ES2848199T3

ES2848199T3 - Composiciones tópicas no acuosas que comprenden una salicilanilida halogenada

Info

Publication number: ES2848199T3
Application number: ES17710911T
Authority: ES
Inventors: Morten Otto Alexander Sommer; Ping Li; Camilla Hasling Frandsen; Hanne Mørck Nielsen; Petra Alexandra Priemel; Thomas Rades
Original assignee: Koebenhavns Univ University Of Copenhagen; Københavns Universitet; Union Therapeutics AS
Current assignee: Koebenhavns Univ University Of Copenhagen; Københavns Universitet; Union Therapeutics AS
Priority date: 2016-03-16
Filing date: 2017-03-15
Publication date: 2021-08-05
Anticipated expiration: 2037-03-15
Also published as: BR112018068593A2; US12036312B2; CN108883309A; MX2018011249A; KR20180123542A; CA3013673A1; DK3429691T3; EP3429691B1; GB201604484D0; JP2019508463A; AU2017234199A1; CN108883309B; EP3429691A1; US20190151231A1; MX383448B; WO2017157997A1

Abstract

Una composición tópica no acuosa que comprende: (i) una salicilanilida halogenada seleccionada de niclosamida, rafoxanida y oxiclozanida, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma; y (ii) polietilenglicol (PEG) con un punto de fusión de menos de 40 °C; con la condición de que cuando la composición comprende niclosamida o rafoxanida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, la composición comprende adicionalmente un agente de formación de gel o un glicol no polimérico.

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones tópicas no acuosas que comprenden una salicilanilida halogenada

Esta invención se refiere a composiciones tópicas no acuosas que comprenden una salicilanilida halogenada; el uso de dichas composiciones en el tratamiento tópico o prevención de enfermedades e infecciones, particularmente aquellas provocadas por bacterias Gram-positivas. Por ejemplo, para uso en el tratamiento tópico o prevención de infecciones de la piel, acné, dermatitis atópica e impétigo y para la descolonización bacteriana, por ejemplo, antes de procedimientos quirúrgicos. También se divulgan métodos para preparar la composición.

Antecedentes

La resistencia bacteriana a los antibióticos es cada vez más frecuente y existe una necesidad continua de identificar nuevos fármacos antibióticos, particularmente fármacos que sean eficaces contra bacterias resistentes a antibióticos convencionales, por ejemplo, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (“MRSA”).

Las infecciones por MRSA sobre la piel y en las vías respiratorias son comunes en entornos hospitalarios y la resistencia de amplio espectro de las bacterias a casi todas las clases de antibióticos (por ejemplo, meticilina, ácido fusídico y mupirocina) las hace particularmente difíciles de combatir.

Los antibióticos tópicos son una opción de tratamiento atractiva para las infecciones de la piel y los tejidos blandos porque el agente activo se puede aplicar directamente al sitio de la infección y puede reducir los efectos secundarios asociados con el uso sistémico de antibióticos. Sin embargo, actualmente se dispone de antibióticos tópicos limitados.

El ácido fusídico es un antibiótico derivado de Fusidium coccineum que se ha utilizado durante más de 35 años para tratar infecciones por Staphylococcus aureus. El ácido fusídico se prescribe comúnmente para el tratamiento de infecciones de la piel provocadas por Staphylococcus aureus. Dichas infecciones incluyen impétigo, queilitis angular (una infección alrededor de la boca) y dermatitis infectada. Sin embargo, S. aureus puede desarrollar rápidamente resistencia al ácido fusídico, incluso después de un breve ciclo de tratamiento. Como resultado, el ácido fusídico generalmente se utiliza sistémicamente en combinación con otro agente antibiótico para reducir el riesgo de desarrollo de resistencia. El uso tópico de ácido fusídico como monoterapia se considera un factor de alto riesgo en el desarrollo de resistencias. Por lo tanto, el uso tópico de ácido fusídico está restringido a ciclos cortos de tratamiento y para pacientes fuera del hospital sin afecciones de la piel subyacentes, junto con una estrecha monitorización de los patrones de susceptibilidad a los antibióticos locales (Dobie et al; Arch Dis Child 2004; 89: 74-77). Actualmente, existen antibióticos tópicos alternativos limitados disponibles.

La resistencia al ácido fusídico también puede estar relacionada con el desarrollo de resistencia en otras bacterias, lo que podría conducir a la propagación de Staphylococcus aureus resistente a múltiples fármacos, tales como MRSA.

La mupirocina es un antibiótico tópico utilizado para tratar infecciones de la piel superficiales y para controlar la propagación de MRSA. Se observó resistencia a la mupirocina poco después de que estuvo disponible. La prevalencia de la resistencia a la mupirocina entre los aislados de MRSA se ha descrito principalmente en pacientes adultos y ancianos hospitalizados con una amplia variabilidad, que va del 0 al 65% de los aislados. Se ha mostrado que las tasas de resistencia se correlacionan con un mayor uso en entornos cerrados para pacientes hospitalizados. Ahora se recomiendan prescripciones de mupirocina muy restrictivas para el tratamiento local.

El impétigo es una infección bacteriana muy contagiosa de las capas superficiales de la epidermis. El impétigo es una de las enfermedades de la piel más comunes entre los niños y representa aproximadamente el 10% de las enfermedades de la piel tratadas en las clínicas pediátricas de los Estados Unidos. Las bacterias normalmente consideradas responsables son Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes, y a menudo una combinación de las dos. El impétigo generalmente se transmite por contacto directo, pero los fómites también cumplen una función importante. El MRSA se encuentra cada vez con mayor frecuencia como bacteria causante del impétigo. El impétigo tiene tres variedades clínicas comunes: impétigo contagioso (impétigo común), impétigo ampolloso y ectima. Sin embargo, las características de los tres tipos de impétigo pueden coexistir en cualquier paciente individual.

La mupirocina tópica (disponible comercialmente como ungüento y crema de Bactroban al 2%) es una opción de tratamiento para el impétigo. Para algunos pacientes, la mupirocina es una opción de tratamiento viable para MRSA; sin embargo, se ha informado ampliamente sobre resistencia a la mupirocina.

El ácido fusídico tópico (disponible comercialmente como crema Fucidin al 2%) se utiliza para el tratamiento del impétigo, y se cree que es tan eficaz como la mupirocina. Sin embargo, la utilidad del ácido fusídico para el tratamiento del impétigo está limitada por el problema del desarrollo de resistencia, como se discutió anteriormente.

Se ha identificado Staphylococcus aureus resistente al ácido fusídico (FRSA) como una bacteria causante de los brotes de impétigo y su aparición se ha asociado con un mayor uso de ácido fusídico tópico. De acuerdo con lo anterior, se ha vuelto cuestionable la utilidad del ácido fusídico como agente de primera línea para el tratamiento del impétigo.

La retapamulina (disponible comercialmente como ungüento de Altabax al 1%), es un antibiótico de pleuromutilina recientemente aprobado para el tratamiento tópico del impétigo causado por Staphylococcus aureus (sólo susceptible a meticilina) o Streptococcus pyogene.

Las heridas y quemaduras a menudo son colonizadas por patógenos microbiológicos, que incluyen bacterias Grampositivas, tales como Staphylococcus aureus y/o Streptococcus pyogenes. A pesar de la ocurrencia común de infecciones de heridas, solo un número limitado de antibióticos tópicos está aprobado para el tratamiento de heridas infectadas. La mupirocina está aprobada para el tratamiento tópico de heridas infectadas, sin embargo, la resistencia bacteriana emergente a mupirocina se está convirtiendo en una preocupación. En los aislados de estafilococos negativos a coagulasa, las tasas de resistencia a la mupirocina son altas, varías desde el 12.7% en Europa y el 38.8% en Estados Unidos. La retapamulina también se utiliza tópicamente para el tratamiento de heridas. El ácido fusídico (disponible comercialmente como Fucidin, LEO Pharma) está aprobado para uso en el tratamiento de infecciones de la piel primarias y secundarias provocadas por cepas sensibles de Staphylococcus aureus, especies de Streptococcus y Corynebacterium minutissimum. Sin embargo, como se discutió anteriormente, el desarrollo de resistencia es común con estos agentes.

Las bacterias Gram-positivas, Propionibacterium, particularmente Propionibacterium acnes están implicadas en la patogénesis del acné. Los antibióticos tópicos se han utilizado durante muchos años en el tratamiento del acné. Sin embargo, las directrices de tratamiento actuales desaconsejan dicho uso debido a la aparición de resistencia a los antibióticos. La incidencia de resistencia a los antibióticos en el acné ha aumentado de manera constante durante los últimos 40 años del 20% en 1978 al 72.5% en 1995 (Cooper et al. Systematic review of Propionibacterium acnes resistance to systemic antibiotics. Med J Aust. 1998, Sep 7;169(5):259-61). Los antibióticos tópicos más comúnmente prescritos para el acné son la eritromicina y la clindamicina. Sin embargo, se ha observado resistencia a estas monoterapias de antibióticos tópicos, incluso después de períodos relativamente cortos de tratamiento de 8 semanas (Cunliffe et al A randomized, double-blind comparison of a clindamycin phosphate/benzoil peróxido gel formulation and a matching clindamycin gel with respect to microbiologic activity and clinical efficacy in the topical treatment of acne vulgaris; Clin Ther. 2002 Jul;24(7):1117-33). El desarrollo de propionibacterias resistentes aumenta la patogenicidad del organismo. Adicionalmente, los regímenes de tratamiento prolongados que utilizan antibióticos tópicos para el tratamiento del acné han provocado una presión de selección o la transferencia de genes resistentes a bacterias potencialmente más patógenas, tales como determinadas cepas de estafilococos o estreptococos. The Global Alliance to Improve Outcomes in Acne (J Am Acad. Dermatol. 2009 May; 60 (5 Suppl): S1-50) recomienda que los antibióticos tópicos se deben utilizar durante el menor tiempo posible y no se deben utilizar como monoterapia sino en combinación con peróxido de benzoilo para reducir la aparición de Propionibacterium acnes resistente.

Por lo tanto, existe la necesidad de nuevos antibióticos tópicos, para los cuales el desarrollo de resistencias no está generalizado en las bacterias diana, para la prevención y el tratamiento de infecciones tópicas provocadas o contribuidas por bacterias Gram positivas tales como Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes y Propionibacterium acnes.

Las salicilanilidas halogenadas son una serie de compuestos utilizados generalmente como agentes antihelmínticos. Dichos compuestos incluyen niclosamida.

La niclosamida es un tenicida conocido eficaz contra varias tenias parasitarias de ganado y animales domésticos (por ejemplo, Taenia spp, Moniezia spp) y también contra trematodos del rumen (Paramphistomum spp) y trematodos de la sangre (Schistosoma spp.). Esto contrasta con la mayoría de las otras salicilanilidas, que generalmente exhiben actividad como flukicidas pero no como tenicidas.

La niclosamida se utiliza actualmente en humanos como fármaco antihelmíntico para tratar infecciones intestinales y muestra una baja toxicidad en general, es poco soluble en agua, muestra una baja absorción intestinal y, una vez en el torrente sanguíneo, se elimina rápidamente a través del tracto urinario o por metabolismo enzimático en el hígado. Terapéuticamente es útil contra cestodo en humanos.

También se ha mostrado que la niclosamida previene la penetración de Schistosoma mansoni a través de la piel humana. Además de utilizarse como fármaco contra el cáncer, pesticida y como medicamento contra el tripanosoma. Prácticamente todas las aplicaciones y aplicaciones propuestas de la niclosamida se dirigen a organismos eucariotas.

También se ha mostrado que la niclosamida inhibe la replicación viral en células humanas. Sin embargo, se considera que el mecanismo consiste en dirigirse a las células anfitrionas humanas para proporcionar condiciones que eviten la vida viral en lugar de dirigirse específicamente al virus. De acuerdo con lo anterior, la aplicación antiviral de niclosamida resulta de su capacidad para dirigirse a procesos eucariotas.

La niclosamida está disponible comercialmente en una serie de formulaciones que incluyen, pero no se limitan a, Bayer73®, Bayer2353®, Bayer25648®, Bayluscid®, Baylucide®, Cestocid®, Clonitralid, Dichlosale®, Fenasal®, HL 2447®, Iomesan ®, Iomezan®, Manosil®, Nasemo®, Niclosamid®, Phenasal®, Tredemine®, Sulqui®, Vermitid®, Vermitin® y Yomesan®.

Otras salicilanilidas halogenadas conocidas incluyen closantel, rafoxanida y oxiclozanida. Estos compuestos también se utilizan principalmente como agentes antihelmínticos.

Se ha propuesto la niclosamida como un posible tratamiento sistémico para las infecciones pulmonares crónicas provocadas por la proteobacteria Pseudomonas aeruginosa y la actinobacteria Mycoplasmum tuberculosis. Se ha mostrado que la niclosamida reduce la respuesta de detección de quórum, así como la producción de metabolitos de detección de quórum en P. aeruginosa. Dado que la detección de quórum se considera un proceso importante para la patogenicidad durante las infecciones pulmonares crónicas provocadas por esta bacteria, llevó a la propuesta de que se podría utilizar niclosamida como terapia adyuvante para estas infecciones. La niclosamida no afecta el crecimiento de P. aeruginosa y, por lo tanto, no tiene ninguna actividad antibacteriana directa. La concentración requerida para una actividad óptima fue 20 ^{j M ,}sin embargo, se detectó algo de inhibición a 1 ^{j M .}(F. Imperi et al., Antimicrobial, Agents and Chemotherapy, 557 (2), 996-1005 (2013)).

Ghazi et al. (Zentralbl. Mikrobiol. 141 (1986), 225-232) probaron el efecto antibacteriano y la toxicidad de los derivados de salicilanilida sintetizados contra Escherichia coli, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus.

J. Vinsova et al. describen la actividad antibacteriana de salicilanilidas (Molecules, vol. 12, no. 1, pp. 1-12, 2007; Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, vol. 19, no. 2, pp. 348-351,2009; European Journal of Medicinal Chemistry, vol. 45, no.

12, pp. 6106-6113, 2010).

M.J. Macielag et al. probaron la actividad antibacteriana del closantel y derivados relacionados contra los organismos resistentes a fármacos, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) y Enterococcus faecium resistente a vancomicina (VREF) (J. Med. Chem., 41 (16), 2939-45 (1998)).

D.J. Hlasta et al encontraron que el closantel tenía actividad antibacteriana contra S. aureus y E. faecium resistentes a fármacos (Bioorg. Med. Chem. Letters, 8 (14), 1923-28 (1998)).

R. Rajamutiah et al. identificó el closantel como un éxito en un ensayo de cribado de líquidos de alto rendimiento y encontró actividad antiestafilocócica del closantel contra aislados de S. aureus resistente a vancomicina y otras bacterias Grampositivas. (PloS One, 2014, 9(2): e89189).

Los documentos GB 2,456,376 y WO 2008/155535 describen el uso de salicilanilidas halogenadas para el tratamiento del acné, en el que las propionibacterias son las bacterias que provocan el acné. No se menciona el problema del desarrollo de resistencia.

El documento US 8,846,646 divulga composiciones que comprenden propilenglicol que tienen actividad antibacteriana contra propionibacterium acnes y se pueden utilizar para tratar el acné.

Chirife et al. (Antimicrobial Agents and Chemotheer., 24(3), (1983), 409-412) divulgan que las soluciones acuosas de PEG 400 tienen un efecto antibacteriano contra ciertas bacterias.

Como se divulga en el presente documento, los inventores han encontrado que las salicilanilidas halogenadas (por ejemplo, closantel, rafoxanida, oxiclozanida o niclosamida) son potentes contra bacterias Gram-positivas, tales como Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes o Propionibacterium acnes. Los inventores han descubierto que las bacterias Gram positivas tratadas con una salicilanilida halogenada exhiben una baja frecuencia de desarrollar mutantes resistentes espontáneos en comparación con la observada con los antibióticos tópicos comúnmente utilizados. Se espera que la frecuencia reducida de mutantes resistentes permita que las salicilanilidas halogenadas se utilicen tópicamente durante períodos de tratamiento prolongados para el tratamiento y/o prevención de infecciones Gram-positivas con un riesgo mínimo de aparición de resistencia bacteriana a la salicilanilida halogenada.

La administración tópica eficaz de un fármaco antibiótico, por ejemplo, a la piel, requiere que el fármaco penetre en y a través del estrato córneo y en la epidermis y la dermis en concentración suficiente para proporcionar un efecto antibacteriano contra las bacterias presentes en la piel en el sitio de infección. Las composiciones tópicas óptimas proporcionan concentraciones de fármaco superiores a la MIC de las bacterias durante periodos de tiempo prolongados, asegurando de esta manera la extinción o inhibición eficaz de las bacterias.

Las salicilanilidas halogenadas, tales como la niclosamida, son muy insolubles en agua. La niclosamida en forma anhidra absorbe fácilmente la humedad y forma monohidrato de niclosamida, que es incluso menos soluble que el anhidrato. Por tanto, las composiciones acuosas de niclosamida son propensas a la inestabilidad y precipitación de la niclosamida (Int. J. Pharm., 269(2), 2004, 417-32; Crystal Growth & Design, 12(9), 4588-4599 (2012)). Adicionalmente, en medios acuosos, se observa un crecimiento indeseable del tamaño de partícula de la niclosamida o las sales de niclosamida incluso después de períodos de tiempo relativamente cortos. La presencia de niclosamida en forma sólida no es deseable para la administración tópica de un fármaco, porque limita la absorción del fármaco. Adicionalmente, la precipitación del fármaco durante el almacenamiento de la composición o cuando se aplica tópicamente puede dar como resultado tasas variables de absorción.

También se informa que la niclosamida en J. Agricultural and Food Chemistry, 30(6), 1028-1032 (1982) es sensible a la degradación inducida por la luz en el agua.

El documento GB 1,527,638 divulga una suspensión a base de aceite de niclosamida con partículas de menos de 2 |jm.

El documento WO1998/056390 describe una solución en forma de una composición antihelmíntica para administración oral, que comprende una sal disuelta farmacológicamente aceptable de niclosamida en un solvente orgánico (polar) farmacológicamente aceptable.

El documento US 3,152,039 divulga composiciones que comprenden ciertas salicilanilidas bromadas, en las que se utiliza una alcanolamina para mejorar la solubilidad de la salicilanilida bromada.

El documento RU 2,227,025 divulga una composición que comprende rafoxanida, alcohol bencílico, trietanolamina, dimetiacetamida y polietilenglicol.

Bonacucina et al. Int. Journal of Pharmaceutics 282, 2004, 115-130 divulgan geles formados a partir de carbopol y PEG 400 que comprenden paracetamol.

Sigue subsistiendo la necesidad de composiciones adecuadas para el suministro tópico de salicilanilidas halogenadas, que proporcionen un potente efecto antibacteriano contra infecciones de la piel por Gram-positivas cuando se aplica tópicamente sobre la piel. De forma adecuada, las composiciones tópicas proporcionan una buena penetración en la piel, proporcionando de esta manera una alta concentración de salicilanilida halogenada en, por ejemplo, la dermis y la epidermis. De forma adecuada, las composiciones tópicas dan como resultado una exposición sistémica mínima a la salicilanilida halogenada después de la aplicación tópica de la composición. De forma adecuada, las composiciones tópicas se toleran bien cuando se aplican tópicamente, por ejemplo, y dan como resultado poca o ninguna irritación de la piel después de la aplicación.

Breve resumen de la divulgación

De acuerdo con un primer aspecto de la invención se proporciona una composición tópica no acuosa que comprende:

(i) una salicilanilida halogenada seleccionada de niclosamida, rafoxanida, y oxiclozanida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y

(ii) polietilenglicol (PEG) con un punto de fusión de menos de 40 °C;

con la condición de que cuando la composición comprende niclosamida o rafoxanida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, la composición comprende adicionalmente un agente de formación de gel o un glicol no polimérico (por ejemplo, propilenglicol).

En este primer aspecto de la invención cuando la composición comprende niclosamida o rafoxanida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, la composición comprende adicionalmente un agente de formación de gel o un glicol no polimérico (por ejemplo propilenglicol), el agente de formación de gel puede ser cualquier agente de formación de gel siempre que no sea un PEG con un punto de fusión de menos de 40 °C. Ejemplos de agentes de formación de gel que se pueden utilizar incluyen cualquiera de los agentes de formación de gel divulgados en el presente documento.

Las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento tópico de enfermedades o infecciones. Como tal la composición forma adecuada está en una forma en la que se puede aplicar fácilmente por vía tópica, por ejemplo, a la piel. La composición puede estar en forma de líquido, loción, pomada, crema o gel.

De forma adecuada, el PEG en la composición se selecciona de tal manera que la composición junto con cualquier otro componente de la composición (por ejemplo, en forma de una composición líquida, semisólida o en gel) se pueda aplicar, esparcir y/o frotar en la piel. Puede ser que el PEG tenga un punto de fusión que sea menor a 35 °C. En ciertas realizaciones el PEG se selecciona de modo que sea blando o, de forma adecuada se funda a la temperatura corporal. Por ejemplo, el PEG puede tener un punto de fusión de 32 °C o menos, o menor que 30 °C, o menor que 25 °C.

En ciertas realizaciones de las composiciones de la invención el PEG tiene un peso molecular promedio de 1000 o menos, por ejemplo 800 o menos o particularmente 600 o menos. En una realización particular el p Eg tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 400 (es decir PEG 400). En otra realización el PEG tiene un peso molecular promedio desde aproximadamente 200 hasta aproximadamente 600.

En ciertas realizaciones de las composiciones de la invención el PEG está presente en una cantidad de al menos 5% en peso de la composición. Por ejemplo, el PEG está presente en una cantidad de al menos: 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35% o 40% en peso de la composición.

Los inventores han encontrado que la presencia de altas concentraciones de PEG en las composiciones de la invención proporcionan particularmente altas concentraciones de la salicilanilida halogenada (por ejemplo, niclosamida) en la dermis y/o epidermis luego de administración tópica a la piel que están muy por encima de la concentración inhibidora mínima de bacterias Gram-positivas que residen en, por ejemplo, el tejido de piel. Por lo tanto, se espera que las composiciones de la invención sean eficaces en el tratamiento tópico o prevención de infecciones o enfermedades provocadas por bacterias Gram-positivas. De acuerdo con lo anterior en ciertas realizaciones el PEG está presente en una cantidad de al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90% o al menos 95% en peso de la composición.

En ciertas realizaciones la composición de la invención comprende un glicol. El glicol es de forma adecuada un glicol no polimérico. Los glicoles no poliméricos son glicoles que no comprenden fracciones poliméricas que están presentes por ejemplo polietilenglicol. Los glicoles no poliméricos particulares incluyen, por ejemplo, un alquilenglicol (por ejemplo, un alquilenglicol C^2-8o particularmente un alquilenglicol C²-⁶), especialmente propilenglicol. En estas realizaciones la composición no acuosa comprende el glicol, el PEG y la salicilanilida halogenada y opcionalmente otros excipientes. La presencia de un glicol no polimérico (por ejemplo, propilenglicol es particularmente adecuada cuando la composición de la invención está en la forma de una composición de pomada o crema tópica.

En ciertas realizaciones las composiciones de la invención comprenden un glicol no polimérico (por ejemplo, propilenglicol) en una cantidad de al menos: 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50% o 55% en peso de la composición. Por ejemplo, la composición comprende desde 5% hasta 35%, o desde 8% hasta 30%, o desde 10% hasta 30% en peso glicol (por ejemplo propilenglicol).

En ciertas realizaciones la composición de la invención está en la forma de un gel tópico no acuoso y comprende adicionalmente un agente de formación de gel. Se establecen a continuación ejemplos de agentes de formación de gel que se pueden utilizar en las composiciones.

En ciertas realizaciones la composición comprende un mejorador de la absorción además del PEG y la salicilanilida halogenada. Se divulgan mejoradores de la absorción adecuados en la descripción detallada a continuación. Puede ser que el mejorador de la absorción se selecciona de 2-(2-etoxietoxi)etanol (Transcutol) y glicerol.

También se proporciona una composición tópica no acuosa que comprende:

(ii) polietilenglicol (PEG) con un peso molecular promedio de 600 o menos;

(iii) un mejorador de la absorción seleccionado de 2-(2-etoxietoxi)etanol (Transcutol) y glicerol.

También se proporciona una composición tópica no acuosa que comprende:

(i) desde aproximadamente 0.1% hasta aproximadamente 10% en peso (por ejemplo, desde aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 5% en peso) de una salicilanilida halogenada seleccionada de niclosamida, rafoxanida, oxiclozanida y closantel, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y

(ii) al menos 10% (por ejemplo, al menos 20%, 30%, 40%, 50% o 60%) en peso polietilenglicol (PEG) con un peso molecular promedio de 600 o menos;

(iii) desde aproximadamente 1% hasta aproximadamente 40% (por ejemplo aproximadamente 5% a aproximadamente 20%) en peso de un mejorador de la absorción seleccionado de 2-(2-etoxietoxi)etanol (Transcutol) y glicerol o una mezcla de los mismos.

También se proporciona una composición tópica no acuosa que comprende:

(iii) desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 30% (por ejemplo, aproximadamente 10 a aproximadamente 25%) en peso propilenglicol; y

(iv) desde aproximadamente 1% hasta aproximadamente 40% (por ejemplo aproximadamente 5% a aproximadamente 20%) en peso de un mejorador de la absorción seleccionado de 2-(2-etoxietoxi)etanol (Transcutol) y glicerol o una mezcla de los mismos.

Los inventores han encontrado que las composiciones tópicas de la invención que comprenden más de 60% en peso de PEG proporcionan un efecto antibacteriano mejorado en comparación con el uso de PEG solo o una salicilanilida halogenada (por ejemplo, niclosamida) sola.

De acuerdo con lo anterior un aspecto adicional de la invención proporciona una composición tópica no acuosa que comprende:

(i) una salicilanilida halogenada, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y

(ii) más del 60 % en peso de un polietilenglicol (PEG), en el que el peso molecular promedio del PEG es menor que 600. También se proporciona una composición tópica no acuosa que comprende:

(i) una salicilanilida halogenada seleccionada de niclosamida, rafoxanida, oxiclozanida y closantel, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y

(ii) más del 60 % en peso de un polietilenglicol (PEG), por ejemplo un PEG con un peso molecular promedio de 600 o menos.

También se proporciona una composición tópica no acuosa que comprende:

(ii) más del 60 % en peso de un polietilenglicol (PEG), en el que el peso molecular promedio del PEG es 600 o menos. En ciertas realizaciones la composición de la invención está en la forma de un gel tópico no acuoso. De acuerdo con lo anterior se proporciona una composición de gel tópico no acuoso que comprende:

(i) una salicilanilida halogenada, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) más del 60 % en peso de un PEG, en el que el peso molecular promedio del PEG es menor que 600; y

(iii) un agente de formación de gel.

También se proporciona una composición de gel tópico no acuoso que comprende:

(i) una salicilanilida halogenada seleccionada de niclosamida, rafoxanida, y oxiclozanida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) polietilenglicol (PEG) con un punto de fusión de menos de 40 °C; y

(iii) un agente de formación de gel.

De forma adecuada el PEG es un PEG con un peso molecular promedio de 800 o menos, preferiblemente 600 o menos. También se proporciona una composición de gel tópico no acuoso que comprende:

(i) una salicilanilida halogenada seleccionada de niclosamida, rafoxanida, oxiclozanida y closantel, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) más del 60 % en peso de un PEG, en el que el peso molecular promedio del PEG es 600 o menos; y

(iii) un agente de formación de gel.

Cuando la composición está en la forma de una composición de gel tópico no acuoso, el agente de formación de gel, por ejemplo, puede ser un carbómero. Puede ser que el agente de formación de gel sea un carbómero seleccionado del grupo que consiste en carbómero 910, carbómero 934P, carbómero 940GE, carbómero 941GE, carbómero 971P y carbómero 974P. Puede ser que el agente de formación de gel sea carbómero 974P. Otros ejemplos de agentes de formación de gel se divulgan en la descripción detallada a continuación.

Puede ser que la salicilanilida halogenada, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma sea un compuesto de la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; en la que el compuesto de la fórmula (I) es como se describe en la descripción detallada a continuación.

Puede ser que la salicilanilida halogenada, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma sea un compuesto de la fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; en la que el compuesto de la fórmula (II) es como se describe en la descripción detallada a continuación.

Puede ser que la salicilanilida halogenada se selecciona del grupo que consista en niclosamida, closantel, oxiclozanida y rafoxanida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. Puede ser que la salicilanilida halogenada sea niclosamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. Puede ser que la salicilanilida halogenada sea niclosamida o un hidrato de la misma. Puede ser que la salicilanilida halogenada sea niclosamida. En particular la salicilanilida halogenada es niclosamida anhidra.

Puede ser que la salicilanilida halogenada sea disuelta en la composición no acuosa, por ejemplo, la composición no acuosa (por ejemplo una composición de gel no acuosa descrita en el presente documento). En otras realizaciones una proporción de la salicilanilida halogenada se disuelve en la composición no acuosa y una proporción se dispersa en la composición.

