ES2738113T3 - Uso de iones de zinc para mejorar un biocida de isotiazolinona - Google Patents
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Abstract
Uso de al menos un compuesto de zinc seleccionado del grupo que consiste en cloruro de zinc, sulfuro de zinc, carbonato de zinc, carbonato básico de zinc, óxidos de zinc, hidróxidos de zinc y combinaciones de los mismos para mejorar la eficacia de una composición antimicrobiana, comprendiendo la composición N-(n-butil)-1,2-benzisotiazolin-3-ona, en donde dicha N-(n-butil)-1,2-benzisotiazolin-3-ona está presente en una cantidad de 5 a 500 ppm, el compuesto de zinc está presente en una cantidad de 5 a 500 ppm, y la razón en peso de N-(n-butil)-1,2-benzisotiazolin-3-ona al compuesto de zinc es de 1:100 a 100:1.
Description
DESCRIPCIÓN
Uso de iones de zinc para mejorar un biocida de isotiazolinona
Antecedentes de la invención
Se sabe que las isotiazolinonas, tales como la 1,2-benzisotiazolin-3-ona (también conocida como "BIT"), son agentes antimicrobianos eficaces. BIT, como se describe, por ejemplo, en formulaciones descritas en la patente europea EP 0 703726, es ampliamente utilizada como agente bactericida en una variedad de aplicaciones. De manera ilustrativa, la publicación de patente británica GB2.230.190A describe una composición conservante que contiene BIT y un aducto de cloruro de zinc ("ZC" por sus siglas en inglés), junto con de 2,2'-ditiopiridina-1, 1 '-dióxido ("DTP"). El ejemplo 3 de la publicación '190A compara composiciones que contienen BIT más ZC más DTP frente a un ejemplo de control que contiene solo BIT más ZC. Los resultados proporcionados en el Ejemplo 3 y la Tabla 3 de la publicación indican que la inclusión de DTP permite un uso reducido de BIT en la composición. No obstante, los autores de la presente invención han descubierto que la cantidad de BIT (2,5 ppm) empleada en el ejemplo de control es insuficiente para la eficacia antimicrobiana en aplicaciones del mundo real. El documento WO 99/65315 descrribe composiciones que comprenden zinc piritiona y N-(n-butil)-1,2-bencisotiazolin-3-ona.
Si bien se ha demostrado que BIT es útil en una amplia gama de aplicaciones, la cantidad útil de BIT que se puede añadir a un producto comercial está limitada por consideraciones económicas y de eficacia y, en menor medida, por cuestiones ambientales y toxicológicas. Por consiguiente, se necesitan composiciones antimicrobianas alternativas para aplicaciones en estado húmedo que sean rentables y minimizan la probabilidad de efectos ambientales y toxicológicos adversos. La presente invención proporciona una de tales alternativas.
Compendio de la invención
En un aspecto, la presente invención se refiere al uso de al menos un compuesto de zinc seleccionado del grupo que consiste en cloruro de zinc, sulfuro de zinc, carbonato de zinc, carbonato básico de zinc, óxidos de zinc e hidróxidos de zinc y combinaciones de los mismos para mejorar la eficacia de una composición antimicrobiana, comprendiendo la composición N-(n-butil)-1,2-benziostiazolin-3-ona, en donde dicha N-(n-butil)-1,2-benziostiazolin-3-ona está presente en una cantidad de 5 a 500 ppm, el compuesto de zinc está presente en una cantidad de 5 a 500 ppm, y la razón en peso de la N-(n-butil)-1,2-benziostiazolin-3-ona al compuesto de zinc es de 1:100 a 100:1. El compuesto de zinc proporciona una fuente de ion metálico.
También se describe un concentrado de composición antimicrobiana que, tras la dilución con agua, proporciona eficacia antimicrobiana en un fluido funcional.
