ES2847923T3

ES2847923T3 - Vacunas contra el meningococo del serogrupo X

Info

Publication number: ES2847923T3
Application number: ES13747515T
Authority: ES
Inventors: Mariagrazia Pizza; Peter Dull; Marzia Monica Giuliani; Muhamed-Kheir Taha; Eva Hong; Ala-Eddine Deghmane
Original assignee: GlaxoSmithKline Biologicals SA; Institut Pasteur
Current assignee: GlaxoSmithKline Biologicals SA; Institut Pasteur
Priority date: 2012-06-14
Filing date: 2013-06-14
Publication date: 2021-08-04
Anticipated expiration: 2033-06-14
Also published as: US10376573B2; AU2013276083B2; EP2861247B1; RU2644340C2; WO2013186753A1; AU2013276083A1; CA2876138A1; JP2015521595A; MX357538B; CA2876138C; EP2861247A1; NZ630133A; BR112014031386A2; MX2014014576A; CN104602704B; RU2015100889A; CN104602704A; US20160166674A1

Abstract

Una composición inmunogénica que comprende un antígeno de fHbp meningocócico y un adyuvante de sal de aluminio que se usan para desencadenar una respuesta inmunitaria en un sujeto, la cual proporciona protección frente a las cepas de meningococo del serogrupo X que expresan una variante 1 fHbp; de manera que el antígeno de fHbp meningocócico comprende un polipéptido de fusión NMB2091-fHbp que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 7; y de manera que la composición inmunogénica (a) carece de vesículas de la membrana externa meningocócicas o (b) incluye vesículas de la membrana externa meningocócicas, y el antígeno de fHbp está presente en la composición en una forma soluble.

Description

DESCRIPCIÓN

Vacunas contra el meningococo del serogrupo X

CAMPO TÉCNICO

[0001] La presente invención pertenece al campo de las vacunas que inmunizan contra el serogrupo X de Neisseria meningitidis.

TÉCNICA ANTERIOR

[0002] Casi todas las enfermedades meningocócicas se deben a cepas de los serogrupos A, B, C, W135 e Y, pero a veces el serogrupo X también es relevante. Actualmente no existe ninguna vacuna contra el serogrupo X. Por lo tanto, sigue habiendo una necesidad de contar con una vacuna que sea eficaz contra las cepas del serogrupo X.

[0003] Pajon et al., 2011, describe diversas vacunas de fHbp recombinante y también un prototipo de vacuna de vesícula de membrana externa nativa a partir de una cepa mutante del serogrupo B con la fHbp sobreexpresada. Pinto et al., 2011, describe una vacuna trivalente de vesícula de membrana externa nativa derivada de una cepa del serogrupo B. Santolaya et al., 2012, describe los resultados de un ensayo clínico con 4CMenB. Serruto et al., 2012, describe las tres variantes inmunogénicas de la proteína fHbp, es decir, fHbp-1, fHbp-2 y fHbp-3.

DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN

[0004] El producto BEXSERO® (que se describe en las referencias 1 a 4 y también se conoce como 4CMenB) está diseñado para inmunizar contra el meningococo del serogrupo B. Los autores de la invención han descubierto que los pacientes inmunizados con BEXSERO® también están protegidos contra las cepas del serogrupo X.

[0005] Por consiguiente, la presente invención proporciona una composición inmunogénica que comprende un antígeno meningocócico de fHbp y un adyuvante de sal de aluminio que se usan para desencadenar una respuesta inmunitaria en un sujeto, la cual proporciona protección frente a las cepas de meningococo del serogrupo X que expresan una variante 1 fHbp; de manera que el antígeno meningocócico de fHbp comprende un polipéptido de fusión NMB2091-fHbp que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 7; y de manera que la composición inmunogénica (a) carece de vesículas de la membrana externa meningocócica o (b) incluye vesículas de la membrana externa meningocócica, y el antígeno de fHbp está presente en la composición en una forma soluble. Protección contra el serogrupo X

[0006] La presente invención se usa para inmunizar sujetos contra las cepas de meningococo del serogrupo X que expresan una variante 1 fHbp, de manera que los receptores de la composición inmunogénica generan una respuesta inmunitaria que proporciona protección frente a las infecciones y/o las enfermedades causadas por una bacteria Neisseria meningitidis que expresa una variante 1 fHbp del serogrupo X. Este serogrupo se caracteriza por un sacárido capsular que tiene cadenas de N-acetilglucosamina 1 -fosfato unidas a (a1^ 4).

[0007] La protección frente a las cepas del serogrupo X puede medirse epidemiológicamente, pero es más común y más conveniente usar una medida o medición indirecta para confirmar que una composición inmunogénica provoca una respuesta de un anticuerpo bactericida sérico (o SBA, por sus siglas en inglés) en los receptores. El ensayo de SBA es algo estándar en este campo (ver, por ejemplo, las referencias 5-8) y presenta una buena reproducibilidad entre laboratorios cuando se usan procedimientos unificados o armonizados [9]. En pocas palabras, los sueros de los receptores de la composición se incuban con bacterias diana o bacterias objetivo (en el caso de la presente invención, cepas de meningococos del serogrupo X que expresan una variante 1 fHbp) en presencia de un complemento (preferiblemente un complemento humano, pero a menudo también se usa en su lugar un complemento de crías de conejo) y se evalúa la muerte de las bacterias en diversas disoluciones de los sueros para determinar la actividad del SBA.