Puede ser que la salicilanilida halogenada esté presente en una cantidad de hasta 10% en peso de la composición, por ejemplo, desde 0.05% hasta 4.5% en peso de la composición, desde 1% hasta 3% en peso, desde 1.5% hasta 4.5% en peso. Por ejemplo, a aproximadamente 2% en peso de la composición o a aproximadamente 4% en peso de la composición.

Puede ser que la composición de gel no acuosa comprenda o consista en:

(i) 0.1% a 5% en peso de niclosamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) 70% a 98% (por ejemplo 85% a 98%) en peso PEG, en el que el peso molecular promedio del PEG es 600 o menos; y

(iii) un agente de formación de gel.

Puede ser que la composición de gel no acuosa comprenda o consista en:

(ii) 85% a 98% en peso PEG, en el que el peso molecular promedio del PEG es 600 o menos; y

(iii) 0.5% a 10% en peso de agente de formación de gel.

Puede ser que la composición de gel no acuosa comprenda o consista en:

(i) 0.1% a 4.5% en peso de niclosamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) 86% a 98% en peso PEG, en el que el peso molecular promedio del PEG es 600 o menos, por ejemplo, PEG 400; y (iii) 0.5% a 10% en peso de agente de formación de gel.

Puede ser que la composición de gel no acuosa comprenda o consista en:

(i) 0.1% a 3% (por ejemplo 1.5% a 2.5%, o aproximadamente 2%) en peso de niclosamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) 94% a 98% en peso de PEG 400; y

(iii) un agente de formación de gel.

Puede ser que la composición de gel no acuosa comprenda o consista en:

(ii) 94% a 98% en peso de PEG 400; y

(iii) 1% a 3% en peso de un agente de formación de gel.

Puede ser que la composición de gel no acuosa comprenda o consista en:

(ii) 70% a 98% (por ejemplo 86% a 98 %) en peso PEG 400; y

(iii) 0.5% a 10% en peso de un carbómero agente de formación de gel.

Puede ser que la composición de gel no acuosa comprenda o consista en:

(i) 1.5% a 4.5% en peso (por ejemplo, aproximadamente 2% o aproximadamente 4%) en peso de niclosamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) 70% a 98% (por ejemplo 86% a 98%) en peso PEG 400; y

(iii) 0.5% a 10% en peso de un carbómero agente de formación de gel.

Puede ser que la composición de gel no acuosa comprenda o consista en:

(i) 0.1% a 3% (por ejemplo 1% a 3%, 1.5% a 2.5%, o aproximadamente 2%) en peso de niclosamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) 70% a 98% (por ejemplo 94% a 98%) en peso de PEG 400; y

(iii) 1% a 3% en peso de un carbómero, por ejemplo, carbómero 974P.

Puede ser que la composición de gel no acuosa comprenda o consista en:

(i) 3.5% a 4.5% (por ejemplo, aproximadamente 4%) en peso de niclosamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) 70% a 92.5% (por ejemplo 92.5% a 95.5%) en peso de PEG 400; y

(iii) 1 a 3% en peso de un carbómero, por ejemplo, carbómero 974P.

Puede ser que cualquiera de las composiciones no acuosas descritas en el presente documento no comprendan alcohol monohidroxi alquilo de cadena corta (por ejemplo, alcohol monohidroxi alquilo C¹-⁶, o más particularmente un alcohol monohidroxi alquilo C^1-4tal como etanol, propanol o isopropanol), o alcohol bencílico. Por ejemplo, la composición no contiene metanol, etanol, propanol o alcohol isopropílico. Por ejemplo, la composición no comprende etanol o alcohol bencílico.

Puede ser que las composiciones no acuosas descritas en el presente documento (por ejemplo, una composición de gel no acuosa) no comprendan etanol. Por lo tanto, la composición puede ser una composición no acuosa, sin etanol. De forma adecuada la composición puede ser una composición de gel tópico no acuoso, sin de etanol.

Puede ser que las composiciones no acuosas descritas en el presente documento no comprendan un alcanol amina, por ejemplo, en la que la composición no comprende trietanolamina.

Puede ser que la composición no acuosa proporcione un pH local mayor de 4.5 en el sitio de infección luego de aplicación tópica de la composición. Puede ser que la composición no acuosa proporcione un pH local de menos de 6 en el sitio de infección luego de aplicación tópica de la composición. De forma adecuada la composición no acuosa proporciona un pH local en el rango desde aproximadamente 4.5 hasta aproximadamente 6 en el sitio de infección luego de aplicación tópica de la composición (por ejemplo, aplicación tópica a la piel infectada con bacterias Gram-positivas).

Se espera que las composiciones no acuosas, por ejemplo, las composiciones de gel no acuosas, de acuerdo con la presente invención proporcionen un número de propiedades ventajosas. Ciertas composiciones no acuosas de la invención pueden proporcionar alta permeabilidad de la salicilanilida halogenada en la piel luego de aplicación tópica, proporcionando de esta manera alto contenido de fármacos locales si la dermis, epidermis y/estrato córneo y por lo tanto proporcionan un potente efecto antibacteriano en la piel en el sitio de infección. Se espera que la administración tópica de la composición de la invención (por ejemplo, una composición de gel no acuosa) resulte en exposición sistémica muy baja a las salicilanilidas halogenadas, reduciendo de esta manera la probabilidad de efectos secundarios sistémicos indeseables.

Ciertas composiciones no acuosas de la invención exhiben buena tolerabilidad cuando se aplican tópicamente a un sitio de infección, tal como la piel. Por ejemplo, las composiciones exhiben de forma adecuada efectos no deseados aceptables, o preferiblemente ninguno, sobre la piel después de aplicación tópica, tales como inflamación o sensibilización de la piel, por ejemplo, sequedad, exfoliación, picazón, sensación de ardor o eritema de la piel. Un perfil de tolerabilidad favorable puede proporcionar tratamientos tópicos que sean adecuados para regímenes de tratamiento tópico prolongados con un bajo riesgo de efectos secundarios locales indeseables que, si están presentes, podrían reducir el cumplimiento del paciente y/o exacerbar los efectos de una infección de la piel (por ejemplo, que surja por un paciente que se rasca una lesión infectada).

Las composiciones de la invención (por ejemplo, las composiciones de gel no acuosas) descritas en este documento pueden proporcionar propiedades de estabilidad química y física ventajosas, particularmente cuando se comparan con composiciones de base acuosa que comprenden una salicilanilida halogenada. Dichas ventajas pueden comprender una o más de tasas bajas o nulas de precipitación del fármaco de la composición durante el almacenamiento y/o luego de la aplicación tópica a la piel. Las composiciones no acuosas de la invención son de forma adecuada químicamente estables frente a la degradación de la salicilanilida halogenada durante almacenamiento o uso de la composición no acuosa. Por ejemplo, las composiciones pueden ser térmicamente estables y/o estables a la luz durante almacenamiento y uso. Como se ilustra en los ejemplos del presente documento, algunas de las composiciones de gel no acuosas de la invención son fotoestables.

El tratamiento exitoso de una infección requiere la exposición al agente antibacteriano durante un tiempo suficiente y en una concentración suficiente para asegurar que las células bacterianas se reduzcan o se erradiquen del sitio de la infección. Sin embargo, un problema asociado con el tratamiento tópico de infecciones, por ejemplo, infecciones de la piel, es el escaso cumplimiento del paciente con el régimen de tratamiento prescrito. El cumplimiento del paciente es un problema particular en los regímenes de tratamiento tópico, porque los pacientes a menudo se olvidan de aplicar el tratamiento tópico, especialmente hacia el final del régimen de tratamiento, cuando comienzan a mejorar los signos y síntomas de la infección. Un cumplimiento deficiente, por ejemplo, la aplicación de la dosis incorrecta o la omisión de dosis, puede dar como resultado concentraciones variables del agente antibacteriano y un mayor riesgo de aparición de cepas resistentes, lo que podría dar como resultado el fracaso del tratamiento. Se espera que la baja frecuencia de mutaciones que confieren resistencia a las salicilanilidas halogenadas reduzca el riesgo de aparición de resistencia incluso si el cumplimiento del paciente es deficiente. Por tanto, se espera que las composiciones no acuosas de la invención que comprenden una salicilanilida halogenada proporcionen un tratamiento tópico eficaz de las infecciones bacterianas.

Un aspecto adicional de la invención proporciona a composición no acuosa de la invención para uso en la prevención o tratamiento tópico de una infección o enfermedad provocada por bacterias Gram-positivas.

Un aspecto adicional de la invención proporciona un método para tratar o prevenir una enfermedad o infección provocada por bacterias Gram-positivas en un sujeto, el método comprende administrar tópicamente al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición no acuosa al sujeto.

Otro aspecto de la invención proporciona procesos para la preparación de la composición de gel no acuosa.

Aspectos y características adicionales de la invención se exponen en la descripción detallada a continuación.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra datos microbiológicos de niclosamida probada contra cepas de MRSA, MSSA y S. pyogenes. La MIC de niclosamida fue < 0.4 |jg/ml contra cepas de S. aureus, que incluyen las cepas resistentes a ácido fusídico (*) y las cepas resistentes a mupirocina (£), y < 3.2 jg/m l contra cepas de Streptococcus pyogenes.

La Figura 2 muestra una curva de tiempo-extinción de MRSA 01 incubado con niclosamida (MIC x 10). La niclosamida tuvo un efecto bacteriostático contra MRSA 01 bajo las condiciones probadas (inóculo inicial: 7 log-io ufc/ml; niclosamida: 4 jg/m l [MIC x 10]).

La Figura 3 muestra las curvas de dosis-respuesta de niclosamida, ácido fusídico y mupirocina contra S. aureus con cepas resistentes a meticilina (A), cepa resistente a ácido fusídico (B) y cepa resistente a mupirocina (C). ATX 2.1 en la Figura 3 es niclosamida.

La Figura 4 muestra el crecimiento de S. aureus a diferentes pH en función de la concentración de niclosamida (promedio de 3 repeticiones). El crecimiento de S. aureus sin niclosamida (0 jg/m l) es comparable desde pH 7.4 hasta pH 6.0. El crecimiento sin niclosamida se inhibe ligeramente a pH 5.5 y se inhibe completamente con pH igual o inferior a 5.0.

La Figura 5 muestra la estabilidad al almacenamiento de las composiciones de gel no acuosas F1 y F4 que comprenden niclosamida después de almacenamiento a 25 °C y 40 °C durante 3 meses.

La Figura 6 muestra la estabilidad al almacenamiento de las composiciones de gel no acuosas F1 y F4 que comprenden niclosamida después de exposición a la luz durante 24 horas. (n = 3). Los resultados se expresan como promedios de ± DE.

La Figura 7 muestra los resultados de un estudio de absorción y penetración percutánea in vitro de la permeación de las composiciones de gel no acuosas F1 y F4 que comprenden niclosamida a través de la piel humana con el tiempo (n = 6). La Figura 7 muestra la niclosamida acumulada mediana en el fluido receptor para las composiciones probadas F1 y F4.

La Figura 8 muestra la reducción de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de MRSA sobre la piel de ratón después de aplicación tópica dos veces al día de la formulación F1 durante tres días en comparación con un control positivo, la aplicación de PEG 400 solo y la aplicación tópica de una composición comparadora comprende una composición de crema acuosa que comprende 2% en peso de niclosamida”. Los datos muestran el efecto beneficioso de la niclosamida y el PEG 400 cuando se utilizan en combinación en la composición de gel.

La Figura 9 muestra la concentración de niclosamida en la epidermis de un minicerdo tratado tópicamente durante 28 días con una composición de gel que comprende 4% en peso de niclosamida, PEG 400 y un carbómero (Formulación B) y la concentración media de niclosamida en la epidermis obtenida con las otras composiciones no acuosas probadas que contienen 2% en peso de niclosamida (Formulaciones D, E, F, G y H, marcadas como “otras formulaciones anhidras” en la Figura 9). El eje y en la Figura 9 muestra la concentración de niclosamida en la epidermis en jg/mL.

Descripción detallada

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones de esta especificación, las palabras “comprenden” y “contienen” y sus variaciones significan “que incluyen, pero no se limitan a,” y no pretenden (ni excluyen) otras fracciones, aditivos, componentes, enteros o etapas. A lo largo de la descripción y las reivindicaciones de esta especificación, el singular abarca el plural a menos que el contexto requiera lo contrario. En particular, cuando se utiliza el artículo indefinido, se debe entender que la especificación contempla tanto la pluralidad como la singularidad, a menos que el contexto requiera lo contrario.

Los rasgos, enteros, características, compuestos, fracciones químicas o grupos descritos junto con un aspecto, realización o ejemplo particular de la invención se deben entender como aplicables a cualquier otro aspecto, realización o ejemplo descrito en este documento a menos que sea incompatible con el mismo. Todas las características divulgadas en esta especificación (que incluyen las reivindicaciones, resumen y dibujos acompañantes) y/o todas las etapas de cualquier método o proceso divulgados de esta manera, se pueden combinar en cualquier combinación, excepto combinaciones en las que al menos algunas de dichas características y/o etapas son mutuamente excluyentes. La invención no se limita a los detalles de ninguna de las realizaciones anteriores. La invención se extiende a cualquier novedad, o cualquier combinación novedosa, de las características descritas en esta especificación (que incluyen las reivindicaciones, resúmenes y dibujos acompañantes), o a cualquier novedad, o combinación novedosa, de las etapas de cualquier método o proceso divulgado de esta manera.

Se dirige la atención del lector a todos los papeles y documentos que se archivan al mismo tiempo o antes de esta especificación en relación con esta solicitud y que están abiertos a la inspección pública con esta especificación, y se incorporan los contenidos de todos esos papeles y documentos en el presente documento como referencia.

Definiciones

En el contexto de la presente solicitud e invención, se aplican las siguientes definiciones:

El término “Staphylococcus aureus” o “S. aureus” como se utiliza en el presente documento, sin descripción adicional, se refiere a cualquier cepa de bacterias gram-positivas clasificadas como Staphylococcus aureus, y que se han asociado con varias infecciones, que incluyen neumonía, osteomielitis, artritis, endocarditis, sepsis y síndrome de choque tóxico, además de causar infecciones menos graves de la piel y tejidos blandos.

El término “Staphylococcus aureus resistente a meticilina” o “MRSA” como se utiliza en este documento incluye cepas de Staphylococcus aureus que son resistentes a meticilina y también se pueden relacionar ampliamente con cepas de bacterias Gram-positivas (por ejemplo, bacterias productoras de betalactamasas) que son resistentes a los antibióticos que entran en la clasificación general de penicilinas. Meticilina es el nombre común del ácido (2S,5R,6R)-6-[(2,6-dimetoxibenzoil)amino]-3,3-dimetil-7-oxo-4-tia-1-azabi-ciclo[3.2.0]heptano-2-carboxílico, que es un antibiótico de betalactama de espectro estrecho que se ha utilizado para tratar infecciones provocadas por bacterias Gram-positivas susceptibles (por ejemplo, que incluyen Staphylococcus aureus).

La referencia a “una salicilanilida halogenada” tiene la intención, a menos que se indique lo contrario, de incluir cualquiera de las salicilanilidas halogenadas divulgadas en este documento, que incluyen closantel, rafoxanida, oxiclozanida y niclosamida y derivados de las mismas, incluyendo sales, hidratos y ésteres de las mismas. Por ejemplo, una salicilanilida halogenada seleccionada del grupo que consiste en closantel, rafoxanida, oxiclozanida y niclosamida o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas, y particularmente niclosamida. A menos que se indique específicamente lo contrario en el presente documento, la referencia a una salicilanilida halogenada, por ejemplo, seleccionada del grupo que consiste en closantel, rafoxanida, oxiclozanida y niclosamida o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas, pretende abarcar hidratos de la salicilanilida halogenada así como hidratos de sales de la salicilanilida halogenada.

El término “sal farmacéuticamente aceptable” se refiere a sales que retienen la eficacia biológica y las propiedades de los compuestos descritos en este documento y que no son biológicamente o de otro modo indeseables. Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica. Las sales particulares incluyen sales de etanolamina o piperazina. De acuerdo con lo anterior, puede ser que una referencia a una sal de una salicilanilida halogenada en el presente documento pueda referirse a una sal farmacéuticamente aceptable de la salicilanilida halogenada.

El término “solvato” se utiliza en este documento para referirse a un complejo de soluto, tal como un compuesto o sal del compuesto, y un solvente. Si el solvente es agua, el solvato puede denominarse hidrato, por ejemplo, monohidrato, dihidrato, trihidrato, etc., dependiendo del número de moléculas de agua presentes por molécula de sustrato.

El término “halo” o “halógeno” se refiere a uno de los halógenos, grupo 17 de la tabla periódica. En particular, el término se refiere a flúor, cloro, bromo y yodo. Preferiblemente, el término se refiere a flúor o cloro.

El término Cm-Cn se refiere a un grupo con m a n átomos de carbono.

El término “alquilo C-i-Ca” se refiere a una cadena de hidrocarburo lineal o ramificada que contiene 1,2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n -butilo, sec-butilo, tert-butilo, n-pentilo y n-hexilo. “Alquilo Ci-C⁴” se refiere de manera similar a dichos grupos que contienen hasta 4 átomos de carbono. Los grupos alquilo pueden ser no sustituidos o sustituidos con uno o más sustituyentes. Los sustituyentes para el grupo alquilo pueden ser halógeno, por ejemplo, flúor, cloro, bromo y yodo, OH, alcoxi C¹-C⁴.

La referencia a un “éster” de la salicilanilida halogenada se refiere a un éster (RC(O)O- o ROC(O)-) formado con un grupo hidroxi o carboxi disponible sobre la salicilanilida halogenada. Por ejemplo, un éster formado por esterificación del grupo 2-hidroxi de la benzamida en una salicilanilida halogenada. El éster se puede dividir después de la aplicación tópica de la salicilanilida para proporcionar el grupo hidroxi o carboxi libre de la molécula original, proporcionando de esta manera un profármaco de la salicilanilida halogenada. El éster puede ser, por ejemplo, un éster de alquilo Ci-a.

La referencia a un “alcohol monoxidroxi alquilo” se refiere a un alcohol de alquilo que tiene un grupo hidroxilo, ejemplos representativos de alcoholes monoxidroxi alquilo incluyen alcoholes monoxidroxi alquilo de cadena corta, particularmente alcoholes monohidroxi Ci-a tales como metanol, etanol, propanol e isopropanol.

La referencia a una “alcanol amina” se refiere a una amina N-sustituida con uno, dos o tres fracciones de alcohol de alquilo. Ejemplos representativos incluyen etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, isopropanolamina y diisopropanolamina.

La referencia a “PEG x00” en el presente documento significa un polietilenglicol con un peso molecular promedio de x00. Por ejemplo, PEG 400 se refiere a un PEG con un peso molecular promedio de 400. A menos que se indique lo contrario, la referencia en este documento al peso molecular del polímero, tal como un PEG, es una referencia al peso molecular promedio numérico (Mn) del polímero. El peso molecular promedio numérico se puede medir utilizando métodos bien conocidos, por ejemplo,

mediante cromatografía de permeación en gel o análisis de grupo terminal de 1H RMN. Dichos métodos incluyen el análisis de GPC como se describe en Guadalupe et al (Handbook of Polymer Synthesis, Characterization, and Processing, Primera edición, 2013) y el análisis de grupo terminal descrito en, por ejemplo, Page et al Anal. Chem., 1964, 36 (10), pp.

1981-1985.

La salicilanilida halogenada se puede aplicar tópicamente en forma de un profármaco de la salicilanilida halogenada. Como se utiliza en este documento, el término “profármaco” se refiere a una fracción unida covalentemente sobre la salicilanilida halogenada que modifica las propiedades biológicas y/o físicas del compuesto. La salicilanilida halogenada activa se libera después de la aplicación tópica de la composición de compuesto de profármaco de la invención. Se pueden formar los profármacos, por ejemplo, mediante la modificación de un grupo funcional adecuado en el compuesto original, por ejemplo, un grupo carboxílico o hidroxi se puede modificar para formar un éster que se divide después de aplicación tópica del profármaco. Se conocen varias estrategias de profármacos y se describen, por ejemplo, en los siguientes documentos:

a) Methods in Enzymology, vol. 42, p. 309-396, editado por K. Widder, et al. (Academic Press, 1985);

b) Design of Pro-drugs, editado por H. Bundgaard, (Elsevier, 1985);

c) A Textbook of Drug Design and Development, editado por Krogsgaard-Larsen

d) H. Bundgaard, Capítulo 5 “Design and Application of Pro-drugs", por H. Bundgaard p. 113-191 (1991); and

e) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38 (1992).

A menos que se indique lo contrario, la referencia en el presente documento a un “% en peso de una salicilanilida halogenada o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma” pretende referirse a la cantidad de salicilanilida de ácido libre (es decir, forma no sal). Por ejemplo, la referencia a una composición que comprende “5% en peso de niclosamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma” se refiere a una composición que comprende 5% en peso de niclosamida como ácido libre. De acuerdo con lo anterior, cuando dicha composición comprende una sal de niclosamida, la cantidad absoluta de sal de niclosamida en la composición será superior al 5% en peso en vista del contraión de sal que también estará presente en la composición.

El término “gel” se utiliza en el presente documento para hacer referencia a una sustancia semisólida, aparentemente homogénea, que puede ser elástica y gelatinosa (como en la gelatina). El gel comprende una matriz polimérica o inorgánica tridimensional dentro de la cual se dispersa una fase líquida. La matriz del gel comprende una red de polímeros o copolímeros entrecruzados física o químicamente que se hinchan, pero no se disuelven en presencia de un solvente (por ejemplo, el PEG de bajo peso molecular). El entrecruzamiento dentro de la matriz de gel puede ser un entrecruzamiento físico (por ejemplo, mediante un enlace de hidrógeno o un entrecruzamiento iónico) o puede estar covalentemente entrecruzado. Generalmente, en las composiciones de gel no acuosas descritas en este documento, la salicilanilida halogenada se disuelve en el PEG y la solución de PEG/salicilanilida halogenada se dispersa dentro de la red polimérica entrecruzada del gel. Los geles son generalmente de apariencia clara, sin embargo, también se contemplan geles turbios. Generalmente, el agente formador de gel, por ejemplo, el polímero formador de gel, está presente en el gel en una cantidad desde aproximadamente 0.5 hasta 15% en peso, normalmente 0.5 a 2% en peso. La USP define los geles como un sistema semisólido que consiste en una dispersión formada por pequeñas partículas inorgánicas o grandes moléculas orgánicas que encierran e interpenetradas por un líquido.

Las composiciones (por ejemplo, las composiciones de gel) de la presente invención son composiciones “no acuosas”, lo que significa que la composición es anhidra y, por tanto, sustancialmente libre de agua. Por ejemplo, las composiciones divulgadas en el presente documento que incluyen las composiciones de gel contienen menos del 5%, menos del 1% o de forma adecuada menos del 0.01%, preferiblemente menos del 0.001% en peso de agua. Preferiblemente, las composiciones de la invención son anhidras y no contienen agua detectable.

Los solventes orgánicos próticos son aquellos que son capaces de formar enlaces de hidrógeno. Los ejemplos más comunes de solventes orgánicos próticos incluyen, pero no se limitan a, alcoholes y ácidos carboxílicos.

Los solventes orgánicos apróticos son aquellos que no son capaces de formar enlaces de hidrógeno. Los solventes orgánicos apróticos comunes incluyen, pero no se limitan a éteres, dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO) y acetonitrilo.

El coeficiente de partición es una relación de concentraciones de compuesto no ionizado entre las dos fases líquidas. El logaritmo de la relación de las concentraciones del soluto (fármaco) no ionizado en los solventes se denomina logP. Cuando uno de los solventes es agua y el otro es un solvente no polar (generalmente octanol), entonces el valor logP se conoce como una medida de lipofilia.

El término “tratamiento” en este documento abarca tanto el tratamiento terapéutico como profiláctico, de una afección infecciosa o no infecciosa, en un mamífero tal como un humano o un animal, pero en particular un humano. Puede implicar la erradicación total o parcial de la afección, la eliminación o mejora de los síntomas asociados, la detención del desarrollo posterior de la afección y/o la prevención o la reducción del riesgo de aparición posterior de la afección. El tratamiento incluye, por ejemplo (i) la prevención de la enfermedad provocada por bacterias Gram-positivas, por ejemplo Staphylococcus aureus y/o Streptococcus pyogenes y/o Propionibacterium acnes (ii) la supresión de la enfermedad provocada por bacterias, por ejemplo Staphylococcus aureus y/o Streptococcus pyogenes y/o Propionibacterium acnes; y (iii) el alivio de la enfermedad provocada por bacterias, por ejemplo Staphylococcus aureus y/o Streptococcus pyogenes y/o Propionibacterium acnes; v) la erradicación de una colonización no sintomática por Staphylococcus aureus de un área del cuerpo, (v) la erradicación de bacterias Gram-positivas, por ejemplo, infección sintomática por Staphylococcus aureus y/o Streptococcus pyogenes y/o Propionibacterium acnes, (vi) la erradicación de bacterias Gram positivas, por ejemplo, Staphylococcus aureus y/o Streptococcus pyogenes y/o Propionibacterium acnes; de un área del cuerpo afectada por otra enfermedad que podría permitir el establecimiento de una infección más fácilmente que en un área no afectada por la enfermedad, por ejemplo, un área de la piel afectada por eccema, dermatitis atópica o úlcera diabética, (vii) la supresión de la enfermedad provocada por bacterias Gram-positivas, por ejemplo Staphylococcus aureus y/o Streptococcus pyogenes y/o Propionibacterium acnes; de un área del cuerpo afectada por otra enfermedad no infecciosa que permite el establecimiento de una infección más fácilmente, que en un área no afectada por la enfermedad, por ejemplo, un área de la piel afectada por eccema o dermatitis atópica.

La cepa bacteriana que provoca una infección se puede caracterizar por una frecuencia de mutación espontánea de menos de 10'6, como menos de 10'7 o 10'8, tal como menos de 4 x 10'9, por ejemplo, menos de 1 x 10'9. El tratamiento implicará normalmente el uso de salicilanilidas halogenadas closantel, rafoxanida, oxiclozanida o niclosamida o derivados de las mismas contra bacterias Gram-positivas tales como Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. Un ejemplo que es de especial interés es la niclosamida.

Cuando se administra un compuesto o sal descritos en esta especificación para tratar un trastorno, una “cantidad terapéuticamente eficaz” es una cantidad suficiente para reducir o aliviar completamente los síntomas u otros efectos perjudiciales del trastorno; curar el trastorno; revertir, detener por completo o ralentizar el progreso del trastorno; o reducir el riesgo de que el trastorno empeore.

La referencia a “tasa de desarrollo de resistencia”, “frecuencia de mutación” o “frecuencia de mutación” en el presente documento indica la frecuencia in vitro a la que surgen mutantes detectables en una población bacteriana en presencia de una concentración de antibiótico dada. La frecuencia de mutación se calcula como el número de colonias resistentes por inóculo después de 48 horas de incubación a 37 °C a una determinada concentración de antibiótico. A menos que se indique lo contrario, la frecuencia de mutación indicada en este documento es la frecuencia de mutación calculada en la MIC x1 del antibiótico. La frecuencia de mutación se puede determinar utilizando métodos estándar descritos Drago et al. The Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 56(2), (2005) 353-359). La tasa de desarrollo de resistencia se cuantifica como la frecuencia de mutantes espontáneos en una población de bacterias que es capaz de resistir una concentración determinada del antibiótico. Por ejemplo, la frecuencia de mutación puede ser de 10'9 si en promedio, 1 célula de cada 109 células puede sobrevivir a una concentración de antibiótico correspondiente a 1x MIC.

La concentración inhibidora mínima (MIC) es la concentración más baja de un antibacteriano que inhibirá el crecimiento visible de un microorganismo después de incubación durante la noche.

La dosis letal mediana, LD⁵⁰(abreviatura de “dosis letal, 50%”) se refiere a la dosis de una sustancia requerida para extinguir a la mitad de los miembros de una población probada después de una duración de prueba especificada. Las cifras de LD⁵⁰se utilizan con frecuencia como indicador general de la toxicidad aguda de una sustancia.

El índice terapéutico (relación terapéutica) se define como la cantidad de un agente terapéutico que causa el efecto terapéutico medido como MIC con respecto a la cantidad que provoca la muerte en estudios con animales medido como LD50.

La unidad formadora de colonias (CFU) es una estimación aproximada del número de células bacterianas viables en una muestra. Viable se define como la capacidad de la célula de multiplicarse mediante fisión binaria bajo condiciones controladas.

Como se utiliza en el presente documento, el término “ lesión” se refiere, por ejemplo, a pústulas, pápulas, comedones abiertos y cerrados y nódulos. Las lesiones inflamatorias incluyen, pero no se limitan a, pústulas, pápulas y nódulos. Las lesiones no inflamatorias incluyen, pero no se limitan a, comedones abiertos y cerrados. Un experto en la técnica reconocerá que los métodos de la presente invención son útiles para tratar otros tipos de lesiones de acné vulgaris.

