ES2870225T3

ES2870225T3 - Análogos de dipéptidos para tratar estados asociados con la formación de fibrillas amiloides

Info

Publication number: ES2870225T3
Application number: ES18190280T
Authority: ES
Inventors: Ehud Gazit; Yaniv Amir; Ludmila Buzhansky; Ulrich Abel; Anat Frydman-Marom
Original assignee: Ramot at Tel Aviv University Ltd
Current assignee: Ramot at Tel Aviv University Ltd
Priority date: 2010-11-15
Filing date: 2011-11-15
Publication date: 2021-10-26
Anticipated expiration: 2031-11-15
Also published as: HUE041210T2

Abstract

Un compuesto que comprende un resto de triptófano (Trp) acoplado a un resto rompedor beta-laminar, estando representado el compuesto por una estructura química seleccionada entre el grupo que consiste en **(Ver fórmula)** para ser usado en la inhibición de la formación de fibrillas amiloides o en el tratamiento de unas enfermedad o trastorno asociado a amiloides.

Description

DESCRIPCIÓN

Análogos de dipéptidos para tratar estados asociados con la formación de fibrillas amiloides

Campo y antecedentes de la invención

La presente invención, en algunas de sus realizaciones, se refiere a nuevos agentes terapéuticos y, más particularmente, a dipéptidos y sus análogos, que previenen la formación de fibrillas amiloides y, por tanto, pueden ser usados en el tratamiento de enfermedades asociadas a amiloides como el tipo II de diabetes mellitus, demencia o enfermedades de Alzheimer, amiloidosis sistémica y localizada, enfermedades o trastornos oculares (por ejemplo, glaucoma) y encefalopatías relacionadas con priones.

El depósito de material amiloide (también denominado formación de placa amiloide) es una característica central de una diversidad de estados patológicos no relacionados que incluyen la enfermedad de Alzheimer, encefalopatías relacionadas con priones, diabetes mellitus de tipo II, amiloidosis familiar y amiloidosis de cadena ligera.

El material amiloide está compuesto por un retículo denso de fibrillas proteináceas no ramificadas de longitud indefinida que tienen un diámetro de aproximadamente 80 a 100 A. Las fibrillas amiloides contienen una estructura nuclear de cadenas de polipéptidos dispuestas en láminas plisadas en p antiparalelas o paralelas que se sitúan con sus ejes longitudinales perpendiculares al eje longitudinal de la fibrilla [Both et al. (1997) Nature 385:787-93; Glenner (1980) N. Eng. J. Med. 302:1283-92; Balbach et al. (2002) Biophys J. 83:1205-16].

Han sido identificadas aproximadamente veinte proteínas de fibrillas amiloides in vivo y correlacionadas con enfermedades específicas. Estas proteínas comparten poca o ninguna homología de secuencia de aminoácidos, sin embargo, la estructura nuclear de las fibrillas amiloides es esencialmente la misma. Esta estructura nuclear común de las fibrillas amiloides, y la presencia de sustancias comunes en los depósitos amiloides, sugieren que los datos que caracterizan una forma particular de material amiloide pueden ser relevantes también para otras formas de material amiloide y, por tanto, se pueden poner en práctica en un diseño de plantilla para el desarrollo de fármacos contra enfermedades asociadas a amiloides, como la diabetes mellitus de tipo II, demencia o enfermedades de Alzheimer, enfermedades y trastornos oculares y encefalopatías relacionadas con priones.

Además, los depósitos amiloides no parece que sean inertes in vivo, sino que en lugar de ello están en un estado dinámico de movimiento y pueden incluso regresar si se detiene la formación de fibrillas [Gillmore et al. (1997) Br. J. Haematol. 99:245-56].

Por tanto, las terapias diseñadas a inhibir la producción de polipéptidos amiloides o inhibir la amiloidosis pueden ser útiles para ensayar enfermedades asociadas a amiloides.

Una de las propuestas terapéuticas actualmente investigadas para prevenir la formación de fibrillas amiloides implica moléculas pequeñas que pueden entrar en el CNS (sistema nervioso central) e interrumpir la polimerización de péptidos p-amiloides. Ejemplos de estos compuestos que han sido descritos en la técnica como modelos efectivos en animales incluyen ciclohexanohexol [McLaurin et al., Nature Medicine 12(7), 2006, pp. 801-808], que incluyen AZD-103; curcumina (Yang et al., J. Biol. Chem., 208(7) 2005, 5892-5901; y derivados de hidroxicolesterol, descritos y reivindicados en el documento WO 03/077869.

Algunos de los presentes inventores han descrito previamente que la agregación de péptidos en forma de fibrillas amiloides está dirigida por interacciones aromáticas. Basándose en estos descubrimientos, se preparó una serie de péptidos cortos que comprendían aminoácidos aromáticos y un aminoácido de rotura beta laminar y se encontró que eran eficaces para inhibir la formación de fibrillas amiloides. La patente de EE.UU. n° 7.781.396 describe y reivindica estos dipéptidos. Un péptido potencial descrito en dicho documento es el dipéptido D-Trp-Aib. Los derivados de este dipéptido se describen también en dicho documento derivados de este dipéptido.

Este péptido se describe también por Frydman-Marom et al. (Angew. Chem. Int. Ed. 48, 11, pp. 1981 -1986).

Bharat K Trivedi et al JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 41, 1 de enero de 1998 (1998-01-01), páginas 38-45, describen compuestos similares que comprenden un grupo -(CO)O-adamantilo.

Un antecedente adicional de la técnica incluye la patente de EE.UU. n° 7,732.479 y la publicación de Yescovi et al. [Org. Biomol. Chem., 2003, 1,2983-2997].

Sumario de la invención

En una búsqueda de nuevas moléculas pequeñas con un rendimiento mejorado para inhibir la formación de fibrillas amiloides, los presentes inventores han diseñado y preparado de forma satisfactoria y han hecho prácticas de dipéptidos modificados basados en el dTrp-Aib previamente descrito. Estos nuevos dipéptidos, por tanto, incluyen un resto de triptófano acoplado a un resto de rotura beta-laminar, cada uno de los cuales se selecciona con el fin de conferir al compuesto dipéptidos características estéricas y/o lipófilas para conseguir el rendimiento deseado.

La presente invención, por tanto, proporciona un compuesto que comprende un resto de triptófano (Trp) acoplado a un resto de rotura beta laminar, con la condición de que dicho resto de Trp no es Trp dicho resto de rotura beta laminar no es ácido a- aminoisobutírico (Aib) ni un éster de ácido a-aminoisobutírico (Aib), estando representado el compuesto por una estructura química seleccionada entre el grupo de consiste en:

para ser usado en la inhibición de la formación de fibrillas amiloides o en tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado a amiloides.

En una realización, el compuesto está representado por la estructura química:

En una realización, la enfermedad o trastorno asociados a amiloides es un de: diabetes mellitus tipo II, enfermedad de Alzheimer (AD); enfermedad de Alzheimer de aparición temprana; enfermedad de Alzheimer de aparición tardía, enfermedad de Alzheimer pre-sintomática; enfermedad de Parkinson; amiloidosis SAA; síndrome islandés hereditario; mieloma múltiple; carcinoma medular; amiloide médico aórtico, amiloidosis de inyección de insulina; amiloidosis sistémica priónica; amiloidosis con inflamación crónica, enfermedad de Huntington; amiloidosis sistémica senil; amiloidosis de la glándula pituitaria; amiloidosis renal hereditaria; demencia británica familiar; amiloidosis hereditaria finlandesa; amiloidosis no neuropática familiar; una enfermedad o trastorno ocular relacionada con amiloidosis o una enfermedad priónica.

En una realización, la enfermedad o trastorno ocular relacionado con amiloides es glaucoma o degeneración macular relacionada con la edad.

En una realización, el compuesto es formulado para una administración en forma de gotas.

En una realización, el compuesto es una formulación para una administración mediante inyección, que incluye inyección intraocular.

Salvo que se defina otra cosa, todos los términos técnicos y/o científicos usados en la presente memoria descriptiva tienen el mismo significado comúnmente entendido por un experto en la técnica al que pertenece la invención. Aunque se pueden usar métodos o materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente memoria descriptiva en la práctica o el ensayo de realizaciones de la invención, se describen con posterioridad ejemplos de métodos y/o materiales. En caso de conflicto, prevalecerá la memoria descriptiva de la patente, incluidas las definiciones.

Breve descripción de los dibujos

Algunas realizaciones de la invención se describen en la presente memoria descriptiva, solo a modo de ejemplo, haciendo referencia a los dibujos que se acompañan.

En los dibujos;

Las Figs. 1A-C* presentan las estructuras químicas de ejemplos de restos de rotura beta laminar según algunas realizaciones de la invención, en las que el resto está acoplado a un resto de Trp a través de la alfa-amina;

Las Figs. 2A-J presentan las estructuras químicas y ejemplos de Trp según algunas realizaciones de la invención, en las que el resto está acoplado a un resto de rotura beta laminar a través de alfa-carboxilato;

Las Figs. 3A-Y presentan las estructuras químicas de ejemplos de análogos de dipéptidos según algunas realizaciones de la invención;

La Fig. 4 es una ilustración esquemática de una trayectoria sintética para preparar un ejemplo de análogo de dipéptido según algunas realizaciones de la invención;

Las Figs. 5A-B presentan análisis de transferencia Western (Fig. 5A) y datos obtenidos usando una tinción con tris-tricina al 15% y proteína Imperial (Fig. 5B) que demuestra el efecto del compuesto 2, H2N-a-Me-Trp-Aib-OMe sobre la inhibición de globulómeros a diversas relaciones en moles de inhibidor; péptido Ap, obtenido usando el protocolo de Hillen;

La Fig. 6 presenta datos que demuestran el efecto de los compuestos 1 y 7 para inhibir la formación de fibrillas de Ap^1-42a diversas relaciones en moles de inhibidor: péptido Ap, usando el protocolo de Hillen;

La Fig. 7 presenta datos que demuestran el efecto de los compuestos 3 y 5 para inhibir la formación de fibrillas de Ap^1-42a diversas relaciones en moles de inhibidor: péptido Ap, usando el protocolo de Hillen; y

La Fig. 8 presenta datos comparativos que demuestran el efecto de D-Trp-Aib (EG30) para inhibir la formación de fibrillas de Ap^1-42a diversas relaciones en moles de inhibidor: péptido Ap, usando el protocolo de Hillen.

Descripción de realizaciones específicas de la invención

La presente descripción se refiere a nuevos agentes terapéuticos y, más particularmente, a dipéptidos y sus análogos, para ser usados en la inhibición de la formación de fibrillas amiloides o en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado amiloides. Los agentes inhiben la formación de fibrillas amiloides y, por tanto, pueden ser usados en el tratamiento de enfermedades asociadas amiloides como diabetes mellitus tipo II, demencia o enfermedades de Alzheimer, amiloidosis sistémica y localizada, enfermedades oculares y trastornos y encefalopatías relacionadas con priones.

Los dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva están basados en un dipéptido D-Trp-Aib previamente descrito (también mencionado en la presente memoria descriptiva y en el estado de la técnica como EG030), que incorpora un resto de aminoácido aromático (Trp) acoplado a un resto rompedor betalaminar (el aminoácido no natural Aib) y que ha sido definido como un inhibidor altamente eficaz de la formación de fibrillas amiloides. Los dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva, por lo tanto, son moléculas pequeñas que se consideran como análogos del dipéptido D-Trp-Aib, en el que uno o más de los restos de aminoácidos aromáticos (Trp) del resto rompedor beta-laminar son modificados con el fin de conferir al análogo un rendimiento mejorado en comparación con D-Trp-Aib.

En una búsqueda de nuevos agentes terapéuticos para prevenir la formación de placa amiloide, los presentes inventores han diseñado y preparado satisfactoriamente y han hecho prácticas con dipéptidos con un rendimiento mejorado. Más específicamente, los nuevos dipéptidos fueron diseñados para exhibir características farmacocinéticas mejoradas como, por ejemplo, una permeabilidad mejorada BBB y una actividad inhibidora mejorada de la formación de placa amiloide y, opcionalmente, una bioestabilidad mejorada (por ejemplo, una semivida aumentada), solubilidad mejorada y similares.

Aunque la presente invención ha sido reducida en la práctica, los presentes inventores han identificado algunas características estructurales que confieren al análogo de dipéptido un perfil farmacocinético deseado. Estas incluyen la incorporación de un resto interruptor beta-laminar con un impedimento estérico aumentado y/o una lipofilicidad aumentada (en comparación con Aib); un resto aromático que incorpora un resto interruptor betalaminar y un resto aromático con lipofilicidad aumentada y/o con funcionalidades que aumentan la semivida de la molécula.

Por tanto, se describe en la presente memoria descriptiva un análogo de dipéptido que comprende un resto de triptófano (Trp) acoplado a un resto interruptor beta-laminar.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, la expresión “resto de triptófano describe un resto químico que es derivado del aminoácido triptófano. La expresión “resto de triptófano” abarca al triptófano por sí mismo, así como derivados y análogos estructurales del mismo.

El término “derivado”, como se usa en la presente memoria descriptiva en el contexto de cualquiera de los restos descritos, describe un resto que ha sido modificado con el fin de incluir una nueva funcionalidad química (a saber, una funcionalidad no presente en el resto por sí misma). La derivación de un resto químico incluye la sustitución de un grupo funcional por otro, la adición de un grupo funcional o la omisión de un grupo funcional. Mediante “grupo funcional” se quiere indicar, por ejemplo, una sustitución distinta de hidrógeno.

Un “derivado de triptófano” por tanto incluye, según algunos aspectos de la descripción, un triptófano derivado con el fin de que incluya uno o más sustituyentes del anillo indol, un sustituyente en el nitrógeno del indol, un sustituyente en el átomo de carbono alfa y uno o más sustituyentes en el átomo de nitrógeno alfa. Están contemplados también otros derivados.

El término “análogo” como se usa en la presente memoria descriptiva en el contexto de cualquiera de los restos descritos, describe restos químicos que tienen características estructurales similares, aunque no idénticas a las del resto original. Por lo tanto, un análogo puede diferir del resto original en un grado de saturación, un número de átomos en un anillo, un tipo de heteroátomo, una longitud de una cadena de alquileno, una configuración de un enlace doble, una configuración de uno o más átomos de carbono asimétricos y similares.

Un “análogo de triptófano”, por tanto, puede incluir un aminoácido en el que un resto indol está unido directamente al átomo de carbono alfa, a través de una cadena de etileno, o a través de un enlace doble, un triptófano modificado para que incluya un resto heteroaromático distinto de indol y un triptófano modificado para que incluya un resto heterocíclico, como se define en la presente memoria descriptiva, distinto de indol, como ejemplos no limitativos.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, la expresión “resto interruptor beta-laminar” incluye restos que son derivados de aminoácidos naturales y no naturales, y que se caracterizan por un ángulo fi de aproximadamente -60 a 25 en lugar del ángulo fi beta-laminar típico de aproximadamente -120 a -140 grados, interrumpiendo así la estructura beta-laminar de la fibrilla amiloide.

Un ejemplo de aminoácido natural conocido como interruptor beta-laminar es la prolina. Otros aminoácidos interruptores beta-laminares incluyen, pero sin limitación ácido aspártico, ácido glutámico, glicina, lisina y serina (según la publicación de Chou and Fasman (1978) Annu. Rev. Biochem. 47, 258).

Se describen en la presente memoria descriptiva compuestos en los que el resto interruptor beta-laminar es un aminoácido sintético como un aminoácido Ca- metilado, cuyas limitaciones conformacionales están restringidas [Balaram, (1999) J. Pept. Res. 54, 195-199]. Al contrario que los aminoácidos naturales, que tienen un átomo de hidrógeno unido al Ca, los aminoácidos Ca-metilados tienen un grupo metilo unido al Ca, que afecta ampliamente a sus propiedades estéricas relativas a los ángulos ^ y ^ del aminoácido. Por tanto, aunque la alanina tiene una amplia gama de conformaciones ^ y ^ permitidas, el ácido a-aminoisobutírico (Aib, véase la Tabla 2 anterior) tiene conformaciones ^ y ^ limitadas.

