糖神经酰胺合酶(GCS)活性的方法，其包括向所述患者单独或作为与酶代替疗法的联合疗法给药有效量的式I化合物。
本申请还涉及在被诊断患有溶酶体贮积病的受试者中减少由GCS衍生的物质的蓄积的方法，其包括向所述患者单独或作为与酶代替疗法的联合疗法给药有效量的式I化合物。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药：
其中：
n为1、2或3；
m为0或1；
p为0或1；
t为0、1或2；
y为1或2；
z为0、1或2；
E为S、O、NH、NOH、NNO2、NCN、NR、NOR或NSO2R；
当m为1时，X1为CR1，或当m为0时，X1为N；
X2为O、-NH、-CH2-、SO2、NH-SO2、CH(C1-C6)烷基或-NR2；
X3为O、-NH、-CH2-、CO、-CH(C1-C6)烷基、SO2NH、-CO-NH-或-NR3；
X4为CR4R5、CH2CR4R5或CH2-(C1-C6)烷基-CR4R5；
X5为直接键、O、S、SO2、CR4R5、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)烯基氧基；
R为(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C9)杂芳基(C1-C6)烷基；
R1为H、CN、(C1-C6)烷基羰基或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立为-H；(C1-C6)烷基，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基，或任选当X2为-NR2且X3为-NR3时，R2和R3可与它们所连接的氮原子一起形成非芳族杂环，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基；
R4和R5独立选自H、(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；
R6为-H、卤素、-CN、(C6-C12)芳基、(C6-C12)芳基氧基、(C1-C6)烷基氧基；(C1-C6)烷基，其任选被一至四个卤素或(C1-C6)烷基取代；
A1为(C2-C6)炔基、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、硝基、CN、-OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烷氧基羰基和(C1-C6)烷基羰基；
A2为H、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、O(C3-C6环烷基)、(C3-C6)环烷氧基、硝基、CN、OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)卤代烷基；
条件是n+t+y+z的和不大于6；
条件是当p为0时，X2为NH-SO2且X3为NH；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为NH、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基、卤代苯基或异丙烯基苯基；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为O、E为O、X3为NH、A1为(C6-C12)芳基且X5为直接键、A2为H且R4为H时，R5不为环己基；且
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为CH2、R4和R5都为氢、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中给予所述化合物抑制在受试者的心肌细胞中的GL-3蓄积。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中给予所述化合物抑制在心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中给予所述化合物降低在受试者的心肌细胞中的GL-3蓄积。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中给予所述化合物降低在心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中给予所述化合物防止在受试者的心肌细胞中的GL-3蓄积。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中给予所述化合物防止在心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中给予所述化合物抑制葡糖神经酰胺合酶(GCS)活性。
本申请还涉及用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药：
其中：
n为1、2或3；
m为0或1；
p为0或1；
t为0、1或2；
y为1或2
z为0、1或2；
E为S、O、NH、NOH、NNO2、NCN、NR、NOR或NSO2R；
当m为1时，X1为CR1，或当m为0时，X1为N；
X2为O、-NH、-CH2-、SO2、NH-SO2、CH(C1-C6)烷基或-NR2；
X3为O、-NH、-CH2-、CO、-CH(C1-C6)烷基、SO2NH、-CO-NH-或-NR3；
X4为CR4R5、CH2CR4R5或CH2-(C1-C6)烷基-CR4R5；
X5为直接键、O、S、SO2、CR4R5、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)烯基氧基；
R为(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C9)杂芳基(C1-C6)烷基；
R1为H、CN、(C1-C6)烷基羰基或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立为-H；(C1-C6)烷基，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基，或任选当X2为-NR2且X3为-NR3时，R2和R3可与它们所连接的氮原子一起形成非芳族杂环，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基；
R4和R5独立选自H、(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；
R6为-H、卤素、-CN、(C6-C12)芳基、(C6-C12)芳基氧基、(C1-C6)烷基氧基；(C1-C6)烷基，其任选被一至四个卤素或(C1-C6)烷基取代；
A1为(C2-C6)炔基、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、硝基、CN、-OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烷氧基羰基和(C1-C6)烷基羰基；
A2为H、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、O(C3-C6环烷基)、(C3-C6)环烷氧基、硝基、CN、OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)卤代烷基；
条件是n+t+y+z的和不大于6；
条件是当p为0时，X2为NH-SO2且X3为NH；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为NH、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基、卤代苯基或异丙烯基苯基；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为O、E为O、X3为NH、A1为(C6-C12)芳基且X5为直接键、A2为H且R4为H时，R5不为环己基；且
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为CH2、R4和R5都为氢、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基。
本申请还涉及用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中所述受试者的心肌细胞具有与健康心肌细胞相比增加的GL-3。
本申请还涉及用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中增加的GL-3存在于心肌细胞的溶酶体中。
本申请还涉及用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中给予所述化合物保持在心肌细胞中的GL-3水平。
本申请还涉及用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中给予所述化合物保持在心肌细胞的溶酶体中的GL-3水平。
本申请还涉及用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中给予所述化合物降低在心肌细胞中的GL-3。
本申请还涉及用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中给予所述化合物降低在心肌细胞的溶酶体中的GL-3。
本申请还涉及用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中所述受试者的心肌细胞包含蓄积的GL-3。
本申请还涉及用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中蓄积的GL-3存在于心肌细胞的溶酶体中。
本申请还涉及用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I表示的化合物，其中给予所述化合物抑制葡糖神经酰胺合酶(GCS)活性。
本申请还涉及用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的化合物，其中所述化合物为
或其药用盐或前药。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的由以下结构式表示的化合物：
本申请还涉及用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的化合物，其中所述化合物为
或其药用盐或前药。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的由以下结构式表示的化合物：
本申请还涉及用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I化合物，其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的α-半乳糖苷酶A。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的由以下结构式表示的化合物：
其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的α-半乳糖苷酶A。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积、用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I化合物且其中在治疗前所述受试者具有升高水平的神经酰胺三己糖苷、溶血神经酰胺三己糖苷或其组合。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积、用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的以下结构式的化合物：
且其中在治疗前所述受试者具有升高水平的神经酰胺三己糖苷、溶血神经酰胺三己糖苷或其组合。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积、用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的式I化合物，其中正在进行治疗的受试者与单独用α-半乳糖苷酶A或所述化合物治疗的受试者相比在尿和血浆中具有较低组合量的所述神经酰胺三己糖苷或溶血神经酰胺三己糖苷。
本申请还涉及用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积、用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的以下结构式的化合物：
其中正在进行治疗的受试者与单独用α-半乳糖苷酶A或所述化合物治疗的受试者相比在尿和血浆中具有较低组合量的所述神经酰胺三己糖苷或溶血神经酰胺三己糖苷。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药接触：
其中：
n为1、2或3；
m为0或1；
p为0或1；
t为0、1或2；
y为1或2；
z为0、1或2；
E为S、O、NH、NOH、NNO2、NCN、NR、NOR或NSO2R；
当m为1时，X1为CR1，或当m为0时，X1为N；
X2为O、-NH、-CH2-、SO2、NH-SO2、CH(C1-C6)烷基或-NR2；
X3为O、-NH、-CH2-、CO、-CH(C1-C6)烷基、SO2NH、-CO-NH-或-NR3；
X4为CR4R5、CH2CR4R5或CH2-(C1-C6)烷基-CR4R5；
X5为直接键、O、S、SO2、CR4R5、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)烯基氧基；
R为(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C9)杂芳基(C1-C6)烷基；
R1为H、CN、(C1-C6)烷基羰基或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立为-H；(C1-C6)烷基，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基，或任选当X2为-NR2且X3为-NR3时，R2和R3可与它们所连接的氮原子一起形成非芳族杂环，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基；
R4和R5独立选自H、(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；
R6为-H、卤素、-CN、(C6-C12)芳基、(C6-C12)芳基氧基、(C1-C6)烷基氧基；(C1-C6)烷基，其任选被一至四个卤素或(C1-C6)烷基取代；
A1为(C2-C6)炔基、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、硝基、CN、-OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烷氧基羰基和(C1-C6)烷基羰基；
A2为H、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、O(C3-C6环烷基)、(C3-C6)环烷氧基、硝基、CN、OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)卤代烷基；
条件是n+t+y+z的和不大于6；
条件是当p为0时，X2为NH-SO2且X3为NH；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为NH、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基、卤代苯基或异丙烯基苯基；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为O、E为O、X3为NH、A1为(C6-C12)芳基且X5为直接键、A2为H且R4为H时，R5不为环己基；且
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为CH2、R4和R5都为氢、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中鞘糖脂疾病或障碍包括与健康心肌细胞相比增加的在心肌细胞中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中增加的GL-3存在于心肌细胞的溶酶体中。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中给予所述化合物保持在心肌细胞中的GL-3水平。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中所述化合物保持在心肌细胞的溶酶体中的GL-3水平。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中给予所述化合物降低在心肌细胞中的GL-3。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中所述化合物降低在心肌细胞的溶酶体中的GL-3。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中鞘糖脂疾病或障碍包括在心肌细胞中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中GL-3蓄积存在于心肌细胞的溶酶体中。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中给予所述化合物抑制在心肌细胞中的GL-3蓄积。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中给予所述化合物抑制在心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中给予所述化合物降低在心肌细胞中的GL-3蓄积。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中给予所述化合物降低在心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中给予所述化合物防止在心肌细胞中的GL-3蓄积。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中给予所述化合物防止在心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中给予所述化合物抑制葡糖神经酰胺合酶(GCS)活性。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中所述化合物为
或其药用盐或前药。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中所述化合物为
或其药用盐或前药。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中心肌细胞处于受试者的心脏中。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中所述受试者患有鞘糖脂疾病或障碍或面临患有鞘糖脂疾病或障碍的风险。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中鞘糖脂疾病或障碍为代谢性障碍。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中鞘糖脂疾病或障碍为溶酶体贮积病。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中溶酶体贮积病选自戈谢病、法布里病、GM1神经节苷脂贮积病、GM2活化因子缺乏症、泰-萨克斯病和桑德霍夫病。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中鞘糖脂疾病或障碍为GL-3疾病或障碍。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中溶酶体贮积病为法布里病。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的化合物GCS452接触，其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的溶酶体酶。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的化合物GCS452接触，其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的溶酶体酶且其中所述溶酶体酶选自葡糖脑苷脂酶、α-半乳糖苷酶A、己糖胺酶A、己糖胺酶B和GM1-神经节苷脂-β-半乳糖苷酶。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的化合物GCS452接触，其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的溶酶体酶，其中所述溶酶体酶为α-半乳糖苷酶A。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的溶酶体酶，其中在治疗前所述受试者具有升高水平的溶酶体底物。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的溶酶体酶，其中在治疗前所述受试者具有升高水平的溶酶体底物。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的化合物GCS452接触，其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的溶酶体酶，其中在治疗前所述受试者具有升高水平的溶酶体底物。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的溶酶体酶，其中在治疗前所述受试者具有升高水平的溶酶体底物且其中所述溶酶体底物选自神经酰胺三己糖苷和溶血神经酰胺三己糖苷及其组合。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的化合物GCS452接触，其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的溶酶体酶，其中在治疗前所述受试者具有升高水平的溶酶体底物且其中所述溶酶体底物选自神经酰胺三己糖苷和溶血神经酰胺三己糖苷及其组合。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的式I化合物接触，其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的溶酶体酶，其中在治疗前所述受试者具有升高水平的溶酶体底物且其中正在进行治疗的受试者与单独用所述溶酶体酶或化合物治疗的受试者相比在尿和血浆中具有较低组合量的所述溶酶体底物。