También se describe un fluido funcional que comprende un medio base más la composición antimicrobiana. El medio base para el fluido funcional puede ser, por ejemplo, un polímero útil en emulsiones poliméricas. Los ejemplos de sistemas poliméricos son redes, tales como (met)acrilatos acrílicos y sustituidos, estireno/butadieno, etilen vinil acetato, poli(acetato de vinilo), estireno/butadieno/N-metilol acrilamida, nitrilo y copolímeros de los mencionados anteriormente. Los fluidos funcionales típicos incluyen composiciones de recubrimiento, tales como pinturas, adhesivos, selladores, masillas, lechadas minerales y de pigmentos, tintas de impresión, formulaciones de plaguicidas agrícolas, productos para el hogar, cuidado personal, fluidos para trabajar metales y otros sistemas de base acuosa. Estos y otros aspectos se harán evidentes al leer la siguiente descripción detallada de la invención.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 proporciona una representación gráfica de un isobolograma que muestra la actividad antimicrobiana de mezclas de 1,2-benzisotiazolin-3-ona ("BIT") y cloruro de zinc frente a Ps.aeruginosa basado en valores de Concentración Inhibidora Fraccionada.
La Figura 2 proporciona una representación gráfica de un isobolograma que muestra la actividad antimicrobiana de las mezclas de Kathon® (una mezcla de 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona ("CIMIT") y 2-metil-4-isotiazolin-3-ona ("MIT") y cloruro de zinc frente a Ps. aeruginosa basado en valores de Concentración Inhibidora Fraccionada.
La Figura 3 proporciona una representación gráfica de un isobolograma que muestra la actividad antimicrobiana de mezclas de MIT y cloruro de zinc frente a Ps. aeruginosa basado en valores de Concentración Inhibidora Fraccionada. La Figura 4 proporciona una representación gráfica de un Isobolograma que muestra la actividad antimicrobiana de mezclas de N-(n-butil)-1,2-benzisotiazolin-3-ona ("BBIT") y cloruro de zinc frente a Ps. aeruginosa basado en valores de Concentración Inhibidora Fraccionada.
La Figura 5 proporciona una representación gráfica de un isobolograma que muestra la actividad antimicrobiana de mezclas de BIT y cloruro de sodio frente a Ps. aeruginosa basado en valores de Concentración Inhibidora Fraccionada.
Descripción detallada de la invención
Se ha descubierto ahora sorprendentemente de acuerdo con la presente invención que una composición antimicrobiana que contiene N-(n-butil)-1,2-benziostiazolin-3-ona más un compuesto de zinc una eficacia antimicrobiana mejorada, en comparación con las composiciones que contienen isotiazolina que no contienen el compuesto metálico. La eficacia mejorada se proporciona adecuadamente en composiciones antimicrobianas en un amplio intervalo de pH de 3 a 12.
La composición antimicrobiana se incorpora adecuadamente a un fluido funcional. El fluido funcional comprende adecuadamente un medio de base más la composición antimicrobiana. El carbonato de zinc básico también se conoce como "carbonato de zinc que contiene hidroxi", también conocido como " hidroxicarbonato de zinc", que se identifica adicionalmente por la fórmula empírica Zn5(OH)6(CO3)2.
La isotiazolinona útil en la presente invención es N-(n-butil)-1,2-benziostiazolin-3-ona (“BBIT”).
Las composiciones antimicrobianas se utilizan adecuadamente en fluidos funcionales tales como emulsiones poliméricas, u otras composiciones de recubrimiento, para conferir conservación tanto en estado húmedo como en lámina seca. El medio base puede ser, por ejemplo, un polímero útil en emulsiones poliméricas en donde el polímero se selecciona del grupo que consiste en (met)acrilatos acrílicos y sustituidos, estireno/butadieno, etilenvinilacetato, poli(acetato de vinilo), estireno/butadieno/N-Metilol acrilamida, nitrilo y copolímeros de los mencionados anteriormente. Los fluidos funcionales típicos incluyen composiciones de recubrimiento, tales como pinturas, adhesivos, selladores, masillas, lechadas minerales y de pigmentos, tintas de impresión, formulaciones de plaguicidas agrícolas, productos para el hogar, cuidado personal, fluidos para trabajar metales y otros sistemas de base acuosa.