En algunas realizaciones, el resto interruptor beta-laminar es derivado de ácido alfa-aminoisobutírico (Aib), de forma que es Aib por sí mismo o un derivado o análogo de Aib, como se define en la presente memoria descriptiva.

Un derivado de Aib incluye, según algunas realizaciones, Aib derivado para sustituir uno o más de los sustituyentes metilo en el Calfa, para sustituir el ácido alfa-carboxílico, por ejemplo, con un éster, una amida, un cloruro de acilo un tiocarboxilato, etc. Y para incluir un sustituyente en el nitrógeno alfa. Están contemplados también otros derivados.

En algunas realizaciones, el resto interruptor beta-laminar es un aminoácido alfa-metilado como, por ejemplo, alfa-metil-lisina, alfa-metil-valina, y alfa-metilfenilalanina.

Debe entenderse que cuando los restos indicados son citados en el contexto de los análogos de dipéptidos descritos, se hace referencia a una parte de cada resto formado tras el acoplamiento al otro resto. En este contexto, el término “resto” es equivalente al término “residuo”, como se usa en el contexto de aminoácidos en un péptido, de forma que representa la parte de un aminoácido o un análogo o derivado del mismo que está presente en el dipéptido, tras ser acoplado a otro aminoácido (o un derivado o análogo del mismo) a través de un enlace péptido o un enlace análogo.

Consecuentemente, un “análogo de dipéptido”, como se usa en la presente memoria descriptiva, describe un péptido compuesto por residuos de un resto de Trp y un resto interruptor Beta-laminar, como se define en la presente memoria descriptiva, y abarca cualquiera de los restos de triptófanos descritos en la presente memoria descriptiva, covalentemente unidos a cualquiera de los restos interruptores beta-laminares como se describen en la presente memoria descriptiva, a través de la formación de un enlace péptido entre un grupo amino de un resto y un grupo carboxílico de otro resto. El “análogo de dipéptido” puede ser mencionado también por lo tanto como un conjugado químico que comprende un resto de triptófano covalentemente unido a un resto de Aib. El análogo de dipéptido es mencionado también en la presente memoria descriptiva como un compuesto o una molécula.

Está excluido del alcance de las realizaciones de la presente invención el dipéptido Trp-Aib y un derivado de éster del mismo. Las realizaciones de la invención abarcan, sin embargo, análogos de dipéptidos en los que uno de los restos Trp o Aib (incluido un éster de los mismos), con la condición de que el otro resto no sea Aib (o un éster del mismo o Trp, respectivamente.

Los análogos de dipéptidos particulares para ser usados como se define en la invención están definidos en las reivindicaciones. Están descritos también en la presente memoria descriptiva otros análogos de dipéptidos. Los análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva se pueden representar colectivamente mediante la fórmula general I:

Fórmula I

en la cual:

la línea de rayas interrumpidas indica un enlace doble opcional;

* indica una configuración (R) o una configuración (S) (relevante para el átomo de carbono sustituido con NR6R7 en el caso de un enlace sencillo, en el que la línea de rayas discontinuas está ausente;

R1 se selecciona entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, arilo, hidroxi, alcoxi, ariloxi, tiol, tioalcoxi, tioariloxi, halo y amino;

R2 y R3 se seleccionan cada uno independientemente entre el grupo que consiste en alquilo, cicloalquilo, arilo, halo, haloalquilo y bencilo o, alternativamente, R2 y R3 forman conjuntamente un anillo saturado o insaturado de 3-8 miembros;

R4 se selecciona entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, carbonilo, tiocarbonilo, carboxilato y tiocarboxilato o, alternativamente, R4 y R3 forman conjuntamente un anillo saturado o insaturado de 4-8 miembros;

R5 se selecciona entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo, o está ausente en el caso de que la línea de rayas discontinuas indique un enlace doble;

R⁶y R7 se seleccionan cada uno independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, carbonilo, tiocarbonilo, carboxilato y tiocarboxilato, o, alternativamente, R⁶y R7 forman conjuntamente un anillo saturado o insaturado de 4-8 miembros;

R⁸se selecciona entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, carbonilo, tiocarbonilo, carboxilato y tiocarboxilato; y

R9-R12 se seleccionan cada uno independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, alcoxi, tioalcoxi, ariloxi, tioariloxi, halo, hidroxi-tiol, carbonilo, carboxilato y carbamato;

con la condición de que cuando R2 es alquilo y R3 es metilo, al menos de R4, R5 y R8-R12 no es hidrógeno.

En la fórmula general I, el fragmento -(R⁴)-N-C(R²)(R³)-C(=O)-R¹se considera que deriva del resto de Aib.

En algunas realizaciones, R4 es hidrógeno, R2 y R3 son cada uno metilo y R1 es hidroxi, de forma que el análogo de dipéptido comprende ácido aminoisobutírico (Aib) como el resto interruptor beta-laminar.

En algunas realizaciones, el resto de Aib es derivado con el fin de incluir otros sustituyentes en el átomo de carbono alfa.

Por tanto, en algunas realizaciones, al menos de R2 y R3 es un alquilo mayor que metilo (a saber, que tiene más de un átomo de carbono).

En algunas realizaciones, uno o ambos de R2 y R3 es butilaquilo como, pero sin limitación isopropilo, isobutilo, terc-butilo y similares.

Como se usa en la presente memoria descriptiva y en la técnica, la expresión “voluminoso” en referencia a un sustituyente o un cierto grupo describe un resto químico que ocupa un volumen grande. La voluminosidad de un grupo se determina mediante el número y el tamaño de los átomos que comprenden el grupo o por su ordenación y por las interacciones entre los átomos (por ejemplo, longitudes de los enlaces o interacciones de repulsión). En el contexto de las presentes realizaciones, los grupos voluminosos son grupos que comprenden tres o más átomos de carbono. Además, en el contexto de las presentes realizaciones, los grupos alquilo voluminosos abarcan alquilos ramificados o alquilos sustituidos.

En algunas realizaciones, uno o ambos de R2 y R3 es un alquilo sustituido con un arilo o cicloalquilo, con el fin de formar sustituyente(s) voluminoso(s). El alquilo puede estar sustituido con otros grupos que confieren voluminosidad. En ejemplos de realizaciones uno o ambos de R2 y R3 es bencilo en el que el fenilo está sustituido o sin sustituir.

En algunas realizaciones, uno de R2 y R3 es metilo y el otro es un alquilo superior o alquilo sustituido, como se describe en la presente memoria descriptiva. Ejemplos de estos restos interruptores beta-laminares incluyen, pero sin limitación, aminoácidos alfa-metilados como a-Me-valina, a-Me-leucina y a-Me-fenilalanina.

En algunas realizaciones, R2 y R3 forman un anillo saturado o insaturado de 3-8 miembros.

El anillo puede ser alicíclico (cicloalquilo), heterocíclico, aromático o heteroaromático.

En algunas realizaciones, R2 y R3 forman conjuntamente un anillo de tres miembros alicíclico saturado (ciclopropano), un anillo de 4 miembros (ciclobutano), un anillo de 5 miembros (ciclopentano) o un anillo de 6 miembros (ciclohexano).

Alternativamente, R2 y R3 forman conjuntamente un anillo no aromático insaturado (por ejemplo, ciclopenteno o ciclohexeno).

De forma adicionalmente alternativa, R2 y R3 forman conjuntamente un anillo heterocíclico, como se define en la presente memoria descriptiva.

En algunas realizaciones, R2 y R3 forman conjuntamente un oxetano, un tetrahidrofurano, un tetrahidropirano, un dihidrofurano o un dihidropirano.

En algunas realizaciones, R2 y R3 forman conjuntamente un oxetano.

El anillo formado por R2 y R3 puede estar sustituido o sin sustituir, como se describe en la presente memoria descriptiva.

Como se demuestra en la sección de ejemplos que sigue, se ha demostrado que los análogos de dipéptidos en los que R2 y R3 representan grupos con una voluminosidad superior en comparación con los dos correspondientes grupos metilo en Aib (es decir, análogos de dipéptidos en los que R2 y R3 forman conjuntamente un anillo), exhiben una actividad inhibidora superior en comparación con el dipéptido D-Trp_Aib. En algunas realizaciones, R4 es hidrógeno, como en Aib.

En algunas realizaciones, R4 es distinto de hidrógeno.

Por tanto, en algunas realizaciones, R4 es alquilo (por ejemplo, metilo).

En algunas realizaciones, R4 y R3 forman conjuntamente un anillo, como se describe en la presente memoria descriptiva para R2 y R3. Este anillo puede ser un anillo heteroalicíclico o heteroaromático sustituido o sin sustituir, como se describe en la presente memoria descriptiva.

En ejemplos de realizaciones, cuando R4 y R3 forman conjuntamente dicho anillo, R2 es un alquilo.

En algunas realizaciones, R4 y R3 forman conjuntamente un anillo de cinco miembros saturado, de forma que el resto interruptor beta-laminar es a Me-prolina.

En algunas realizaciones, el resto interruptor beta-laminar comprende uno o más grupos halo (por ejemplo, cloro, flúor o bromo).

Aunque no se desean vinculaciones teóricas particulares, se sugiere que la presencia de un grupo halo aumenta la lipofilicidad y/o aumenta la semivida del análogo de dipéptido y, por tanto, confiere al análogo de dipéptido características farmacocinéticas mejoradas.

Un grupo halo puede ser introducido en el análogo de dipéptido siendo uno de R2 y R3, como un sustituyente de un alquilo, cicloalquilo o un arilo que forma uno o más R2, R3 o R4, o como un sustituyente de un anillo formado por R2 y R3 y/o R3 y R4.

En algunas realizaciones, uno o más de R2 y R3 es haloalquilo como trihaloalquilo (por ejemplo, trifluorometilo). En un ejemplo de realización, el resto interruptor beta-laminar es un ácido amino-trifluoroisobutírico.

En algunas realizaciones, uno o más de R2 y R3 es un bencilo halogenado. En un ejemplo de realización, el resto interruptor beta-laminar es una a-Me-fenilalanina halogenada.

Cada uno de los restos interruptores beta-laminares descritos en la presente memoria descriptiva pueden terminar con un grupo ácido carboxílico, de forma que R1 en la fórmula I es hidroxi.

Sin embargo, los presentes inventores han demostrado que la derivación del grupo carboxílico con el fin de incluir un éster o una amida da lugar a una actividad inhibidora mejorada y puede conferir también al análogo de dipéptido características farmacocinéticas mejoradas como una lipofilicidad mejorada y permeabilidad BBB. Por tanto, en algunas realizaciones, para cualquiera de los restos interruptores beta-laminares descritos en la presente memoria descriptiva, R1 un alcoxi o amino.

En algunas realizaciones, el alcoxi es un grupo voluminoso, como se define en la presente memoria descriptiva, de forma que el alcoxi es un grupo O-alquilo en el que el alquilo es una alquilo voluminoso, como se define la presente memoria descriptiva. Ejemplos representativos incluyen, poro sin limitación, t-butoxi, isopropoxi y similares-.

En algunas realizaciones cundo R1 en la formula I es amino, la amina puede ser una amina primaria (-NH2) una amina secundaria, (-NR') una amina terciaria (NR'R”), en que R' y R” pueden ser cada uno independientemente alquilo, cicloalquilo o arilo, siendo preferentemente cada uno de forma independiente un alquilo.

En algunas realizaciones, R1 es una amina secundaria.

Haciendo referencia ahora al resto de Trp, presentado en la fórmula I mediante el fragmento no incluido en el fragmento -(R4)-N-C(R2)(R3)-C(=O)-Ri

En algunas realizaciones, el resto de Trp en el análogo de dipéptido descrito incluye un resto interruptor betalaminar, por ejemplo, en la forma de un sustituyente metilo en el átomo de carbono alfa, de forma que el resto de Trp es Me-triptófano.

Consecuentemente, en algunas realizaciones R5 es alquilo.

En algunas realizaciones, R5 es metilo.

En algunas realizaciones, la a-amina del resto de Trp está derivada de forma de que al menos uno de R⁶y R7 es distinto de hidrógeno y la alfa-amina es una amina secundaria o una amina terciaria.

Una amina secundaria o terciaria confiere al análogo de dipéptido una lipofilicidad mejorada y permeabilidad. En algunas realizaciones, la alfa-amina de resto de Trp está sustituida por un carboxilato, carbonilo (incluido aldehído) tiocarbonilo y/o tiocarboxilato, con el fin de formar una amida o un carbamato.

En algunas realizaciones, la alfa-amina del resto de Trp está sustituida con t-Boc.

En algunas realizaciones R⁶y R7 forman conjuntamente un anillo heterocíclico o heteroaromático, como se describió anteriormente en la presente memoria descriptiva para R4 y R3.

En algunas realizaciones, el resto de Trp es tal que el resto de indol es derivado con el fin de incluir uno o más sustituyentes. En algunas realizaciones, el N-indol está sustituido, de forma que R⁸es distinto de hidrógeno. En algunas realizaciones R⁸es un alquilo (por ejemplo, metilo).

En algunas realizaciones, R⁸es un alquilo voluminoso (por ejemplo, isopropilo, isobutilo o t-butilo).

En algunas realizaciones, R⁸es t-butilo.

En algunas realizaciones, el grupo indol está sustituido con uno o más sustituyentes, indicados como R9-R12, como se detalla con anterioridad.

En algunas realizaciones, uno o más de R9-R12 es halo, como se define en la presente memoria descriptiva. Aunque no se desean vinculaciones teóricas particulares, se sugiere que la introducción de uno o más grupos halo en el resto indol proporciona características farmacocinéticas mejoradas como consecuencia de una lipolifilicidad mejorada y/o semivida prolongada.

Como uno de los principales obstáculos de usar fragmentos de péptidos cortos en terapia es su degradación proteolítica por proteasas celulares estereoespecíficas, en algunas realizaciones uno o los dos átomos de carbono asimétricos opcionales (marcados mediante * en la fórmula I) son derivados de D-isómeros de los restos de aminoácidos indicados y, consecuentemente, tienen una configuración (R).

En algunas realizaciones, el carbono alfa del resto de Trp es un átomo de carbono asimétrico que tiene una configuración (R).

En algunas realizaciones, un grupo indol, como se describe en la presente memoria descriptiva, está unido al átomo de carbono alfa a través de un enlace doble.

Debe entenderse que el número y la naturaleza de las modificaciones introducidas en el análogo de dipéptido están gobernados por consideraciones estéricas y electrónicas que pueden afectar a la estabilidad del producto obtenido y el carácter factible de su síntesis.

Consecuentemente, en algunas realizaciones, los análogos de dipéptidos son tales que no contienen dos o más grupos voluminosos en estrecha proximidad uno de otro o dos o más grupos electronegativos en estrecha proximidad uno de otro.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, el término “amina” describe un grupo -R'R” y un grupo -NR'-en que R' y R” son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, como se definen estos términos en la presente memoria descriptiva.

El término “amina” es usado para describir un grupo -NR'R” en los casos en que la amina es un grupo terminal, como se define con posterioridad y es usado para describir un grupo -NR'-en los casos en que la amina es un grupo conector.

En toda la presente memoria descriptiva, la expresión “grupo terminal” describe un grupo (un sustituyente) que está unido a otro resto en el compuesto a través de un átomo del mismo.

La expresión “grupo conector” describe un grupo (un sustituyente) que está unido a otro resto en el compuesto a través de dos o más átomos del mismo.

El grupo amino, por lo tanto, puede ser una amina primaria, en que tanto R' como R” son hidrógeno, una amina secundaria, en la que R' es hidrógeno y R” es alquilo, cicloalquilo o arilo, o una amina terciaria, en la que R' y R” son independientemente alquilo, cicloalquilo o arilo.

Alternativamente R' y R” pueden ser cada uno independientemente hidroxialquilo, trihaloalquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, heteroalicíclico, amino, haluro, sulfonato, sulfóxido, fosfonato, hidroxi, alcoxi, ariloxi, tiohidroxi, tioalcoxi, tioariloxi, ciano, nitro, azo, sulfonamido, carbonilo, C-carboxilato, O-carboxilato, N-tiocarbamato, O-tiocarbamato, urea, tiourea, N-carbamato, O-carbamato, C-amido, N-amido, guanilo, guanidino e hidrazino.