本申请还涉及用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的化合物GCS452接触，其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的溶酶体酶，其中在治疗前所述受试者具有升高水平的溶酶体底物且其中正在进行治疗的受试者与单独用所述溶酶体酶或化合物治疗的受试者相比在尿和血浆中具有较低组合量的所述溶酶体底物。
本申请提供用于治疗被诊断患有溶酶体贮积病的受试者的联合疗法的方法，包括交替给予酶代替疗法和SRT或小分子疗法。
本申请提供用于治疗被诊断患有溶酶体贮积病的受试者的联合疗法的方法，包括同时给予酶代替疗法和SRT或小分子疗法。
在本申请各种联合疗法中，应该理解的是给予小分子疗法或SRT可在给予酶代替疗法之前发生、与给予酶代替疗法共同发生或在给予酶代替疗法之后发生。类似地，给予酶代替疗法可在给予小分子疗法之前发生、与给予小分子疗法共同发生或在给予小分子疗法之后发生。
本申请还提供了用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药接触：
其中：
n为1、2或3；
m为0或1；
p为0或1；
t为0、1或2；
y为1或2；
z为0、1或2；
E为S、O、NH、NOH、NNO2、NCN、NR、NOR或NSO2R；
当m为1时，X1为CR1，或当m为0时，X1为N；
X2为O、-NH、-CH2-、SO2、NH-SO2、CH(C1-C6)烷基或-NR2；
X3为O、-NH、-CH2-、CO、-CH(C1-C6)烷基、SO2NH、-CO-NH-或-NR3；
X4为CR4R5、CH2CR4R5或CH2-(C1-C6)烷基-CR4R5；
X5为直接键、O、S、SO2、CR4R5、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)烯基氧基；
R为(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C9)杂芳基(C1-C6)烷基；
R1为H、CN、(C1-C6)烷基羰基或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立为-H；(C1-C6)烷基，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基，或任选当X2为-NR2且X3为-NR3时，R2和R3可与它们所连接的氮原子一起形成非芳族杂环，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基；
R4和R5独立选自H、(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；
R6为-H、卤素、-CN、(C6-C12)芳基、(C6-C12)芳基氧基、(C1-C6)烷基氧基；(C1-C6)烷基，其任选被一至四个卤素或(C1-C6)烷基取代；
A1为(C2-C6)炔基、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、硝基、CN、-OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烷氧基羰基和(C1-C6)烷基羰基；
A2为H、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、O(C3-C6环烷基)、(C3-C6)环烷氧基、硝基、CN、OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)卤代烷基；
条件是n+t+y+z的和不大于6；
条件是当p为0时，X2为NH-SO2且X3为NH；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为NH、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基、卤代苯基或异丙烯基苯基；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为O、E为O、X3为NH、A1为(C6-C12)芳基且X5为直接键、A2为H且R4为H时，R5不为环己基；且
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为CH2、R4和R5都为氢、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基。
本申请还提供了用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的由以下结构式表示的化合物接触：
或其药用盐或前药。
定义
本申请使用的术语“药用盐”是指本申请化合物的药用酸加成盐或药用碱加成盐，其可与含有其的药物组合物中的任何其它组分一起给药而不产生任何一种或多种严重的不良生物作用或不产生任何一种或多种有害的相互作用。
本申请使用的术语“前药”是指母体药物分子的药理学衍生物，其在生物体内需要自发或酶催化的生物转化以释放活性药物。例如，前药为式I化合物的变体或衍生物，其具有可在某些代谢条件下发生裂解的基团，所述基团当裂解时形成式I化合物。然后所述前药当在生理学条件下经历溶剂分解或经历酶催化降解时是具有体内药物活性的。本申请前药化合物可被称为单一前药、双重前药、三重前药等，这取决于在生物体内释放活性药物所需要的生物转化步骤的数目和存在于前体形式中的官能团的数目。前药形式通常提供以下优点：溶解性、组织相容性或哺乳动物体内的延迟释放(参见Bundgard,Design of Prodrugs,pp.7-9,21-24,Elsevier,Amsterdam 1985and Silverman,The Organic Chemistry ofDrug Design and Drug Action,pp.352-401,Academic Press,San Diego,Calif.,1992)。本领域公知的前药包括公知的酸衍生物例如通过使母体酸与合适的醇反应来制备的酯、通过使母体酸化合物与胺反应来制备的酰胺、通过使碱性基团发生反应而形成的酰基化碱衍生物等。当然，其它前药衍生物可与本申请公开的其它特征组合以提高生物利用度。因此，本领域技术人员将认识到的是，可将具有游离氨基、酰氨基、羟基或羧基的本申请某些化合物转化成前药。前药包括以下化合物，其具有通过肽键与本申请化合物中的游离氨基、羟基或羧基共价连接的氨基酸残基或多肽链，所述多肽链由两个或更多个(例如两个、三个或四个)氨基酸残基构成。氨基酸残基包括20种天然存在的通常经由三个字母符号来指定的氨基酸且还包括4-羟基脯氨酸、羟基赖氨酸、锁链赖氨酸、异锁链赖氨酸、3-甲基组氨酸、正缬氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、鸟氨酸和蛋氨酸砜。前药还包括以下化合物，其具有与本申请公开的任何上述取代基共价键合的碳酸酯、氨基甲酸酯、酰胺或烷基酯部分。
本申请使用的术语“(C1-C6)烷基”是指饱和的直链或支链的自由基，其基本由1至6个碳原子和相应数目的氢原子构成。示例性的(C1-C6)烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基等。当然，考虑到本申请权益，其它(C1-C6)烷基对于本领域技术人员将是显而易见的。
本申请使用的术语“(C3-C10)环烷基”是指非芳族的饱和的形成至少一个环的自由基，其基本由3至10个碳原子和相应数目的氢原子构成。因此，(C3-C10)环烷基可以是单环或多环的。所述多环环烷基中的各个环可具有不同的连接方式例如除共价键代替外的稠合、桥接、螺环等。示例性的(C3-C10)环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、降冰片基、二环[3.2.1]辛基、八氢-并环戊二烯基、螺[4.5]癸基、取代有环丁基的环丙基、取代有环戊基的环丁基、取代有环丙基的环己基等。当然，考虑到本申请权益，其它(C3-C10)环烷基对于本领域技术人员将是显而易见的。
本申请使用的术语“(C2-C9)杂环烷基”是指非芳族的自由基，其具有形成至少一个环的3至10个原子(即环原子)，其中2至9个环原子为碳且其余一个或多个环原子(即一个或多个杂环原子)选自氮、硫和氧。因此，(C2-C9)杂环烷基可以是单环或多环的。所述多环杂环烷基中的各个环可具有不同的连接方式例如除共价键代替外的稠合、桥接、螺环等。示例性的(C2-C9)杂环烷基包括吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢吡喃基、吡喃基、噻喃基、氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丙烷基、亚甲基二氧基、色烯基、丙二酰脲基、异噁唑烷基、1,3-噁唑烷-3-基、异噻唑烷基、1,3-噻唑烷-3-基、1,2-吡唑烷-2-基、1,3-吡唑烷-1-基、哌啶基、硫吗啉基、1,2-四氢噻嗪-2-基、1,3-四氢噻嗪-3-基、四氢噻二嗪基、吗啉基、1,2-四氢二嗪-2-基、1,3-四氢二嗪-1-基、四氢氮杂基、哌嗪基、哌嗪-2-酮基、哌嗪-3-酮基、色满基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、咪唑烷基、2-咪唑烷基、1,4-二噁烷基、8-氮杂二环[3.2.1]辛基、3-氮杂二环[3.2.1]辛基、3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛基、2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂二环[2.2.2]辛基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂二环[4.1.0]庚基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、2-氮杂螺[4.4]壬基、7-氧杂-1-氮杂-螺[4.4]壬基、7-氮杂二环[2.2.2]庚基、八氢-1H-吲哚基等。通常，(C2-C9)杂环烷基典型地经由碳原子或氮原子与主结构连接。当然，考虑到本申请权益，其它(C2-C9)杂环烷基对于本领域技术人员将是显而易见的。
本申请使用的术语“(C2-C9)杂芳基”是指芳族的自由基，其具有形成至少一个环的5至10个原子(即环原子)，其中2至9个环原子为碳且其余一个或多个环原子(即一个或多个杂环原子)选自氮、硫和氧。因此，(C2-C9)杂芳基可以是单环或多环的。所述多环杂芳基中的各个环可具有不同的连接方式例如除共价键代替外的稠合等。示例性的(C2-C9)杂芳基包括呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡咯基、三唑基、四唑基、咪唑基、1,3,5-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,3,5-噻二唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、1,2,4-三嗪基、1,2,3-三嗪基、1,3,5-三嗪基、吡唑并[3,4-b]吡啶基、噌啉基、蝶啶基、嘌呤基、6,7-二氢-5H-[1]氮杂茚基、苯并[b]噻吩基、5,6,7,8-四氢-喹啉-3-基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、硫杂茚基、异硫杂茚基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、异吲哚基、吲哚基、吲嗪基、吲唑基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基和苯并噁嗪基等。通常，(C2-C9)杂芳基典型地经由碳原子与主结构连接，然而本领域技术人员将认识到的是，某些其它原子例如杂环原子可与主结构连接。当然，考虑到本申请权益，其它(C2-C9)杂芳基对于本领域技术人员将是显而易见的。
本申请使用的术语“(C6-C12)芳基”是指具有形成至少一个环的6-12个碳原子的官能团或取代基。
本申请使用的术语“(C6-C10)芳基”是指具有形成至少一个环的6-12个碳原子的官能团或取代基，包括苯基或萘基。
本申请使用的术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
本申请使用的术语“氨基”是指具有氮原子和1至2个氢原子的自由基。因此，术语“氨基”通常是指伯氨基和仲氨基。就此而言，本申请和所附权利要求书使用的叔氨基由通式RR’N-表示，其中R和R’为可相同或不同的碳基。然而，术语“氨基”在本申请中通常可用于描述伯氨基、仲氨基或叔氨基且本领域技术人员将能够根据本申请使用该术语的上下文而容易地确定所述氨基。
本申请使用的术语“联合疗法”是指用两种或更多种治疗平台(例如酶代替疗法和小分子疗法)以轮换、交替和/或同时的治疗安排对患者进行治疗。治疗安排的实例可包括但不限于：(1)进行酶代替疗法，然后进行小分子疗法；(2)进行小分子疗法，然后进行酶代替疗法；(3)同时进行酶代替疗法与小分子疗法；和(4)上述治疗安排的任何组合。联合疗法可按需提供治疗平台的暂时重叠，这取决于给定的贮积病在给定的受试者中的临床病程。
本申请使用的术语“酶代替疗法”或“ERT”是指向有此需要的患者给药外源性产生的天然酶或重组酶。例如，在溶酶体贮积病的情况下，患者由于负责代谢底物的酶的缺乏或缺陷或由于合适的酶功能所需要的酶活化因子的缺乏而在溶酶体中蓄积有害水平的底物(即所贮积的物质)。向患者提供酶代替疗法以降低受害组织中蓄积底物的水平(即减积(debulk))。表1提供了溶酶体贮积病的列表且针对每种疾病鉴定了相应的酶缺乏和蓄积的底物。用于治疗溶酶体贮积病的酶代替疗法是本领域已知的。根据本申请联合疗法，在表1中鉴定的溶酶体酶可用于酶代替疗法以在被诊断患有各种溶酶体贮积病的患者中降低相应底物的水平。
本申请使用的“有效量”的酶或小分子当在本申请联合疗法中递送至受试者时为以下量，其足以改善溶酶体贮积病的临床病程，其中临床改善通过本领域技术人员熟知的多种定义参数中的任何一种来测量。
化学缩写
ACN是指乙腈。
DMF是指N,N-二甲基甲酰胺。
DMSO是指二甲基亚砜。
EtOAc是指乙酸乙酯。
EtOH是指乙醇。
许尼希碱(Hunig’s Base)是指二异丙基乙基胺(“DIPEA”)。
MeOH是指甲醇。
NaOH是指氢氧化钠。
THF是指四氢呋喃。
TFA是指三氟乙酸。
本申请化合物的其它特征和优点通过以下对某些实施方案的详细描述将是显而易见的。
附图说明
图1A和1B.心脏收缩蛋白在一个月大的野生型(WT)和法布里病(FD)跳动的拟胚体(EB)和解离的细胞中的表达。(A)跳动的EB的免疫组织化学。将小鼠成纤维细胞(大的细胞，绿色箭头)添加至EB(小且集中在一起的细胞，棕色箭头)以促进样品处理。针对肌动蛋白、肌钙蛋白I和α-辅肌动蛋白的抗体用于鉴定包含在EB中的心肌细胞。在WT EB和来自三种FD经诱导的多能干细胞(iPSC)系的法布里病EB中，多于90％的细胞表达高水平的心脏收缩蛋白。(B)由抗α-辅肌动蛋白显示的收缩纤维没有那么多，是较无序的且位于由FD iPSC衍生的细胞的外周。
图2A-2D.在一个月大的由法布里病iPSC衍生的心肌细胞中的溶酶体神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积。(A)在来自跳动的法布里病EB的解离的细胞中的GL-3蓄积。抗GL-3显示出分散在细胞质中的鞘糖脂斑点。(B)在亮视野显微镜检查中可频繁观察到的液泡及在由法布里病iPSC衍生的细胞中较高水平的GL-3。(C)在由法布里病iPSC衍生的心肌细胞中的GL-3蓄积。α-辅肌动蛋白和GL-3在相同细胞中的表达。(D)GL-3蓄积在溶酶体中。GL-3和Lamp2(溶酶体膜的一种标志物)的共区域化(参见合并的图且在最大放大倍数比较黄色箭头)。GL-3和Lamp2信号较接近细胞核且在细胞外周减少。
图3A和3B.对一个月大的由法布里病iPSC衍生的EB进行的电子显微镜检查。(A)由法布里病iPSC衍生的EB中的心肌细胞分化和溶酶体贮存内含物。蓝色箭头指示具有显著Z带的肌原纤维。红色箭头指示多室膜内含物(具有底物贮存的溶酶体)。黄色箭头指示胞间结合且N＝细胞核。(B)对分化的心肌细胞进行的较高放大倍数观察。图3B中的插图为对溶酶体贮存内含物进行的较高放大倍数观察。
图4.由质谱确定的跳动的法布里病EB中的GL-3蓄积的动力学。天数从开始心脏分化计算。GL-3含量通过定量九种不同的GL-3亚型并相对于总磷脂酰胆碱(PC)对总GL-3水平进行归一化来确定。对每种样品一式多份处理。针对所有法布里病克隆对GL-3/PC比取平均值。法布里病样品的数目：第16天，n＝4；第23天，n＝8；第30天，n＝17；第45天，n＝8。WT样品的数目：第30天，n＝4；第45天，n＝5。
图5A-5C.1μM GCS452或3μg/mL半乳糖苷酶β处理对法布里病心肌细胞中GL-3蓄积和清除的作用。(A、B)EB中GL-3含量的质谱。对每种样品一式多份处理。T0：开始处理前的EB。(A)防止蓄积：在心脏分化开始后第18天处理。未处理/用GCS452处理的样品的数目：WT，n＝3/5；C658T-4，n＝4/6；G485A-10，n＝2/3；G485A-56，n＝3/5。在所有三种iPSC的法布里病EB中的T0平均值，第16天，n＝4。(B)清除：在心脏分化开始后第28天处理。未处理/用GCS452处理/用半乳糖苷酶β处理的样品的数目：WT，n＝3/5/2；C658T-4，n＝2/5/3；G485A-10，n＝3/7/3；G485A-56，n＝3/9/4。T0WT，n＝4；在三种iPSC的法布里病EB中的T0平均值，n＝17。(C)GL-3含量和Lamp2共区域化通过一个月大的经处理的由法布里病iPSC衍生的心肌细胞中的免疫细胞化学来确定并与未处理的对照细胞比较。在处理结束时，检测不到GL-3或极微弱地检测到GL-3。同时，Lamp2液泡数目及信号强度是降低的。
图6A-6C.法布里病心肌细的电生理学。(A)描述了微电极阵列(MEA)用于评价细胞的电生理学。(B)显示了由WT iPSC衍生的心肌细胞的电生理学。(C)显示了由法布里病iPSC衍生的心肌细胞的电生理学。
具体实施方式
本申请至少部分基于以下发现，即通过葡糖神经酰胺合酶抑制的底物减少疗法能够防止蓄积并能够清除心肌细胞(例如非分化的心肌细胞)中蓄积的溶酶体GL-3。本申请涉及使用葡糖神经酰胺合酶抑制剂以降低或防止受试者心肌细胞中的GL-3蓄积的方法。本申请还涉及用于降低或防止受试者心肌细胞中的GL-3蓄积的组合物。
尽管现将参考制备和方案来描述本申请具体实施方案，但是应该理解的是，这些实施方案仅是示例性的且仅用于说明多种可能的具体实施方案中的一小部分，其可代表本申请要义的实施。各种变化和修改对于知晓本申请益处的本领域技术人员将是显而易见的且被认为在所附权利要求书所进一步定义的本申请主旨和范围内。
葡糖神经酰胺合酶抑制剂
葡糖神经酰胺合酶(GCS)是在以葡糖神经酰胺为基础的鞘糖脂(GSL)的生物合成中催化初始糖基化步骤的关键酶，所述初始糖基化步骤即由UDP-葡萄糖(UDP-Glc)将葡萄糖转移至神经酰胺以形成葡糖神经酰胺的关键转移(参见图1)。GCS是位于高尔基体顺面膜囊/中间膜囊中的跨膜III型整合蛋白。据信鞘糖脂(GSL)是多种细胞膜事件的动力学所需要的，所述细胞膜事件包括细胞相互作用、信号传导和运输。已经显示GSL结构的合成(参见Yamashita等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1999,96(16),9142-9147)对于胚胎发育和一些组织的分化是必不可少的。神经酰胺在鞘脂代谢中发挥重要作用且已经显示GCS活性的下调对鞘脂模式具有显著影响，其中鞘糖脂的表达是减少的。鞘脂(SL)在生理学及病理学心血管状态中具有生物调节作用。具体地，鞘脂及其调节酶就在新生大鼠心脏中对慢性缺氧的适应性响应而言似乎发挥作用(参见El Alwanit等人,Prostaglandins&Other LipidMediators 2005,78(1-4),249-263)。
已经提出将GCS抑制剂用于治疗多种疾病(参见例如WO2005068426)。所述治疗包括治疗糖脂贮积病(例如泰-萨克斯病、桑德霍夫病、GM2活化因子缺乏症、GM1神经节苷脂贮积病和法布里病)、与糖脂蓄积相关的疾病(例如戈谢病；美格鲁特(Zavesca)作为GCS抑制剂已经被批准用于治疗1型戈谢病患者，参见Treiber等人,Xenobiotica 2007,37(3),298-314)、引起肾脏肥大或增生的疾病例如糖尿病性肾病、引起高血糖症或高胰岛素血症的疾病、其中糖脂合成异常的癌症、由使用细胞表面糖脂作为受体的生物体引起的感染性疾病、其中葡糖神经酰胺的合成是必要或重要的感染性疾病、其中葡糖神经酰胺的合成是必要或重要的疾病、其中发生过度糖脂合成的疾病(例如动脉粥样硬化、多囊性肾病和肾脏肥大)、神经元障碍、神经元损伤、与巨噬细胞募集和活化相关的炎性疾病或障碍(例如类风湿性关节炎、克罗恩病、哮喘和脓毒症)及糖尿病和肥胖症(参见WO2006053043)。
例如已经显示GCS的过度表达参与多重抗药性且破坏由神经酰胺诱导的凋亡。例如，Turzanski等人,Experimental Hematology 2005,33(1),62-72已经显示神经酰胺在急性骨髓性白血病(AML)细胞中诱导凋亡且P-糖蛋白(p-gp)促成对由神经酰胺诱导的凋亡的抗性，其中对神经酰胺-葡糖神经酰胺途径的调节对TF-1细胞中的该抗性具有显著贡献。因此，GCS抑制剂可通过在患病细胞中诱导凋亡来用于治疗增殖性障碍。
化合物
除非另有说明，本申请使用的所有科技术语都具有与本领域技术人员所通常理解相同的含义。尽管其它化合物或方法可用于实施或测试，但是现将某些优选的方法描述在以下制备和方案中。
制备A
制备B
制备C
制备D
制备E
方案1
方案2
方案3
在制备A的反应1中，式A-7化合物如下转化成相应的其中X为OH的式A-1化合物：在非质子性溶剂例如四氢呋喃中用还原剂优选氢化锂铝对A-7进行还原。将反应混合物在0℃至室温的温度搅拌约15分钟至约2小时优选约30分钟的时段。可选择地，式A-7化合物如下转化成相应的其中X为OH的式A-1化合物：在压力为约1大气压的氢气下在催化剂优选氧化铂和极性溶剂例如甲醇或乙醇存在下将A-7还原2小时至6小时优选4小时的时段。可选择地，式A-7化合物如下转化成相应的其中X为NH的式A-1化合物：在极性溶剂例如乙醇、甲醇、异丙醇优选异丙醇中使A-7与盐酸羟胺和乙酸钠反应。将反应混合物在50-80℃的温度搅拌2小时至7小时优选3小时的时段。然后在极性质子性溶剂例如乙醇、甲醇、丙醇优选正丙醇中用还原剂优选金属钠将以上如此形成的化合物转化成式A-1化合物。将反应混合物在50-80℃优选溶剂回流温度搅拌过夜。
在制备A的反应2中，式A-7化合物如下转化成相应的其中R1、n和z如上定义的式A-5化合物：在约-60℃至约-90℃优选约-78℃的温度历时约1小时至约4小时优选约2小时的时段将R1-溴化镁在醚中的溶液加到A-7在非质子性溶剂例如醚中的溶液中。可选择地，可使式A-7化合物与R1-锂反应以得到式A-5化合物。
在制备A的反应3中，式A-5化合物如下转化成相应的其中R1、n和z如上定义的式A-4化合物：A-5在乙腈存在下用强酸优选硫酸处理。将反应混合物在室温搅拌过夜。