Un “medicamento tópico” es un medicamento que se aplica a superficies corporales tal como la piel o las membranas mucosas para tratamiento. Los medicamentos tópicos difieren de muchos otros tipos de fármacos porque su mal manejo puede provocar ciertas complicaciones en un paciente o administrador del fármaco. De forma adecuada, las composiciones de gel no acuosas descritas en este documento son epicutáneas, lo que significa que se aplican directamente sobre la piel. Los medicamentos tópicos también se pueden aplicar a la superficie de tejidos distintos de la piel, por ejemplo, a la superficie de un diente, por vía rectal o vaginal. De forma adecuada, la composición de gel se aplica tópicamente por vía epicutánea.

La referencia a la “composición de la invención”, una “composición de gel no acuosa” de la invención o una “composición de gel” de la invención pretende ser una referencia a cualquiera de las composiciones no acuosas descritas en el presente documento en la descripción, ejemplos y reivindicaciones a menos que se indique lo contrario.

La referencia a “aproximadamente” en el contexto de un valor numérico pretende abarcar el valor /-10%. Por ejemplo, aproximadamente el 20% incluye el rango desde el 18% hasta el 22%.

Composiciones no acuosas

En ciertas realizaciones la composición tópica no acuosa de la invención comprende:

(ii) polietilenglicol (PEG) con un punto de fusión de menos de 40 °C;

con la condición de que cuando la composición comprende niclosamida o rafoxanida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, la composición comprende adicionalmente un glicol no polimérico (por ejemplo, un alquilenglicol, por ejemplo un alquilenglicol C^2-8y especialmente propilenglicol).

En ciertas realizaciones la composición no acuosa comprende:

(i) una salicilanilida halogenada (por ejemplo, niclosamida, rafoxanida, oxiclozanida y closantel), o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y

(ii) más del 60% en peso de un PEG, preferiblemente en el que el peso molecular promedio del PEG es 800 o menos y particularmente 600 o menos. Por ejemplo, el peso molecular promedio del PEG es menor que 800. Por ejemplo, el peso molecular promedio del PEG es menor que 400.

En ciertas realizaciones la composición tópica no acuosa de la invención comprende propilenglicol. De acuerdo con lo anterior la composición de la invención puede comprender:

(ii) polietilenglicol (PEG) con un punto de fusión de menos de 40 °C; y

(iii) propilenglicol.

(i) 0.1 a 5% en peso de una salicilanilida halogenada seleccionada de niclosamida, rafoxanida, oxiclozanida y closantel, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) polietilenglicol (PEG) con un punto de fusión de menos de 40 °C; y

(iii) 0.5 a 30% (por ejemplo 5 a 25%) en peso propilenglicol.

Ejemplos de PEG, preferiblemente con un peso molecular promedio de menos de 600, que se pueden utilizar en la composición no acuosa se describen en más detalle a continuación bajo la sección “Polietilenglicol (PEG)”

Puede ser que la composición no acuosa comprenda hasta 10%, hasta 20%, hasta 30%, hasta 35%, hasta 40%, hasta 45%, hasta 50% o hasta 55% en peso de PEG. Por ejemplo, en el que el límite inferior de PEG es 1% en peso y el límite superior es cualquiera de los valores establecidos en este párrafo. Por ejemplo, en el que el límite inferior de p Eg es 5% en peso y el límite superior es cualquiera de los valores establecidos en este párrafo.

En ciertas realizaciones se ha encontrado que una alta concentración de PEG en la composición proporciona composiciones tópicas no acuosas con propiedades ventajosas, por ejemplo, una o más de actividad antibacteriana mejorada, penetración transdérmica mejorada y/o buena tolerabilidad cuando se aplica tópicamente a la piel. Ciertas composiciones descritas en el presente documento proporcionan una alta concentración de salicilanilida halogenada en los tejidos de la piel (por ejemplo, la dermis y la epidermis) y niveles muy bajos de exposición sistémica (por ejemplo, en el plasma) a la salicilanilida halogenada. Por lo tanto, se espera que las composiciones proporcionen un tratamiento tópico local eficaz de, por ejemplo, una afección dérmica, con pocos o ningún efecto secundario sistémico, porque la exposición sistémica es baja. Se espera que dichas composiciones proporcionen una amplia ventana terapéutica entre los efectos terapéuticos beneficiosos y la aparición de efectos secundarios sistémicos indeseables que pueden estar asociados con la salicilanilida halogenada. Dichos efectos secundarios podrían ser toxicidad sistémica o efectos sistémicos indeseables tales como alteración del microbioma intestinal que puede resultar de la exposición sistémica a un agente antibacteriano.

Puede ser que la composición no acuosa comprenda más de 65%, más de 70%, más de 75%, más de 80%, más de 85%, más de 90%, más de 95%, más de 96%, más de 97%, más de 98% o más de 99% PEG (preferiblemente con un peso molecular promedio de 600 o menos, menor que 600 o 400 o menos); y en la que el % es en peso de la composición. Cantidades adicionales de PEG que pueden estar presentes en la composición se describen bajo la sección “Polietilenglicol (PEG)”

Puede ser que la salicilanilida halogenada, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma esté presente en la composición no acuosa en una cantidad de 0.01% a 10%, por ejemplo desde 0.01% hasta 5%, desde 0.01% hasta 4.5%, desde 0.01% hasta 4%, desde 0.01% hasta 3.5%, desde 0.01% hasta 3%, desde 0.1% hasta 5%, desde 0.1% hasta 4.5%, desde 0.1% hasta 4%, desde 0.1% hasta 3.5%, desde 0.1 hasta 3%, desde 0.1 hasta 2.5%, desde 0.1 hasta 2%, desde 0.1 hasta 1.5%, desde 0.1 hasta 1%, o desde 0.5 hasta 3%, por ejemplo aproximadamente 1%, aproximadamente 2% aproximadamente 2.5% aproximadamente 3%, aproximadamente 4% o aproximadamente 5%, en la que los % son en peso en base al peso de la composición. Ejemplos adecuados de salicilanilidas halogenadas que se pueden utilizar se describen a continuación.

Puede ser que la composición no acuosa de la invención comprenda:

(i) 0.01 a 3.5% (por ejemplo 0.1 a 3% o aproximadamente 2%) en peso de una salicilanilida halogenada, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y

(ii) al menos 70 % (por ejemplo, al menos 90%) en peso de un PEG, en el que el peso molecular promedio del PEG es 600 o menos (por ejemplo menor que 600 o desde aproximadamente 200 hasta aproximadamente 600 o aproximadamente 400).

Puede ser que las composiciones no acuosas descritas en el presente documento comprendan adicionalmente un solvente orgánico polar por ejemplo un solvente orgánico polar seleccionado de un alquilenglicol (por ejemplo propilenglicol), 2-(2-etoxietoxi)etanol, glicerol, un éter macrogol estearilo (por ejemplo, éter macrogol 15 estearilo) o un isoestearato de macrogol o un alcohol graso, por ejemplo un alcohol C^-C-iatal como alcohol cetoestearílico o una mezcla de dos o más de los mismos. Puede ser que el orgánico polar esté presente en la composición en una cantidad desde aproximadamente 5% a aproximadamente 65%, aproximadamente 10% a aproximadamente 55% o aproximadamente 25% a aproximadamente 50% en peso de la composición.

Puede ser que las composiciones no acuosas descritas en el presente documento comprendan adicionalmente un glicol, por ejemplo, un alquilenglicol (por ejemplo propilenglicol). Puede ser que la composición comprenda desde aproximadamente 5% hasta aproximadamente 30%, aproximadamente 10% a aproximadamente 30%, o aproximadamente 14% a aproximadamente 28% en peso de un glicol, particularmente propilenglicol.

Puede ser que las composiciones no acuosas descritas en el presente documento comprendan adicionalmente 2-(2-etoxietoxi)etanol. Puede ser que la composición comprenda desde aproximadamente 1% hasta aproximadamente 25%, aproximadamente 5% a aproximadamente 20% o aproximadamente 10% a aproximadamente 20% en peso de 2-(2-etoxietoxi)etanol.

Puede ser que las composiciones no acuosas descritas en el presente documento comprendan adicionalmente glicerol. Puede ser que la composición comprenda desde aproximadamente 5% hasta aproximadamente 30%, aproximadamente 10% a aproximadamente 30%, o aproximadamente 15% a 25% en peso de glicerol.

Puede ser que la composición comprenda uno o más excipientes no polares, por ejemplo, uno o más de aceites, solventes hidrocarbonados o ceras no polares. Puede ser que la composición comprenda uno o más excipientes no polares seleccionados de ésteres aromáticos o alifáticos, un aceite mineral, un aceite vegetal y triglicéridos de cadena larga o de cadena media. Por ejemplo, los excipientes no polares se pueden seleccionar de uno o más de un aceite mineral (por ejemplo, parafina líquida o una cera de parafina) y triglicéridos de cadena media. Puede ser que los excipientes no polares estén presentes en la composición en una cantidad desde aproximadamente 2% a aproximadamente 50%, aproximadamente 5% a aproximadamente 40%, aproximadamente 5% a aproximadamente 30%, o aproximadamente 5% a 25% en peso de la composición.

Puede ser que las composiciones no acuosas descritas en este documento comprendan adicionalmente uno o más tensioactivos o emulsionantes, por ejemplo, un tensioactivo o emulsionantes iónicos o no iónicos. Ejemplos representativos de tensioactivos o emulsionantes incluyen cualquiera de aquellos descritos en el presente, por ejemplo, un glicérido de ácido graso PEGilado (labrasol), éster de alquilo de polioxietilenglicol sorbitán (polisorbato), un éter de alquil polioxietilenglicol (Brij), éteres polioxietilen de alcoholes grasos (ceteareth), o un éster de ácido graso de glicerol (por ejemplo, estearato de glicerilo). Puede ser que el tensioactivo o los emulsionantes estén presentes en la composición en una cantidad desde aproximadamente 0.1% a aproximadamente 15%, aproximadamente 0.2% a aproximadamente 10%, o aproximadamente 0.2% a aproximadamente 5% en peso de la composición.

En determinadas realizaciones, la composición no acuosa comprende una emulsión o microemulsión no acuosa. Las composiciones de emulsión o microemulsión no acuosas son particularmente adecuadas para proporcionar composiciones en forma de una composición de crema tópica no acuosa. La emulsión no acuosa comprende una fase hidrófila no acuosa (que comprende de forma adecuada excipientes polares) y una fase hidrófoba no acuosa que es inmiscible con la fase hidrófila (que comprende de forma adecuada excipientes no polares tales como un aceite). Puede ser que la fase hidrófila comprenda la fase continua de la emulsión y la fase hidrófoba esté dispersa dentro de la fase hidrófila como la fase discontinua de la emulsión. En determinadas realizaciones, la fase hidrófoba no acuosa comprende la fase continua de la emulsión y la fase no acuosa se dispersa dentro de la fase hidrófoba no acuosa como la fase discontinua de la emulsión.

Generalmente, la fase hidrófila no acuosa comprende la salicilanilida halogenada, el PEG y opcionalmente uno o más de los solventes polares descritos en el presente documento. De acuerdo con lo anterior, puede ser que la fase hidrófila no acuosa comprenda niclosamida, PEG y opcionalmente uno o más solventes polares seleccionados entre propilenglicol, 2-(2-etoxietoxi)etanol, glicerol, un éter macrogol estearilo (por ejemplo, éter macrogol 15 estearilo) y un alcohol graso, por ejemplo un alcohol C¹²-C¹⁸tal como alcohol cetoestearílico

Puede ser que la fase hidrófoba no acuosa de la emulsión o microemulsión comprenda uno o más de los excipientes no polares descritos en el presente documento, por ejemplo, un aceite mineral, un aceite vegetal y triglicéridos de cadena larga o de cadena media.

En aquellas realizaciones en las que la composición está en forma de una emulsión o microemulsión no acuosa, la composición comprende de forma adecuada un tensioactivo o emulsionante, por ejemplo, uno o más de los tensioactivos o emulsionantes descritos en el presente documento.

De forma adecuada la composición no acuosa comprende una solución de la salicilanilida halogenada. De acuerdo con lo anterior se prefiere que la salicilanilida halogenada se disuelva completamente en la composición no acuosa. Sin embargo, se contempla que la salicilanilida halogenada puede estar como una dispersión en la composición. Alternativamente en algunas realizaciones al menos una proporción de la salicilanilida halogenada se disuelve en la composición. En esta realización se prefiere que al menos 80%, preferiblemente al menos 90%, más preferiblemente al menos 95% en peso de la salicilanilida halogenada se disuelva en la composición.

Composiciones de gel no acuosas

En ciertas realizaciones la composición tópica no acuosa de la invención está en la forma de una composición de gel tópico no acuoso

En ciertas realizaciones se proporciona una composición de gel tópico no acuoso que comprende:

(i) una salicilanilida halogenada (por ejemplo, seleccionada de niclosamida, rafoxanida, oxiclozanida y closantel), o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y

(ii) PEG con un punto de fusión de menos de 40 °C; y

(iii) un agente de formación de gel.

(i) una salicilanilida halogenada (por ejemplo, seleccionada de niclosamida, rafoxanida, oxiclozanida y closantel), o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) más del 60 % en peso de un PEG, preferiblemente en el que el peso molecular promedio del PEG es menor que 600; y

(iii) un agente de formación de gel.

Aspectos particulares de las composiciones de gel no acuosas de la invención se describen a continuación.

Agente de formación de gel

Puede ser que el agente de formación de gel presente en las composiciones divulgadas en el presente documento sea un agente de formación de gel inorgánico. Puede ser que el agente de formación de gel sea un polímero de formación de gel.

Agentes de formación de gel inorgánicos

Puede ser que el agente de formación de gel sea un agente de formación de gel inorgánico, por ejemplo, una bentonita o un sílice. Puede ser que el agente de formación de gel sea silicato de magnesio y aluminio (Veegum®).

Polímeros de formación de gel

El agente de formación de gel puede ser un polímero de formación de gel. El polímero de formación de gel puede ser un polímero de formación de gel hidrófilo. El polímero de formación de gel se puede seleccionar del grupo que consiste en: gelatina; agar; agarosa; pectina; carragenina; quitosano; alginato; almidón; componentes de almidón (por ejemplo amilosa o amilopectina); goma de tragacanto; goma xantana; goma arábiga (goma acacia); goma de guar; goma gellan; goma de algarrobo; poliuretano; poliuretano poliéter; celulosa; éter de celulosas (por ejemplo metilcelulosa, carboximetil celulosa, etilcelulosa, hidroxietil celulosa o hidroxipropil celulosa), ésteres de celulosa, acetatos de celulosa, triacetatos de celulosa; alcohol de polivinilo entrecruzado; polímeros y copolímeros de ácido acrílico, acrilatos de hidroxialquilo, acrilato de hidroxietilo, monoacrilato de dietilenglicol, acrilato de 2-hidroxipropilo o acrilato de 3-hidroxipropilo; carbómeros (ácidos poli(acrílicos) entrecruzados), por ejemplo carbómero 910, 934P, 940GE, 941GE, 971P, 974P; polímeros y copolímeros de ácido metacrílico, metacrilato de hidroxietilo, monometacrilato de dietilenglicol, metacrilato de 2-hidroxipropilo, metacrilato de 3-hidroxipropilo o monometilacrilato de dipropilenglicol; polímeros de vinilpirrolidona; polímeros y copolímeros o acrilamida, N-metilacrilamida, N-propilacrilamida; metacrilamida, N-isopropilmetacrilamida, o N-2-hidroxietilmetacrilamida; poloxámeros (copolímeros de tribloque que comprenden un bloque de polioxipropileno central flanqueado por dos bloques de polioxietileno, por ejemplo un Pluronic®); y geles que comprenden polialquilenglicoles entrecruzados, por ejemplo geles que comprenden polietilenglicol entrecruzado o polipropilenglicol entrecruzado. En realizaciones específicas se prevén combinaciones binarias o terciarias, etc. de cualquiera de los agentes formadores de gel anteriores. Cuando el agente de formación de gel comprende un PEG, el PEG tiene de forma adecuada un mayor peso molecular que el PEG utilizado como un solvente para disolver o dispersar la salicilanilida halogenada en la composición de gel. De acuerdo con lo anterior se entiende que cuando el agente de formación de gel es un PEG, el PEG del agente de formación de gel es diferente al PEG presente en el componente (ii) de las composiciones de la invención. Por ejemplo, cuando el agente de formación de gel comprende un PEG, el PEG de forma adecuada tiene un peso molecular mayor de 600, por ejemplo, mayor de 1000, mayor de 10000 o mayor de 20000. De forma adecuada, cuando el agente de formación de gel comprende un PEG tiene un peso molecular promedio desde aproximadamente 600 a aproximadamente 35,000, por ejemplo, desde aproximadamente 800 hasta aproximadamente 25,000, o desde aproximadamente 1000 hasta aproximadamente 20,000. También se contemplan otros agentes de formación de gel, por ejemplo, cómo se divulga en Gels handbook Vols 1-4, Osada et al. 2001 Elsevier.

El polímero de formación de gel puede ser una goma, por ejemplo, una goma seleccionada de goma de tragacanto, goma xantana; goma arábiga (goma de acacia); goma de guar; goma gellan goma de algarrobo.

El polímero de formación de gel puede ser un éter de celulosa, por ejemplo, metilcelulosa, carboximetil celulosa, etilcelulosa, hidroxietil celulosa, hidroxi propil metil celulosa o hidroxipropil celulosa.

Polímeros de formación de gel de carbómero

En una realización particular, el agente de formación de gel es un carbómero. Los carbómeros son polímeros de poli (ácido acrílico) entrecruzados de alto peso molecular. Los polímeros pueden estar entrecruzados por éteres de polialcohol alílico, por ejemplo, alil sacarosa o alil pentaeritritol. El carbómero puede ser un homopolímero, por ejemplo 910, 934P, 940GE, 941GE, 971P, 974P, en el que “GE” se refiere a grado médico y Grado oral “P”. También se pueden utilizar derivados de polímeros de carbómero, por ejemplo, interpolímeros de Carbopol que comprenden un polímero de carbómero que comprende un copolímero de bloques de polietilenglicol y un éster de ácido de alquilo de cadena larga, dichos derivados están disponibles comercialmente como ETD 2020 NF y Ultrez 10 NF de Lubrizol.

Los carbómeros (también conocidos como Carbopoles) son bien conocidos y se caracterizan en la monografía de la Farmacopea de los Estados Unidos/Formulario Nacional (USP/NF) para carbómeros y la monografía de la Farmacopea Europea (Ph. Eur.) para Carbómeros, cuya referencia se incorpora en el presente documento.

El carbómero puede tener una viscosidad desde aproximadamente 4,000 hasta aproximadamente 70,000, por ejemplo aproximadamente 10,000 a aproximadamente 60,000, desde aproximadamente 20,000 hasta aproximadamente 50,000, aproximadamente 25,000 a aproximadamente 45,000 o aproximadamente 29,400 a aproximadamente 39,400 cP, en el que la viscosidad es aquella de una solución al 0.5% en peso del carbómero en agua, neutralizada a pH 7.3 - 7.8 a 25 °C, medida utilizando un Brookfield RVT, 20 rpm, husillo #6.

De forma adecuada, el carbómero comprende desde aproximadamente 56% hasta aproximadamente 68.0% en peso de grupos de ácido carboxílico (-COOH), medidos al titular una solución o dispersión acuosa del polímero contra NaOH.

De forma adecuada, el carbómero está sustancialmente libre de benceno residual (por ejemplo, contiene menos de 0.5 partes por millón). De acuerdo con lo anterior, se prefiere que el carbómero se prepare sin utilizar benceno como solvente durante el proceso de polimerización. Los carbómeros preferidos son aquellos que se preparan utilizando acetato de etilo y opcionalmente ciclohexano como solvente durante la polimerización.

Un carbómero particular para uso como agente gelificante en la presente invención es el carbómero 974P. Este carbómero tiene de forma adecuada una viscosidad de 29400 a 39400 cP (solución al 0.5% en agua neutralizada a pH 7.3-7.8 y medida a 25 °C utilizando un Brookfield RVT, 20 rpm con husillo #6). El carbómero tiene normalmente un contenido de ácido carboxílico desde 56 hasta 68%.

Convencionalmente, los geles de carbómero se forman al dispersar el carbómero en agua, lo que da como resultado la ionización de los grupos carboxi presentes en el polímero. La solución o dispersión resultante se neutraliza luego utilizando una base, lo que resulta en un aumento de la viscosidad y la formación de gel. Sin embargo, en la presente invención, el gel es un gel no acuoso y la formación de gel se puede lograr al disolver o dispersar el carbopol en el solvente orgánico junto con las salicilanilidas halogenadas y calentando la mezcla a aproximadamente 70 °C.

El polímero de formación de gel también se puede denominar coloide, es decir, un sistema coloide en el que las partículas coloidales se dispersan en el solvente orgánico y la cantidad de solvente disponible permite la formación de un gel. En las realizaciones, se prefiere utilizar coloides reversibles, preferiblemente coloides termorreversibles (por ejemplo, agar, agarosa y gelatina, etc.) en contraposición a coloides irreversibles (de un solo estado). Los coloides termorreversibles pueden existir en estado de gel y sol, y alternar entre estados con la adición o eliminación de calor. Los coloides termorreversibles que se pueden utilizar de acuerdo con la invención, ya sea individualmente o en combinación, incluyen, por ejemplo, gelatina, carragenina, gelatina, agar, agarosa (un polisacárido obtenido del agar), pectina y derivados de celulosa, por ejemplo, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, etilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa o hidroxipropilcelulosa. Otro término que se puede aplicar a los polímeros de formación de gel es “termotrópico”: un agente gelificante termotrópico es aquel que se hace gelificar por un cambio de temperatura. En realizaciones de la invención, por lo tanto, el formador de gel es un polímero de formación de gel termotrópico o una combinación de dichos polímeros.

El polímero de formación de gel puede ser o comprender un polímero de formación de gel ionotrópico cuya gelificación es inducida por iones. Los agentes de formación de gel ionotróficos adecuados son polímeros aniónicos o catiónicos que se pueden entrecruzar mediante contraiones multivalentes para formar un gel. Los polímeros de formación de gel ionotróficos pueden ser, por ejemplo, quitosano, un alginato, carragenina o pectina.

El polímero de formación de gel puede comprender o ser un solo polímero de una mezcla de dos o más polímeros, por ejemplo, una combinación de dos o más de los polímeros de formación de gel enumerados en el presente documento.

La cantidad de agente de formación de gel presente en la composición se debe seleccionar de modo que proporcione una composición de gel que tenga las propiedades reológicas requeridas, por ejemplo, viscosidad para aplicación tópica. Generalmente, el gel tendrá una viscosidad tal que se pueda dispensar y esparcir fácilmente y frotarse en el área de, por ejemplo, la piel que está infectada. La reología de la composición de gel dependerá del agente gelificante particular utilizado, el peso molecular del PEG, la salicilanilida halogenada particular y las cantidades del mismo en la composición. Generalmente, el agente gelificante, por ejemplo, un carbómero, estará presente en la composición de gel en una cantidad de hasta aproximadamente 10% en peso, por ejemplo hasta aproximadamente 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 5.5%, 6%, 6.5%, 7%, 7.5%, 8%, 8.5%. 9% o 9.5% en peso de la composición de gel. De forma adecuada el agente gelificante, por ejemplo un carbómero, puede estar presente en una cantidad desde aproximadamente 0.01% hasta aproximadamente 10% en peso de la composición de gel, por ejemplo aproximadamente 0.01% a aproximadamente 8%, aproximadamente 0.05% a aproximadamente 7%, aproximadamente 0.05% a aproximadamente 6%, aproximadamente 0.05% a aproximadamente 5%, aproximadamente 0.05% a aproximadamente 4%, aproximadamente 1% a aproximadamente 6%, aproximadamente 1% a aproximadamente 5% o aproximadamente 1% a aproximadamente 4%, aproximadamente 2% a aproximadamente 5%, aproximadamente 2% a aproximadamente 4% o aproximadamente 2% a aproximadamente 3%, en el que el % es en peso en base al peso de la composición de gel.

Polietilenglicol (PEG)

Como se ilustra en los Ejemplos, los inventores han encontrado que cuando se utiliza polietilenglicol (PEG) como un solvente en la composición de gel no acuosa, el efecto antibacteriano de la salicilanilida halogenada, por ejemplo, niclosamida, se mejora en comparación con el uso de PEG solo o la salicilanilida halogenada sola cuando se prueba en un modelo de ratón.

De forma adecuada el PEG es líquido a temperatura ambiente (por ejemplo 20 a 25 °C), de acuerdo con lo anterior el solvente puede ser un PEG de bajo peso molecular. Particularmente, el p Eg tiene un peso molecular promedio de 600 o menos, de forma adecuada menor que aproximadamente 600. Por ejemplo, el PEG puede tener un peso molecular promedio desde aproximadamente 200 hasta aproximadamente 600, aproximadamente 200 a aproximadamente 500 o aproximadamente 200 a aproximadamente 400. Un PEG particular se selecciona de PEG 200, PEG 300 y PEG 400. En una realización particular el PEG es PEG 400.

De forma adecuada el PEG está presente en una cantidad al menos suficiente para proporcionar una solución de la salicilanilida halogenada en la composición no acuosa. Como se dará cuenta la cantidad de PEG requerida para disolver la salicilanilida halogenada dependerá de la salicilanilida halogenada particular utilizada y los otros componentes de la composición. En ciertas realizaciones el PEG está presente en la composición no acuosa de la invención una cantidad de al menos 60%, de forma adecuada más del 60% en peso de la composición. Las composiciones no acuosas que contienen altas cantidades de PEG proporcionan composiciones tópicas que dan altos niveles de la salicilanilida halogenada en tejidos de piel y solo exposición sistémica mínima a la salicilanilida halogenada. También se ha encontrado que dichas composiciones son bien toleradas, a pesar de que contienen altas concentraciones de PEG. De forma adecuada el PEG está presente en una cantidad de más del 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98% o 99% en el que el % es en peso en base al peso de la composición de gel. Puede ser que el PEG, preferiblemente un PEG con un peso molecular promedio de 600 o menos (particularmente menor que 600) esté presente en la composición no acuosa de la invención en una cantidad de por ejemplo 65 a 98%, por ejemplo, desde 65% hasta 95%, 65% a 90%, 65% a 80%, 70% a 98%, 70% a 95%, 70% a 85%, 70% a 80%, 80% a 98%, 80% a 95%, 80% a 90%, 85% a 98% o 85% a 95%, en el que el % es en peso en base al peso de la composición no acuosa de la invención.

En ciertas realizaciones las composiciones no acuosas comprenden concentraciones más bajas de PEG, por ejemplo 50% o menos, 45% o menos, 40% o menos, 35% o menos, 30% o menos, 25% o menos, 20% o menos, 15% o menos, en las que el % es % en peso de la composición. Puede ser que el PEG esté presente desde aproximadamente 1% hasta aproximadamente 50%, desde aproximadamente 5% hasta aproximadamente 40%, desde aproximadamente 5% hasta aproximadamente 35%, o desde aproximadamente 5 hasta aproximadamente 30% en peso de la composición.

Salicilanilida halogenada

Las salicilanilidas también se conocen como 2-hidroxi-N-fenilbenzamidas o 2-hidroxibenzanilidas. Las salicilanilidas son compuestos fenólicos débilmente ácidos. Las salicilanilidas halogenadas son salicilanilidas sustituidas por al menos un grupo halo. La salicilanilida halogenada puede ser cualquier salicilanilida halogenada que posea actividad antibacteriana contra bacterias Gram-positivas.

Puede ser que la salicilanilida halogenada sea cualquiera de los análogos de niclosamida descritos en el documento WO 2008/021088, que se incorpora en el presente documento como referencia.

La salicilanilida halogenada puede ser una salicilanilida halogenada de fórmula (I):

en la que

X es O o S;

R1 y R2 se seleccionan en cada ocurrencia independientemente de halo;

R3 y R4 se seleccionan en cada ocurrencia independientemente de H, alquilo C^1-6, -ORA1, -NO²y -CN;

R5 es H o -L1-R7;

R6 es H o -C(O)RA2;

R5 es -L1-R7;

L1 se selecciona de un enlace, O, S, o -(CRA3RB)o-, en el que o es 1 o 2;

R7 es fenilo, no sustituido o sustituido con 1, 2, o 3 grupos seleccionados de halo, alquilo C^1-4, -ORA4, -NO²y -CN; RA1, RA2, RA3 y RA4 se seleccionan en cada ocurrencia independientemente de H y alquilo C^1-4;

RB se selecciona en cada ocurrencia de H, alquilo C^1-4y -CN;

n y p cada uno se selecciona independientemente de 0, 1, 2, 3 o 4, con la condición de que n+p es al menos 1;

t y v se seleccionan independientemente de 0, 1 y 2;

o una sal, solvato (por ejemplo, hidrato) o éster farmacéuticamente aceptable de la misma.