El término “alquilo” describe un hidrocarburo alifático saturado que incluye grupos de cadena lineal y cadena ramificada. Preferentemente, el grupo alquilo tiene uno a 20 átomos de carbono. Siempre que se establezca un intervalo numérico en la presente memoria descriptiva, por ejemplo “1-20”, implica que el grupo, en este caso el grupo alquilo, puede contener uno átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono, etc. Y que incluye hasta 20 átomos de carbono. En algunas realizaciones, el alquilo es un alquilo de tamaño medio que tiene de 1 a 10 átomos de carbono. En algunas realizaciones, salvo que se indique otra cosa, el alquilo es un alquilo inferior que tiene de 1 a 6 o de 1 a 4 átomos de carbono. El grupo alquilo puede estar sustituido o sin sustituir. El alquilo sustituido puede tener uno o más sustituyentes, en que cada grupo sustituyente puede ser independientemente, por ejemplo, hidroxialquilo, trihaloalquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, heteroalicíclico, amino, haluro, sulfonato, sulfóxido, fosfonato, hidroxi, alcoxi, ariloxi, trihidroxi, trialcoxi, triariloxi, ciano, nitro, azo, sulfonamido, C-carboxilato, O-carboxilato, N-tiocarbamato, O-tiocarbamato, urea, tiourea, N-carbamato, O-carbamato, C-amido, N-amido, guanilo, gunidino e hidrazino.

El grupo alquilo puede ser un grupo terminal, como esta expresión se define con anterioridad, el cual está unido a un único átomo contiguo, o un grupo conector, como esta expresión se define con anterioridad, que conecta dos o más restos a través de al menos dos átomos de carbono en su cadena.

El término “cicloalquilo” describe un anillo monocíclico o condensado con todos los átomos de carbono (es decir, anillos que comparten un par de átomos de carbono contiguos) grupo en el que uno o más de los anillos no tiene un sistema de electrones pi completamente conjugado. El grupo cicloalquilo puede ser sustituido o sin sustituir. El cicloalquilo sustituido puede tener uno o más sustituyentes, en que cada grupo sustituyente puede ser independientemente, por ejemplo, hidroxialquilo, trihaloalquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, heteroalicíclico, amino, haluro, sulfonato, sulfóxido, fosfonato, hidrolxi, alcoxi, ariloxi, tiohidroxi, tioalcoxi, tioariloxi, ciano, nitro, azo, sulfonamido, C-carboxilato, O-carboxilato, N-tiocarbamato, O-tiocarbamato, urea, tiourea, N-carbamato, O-carbamato, C-amido, N-amido, guanilo, guanidino e hidrazino. El grupo cicloalquilo puede ser un grupo terminal, como se define esta expresión con anterioridad, en el que está unido a un único átomo contiguo, o un grupo conector como esta expresión se define con anterioridad, que conecta dos o más restos en dos o más posiciones del mismo.

El término “arilo” describe grupos monocíclicos o policíclicos de anillos condensados con todos los átomos de carbono (es decir, anillos que comparten pares de átomos de carbono contiguos) que tiene un sistema de electrones pi completamente conjugados. El grupo arilo puede estar sustituido o sin sustituir. El arilo sustituido puede tener uno o más sustituyentes, en que cada grupo sustituyente puede ser independientemente, por ejemplo, hidroxialquilo, trihaloalquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, heteroalicíclico, amino, haluro, sulfonato, sulfóxido, fosfonato, hidroxi, alcoxi, ariloxi, tiohidroxi, tioalcoxi, tioariloxi, ciano, nitro, azo, sulfonamido, C-carboxilato, O-carboxilato, N-tiocarbamato, O-tiocarbamato, urea, tiourea, N-carbamato, O-carbamato, C-amido, N-amido, guanilo, guanidino e hidrazino. El grupo arilo puede ser un grupo terminal, como esta expresión se define con anterioridad, el cual está unido a un único átomo contiguo, o un grupo conector, como este término se define con anterioridad que conecta dos o más restos a dos o más posiciones del mismo.

El término “heteroarilo” describe un grupo de anillos monocíclicos o condensados (es decir, anillos que comparten un par de átomos contiguos) que tiene en el (o los) anillo(s) uno o más átomos como, por ejemplo, nitrógeno, oxígeno y azufre y que además tiene un sistema de electrones pi completamente conjugado. Ejemplos, sin limitación, de grupos heteroarilo incluyen pirrol, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, pirazol, piridino, pirimidino, quinolino, isoquinolino y purino. El grupo heteroarilo puede estar sustituido o sin sustituir. El heteroarilo sustituido puede tener uno o más sustituyentes, en que cada grupo sustituyente puede ser independientemente, por ejemplo, hidroxialquilo, trihaloalquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, heteroalicíclico, amino, haluro, sulfonato, sulfóxido, fosfonato, hidroxi, alcoxi, ariloxi, tiohidroxi, tioalcoxi, trioariloxi, ciano, nitro, azo, sulfonamido, C-carboxilato, O-carboxilato, N-tiocarbamato, O-tiocarbamato, urea, tiourea, O-cabamato, N-carbamato, C-amido, N-amido, guanilo, guanidino e hidrazino. El grupo heteroarilo puede ser un grupo terminal, como se define esta expresión con anterioridad, en el que está unido a un único átomo contiguo o un grupo conector, como se define esta expresión con anterioridad, que conecta dos o más restos a dos o más posiciones del mismo. Ejemplos representativos son piridino, pirrol, oxazol, indol, purino y similares.

El término “heterocíclico” describe un grupo de anillos monocíclico o condensados que tiene en el (o los) anillo(s) uno o más átomos como nitrógeno, oxígeno y azufre. Los anillos pueden tener uno o más enlaces dobles. Sin embargo, los anillos no tienen un sistema de electrones pi completamente conjugados. El heteroalicíclico puede estar sustituido o sin sustituir. El heteroalicíclico sustituido puede tener uno o más sustituyentes, en que cada grupo sustituyente puede ser independientemente, por ejemplo, hidroxialquilo, trihaloalquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, heteroalicíclico, amino, haluro, sulfonato, sulfóxido, fosfonato, hidroxi, alcoxi, ariloxi, trihidroxi, trialcoxi, triariloxi, ciano, nitro, azo, sulfonamido, C-carboxilato, O-carboxilato, N-tiocarbamato, O-tiocarbamato, urea, tiourea, O-cabamato, N-carbamato, C-amido, N-amido, guanilo, guanidino e hidrazino. El grupo heteroalicíclico puede ser un grupo terminal, como se define esta expresión con anterioridad en el que está unido a un único átomo contiguo, o un grupo conector, como se define esta expresión con anterioridad que conecta dos o más restos a dos o más posiciones del mismo. Ejemplos representativos son piperidino, piperazina, oxetano, tetrahidrofurano, tetrahidropirano, morfolino y similares.

El término “halo” se menciona también en la presente memoria descriptiva como “haluro” y describe flúor, cloro, bromo o yodo.

El término “haloalquilo” describe un grupo alquilo como se define anteriormente, adicionalmente sustituido con uno o más haluros.

Un “trihaloalquilo” describe, por ejemplo un trihaloalquilo (por ejemplo, -CX3, en que X es haluro).

El término “carbonilo” como se usa en la presente memoria descriptiva describe un grupo terminal -C(= O)-R' o un grupo conector -C(=O)-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' es como se define en la presente memoria descriptiva.

El término “tiocarbonilo” como se usa en la presente memoria descriptiva, describe un grupo terminal -C(=S)R' o un grupo conector -C(=S)-, como se definen estas expresiones con anterioridad en que R' es como se define en la presente memoria descriptiva.

El término “hidroxilo” o “hidroxi” describe un grupo -OH.

El término “alcoxi” describe un grupo -O-alquilo y -O-cicloalquilo, como se define en la presente memoria descriptiva.

El término “ariloxi” describe un grupo -O-arilo y un grupo -O-heteroarilo, como se define en la presente memoria descriptiva.

El término “tiohidroxi” o “tiol” describe un grupo -SH.

El término “tioalcoxi” describe un grupo -S-alquilo y un grupo S-cicloalquilo, como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “tioariloxi” describe un grupo -S- arilo y -S-heteroarilo, como se define en la presente memoria descriptiva.

El término “ciano” describe un grupo -C=N.

El término “isocianato” describe un grupo -N=C=O.

El término “nitro” describe un grupo -NO2.

El término “haluro de acilo” describe un grupo -C(=O)R”” en el que R”” es haluro, como se define con anterioridad.

El término “carboxilato” abarca C-carboxilato, O-carboxilato, C-tiocarboxilato y O-tiocarboxilato.

El término “C-Carboxilato describe un grupo terminal -C(=O)-R' o un grupo conector -C(=O)-O-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' es como se define en la presente memoria descriptiva.

El término “O-carboxilato, describe un grupo terminal -OC(=O)R' o un grupo conector -OC(=O)-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' es como se define en la presente memoria descriptiva. El término “C-tiocarboxilato” describe un grupo terminal -C(S)-OR' o un grupo conector -C(=S)-O-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' es como se define en la presente memoria descriptiva.

El término “O-tiocarboxilato” describe un grupo terminal, -OC(=S)R' o un grupo conector -OC(=S)- como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' es como se define en la presente memoria descriptiva. El término “amido” abarca C-amido y N-amido.

El término “C-amido” describe un grupo terminal -C(=O)-NR'R” o un grupo conector -C(=O)-NR', como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “N-amido” describe un grupo terminal R'C(=O)-NR”- o un grupo conecto R'C(=O)-N-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva. El término “N-carbamato” describe un grupo terminal R”OC(=O)-NR'” o un grupo conector -OC(=O)-NR'”, como se definen estas expresiones con anterioridad en que R' y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “O-carbamato” describe un grupo terminal -OC(=O)-NR'R” o un grupo conector -OC(=O)-NR'- como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “O-tiocarbamato” describe un grupo termina -OC(=S)-NR'R” o un grupo conector -OC(=S)-NR'-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “N-tiocarbamato” describe un grupo terminal R”OC(=S)NR” o un grupo conector -OC(S)NR'-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “S-ditiocarbamato” describe un grupo terminal -SC(=S)-NR'R” o un grupo conector -SC(=S)NR'-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “N-ditiocarbamato” describe un grupo terminal R”SC(=S)NR'- o un grupo conector -SC(=S)NR'-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “azo” o “diazo” describe un grupo terminal -N=NR' o un grupo conector -N=N-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' es como se define en la presente memoria descriptiva.

El término “sulfato” describe un grupo terminal -O-S(=O)2-OR', como se define este término con anterioridad, o un grupo conector -O-S(=O)2-O-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' es como se define con anterioridad.

El término “tiosulfato” describe un grupo terminal -O-S(=S)(=O)-OR' o un grupo conector -O-S(=S)(=O)-O-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' es como se define con anterioridad.

El término “sulfito” describe un grupo terminal -O-S(=O)-O-R' o un grupo conector -O-S(=O)-O- como se definen estas expresiones con anterioridad en que R' es como se define con anterioridad.

El término “tiosulfito describe un grupo terminal -O-S(=S)-O-R' o un grupo conector -O-S(=S)-O-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' es como se define con anterioridad.

El término “sulfinato” describe un grupo terminal -S(=O)-OR' o un grupo conector -S(=O)-O-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' es como se define con anterioridad.

El término “sulfóxido” o “sulfinilo” describe un grupo terminal -S(=O)R' o un grupo conector -S(=O)-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' es como se define con anterioridad.

El término “sulfonato describe un grupo terminal -S(=O)2-R' o un grupo conector -S(=O)2-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' es como se define en la presente memoria descriptiva.

El término “S-sulfonamido” describe un grupo terminal -S(=O)2-NR'R” o un grupo conector -S(=O)2-NR'- como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “N-sulfonamido” describe un grupo terminal R'S(=O)2-NR”- o un grupo conector -S(=O)2-NR'-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se deinen en la presente memoria descriptiva.

El término “disulfuro” se refiere a un grupo terminal -S-SR' o un grupo conector -S-S-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' es como se define en la presente memoria descriptiva.

El término “fosfonato” describe un grupo terminal -P(=O)(OR')(OR”) o un grupo conector -P(O)(OR')(O)-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se definen en la presente mem oria descriptiva.

El término “tiofosfonato” describe un grupo terminal -P(=S)(OR')(OR”) o un grupo conector -P(=S)(OR')(O)-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “fosfinilo” describe un grupo terminal -PR'R” o un grupo conector -PR'-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “óxido de fosfina” describe un grupo terminal -P(=O)(R')(R”) o un grupo conector -P(=O)(R')- como se definen en estas expresiones con anterioridad, siendo R' y R” como se definen en la presente memoria descriptiva.

La expresión “sulfuro de fosfina” describe un grupo terminal -P(=S)(R')(R”) o un grupo conector -P(=S)(R')-, como se definen estas expresiones con anterioridad, siendo R' y R” como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “fosfito” describe un grupo terminal -O-PR'(=O)(OR”) o un grupo conector -O-PH(=O)(O)-, como se definen estas expresiones con anterioridad, siendo R' y R” como se definen en la presente memoria descriptiva. El término “urea” que se menciona también en la presente memoria descriptiva como “ureido” describe un grupo terminal -NR'C(=O)-NR'R”' o un grupo conector -NR'C(=O)-NR”-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva y R'” es como se define en la presente memoria descriptiva para R' y R”.

El término “tiourea”, que se menciona también en la presente memoria descriptiva como “tioureido” describe un grupo terminal -NR'-C(=S)-NR”R”' o un grupo conector -NR'-C(=S)-NR”-, en que R', R” y R'” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “guanilo” describe un grupo terminal R'R”NC(=N)- o un grupo conector -R'NC(=N)-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R' y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva. El término “guanidino” describe un grupo terminal -R'NC(=N)-NR”R”' o un grupo conector -R'NC(=N)-NR”- como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R', R” y R'” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

El término “hidrazino” describe un grupo terminal -NR'-NR”R'” o un grupo conector -NR'-NR”-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R', R” y R'” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, el término “hidrazido” describe un grupo terminal -C(=O)NR'-NR”R'” o un grupo conector -C(=O)-NR'-NR”-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R', R” y R'” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, el término “tiohidrazido” describe un grupo terminal -C(=S)-NR'-NR”R”' o un grupo conector -C(=S)-NR'-NR”-, como se definen estas expresiones con anterioridad, en que R', R” y R” son como se definen en la presente memoria descriptiva.

Una lista de restos interruptores beta-laminares que con adecuados para ser usados en el contexto de la descripción se presenta en la Tabla 3 (véase el ejemplo 1 que sigue) y en la figura 1.

Una lista de ejemplos de restos Trp que son adecuados para ser usados en el contexto de la descripción se presenta en la Tabla 2 (véase el ejemplo 1 que sigue) y en la figura 2.

Debe apreciase que las realizaciones de la presente descripción abarcan cualquier combinación de uno de los restos Trp descritos en la presente memoria descriptiva y uno de los restos interruptores beta-laminares descritos en la presente memoria descriptiva.

Una lista de ejemplo de análogos de dipéptidos según algunas realizaciones de la descripción se presenta en la Tabla 1 (véase e ejemplo 1 que sigue) y en la figura 3.

Como se indicó con anterioridad y como se demuestra adicionalmente en la sección de ejemplos que sigue, los presentes inventores han desvelado que las modificaciones de algunas características estructurales y funcionales de un resto de Trp y/o un resto de Aib en un dipéptido compuesto por estos dos resto, da lugar a análogos de dipéptidos de los D-Trp-Aib previamente descritos que se caracterizan por un rendimiento mejorado y, por tanto, pueden ser eficazmente utilizados como agentes terapéuticos para inhibir la formación de fibrillas amiloides.

Consecuentemente, en algunas realizaciones, un análogo de dipéptido como se describe en la presente memoria descriptiva se caracteriza por un rendimiento mejorado en comparación con D-Trp-Aib y los derivados previamente descritos del mismo.

En algunas realizaciones, un análogo de dipéptido como se describe en la presente memoria descriptiva se caracteriza por una actividad inhibidora de la formación de fibrillas amiloides que es mayor que una actividad inhibidora de D-Trp-Aib. En algunas realizaciones, una actividad inhibidora aumentada de los análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva se mide mediante la relación mínima de proteína amiloide-beta:inhibidor requerida para inhibir la formación de globulómeros de la proteína amiloide-beta. En algunas realizaciones, los análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva exhiben una inhibición sustancialmente completa de la formación de globulómeros de la proteína amiloide-beta a una relación en moles 1:20 de proteína amiloide-beta:inhibidor. Esta relación dos veces menor que la correspondiente relación mínima de proteína amiloide-beta:inhibidor requerida para inhibir la formación de globulómeros de la proteína amiloide-beta de D-Trp-Aib e indica una actividad inhibidora sustancialmente mejorada de los análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva.