在制备A的反应4中，式A-4化合物如下转化成相应的其中R1、n和z如上定义的式A-2化合物：A-4用酸优选盐酸处理。将反应混合物在回流下搅拌18小时至72小时优选24小时的时段且通过用无机碱例如氢氧化钠的水溶液处理而碱化至pH＝8。
在制备A的反应5中，式A-7化合物如下转化成相应的其中R1、n和z如上定义的式A-6化合物：使A-7与三苯基磷鎓叶立德(triphenyl phosphonium ylide)反应以得到相应的式A-6烯化合物。将反应混合物在室温搅拌过夜。
在制备A的反应6中，式A-6化合物如下转化成相应的其中R1、n和z如上定义的式A-3化合物：在压力为约1大气压的氢气下在催化剂优选钯/炭和极性溶剂例如甲醇、乙醇或乙酸乙酯存在下对A-6进行还原。将反应混合物在室温搅拌约2小时至约24小时优选约18小时的时段。然后如此形成的化合物在溶剂例如四氢呋喃、甲醇和水的混合物中用碱优选氢氧化锂处理以得到式A-3化合物。将反应混合物在室温搅拌过夜。
在制备B的反应1中，式B-2化合物如下转化成相应的式B-1化合物：在非质子性溶剂例如四氢呋喃中用还原剂优选氢化锂铝对B-2进行还原。将反应混合物在0℃至室温的温度搅拌约15分钟至约2小时优选约30分钟的时段。
在制备C的反应1中，式C-4化合物如下转化成相应的其中X为溴或氯的式C-3化合物：在催化剂优选1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)和碳酸钾存在下使C-4与硼酸反应。反应混合物在二甲氧基乙烷和水的混合物中在约130℃至约170℃优选约150℃的温度用微波处理约15min至约1小时优选约30min的时段。可选择地，反应可使用溶剂例如二氧杂环己烷来进行且在常规加热下在100℃搅拌过夜。
在制备C的反应2中，式C-3化合物如下转化成相应的其中f为1-8且A1、X5和A2如上定义的式C-1化合物：将乙基溴化镁滴加到C-3和异丙醇钛在醚中的混合物中。将反应混合物在约-50℃至约-90℃优选约-70℃的温度搅拌。将所得反应混合物温热至约20℃至约30℃优选约25℃且再搅拌约30分钟至约2小时优选约1小时的时段。然后在约20℃至约30℃优选约25℃的温度将三氟化硼乙醚合物滴加到所述混合物中。
在制备C的反应3中，式C-3化合物如下转化成相应的其中A1、X5和A2如上定义的式C-2化合物：首先将氯化铈(III)在非质子性溶剂例如四氢呋喃中的混悬液在室温搅拌约30分钟至约2小时优选约1小时的时段。将所得混悬液冷却至约-60℃至约-90℃优选约-78℃的温度且加入有机锂剂优选甲基锂的醚溶液。历时约30分钟至约2小时优选约1小时的时段使所得有机铈复合物得以形成，然后加入C-3在非质子性溶剂例如四氢呋喃中的溶液。然后将所得反应混合物温热至室温且搅拌约16小时至约20小时优选约18小时的时段。
在制备D的反应1中，其中R为CO2Et或CN且X为溴或氯的式D-5化合物如下转化成相应的式D-3化合物：使D-5与烷基二卤化物例如1,2-二溴乙烷反应。然后如此形成的化合物在溶剂例如四氢呋喃、甲醇、乙二醇和水的混合物中用无机碱例如氢氧化锂或氢氧化钾处理以得到其中f为1-8的式D-3化合物。将反应混合物在25℃至130℃的温度搅拌过夜。可选择地，为了形成相应的其中X为X5-A2的式D-3化合物，必须首先按照以上在制备C的反应1中描述的操作使D-5发生反应。
在制备D的反应2中，式D-3化合物如下转化成相应的式D-1化合物：使D-3与碱例如三乙胺和二苯基磷酰基叠氮在非质子性溶剂例如甲苯中反应。将反应混合物加热至80℃-110℃的温度范围优选在110℃加热15min至1小时优选30分钟。然后如此形成的中间体在60-110℃优选90℃用叔丁醇处理过夜。然后如此形成的氨基甲酸酯如下转化成相应的其中f为1-8的式D-1化合物：在室温在酸性介质(优选使用三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液)中处理30min至5小时优选2小时的时段。
在制备D的反应3中，其中R为CO2Et或CN且X为溴或氯的式D-5化合物如下转化成相应的式D-4化合物：使D-5与烷基卤化物例如MeI反应。然后如此形成的化合物在溶剂例如四氢呋喃、甲醇、乙二醇和水的混合物中用无机碱例如氢氧化锂或氢氧化钾处理以得到式D-4化合物。将反应混合物在25℃至130℃的温度搅拌过夜。可选择地，为了形成相应的其中X为X5-A2的式D-4化合物，必须首先按照以上在制备C的反应1中描述的操作使D-5发生反应。
在制备D的反应4中，式D-4化合物如下转化成相应的式D-2化合物：使D-4与碱例如三乙胺和二苯基磷酰基叠氮在非质子性溶剂例如甲苯中反应。将反应混合物加热至80℃-110℃的温度范围优选在110℃加热15min至1小时优选30分钟。然后如此形成的中间体在60-110℃优选90℃用叔丁醇处理过夜。然后如此形成的氨基甲酸酯如下转化成相应的式D-1化合物：在室温在酸性介质(优选使用三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液)中处理30min至5小时优选2小时的时段。
在制备E的反应1中，其中X为溴或氯的式E-2化合物如下转化成相应的式E-1化合物：在约-60℃至约-90℃优选约-78℃的温度使E-2与甲基溴化镁在醚中反应约30min至约3小时优选约2小时的时段。可选择地，为了形成相应的其中X为X5-A2的式E-1化合物，必须首先按照以上在制备C的反应1中描述的操作使E-2发生反应。
在制备E的反应2中，式E-1化合物如下转化成相应的式D-2化合物：E-1在氯乙腈存在下用强酸优选硫酸处理。将反应混合物在室温搅拌过夜。然后如此形成的化合物在极性质子性溶剂例如乙醇中在80℃用硫脲处理过夜以形成相应的式D-2化合物。可选择地，E-1在非质子性溶剂例如二氯甲烷中在-10℃至室温的温度范围优选在0℃用叠氮化钠和三氟乙酸处理。如此形成的化合物在四氢呋喃和水的溶液中在三苯基膦存在下被还原以形成相应的式D-2化合物。将反应混合物在25-80℃的温度范围优选在室温搅拌2小时至24小时优选18小时的时段。
在方案1的反应1中，式A-1或A-2化合物如下分别转化成相应的其中f为1-8的式II化合物或式III化合物：将三光气加到C-1或C-2和三乙胺在非质子性溶剂例如四氢呋喃中的混悬液中。将反应混合物在室温搅拌约5分钟至约20分钟优选约15分钟的时段且加入少量醚。将所形成的三乙铵盐滤出。另外，在0℃或室温将氢化钠加到其中X为OH或NH的A-1或A-2在非质子性溶剂例如四氢呋喃中的混悬液中。将反应混合物在室温搅拌约5分钟至约20分钟优选约15分钟的时段且滴加以上如此形成的异氰酸酯四氢呋喃/醚溶液。可选择地，式II和III化合物可如下形成：如以上在制备D的反应4中描述的操作所述那样在非质子性溶剂例如甲苯中在碱例如三乙胺和二苯基磷酰基叠氮存在下使式D3或D4化合物与A-1和A-2反应。
在方案2的反应1中，式A-1、A-2或B-1化合物如下分别转化成相应的其中f为1-8的式IV、V、VI和VII化合物：将三光气加到C-1、C-2、D-1或D-2和三乙胺在非质子性溶剂例如四氢呋喃或甲苯中的混悬液中。将反应混合物在室温搅拌约5分钟至约20分钟优选约15分钟的时段且加入少量醚。然后将其中X为NH的A-1或A-2加到以上如此形成的异氰酸酯溶液中且将反应混合物在25-100℃的温度范围优选在室温搅拌约2小时至24小时优选18小时的时段。
在方案3的反应1中，式A-3化合物如下分别转化成相应的其中f为1-8的式VIII化合物和式IX化合物：在溶剂例如四氢呋喃或二甲基甲酰胺中使用碳二亚胺偶联剂例如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺和1-羟基-苯并三唑或2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐经由肽偶联使A3与C1、C-2、D-1或D-2反应。将反应混合物在室温搅拌过夜。
尽管现将参考制备和方案来描述本申请具体实施方案，但是应该理解的是，这些实施方案仅是示例性的且仅用于说明多种可能的具体实施方案中的一小部分，其可代表本申请要义的实施。各种变化和修改对于知晓本申请益处的本领域技术人员将是显而易见的且被认为在所附权利要求书所进一步定义的本申请主旨和范围内。
除非另有说明，本申请使用的所有科技术语都具有与本领域技术人员所通常理解相同的含义。尽管其它化合物或方法可用于实施或测试，但是现将某些优选的方法描述在以下制备和方案中。
本申请化合物的所有药用盐、前药、互变异构体、水合物和溶剂化物也在本申请范围内。
性质为碱性的本申请化合物通常能够与各种无机酸和/或有机酸形成很多种不同的盐。尽管所述盐通常就给药于动物和人类而言是药学上可接受的，但是实际上经常需要的是，首先从反应混合物中分离出呈非药用盐形式的化合物，然后简单地通过用碱性试剂处理将非药用盐转化回游离碱化合物，然后将游离碱转化成药用酸加成盐。碱化合物的酸加成盐可容易地使用常规技术例如如下制备：在水性溶剂介质或合适的有机溶剂例如甲醇或乙醇中用基本等量的所选矿物酸或有机酸对碱化合物进行处理。小心地将溶剂蒸发后，得到所需要的固体盐。
可用于制备碱化合物的药用酸加成盐的酸是可形成无毒酸加成盐的那些酸，所述无毒酸加成盐即为含有药理学上可接受的阴离子的盐例如氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸盐或硫酸氢盐、磷酸盐或酸式磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、枸橼酸盐或酸式枸橼酸盐、酒石酸盐或酒石酸氢盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、蔗糖盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐和扑酸盐[即1,1’-亚甲基-二(2-羟基-3-萘甲酸盐)]。
性质为酸性例如含有COOH或四唑部分的本申请化合物通常能够与各种无机碱和/或有机碱形成很多种不同的盐。尽管所述盐通常就给药于动物和人类而言是药学上可接受的，但是实际上经常需要的是，首先从反应混合物中分离出呈非药用盐形式的化合物，然后简单地通过用酸性试剂处理将非药用盐转化回游离酸化合物，然后将游离酸转化成药用碱加成盐。这些碱加成盐可容易地使用常规技术例如如下制备：用含有药理学上可接受的所需阳离子的水溶液对相应的酸性化合物进行处理，然后将所得溶液优选在减压下蒸发至干。可选择地，它们还可如下制备：将酸性化合物的低级烷醇溶液和所需要的碱金属烷氧化物混合在一起，然后以与上述相同的方式将所得溶液蒸发至干。在每种情况下优选使用化学计量的试剂以确保反应的完全和所需固体盐的最大产率。
可用于制备酸化合物的药用碱加成盐的碱是可形成无毒碱加成盐的那些碱，所述无毒碱加成盐即为含有药理学上可接受的阳离子的盐例如碱金属阳离子盐(例如钾盐和钠盐)、碱土金属阳离子盐(例如钙盐和镁盐)、铵盐或其它水溶性胺[例如N-甲基葡糖胺(葡甲胺)]加成盐、低级烷醇铵盐及其它诸如此类的有机胺碱盐。
经同位素标记的化合物也在本申请范围内。本申请使用的“经同位素标记的化合物”是指本申请以下化合物(包括各自如本申请所述的其药用盐和前药)，其中一个或多个原子被原子量或质量数与自然界常见原子量或质量数不同的原子代替。可引入到本申请化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别为例如2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。
通过经同位素标记的本申请化合物，所述化合物可用于药物和/或底物组织分布测定。经氚(3H)和碳-14(14C)标记的化合物是特别优选的，这是因为它们易于制备和检测。另外，用较重的同位素例如氘(2H)进行的替换可提供由于较大的代谢稳定性而带来的某些治疗益处例如增加的体内半衰期或减小的剂量需要且因此在一些情况下可能是优选的。经同位素标记的本申请化合物(包括其药用盐和前药)可通过本领域已知的任何方法来制备。
本申请化合物的立体异构体(例如顺式和反式异构体)和所有光学异构体(例如R和S对映异构体)及所述异构体的外消旋混合物、非对映异构体混合物和其它混合物在本申请范围内。
本申请化合物、盐、前药、水合物和溶剂化物可按几种互变异构体形式(包括烯醇和亚胺形式及酮和烯胺形式)和几何异构体形式及其混合物形式存在。互变异构体以一组互变异构体的混合物形式存在于溶液中。在固体形式中，一种互变异构体通常占优势。尽管可能描述了一种互变异构体，但是所有互变异构体都在本申请范围内。
阻转异构体也在本申请范围内。阻转异构体是指以下化合物，其可被分离成旋转受到限制的异构体。
本申请还提供药物组合物，其包含至少一种本申请化合物和至少一种药用载体。药用载体可以是本领域已知的任何所述载体，其包括在例如Remington’s PharmaceuticalSciences,Mack Publishing Co.,(A.R.Gennaro edit.1985)中描述的那些载体。本申请化合物的药物组合物可通过本领域已知的常规方法来制备，包括例如将至少一种本申请化合物与药用载体混合。
本申请药物组合物可用于动物或人类。因此，可将本申请化合物配制成用于口服、含服、胃肠外(例如静脉内、肌内或皮下)、局部、直肠或鼻内给药或适于通过吸入或吹入来给药的形式。
还可按照本领域技术人员熟知的方法将本申请化合物配制成用于持续递送。所述制剂的实例可参见美国专利3,119,742、3,492,397、3,538,214、4,060,598和4,173,626。
对于口服给药，药物组合物可呈例如通过常规方法用一种或多种药用赋形剂制备的片剂或胶囊剂形式，所述药用赋形剂为例如粘合剂(例如预胶化玉米淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮或羟基丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或硅胶)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)；和/或润湿剂(例如月桂基硫酸钠)。片剂可通过本领域公知的方法来包衣。用于口服给药的液体制剂可呈例如溶液剂、糖浆剂或混悬剂形式或它们可按干燥产品形式来提供，所述干燥产品在使用前用水或其它合适的媒介物复溶。所述液体制剂可通过常规方法用一种或多种药用添加剂制备，所述药用添加剂为例如助悬剂(例如山梨醇糖浆、甲基纤维素或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)；非水性媒介物(例如杏仁油、油性酯或乙醇)；和/或防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。
对于含服给药，组合物可呈以常规方式配制的片剂或锭剂形式。
可将本申请化合物配制成用于通过注射来胃肠外给药，所述注射包括使用常规导管插入技术或输注。注射剂可按例如在安瓿或多剂量容器中添加有防腐剂的单位剂量形式来提供。组合物可呈例如在油性或水性媒介物中的混悬剂、溶液剂或乳剂形式且可含有本领域技术人员公认的配制剂例如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。可选择地，活性成分可呈粉末形式，其在使用前用合适的媒介物例如无菌的无热原的水复溶。
对于局部给药，可将本申请化合物配制成软膏剂或乳膏剂。
还可将本申请化合物配制成直肠用组合物例如栓剂或保留性灌肠剂，其例如含有常规栓剂基质例如可可脂或其它甘油酯。
对于鼻内给药或通过吸入来给药，本申请化合物可方便地以溶液或混悬液形式由被患者挤压或泵送的泵喷雾容器递送或以气雾喷雾提供形式通过使用合适的推进剂由加压容器或雾化器递送，所述推进剂为例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可通过提供阀门来确定以递送所计量的量。加压容器或雾化器可含有本申请化合物的溶液或混悬液。可将用在吸入器或吹入器中的胶囊或药筒(例如由明胶制成)配制成含有本申请化合物和合适的粉末基质例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
本申请化合物用于向普通成人口服、胃肠外或含服给药以治疗或预防与TPO相关的疾病状态的推荐剂量为约0.1mg至约2000mg。在某些实施方案中，推荐剂量为约0.1mg至约200mg活性成分/单位剂量。不考虑所推荐的剂量，所述化合物可例如每天给药1-4次。
用于在普通成人中治疗或预防上述病症的气雾剂优选被设置成使气雾剂的每个计量剂量或“喷出量”含有约20mg至约10,000mg优选约20mg至约1000mg的本申请化合物。气雾剂的每日总剂量将在约100mg至约100mg的范围内。在某些实施方案中，气雾剂的每日总剂量通常将在约100mg至约10mg的范围内。每天可给药几次例如2、3、4或8次且每次给药例如1、2或3个剂量。
用于在普通成人中治疗或预防上述病症的组合气雾剂优选被设置成使气雾剂的每个计量剂量或“喷出量”含有约0.01mg至约1000mg的包含本申请化合物的组合。在某些实施方案中，气雾剂的每个计量剂量或“喷出量”含有约0.01mg至约100mg的包含本申请化合物的组合。在某些实施方案中，气雾剂的每个计量剂量或“喷出量”含有约1mg至约10mg的包含本申请化合物的组合。每天可给药几次例如2、3、4或8次且每次给药例如1、2或3个剂量。
用于治疗或预防的以下药物组合物和方法也在本申请范围内，其包括给药至少一种本申请化合物的前药。
葡糖神经酰胺合酶测定
酶测定使用微粒体作为葡糖神经酰胺合酶活性的来源。以与白蛋白的复合物形式将荧光神经酰胺底物递送至与膜结合的酶。反应后，将神经酰胺和葡糖神经酰胺分离且通过带有荧光检测的反相HPLC来定量。
操作
由A375人黑素瘤细胞制备微粒体：
细胞悬浮液在冰上用超声波处理以完成溶胞，随后在4℃以10,000g离心10分钟。上清液通过在4℃以100,000g再次离心1小时来澄清。将团块重新混悬在溶胞缓冲液中，等分且贮存在-80℃。
葡糖神经酰胺合酶测定
将底物和微粒体以1:1组合，在板振荡器上充分混合，将板密封并在室温避光孵育1小时。
在反应板中用停止溶液停止并转移到分析板中。
RP-HPLC分析
-柱：MercuryMSTM(Phenomenex)可更换柱(Luna C8,3μm,20×4mm)。
-系统：带有Agilent 1200系列荧光检测器的Agilent 1100。
-流动相：1％甲酸/81％甲醇，19％水，流速0.5mL/min，等度洗脱，4min。
-样品稀释剂：0.1mM C8神经酰胺(吸附阻断剂)/50％异丙醇，50％水(v/v)。
-荧光检测：λex＝470nm，λem＝530nm。
-在这些条件下，NBD C6GluCer所具有的保留时间为约1.7min且NBD C6Cer在约2.1min洗脱；峰清楚地与基线分开且通过HPLC软件自动积分。
-底物向产物的转化％用作抑制剂测试的读出结果以避免由于稀释误差或样品蒸发所导致的可变性。
所有示例性化合物在报道子测定中所具有的IC50值都小于5μM。
实验
一般操作A：用三光气形成氨基甲酸酯/脲
在室温向胺盐酸盐(1当量)和三乙胺(3-4当量)在THF中的混悬液(浓度～0.2M)中加入三光气(0.35当量)。将反应混合物搅拌10min并加入少量乙醚(1-2mL)。将三乙铵盐滤出得到异氰酸酯在THF/乙醚中的澄清溶液。
在室温向醇(1.5当量)在THF中的溶液(浓度～0.2M)中加入NaH[60％,油](1.5当量)。将反应混合物搅拌15min并逐滴加入上述溶液(异氰酸酯在THF/乙醚中的溶液)。
在标准后处理中，将反应混合物用盐水淬灭。将溶液用EtOAc萃取并将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗物质在Combiflash(SiO2柱,CHCl3和2N NH3/MeOH)上纯化得到相应的氨基甲酸酯。
可选择地：在室温向胺盐酸盐A(1当量)和三乙胺(3-4当量)在THF中的混悬液(浓度～0.2M)中加入三光气(0.35当量)。将反应混合物搅拌10min并加入少量乙醚(1-2mL)。将三乙铵盐滤出得到异氰酸酯在THF/乙醚中的澄清溶液。
在室温向胺B(1当量)在THF中的溶液(浓度～1.0M)中逐滴加入上述溶液(异氰酸酯在THF/乙醚中的溶液)。将反应混合物搅拌18h并浓缩。将粗物质在Combiflash(SiO2柱,CHCl3和2N NH3/MeOH)上纯化得到相应的脲。
一般操作B：用有机铈进行烷基化
将CeCl3(4当量)在THF中的混悬液(浓度～0.2M)在室温搅拌1h。将混悬液冷却至-78℃并逐滴加入MeLi/乙醚[1.6M](4当量)。历时1h形成有机铈复合物并逐滴加入腈(1当量)在THF中的溶液(浓度2.0M)。将反应混合物温热至室温并搅拌18h。将溶液冷却至0℃并用水(～1mL)淬灭，随后加入50％氢氧化铵水溶液(～3mL)直到形成析出物并沉降至烧瓶底部。将混合物经硅藻土填料过滤并浓缩。将粗物质用HCl/二噁烷溶液[4.0M]处理。将中间体芳基丙-2-胺盐酸盐在乙醚中研磨并按原样用于下一步。可选择地，将粗游离碱胺在Combiflash(SiO2柱,CHCl3和2N NH3/MeOH)上纯化得到相应的芳基丙基胺。
一般操作C：用羰基二咪唑(CDI)形成脲
将胺A(1当量)和CDI(1.3当量)在THF中的溶液(浓度～0.15M)回流搅拌1h。加入胺B(1.3当量)在THF中的溶液并将反应混合物再搅拌1.5h。将反应混合物冷却至室温并用乙醚稀释。析出预期化合物并滤出。将粗物质在Combiflash[(碱性Al2O3柱,CHCl3和MeOH)或(SiO2柱,CHCl3和2N NH3/MeOH)]上纯化得到相应的脲。
一般操作D：用三光气形成脲
在室温向胺A(1当量)和三乙胺(4当量)在THF中的混悬液(浓度～0.15M)中加入三光气(0.35当量)。将反应混合物搅拌15min并加入胺B(1.1当量)。将反应混合物在室温搅拌18h，然后用EtOAc稀释。将有机层用NaOH水溶液[1.0M]洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗物质在Combiflash(SiO2柱,CHCl3和2N NH3/MeOH)上纯化得到相应的脲。
一般操作E：Suzuki偶联
向芳基卤(1当量)在DME/水的混合物[4:1]中的溶液(浓度～0.2M)中加入硼酸(2当量)、钯催化剂(0.1-0.25当量)和碳酸钠(2当量)。将反应混合物在150℃用微波辐射25min。经硅藻土填料过滤并浓缩后，将粗产物在Combiflash(SiO2柱,CHCl3和2N NH3/MeOH)上纯化得到相应的偶联加合物。
可选择地：向芳基卤(1当量)在甲苯/水的混合物[20:1]中的溶液(浓度～0.2M)中加入硼酸(1.3-2.5当量)、钯催化剂(0.05-0.15当量)、三环己基膦(0.15-0.45当量)和磷酸钾(5当量)。将反应混合物在150℃用微波辐射25min。经硅藻土填料过滤并浓缩后，将粗产物在Combiflash(SiO2柱,CHCl3和2N NH3/MeOH)上纯化得到相应的偶联加合物。
一般操作F：氢化
向底物在甲醇、乙醇或EtOAc中的溶液(浓度～0.2M)中加入钯催化剂(底物的20％w/w)。将反应混合物在室温在压力为1atm的氢气下搅拌直到完成。将反应混合物经硅藻土填料过滤，随后用氯仿淋洗两次。将粗产物浓缩并在Combiflash(SiO2柱,CHCl3和2N NH3/MeOH)上纯化得到氢化产物。可选择地，将终物质经析出或重结晶纯化。
一般操作G：环丙烷化