La salicilanilida halogenada de la fórmula (I) puede ser de la fórmula (II), o una sal, solvato (por ejemplo, hidrato) o éster farmacéuticamente aceptable de la misma.

Las siguientes declaraciones en los párrafos numerados siguientes se aplican a compuestos de fórmulas (I) o (II). Estas declaraciones son independientes e intercambiables. En otras palabras, cualquiera de las características descritas en cualquiera de las siguientes declaraciones se puede combinar (cuando sea químicamente permitido) con las características descritas en una o más declaraciones a continuación. En particular, cuando se ejemplifica o ilustra un compuesto en esta especificación, dos o más de las siguientes declaraciones que describen una característica de ese compuesto, expresadas en cualquier nivel de generalidad, se pueden combinar para representar la materia objeto de estudio que se contempla como formando parte de la divulgación de esta invención en esta especificación.

1. X es O.

2. R1 y R2 se seleccionan en cada ocurrencia independientemente de flúor, cloro, bromo y yodo.

3. R1 y R2 se seleccionan en cada ocurrencia independientemente de cloro, bromo y yodo.

4. R1 es cloro.

5. R1 es bromo.

6. R1 es yodo.

7. R2 es cloro.

8. R2 es bromo.

9. R2 es yodo.

10. R3 y R4 se seleccionan en cada ocurrencia independientemente de H, alquilo C¹-⁴,-ORA1, -NO²y -CN.

11. R3 y R4 se seleccionan en cada ocurrencia independientemente de H, alquilo C¹-⁴, - ORA1 y -NO².

12. R3y R4 se seleccionan en cada ocurrencia independientemente de H, alquilo C¹-⁴, -OH, -OMe, -NO²y-CN, por ejemplo, H, alquilo C¹-⁴, -OH o -NO².

13. R5 es H.

14. R5 es -L1-R7.

15. L1 se selecciona de -O-, -CH²- y -CH(CN)-, por ejemplo -O- o -CH(CN)-.

16. R⁷es fenilo, no sustituido o sustituido con 1, 2, o 3 grupos seleccionados de halo, alquilo C^1-4y -CN

17. R7 es fenilo no sustituido o sustituido con 1, 2, o 3 grupos (por ejemplo 1 o 2 grupos) seleccionado de halo.

18. R7 es fenilo no sustituido.

19. L1 se selecciona de -O- y -CH(CN)-; y R7 es fenilo no sustituido o sustituido con 1, 2, o 3 grupos seleccionados de halo.

20. R⁶es H.

21. R⁶es -C(O)RA2, por ejemplo -C(O)CHa.

^{2 2}. t = ⁰o ¹.

23 t=0.

24. v = 0 o 1.

25. v = 0.

26. o es ¹.

27. v = 1 y R⁴se selecciona de -OH, alquilo C^1-4y -NO².

28. Un compuesto de cualquiera de las fórmulas (I) o (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Los compuestos particulares son compuestos de la fórmula (I) o fórmula (II), o una sal, solvato o éster farmacéuticamente aceptable de los mismos en la que:

X es O;

R¹y R²se seleccionan en cada ocurrencia independientemente de halo;

R3 y R4 se seleccionan en cada ocurrencia independientemente de H, alquilo C¹-⁴, -ORA1, -NO²y CN;

R5 es H o -L1-R7;

R6 es H o -C(O)RA2;

L1 se selecciona de O y -CH(CN)-;

R7 es fenilo no sustituido o sustituido con 1, 2, o 3 grupos seleccionados de halo;

R^A1y R^A2se seleccionan en cada ocurrencia independientemente de H y alquilo C¹-⁴;

t y v se seleccionan independientemente de 0, 1 y 2;

o una sal, o éster farmacéuticamente aceptable de los mismos.

o una sal, solvato, profármaco o derivado farmacéuticamente aceptable de la misma.

La salicilanilida halogenada puede ser un derivado de tioamida, por ejemplo, brotianida:

La salicilanilida halogenada se puede seleccionar del grupo que consiste en tetraclorosalicilanilida, closantel, rafoxanida, oxiclozanida, resorantel, clioxanida, dibromosalan, tribromosalan, brotianida y niclosamida, o una sal o profármaco o derivado farmacéuticamente aceptable de la misma.

La salicilanilida halogenada se puede seleccionar del grupo que consiste en tetraclorosalicilanilida, closantel, rafoxanida, oxiclozanida, resorantel, dibromosalan, tribromosalan y niclosamida, o una sal o éster farmacéuticamente aceptable de la misma.

La salicilanilida halogenada se puede seleccionar del grupo que consiste en clioxanida, closantel, oxiclozanida, rafoxanida, tribromosalan o una sal o éster farmacéuticamente aceptable de la misma.

La salicilanilida halogenada se puede seleccionar del grupo que consiste en tetraclorosalicilanilida, closantel, rafoxanida, oxiclozanida, resorantel, clioxanida, dibromosalan, tribromosalan, brotianida y niclosamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

La salicilanilida halogenada se puede seleccionar del grupo que consiste en tetraclorosalicilanilida, closantel, rafoxanida, oxiclozanida, resorantel, clioxanida, dibromosalan, tribromosalan y niclosamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

La salicilanilida halogenada se puede seleccionar del grupo que consiste en niclosamida, clioxanida, closantel, oxiclozanida, rafoxanida y tribromosalan, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

La salicilanilida halogenada se puede seleccionar del grupo que consiste en clioxanida, closantel, oxiclozanida, rafoxanida y tribromosalan, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

La salicilanilida halogenada se puede seleccionar del grupo que consiste en clioxanida, closantel, rafoxanida y tribromosalan, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

La salicilanilida halogenada se puede seleccionar del grupo que consiste en tetraclorosalicilanilida, closantel, rafoxanida, oxiclozanida, resorantel, clioxanida, dibromosalan, tribromosalan, brotianida y niclosamida.

La salicilanilida halogenada se puede seleccionar del grupo que consiste en niclosamida, closantel, oxiclozanida y rafoxanida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

La salicilanilida halogenada puede ser clioxanida, o una sal o éster farmacéuticamente aceptable de la misma, por ejemplo, la salicilanilida halogenada es clioxanida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, de forma adecuada la salicilanilida halogenada es clioxanida.

La salicilanilida halogenada puede ser closantel, o una sal o éster farmacéuticamente aceptable de la misma, por ejemplo, la salicilanilida halogenada es closantel o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, de forma adecuada la salicilanilida halogenada es closantel.

La salicilanilida halogenada puede ser oxiclozanida, o una sal o éster farmacéuticamente aceptable de la misma, por ejemplo, la salicilanilida halogenada es oxiclozanida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, de forma adecuada la salicilanilida halogenada es oxiclozanida.

La salicilanilida halogenada puede ser rafoxanida, o una sal o éster farmacéuticamente aceptable de la misma, por ejemplo, la salicilanilida halogenada es rafoxanida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, de forma adecuada la salicilanilida halogenada es rafoxanida.

La salicilanilida halogenada puede ser tribromosalan, o una sal o éster farmacéuticamente aceptable de la misma, por ejemplo, la salicilanilida halogenada es tribromosalan o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, de forma adecuada particularmente la salicilanilida halogenada es tribromosalan.

La salicilanilida halogenada puede ser niclosamida, o una sal o éster farmacéuticamente aceptable de la misma, por ejemplo, la salicilanilida halogenada es niclosamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

En ciertas realizaciones la salicilanilida halogenada es niclosamida en la forma de ácido libre.

En ciertas realizaciones la salicilanilida halogenada es una sal farmacéuticamente aceptable de niclosamida, por ejemplo, una sal de etanolamina, o sal de piperazina.

La salicilanilida halogenada puede ser un hidrato de niclosamida o sal farmacéuticamente aceptable de la misma. Sin embargo, generalmente se prefiere que la niclosamida no esté presente en la composición de gel como un hidrato. De acuerdo con lo anterior se prefiere que la niclosamida sea niclosamida anhidra, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. En una realización particular la niclosamida es niclosamida anhidra.

De forma adecuada las salicilanilidas halogenadas están presentes en la composición no acuosa en una cantidad de hasta 10%, hasta 8%, hasta 6%, hasta 5% hasta 4.5%, hasta 4%, hasta 3.5%, hasta 3% o hasta 2%, en las que el % es en peso en base al peso de la composición.

Las salicilanilidas halogenadas, por ejemplo, pueden estar presentes en la composición no acuosa en una cantidad desde aproximadamente 0.01% hasta aproximadamente 6%, aproximadamente 0.01% a aproximadamente 5.5%, aproximadamente 0.01% a aproximadamente 5%, aproximadamente 0.01% a aproximadamente 4.5%, aproximadamente 0.01% a aproximadamente 4%, aproximadamente 0.01% a aproximadamente 3.5%, aproximadamente 0.01% a aproximadamente 3%. aproximadamente 0.01% a aproximadamente 2.5%, aproximadamente 0.05 a aproximadamente 5%, aproximadamente 0.05% a aproximadamente 4.5%, 0.05% a aproximadamente 4%, 0.05% a aproximadamente 3.5%, 0.05% a aproximadamente 3%, 0.05% a aproximadamente 2.5%, aproximadamente 0.1% a aproximadamente 6%, aproximadamente 0.1% a aproximadamente 5%, aproximadamente 0.1% a aproximadamente 4.5%, aproximadamente 0.1% a aproximadamente 4%, aproximadamente 0.1% a aproximadamente 3.5%, aproximadamente 0.1% a aproximadamente 3%, aproximadamente 0.1% a aproximadamente 2.5%, aproximadamente 0.5% a aproximadamente 5%, aproximadamente 0.5% a aproximadamente 4.5%, aproximadamente 0.5% a aproximadamente 4%, aproximadamente 0.5% a aproximadamente 3.5%, aproximadamente 0.5% a aproximadamente 3%, o aproximadamente 0.5% a aproximadamente 2.5%, en las que el % es en peso en base al peso de la composición. Por ejemplo, las salicilanilidas halogenadas pueden estar presentes en la composición en una cantidad de aproximadamente 0.5%, aproximadamente 1%, aproximadamente 1.5%, aproximadamente 2%, aproximadamente 2.5%, aproximadamente 3% aproximadamente 3.5%, aproximadamente 4%, aproximadamente 4.5% o aproximadamente 5%, en las que el % es en peso en base al peso de la composición.

Las salicilanilidas halogenadas pueden estar presentes en la composición como una solución o una suspensión. Sin embargo, como se discutió anteriormente, se prefiere que la salicilanilida halogenada esté sustancial o completamente disuelta en la composición de la invención. Generalmente se prefiere una solución de la salicilanilida halogenada en la composición porque esto maximiza el fármaco disponible para la absorción después de la administración tópica de la composición y se espera que reduzca la variabilidad de la absorción inter e intrapacientes. De acuerdo con lo anterior, en las realizaciones preferidas, la cantidad de salicilanilida halogenada se selecciona de tal manera que se disuelva completamente en la composición.

Composiciones de gel no acuosas específicas

En una realización la composición de gel no acuosa comprende:

(i) 0.05% a 5% en peso de una salicilanilida halogenada, por ejemplo, closantel, niclosamida, rafoxanida o oxiclozanida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) más de 60 % en peso de PEG, en el que el PEG has un peso molecular promedio de menos de 600; y

(ii) hasta 10% en peso de un polímero de formación de gel.

De forma adecuada en esta realización la salicilanilida halogenada, por ejemplo, niclosamida, está presente en la composición en una cantidad desde 0.05% a 4.5%, por ejemplo, desde 0.5% hasta 3% en peso de la composición de gel. De forma adecuada en esta realización el polímero de formación de gel puede estar presente en una cantidad de 0.5% a 5% en peso, por ejemplo, desde aproximadamente 1% hasta aproximadamente 3%, o desde aproximadamente 2% hasta aproximadamente 3% en peso. El polímero de formación de gel puede ser cualquiera de los polímeros de formación de gel descritos en el presente documento, por ejemplo, un polímero de carbómero tal como carbómero 974P.

En otra realización la composición de gel no acuosa comprende o consiste en:

(i) una salicilanilida halogenada, por ejemplo, closantel, niclosamida, rafoxanida u oxiclozanida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) más de 70% en peso de un PEG, en el que el peso molecular promedio del PEG es menor que 600; y

(iii) un agente de formación de gel.

En esta realización la salicilanilida halogenada, por ejemplo, niclosamida puede estar presente en la composición en una cantidad desde 0.05 hasta 5 % en peso, por ejemplo, 0.05% a 4.5% en peso de la composición de gel.

En esta realización el agente de formación de gel puede ser cualquiera de los agentes de formación de gel descritos en el presente documento, por ejemplo un agente de formación de gel seleccionado del grupo que consiste en: gelatina; agar; agarosa; pectina; carragenina; quitosano; alginato; almidón; componentes de almidón (por ejemplo amilosa o amilopectina); goma de tragacanto; goma xantana; goma arábiga (goma acacia); goma de guar; goma gellan; goma de algarrobo; poliuretano; poliuretano poliéter; celulosa; éter de celulosas (por ejemplo metilcelulosa, carboximetil celulosa, etilcelulosa, hidroxietil celulosa o hidroxipropil celulosa), ésteres de celulosa, acetato de celulosas, triacetato de celulosas; alcohol de polivinilo entrecruzado; polímeros y copolímeros de ácido acrílico, acrilatos de hidroxialquilo, acrilato de hidroxietilo, monoacrilato de dietilenglicol, acrilato de 2-hidroxipropilo, acrilato de 3-hidroxipropilo, carbómeros (ácidos poli(acrílicos) reticulados, por ejemplo carbómero 910, 934P, 940GE, 941GE, 971P, 974P; polímeros y copolímeros de ácido metacrílico, metacrilato de hidroxietilo, monometacrilato de dietilenglicol, metacrilato de 2-hidroxipropilo, metacrilato de 3-hidroxipropilo, monometilacrilato de dipropilenglicol; polímero de vinilpirrolidonas; acrilamida polímeros y copolímeros, N-metilacrilamida, N-propilacrilamida; metacrilamida polímeros y copolímeros, N-isopropilmetacrilamida, N-2-hidroxietilmetacrilamida; poloxámeros (copolímeros de tribloque que comprenden un bloque de polioxipropileno central flanqueado por dos bloques de polioxietileno, por ejemplo a Pluronic®); y combinaciones de los mismos.

En esta realización el agente de formación de gel está de forma adecuada presente en una cantidad de hasta 10%, por ejemplo, desde 0.25% hasta 10% en peso de la composición de gel, por ejemplo desde 0.5% hasta 5%, o desde 0.5% hasta 4%, o desde 1% hasta 3% en peso de la composición.

En esta realización el PEG puede ser un PEG con un peso molecular promedio desde aproximadamente 200 hasta aproximadamente 500, tal como PEG 200, PEG 300 o Pe G 400. Particularmente el PEG es p Eg 400. De forma adecuada el PEG está presente en una cantidad de más de 70%, por ejemplo, más de 75%, 80%, 85%, 90% o 95% en peso en base al peso de la composición de gel.

En una realización la composición de gel no acuosa comprende o consiste en:

(i) 0.05 a 4.5 % en peso de una salicilanilida halogenada, por ejemplo, closantel, niclosamida, rafoxanida o oxiclozanida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) más de 60 % en peso de un PEG, en el que el peso molecular promedio del PEG es menor que 600; y

(ii) hasta 5% en peso de un carbómero (por ejemplo, un carbómero seleccionado de carbómero 910, carbómero 934P, carbómero 940GE, carbómero 941GE, carbómero 971P y carbómero 974P).

En esta realización la composición de gel no acuosa de forma adecuada comprende desde 0.1% hasta 5%, por ejemplo, desde 0.1% hasta 4%, 0.5% a 4%, 1% a 4%, 1% a 3% o desde 2 hasta 3% del carbómero (por ejemplo, carbómero 974p ). En esta realización el PEG puede ser un PEG con un peso molecular promedio desde aproximadamente 200 hasta aproximadamente 500, tal como PEG 200, PEG 300 o Pe G 400. Particularmente el PEG es p Eg 400. De forma adecuada el PEG está presente en una cantidad de más de 70%, por ejemplo, más de 75%, 80%, 85% o 90% en peso en base al peso de la composición de gel.

En una realización la composición de gel no acuosa comprende o consiste en:

(i) 1 a 3 % en peso de niclosamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) 94 a 98% en peso de un PEG, en el que el peso molecular promedio del PEG es menor que 600 (por ejemplo, un peso molecular promedio desde aproximadamente 200 hasta aproximadamente 500, tal como PEG 200, PEG 300 o PEG 400); y

(iii) 1 a 3% en peso de un carbómero (por ejemplo, un carbómero seleccionado de carbómero 910, carbómero 934P, carbómero 940Ge , carbómero 941GE, carbómero 971P y carbómero 974P).

En una realización la composición de gel no acuosa comprende o consiste en:

(ii) 94 a 98 % en peso de PEG 400; y

(ii) 1 a 3 % en peso de carbómero 974P.

Opcionalmente en todas las composiciones de gel específicas descritas anteriormente, cuando la salicilanilida halogenada es niclosamida, la niclosamida puede estar presente en la composición como el ácido libre.

Opcionalmente en todas las composiciones de gel específicas descritas anteriormente la composición de gel de forma adecuada no comprende etanol. De acuerdo con lo anterior dichas composiciones de gel son composiciones de gel no acuosas, no etanólicas.

pH local

Los inventores han descubierto que la actividad antibacteriana de las salicilanilidas halogenadas, por ejemplo, niclosamida, es mayor a pH bajo que a pH neutro o básico.

De acuerdo con lo anterior puede ser que la composición de la invención proporcione un pH local de menos de 6 en el sitio de infección. Por lo tanto, puede ser que la composición no comprenda un tampón o modificador de pH. Las salicilanilidas halogenadas son débilmente ácidas en virtud de sus grupos fenólicos. Por tanto, puede ser que la salicilanilida halogenada, por ejemplo, niclosamida, esté en forma de ácido libre (es decir, no en forma de sal). En otras realizaciones la composición comprende excipientes para proporcionar un pH local de menos de 6 cuando la formulación se aplica de forma tópica, por ejemplo, la composición puede comprender un modificador de pH tal como un ácido o base adecuados. Los componentes de la formulación se pueden seleccionar de tal manera que proporcionen un pH local mayor de 4.5 (por ejemplo, mayor de 5) en el sitio de infección. Por ejemplo, la composición puede proporcionar un pH local desde aproximadamente 4.5 hasta 6, de forma adecuada aproximadamente 5.5. La referencia a un “pH local” es el pH en el sitio donde se aplica la formulación, por ejemplo, el pH sobre la superficie de la piel después de aplicar la composición que comprende la salicilanilida halogenada. Las composiciones de gel no acuosas de la invención en las que el agente de formación de gel comprende fracciones ácidas, por ejemplo, polímeros de carbómero, pueden ser particularmente adecuadas para proporcionar el pH local bajo deseado después de la aplicación tópica sin necesidad de agentes adicionales para modificar el pH.

El pH local después de la aplicación tópica, por ejemplo, sobre la superficie de la piel, se puede medir utilizando técnicas conocidas, por ejemplo, el pH de la superficie de la piel se puede medir utilizando métodos estándar, por ejemplo utilizando un electrodo de vidrio plano adecuado conectado a un medidor de pH. Dichos aparatos están disponibles comercialmente como, por ejemplo, el Skin-pH-Meter PH 905 (Courage Khazaka electronic GmbH). Los métodos para medir el pH de la piel local son bien conocidos e incluyen la norma ISO 12505-1: 2014 (en), sección 4.4, incorporada en el presente documento como referencia.

El pH local deseado de menos de 6 en el sitio de la infección, por ejemplo, sobre la superficie de la piel, se puede obtener mediante métodos de rutina, por ejemplo al agregar un material ácido o básico adecuado a la formulación que comprende la salicilanilida halogenada. Por ejemplo, se puede agregar un ácido, base o tampón inorgánico u orgánico a la formulación que comprende la salicilanilida halogenada en una cantidad suficiente para proporcionar el pH local deseado de menos de 6 en el sitio de infección.

Componentes opcionales

Los siguientes componentes y características opcionalmente pueden estar presentes en las composiciones no acuosas de la invención, por ejemplo, las composiciones de gel no acuosas descritas en el presente documento.

Solvente adicional

La composición no acuosa de la invención puede comprender uno o más solventes no acuosos adicionales además del PEG. La presencia de un solvente adicional puede mejorar la solubilidad de la salicilanilida halogenada y o ayudar a mantener la salicilanilida halogenada en solución durante la preparación, almacenamiento y uso tópico de la composición no acuosa. El solvente adicional puede ser, por ejemplo, un solvente orgánico polar en el que la salicilanilida halogenada es soluble, por ejemplo, un solvente orgánico polar en el que las salicilanilidas halogenadas tengan una solubilidad mayor de 2% en peso en el solvente adicional.

El solvente orgánico polar puede ser un solvente orgánico polar prótico. En una realización el solvente es un solvente orgánico polar prótico que tiene una constante dieléctrica desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 45, por ejemplo, una constante dieléctrica desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 25. Solventes orgánicos polares próticos son aquellos que tienen una constante dieléctrica desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 20, en los que en cada caso la constante dieléctrica se mide a 20-25 °C. La constante dieléctrica de los solventes orgánicos es bien conocida o se puede medir utilizando técnicas bien conocidas.

Los solventes orgánicos polares próticos representativos con una constante dieléctrica en el rango de 10 a 45 incluyen aquellos establecidos en la Tabla 1:

Tabla 1

Los solventes orgánico polares adicionales con una constante dieléctrica en el rango son bien conocidos (véase por ejemplo “Solubility and Solubilization in Aqueous Media” por Samuel H. Yalkowsky (University of Arizona). Oxford University Press: New York. 1999). Por ejemplo, el solvente orgánico polar se puede seleccionar de acetato de etilo, dimetilformamida, diclorometano, glicerol, propilenglicol, o 2-(2-etoxietoxi)etanol (Transcutol), éter propilenglicol estearilo, isostearato de propilenglicol.

En otra realización el solvente orgánico polar es un solvente orgánico polar aprótico que tiene una constante dieléctrica desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 45, por ejemplo, una constante dieléctrica desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 25 a 25 °C.

Cuando están presentes los solventes adicionales, están presentes de forma adecuada en una cantidad de hasta 35% en peso de la composición. Por ejemplo, hasta 30%, 25%, 20% 15% o 10% en peso de la composición. En realizaciones particulares los solventes adicionales están presentes en una cantidad de menos de 10%, por ejemplo, menor que 8%, menor que 6%, menor que 5% o menor que 3%, en la que el % es en peso en base al peso de la composición no acuosa. Puede ser que el solvente adicional esté presente en una cantidad de 1% a 30%, desde 1% hasta 25%, desde 1% hasta 20%, desde 1 hasta 10%, desde 3 hasta 30%, desde 3 hasta 20%, desde 3 hasta 15%, desde 5 hasta 30%, desde 5 hasta 20% o desde 5 hasta 10%, en la que el % es en peso en base al peso de la composición.

En algunas realizaciones se prefiere que la composición no acuosa de la invención no contenga un solvente adicional, porque la presencia de otro solvente con el PEG puede aumentar el riesgo de precipitación no deseable de la salicilanilida halogenada cuando la composición de gel se aplica a la piel como resultado de por ejemplo tasas diferenciales de absorción y/o evaporación del solvente después de aplicación de la composición no acuosa. De acuerdo con lo anterior, puede ser que la composición no acuosa del PEG sea el único solvente para la salicilanilida halogenada.

Composiciones no etanólicas

La presencia de etanol en composiciones tópicas puede provocar sequedad y/o descamación de la piel, particularmente en pacientes con piel sensible. Esto puede ser un problema particular en pacientes con acné, porque la sequedad que resulta del etanol puede promover la producción excesiva de grasa en la piel y la exacerbación del acné. (R I Ceilley, Skinmed., 9(1), 2011, 15-21). Esto es particularmente el caso cuando la composición no acuosa es para uso en el tratamiento tópico del acné. Por tanto, en una realización preferida, la composición de la invención es una composición no acuosa, sin etanol (libre de etanol), por ejemplo, una composición en gel no acuosa, sin etanol.

Mejoradores de la absorción

La composición no acuosa puede comprender opcionalmente un mejorador de absorción. La absorción puede ser cualquier sustancia que actúe para mejorar la penetración de la salicilanilida halogenada en la epidermis y epidermis. Los mejoradores de absorción adecuados incluyen los mejoradores de absorción transdérmica descritos, por ejemplo, en Smith and Maibach (2005) Percutaneous Penetration Enhancers, Segunda edición ISBN 9780849321528, incorporado en el presente documento como referencia.

Puede ser que el mejorador de la absorción, cuando esté presente en la composición no acuosa se seleccione de, por ejemplo, un sulfóxido (por ejemplo dimetilsulfóxido); dimetilacetamida; dimetilformamida; una urea; un alcohol graso, por ejemplo un alcohol graso Ca-C-ie, que puede ser saturado o insaturado (por ejemplo alcohol caprílico o alcohol cetoestearílico); un poliol (por ejemplo glicerol; un glicol (por ejemplo propilenglicol o hexilenglicol); Azone ((1-dodecilazacicloheptan- 2-ona); un aceite esencial (por ejemplo un terpeno o terpenoide); una pirrolidona (por ejemplo N-metil-2-pirrolidona); una oxazolidinona (por ejemplo 4-deciloxazolidin-2-ona) un tensioactivo (por ejemplo un tensioactivo no iónico, aniónico o catiónico, particularmente un tensioactivo no iónico por ejemplo un éster de polioxietileno glicol sorbitán alquilo (por ejemplo polisorbatos tales como Polisorbato 80 ((polioxietileno (20) monooleato de sorbitán), Polisorbato 60 (polioxietileno (20) monostearato de sorbitán), Polisorbato 40 (polioxietileno (20) monopalmitato de sorbitán) o Polisorbato 20 (polioxietileno (20) monolaurato de sorbitán)), un éter de polioxietilenglicol alquilo (por ejemplo Brij, tal como Brij S721 o Brij S2), un poloxámero o un glicérido de ácido graso PEGilado tal como glicéridos de caprulocaproil polioxil-8 (por ejemplo Labrasol), un éster de ácido graso de glicerol, por ejemplo estearato de glicerilo, o éteres de polioxietileno de alcoholes grasos (por ejemplo alcohol cetílico y/o alcohol estearílico, ejemplos particulares incluyen ceteareth-15, -16, -17, -18, -19, -20, -21, -22, 23-, -24, o -25 y particularmente ceteareth-20) , por ejemplo un éster de ácido graso de sorbitán polietoxilado. El mejorador de la absorción también puede ser 2-(2-etoxietoxi)etanol (Transcutol). Los mejoradores de absorción preferidos son aquellos que tienen un impacto mínimo sobre la estructura de la piel para minimizar los efectos de tolerabilidad indeseables asociados con el mejorador de absorción, por ejemplo, la irritación, que podría exacerbar los efectos de una infección de la piel en un paciente. Los mejoradores de absorción particulares incluyen polioles, por ejemplo, propilenglicol o glicerol. De acuerdo con lo anterior el mejorador de la absorción puede ser propilenglicol. El mejorador de absorción puede ser glicerol. Se entiende que cuando el mejorador de la absorción puede también actuar como un solvente adicional en la composición, particularmente cuando la salicilanilida halogenada es soluble en el mejorador de absorción.

Cuando está presente en la composición no acuosa, el mejorador de la absorción puede estar en una cantidad de hasta 35% en peso de la composición (por ejemplo, una composición de gel), por ejemplo desde 0.5% hasta 35%, desde 1% hasta 35%, desde 5% hasta 30%, desde 10% hasta 30%, desde 5% hasta 35%, desde 5% hasta 30% o desde 10% hasta 30%, en la que el % es en peso de la composición.

Como se ilustra en los ejemplos en el presente documento, se encontró que cuando una composición de gel no acuosa que comprende un agente gelificante de carbómero (carbómero 974P) y PEG 400, la presencia de un propilenglicol como mejorador de absorción no afecta significativamente la permeación y la absorción de la salicilanilida halogenada probada (niclosamida) sobre la piel humana. De acuerdo con lo anterior, en ciertas realizaciones, la composición no acuosa de la invención no comprende un mejorador de absorción. Esto puede ser ventajoso, porque minimiza el número de componentes presentes en la composición y puede reducir el riesgo de efectos secundarios indeseables asociados con el mejorador de absorción, por ejemplo, irritación de la piel en el sitio de aplicación de la composición no acuosa. Por tanto, las composiciones no acuosas que no contienen un mejorador de absorción pueden presentar una tolerabilidad mejorada.