En algunas realizaciones, los análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva exhiben una inhibición sustancialmente completa de la formación de globulómeros de la proteína amiloide-beta a una relación en moles 1:10 de proteína amiloide-beta:inhibidor. En algunas realizaciones, los análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva exhiben una inhibición sustancialmente completa de la formación de globulómeros de la proteína amiloide-beta a una relación en moles 1:1 de proteína amiloide-beta: inhibido e incluso a relaciones inferiores.

En algunas realizaciones, un análogo de dipéptido como se describe en la presente memoria descriptiva se caracteriza por una permeabilidad BBB que es mayor que la permeabilidad BBB de D-Trp-Aib. En algunas realizaciones, un análogo de dipéptido como se describe en la presente memoria descriptiva se caracteriza por una lipofilicidad que es mayor que la lipofilicidad de D-Trp-Aib.

En algunas realizaciones, un análogo de dipéptido como se describe en la presente memoria descriptiva se caracteriza por una semivida que es mayor que la semivida de D-Trp-Aib.

Conjuntamente, un análogo de dipéptido como se describe en la presente memoria descriptiva se caracteriza por un efecto terapéutico mejorado en comparación con el D-Trp-Aib previamente descrito y sus derivados de ésteres. Este efecto mejorado se puede poner de manifiesto por una cantidad reducida del análogo de dipéptido requerida para tratar un estado indicado, como se detalla con posterioridad, mediante un número reducido de administraciones del análogo de dipéptido, en comparación con D-Trp-Aib y/o con efectos secundarios reducidos.

Consecuentemente, cada uno de los análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva puede ser caracterizado independientemente como un inhibidor de la formación de fibrillas amiloides.

Según algunas realizaciones, cada uno de los análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva puede ser independientemente identificado para ser usado en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado a amiloides.

La presente invención por tanto proporciona un compuesto que comprende un resto de triptófano (Trp) acoplado a un resto interruptor beta-laminar, con la condición de que dicho esto Trp no es Trp o dicho resto interruptor beta-laminar no es ácido a-aminoisobutírico (Aib) ni un éster de ácido a-aminoisobutírico (Aib), estando representado el compuesto por una estructura química seleccionada entre el grupo que consiste en

para ser usado en la inhibición de la formación de fibrillas amiloides o en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado a amiloides en un sujeto.

Los sujetos individuales preferidos son mamíferos como caninos, felinos, ovino, porcinos, equinos, bovinos, seres humanos y similares.

Como se usan en toda la presente memoria descriptiva, las expresiones “inhibición (o prevención) de la formación de fibrillas amiloides”, “inhibición (o prevención) de la formación de placa amiloide”, “disgregación de fibrillas amiloides”, “inhibición (o prevención) de la globulomerización de amiloides-beta”, así como las variantes gramaticales y combinaciones de las mismas, se usan de forma intercambiable y se refieren generalmente a una interferencia con procedimientos biológicos que da lugar a una agregación de péptidos amiloides beta en forma de oligómeros y polímeros, formando así una placa amiloide. Por tanto, estas expresiones describen una actividad de los análogos de péptidos descritos que da lugar a una reducción o prevención de la formación de placa amiloide, o una disminución sustancial de la aparición de la placa en el tejido afectado.

La expresión “placa amiloide” se refiere a un amiloide fibrilar así como amiloide agregado pero no fibrilar, en lo que sigue “amiloide protofibrilar” , que puede ser también patógeno.

Se apreciará que cuando se utilizan para el tratamiento de enfermedades amiloides, los análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva son capaces de prevenir la formación de fibrillas, reducir la formación de fibrillas o disgregar los agregados formados mediante una desestabilización competitiva del agregado previamente formado. Alternativamente, los análogos de dipéptidos descritos pueden actuar mediante una auto-agregación y formación de complejos heteromoleculares que no están ordenados como estructuras homomoleculares formadas por fragmentos amiloides.

La expresión “enfermedad o trastorno asociado a amiloides”, como se usa en la presente memoria descriptiva, describe un estado médico con una patología que implica la formación de placa amiloide. Este estado médico puede implicar otras patologías, sin embargo, es tratable, al menos en alguna medida, reduciendo, previniendo o inhibiendo la formación de placa amiloide.

Ejemplos de enfermedades asociadas a amiloides tratables según realizaciones de la presente invención, incluyen, pero sin limitación, diabetes mellitus de tipo II, enfermedad de Alzheimer (AD), enfermedad de Alzheimer de aparición temprana, enfermedad de Alzheimer de aparición tardía, enfermedad de Alzheimer presintomática, enfermedad de Parkinson, amiloidosis SAA, síndrome Islandés hereditario, mieloma múltiple, carcinoma medular, amiloide médica aórtica, amiloidosis por inyección de insulina, amiloidosis sistémica priónica, amiloidosis con inflamación crónica, enfermedad de Huntington, amiloidosis sistémica senil, amiloidosis de glándulas pituitarias, amiloidosis renal hereditaria, demencia británica familiar, amiloidosis hereditaria finlandesa, amiloidosis no neuropática familiar [Gazit (2002) Curr. Med. Chem. 9:1667-1675], enfermedades y trastornos oculares relacionados con amiloides como glaucoma [Guo et al., PNAS (2007), 104(33), pp. 13444-13449] y degeneración macular relacionada con la edad (AMD) y enfermedades priónicas que incluyen tembladera de ovejas y cabras y encefalopatía espongiforme bovina (BSE) de ganado [Wilesmith and Wells (1991) Curr Top Microbiol Immunol 172: 21-38] y enfermedades priónicas humanas que incluyen (i) kuro, (ii) enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (CJD), (iii) enfermedad de Gerstmann-Streussler-Sheinker (GSS), y (iv) insomnio familiar fatal (FFI) [Gajdusek (1977) Science 197: 943-960; Medori, Tritschler et al. (1992) N Engl J Med 326: 444-449].

En cualquiera de los métodos y usos descritos en la presente memoria descriptiva, se proporciona una cantidad terapéuticamente eficaz, como se define en la presente memoria descriptiva del análogo del dipéptido al sujeto. El análogo del dipéptido puede ser proporcionado usando uno de una diversidad de métodos de suministro. Los métodos de suministro y las formulaciones adecuadas se describen con posterioridad con respecto a las composiciones farmacéuticas.

Las vías adecuadas de administración pueden incluir, por ejemplo, oral, sublingual, inhalación, rectal, transmucosal, transdermal, intracavesmosal, tópica, intestinal o parenteral, que incluyen inyecciones intramusculares, subcutánea e intramedular así como inyecciones intratecal, intraventricular directa, intravenosa, intraperitoneal, intranasal o intraocular.

Los análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva pueden ser proporcionados a un sujeto individual por sí mismo, o como parte de una composición farmacéutica en la que están mezclados con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, una “composición farmacéutica” se refiere a una preparación de uno o más ingredientes activos descritos en la presente memoria descriptiva con otros componentes químicos como vehículos y excipientes fisiológicamente aceptables. La finalidad de una composición farmacéutica es facilitar la administración de un compuesto a un organismo.

En la presente memoria descriptiva, “ingrediente activo” se refiere al análogo de dipéptido, que puede ser tenido en cuenta para el efecto biológico.

En lo que sigue, las expresiones “vehículo fisiológicamente aceptable” y “vehículo farmacéuticamente aceptable” que se pueden usar de forma intercambiable, se refieren a un vehículo o diluyente que no provoca una irritación significativa a un organismo y no anula la actividad y propiedades biológicas del compuesto administrado. En estas expresiones se incluye un adyuvante. Uno de los ingredientes incluido en el vehículo farmacéuticamente aceptable puede ser, por ejemplo, polietilenglicol (PEG), un polímero biocompatible con una amplia gama de solubilidad en medios tanto orgánicos como acuosos (Mutter et al. (1979).

En la presente memoria descriptiva, el término “excipiente” se refiere a una sustancia inerte añadida a una composición farmacéutica para facilitar adicionalmente la administración de un ingrediente activo. Ejemplo, sin limitación, de excipientes incluyen carbonato de calcio, fosfato de calcio, diversos azúcares y tipos de almidón, derivados de celulosa, gelatina, aceites vegetales y polietilenglicoles.

Las técnicas para la formulación y administración de los fármacos se pueden encontrar en la publicación “Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, PA, última edición.

Alternativamente, se puede administrar una preparación de una manera local en lugar de sistémica, por ejemplo, a través de una inyección de la preparación directamente a la zona específica del cuerpo de un paciente.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden fabricar mediante procedimientos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, mediante mezcla convencional, disolución, granulación, preparación de grajeas, preparación de polvos finos, emulsionamiento, encapsulación, inclusión o liofilización.

Las composiciones farmacéuticas para ser usadas de acuerdo con la presente invención pueden ser formuladas de una manera convencional usando uno o más vehículos fisiológicamente aceptables que comprenden excipientes y materias auxiliares que facilitan el tratamiento de los ingredientes activos en forma de preparaciones que pueden ser usadas para farmacéuticamente. La formulación apropiada dependerá de la vía de administración escogida.

Las formulaciones para una administración tópica incluyen, pero sin limitación, lociones, ungüentos, geles, cremas, supositorios, gotas, líquidos, pulverizaciones y polvos. Pueden ser necesario o deseables vehículos convencionales, acuosos, en polvo o bases aceitosar, espesantes y similares.

Las composiciones para una administración oral incluyen polvos o gránulos, suspensiones o soluciones en agua o medios no acuosos, bolsitas, cápsulas o comprimidos. Pueden ser deseables espesantes, diluyentes, sabores, adyuvantes de dispersión, emulsionantes o aglutinantes.

Las formulaciones para una administración parenteral pueden incluir, pero sin limitación soluciones esterilizadas que pueden contener también tamponantes, diluyentes u otros aditivos adecuados. Están previstas para el tratamiento composiciones de liberación lenta.

Las composiciones adecuadas para ser usadas en el contexto de las presentes realizaciones incluyen composiciones en las que los ingredientes activos están contenidos en una cantidad eficaz para conseguir la finalidad buscada. Más específicamente, una cantidad terapéuticamente eficaz significa una cantidad de los ingredientes activos eficaz para prevenir, aliviar o mejorar los síntomas de una enfermedad o prolongar la supervivencia del sujeto que está siendo tratado.

La determinación de una cantidad terapéuticamente eficaz está dentro de las capacidades de los expertos en la técnica.

Para cualquier preparación usada en los métodos de la invención, la cantidad terapéuticamente eficaz o dosis puede ser estimada inicialmente a partir de ensayos in vitro. Por ejemplo, una dosis puede ser formulada en modelos de animales y esta información puede ser usada para determinar más exactamente las dosis útiles en seres humanos.

La toxicidad y la eficacia terapéutica de los ingredientes activos descritos en la presente memoria descriptiva se pueden determinar mediante procedimientos farmacéuticos estándar in vitro, en cultivos celulares o animales experimentales. Los datos obtenidos a partir de estos análisis de cultivos in vitro y celulares y los estudios en animales pueden ser usados para formular una gama de dosificaciones para ser usadas en seres humanos. La dosificación puede variar dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. La formulación exacta, vía de administración y dosificación se pueden escoger por el facultativo individual considerando el estado del paciente. [Véase, por ejemplo, la publicación de Fingl, et al., (1975) "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Cap. 1 pág.1].

Dependiendo de la gravedad y la respuesta del estado que va a ser tratado, la dosificación puede ser de una o una pluralidad de administraciones, con un transcurso del tratamiento que dure desde varios días hasta varias semanas o hasta que se consiga la curación o se efectúe una disminución del estado de enfermedad.

La cantidad de una composición que va a ser administrada dependerá, naturalmente, del sujeto que está siendo tratado, la gravedad de la afección, la manera de administración, el criterio del facultativo encargado, etc.

Las composiciones que incluyen el análogo de dipéptido como se describe en la presente memoria descriptiva, formuladas en un vehículo farmacéutico compatible, pueden ser preparadas, colocadas en un recipiente apropiado y etiquetadas para el tratamiento de un estado indicado, como se describe en la presente memoria descriptiva.

Si se desea, las composiciones pueden ser presentadas en un envase o dispositivo de suministro, como un estuche de ensayo aprobado por la FDA (La institución U.S. Food and Drug Administration), que puede contener el ingrediente activo. El envase puede comprender, por ejemplo, una hoja metálica o de plástico como, pero sin limitación un encase de ampolla o un recipiente presurizado (para inhalación). El envase o dispositivo de suministro puede ir acompañado de instrucciones para la administración. El envase o dispositivo de suministro puede ir acompañado también de una indicación asociada al recipiente en una forma prescrita para una agencia estatal que regule la fabricación, uso o distribución de productos farmacéuticos, en que la indicación refleje la aprobación por la agencia de la forma de las composiciones para una administración a seres humanos o veterinaria. Esta indicación, por ejemplo, puede ser un etiquetado aprobado por la entidad U.S. Food and Drug Administration para las prescripción de fármacos o de una inserción de productos aprobados.

En algunas realizaciones, la composición farmacéutica está envasada en un material de envasado y está identificada de forma impresa, en o sobre el material de envasado, para ser usada en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado a amiloides, como se describe en la presente memoria descriptiva.

Se apreciará que el tratamiento de enfermedades asociadas a amiloides según la presente invención puede combinarse con otros métodos de tratamiento conocidos en la técnica (es decir, terapia de combinación). Por tanto, los compuestos según realizaciones de la presente invención pueden ser coadministrados (de forma simultánea o separada) con fármacos antiamiloides adicionales. Ejemplos de estos fármacos antiamiloides incluyen, pero sin limitación, anticuerpos desestabilizadores de amiloides, péptidos desestabilizadores de amiloides y moléculas pequeñas antiamiloides (se proporcionan detalles adicionales de estos fármacos en la sección de antecedentes anterior). Los compuestos según las realizaciones de la presente invención pueden ser conjuntamente administrados (de forma simultánea o separada) con fármacos adicionales para tratar una enfermedad o trastorno indicado.

También se describe un procedimiento para preparar análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva, que se efectúa acoplando un resto de triptófano y un resto rompedor beta-laminar.

En algunas realizaciones, el procedimiento se efectúa en presencia de un agente acoplador de péptidos. Están contemplados cualesquiera agentes acopladores adecuados para ser usados para acoplar aminoácidos.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende adicionalmente, antes del acoplamiento, proteger uno o más grupos funcionales en el resto de triptófano y el resto rompedor beta-laminar. Está contemplado cualquier grupo protector adecuado. Los grupos protectores adecuados se seleccionan normalmente para que sean adecuados para que el grupo funcional sea protegido y para ser fácilmente separados bajo condiciones que no afecten a otras funcionalidades del producto de dipéptido o cualquiera de sus intermedios.

En el caso de que se usen el resto de Trp y/o el grupo rompedor beta-laminar protegido, el procedimiento comprende adicionalmente, con posterioridad al acoplamiento, separar el (o los) grupo(s) protector(es). En el caso de que esté presente más de un grupo protector en el dipéptido acoplado, la separación de los grupos protectores se puede realizar de forma simultánea o secuencial, dependiendo de los grupos protectores usados.

La selección y la práctica del procedimiento descrito, con grupos protectores adecuados, puede ser bien reconocida por los expertos en la técnica.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende adicionalmente ya sea antes o después del acoplamiento, preparar el resto de triptófano y/o el resto rompedor beta-laminar del análogo de dipéptido.

Consecuentemente, en algunas realizaciones, el Trp es acoplado a un resto rompedor beta-laminar como se describe en la presente memoria descriptiva, para proporcionar así un análogo de dipéptido que comprende Trp como el resto de Trp y, posteriormente, el Trp en este análogo de dipéptido es derivado con el fin de producir un análogo de dipéptido con un resto de Trp, como se describe en la presente memoria descriptiva para análogos de dipéptidos que comprenden un resto de Trp diferente de Trp.