向在-70℃搅拌的芳基腈(1当量)和Ti(Oi-Pr)4(1.7当量)的混合物中逐滴加入EtMgBr[3.0M在乙醚中的溶液](1.1当量)。将反应混合物温热至25℃并搅拌1h。在25℃向上述混合物中逐滴加入BF3·Et2O(3当量)。加入后，将混合物再搅拌2h，然后用HCl水溶液[2M]淬灭。然后将所得溶液通过加入NaOH水溶液[2M]碱化。将有机物质用乙醚萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗物质经硅胶柱色谱(用石油醚/EtOAc 10/1至1/1洗脱)纯化得到相应的1-芳基-环丙烷胺。
一般操作H：经原位Curtius重排的偶联
将酸(1当量)、三乙胺(2.5当量)和DPPA(1.0当量)在甲苯中的混合物(浓度～0.3M)回流30min。将混合物冷却至室温并加入醇(1当量)。加入后，将混合物在90℃加热18h。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机相经硫酸钠干燥，浓缩并经制备性TLC(EtOAc/MeOH 5:1,含有1％TEA)纯化得到相应的氨基甲酸酯。
一般操作I：使用EDCI形成酰胺
向胺(1当量)在DMF或THF中的溶液(浓度～0.3M)中加入EDCI(1.2-2.5当量)、HOBT(1.2-2.5当量)、DIPEA(1.2-2.5当量)和三乙胺(几滴)。将反应混合物搅拌并加入酸(1.2当量)。将反应混合物在室温搅拌18h，然后浓缩。将残留物溶于EtOAc中并用盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥并浓缩。将粗物质经制备性HPLC-MS或Combiflash(SiO2柱,CHCl3和2N NH3/MeOH)纯化。
制备A
中间体1
2-(3-溴苯基)丙-2-胺盐酸盐
在-78℃向3-溴苯甲酸甲酯(15.0g,69.8mmol)在THF(140mL)中的溶液中逐滴加入MeMgBr/乙醚的溶液[3.0M](58mL)。将反应混合物温热至室温并搅拌2h。将溶液倒入氯化铵饱和水溶液中并将有机物质用EtOAc萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到相应的醇(14.9g)，其无需进一步纯化即使用。
向2-(3-溴苯基)丙-2-醇(17.2g,79.8mmol)在氯乙腈(160mL)中的溶液中加入乙酸(14mL)。将反应混合物冷却至0℃并逐滴加入H2SO4(14mL)。将反应混合物温热至室温并搅拌18h。然后将反应混合物倒入冰中并用EtOAc萃取。将有机层用NaOH水溶液[1.0M]和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩得到相应的氯乙酰胺(21.4g)，其无需进一步纯化即使用。
向N-(2-(3-溴苯基)丙-2-基)-2-氯乙酰胺(20.3g)在乙醇(120mL)中的溶液中加入乙酸(20mL)。将反应混合物回流搅拌18h。将溶液冷却至室温并将析出物在硅藻土填料上滤出。将滤液浓缩并将残留物溶于EtOAc中。将有机层用NaOH水溶液[1.0M]处理，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗物质用HCl/二噁烷的溶液[4M]处理。将中间体2-(3-溴苯基)丙-2-胺盐酸盐在乙醚中研磨并按原样用于下一步(7.50g,43％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.69(q,J＝1.8Hz,1H),7.55(ddd,J＝1.0,1.8,7.9Hz,1H),7.49(ddd,J＝1.0,2.0,8.0Hz,1H),7.38(t,J＝8.0Hz,1H),1.71(s,6H)ppm。
制备B
中间体2
2-(5-溴-2-氟苯基)丙-2-胺盐酸盐
向5-溴-2-氟苯甲酸(4.85g,22.8mmol)在甲醇(45mL)中的溶液中加入H2SO4(4.5mL)。将反应混合物在室温搅拌18h并将溶液浓缩。将残留物用NaOH水溶液[10％w/v]处理并将有机物质用CHCl3萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到相应的酯(4.69g,91％)，其无需进一步纯化即使用。
使用与在实施例中间体1中所述相同的操作将酯中间体(4.69g,20.1mmol)转化成中间体2，得到相应的铵盐(3.94g,67％总收率)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.67-7.57(m,2H),7.21(dd,J＝8.7,12.3Hz,1H),1.77(s,6H)ppm。
中间体3
2-(3-溴-4-氟苯基)丙-2-胺盐酸盐
使用与在实施例中间体2中所述相同的操作将5-溴-2-氟苯甲酸转化成中间体3，得到相应的铵盐(2.79g,49％总收率)，其为白色固体。
中间体4
2-(3-溴-2-氟苯基)丙-2-胺
使用与在实施例中间体2中所述相同的操作将3-溴-2-氟苯甲酸转化成中间体4，得到相应的胺，其为淡黄色油状物。
中间体5
2-(4-溴苯基)丙-2-胺盐酸盐
使用一般操作B将溴苯甲腈(2.00g,11.0mmol)转化成相应的2-(4-溴苯基)丙-2-胺，其以棕色油状物形式得到(1.20g,51％)。
制备C
中间体6
1,4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷
在室温向1,4-二氮杂二环[3.2.2]壬-3-酮(1.0g,7.2mmol)在1,4-二噁烷(7.2mL)中的搅拌溶液中加入氢化锂铝[2.0M/THF](4.1mL,8.2mmol)。然后将反应混合物加热回流6小时，然后冷却至室温。将反应混合物通过逐滴加入200μL H2O、200μL 15％NaOH水溶液和600μL H2O淬灭。将混合物经硅藻土过滤，随后将其用EtOAc洗涤。将合并的滤液真空浓缩得到产物(0.82g,90％)，其无需进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.28-3.25(m,1H),2.99-2.95(m,8H),1.86-1.80(m,3H),1.69-1.64(m,2H)ppm。
制备D
中间体7
2-甲基奎宁环-3-醇
将碳酸钾(11.4g,82.8mmol)和奎宁环水合物(5.00g,20.4mmol)溶于H2O(15.6mL)中。当完全溶解时，加入二氯甲烷(20.4mL)并将反应混合物在室温搅拌过夜。分离有机相并将水相用氯仿(3×50mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。产物无需进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)2.79(s,1H),5.19(s,1H),3.14-3.06(m,2H),2.99-2.91(m,2H),2.57-2.55(m,1H),1.98-1.93(m,4H)ppm。
将2-亚甲基奎宁环-3-酮(3.50g)在乙醇(30mL)中的溶液在氢气气氛下经10％Pd/C(50wt％)还原。当经TLC判断完成时(～3天)，将催化剂滤出并将滤饼用乙酸乙酯洗涤。真空除去溶剂得到预期产物(2.80g,80％)，其无需进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)3.37-3.31(m,1H),3.21-3.13(m,2H),3.09-3.00(m,1H),2.97-2.89(m,1H),2.46-2.43(m,1H),2.05-1.91(m,4H),1.34(d,J＝7.6Hz,3H)ppm。
在室温向2-甲基奎宁环-3-酮(0.50g,3.60mmol)在1,4-二噁烷(18mL)中的溶液中加入氢化锂铝[1.0M/THF](4.1,4.1mmol)。将反应混合物在室温搅拌15分钟。将反应混合物通过逐滴加入116μL H2O、116μL 15％NaOH水溶液和348μL H2O淬灭。将混合物经硅藻土过滤，随后将其用EtOAc洗涤。真空除去溶剂得到呈非对映异构体的2:1混合物形式的产物(0.48g,95％)，其无需进一步纯化即使用。
制备E
中间体8
1-氮杂二环[3.2.2]壬-4-醇
在0℃向1-氮杂二环[3.2.2]壬-4-酮(0.20g,1.4mmol)在1,4-二噁烷(2.8mL)中的溶液中加入氢化锂铝[1.0M/THF](1.7mL,1.7mmol)。将反应混合物在0℃保持15分钟。将反应混合物通过逐滴加入46μL H2O、46μL 15％NaOH水溶液和138μL H2O淬灭。将混合物经硅藻土过滤，随后将其用EtOAc洗涤。真空除去溶剂得到产物(0.19g,96％)，其无需进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.90-3.86(m,1H),3.09-3.03(m,1H),2.96-2.91(dd,J＝9.2,6.8Hz,1H),2.86-2.75(m,3H),2.71-2.64(m,1H),2.34-2.27(bs s,1H),1.98-1.86(m,3H),1.71-1.59(m,3H),1.51-1.35(m,1H)ppm。
制备F
中间体9
1-氮杂二环[2.2.1]庚-3-醇
在0℃向甲醇钠(2.00g,37.9mmol)在甲醇(9mL)中的混合物中加入甘氨酸甲酯盐酸盐(4.76g,37.9mmol)和亚甲基丁二酸二甲酯(5.00g,31.6mmol)。将反应混合物加热回流16小时，然后冷却至室温。滤出固体并用二氯甲烷洗涤。将滤液浓缩并将残留物用5N HCl(50mL)稀释。将水层用二氯甲烷(4×50mL)萃取，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。产物无需进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.04(dd,J＝82.0,17.6Hz),3.74-3.64(m,8H),3.32-3.24(m,1H),2.77-2.63(m,2H)ppm。
在0℃向1-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-5-氧代吡咯烷-3-羧酸甲酯(3.40g,16.0mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入硼烷-THF[1.0M/THF](32.0mL,32.0mmol)。将反应混合物回流搅拌1小时，然后冷却至室温，在室温将其再搅拌12小时。将反应混合物通过加入饱和碳酸钾溶液(5.52g,20mL H2O)淬灭并再加热回流1小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂并将残留物通过加入5N HCl(25mL)酸化。将水层用二氯甲烷(2×30mL)萃取。然后通过加入固体碳酸钾使水层的pH变为碱性。将水层进一步用二氯甲烷(5×30mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。产物无需进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.66(s,3H),3.63(s,3H),3.29(ABq,2H,J＝24.0,16.8Hz),3.06-3.02(m,2H),2.87-2.81(m,1H),2.71-2.65(m,1H),2.56-2.50(m,1H),2.09-2.04(m,2H)ppm。
历时1小时向叔丁醇钾(2.46g,22.0mmol)在甲苯(32mL)中的回流溶液中逐滴加入1-(2-甲氧基-2-氧代乙基)吡咯烷-3-羧酸甲酯(2.00g,10.0mmol)在甲苯(10mL)中的溶液。将反应混合物再回流搅拌3小时，然后首先冷却至室温，然后冷却至-10℃。然后在搅拌下加入乙酸(1.3mL)。将甲苯层用5NHCl(4×50mL)萃取。将合并的水层在110℃加热8小时。然后将反应混合物冷却至室温并将体积真空减小一半。通过加入固体碳酸钾使反应混合物的pH变为碱性。将水层用二氯甲烷(5×50mL)萃取并将合并的有机层真空浓缩。向粗产物中加入乙醚。将固体滤出得到预期产物(0.30g,27％)，其无需进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.05-2.96(m,3H),2.76(s,2H),2.72-2.66(m,2H),2.09-2.01(m,1H),1.78-1.71(m,1H)ppm。
将1-氮杂二环[2.2.1]庚-3-酮(0.30g,2.7mmol)在乙醇(2-3mL)中的溶液在氢气气氛下经PtO2(50wt％)还原。搅拌4小时后，滤出催化剂并将滤饼用乙醇洗涤。真空除去乙醇得到预期产物(0.29g,95％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.36-4.35(m,1H),3.10-3.05(m,1H),2.95-2.88(m,1H),2.72-2.66(m,1H),2.63-2.57(m,2H),2.48-2.44(dd,J＝10.0,3.2Hz,1H),2.11-2.05(m,2H),1.51-1.44(m,1H)ppm。
制备G
中间体10
(R)-3-甲基奎宁环-3-胺和(S)-3-甲基奎宁环-3-胺
在-78℃向MeLi[3.0M/乙醚](67.0mL,201mmol)在无水乙醚(150mL)中的充分搅拌的溶液中逐滴加入奎宁环-3-酮(12.5g,100mmol)在乙醚(100mL)中的溶液。将所得溶液在-78℃保持1小时，然后在室温保持18小时。在0℃逐滴加入水(60mL)并将混合物真空浓缩得到残留物，将其经中性氧化铝柱色谱(0-20％MeOH/CHCl3)纯化得到3-甲基奎宁环-3-醇(10.0g,71％)，其为浅黄色固体。在0℃向搅拌的乙腈(250mL)中缓慢加入浓硫酸(100mL)。在0℃将所得溶液逐滴加到3-甲基奎宁环-3-醇(9.10g,64.5mmol)在乙腈(250mL)中的混合物中。将反应混合物在室温搅拌60小时，然后用冰浴冷却并用氢氧化钠水溶液碱化至pH10。将混合物用5:1(v/v)CHCl3/i-PrOH萃取。将有机层浓缩得到残留物，将其用2N HCl水溶液稀释并用5:1(v/v)CHCl3/i-PrOH洗涤。然后将剩余的水层用2N NaOH碱化并用5:1(v/v)CHCl3/i-PrOH萃取。将合并的有机层用水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩得到9.5g(82％)预期化合物，其为浅黄色油状物。通过在超临界流体色谱(SFC)系统上使用手性柱将上述中间体的2种对映异构体彼此分离。
将上述手性乙酰胺中间体(9.50g,52.0mmol)在浓HCl(100mL)中的溶液回流3天，用冰浴冷却并用氢氧化钠水溶液中和至pH 1。将混合物用5:1(v/v)CHCl3/i-PrOH洗涤。然后将水层用2N NaOH碱化并用5:1(v/v)CHCl3/i-PrOH)萃取。将合并的萃取物用水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩得到5.00g(69％)预期手性化合物，其为浅黄色半固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.72-2.39(m,6H),2.01-1.96(m,1H),1.67-1.61(m,1H),1.43-1.36(m,2H),1.23-1.17(m,1H),1.09(s,3H)ppm。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ65.3,48.3,46.6,46.4,34.2,30.0,24.8,22.8ppm。纯度>99％(GC-MS)；保留时间6.63min；(M)140.1。
制备H
中间体11
2-(3-(4-氟苯基)异噻唑-5-基)丙-2-胺
向4-氟苯甲酰胺(70.00g,503.1mmol)在甲苯(900mL)中的搅拌混悬液中加入氯羰基硫基氯(83.0mL,1.00mol)。将混合物在60℃加热过夜并浓缩。将所得褐色固体用二氯甲烷(200mL)研磨，经抽吸过滤收集并用额外的二氯甲烷(4×70mL)淋洗。将粗产物浸入到硅胶(100g)上并在用硅胶干载的大过滤漏斗中进行色谱纯化(使用己烷/乙酸乙酯梯度)。得到产物5-(4-氟苯基)-1,3,4-噁噻唑-2-酮，其为灰白色固体(55.98g,56％)。
向5-(4-氟苯基)-1,3,4-噁噻唑-2-酮(42.80g,217.1mmol)在邻二氯苯(600mL)中的搅拌溶液中加入丙炔酸乙酯(66.0mL,651mmol)。将混合物在135℃加热过夜并浓缩。将残留的油状物经快速色谱(使用己烷/乙酸乙酯梯度)纯化得到3-(4-氟苯基)异噻唑-5-羧酸乙酯，其为淡金色固体(17.35g,32％)。弃去极性较大的3-(4-氟苯基)异噻唑-4-羧酸乙酯异构体(以与预期产物的比例为～57/43产生)。
历时20分钟向3-(4-氟苯基)异噻唑-5-羧酸乙酯(38.50g,153.2mmol)在THF(400mL)中的搅拌并冷却(0℃)的溶液中逐滴加入甲基溴化镁在乙醚中的溶液(3.0M,128mL,384mmol)。在0℃再保持1.5小时后，将反应混合物通过缓慢加入乙酸乙酯(20mL)淬灭并浓缩。将残留物吸收于NH4Cl水溶液(400mL)中并用乙酸乙酯(2×150mL)萃取。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)并浓缩。将所得琥珀色浆状物经快速色谱(使用己烷/乙酸乙酯梯度)纯化得到2-(3-(4-氟苯基)异噻唑-5-基)丙-2-醇，其为柔软金色固体(29.02g,80％)。
将2-(3-(4-氟苯基)异噻唑-5-基)丙-2-醇(29.00g,122.2mmol)吸收于亚硫酰氯(75mL)中。将混合物短暂冷却(冰浴)并搅拌。4小时后，将反应混合物浓缩并将残留物在乙酸乙酯(200mL)和NaHCO3水溶液(300mL)之间分配。将有机层与水层的反萃取物(乙酸乙酯,1×100mL)合并，干燥(Na2SO4)并浓缩得到5-(2-氯丙-2-基)-3-(4-氟苯基)异噻唑产物和3-(4-氟苯基)-5-(丙-1-烯-2-基)异噻唑消除副产物的混合物(比例～63/39)，其为深琥珀色油状物(29.37g)。该物质无需纯化即用于下一个反应。
向前述步骤的产物在DMSO(80mL)中的搅拌溶液中加入叠氮化钠(14.89g,229.0mmol)。将混合物在50℃加热过夜，用乙酸乙酯(250mL)稀释并用水(6×400mL)洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩得到5-(2-叠氮基丙-2-基)-3-(4-氟苯基)异噻唑和3-(4-氟苯基)-5-(丙-1-烯-2-基)异噻唑的混合物(比例为～56/44)，其为深琥珀色油状物(29.10g)。该物质无需纯化即用于下一个反应。
将前述步骤的产物与10％钯/炭(50％水；7.50g)合并并吸收于甲醇(350mL)中。将搅拌的混悬液在真空和氮气净化之间循环三次。再次抽空后，将反应混合物用氢气(气囊储库)回填并搅拌过夜。将反应混合物经硅藻土过滤。将滤液与硅藻土的甲醇淋洗液合并并浓缩。将所得深琥珀色油状物经快速色谱(使用二氯甲烷/甲醇梯度)纯化得到2-(3-(4-氟苯基)异噻唑-5-基)丙-2-胺，其为粘稠琥珀色油状物(14.23g,历经3步49％)。
几种措施正被使用或实施以治疗LSD，所述措施中的大多数集中于在疾病控制中单独使用酶代替疗法。所批准的多种酶代替疗法是可商购的以治疗LSD(例如针对蓬佩病的针对I型粘多糖贮积病的针对戈谢病的和针对法布里病的)。另外，发明人已经鉴定了用于在LSD控制中单独使用的多种小分子。如以下所详细描述的那样，在此描述的本申请治疗方法为面对各种溶酶体贮积病的从业者提供了治疗选择。
在本申请某些方面，本申请化合物可单独或以与酶代替疗法的联合疗法形式用于治疗代谢病例如溶酶体贮积病(LSD)。在本申请其它方面，本申请化合物可单独或以与酶代替疗法的联合疗法形式用于在被诊断患有代谢病例如LSD的受试者中抑制或降低GCS活性。在本申请其它方面，本申请化合物可用于在被诊断患有代谢病例如LSD的受试者中减少和/或抑制贮存物质(例如溶酶体底物)的蓄积。在上述方面的某些实施方案中，所述LSD为戈谢病(1型、2型或3型)、法布里病、GM1神经节苷脂贮积病或GM2神经节苷脂贮积病(例如GM2活化因子缺乏、泰-萨克斯病和桑德霍夫病)。表1列举了多种LSD且鉴定了所缺乏的相应酶，所述酶可在本申请上述方面用于ERT。
在其它方案中，可能需要向以下患者提供SMT，所述患者的病症需要减少脑中的底物且因此不能通过全身性给药ERT来治疗。尽管直接的脑室内或鞘内给药可降低脑中的底物水平，但是全身性给药的ERT由于其不能穿过血脑屏障(BBB)而不适于涉及中枢神经系统(CNS)的LSD且可证实SMT在具有CNS残留酶活性的患者中是有益的。
根据本申请，向患者提供SMT以治疗癌症和/或代谢病例如溶酶体贮积病。SMT可包括一种或多种小分子。SMT包括向患者给药本申请化合物。在具体实施方案中，所述化合物为(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸(S)-奎宁环-3-基酯或(2-(4’-氟-[1,1’-联苯]-3-基)丙-2-基)氨基甲酸奎宁环-3-基酯或其组合。
在某些实施方案中，本申请化合物例如(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸(S)-奎宁环-3-基酯和(2-(4’-氟-[1,1’-联苯]-3-基)丙-2-基)氨基甲酸奎宁环-3-基酯可用于治疗实际上由于鞘糖脂途径中的缺陷而引起的任何贮积病(例如戈谢病(即1型、2型、3型)、法布里病、GM1神经节苷脂贮积病、GM2神经节苷脂贮积病(例如GM2活化因子缺乏、泰-萨克斯病和桑德霍夫病))。在特别优选的实施方案中，(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸(S)-奎宁环-3-基酯或其药用盐或前药单独或以与酶代替疗法的联合疗法形式用于在患有法布里病的患者中抑制和/或减少Gb3和/或lyso-Gb3的蓄积。在优选的实施方案中，酶代替疗法包括向法布里病患者给药α-半乳糖苷酶A。实际上，已经证实本申请GCS抑制剂可在法布里病的小鼠模型中有效地减少Gb3和lyso-Gb3的贮积，这因此支持了其可用作治疗法布里病的可行措施。参见WO2012/129084。另外，在WO2012/129084的实施例中提供的体内联合疗法数据有力地表明联合治疗措施可以是累加和互补的。
在某些实施方案中，本申请化合物例如(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸(S)-奎宁环-3-基酯和(2-(4’-氟-[1,1’-联苯]-3-基)丙-2-基)氨基甲酸奎宁环-3-基酯可单独或以与ERT(例如给药葡糖脑苷脂酶)的组合形式用于在被诊断患有神经病性戈谢病的受试者的脑中降低GluCer和GluSph的水平。