La invención se describe adicionalmente en los ejemplos que se proporcionan a continuación. Todos los porcentajes proporcionados en la presente memoria son porcentajes en peso basados en el peso total de la composición, a menos que se indique lo contrario.
Ejemplo comparativo 1
En este ejemplo, se sensibilizaron muestras de un látex acrílico con una base acuosa comercial, marca registrada REVACRYl 1A, suministrada por Harlow Chemical Company, pH 8,1, que contenía aditivos antimicrobianos en las cantidades identificadas en la Tabla I a continuación, a una suspensión bacteriana que consistía en Pseudomonas aeruginosa, NCIMB 8295
Providencia rettgeri, NCIMB 10842
Serratia marcescens, NCIMB 9523
Aeromonas hydrophila, NCIMB9233
Alcaligenes spp. (producto aislado de conservación en estado húmedo)
Burkholderia cepacia, ATCC 25416
Pseudomonas putida, NCIMB9494
Todas las especies de prueba se cultivaron en agar nutriente y se incubaron durante 24 horas a 30°C. Después de este período, se prepararon suspensiones individuales de cada organismo de prueba a una concentración de 106 unidades de formación de colonias por ml en solución salina por medio de una cámara de conteo Thoma, lograda mezclando volúmenes iguales de las suspensiones individuales. La concentración de bacterias en cada alícuota después de cada sensibilización fue de 2 x 106 por ml.
Las muestras de pintura que contenían aditivos antimicrobianos se almacenaron a 40°C durante 7 días antes de comenzar la prueba. Las muestras de pintura se sensibilizaron con 1 % v/v de suspensión bacteriana como se describe anteriormente. Todas las muestras de prueba se incubaron a 30°C durante la duración de la prueba y se examinaron para detectar bacterias viables después de 1, 3 y 7 días después de cada sensibilización. Las bacterias viables se detectaron por medio de alícuotas de aislamiento en agar nutriente seguido de incubación a 30°C durante 2 días. La tabla I presenta los resultados obtenidos después de la tercera inoculación los días 1, 3 y 7.
Tabla I
Los resultados demuestran un efecto potenciador de BIT combinado con una sal que contiene zinc cuando se compara con un producto comercial, a saber, PROXEL BD20, un producto de Arch Chemicals, Inc. que contiene solo BIT para la conservación de un látex comercial ya que solamente se requieren 100 ppm de BIT en presencia de una sal que contiene zinc en comparación con 250 ppm de BIT para muestras que contiene solamente BIT.
Ejemplo comparativo 2
Investigación de la potenciación entre 1,2-Benzisotiazolin-3-ona (BIT) y Cloruro de Zinc (ZnCL) frente a Pseudomonas aeruginosa.
Bacteria
Se utilizó Pseudomonas aeruginosa (NCIB 10421) mantenida en agar nutriente, para estudiar la sinergia entre BIT y ZnCl2.
Cálculo de Concentraciones Inhibidoras Mínimas frente a Monocultivos
Las bacterias se cultivaron hasta la fase estacionaria (aproximadamente 24 horas) en caldo nutriente (aproximadamente 109 organismos por ml). Se utilizó un inóculo al 0,1% (v/v) para sembrar medio de nueva aportación y a continuación se añadieron 100 pl del inóculo a cada pocillo de una placa de microtitulación, excepto el primer pocillo que contenía 200 pl.
Utilizando diluciones dobles, la concentración de los compuestos bajo investigación se varió en cada pocillo a lo largo del eje de ordenadas. La presencia o ausencia de crecimiento se registró mediante inspección visual después de 24 horas de incubación a 37°C.
