ES2899007T3 - Métodos para predecir el riesgo de insuficiencia respiratoria en un paciente séptico al medir niveles reducidos de endocan en sangre - Google Patents

Abstract

Un método para predecir el riesgo de tener insuficiencia respiratoria en un paciente que tiene sepsis grave o choque séptico que comprende una etapa que consiste en medir la concentración de endocan en una muestra de sangre obtenida de dicho paciente séptico y una etapa de comparar la concentración de endocan con un valor umbral predeterminado que representa la concentración medida en promedio en pacientes sanos y en donde una concentración menor que el valor umbral predeterminado predice insuficiencia respiratoria en las 48-72 horas posteriores a la admisión en la UCI del paciente que tiene sepsis grave o choque séptico.

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos para predecir el riesgo de insuficiencia respiratoria en un paciente séptico al medir niveles reducidos de endocan en sangre

Sector de la técnica

La presente invención se relaciona con métodos y kits para predecir el riesgo de insuficiencia respiratoria, insuficiencia renal o trombopenia en un paciente séptico.

Estado de la técnica

La sepsis es un síndrome clínico que complica una infección grave y se caracteriza por inflamación sistémica y lesión tisular generalizada y, por lo tanto, representa una de las principales causas de hospitalización y mortalidad en unidades de cuidados intensivos (UCI) no coronarias. Las causas comunes incluyen organismos gram-negativos, estafilococos y meningococos. Existen tres etapas reconocidas en la respuesta inflamatoria con riesgo aumentado progresivo de insuficiencia orgánica específica y muerte: sepsis, sepsis grave y choque séptico. La sepsis grave es sepsis acompañada por signos de insuficiencia de al menos un órgano. La insuficiencia cardiovascular típicamente se manifiesta mediante hipotensión, insuficiencia respiratoria por hipoxemia, insuficiencia renal por oliguria, e insuficiencia hematológica por coagulopatía.

Por consiguiente, los métodos para predecir el riesgo de insuficiencia respiratoria, insuficiencia renal o trombopenia en un paciente séptico son muy deseables.

Resultados recientes sugieren que, en pacientes sépticos, el nivel de endocan en sangre está relacionada con la gravedad de la enfermedad y el desenlace del paciente y puede representar un nuevo marcador de disfunción de células endoteliales (Scherpereel A, Depontieu F, Grigoriu B, Cavestri B, Tsicopoulos A, Gentina T, Jourdain M, Pugin J, Tonnel AB, Lassalle P. Endocan, a new endothelial marker in human sepsis. Crit Care Med. 2006 Feb;34(2):532-7). Sin embargo, el papel del endocan para predecir el riesgo de insuficiencia respiratoria, insuficiencia renal o trombopenia en un paciente séptico todavía no se ha investigado.

Objeto de la invención

La presente invención se relaciona con un método para predecir el riesgo de tener insuficiencia respiratoria en un paciente que tiene sepsis grave o choque séptico que comprende una etapa que consiste en medir la concentración de endocan en una muestra de sangre obtenida de dicho paciente séptico y una etapa de comparar la concentración de endocan con un valor umbral predeterminado que representa la concentración medida en promedio en pacientes sanos y en donde una concentración menor que el valor umbral predeterminado predice insuficiencia respiratoria en las 48-72 horas posteriores a la admisión en la UCI del paciente que tiene sepsis grave o choque séptico. La invención se define en las reivindicaciones adjuntas.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN:

Los inventores muestran que el nivel de endocan en sangre representa una herramienta para predecir la insuficiencia respiratoria y/o la insuficiencia renal y/o la trombopenia en pacientes sépticos.

Por consiguiente, la presente invención se relaciona con un método para predecir el riesgo de tener insuficiencia respiratoria en un paciente que tiene sepsis grave o choque séptico que comprende una etapa que consiste en medir la concentración de endocan en una muestra de sangre obtenida de dicho paciente séptico y una etapa de comparar la concentración de endocan con un valor umbral predeterminado que representa la concentración medida en promedio en pacientes sanos y en donde una concentración menor que el valor umbral predeterminado predice insuficiencia respiratoria en las 48-72 horas posteriores a la admisión en la UCI del paciente que tiene sepsis grave o choque séptico.