[0008] No es necesario que la composición proteja frente a todas y cada una de las cepas del meningococo del serogrupo X o que deban protegerse todos los receptores de la composición. Una protección universal de este tipo no es el estándar normal en este campo. En lugar de ello, normalmente la protección se evalúa usando una lista o conjunto de cepas o variantes clínicamente relevantes, a menudo seleccionadas país por país y que tal vez varían con el tiempo, y se mide o determina en una población de receptores o destinatarios. Disponemos de diversas cepas del serogrupo X para confirmar la eficacia protectora; por ejemplo, la composición puede proteger frente a M405 (NAMRU#4; ATCC 35560), frente a la cepa 860060 (cepa de referencia 657 de la base de datos de PubMLST; denominación de la cepa: X:P1.12-1,13-5:F5-5: ST-24 (cc750); también conocida como Z6430), frente a las cepas 9557, 9558 y/o 9559 [30], frente a las cepas del serogrupo X que se enumeran en la Tabla 1 de la referencia 10 y frente a las cepas que se especifican en la referencia 11.

[0009] Dentro del serogrupo X, cuando la composición inmunogénica incluye un antígeno de fHbp, el método puede ser adecuado para inmunizar frente a cepas o variantes que tengan la misma variante de fHbp que la variante de la composición; por ejemplo, si la composición incluye una variante 1 fHbp, el método será más útil o adecuado para inmunizar frente a cepas del serogrupo X que expresan una variante 1 fHbp.

[0010] Además de inmunizarse frente al meningococo del serogrupo X, los receptores también pueden inmunizarse frente a otros serogrupos, por ejemplo uno o más de los serogrupos A, B, C, W135 y/o Y. Por ejemplo, la referencia 12 explica que los antígenos de BEXSERO® pueden proteger frente al serogrupo Y, y la referencia 13 sugiere que la fHbp podría proporcionar protección frente a otros serogrupos además del serogrupo B.

La composición inmunogénica

[0011] La presente invención utiliza una composición inmunogénica (por ejemplo, una vacuna) para proteger a sujetos frente a cepas de meningococos del serogrupo X que expresan una variante 1 fHbp. La composición incluye un antígeno de fHbp y provoca una respuesta inmunitaria frente a este antígeno. En algunas realizaciones, la composición solo incluye dos de los siguientes antígenos: antígenos de fHbp, antígenos de NHBA y antígenos de NadA (pero puede incluir otros antígenos adicionales; por ejemplo, fHBP+NHBA, fHBP+NadA). En otras realizaciones, la composición incluye estos tres antígenos (y puede incluir otros antígenos adicionales).

[0012] La composición no incluye una cantidad inmunogénica de sacárido capsular del serogrupo X, es decir, la protección frente al serogrupo X no puede explicarse mediante una respuesta de antisacáridos. El sacárido capsular del serogrupo X no está presente -esto es, está ausente- como sacárido libre, sacárido conjugado o sacárido localizado en la membrana (por ejemplo, en OMVs).

[0013] Una composición preferida incluye los siguientes: (i) un antígeno de fHbp que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 7; (ii) un antígeno de NHBA que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 8 (por ejemplo, SEQ ID NO: 9); y (iii) un antígeno de NadA que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 10. BEXSERO® es una de estas composiciones.

[0014] Si bien SEQ ID NO: 8 y SEQ ID NO: 10 son secuencias de aminoácidos útiles en una combinación, la invención no se limita a estas secuencias concretas. Por consiguiente, una o dos de estas secuencias de aminoácidos pueden modificarse de manera independiente por medio de hasta 5 cambios de aminos únicos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4 o 5 inserciones y/o deleciones y/o sustituciones de un solo aminoácido), siempre y cuando la secuencia modificada pueda generar anticuerpos que aún se unan a un polipéptido que comprenda la secuencia no modificada.

[0015] Los polipéptidos de una composición pueden estar presentes con masas básicamente iguales, es decir, la masa de cada uno de ellos está dentro de un 5% de la masa promedio de todos los polipéptidos. Por lo tanto, cuando la composición incluya tres polipéptidos (fHbp, HNBA y NadA), estos pueden estar presentes con una relación de masas de a:b:c, de manera que cada uno de ellos (a, b y c) está entre 0,95 y 1,05.

fHbp (proteína de union al factor H)

[0016] El antígeno de fHbp se ha descrito o caracterizado con detalle. También se conoce como proteína '741' (SEQ IDs 2535 y 2536 en la referencia 26), 'NMB1870', 'GNA1870' [14-16], 'P2086', 'LP2086' u 'ORF2086' [17-19]. De manera natural es una lipoproteína y se expresa en muchos serogrupos meningocócicos. La estructura del dominio inmunodominante C-terminal de fHbp ('fHbpC') se ha determinado mediante RMN [20]. Esta parte de la proteína forma un barril p de ocho hebras o cadenas y estas cadenas están conectadas mediante bucles o 'loops' de longitudes variables. El barril está precedido por una hélice a corta y por una cola N-terminal flexible. Se confirmó que la proteína es una proteína de unión al factor H y se denominó fHbp (referencia 21).