Cálculo de la Actividad Antimicrobiana frente a Monocultivos
Para este ensayo se utilizaron placas de microtitulación. Se construyó una matriz simple con concentraciones variadas de los dos compuestos, desde 2 x CIM (concentración inhibidora mínima) hasta una concentración cero en una matriz de 10 x 10. Como la placa de microtitulación tiene solo 96 pocillos, se omitieron las combinaciones de los dos compuestos que componían las concentraciones extremas (la más alta y la más baja). Las soluciones se prepararon en caldo a dos veces las concentraciones finales después de la disolución previa de los compuestos en agua destilada. La mezcla (100 pl) se añadió a la placa para que el volumen total en cada pocillo fuera de 200 pl. Se utilizó caldo nutriente para Ps.aeruginosa. Las placas se incubaron durante 16-24 horas a 37°C. La presencia o ausencia de crecimiento se determinó mediante inspección visual.
Resultados para el Ejemplo 2
Tabla 2: Actividad Antimicrobiana de Compuestos Bajo Investigación
Tabla 2
Cálculo de Actividad frente a Monocultivos.
La Concentración Inhibidora Mínima (CIM) es la concentración más baja de biocida que mostró inhibición del crecimiento cuando se utilizó solo. Para el propósito de los cálculos de Concentración Inhibidora Fraccionada (CIF), si un solo biocida no controlaba el crecimiento, se tomaba la CIM como la concentración más alta utilizada. Una Concentración Inhibidora Fraccionada es la concentración de biocida que controla el crecimiento en la mezcla dividida por la CIM de ese biocida. Se calcularon los valores de CIF para ambos compuestos en la mezcla y los resultados se muestran en la Tabla 3. La suma de estas dos cifras proporciona una indicación de la acción de los dos biocidas. Un valor menor que uno indica un efecto mejorado, si el total es la unidad o mayor, la acción es aditiva y si el valor es mayor que dos, los biocidas son antagónicos.
Tabla 3: Concentraciones Inhibidoras Fraccionadas para 1,2-Benzisotiazolin-3-ona (BIT) y Cloruro de Zinc (ZnCh) frente a Ps.aeruginosa
Tabla 3
Si se construye una gráfica con los ejes que representan las Concentraciones Inhibidoras Fraccionadas del biocida para los dos biocidas en escalas lineales, cuando la combinación es aditiva, el isobolo (es decir, la línea que une los puntos que representan todas las combinaciones con el mismo efecto, incluidas las concentraciones igualmente eficaces de los biocidas utilizados solos) es recto, las combinaciones mejoradas proporcionan isobolos cóncavos y las combinaciones antagónicas proporcionan isobolos convexos. Como se muestra en la FIG. 1, la combinación de BIT y ZnCl2 tiene un efecto mejorado frente a Ps.aeruginosa según lo confirmado por el isobolo cóncavo en el gráfico de la FIG.1.
Ejemplo Comparativo 3
Investigación de potenciación entre Kathon® (ClMIT/MIT) y Cloruro de Zinc (ZnCb) frente a Pseudomonas aerugiuosa. Bacteria
Se utilizó Pseudomonas aeruginosa (NCIB 10421) mantenida en agar nutriente, para estudiar la sinergia de Kathon® y ZnCl2.
Cálculo de Concentraciones Inhibidoras Mínimas Contra Monocultivos
Las bacterias se cultivaron hasta la fase estacionaria (aproximadamente 24 horas) en caldo nutriente (aproximadamente 109 organismos por ml). Se utilizó un inóculo al 0,1% (v/v) para sembrar medio de nueva aportación y a continuación se añadieron 100 pl del inóculo a cada pocillo de una placa de microtitulación, excepto el primer pocillo que contenía 200 pl.
Utilizando diluciones dobles, la concentración de los compuestos bajo investigación se varió en cada pocillo a lo largo del eje de ordenadas. La presencia o ausencia de crecimiento se registró mediante inspección visual después de 24 horas de incubación a 37°C.