Otros ingredientes

Las composiciones no acuosas descritas en el presente documento son composiciones tópicas. De acuerdo con lo anterior, la composición está convenientemente en forma de un líquido, loción, pomada, crema o gel tópico no acuoso adecuado para aplicación tópica, por ejemplo, en la piel. La composición no acuosa comprenderá adicional y generalmente uno o más excipientes adicionales además de la salicilanilida halogenada y el PEG para proporcionar composiciones de la forma requerida para la administración tópica. Los componentes adicionales de la composición pueden ser cualquiera de aquellos descritos en el presente documento y/o uno o más excipientes seleccionados de agentes modificadores de la viscosidad, emulsionantes, tensioactivos, humectantes, aceites, ceras, solventes adicionales, conservantes, agentes modificadores del pH (por ejemplo, un ácido o base adecuado, por ejemplo, un ácido orgánico o una base de amina orgánica), tampones, antioxidantes (por ejemplo, hidroxianisol butilado o hidroxitolueno butilado), inhibidores de cristalización (por ejemplo, un derivado de celulosa tal como hidroxipropilmetilcelulosa), colorantes, fragancias. Son bien conocidos ejemplos representativos de dichos excipientes adicionales, por ejemplo, como se enumeran en e1Handbook of Pharmaceutical Excipients, 7a edición, Rowe et al. Se establecen excipientes específicos adicionales en cualquiera de las composiciones no acuosas descritas en los Ejemplos del presente documento.

Fabricación

Las composiciones de gel de la invención se pueden preparar mediante un proceso que comprende las etapas:

(i) disolver la salicilanilida halogenada en el PEG;

(ii) combinar la solución de la etapa (i) con el agente de formación de gel para formar una mezcla; y

(iii) hacer que la mezcla se gelifique.

De forma adecuada, la salicilanilida halogenada se disuelve completamente en el PEG en la etapa (i) para formar una solución. La disolución se puede ayudar mediante la agitación de la mezcla mediante agitación o mediante la aplicación de ultrasonidos. Opcionalmente, la mezcla se puede calentar para facilitar la disolución. Sin embargo, preferiblemente la solución se prepara a temperatura ambiente. Opcionalmente, cualquier salicilanilida halogenada que permanezca sin disolver se puede eliminar mediante una filtración adecuada u otro método de separación antes de combinar la solución con el agente de formación de gel en la etapa (ii) del proceso.

La solución de la etapa (i) se puede agregar al agente de formación de gel o, alternativamente, el agente de formación de gel se puede agregar a la solución. Opcionalmente, el agente de formación de gel se puede disolver en algo del PEG para formar una solución o dispersión antes de combinarlo con la solución de la etapa (i). De forma adecuada, cualquier componente adicional opcional de la composición de gel, tal como mejoradores de la absorción, solventes adicionales, etc. se agrega a la mezcla antes de la gelificación de la composición. Alternativamente, se pueden agregar uno o más de los componentes opcionales después de la formación del gel al mezclar el componente o componentes adicionales con el gel.

La formación de gel en la etapa (iii) puede verse afectada por varios métodos, dependiendo de la naturaleza del agente de formación de gel utilizado. Por ejemplo, cuando el agente de formación de gel es termotrópico, el agente de formación de gel se puede calentar para formar un líquido antes de agregar la solución de la etapa (i). Después de mezclar el agente de formación de gel con la solución, la mezcla resultante se puede enfriar haciendo que la mezcla se gelifique. Alternativamente, cuando la gelificación se efectúa mediante entrecruzamiento iónico, se agrega un agente iónico adecuado a la mezcla en la etapa (iii), por ejemplo, una sal adecuada para hacer que la mezcla gelifique. La gelificación también se puede inducir al cambiar el pH de la mezcla utilizando un ácido o base adecuados para lograr el pH requerido para que se produzca la gelificación. El proceso se lleva a cabo de forma adecuada utilizando reactivos anhidros bajo condiciones anhidras para asegurar que la composición de gel resultante sea una composición de gel no acuosa.

Cuando el agente de formación de gel es un carbómero, un proceso particular para la preparación de la composición de gel de la invención comprende:

(i) disolver la salicilanilida halogenada en el PEG;

(ii) combinar la solución de la etapa (i) con un carbómero para formar una mezcla; y

(iii) calentar la mezcla para formar un gel.

La etapa (i) de este proceso se realiza de forma adecuada a temperatura ambiente. Después de combinar la solución con el carbómero, la mezcla se mezcla para proporcionar una dispersión uniforme. La mezcla se puede realizar utilizando cualquier método adecuado, por ejemplo, agitación o, preferiblemente, mediante homogeneización. La dispersión resultante se desgasifica de forma adecuada antes de la formación del gel en la etapa (iii).

En la etapa (iii) la mezcla se calienta a una temperatura de 60 a 80 °C, por ejemplo, a aproximadamente 70 °C, preferiblemente con agitación. De forma adecuada, la mezcla se mantiene a esta temperatura durante un tiempo suficiente para formar una dispersión homogénea y transparente y formación de gel. Normalmente, un tiempo de mantenimiento de aproximadamente 30 minutos es suficiente para permitir la solvatación del carbómero y la formación de gel.

La salicilanilida halogenada puede ser cualquiera de aquellas descritas en el presente documento, por ejemplo, niclosamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. La salicilanilida halogenada puede estar presente en la composición de gel final en una cantidad como se describe en el presente documento, por ejemplo, desde aproximadamente 0.05% a aproximadamente 4.5% en peso de la composición de gel final.

El carbómero en este proceso puede se cualquiera de los carbómeros divulgados en el presente documento, por ejemplo, carbómero 974P. El carbómero puede estar presente en la composición de gel final en una cantidad como se describe en el presente documento, por ejemplo, en una cantidad desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 4% o aproximadamente 2% a aproximadamente 3% en peso de la composición de gel final.

Como se describe en el presente documento, el PEG de forma adecuada tiene un peso molecular promedio de 600 o menos (de forma adecuada menor que 600). Por ejemplo, un PEG con un peso molecular promedio desde 200 a 500, por ejemplo, PEG 400. El PEG puede estar presente en la composición de gel final in una cantidad como se describe en el presente documento, por ejemplo, mayor de 80%, opcionalmente mayor de 85%, por ejemplo, mayor de 90% en peso de la composición de gel final.

Como se discutió en relación con el método de proceso general anterior, el proceso se realiza bajo condiciones anhidras utilizando reactivos anhidros para asegurar que la composición de gel resultante sea un gel no acuoso.

Un aspecto adicional de la presente invención proporciona una composición de gel no acuosa obtenida por, o que se puede obtener mediante el proceso descrito en el presente documento.

Cuando la composición de la invención está en forma de loción, pomada o crema, la composición se puede preparar utilizando métodos conocidos para la preparación de dichas composiciones. Por ejemplo, se pueden preparar lociones o ungüentos simplemente al mezclar la salicilanilida halogenada, el PEG y otros excipientes necesarios, por ejemplo, modificadores de la viscosidad, solventes o tensioactivos adicionales.

Las composiciones no acuosas de la invención también se pueden preparar como emulsión no acuosa o microemulsiones para proporcionar una composición en forma de, por ejemplo, una crema no acuosa. Se pueden preparar emulsiones y microemulsiones no acuosas utilizando métodos bien conocidos. Las emulsiones y microemulsiones no acuosas se pueden preparar al mezclar dos fases no acuosas inmiscibles. De forma adecuada, se emulsiona una fase hidrófila no acuosa (por ejemplo, una fase hidrófila que comprende excipientes polares y la salicilanilida halogenada) con una fase hidrófoba inmiscible (por ejemplo, que comprende excipientes hidrófobos no polares). La emulsión no acuosa puede comprender una fase hidrófoba continua y una fase hidrófila discontinua. Generalmente, sin embargo, la emulsión no acuosa comprenderá una fase hidrófila continua y una fase hidrófoba discontinua. Puede ser que la fase hidrófila no acuosa comprenda la salicilanilida halogenada y PEG y la fase hidrófoba no acuosa comprenda un líquido no polar, que es inmiscible con la fase hidrófoba, por ejemplo, un triglicérido de cadena media, un aceite vegetal, un aceite de hidrocarburo o un aceite mineral tal como la parafina. Generalmente, la emulsión no acuosa se estabilizará con uno o más tensioactivos o emulsionantes adecuados, por ejemplo, uno o más tensioactivos no iónicos (por ejemplo, macrogol cetoestearilo, alcohol cetoestearílico, estearato de glicerilo, polisorbato 80, Brij s721, Brij S2, ceteareth-20 o éter de macrogol estearilo). La emulsión o microemulsión se puede formar utilizando métodos bien conocidos, por ejemplo, por homogeneización de la fase hidrófila con la fase hidrófoba junto con los otros componentes de la emulsión o microemulsión no acuosa.

Los procesos descritos en el presente documento se llevan a cabo de forma adecuada bajo condiciones anhidras utilizando excipientes anhidros para prevenir o minimizar la contaminación de la composición con agua.

Aplicaciones tópicas de la composición no acuosa para uso en el tratamiento de infecciones Gram-positivas

Los inventores han encontrado que las salicilanilidas halogenadas, por ejemplo, closantel, rafoxanida, oxiclozanida o niclosamida, son altamente eficaces contra bacterias Gram positivas, como Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes o Propionibacterium acnes.

La niclosamida es bacteriostática para S. aureus (véase Figura 1), es decir, previene el crecimiento de la bacteria, pero no lo extingue. Los inventores también han encontrado que la niclosamida es igualmente eficaz contra las cepas de S. aureus resistentes a meticilina, ácido fusídico y mupirocina que contra las cepas no resistentes (véase Figura 2).

Inesperadamente, los inventores también han encontrado que las bacterias Gram positivas desarrollan mutaciones espontáneas que confieren resistencia a la salicilanilida halogenada a frecuencias muy bajas. Los ejemplos en el presente documento ilustran que las salicilanilidas halogenadas, por ejemplo, closantel, rafoxanida, oxiclozanida y particularmente niclosamida, dan como resultado frecuencias muy bajas de mutaciones que confieren resistencia contra MRSA 01 en comparación con las frecuencias de mutación observadas con otros agentes antibacterianos comúnmente utilizados tales como ácido fusídico, mupirocina y retapamulina (véase Tabla 5).

De acuerdo con lo anterior, se espera que las composiciones de la invención que comprenden una salicilanilida halogenada proporcionen un potente efecto antibacteriano, con un riesgo relativamente bajo de aparición de resistencia bacteriana a la salicilanilida halogenada. Por lo tanto, la composición de la invención que comprende la salicilanilida halogenada puede aplicarse tópicamente durante períodos de tratamiento prolongados (por ejemplo, más de 2 semanas) con un bajo riesgo de desarrollo de resistencia.

En una realización se proporciona una composición de la invención para uso en la prevención y/o tratamiento tópicos de enfermedades o infecciones provocadas por bacterias Gram-positivas.

Puede ser que la composición de la invención sea para uso en la prevención y/o tratamiento tópicos de una enfermedad o afección seleccionada de impétigo, conjuntivitis bacteriana, infecciones relacionadas con dermatitis atópica, sicosis barbae, foliculitis superficial, paroniquia eritrasma, dermatosis infectada secundaria, carbuncos, furonculosis, ectima, celulitis, erisipela, fascitis necrotizante, infecciones de la piel secundarias de heridas, dermatitis, sarna, úlcera diabética, acné y similares. La infección o enfermedad puede ser acné. La infección o enfermedad puede ser dermatitis atópica o eczema infectado por una bacteria Gram-positiva, tal como Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes.

Puede ser que la composición de la invención es para uso en la prevención y/o tratamiento tópicos de una enfermedad o afección seleccionada de trastorno de la piel o de la membranas, tales como infecciones de la piel o membranas (por ejemplo infecciones de las membranas nasales, axila, ingle, perineo, recto, piel dermatítica, úlceras de la piel y sitios de inserción de equipo médico tales como agujas intravenosas, catéteres y traqueotomía o sondas de alimentación) con cualquiera de las bacterias descritas anteriormente (por ejemplo, cualquiera de los estafilococos, estreptococos tales como S. aureus (por ejemplo, S. aureus resistente a meticilina (MRSA)). Las afecciones bacterianas particulares que se pueden tratar mediante aplicación tópica de la composición de gel de la invención también incluyen las afecciones relacionadas con la piel y la membrana descritas anteriormente, así como: rosácea (que incluyen rosácea eritematotelangiectásica, rosácea papulopustulosa, rosácea fimatosa y rosácea ocular); erisipela; eritrasma; ectima; ectima gangrenoso; impétigo; paroniquia; celulitis; foliculitis (que incluye foliculitis de la tina); furunculosis; carbunculosis; síndrome de piel escaldada por estafilococos; escarlatina quirúrgica; enfermedad perianal estreptocócica; síndrome de choque tóxico estreptocócico; queratólisis picada; tricomicosis axilar; pioderma; infecciones del oído del canal externo; síndrome de la uña verde; espiroquetas; La fascitis necrotizante; infecciones de la piel por micobacterias (tales como lupus vulgaris, escrofuloderma, tuberculosis verrugosa, tuberculides, eritema nudoso, eritema indurado, manifestaciones cutáneas de lepra tuberculoide o lepra lepromatosa, eritema nudoso leproso, M. kansasii cutáneo, infecciones por M. malmoense, M. szulgai, M. simiae, M. gordonae, M. haemophilum, M. avium, M. intracellular, M. chelonae (que incluye M. abscessus) o M. fortuitum, granuloma de piscina (o pecera), linfadenitis y úlcera de Buruli (úlcera de Bairnsdale, Úlcera de Searles, úlcera de Kakerifu o úlcera de Toro)); así como eccemas infectados, quemaduras, abrasiones y heridas en la piel.

Puede ser que la infección o enfermedad se selecciona del grupo que consiste en impétigo, conjuntivitis bacteriana y dermatitis atópica. Puede ser que la infección o enfermedad se selecciona del grupo que consiste en impétigo, conjuntivitis bacteriana, infecciones relacionadas con dermatitis atópica, sicosis barbae, foliculitis superficial, paroniquia eritrasma, dermatosis infectada secundaria, carbuncos y furonculosis, ectima, celulitis, erisipela, fascitis necrotizante, infecciones de la piel secundarias de heridas, dermatitis, sarna, úlcera diabéticas y similares. Puede ser que la infección o enfermedad se seleccione de dermatitis atópica e infecciones relacionadas, dermatitis, dermatosis infectada secundaria e impétigo. Puede ser que la infección o enfermedad sea celulitis. Puede ser que la infección o enfermedad se seleccione de sicosis barbae, foliculitis superficial, paroniquia eritrasma, carbuncos, furonculosis, ectima, erisipela, fascitis necrotizante, infecciones de la piel secundarias de heridas, sarna y úlceras diabéticas.

Ejemplos de enfermedades que se pueden tratar tópicamente utilizando la composición de la invención incluyen impétigo, conjuntivitis bacteriana, infecciones relacionadas con dermatitis atópica, acné, sicosis barbae, foliculitis superficial, paroniquia eritrasma, dermatosis infectada secundaria, carbuncos, furonculosis (ectima, celulitis, erisipela, fascitis necrotizante, infecciones de la piel secundarias de heridas, dermatitis, sarna, úlcera diabéticas y similares).

La infección o enfermedad tratada tópicamente utilizando la composición de la invención puede ser una infección de la piel, dermatitis infectada o dermatosis infectada, por ejemplo, cualquiera de la piel infecciones descritas en el presente documento. La infección de la piel, por ejemplo, se puede seleccionar de impétigo (que incluye impétigo contagioso, impétigo ampolloso, y ectima) dermatitis infectada (por ejemplo, dermatitis infectada atópica) eccema infectado, heridas de la piel infectadas, quemaduras infectadas y úlceras infectadas (por ejemplo úlcera diabéticas).

La infección o enfermedad tratada tópicamente utilizando la composición de la invención puede ser una dermatosis secundariamente infectada Gram-positiva, por ejemplo, una infección de la piel secundaria. Las infecciones Grampositivas secundarias son complicaciones comunes de dermatosis primarias, infecciones de la piel primarias no bacterianas, lesiones traumáticas, úlceras, infestaciones cutáneas y otras enfermedades de la piel. De acuerdo con lo anterior, la composición de la invención se puede utilizar en el tratamiento tópico de, por ejemplo, infecciones secundarias de una afección seleccionada de eccema, pediculosis, sarna, picaduras de insectos (por ejemplo, urticaria papular), psoriasis (que incluyen psoriasis por pénfigo), úlceras de piel, kerion y una infección viral de la piel (por ejemplo, herpes simple o varicela).

Puede ser que la composición de la invención sea para uso en el tratamiento de una enfermedad o infección seleccionada de eccema infectado, dermatitis infectada, impétigo, úlceras diabéticas infectadas, picaduras de insectos infectados, quemaduras infectadas, heridas infectadas, acné, rosácea, foliculitis, infecciones de articulación protésica y rinosinusitis (que incluyen rinosinusitis crónica).

En pacientes afectados por determinadas afecciones dermatológicas, la integridad del tejido de la piel se ve a menudo comprometida, lo que facilita que las bacterias penetren en la piel y se establezcan. Por tanto, dichos pacientes son más propensos a desarrollar infecciones de la piel. De acuerdo con lo anterior, las composiciones de la invención se pueden utilizar para reducir o erradicar bacterias Gram-positivas tales como Staphylococcus aureus y/o Streptococcus pyogenes que colonizan y proliferan en la piel afectada por una afección dermatológica. La afección dermatológica puede ser cualquiera de las afecciones divulgadas en el presente documento, por ejemplo, dermatitis, que incluye dermatitis atópica, eccema y úlceras diabéticas. En algunos pacientes con afecciones dermatológicas infectadas con bacterias Grampositivas, la infección puede no ser sintomática. Sin embargo, la infección se puede volver sintomática y/o provocar un empeoramiento o exacerbación de la afección dermatológica. De acuerdo con lo anterior, las composiciones de la invención pueden ser útiles como un tratamiento profiláctico de una afección dermatológica para evitar que una infección se vuelva sintomática y/o para prevenir o reducir el riesgo de exacerbación de la afección dermatológica.

Bacterias Gram-positivas

Puede ser que la bacteria Gram-positiva sea Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA).

Puede ser que la bacteria Gram-positiva desarrolle mutaciones espontáneas que confieren resistencia a la salicilanilida halogenada a una frecuencia de menos de 10'6 a la concentración inhibidora mínima (MIC) de la salicilanilida halogenada a la bacteria Gram-positiva. Puede ser que la bacteria Gram-positiva desarrolle mutaciones espontáneas que confieren resistencia a la salicilanilida halogenada a una frecuencia de menos de 10'7 a la MIC de la salicilanilida halogenada a la bacteria Gram-positiva. Puede ser que la bacteria Gram-positiva desarrolle mutaciones espontáneas que confieren resistencia a la salicilanilida halogenada a una frecuencia de menos de 10'8 a la MIC de la salicilanilida halogenada a la bacteria Gram-positiva. Por lo tanto, puede ser que la bacteria Gram-positiva desarrolle mutaciones espontáneas que confieren resistencia a la salicilanilida halogenada (por ejemplo, niclosamida) a una frecuencia de menos de 4 x 10'9 a la MIC de la salicilanilida halogenada a la bacteria Gram-positiva.

Puede ser que la bacteria Gram-positiva sea un Staphylococcus spp., Streptococcus spp. o Propionibacterium spp. La bacteria Gram-positiva puede ser un Staphylococcus spp. o Streptococcus spp. La bacteria Gram-positiva se puede seleccionar de Staphylococcus aureus o Streptococcus pyogenes. La bacteria Gram-positiva puede ser Propionibacterium spp., por ejemplo, Propionibacterium acnes. Puede ser que la bacteria Gram-positiva no sea una propionibacteria por ejemplo que no es Propionibacterium acnes.

En algunas realizaciones, la población de bacterias Gram-positivas incluye bacterias Gram-positivas coco. En algunas realizaciones, la bacteria Gram-positiva son del género Streptococcus o Staphylococcus.

En algunas realizaciones, la bacteria Gram-positiva son del género Streptococcus. Puede ser que las bacterias Grampositivas son Streptococcus seleccionados de Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus suis, Streptococcus agalactiae o Streptococcus viridans.

En algunas realizaciones, la bacteria Gram-positiva son Streptococcus pyogenes. En algunas realizaciones, la bacteria Gram-positiva son del género Staphylococcus genus. Puede ser que las bacterias Gram-positiva sean Staphylococcus seleccionados de Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus o Staphylococcus lugdunensis. En algunas realizaciones, las bacterias Gram positivas de coco son Staphylococcus aureus (por ejemplo, Staphylococcus aureus resistente a meticilina).

Puede ser que la población de bacterias Gram-positivas incluya bacterias Gram-positivas resistente a antibióticos. Puede ser que la bacteria Gram-positiva sea una cepa resistente a los antibióticos. Por ejemplo, la bacteria Gram-positiva descrita en el presente documento puede ser resistente a un antibiótico diferente de una salicilanilida halogenada (por ejemplo, la bacteria es resistente a un fármaco diferente de closantel, rafoxanida, oxiclozanida o niclosamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma).

Puede ser que la bacteria Gram-positiva sea resistente a un fármaco seleccionado de ácido fusídico, mupirocina, retapamulina, eritromicina, clindamicina y una tetraciclina (por ejemplo, tetraciclina, minociclina o doxiciclina).

Puede ser que la bacteria Gram-positiva sea resistente a un fármaco seleccionado de eritromicina, clindamicina o una tetraciclina (por ejemplo, tetraciclina, minociclina o doxiciclina).

Puede ser que la bacteria Gram-positiva sea resistente a un fármaco seleccionado de ácido fusídico, mupirocina y retapamulina.

Puede ser que la bacteria sea resistente a un fármaco seleccionado de ácido fusídico, mupirocina, retapamulina, eritromicina y clindamicina.

Puede ser que la bacteria sea resistente a un fármaco seleccionado de eritromicina y clindamicina.

Puede ser que la bacteria sea resistente a una tetraciclina, por ejemplo, tetraciclina, minociclina o doxiciclina.

Puede ser que la bacteria sea Propionibacterium spp, por ejemplo, Propionibacterium acnes resistente a un fármaco seleccionado de eritromicina, clindamicina o una tetraciclina (por ejemplo, tetraciclina, minociclina o doxiciclina). Puede ser que la bacteria sea Propionibacterium spp, por ejemplo, Propionibacterium acnes resistente a un fármaco seleccionado de eritromicina y clindamicina. Puede ser que la bacteria sea Propionibacterium spp, por ejemplo, Propionibacterium acnes resistente a un fármaco seleccionado de ácido fusídico o retapamulina.

Puede ser que la bacteria sea Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA).

Puede ser que la bacteria Gram-positiva no sea una cepa resistente a los antibióticos.

La baja frecuencia de mutación asociada con las salicilanilidas halogenadas puede permitir que la salicilanilida halogenada comprendida en la composición de gel de la invención se aplique tópicamente como monoterapia en la prevención o el tratamiento de una infección. Esto tiene la ventaja de que reduce la exposición de los pacientes a agentes terapéuticos adicionales innecesarios y, en particular, evita la necesidad de coadministrar antibióticos adicionales, reduciendo de esta manera aún más el riesgo de resistencia asociado con el uso de antibióticos convencionales.

La salicilanilida halogenada se puede aplicar tópicamente para proporcionar un tratamiento de una infección, por ejemplo, al reducir o eliminar las bacterias Gram-positivas que provocan la infección. Las bajas frecuencias de mutación asociadas con las salicilanilidas halogenadas también pueden hacer que los compuestos sean particularmente adecuados para uso como terapia de mantenimiento para mantener una infección en remisión; para prevenir la recurrencia de la infección; o para controlar la concentración de bacterias Gram-positivas a un nivel aceptablemente bajo para prevenir o minimizar los síntomas de la infección experimentada por un sujeto.

Dermatitis atópica

En una realización particular se proporciona una composición no acuosa de la invención para uso en el tratamiento tópico de dermatitis atópica.

Los pacientes con dermatitis atópica son propensos a la infección de la piel por bacterias Gram-positivas tales como bacterias Staphylococcus y/o Streptococcus y existe una correlación de la severidad de la dermatitis atópica con la colonización bacteriana.

En ciertas realizaciones una composición de la invención es para uso en el tratamiento de dermatitis atópica infectada con bacterias Gram-positivas, por ejemplo, bacterias Staphylococcus y/o Streptococcus.

En ciertas realizaciones la composición no acuosa de la invención es para uso en el tratamiento tópico de dermatitis atópica en la que la dermatitis atópica es asintomático de los efectos de una infección bacteriana.

Acné

En una realización particular de la invención se proporciona una composición de la invención para uso en la prevención o tratamiento tópico del acné.

Puede ser que la infección sea enfermedad de acné, por ejemplo, acné vulgaris. El acné puede ser acné leve, moderado o severo. El acné puede ser acné inflamatorio. El acné puede ser acné no inflamatorio. Cuando la enfermedad o infección es acné puede ser que la bacteria Gram-positiva sea Propionibacterium spp, particularmente Propionibacterium acnes.

Puede ser que la infección o enfermedad no sea acné vulgaris.

La salicilanilida halogenada comprendida en la composición puede ser cualquiera de las salicilanilidas halogenadas descritas en el presente documento. De forma adecuada la salicilanilida halogenada es niclosamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, más particularmente niclosamida en la forma de base libre.

Una causa principal de acné es la obstrucción del canal pilosebáceo como resultado de la producción excesiva de sebo y la formación de microcomedones. Éstos, a su vez, pueden progresar a comedones abiertos (“puntos negros”) o comedones cerrados (“puntos blancos”). El microambiente rico en sebo proporciona las condiciones ideales para el crecimiento bacteriano, particularmente Propionibacterium acnes y Staphylococcus aureus. Las bacterias tales como Propionibacterium acnes convierten el sebo en ácidos grasos libres, lo que da como resultado una respuesta inflamatoria local y el desarrollo de lesiones de acné inflamatorias. Las lesiones inflamatorias se pueden caracterizar por pápulas (pequeñas espinillas o hinchazones) o pústulas (lesiones llenas de pus en la epidermis o la dermis).

La composición de la invención puede ser para uso en el tratamiento tópico o prevención del acné infectado con una Propionibacterium, por ejemplo, Propionibacterium acnes. El Propionibacterium puede ser resistente a uno o más antibióticos convencionales. Por ejemplo, el Propionibacterium puede ser resistente a uno o más de eritromicina, clindamicina y una tetraciclina (por ejemplo, tetraciclina, minociclina o doxiciclina). En esta realización puede ser que el Propionibacterium sea Propionibacterium acnes.

La composición de la invención puede ser para uso en el tratamiento tópico o prevención del acné infectado con Staphylococcus Sp., por ejemplo, Staphylococcus aureus. El Staphylococcus puede ser resistente a uno o más antibióticos convencionales. Por ejemplo, el Staphylococcus aureus puede ser resistente a uno o más de eritromicina o clindamicina. El Staphylococcus aureus puede ser MRSA.

La composición de la invención puede ser para uso en el tratamiento tópico o prevención del acné inflamatorio. El acné inflamatorio puede ser acné inflamatorio moderado o severo. La composición de gel de la invención se puede aplicar tópicamente a la piel como tratamiento profiláctico para prevenir la aparición de acné. La composición de gel de la invención se puede aplicar tópicamente a una lesión de acné no inflamatoria, por ejemplo, una microcomedona, un comedón abierto o un comedón cerrado para evitar que el acné progrese a acné inflamatorio. La profilaxis o el tratamiento de acné no inflamatorio o el tratamiento del acné inflamatorio (particularmente el acné inflamatorio agudo o en etapa temprana) pueden ser particularmente adecuados para minimizar o prevenir las cicatrices de la piel que pueden ocurrir en algunos sujetos afectados por el acné inflamatorio. El acné inflamatorio produce una respuesta inmunitaria y puede provocar la formación de tejido cicatricial en el sitio de la inflamación. Las cicatrices pueden ser atróficas o hipertróficas. Las cicatrices también pueden provocar una hiperpigmentación posinflamatoria de la piel. Las cicatrices atróficas (asociadas con la pérdida de colágeno) son particularmente frecuentes en el acné. La composición de gel tópico de la invención para uso en el tratamiento del acné no inflamatorio o del acné inflamatorio puede reducir o eliminar la inflamación resultante de la infección bacteriana, previniendo o reduciendo de este modo las cicatrices del acné.

De acuerdo con lo anterior, la composición de la invención puede ser para uso en la prevención o reducción tópica de las cicatrices de la piel asociadas con el acné. Este aspecto de la invención puede ser particularmente adecuado para el tratamiento de pacientes con piel oscura, por ejemplo, pacientes africanos, hispanos o asiáticos.