[0017] El antígeno de fHbp presenta tres variantes distintas [22] y se ha descubierto que el suero producido contra una familia determinada es bactericida dentro de la misma familia, pero no es activo contra cepas que expresan una de las otras dos familias, es decir, hay protección cruzada intrafamiliar, pero no hay protección cruzada interfamiliar. La presente invención utiliza una única variante de fHbp. A fin de proporcionar una cobertura más amplia, de manera útil, la composición puede incluir una fHbp de dos o tres de las variantes.

[0018] Cuando la composición comprende un único antígeno de fHbp, puede incluir uno de los siguientes:

(a) un primer polipéptido, que comprende una primera secuencia de aminoácidos, de manera que la primera secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos un porcentaje a (%a) de igualdad o identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1 y/o (ii) que se compone de un fragmento de al menos 'x' aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 1;

(b) un segundo polipéptido, que comprende una segunda secuencia de aminoácidos, de manera que la segunda secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos un porcentaje b (%b) de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 2 y/o (ii) que se compone de un fragmento de al menos 'y' aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 2;

(c) un tercer polipéptido, que comprende una tercera secuencia de aminoácidos, de manera que la tercera secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos un porcentaje c (%c) de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 3 y/o (ii) que se compone de un fragmento de al menos 'z' aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 3.

[0019] Cuando la composición comprende dos antígenos meningocócicos de fHbp diferentes, puede incluir una mezcla o combinación de: (i) un primer polipéptido y un segundo polipéptido, tal y como se ha explicado previamente; (ii) un primer polipéptido y un tercer polipéptido, tal y como se ha explicado previamente; o (iii) un segundo polipéptido y un tercer polipéptido, tal y como se ha explicado previamente. Se prefiere una combinación del primer polipéptido y el tercer polipéptido.

[0020] La composición puede comprender tres antígenos meningocócicos de fHbp diferentes, con un primer polipéptido, un segundo polipéptido y un tercer polipéptido, tal y como se ha explicado previamente.

[0021] Cuando la composición comprende dos o tres antígenos meningocócicos de fHbp diferentes, aunque estos puedan tener algunas secuencias en común, el primer polipéptido, el segundo polipéptido y el tercer polipéptido tienen diferentes secuencias de aminoácidos de fHbp.

[0022] Cuando se le administra a un sujeto, un polipéptido que comprende la primera secuencia de aminoácidos provocará una respuesta de anticuerpos que incluye anticuerpos que se unen a la proteína de meningococo de tipo natural o silvestre que tiene una secuencia de aminoácidos madura SEQ ID NO: 1 (cepa MC58). Todos o algunos de estos anticuerpos no se unen a la proteína de meningococo de tipo silvestre que tiene una secuencia de aminoácidos madura SEQ ID NO: 2 o a la proteína de meningococo de tipo silvestre que tiene una secuencia de aminoácidos madura SEQ ID NO: 3.

[0023] Cuando se le administra a un sujeto, un polipéptido que comprende la segunda secuencia de aminoácidos provocará una respuesta de anticuerpos que incluye anticuerpos que se unen a la proteína de meningococo de tipo silvestre que tiene la secuencia de aminoácidos madura SEQ ID NO: 2 (cepa 961-5945). Todos o algunos de estos anticuerpos no se unen a la proteína de meningococo de tipo silvestre que tiene una secuencia de aminoácidos madura SEQ ID NO: 1 o a la proteína de meningococo de tipo silvestre que tiene una secuencia de aminoácidos madura SEQ ID NO: 3.

[0024] Cuando se le administra a un sujeto, un polipéptido que comprende la tercera secuencia de aminoácidos provocará una respuesta de anticuerpos que incluye anticuerpos que se unen a la proteína de meningococo de tipo silvestre que tiene una secuencia de aminoácidos madura SEQ ID NO: 3 (M1239). Todos o algunos de estos anticuerpos no se unen a la proteína de meningococo de tipo silvestre que tiene una secuencia de aminoácidos madura SEQ ID NO: 1 o a la proteína de meningococo de tipo silvestre que tiene una secuencia de aminoácidos madura SEQ ID NO: 2.

[0025] Es posible que el fragmento de al menos 'x' aminoácidos contiguos de la SEQ ID NO: 1 no esté presente en la SEQ ID NO: 2 o en la SEQ ID NO: 3. De manera similar, es posible que el fragmento de al menos 'y' aminoácidos contiguos de la SEQ ID NO: 2 no esté presente en la SEQ ID NO: 1 o en la SEQ ID NO: 3. De manera similar, es posible que el fragmento de al menos 'z' aminoácidos contiguos de la SEQ ID NO: 3 no esté presente en la SEQ ID NO: 1 o en la SEQ ID NO: 2. Cuando el mencionado fragmento de una de las SEQ ID NOs: 1 a 3 está alineado como una secuencia contigua frente a las otras dos SEQ ID NOs, la igualdad o identidad entre el fragmento y cada una de las otras dos SEQ ID NOs es de menos de un 75%; por ejemplo, menos de un 70%, menos de un 65%, menos de un 60%, etc.