本申请联合疗法的小分子疗法组分的剂量方案通常由专业医生来确定且被预期随所治疗的具体贮积病和具体患病个体的临床情况而显著变化。确定所给定的本申请SMT用于治疗任何贮积病的剂量方案的一般原则是本领域技术人员熟知的。关于剂量方案的指导可由任何本领域公知的多种参考文献得到。其它指导可尤其由本申请引用的一系列具体参考文献得到。在某些实施方案中，所述剂量的范围可以是约0.5mg/kg至约300mg/kg，优选约5mg/kg至约60mg/kg(例如5mg/kg、10mg/kg、15、mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg和60mg/kg)，其每天一次至五次腹膜内、口服或等效给药。所述剂量的范围可以是约5mg/kg至约5g/kg，优选约10mg/kg至约1g/kg，其每天一次至五次口服、腹膜内或等效给药。在一个实施方案中，剂量范围为约10mg/天至约500mg/天(例如10mg/天、20mg/天、30mg/天、40mg/天、50mg/天、60mg/天、70mg/天、80mg/天、90mg/天、100mg/天、110mg/天、120mg/天、130mg/天、140mg/天、150mg/天、160mg/天、170mg/天、180mg/天、190mg/天、200mg/天、210mg/天、220mg/天、230mg/天、240mg/天、250mg/天、260mg/天、270mg/天、280mg/天、290mg/天、300mg/天)。特别优选的口服剂量范围为约50mg至约100mg，其中所述剂量每天给药两次。本申请化合物的具体口服剂量范围为约5mg/kg/天至约600mg/kg/天。本申请化合物的具体口服剂量范围为约1mg/kg/天至约120mg/kg/天例如1mg/kg/天、5mg/kg/天、10mg/kg/天、15mg/kg/天、20mg/kg/天、25mg/kg/天、30mg/kg/天、35mg/kg/天、40mg/kg/天、45mg/kg/天、50mg/kg/天、55mg/kg/天或60mg/kg/天、65mg/kg/天、70mg/kg/天、75mg/kg/天、80mg/kg/天、85mg/kg/天、90mg/kg/天、95mg/kg/天、100mg/kg/天、105mg/kg/天、110mg/kg/天、115mg/kg/天或120mg/kg/天。
在某些实施方案中，本申请涉及使用本申请化合物的SMT和ERT疗法的联合疗法以治疗溶酶体贮积病。可根据本申请来治疗的已知溶酶体贮积病的部分列表参见表1，其包括通用的疾病名称、所贮积的物质和相应的酶缺乏(改编自上述Kolodny等人,1998中的表38-4)。
本领域技术人员已知的任何方法可用于监测疾病状态和本申请联合疗法的有效性。对疾病状态的临床监测可包括但不限于器官体积(例如肝脏、脾脏)、血红蛋白、红细胞计数、血细胞比容、血小板减少、恶病质(消瘦)和血浆壳多糖酶水平(例如壳三糖苷酶)。已知壳三糖苷酶(壳多糖酶家族中的一种酶)在患有溶酶体贮积病的受试者中由巨噬细胞以高水平产生(参见Guo等人,1995,J.Inherit.Metab.Dis.18,717-722；den Tandt等人,1996,J.Inherit.Metab.Dis.19,344-350；Dodelson de Kremer等人,1997,Medicina(Buenos Aires)57,677-684；Czartoryska等人,2000,Clin.Biochem.33,147-149；Czartoryska等人,1998,Clin.Biochem.31,417-420；Mistry等人,1997,BaillieresClin.Haematol.10,817-838；Young等人,1997,J.Inherit.Metab.Dis.20,595-602；Hollak等人,1994,J.Clin.Invest.93,1288-1292)。壳三糖苷酶优选与血管紧张素转化酶和非耐酒石酸的酸性磷酸酶一起测量以监测戈谢病患者对治疗的响应。
给药本申请联合疗法的方法和制剂包括本领域公知的所有方法和制剂(参见例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,1980及随后几年,第16版及随后版本,A.Osloeditor,Easton Pa.；Controlled Drug Delivery,1987,2nd rev.,Joseph R.Robinson&Vincent H.L.Lee,eds.,Marcel Dekker,ISBN:0824775880；Encyclopedia of ControlledDrug Delivery,1999,Edith Mathiowitz,John Wiley&Sons,ISBN:0471148288；美国专利6,066,626及其中引用的参考文献；还参见以下章节引用的参考文献)。
根据本申请，为治疗溶酶体贮积病的联合疗法提供以下通用措施。每种通用措施涉及按以下方式将酶代替疗法与小分子疗法组合，所述方式使临床益处最优化同时使与单独使用每种疗法相关的缺点最小化。
在本申请一个实施方案中，给药酶代替疗法(单独或与小分子疗法组合)以开始治疗(即对受试者进行减积)且在减积期后给药小分子疗法以实现和保持稳定的长期治疗作用而不需要频繁的静脉内ERT注射。例如，可每周一次、每两周一次或每两个月一次静脉内给药(例如历时一至两小时)酶代替疗法且持续数周或数月或更长时间(例如直到所涉及的指标器官例如脾脏或肝脏显示出体积减小)。另外，初始减积治疗的ERT期可单独进行或与小分子疗法组合进行。其中小分子适于口服的小分子疗法组分是特别优选的，这因此不再需要频繁的静脉内介入。
按需在ERT和SMT之间交替或用ERT补充SMT，这提供了以下策略：同时利用强度的优点且解决与单独使用时的每种疗法相关的缺点。无论是用于减积和/或还是用于较长期的护理，ERT的优点都在于非常广泛的临床经验，其可为从业者作出的决定提供信息。另外，在减积期可例如通过对尿或其它身体样品中的生物化学代谢物进行监测或通过对受影响的器官体积进行测量而用ERT对受试者进行有效滴定。然而，ERT的缺点是所需要的给药频率，其由于底物的不断重新蓄积而通常涉及每周一次或每两周一次的静脉内注射。使用小分子疗法以在患者中减少底物蓄积量或抑制底物蓄积，这可随后降低ERT的给药频率。例如，每两周一次的酶代替疗法给药方案可提供“ERT假日”(例如使用SMT)，从而使频繁的酶注射不是所需要的疗法。另外，用联合疗法对溶酶体贮积病进行的治疗可提供互补的治疗措施。实际上，与单独的任何一种治疗平台相比，SMT和ERT的联合疗法可提供显著的改善。参见WO2012/129084。使用SMT和ERT的联合疗法可以是累加和互补的。在一个实施方案中，ERT可用作减积策略(即开始治疗)，然后或同时用使用本申请化合物的SMT进行补充。在另一个实施方案中，患者首先用使用本申请化合物的SMT进行治疗，然后或同时用ERT进行补充。在其它实施方案中，SMT用于在患有溶酶体贮积病的患者中抑制或减少底物的进一步蓄积(或若在用ERT进行减积后使用，则抑制或减少底物的重新蓄积)且按需任选提供的ERT用于减少底物的任何进一步蓄积。在一个实施方案中，本申请提供对被诊断患有溶酶体贮积病的受试者进行治疗的联合疗法，其包括在给药酶代替疗法和给药小分子疗法之间交替。在另一个实施方案中，本申请提供对被诊断患有溶酶体贮积病的受试者进行治疗的联合疗法，其包括同时给药酶代替疗法和小分子疗法。在本申请各种联合疗法中，应该理解的是，小分子疗法的给药可在给药酶代替疗法前、与给药酶代替疗法同时或在给药酶代替疗法后进行。类似地，酶代替疗法的给药可在给药小分子疗法前、与给药小分子疗法同时或在给药小分子疗法后进行。
在本申请任何实施方案中，所述溶酶体贮积病选自戈谢(Gaucher)病(1型、2型和3型)、尼-皮(Niemann-Pick)病、法伯(Farber)病、GM1神经节苷脂贮积病、GM2神经节苷脂贮积病(例如GM2活化因子缺乏、泰-萨克斯(Tay-Sachs)病和桑德霍夫(Sandhoff)病)、克拉伯(Krabbe)病、胡-沙(Hurler-Scheie)综合征(MPS I)、亨特(Hunter)病(MPS II)、A型桑菲列普(Sanfilippo)病(MPS III)、B型桑菲列普病(MPS III)、C型桑菲列普病(MPS III)、D型桑菲列普病(MPS III)、A型莫尔基奥(Marquio)综合征(MPS IV)、B型莫尔基奥综合征(MPSIV)、马-拉(Maroteaux-Lamy)病(MPS VI)、斯利(Sly)综合征(MPS VII)、粘硫脂病、唾液酸贮积病、粘脂贮积病II、粘脂贮积病III、粘脂贮积病IV、法布里(Fabry)病、欣德勒(Schindler)病、蓬佩(Pompe)病、唾液酸贮积病、岩藻糖苷贮积病、甘露糖苷贮积病、天冬氨酰葡糖胺尿症、沃尔曼(Wolman)病和神经元蜡样脂褐质贮积病。
另外，ERT提供有效量的至少一种以下酶：葡糖脑苷脂酶、鞘磷脂酶、神经酰胺酶、GM1神经节苷脂-β-半乳糖苷酶、己糖胺酶A、己糖胺酶B、β-半乳糖脑苷脂酶、α-L-艾杜糖醛酸酶、艾杜糖醛酸硫酸酯酶、乙酰肝素-N-硫酸酯酶、N-乙酰基-α-氨基葡萄糖苷酶、乙酰辅酶A:α-氨基葡萄糖苷乙酰基转移酶、N-乙酰基-α-葡糖胺-6-硫酸酯酶、半乳糖胺-6-硫酸酯酶、β-半乳糖苷酶、半乳糖胺-4-硫酸酯酶(芳基硫酸酯酶B)、β-葡糖醛酸苷酶、芳基硫酸酯酶A、芳基硫酸酯酶C、α-神经氨酸酶、N-乙酰基-葡糖胺-1-磷酸转移酶、α-半乳糖苷酶A、α-N-乙酰基氨基半乳糖苷酶、α-葡萄糖苷酶、α-岩藻糖苷酶、α-甘露糖苷酶、天冬氨酰基氨基葡糖酰胺酶、酸性脂肪酶、棕榈酰基蛋白硫酯酶(CLN-1)、PPT1、TPP1、CLN3、CLN5、CLN6、CLN8、NPC1或NPC2。
根据本申请，SMT和/或ERT使以下所贮积的物质中的至少一种得以减少：葡糖脑苷脂、鞘磷脂、神经酰胺、GM1神经节苷脂、GM2神经节苷脂、红细胞糖苷脂、半乳糖基神经酰胺、硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素、硫酸角质素、硫苷脂、粘多糖、唾液酸寡糖、糖蛋白、唾液酸寡糖、糖脂、神经酰胺三己糖苷、经O连接的糖肽、糖原、游离唾液酸、岩藻糖脂、岩藻糖基寡糖、甘露糖基寡糖、天冬氨酰基氨基葡萄糖、胆固醇酯、甘油三酯、颗粒状嗜渗性沉积物-蛋白脂质微粒体A和D、ATP合酶亚基c、NPC1或NPC2。
在本申请某些实施方案中，小分子疗法包括向受试者给药有效量的(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸(S)-奎宁环-3-基酯：
在其它实施方案中，小分子疗法包括向受试者给药有效量的(2-(4’-氟-[1,1’-联苯]-3-基)丙-2-基)氨基甲酸奎宁环-3-基酯：
小分子疗法可包括向受试者给药一种或多种化合物。在某些实施方案中，所述化合物中的至少一种为本申请化合物诸如(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸(S)-奎宁环-3-基酯和/或(2-(4’-氟-[1,1’-联苯]-3-基)丙-2-基)氨基甲酸奎宁环-3-基酯。
酶代替疗法可刺激所不需要的免疫响应。因此，免疫抑制剂可与本申请联合疗法中的酶代替疗法组分一起使用。所述药物还可与小分子疗法组分一起使用，但是通常不大可能在本申请中需要介入。本领域技术人员已知的任何免疫抑制剂可与本申请联合疗法一起使用。所述免疫抑制剂包括但不限于环孢菌素、FK506、雷帕霉素、CTLA4-Ig和抗TNF剂例如伊那西普(参见例如Moder,2000,Ann.Allergy Asthma Immunol.84,280-284；Nevins,2000,Curr.Opin.Pediatr.12,146-150；Kurlberg等人,2000,Scand.J.Immunol.51,224-230；Ideguchi等人,2000,Neuroscience 95,217-226；Potter等人,1999,Ann.N.Y.Acad.Sci.875,159-174；Slavik等人,1999,Immunol.Res.19,1-24；Gaziev等人,1999,Bone Marrow Transplant.25,689-696；Henry,1999,Clin.Transplant.13,209-220；Gummert等人,1999,J.Am.Soc.Nephrol.10,1366-1380；Qi等人,2000,Transplantation69,1275-1283)。已经在移植患者中被证实有效的抗IL2受体(α-亚基)抗体达克珠单抗(例如ZenapaxTM)也可用作免疫抑制剂(参见例如Wiseman等人,1999,Drugs 58,1029-1042；Beniaminovitz等人,2000,N.Engl J.Med.342,613-619；Ponticelli等人,1999,DrugsR.D.1,55-60；Berard等人,1999,Pharmacotherapy 19,1127-1137；Eckhoff等人,2000,Transplantation 69,1867-1872；Ekberg等人,2000,Transpl.Int.13,151-159)。其它免疫抑制剂包括但不限于抗CD2(Branco等人,1999,Transplantation 68,1588-1596；Przepiorka等人,1998,Blood 92,4066-4071)、抗CD4(Marinova-Mutafchieva等人,2000,Arthritis Rheum.43,638-644；Fishwild等人,1999,Clin.Immunol.92,138-152)和抗CD40配体(Hong等人,2000,Semin.Nephrol.20,108-125；Chirmule等人,2000,J.Virol.74,3345-3352；Ito等人,2000,J.Immunol.164,1230-1235)。
本领域技术人员已知的免疫抑制剂的任何组合可与本申请联合疗法一起使用。一种特别有用的免疫抑制剂组合是他克莫司(FK506)+西罗莫司(雷帕霉素)+达克珠单抗(抗IL2受体α-亚基抗体)。该组合被证实可有效代替类固醇和环孢菌素且是特异性靶向于肝脏的。另外，最近已经显示该组合使胰岛细胞移植得以成功。参见Denise Grady,The NewYork Times,Saturday,May27,2000,第A1和A11页。还参见A.M.Shapiro等人,Jul.27,2000,“Islet Transplantation In Seven Patients With Type 1Diabetes Mellitus Using AGlucocorticoid-Free Immunosuppressive Regimen”,N.Engl.J.Med.343,230-238；Ryan等人,2001,Diabetes 50,710-719。通过本领域已知的任何方法来进行的血浆去除术也可用于除去或排除以下抗体，所述抗体可发展成对抗联合疗法中的各种组分。
与本申请一起使用的免疫状态指示物包括但不限于本领域技术人员已知的抗体和任何细胞因子例如白介素、CSF和干扰素(通常参见Leonard等人,2000,J.AllergyClin.Immunol.105,877-888；Oberholzer等人,2000,Crit.Care Med.28(4Suppl.),N3-N12；Rubinstein等人,1998,Cytokine Growth Factor Rev.9,175-181)。例如，可监测对代替酶具有特异性免疫反应性的抗体以确定受试者的免疫状态。在约24种已知的白介素中，特别优选的免疫状态指示物为IL-1α、IL-2、IL-4、IL-8和IL-10。在集落刺激因子(CSF)中，特别优选的免疫状态指示物为G-CSF、GM-CSF和M-CSF。在干扰素中，一种或多种α-、β-或γ-干扰素优选作为免疫状态指示物。
在以下章节中提供的各种组分可用于8种具体的溶酶体贮积病(即戈谢病(包括1型、2型和3型)、法布里病、B型尼-皮病、亨特病、莫尔基奥综合征、马-拉病、蓬佩病和胡-沙综合征)。在以下章节中进一步以能够实现的方式公开了本申请联合疗法中的酶代替疗法组分和小分子疗法组分。
戈谢病
如上所述，戈谢病由于葡糖脑苷脂酶(β-D-葡糖基-N-酰基鞘氨醇葡萄糖水解酶,EC 3.2.1.45)的缺乏和葡糖脑苷脂(葡糖神经酰胺)的蓄积而引起。就用于治疗戈谢病的本申请联合疗法中的酶代替疗法组分而言，可参见多种参考文献，其公开了令人满意的剂量方案和与治疗相关的其它有用信息(参见Morales,1996,Gaucher’s Disease:A Review,The Annals of Pharmacotherapy 30,381-388；Rosenthal等人,1995,EnzymeReplacement Therapy for Gaucher Disease:Skeletal Responses to Macrophage-targeted Glucocerebrosidase,Pediatrics 96,629-637；Barton等人,1991,ReplacementTherapy for Inherited Enzyme Deficiency-Macrophage-targetedGlucocerebrosidase for Gaucher’s Disease,New England Journal of Medicine 324,1464-1470；Grabowski等人,1995,Enzyme Therapy in Type 1 Gaucher Disease:Comparative Efficacy of Mannose-terminated Glucocerebrosidase from Naturaland Recombinant Sources,Annals of Internal Medicine 122,33-39；Pastores等人,1993,Enzyme Therapy in Gaucher Disease Type 1:Dosage Efficacy and AdverseEffects in 33 Patients treated for 6 to 24Months,Blood 82,408-416；和Weinreb等人,Am.J.Med.,113(2):112-9(2002))。
一个实施方案提供了每周三次2.5单位/千克(U/kg)至每两周一次60U/kg的ERT剂量方案，其中酶通过历时1-2小时静脉内输注来给药。葡糖脑苷脂酶的单位被定义为在37℃每分钟催化1微摩尔合成底物对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷发生水解的酶量。另一个实施方案提供了每周三次1U/kg至每两周一次120U/kg的剂量方案。另一个实施方案提供了每天一次或每周三次0.25U/kg至每二至六周一次600U/kg的剂量方案。
自1991年以来，阿糖脑苷酶已经可由Genzyme Corporation得到。阿糖脑苷酶为由胎盘衍生的葡糖脑苷脂酶的改良形式。在1994年，伊米苷酶也可由Genzyme Corporation得到。伊米苷酶为葡糖脑苷脂酶的改良形式，其衍生自重组DNA在哺乳动物细胞培养系统(中华仓鼠卵巢细胞)中的表达。伊米苷酶为由497个氨基酸构成的含有四个N联糖基化位点的单体糖蛋白。伊米苷酶具有以下优点：与由胎盘衍生的阿糖脑苷酶相比理论上无限的供应和降低的生物污染物可能性。这些酶在其糖基化位点被修饰以暴露甘露糖残基，该策略经由甘露糖-6-磷酸受体而改善对溶酶体的靶向性。伊米苷酶与胎盘葡糖脑苷脂酶的不同在于495位的一个氨基酸，其中组氨酸代替精氨酸。已知这些产品的几种剂量方案是有效的(参见上述Morales,1996；上述Rosenthal等人,1995；上述Barton等人,1991；上述Grabowski等人,1995；上述Pastores等人,1993)。例如，每两周一次60U/kg的剂量方案在患有中度至重度疾病的受试者中具有临床益处。对于其它剂量方案和给药信息，从业者应该查询以上引用的参考文献和这些产品的包装说明书。还参见转让给GenzymeCorporation的美国专利5,236,838和5,549,892。
如上所述，戈谢病由于溶酶体酶葡糖脑苷脂酶(GC)的缺乏而引起。在戈谢病的最常见表型(1型)中，病理学限于网状内皮组织系统和骨骼系统且没有神经病症状。参见Barranger,Glucosylceramide lipidosis:Gaucher disease.In:Scriver CR BA,Sly WS,Valle D,editor.The Metabolic Basis of Inherited Disease.New York:McGraw-Hill.pp.3635-3668(2001)。在神经病性戈谢病(nGD)(细分为2型和3型戈谢病)中，葡糖脑苷脂酶(GC)的缺乏引起葡糖神经酰胺(GluCer；GL-1)和葡糖基鞘氨醇(GluSph)在脑中蓄积，这引起神经损伤。2型戈谢病的特征在于发病早、进展快、内脏和中枢神经系统中的广泛病理学及通常在2岁前死亡。3型戈谢病(也称为亚急性nGD)是一种中间表型，其具有各种发病年龄及不同的严重程度和进展速率。Goker-Alpan等人,The Journal of Pediatrics143:273-276(2003)。最新的进展已经繁育出2型戈谢病的K14lnl/lnl小鼠模型(以下称为“K14小鼠”)；该小鼠模型非常接近地再现了所述人类疾病，其表现出共济失调、癫痫发作、痉挛状态和减少的中位寿命(仅14天)。Enquist等人,PNAS 104:17483-17488(2007)。
如在患有nGD的患者中那样，所述疾病的几种小鼠模型由于GC活性的缺乏而在脑中具有提高的GluCer和GluSph水平。Liu等人,PNAS95:2503-2508(1998)和Nilsson,J.Neurochem 39:709-718(1982)。“K14”小鼠显示出神经病表型，其与2型戈谢病共有多种病理学特征例如神经变性、星形胶质细胞增生、小神经胶质细胞增殖及特定脑区域中提高的GluCer和GluSph水平。Enquist等人(2007)。
由于2型戈谢病的严重度和当前疗法不能穿过血脑屏障(BBB)，因此主治医生面临对受nGD影响的患者进行临床控制的挑战。对非nGD的当前治疗基于重组人葡糖脑苷脂酶(Imiglucerase；CerezymeTM)的静脉内递送以代替缺乏的酶或基于葡糖神经酰胺合酶抑制剂的给药以减少底物(GL-1)的产生。然而，这些药物不能穿过血脑屏障且因此被预期不能为nGD患者提供治疗益处。当前临床使用的小分子葡糖神经酰胺合酶抑制剂不可能解决nGD的神经病表型。在2型戈谢病的K14小鼠模型中对本申请化合物即(2-(4’-氟-[1,1’-联苯]-3-基)丙-2-基)氨基甲酸奎宁环-3-基酯(以下称为“GZ161”)进行的评价表明其确实可减少脑GluCer和GluSph。参见WO2012/129084的实施例122-125。其还减少脑神经病且延长该模型的寿命。另外，使用酶代替疗法和小分子底物减少的联合措施可代表对2型戈谢病的优秀疗法。
法布里病
如上所述，法布里病由于溶酶体酶α-半乳糖苷酶A的缺乏而引起。所述酶缺乏使具有末端α-半乳糖基的鞘糖脂发生全身性沉积，所述具有末端α-半乳糖基的鞘糖脂主要为神经酰胺三己糖苷(GL3或Gb3)且在较小程度上为半乳糖二糖基神经酰胺和B血型鞘糖脂。