La composición de la invención puede ser para uso en la prevención o el tratamiento tópico de acné leve, moderado o severo. El acné leve (acné tipo 1) se caracteriza por la falta de inflamación y generalmente no es particularmente doloroso. El área del cuerpo afectada por el acné suele ser limitada. Los puntos negros no inflamados y las pequeñas protuberancias rojas (pápulas) son comunes en el acné tipo 1. El acné moderado (acné tipo 2) es similar al acné tipo 1, pero se caracteriza por un aumento de los niveles de inflamación y enrojecimiento. Las espinillas pueden variar desde pequeñas protuberancias rojas hasta puntos blancos medianos. A diferencia de las imperfecciones del acné tipo 1, el aumento de la inflamación provoca espinillas que a menudo son dolorosas al tacto. El acné moderado a severo (acné tipo 3) se caracteriza por la presencia de nódulos y pústulas de tamaño mediano a grande que con frecuencia son dolorosos. En el acné tipo 3, las espinillas a menudo se asocian con cantidades significativas de inflamación. Los puntos blancos grandes y las protuberancias rojas grandes y dolorosas son comunes en pacientes con acné tipo 3. El acné severo, o acné tipo 4, se caracteriza por una infección profunda y una inflamación extensa. Los quistes grandes, que son esencialmente nódulos grandes e irregulares, son una característica común en el acné tipo 4.

La composición de la invención se puede aplicar tópicamente en combinación con otro agente activo para el tratamiento de acné, por ejemplo, un retinoide tópico y/o peróxido de benzoilo. El otro agente activo se puede aplicar tópicamente de forma separada a la aplicación tópica de la composición de la invención. Alternativamente la composición de la invención puede incorporar el otro agente, por ejemplo, un retinoide y/o peróxido de benzoilo de tal manera que todos los activos estén presentes en una formulación tópica única. Los retinoides tópicos adecuados incluyen cualquier retinoides adecuados para el tratamiento de acné, por ejemplo, ácido retinoico (tretinoína), adapaleno o tazaroteno. En una realización la composición de la invención es para uso en combinación con un retinoide para el tratamiento tópico de acné. En otra realización la composición de la invención es para uso en combinación con peróxido de benzoilo para el tratamiento tópico de acné. En otra realización la composición de la invención es para uso en combinación con peróxido de benzoilo y un retinoide para el tratamiento tópico de acné.

Una composición no acuosa en el presente documento descrito (por ejemplo, una composición de gel no acuosa) que comprende adicionalmente un retinoide y/o peróxido de benzoilo forma un aspecto adicional de la presente invención.

Un aspecto adicional de la invención proporciona un kit que comprende una primera y segunda composición, en la que la primera composición comprende una composición no acuosa de la invención; y la segunda composición se selecciona de (i) una composición que comprende un retinoide y (ii) una composición que comprende peróxido de benzoilo. De acuerdo con lo anterior puede ser que el kit comprenda una primera composición que comprende una composición no acuosa de la invención (por ejemplo, que comprende niclosamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma); y una segunda composición que comprende un retinoide. En una realización adicional el kit comprende una primera composición que comprende una composición no acuosa de la invención (por ejemplo, que comprende niclosamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma); y una segunda composición que comprende peróxido de benzoilo.

Los kits de acuerdo con este aspecto de la invención son particularmente adecuados para uso en el tratamiento de acné. De acuerdo con lo anterior, los kits descritos en el presente documento pueden comprender adicionalmente instrucciones para la aplicación tópica de las composiciones comprendidas en el kit para el tratamiento del acné, de forma adecuada en las que las instrucciones para uso requieren la aplicación tópica de la composición durante un período de tiempo suficiente para tratar eficazmente el acné, por ejemplo, durante 1 semana o más de 2 semanas.

Cuando el kit incluye un retinoide, el retinoide en el kit puede ser cualquier retinoide adecuado para uso en el tratamiento del acné, por ejemplo, seleccionado entre ácido retinoico, adapaleno y tazaroteno).

La composición no acuosa de la invención puede ser para uso como terapia de mantenimiento tópica en el tratamiento del acné. Cuando se utiliza como terapia de mantenimiento, la composición de la invención puede actuar para mantener el acné en remisión o para prevenir la recurrencia o el empeoramiento de la afección después de un tratamiento primario del acné. El tratamiento primario actúa para controlar el acné y el uso de mantenimiento de la composición tópica de la invención mantiene el control del acné. El tratamiento primario puede ser cualquier tratamiento conocido del acné, por ejemplo, un retinoide, peróxido de benzoílo, antibióticos tópicos o antibióticos orales o una combinación de los mismos. La terapia primaria también puede ser una composición tópica de la invención como se describe en el presente documento.

Las directrices de tratamiento actuales para el acné recomiendan que los antibióticos tópicos convencionales para el tratamiento del acné se utilicen en combinación con otro agente antibacteriano tal como un retinoide o peróxido de benzoilo para minimizar el riesgo de desarrollo de resistencia a los antibióticos. Se espera que la muy baja frecuencia de mutación asociada con el uso tópico de una salicilanilida halogenada presente en la composición de la invención reduzca significativamente el riesgo de aparición de resistencia a los antibióticos y, por lo tanto, se espera que la composición de la invención sea útil como monoterapia para el tratamiento tópico del acné. Esto puede ser particularmente ventajoso para algunos pacientes que son sensibles o intolerantes al peróxido de benzoílo y/o retinoides tópicos. Por tanto, el uso de una composición de la invención como monoterapia tópica para el tratamiento del acné puede reducir los efectos secundarios en comparación con los tratamientos convencionales del acné que incluyen peróxido de benzoílo o retinoides tópicos.

Un efecto secundario común de ciertas quimioterapias, especialmente los inhibidores del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), es el desarrollo de erupciones (foliculitis). Las erupciones acneiformes se observan como efecto secundario en una proporción muy alta de pacientes tratados con inhibidores de EGFR, incluidos gefitinib, erlotinib, panitumumab y cetuximab y pueden ser un marcador sustituto de la eficacia del inhibidor de EGFR (Wollenberg et al, et al. Cutaneous side effects of EGFR inhibitors-- appearance and management., Dtsch. Med. Wochenschr. 135(4):149-54 (2010 Jan)).

La reacción acneiforme comienza como un eritema facial seguido de pápulas y pústulas sobre la cara y la parte superior del tronco. A diferencia del acné verdadero, las pústulas son estériles. Sin embargo, se ha mostrado que los antibióticos tópicos son eficaces en el tratamiento de las erupciones acneiformes asociadas con la quimioterapia.

De acuerdo con lo anterior, la composición de gel de la invención descrita en el presente documento puede ser para uso en el tratamiento tópico de una erupción acneiforme, particularmente una erupción acneiforme en un sujeto que ha sido tratado o está siendo tratado con un inhibidor de EGFR.

Descolonización

La composición de la invención puede ser para uso para descolonizar a un sujeto que porta una bacteria Gram-positiva (que incluye cualquiera de las bacterias Gram-positivas descritas en el presente documento, por ejemplo, MRSA). Dicha descolonización puede ser eficaz para prevenir o reducir la propagación de la infección a otros sujetos, particularmente en un entorno hospitalario. La descolonización también puede prevenir o reducir el riesgo de infecciones en el sitio quirúrgico como resultado de procedimientos quirúrgicos o médicos llevados a cabo en el paciente o en el sitio de dispositivos médico tales como catéteres o líneas IV o cánulas. De acuerdo con lo anterior, la composición de la invención puede ser para uso en la descolonización de un sujeto antes de realizar un procedimiento quirúrgico en el sujeto, en el que la composición se aplica tópicamente al sujeto. Dichos procedimientos quirúrgicos incluyen, por ejemplo, procedimientos quirúrgicos electivos tales como reemplazo de cadera o rodilla. En una realización, la composición de la invención puede ser para uso en la descolonización de un sujeto antes de la diálisis. La descolonización previa a la diálisis puede prevenir o reducir el riesgo de infección asociada con la diálisis, tal como infección de línea vascular o infecciones del torrente sanguíneo relacionadas con el catéter (CRBSI). La descolonización se puede lograr al administrar tópicamente la composición de gel que comprende la salicilanilida halogenada a sitios sobre el sujeto que están colonizados por bacterias Gram-positivas. Se sabe que un sitio común de colonización bacteriana tal como MRSA es la nariz. De acuerdo con lo anterior, la composición de la invención se puede aplicar tópicamente a la nariz. En particular, la composición de la invención se puede aplicar a las fosas nasales anteriores (la superficie interna de las fosas nasales).

Usos de las composiciones de gel en métodos de tratamiento

También se proporcionan métodos para tratar a un sujeto que tiene una infección bacteriana Gram-positiva que incluyen la administración tópica a un sujeto que tiene una infección bacteriana Gram-positiva de la composición de la invención en una cantidad suficiente para disminuir la población de bacterias Gram-positivas en el sujeto.

La presente invención proporciona un método para tratar a un sujeto que padece una infección contribuida o provocada por bacterias Gram-positivas como se describió anteriormente, dicho método comprende la etapa de administrar tópicamente una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición de la invención. El método de tratamiento de la invención puede caracterizarse por una tasa de desarrollo de resistencia espontánea a estas bacterias de menos de 10' 6, como menos de 10‘7 o 10‘8, como menos de 4 x 10‘9. Un ejemplo que es de especial interés es una composición de gel de la invención que comprende niclosamida que puede caracterizarse por una tasa de desarrollo de resistencia espontánea a estas bacterias de menos de 10‘8, tal como menos de 1 x 10‘9.

La presente invención puede proporcionar el uso de la composición de la invención en la fabricación de un medicamento para la prevención y/o tratamiento tópico de una infección contribuida o provocada por bacterias Gram-positivas.

Los métodos de tratamiento y usos descritos en esta sección pueden ser para el tratamiento y/o prevención de cualquiera de las afecciones descritas en el presente documento. Los métodos y usos pueden ser para infecciones provocadas por cualquiera de las bacterias Gram positivas descritas en el presente documento.

Dosificaciones y regímenes de dosificación

Puede ser que la composición de la invención se administre tópicamente como un tratamiento agudo de una infección, por ejemplo, la administración durante un período de menos de 2 semanas.

El efecto combinado del potente efecto antibacteriano de la salicilanilida halogenada junto con el bajo riesgo de aparición de resistencia bacteriana puede hacer que la composición de la invención sea particularmente adecuada para ser administrada como tratamiento crónico de una infección, por ejemplo, la administración durante un período de más de 2 semanas.

La duración del tratamiento dependerá de la naturaleza de la infección que se esté tratando. De forma adecuada, la administración tópica se continúa hasta que se erradica la infección y/o se reducen o eliminan los síntomas de la infección. Un médico puede determinar fácilmente el límite superior del período de tratamiento. La salicilanilida halogenada, por ejemplo, se puede administrar tópicamente durante un período seleccionado de 1 día, 2 días, más de 3 días, más de 1 semana, más de 2 semanas, más de 3 semanas, más de 4 semanas, más de 6 semanas, más de 12 semanas, más de 6 meses y más de 1 año. Por ejemplo, la salicilanilida halogenada se puede administrar tópicamente durante un período de más de dos semanas a aproximadamente 1 año; un período de 3 semanas a 1 año; un período de 4 semanas a 1 año; un período de 4 semanas a 6 meses; o de 4 semanas a 3 meses.

La frecuencia de administración tópica de la composición de la invención dependerá de una serie de factores que un médico puede determinar fácilmente, por ejemplo, la gravedad de la infección, la capacidad de respuesta al tratamiento inicial y la infección particular que se está tratando. De forma adecuada, la composición de gel de la invención se puede administrar tópicamente una vez al día, dos veces al día, tres veces al día, cuatro veces al día, una vez cada dos días o una vez a la semana.

La dosificación de salicilanilida halogenada administrada con la composición de la invención variará dependiendo de una serie de factores que incluyen, por ejemplo, la edad, el peso y el género del animal o humano que padece la infección, la gravedad de la infección y la frecuencia de administración seleccionada.

Un médico puede determinar fácilmente una dosificación adecuada para aplicación tópica. De forma adecuada la composición de la invención se aplica de forma tópica en una cantidad desde aproximadamente 0.01 a aproximadamente 10000 mg/cm2, por ejemplo, desde aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 1000 mg/cm2, preferiblemente desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 100 mg/cm2. La composición de forma adecuada comprende la salicilanilida halogenada en una cantidad desde aproximadamente 0.1% a aproximadamente 10%, preferiblemente desde aproximadamente 0.1% hasta aproximadamente 10%, más preferiblemente desde aproximadamente 0.1% hasta aproximadamente 6% e incluso más preferiblemente desde aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 4% en peso de la composición. En general, la cantidad de la salicilanilida halogenada a ser administrada tópicamente puede estar en el rango de 0.01-2 mg/cm2, preferiblemente entre 0.05 -1 mg/cm2 e incluso más preferiblemente entre 0.05- 0.5 mg/cm2, por ejemplo, entre 0.2 mg/cm2.

La composición de la invención de forma adecuada se aplica al sitio de infección y se frota suavemente para proporcionar una cubierta de la composición (por ejemplo, gel) sobre el sitio infectado. Alternativamente la composición de la invención se puede aplicar a un portador adecuado, por ejemplo, un apósito para heridas o un parche que se aplica al sitio de la infección.

Sujetos

Las composiciones no acuosas de la invención son adecuadas para uso en el tratamiento tópico de sujetos afectados por cualquiera de las enfermedades o infecciones descritas en el presente documento. El sujeto puede ser un mamífero de sangre caliente. En realizaciones particulares el sujeto tratado es un humano. En ciertas realizaciones el sujeto puede ser un animal. En ciertas realizaciones la composición de la invención es para uso como producto veterinario para el tratamiento tópico de un animal. En ciertas realizaciones las composiciones tópicas no acuosas de la invención (por ejemplo, las composiciones de gel descritas en el presente documento) son para uso en el tratamiento tópico de enfermedades e infecciones en animales comerciales tales como ganado (por ejemplo, vacas, ovejas, pollos, cerdos, gansos, patos, cabras, etc.). En otras realizaciones, las composiciones de la presente invención pueden ser para uso en el tratamiento tópico de enfermedades o infecciones en animales de compañía tales como gatos, perros, caballos, etc.

Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar, pero no limitar, la invención de ninguna manera, conformación o forma, ya sea explícita o implícitamente.

Ejemplos

Ejemplo 1

Se llevaron a cabo pruebas experimentales para determinar la actividad antibacteriana y la tasa de mutación que confiere resistencia a las salicilanilidas halogenadas y los compuestos de referencia.

Microorganismos

Se utilizó la cepa 01 de S. aureus resistente a meticilina (MRSA) como microorganismo de prueba principal como bacteria representativa que se encuentra comúnmente en infecciones de la piel. Esta cepa es un aislado clínico de MRSA adquirido en comunidad del tipo USA 300, de un absceso de la piel.

También se incluyeron en el estudio otras veintiuna cepas de S. aureus sensibles a meticilina y MRSA, y 4 cepas de Streptococcus pyogenes (Tabla 2). Estos cubrieron cepas resistentes a ácido fusídico y a mupirocina, estos dos tipos de resistencia son de relevancia clínica.

Las cepas se conservaron en Caldo Luria Bertani (LB) (S. aureus) o Infusión de Cerebro y Corazón (BHI) (S. pyogenes) suplementado con glicerol al 15% (v/v) a -80 °C, y se reactivaron mediante aislamiento sobre placas de agar LB (S. aureus) o BHI (S. pyogenes). Las cepas se cultivaron en caldo Mueller Hinton (MH) ajustado a cationes (S. aureus) suplementado con sangre de caballo lisada al 2.5% (v/v) (S. pyogenes). Todas las cepas se cultivaron a 37 °C, aeróbicamente para cepas de S. aureus.

Tabla 2

Todas las cepas de Staphylococcus aureus excepto una (MRSA 07) son aislados clínicos humanos; MRSA 07 es un MRSA asociado al ganado; MRSA 02 y MRS 04 son MRSA asociado a comunidad; *: cepas resistentes a ácido fusídico; $ cepas resistentes a mupirocina; ND: No determinado; EEFIC: Clon de Impétigo resistente al ácido Fusídico Europeo Epidémico; MLST: Tipificación de Secuencia de Multilocus; SSCmec: casete estafilocócico de cromosoma mec; spa: proteína A de S. aureus; KU: Universidad de Copenhague; SSI: Laboratorio Nacional de Referencia para Estafilococos, Statens Serum Instityt, Copenhague, Dinamarca.

Actividad antibacterial

Se realizaron las siguientes pruebas para evaluar la actividad antibacteriana in vitro (Figura 1):

Ensayo de concentración inhibidora mínima (MIC)

La MIC se determinó utilizando placas de 96 pocillos y diluciones dos veces seriadas de niclosamida (de Sigma) (de 51.2 a 0.025 |jg/ml) en el medio indicado anteriormente, con 150 j l por pocillo. Los cultivos bacterianos se detuvieron en su fase de crecimiento exponencial y las placas se inocularon con la concentración aproximada de 103 células por pocillo. Las placas se incubaron a 37 °C durante 18 horas (S. aureus) o 24 horas (S. pyogenes). Se midió la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm al final del tiempo de incubación. La inhibición se calculó como (Inhibición = 1 -ODprueba/ODsin tratamiento) y los valores de MIC se determinaron como la concentración mínima que proporciona una inhibición del 100%. Los experimentos se realizaron al menos como réplicas biológicas por triplicado con todas las cepas.

La inhibición observada podría haber sido atribuible a una actividad bactericida o bacteriostática, que no se pudo determinar a partir de este experimento. Por tanto, se llevó a cabo el siguiente ensayo para determinar si la niclosamida extingue o inhibe el crecimiento de S. aureus.

Ensayo de tiempo-extinción

Este ensayo se realizó en 20 ml de medio. Incluyó un control negativo (medio sin bacterias), un control positivo (bacterias cultivadas sin niclosamida) y el ensayo (bacterias cultivadas con niclosamida). La niclosamida se probó a 10 veces su MIC, determinada en el experimento anterior. Este experimento se realizó con el microorganismo de prueba primario indicado anteriormente.

Se detuvo el cultivo durante la noche y se midió la OD⁶⁰⁰. A continuación, el cultivo se diluyó en el medio indicado para obtener una OD⁶⁰⁰de 0.25 con el fin de tener aproximadamente 5X108 ufc/ml. A continuación, se agregaron doscientos j l de este cultivo diluido en todas las condiciones excepto en el control negativo. La concentración bacteriana inicial fue de aproximadamente 5X106 ufc/ml. Los tubos se incubaron aeróbicamente a 37 °C durante 24 horas.

Se enumeraron las bacterias antes de incubación, después de 30 minutos, 1, 2, 4, 8 y 24 horas de incubación mediante diluciones en serie en NaCl al 0.9% y se sembraron en agar LB, con 2 placas por dilución. Las placas se incubaron a 37 °C y las colonias enumeradas después de 24 horas.

El compuesto se consideró bactericida si la reducción del inóculo bacteriano fue superior o igual a 3 log^-10ufc/ml, bacteriostático si la reducción fue inferior a 3 log^-10ufc/ml.

Resultados y conclusiones

Microbiología: curvas MIC y de Extinción - Figuras 1 y 2 y Tablas 3 y 4

Tabla 3 - Sensibilidad in vitro de aislados clínicos de S. aureus ce a de referencia ATCC 29213 de S. aureus.

La Tabla 4 muestra los índices terapéuticos de las salicilanilidas halogenadas niclosamida, closantel, oxiclozanida y rafoxanida. El índice terapéutico se calculó como la relación entre la LD⁵⁰en ratas a la MIC del compuesto de prueba. Los valores de LD⁵⁰mostrados en la Tabla 3 se tomaron de los valores de la literatura publicada para estos compuestos, por ejemplo, en Andrews et al. Pharmac. Ther. Vol 19 pp 245 (1983).

Tabla 4. Índices terapéuticos de salicilanilidas halogenadas, calculados a partir de sus MIC frente a cepas de S. aureus . n i l l LD n r r n .

Los datos muestran que las salicilanilidas halogenadas tales como closantel, oxiclozanida, rafoxanida y particularmente niclosamida son potentes contra cepas Gram positivas tales como S. aureus y S. pyogenes. Cabe destacar que el efecto es independiente del perfil de resistencia de los aislados frente a otros antibióticos utilizados actualmente para el tratamiento tópico de estos microorganismos, que incluyen el ácido fusídico y la mupirocina. De acuerdo con lo anterior, las salicilanilidas halogenadas en general y la niclosamida en particular son muy adecuadas como posible tratamiento para cepas Gram positivas tanto susceptibles como resistentes.

Evaluación de la frecuencia de mutación

La frecuencia de mutaciones espontáneas de un solo paso se determinó en 3 cepas diferentes (MRSA, resistente al ácido fusídico y resistente a mupirocina) como se describe por Drago et al. (2005) (Drago, L., De Vecchi, E., Nicola, L., Tocalli, L., & Gismondo, M.R. (2005). Selección in vitro de resistencia en Pseudomonas aeruginosa y Acinetobacter spp. por levofloxacina y ciprofloxacina sola y en combinación con beta-lactamas y amikacina. The Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 56 (2), 353-359). Cien pl de un inóculo inicial de 109 ufc/ml de un cultivo de una noche se sembraron sobre placas de agar LB suplementadas con el compuesto de prueba (0X, 1X, 2X, 4X y 10X MIC). Se sembraron diluciones adecuadas sobre placas sin el compuesto.

Se enumeró el crecimiento celular viable después de 48 horas de incubación a 37 °C.

Se llevaron a cabo diez réplicas para cada cepa y se utilizaron ácido fusídico, mupirocina y retapamulina como controles para la cepa MRSA 01.

Las mutaciones espontáneas que confieren resistencia a las salicilanilidas halogenadas ocurrieron a una frecuencia muy baja (frecuencia de mutaciones = 5 x 10'9, 2 x 10-8 y 1 x 10'7 en MIC X 1 para rafoxanida, closantel y oxiclozanida respectivamente) y para la niclosamida a una frecuencia extremadamente baja (0 < frecuencia de mutación <4 x10'1° en MlC X 1) en comparación con los antibióticos utilizados actualmente tales como ácido fusídico, retapamulina y mupirocina (frecuencia de mutación: > 4 X 10'5 en MIC x 1) (véase Tabla 5).

Tabla 5. Tasas de mutación ue confieren resistencia a las salicilanilidas halo enadas.

La tasa de frecuencia de mutación es una medida del número de mutantes resistentes dentro de una población dada después de la exposición al antibiótico. Una frecuencia de mutación de 10'9 significa que hay menos de un mutante resistente en una población de 109 células.

Inesperadamente, el desarrollo de resistencia hacia las salicilanilidas halogenadas en general y la niclosamida en particular es mucho más lento que el desarrollo de resistencia hacia los antibióticos tópicos actualmente aprobados tales como ácido fusídico, mupirocina y retapamulina.

La alta potencia y la baja tasa de desarrollo de resistencia hacen que la niclosamida sea particularmente útil como un tratamiento tópico de infecciones provocadas por organismos Gram-positivos.

Ejemplo 2: Cribado adicional más extenso de aislados clínicos realizado con niclosamida.

Métodos

Microorganismos

Elegida por su relevancia con respecto a las infecciones bacterianas de la piel, la cepa de S. aureus 01 resistente a meticilina (MRSA) se utilizó como microorganismo de prueba principal. Esta cepa es un aislado clínico de MRSA adquirido en la comunidad del tipo USA 300, de un absceso de la piel.

También se incluyeron en el estudio otras doscientas cuatro cepas de S. aureus sensibles a meticilina y MRSA y 4 cepas de Streptococcus pyogenes. Estos cubrieron cepas resistentes al ácido fusídico y a mupirocina, estos dos tipos de resistencia son de relevancia clínica.

Las cepas se conservaron en caldo Luria Bertani (LB) (S. aureus) o Infusión de Cerebro y Corazón (BHI) (S. pyogenes) suplementada con glicerol al 15% (v/v) a -80 °C, y se reactivaron mediante aislamiento sobre placas de agar LB (S. aureus) o BHI (S. pyogenes). Las cepas se cultivaron en caldo Mueller Hinton (MH) ajustado a cationes (S. aureus) o BHI (S. pyogenes). Todas las cepas se cultivaron aeróbicamente (microaeróbicamente para las cepas de S. pyogenes) a 37 °C.

Actividad antibacteriana

Ensayo de concentración mínima inhibidora (MIC)

Las concentraciones inhibidoras mínimas (MIC) de niclosamida, ácido fusídico y mupirocina se determinaron de acuerdo con los criterios de CLSI con un rango de concentración de dilución duplicada (16 a 0.008 |jg/ml) en Caldo Mueller Hinton ajustado por cationes (Fluka Analytical 90922), utilizando placas de 96 pocillos, para 205 cepas diferentes de S. aureus. Se incluyó S. aureus ATCC 29213 como cepa de referencia de control y se incluyeron clindamicina y vancomicina como antibióticos de control.

Los cultivos bacterianos se detuvieron en su fase de crecimiento exponencial y las placas se inocularon con la concentración aproximada de 5 x 105 células por pocillo. Las placas se incubaron a 37 °C durante 18 horas (S. aureus) o 24 horas (S. pyogenes). Se midió la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm al final del tiempo de incubación. La inhibición se calculó como (Inhibición = 1 - ODprueba/ODsin tratamiento) y los valores de MIC se determinaron como la concentración mínima que proporciona una inhibición del 100%.

Debido a la interferencia con la sangre (MIC aumentó en 16 con sangre de caballo lisada al 5%), la determinación de MIC frente a cepas de S. pyogenes se realizó en BHI.

Resultados y discusión

Determinación de la MIC in vitro y amplitud del efecto

La MIC de la niclosamida fue < 0.5 jg/m l contra todas las cepas de S. aureus y S. pyogenes diana, que incluyen las cepas resistentes a ácido fusídico, mupirocina, clindamicina y retapamulina (Tabla 6, Tabla 7. Tabla 8 y Figura 3).