[0026] El valor de 'a' es al menos 80; por ejemplo, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99 o omás. El valor de 'b' es al menos 80; por ejemplo, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99 o más. El valor de 'c' es al menos 80; por ejemplo, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99 o más. Los valores de 'a', 'b' y 'c' pueden ser iguales o diferentes. Los valores de 'a', 'b' y 'c' pueden ser idénticos.

[0027] El valor de 'x' es al menos 7; por ejemplo, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 225, 250. El valor de 'y' es al menos 7; por ejemplo, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 225, 250. El valor de 'z' es al menos 7; por ejemplo, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 225, 250. Los valores de 'x', 'y' y 'z' pueden ser iguales o diferentes. Los valores de 'x', 'y' y 'z' pueden ser idénticos.

[0028] Preferiblemente, los fragmentos comprenden un epítopo de la respectiva secuencia SEQ ID NO:. Otros fragmentos útiles carecen de uno o más aminoácidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o más) del extremo C-terminal y/o uno o más aminoácidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o más) del extremo N-terminal de la respectiva SEQ ID NO:, si bien conservan al menos un epítopo de esta.

[0029] En comparación con las SEQ ID NOs: 12 o 3, las secuencias de aminoácidos pueden incluir uno o más reemplazos conservadores -o sustituciones conservativas- de aminoácidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, etc.), es decir, reemplazos o sustituciones de un aminoácido por otro que tiene una cadena lateral relacionada. Generalmente, los aminoácidos codificados genéticamente se dividen en cuatro familias: (1) ácidos; por ejemplo, aspartato, glutamato; (2) básicos; por ejemplo, lisina, arginina, histidina; (3) no polares; por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano; y (4) polares sin carga; por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, cisteína, serina, treonina, tirosina. La fenilalanina, el triptófano y la tirosina se clasifican a veces de forma conjunta como 'aminoácidos aromáticos'. En general, la sustitución de aminoácidos individuales dentro de estas familias no tiene efectos importantes sobre la actividad biológica. Los polipéptidos pueden tener una o más deleciones de aminoácidos individuales (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, etc.) respecto a una secuencia de referencia. Los polipéptidos también pueden incluir una o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, etc.) inserciones (por ejemplo, cada una de 1,2, 3, 4 o 5 aminoácidos) respecto a una secuencia de referencia.

[0030] Una primera secuencia de aminoácidos útil tiene al menos un 85% de identidad (por ejemplo, >95% o un 100%) con SEQ ID NO: 1. Otra primera secuencia de aminoácidos útil tiene al menos un 95% de identidad (por ejemplo, >98% o un 100%) con ^sE^qID NO: 12.

[0031] Una tercera secuencia de aminoácidos útil tiene al menos un 85% de identidad (por ejemplo, >95% o un 100%) con SEQ ID NO: 3. Otra tercera secuencia de aminoácidos útil tiene al menos un 95% de identidad (por ejemplo, >98% o un 100%) con SEQ ID NO: 11.

[0032] Las combinaciones que incluyan una mezcla de la primera secuencia y la tercera secuencia basadas en SEQ ID NO: 11 y SEQ ID NO: 12 (o sus variantes cercanas) son particularmente útiles. Por consiguiente, una composición puede comprender un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 11 y otro polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 12.

[0033] Otra fHbp útil es una de las formas modificadas que se desvelan, por ejemplo, en la referencia 23 (por ejemplo, las que comprenden la SEQ ID NO: 20 o la SEQ ID NO: 23). Estas formas modificadas pueden utilizar un único polipéptido de fHbp para desencadenar respuestas de anticuerpos mayormente bactericidas frente a diversas variantes de fHbp. La SEQ ID NO: 77 de la referencia 23 es otra secuencia de fHbp útil que puede usarse.

[0034] Los antígenos de fHbp que se utilizan con la presente invención pueden estar lipidados, por ejemplo en un residuo de cisteína N-terminal. En otras realizaciones, no están lipidados y pueden incluir secuencias de aminoácidos 'secuencia arriba' ('upstream') de la cisteína N-terminal madura natural. Las SEQ ID NOs: 1-3 y 11-12 comienzan con la cisteína del extremo N-terminal natural de los polipéptidos de fHbp maduros y relevantes. En el caso de las fHbp lipidadas, normalmente los lípidos unidos a las cisteínas incluirán residuos de palmitoíl o palmitoílo, por ejemplo tripalmitoíl-S-gliceril-cisteína (Pam3Cys), dipalmitoíl-S-gliceril cisteína (Pam2Cys), N-acetil (dipalmitoíl-S-gliceril cisteína), etc.

[0035] Preferiblemente, la administración de una fHbp generará anticuerpos que pueden unirse a un polipéptido meningocócico que se compone de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 1, 2 o 3. Los antígenos de fHbp que son útiles o adecuados para usarse con la presente invención pueden generar anticuerpos antimeningocócicos bactericidas tras la administración a un sujeto.

[0036] Normalmente, la cantidad total de un polipéptido de fHbp será de entre 1 y 500 pg/dosis; por ejemplo, entre 60 y 200 pg/dosis o entre 120 y 500 pg/ml.