几种测定可用于监测疾病进展和确定何时由一种治疗模式转换至另一种治疗模式。在一个实施方案中，可使用以下测定，其确定组织样品中α-半乳糖苷酶A的特异性活性。在另一个实施方案中，可使用以下测定，其确定Gb3的蓄积。在另一个实施方案中，从业者可测定鞘糖脂底物在体液中及在血管内皮细胞、周皮细胞和平滑肌细胞的溶酶体中的沉积。可作为有用的疾病控制指示物的其它临床表现包括蛋白尿或肾损伤的其它指征例如尿中的红细胞或脂质小球及升高的红细胞沉降率。从业者还可监测贫血、降低的血清铁浓度、高浓度的β-血小板球蛋白和升高的网织红细胞计数或血小板聚集。实际上，可使用本领域技术人员已知用于监测疾病进展的任何措施(通常参见Desnick RJ等人,1995,alpha-Galactosidase A Deficiency:Fabry Disease,In:The Metabolic and Molecular Basesof Inherited Disease,Scriver等人编辑,McGraw-Hill,N.Y.,7.sup.th ed.,第2741-2784页)。优选的代替标志物为用于对法布里病控制进行监测的疼痛。其它优选的方法包括对来自体液或活组织检查标本的酶和/或底物的总清除率进行测量。法布里病酶代替疗法的优选剂量方案为每隔一天一次1-10mg/kg i.v.。可使用每隔一天一次至每周一次或每两周一次0.1-100mg/kg i.v.的剂量方案。
B型尼-皮病
如上所述，B型尼-皮病由于溶酶体酶酸性鞘磷脂酶的活性降低和膜脂质(主要为鞘磷脂)的蓄积而引起。待递送的代替用酸性鞘磷脂酶的有效剂量可以是约0.01mg/kg体重至约10mg/kg体重，其频率为每隔一天一次至每周一次、每两周一次或每两个月一次。在其它实施方案中，有效剂量可以是约0.03mg/kg至约1mg/kg、约0.03mg/kg至约0.1mg/kg和/或约0.3mg/kg至约0.6mg/kg。在具体实施方案中，在递增的剂量方案中按以下先后剂量向患者给药酸性鞘磷脂酶：0.1mg/kg、0.3mg/kg、0.6mg/kg和1.0mg/kg，其中每种剂量的酸性鞘磷脂酶至少给药两次且每种剂量间隔两周来给药且其中在将剂量提高至下一个水平前监测患者中的毒副作用(参见美国专利申请公开文本2011/0052559)。
胡-沙综合征(MPS I)
胡尔勒(Hurler)病、沙伊(Scheie)病和胡-沙病(也称为MPS I)由于α-艾杜糖醛酸酶的失活及硫酸皮肤素和硫酸乙酰肝素的蓄积而引起。几种测定可用于监测MPS I疾病进展。例如，可监测组织活组织检查标本或得自外周血的培养细胞中α-艾杜糖醛酸酶的酶活性。另外，MPS I及其它粘多糖贮积病中疾病进展的方便测量指标是糖胺聚糖硫酸皮肤素和硫酸乙酰肝素的尿排泄(参见上述Neufeld等人,1995)。在具体实施方案中，以0.58mg/kg体重的剂量每周一次静脉内输注给药α-艾杜糖醛酸酶。
亨特病(MPS II)
亨特病(也称为MPS II)由于艾杜糖醛酸硫酸酯酶的失活及硫酸皮肤素和硫酸乙酰肝素的蓄积而引起。亨特病在临床上表现为重度和中度形式。治疗用酶的剂量方案为每两周1.5mg/kg至每周50mg/kg是优选的。
莫尔基奥综合征(MPS IV)
莫尔基奥综合征(也称为MPS IV)由于硫酸角质素的蓄积而引起，而硫酸角质素的蓄积是由于两种酶中任何一种的失活。MPS IVA中失活的酶为半乳糖胺-6-硫酸酯酶且MPSIVB中失活的酶为β-半乳糖苷酶。治疗用酶的剂量方案为每两周1.5mg/kg至每周50mg/kg是优选的。
马-拉病(MPS VI)
马-拉病(也称为MPS VI)由于半乳糖胺-4-硫酸酯酶(芳基硫酸酯酶B)的失活和硫酸皮肤素的蓄积而引起。每两周1.5mg/kg至每周50mg/kg的剂量方案为ERT所提供的有效治疗用酶的优选范围。优化地，所使用的剂量小于或等于每周10mg/kg。MPS VI疾病进展的优选代替标志物为蛋白聚糖的水平。
蓬佩病
蓬佩病由于酸性α-葡萄糖苷酶的失活和糖原的蓄积而引起。酸性α-葡萄糖苷酶的基因位于人染色体17上且被命名为GAA。H.G.Hers基于他对该疾病的研究而首次提出了先天性溶酶体疾病的概念，所述先天性溶酶体疾病被他称为II型糖原贮积病(GSD II)且现也称为酸性麦芽糖酶缺乏症(AMD)(参见Hers,1965,Gastroenterology 48,625)。在具体实施方案中，以20mg/kg体重的剂量每两周静脉内输注给药GAA。
几种测定可用于监测蓬佩病进展。可使用本领域技术人员已知的任何测定。例如，本领域技术人员可测定糖原颗粒的溶酶体内蓄积，特别是在得自活组织检查的心肌膜、肝脏和骨骼肌纤维中。还可监测活组织检查标本或得自外周血的培养细胞中α-葡萄糖苷酶的酶活性。可监测肌酸激酶(CK)的血清升高作为疾病进展的指征。血清CK在婴儿发病患者中可升高达十倍且在成人发病患者中通常升高较小的程度。参见Hirschhorn R,1995,Glycogen Storage Disease Type II:Acid alpha-Gluocosidase(Acid Maltase)Deficiency,In:The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease,Scriver等人编辑,McGraw-Hill,N.Y.,7.sup.th ed.,第2443-2464页。
酶代替疗法
以下章节提供了关于本申请联合疗法中酶代替疗法组分的具体公开和可选实施方案。本申请联合疗法中酶代替疗法组分的剂量方案通常由专业医生来确定。以上提供了用葡糖脑苷脂酶治疗戈谢病的剂量方案的几个实例。基于公众可得到的信息例如在相关章节中就每种具体LSD所引用的具体参考文献，本申请联合疗法中的任何给定ERT组分在治疗任何LSD中的剂量方案的一般确定原则对于本领域技术人员将是显而易见的。可通过静脉内输注向患者给药ERT。脑室内和/或鞘内输注(例如除静脉内输注外)可用于向被诊断患有具有CNS表现的溶酶体贮积病的患者给药ERT。
本领域已知的任何方法可用于制备在本申请联合疗法的酶代替疗法组分中使用的酶。多种这样的方法是已知的且包括但不限于由Shire plc开发的基因活化技术(参见美国专利5,968,502和5,272,071)。
小分子疗法
以下章节提供了关于本申请联合疗法中小分子疗法组分的具体公开和可选实施方案。本申请联合疗法中小分子疗法组分的剂量方案通常由专业医生来确定且被预期随所治疗的具体贮积病和具体患病个体的临床情况而显著变化。本申请任何联合疗法中给定的SMT组分在治疗任何贮积病中的剂量方案的一般确定原则是本领域技术人员熟知的。关于剂量方案的指导可由就此而言本领域公知的任何多种参考文献得到。进一步的指导可尤其由本申请引用的一系列具体参考文献得到。
通常，本申请化合物例如(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸(S)-奎宁环-3-基酯和(2-(4’-氟-[1,1’-联苯]-3-基)丙-2-基)氨基甲酸奎宁环-3-基酯可用于本申请联合疗法以治疗实际上由于鞘糖脂途径中的损害而引起的任何贮积病(例如戈谢病、法布里病、GM1神经节苷脂贮积病和GM2神经节苷脂贮积病(例如GM2活化因子缺乏症、泰-萨克斯病和桑德霍夫病))。类似地，氨基糖苷(例如庆大霉素、G418)可用于本申请联合疗法以治疗具有早熟终止密码子突变(即无意义突变)的任何贮积病个体。所述突变在胡尔勒综合征中是特别普遍的。当与其它疗法相比时，本申请联合疗法中的小分子疗法组分在所治疗的贮积病具有中枢神经系统表现的情况下(例如桑德霍夫病、泰-萨克斯病、A型尼-皮病及2型和3型戈谢病)是特别优选的，这是因为小分子通常可容易地穿过血脑屏障。
本领域技术人员可容易地确定在本申请联合疗法中使用的底物抑制剂的优选剂量。在某些实施方案中，所述剂量可以是约0.5mg/kg至约300mg/kg，优选约5mg/kg至约60mg/kg(例如5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg和60mg/kg)，其每天一次至五次腹膜内、口服或等效给药。所述剂量可以是约5mg/kg至约5g/kg，优选约10mg/kg至约1g/kg，其每天一次至五次口服、腹膜内或等效给药。在一个实施方案中，剂量范围为约10mg/天至约500mg/天(例如10mg/天、20mg/天、30mg/天、40mg/天、50mg/天、60mg/天、70mg/天、80mg/天、90mg/天、100mg/天、110mg/天、120mg/天、130mg/天、140mg/天、150mg/天、160mg/天、170mg/天、180mg/天、190mg/天、200mg/天、210mg/天、220mg/天、230mg/天、240mg/天、250mg/天、260mg/天、270mg/天、280mg/天、290mg/天、300mg/天)。特别优选的口服剂量范围为约50mg至约100mg，其中所述剂量每天给药两次。本申请化合物的具体口服剂量范围为约5mg/kg/天至约600mg/kg/天。本申请化合物的具体口服剂量范围为约1mg/kg/天至约100mg/kg/天例如1mg/kg/天、5mg/kg/天、10mg/kg/天、15mg/kg/天、20mg/kg/天、25mg/kg/天、30mg/kg/天、35mg/kg/天、40mg/kg/天、45mg/kg/天、50mg/kg/天、55mg/kg/天、60mg/kg/天、65mg/kg/天、70mg/kg/天、75mg/kg/天、80mg/kg/天、85mg/kg/天、90mg/kg/天、95mg/kg/天或100mg/kg/天。
治疗平台(即酶代替疗法和小分子疗法)的轮换组合是优选的。然而，受试者也可按需通过这两种措施的重叠来治疗，这由专业医生来确定。治疗安排的实例可包括但不限于：(1)进行SMT，然后进行ERT；(2)进行ERT，然后进行SMT；和(3)在大约相同的时间提供ERT和SMT。如上所述，也可按需进行治疗平台的暂时重叠，这取决于给定的贮积病在给定的受试者中的临床病程。
各种联合疗法的治疗间隔可变化很大且在不同的贮积病和不同的个体之间通常可以是不同的，这取决于贮存产物蓄积的激进程度。例如，与蓬佩病中贮存产物的快速蓄积相比，法布里病中贮存产物的蓄积可能是缓慢的。本领域技术人员通过监测疾病进展和治疗成功的临床指征而对具体个体中的具体贮积病进行滴定。
在溶酶体贮积病中蓄积的各种大分子不是均匀分布的，而是沉积在就每种疾病而言某些优选的解剖学部位。然而，外源性提供的酶通常被网状内皮系统中的细胞所吸收且被分类到溶酶体隔室中，在那里它的作用是水解所蓄积的底物。另外，治疗用酶的细胞摄取可通过某些措施来加强以提高对溶酶体的靶向性(参见例如Friedman等人转让给GenzymeCorporation的美国专利5,549,892，其描述了以下重组葡糖脑苷脂酶，所述重组葡糖脑苷脂酶借助经改造的被细胞表面的甘露糖受体所识别且被胞吞和运输至溶酶体的寡糖侧链而具有改善的药物代谢动力学)。
与其它器官相比，一些治疗模式较好地靶向于一些受影响的器官。例如，在法布里病中，若ERT到达肾脏或心脏的充分程度不足以产生令人满意的临床效果，则SMT可用于降低那些组织中的底物水平。已经显示与ERT相比，SMT可较大程度地有效降低法布里病小鼠模型的尿中的Gb3水平(即法布里病患者中蓄积的底物)。参见WO2012/129084，将其全部内容通过引用的方式并入本申请。据信肾脏为尿Gb3的主要来源。相反地，与SMT相比，ERT较大程度地有效降低血浆中的Gb3水平。参见WO2012/129084。因此，ERT和SMT的联合疗法提供互补的治疗策略，其利用强度的优点且解决与单独使用每种疗法相关的缺点。SMT能够穿过BBB，当与ERT组合时这提供了有力的措施来治疗具有CNS表现的LSD例如A型尼-皮病和神经病性戈谢病(nGD)。另外，SMT与酶代替疗法的组合所实现的底物减少在分开和不同的介入点解决贮积问题，这可加强临床效果。
应该理解的是，所提及的两种或更多种疗法的同时或并行给药不需要它们在同一时间给药，而仅需要它们在受试者中在同一时间发挥作用。
实施例
应该认识到的是，本申请不应该被理解为限于现在描述的实施例；相反地，本申请应该被理解为包括本申请提供的任何和所有实施形式及在本领域技术人员的知识范围内的所有等价变化形式。
实施例1：FD iPSC的产生
为了产生经诱导的来自法布里病(FD)患者的多能干细胞(iPSC)系而使用来自两名受FD影响的具有症状的白种人男孩的皮肤成纤维细胞。两名患者均不具有可检测的α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)活性。一名10岁供者就GLA外显子3基因(G485A)中的单个核苷酸改变而言为半合子的。另一名17岁供者就GLA外显子5基因(C658T)中的单个核苷酸改变而言为半合子的。所述突变各自引入一个终止密码子(W162X和R220X)并已知与FD的经典严重呈现相关。参见Altarescu GM.等人,Clin.Genet.60:46-51(2001)；Germain DP.等人,Mol.Med.8:306-12(2002)；Meaney C.等人,Hum.Mol.Genet.3:1019-20(1994)；和Maki N.等人,Clin.Nephrol.61:185-90(2004)。
在慢病毒中编码四个程序重编因子即Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc的单个多顺反子盒用于由两个样品产生多于40个iPSC克隆。对iPSC细胞进行表征以检查多能状态及程序重编因子的表达消失(数据未显示)。在该类多能细胞中需要神经酰胺三己糖苷(GL-3)。然而，甚至在培养数月后，在保持在指数生长期的法布里病iPSC中也没有检测到GL-3蓄积(免疫组织学、电子显微镜及质谱分析数据未显示)。尽管这些细胞产生GL-3且不能将其降解(α-GalA缺乏)，但是当其快速分裂时，GL-3稀释可发生在连续分裂过程中且抵消了GL-3合成，从而保护细胞免受GL-3蓄积。
实施例2：产生由法布里病iPSC衍生的心肌细胞的能力
在缺氧条件下连续添加细胞因子混合物的心脏分化程序用于产生自发跳动的拟胚体(EB)，其含有在开始分化后10-16天出现的心肌细胞富集群落。所测试的全部iPSC(17个系)都能够产生跳动的EB。选择来自两名患者的三种iPSC以进一步分析由法布里病iPSC衍生的心肌细胞的表型：G485A-10、G485A-56和C658T-4。将所述表型与在相同实验室条件下产生的由野生型(WT)iPS衍生的心肌细胞的表型进行比较。
免疫组织学措施用于表征和定量跳动的EB中的细胞。在开始分化后一个月，挑选EB并添加小鼠成纤维细胞(MEF)以使EB在石蜡块中具有良好分离且有助于在包埋、切片和固定在载玻片上的过程中处理样品。针对几种心脏收缩蛋白诸如肌动蛋白、肌球蛋白、肌钙蛋白或α-辅肌动蛋白的抗体用于鉴别包含在跳动的EB中的心肌细胞。对于WT EB，多于90％的细胞表达高水平的各种心脏收缩蛋白(图1A)。这些结果表明细胞的“法布里病源”不影响法布里病iPSC有效产生心肌细胞的能力。
实施例3：法布里病表型
将一个月大的跳动的EB分离并置于培养皿上以产生小二维细胞簇或单细胞层。在铺板后四至七天，对细胞进行分析以更详细地研究收缩纤维的构成及GL-3的潜在蓄积。
在由WT iPSC衍生的心肌细胞中存在所测试的全部收缩蛋白且在功能上是有序的。收缩纤维在长轴上定向且占据细胞的全部体积(图1B)。在由法布里病iPSC衍生的心肌细胞中也存在收缩蛋白且在功能上组织成纤维，但是这些纤维是较少的且就大部分细胞而言定位在处于浆膜附近的外周(图1B)。该结果暗示当法布里病表型进展且剩余的纤维被阻止占据细胞中心时，部分收缩纤维不能在心脏分化过程中在法布里病细胞中变得有序或消失。该表型与已经在FD心脏活组织检查中描述的表型非常相似，其中超微结构电子显微镜检查显示心脏肌原纤维常常移位至细胞的外周，这是由于细胞质内含物及肌原纤维裂解和肌丝退化与肌钙蛋白I降解产物的病灶区域。Chimenti C.等人,Am.J.Pathol.172:1482-1490(2008)。
用针对GL-3的抗体进行的免疫细胞学(ICC)研究表明在FD细胞中存在鞘脂的蓄积(图2A)。GL-3似乎在具有可在亮视野显微镜检查过程中观察到的液泡的细胞中是升高较大的(图2B)。由抗体产生的信号由分散在细胞质中的大量点构成。验证了心脏纤维收缩蛋白和GL-3的共表达并证实了在开始分化程序后一个月由FD iPSC衍生的心肌细胞具有蓄积的GL-3(图2C)。
ICC措施也用于证实蓄积的GL-3如在FD患者细胞中那样位于溶酶体隔室中。使用针对GL-3的抗体及溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2/CD107b)(溶酶体膜的糖蛋白标志物)。由两种抗体产生的荧光信号在细胞核附近具有较高密度的点染色且在胞质膜附近具有降低密度的点染色。当融合时，两个信号重叠并证实GL-3的蓄积和贮存发生在溶酶体结构中(图2D)。
该结果通过对FD心肌细胞进行电子显微镜表征而证实。衍生自法布里病和WTiPSC的EB所含有的细胞具有不同程度的心肌细胞分化，其通过以下特征得以佐证：肌原纤维(1-2μm宽)，其组织成具有明显Z带的肌节；大量富含糖原的肌浆；及许多线粒体和细胞间连接，包括桥粒和缝隙连接(闰盘样结构)。法布里病EB中的心肌细胞含有溶酶体底物贮存内含物(图3)。这些直径为700-800nm的内含物与称为斑马小体的层状或洋葱状结构是相似的，而斑马小体反映了法布里病患者细胞中的GL-3蓄积。Elleder等人,Virchows Arch.APathol.Anat.Histopathol.417:449-455(1990)。
另外，通过质谱对心肌细胞分化开始后16、23、30和45天大的EB的GL-3含量进行分析。每个复本的GL-3含量通过定量九种不同的GL-3亚型并相对于总磷脂酰胆碱(PC)对总GL-3水平进行归一化来确定。因为PC为主要的细胞膜组分，所以其量在活细胞中不会变化很大。当对所有克隆在每个时间点的这些值进行平均时，在时间过程中观察到GL-3的蓄积(图4)。至分化第二周，GL-3的量接近翻倍。至第三周，法布里病EB与野生型对照相比具有GL-3的5.5倍增加。在第30天，它们具有GL-3含量的约11至12倍增加。两周后(第45天)，GL-3的量不是显著不同的。因为心肌细胞一旦开始跳动就停止分化，所以这些结果表明当细胞不再分化且稀释存在于子细胞中的鞘脂时，GL-3快速蓄积。没有观察到神经鞘氨醇三己糖苷(lyso-GL-3)(数据未显示)。综上，基于质谱的分析支持了ICC结果且显示GL-3在法布里病EB中蓄积。
实施例4：底物减少疗法
对GCS452[(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸(S)-奎宁环-3-基酯](一种选择性葡糖神经酰胺合酶抑制剂)进行测试以评价其防止GL-3在由法布里病iPSC衍生的心肌细胞中蓄积的潜力。在诱导心脏分化后18天，对EB进行处理。在该时间点，蓄积在FD心肌细胞中是低的(图4)。将FD和WT心肌细胞用1μM GCS452处理15天。尽管未处理的FD心肌细胞与WT相比显示出GL-3的12至15倍增加，但是经处理的FD细胞中的GL-3水平接近未处理的WT细胞的生理学水平。这些结果暗示GCS452可防止额外的GL-3蓄积并可用于缓解该鞘脂在FD心肌细胞中的过剩水平(图5A)。
接下来确定的是，当在开始处理时存在显著的GL-3蓄积时，所述化合物能否降低蓄积的GL-3水平(图4)。在开始分化后28天，将跳动的EB用1μM GCS452处理15天。在处理结束时分离EB并铺板且进行ICC分析。在经处理的细胞中观察到GL-3标记的显著减少直至鞘脂蓄积的点信号特征的实际消失(图5C)。令人感兴趣的是，观察到Lamp2信号强度的伴随降低，这暗示未处理的FD心肌细胞中的Lamp2水平升高是由于GL-3的蓄积及大部分溶酶体主要含有GL-3。质谱证实了经处理的法布里病EB中的GL-3减少。尽管与WT相比，GL-3在未处理的FD心肌细胞中增加13至18倍，但是在用GCS452处理15天后，GL-3水平在经处理的FD心肌细胞中增加4.5至5.5倍。这对应于与处理起始点(T0)时的GL-3水平相比，蓄积的GL-3减少2.3至2.8倍(图5B)。
对EB进行的电子显微镜检查在两个不同时间点(开始分化后18和28天)显示与未处理的EB相比，贮存内含物在经处理的法布里病EB中是相对很少的。经处理或未处理的野生型EB没有显示出底物贮存内含物(数据未显示)。
同时研究了半乳糖苷酶β能否清除在一个月大的法布里病心肌细胞中蓄积的GL-3。将EB用0.3μg/mL半乳糖苷酶β处理5天且如就GCS452所述那样分析GL-3的含量。使用ICC在经处理的法布里病心肌细胞中没有检测到GL-3液泡(图5C)。质谱证实了完全清除。经处理的法布里病心肌细胞与未处理的法布里病细胞相比具有GL-3水平的6.4至18倍降低，其与未处理的野生型心肌细胞中的水平是相似的(图5B)。
实施例5：由法布里病衍生的心肌细胞的电生理学
将一个月大的由iPSC衍生的心肌细胞置于微电极阵列(MEA；图6A)的电极上以研究与所述细胞的收缩活性相关的电信号。在由野生型iPSC衍生的心肌细胞中，电信号随时间是稳定且可重现的(图6B)。在法布里病细胞中观察到变化的电生理学，其具有高频率、心律不齐或信号强度的偶发改变，而不具有节律的改变(图6C)。
观察法布里病心肌细胞在用半乳糖苷酶β处理后的电生理学以确定心肌细胞能否在清除GL-3后恢复野生型功能活性。
实施例6：较低剂量的半乳糖苷酶β和GCS452
将18和30天大的心肌细胞用2种剂量的GCS452(0.1μM和1μM)处理15天。将30天大的心肌细胞用2种剂量的半乳糖苷酶β(0.3μg/ml和3μg/ml半乳糖苷酶β)处理5天。质谱用于评价包含在细胞中的GL-3。
实施例7：用GCS452处理6周后的GL-3清除
将28天大的由法布里病iPSC衍生的心肌细胞用1μM GCS452处理6周。质谱用于评价包含在细胞中的GL-3。
结果
法布里病患者中的α-半乳糖苷酶A缺乏导致细胞GL-3在各种细胞类型中的进行性蓄积，包括心脏中的血管内皮细胞和心肌细胞。参见Aerts等人,PNAS USA 105:2812-2817(2008)。尽管用半乳糖苷酶β进行的ERT有效地清除GL-3在心脏中的微血管沉积，但是其对心肌细胞GL-3蓄积没有作用。参见Thurberg B.L.et al,Circulation 119:2561-2567(2009)。由于在法布里病小鼠的心肌细胞中没有观察到GL-3蓄积，因此理想的是开发以下用于对FD中的心肌细胞病理学进行研究的相关人体外系统，其可用于研究针对GL-3蓄积的可替代的治疗策略。参见Ohshima T.等人,PNAS 96:2540-2544(1997)。
已经描述了几种程序以将人胚胎干细胞(ESC)分化为跳动的心肌细胞。然而，所述程序采用正常非致病性ESC，其不适于研究与诸如FD那样的病症相关的疾病特异性改变。Takahashi K.等人,Cell 131:861-872(2007)在2007年报道了通过对终末分化的细胞进行重新编程来产生称为经诱导的多能干细胞(iPSC)的人ESC样细胞。作为该发现的结果，iPSC系可由患者并用适当的程序产生且可用于产生分化的显示出疾病特异性表型的细胞。使用该措施使用来自以下两名具有症状的FD患者的成纤维细胞产生几种iPSC系，所述患者携带GLA基因的已知与所述疾病的典型表型相关的不同失活突变(参见Altarescu GM.等人,Clin.Genet.60:46-51(2001)；Germain DP.等人,Mol.Med.8:306-12(2002)；Meaney C.等人,Hum.Mol.Genet.3:1019-20(1994)；和Maki N.等人,Clin.Nephrol.61:185-90(2004))。由对照iPSC系和由法布里病衍生的iPSC系产生跳动的心肌细胞的能力是相似的，其中多于90％的细胞表达心脏收缩纤维蛋白。因此，似乎GLA失活没有显著影响使成纤维细胞重新编程为iPSC的能力或使这些细胞分化为心肌细胞的能力。