En algunas realizaciones, un resto de Trp, como se describe en la presente memoria descriptiva, ya modificado como se describe en la presente memoria descriptiva se prepara en primer lugar y seguidamente se acopla al rompedor beta-laminar.

Análogamente, en algunas realizaciones, el Aib es acoplado a un resto de Trp, para proporcionar así un análogo de dipeptido con Aib como el resto rompedor beta-laminar y, posteriormente el Aib en este análogo de dipéptido es derivado con el fin de producir un análogo de dipéptido con un resto rompedor beta-laminar, como se describe en la presente memoria descriptiva para análogos de dipéptidos que comprenden un resto rompedor beta-laminar diferente de Aib o un éster del mismo.

Un ejemplo de procedimiento general para preparar los análogos de dipéptidos descritos se presenta en la sección de ejemplos que sigue.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, el término “aproximadamente” se refiere a ± 10 %.

Los términos y expresiones “comprende”, “que comprende”, “ incluye”, “que incluye”, “que tiene” y sus conjugados significan “que incluyen pero no están limitados a”.

La expresión “que consiste en” significa “que incluyen y está limitado a”.

La expresión “que consiste esencialmente en” significa que la composición, método o estructura puede incluir ingredientes, etapas y/o partes adicionales, pero solamente si los ingredientes, etapas y/o partes adicionales no alteran materialmente las características básicas y novedosas de la composición, método o estructura reivindicados.

La expresión “ejemplo de” se usa en la presente memoria descriptiva, para indicar “que sirve como un ejemplo, caso o ilustración”. Cualquier realización descrita como “ejemplo de” no está necesariamente concebida como preferida o ventajosa sobre otras realizaciones y/o para excluir la incorporación de características de otras realizaciones.

El término “opcionalmente” se usa en la presente memoria descriptiva para indicar “se proporciona en algunas realizaciones y no se proporciona en otras realizaciones”. Una realización particular de la invención puede incluir una pluralidad de características “opcionales” salvo que estas características estén en conflicto.

Como se usan en la presente memoria descriptiva, la forma singular de los artículos “uno”, “una”, “el”, “la” incluyen las referencias en plural salvo que el contexto dicte claramente otra cosa. Por ejemplo, la expresión “un compuesto” o “al menos un compuesto” puede incluir una pluralidad de compuestos, que incluye sus mezclas.

En toda esta memoria descriptiva, se pueden presentar diversas realizaciones de la invención en un formato de intervalos. Debe entenderse que la descripción en el formato de intervalos es meramente por motivos de conveniencia y brevedad y no debe ser interpretada como una limitación inflexible del alcance de la invención. Consecuentemente, la descripción de un intervalo se debe considerar que tiene específicamente descritos todos los posibles subintervalos, así como los valores numéricos individuales en ese intervalo. Por ejemplo, a descripción de un intervalo como de 1 a 6, se debe considerar que tiene específicamente descrita subintervalos como de 1 a 3, de 1 a 5, de 2 a 4, de 2 a 6, de 3 a 6, etc., así como números individuales en ese intervalo, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5 y 6. Esto se aplica independientemente de la amplitud del intervalo.

Siempre que se indique un intervalo numérico en la presente memoria descriptiva, está previsto que incluya cualquier valor numérico citado (fraccional o entero) en el intervalo indicado. Las expresiones “que varía /varía entre” un primer número indicado y un segundo número indicado y “que varía/varía desde” un primer número indicado “hasta” un segundo número indicado se usan en la presente memoria descriptiva de forma intercambiable y está previsto que incluyan el primer y segundo números indicados y todos los números fraccionarios y enteros entre ellos.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, el término “método” se refiere a maneras, medios, técnicas y procedimientos para llevar a cabo una tarea dada que incluyen, pero sin limitación, las maneras, medios, técnicas y procedimientos conocidos o ya desarrollados a partir de maneras, medios, técnicas y procedimientos conocidos por los usuarios de las técnicas químicas, farmacológicas, biológicas, bioquímicas y médicas.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, el término “tratar” incluye suprimir, inhibir sustancialmente, ralentizar o invertir el progreso de un estado, mejorando sustancialmente los síntomas clínicos o estéticos de un estado o previniendo sustancialmente la aparición de síntomas clínicos o estéticos de un estado.

Diversas realizaciones y aspectos de la presente invención, como se delinean con anterioridad y se reivindican y en la sección de reivindicaciones posterior, encuentran un apoyo experimental en los siguientes ejemplos.

Ejemplos

Se hace referencia seguidamente a los siguientes ejemplos, que junto con las descripciones anteriores ilustran algunas realizaciones de la invención.

Ejemplo 1

Síntesis químicas

Materiales y métodos:

Los reactivos químicos fueron adquiridos de la entidad Sigma-Aldrich, salvo que se indique otra cosa.

Los disolventes fueron adquiridos de la entidad Bio-Lab, salvo que se indique otra cosa.

Las mediciones de RMN se realizaron en un dispositivo Bruker Avance-200 MHz NMR, usando SiMe4 como patrón.

Se realizaron mediciones de espectroscopías de masas de tipo Electrospray (ESI-MS) se realizaron en un espectrómetro de masas Waters Micromass SYNAPT HDMS Mass spectrometer.

Procedimiento general:

Los compuestos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva se prepararon usando un pocedimiento estándar para acoplar dos aminoácidos como sigue:

D-Trp o un análogo del mismo (por ejemplo, D/L-a-metil-Trp) es acoplado a un resto rompedor beta-laminar derivado del aminoácido no natural ácido 2-amino-isobutírico (Aib).

Protección de la función carboxílica: los aminoácidos se protegen en su función carboxílica a través de una éster metílico o terc-butílico usando cloruro de tionilo como reactivo y metanol, etanol o terc-butanol como disolvente, basándose en el procedimiento descrito en la publicación Bioorganic & Medicinal Chemistry 15(14):4903-9, 2007, con los siguientes cambios: el cloruro de tionilo no se destiló antes de la reacción y el producto intermedio no se purifica través de recristalización sino que en lugar de ello se usó una columna de gel de sílice 60, con acetato de etilo en hexano como eluyente. Los productos intermedios se verifican mediante 1H-RMN de 200 MHz usando CDCb como disolvente.

Protección con N-Boc: la protección con N-Boc del resto de triptófano (por ejemplo, éster D-Trp-metílico o éster D/L-alfa-metil-Trp-metílico) se realiza según el procedimiento descrito en la publicación J. Org. Chem. 71 ,7106 9, 2006. El producto intermedio se purifica usando una columna de gel de sílice 60 usando acetato de etilo al 20-50% en hexano como eluyente. El producto se verifica mediante 1H-RMN de 200 MHz usando CDCb como disolvente.

Desesterificación de aminoácido protegido con Boc: la desesterificación del resto de Trp protegido con Boc por ejemplo, éster D-Trp-metílico o éster D/L-alfa-metil-Trp-metílico) se lleva a cabo usando hidróxido de litio como sigue: El aminoácido protegido se disuelve en dos volúmenes de metanol y se enfría en un baño con hielo. Se disuelven tres equivalentes de hidróxido de litio en un volumen de agua y se añaden a la solución y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante un período de tiempo que varía en el intervalo de dos horas a una noche, mientras se realiza un seguimiento mediante TLC. El producto obtenido se purifica usando una columna de gel de sílice 60 usando ácido acético al 1% en acetato de etilo como eluyente. El producto se verifica a través 1H-RMN de 200 MHz usando CDCI3 como disolvente.

Acoplamiento: El acoplamiento del resto de Trp protegido con Boc (por ejemplo, éster D-Trp o D/L-alfa-metil-^{Trp-metílico) se realiza usando HBTU como reactivo de acoplamiento,}DieA ^{como catalizador y DMF como}disolvente, según el procedimiento descrito en la publicación J. Med. Chem. 48 (22), 6908-6917, 2005. El acoplamiento se puede efectuar también usando otros agentes acoplantes. El producto se purifica a través de una columna de gel de sílice usando acetato de etilo al 20%-50% en hexano como eluyente. La estructura del producto se verifica mediante 1H-RMN de 200 MHz usando CDCb o DMSO-d6 como disolvente.

Desprotección de Boc: La desprotección de Boc se lleva a cabo usando TFA al 50% en cloruro de metileno durante 6 minutos, seguido de evaporación bajo presión reducida. Con el fin de separar los restos de TFA, se realiza una adición de benceno y una evaporación bajo presión reducida, respectivamente, 2-3 veces. Posteriormente se añade agua y el pH de la solución se neutraliza. El agua se separa seguidamente mediante evaporación bajo presión reducida seguida de liofilización durante una noche. El producto se verifica mediante 1H-RMN de 200 MHz usando d6-DMSO como disolvente.

Se realiza seguidamente una desesterificación adicional opcional, si se desea, usando el procedimiento descrito con anterioridad. El producto final se purifica en una columna de gel de sílice, usando ácido acético al 1% en etanol como eluyente. El producto se verifica mediante 1H-RMN a 200 MHz usando d6-DMSO como disolvente.

Un ejemplo de esquema sintético, que expone la síntesis de H2N-Trp-Aib-OMe, para fines ilustrativos, se presenta en la figura 4.

Usando el procedimiento general descrito con anterioridad, se sintetizaron los siguientes ejemplos de compuestos de dipéptidos, como sigue:

Preparación de H2N-Trp-Aib-OtBu ((R)-(2-(2-amino-3-(1H-indol-3-il)propanamido)-2-metilpropanoato de tercbutilo; compuesto 1):

El compuesto 1 se preparó acoplando D-Trp y Aib-OtBu como se describió con anterioridad.

1H-RMN (200 MHz; DMSO-d6): 6 = 1,22 (s ancho, 9H, -(CH3)3) 1,58 (s ancho, 6H, (CH3)2), 3,09-3,45 (m, 1H, CH & 2H, CH2), 7,01-7,14 (m, 3H, Ar-CH), 7,37 (d, 1H, Ar-CH), 7,71 (d, 1H, Ar-CH), 8,07 (s ancho, 2H, amido-NH), 10,97 (s ancho, 1H, indol-NH).

MS (ESI): m/z = 344,2 (M+-H+), 10%.

Preparación de (D/L)-H2N-a-Me-Trp-Aib-OMe (2-(2-amino-3-(1H-indol-3-il)-2-metilpropanamido)-2-metilpropanoato de metilo; compuesto 2):

El compuesto 2 se preparó acoplando L/D-a-Me-Trp (mezcla racémica) y Aib-OMe como se describió con anterioridad.

1H-RMN (200 MHz; DMSO-d6): 6 = 1,381,48 (m, 9H, CHa&CHâ ), 3,05-3,39 (m, 2H, CH2), 3,66 (s, 3H, CH3), 3,85 (m, 1H, CH), 7,08-7,77 (m, 5H, Ar-CH), 11,13 (s ancho, 1H, indol-NH);

MS (ESI): m/z = 337,2 (M++Li+) 100%.

Preparación de (D/L)-H2N-a-Me-Trp-ciclopentano-OMe (1-(2-amino-3-(1H-indol-3-il)-2-metilpropanamido)ciclopentanocarboxilato de metilo; compuesto 3):

El compuesto 3 se preparó acoplando L/D-a-Me-Trp y metil 1-aminociclopentanocarboxilato como se describió con anterioridad.

1H-RMN (200 MHz; CDCls): 6 = 0,83-1,79 (m, 11H, CH3& 4 CH2), 3,18-3,58 (m, 2H, CH2), 3,89 (s, 3H, CH3), 4,3 (s ancho, 2H, NH2), 6,91-7,57 (m, 5H, Ar-CH), 7,67 (s ancho, 1H, amido-NH);

MS (ESI): m/z = 345,0 (M++2H+) 10%.

Preparación de ácido H2N-Trp-ciclopentano-OH ((R)-1-(2-amino-3-(1H-indol-3-il)propanamido)ciclopentanocarboxílico; compuesto 4):

El compuesto 4 se preparó acoplando D-Trp y ácido 1-aminociclopentanocarboxílico como se describió con anterioridad.

1H-RMN (200 MHz; CDCls): 5 = 1,51-1,58 (m, 4H, CH2), 1,90-2,25 (m, 4H, 2 CH2), 3,39-3,6 (m, 2H, CH2), 4,12 (m 1H, CH), 7,24-7,75 (m, 5H, Ar-CH), 8,1 (s ancho, 1H, amido-NH);

MS (ESI): m/z = 346,2 (M+NaCl) 100%.

Preparación de ácido H2N-Trp-ciclopropano-OH ((R)- (1-(2-amino-3-(1H-indol-3-il)propanamido)ciclopropanocarboxílico; compuesto 5):

El compuesto 5 se preparó acoplando D-Trp y ácido 1-aminociclopropanocarboxílico como se describió con anterioridad.

1H-RMN (200 MHz; DMSO-d6): 5 = 1,33-1,90 (m, 4H, CH2), 3,25-3,62 (m, 2H, CH2), 4,22 (m, 1H, CH), 7,07 8,17 (m, 6H, Ar-CH&1H, amida NH);

MS (ESI): m/z = 346,2 (M++NaCl) 100%.

Preparación de H2N-Trp-ciclopropano-OEt ((1-(2-amino-3-(1H-indol-3-il)propanamido)ciclopropanocarboxilato de etilo); compuesto 6):

El compuesto 6 se preparó acoplando D-Trp y 1-aminociclopropanocarboxilato de etilo como se describió con anterioridad.

1H-RMN (200 MHz; CDCls): 5 = 1,15-1,52 (m, 7H, 2 CH2 & Et-CHa), 2,96-3,52 (m, 2H, CH2), 4,24 (q, 2H), 4,56 4,66 (m, 1H, CH), 6,96-7,59 (m, 5H, Ar-CH), 7,72-8, 0 (s ancho, 1H, amida NH);

MS, ESI, MS (ESI): m/z = 351,1 (M++K+) 100%.

Preparación de ácido H2N-Trp-ciclohexano-OH (1-(2-amino-3-(1H-indol-3-il)propanamido)ciclohexanocarboxílico; compuesto 7):

El compuesto 7 se preparó acoplando D-Trp y ácido 1-aminociclohexanocarboxílico como se describió con anterioridad.

1H-RMN (200 MHz; CDCls): 5 = 0,76-0,92 (m, 6H, 3 CH2), 1,29 -1,56 (m, 4H, 2 CH2), 3,03-3,55 (m, 2H, CH2), 3,89 (m, 1H, CH), 7,02-7,62 (5H, Ar-CH), 7,88 (s ancho, 1H, amida NH);

MS (ESI): m/z = 346,2 (M++H2O) 100%.

Preparación de H2N-Trp-ciclohexano-OEt ((1-(2-amino-3-(1H-indol-3-il)propanamido)ciclohexanocarboxilato de etilo; compuesto 8):

El compuesto 8 se preparó acoplando D-Trp y 1-aminociclohexanocarboxilato de etilo como se describió con anterioridad.

¹H-RMN (200 MHz; DMSO-da): 5 = 0,90-2,01 (m, 13H, Et-CH³&5CH²), 3,04-3,43 (m, 2H, CH2), 4,01 (q, 2H), 6,99-8,10 (m, 5H, Ar-CH), 10,94 (s ancho, 1H, indol-NH);

MS (ESI): m/z = 413,3 (M++NaCl) 100%.

Preparación de H2N-Trp-a-Me-Prolina-OMe (1-(2-amino-3-(1 H-indol-3-il)propanoil)-2-metilpirrolidina-2-carboxilato de metilo; compuesto 9):

El compuesto 9 se preparó acoplando D-Trp y a-Me-Prolina-OMe como se describió con anterioridad.

¹H-RMN (200 MHz; CDCb): 5 = 1,27-1,70 (m, 7H, CH3&2 CH2), 3,22 (m, 3H, CH2), 3,51-3,81 (m, 2H, CH2), 4,7 (m, 1H, CH), 7,23-7,70 (m, 5H, Ar-CH);

MS (ESI): m/z = 395,1 (M++2Na+&+Cl-) 100%.

Preparación H2N-Trp-oxetano-OH (ácido (R)-3-(2-amino-3-(1H-indol-3-il)propanamido)oxetano-3-carboxílico; compuesto 10):

El compuesto 10 se preparó acoplando D-Trp y 1-aminooxetanocarboxílico acid como se describió con anterioridad.