[0037] Un polipéptido que incluya la secuencia de antígenos de fHbp puede incluir sólo esa secuencia, o bien puede ser un polipéptido de fusión. Un compañero de fusión adecuado para una secuencia de fHbp es el polipéptido NMB2091, que normalmente estará 'secuencia arriba' de la secuencia de fHbp. El antígeno de fHbp presente en una composición de la invención es una fusión NMB2091-fHbp, SEQ ID NO: 7.

NHBA (antígeno de Neisseria de unión a heparina)

[0038] El NHBA se incluyó en la secuencia genómica publicada para la cepa meningocócica del serogrupo B MC58 [24] como el gen NMB2132 (GenBank, número de acceso GI:7227388; SEQ ID NO: 4 en el presente documento). Desde entonces se han publicado secuencias de NHBA de muchas cepas. Por ejemplo, pueden verse formas alélicas de NHBA (denominadas proteína '287') en las Figuras 5 y 15 de la referencia 25, y también en el ejemplo 13 y en la figura 21 de la referencia 26 (SEQ IDs 3179 a 3184 de ese documento). También se ha informado sobre diversos fragmentos inmunogénicos de NHBA. Se confirmó que la proteína era una proteína de unión a la heparina y se denominó 'NHBA' (referencia 27).

[0039] Los antígenos de NHBA preferidos para usarse con la invención comprenden una secuencia de aminoácidos: (a) que tiene un 70% o más de identidad (por ejemplo, un 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% o más) con ^sE^qID NO: 4; y/o (b) comprenden un fragmento de al menos 'n' aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 4, de manera que 'n' es 7 o más (por ejemplo, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o más). Los fragmentos preferidos de (b) comprenden un epítopo de SEQ ID NO: 4.

[0040] Los antígenos de NHBA más útiles o adecuados pueden generar anticuerpos que, tras la administración a un sujeto, pueden unirse a un polipéptido meningocócico que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 4. Los antígenos de NHBA que son beneficiosos para usarse con la presente invención pueden generar anticuerpos antimeningocócicos bactericidas tras la administración a un sujeto.

[0041] Un polipéptido que incluya la secuencia de antígenos de NHBA puede incluir sólo esa secuencia, o bien puede ser una proteína de fusión. Un compañero de fusión adecuado para una secuencia de NHBA es el polipéptido NMB1030, que normalmente estará 'secuencia abajo' ('downstream') de la secuencia de NHBA. Por consiguiente, el antígeno de NHBA puede estar presente en una composición de la presente invención como una fusión NHBA-NMB1030, por ejemplo SEQ ID NO: 9.

NadA (adhesina A de Neisseria)

[0042] El antígeno de NadA se incluyó en la secuencia genómica publicada para la cepa meningocócica del serogrupo B MC58 [24] como el gen NMB1994 (GenBank, número de acceso Gⁱ:7227256; SEQ ID NO: 5 en el presente documento). Desde entonces se han publicado las secuencias del antígeno de NadA de muchas cepas y se ha documentado ampliamente la actividad de la proteína como una adhesina de Neisseria. También se ha informado sobre diversos fragmentos inmunogénicos de NadA. Se confirmó que la proteína era una adhesina y se denominó 'NadA' (referencia 28).

[0043] Los antígenos de NadA preferidos para usarse con la invención comprenden una secuencia de aminoácidos: (a) que tiene un 70% o más de identidad (por ejemplo, un 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% o más) con s Eq ID NO: 5; y/o (b) comprenden un fragmento de al menos 'n' aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 5, de manera que 'n' es 7 o más (por ejemplo, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o más). Los fragmentos preferidos de (b) comprenden un epítopo de SEQ ID NO: 5.

[0044] Los antígenos de NadA más útiles o adecuados pueden generar anticuerpos que, tras la administración a un sujeto, pueden unirse a un polipéptido meningocócico que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 5. Los antígenos de NadA que son beneficiosos para usarse con la presente invención pueden generar anticuerpos antimeningocócicos bactericidas tras la administración a un sujeto. SEQ ID NO: 10 es uno de estos fragmentos. Vesículas de la membrana externa

[0045] En algunas realizaciones, la composición inmunogénica carece de vesículas de la membrana externa (u OMVs, por sus siglas en inglés) de meningococo. No obstante, en otras realizaciones, la composición inmunogénica incluye OMVs meningocócicas. En las realizaciones que contienen OMVs, la composición incluye al menos un antígeno de fHbp y/o NHBA y/o NadA en una forma 'no OMV', por ejemplo en una forma soluble. Por consiguiente, estas composiciones se preparan mezclando OMVs con uno o más antígenos solubles, lo cual contrasta con el enfoque de las referencias 29 y 30.

[0046] Cuando la composición incluye OMVs, estas OMVs pueden ser cualquier vesícula proteoliposómica obtenida mediante la disrupción de o la ceiosis ('blebbing', en inglés) de una membrana externa meningocócica para formar vesículas a partir de esta que conserven o retengan los antígenos de la membrana externa. Por lo tanto, este término incluye, por ejemplo, las OMVs (a veces denominadas 'bullas', 'flictenas', 'ampollas' o 'blebs'), las microvesículas (o MVs) y las 'OMVs nativas' (o 'NOMVs', por sus siglas en inglés). En este campo se conocen diversas vesículas de este tipo (ver, por ejemplo, las referencias 31 a 45) y en una composición de la invención puede incluirse cualquiera de estas.

