ES2711358T3 - Marcador de pronóstico para determinar el riesgo de preeclampsia de inicio precoz - Google Patents
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Abstract
Un procedimiento in vitro para identificar, a partir de una muestra de líquido biológico de una hembra embarazada, un síndrome relacionado con el embarazo seleccionado entre el grupo que consiste en la preeclampsia de inicio precoz, la eclampsia y hemólisis, aumento de enzimas hepáticas y trombocitopenia (HELLP), incluyendo el procedimiento (i) medir la cantidad de ESM-1 en la muestra biológica, procediendo la muestra biológica de la hembra embarazada en una cualquiera de las semanas 9-16 de gestación; (ii) comparar dicha cantidad de ESM-1 con un valor de referencia, y (iii) identificar, en función de la comparación de la cantidad de ESM-1 con el valor de referencia, si es probable que la hembra tenga o desarrolle el síndrome relacionado con el embarazo, comprendiendo dicha muestra de líquido biológico una muestra de sangre, una muestra de plasma o una muestra de suero de dicha hembra embarazada.
Description
DESCRIPCION
Marcador de pronostico para determinar el riesgo de preeclampsia de inicio precoz
Campo de la invencion
La invencion versa acerca de la prediccion, especialmente en una etapa temprana de la gestacion, y del diagnostico, en las etapas posteriores de la gestacion, de la preeclampsia.
Antecedentes de la invencion
En la tecnica se conocen procedimientos para diagnosticar la preeclampsia. El documento WO2013071703, por ejemplo, describe un medio para detectar rapidamente adipsina para diagnosticar la preeclampsia que comprende una almohadilla de adsorcion de agua, una membrana de nitrocelulosa, una almohadilla de marcado con oro y una almohadilla de muestreo, estando ambas unidas sucesivamente de arriba abajo y fijadas en la placa base. La almohadilla de muestreo solapa parcialmente a la almohadilla de marcado con oro. Sobre la membrana de nitrocelulosa se proporciona una lmea de deteccion recubierta con anticuerpo policlonal de adipsina antihumana de conejo, o anticuerpo policlonal de adipsina antihumana de cabra, o anticuerpo policlonal de adipsina antihumana de raton y una lmea de control recubierta con anticuerpo policlonal de IgG antirraton de cabra. La lmea de deteccion esta situada aguas abajo y separada de la lmea de control. La almohadilla de marcado con oro esta hecha de un material que adsorbe el agua, y esta recubierta con anticuerpo monoclonal de adipsina antihumana de raton marcado con oro. Un equipo de reactivos de ensayo para detectar rapidamente adipsina para el diagnostico de la preeclampsia comprende un alojamiento externo y dichos medios en el mismo. El procedimiento de preparacion de dichos medios de deteccion comprende: 1) el recubrimiento de la lmea de deteccion y la lmea de control; 2) la preparacion de la almohadilla de marcado con oro; 3) la combinacion.
El documento WO2014001244 describe un procedimiento para diagnosticar si una hembra embarazada no sufre riesgo de preeclampsia en una ventana temporal breve que comprende a) determinar la cantidad de al menos un biomarcador de angiogenesis seleccionado del grupo que consiste en sFlt-1, endoglina y P1GF en una muestra de dicha hembra, y b) comparar la cantidad con una referencia, con lo que se diagnostica que una hembra no sufre riesgo de desarrollar preeclampsia en un periodo de tiempo breve si la cantidad es identica a la referencia, o menor, en los casos de sFlt-1 y endoglina e identica o mayor en el caso de P1GF, permitiendo dicha referencia hacer el diagnostico con un valor predictivo negativo de al menos aproximadamente el 98%. El documento US20050170444 describe procedimientos de diagnostico de la preeclampsia y la eclampsia o una propension a desarrollar preeclampsia o eclampsia detectando los niveles del factor de crecimiento placentario en un sujeto.
Sara Cross et al. describen en “Endocan (ESM-1): a novel soluble endothelial cell injury marker in preeclampsia (PE) and intrauterine growth restriction (IUGR)” (33er encuentro anual / Encuentro sobre embarazo de la Sociedad de Medicina Fetal Maternal (SMFM), San Francisco, California, EE. UU.; vol. 208, 20 de diciembre de 2012, pagina S276) que las mujeres con sPE prematura tienen niveles elevados de ESM-1 en suero, lo que probablemente refleja un grado avanzado de activacion y lesiones endoteliales en una GA anterior. La expresion potenciada en sitios de lesiones placentarias importantes sugiere que la ESM-1 puede desempenar un papel en la fisiopatologfa de la lesion por trofoblastos en la RCIU.
El documento WO2004021978 describe compuestos no codificantes, composiciones y procedimientos para modular la expresion de la molecula endotelial espedfica-1 (ESM-1). Las composiciones comprenden compuestos no codificantes, en particular oligonucleotidos no codificantes, dirigidos a acidos nucleicos que codifican la ESM-1. Se describen procedimientos de uso de estos compuestos para la modulacion de la expresion de la ESM-1 y para el tratamiento de enfermedades asociadas con la expresion de la ESM-1.
El documento WO2004003172 versa sobre un acido nucleico y su polipeptido codificado ESM-1, cuya expresion es modulada en la angiogenesis y la oncogenesis. La aplicacion tambien versa sobre anticuerpos que tienen especificidad hacia dicho polipeptido, moleculas no codificantes, y sobre procedimientos utiles para tratar o modular la angiogenesis en mairnferos necesitados de tal efecto biologico.
Sumario de la invencion
La preeclampsia es un smdrome que se caracteriza por una elevada presion arterial (>140/90) y cantidades significativas de protema en la orina (>300 mg/24 horas de orina) predominantemente durante las ultimas semanas del embarazo. Clmicamente, se reconocen dos formas: la preeclampsia de inicio precoz, que aparece antes de la 34a semana de edad de gestacion (GA), y la preeclampsia de inicio tardm, que aparece despues de la 34a semana de GA. Si no se trata, la afeccion podna dar lugar, para la madre y el nino, a efectos a largo plazo e incluso a una situacion que supone un peligro para la vida. Y aunque algunas mujeres se benefician de una dosis baja de suplementos de aspirina o pueden ser estabilizadas con sulfato magnesico intravenoso, los mejores tratamientos para la eclampsia o la preeclampsia avanzada son el aborto o el parto. Esto hace de la monitorizacion de la preeclampsia de inicio precoz y su tratamiento aun mas importantes, dado que esto aumenta las posibilidades para la madre y el nino, simplemente debido al hecho de que el parto se retrase todo el tiempo posible. Se realiza mucha
investigacion para encontrar el mecanismo que da lugar a este smdrome. En esta investigacion, se han hallado varios factores que podnan desempenar un papel en la etiologfa de la enfermedad. El sistema inmunitario materno y el hecho de si se construye de manera efectiva la tolerancia inmunitaria gestacional parecen desempenar una parte importante. La actual interpretacion del smdrome es que es un proceso en dos etapas. La carencia inicial de tolerancia inmunitaria gestacional de los citotrofoblastos placentarios puede llevar a arterias espirales remodeladas de forma inadecuada y a una implantacion superficial, lo cual, a su vez, lleva posteriormente a la hipoxia. Esta hipoxia de la placenta parece ser un factor importante, dado que es seguida por la liberacion de factores solubles en la circulacion materna. Algunos factores solubles, como la tirosina quinasa-1 de tipo Fms soluble (sFlt-1 o sVEGFR-1) y la endoglina soluble (sEng), han sido descritos como marcadores que son expresados de manera diferente en embarazos preeclampticos despues de la semana 20 de gestacion en comparacion con los embarazos sanos. Estos factores son usados actualmente para la exploracion durante el embarazo y las concentraciones dan indicaciones de la gravedad de la enfermedad.
Una desventaja de las soluciones actuales para detectar la preeclampsia o la eclampsia y otros smdromes relacionados con el embarazo, tales como HELLP (hemolisis, aumento de enzimas hepaticas y trombocitopenia) y la restriccion del crecimiento intrauterino (RCIU) es que esos smdromes son detectables a finales del embarazo. Esto impide tomar medidas de manera precoz durante el embarazo para prevenir la incidencia o reducir la gravedad del smdrome. Saber temprano durante el embarazo que la mujer embarazada desarrollara tal smdrome tambien reducina medidas preventivas innecesarias, tales como, por ejemplo, el uso estandar de aspirina. En la presente memoria, la hembra es especialmente una mujer.
En 1996, Lassalle et al. descubrieron un nuevo marcador para celulas endoteliales (J. Biol. Chem. 1996, 271:20458 20464). Este proteoglicano de 50 kD recibio la denominacion de molecula espedfica a las celulas endoteliales-1 (ESM-1) y tambien recibe el nombre de endocan. La expresion y la secrecion de ESM-1 es regulada al alza por moleculas proinflamatorias, tales como TNF alfa, y en presencia de factores proangiogenicos tales como VEGF. Se ha descrito que la molecula es regulada al alza en afecciones inflamatorias como la sepsis, pero tambien en el cancer.
Segun se ha indicado anteriormente, la ESM-1 desempena un papel en la regulacion de la angiogenesis y es liberada por celulas endoteliales activadas. Se realizo un ensayo para comprobar si la ESM-1 aumenta en la preeclampsia (PE). Se recogieron a intervalos regulares muestras de plasma de embarazos de alto riesgo divididas en 23 embarazos sanos (CON), 11 con PE grave de inicio precoz (SE) y 7 con PE grave de inicio tardm (SL) entre la semana 8 y el parto. La ESM-1 fue medida por ELISA. Entre la semana 24 de GA y el parto, las concentraciones de ESM-1 aumentaron significativamente en la preeclampsia de inicio tanto precoz como tardm con respecto a los controles (Mann Whitney, p<0,05). Sorprendentemente, la concentracion de ESM-1 tambien difirio entre los tres grupos en las semanas 12 y 16. Las concentraciones de ESM-1 en embarazos sanos (media±EEM:1857±861 pg/ml) y en los que desarrollaron Pe grave de inicio tardm (1298±371 pg/ml) son comparables, pero en los embarazos que desarrollan PE grave de inicio precoz, la concentracion (410±355 pg/ml) es significativamente menor que en los embarazos sanos. Por ende, las concentraciones de ESM-1 aumentan durante la preeclampsia grave de inicio precoz y tardm, lo que puede deberse a la activacion de las celulas endoteliales en estas condiciones. Sorprendentemente, dado que la ESM-1 disminuye en las semanas 12-16 en pacientes que posteriormente desarrollan PE grave de inicio precoz, podna ser un marcador de pronostico que puede determinar el riesgo de que las mujeres desarrollen PE grave de inicio precoz ya en las semanas 1-20, tal como en las semanas 8-20, especialmente las semanas 8-16, aun mas especialmente las semanas 12 a 16 de la gestacion.