Preparación de H2N-Trp-oxetano-NH2 ((R)-3-(2-amino-3-(1 H-indol-3-il)propanamido)oxetano-3-carboxamida; compuesto 11):

El compuesto 11 se preparó acoplando D-Trp y 1-aminooxetanocarboxamida como se describió con anterioridad.

Las estructuras químicas de los conjugados se presentan en la Tabla 1 siguiente.

Tabla 1

Debe apreciarse que, aunque en la Tabla 1 las estructuras químicas se presentan para restos de D-Trp, están contemplados también conjugados que comprenden un correspondiente resto de L-Trp.

Usando el procedimiento general anteriormente descrito, se prepararon los compuestos que comprenden un resto de Trp como se expone en la Tabla 2: 5

Tabla 2

Cada uno de los restos de Trp expuestos en la Tabla 2 está acoplado a uno de los restos rompedores betalaminares expuestos en la Tabla 3 siguiente.

Tabla 3

Usando adicionalmente el procedimiento general descrito con anterioridad en la presente memoria descriptiva, se prepararon los siguientes compuestos como sigue:

Preparación de compuesto A (Fig. 3):

El compuesto A se preparó como se expone en el esquema 1 siguiente.

E s q u e m a 1

Preparación de compuesto A2: A una solución agitada de A (5,10 gramos, 16,7 mmol) y sal de HCl de fenilmetil-2-amino-2-metilpropanoato (3,60 gramos, 18,4 mmol) en Dm F (100 ml) se añadió Ho BT (3,40 gramos, 5,1 mmol), DIEA (8,9 ml, 50,1 mmol y EDCI (4,50 gramos, 25,1 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 16 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, la mezcla se vertió en hielo/agua (100 ml) y se extrajo con EtOAc (100 ml x 2). La fase orgánica se lavó con solución acuosa de HCl 1 N (80 ml x 2 ), solución saturada de NaHCO3 (80 ml x 2), salmuera (80 ml) y agua sobre Na2SO4. Seguidamente, el disolvente de EtOAc se separó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice (Pe/EtOAc= 2:1) para suministrar el compuesto A2 (6,00 gramos, 75%) en forma de un sólido blanco.

Preparación de compuesto A3: La solución de compuesto A2 (6,00 gramos, 12,4 mmol) en Et2O/HCl (30 ml, 2,5 M) se agitó durante dos horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2. La mezcla de reacción se concentró, seguidamente se añadió NaHCO3 (sat.) para llevar el pH a 7 y seguidamente se extrajo con DCM (80 ml) y se lavó con salmuera (80 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró a vacío para proporcionar el compuesto A3 (4,50 gramos, 96%) en forma de un sólido blanco.

1HRMN (400 MHz, DMSO-d6): ó = 1,50 (s, 6H), 2,86-2,91 (m, 1H), 3,35-3,40 (m, 1H), 3,67-3,71 (m, 1H), 5,21 (s, 2H), 7,56 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,12-7,25 (m, 2H), 7,33-7,41 (m, 5H), 7,66 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H), 8,39 (ancha, 1H).

Preparación de compuesto A4: A una solución agitada de compuesto A3 (731 mg, 1,73 mmol) en THF (20 ml) se añadió Ac2O (4,0 ml). Después de agitar durante dos horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, la mezcla de reacción se concentró a vacío. A este residuo se añadió DCM (30 ml) y se lavó con NhHCO3 saturado (30 ml x 2) y salmuera (30 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró a vacío para proporcionar el compuesto A4 (780 mg, 96%) en forma de un sólido blanco.

1HRMN (400 MHz, DMSO-d6): ó = 1,39 (s, 6H), 1,94 (s, 3H), 3,05-3,11 (m, 1H), 3,27-3,32 (m, 1H), 4,73-4,76 (m, 1H), 5,09-5,18 (m, 2H), 6,32 (s, 1H), 6,40 (d, J = 7,6 Hz,1H), 7,02 (d, J = 2,0 Hz,1H),7,13-7,24 (m, 2H), 7,32-7,40 (m, 6H), 7,65 (d, J = 8,0 Hz,1H), 8,24 (s, 1H).

Preparación de compuesto A: A una solución agitada de compuesto A4 (780 mg, 1,85 mmol) en THF (10 ml) se añadió 10% de Pd/C (330 mg) y se agitó durante dos horas bajo H2(1 atm) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró, el filtrado se concentró para proporcionar compuesto A (321 mg, 52%) en forma de un sólido blanco.1

1HRMN (400 MHz, DMSO-d6): ó = 1,21 (s, 3H), 1,26 (s, 3H),1,71 (s, 3H), 2,83-2,89 (m, 1H), 3,04-3,09 (m, 1H), 4,54-4,60 (m, 1H),6,96-7,08 (m,2H), 7,13 (d, J = 13,2 Hz,1H), 7,32 (d, J = 8,0 Hz,1H), 7,62 (d, J = 7,6Hz,1H), 8,00 (d, J = 8,4 Hz,1H), 8,17 (d, J = 10,0 Hz,1H),10,80 (s, 1H), 12,22 (s, 1H).

LC-MS (fase móvil: desde 90% de agua y 10% de H3CN hasta 5% de agua y 95% de CH3CN en seis minutos, finalmente bajo estas condiciones durante 0,5 minutos): La pureza es de 97,9%, tiempo de retención= 2,336 minutos.

MS: Calc.: 331,1; encontrado: 330,0 (M-H)-.

Preparación de compuesto C (Fig. 3):

La síntesis de compuesto C se expone en el esquema 2 siguiente.

Esquema 2

Preparación de compuesto C’: Una mezcla de HCOOH (1,5 ml, 30,4 mmol) y Ac2O (2,2 ml, 24,0 mmol) se agitó durante 2 horas a 60°C y seguidamente se enfrió a temperatura ambiente. A esta mezcla de reacción Se añadió una solución de compuesto A3 (2,88 gramos, 7,60 mmol, descrita con anterioridad) en THF (20 ml). La mezcla se agitó durante dos horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, se concentró a vacío y el residuo se diluyó con DCM (10 ml), seguidamente se lavó con NaHCO3 saturado (100 ml x 2) y salmuera (100 ml) y se secó sobre Na2SO4. La fase orgánica se concentró a vacío para proporcionar el compuesto C’ (780 mg, 96%) en forma de un sólido blanco.

1HRMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 = 1,39 (s, 6H), 3,05-3,11 (m, 1H), 3,32-3,37 (m, 1H), 4,78-4,80 (m, 1H), 5,10 5,19 (m, 2H), 6,09 (s, 1H), 6,40 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 1,5 Hz, 1H),7,16-7,27 (m, 3H), 7,34-7,42 (m, 5H), 8,06 (s ancho, 1H), 8,16 (s, 1H).

Preparación de compuesto C: Una mezcla de compuesto C’ (350 mg, 0,86 mmol) y Pd/C (10%, 250 mg) en THF (10 ml) se agitó durante 2 horas bajo H2 (1 atm) a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2. La mezcla de reacción se filtró, el filtrado se concentró a vacío para proporcionar el compuesto C 200 mg, 73%) en forma de un sólido blanco.

1HRMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 = 1,35 (s, 3H), 1,1,38 (s, 3H), 2,86-2,92 (m, 1H), 3,07-3,12 (m, 1H), 4,64-4,70 (m, 1H), 6,96-7,08 (m, 2H), 7,14 (s, 1H), 7,32 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,92 (m, 1H), 8,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H), 10,83 (s, 1H), 12,26 (s, 1H).

LC-MS (fase móvil: desde 95% de agua y 5% de CH3CN hasta 5% de agua y 95% de CH3CN en 6 minutos, finalmente bajo estas condiciones durante 0,5 minutos): la pureza es de 98,6%, tiempo de retención = 2,309 minutos.

MS: calc.: 317,1; encontrado: 316,0 (M-H)-.

Preparación de compuesto B (Fig. 3):

La síntesis del compuesto B se expone en el esquema 3 siguiente.

E s q u e m a 3

Preparación de compuesto B1: A una solución agitada de compuesto C’ (780 mg, 1,85 mmol, descrito con anterioridad) en THF anhidro (20 ml) se añadió BH3. SMe2 (1,6 ml, 16 mmol, 10 M en THF) a 0°C. Después de agitar durante 3 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, la mezcla de reacción se inactivó con HCl (conc.) a 0° C, seguidamente se añadió NhHCÜ3 (sat.) para llevar el pH a 8 y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (40 ml), se secó sobre Na2SÜ4 y se purificó mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice (EtOAc) para proporcionar el compuesto B1 (400 mg, 17%) en forma de un sólido blanco.

Preparación de compuesto B2: A una solución agitada de compuesto B1 (400 mg, 1,0 mmol) en THF (20 ml) se añadió Ac2Ü (2 ml) a temperatura ambiente. Después de agitar durante dos horas bajo atmósfera de N2, la mezcla de reacción se diluyó con DCM (30 ml), se lavó con NaHCÜ3 saturado (30 ml x 2) y salmuera (30 ml) y la fase orgánica se secó sobre Na2SÜ4, se concentró a vacío y se purificó mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice (PE/EtÜAc = 1:1-1:4) para proporcionar el compuesto B2 (300 mg, 68%) en forma de un sólido blanco.

1HRMN (400 MHz, DMSÜ-d6): 5 = 1,39 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 2,81 (s, 3H), 3,08-3,14 (m, 1H), 3,31 3,36 (m, 1H), 5,21 (s, 2H), 5,40-5,44 (m,1H), 6,71 (s, 1H), 6,97 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,12-7,23 (m, 2H), 7,34-7,41 (m, 6H), 7,58-7,64 (m, 1H), 8,1 (s, 1H).

Preparación de compuesto B: A una solución agitada de compuesto B2 (300 mg, 0,690 mmol) en THF (10 ml) se añadió 10% de Pd/C (200 mg) y la mezcla se agitó durante 2 horas bajo H2 (1 atm) a temperatura ambiente y seguidamente se filtró. El filtrado se concentró a vacío para proporcionar el compuesto B (200 mg, 84%) en forma de un sólido blanco.

1HRMN (400 MHz, DMSÜ-d6): 5 = 1,31-1,39 (m, 6H), 1,65 (s ,1,5H), 1,92 (s 1,5H), 2,78 (s, 1,5H), 2,91 (s, 1,5H), 2,96-3,06 (m, 1H), 3,17-3,21 (m, 1H), 4,55-4,57 (m, 0,5H), 5,31-5,34 (m, 0,5H), 6,98-7,12 (m, 3H), 7,31-7,36 (m, 1H), 6,61-7,66 (m, 1H), 8,05 (s, 0,5H), 8,33 (s, 0,5H), 10,79 (s, 0,5H), 10,89 (s, 0,5H), 12,24 (s, 1H).

LC-MS (fase móvil: desde 95% de agua y 5% de CH3CN hasta 5% de agua y 95% de H3CN en 6 minutos, finalmente bajo estas condiciones durante 0,5 minutos): la pureza es de 97,2%, tiempo de retención = 2,415 minutos.

MS: calc.: 345,1; encontrado: 346,1 (M H)+.

Preparación de compuestos U y T (Fig. 3):

La 'reparación de los compuestos U y T se expone en el esquema 4 siguiente.

E s q u e m a 4

Preparación de compuesto U9: A una solución agitada de compuesto U8 (5,00 gramos, 34,5 mmol) en DCM (50 ml) se añadió DMAP (2,10 gramos, 17,3 mmol) y DIEA (9,0 ml, 51,7 mmol) y Boc2O (11,3 gramos, 51,7 mmol). La mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, se lavó con HCl 1 N (100 ml x 2), solución saturada de NaHCO3 (100 ml x 2) y salmuera (80 ml), la fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se concentró y se purificó mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice (PE/EtOAc = 30:1-10:1-4:1) para proporcionar el compuesto U9 (8,10 gramos, 96%) en forma de un sólido blanco.

1HRMN (400 MHz, CDCla): ó = 1,74 (s, 9H), 7,40-7,45 (m, 2H), 8,17-8,19 (m, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,31-8,33 (m, 1H), 10,13 (s, 1H).

Preparación de compuesto U11: A una solución agitada de compuesto U10 (1,60 gramas, 5,39 mmol) en DCM (15 ml) se añadió d Bu (753 mg, 4,95 mmol). La mezcla se agitó durante 10 minutos a temperatura ambiente, seguidamente se añadió una solución de compuesto U9 (1,10 gramos, 4,49 mmol, en 10 ml de DCM) gota a gota. Después de agitar durante 3 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, la mezcla de reacción se lavó con ácido cítrico al 5% (20 ml x 2) y salmuera (80 ml), la fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se concentró y se purificó mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice (PE/EtOAc =25:1-4:1) para proporcionar el compuesto U11 (1,70 gramos, 89%) en forma de un sólido amarillo.

1HRMN (400 MHz, CDCls): ó = 1,48 (s, 9H), 1,71 (s, 9H), 3,90 (s, 3H), 6,24 (ancha, s, 1H), 7,29-7,40 (m, 2H), 7,62 (s, 1H), 7,74 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,97 (s, 1H), 8,18 (d, J = 8,0 Hz, 1H).

Preparación de compuesto U12: A una solución agitada de compuesto U11 1,70 gramos, 4,10 mmol) en THF/MeOH 1:1, 20 ml) se añadió una solución de KOH (1,80 gramos, 32,0 mmol en 10 ml de H2O). Después de agitar durante 2 horas a 60°C bajo atmósfera de N2, se añadió HCl (conc.) a la mezcla para llevar el pH = 3,4 bajo enfriamiento con hielo, se diluyó con H2O (80 ml), se extrajo con EtOAc (100 ml x 2), la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (80 ml x 2), se secó sobre Na2SO4 y se concentró a vacío para proporcionar el compuesto U12 (900 mg, 75%) en forma de un sólido amarillo.

1HRMN (400 MHz, DMSO-d6): ó = 1,38 (ancha, 9H), 7,11-7,21 (m, 2H), 7,42 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,64 (s ancho, 1H), 7,74 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H), 8,27 (ancha, 1H), 11,71 (ancha, 1H), 12,24 (ancha, 1H).

Preparación de compuesto U13: A una solución agitada de compuesto U12 (660 mg, 2,19 mmol) y 2-amino-2-metilpropanoato de metilo (HCl) en DMF (20 ml) se añadió HATU (1,70 gramos, 4,40 mmol) y DIEA (1,2 ml, 6,60 mmol) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, seguidamente se vertió en hielo/agua (50 ml), se extrajo con EtOAc (50 ml x 2) y la fase orgánica combinada se lavó con HCl 1 N (80 ml x 2), NaHCO3 saturado (50 ml x 2) y salmuera (50 ml), se secó sobre Na2CO4, el disolvente se concentró a vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice (PE/EtOAc = 2:1) para proporcionar el compuesto U13 (450 mg, 51%) en forma de un sólido amarillo.

1HRMN (400 MHz, DMSO-d6): ó = 1,47 (s, 6H), 1,67 (s, 9H), 3,82 (s, 3H), 6,94 (s, 1H), 7,21-7,30 (m, 3H), 7,43 7,45 (m, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,76-7,80 (m, 2H), 8,84 (s, 1H).

Preparación de compuesto U: A una solución agitada de compuesto U13 (250 mg, 0,63 mmol) en THF/MeOH (1:1, 20 ml) se añadió una solución de LiOH (120 mg, 2,7 mmol, en 3 ml de H2O) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a 60°C bajo atmósfera de N2, seguidamente se añadió HCl (concentrado) para lleva el pH a 3 bajo agua enfriada con hielo. La mezcla seguidamente se diluyó con 30 ml de H2O y se extrajo con EtOAc (50 ml x 2), la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml x 2), se secó sobre Na2SO4 y se concentró a vacío para proporcionar el compuesto U (200 mg, 83%) en forma de un sólido rojo.

1HRMN (400 MHz, DMSO-d6): ó = 1 ,40 (s , 6H), 1,48 (s, 9H), 7,11-7,13 (m, 2H), 7,43-7,45 (m, 2H), 7,69-7,75 (m, 4H), 8,6 (s, 1H), 11,64 (s, 1H).