Tabla 6 Susceptibilidad in vitro de aislados clínicos de S. aureus y cepa de referencia de S. aureus ATCC 29213. Las resistencias se indican en negrita. ND: no determinado.___________________________________________________ MIC (mg/ml)__________________________________________________________________ niclosamida Ácido Mupirocina Retapamulina Clindamicina Vancomicina fusídico

M IC (m g /m l)

niclosamida Ácido Mupirocina Retapamulina Clindamicina Vancomicina fusídico

0.25 0.06 0.5 0.03 0.06 1

0.5 4 0.25 0.06 0.125 1 0.25 0.125 0.125 0.03 0.06 1 0.25 0.25 0.25 16 > 16 1 0.25 0.5 0.25 0.06 0.125 1 0.25 0.5 0.25 0.06 0.125 1 0.25 0.25 0.25 0.06 0.125 1 0.25 16 0.5 0.03 > 16 1 0.25 8 0.25 0.06 0.06 1 0.25 0.5 0.25 0.06 0.125 1 0.25 8 0.125 0.06 0.125 1 0.25 8 0.25 0.06 0.06 1 0.25 0.125 0.25 0.03 0.06 1 0.25 > 16 0.125 0.02 0.06 1 0.25 0.25 0.25 0.06 > 16 1 0.25 0.125 0.25 0.06 0.06 1 0.25 4 0.25 0.02 0.03 1 0.25 0.06 0.13 0.02 0.06 1 0.25 0.06 0.13 0.02 0.03 1 0.25 0.06 0.25 0.02 > 16 0.5 0.25 2 0.13 0.02 0.03 0.5 0.25 0.25 0.25 0.02 0.03 2

0.25 0.03 0.25 0.02 0.02 1 0.125 0.13 0.25 0.03 0.06 1 0.25 0.06 0.25 0.02 0.03 1 0.25 0.25 0.25 0.03 0.06 1 0.25 0.125 0.25 0.03 0.06 2

0.25 4 0.25 0.02 0.03 0.5 0.25 0.06 0.25 < 0.01 0.03 1 0.25 0.125 0.125 0.02 0.03 1 0.25 4 0.125 0.02 0.06 1 0.25 0.06 0.125 0.02 0.03 1 0.25 8 0.25 0.02 0.06 0.5 0.25 0.06 0.25 0.02 0.03 2

0.25 0.06 0.25 0.02 0.06 2

0.25 0.125 0.125 0.02 0.06 1 0.25 0.25 0.25 0.02 0.06 1 0.25 0.06 0.25 0.02 0.03 1 0.25 0.06 0.25 0.02 0.03 1 0.25 0.25 0.125 0.02 0.03 1 0.25 0.125 0.25 0.02 0.03 1 0.25 4 0.125 < 0.01 0.03 1 0.125 8 0.25 0.02 0.06 1 0.25 0.06 0.125 < 0.01 0.02 1 0.25 16 0.25 0.03 0.06 1

0.5 0.25 0.25 0.03 0.125 1 0.25 0.25 0.25 0.03 0.125 2

0.5 0.5 0.5 0.03 0.125 1 0.25 0.25 0.25 0.03 0.125 1 0.25 16 0.25 0.03 0.125 2

0.5 0.125 0.25 0.03 0.06 1 0.25 0.5 0.25 < 0.01 0.03 1

0.5 0.125 0.25 0.02 0.06 1

0.5 0.25 0.25 0.03 0.125 1 0.25 8 0.25 0.03 0.125 2

0.5 0.06 0.25 0.03 0.06 1 0.25 8 0.25 0.02 0.06 1 0.25 8 0.25 0.03 0.125 2

0.5 4 0.25 0.03 0.125 1

0.25 > 16 0.25 0.03 0.06 2 M IC (m g /m l)

niclosamida Ácido Mupirocina Retapamulina Clindamicina Vancomicina fusídico

0.25 0.125 0.25 0.02 0.06 1

0.25 0.06 0.25 0.03 0.06 1

0.5 0.06 0.25 0.02 > 16 1

0.5 16 0.25 0.06 0.125 1

0.25 0.25 0.25 0.06 0.125 1

0.25 8 0.25 0.06 0.06 1

0.25 0.02 0.25 0.02 0.03 2

0.25 0.125 0.25 0.03 0.125 2

0.25 8 0.25 0.03 0.125 2

0.25 0.125 0.125 0.03 > 16 1

0.25 8 0.25 0.03 0.06 1

0.5 0.06 0.5 0.03 > 16 1

0.25 0.125 0.5 0.03 0.125 1

MRSA 100 0.25 0.125 0.5 1 0.25 1 MRSA 101 0.5 8 0.25 0.03 0.06 1 MRSA 102 0.25 0.06 0.25 0.03 0.06 2 MRSA 103 0.25 8 0.25 0.03 0.125 1 MRSA 104 0.5 0.25 0.25 0.03 0.125 1 MRSA 105 0.25 0.125 0.25 0.03 0.125 1 MRSA 106

0.25 0.125 0.25 0.06 0.125 1 MRSA 107 0.25 0.25 0.25 0.06 0.125 2 MRSA 108 0.25 4 0.25 0.03 0.125 1 MRSA 109 0.25 0.25 0.25 0.03 0.125 1 MRSA 110 0.25 0.06 0.125 0.03 0.125 1 MRSA 111 0.5 8 0.25 0.03 0.125 1 MRSA 112 0.25 0.06 0.25 0.03 0.06 1 MRSA 113 0.25 0.125 0.25 0.03 0.06 1

0.25 8 0.5 0.03 0.125 1

0.25 0.125 0.25 0.03 0.125 2

0.25 8 0.5 0.03 0.125 1

0.25 0.25 0.25 0.03 0.125 1

0.25 1 0.5 0.03 0.125 1

0.25 0.125 0.25 0.03 0.125 2

0.25 > 16 0.125 0.06 0.125 1

0.25 0.125 0.5 0.03 0.125 2

0.25 16 0.5 0.06 0.125 1

0.5 0.125 0.5 0.03 0.125 1

0.5 0.125 0.5 0.06 0.125 2

0.25 0.25 0.5 0.06 0.125 1

0.25 0.5 0.125 0.06 0.125 1

0.25 0.25 0.25 0.06 0.125 1

115584D 0.25 0.25 0.5 0.06 0.125 2 115740E 0.5 0.25 0.25 0.06 0.125 1 115810E 0.25 0.25 0.25 0.06 0.125 1 115628T 0.25 8 0.25 0.03 0.06 2 000274T 0.25 0.5 0.5 0.06 0.125 1 115691T 0.5 0.25 0.25 0.03 0.125 1 115903T 0.5 8 0.5 0.03 0.125 1 116122T 0.25 0.125 0.5 0.03 0.125 1 115015T 0.5 0.25 0.5 0.06 0.125 2 115273C 0.5 0.25 0.25 0.03 0.125 1 000040C 0.5 0.25 0.25 0.03 0.125 1 115690C 0.25 8 0.125 0.25 0.5 2 115561C 0.25 0.125 0.5 0.03 0.125 1 115445C 0.5 0.25 0.25 0.03 0.125 1 115263C 0.25 0.125 0.25 0.03 0.06 2 115303C 0.5 0.25 0.25 0.03 > 16 1 115268C 0.5 0.25 0.5 0.03 0.125 1 115295C 0.25 0.125 0.25 0.03 0.125 1 115242C 0.5 8 0.25 0.03 0.06 1 M IC (m g /m l)

niclosamida Ácido Mupirocina Retapamulina Clindamicina Vancomicina fusídico

115427C 0.25 0.125 0.25 0.03 0.06 1 000041C 0.25 0.25 0.25 0.03 0.06 1

E5-1048654 0.25 0.5 0.25 0.06 0.125 1

9-2955245 0.25 0.25 0.25 0.06 0.125 1

E5-1046019 0.25 0.25 0.25 0.03 0.125 1

E5-1046020 0.5 0.25 0.25 0.06 0.125 1

E5-1047585 0.25 0.25 0.25 0.03 0.125 1

E5-1038294 0.5 0.25 0.25 0.03 0.125 1

E5-1035779 0.5 0.125 0.5 0.03 0.125 1

9-1862936 0.5 0.125 0.25 0.03 0.125 1

E5-1033091 0.5 0.03 0.25 0.02 0.06 1

9-26422166 0.5 8 0.25 0.03 0.125 1

9-2642158 0.25 0.25 0.25 0.06 0.125 1

E5-1035775 0.5 > 16 0.25 0.06 0.125 1

E5-1029558 0.25 16 0.5 0.03 0.125 1

E5-1038279 0.5 4 0.25 0.03 0.125 1

E5-1039697 0.25 0.5 0.25 0.06 0.125 1

E5-1041979 0.5 0.25 0.5 0.03 0.125 1

E5-1035284 0.25 0.25 0.25 0.03 0.125 1

E5-1030469

0.25 0.125 0.25 0.03 0.125 2

E5-1030472 0.5 0.25 0.5 0.06 0.125 1

E5-1041977 0.5 16 0.5 0.03 0.125 2

E5-1041987 0.5 16 0.25 0.03 0.125 1

E5-1039684 0.5 16 0.25 0.06 0.125 1

E5-1041980 0.25 0.25 0.25 0.03 0.125 1

E5-1033088 0.25 0.25 0.25 0.03 0.125 1

MIC (mg/ml)

niclosamida Ácido Mupirocina Retapamulina Clindamicina Vancomicina fusídico

E5-1035277 0.5 16 0.5 0.03 0.125 1

E5-1046096 0.5 0.5 0.5 0.06 0.125 1

E5-1046085 0.5 8 0.5 0.06 0.125 2

9-2625962 0.5 0.25 0.5 0.03 0.125 1

E5-1043668 0.25 1 0.25 0.06 0.25 1

E5-1048428 0.25 0.5 0.25 0.06 0.25 1

E5-1047924

0.5 0.25 0.5 0.03 0.125 1

E5-1047606 0.5 8 0.5 0.03 0.125 1

E5-1046070 0.25 0.25 0.5 0.03 0.125 1

E5-1046298 0.25 0.125 0.25 0.03 0.125 1

E5-1046296 0.5 0.125 1 0.03 0.125 1

E5-1046297 0.5 0.125 0.25 0.06 0.125 1

E5-1043184 0.5 16 0.5 0.03 0.125 1

E5-1038286 0.25 0.25 0.5 0.06 0.125 1

E5-1037958 0.5 16 0.5 0.06 0.125 1

E5-1037971 0.25 0.25 0.25 0.03 0.125 1

E5-1033076 0.5 0.25 0.25 0.03 0.125 1

E5-1033076

0.5 0.25 0.25 0.03 0.125 1

E5-1029252 0.25 0.25 0.5 0.03 0.125 1

E5-1030440 0.25 0.25 0.25 0.06 0.06 1

E5-1030482 0.125 16 0.25 0.02 0.06 1

E5-1046074 0.25 0.125 0.25 0.06 0.125 1

E5-1048204 0.25 0.25 0.25 0.03 0.06 2

E5-1048670 0.125 0.5 0.5 0.06 0.125 2

E5-1046039 0.25 0.25 0.25 0.06 0.125 1

E5-1045179 0.25 0.25 0.25 0.06 0.125 1

E5-1046723 0.25 0.5 0.25 0.06 0.125 2 Tabla 7 Distribución de la MIC de niclosamida contra Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes (porcentaje y relación)

La niclosamida fue inhibidora a una concentración igual o inferior a 0.5 pg/ml para todas las cepas de S. aureus y S. pyogenes diana, que incluyen cepas resistentes al ácido fusídico y a la mupirocina.

Ejemplo 3

Se llevó a cabo un estudio adicional para examinar la frecuencia de mutación espontánea que confiere resistencia a la niclosamida en 3 cepas de Staphylococcus aureus resistentes a meticilina, que incluyen cepas resistentes a ácido fusídico y a mupirocina. Esta frecuencia se comparó con las frecuencias de mutación espontánea que confieren resistencia a ácido fusídico, mupirocina y retapamulina en una cepa de MRSA.

Métodos

Microorganismos

Se eligieron tres aislados clínicos de Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA), con diferentes perfiles de resistencia (MRSA 01, MRSA15 [cepa resistente al ácido fusídico] y MRSA 16 [cepa resistente a mupirocina]) por su relevancia con respecto a infecciones de la piel bacterianas. La cepa MRSA 01 se utilizó como microorganismo de prueba principal. Esta cepa es un aislado clínico de MRSA adquirido en comunidad del tipo USA 300, desde un absceso de la piel.

Las cepas se conservaron en caldo Luria Bertani (LB) suplementado con glicerol al 15% (v/v) a -80 °C y se reactivaron mediante aislamiento en placas de agar LB. Las cepas se cultivaron aeróbicamente en Caldo Mueller Hinton (MH) ajustado a 37 °C.

Evaluación de la frecuencia de mutación de resistencia

Se determinó la frecuencia de mutaciones espontáneas de una sola etapa en las 3 cepas diferentes como se describe por Drago et al. (2005) y Pannu et al. (2011). Se sembraron sobre placas de agar Lb cien pl de un inóculo inicial de aproximadamente 109 ufc/ml de un cultivo de la noche a la mañana suplementadas con el compuesto de prueba (0X, 1X, 2X, 4X y 10X MIC). Se sembraron diluciones adecuadas sobre placas sin el compuesto.

La frecuencia de resistencia espontánea para una combinación de fármaco-aislado se calculó a partir del número de colonias que crecieron sobre placas que contenían fármaco frente al número de colonias que crecieron en agar libre de fármaco.

Resultados y discusión

Las mutaciones espontáneas que confieren resistencia a la niclosamida se produjeron a una frecuencia extremadamente baja (por debajo del límite de detección) (0 < frecuencia de mutación <4.10-9 a MIC x 1) para todas las cepas probadas (MRSA 01, MRSA 15 (resistente al ácido fusídico) y MRSA 16 (resistente a mupirocina)) en comparación con ácido fusídico (frecuencia de mutación: 3.10-7 a MIC x 10 y > 4.10-5 a MIC x 1) y mupirocina y retapamulina. Los resultados con la cepa MRSA 01 se muestran en la Tabla 9.

Tabla 9 Frecuencias de mutaciones espontáneas que confieren resistencia a niclosamida, ácido fusídico, mupirocina y retapamulina con la cepa MRSA 01. Promedio de 10 repeticiones.

En cuanto a MRSA 01, no creció colonia en placas con niclosamida con las cepas MRSA 15 y MRSA 16. Esto condujo a una frecuencia de mutación <3x10-8 para m RsA 15 y <1x10-7 para MRSA 16 a MIC x 1 (0.25 |jg/ml), estas diferencias en los límites de detección se deben a diferencias en las concentraciones bacterianas de los cultivos nocturnos.

Conclusiones

Las frecuencias de mutaciones espontáneas que confieren resistencia a niclosamida en Staphylococcus aureus fueron mucho más bajas que las frecuencias de mutaciones espontáneas que confieren resistencia al ácido fusídico, mupirocina y retapamulina en Staphylococcus aureus. Esto apoya el uso de niclosamida para la descolonización cutánea de S. aureus.

Ejemplo 4: Propionibacterium acnes

Evaluación de la probabilidad de seleccionar mutantes espontáneos de Propionibacterium acnes en el contexto del tratamiento antibiótico crónico (a largo plazo) del acné.

Microorganismo

Las cepas de P. acnes utilizadas fueron CSS3288, CSS 3023, 998 y 1044 obtenidas de Luc Dubreuil.

Medio de cultivo

Se cultivan cepas de P. acnes sobre agar en sangre Brucella con hemina y vitamina K [1], las placas se incuban de 48 a 72 horas a 35-37 °C bajo condiciones anaeróbicas. El agar de sangre Brucella con hemina y vitamina K se preparó de la siguiente manera: el agar Brucella estéril con hemina y vitamina K se endurecen a 50-54 °C y el medio se complementó con sangre de caballo lacada al 5% y se vertió en placas de Petri. Los cultivos en caldo se realizan en caldo Wilkins-Chalgren [2]. Todos los cultivos se realizan en condiciones anaeróbicas en una cámara anaeróbica [3]. Se inoculó medio de agar para el aislamiento de una sola colonia utilizando asas desechables estériles.

Compuestos probados:

Se ensayó la niclosamida como salicilanilida halogenada. Los compuestos comparadores fueron el ácido fusídico y la retapamulina, los cuales se utilizan frecuentemente en el tratamiento del acné vulgaris.

Concentración mínima inhibidora (MIC)

Las MIC de los agentes antibacterianos se determinaron mediante dilución en agar. Las bacterias se transfirieron y se cultivaron en Caldo Wilkins-Chalgren a 35-37 °C en la cámara anaerobia (N²al 86% -CO²al 7% -H²al 7%) durante 48 a 72 horas.

Se prepararon placas de Agar en Sangre Brucella con hemina y vitamina K que contenían una serie de diluciones dobles de agentes antibacterianos. El agar base se preparó y se atemperó a 50-54 °C. Luego se agregaron el suplemento de sangre y los antibióticos y los 7 ml se vertieron asépticamente en placas de cultivo de seis pocillos. Una vez que el agar se solidificó, se transfirió a la cámara anaerobia durante 24 horas antes de su uso para permitir la reducción previa. En cada pocillo se colocaron veinticinco microlitros de cultivo de P. acnes que contenían 106 CFU. Las placas se incubaron anaeróbicamente durante 72 horas a 35-37 °C La MIC es la concentración más baja que inhibe el crecimiento de P. acnes. Ensayo de frecuencia de mutación espontánea

Se transfirieron bacterias crioconservadas y se cultivaron en Wilkins-Chalgren a 35-37 °C en una cámara anaerobia (N²al 86% -CO²al 7% -H²al 7%) durante 72 horas.

Se prepararon placas de Agar de Sangre Rucella con hemina y vitamina K que contenían 4 X o 2 X MIC (concentración inhibidora mínima) del antibiótico de prueba. El agar base se preparó y se atemperó a 50-54 °C. Luego se agregaron el suplemento de sangre y los antibióticos y las placas se vertieron asépticamente en placas de Petri. Una vez que el agar se ha solidificado, las placas se secaron bajo una campana de flujo laminar y luego se transfirieron a la cámara anaerobia durante 24 horas antes de uso para permitir la reducción previa.

Los inóculos bacterianos se tomaron del caldo Wilkins-Chalgren con el objetivo de obtener una concentración cercana a 1 X 108 CFU/ml. Estos inóculos se diluyeron luego en Caldo Brucella y se contaron en placa utilizando un agar sin antibiótico para enumerar los inóculos de partida.

Se extendieron en placa cien microlitros de los inóculos ajustados sobre cada una de las 25 placas de agar que contenían antibiótico mientras estaban en la cámara anaerobia. A continuación, estas placas se invirtieron y se incubaron durante 72 horas a 37 °C. Las colonias que crecían sobre placas se transfirieron a nuevas placas de antibióticos y se volvieron a incubar para confirmar la resistencia al antibiótico. La frecuencia de mutaciones espontáneas se calculó como la relación de colonias resistentes que surgieron versus los recuentos de inóculos bacterianos iniciales.

Resultados y discusión

Las MIC de los agentes antibacterianos fueron las siguientes:

Ácido fusídico: 4 pg/ml

Retapamulina: 0.016 pg/ml

Niclosamida: 0.5 pg/ml

Las frecuencias de mutación espontánea para cada uno de los compuestos probados se muestran en la Tabla 10.

Tabla 10. Frecuencia de mutación es ontánea frente a niclosamida dos com aradores

Conclusiones

Los dos comparadores ácido fusídico y retapamulina tienen una frecuencia de mutación de resistencia en el rango de 1 X 10-8. No se observaron mutantes resistentes a la niclosamida, por lo que la frecuencia de mutación de la niclosamida es menor que 1 X 10-9 al menos 10 veces menor que los dos compuestos comparadores ácido fusídico y retapamulina.

Referencias

[1] H.-P. Schau, “J. F. MacFaddin, Media for Isolation - Cultivation - Identification - Maintenance of Medical Bacteria, Volume I. XI 929 S., 163 Abb., 94 Tab. Baltimore, London 1985. Williams and Wilkins. ISBN: 0-683-05316-7,” J. Basic Microbiol., vol. 26, no. 4, pp. 240-240, 1986.

[2] T. D. Wilkins and S. Chalgren, “Medium for use in antibiotic susceptibility testing of anaerobic bacteria,” Antimicrob. Agents Chemother., vol. 10, no. 6, pp. 926-928, Dec. 1976.

[3] S. M. Butler-Wu, E. M. Burns, P. S. Pottinger, A. S. Magaret, J. L. Rakeman, F. A. Matsen, and B. T. Cookson, “Optimization of Periprosthetic Culture for Diagnosis of Propionibacterium acnes Prosthetic Joint Infection,” J. Clin. Microbiol., vol. 49, no. 7, pp. 2490-2495, Jul. 2011.

[4] E. J. C. Goldstein, D. M. Citron, C. V. Merriam, Y. A. Warren, K. L. Tyrrell, and H. T. Fernandez, “Comparative In Vitro Activities of Retapamulin (SB-275833) against 141 Clinical Isolates of Propionibacterium spp., Including 117 P. acnes Isolates,” Antimicrob. Agents Chemother., vol. 50, no. 1, pp. 379-381, Jan. 2006.

Ejemplo 5: Efectos del pH sobre la actividad antibacteriana

Se llevó a cabo un estudio para determinar el efecto del pH sobre la actividad antibacteriana de la niclosamida contra Staphylococcus aureus con el fin de evaluar si la niclosamida todavía es activa contra S. aureus a niveles de pH cercanos a aquellos de la piel.

Métodos

Microorganismos

Se eligió la cepa 01 de S. aureus resistente a meticilina (MRSA), elegida por su relevancia con respecto a las infecciones bacterianas de la piel. Esta cepa es un aislado clínico de MRSA adquirido en comunidad del tipo u Sa 300, de un absceso de la piel.

Esta cepa se conservó en Caldo Luria Bertani (LB) suplementado con glicerol al 15% (v/v) a -80 °C y se reactivó mediante aislamiento sobre placas de agar LB. Luego se cultivó aeróbicamente en Caldo Mueller Hinton (MH) ajustado a 37 °C. Evaluación del efecto del pH sobre la actividad antibacteriana de niclosamida

El pH del Caldo Mueller-Hinton ajustado con cationes se ajustó con HCl 2M a 7, 6.5, 6, 5.5, 5, 4.5 y 5. Se prepararon diez ml de medio para cada pH. El pH del MHBII no ajustado fue igual a 7.4.

Cada una de las muestras con pH ajustado se filtró sobre filtros de 0.2 pm antes de utilizarse para el ensayo de determinación de MIC. Para cada pH, se determinaron concentraciones inhibidoras mínimas (MIC) de niclosamida de acuerdo con los criterios de CLSI con un rango de concentración de dilución que se duplica (16 a 0.008 pg/ml).

El cultivo bacteriano se detuvo en su fase de crecimiento exponencial y las placas se inocularon con la concentración aproximada de 5 x 105 células por pocillo. Las placas se incubaron a 37 °C durante 18 horas (S. aureus). Se midió la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm al final del tiempo de incubación. La inhibición se calculó como (Inhibición = 1 - ODprueba/ODsin tratamiento) y los valores de MIC se determinaron como la concentración mínima que proporciona una inhibición del 100%.

El experimento se realizó en triples réplicas biológicas.

Resultados

Se comprobó el pH de cada uno de los medios con pH ajustado después de la adición de niclosamida para comprobar que la adición de niclosamida no tenía ninguna influencia sobre el pH. Las mediciones mostraron que la adición de niclosamida (16 pg/ml) en el medio con pH ajustado no tuvo influencia sobre el pH (Tabla 11).

MRSA 01 creció igualmente bien desde pH 6 hasta pH 7.4 (OD⁶⁰⁰“ 0.2 en promedio en pocillos de control positivo) y ligeramente menos en pH 5.5 (OD⁶⁰⁰“ 0.1 en promedio en los pocillos de control positivo). Sin embargo, la cepa fue inhibida por el pH más bajo (pH 4 a pH 5) (Figura 5).

Las determinaciones de MIC mostraron que la actividad inhibidora de la niclosamida contra MRSA 01 aumentó cuando disminuyó el pH, con MIC más bajas (Tabla 11).

Conclusiones

Se observó el efecto inhibidor máximo de la niclosamida a un pH de 5.5, que está cerca del pH de la piel.

Ejemplo 6: Composiciones de gel no acuosas

Las formulaciones (F1 y F4) mostradas en la Tabla 12 a continuación se prepararon como sigue, en las que las cantidades se muestran en la Tabla 12 p/p.

T l 12. F rm l i n l m r n n ni l mi

Se pesaron 0.20 g de niclosamida, PEG 400 (9.56 g para F1 y 7.06 g para F4) y propilenglicol (2.5 g para F4) en botellas de tapón azul. La mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta que se formó una solución transparente. A continuación, se dispersaron 240 mg de carbómero 974P en la solución de niclosamida PEG 400. La dispersión se homogeneizó y desgasificó. La suspensión luego se calentó a 70 °C y se agitó mecánicamente a 250 rpm hasta que se formó una dispersión homogénea después de aproximadamente 30 minutos. La solución final se enfrió luego para dar las composiciones de gel no acuosas del título.

Las formulaciones finales se protegieron de la luz antes de uso adicional.

Estabilidad de almacenamiento de las formulaciones F1 y F4

Las formulaciones probadas se almacenaron en tubos de aluminio en incubadoras mantenidas al 80% de humedad relativa ya 25 y 40 °C.

Figura 5, la niclosamida es estable en las formulaciones de gel F1 y F4 en los tubos de aluminio con 104.8±1.0%/104.8±1.0% y 102.2±4.8%/99.2±7.0% de fármaco restante después de tres meses de almacenamiento a 25 y 40 °C respectivamente. No se observaron productos de degradación al utilizar análisis de HPLC.

Estabilidad a la luz de las formulaciones F1 y F4

Las formulaciones F1 y F4 se expusieron a luz ambiental durante 24 horas. En puntos de tiempo predeterminados, se retiró una pequeña cantidad de formulación de gel expuesta y se analizó mediante HPLC.

Como se ilustra en la Figura 6, las composiciones de gel no acuosas no mostraron signos de degradación después de 24 horas de exposición a la luz.

Absorción y penetración de la piel de las diferentes formulaciones tópicas.

Métodos

Fuente de tejido

Se adquirió tejido de piel de cadáver humano de un banco de tejidos en los Estados Unidos. Estos tejidos se recuperan dentro de las 24 horas posteriores a la muerte. Se recibieron tres lotes de tejido de piel dermatomizado. Datos demográficos del donante: tejido 4838 (grosor promedio = 537 |jm): sexo = hombre, edad = 31, raza = caucásico y sitio anatómico = abdomen; tejido 4830 (grosor promedio = 610 jm ): sexo = hombre, edad = 53, raza = caucásico y sitio anatómico = abdomen; tejido 4950 (grosor promedio = 633 jm ): sexo = hombre, edad = 46, raza = caucásico y sitio anatómico = abdomen). El tejido se recibió en un empaque de hielo seco. El tejido 4830 y el tejido 4848 se almacenaron en el congelador (-20 °C) durante aproximadamente 4.5 meses; el tejido 4950 se almacenó en el congelador (-20 °C) durante aproximadamente 3.5 meses. Todos los tejidos se humedecieron con un medio de almacenamiento patentado por Zyleris para preservar la integridad de la barrera durante el almacenamiento. Se almacenó a -20 °C hasta uso. Prueba de integridad de la barrera de la piel

Después de pasar la inspección visual inicial, se evaluó la integridad de la barrera del tejido de la piel utilizando una medición de impedancia eléctrica transepidérmica (medición TEER, valor Z).

La medición se realizó utilizando un medidor LCR a una frecuencia de 100 Hz a temperatura ambiente. El medio de medición fue una solución de NaCl al 0.9% utilizando un par de electrodos de acero inoxidable.

Antes del estudio de cribado, se evaluó el valor de impedancia eléctrica para el lote de tejido de piel. Debido a la posible variación de un lote a otro en la edad, el sexo, la raza, el sitio anatómico y el tiempo de recolección del tejido del donante, el objetivo de la medición fue establecer el valor umbral para el tejido de cadáver intacto para el lote que se utilizará en el estudio de absorción y penetración de la piel actuales. Se tomaron doce (12) muestras de tejido de puntos seleccionados del lote. Se midió el valor de impedancia eléctrica (valor Z). Todos los valores Z reportados son valores netos después de sustracción del medio de medición en blanco (1.0 KOhms). Se encontró que la gran mayoría de los tejidos para # 4848 y 4950 tenían un valor Z de 5.0 KOhms o mayor; y para 4830 tenía un valor Z de 7.0 KOhms o mayor. Para aquellos tejidos con defectos visibles, el valor Z se encontró en el rango de 0.1-0.5 KOhms. Por lo tanto, se utilizaron 5.0 y 7.0 KOhms como valor umbral para los tres lotes.

Después de que los tejidos se montaron sobre células de Cribado de Alto Rendimiento (HTS), se midió la integridad de la piel antes de incubación a 32 °C. Se descartó cualquier tejido que tuviera un valor Z menor que 5.0 o 7.0 KOhms.

Estudio de absorción y penetración percutánea in vitro

El estudio de cribado de la formulación se llevó a cabo en la estación de Cribado de Alto Rendimiento (HTS) de Zyleris. Esta tecnología se desarrolla en base al principio de Célula de Franz. La característica técnica principal incluye una estación de cribado única de 81 células con capacidad para realizar varios tipos de estudios de absorción y penetración de la piel en cada célula individual. Está totalmente validado contra la tecnología estándar de Célula de Franz. Las muestras de piel después de lavarse con solución tampón de fosfato 1x (PBS), pH 7.4 (fosfato 10 mM, NaCl 137 mM, KCl 2.7 mM, pH 7.4) se montaron sobre células de difusión en la estación HTS.

Se utilizó un total de 18 células de difusión en el estudio. Cada célula de la estación tiene un área de difusión de 0.503 cm2 (8 mm de diámetro). Cada célula individual es de tipo Célula de Franz estática. La cámara receptora se llenó con 3.0 ml de Albúmina de Suero Bovino (BSA) al 4% en agua suplementada con sulfato de gentamicina al 0.01%. pH 7.1, que se mezcló de forma vigorosa y continua. La razón para utilizar este medio es que el BSA al 4% puede imitar el nivel de proteína en la sangre y se puede eliminar fácilmente antes del análisis. Además, este medio con gentamicina al 0.01% es mejor para mantener la integridad de la piel a través de los experimentos, en comparación con el tampón de PBS normal. La temperatura se fijó en 32±0.1 °C. Las muestras de tejido en las células HTS se equilibraron a 32±0.1 °C durante 1 hora antes de la dosificación. Cada formulación se procesó en seis repeticiones (N = 6, Tabla 2). Todas las actividades de laboratorio con niclosamida se realizaron bajo luces amarillas (A = 570 nm), porque la niclosamida es amarilla y puede absorber luces ultravioleta (A = 290-450 nm).

Nota: F11-F16 son las réplicas de la formulación 1 (F1); F41-F46 son las réplicas de la formulación 4 (F4).

En los puntos de tiempo 2, 4 y 8 horas, se recolectó todo el líquido receptor y se reemplazó con un lote nuevo de líquido receptor (preincubado a 32 °C). Las muestras recolectadas del medio receptor se almacenaron en un congelador (-20 °C).

A las 24 horas, después de retirar el tejido de la piel de la Célula de Franz HT, la superficie del tejido y la cámara donante se limpiaron cuidadosamente con hisopos de algodón humedecidos con agua destilada, seguido de un paño con hisopos de algodón húmedos, luego otro ciclo de hisopos de algodón para eliminar el API “no absorbido y no penetrado”. Se utilizó el método de separación de cinta estándar para eliminar la capa del estrato córneo (SC). Es un procedimiento validado que las dos primeras tiras de cinta también se contaron como “API no absorbido. Los hisopos de algodón recolectados y las dos primeras tiras se combinaron y extrajeron con 5.0 ml de DMSO/acetonitrilo (50/50 v/v) en la habitación temperatura durante la noche utilizando un agitador orbital.

Se continuó el ciclo de separación de cinta durante 15 veces más para cada muestra de piel para eliminar la capa SC por completo. Las tiras de cinta se combinaron y se extrajeron con 5.0 ml de DMSO/acetonitrilo (50/50 v/v) a temperatura ambiente durante la noche utilizando un agitador orbital. Para cada ciclo de separación, todas las cintas/tejidos aplicados se alinearon sobre una placa de teflón. Luego, se presionó un rodillo revestido de caucho duro contra las cintas/tejidos para aplicar la misma presión en todas las muestras para asegurar la uniformidad de cada ciclo y procedimiento completo. Luego, la tira de cinta se retiró con un movimiento rápido de cada par de cinta/tejido. Luego se recogió la tira de cinta. Los extractos se recolectaron y almacenaron en un congelador (-20 °C).