Por ende, en un primer aspecto, la invencion proporciona un procedimiento para diagnosticar si una hembra embarazada tiene o no preeclampsia, eclampsia, o HELLP, o tiene o no predisposicion a desarrollarlas, comprendiendo dicho procedimiento la determinacion de la cantidad de ESM-1 en una muestra de dicha hembra. Especialmente, la invencion proporciona en un primer aspecto un procedimiento (in vitro) para identificar, a partir de una muestra biologica de una hembra embarazada, un smdrome relacionado con el embarazo seleccionado del grupo que consiste en la preeclampsia, la eclampsia y HELLP (hemolisis, aumento de enzimas hepaticas y trombocitopenia), incluyendo el procedimiento (i) (el uso de un ensayo espedfico a la ESM-1 y) la medicion de la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica, siendo la muestra biologica (especialmente, una muestra de lfquido biologico) de una hembra embarazada que se encuentra en una semana cualquiera de gestacion entre las semanas 9-16, aun mas especialmente entre las semanas 12-16; y (ii) la comparacion de dicha cantidad de ESM-1 con un valor de referencia, segun se define adicionalmente en las reivindicaciones adjuntas. El procedimiento, segun se ha indicado anteriormente, puede comprender especialmente, ademas, (iii) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo en funcion de una comparacion de la cantidad de ESM-1 con el valor de referencia. Con la presente invencion, ya antes de la semana 24, incluso antes de la semana 20, puede detectarse la probabilidad de desarrollar tal smdrome o incluso su presencia. Por ende, en una etapa muy temprana, puede iniciarse un tratamiento o una terapia de prevencion. Por ende, la frase “medicion de la cantidad de ESM-1” tambien se puede referir a la medicion de un equivalente de ESM-1 o la medicion de un metabolito de ESM-1. En una realizacion, dicha ESM-1 es el nivel de ESM-1 libre, ESM-1 enlazada, un metabolito de ESM-1 o ESM-1 total. Especialmente, dicha cantidad de ESM-1 es el nivel de ESM-1 libre en la muestra biologica. El valor de referencia puede ser, especialmente, un valor de referencia medido en una muestra de una mujer que tiene un embarazo sano. Especialmente, un embarazo sano se refiere a un embarazo de la hembra que no tiene ni desarrolla
ninguno de los smdromes relacionados con el embarazo indicados en la presente memoria (durante todo el embarazo). Esto puede indicar especialmente que el valor de referencia sea tal valor de ESM-1 de una muestra de una hembra embarazada que posteriormente parecio no desarrollar ni tener tal smdrome relacionado con el embarazo. Tal valor de referencia puede ser especialmente un valor medio de un grupo de hembras embarazadas cuya totalidad parecio no tener ni desarrollar tal smdrome relacionado con el embarazo. Segun se ha indicado anteriormente (y se indica tambien posteriormente), se realizo la llamativa observacion de que las hembras embarazadas que ya teman el smdrome relacionado con el embarazo o despues parecieron desarrollar tal smdrome teman valores de ESM-1 sustancialmente menores en las muestras biologicas de estas hembras tomadas en la semana 20 (desde el inicio de la gestacion) o con anterioridad. Por ende, en una realizacion espedfica, el procedimiento comprende, ademas, (iii) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo en funcion de una comparacion de la cantidad de ESM-1 con el valor de referencia cuando dicha cantidad de ESM-1 es menor que el valor de referencia de ESM-1. Por ende, especialmente, el valor de referencia es la cantidad de ESM-1 en muestras biologicas de hembras embarazadas que tienen un embarazo sano. Especialmente, los valores de referencia pueden incluir un unico valor de referencia para un periodo espedfico de la gestacion o varios valores de referencia para varios periodos dentro del periodo de gestacion. Especialmente, el valor medido de la ESM-1 se compara con un valor de referencia indicativo para el momento de la gestacion en el que se toma la muestra de lfquido biologico de la hembra embarazada. Por ejemplo, puede haber valores de referencia espedficos para las semanas 8-12 y valores de referencia para las semanas 12-16, etc. Opcionalmente, puede haber diferentes valores de referencia para diferentes tipos de muestras. Como es sabido en la tecnica, el valor de referencia puede ser un numero, pero tambien puede ser un color, una intensidad de color o la falta de la misma, ser una cantidad de radiactividad o una cantidad de luz o la falta de la misma.
Especialmente, la muestra es una muestra de lfquido; es decir, una muestra de lfquido biologico. En una realizacion, dicha muestra es sangre, plasma, suero, orina o saliva de la hembra. Especialmente, dicha muestra biologica comprende una muestra de sangre, una muestra de plasma o una muestra de suero de dicha hembra embarazada. Sin embargo, la muestra tambien puede incluir lfquido cefalorraqrndeo (LCR) u otro lfquido biologico. Opcionalmente, la muestra biologica puede incluir una biopsia de placenta. Aun mas especialmente, dicha muestra biologica es de una hembra embarazada que se encuentra en una semana cualquiera de gestacion entre las semanas 12 a 16 de gestacion. En otra realizacion todavfa mas espedfica, dicha muestra biologica comprende un ejemplo de plasma y se evalua que la hembra embarazada tiene el smdrome relacionado con el embarazo cuando el valor de ESM-1 se encuentra en el intervalo de 410±355 pg/ml.
En una realizacion espedfica, la cantidad de ESM-1 de la muestra biologica de la hembra embarazada es indicativa del smdrome relacionado con el embarazo cuando la cantidad es igual o menor que el 80%, especialmente igual o menor que el 70%, especialmente igual o menor que el 60%, tal como igual o menor que el 50%, como incluso mas especialmente igual o menor que el 40%, de la cantidad de ESM-1 de muestras biologicas de hembras embarazadas que tienen un embarazo sano. Por supuesto, las comparaciones se efectuan entre muestras tomadas en el mismo periodo de embarazo, tal como en el periodo de gestacion de las semanas 1-20, como las semanas 12 16. Por ende, la cantidad de ESM-1 de la muestra biologica de la hembra embarazada puede ser indicativa del smdrome relacionado con el embarazo cuando la cantidad es igual o menor que el 80%, especialmente igual o menor que el 70%, especialmente igual o menor que el 60%, tal como igual o menor que el 50%, como incluso mas especialmente igual o menor que el 40%, de la cantidad de ESM-1 de muestras biologicas de hembras embarazadas que tienen un embarazo sano, refiriendose la muestra biologica de la hembra embarazada y el valor de referencia a muestras en la misma semana de gestacion (especialmente, seleccionadas de las semanas 1-2).
Especialmente, el ensayo es un ensayo a base de anticuerpos; es decir, el ensayo usa un anticuerpo para detectar la protema ESM-1 (o un equivalente o un metabolito). En una realizacion espedfica, el ensayo comprende un ensayo ELISA (ensayo por inmunoabsorcion ligado a enzimas), un ensayo turbidimetrico, un ensayo de radioinmunoabsorcion (RlST), un radioinmunoensayo (RIA), un ensayo de inmunofluorescencia directa o indirecta, un inmunoensayo en gel de partmulas (PaGIA) o un ensayo de flujo lateral. Aun mas especialmente, el ensayo comprende un ensayo ELISA. Alternativamente o ademas, el ensayo comprende un ensayo de flujo lateral. Alternativamente o ademas, el ensayo comprende un ensayo enzimatico, un ensayo colorimetrico o un ensayo luminiscente. Alternativamente o ademas, las mediciones tambien pueden incluir mediciones de espectrometna de masa, especialmente de metabolitos de ESM-1. Por ende, en una realizacion, la medicion de la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica incluye el uso de espectrometna de masa (MS).
En otra realizacion adicional, no se mide directamente la ESM-1, sino que se detecta el ARN que codifica la ESM-1; es decir, se detecta especialmente la cantidad de ARN que codifica la ESM-1. Por ende, en una realizacion espedfica, la medicion de la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica comprende un procedimiento para realizar una cuantificacion del ARN que codifica la ESM-1 en las celulas o del ARN libre de celulas en la muestra biologica, especialmente un fluido (es decir, un lfquido). En otra realizacion adicional, la invencion implica un procedimiento en el que la medicion de la cantidad de eSM-1 en la muestra biologica comprende un procedimiento para cuantificar la cantidad de protema a traves de la cantidad de ARN que codifica la ESM-1. Por ejemplo, en una realizacion, dicha cuantificacion se realiza mediante RT-PCR, PCR, hibridacion u otros medios de determinacion de la cantidad de nucleotidos. Ademas de la ESM-1 marcadora, tambien pueden usarse uno o mas marcadores adicionales. Los valores absolutos de los mismos pueden ser comparados con valores absolutos de referencia. Sin embargo,
alternativamente o ademas, puede usarse una proporcion entre la ESM-1 marcadora y el otro marcador para compararlo con una proporcion de referencia. Por ejemplo, en una realizacion espedfica, el procedimiento puede comprender, ademas, (iv) el uso (la seleccion) de un marcador secundario seleccionado del grupo que consiste en tirosina quinasa-1 de tipo Fms soluble (sFlt1), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento placentario (PlGF), factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), endoglina soluble, protema placentaria 13 (pp-13), protema A de plasma asociada al embarazo (PAPP-A) y factor 15 de diferenciacion de crecimiento (GDF-15), (v) el uso de un ensayo espedfico para el marcador secundario y la medicion de la cantidad del marcador secundario en la muestra biologica y, opcionalmente, la comparacion de dicha cantidad de dicho marcador secundario con un valor de referencia del marcador secundario. Esto puede potenciar adicionalmente la certeza del procedimiento de identificacion. De forma alternativa o adicional al marcador secundario anteriormente indicado, tambien pueden elegirse una o mas de una pikachurina y una hemopexina. La pikachurina, tambien denominada protema de tipo agrina (AGRINL) y protema contenedora de dominios de fibronectina de tipo III semejante a EGF y de laminina de tipo G (EGFLAM), es una protema que en los seres humanos es codificada por el gen EGFLAM. La hemopexina (o HPX), tambien denominada beta-1B-glucoprotema, es una protema que en los seres humanos es codificada por el gen HPX y pertenece a la familia protemica de la hemopexina.
En una realizacion espedfica adicional, el procedimiento puede comprender, ademas, la identificacion de que es probable que la hembra tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo en funcion de una comparacion de la cantidad de ESM-1 con un valor de referencia, y en funcion de una comparacion de la cantidad de dichos uno o mas marcadores secundarios con el correspondiente valor de referencia del marcador secundario. Alternativamente o ademas, en una realizacion espedfica, el procedimiento puede comprender, ademas, la determinacion de una proporcion de la cantidad de ESM-1 con respecto a la cantidad del marcador secundario, la seleccion de un valor de referencia de la proporcion, y la comparacion de la proporcion con el valor de referencia de la proporcion. Por ende, en otra realizacion espedfica adicional, el procedimiento puede comprender, ademas, la identificacion de que es probable que la hembra tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo en funcion de una comparacion de la cantidad de ESM-1 con respecto a un valor de referencia, y en funcion de una comparacion de la proporcion entre la cantidad de ESM-1 y la cantidad del marcador secundario con respecto al valor de referencia de la proporcion.
Alternativamente o ademas, el procedimiento puede incluir un proceso de multiples etapas en el que pueden tomarse muestras en diferentes momentos, como antes de la semana 12 y despues de la semana 16, o antes de la semana 20 y despues de la semana 20, etc., y pueden ser usadas para identificar si es probable o no que la hembra embarazada tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo. Por ende, en una realizacion espedfica, el procedimiento puede comprender (ademas) la provision de una primera muestra biologica de una hembra extrafda en una primera ocasion, y la provision de una segunda muestra biologica de la hembra extrafda en una segunda ocasion, el uso de un ensayo espedfico a la ESM-1, la medicion de la cantidad de ESM-1 en la primera muestra biologica que constituye una primera cantidad, el uso de un ensayo espedfico a la ESM-1, la medicion de la cantidad de ESM-1 en la segunda muestra biologica y que constituye una segunda cantidad. La segunda ocasion es especialmente posterior en el tiempo con respecto a la primera ocasion. Al menos la primera muestra es tomada especialmente en la semana 20 de gestacion o con anterioridad (como 12-16). Ademas, el procedimiento y el uso, asf como la aplicacion del equipo de reactivos puede incluir la extraccion de una muestra biologica, dos muestras biologicas, pero tambien mas de dos muestras biologicas. Especialmente, estas son tomadas en momentos diferentes, tales como con uno o mas dfas entre medias, o una o mas semanas entre medias. Especialmente en una realizacion espedfica, el procedimiento puede comprender, ademas, la identificacion de que es probable que la hembra tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo en funcion de una comparacion de la primera cantidad y la segunda cantidad.
