ES2710948T3

ES2710948T3 - Composiciones y usos médicos de las mismas

Info

Publication number: ES2710948T3
Application number: ES14171762T
Authority: ES
Inventors: Doris Stoffers; Leon Diva D De; Charles Stanley
Original assignee: Childrens Hospital of Philadelphia CHOP; University of Pennsylvania Penn
Current assignee: Childrens Hospital of Philadelphia CHOP; University of Pennsylvania Penn
Priority date: 2007-01-08
Filing date: 2008-01-08
Publication date: 2019-04-29
Anticipated expiration: 2028-01-08
Also published as: US20180050095A1; EP2120994A2; US20080269130A1; US20190336584A1; US10987407B2; PT3456340T; DK3456340T3; EP2120994A4; EP2818181B1; US20240082361A1; PL3456340T3; ES2908838T3; SI3456340T1; EP3456340A1; EP2120994B1; LT3456340T; US10188702B2; HRP20220346T3; ES2499390T3; US20100190700A1

Abstract

Un antagonista del receptor del péptido similar al glucagón-1 (GLP-1) para uso en el tratamiento de la hipoglucemia posprandial, en donde dicho antagonista es el péptido presentado en la SEQ ID N.º 1.

Description

DESCRIPCION

Composiciones y usos medicos de las mismas

Campo de la invencion

Esta invencion proporciona composiciones para uso en el tratamiento de la hipoglucemia posprandial.

Antecedentes de la invencion

El hiperinsulinismo congenito (HI) es un trastorno genetico de la funcion de las celulas pancreaticas p caracterizado por el fracaso para suprimir la secrecion de insulina en presencia de hipoglucemia, dando como resultado un dano cerebral o la muerte si se trata inadecuadamente. Las mutaciones de la lmea germinal en cinco genes han sido asociadas con el HI: el receptor de sulfonilurea (SUR-1, codificado por ABCC8), un canal de potasio rectificador de entrada (Kir6.2, codificado por KCNJ11), glucocinasa (GCK), glutamato deshidrogenasa (GLUD-1) y L-3-hidroxiacil-CoA de cadena corta (SCHAD, codificada por HADSC). Las mutaciones con perdida de funcion en el canal K^atp(compuesto por dos subunidades: Kir6.2 y SUR-1) son responsables de la forma mas comun y severa de HI (K^atpHI), con muchos pacientes que requieren una pancreatectoirna casi total para controlar la hipoglucemia, lo que lleva a largas estancias hospitalarias y a complicaciones potencialmente mortales.

La hipoglucemia posprandial es una complicacion frecuente en la funduplicatura de Nissen (por ejemplo, en ninos), un procedimiento que se lleva a cabo comunmente para tratar reflujo gastroesofagico severo. Hasta un 30 % de los pacientes que se estan sometiendo a este proceso desarrollan el smdrome de Dumping. El smdrome de Dumping se caracteriza por smtomas tempranos o “dumping temprano” debido a los cambios de lfquido provocados por la carga osmotica en el intestino delgado y el "dumping tardfo" o hipoglucemia posprandial. La hipoglucemia posprandial tambien puede ser causada por una cirugfa de bypass gastrico para la obesidad.

Se necesitan con urgencia tratamientos eficaces para el HI congenito y la hipoglucemia posprandial.

Sumario de la invencion

Esta invencion proporciona un antagonista del receptor del peptido similar al glucagon tipo 1 (GLP-1) para uso en el tratamiento de la hipoglucemia posprandial, en donde dicho antagonista es el peptido, presentado en la SEQ ID N.° 1. En una realización, la hipoglucemia posprandial se asocia con una cirugfa de bypass gastrico o con una funduplicatura de Nissen. En una realización, el antagonista se administra subcutaneamente.

Breve descripcion de las figuras

La invencion se comprendera mejor a partir de la lectura de la siguiente descripcion detallada tomada conjuntamente con los dibujos en los que se utilizan indicadores a modo de referencia para designar elementos similares, y en los cuales:

La Figura 1 muestra la hipoglucemia en ayunas y la alteracion de la tolerancia a la glucosa en ratones SUR-1--. (A) Niveles de glucosa en sangre en ayunas (en mg/dl) en ratones SUR-1-- (n = 27) y en controles naturales de la misma camada (n = 30), p = 0,00000003. (B) Peso corporal (en g) de los ratones SUR-1-- (n = 27) y de los controles naturales de la misma camada (n = 30). (C) Tolerancia a la glucosa oral (2 g/kg) en ratones SUR-1-- (n = 23) (lmea continua y drculos) y en controles naturales de la misma camada (n = 25) (lmea discontinua y cuadrados abiertos), p <0,0001, ANOVA de medidas repetidas. (D) Secrecion de insulina en respuesta a una carga de glucosa oral (2 g/kg) en ratones SUR-1-- (n = 8) (lmea solida y drculos) en comparacion con controles naturales de la misma camada (n = 9) (lmea discontinua y cuadrados abiertos), p = 0,02, ANOVA de medidas repetidas;