Cálculo de la Actividad Antimicrobiana Contra Monocultivos
Para este ensayo se utilizaron placas de microtitulación. Se construyó una matriz simple con concentraciones variadas de los dos compuestos, desde 2 x CIM (concentración inhibidora mínima) hasta una concentración cero en una matriz de 10 x 10. Como la placa de microtitulación tiene solo 96 pocillos, se omitieron las combinaciones de los dos compuestos que componían las concentraciones extremas (la más alta y la más baja). Las soluciones se prepararon en caldo a dos veces las concentraciones finales después de la disolución previa de los compuestos en agua destilada. La mezcla (100 pl) se añadió a la placa para que el volumen total en cada pocillo fuera de 200 pl. Se utilizó caldo nutriente para Ps.aeruginosa. Las placas se incubaron durante 16-24 horas a 37°C. La presencia o ausencia de crecimiento se determinó mediante inspección visual.
Resultados del Ejemplo 3
Tabla 4: Actividad Antimicrobiana de Compuestos Bajo Investigación
Tabla 4
La mezcla de CIMIT y MIT está disponible en Rohm and Haas Company, Filadelfia, PA marca registrada Kathon®. Cálculo de Sinergia Contra Monocultivos.
La Concentración Inhibidora Mínima (CIM) es la concentración más baja de biocida que mostró inhibición del crecimiento cuando se utilizó solo. Para el propósito de los cálculos de Concentración Inhibidora Fraccionada (CIF), si un solo biocida no controlaba el crecimiento, se tomaba la CIM como la concentración más alta utilizada. Una concentración inhibidora fraccionada es la concentración de biocida que controla el crecimiento en la mezcla dividida por la CIM de ese biocida. Se calcularon los valores de CIF para ambos compuestos en la mezcla y los resultados se muestran en la Tabla 5. La suma de estas dos cifras proporciona una indicación de la acción de los dos biocidas. Un valor menor que uno indica un efecto mejorado, si el total es la unidad o mayor, la acción es aditiva y si el valor es mayor que dos, los biocidas son antagónicos.
Tabla 5: Concentraciones Inhibidoras Fraccionadas para Kathon (ClMIT/MIT) y Cloruro de Zinc (ZnCL) frente a Ps.aeruginosa
Tabla 5
Si se construye una gráfica con los ejes que representan las Concentraciones Inhibidoras Fraccionadas del biocida para los dos biocidas en escalas lineales, cuando la combinación es aditiva, el isobolo (es decir, la línea que une los puntos que representan todas las combinaciones con el mismo efecto, incluidas las concentraciones igualmente eficaces de los biocidas utilizados solos) es recto, las combinaciones mejoradas proporcionan isobolos cóncavos y las combinaciones antagónicas proporcionan isobolos convexos. Como se muestra en la FIG. 2, la combinación de Kathon® y ZnCl2 tiene un efecto mejorado frente a Ps. aeruginosa según lo confirmado por el isobolo cóncavo en la FIG. 2.
Ejemplo Comparativo 4
Investigación de la potenciación entre MIT y Cloruro de Zinc (ZnCL) frente a Pseudomonas aeruginosa Bacteria
Se utilizó Pseudomonas aeruginosa (NCIB 10421) mantenida en agar nutriente, para estudiar la sinergia entre MIT y ZnCl2.
Cálculo de Concentraciones Inhibidoras Mínimas Contra Monocultivos
Las bacterias se cultivaron hasta la fase estacionaria (aproximadamente 24 horas) en caldo nutriente (aproximadamente 109 organismos por ml). Se utilizó un inóculo al 0,1% (v/v) para sembrar medio de nueva aportación y a continuación se añadieron 100 pl del inóculo a cada pocillo de una placa de microtitulación, excepto el primer pocillo que contenía 200 pl.
Utilizando diluciones dobles, la concentración de los compuestos bajo investigación se varió en cada pocillo a lo largo del eje de ordenadas. La presencia o ausencia de crecimiento se registró mediante inspección visual después de 24 horas de incubación a 37 °C.