En una realizacion espedfica, el procedimiento puede comprender, ademas, la etapa del estudio Doppler de la arteria uterina. Este estudio puede dar, ventajosamente, informacion adicional sobre la placentacion. Es sabido que la placentacion deficiente es una indicacion del riesgo del desarrollo de problemas relacionados con el embarazo.
En otro aspecto adicional, la invencion tambien proporciona un dispositivo para identificar que es probable que una hembra embarazada que se encuentre en una cualquiera de las semanas 9-16 de gestacion tenga o desarrolle un smdrome relacionado con el embarazo seleccionado del grupo que consiste en preeclampsia, eclampsia y HELLP, comprendiendo dicho dispositivo: (a) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la ESM-1 — que sea, por ejemplo, un anticuerpo, un receptor (recombinante) de la ESM-1 o un aptamero— que permita la determinacion de la cantidad de ESM-1; (b) una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos que tiene implementados los algoritmos necesarios para comparar la cantidad de ESM-1 determinada con un valor de referencia almacenado en una base de datos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP. Especialmente, en una realizacion el dispositivo puede comprender, ademas, una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15, que permite la determinacion de la cantidad sFlt1, VEGF, P1GF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15, y una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos que tiene implementados los algoritmos necesarios para comparar la cantidad de sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15 determinada con valores de referencia almacenados en una base de datos y calcular la proporcion entre los marcadores medidos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia,
eclampsia y/o HELLP. Como estara claro para una persona experta en la tecnica, las unidades de analisis y las unidades de evaluacion de ESM-1 y uno o mas de los demas marcadores pueden ser opcionalmente una unica unidad de analisis y/o una unica unidad de evaluacion, respectivamente. Especialmente, en otra realizacion adicional la unidad de evaluacion tambien es capaz de dar recomendaciones terapeuticas. De forma alternativa o adicional al marcador secundario anteriormente indicado, tambien pueden elegirse una o mas de una pikachurina y una hemopexina.
En otro aspecto adicional, la invencion tambien proporciona el uso de una evaluacion de la cantidad de ESM-1 en una muestra biologica extrafda de una hembra embarazada que se encuentra en una cualquiera de las semanas 9 16 de gestacion para identificar si es probable que la hembra embarazada tenga o desarrolle un smdrome relacionado con el embarazo seleccionado del grupo que consiste en preeclampsia, eclampsia y HELLP segun se define adicionalmente en las reivindicaciones adjuntas. aun mas especialmente, la invencion proporciona el uso in vitro de una muestra biologica extrafda de una hembra embarazada que se encuentra en una cualquiera de las semanas 9-16 de gestacion para identificar si es probable que la hembra embarazada tenga o desarrolle un smdrome relacionado con el embarazo seleccionado del grupo que consiste en preeclampsia, eclampsia y HELLP, comprendiendo el uso: (a) usando un ensayo espedfico a la ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica; (b) comparar dicha cantidad de eSM-1 con un valor de referencia; y (c) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo definido adicionalmente en las reivindicaciones adjuntas.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un equipo de reactivos para identificar si es probable que una hembra embarazada que se encuentra en una cualquiera de las semanas 9-16 de gestacion tenga o desarrolle un smdrome relacionado con el embarazo seleccionado del grupo que consiste en preeclampsia, eclampsia y HELLP, comprendiendo dicho equipo de reactivos: (a) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la ESM-1; (b) una unidad de evaluacion para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo en funcion del resultado proporcionado por la unidad de analisis, segun se define adicionalmente en las reivindicaciones adjuntas. Especialmente, la invencion proporciona una realizacion del equipo de reactivos que, ademas, comprende un manual o una referencia a un manual, tal como un manual remoto (como una base de datos en un servidor). Aun mas especialmente, la invencion proporciona una realizacion del equipo de reactivos en la que el manual incluye instrucciones de como extraer una muestra biologica de una hembra embarazada y/o de como usar la unidad de analisis y/o de como usar la unidad de evaluacion.
En una realizacion, la unidad de evaluacion comprende un esquema de colores, en el que la unidad de analisis esta configurada para proporcionar una reaccion cromatica, dependiendo el color de la cantidad de ESM-1 en una muestra biologica extrafda de una hembra embarazada. Especialmente, la invencion proporciona una realizacion del equipo de reactivos que comprende: (b) una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP. Especialmente, la invencion proporciona una realizacion del equipo de reactivos que comprende: (b) una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos que tiene implementados algoritmos necesarios para comparar la cantidad de ESM-1 determinada con valores de referencia almacenados en una base de datos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo. En una realizacion espedfica del equipo de reactivos, dicho equipo de reactivos comprende: (a) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la ESM-1 y de uno o mas de sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15. Por ende, la invencion tambien puede proporcionar una realizacion del equipo de reactivos que comprende una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la ESM-1 y un agente de deteccion de uno o mas de sFlt1, VEGF, PlGF, Hg F, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15, que permite la determinacion de la cantidad de ESM-1, y de uno o mas de sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15. Aun mas especialmente, la invencion proporciona una realizacion del equipo de reactivos que comprende una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos que tiene implementados algoritmos necesarios para comparar la cantidad de Es M-1 y de uno o mas de sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAp P-A y g Df-15 determinada con valores de referencia almacenados en una base de datos y calcular la proporcion entre los marcadores medidos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo. De forma alternativa o adicional al marcador secundario anteriormente indicado, tambien pueden elegirse una o mas de una pikachurina y una hemopexina. Segun se ha indicado anteriormente, en una realizacion, la unidad de analisis puede comprender un ensayo. Aun mas especialmente, en una realizacion la unidad de analisis comprende un ensayo ELISA (ensayo por inmunoabsorcion ligado a enzimas), un ensayo turbidimetrico, un ensayo de radioinmunoabsorcion (RlST), un radioinmunoensayo (RIA), immunofluorescencia directa o indirecta, un inmunoensayo en gel de partmulas (PaGIA) o un ensayo de flujo lateral.
En una realizacion (del equipo de reactivos), el manual incluye informacion para extraer una muestra biologica de una hembra embarazada en una semana cualquiera de la gestacion, especialmente entre las semanas 1 a 20 de gestacion, aun mas especialmente entre las semanas 12 a 16.
Alternativamente o ademas, la invencion proporciona una realizacion del equipo de reactivos en la que la unidad de analisis comprende un procedimiento para realizar una cuantificacion del a Rn que codifica la ESM-1 en las celulas o del ARN libre de celulas en la muestra biologica, especialmente un fluido biologico, tal como un lfquido corporal.
Por ende, el procedimiento, el equipo de reactivos o el dispositivo de la invencion puede ser usado para predecir que es probable que una hembra embarazada en una cualquiera de las semanas 1 a 20 de gestacion desarrolle despues de la semana 20 preeclampsia grave de inicio precoz, en funcion de una medicion de la cantidad de ESM-1 en una muestra de ffquido biologico de la hembra embarazada, comprendiendo especialmente la muestra de ffquido biologico especialmente una muestra de sangre, una muestra de plasma o una muestra de suero de dicha hembra embarazada. Esto ocurrira especialmente cuando la cantidad de ESM-1 sea sustancialmente menor que la cantidad de ESM-1 en una muestra (de una hembra embarazada al mismo tiempo, especialmente en aproximadamente la misma semana de gestacion) de una hembra embarazada sana.
Segun se lo usa en la presente memoria, el termino “ESM-1” o “endocan” tiene su significado general en la tecnica, y se refiere a la molecula espedfica a las celulas endoteliales-1, que es un proteoglicano de sulfato de dermatan de 50 kDa expresado por las celulas endoteliales del pulmon y el rinon, entre otros tipos de celulas y puede ser detectado en la sangre humana. Segun se la usa en la presente memoria, la expresion “muestra de sangre” se refiere a sangre entera, suero o a una muestra de plasma. Normalmente, la muestra de sangre es extrafda/recogida de un paciente por un medico o una enfermera y procesada en el laboratorio del hospital. Los ensayos indicados anteriormente tambien pueden ser usados en hospitales o cffnicas secundarios y podnan incluso ser usados en general por comadronas. Una vez que se prepara la muestra de sangre de la paciente, la concentracion de ESM-1 puede ser medida mediante cualquier procedimiento conocido en la tecnica. Remitirse, por ejemplo, al documento WO2012098219. Por ejemplo, la concentracion de ESM-1 puede ser medida usando tecnicas estandar electroforeticas e inmunodiagnosticas, incluyendo inmunoensayos tales como ensayos de competencia, de reaccion directa o de fase doble. Tales ensayos incluyen, sin limitacion, electroinmunotransferencias; ensayos de aglutinacion; inmunoensayos marcados y arbitrados por enzimas, tales como los ELISA; ensayos de tipo biotina/avidina; radioinmunoensayos; Inmunoelectroforesis; inmunoprecipitacion, cromatograffa ffquida de alto rendimiento (HPLC), cromatograffa por exclusion de tamanos, afinidad en fase solida, etc. Segun tambien se describe en el documento WO2012098219, tales procedimientos pueden comprender la puesta de la muestra de sangre en contacto con un ligando capaz de interactuar selectivamente con la ESM-1 presente en la muestra de sangre. Generalmente, el ligando puede ser un anticuerpo que puede ser policlonal o monoclonal, preferentemente monoclonal. Los anticuerpos policlonales dirigidos contra la eSM-1 pueden ser suscitados segun procedimientos conocidos administrando el anffgeno o epftopo apropiado a un anfitrion animal seleccionado, por ejemplo, entre cerdos, vacas, caballos, conejos, cabras, ovejas y ratones, entre otros. Para potenciar la produccion de anticuerpos pueden usarse diversos adyuvantes conocidos en la tecnica. Aunque los anticuerpos utiles en la puesta en practica de la invencion pueden ser policlonales, se prefieren los anticuerpos monoclonales. Los anticuerpos monoclonales contra la ESM-1 pueden ser preparados y aislados usando cualquier tecnica que permita la produccion de moleculas de anticuerpo mediante ffneas celulares continuas en cultivo. Las tecnicas para la produccion y el aislamiento incluyen, sin limitacion, la tecnica del hibridoma, descrita originalmente en el documento WO2012098219 y en las referencias citadas en el mismo. Los anticuerpos utiles en la puesta en practica de la presente invencion tambien incluyen fragmentos anti-ESM-1 que incluyen, sin limitacion, fragmentos F(ab')2, que pueden ser generados por digestion con pepsina de una molecula intacta de anticuerpo, y fragmentos Fab, que pueden ser generados reduciendo los puentes disulfuro de los fragmentos F(ab')2. Alternativamente, pueden construirse bibliotecas de expresion de Fab y/o scFv (Fv monocatenario) para permitir la identificacion rapida de fragmentos que tienen la especificidad deseada hacia la ESM-1. Puede usarse, por ejemplo, la visualizacion de anticuerpos en fagos. En tal procedimiento, los fragmentos Fv monocatenarios (scFv) o Fab son expresados en la superficie de un bacteriofago adecuado; por ejemplo, M13. Sucintamente, se retiran los esplenocitos de un anfitrion adecuado —por ejemplo, un raton— que ha sido inmunizado con una protema. Se obtienen las regiones codificantes de las cadenas VL y VH de las celulas que producen el anticuerpo deseado contra la protema. Estas regiones codificantes son fusionadas entonces con un terminal de una secuencia de fagos. Una vez que el fato es insertado en un portador adecuado — por ejemplo, bacterias—, el fago muestra el fragmento de anticuerpo. La visualizacion de anticuerpos en fagos tambien puede ser proporcionada mediante procedimientos combinatorios conocidos por los expertos en la tecnica. Los fragmentos de anticuerpos presentados por un fago pueden ser usados entonces como parte de un inmunoensayo. Hay anticuerpos monoclonales anti-ESM-1 disponibles comercialmente, por ejemplo, en Lunginnov (Lille, Francia); vease tambien el documento WO2012098219.