13C RMN (100 MHz, MeOH-d4):ó = 13,11, 19,52, 23,48, 23,73, 27,08, 27,29, 56,18, 60,19, 80,29, 109,74, 111,31, 111,43, 117,92, 120,11, 120,23, 122,18, 122,76, 124,54, 126,08, 126,63, 127,48, 135,98, 166,54, 171,66, 176,82.

LCMS (fase móvil: desde 95% de agua y 5% de CH3CN hasta 5% de agua y 95% de CH3CN en 6 minutos, finalmente bajo estas condiciones durante 0,5 minutos): la pureza es de 97,5%, tiempo de retención = 3,415 minutos.

MS: calc.: 387,1; encontrado: 388,1 (M+H)+.

Preparación de compuesto T: A una solución agitada de compuesto U (150 mg, 0,39 mmol) y NH4Cl (70,0 mg, 1,30 mmol) en DMF (10 ml) se añadió HATU (240 mg, 0,630 mmol) y DIEA (0,5 ml, 2,80 mmol). Después de agitar durante 16 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, la mezcla de reacción se vertió en agua con hielo (30 ml) y se extrajo con EtOAc (50 ml x 2). La fase orgánica combinada se lavó con HCl 1 N (50 ml x 2), NaHCO3 saturado (50 ml x 2) y salmuera (50 ml) y se secó sobre Na2SO4, se concentró a vacío y se purificó mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice (PE/EtOAc = 2:1) para proporcionar compuesto T (120 mg, 80%) en forma de un sólido amarillo.

1HRMN (400 MHz, DMSO-d6): ó = 1,30-1,51 (m, 15H), 7,10-7,20 (m, 4H), 7,41-7,46 (m, 2H), 7,70-7,73 (m, 2H), 7,87 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 11,60 (s, 1H).

13C RMN (100 MHz, MeOH-d4): ó = 24,42, 27,33, 56,69, 80,46, 111,29, 117,97, 120,03, 122,16, 123,41, 126,41, 136,03, 155,51, 166,70.

LCMS (fase móvil: desde 95% de agua y 5% de CH3CN hasta 5% de agua y 95% de CH3CN en 6 minutos, finalmente bajo estas condiciones durante 0,5 minutos): la pureza es de 97,3%, tiempo de retención = 2,782 minutos.

MS: calc.: 386,2; encontrado: 387,1 (M+H)+.

Preparación de compuestos Q y W (Fig. 3):

Los compuestos U y W se prepararon como se expone en el esquema 5 siguiente.

E s q u e m a 5

Preparación de compuesto 12 (Esquema 5):

El compuesto 18 se preparó como se expone en el Esquema 6 siguiente.

Esquema 6

Preparación de compuesto 15: Una solución de compuesto 14 (10,0 gramos, 97,0 mmol) en dioxano (150 ml) y NaOH (5%, 150 ml) se enfrió a 0° C, seguidamente se añadió gota a gota Boc2Ü. La mezcla se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, seguidamente se añadió HCl (concentrado) para llevar el pH a 3 y la mezcla se extrajo con EtOAc (100 ml x 3), se lavó con salmuera, 50 ml), se secó sobre Na2SÜ4, se concentró a vacío y se purificó sobre una columna de gel de sílice (PE/EtOAc = 5:1) para proporcionar el producto en forma de un sólido blanco (12,1 gramos, 61% de rendimiento).

Preparación de compuesto 16: A una mezcla agitada de compuesto 15 (8,60 gramos, 42,3 mmol) y K2CO3 (8,80 gramos, 63,5 mmol) en DMF (150 ml) se añadió BnBr (6,20 ml, 51,0 mmol) gota a gota a 0° C. Después de agitar durante 15 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, la mezcla de reacción se vertió en agua (200 ml) y se extrajo con EtOAc (200 ml x 3). La fase orgánica se lavó con salmuera (100 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró a vacío. A este residuo se añadió hexano (50 ml) y la mezcla se agitó durante 30 minutos, se filtró para proporcionar el compuesto 16 (8,50 gramos, 69%) en forma de un sólido blanco.

1HRMN (400 MHz, CDCb): 5 = 1,43 (s, 9H), 1,54 (s, 6H), 5,04 (ancha, s, 1H), 5,19 (s, 2H), 7,37-7,38 (m, 5H). Preparación de compuesto 17: A una solución agitada de compuesto 16 (5,00 gramos, 17 mmol) en THF (100 ml) se añadió NaH (5,40 gramos, 60%, 136 mmol, lavada con hexano) enfriada con hielo y la mezcla de reacción se agitó durante dos horas en un baño de hielo/agua, seguidamente se añadió Mel (4,50 ml, 85,0 mmol) gota a gota. La mezcla se agitó durante 15 horas a 30°C bajo atmósfera de N2 y seguidamente se vertió en hielo/agua (100 ml), lentamente y se extrajo con EtOAc (100 ml x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (100 ml x 2), se secó sobre Na2SO4 y se concentró a vacío para proporcionar el compuesto 17 (4,00 gramos, 77%) en forma de un aceite amarillo.

1HRMN (400 MHz, CDCla): ó = 1,45 (s, 9H), 1,47 (s, 6H), 2,93 (s, 3H), 5,16 (s, 2H), 7,33-7,38 (m, 5H).

Preparación de compuesto 18: La solución de compuesto 17 (4,0 gramos, 13,0 mmol) en Et2O/HCl (30 ml, 2,5 M) se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2. El disolvente seguidamente se evaporó y al residuo se añadió hexano (40 ml) y la mezcla se agitó durante 30 minutos y se filtró para proporcionar la sal de HCl de compuesto 18 (2,3 gramos, 74%) en forma de un sólido blanco.

1HRMN (400 MHz, CD3OD): ó = 1,61 (s, 6H), 2,70 (s, 3H), 5,33 (s, 2H), 7,70-7,50 (m, 5H).

Preparación de compuesto 19: A una solución agitada de compuesto A1 (3,60 gramos, 11,8 mmol) y sal de compuesto 18 (HCl) en DMF (100 ml) se añadió HATU (5,60 gramos, 14,8 mmol) y DMAP (3,60 gramos, 29,4 mmol) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 16 hora a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, seguidamente se vertió en agua (100 ml) y se extrajo con EtOAc (150 ml x 2). La fase orgánica combinada se lavó con HCl 1 N (acuoso) (100 ml x 2), NaHCO3 saturado (10 ml x 2) y salmuera (100 ml), seguidamente se secó sobre Na2SO4, se concentró a vacío y se purificó mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice (Pe/EtOAc = 22:1) para proporcionar el compuesto 19 (2,70 gramos, 56%) en forma de un sólido amarillo.

1HRMN (400 MHz, DMSO-d6): ó = 1,32 (d, J = 8,8 Hz, 6H), 1,49 (s, 9H), 2,58 (s, 3H), 3,04-3,11 (m, 2H), 4,94 4,99 (m, 1H), 5,10-5,21 (m, 2H), 5,41-5,43 (m, 1H), 6,95 (s, 1H), 7,12-7,21 (m, 2H),7,29-7,39 (m,6H), 7,72 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,15 (s, 1H).

Preparación de compuesto 20: una solución de compuesto 19 (500 mg, 1,01 mmol) en Et2O/HCl (2,5 M, 20 ml) se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2 y posteriormente la mezcla de reacción se concentró bajo vacío para proporcionar el compuesto 20 (450 mg, en bruto).

Preparación de compuesto 21: Una solución de compuesto 20 (450 mg, en bruto) y Ac2O (2,0 ml) y DIEA (1,0 ml) en THF (20 ml) se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2 y posteriormente la mezcla de reacción se concentró a vacío y se diluyó con EtOAc (30 ml), la fase orgánica se lavó con HCl 1 N (acuoso) (20 ml x 2), NaHCO3 saturado (20 ml x 2) y salmuera (20 ml), se secó sobre Na2SO4 y el disolvente se separó a vacío para proporcionar el compuesto 21 (400 mg, 91%) en forma de un sólido amarillo.

Preparación de compuesto Q: La mezcla de compuesto 21 (500 mg, en bruto) y 10% de Pd/C (250 mg) en THF (20 ml) se agitó durante 2 hora a temperatura ambiente bajo H2 (1 atm), seguidamente se filtró y el filtrado se concentró para proporcionar compuesto Q (250 mg, 88%) en forma de un sólido blanco.

1HRMN (400 MHz, DMSO-d6): ó = 1,25-1,31 (s, 6H), 1,79 (s, 3H), 2,83 (s, 3H), 2,85-2,88 (m, 1H), 3,00-3,05 (m, 1H), 4,94-5,00 (m, 1H),6,98-7,09 (m, 2H), 7,14 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 10,83 (s, 1H), 11,91 (s ancho, 1H).

LC-MS (fase móvil: desde 95 de agua y 5% de CH3CN hasta 40% de agua y 60% de CH3CN en 6 minutos, finalmente bajo estas condiciones durante 0,5 minutos): la pureza es de >95%, tiempo de retención= 1,958 minutos.

MS calc.: 345,2; encontrado: 346,1 (M H)+.

Preparación de compuesto V: A una solución agitada de compuesto V (230 mg, 0,67 mmol) y MeNH2.HCl (222 mg, 3,33 mmol) en Dm F (20 ml) se añadió HOBT (1,35 mg, 1 mmol) y DIEA (0,8 ml, 4,70 mmol), seguidamente se añadió EDCI (192 mg, 1,0 mmol) a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, se concentró a vacío y se purificó mediante HPLC preparatoria para proporcionar compuesto V (30 mg, 17%) en forma de un sólido blanco.

1HRMN (400 MHz, CDCI3): 8 = 1,35 (d, J = 5,2 Hz, 6H),1,99 (s, 3H), 2,65 (d, J = 4,8 Hz, 3H), 2,74 (s, 3H), 3,21 3,24 (m, 2H), 5,16-5,18 (m, 1H), 5,61 (s ancho, 1H),6,48 (s ancho, 1H), 7,16-7,29 (m, 3H),7,40 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,20 (s, 1H).

LC-MS [fase móvil: desde 90% de agua (0,02% de NH4Ac) y 10% de CH3CN hasta 5% de agua (0,02% de NH4Ac) y 95% de CH3CN en 6 minutos, finaImente bajo estas condiciones durante 0,5 minutos]: Ia pureza es >95%, tiempo de retención = 2,090 minutos.

MS calc.: 327,2; encontrado: 328,1 (M++H).

Preparación de compuesto R (Fig. 3): El compuesto R se preparó como se expone en el esquema 7 siguiente. Esquema 7

La mezcla de compuesto 19 (1,50 gramos, 3,8 mmol) y Pd/C (10%, 400 mg) en THF (40) ml) se agitó durante 15 horas a temperatura ambiente bajo H2 (1 atm), seguidamente se filtró y el filtrado se concentró para proporcionar el compuesto R (1,20 gramos, 80%) en forma de un sólido rojo.

1HRMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 = 1,20-1,32 (m, 15H), 2,87-2,30 (m, 5H), 4,60-4,65 (m, 1H), 6,83-7,16 (m, 4H), 7,33-7,57 (m, 2H), 10,84 (s, 1H), 11,88 (s, 1H).

LC-MS (fase móvil: desde 95% de agua y 5% de CH3CN hasta 5% de agua y 95% de CH3CN en 6 minutos, finalmente bajo estas condiciones durante 0,5 minutos): la pureza es de 98,6%, tiempo de retención =3,685 minutos.

MS calc.: 403,2: encontrado: 404,1 (M++H).

Preparación de compuestos D, E y F (Fig. 3):

Los compuestos D, E y F se prepararon como se expone en el esquema 8 siguiente.

E s q u e m a 8

Compuesto D: R=NH2;

Compuesto E: R=NHMe;

Compuesto F: R= NMe2

Preparación de compuesto 40: A una solución agitada de compuesto A1 (2,0 gramos, 6,6 mmol) en DMF (10 ml) se añadió amina (1,1 gramo, 7,0 mmol), HOBt (945 mg, 7 mmol) EDC (1,9 gramo, 10 mmol) y DIEA (2,6 gramos, 20 mmol). Después de agitar durante 16 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, la mezcla de reacción se vertió en hielo/agua (20 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3) y la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró a vacío. El residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice (PE: EtOAc = 8:1) para proporcionar el compuesto 40 (3,2 gramos, 81% de rendimiento).

Preparación de compuesto 41: A una solución de compuesto 40 (4,8 gramos, 12 mmol) en MeOH (50 ml) y H2O (10 ml) se añadió LOH.H2O (608 mg, 15 mmol). Después de agitar durante 4 horas a temperatura ambiente, se añadió HCl (concentrado) a la mezcla de reacción para llevar el pH a 5, se añadió agua (40 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (40 ml x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró a vacío para proporcionar el compuesto 41 en forma de un sólido blanco (4,2 gramos, 90% de rendimiento).

Preparación de compuestos 42, 43 y 44:

A una solución de compuesto 41 (300 mg, 0,77 mmol) en DMF (10 ml) se añadió sal de amina (2,3 mmol, seleccionada según el producto deseado), HOBt (157 mg, 1,2 mmol), EDC (2,23 gramos, 1,2 mmol) y DIEA (298 mg, 2,3 mmol). Después de agitar durante 16 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2, la mezcla se vertió en H2O (50 ml) y se extrajo con EtOAc (50 ml x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró a vacío. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE: EtOAc = 8:1) para proporcionar el producto (42, 43 o 44).

Preparación de compuestos D, E y F:

Una solución de compuesto 42 (o 43 o 44) en EtOAc/HCl (4N, 10 ml) se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente, seguidamente se concentró a vacío y se purificó mediante HPLC preparatoria para proporcionar el correspondiente producto en forma de un sólido blanco.

Compuesto D: 90 mg, 51 % de rendimiento;

1H RMN (400 MHz, DMSO-da): 6 = 1,28 (s, 6H), 3,30-3,03 (m, 2H), 4,03 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 7,20-6,90 (m, 5H), 7,37 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,25-8,00 (s ancho, 3H), 8,54 (s, 1H), 11,04 (s, 1H).

LC-MS [fase móvil: desde 95% de agua (0,05% de TFA) y 5% de CH3CN hasta 5% de agua (0,05% de TFA) y 95% de CH3CN en 6 minutos, finalmente, bajo estas condiciones durante 0,5 minutos]: la pureza es > 95%, tiempo de retención = 2,308 minutos.

MS: calc.: 288,1; encontrado: 289,1 (M++H).

Compuesto E: 75 mg, 57% de rendimiento;

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 6 = 1,27 (s, 6H), 2,52 (s, 3H), 3,30-3,02 (m, 2H), 4,02 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,20 7,00 (m, 3H), 7,38 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,35-7,90 (s ancho, 3H), 8,59 (s, 1H), 11,03 (s, 1H).

LC-MS [fase móvil: desde 95% de agua (0,05% de TFA) y 5% de CH3CN hasta 5% de agua (0,05% de TFA) y 95% de CH3CN en 6 minutos, finalmente bajo estas condiciones durante 0,5 minutos]: la pureza es >95%, tiempo de retención = 2,391 minutos.

MS: calc.: 302,1; encontrado: 303,1 (M++H).

Compuesto F: 50 mg, 47% de rendimiento;

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 6 = 1,32 (s, 3H), 1,34 (s, 3H), 3,10-2,65 (m, 8H), 3,47 (dd, J = 7 ,6 ,5 ,4 Hz, 1H), 7,15-7,00 (m, 3H), 7,34 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,13 (s, 1H), 10,90 (s, 1H).

LC-MS [fase móvil: desde 95% de agua y 5% de CH3CN hasta 5% de agua y 95% de CH3CN en 6 minutos, finalmente bajo estas condiciones durante 0,5 minutos]: la pureza es de 98,3%, tiempo de retención =2,568 minutos.

MS: calc.: 316,1; encontrado: 317,2 (M++H).

Preparación de compuesto W (Fig. 3):

El compuesto W se preparó como se expone en el esquema 9 siguiente, utilizando benciloxicarbonilo (Z) como grupo protector del N terminal del análogo de dipéptido y éster de fenilacilo (éster 2-fenil-2-oxoetílico (Pac) como grupo protector del C terminal del análogo de dipéptido, para generar así Z-D-Trp-Aib-OPac. Los dos grupos protectores Z y Pac se separan mediante hidrogenación catalítica.