Según se usa en la presente memoria, el término “paciente séptico” se refiere a un paciente que tiene sepsis grave o choque séptico.

Según se usa en la presente memoria, el término "insuficiencia respiratoria" tiene su significado general en la técnica y se define como la incapacidad del sistema respiratorio para cumplir su función, es decir, para mantener una hematosis normal (transformación de sangre venosa, rica en CO² , en sangre arterial, rica en O²). La insuficiencia respiratoria se desarrolla cuando la tasa de intercambio gaseoso entre la atmósfera y la sangre es incapaz de satisfacer las demandas metabólicas del cuerpo.

Según se usa en la presente memoria, el término "insuficiencia renal" tiene su significado general en la técnica y describe una afección médica en la que los riñones no filtran adecuadamente las toxinas y productos de desecho de la sangre.

Según se usa en la presente memoria, el término “trombopema” o "trombocitopenia" tiene su significado general en la técnica y define una disminución anormal en el número de plaquetas en la sangre.

Según se usa en la presente memoria, el término "endocan" o "ESM-1" tiene su significado general en la técnica y se refiere a la molécula específica de células endoteliales-1 que es un proteoglucano dermatán sulfato de 50 kDa expresado por células endoteliales en el pulmón y el riñón (Lassalle P, Molet S, Janin A, et al.: ESM-1 es una nueva molécula específica para células endoteliales humanas expresada en el pulmón y regulada por citocinas. J Biol Chem 1996; 271:20458-20464) y puede detectarse en la sangre humana (Bechard D, Meignin V, Scherpereel A, et al: Characterization of the secreted form of endothelial-cell-specific molecule 1 by specific monoclonal antibodies. J Vasc Res 2000; 37:417-425; Bechard D, Gentina T, Delehedde M, et al: Endocan is a novel chondroitin sulfate/dermatan sulfate proteoglycan that promotes hepatocyte growth factor/scatter factor mitogenic activity. J Biol Chem 2001; 276:48341-48349).

Según se usa en la presente memoria, el término "muestra de sangre" se refiere a una muestra de sangre entera, suero o plasma. Típicamente, la muestra de sangre se prepara en la admisión a la unidad de cuidados intensivos (UCI) del paciente con sepsis grave y choque séptico.

Una vez que se prepara la muestra de sangre del paciente, se puede medir la concentración de ESM-1 mediante cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo, la concentración de ESM-1 se puede medir al usar técnicas electroforéticas e inmunodiagnósticas estándares, incluidos inmunoensayos tales como ensayos de competición, reacción directa o tipo sándwich. Dichos ensayos incluyen, pero no se limitan a, transferencias Western; pruebas de aglutinación; inmunoensayos marcados y mediados por enzimas, tales como ELISA; ensayos tipo biotina/avidina; radioinmunoensayos; inmunoelectroforesis; inmunoprecipitación; cromatografía de líquidos de alto rendimiento (HPLC, por sus siglas en inglés), cromatografía de exclusión por tamaño, afinidad por fase sólida, etc.

En una realización particular, dichos métodos comprenden poner en contacto la muestra de sangre con un par de unión capaz de interactuar selectivamente con ESM-1 presente en la muestra de sangre.

El par de unión puede ser generalmente un anticuerpo que puede ser policlonal o monoclonal, preferiblemente monoclonal. Los anticuerpos policlonales que se dirigen contra ESM-1 pueden desencadenarse según métodos conocidos al administrar el antígeno o epítopo apropiado a un animal hospedante seleccionado, p. ej., de cerdos, vacas, caballos, conejos, cabras, ovejas y ratones, entre otros. Se pueden usar diversos adyuvantes conocidos en la técnica para potenciar la producción de anticuerpos. Si bien los anticuerpos útiles en la puesta en práctica de la invención pueden ser policlonales, se prefieren anticuerpos monoclonales. Se pueden preparar y aislar anticuerpos monoclonales contra ESM-1 al usar cualquier técnica que proporcione la producción de moléculas de anticuerpo mediante líneas celulares continuas en cultivo. Las técnicas para producción y aislamiento incluyen, pero no se limitan a, la técnica del hibridoma descrita originalmente por Kohler y Milstein (1975); la técnica del hibridoma de linfocitos B humanos (Cote et al., 1983); y la técnica del hibridoma de EBV (Cole et al. 1985). Alternativamente, las técnicas descritas para la producción de anticuerpos de cadena simple (ver, p. ej., la patente estadounidense núm.