Cálculo de la Actividad Antimicrobiana Contra Monocultivos
Para este ensayo se utilizaron placas de microtitulación. Se construyó una matriz simple con concentraciones variadas de los dos compuestos, desde 2 x CIM (concentración inhibidora mínima) hasta una concentración cero en una matriz de 10 x 10. Como la placa de microtitulación tiene solo 96 pocillos, se omitieron las combinaciones de los dos compuestos que componían las concentraciones extremas (la más alta y la más baja). Las soluciones se prepararon en caldo a dos veces las concentraciones finales después de la disolución previa de los compuestos en agua destilada. La mezcla (100 pl) se añadió a la placa para que el volumen total en cada pocillo fuera de 200 pl. Se utilizó caldo nutriente para Ps.aeruginosa. Las placas se incubaron durante 16-24 horas a 37°C. La presencia o ausencia de crecimiento se determinó mediante inspección visual.
Resultados del Ejemplo 4
Tabla 6: Actividad Antimicrobiana de Compuestos Bajo Investigación
Tabla 6
Cálculo de Sinergia Contra Monocultivos.
La Concentración Inhibidora Mínima (CIM) es la concentración más baja de biocida que mostró inhibición del crecimiento cuando se usa solo. Para el propósito de los cálculos de Concentración Inhibidora Fraccionada (CIF), si un solo biocida no controlaba el crecimiento, se tomaba la CIM como la concentración más alta utilizada. Una concentración inhibidora fraccionada es la concentración de biocida que controla el crecimiento en la mezcla dividida por la CIM de ese biocida. Se calcularon los valores de CIF para ambos compuestos en la mezcla y los resultados se muestran en la Tabla 7. La suma de estas dos cifras proporciona una indicación de la acción de los dos biocidas. Un valor menor que uno indica un efecto mejorado, si el total es la unidad o mayor, la acción es aditiva y si el valor es mayor que dos, los biocidas son antagónicos.
Tabla 7: Concentraciones Inhibidoras Fraccionadas para (MIT) y Cloruro de Zinc (ZnCh) frente a Ps.aeruginosa Tabla 7
Si se construye una gráfica con los ejes que representan las Concentraciones Inhibidoras Fraccionadas del biocida para los dos biocidas en escalas lineales, cuando la combinación es aditiva, el isobolo (es decir, la línea que une los puntos que representan todas las combinaciones con el mismo efecto, incluidas las concentraciones igualmente efectivas de los biocidas utilizados solos) es recto, las combinaciones mejoradas proporcionan isobolos cóncavos y las combinaciones antagónicas proporcionan isobolos convexos. Como se muestra en la FIG. 3, la combinación de MIT y ZnCl2 tiene un efecto mejorado frente a Ps.aeruginosa confirmado por el isobolo cóncavo en la FIG. 3.
Ejemplo 5
Investigación de potenciación entre BBIT y Cloruro de Zinc (ZnCh) frente a Pseudomonas aeruginosa.
Bacteria
Se utilizó Pseudomonas aeruginosa (NCIB 10421) mantenida en agar nutriente, para estudiar la sinergia entre BBIT y ZnCl2.
Cálculo de Concentraciones Inhibidoras Mínimas Contra Monocultivos
Las bacterias se cultivaron hasta la fase estacionaria (aproximadamente 24 horas) en caldo nutriente (aproximadamente 109 organismos por ml). Se utilizó un inóculo al 0,1% (v/v) para sembrar medio de nueva aportación y a continuación se añadieron 100 pl del inóculo a cada pocillo de una placa de microtitulación, excepto el primer pocillo que contenía 200 pl.
Utilizando diluciones dobles, la concentración de los compuestos bajo investigación se varió en cada pocillo a lo largo del eje de ordenadas. La presencia o ausencia de crecimiento se registró mediante inspección visual después de 24 horas de incubación a 37°C.