E s q u e m a 9

Preparación de Z-D-Trp-Aib-OMe (Compuesto 51)

Se disolvieron 33,84 gramos (100 mmol) de Z-D-Trp-OH en 150 ml de EtOAc. Se añadieron 30,44 gramos (110 mmol) de cloruro de N-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triazin-2-il)-N-metilmorfolinio a 0-5° C. El H-Aib-OMe fue suministrado a partir de 28, 56 gramos (186 mmol) de sal de hidrocloruro y fue añadido a la mezcla de reacción. Se añadieron también 20 ml (150 mmol, 1,5 equivalentes) de trietilamina y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante un día. La mezcla de reacción posteriormente se sometió a tratamiento añadiendo de 150 ml de agua, separando las fases, lavando la fase orgánica con 150 ml de NaHCO3 saturado y 150 ml de NaCl saturado, secando en Na2SO4 y evaporando el disolvente. El compuesto 51 en bruto se obtuvo en forma de un aceite color naranja (45,0 gramos, 103 mmol, 103%) y se purificó mediante cromatografía de columna sobre sílice (usando tolueno: MeOH 9:1 como eluyente) con el fin de producir el compuesto 51 en forma de un aceite color naranja (40,0 gramos, 91,4 mmol, 91,4% de rendimiento).

Preparación de Z-D-Trp-Aib-OH (Compuesto 52):

Una solución de 20,0 gramos (46 mmol) de Z-D-Trp-Aib-OMe en una mezcla de 100 ml de metanol, 100 ml de agua y 2,2 gramos (55 mmol) de NaOH se agitó a temperatura ambiente durante un día. La mezcla de reacción posteriormente se sometió a tratamiento evaporando el disolvente, añadiendo 200 ml de agua al residuo obtenido, extrayendo con 3 x 50 ml de ciclohexano, ajustando el pH de la fase acuosa a 3, con 10 ml de H3PO4 al 85%, filtrando el precipitado formado mientras se lavaba el precipitado con 400 ml de agua y secando a vacío a 40°C. El compuesto 52 se obtuvo en forma de un producto sólido blanco (17,0 gramos, 40 mmol, 87% de rendimiento).

Preparación de Z-D-Trp-Aib-OPAc (compuesto 53):

A una solución de 4, 23 gramos (10 mmol) de Z-D-Trp-Aib-OH (compuesto 52) y 199 gramos (10 mmol) de 2'-bromo acetofenona en 20 ml de EtOAc, se añadieron 1,4 ml (10 mmol) de trietilamina y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción posteriormente se sometió a tratamiento añadiendo 50 ml de EtOAc, lavando la fase orgánica con 20 ml de KHSO41M, 20 ml de agua, 20 ml de NaHCO3 1 M y 20 ml de agua y evaporando el disolvente. El producto en bruto obtenido se purificó mediante cromatografía de columna sobre sílice (usando hexano: EtOAc 1:1 como eluyente) para producir el compuesto 53 en forma de un aceite transparente (7,9 mmol, 79% de rendimiento).

Preparación de Z-(N-tBu)-D-Trp-Aib-OPac (compuesto 54):

Se colocaron 4,3 gramos (7,9 mmol) de Z-D-Trp-Aib-OPac (compuesto 53) en un reactor metálico junto con 40 ml de diclorometano y 0,24 ml de H2SO4 concentrado como catalizador. Se condensó isobutileno en el reactor a -5°C (enfriado en un baño de sal-hielo). La mezcla de reacción se agitó durante un día a temperatura ambiente y 2,5 bares de presión y posteriormente se sometió a tratamiento evaporando el isobutileno, lavando la fase orgánica residual con 50 ml de NaOH al 10% y evaporando la fase orgánica. El producto en bruto así obtenido se purificó mediante cromatografía de columna sobre sílice (usando CHCb: MeOH 98:2 como eluyente) para proporcionar el compuesto 54 en forma de un producto sólido amarillo claro (2,85 gramos, 4,8 mmol, 60% de rendimiento).

Preparación de H-(N-tBu)-D-Trp-Aib-OH (compuesto W):

Se disolvieron 1,2 gramos (2 mmol) de Z-(N-tBu)-D-Trp-Aib-OPac (compuesto 54 en 100 ml de MeOH, la solución se colocó en un reactor y se le añadieron 0,12 gramos de catalizador SelCat Q6 (tipo Pd/C). La mezcla de reacción se agitó durante un día a temperatura ambiente y 1,5 bares de presión de H2 y posteriormente se sometió a tratamiento mediante filtración, lavando el catalizador con 2 x 50 ml de metanol caliente, combinando las fases orgánicas y evaporando el disolvente. El residuo sólido se purificó mediante cromatografía de columna sobre sílice (usando tolueno: metanol 1:1 como eluyente) para proporcionar el compuesto W en forma de un sólido amarillo claro (126 mg, 0,36 mmol, 18% de rendimiento).

1H-RMN (registrado a 11,7 Tesla en un espectrómetro Bruker Avance-500 MHz (dos canales) a 300 Ken DMSO): ó = 1,35 (s), 1,64 (s), 2,80, 3,07, 3,45 (t), 6,98 (t), 7,07 (t), 7,58 (d), 7,63 (d), 8,37, 8,52.

Ejemplo 2

Ensayos de actividad

Soluciones de péptidos:

Los análogos de D-Trp-Aib descritos en la presente memoria descriptiva, así como otros péptidos ensayados para fines de comparación se disolvieron en DMSO a una concentración de 500 mM y 100 mM, se sometieron a ultrasonidos durante 20 segundos en hielo y seguidamente se diluyeron con DMSO hasta sus concentraciones finales.

Formación de oligómeros (protocolo de Hillen):

Se produjeron intermedios AP1-42 y globulómeros según Barghorn et al. [J. Neurochem. 2005 Nov; 95(3):834-47].. Se adquirieron polipéptidos p-amiloides liofilizados sintéticos (Ap 1-42 > 98% puro) de la entidad Bachem (Bubendorf, Suiza). Para evitar la preagregación, se pretrató AP1-42 liofilizado sintético con HFIP. El AP1-42 se disolvió en HFIP al 100%, se sometió a ultrasonidos durante 20 segundos y se incubó durante 2 horas a 37° C bajo agitación a 100 rpm. Después de evaporar en un dispositivo speedVac, el AP1-42 se volvió a poner en suspensión en DMSO, con o sin el péptido ensayado, a 5 mM y se diluyó con NaH2PO420 mM, NaCl 140 mM, pH 5,4, hasta una concentración final de 400 pM y 1/10 de volumen DSDS al 2% (concentración final de 0,2%). Los globulómeros de Ap se generaron mediante dilución adicional con dos volumen de H2O e incubación durante 18 horas o más. Los productos de agregación de Ap se separaron seguidamente usando gel de tristricina al 15% y se tiñeron usando colorante de proteínas imperial.

Análisis de transferencia Western:

Para evaluar el efecto de los análogos de D-Trp-Aib sobre la transformación del Ap1-42 en las estructuras tóxicas, los péptidos ensayados se incubaron con Ap1-42 en relaciones en moles crecientes y las mezclas de reacción se resolvieron en SDS-PAGE seguido de análisis de transferencia Western mediante un anticuerpo anti- AP1-42 específico (6E10) (SIGNET).

Ensayo de fluorescencia de tioflavina T: La fibrilización de polipéptido AP1-42 se verificó usando un ensayo de unión de colorante tioflavina T (ThT). Se preparó una solución de Ap1-4210 pM como se describió anteriormente y se mezcló inmediatamente con las soluciones madre de análogos ensayados (100 pM), con el fin de conseguir una concentración final de 5 pM para Ap y diversas concentraciones del análogo ensayado. Para cada medición, se añadió ThT a 0,1 ml de muestra para proporcionar una concentración final de ThT 0,3 pM y Ap O, 4 pM. Las muestras se incubaron a 37° C. Se llevaron a cabo mediciones de la fluorescencia, hechas después de la adición de la solución de ThT a cada muestra a 37° C usando un espectrómetro Jobin Yvon FluroMax-3 (excitación 450 nm, ranura de 2,5 nm; emisión 480 nm, ranura 5 nm, tiempo de integración de 1 segundo). Se sustrajo el fondo de cada muestra. Cada experimento se repitió por cuadruplicado.

Resultados:

Todos los análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva ensayados usando el protocolo de Hillen para la generación de globulómeros de AP1-42 se encontró que exhibían una inhibición de la generación de globulómeros AP1-42 hasta un alcance mayor medido para D-Trp-Aib (MRZ99030) a una relación en moles 1:1 (inhibidor: péptido Ap) e incluso a concentraciones inferiores. La totalidad de los análogos ensayados mostró una inhibición completa a una relación en moles de 20:1 (inhibidor: péptido Ap).

El compuesto 2, HhN-a-Me-Trp-Aib-OMe (véase la tabla 1 anterior), mostró una inhibición de globulómeros completa a una relación en moles de 1:1 (inhibidor:péptido Ap), usando el protocolo de Hillen (véase la Fig. 5A para los datos obtenidos usando análisis de transferencia Western y la Fig. 5B para datos obtenidos usando gel de Tris-tricina al 15% y colorante de proteína Imperial).

Los compuestos 1 y 7 (véase la Tabla 1 anterior) se mostraron usando el protocolo de Hillen para inhibir la formación de fibrillas de Ap1-42 a una relación en moles de 10:1 y 20:1 (inhibidor:péptido Ap ) (véase la Fig.6).

Los compuestos 3 y 5 (véase la Tabla 1 anterior) se mostraron el protocolo de Hillen, para para inhibir la formación de fibrillas de Ap1-42 a una relación en moles de 10:1 (inhibidor:péptido Ap) (véase la Fig.7).

Para fines de comparación, se obtuvieron datos para la inhibición de la generación de globulómeros de Ap 1-42 medida para D-Trp-Aib (EG30), usando el protocolo de Hillen, que mostró la inhibición completa solamente a una relación en moles de 40:1 (inhibidor: péptido Ap) (véase la Fig. 8).

Para una comparación adicional, se aprecia que los siguientes péptidos ensayados no mostraron actividad alguna para inhibir la generación de globulómeros de Ap1-42 : dF-dF-Aib; Y-Aib-Aib; Aib-Y-Y; dY-Aib; y N-Y-Y-P.

Ejemplo 3

Ensayos de actividad (ensayo de unión de SPR)

Se realizaron estudios de resonancia plasmónica de superficie (SPR) usando un instrumento biodetector Biacore X100 (GE Lifesciences, Uppsala, Suecia), equipado con dos celdas de flujo en un chip detector. Los monómeros de Ap fueron covalentemente acoplados a una celda de flujo de chips detectores CM7 (GE Lifesciences, Uppsala, Suecia) a través de aminas primarias usando el estuche de ensayo de acoplamiento de aminas (GE Lifesciences, Uppsala, Suecia). Como testigo, se inmovilizó etanolamina sobre el canal de referencia. Se usaron 3 tipos diferentes de chips y los niveles de inmovilización para Ap eran comparables (21605RU, 22180RU y 2192RU, respectivamente). Un RU representa aproximadamente 1pg/mm2 de los analitos en la matriz superficial del chip detector.

Los compuestos ensayados se disolvieron en DMSO y se diluyeron adicionalmente en DMSO para proporcionar soluciones madre concentradas de 1000 x. La soluciones madre se diluyeron 1:1000 en tampón de HBS-EP que contenía HEPES 0,01 M, pH 7,4, NaCI 0,5 M, EDTA 3 mM y 0,005% de tensioactivo PB:0. Se usó HBS-EP 0,1% (v/v) de DMSO como tampón de realización del ensayo. Las soluciones de ensayo se inyectaron sobre el chip detector en concentraciones que variaban en el intervalo de 0,1 Nm a 300 Nm a un caudal de 10 pl/min durante 180 segundos a 25° C. Las concentraciones se ensayaron por duplicado.

Las RUs provocadas por el compuesto inyectado en la celda de flujo testigo de etanolamina se ajustó como respuesta de referencia y se sustrajo de las RUs provocadas por el mismo compuesto inyectado a la celda de flujo saturada de Ap. Las relaciones entre cada RU obtenida en el estado estacionario de unión (plataforma de la curva de unión) y capa concentración del compuesto se representaron gráficamente.

Después de que se detuvo la inyección de analito, se hizo fluir tampón de HBS-EP sobre el chip durante 180 s para permitir que el analito unido se disociara del Ap inmovilizado y se obtuvieron las curvas de disociación. Después de la fase de disociación, se inyectó la solución de regeneración (NaCl 1 M, NaOH 50 mM) y se hizo fluir sobre el chip durante 30 segundos para retirar los analitos residuales del Ap inmovilizado.

Se usó un software Biacore X100 Ver 1.1 para registrar las curvas de unión y un software de evaluación Biacore X100 Ver 1.1 para analizar las curvas (gráfico de cada RU en estado estacionario frente a concentración de analito, ajuste del gráfico, determinación de valores de Kd). La constante de equilibrio de disociación Kd del analito respecto al Ap inmovilizado se determinó a partir de los niveles de estado estacionario que estimaban la RU máxima, Rmax y calculando la Kd como la concentración del compuesto que provocó la mitad de la Rmax. La tabla 4 siguiente presenta los valores de IC-50 obtenidos realizando ensayos repetidos para ejemplos de compuestos, como se describen en la presente memoria descriptiva.

Tabla 4

Ejemplo 4

Parámetros farmacológicos

La solubilidad acuosa de los ejemplos de análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva se ensayó a pH 7,4. Los datos obtenidos se presentan en la Tabla 5 siguiente e indican que todos los compuestos ensayados mostraron una buena solubilidad por encima de 250.

Los ejemplos de análogos de dipéptidos descritos en la presente memoria descriptiva se ensayaron en cuanto a la permeabilidad de membrana en células MDCKII transfectadas con PGP humano, para evaluar la absorción intestinal. Los datos obtenidos se presentan en la Tabla 5 siguiente, en la que A-B es el flujo apical-basolateral IAI es el índice de asimetría.

La estabilidad metabólica de los ejemplos de análogos de péptidos descritos en la presente memoria descriptiva se ensayó en microsomas de hígado humano y de rata (h Lm y RLM, respectivamente). Los datos obtenidos se presentan en la Tabla 5 siguiente, en forma de % de compuesto que permanecía después de 30 minutos. Todos los péptidos se encontró que eran suficientemente estables.

Tabla 5

Aunque la invención ha sido descrita conjuntamente con sus realizaciones específicas, es evidente que muchas alternativas, modificaciones y variaciones serán evidentes para los expertos en la técnica.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto que comprende un resto de triptófano (Trp) acoplado a un resto rompedor beta-laminar, estando representado el compuesto por una estructura química seleccionada entre el grupo que consiste en

para ser usado en la inhibición de la formación de fibrillas amiloides o en el tratamiento de unas enfermedad o trastorno asociado a amiloides.

2. El compuesto para ser usado de la reivindicación 1, representado por la estructura química:

3. El compuesto para ser usado de las reivindicaciones 1 o 2, en que dicha enfermedad o trastorno asociado a amiloides es uno de: diabetes mellitus tipo II, enfermedad de Alzheimer (AD); enfermedad de Alzheimer de aparición temprana; enfermedad de Alzheimer de aparición tardía, enfermedad de Alzheimer pre-sintomática; enfermedad de Parkinson; amiloidosis SAA; síndrome islandés hereditario; mieloma múltiple; carcinoma medular; amiloide médico aórtico, amiloidosis de inyección de insulina; amiloidosis sistemática priónica; amiloidosis con inflamación crónica, enfermedad de Huntington; amiloidosis sistémica senil; amiloidosis de la glándula pituitaria; amiloidosis renal hereditaria; demencia británica familiar; amiloidosis hereditaria finlandesa; amiloidosis no neuropática familiar; una enfermedad o trastorno ocular relacionada con amiloidosis o una enfermedad priónica.

4. El compuesto para ser usado de la reivindicación 3, en que dicha enfermedad o trastorno ocular relacionado con amiloides es glaucoma o degeneración macular relacionada con la edad.

5. El compuesto para ser usado de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en que dicho compuesto es formulado para una administración en forma de gotas.

6. El compuesto para ser usado de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en que dicho compuesto es una formulación para una administración mediante inyección que incluye inyección intraocular.