4.946.778) pueden adaptarse para producir anticuerpos anti-ESM-1 de cadena simple. Los anticuerpos útiles para poner en práctica la presente invención también incluyen fragmentos anti-ESM-1 que incluyen, pero no se limitan a, fragmentos F(ab')2, que pueden generarse mediante la digestión por pepsina de una molécula de anticuerpo intacta y fragmentos Fab, que pueden generarse mediante la reducción de los puentes disulfuro de los fragmentos F(ab')2. Alternativamente, se pueden construir bibliotecas de expresión de Fab y/o scFv para permitir la rápida identificación de fragmentos que tienen la especificidad deseada para ESM-1. Por ejemplo, se puede usar visualización en fagos de anticuerpos. En dicho método, se expresan fragmentos Fv de cadena simple (scFv, por sus siglas en inglés) o fragmentos Fab en la superficie de un bacteriófago adecuado, p. ej., M13. A grandes rasgos, se extraen células de bazo de un hospedante adecuado, p. ej., ratón, que se ha inmunizado con una proteína. Las regiones codificantes de las cadenas VL y VH se obtienen a partir de dichas células que producen el anticuerpo deseado contra la proteína. Estas regiones codificantes después se fusionan con un extremo de una secuencia de fago. Una vez que el fago se inserta en un portador adecuado, p. ej., bacterias, el fago hace visible el fragmento de anticuerpo. La visualización en fagos de anticuerpos también se puede proporcionar mediante métodos combinados conocidos por los expertos en la técnica. Los fragmentos de anticuerpo que hace visible un fago después pueden usarse como parte de un inmunoensayo.

Existen anticuerpos monoclonales anti-ESM-1 disponibles comercialmente de Lunginnov (Lille, Francia). Por ejemplo, el anticuerpo anti-endocan/ESM-1 humano MEP08 detecta el extremo N de endocan humano (Bechard et al. (2000) J. Vasc. Res. 37:417-425; Grigoriu et al. (2006) Clin. Cancer Res. 12:4575-4582; Maurage et al. (2009) Exp. Neurol. 68:836-844; Leroy et al. (2010) Histopathology 56:180-187; Sarrazin et al. (2010) J. Canc. Sci. Ther.

2:47-52). El clon del anticuerpo anti-endocan/ESM-1 humano MEP19 detecta el extremo C de endocan humano (Bechard et al. (2000) J. Vasc. Res. 37:417-425; Grigoriu et al. (2006) Clin. Cancer Res. 12:4575-4582; Maurage et al. (2009) Exp. Neurol. 68:836-844; Leroy et al. (2010) Histopathology 56:180-187; Sarrazin et al. (2010a) J. Canc. Sci. Ther. 2:47-52; y Sarrazin et al. (2010b) Glycobiology 20:1380-1388).

Alternativamente, el par de unión puede ser un aptámero. Los aptámeros son una clase de molécula que representa una alternativa a anticuerpos en relación con el reconocimiento molecular. Los aptámeros son secuencias oligonucleotídicas o oligopeptídicas con la capacidad de reconocer prácticamente cualquier clase de moléculas diana con alta afinidad y especificidad. Dichos ligandos pueden aislarse a través de Evolución sistemática de ligandos por enriquecimiento exponencial (SELEX, por sus siglas en inglés) de una biblioteca de secuencias aleatoria, como se describe en Tuerk C. y Gold L., 1990. La biblioteca de secuencias aleatoria se puede obtener mediante síntesis química combinatoria de ADN. En esta biblioteca, cada miembro es un oligómero lineal, eventualmente químicamente modificado, de una secuencia única. Se han reseñado posibles modificaciones, usos y ventajas de esta clase de moléculas en Jayasena S.D., 1999. Los aptámeros peptídicos consisten en regiones variables de anticuerpo conformacionalmente restringidas exhibidas mediante una proteína de plataforma tal como tiorredoxina A de E. coli, que se seleccionan a partir de las bibliotecas combinatorias mediante dos métodos híbridos (Colas et al., 1996).