Otros antígenos meningocócicos adicionales

[0047] Una composición puede incluir uno o más antígenos de proteínas meningocócicas adicionales, como HmbR, NspA, NhhA, App, Omp85, TbpA, TbpB y/o Cu,Zn-superoxida dismutasa.

[0048] Una composición puede incluir uno o más antígenos de sacáridos meningocócicos, que normalmente están conjugados con proteínas portadoras. Así, por ejemplo, una composición podría incluir uno o más sacáridos capsulares de los serogrupos A, C, W135 y/o Y. Por ejemplo, la composición podría incluir los conjugados que están presentes en los productos MENVEO, MENACTRA o NIMENRIX (todos ellos incluyen sacáridos capsulares conjugados para cada uno de los serogrupos A, C, W135 e Y).

Antígenos no meningocócicos

[0049] Una composición puede incluir uno o más antígenos no meningocócicos. Por ejemplo, puede incluir uno o más de los siguientes: (a) un antígeno de Streptococcus pneumoniae, como un sacárido (normalmente, conjugado), como en el caso de los productos PREVNAR y SYNFLORIX; (b) un antígeno del virus de la hepatitis B, como el antígeno de superficie HBsAg; (c) un antígeno de Bordetella pertussis, como holotoxina pertussis (o PT, por sus siglas en inglés) y hemaglutinina filamentosa (FHA) de B.pertussis, opcionalmente en combinación con pertactina y/o los aglutinógenos 2 y 3; (d) un antígeno de difteria, como un toxoide de difteria; (e) un antígeno del tétanos, como un toxoide del tétanos; (f) un antígeno sacárido de Haemophilus influenzae B (Hib), normalmente conjugado; y/o (g) antígenos de poliovirus inactivos.

Componentes no antigénicos

[0050] Además de sus antígenos, normalmente una composición inmunogénica de la invención incluye un vehículo o portador farmacéuticamente aceptable (la referencia 46 incluye un extenso análisis de este tipo de portadores).

[0051] Normalmente, el pH de una composición es de entre 6 y 8 y, más preferiblemente, de entre 6.5 y 7.5 (por ejemplo, alrededor de 7). El pH puede mantenerse estable usando un 'buffer' o tampón, por ejemplo un tampón Tris, un tampón de citrato, un tampón de fosfato o un tampón de histidina. Por lo tanto, generalmente la composición incluirá un tampón.

[0052] Una composición puede estar esterilizada y/o carecer de pirógenos. Las composiciones pueden ser isotónicas en relación con los humanos.

[0053] Una composición comprende una cantidad inmunológicamente eficaz de su(s) antígeno(s). Una 'cantidad inmunológicamente eficaz' es una cantidad que, cuando se administra a un sujeto, resulta eficaz para desencadenar una respuesta de anticuerpos frente al antígeno. Esta cantidad puede variar dependiendo de la salud y de la condición física del individuo que se va a tratar, de su edad, de la capacidad del sistema inmunitario del individuo para sintetizar anticuerpos, del grado de protección deseado, de la formulación o preparación de la vacuna, de la evaluación que realice el médico tratante sobre la situación médica, y de otros factores relevantes. Se espera que la cantidad abarque un rango o intervalo relativamente amplio que pueda determinarse mediante ensayos rutinarios. Generalmente, el contenido antigénico de las composiciones de la invención se expresa haciendo referencia a la masa de proteína por cada dosis. Puede resultar conveniente una dosis de 10-500 gg (por ejemplo, 50 gg) por antígeno.

[0054] Las composiciones inmunogénicas pueden incluir un adyuvante inmunológico. Así, por ejemplo, pueden incluir un adyuvante de sal de aluminio o una emulsión de aceite en agua (por ejemplo, una emulsión de escualeno en agua). Las sales de aluminio adecuadas incluyen hidróxidos (por ejemplo, oxihidróxidos), fosfatos (por ejemplo, hidroxifosfatos, ortofosfatos; ver, por ejemplo, los capítulos 8 y 9 de la referencia 47) o mezclas de estos. Las sales pueden tener cualquier forma adecuada (por ejemplo, de gel, cristalina, amorfa, etc.), de manera que se prefiere la adsorción del antígeno a la sal. Preferiblemente, la concentración de Al+++ en una composición que se va a administrar a un paciente es de menos de 5 mg/ml; por ejemplo, <4 mg/ml, <3 mg/ml, <2 mg/ml, <1 mg/ml, etc. El intervalo preferido es de entre 0,3 y 1 mg/ml. Se prefiere un máximo de 0,85 mg/dosis. Los adyuvantes de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio son particularmente adecuados para usarse con la invención.

[0055] Las composiciones pueden incluir un agente antimicrobiano, especialmente cuando se envasan en un formato de múltiples dosis. Algunos agentes antimicrobianos como tiomersal y 2-fenoxietanol se incluyen habitualmente en las vacunas, pero es preferible usar un conservante sin mercurio o no usar ningún conservante.

[0056] Las composiciones pueden comprender un detergente, por ejemplo un Tween (polisorbato), como Tween 80. Generalmente, los detergentes están presentes en niveles bajos, por ejemplo <0,01%. Las composiciones pueden incluir detergentes residuales (por ejemplo, desoxicolato) de la preparación de OMVs. Preferiblemente, la cantidad de detergente residual es de menos de 0,4 gg (y, más preferiblemente, de menos de 0,2 gg) por cada gg de proteína meningocócica.