En otra realizacion, el ligando puede ser un aptamero. Los aptameros son una clase de moleculas que representa una alternativa a los anticuerpos en terminos de reconocimiento molecular. Los aptameros son secuencias de oligonucleotidos u oligopeptidos con capacidad de reconocer casi cualquier clase de moleculas diana con gran afinidad y especificidad. Tales ligandos pueden ser aislados mediante una evolucion sistematica de ligandos por enriquecimiento exponencial (SELEX) de una biblioteca de secuencias aleatorias, segun se describe en el documento WO2012098219 y en las referencias citadas en el mismo. La biblioteca de secuencias aleatorias es obtenible por smtesis qmmica combinatoria de ADN. En esta biblioteca, cada miembro es un oligomero lineal, modificado qmmicamente en ultimo termino, de una secuencia unica. En el documento WO2012098219 y en las referencias citadas en el mismo se han indicado y descrito modificaciones posibles, usos y ventajas de esta clase de moleculas. Los ligandos de la invencion, tales como anticuerpos o aptameros, pueden ser marcados con una molecula o sustancia detectable, tal como una molecula fluorescente, una molecula radiactiva o cualquier otra marca conocida en la tecnica. En la tecnica se conocen marcas que generalmente proporcionan (ya sea directa o indirectamente) una senal.
La PE grave de inicio precoz, especialmente, pertenece a los smdromes relacionados con el embarazo (tales como la preeclampsia) descritos en la presente memoria. Segun es usado en la presente memoria, se preve que el termino “marcado”, con respecto al anticuerpo, abarque el marcado directo del anticuerpo o el aptamero acoplando (es decir, enlazando ffsicamente) al anticuerpo o al aptamero una sustancia detectable, tal como un agente radiactivo o un fluoroforo (por ejemplo isotiocianato de fluorescema (FITC) o ficoeritrina (PE) o indocianina (Cy5)), asf como el marcado indirecto de la sonda o el anticuerpo mediante reactividad con una sustancia detectable. Un anticuerpo o un aptamero de la invencion puede ser marcado con una molecula radiactiva mediante cualquier procedimiento conocido en la tecnica. Las moleculas radiactivas incluyen, por ejemplo, sin limitacion, 1123, 1124, In111, Re86, Re188. Segun se indica tambien el documento WO2012098219, los ensayos anteriormente mencionados generalmente implican la union del ligando (es decir, el anticuerpo o el aptamero) en un soporte solido. Los soportes solidos que se pueden usar en la puesta en practica de la invencion incluyen sustratos tales como nitrocelulosa (por ejemplo, en forma de membrana o pocillo de microtitulacion); cloruro de polivinilo (por ejemplo, laminas o pocillos de microtitulacion); latex de poliestireno (por ejemplo, perlas o placas de microtitulacion); fluoruro de polivinilideno; papel diazotizado; membranas de nailon; perlas activadas, perlas sensibles al magnetismo y similares.
Mas en particular, puede usarse un procedimiento ELISA en el que se recubran los pocillos de una placa de microtitulacion con un conjunto de anticuerpos contra la ESM-1. A continuacion, se anade una muestra de sangre que contiene o se sospecha que contiene ESM-1 a los pocillos recubiertos. Despues de un periodo de incubacion suficiente para permitir la formacion de complejos anticuerpo-antigeno, la o las placas pueden ser lavadas para eliminar restos no unidos y anadirse una molecula secundaria de union marcada de manera detectable. Se deja que la molecula secundaria de union reaccione con cualquier protema marcadora de la muestra capturada, se lava la placa y se detecta la presencia de la molecula secundaria de union usando procedimientos muy conocidos en la tecnica. Normalmente, hay disponible comercialmente un equipo de reactivos ELISA en Lunginnov (Lille, Francia) o en otras fuentes, tales como las descritas en el documento WO2012098219 y en las referencias citadas en el mismo. La medicion de la concentracion de ESM-1 (con o sin procedimientos basados en inmunoensayos) tambien puede incluir la separacion de las protemas: centrifugacion, basada en el peso molecular de la protema; electroforesis, basada en la masa y la carga; HPLC, basada en la hidrofobicidad; cromatograffa por exclusion de tamanos, basada en el tamano; y la afinidad en fase solida, basada en la afinidad de la protema hacia la fase solida particular que se use. Una vez separada, la ESM-1 puede ser identificada en funcion del “perfil de separacion” conocido —por ejemplo, el tiempo de retencion— para esa protema y ser medida usando tecnicas estandar. Alternativamente, las protemas separadas pueden ser detectadas y medidas, por ejemplo, por un espectrometro de masas. Por ende, la presencia y la cuantificacion del analito puede ser mostrada y realizada usando tecnicas generalmente aceptadas como, por ejemplo, el ensayo por inmunoabsorcion ligado a enzimas (ELISA), ya sea en una configuracion de fase doble o competitiva, un procedimiento de flujo lateral, un ensayo a base de partmulas (perlas) magneticas o fluorescentes e inmunoelectrotransferencia, etc.
En una realizacion, se determina en una muestra la cantidad de sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15, o una combinacion de estos marcadores, ademas de la cantidad de ESM-1 y se comparan sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15, o una combinacion de estos marcadores, con una cantidad de referencia de ESM-1, sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15 para diagnosticar el riesgo de experimentar preeclampsia, eclampsia o HELLP. En una realizacion, la proporcion entre ESM-1 y cualquiera de dichos marcadores o de una combinacion de dichos marcadores en una muestra es usada para determinar la predisposicion o no de una hembra embarazada a desarrollar preeclampsia, eclampsia o HELLP. En una realizacion, dicha muestra es sangre, plasma, suero, orina o saliva de la hembra. En un ejemplo, dicha muestra se deriva de una hembra que se encuentra en una semana cualquiera de gestacion entre las semanas 1 a 20 de gestacion. En un ejemplo, dicha muestra se deriva de una hembra que se encuentra en una semana cualquiera de gestacion entre las semanas 20 a 36 de gestacion. En una realizacion, dichos niveles de medicion se realizan en una o mas ocasiones, y un cambio en dichos niveles es un valor diagnostico para el desarrollo o no de preeclampsia, eclampsia o HELLP. En una realizacion, dicha medicion se efectua usando un ensayo inmunologico. En un aspecto adicional, la invencion proporciona un dispositivo para determinar la predisposicion o no de una hembra embarazada a desarrollar preeclampsia, eclampsia o HELLP, comprendiendo dicho dispositivo: (a) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la ESM-1 que permite la determinacion de la cantidad de ESM-1; (b) una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos que tiene implementados algoritmos necesarios para comparar la cantidad de ESM-1 determinada con valores de referencia almacenados en una base de datos para determinar la predisposicion o no de una mujer embarazada a desarrollar preeclampsia, eclampsia o HELLP.
En una realizacion, la invencion proporciona, ademas, un dispositivo para determinar la predisposicion o no de una hembra embarazada a desarrollar preeclampsia, eclampsia o HELLp , comprendiendo dicho dispositivo: (a) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de ESM-1, sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15, que permite la determinacion de la cantidad de ESM-1, sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15; (y/o) (b) una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos que tiene implementados algoritmos necesarios para comparar la cantidad de ESM-1, sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15 determinada con valores de referencia almacenados en una base de datos y calcular la proporcion entre los marcadores medidos para determinar la predisposicion o no de una mujer embarazada a
desarrollar preeclampsia, eclampsia o HELLP. En una realizacion, la invencion proporciona, ademas, un dispositivo en el que dicha unidad de evaluacion es tambien capaz de dar recomendaciones terapeuticas. En otro aspecto adicional, la invencion tambien proporciona un equipo de reactivos para determinar la predisposicion o no de una hembra embarazada a desarrollar preeclampsia, eclampsia o HELLP, comprendiendo dicho equipo de reactivos al menos el agente de deteccion de la ESM-1 y, preferentemente, estandares que reflejen las cantidades de referencia derivados de una hembra embarazada o de un grupo de las mismas que se sabe que no padecen preeclampsia, eclampsia o HELLP ni tienen predisposicion a desarrollarlas.
La cantidad de ESM-1 en la muestra biologica o lfquido biologico de la hembra embarazada es comparada especialmente con un valor de referencia derivado de una muestra biologica o lfquido biologico de hembras embarazadas que tienen un embarazo sano, habiendose producido las muestras biologicas (es decir, las muestras de referencia y la muestra biologica de la hembra embarazada) de la misma manera (mismo tipo de muestra) y en la misma semana.
En la presente memoria, el termino “sustancialmente”, tal como en “consiste sustancialmente”, sera entendido por la persona experta en la tecnica. El termino “sustancialmente” tambien puede incluir realizaciones con “totalmente”, “completamente”, “la totalidad”, etc. Por ende, en las realizaciones tambien puede eliminarse el adverbio sustancialmente. Cuando sea aplicable, el termino “sustancialmente” tambien puede referirse al 90% o mas, tal como 95% o mas, especialmente 99% o mas, incluso mas especialmente 99,5% o mas, incluyendo el 100%. El termino “comprender” tambien incluye realizaciones en las que el termino “comprende” significa “consiste en”. El termino “y/o” se refiere especialmente relates a uno o mas de los elementos mencionados antes y despues de “y/o”. Por ejemplo, una frase “elemento 1 y/o elemento 2” y frases similares pueden referirse a uno o mas del elemento 1 y el elemento 2. La expresion “que comprende” puede referirse, en una realizacion, a “que consiste en”, pero en otra realizacion tambien puede referirse a “que contiene al menos las especies definidas y, opcionalmente, una o mas especies adicionales”. Ademas, los terminos primero, segundo, tercero y similares, en la descripcion y en las reivindicaciones, son usados para distinguir entre elementos similares y no necesariamente para describir un orden secuencial o cronologico. Ha de entender que los terminos asf usados son intercambiables en unas circunstancias apropiadas y que otras realizaciones de la invencion descritas en la presente memoria son susceptibles de operacion en otras secuencias distintas de las descritas o ilustradas en la presente memoria. Sin embargo, los terminos primero y segundo, etc., tambien pueden indicar una relacion en tiempo. Por ejemplo, una primera muestra puede ser extrafda en el tiempo anteriormente a una segunda muestra. Esto se aplica especialmente, a las expresiones “primera ocasion” y “segunda ocasion”. En funcion de los valores medidos, puede realizarse un diagnostico.