Los pares de unión tales como anticuerpos o aptámeros se pueden etiquetar con una molécula o sustancia detectable, tal como una molécula fluorescente, una molécula radioactiva o cualesquiera otras etiquetas conocidas en la técnica. En la técnica se conocen etiquetas que generalmente proporcionan (sea directamente o indirectamente) una señal.

Según se usa en la presente memoria, el término "etiquetado/a", en relación con el anticuerpo, se pretende que comprenda el etiquetado directo del anticuerpo o aptámero al acoplar (es decir, al enlazar físicamente) una sustancia detectable, tal como un agente radioactivo o un fluoróforo (p. ej., isotiocianato de fluoresceína (FITC, por sus siglas en inglés) o ficoeritrina (PE, por sus siglas en inglés) o indocianina (Cy5)) al anticuerpo o aptámero, así como el etiquetado indirecto de la sonda o anticuerpo mediante reactividad con una sustancia detectable. Un anticuerpo o aptámero de la invención se puede etiquetar con una molécula radioactiva mediante cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo, las moléculas radioactivas incluyen, pero no se limitan a, átomo radioactivo para estudios gammagráficos tales como 1123, 1124, In111, Re186, Re188.

Los ensayos mencionados anteriormente implican generalmente la unión del par de unión (es decir, anticuerpo o aptámero) a un soporte sólido. Los soportes sólidos que se pueden usar en la puesta en práctica de la invención incluyen sustratos tales como nitrocelulosa (p. ej., en forma de membrana o pocillo de microtitulación); polivinilcloruro (p. ej., láminas o pocillos de microtitulación); látex de poliestireno (p. ej., perlas o placas de microtitulación); fluoruro de polivinilidina; papel diazotizado; membranas de nailon; perlas activadas, perlas sensibles magnéticamente, y similares.

Más particularmente, puede usarse un método ELISA, en donde los pocillos de la placa de microtitulación se recubren con un conjunto de anticuerpos contra ESM-1. Después, se agrega una muestra de sangre que contiene o se sospecha que contiene ESM-1 a los pocillos recubiertos. Después de un período de incubación suficiente para permitir la formación de complejos de anticuerpo-antígeno, la(s) placa(s) puede(n) lavarse para retirar los restos no unidos y se agrega una molécula de unión secundaria etiquetada de manera detectable. Se deja que la molécula de unión secundaria haga reacción con cualquier proteína marcadora de muestra capturada, la placa se lava y se detecta la presencia de la molécula de unión secundaria al usar métodos conocidos en la técnica.

Típicamente, existe un kit para ELISA disponible comercialmente de Lunginnov (Lille, Francia): EndoMark HI ® (Kit para ELISA para detectar endocan humano). Se describen otros métodos de ELISA en: Bechard et al. (2000) J. Vasc. Res. 37:417-425; Grigoriu et al. (2006) Clin. Cancer Res. 12:4575-4582; Leroy et al. (2010) Histopathology 56:180-187; Sarrazin et al. (2006) BBA Reviews 1765:25-37; Sarrazin et al. (2010a) J. Canc. Sci. Ther. 2:47-52; Scherpereel et al. (2003) Cancer Res. 63:6084-6089; Scherpereel et al. (2006) Crit. Care Med. 34(2):532-537.

Medir la concentración de ESM-1 (con o sin métodos basados en inmunoensayo) también puede incluir la separación de las proteínas: centrifugación basada en el peso molecular de la proteína; electroforesis basada en la masa y carga; HPLC basada en la hidrofobicidad; cromatografía de exclusión por tamaño basada en el tamaño; y afinidad por fase sólida basada en la afinidad de la proteína por una fase sólida particular que se usa. Una vez separada, la ESM-1 se puede identificar en función de un "perfil de separación" conocido, p. ej., tiempo de retención, para dicha proteína y medir al usar técnicas estándares. Alternativamente, las proteínas separadas se pueden detectar y medir, por ejemplo, mediante un espectrómetro de masas.