[0057] Si la vacuna incluye LOS, preferiblemente la cantidad de LOS es de menos de 0,12 gg (y, más preferiblemente, de menos de 0,05 gg) por cada gg de proteína.

[0058] Las composiciones pueden incluir sales de sodio (por ejemplo, cloruro sódico) para aportar tonicidad. Es habitual una concentración de 10±2 mg/ml de NaCl; por ejemplo, alrededor de 9 mg/ml.

Administración de la composición

[0059] Generalmente, las composiciones de la presente invención se administran directamente al paciente. La administración directa puede realizarse mediante inyección parenteral (por ejemplo, de manera subcutánea, intraperitoneal, intravenosa, intramuscular, o en el espacio intersticial de un tejido), o mediante cualquier otra vía o ruta adecuada. Se prefiere la administración intramuscular, por ejemplo en el muslo o en la parte superior del brazo. La inyección puede realizarse usando una aguja (por ejemplo, una aguja hipodérmica), pero, de manera alternativa, puede realizarse una inyección sin agujas. El volumen de una dosis intramuscular típica es de 0,5 ml.

[0060] La administración puede incluir un plan monodosis o de una sola dosis, pero normalmente incluye un plan de múltiples dosis. Los intervalos adecuados entre la preparación de las dosis pueden determinarse de manera rutinaria, por ejemplo entre 4 y 16 semanas, o por ejemplo uno o dos meses. BEXSERO® puede administrarse a los 2, 4 y 6 meses, o a los 2, 3 y 4 meses, con una cuarta dosis opcional a los 12 meses.

[0061] El sujeto que se inmuniza es un ser humano, que puede tener cualquier edad; por ejemplo, 0-12 meses, 1 -5 años, 5-18 años, 18-55 años o más de 55 años.

Resumen general

[0062] A menos que se indique lo contrario, para la práctica de la presente invención se usarán métodos convencionales en el campo de la química, la bioquímica, la biología molecular, la inmunología y la farmacología, y que estén dentro de los conocimientos y habilidades habituales en este campo. Estas técnicas se explican y describen ampliamente en la literatura. Ver, por ejemplo, las referencias 48-54, etc.

[0063] El término '(que) comprende(n)' abarca los términos '(que) incluye(n)' y '(que) se compone(n) de'; por ejemplo, una composición 'que comprende' X puede componerse exclusivamente de X o puede incluir algo adicional, por ejemplo X Y.

[0064] Los términos 'alrededor de' o 'aproximadamente', en relación con un valor numérico x, son opcionales y significan, por ejemplo, x+10%.

[0065] Cuando la invención comporta un 'epítopo', este epítopo puede ser un epítopo de células B y/o un epítopo de células T, pero normalmente será un epítopo de células B. Estos epítopos pueden identificarse empíricamente (por ejemplo, usando PEPSCAN [55,56] o métodos similares), o bien pueden predecirse (por ejemplo, usando el índice antigénico de Jameson-Wolf [57], los enfoques basados en matrices [58], Ma PITOPE [59], Te PITOPE [60,61], redes neurales [62], OptiMer & EpiMer [63, 64], ADEPT [65], Tsites [66], la hidrofilicidad [67], el índice antigénico [68] o los métodos que se desvelan en las referencias 69-73, etc.). Los epítopos son las partes de un antígeno que son reconocidas por y se unen a los sitios de unión antigénicos de los anticuerpos o los receptores de células T y también pueden denominarse 'determinantes antigénicos'.

[0066] Las referencias a un porcentaje de identidad de secuencia entre dos secuencias de aminoácidos significan que, cuando se alinean, dichos porcentajes de aminoácidos son iguales al comparar ambas secuencias. Esta alineación -o alineamiento- y el porcentaje (%) de homología o la identidad de secuencia pueden determinarse usando programas de 'software' que son muy conocidos en este campo, por ejemplo los que se describen en la sección 7.7.18 de la referencia 74. Un alineamiento preferido se determina mediante el algoritmo de búsqueda de homología de Smith-Waterman usando una búsqueda de huecos o espacios afines con una penalización de abertura de espacios ('gap open penalty', en inglés) de 12 y una penalización por extensión de espacios ('gap extension penalty') de 2 (matriz BLOSUM de 62). El algoritmo de búsqueda de homología de Smith-Waterman se desvela en la referencia 75.

[0067] El término 'básicamente' no excluye el término 'completamente'; por ejemplo, una composición 'que carece básicamente de Y' puede carecer completamente de Y. Cuando sea necesario, el término 'básicamente' puede omitirse de la definición de la invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS ILUSTRACIONES

[0068] No se incluyen ilustraciones.

MODOS DE PONER EN PRÁCTICA LA INVENCIÓN

[0069] El producto BEXSERO® se describe en las referencias 1 a 3 e incluye 50 gg de cada uno de los siguientes: NadA (subvariante 3.1), fHbp, subvariante 1.1 (como una proteína de fusión GNA2091-fHbp) y NHBA, subvariante 1.2 (como una proteína de fusión NHBA-GNA1030), adsorbidos en 1,5 mg de hidróxido de aluminio, y con 25 gg de OMVs de la cepa de N.meningitidis NZ98/254.