Los dispositivos de la presente memoria pueden ser descritos, entre otros modos, durante la operacion. Como estara claro para la persona experta en la tecnica, la invencion no esta limitada a procedimientos de operacion o a dispositivos en operacion. Debena hacerse notar que las realizaciones mencionadas anteriormente ilustran la invencion sin limitarla, y que los expertos en la tecnica seran capaces de disenar muchas realizaciones alternativas sin apartarse del alcance de las reivindicaciones adjuntas. En las reivindicaciones, no se interpretara que ningun signo de referencia puesto entre parentesis limite la reivindicacion. El uso del verbo “comprender” y sus conjugaciones no excluye la presencia de elementos o etapas distintos de los enumerados una reivindicacion. El artfculo “un” o “una” delante de un elemento no excluye la presencia de varios elementos de ese tipo. La invencion puede ser implementada por medio de un soporte ffsico que comprende varios elementos diferenciados, y por medio de un ordenador programado de manera adecuada. En la reivindicacion de un dispositivo que enumere varios medios, varios de estos medios pueden ser implementados por un unico elemento de soporte ffsico. El mero hecho de que se enumeren ciertas medidas en reivindicaciones dependientes mutuamente diferentes no indica que no pueda usarse con ventaja una combinacion de estas medidas. La invencion se aplica, ademas, a un dispositivo que comprende uno o mas rasgos caractensticos descritos en la descripcion y/o mostrados en los dibujos adjuntos. La invencion se refiere, ademas, a un procedimiento o proceso que comprende uno o mas rasgos caractensticos descritos en la descripcion y/o mostrados en los dibujos adjuntos.
Los diversos aspectos expuestos en esta patente pueden ser combinados para proporcionar ventajas adicionales. Ademas, algunas de las caractensticas pueden formar la base para una o mas solicitudes divisionarias.
Descripcion de los dibujos
Figura 1: Concentracion de la ESM-1 en plasma durante el ultimo trimestre de embarazo de mujeres embarazadas sanas (P) (n=32), de mujeres con preeclampsia grave de inicio precoz (SE) (n=52), y de mujeres con preeclampsia grave de inicio tardfo (SL) (n=8) y de mujeres no embarazadas (NP) (n=25). Significacion calculada por el ensayo de Mann Whitney: **** = p<0,0001, *** = p<0,001, y NS = no significativo; y Figura 2: Concentraciones de ESM-1 en plasma durante el embarazo (semana 12 hasta el parto) de mujeres embarazadas sanas (CON; n=23), con preeclampsia grave de inicio precoz (SE; n=11) y preeclampsia grave de inicio tardfo (SL; n=7). La significacion entre embarazos sanos y preeclampticos es calculada por el ensayo de Mann Whitney: * = p<0,05. El tiempo de gestacion se indica con “ge” en semanas (w).
Descripcion detallada de las realizaciones
Dado que la ESM-1 desempena un papel en la regulacion de la angiogenesis, los inventores emitieron la hipotesis de que la expresion de la ESM-1 durante el embarazo sena diferente entre los embarazos sanos y las dos formas, de inicio precoz y tardfo, de preeclampsia. Se recogieron a intervalos regulares entre la semana 8 y el parto un total de 290 muestras de plasma en EDTA de 23 embarazos sanos y de control con GA coincidente (CON), 11 de PE grave de inicio precoz (SE) y 7 de PE grave de inicio tardfo (SL). En estas muestras de plasma, la ESM-1 fue medida por ELlSA. Por razones de conveniencia, se determino la media de los valores de periodos de 4 semanas: de la 9 a la 12 se expresa como semana 12, las semanas 13 a 16 se expresan como semana 16, etc. Durante el periodo entre la semana 24 de GA y el parto, las concentraciones de ESM-1 aumentaron significativamente en la preeclampsia de inicio tanto precoz como tardfo en comparacion con los controles durante el mismo periodo. Sorprendentemente, la concentracion de ESM-1 tambien difirio entre los tres grupos en las semanas 12 y 16. Las concentraciones de ESM-1 en embarazos sanos (media de 1857 pg/ml) y en los que desarrollan PE grave de inicio tardfo (media de 1298 pg/ml) son comparables, pero en los embarazos que desarrollan PE grave de inicio precoz, la concentracion (media de 410 pg/ml) es significativamente menor (Figura 1). Estos resultados indican que la ESM-1 es un marcador de pronostico que puede determinar el riesgo de que las mujeres desarrollen PE grave de inicio precoz ya en las semanas 12 a 16 de la gestacion (Figura 2).
Las pacientes con preeclampsia de inicio precoz y las de control con embarazos sanos fueron reclutadas de la sala prenatal y las mujeres no embarazadas fueron reclutadas del personal del hospital y entre estudiantes. Los criterios de exclusion para todos los grupos fueron hipertension, diabetes mellitus, vasculitis, enfermedad renal, enfermedad autoinmunitaria, neoplasias malignas preexistentes o mujeres que hubieran tenido recientemente un traumatismo o cirugfa. La preeclampsia se definio segun los estandares de la Sociedad Internacional para el Estudio de la Hipertension en el Embarazo (ISSHP): presion arterial diastolica de 90 mmHg o mas en dos o mas ocasiones consecutivas separadas mas de 4 horas y proteinuria de mas de 300 mg/24 horas. Se incluyo a mujeres con preeclampsia de inicio precoz, definida como el inicio de la preeclampsia antes de las 34 semanas. Se tomaron muestras de sangre de mujeres no embarazadas y de pacientes con preeclampsia y mujeres embarazadas sanas entre la semana 12 del embarazo y el parto.
Se recogieron muestras de sangre materna de mujeres embarazadas tanto sanas como preeclampticas durante un muestreo rutinario de sangre. Las muestras de sangre fueron extrafdas introduciendolas en tubos de 10 mL que conteman EDTA (Venoject, Terumo Europe NV, Lovaina, Belgica). De estas muestras se recogio el plasma y se lo congelo (-80°C) en partes alfcuotas hasta que los ensayos pudieron llevarse a cabo simultaneamente. Se determinaron los niveles plasmaticos de todos los analitos usando reactivos disponibles comercialmente. Estos reactivos estaban presentes en conjuntos o equipos de reactivos para llevar a cabo ensayos ELISA de fase doble. sFlt, sEng, PlGF y HGF fueron medidos mediante ensayos ELISA Quantikine (R&D Systems Inc., Minneapolis, EE. UU.). La ESM-1 fue medida usando la combinacion de anticuerpos y el estandar de Lunginnov (Lille, Francia).
Sucintamente, se inmovilizo en una microplaca ELISA un primer anticuerpo mono o policlonal espedfico para el analito. Tras su incubacion durante la noche, la placa fue lavada y bloqueada con solucion salina tamponada con fosfato (PBS) que contema un 0,1% de albumina de suero bovino. Tras una incubacion posterior, la placa fue lavada con tampon de lavado que contema un 0,1% de Tween-20. A partir de una solucion madre que contema una concentracion conocida del analito, se preparo una curva estandar mediante una disolucion 1 a 1. Se incubaron partes alfcuotas de 100 pL de la curva estandar de la muestra de plasma en los diferentes pocillos de la placa ELISA. Despues de la incubacion, se volvio a lavar la placa, seguido por la incubacion con un segundo anticuerpo mono o policlonal espedfico para el analito y conjugado con biotina. Antes de incubar el ensayo con estreptavidinapoli-HRPo, la placa fue lavada nuevamente. Despues de la incubacion con estreptavidina-poli-HRPO el ensayo fue incubado con una solucion de sustrato de 3,3',5,5'-tetrametilbencidina (TMB). La enzima HRPO presente en el pocillo hara azul la solucion incolora en proporcion al analito presente. Se detuvo el revelado del color y se midio la intensidad del color. Pueden encontrarse detalles adicionales en los prospectos de los respectivos paquetes. Segun se ha indicado anteriormente, se recogieron a intervalos regulares entre la semana 8 y el parto un total de 290 muestras de plasma en EDTA de 23 embarazos sanos y de control con GA coincidente (CON), 11 de PE grave de inicio precoz (SE) y 7 de PE grave de inicio tardfo (SL). En estas muestras de plasma, la ESM-1 fue medida por ELISA. Durante el periodo entre la semana 24 de GA y el parto, las concentraciones de ESM-1 aumentaron significativamente en la preeclampsia de inicio tanto precoz como tardfo en comparacion con los controles durante el mismo periodo. Sorprendentemente, la concentracion de ESM-1 tambien difirio entre los tres grupos en las semanas 12 y 16. Las concentraciones de ESM-1 en embarazos sanos (media de 1857 pg/ml) y en los que desarrollan PE grave de inicio tardfo (media de 1298 pg/ml) son comparables, pero en los embarazos que desarrollan PE grave de inicio precoz, la concentracion (media de 410 pg/ml) es significativamente menor (Figura 1). Estos resultados indican que la ESM-1 es un marcador de pronostico que puede determinar el riesgo de que las mujeres desarrollen PE grave de inicio precoz ya en las semanas 12 a 16 de la gestacion (Figura 2). En funcion de la medicion de la concentracion de ESM-1 en sangre puede determinarse el riesgo de que una mujer embarazada desarrolle preeclampsia posteriormente en su embarazo. Este riesgo es mas elevado cuando la concentracion de ESM-1 es menor que la de las mujeres que no desarrollaran preeclampsia o preeclampsia de inicio tardfo.