Después de retirar la capa SC, el tejido restante se cortó en trozos pequeños y se extrajo con 5.0 ml de DMSO/acetonitrilo (50/50 v/v) a temperatura ambiente durante la noche utilizando un agitador orbital. Los sobrenadantes se recolectaron y almacenaron en un congelador (-20 °C). El fluido receptor se recolectó y se almacenó en un congelador (-20 °C).

Estudio de penetración y absorción percutánea in vitro del perfil de absorción de fármacos

Se calculó la cantidad de fármaco acumulada en el fluido receptor para F11-F16 y F41-F46 a las 2, 4, 8 y 24 horas. En el grupo F42, la cantidad acumulada de niclosamida fue aproximadamente 5-10 veces mayor que los valores en otros grupos (F41, F43, F44, F45 y F46) a las 2 horas. Esto se puede deber al daño a la integridad de la piel durante el experimento, aunque la integridad de la piel se validó antes del experimento. Por tanto, los datos del grupo F42 se descartaron en el presente cálculo. Las curvas de absorción de niclosamida se adquirieron al graficar la cantidad de fármaco acumulada frente al tiempo (Figura 7). Las ecuaciones, pendiente y R2 se adquirieron utilizando los últimos tres puntos de tiempo para el ajuste de linealidad en F1 y F4, asumiendo que se alcanzó el estado estacionario después de 2 horas para F1 y F4.

Los parámetros de permeación de niclosamida de diferentes formulaciones a través de la piel humana se exponen en la Tabla 13. Los flujos de estado estacionario de niclosamida de diferentes formulaciones se calcularon basándose en los valores de pendiente de las curvas de absorción.

Análisis de datos

Los datos de permeación se analizaron de acuerdo con la directriz 4281 de la OECD. El flujo de estado estacionario (Js), el tiempo de retardo (T^l), el coeficiente de difusión (D), el coeficiente de partición piel/vehículo (K) y el coeficiente de permeación aparente (Papp) se definen mediante ecuaciones (Eqs). (1-3)2.

Js = (dQ/dt)ss * 1/A = DKC/h (1)

D = h2/6T i (2)

Papp = dQ/dt * 1/A * 1/C (3)

Para los cálculos estadísticos, se utilizó la prueba t de Student con dos colas tipo 1 y se consideró significativa p <0.05.

1. Oecd, Test No. 428: Skin Absorption: In Vitro Method. OECD Publishing.

2. Cho, Y. A.; Gwak, H. S., Transdermal delivery of ketorolac tromethamine: effects of vehicles and penetration enhancers. Drug development and industrial pharmacy 2004, 30 (6), 557-564

Los parámetros de permeación de la niclosamida a través de la piel humana para las formulaciones F1 y F4 se calcularon utilizando las ecuaciones anteriores. De acuerdo con la Eq. (1 y 3), la permeabilidad se determinó mediante el coeficiente de difusión (Ds) y el coeficiente de partición de piel/vehículo (K), considerando que la dosis aplicada está completamente solubilizada en tres formulaciones (alrededor de 20 mg/ml). No se observaron diferencias significativas entre F1 y F4 en los valores de permeabilidad. Estos resultados indican que el mejorador de penetración propilenglicol no influyó significativamente en el perfil de absorción de niclosamida en F4.

Nota: el flujo de estado estacionario (Js), el tiempo de retardo (Tl), el coeficiente de difusión (Ds), el coeficiente de partición de piel/vehículo (K) y el coeficiente de permeación aparente (Papp).

La Figura 7 muestra la niclosamida acumulada mediana en el fluido receptor para las composiciones ensayadas F1 y F4.

Perfil de penetración del fármaco después de aplicación de 24 horas.

Se determinó la distribución de niclosamida en las muestras de piel después de 24 horas, es decir, la cantidad expresada como ng y % de la dosis aplicada presente en el fluido receptor, epidermis y dermis viables, estrato córneo. También se determinó la cantidad de niclosamida sobre las superficies de la piel y sobre las paredes de las cámaras donantes, y se consideró un fármaco no penetrado. El promedio de los resultados para las formulaciones F1 y F4 se muestra en la Tabla 14.

Tabla 14 Perfil de penetración de fármaco promedio de niclosamida a través de la piel humana después de aplicar F1 y F4 durante 24 hr (n=6)

Tabla 14 continuación

No se observó ninguna diferencia significativa entre F1 y F4 con respecto a la cantidad y el porcentaje de niclosamida en el fluido receptor. Este resultado es consistente con los datos de permeabilidad discutidos anteriormente. Por tanto, el mejorador de la permeación propilenglicol al 25% en peso en F4 no influyó significativamente en el perfil de absorción de la niclosamida de la composición de gel en este estudio. Adicionalmente, no se observaron diferencias estadísticamente significativas entre las formulaciones F1 y F4 en la distribución del fármaco en el estrato córneo, así como en la dermis y la epidermis (p> 0.05).

Exposición a fármaco activa en el tejido de piel humana

De acuerdo con investigaciones anteriores, el grosor promedio de la capa del estrato córneo del abdomen de un adulto es de aproximadamente 22.38 pm (Holbrook, K. A.; Odland, G. F., Regional differences in the thickness (cell layers) of the human stratum corneum: an ultrastructural analysis. Journal of Investigative Dermatology 1974, 62 (4), 415-422.) El grosor de la epidermis y dermis se calculó al restar la capa del estrato córneo del grosor de la pieza completa de la piel (Tabla 14). Por tanto, se puede calcular el volumen del estrato córneo y la epidermis más la dermis. Las concentraciones de niclosamida en diferentes capas de la piel se pueden calcular al utilizar la cantidad de niclosamida depositada y el volumen calculado. Como se muestra en la Tabla 15, 5.000-10.000 veces la MIC de niclosamida estaba presente en la capa del estrato córneo después de aplicar F1 (220.17 pg/cm2) y F4 (191.01 pg/cm2) durante 24 horas.

688 veces y 975 veces la MIC de niclosamida estaba presente en la epidermis y dermis después de aplicar F1 (220.17 pg/cm2) y F4 (191.01 pg/cm2) durante 24 h. Generalmente se considera que 10 x la MIC de la exposición al fármaco durante 24 horas será suficiente para proporcionar una extinción eficaz de las bacterias. Estos resultados sugieren que las presentes formulaciones en gel serán un antibacteriano tópico muy potente.

Tabla 15 Valores promedios de exposición al fármaco activo en el tejido de piel humana después de aplicar F1 y F4 durante 24 h (n = 6)

Sinergia entre niclosamida y PEG (datos in vivo)

El Staphylococcus aureus 43484 es un aislado clínico de CA-MRSA de un absceso de la piel de tipo USA300 (ST8-t008-IV, PVL+) (Statens Serum Institute, Copenhague, Dinamarca). Se prepararon suspensiones bacterianas para la inoculación de ratones a partir de cultivos durante la noche en placas de agar de sangre al 5% (SSI Diagnostica, Hillerad, Dinamarca) inmediatamente antes de la inoculación al suspender las colonias en solución salina estéril al 0.9% a 9 logio CFU/ml. (MRSA 01).

Modelo experimental de infección de heridas de la piel

Los experimentos se realizaron esencialmente como se describe en (Vingsbo Lundberg C, Frimodt-M⁰ller N. Efficacy of topical and systemic antibiotic treatment of meticillin-resistant Staphylococcus aureus in a murine superficial skin wound infection model. Int. J Antimicrob. Agents. 2013 Sep;42(3):272-5. doi: 10.1016/j.ijantimicag.2013.05.008. Epub 2013 Jul 6. PubMed PMID: 23837927.

Se anestesiaron ratones hembra BALB/c, de 10-12 semanas de edad, y se afeitaron en un área de piel de 2-3 cm2 de la zona lumbar. Se utilizó una cureta dérmica desechable (Integra, York, PA, EE.UU.) para inducir una herida de la piel superficial menor en un área de 1 cm2, que se inoculó con 7 log¹⁰CFU de bacterias.

Se sacrificaron los ratones y se cortó toda el área de piel infectada con tejido subyacente y se homogeneizó en 1 ml de solución salina utilizando un Dispomix® Drive (Medic Tools AG, Zug, Suiza). Los homogeneizados de tejido se diluyeron en serie en solución salina que contenía Triton X-100 al 0.1% (T-8787; Sigma-Aldrich Inc., St Louis, MO). Luego, se aplicaron puntos de 20 pl por duplicado a agar de NaCl suplementado con polimixina B (SSI Diagnostica). Las placas se incubaron a 35 °C en aire ambiente durante 20-48 h.

El tratamiento se inició el día después de la inoculación y los ratones se trataron dos veces al día durante 3 días, con 5-6 ratones en cada grupo de tratamiento. En resumen, se aplicaron por vía tópica 0.05 ml de formulación antibiótica en el área de la lesión. Se recolectaron muestras de piel el día después de completar el tratamiento para la determinación de CFU. El efecto de arrastre se minimizó al realizar las determinaciones de CFU > 18 h después del último tratamiento y homogeneizando, diluyendo y colocando las muestras en placa inmediatamente. Los ratones se probaron con las siguientes composiciones:

F1 en la Tabla 12 (véase “PEG 400 API al 2%” en la Figura 8 (una composición en gel de la invención));

La composición F1 pero excluyendo niclosamida (véase “PEG 400” en la Figura 8 (una composición comparativa)) Una composición de crema acuosa de niclosamida al 2% que contiene los excipientes que se muestran en la Tabla 16 (véase “otros excipientes API al 2% en la Figura 8; (una composición comparativa))

Tabla 16: Com osición com arativa

Los resultados de la reducción de MRSA sobre la piel de los ratones después del tratamiento dos veces al día durante tres días se ilustran en la Figura 8. Los resultados muestran que la composición de gel no acuoso que comprende niclosamida y PEG 400 exhibió un efecto mejorado en comparación con el uso de PEG 400 solo o la formulación en crema que comprende niclosamida sola.

Se ha informado que las soluciones de polietilenglicol 400 concentradas (PEG400) (Antibacterial Agents and Chemotherapy, 24(3), 409-412 (1983)) tienen alguna actividad antibacteriana contra bacterias tales como Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli y Staphylococcus aureus. Los experimentos descritos se realizaron en un medio acuoso y se consideraba que el efecto de PEG 400 se atribuía a dos efectos: disminución de la actividad del agua y, superpuesto a esto, la acción específica de PEG 400 sobre células bacterianas.

El efecto sinérgico aparente entre niclosamida y PEG en la reducción de MRSA sobre la piel del ratón fue inesperado porque las composiciones probadas eran geles no acuosos aplicados tópicamente a la piel del ratón bajo condiciones esencialmente no acuosas.

Ejemplo 7: Otras composiciones tópicas no acuosas

Se prepararon composiciones tópicas no acuosas que se muestran en las Tablas 17, 18 y 19.

Tabla 17

Tabla 18

Tabla 19

Las formulaciones de pomadas D, E, F, G, H, I y J establecidas en las Tablas 17 y 18 se prepararon como emulsiones no acuosas utilizando el siguiente método general.

Se mezclaron la fase hidrófila de la emulsión y la niclosamida anhidra (véase bajo el encabezado “fase hidrófila” en las Tablas 17 y 18) junto con agitación en un recipiente para formar una solución de niclosamida en la fase hidrófila. Generalmente, la fase hidrófila se calentó suavemente a una temperatura de aproximadamente 60 a 75 °C (generalmente a aproximadamente 70 °C) para ayudar a la disolución de la niclosamida.

Se mezcló una fase hidrófoba que comprendía los aceites y emulsionantes bajo el título “Fase hidrófoba y emulsionantes” mediante agitación en un recipiente calentado. La temperatura fue de aproximadamente 60 a 75 °C (generalmente a aproximadamente 70 °C).

La fase hidrófoba y las fases hidrófilas se mezclaron juntas con agitación suave para evitar la separación de fases y la mezcla se enfrió a una temperatura de aproximadamente 40 a 50 °C. Después, la mezcla se homogeneizó para dar la composición final.

La formulación de gel B se preparó utilizando un método análogo a aquel descrito para la preparación de la composición de gel F1 descrita anteriormente en el Ejemplo 6.

La apariencia y algunas de las propiedades de las composiciones resultantes se describen en la fila marcada como “Apariencia” en las Tablas 17 y 18.

Ejemplo 8: Tolerancia dérmica y estudio PK en minicerdos

Objetivo

El objetivo del estudio fue evaluar la tolerabilidad local de las formulaciones de niclosamida dérmica no acuosas B, D, E, F, G, H, I y J en las Tablas 17 y 18. El estudio también evaluó la distribución de niclosamida en la dermis y la epidermis después de 2 días y 28 días de aplicación.

Razón de la elección de la especie animal, ruta de administración y dosis

La piel de cerdos y minicerdos se ha descrito ampliamente y se considera útil para evaluaciones relacionadas dermatológicas y pruebas de toxicidad dérmica, ya que se consideró que la arquitectura, el desarrollo y la función de la piel se parecían mucho a la piel humana.

Animales

El estudio se realizó en minicerdos Gottingen SPF 3 machos y 3 hembras de Minicerdos Ellegaard Gottingen A/S, DK-4261 Dalmose, Dinamarca. Al comienzo del período de aclimatación, los animales tenían aproximadamente 6 meses de edad y el peso corporal era de 12.1 a 13.4 kg. Se permitió un período de aclimatación de al menos 1 semana, durante el cual se observó a los animales diariamente.

Dosificación

Las composiciones se aplicaron por vía dérmica a un área de prueba sobre la piel de los minicerdos a una dosis diaria aplicada de 10 mg/m2 de niclosamida durante 28 días. Todos los campos de prueba fueron semi-ocluidos con Mefix® (Molnlycke Health Care, Suecia), permitiendo que los sitios “respiren” mientras se mantiene la sustancia de prueba en su lugar. El Mefix® se mantuvo en su lugar con cinta adhesiva (Tensoplast, BSN medical, Alemania) durante 6 horas ± 30 minutos después de la aplicación para asegurar que los compuestos fueran absorbidos en la piel.

Biopsias de piel y análisis PK

Se tomaron biopsias de piel de los minicerdos el día 28. Se extrajo tejido subdérmico y las biopsias se colocaron en un tubo Eppendorf y se sumergieron en un baño de agua a 55 °C durante 5 minutos. Después de eso, cada biopsia se dividió entre la capa epidérmica y dérmica de la piel con pinzas. Se registró el peso de la biopsia dérmica y se estimó el peso de la biopsia epidérmica a partir del peso de cortes epidérmicos de biopsias de piel de cerdo de 6 mm. Las muestras de biopsia epidérmica y dérmica se colocaron en tubos Eppendorf separados y se congelaron rápidamente en nitrógeno líquido antes del análisis.

Las biopsias de piel se analizaron utilizando un método HPLC validado para evaluar la concentración de niclosamida en la dermis y epidermis.

Muestreo de sangre

También se tomaron muestras de sangre el día 28 y se analizó el plasma de la sangre para determinar la concentración de niclosamida.

Reacciones de piel

Se observaron reacciones en los sitios de aplicación diariamente después de la dosificación y el día de la necropsia. Cualquier irritación dérmica se puntuó de acuerdo con las Directrices de la OCDE para el Ensayo de Sustancias Químicas No. 404, adoptada el 24 de abril de 2002: “Irritación/corrosión dérmica aguda” de la siguiente manera:

Se registró cualquier otra reacción y el área afectada se puntuó de la siguiente manera:

Resultados

Reacciones de la piel

Todas las formulaciones dérmicas probadas fueron bien toleradas en todos los minicerdos después de dosificación repetida durante 28 días.

En una comparación de los resultados de todas las formulaciones tópicas probadas, se hicieron las siguientes observaciones.

La puntuación de las reacciones de la piel reveló que la formulación B (formulación de gel no acuoso) solo provocó un ligero eritema un día en un cerdo (cerdo n° 6), lo que indica que la formulación B se toleró extremadamente bien.

Las formulaciones F y G solo revelaron puntuaciones hasta bien definidas en 3 cerdos (Cerdos Nos. 1, 2 y 3) y hasta levemente en 3 cerdos (Cerdos No. 4, 5 y 6), lo que significa que todos los cerdos se vieron afectados en menor grado por las formulaciones F y G. La formulación I afectó a tres cerdos (Cerdos Nos. 1, 4 y 5) hasta un leve eritema, mientras que dos cerdos (Cerdos No. 2 y 3) se vieron afectados hasta un grado moderado de eritema.

Las formulaciones D, E, H y J mostraron puntuaciones de hasta moderadas en todos los cerdos, sin embargo, los cerdos hembra nunca superarían las puntuaciones de eritema leve. Ninguna de las formulaciones provocó edema en ninguno de los cerdos durante todo el estudio. En conclusión, las formulaciones anhidras dosificadas tópicamente diariamente durante 28 días en el estudio de tolerancia local en 3 minicerdos hembras y 3 minicerdos machos revelaron eritema macroscópicamente de leve a moderado, sin embargo, el eritema desapareció dentro de los 9 días de la última dosis. Adicionalmente, la histopatología no encontró reacciones observables provocadas por la aplicación de las formulaciones. La fórmula en gel B fue particularmente bien tolerada.

Bioanálisis en dermis, epidermis y plasma

El bioanálisis mostró que la niclosamida se localizó principalmente en la epidermis y la dermis, con solo una ligera concentración en el plasma (generalmente menos de 0.651 ng/ml), lo que indica un efecto altamente local. Las formulaciones que se observaron con mayor exposición en la epidermis y la dermis fueron las formulaciones B (todos los cerdos) y H (en cuatro cerdos).

La Figura 9 compara la concentración de niclosamida en la epidermis el día 28 con la formulación de gel B con la concentración promedio observada para las formulaciones de pomada D, E, F, G y H. La concentración de niclosamida en la epidermis de la formulación B de gel fue significativamente más alta que la resultante de las otras formulaciones probadas.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición tópica no acuosa que comprende:

(i) una salicilanilida halogenada seleccionada de niclosamida, rafoxanida y oxiclozanida, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma; y

(ii) polietilenglicol (PEG) con un punto de fusión de menos de 40 °C;

con la condición de que cuando la composición comprende niclosamida o rafoxanida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, la composición comprende adicionalmente un agente de formación de gel o un glicol no polimérico.

2. La composición de la reivindicación 1 en la que:

(i) el PEG tiene un peso molecular promedio de 800 o menos; o

(ii) el PEG tiene un peso molecular promedio de 600 o menos.

3. La composición de la reivindicación 1 o reivindicación 2, en la que:

(i) el PEG está presente en una cantidad de al menos 5% en peso de la composición; o

(ii) el PEG está presente en una cantidad de al menos 15% en peso de la composición; o

(iii) el PEG está presente en una cantidad de al menos 50% en peso de la composición.

4. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la composición comprende un alquilenglicol, por ejemplo, propilenglicol; opcionalmente en la que el alquilenglicol está presente en una cantidad de al menos 5% en peso de la composición, por ejemplo, en la que el alquilenglicol está presente en una cantidad desde 8% en peso hasta 30% en peso.

5. Una composición tópica no acuosa que comprende:

(i) una salicilanilida halogenada seleccionada de niclosamida, rafoxanida, oxiclozanida y closantel, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma; y

(ii) más del 60 % en peso de un polietilenglicol (PEG), en el que el peso molecular promedio del PEG es 600 o menos.

6. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que la composición comprende un agente de formación de gel; opcionalmente en la que:

(i) el agente de formación de gel es un polímero de formación de gel, por ejemplo, un polímero de formación de gel hidrófilo; o

(ii) el polímero de formación de gel es un polímero de formación de gel termorreversible, por ejemplo, gelatina, carragenina, agar, agarosa, pectina o un derivado de celulosa; o

(iii) el polímero de formación de gel es un polímero de formación de gel ionotrópico, por ejemplo, quitosano o un alginato; o

(iv) el polímero de formación de gel se selecciona de gelatina; agar; agarosa; pectina; carragenina; quitosano; alginato; almidón; componentes de almidón; goma de tragacanto; goma xantana; goma arábiga; goma de guar; goma gellan; goma de algarrobo; un poliuretano; un poliuretano poliéter; celulosa; un éter de celulosa; un éster de celulosa, un acetato de celulosa, un triacetato de celulosa; alcohol de polivinilo entrecruzado; un polímero o copolímero de ácido acrílico, acrilatos de hidroxialquilo, acrilato de hidroxietilo, monoacrilato de dietilenglicol, acrilato de 2-hidroxipropilo o acrilato de 3-hidroxipropilo; un carbómero; un polímero o copolímero de ácido metacrílico, metacrilato de hidroxietilo, monometacrilato de dietilenglicol, metacrilato de 2-hidroxipropilo, metacrilato de 3-hidroxipropilo o monometilacrilato de dipropilenglicol; un polímero de vinilpirrolidona; un polímero o copolímero de acrilamida, N-metilacrilamida, N-propilacrilamida o metacrilamida, N-isopropilmetacrilamida o N-2-hidroxietilmetacrilamida; un poloxámero; y geles que comprenden polialquilenglicoles entrecruzados y combinaciones de los mismos; o

preferiblemente en la que el polímero de formación de gel es un carbómero, por ejemplo, un carbómero se selecciona de carbómero 910, carbómero 934P, carbómero 940GE, carbómero 941GE, carbómero 971P y carbómero 974P, más preferiblemente en la que el carbómero es carbómero 974P; y/o

en la que el agente de formación de gel está presente en una cantidad de hasta aproximadamente 10% en peso de la composición, por ejemplo, desde 1% hasta 5% en peso de la composición.

7. La composición de cualquier reivindicación precedente en la que:

(i) el PEG tiene un peso molecular promedio desde aproximadamente 200 hasta aproximadamente 600, preferiblemente en la que el PEG es PEG 400; y/o

(ii) el PEG está presente en una cantidad desde aproximadamente 70% a aproximadamente 98% en peso de la composición, por ejemplo, desde 80% hasta 95% en peso.

⁸. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que la salicilanilida halogenada es oxiclozanida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

9. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que la salicilanilida halogenada es niclosamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, preferiblemente en la que la salicilanilida halogenada es niclosamida anhidra.

10. La composición de cualquier reivindicación precedente en la que la salicilanilida halogenada está presente en una cantidad de hasta ¹⁰% en peso de la composición, por ejemplo, hasta ⁸% en peso de la composición; opcionalmente en la que la salicilanilida halogenada está presente desde:

(i) desde ⁰.¹% hasta ⁶% en peso de la composición;

(ii) desde 0.05 hasta 4.5% en peso de la composición; o

(iii) desde 2.5 hasta ⁶% en peso de la composición;

por ejemplo, en la que la salicilanilida halogenada está presente en una cantidad de aproximadamente ²% en peso de la composición, o aproximadamente 4% en peso de la composición, o aproximadamente 5% en peso de la composición.

11. La composición de cualquier reivindicación precedente en la que la composición comprende un solvente orgánico polar que tiene una constante dieléctrica desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 45, por ejemplo, una constante dieléctrica desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 20 cuando se mide a 20-25 °C; opcionalmente en la que el solvente orgánico polar está presente en una cantidad de hasta 35% en peso de la composición, por ejemplo desde 1% hasta 30% en peso.

12. La composición de cualquier reivindicación precedente en la que la composición comprende un mejorador de la absorción, por ejemplo un mejorador de la absorción seleccionado de un sulfóxido; dimetilacetamida; dimetilformamida; una urea; un alcohol graso; un poliol (por ejemplo glicerol), un glicol (por ejemplo propilenglicol o hexilenglicol); ¹-dodecilazacicloheptan-²-ona; un aceite esencial; una pirrolidona; una oxazolidinona; un tensioactivo (por ejemplo un tensioactivo no iónico, aniónico o catiónico); y ²-(²-etoxietoxi)etanol, opcionalmente en la que el mejorador de la absorción es ²-(²-etoxietoxi)etanol, propilenglicol o glicerol, de forma adecuada el mejorador de la absorción es propilenglicol; opcionalmente en la que el mejorador de la absorción está presente en una cantidad de hasta 35% en peso de la composición, por ejemplo, desde 1% hasta 30% en peso de la composición.

13. La composición tópica no acuosa de la reivindicación 5 que comprende:

(i) 0.1% a 5% en peso de niclosamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) 70% a 98% (por ejemplo 85% a 98%) en peso PEG, en la que el peso molecular promedio del PEG es 600 o menos; y

(iii) un agente de formación de gel;

por ejemplo, en la que la composición comprende:

(i) 1% a 3% (por ejemplo, 1.5% a 2.5%, o aproximadamente 2%) en peso de niclosamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) 94% a 98% en peso de PEG 400; y

(iii) 1% a 3% en peso de un carbómero, por ejemplo ,carbómero 974P; o

en la que la composición comprende:

(i) 3.5% a 4.5% (por ejemplo, aproximadamente 4%) en peso de niclosamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

(ii) 92.5% a 95.5% en peso de PEG 400; y

(iii) 1 a 3% en peso de un carbómero, por ejemplo, carbómero 974P.

14. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en la que:

(i) la composición no comprende un alcohol monohidroxi alquilo C^1-4o alcohol bencílico, por ejemplo, en la que la composición no comprende etanol o alcohol bencílico; y/o

(ii) la composición no comprende una alcanolamina, por ejemplo, en la que la composición no comprende trietanolamina.

15. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, que comprende un retinoide y/o peróxido de benzoilo.

16. Una composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para uso en la prevención o tratamiento tópico de una infección o enfermedad provocada por bacterias Gram-positivas; por ejemplo, en la que:

(i) la bacteria Gram-positiva se selecciona de Staphylococcus spp., Streptococcus spp. o Propionibacterium spp.; y/o (ii) la bacteria Gram-positiva no es un Propionibacterium; y/o

(iii) la infección o enfermedad se selecciona del grupo que consiste en impétigo, conjuntivitis bacteriana, dermatitis atópica, sicosis barbae, foliculitis superficial, paroniquia eritrasma, dermatosis infectada secundaria, carbuncos, furonculosis, ectima, celulitis, erisipela, fascitis necrotizante, infecciones de la piel secundarias de heridas, dermatitis, sarna, úlcera diabética y acné; y/o

(iv) la infección o enfermedad se selecciona del grupo que consiste en eccema infectado, dermatitis infectada, impétigo, úlceras diabéticas infectadas, picaduras de insectos infectados, quemaduras infectadas, heridas infectadas, acné, rosácea, foliculitis, infecciones de articulación protésica y rinosinusitis (que incluyen rinosinusitis crónica); y/o

(iv) la infección o enfermedad es acné, por ejemplo, en la que el acné es acné no inflamatorio, o en la que el acné es acné inflamatorio, o en la que el acné es acné severo, o en la que el acné es acné leve o moderado; y/o en la que la bacteria Gram-positiva es Propionibacterium acnes; y/o

(v) la infección o enfermedad es pioderma; y/o

(v) la bacteria Gram-positiva no es una cepa resistente a los antibióticos; o

(vi) la bacteria Gram-positiva es una cepa resistente a los antibióticos, por ejemplo en la que la bacteria Gram-positiva es una cepa antibiótica resistente a un fármaco seleccionado de ácido fusídico, mupirocina, retapamulina, eritromicina, clindamicina y una tetraciclina, preferiblemente en la que la bacteria Gram-positiva es resistente a un fármaco seleccionado de ácido fusídico, mupirocina y retapamulina; más preferiblemente en la que la bacteria Gram-positiva es Staphylococcus aureus resistente a meticilina.

17. Una composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para uso en el tratamiento tópico de dermatitis atópica.

18. Una composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para uso en el tratamiento tópico de un trastorno de la piel o de la membrana.

19. Una composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para uso en el tratamiento tópico de rosácea.

20. Una composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para uso en el tratamiento tópico de psoriasis.

21. Una composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para uso en el tratamiento tópico de acné, opcionalmente en la que:

(i) el acné es acné inflamatorio; o

(ii) el tratamiento evita o reduce las cicatrices en la piel asociadas con acné; o

(iii) la composición se aplica de forma tópica en combinación con otro agente activo para el tratamiento de acné, por ejemplo, un retinoide tópico y/o peróxido de benzoilo.

22. Una composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 para uso en el tratamiento tópico de una erupción acneiforme asociada con un tratamiento de quimioterapia, opcionalmente en la que la quimioterapia es un inhibidor del receptor del factor de crecimiento epidérmico, por ejemplo, gefitinib, erlotinib, panitumumab o cetuximab.

23. La composición para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 22, en la que la composición es para uso en el tratamiento tópico de un humano o animal, por ejemplo, un animal de compañía tal como un gato, perro o caballo, preferiblemente en la que la composición es para uso en el tratamiento tópico de un humano.