Medir la concentración de ESM-1 se usa para predecir la insuficiencia respiratoria, en las 48-72 horas posteriores a la admisión a la UCI de pacientes con sepsis grave y choque séptico.

El método de la invención comprende, además, una etapa de comparar la concentración de ESM-1 con un valor umbral predeterminado. Dicha comparación es indicativa de si dicho paciente tiene un riesgo de padecer una insuficiencia respiratoria. Por ejemplo, el valor umbral predeterminado representa la concentración medida en promedio en pacientes sanos, a saber, pacientes que no desarrollarán una insuficiencia orgánica. Típicamente, una concentración más baja que el valor umbral predeterminado según se determinó en pacientes sanos predice la insuficiencia orgánica, más particularmente, la insuficiencia respiratoria, en las 48-72 horas posteriores a la admisión a la UCI de pacientes con sepsis grave y choque séptico.

El método de la invención, por lo tanto, puede ser útil para clasificar a pacientes que padecen sepsis y después se puede usar para elegir el tratamiento preciso en la unidad de cuidados intensivos. Por ejemplo, los pacientes con un riesgo alto de desarrollar una insuficiencia respiratoria, una insuficiencia renal o trombopenia pueden recibir un tratamiento y atención más intensivos en comparación con un paciente con un riesgo débil. Dicho método, por lo tanto, puede ayudar a un médico a tomar una decisión sobre el tratamiento terapéutico que puede consistir, por consiguiente, en administrar los fármacos precisos a los pacientes. Por lo tanto, los costes de los tratamientos se pueden adaptar a los pacientes admitidos a las unidades de cuidados intensivos y, por consiguiente, el método de la invención puede representar una herramienta útil para la gestión de dichas unidades. Finalmente, el método se puede aplicar para monitorizar el desenlace terapéutico de un paciente que padece sepsis.

Además, se describe el uso de ESM-1 como un marcador de una insuficiencia respiratoria, insuficiencia renal o trombopenia en un paciente séptico.

También se describe un kit para predecir el riesgo de padecer una insuficiencia orgánica seleccionada del grupo que consiste en insuficiencia respiratoria, insuficiencia renal o trombopenia, que comprende medios para medir la concentración de ESM-1. El kit puede incluir un anticuerpo o un conjunto de anticuerpos como se describió anteriormente. En particular, el anticuerpo o conjunto de anticuerpos están etiquetados como se describió anteriormente. El kit también puede contener otros reactivos y materiales envasados de manera adecuada necesarios para el protocolo de detección particular, incluidas matrices de fase sólida, si corresponden, y estándares. El kit también puede contener medios para la detección de otros marcadores de insuficiencia orgánica, tales como proteína C reactiva (CRP, por sus siglas en inglés) o procalcitonina (PCT, por sus siglas en inglés), IL-6, TNFa.

La invención se ilustrará adicionalmente mediante las siguientes figuras y ejemplos. Sin embargo, estos ejemplos y figuras no se deben interpretar de ninguna forma como una limitación al alcance de la presente invención.

Descripción de las figuras

Figura 1. Aumento de niveles de endocan en plasma en pacientes con sepsis grave (Sepsis Sévére) y choque séptico (Choc Septique) en comparación con voluntarios sanos (Temoin) (*: p<0,05).

Figura 2. Endocan e insuficiencia respiratoria. A: niveles de endocan en pacientes sin insuficiencia respiratoria (0), con ALI/ARDS (1) a las 48 h (*: p<0,05). B: niveles de endocan en pacientes sin insuficiencia respiratoria (0), con ALI/ARDS (1) a las 72 h (*: p<0,05).

Figura 3. Endocan y gravedad respiratoria. A: niveles de endocan en pacientes sin insuficiencia respiratoria (0), con ALI (ALI), con ^a R^dS (SDRA) a las 48 h. B: niveles de endocan en pacientes sin insuficiencia respiratoria (0), con ALI (ALI), con ARDS (SDRA) a las 72 h.