使用三种互补方法评价由iPSC衍生的心肌细胞中的GL-3蓄积：用抗CD77/GL-3抗体进行的免疫组织化学、定量LC/MS和电子显微镜。基于通过LC/MS进行的定量评估，细胞GL-3水平随着iPSC由多能细胞分化为非分化性心肌细胞而提高。在分化结束时，由法布里病衍生的心肌细胞中的细胞GL-3水平为在对照培养物中观察到的10倍以上。由FD iPSC衍生的心肌细胞中增加的GL-3通过用抗CD77/GL-3抗体进行的免疫组织化学证实，其显示出细胞质中与溶酶体标志物LAMP2共定位的点染色。通过电子显微镜进行的超微结构检查确认了成熟心肌细胞的典型结构特征且显示在由FD iPSC衍生的培养物中存在电子密集的贮存内含物(斑马小体)。
尽管GL-3蓄积，但是由FD iPSC衍生的细胞表达了几种成熟心肌细胞的典型标志物，包括收缩蛋白α-辅肌动蛋白。然而，与其中收缩纤维以有序方式穿过长轴的对照细胞不同的是，一个月大的由FD iPSC衍生的心肌细胞中的纤维数目通常没有那么多且常常被发现于在浆膜附近的细胞外周。该无序的收缩纤维可能是由于在FD心肌细胞中存在扩大的富集脂质的溶酶体，其由细胞中心置换纤维。
在具有疾病的心肌细胞中观察到的表型改变在由两种法布里病患者iPSC系产生的细胞中是可重现和相似的。由于这些细胞具有GLA基因的不同失活突变，所述表型可能由于在分化的心肌细胞中缺乏α-半乳糖苷酶酶活性所导致。重要的是，在由FD iPSC衍生的心肌细胞中观察到的GL-3的溶酶体蓄积和收缩纤维的无序与在来自法布里病患者的活组织检查中描述的心肌细胞病理学是密切相似的。参见Chimenti C.等人,Am.J.Pathol.172:1482-1490(2008)。
鉴于与所述人类疾病的强表型相似性，由法布里病iPSC衍生的心肌细胞用于评价ERT和SRT对细胞GL-3蓄积的作用。向由iPSC衍生的心肌细胞中添加半乳糖苷酶β导致GL-3的清除，这表明所述重组酶能够在所培养的细胞中接近并清除溶酶体底物。该发现暗示半乳糖苷酶β明显不能在法布里病患者中清除心肌细胞GL-3不是由于心肌细胞中酶活性的内在缺陷。然而，鉴于所述疾病的长期性质及心肌细胞体内细胞更新的缺乏，GL-3在所培养的由iPSC衍生的心肌细胞中的水平可低于在来自法布里病患者的心脏组织中观察到的水平。已经在用半乳糖苷酶β治疗的法布里病患者中报道了左心室质量的适当减少，这暗示了酶替代对心肌细胞GL-3贮存的积极影响。参见Weidemann F.等人,Circulation 108:1299-301(2003)和Germain D.等人,Genetic and Medicine 23:1-8(2013)。然而，由于半定量可视方法用于在心脏活组织检查中用显微镜定量GL-3，因此认为所述方法的灵敏度不足以观察贮存的有限变化。
底物减少疗法(SRT)为旨在通过抑制GCS(鞘糖脂合成中的限速代谢酶)来减少GL-3合成的可选措施。已经在法布里病小鼠模型中显示GCS抑制剂降低血浆、尿和组织中的GL-3水平。参见Marshall J.等人,PLos One5:e15033(2010)。为了确定GCS抑制剂能否降低心肌细胞中的GL-3水平，在GL-3蓄积开始时或当在由法布里病iPSC衍生的心肌细胞中已经存在显著的GL-3贮存时评价GCS抑制对细胞GL-3水平的作用。向心肌细胞培养物中添加GCS抑制剂对存活不具有影响。然而，在第18天和第33天之间在未处理的心肌细胞中发生的GL-3的显著蓄积通过对GCS的抑制而防止。重要的是，对于在处理开始时具有显著GL-3贮存的一个月大的心肌细胞，在GCS抑制剂存在下将所述细胞在培养基中保持两周导致GL-3贮存的大于50％减少(通过LC/MS测量)及GL-3/LAMP2含量的相应减少。在心肌细胞中观察到的该结果是非常令人感兴趣的，这是因为其暗示存在用于GL-3清除的可选途径且可在非分化性心脏细胞中降低GL-3水平。需要额外的工作以研究GL-3从这些细胞中不依赖α-半乳糖苷酶的清除机制，但是可选择的分解代谢途径和底物从细胞中的外流均是感兴趣的领域。
因此，本申请描述了由法布里病iPSC衍生的心肌细胞的成功产生。这些FD心肌细胞所具有的表型特征类似于与所述疾病相关的病理学特征。该体外模型可用于研究法布里病中心脏表现的致病机制及治疗介入的潜在策略。对于后者，以上数据表明半乳糖苷酶β和GCS抑制均对心肌细胞中的GL-3贮存具有积极影响。鉴于GCS抑制在该疾病模型中有前景的体外数据及其独特的作用机制，SRT提供了可替换ERT或与ERT互补的措施以治疗法布里病的心脏表现。
使用以下方法和材料获得了本申请报道的结果。
成纤维细胞培养
两种人类未转化的法布里病成纤维细胞GM00107和GM00881为可商购得到的且由Coriell Institute for Medical Research获得。它们来自两名临床上受影响的男性患者。对于克隆GM00107，患者就在GLA基因的外显子3的核苷酸485处导致终止密码子(W162X)的G>A变化(c.485G>A)而言为半合子的。采样年龄为10岁。对于克隆GM00881，受试者就在GLA基因的外显子5的核苷酸658处导致终止密码子(R220X)的C>T变化(c.658C>T)而言为半合子的。采样年龄为17岁。根据Coriell Institute的推荐解冻成纤维细胞并在MEM(Gibco,Carlsbad,CA)中在37℃和5％CO2下培养，所述MEM含有1×MEM非必需氨基酸(Gibco,Carlsbad,CA)、1×青霉素-链霉素(Gibco,Carlsbad,CA)和15％胎牛血清。
iPSC产生
人STEMCCA Cre切割性组成性多顺反子(OKSM)慢病毒重新编程试剂盒(Millipore,Billerica,MA)用于产生法布里病iPSC。该载体包括重新编程转录因子Oct-4、Klf4、SOX-2和c-Myc。根据供应商的推荐使用试剂盒。在第0天，以最佳密度接种成纤维细胞。在第1和2天，将其用病毒感染。在第6天，将感染的细胞置于人供给者成纤维细胞(HFF)上并培养于补充有12ng/mL FGF-2(Miltenyi Biotech,Bergisch Gladbach)的Knock-OutDMEM(Gibco,Carlsbad,CA)、20％KOSR(Gibco,Carlsbad,CA)、1×青霉素-链霉素(Gibco,Carlsbad,CA)、1×Glutamax(Gibco,Carlsbad,CA)、10mM 2-巯基乙醇(Gibco,Carlsbad,CA)中。在选择和扩展阶段每周对iPSC克隆进行手动传代。进行胶原酶IV(STEMCELL,PaloAlto,CA)传代以产生用于心脏分化的iPSC批次。
人iPSC的心脏分化
由Yang L.等人,Nature 453:524-528(2008)改进的3D分化程序用于产生由iPSC衍生的心肌细胞。对于前十二天，将细胞保持在低氧条件(5％氧气)和5％CO2下。然后将细胞在空气环境和5％CO2下培养以完成分化。所使用的基础培养基由StemPro 34SFM(Gibco,Carlsbad,CA)、营养补充剂(Gibco,Carlsbad,CA)、0.5ng/mL BMP4(R&D Systems,Minneapolis,MN)、Glutamax(Gibco,Carlsbad,CA)和1×青霉素-链霉素(Gibco,Carlsbad,CA)构成，其随时间推移而补充有不同的细胞因子混合物。
在第0天，将六天大的iPSC培养物用胶原酶IV(STEMCELL,Palo Alto,CA)处理45分钟。将流动的群落转移并在超低吸附培养皿(Corning,Lowell,MA)中保持7天以产生拟胚体(EB)。由第1天至第4天，在基础培养基中添加10ng/mL BMP4、6ng/mL bFGF和3ng/mL激活素A(R&D Systems,Minneapolis,MN)，然后由第4天至第8天替换为150ng/mL DKK1(Peprotech,Rocky Hill,NJ)和10ng/mL VEGF(R&D Systems,Minneapolis,MN)。在第7天，将EB置于用基质胶(BD Biosciences,Franklin Lakes,NJ)涂覆的皿上。由第8天至第16天，向基础培养基中补充10ng/mL VEGF、150ng/mL DKK1和6ng/mL bFGF。另外，将心肌细胞保持在基础培养基中。
免疫组织化学(IHC)
收集一个月大的跳动的EB并添加小鼠成纤维细胞以有助于在包埋、切片和置于载玻片上的过程中处理样品。将样品固定在磷酸盐缓冲盐水3.7％福尔马林的溶液中，然后脱水并包埋在石蜡中。制备厚度为5μm的切片。使用Ventana自动仪器(Discovery XT,VentanaMedical Systems,Inc,Oro Valley,AZ)进行典型IHC。将切片脱蜡并在36分钟内首先采用抗原修复细胞调节1(CC1)缓冲液(Ventana Medical Systems,Inc,Oro Valley,AZ)。然后将样品与一级抗体在37℃孵育1小时，接着进行戊二醛后固定。为了进行检测，在室温应用生物素化二级抗体32分钟。免疫染色通过DAB Map Kit(Ventana Medical Systems,Inc,Oro Valley,AZ)检测，得到棕色。
对于所有免疫染色，随后将切片用苏木精复染4分钟并用靛蓝试剂(VentanaMedical Systems,Inc,Oro Valley,AZ)复染4分钟。将染色的载玻片脱水并用CytosealXYL(Richard-Allan Scientific,Kalamazoo,Michigan)滑动覆盖。
所使用的一级抗体分别为针对α-肌动蛋白且最终稀释度为1/200的小鼠单克隆抗体IgG1(Lifespan,Providence,RI)、针对肌钙蛋白1且最终稀释度为1/500的小鼠单克隆IgG2b抗体(Millipore,Billerica,MA)和最终稀释度为1/50的兔多克隆抗α-辅肌动蛋白(Lifespan,Providence,RI)且所使用的二级抗体分别为生物素化山羊抗小鼠IgG1(Southern Biotech,Birmingham,AL)、生物素化山羊抗小鼠IgG(Jackson ImmunoresearchLaboratories,West Grove,PA)和山羊抗兔免疫球蛋白(IgG)(Jackson ImmunoresearchLaboratories,West Grove,PA)。二级抗体以最终稀释度1/200添加。
免疫细胞化学(ICC)
收集一个月大的跳动的EB并使用拟胚体分离试剂盒(Miltenyi Biotech,Bergisch Gladbach)分离。将分离的细胞置于用基质胶涂覆的皿上。五天后，使用8％甲醛溶液(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)/DPBS(Gibco,Carlsbad,CA)固定细胞并在0.05％Tween 20(Sigma Life Science,St.Louis,MO)中在室温透化20分钟。
将样品与一级抗体在4℃孵育过夜。在室温使用二级抗体一小时。
所使用的一级抗体为针对α-辅肌动蛋白且最终稀释度为1/1500的小鼠单克隆IgG1(Sigma Life Science,St.Louis,MO)、针对GL-3/CD77且最终稀释度为1/300的大鼠单克隆IgM(Abcam,Cambridge,US)和针对LAMP2且最终稀释度为1/500的小鼠单克隆IgG1(Santa Cruz Biotechnology,Dallas,TX)。二级抗体为Alexa Fluor 488山羊抗小鼠IgG(Molecular Probes,Carlsbad,CA)、Alexa Fluor 555山羊抗小鼠IgG(Molecular Probes,Carlsbad,CA)和Alexa Fluor 488山羊抗大鼠IgG(Molecular Probes,Carlsbad,CA)。它们以最终稀释度1/1000使用。
电子显微镜检查
将一个月大的跳动的EB固定在3％戊二醛在0.2M二甲砷酸盐缓冲液中的溶液(Electron Microscopy Sciences,Hatfield,PA)中并在1％四氧化锇中后固定且包埋在环氧树脂中。将半薄切片(1微米)用Richardson染料染色并通过光学显微镜检查。将超薄切片(60-80nm)用乙酸双氧铀染色并用JEOL JEM-1400透射电子显微镜(JEOL USA,Inc.,Peabody,MA)检查。
质谱
将含有EB的团块在乙腈:甲醇(1:1)的溶液中提取。将提取物直接注射到2.1×100mm,1.7μM BEH Hilic柱(Waters)上，用Waters Acquity UPLC系统解析并用API-4000质谱仪(ABSciex,Framingham,MA)以多反应监测(MRM)和阳离子模式分析C16、C18、C20、C22、C23、C24、C24:1、C24(OH)和C24:1(OH)GL-3同工型及lyso-GL-3。使用以下外标校准曲线定量总GL-3水平，所述外标校准曲线通过将GL-3天然标准品(Matreya#1067)在相同提取溶液中连续稀释来制备。将提取物进一步用乙腈稀释并注射到2.0×100mm,3μM Luna Hilic柱(Phenomonex)上，使用Waters Acquity UPLC解析并用API-4000质谱仪以前体离子和阳离子模式分析总磷脂酰胆碱(PC)。总PC水平也通过用以下外标校准曲线进行校准来确定，所述外标校准曲线通过将PC天然标准品(Matreya#1044)连续稀释来制备。相对于总PC水平对每个样品的总GL-3水平进行归一化。

Claims (67)

1.用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药：
其中：
n为1、2或3；
m为0或1；
p为0或1；
t为0、1或2；
y为1或2；
z为0、1或2；
E为S、O、NH、NOH、NNO2、NCN、NR、NOR或NSO2R；
当m为1时，X1为CR1，或当m为0时，X1为N；
X2为O、-NH、-CH2-、SO2、NH-SO2、CH(C1-C6)烷基或-NR2；
X3为O、-NH、-CH2-、CO、-CH(C1-C6)烷基、SO2NH、-CO-NH-或-NR3；
X4为CR4R5、CH2CR4R5或CH2-(C1-C6)烷基-CR4R5；
X5为直接键、O、S、SO2、CR4R5、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)烯基氧基；
R为(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C9)杂芳基(C1-C6)烷基；
R1为H、CN、(C1-C6)烷基羰基或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立为-H；(C1-C6)烷基，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基，或任选当X2为-NR2且X3为-NR3时，R2和R3可与它们所连接的氮原子一起形成非芳族杂环，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基；
R4和R5独立选自H、(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；
R6为-H、卤素、-CN、(C6-C12)芳基、(C6-C12)芳基氧基、(C1-C6)烷基氧基；(C1-C6)烷基，其任选被一至四个卤素或(C1-C6)烷基取代；
A1为(C2-C6)炔基、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、硝基、CN、-OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烷氧基羰基和(C1-C6)烷基羰基；
A2为H、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、O(C3-C6环烷基)、(C3-C6)环烷氧基、硝基、CN、OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)卤代烷基；
条件是n+t+y+z的和不大于6；
条件是当p为0时，X2为NH-SO2且X3为NH；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为NH、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基、卤代苯基或异丙烯基苯基；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为O、E为O、X3为NH、A1为(C6-C12)芳基且X5为直接键、A2为H且R4为H时，R5不为环己基；且
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为CH2、R4和R5都为氢、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基。
2.权利要求1的方法，其中给予所述化合物抑制在所述受试者的心肌细胞中的GL-3蓄积。
3.权利要求2的方法，其中给予所述化合物抑制在所述心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
4.权利要求2的方法，其中给予所述化合物降低在所述受试者的心肌细胞中的GL-3蓄积。
5.权利要求4的方法，其中给予所述化合物降低在所述心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
6.权利要求1的方法，其中给予所述化合物防止在所述受试者的心肌细胞中的GL-3蓄积。
7.权利要求6的方法，其中给予所述化合物防止在所述心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
8.权利要求1-7中任一项的方法，其中给予所述化合物抑制葡糖神经酰胺合酶(GCS)活性。
9.用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)的方法，其中所述方法包括对所述受试者给予有效量的由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药：
其中：
n为1、2或3；
m为0或1；
p为0或1；
t为0、1或2；
y为1或2；
z为0、1或2；
E为S、O、NH、NOH、NNO2、NCN、NR、NOR或NSO2R；
当m为1时，X1为CR1，或当m为0时，X1为N；
X2为O、-NH、-CH2-、SO2、NH-SO2、CH(C1-C6)烷基或-NR2；
X3为O、-NH、-CH2-、CO、-CH(C1-C6)烷基、SO2NH、-CO-NH-或-NR3；
X4为CR4R5、CH2CR4R5或CH2-(C1-C6)烷基-CR4R5；
X5为直接键、O、S、SO2、CR4R5、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)烯基氧基；
R为(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C9)杂芳基(C1-C6)烷基；
R1为H、CN、(C1-C6)烷基羰基或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立为-H；(C1-C6)烷基，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基，或任选当X2为-NR2且X3为-NR3时，R2和R3可与它们所连接的氮原子一起形成非芳族杂环，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基；
R4和R5独立选自H、(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；
R6为-H、卤素、-CN、(C6-C12)芳基、(C6-C12)芳基氧基、(C1-C6)烷基氧基；(C1-C6)烷基，其任选被一至四个卤素或(C1-C6)烷基取代；
A1为(C2-C6)炔基、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、硝基、CN、-OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烷氧基羰基和(C1-C6)烷基羰基；
A2为H、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、O(C3-C6环烷基)、(C3-C6)环烷氧基、硝基、CN、OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)卤代烷基；
条件是n+t+y+z的和不大于6；
条件是当p为0时，X2为NH-SO2且X3为NH；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为NH、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基、卤代苯基或异丙烯基苯基；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为O、E为O、X3为NH、A1为(C6-C12)芳基且X5为直接键、A2为H且R4为H时，R5不为环己基；且
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为CH2、R4和R5都为氢、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基。
10.权利要求9的方法，其中所述受试者的心肌细胞与健康心肌细胞相比具有增加的GL-3。
11.权利要求10的方法，其中所述增加的GL-3存在于所述心肌细胞的溶酶体中。
12.权利要求10或11的方法，其中给予所述化合物保持在所述心肌细胞中的GL-3水平。
13.权利要求12的方法，其中给予所述化合物保持在所述心肌细胞的溶酶体中的GL-3水平。
14.权利要求10或11的方法，其中给予所述化合物降低在所述心肌细胞中的GL-3。
15.权利要求14的方法，其中给予所述化合物降低在所述心肌细胞的溶酶体中的GL-3。
16.权利要求9-15中任一项的方法，其中所述受试者的心肌细胞包含蓄积的GL-3。
17.权利要求16的方法，其中所述蓄积的GL-3存在于所述心肌细胞的溶酶体中。
18.权利要求9-17中任一项的方法，其中给予所述化合物抑制葡糖神经酰胺合酶(GCS)活性。
19.权利要求1-18中任一项的方法，其中所述化合物为
或其药用盐或前药。
20.权利要求1-18中任一项的方法，其中所述化合物为
或其药用盐或前药。
21.权利要求1-20中任一项的方法，其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的α-半乳糖苷酶A。
22.权利要求1-21中任一项的方法，其中在治疗前所述受试者具有升高水平的神经酰胺三己糖苷、溶血神经酰胺三己糖苷或其组合。
23.权利要求22的方法，其中正在进行治疗的受试者与单独用α-半乳糖苷酶A或所述化合物治疗的受试者相比在尿和血浆中具有较低组合量的神经酰胺三己糖苷或溶血神经酰胺三己糖苷。
24.用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍的方法，其中所述方法包括使所述心肌细胞与有效量的由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药接触：
其中：
n为1、2或3；
m为0或1；
p为0或1；
t为0、1或2；
y为1或2；
z为0、1或2；
E为S、O、NH、NOH、NNO2、NCN、NR、NOR或NSO2R；
当m为1时，X1为CR1，或当m为0时，X1为N；