En un aspecto, la invencion proporciona un procedimiento para identificar que es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP (hemolisis, aumento de enzimas hepaticas y trombocitopenia) que comprende las etapas de: (a) extraer una muestra biologica de una hembra; (b) usando un ensayo espedfico a la ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica; y (c) comparar dicha cantidad de ESM-1 con un valor de referencia; y (d) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP en funcion de una comparacion de la cantidad de ESM-1 con un valor de referencia.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un procedimiento para identificar que es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP (hemolisis, aumento de enzimas hepaticas y trombocitopenia) que comprende las etapas de: (a) extraer una muestra biologica de una hembra; (b) usando un ensayo espedfico a la ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica; y (c) comparar dicha cantidad de ESM-1 con un valor de referencia; y (d) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP cuando dicha cantidad de ESM-1 es mayor que el valor de referencia.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un procedimiento para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, que comprende las etapas de: (a) extraer una muestra biologica de una hembra; (b) usando un ensayo espedfico a la ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica; (c) comparar dicha cantidad de ESM-1 con un valor de referencia de ESM-1; y (d) seleccionar uno o mas marcadores secundarios del grupo que consiste en tirosina quinasa-1 de tipo Fms soluble (sFlt1), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento placentario (PlGF), factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), endoglina soluble, protema placentaria 13 (pp-13), protema A de plasma asociada al embarazo (PAPP-A) y factor 15 de diferenciacion de crecimiento (GDF-15); e) usando ensayos espedficos para cada uno de los uno o mas marcadores secundarios, medir las cantidades de cada uno de los uno o mas marcadores secundarios en la muestra biologica; (f) para cada uno de dichos uno o mas marcadores secundarios, seleccionar un valor de referencia del marcador secundario, y comparar dicha cantidad de dicho marcador secundario con el valor de referencia del marcador secundario; y (g) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia, HELLP y/o RCIU en funcion de una comparacion de la cantidad de ESM-1 con un valor de referencia, y en funcion de una comparacion de la cantidad de dichos uno o mas marcadores secundarios con el correspondiente valor de referencia del marcador secundario.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un procedimiento para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, que comprende las etapas de: (a) extraer una muestra biologica de una hembra; (b) usando un ensayo espedfico a la ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica; (c) comparar dicha cantidad de ESM-1 con un valor de referencia de ESM-1; y (d) seleccionar uno o mas marcadores secundarios del grupo que consiste en tirosina quinasa-1 de tipo Fms soluble (sFlt1), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento placentario (PlGF), factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), endoglina soluble, protema placentaria 13 (pp-13), protema A de plasma asociada al embarazo (PAPP-A) y factor 15 de diferenciacion de crecimiento (GDF-15); e) usando ensayos espedficos para cada uno de los uno o mas marcadores secundarios, medir las cantidades de cada uno de los uno o mas marcadores secundarios en la muestra biologica; (f) para cada uno de dichos uno o mas marcadores secundarios, seleccionar un valor de referencia del marcador secundario, y comparar dicha cantidad de dicho marcador secundario con el valor de referencia del marcador secundario; y (g) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP cuando dicha cantidad de ESM-1 es mayor que el valor de referencia de ESM-1, y cuando dicha cantidad de cada uno de dichos uno o mas marcadores secundarios es mayor que su correspondiente valor de referencia del marcador secundario.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un procedimiento para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, que comprende las etapas de: (a) extraer una muestra biologica de una hembra; (b) usando un ensayo espedfico a la ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica; (c) seleccionar uno o mas marcadores secundarios del grupo que consiste en sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15; (d) usando ensayos espedficos para cada uno de los uno o mas marcadores secundarios, medir las cantidades de cada uno de los uno o mas marcadores secundarios en la muestra biologica; (e) para cada uno de los marcadores secundarios: (i) determinar la proporcion entre la cantidad de ESM-1 y la cantidad del marcador secundario; y (ii) seleccionar un valor de referencia de la proporcion; (iii) comparar la proporcion con el valor de referencia de la proporcion; y (f) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, especialmente en funcion de una comparacion con la proporcion de referencia, tal como cuando, para cada uno de los marcadores secundarios, dicha proporcion es mayor que el valor de referencia de la proporcion.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un procedimiento para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, que comprende las etapas de: (a) extraer una primera muestra biologica de una hembra en una primera ocasion; (b) extraer una segunda muestra biologica de una hembra en una segunda ocasion; (c) usando un ensayo espedfico a la ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la primera muestra biologica que constituye una primera cantidad; (d) usando un ensayo espedfico a la ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la segunda muestra biologica que constituye una segunda cantidad; y (e) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP especialmente en funcion de
una comparacion entre la primera cantidad y la segunda cantidad, tal como cuando la segunda cantidad es mayor que la primera cantidad en un valor de referencia predefinido. En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un procedimiento para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, que comprende las etapas de: (a) extraer una primera muestra biologica de una hembra; (b) extraer una segunda muestra biologica de una hembra; (c) usando un ensayo espedfico a la ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la primera muestra biologica que constituye una primera cantidad de ESM-1; (d) usando un ensayo espedfico a la eSM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la segunda muestra biologica que constituye una segunda cantidad de ESM-1; (e) seleccionar uno o mas marcadores secundarios del grupo que consiste en sFltl, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15; (f) usando ensayos espedficos para cada uno de los uno 0 mas marcadores secundarios, medir las cantidades de cada uno de los uno o mas marcadores secundarios en la primera muestra biologica, que constituyen un conjunto de primeras cantidades de los marcadores secundarios; (g) usando ensayos espedficos para cada uno de los uno o mas marcadores secundarios, medir las cantidades de cada uno de los uno o mas marcadores secundarios en la segunda muestra biologica, que constituyen un conjunto de segundas cantidades de los marcadores secundarios; (h) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP especialmente en funcion de (i) una comparacion entre la primera cantidad de ESM-1 y la segunda cantidad ESM-1 y/o en funcion de (ii) una comparacion entre la segunda cantidad del marcador secundario y la primera cantidad, tal como cuando la segunda cantidad de ESM-1 es mayor que la primera cantidad de ESM-1 en un valor de referencia de ESM-1 predefinido y, para cada uno de los marcadores secundarios, la segunda cantidad del marcador secundario es mayor que la primera cantidad del marcador secundario en un valor de referencia predefinido para ese marcador secundario.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un procedimiento para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, que comprende las etapas de: (a) extraer una primera muestra biologica de una hembra; (b) extraer una segunda muestra biologica de una hembra; (c) usando un ensayo espedfico a la ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la primera muestra biologica que constituye una primera cantidad de ESM-1; (d) usando un ensayo espedfico a la ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la segunda muestra biologica que constituye una segunda cantidad de ESM-1; (e) seleccionar uno o mas marcadores secundarios del grupo que consiste en sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15; (f) usando ensayos espedficos para cada uno de los uno o mas marcadores secundarios, medir las cantidades de cada uno de los uno o mas marcadores secundarios en la primera muestra biologica, que constituyen un conjunto de primeras cantidades de los marcadores secundarios; (g) usando ensayos espedficos para cada uno de los uno o mas marcadores secundarios, medir las cantidades de cada uno de los uno o mas marcadores secundarios en la segunda muestra biologica, que constituyen un conjunto de segundas cantidades de los marcadores secundarios; (h) para cada uno de los marcadores secundarios: (1) determinar la proporcion entre la primera cantidad de ESM-1 y la primera cantidad del marcador secundario, que constituye una primera proporcion; (2) determinar la proporcion entre la segunda cantidad de ESM-1 y la segunda cantidad del marcador secundario, que constituye una segunda proporcion; (3) comparar la primera proporcion con la segunda proporcion; e (i) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, especialmente cuando, para cada uno de los marcadores secundarios, la segunda proporcion es mayor que la primera proporcion en un valor de referencia predefinido.
En una realizacion, el procedimiento comprende, ademas, la etapa de un estudio Doppler de la arteria uterina. En una realizacion, dicha etapa de medicion o dichas etapas de medicion se efectuan usando uno o mas ensayos inmunologicos, especialmente un ensayo ELISA (ensayo por inmunoabsorcion ligado a enzimas), un ensayo turbidimetrico, un ensayo de radioinmunoabsorcion (RlST), un radioinmunoensayo (RIA), un ensayo de inmunofluorescencia directa o indirecta, un inmunoensayo en gel de partfculas (PaGlA), espectrometna de masa (MS) o un ensayo de flujo lateral. En una realizacion, dicho ensayo inmunologico o dichos ensayos inmunologicos son un ensayo ELISA. En una realizacion, dicho ensayo inmunologico o dichos ensayos inmunologicos son un ensayo de flujo lateral. En una realizacion, dicha etapa de medicion o dichas etapas de medicion se realizan usando uno o mas ensayos colorimetricos enzimaticos. En una realizacion, dicha etapa de medicion o dichas etapas de medicion se realizan usando espectrometna de masa (MS). En una realizacion, dicha cantidad de ESM-1 es el nivel de ESM-1 libre, ESM-1 enlazada, un metabolito de Es M-1 o ESM-1 total.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un dispositivo para identificar a una hembra embarazada que se encuentra en una cualquiera de las semanas 9-16 de gestacion que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y HELLP, comprendiendo dicho dispositivo: (a) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la ESM-1 que es, por ejemplo, un anticuerpo, un receptor (recombinante) de la e SM-1 o un aptamero, que permite la determinacion de la cantidad de ESM-1; (b) una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos que tiene implementados algoritmos necesarios para comparar la cantidad de ESM-1 determinada con valores de referencia almacenados en una base de datos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP. En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un dispositivo para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, comprendiendo dicho dispositivo: (a) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la ESM-1, sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15 que permite la determinacion de la cantidad de ESM-1, sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15; (b) una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos que tiene implementados algoritmos necesarios para
comparar la cantidad de ESM-1, sFlt1, VEGF, PIGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15 determinada con valores de referencia almacenados en una base de datos y calcular la proporcion entre los marcadores medidos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP. En una realizacion, dicha unidad de evaluacion tambien es capaz de dar recomendaciones terapeuticas. En otro aspecto adicional, la invencion proporciona el uso de una evaluacion de la cantidad de ESM-1 en una muestra biologica extrafda de una hembra embarazada para identificar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP.
En otra realizacion adicional, la invencion proporciona el uso in vitro de una muestra biologica extrafda de una hembra embarazada si es probable que la hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, comprendiendo el uso: (a) usando un ensayo espedfico a ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica; (b) comparar dicha cantidad de ESM-1 con un valor de referencia; y (c) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia, HELLP y/o RCIU. En una realizacion, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP en funcion de una comparacion de la cantidad de ESM-1 con un valor de referencia. En un ejemplo, el uso adicional comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia, HELLP y/o RCIU cuando dicha cantidad de ESM-1 es mayor que el valor de referencia, especialmente cuando la muestra biologica procede de una hembra embarazada en una semana cualquiera de la gestacion entre la semana 26 de gestacion o posteriormente.
En otra realizacion adicional, la invencion proporciona el uso in vitro de una muestra biologica extrafda de una hembra embarazada para identificar si es probable que la hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, comprendiendo el uso: (a) usando un ensayo espedfico a ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica; (b) comparar dicha cantidad de ESM-1 con un valor de referencia de ESM-1; y (c) seleccionar uno o mas marcadores secundarios del grupo que consiste en sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15; (d) usando ensayos espedficos para cada uno de los uno o mas marcadores secundarios, medir las cantidades de cada uno de los uno o mas marcadores secundarios en la muestra biologica; (e) para cada uno de dichos uno o mas marcadores secundarios, seleccionar un valor de referencia del marcador secundario, y comparar dicha cantidad de dicho marcador secundario con el valor de referencia del marcador secundario; y (f) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP.
En una realizacion, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP en funcion de una comparacion de la cantidad de ESM-1 con un valor de referencia, y en funcion de una comparacion de la cantidad de dichos uno o mas marcadores secundarios con el correspondiente valor de referencia del marcador secundario. En un ejemplo, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia, HELLP y/o RCIU cuando dicha cantidad de ESM-1 es mayor que el valor de referencia de ESM-1, especialmente cuando la muestra biologica procede de una hembra embarazada en una semana cualquiera de gestacion entre la semana 26 de gestacion o posteriormente. En una realizacion, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP cuando dicha cantidad de cada uno de dichos uno o mas marcadores secundarios es mayor que su correspondiente valor de referencia del marcador secundario.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un uso in vitro de una muestra biologica extrafda de una hembra embarazada para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, que comprende las etapas de: (a) usando un ensayo espedfico a ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica; (b) seleccionar uno o mas marcadores secundarios del grupo que consiste en sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15; (c) usando ensayos espedficos para cada uno de los uno o mas marcadores secundarios, medir la cantidad de cada uno de los uno o mas marcadores secundarios en la muestra biologica; (d) para cada uno de los marcadores secundarios: (i) determinar la proporcion entre la cantidad de ESM-1 y la cantidad del marcador secundario; y (ii) seleccionar un valor de referencia de la proporcion; (iii) comparar la proporcion con el valor de referencia de la proporcion; y (e) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP.