Figura 4. Curva ROC de niveles de endocan en plasma en la inclusión con la presencia de insuficiencia respiratoria a las 48 h. AUC: Área bajo la curva. La tabla debajo del gráfico indica la sensibilidad y especificidad calculadas dependiendo del valor de niveles de endocan en plasma. Los casos en gris establecen el corte de endocan (3,55 ng/mL) para el mejor valor de sensibilidad/especificidad (84,62 %, 100 %, respectivamente).

Descripción detallada de la invención

EJEMPLO 1:

El nivel alto de endocan en sangre selecciona pacientes sépticos con insuficiencia respiratoria (definida mediante Pa02/Fi02 < 200) y/o con insuficiencia renal (definida mediante creatinina > 20 mg/mL) y/o trombopenia (Tabla 1).

EJEMPLO 2: LOS NIVELES BAJOS DE ENDOCAN PREDICEN LA INSUFICIENCIA RESPIRATORIA EN LAS 48­ 72 HORAS POSTERIORES A LA ADMISIÓN EN LA UCI EN PACIENTES CON SEPSIS GRAVE Y CHOQUE SÉPTICO

Introducción:

La lesión pulmonar aguda (ALI, por sus siglas en inglés) y el síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS, por sus siglas en inglés) son trastornos clínicos comunes caracterizados por lesión epitelial alveolar y endotelial que conducen al desarrollo de una insuficiencia respiratoria aguda. Estos se distinguen por el intercambio gaseoso pulmonar. El término ALI se refiere a pacientes con una relación de PaO²/FiO² de < 300 mmHg, mientras que una relación de < 200 mmHg define al ARDS. Tanto ALI como ARDS pueden producirse como una lesión pulmonar directa, tal como neumonía, aspiración, contusión pulmonar o inhalación tóxica, o una agresión extrapulmonar indirecta tal como sepsis, que es la causa más prevalente y fatal de ARDS, pero también múltiples transfusiones de productos sanguíneos, pancreatitis aguda, traumatismo no torácico con choque, coagulación intravascular diseminada (DIC, por sus siglas en inglés). La incidencia de ALI o ARDS se estimó en 7,1 % de todos los pacientes admitidos a una unidad de cuidados intensivos (UCI). La tasa de mortalidad asociada con ARDS y ALI se estimó en 30-40 %. Para la mayoría de los pacientes con ARDS, el desenlace clínico se determina en los primeros 7-10 días después del diagnóstico, dado que, dentro de este período, la mitad de los pacientes ha muerto o ha dejado de usar respirador mecánico. Los supervivientes de ARDS recuperan la función pulmonar en 6-12 meses, pero a menudo permanecen anomalías residuales, que incluyen restricción/obstrucción leve, intercambio gaseoso alterado durante el ejercicio o capacidad de difusión disminuida.

Los indicadores pronósticos para una mayor mortalidad incluyen edad avanzada, la presencia de disfunción orgánica no pulmonar, cirrosis hepática, neoplasia maligna activa y choque séptico; mientras que el grado inicial de alteración del intercambio gaseoso es un factor pronóstico malo del desenlace clínico. Un biomarcador simple, preciso y basado en sangre capaz de evaluar la gravedad inicial de ALI / ARDS y seguir de cerca la evolución del fenómeno inflamatorio sería de gran ayuda para que los médicos predijeran el desenlace y para seleccionar de manera más apropiada las medidas terapéuticas.

ALI / ARDS se pueden dividir en las fases exudativa, proliferativa y fibrótica con superposiciones significativas. La fase exudativa se produce en la fase aguda inicial (1-7 días después de la lesión) y se caracteriza por daño alveolar difuso (DAD) con necrosis de células alveolares tipo I, edema intersticial y alveolar rico en proteínas, hemorragia e infiltrados alveolares neutrófilos difusos. La fase proliferativa comienza típicamente 1-2 semanas después de la agresión original y se caracteriza por la proliferación e hiperplasia de células alveolares de tipo II, y mediante la proliferación de fibroblastos en el intersticio y más tarde dentro de la luz alveolar. Solo algunos pacientes ingresan a la fase fibrótica, que comienza típicamente 10-14 días después de la lesión inicial. Se caracteriza por acumulación de linfocitos y macrófagos, así como fibrosis, y vasos tortuosos estrechados por engrosamiento miointimal y fibrosis mural.