[0070] Se obtuvieron once cepas MenX, aisladas entre 1995 y 2007 y procedentes de varios países. Su serotipo y serosubtipo [76], MLST [77] y genotipo se muestran a continuación:

[0071] Las primeras 9 cepas, todas no tipificables, en el mismo complejo clonal y con la misma región variable PorA y el marcador FetA y el subtipo de fHbp (variante 1), procedían de países africanos; las otras dos cepas se aislaron en Francia.

[0072] Para el SBA, se obtuvieron sueros de estudios clínicos antes de la vacunación y después de la administración de la vacuna BEXSERO®. En el caso de los niños, las muestras analizadas procedían de 40 niños que habían recibido tres inmunizaciones o bien tres inmunizaciones más una dosis de refuerzo. En el caso del resto de grupos de edad, los sueros agrupados procedían de 12 adolescentes o 23 adultos vacunados con dos dosis. La mayoría de los adultos ya habían recibido la vacuna polisacárida cuadrivalente (ACWY). Como control positivo se usó un suero de conejo policlonal frente al sacárido capsular del serogrupo X.

[0073] Para los ensayos de SBA se usó complemento humano, y como control se usó suero de sujetos vacunados (hSBA) y un suero policlonal. La protección se determinó como un título o valoración de 4 para hSBA [78]. La respuesta a la vacuna se registró como el porcentaje de títulos de hSBA de al menos 8 para las cepas que mostraron una respuesta de <4 antes de la vacunación, o bien como un aumento de cuatro veces (x4) para las cepas que mostraron una respuesta de al menos 4 antes de la vacunación. Los títulos de SBA fueron los siguientes:

[0074] De este modo, todas las variantes tuvieron títulos de SBA de >128 usando el suero anticápsula policlonal. En el caso de los niños, todos los títulos previos a la inmunización fueron inferiores a 8 (el título de hSBA que tenía correlación con la protección). En los adultos y los adolescentes se observaron títulos previos a la inmunización ligeramente más elevados.

[0075] Tras la vacunación, los títulos de hSBA aumentaron en todos los planes y grupos de edad examinados, para todas las variantes de África. En el caso de las variantes con un título de al menos 4 antes de la vacunación, en todos los casos se observó un aumento de cuatro veces en los títulos de hSBA, excepto en el caso de la cepa LNP143 55 (un aumento de tres veces). A diferencia de las cepas africanas, las dos variantes de Francia no murieron a causa de los sueros post-inmunización, si bien los títulos de SBA aumentaron en todos los casos.

[0076] Por consiguiente, las cepas de MenX involucradas en la meningitis meningocócica (al menos en el caso de las cepas africanas aisladas entre 1995 y 2007) pueden cubrirse mediante la vacuna 4CMenB BEXSERO®. La cobertura de estas variantes se predijo adecuadamente basándose en su tipo de variante de fHbp.

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Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición inmunogénica que comprende un antígeno de fHbp meningocócico y un adyuvante de sal de aluminio que se usan para desencadenar una respuesta inmunitaria en un sujeto, la cual proporciona protección frente a las cepas de meningococo del serogrupo X que expresan una variante 1 fHbp; de manera que el antígeno de fHbp meningocócico comprende un polipéptido de fusión NMB2091-fHbp que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 7; y de manera que la composición inmunogénica (a) carece de vesículas de la membrana externa meningocócicas o (b) incluye vesículas de la membrana externa meningocócicas, y el antígeno de fHbp está presente en la composición en una forma soluble.

2. La composición inmunogénica para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, de manera que la composición también comprende uno o ambos de los siguientes: (i) un antígeno de NHBA meningocócico, y/o (ii) un antígeno de NadA meningocócico, de manera que, opcionalmente, si la composición inmunogénica incluye vesículas de la membrana exterior meningocócicas, al menos uno de entre los antígenos de NHBA y/o los antígenos de NadA está presente en la composición en una forma soluble.

3. La composición inmunogénica para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, de manera que la composición incluye un antígeno de NHBA que comprende (a) una secuencia de aminoácidos que tiene un 70% o más de igualdad o identidad con SEQ ID NO: 4; y/o (b) un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 4.

4. La composición inmunogénica para su uso de acuerdo con la reivindicación 2 o la reivindicación 3, de manera que la composición incluye un antígeno de NadA que comprende (a) una secuencia de aminoácidos que tiene un 70% o más de identidad con SEQ ID NO: 5; y/o (b) un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 5.

5. La composición inmunogénica para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, de manera que la composición incluye cada uno de los siguientes: (i) un antígeno que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 8; y (ii) un antígeno que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 10.

6. La composición inmunogénica para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, de manera que la composición incluye cada uno de los siguientes: (i) un polipéptido de fusión NMB2091-fHbp que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 7; (ii) un polipéptido de fusión NHBA-NMB1030 que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 9; y (iii) un antígeno que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 10.

7. La composición inmunogénica para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, de manera que la composición incluye uno o más antígenos no meningocócicos.

8. La composición inmunogénica para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, de manera que la composición se administra al sujeto mediante inyección intramuscular.