Cálculo de la Actividad Antimicrobiana Contra Monocultivos
Para este ensayo se utilizaron placas de microtitulación. Se construyó una matriz simple con concentraciones variadas de los dos compuestos, desde 2 x CIM (concentración inhibidora mínima) hasta una concentración cero en una matriz de 10 x 10. Como la placa de microtitulación tiene solo 96 pocillos, se omitieron las combinaciones de los dos compuestos que componían las concentraciones extremas (la más alta y la más baja). Las soluciones se prepararon en caldo a dos veces las concentraciones finales después de la disolución previa de los compuestos en agua destilada. La mezcla (100 pl) se añadió a la placa para que el volumen total en cada pocillo fuera de 200 pl. Se utilizó caldo nutriente para Ps.aeruginosa. Las placas se incubaron durante 16-24 horas a 37°C. La presencia o ausencia de crecimiento se determinó mediante inspección visual.
Resultados del Ejemplo 5
Tabla 8: Actividad Antimicrobiana de Compuestos Bajo Investigación
Tabla 8
BBIT es N-(n-butil)-1,2-benzisotiazolin-3-ona.
Cálculo de Sinergia Contra Monocultivos.
La Concentración Inhibidora Mínima (CIM) es la concentración más baja de biocida que mostró inhibición del crecimiento cuando se utiliza solo. Para el propósito de los cálculos de Concentración Inhibidora Fraccionada (CIF), si un solo biocida no controlaba el crecimiento, se tomaba la CIM como la concentración más alta utilizada. Una concentración inhibidora fraccionada es la concentración de biocida que controla el crecimiento en la mezcla dividida por la CIM de ese biocida. Se calcularon los valores de CIF para ambos compuestos en la mezcla y los resultados se muestran en la Tabla 9. La suma de estas dos cifras proporciona una indicación de la acción de los dos biocidas. Un valor menor que uno indica un efecto mejorado, si el total es la unidad o mayor, la acción es aditiva y si el valor es mayor que dos, los biocidas son antagónicos.
Tabla 9: Concentraciones Inhibidoras Fraccionadas para BBIT y Cloruro de Zinc (ZnCb) frente a Ps.aeruginosa Tabla 9
Si se construye una gráfica con los ejes que representan las Concentraciones Inhibidoras Fraccionadas del biocida para los dos biocidas en escalas lineales, cuando la combinación es aditiva, el isobolo (es decir, la línea que une los puntos que representan todas las combinaciones con el mismo efecto, incluidas las concentraciones igualmente efectivas de los biocidas utilizados solos) es recto, las combinaciones mejoradas proporcionan isobolos cóncavos y las combinaciones antagónicas proporcionan isobolos convexos. Como se muestra en la FIG. 4, la combinación de BBIT y ZnCl2 tiene un efecto mejorado frente a Ps.aeruginosa según lo confirmado por el isobolo cóncavo mostrado en la FIG. 4.
Ejemplo comparativo A
Investigación de la potenciación entre 1,2-Benzisotiazolin-3-ona (BIT) y Cloruro de Sodio (NaCb) frente a Pseudomonas aeruginosa en comparación con la sinergia entre 1,2-Benzisotiazolin-3-ona (BIT) y Cloruro de Zinc (ZnCl2) frente a Pseudomonas aeruginosa (Ejemplo 2)
Bacteria
Se utilizó Pseudomonas aeruginosa (NCIB 10421) mantenida en agar nutriente, para estudiar la eficacia de la combinación de BIT con cloruro de sodio.
Cálculo de Concentraciones Inhibidoras Mínimas Contra Monocultivos
Las bacterias se cultivaron hasta la fase estacionaria (aproximadamente 24 horas) en caldo nutriente (aproximadamente 109 organismos por ml). Se utilizó un inóculo al 0,1% (v/v) para sembrar medio de nueva aportación y a continuación se añadieron 100 pl del inóculo a cada pocillo de una placa de microtitulación, excepto el primer pocillo que contenía 200 pl.
Utilizando diluciones dobles, la concentración de los compuestos bajo investigación se varió en cada pocillo a lo largo del eje de ordenadas. La presencia o ausencia de crecimiento se registró mediante inspección visual después de 24 horas de incubación a 37°C.