Los neutrófilos se consideran como los principales actores en los procesos inflamatorios asociados con ALI / ARDS. Se acumulan en el tejido pulmonar y el fluido de lavado broncoalveolar de pacientes con ARDS. Los neutrófilos luchan contra los microorganismos invasores, pero también pueden causar daño celular mediante la producción y secreción de mediadores proinflamatorios, radicales libres, especies de oxígeno reactivo y proteasas. Esos hallazgos respaldan la noción de que la inflamación dependiente de neutrófilos no solo es el resultado, sino también la causa de ALI. Sin embargo, los mecanismos reguladores específicos que controlan la acumulación de PMN en el pulmón durante ALI / ARDS no se entienden completamente.

El daño diana principal en caso de lesión indirecta, tal como la observada en la sepsis, es el endotelio pulmonar. Nuestra comprensión de los mecanismos que rigen las respuestas patofisiológicas de células endoteliales en ARDS permanece incompleta. La lesión endotelial aumenta la permeabilidad vascular y, por lo tanto, promueve la formación de edema pulmonar. Sin embargo, las células endoteliales también se pueden activar independientemente en cualquier daño celular, incluida la (i) inducción de coagulación local resultante del depósito de fibrina en exceso, (ii) sobreexpresión de moléculas de adhesión tales como ICAM-1, favoreciendo el reclutamiento y la migración de leucocitos hacia el intersticio y los espacios alveolares. Esto puede relacionarse con un aumento de ICAM-1 soluble en la sepsis grave, sin embargo, ICAM-1 también se expresa en fibroblastos y leucocitos, lo que reduce la selectividad de la expresión de sICAM-1 al endotelio pulmonar. Además, el endotelio pulmonar capilar se caracteriza por la ausencia de expresión de otras 2 moléculas de adhesión importantes E-selectina y VCAM-1, incluso después del endotelio capilar activado a partir de ARDS pulmonar.

Por otro lado, hay datos emergentes y contundentes que pueden considerar endocan como un biomarcador de células endoteliales vasculares pulmonares activadas. El endocan (o ESM-1) se ha identificado como un proteoglucano específico de células endoteliales constituido por un núcleo proteico de 20 kDa y una cadena única de glucosaminoglicano de sulfato de condroitina / dermatán sulfato, enlazados por O a la serina 137. El endocan se expresa principalmente en el pulmón y, en menor medida, en los capilares del riñón. La selectividad por capilares pulmonares es impulsada por una secuencia promotora corta Citocinas como TNF o IL-1 o LPS bacteriana desencadenan la síntesis y secreción de endocan por células endoteliales. El endocan se une a su receptor, la integrina LFA-1 de leucocitos e inhibe la interacción LFA-1 / ICAM-1, lo que sugiere un papel del endocan en el control de la diapédesis leucocitaria. Estudios iniciales han demostrado que los niveles de endocan en sangre aumentan en pacientes con sepsis grave, lo que funciona como una característica pronóstica mala, así como procalcitonina, en la actualidad el mejor marcador pronóstico de sepsis.

Para explicar cómo pueden producirse ALI / SDRA durante la sepsis, hipotetizamos que poco después de la exposición bacteriana pulmonar, macrófagos activados liberan IL-8 para reclutar neutrófilos, y TNFa que, a su vez, activa las células endoteliales pulmonares para expresar ICAM-1 y endocan para controlar la diapédesis leucocitaria. Pero si la sepsis es suficientemente grave para inducir la activación intravascular de neutrófilos, se produce la proteólisis de endocan inducida por proteasas neutrófilas, que conduce a exacerbar la diapédesis neutrófila y desencadenar la insuficiencia orgánica. Si nuestra hipótesis es correcta, entonces deberíamos ser capaces de hallar un vínculo entre la cinética de endocan y la aparición de la insuficiencia respiratoria durante la sepsis grave.