En una realizacion, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP en funcion de una comparacion para cada uno de los marcadores secundarios con el valor de referencia de la proporcion. En una realizacion, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP cuando, para cada uno de los marcadores secundarios, dicha proporcion es mayor que el valor de referencia de la proporcion. En una realizacion dicha muestra se deriva de una hembra que se encuentra en una semana cualquiera de gestacion entre las semanas 1 a 20 de gestacion, especialmente entre las semanas 12 a 16, y se identifica que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP cuando dicha cantidad de ESM-1 es menor que el valor de referencia de ESM-1.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un uso in vitro de muestras biologicas extrafdas de una hembra embarazada para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, usando una primera muestra biologica de una hembra extrafda en una primera ocasion y
usando una segunda muestra biologica de una hembra e x ^ d a en una segunda ocasion, que comprende las etapas de: (a) usando un ensayo espedfico a ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la primera muestra biologica, que constituye una primera cantidad; (b) usando un ensayo espedfico a ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la segunda muestra biologica, que constituye una segunda cantidad; y (c) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP. En una realizacion, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP en funcion de una comparacion entre la segunda cantidad y la primera cantidad. En un ejemplo, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia, HELLP y/o RCIU cuando la segunda cantidad es mayor que la primera cantidad en un valor de referencia predefinido, especialmente cuando la muestra biologica procede de una hembra embarazada en una semana cualquiera de gestacion entre la semana 26 de gestacion o posteriormente En una realizacion, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP cuando la segunda cantidad es menor que la primera cantidad en un valor de referencia predefinido cuando la muestra biologica procede de una hembra embarazada en una semana cualquiera de gestacion antes de la semana 26, especialmente antes de la semana 20, aun mas especialmente en cualquier semana de gestacion entre las semanas de gestacion 12 y 16.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un uso in vitro de muestras biologicas extrafdas de una hembra embarazada para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, usando una primera muestra biologica de una hembra extrafda en una primera ocasion y usando una segunda muestra biologica de una hembra extrafda en una segunda ocasion, que comprende las etapas de: (a) usando un ensayo espedfico a ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la primera muestra biologica, que constituye una primera cantidad de ESM-1; (b) usando un ensayo espedfico a ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la segunda muestra biologica, que constituye una segunda cantidad de ESM-1; (c) seleccionar uno o mas marcadores secundarios del grupo que consiste en sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15; (d) usando ensayos espedficos para cada uno de los uno o mas marcadores secundarios, medir las cantidades de cada uno de los uno o mas marcadores secundarios en la primera muestra biologica, que constituyen un conjunto de primeras cantidades de los marcadores secundarios; (e) usando ensayos espedficos para cada uno de los uno o mas marcadores secundarios, medir las cantidades de cada uno de los uno o mas marcadores secundarios en la segunda muestra biologica, que constituyen un conjunto de segundas cantidades de los marcadores secundarios; (f) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP.
En un ejemplo, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia, HELLP y/o RCIU cuando la segunda cantidad es mayor que la primera cantidad en un valor de referencia predefinido, especialmente cuando la muestra biologica procede de una hembra embarazada en una semana cualquiera de gestacion entre la semana 26 de gestacion o posteriormente. En una realizacion, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP cuando la segunda cantidad es menor que la primera cantidad en un valor de referencia predefinido cuando la muestra biologica procede de una hembra embarazada en una semana cualquiera de gestacion antes de la semana 26, especialmente antes de la semana 20, aun mas especialmente en cualquier semana de gestacion entre las semanas de gestacion 12 y 16.
En una realizacion, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP en funcion de una comparacion de cada uno de dichos uno o mas marcadores secundarios con su correspondiente valor de referencia del marcador secundario. En un ejemplo, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia, HELLP y/o RCIU cuando dicha cantidad de cada uno de dichos uno o mas marcadores secundarios (tambien) es mayor que su correspondiente valor de referencia del marcador secundario.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un uso in vitro de muestras biologicas extrafdas de una hembra embarazada para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, usando una primera muestra biologica de una hembra extrafda en una primera ocasion y usando una segunda muestra biologica de una hembra extrafda en una segunda ocasion, que comprende las etapas de: (a) usando un ensayo espedfico a ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la primera muestra biologica, que constituye una primera cantidad de ESM-1; (b) usando un ensayo espedfico a ESM-1, medir la cantidad de ESM-1 en la segunda muestra biologica, que constituye una segunda cantidad de ESM-1; (c) seleccionar uno o mas marcadores secundarios del grupo que consiste en sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15; (d) usando ensayos espedficos para cada uno de los uno o mas marcadores secundarios, medir las cantidades de cada uno de los uno o mas marcadores secundarios en la primera muestra biologica, que constituyen un conjunto de primeras cantidades de los marcadores secundarios; (e) usando ensayos espedficos para cada uno de los uno o mas marcadores secundarios, medir las cantidades de cada uno de los uno o mas marcadores secundarios en la segunda muestra biologica, que constituyen un conjunto de segundas cantidades de los marcadores secundarios; (f) para cada uno de los marcadores secundarios: (i) determinar la proporcion entre la primera cantidad de ESM-1 y la primera cantidad del marcador secundario, que constituye una primera proporcion; (ii) determinar la proporcion entre la segunda cantidad de ESM-1 y la segunda cantidad del marcador secundario, que constituye una segunda proporcion; (iii) comparar la primera proporcion con la segunda proporcion; y (g) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP.
En una realizacion, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP en funcion de una comparacion de la proporcion de cada proporcion de cada uno de los marcadores secundarios con un valor de referencia predefinido. En una realizacion, el uso comprende (ademas) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP cuando, para cada uno de los marcadores secundarios, la segunda proporcion es mayor que la primera proporcion en un valor de referencia predefinido. En una realizacion, dicha etapa de medicion o dichas etapas de medicion se realizan usando uno o mas ensayos inmunologicos. En una realizacion, dicho ensayo inmunologico o dichos ensayos inmunologicos son un ensayo ELISA. En una realizacion, dicho ensayo inmunologico o dichos ensayos inmunologicos son un ensayo de flujo lateral. En una realizacion, dicha etapa de medicion o dichas etapas de medicion se realizan usando uno o mas de un ensayo enzimatico o colorimetrico o luminiscente. En una realizacion, dicha etapa de medicion o dichas etapas de medicion se realizan usando espectrometna de masa (MS). En una realizacion, dicha cantidad de ESM-1 es el nivel de ESM-1 libre, ESM-1 enlazada, un metabolito de ESM-1 o ESM-1 total.
En una realizacion, una o mas de dicha primera muestra biologica y dicha segunda muestra biologica, especialmente tanto la primera muestra biologica como la segunda muestra biologica, son sangre, plasma, suero, orina o saliva de la hembra. En una realizacion, una o mas de dicha primera muestra biologica y dicha segunda muestra biologica, especialmente tanto la primera muestra biologica como la segunda muestra biologica, se derivan de una hembra que se encuentra en una semana cualquiera de gestacion entre las semanas 1 a 20 de gestacion, especialmente entre las semanas 12 a 16. En un ejemplo adicional, una o mas de dicha primera muestra biologica y dicha segunda muestra biologica, especialmente tanto la primera muestra biologica como la segunda muestra biologica, se derivan de una hembra que se encuentra en una semana cualquiera de gestacion entre las semanas de gestacion 20 a 36.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un equipo de reactivos para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, comprendiendo dicho equipo de reactivos: (a) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la ESM-1; (b) una unidad de evaluacion para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, en funcion de un resultado proporcionado por la unidad de analisis. En una realizacion, el equipo de reactivos puede comprender, ademas, un manual o una referencia a un manual (remoto). En una realizacion, el manual incluye instrucciones de como extraer una muestra biologica de una hembra embarazada y/o de como usar la unidad de analisis y/o de como usar la unidad de evaluacion. En una realizacion, la unidad de evaluacion comprende un esquema de colores, estando configurada la unidad de analisis para proporcionar una reaccion cromatica, dependiendo el color de la cantidad de ESM-1 en una muestra biologica extrafda de una hembra embarazada. En una realizacion, el equipo de reactivos comprende (ademas): (a) una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP. En una realizacion, el equipo de reactivos comprende (ademas): (b) una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos que tiene implementados algoritmos necesarios para comparar la cantidad de ESM-1 determinada con valores de referencia almacenados en una base de datos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un equipo de reactivos para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, comprendiendo dicho equipo de reactivos: (a) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la ESM-1, sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15. En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un equipo de reactivos, segun se describe en la presente memoria, para identificar a una hembra embarazada que es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y/o HELLP, comprendiendo dicho equipo de reactivos: (a) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la eSM-1, sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15, que permite la determinacion de la cantidad de ESM-1, sFlt1, VEGF, PlGF, hGf , sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15.
En otro aspecto adicional, la invencion proporciona un equipo de reactivos, segun se describe en la presente memoria, comprendiendo dicho equipo de reactivos (ademas): (b) una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos que tiene implementados algoritmos necesarios para comparar la cantidad de ESM-1, sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15 determinada con valores de referencia almacenados en una base de datos y calcular la proporcion entre los marcadores medidos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia, HELLP y/o RCIU. En una realizacion, dicha unidad de evaluacion tambien es capaz de dar recomendaciones terapeuticas. En una realizacion, la unidad de analisis comprende un ensayo. En una realizacion, la unidad de analisis comprende un ensayo ELISA (ensayo por inmunoabsorcion ligado a enzimas), un ensayo turbidimetrico, un ensayo de radioinmunoabsorcion (RIST), un radioinmunoensayo (RIA), un ensayo de inmunofluorescencia directa o indirecta, un inmunoensayo en gel de partfculas (PaGIA), espectrometna de masa (MS) o un ensayo de flujo lateral. En una realizacion, el manual incluye informacion para extraer una muestra biologica de una hembra embarazada en una semana cualquiera de la gestacion, especialmente entre las semanas 1 a 20 de gestacion, aun mas especialmente entre las semanas 12 a 16. El procedimiento y el uso, asf como la aplicacion del equipo de reactivos, pueden incluir la toma de varias muestras a lo largo de un periodo de tiempo y la determinacion, con el ensayo espedfico a la ESM-1, la o las
cantidades de ESM-1 o de valores derivados de la misma, como proporciones de valores. De manera alternativa o adicional, la cuantificacion de una cuantificacion indirecta; por ejemplo, por una reaccion cromatica que puede depender de la concentracion (cantidad). En funcion del color, puede hacerse una prediccion sobre una hembra embarazada de si es probable que tenga o desarrolle preeclampsia, eclampsia y HELLP (hemolisis, aumento de enzimas hepaticas y trombocitopenia) y/o restriccion del crecimiento intrauterino (RCIU).
Ademas, o alternativamente, pueden determinarse o proporcionarse valores de referencia —por ejemplo, en un manual (en Internet)— en funcion de los cuales pueda determinarse si la hembra embarazada tiene o es probable que desarrolle uno de los smdromes anteriormente mencionados. Cuando se compara el valor obtenido de la hembra con un valor de referencia, o varios valores de referencia cuando se determina mas de un parametro, puede predecirse el estado de la probabilidad. Por ende, el manual y/o los datos de referencia pueden ser remotos, estando, por ejemplo, en Internet. El usuario puede derivar los datos de Internet.
La medicion puede realizarse usando un procedimiento para cuantificar la cantidad de protema a traves de la cantidad de ARN que codifica dicha protema. Por ende, en una realizacion dicha etapa de medicion o dichas etapas de medicion se efectuan usando un procedimiento para cuantificar la cantidad de protema a traves de la cantidad de ARN que codifica dicha protema. Ademas, adicional o alternativamente, dicha cuantificacion puede realizarse a traves de RT-PCR, PCR, hibridacion u otros medios para determinar la cantidad de nucleotidos.
Claims (18)
1. Un procedimiento in vitro para identificar, a partir de una muestra de Kquido biologico de una hembra embarazada, un smdrome relacionado con el embarazo seleccionado entre el grupo que consiste en la preeclampsia de inicio precoz, la eclampsia y hemolisis, aumento de enzimas hepaticas y trombocitopenia (HELLP), incluyendo el procedimiento
(i) medir la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica, procediendo la muestra biologica de la hembra embarazada en una cualquiera de las semanas 9-16 de gestacion;
(ii) comparar dicha cantidad de ESM-1 con un valor de referencia, y
(iii) identificar, en funcion de la comparacion de la cantidad de ESM-1 con el valor de referencia, si es probable que la hembra tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo,
comprendiendo dicha muestra de lfquido biologico una muestra de sangre, una muestra de plasma o una muestra de suero de dicha hembra embarazada.