Cálculo de la Actividad Antimicrobiana Contra Monocultivos
Para este ensayo se utilizaron placas de microtitulación. Se construyó una matriz simple con concentraciones variadas de los dos compuestos, desde 2 x CIM (concentración inhibidora mínima) hasta una concentración cero en una matriz de 10 x 10. Como la placa de microtitulación tiene solo 96 pocillos, se omitieron las combinaciones de los dos compuestos que componían las concentraciones extremas (la más alta y la más baja). Las soluciones se prepararon en caldo a dos veces las concentraciones finales después de la disolución previa de los compuestos en agua destilada. La mezcla (100 pl) se añadió a la placa para que el volumen total en cada pocillo fuera de 200 pl. Se utilizó caldo nutriente para Ps.aeruginosa. Las placas se incubaron durante 16-24 horas a 37°C. La presencia o ausencia de crecimiento se determinó mediante inspección visual.
Resultados del Ejemplo Comparativo A
Tabla 10: Actividad Antimicrobiana de Compuestos Bajo Investigación
Tabla 10
Cálculo de la potenciación frente a Monocultivos.
La Concentración Inhibidora Mínima (CIM) es la concentración más baja de biocida que mostró inhibición del crecimiento cuando se usa solo. Para el propósito de los cálculos de Concentración Inhibidora Fraccionada (CIF), si un solo biocida no controlaba el crecimiento, se tomaba la CIM como la concentración más alta utilizada. Una concentración inhibidora fraccionada es la concentración de biocida que controla el crecimiento en la mezcla dividida por la CIM de ese biocida. Se calcularon los valores de CIF para ambos compuestos en la mezcla y los resultados se muestran en la Tabla 11. La suma de estas dos cifras proporciona una indicación de la acción de los dos biocidas. Un valor menor que uno indica un efecto mejorado, si el total es la unidad o mayor, la acción es aditiva y si el valor es mayor que dos, los biocidas son antagónicos.
Tabla 11: Concentraciones Inhibidoras Fraccionadas para 1,2-Benzisotiazolin-3-ona (BIT) y Cloruro de Sodio (NaCh) frente a Ps.aeruginosa
Tabla 11
Si se construye una gráfica con los ejes que representan las Concentraciones Inhibidoras Fraccionadas del biocida para los dos biocidas en escalas lineales, cuando la combinación es aditiva, el isobolo (es decir, la línea que une los puntos que representan todas las combinaciones con el mismo efecto, incluidas las concentraciones igualmente efectivas de los biocidas utilizados solos) es recto, las combinaciones mejoradas proporcionan isobolos cóncavos y las combinaciones antagónicas proporcionan isobolos convexos. Como se muestra en la FIG. 5, la combinación de BIT y NaCl2 es aditiva frente a Ps.aeruginosa según lo confirmado por el isobolo recto en la FIG. 5. Además, los resultados de este Ejemplo ilustran además que la combinación de una isotiazolin-3-ona tal como BIT y un compuesto de zinc tal como ZnCb, como se muestra en el Ejemplo 2, muestra resultados de potenciación inesperados frente a Ps.aeruginosa.
Claims (2)
1. Uso de al menos un compuesto de zinc seleccionado del grupo que consiste en cloruro de zinc, sulfuro de zinc, carbonato de zinc, carbonato básico de zinc, óxidos de zinc, hidróxidos de zinc y combinaciones de los mismos para mejorar la eficacia de una composición antimicrobiana, comprendiendo la composición N-(n-butil)-1,2-benzisotiazolin-3-ona, en donde dicha N-(n-butil)-1,2-benzisotiazolin-3-ona está presente en una cantidad de 5 a 500 ppm, el compuesto de zinc está presente en una cantidad de 5 a 500 ppm, y la razón en peso de N-(n-butil)-1,2-benzisotiazolin-3-ona al compuesto de zinc es de 1:100 a 100:1.
2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho compuesto de zinc es cloruro de zinc.
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