Pacientes y métodos:

Se inscribieron prospectivamente veintiún pacientes y nueve voluntarios normales en el presente estudio. Todos los pacientes vinieron de la Unidad de Ciudades Intensivos en el Hospital Universitario de Lille. Los criterios de inclusión fueron pacientes con sepsis grave o choque séptico, de acuerdo con la clasificación de ACC/SCCM. Los criterios de no inclusión fueron edad < 18 años y embarazo. Los criterios de exclusión fueron choque séptico con origen no séptico y terapias inmunosupresoras 1 mes antes de la admisión en la UCI.

Los índices de disfunción orgánica se recogieron en la inclusión y a las 24 h, 48 h y 72 h: escala de coma de Glasgow < 14, PaO2 < 9,75 kPa, saturación de oxígeno < 92 %, ALI (PaO2/FiO2 < 300), ARDS (PaO2/FiO2 < 200), presión sanguínea sistólica < 90 mmHg, caída de la presión sanguínea sistólica > 40 mmHg con respecto al valor inicial, pH < 7,3, lactato > 2,5 mmol/l, creatinina > 177 pmol/l, duplicación de creatinina en pacientes con enfermedad renal conocida, oliguria < 30 ml/hora durante > 3 horas o < 0,7 1/24 horas, tiempo de protrombina < 0,6 s (referencia 0,70-1,30 s), plaquetas < 100 * 109/1, bilirrubina > 43 pmol/l e íleo paralítico. El choque séptico se definió como hipotensión persistente a pesar de la rehidratación con líquido adecuada durante al menos 1 hora.

Se tomaron muestras de sangre en tubo de citrato de 5 mL de los pacientes incluidos en la admisión a la UCI. Las muestras después se centrifugaron a 3000 g durante 15 min a 4 °C, se dividieron en alícuota con 500 pL de plasma por tubo y después se congelaron a -80 °C en 1,5 horas. Se determinaron los niveles de endocan mediante ELISA (Lunginnov, Francia).

Los datos se presentaron como la mediana y la amplitud intercuartílica o como la media ± desviación estándar. El análisis de los datos incluyó comparación por análisis de varianza de niveles de endocan en plasma en la inclusión y la presencia o ausencia de cada insuficiencia orgánica en cada punto del tiempo del estudio. Cuando fueron significativos, los grupos se compararon de 2 en 2 al usar pruebas a posteriori con corrección de Bonferroni. El valor pronóstico de endocan se realizó mediante la curva ROC. Todos los cálculos estadísticos se llevarán a cabo con el paquete de software estadístico SPSS.

Resultados:

Los niveles de endocan en plasma aumentaron en la sepsis grave (3,96 ± 3,35 ng/mL) y en el choque séptico (4,33 ± 5,01 ng/mL) con respecto a los testigos sanos (0,67 ± 0,25 ng/mL) (p<0,05) (Figura 1).

Los pacientes con insuficiencia respiratoria a las 48 h y/o 72 h revelaron niveles bajos significativos de endocan en plasma en la inclusión que los pacientes sin insuficiencia respiratoria en los mismos puntos de tiempo (p<0,05, Figura 2).

Los niveles de endocan en plasma no distinguieron ALI de ARDS. Fueron bajos en ambos grupos (Figura 3).

La curva ROC entre endocan y la insuficiencia respiratoria a las 48 h indicó un AUC = 0,923 (p<0,05). Los valores de endocan < 3,55 ng/mL en la admisión predicen insuficiencia respiratoria a las 48 h con 84,62 % de sensibilidad y 100 % de especificidad (Figura 4).

REFERENCIAS:

A lo largo de la presente solicitud, varias referencias describen el estado de la técnica a la que pertenece la presente invención.

Claims (2)

REIVINDICACIONES

1. Un método para predecir el riesgo de tener insuficiencia respiratoria en un paciente que tiene sepsis grave o choque séptico que comprende una etapa que consiste en medir la concentración de endocan en una muestra de sangre obtenida de dicho paciente séptico y una etapa de comparar la concentración de endocan con un valor umbral predeterminado que representa la concentración medida en promedio en pacientes sanos y en donde una concentración menor que el valor umbral predeterminado predice insuficiencia respiratoria en las 48-72 horas posteriores a la admisión en la UCI del paciente que tiene sepsis grave o choque séptico.

2. El método según la reivindicación 1, en donde la muestra de sangre es una muestra de sangre entera, suero o plasma.