2. El procedimiento segun la reivindicacion 1 en el que el valor de referencia es la cantidad de ESM-1 en las muestras biologicas de hembras embarazadas que tienen un embarazo sano.
3. El procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que dicha muestra de lfquido biologico procede de una hembra embarazada que se encuentra en una semana cualquiera de gestacion entre las semanas 12 a 16 de gestacion, y en el que dicha muestra de lfquido biologico comprende una muestra de plasma y en el que se evalua que la hembra embarazada tiene el smdrome relacionado con el embarazo cuando el valor de ESM-1 se encuentra en el intervalo de 410±355 pg/ml.
4. El procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que la cantidad de ESM-1 de la muestra de lfquido biologico de la hembra embarazada es indicativa del smdrome relacionado con el embarazo cuando la cantidad es igual o menor que el 70% de la cantidad de ESM-1 en muestras de lfquidos biologicos de hembras embarazadas que tienen un embarazo sano.
5. El procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes que, ademas, comprende el uso de un ensayo espedfico a la ESM-1, en el que el ensayo comprende un ensayo ELlSA (ensayo por inmunoabsorcion ligado a enzimas), un ensayo turbidimetrico, un ensayo de radioinmunoabsorcion (RlST), un radioinmunoensayo (RIA), un ensayo de inmunofluorescencia directa o indirecta, un inmunoensayo en gel de partmulas (PaGIA) o un ensayo de flujo lateral, especialmente en el que el ensayo comprende uno o mas de un ensayo ELISA, un ensayo de flujo lateral, un ensayo enzimatico, un ensayo colorimetrico y un ensayo luminiscente, y/o en el que la medicion de la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica incluye el uso de espectrometna de masa (MS); comprendiendo el procedimiento, ademas, la etapa del estudio Doppler de la arteria uterina y de deducir del mismo informacion sobre la placentacion.
6. El procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que dicha cantidad de ESM-1 es el nivel de ESM-1 libre en la muestra biologica.
7. El procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que una o mas de (a) la medicion de la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica comprende un procedimiento para realizar una cuantificacion del ARN que codifica la ESM-1 en celulas o del ARN libre de celulas en la muestra biologica, y (b) la medicion de la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica comprende un procedimiento para cuantificar la cantidad de protema a traves de la cantidad de ARN que codifica la ESM-1; y en el que dicha cuantificacion es mediante rT-PCR, PCR, hibridacion u otros medios de determinacion de la cantidad de nucleotidos.
8. El procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes que, ademas, comprende:
(iv) usar un marcador secundario seleccionado del grupo que consiste en tirosina quinasa-1 de tipo Fms soluble (sFlt1), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento placentario (PlGF), factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), endoglina soluble, protema placentaria 13 (pp-13), protema A de plasma asociada al embarazo (PAPP-A), factor 15 de diferenciacion de crecimiento (GDF-15), pikachurina y una hemopexina,
(v) usar opcionalmente un ensayo espedfico para el marcador secundario y medir la cantidad de marcador secundario en la muestra biologica y, opcionalmente, comparar dicha cantidad de dicho marcador secundario con un valor de referencia del marcador secundario,
comprendiendo el procedimiento, ademas, la identificacion de que es probable que la hembra tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo en funcion de una comparacion de la cantidad de ESM-1 con un valor de referencia, y en funcion de una comparacion de la cantidad de dichos uno o mas marcadores secundarios con el correspondiente valor de referencia del marcador secundario, y comprendiendo el procedimiento, ademas, la determinacion de una proporcion entre la cantidad de ESM-1 y la cantidad del marcador secundario, la seleccion de un valor de referencia de proporcion, y la comparacion de la proporcion
con el valor de referencia de proporcion, y comprendiendo el procedimiento, ademas, la identificacion de que es probable que la hembra tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo en funcion de una comparacion de la cantidad de ESM-1 con un valor de referencia, y en funcion de una comparacion de la proporcion entre la cantidad de ESM-1 y la cantidad del marcador secundario con la proporcion del valor de referencia.
9. El procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, comprendiendo el procedimiento la provision de una primera muestra biologica de una hembra extrafda en una primera ocasion, y la provision de una segunda muestra biologica de la hembra extrafda en una segunda ocasion, usando un ensayo espedfico a la ESM-1, la medicion de la cantidad de ESM-1 en la primera muestra biologica que constituye una primera cantidad, el uso de un ensayo espedfico a la ESM-1, la medicion de la cantidad de ESM-1 en la segunda muestra biologica y que constituye una segunda cantidad, y comprendiendo el procedimiento, ademas, identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo en funcion de una comparacion entre la primera cantidad y la segunda cantidad.
10. Un dispositivo para identificar a una hembra embarazada que se encuentre en una cualquiera de las semanas 9-16 de gestacion que es probable que tenga o desarrolle un smdrome relacionado con el embarazo seleccionado del grupo que consiste en la preeclampsia de inicio precoz, la eclampsia y HELLP, comprendiendo dicho dispositivo (a) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la ESM-1 que sea, por ejemplo, un anticuerpo, un receptor (recombinante) de la ESM-1 o un aptamero que permita la determinacion de la cantidad de ESM-1; (b) una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos que tiene implementados los algoritmos necesarios para comparar la cantidad de ESM-1 determinada con un valor de referencia almacenado en una base de datos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia de inicio precoz, eclampsia y/o HELLP.
11. El dispositivo segun la reivindicacion 10 que, ademas, comprende una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de sFlt1, VEGF, p 1g F, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15, que permite la determinacion de la cantidad sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15, y una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos que tiene implementados los algoritmos necesarios para comparar la cantidad de sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15 determinada con valores de referencia almacenados en una base de datos y calcular la proporcion entre los marcadores medidos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle preeclampsia de inicio precoz, eclampsia y/o HELLP, y en el que dicha unidad de evaluacion es tambien capaz de dar recomendaciones terapeuticas.
12. El uso de una evaluacion de la cantidad de ESM-1 en una muestra de lfquido biologico extrafda de una hembra embarazada que se encuentra en una cualquiera de las semanas 9-16 de gestacion para identificar si es probable que la hembra embarazada tenga o desarrolle un smdrome relacionado con el embarazo seleccionado del grupo que consiste en preeclampsia de inicio precoz, eclampsia y HELLP, en el que dicha muestra de lfquido biologico comprende una muestra de sangre, una muestra de plasma o una muestra de suero de dicha hembra embarazada.
13. El uso in vitro de muestra de lfquido biologico extrafda de una hembra embarazada que se encuentra en una cualquiera de las semanas 9-16 de gestacion para identificar si es probable que la hembra embarazada tenga o desarrolle un smdrome relacionado con el embarazo seleccionado del grupo que consiste en preeclampsia de inicio precoz, eclampsia y HELLP, comprendiendo el uso: (a) medir la cantidad de ESM-1 en la muestra biologica, usando especialmente un ensayo espedfico a la ESM-1; (b) comparar dicha cantidad de ESM-1 con un valor de referencia; y (c) identificar que es probable que la hembra tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo, en el que dicha muestra de lfquido biologico comprende una muestra de sangre, una muestra de plasma o una muestra de suero de dicha hembra embarazada.
14. Un equipo de reactivos para identificar si es probable que una hembra embarazada que se encuentra en una cualquiera de las semanas 9-16 de gestacion tenga o desarrolle un smdrome relacionado con el embarazo seleccionado del grupo que consiste en preeclampsia de inicio precoz, eclampsia y HELLP, comprendiendo dicho equipo de reactivos: (a) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la ESM-1; (b) una unidad de evaluacion para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo en funcion del resultado proporcionado por la unidad de analisis, comprendiendo la unidad de evaluacion un procesador de datos que tiene implementados los algoritmos necesarios para comparar la cantidad de ESM-1 determinada con valores de referencia almacenados en una base de datos y determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo.
15. Un equipo de reactivos para identificar si es probable que una hembra embarazada que se encuentra en una cualquiera de las semanas 9-16 de gestacion tenga o desarrolle un smdrome relacionado con el embarazo seleccionado del grupo que consiste en preeclampsia de inicio precoz, eclampsia y HELLP, comprendiendo dicho equipo de reactivos: (a) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la ESM-1 y de
uno o mas de sFlt1, VEGF, PIGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15; (b) una unidad de evaluacion para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo, en funcion de un resultado proporcionado por la unidad de analisis, comprendiendo la unidad de evaluacion un procesador de datos que tiene implementados algoritmos necesarios para comparar la cantidad de ESM-1, y de uno o mas de sFltl, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15 determinada con valores de referencia almacenados en una base de datos y calcular la proporcion entre los marcadores medidos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo.
16. El equipo de reactivos segun una cualquiera de las reivindicaciones 14-15 que, ademas, comprende un manual o una referencia a un manual, incluyendo el manual instrucciones de como extraer una muestra de lfquido biologico de una hembra embarazada y/o de como usar la unidad de analisis y/o de como usar la unidad de evaluacion, incluyendo el manual informacion para extraer una muestra de lfquido biologico de una hembra embarazada en una cualquiera de las semanas 9-16 de gestacion, especialmente las semanas 12-16 de gestacion, y en el que la unidad de evaluacion comprende un esquema de colores, en el que la unidad de analisis esta configurada para proporcionar una reaccion cromatica, dependiendo el color de la cantidad de ESM-1 en una muestra biologica extrafda de una hembra embarazada, en el que dicha muestra de lfquido biologico comprende una muestra de sangre, una muestra de plasma, o una muestra de suero de dicha hembra embarazada.
17. El equipo de reactivos segun una cualquiera de las reivindicaciones 15-16 que comprende
(i) una unidad de analisis que comprende un agente de deteccion de la ESM-1 y de uno o mas de sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15, comprendiendo la unidad de analisis, especialmente, un agente de deteccion de la ESM-1 y un agente de deteccion de uno o mas de sFlt1, VEGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A y GDF-15, que permite la determinacion de la cantidad de ESM-1, y de uno o mas de sFlt1, VeGF, PlGF, HGF, sEndoglina, pp-13, PAPP-A o GDF-15, en el que (a) la unidad de analisis comprende un ensayo, comprendiendo especialmente la unidad de analisis un ensayo ELISA (ensayo por inmunoabsorcion ligado a enzimas), un ensayo turbidimetrico, un ensayo de radioinmunoabsorcion (RIST), un radioinmunoensayo (RIA), un ensayo de inmunofluorescencia directa o indirecta, un inmunoensayo en gel de partmulas (PaGIA) o un ensayo de flujo lateral; o (b) la unidad de analisis comprende un procedimiento para realizar una cuantificacion del ARN que codifica la ESM-1 en celulas o del ARN libre de celulas en la muestra biologica, y
(ii) una unidad de evaluacion que comprende un procesador de datos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo, especialmente un procesador de datos que tenga implementados algoritmos necesarios para comparar la cantidad de ESM-1 determinada con valores de referencia almacenados en una base de datos para determinar si es probable que una hembra embarazada tenga o desarrolle el smdrome relacionado con el embarazo.
18. El uso de un equipo de reactivos segun una cualquiera de las reivindicaciones 14-17 para predecir que una hembra embarazada en una cualquiera de las semanas 9-16 de gestacion va a desarrollar, despues de la semana 20, preeclampsia de inicio precoz severa, en funcion de una medicion de la cantidad de ESM-1 en una muestra de lfquido biologico de la hembra embarazada, en el que la muestra de lfquido biologico comprende una muestra de sangre, una muestra de plasma, o una muestra de suero de dicha hembra embarazada.
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