X2为O、-NH、-CH2-、SO2、NH-SO2、CH(C1-C6)烷基或-NR2；
X3为O、-NH、-CH2-、CO、-CH(C1-C6)烷基、SO2NH、-CO-NH-或-NR3；
X4为CR4R5、CH2CR4R5或CH2-(C1-C6)烷基-CR4R5；
X5为直接键、O、S、SO2、CR4R5、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)烯基氧基；
R为(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C9)杂芳基(C1-C6)烷基；
R1为H、CN、(C1-C6)烷基羰基或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立为-H；(C1-C6)烷基，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基，或任选当X2为-NR2且X3为-NR3时，R2和R3可与它们所连接的氮原子一起形成非芳族杂环，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基；
R4和R5独立选自H、(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；
R6为-H、卤素、-CN、(C6-C12)芳基、(C6-C12)芳基氧基、(C1-C6)烷基氧基；(C1-C6)烷基，其任选被一至四个卤素或(C1-C6)烷基取代；
A1为(C2-C6)炔基、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、硝基、CN、-OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烷氧基羰基和(C1-C6)烷基羰基；
A2为H、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、O(C3-C6环烷基)、(C3-C6)环烷氧基、硝基、CN、OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)卤代烷基；
条件是n+t+y+z的和不大于6；
条件是当p为0时，X2为NH-SO2且X3为NH；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为NH、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基、卤代苯基或异丙烯基苯基；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为O、E为O、X3为NH、A1为(C6-C12)芳基且X5为直接键、A2为H且R4为H时，R5不为环己基；且
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为CH2、R4和R5都为氢、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基。
25.权利要求24的方法，其中所述鞘糖脂疾病或障碍包括在所述心肌细胞中与健康心肌细胞相比增加的神经酰胺三己糖苷(GL-3)。
26.权利要求25的方法，其中所述增加的GL-3存在于所述心肌细胞的溶酶体中。
27.权利要求25或26的方法，其中给予所述化合物保持在所述心肌细胞中的GL-3水平。
28.权利要求27的方法，其中所述化合物保持在所述心肌细胞的溶酶体中的GL-3水平。
29.权利要求25或26的方法，其中给予所述化合物降低在所述心肌细胞中的GL-3。
30.权利要求29的方法，其中所述化合物降低在所述心肌细胞的溶酶体中的GL-3。
31.权利要求24-30中任一项的方法，其中所述鞘糖脂疾病或障碍包括在所述心肌细胞中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积。
32.权利要求31的方法，其中GL-3蓄积存在于所述心肌细胞的溶酶体中。
33.权利要求31或32的方法，其中给予所述化合物抑制在所述心肌细胞中的GL-3蓄积。
34.权利要求33的方法，其中给予所述化合物抑制在所述心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
35.权利要求31或32的方法，其中给予所述化合物降低在所述心肌细胞中的GL-3蓄积。
36.权利要求35的方法，其中给予所述化合物降低在所述心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
37.权利要求31或32的方法，其中给予所述化合物防止在所述心肌细胞中的GL-3蓄积。
38.权利要求37的方法，其中给予所述化合物防止在所述心肌细胞的溶酶体中的GL-3蓄积。
39.权利要求24-38中任一项的方法，其中给予所述化合物抑制葡糖神经酰胺合酶(GCS)活性。
40.权利要求24-39中任一项的方法，其中所述化合物为
或其药用盐或前药。
41.权利要求24-39中任一项的方法，其中所述化合物为
或其药用盐或前药。
42.权利要求24-41中任一项的方法，其中所述心肌细胞处于受试者的心脏中。
43.权利要求42的方法，其中所述受试者患有所述鞘糖脂疾病或障碍或面临患有所述鞘糖脂疾病或障碍的风险。
44.权利要求24-43中任一项的方法，其中所述鞘糖脂疾病或障碍为代谢性障碍。
45.权利要求24-44中任一项的方法，其中所述鞘糖脂疾病或障碍为溶酶体贮积病。
46.权利要求45的方法，其中所述溶酶体贮积病选自戈谢病、法布里病、GM1神经节苷脂贮积病、GM2活化因子缺乏症、泰-萨克斯病和桑德霍夫病。
47.权利要求24-46中任一项的方法，其中所述鞘糖脂疾病或障碍为GL-3疾病或障碍。
48.权利要求46或47的方法，其中所述溶酶体贮积病为法布里病。
49.权利要求24-48中任一项的方法，其中所述方法还包括对所述受试者给予治疗有效量的溶酶体酶。
50.权利要求49的方法，其中所述溶酶体酶选自葡糖脑苷脂酶、α-半乳糖苷酶A、己糖胺酶A、己糖胺酶B和GM1-神经节苷脂-β-半乳糖苷酶。
51.权利要求50的方法，其中所述溶酶体酶为α-半乳糖苷酶A。
52.权利要求45-51中任一项的方法，其中在治疗前所述受试者具有升高水平的溶酶体底物。
53.权利要求52的方法，其中所述溶酶体底物选自神经酰胺三己糖苷和溶血神经酰胺三己糖苷及其组合。
54.权利要求49-53中任一项的方法，其中正在进行治疗的受试者与单独用所述溶酶体酶或所述化合物治疗的受试者相比在尿和血浆中具有较低组合量的所述溶酶体底物。
55.在权利要求1-54中任一项的方法中使用的药物组合物，其中所述药物组合物包含由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药：
其中：
n为1、2或3；
m为0或1；
p为0或1；
t为0、1或2；
y为1或2；
z为0、1或2；
E为S、O、NH、NOH、NNO2、NCN、NR、NOR或NSO2R；
当m为1时，X1为CR1，或当m为0时，X1为N；
X2为O、-NH、-CH2-、SO2、NH-SO2、CH(C1-C6)烷基或-NR2；
X3为O、-NH、-CH2-、CO、-CH(C1-C6)烷基、SO2NH、-CO-NH-或-NR3；
X4为CR4R5、CH2CR4R5或CH2-(C1-C6)烷基-CR4R5；
X5为直接键、O、S、SO2、CR4R5、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)烯基氧基；
R为(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C9)杂芳基(C1-C6)烷基；
R1为H、CN、(C1-C6)烷基羰基或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立为-H；(C1-C6)烷基，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基，或任选当X2为-NR2且X3为-NR3时，R2和R3可与它们所连接的氮原子一起形成非芳族杂环，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基；
R4和R5独立选自H、(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；
R6为-H、卤素、-CN、(C6-C12)芳基、(C6-C12)芳基氧基、(C1-C6)烷基氧基；(C1-C6)烷基，其任选被一至四个卤素或(C1-C6)烷基取代；
A1为(C2-C6)炔基、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、硝基、CN、-OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烷氧基羰基和(C1-C6)烷基羰基；
A2为H、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、O(C3-C6环烷基)、(C3-C6)环烷氧基、硝基、CN、OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)卤代烷基；
条件是n+t+y+z的和不大于6；
条件是当p为0时，X2为NH-SO2且X3为NH；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为NH、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基、卤代苯基或异丙烯基苯基；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为O、E为O、X3为NH、A1为(C6-C12)芳基且X5为直接键、A2为H且R4为H时，R5不为环己基；且
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为CH2、R4和R5都为氢、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基。
56.权利要求55的药物组合物，其中所述化合物为
或其药用盐或前药。
57.权利要求55的药物组合物，其中所述化合物为
或其药用盐或前药。
58.权利要求55-57中任一项的药物组合物，其中所述药物组合物还包含药用载体、稀释剂或赋形剂。
59.由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药，其用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积：
其中：
n为1、2或3；
m为0或1；
p为0或1；
t为0、1或2；
y为1或2；
z为0、1或2；
E为S、O、NH、NOH、NNO2、NCN、NR、NOR或NSO2R；
当m为1时，X1为CR1，或当m为0时，X1为N；
X2为O、-NH、-CH2-、SO2、NH-SO2、CH(C1-C6)烷基或-NR2；
X3为O、-NH、-CH2-、CO、-CH(C1-C6)烷基、SO2NH、-CO-NH-或-NR3；
X4为CR4R5、CH2CR4R5或CH2-(C1-C6)烷基-CR4R5；
X5为直接键、O、S、SO2、CR4R5、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)烯基氧基；
R为(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C9)杂芳基(C1-C6)烷基；
R1为H、CN、(C1-C6)烷基羰基或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立为-H；(C1-C6)烷基，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基，或任选当X2为-NR2且X3为-NR3时，R2和R3可与它们所连接的氮原子一起形成非芳族杂环，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基；
R4和R5独立选自H、(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；
R6为-H、卤素、-CN、(C6-C12)芳基、(C6-C12)芳基氧基、(C1-C6)烷基氧基；(C1-C6)烷基，其任选被一至四个卤素或(C1-C6)烷基取代；
A1为(C2-C6)炔基、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、硝基、CN、-OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烷氧基羰基和(C1-C6)烷基羰基；
A2为H、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、O(C3-C6环烷基)、(C3-C6)环烷氧基、硝基、CN、OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)卤代烷基；
条件是n+t+y+z的和不大于6；
条件是当p为0时，X2为NH-SO2且X3为NH；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为NH、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基、卤代苯基或异丙烯基苯基；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为O、E为O、X3为NH、A1为(C6-C12)芳基且X5为直接键、A2为H且R4为H时，R5不为环己基；且
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为CH2、R4和R5都为氢、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基。
60.由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药，其用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)：
其中：
n为1、2或3；
m为0或1；
p为0或1；
t为0、1或2；
y为1或2；
z为0、1或2；
E为S、O、NH、NOH、NNO2、NCN、NR、NOR或NSO2R；
当m为1时，X1为CR1，或当m为0时，X1为N；
X2为O、-NH、-CH2-、SO2、NH-SO2、CH(C1-C6)烷基或-NR2；
X3为O、-NH、-CH2-、CO、-CH(C1-C6)烷基、SO2NH、-CO-NH-或-NR3；
X4为CR4R5、CH2CR4R5或CH2-(C1-C6)烷基-CR4R5；
X5为直接键、O、S、SO2、CR4R5、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)烯基氧基；
R为(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C9)杂芳基(C1-C6)烷基；
R1为H、CN、(C1-C6)烷基羰基或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立为-H；(C1-C6)烷基，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基，或任选当X2为-NR2且X3为-NR3时，R2和R3可与它们所连接的氮原子一起形成非芳族杂环，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基；
R4和R5独立选自H、(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；
R6为-H、卤素、-CN、(C6-C12)芳基、(C6-C12)芳基氧基、(C1-C6)烷基氧基；(C1-C6)烷基，其任选被一至四个卤素或(C1-C6)烷基取代；
A1为(C2-C6)炔基、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、硝基、CN、-OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烷氧基羰基和(C1-C6)烷基羰基；
A2为H、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、O(C3-C6环烷基)、(C3-C6)环烷氧基、硝基、CN、OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)卤代烷基；
条件是n+t+y+z的和不大于6；
条件是当p为0时，X2为NH-SO2且X3为NH；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为NH、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基、卤代苯基或异丙烯基苯基；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为O、E为O、X3为NH、A1为(C6-C12)芳基且X5为直接键、A2为H且R4为H时，R5不为环己基；且
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为CH2、R4和R5都为氢、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基。
61.由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药，其用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍：
其中：
n为1、2或3；
m为0或1；
p为0或1；
t为0、1或2；
y为1或2；
z为0、1或2；
E为S、O、NH、NOH、NNO2、NCN、NR、NOR或NSO2R；
当m为1时，X1为CR1，或当m为0时，X1为N；
X2为O、-NH、-CH2-、SO2、NH-SO2、CH(C1-C6)烷基或-NR2；
X3为O、-NH、-CH2-、CO、-CH(C1-C6)烷基、SO2NH、-CO-NH-或-NR3；
X4为CR4R5、CH2CR4R5或CH2-(C1-C6)烷基-CR4R5；
X5为直接键、O、S、SO2、CR4R5、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)烯基氧基；
R为(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C9)杂芳基(C1-C6)烷基；
R1为H、CN、(C1-C6)烷基羰基或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立为-H；(C1-C6)烷基，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基，或任选当X2为-NR2且X3为-NR3时，R2和R3可与它们所连接的氮原子一起形成非芳族杂环，其任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C6)烷基(C6-C12)芳基、卤代(C6-C12)芳基和卤代(C2-C9)杂芳基；
R4和R5独立选自H、(C1-C6)烷基或与它们所连接的碳一起形成螺(C3-C10)环烷基环或螺(C3-C10)环烷氧基环；
R6为-H、卤素、-CN、(C6-C12)芳基、(C6-C12)芳基氧基、(C1-C6)烷基氧基；(C1-C6)烷基，其任选被一至四个卤素或(C1-C6)烷基取代；
A1为(C2-C6)炔基、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、硝基、CN、-OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C1-C6)烷氧基羰基和(C1-C6)烷基羰基；
A2为H、(C3-C10)环烷基、(C6-C12)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或苯并(C2-C9)杂环烷基，其任选取代有选自以下的一个或多个取代基：卤素、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、O(C3-C6环烷基)、(C3-C6)环烷氧基、硝基、CN、OH、任选被一个至三个卤素取代的(C1-C6)烷基氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)卤代烷基；
条件是n+t+y+z的和不大于6；
条件是当p为0时，X2为NH-SO2且X3为NH；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为NH、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基、卤代苯基或异丙烯基苯基；
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为O、E为O、X3为NH、A1为(C6-C12)芳基且X5为直接键、A2为H且R4为H时，R5不为环己基；且
条件是当n为1、t为0、y为1、z为1、X2为NH、E为O、X3为CH2、R4和R5都为氢、A2为H且X5为直接键时，A1不为未取代的苯基。
62.由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药，其用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积：
63.由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药，其用于治疗患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)蓄积：
64.由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药，其用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)：
65.由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药，其用于降低患有法布里病或面临患有法布里病的风险的受试者的心脏中的神经酰胺三己糖苷(GL-3)：
66.由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药，其用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍：
67.由以下结构式表示的化合物或其药用盐或前药，其用于治疗心肌细胞中的鞘糖脂疾病或障碍：
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