La Figura 2 muestra los niveles de glucosa en sangre en ayunas normalizados con exendina-(9-39) en ratones SUR-1--. Los niveles de glucosa en sangre se determinaron despues de 12-16 horas de ayuno el dfa 7. Ratones naturales de la misma camada tratados con vehmulo (n = 13) (barra blanca); ratones naturales de la misma camada tratados con exendina-(9-39) (n = 10) (barra rayada); ratones SUR-1-- tratados con vehmulo (n = 11) (barra negra); ratones SUR-1-' tratados con exendina-(9-39) (n = 11) (barra gris);

La Figura 3 muestra el perfil hormonal en ayunas. (A) Niveles de glucagon y de insulina en ayunas en ratones naturales tratados con vehmulo (n = 15) (barra blanca), ratones naturales tratados con exendina-(9-39) (n = 14) (barra rayada), ratones SUR-1- ' tratados con vehmulo (n = 13) (barra negra), y ratones SUR-1-/' tratados con exendina-(9-39) (n = 14) (barra gris). (B) Relacion de insulina a glucosa en ratones naturales tratados con vehmulo (n = 9) (barra blanca), ratones naturales tratados con exendina-(9-39) (n = 10) (barra rayada), ratones SUR-1--tratados con vehmulo (n = 9) (barra negra), y ratones SUR-1-- tratados con exendina-(9-39) (n = 10) (barra gris); La Figura 4 muestra que la exendina-(9-39) no influyo en la tolerancia a la glucosa ni en la sensibilidad a la insulina. (A) Tolerancia a la glucosa oral en ratones naturales de la misma camada tratados con vehmulo (n = 10) (lmea discontinua/cuadrados abiertos), ratones naturales tratados con exendina-(9-39) (n = 8) (lmea continua/cuadrados solidos), ratones SUR-1-- tratados con vehmulo (n = 9) (lmea discontinua/drculos abiertos), y ratones SUR-1--tratados con exendina-(9-39) (n = 9) (lmea continua/cmculos solidos). Ratones naturales tratados con vehmulo frente a ratones SUR-1/- tratados con vehmulo, p = 0,001, ANOVA de medidas repetidas; ratones SUR-1/- tratados con vehmulo frente a ratones SUR-1/- tratados con exendina-(9-39), p = 0,02 a los 120 min. (B) Sensibilidad a la insulina en ratones naturales tratados con vehmulo (n = 15) (lmea discontinua/cuadrados abiertos), ratones naturales tratados con exendina-(9-39) (n = 14) (lmea continua/cuadrados solidos), ratones SUR-1/- tratados con vehmulo (n = 13) (lmea discontinua/drculos abiertos), y ratones SUR-1/- tratados con exendina-(9-39) (n = 14) (lmea continua/drculos solidos);

La Figura 5 muestra el efecto de la exendina-(9-39) sobre la sensibilidad al combustible de los islotes SUR-1/-. Los islotes aislados de ratones SUR-1/- se cultivaron durante 3 dfas en medio RPMI 1640 que contema glucosa 10 mM. Se perfundieron lotes de 100 islotes cultivados con una rampa de una mezcla fisiologica de aminoacidos (0-12 mM) en presencia (drculos abiertos) o en ausencia (drculos negros) de exendina-(9-39) a una concentracion 100 nM. Los resultados se presentan como las medias ± S.E. de 100 islotes procedentes de 3 perfusiones separadas para cada condicion;

La Figura 6 muestra que la exendina-(9-39) no tuvo ningun impacto sobre el [Ca2+] en los islotes SUR-1/-. Los islotes de raton SUR-1/- aislados se cultivaron con glucosa 10 mM durante 3 dfas sobre cubreobjetos. Se midio el [Ca2+]i de forma continua mediante la fluorescencia de Fura-2 en respuesta a los aminoacidos (4 mM) en presencia (lmea gris) o en ausencia (lmea negra) de exendina-(9-39). Se muestran experimentos representativos. Todos los estudios se repitieron al menos 3 veces y mostraron resultados comparables; y

La Figura 7 muestra un esquema que describe el mecanismo de accion propuesto de la exendina-(9-39) en los islotes SUR-1/-. En los islotes de raton SUR-1/-, la despolarizacion de la membrana plasmatica da como resultado una elevacion del Ca2+ citosolico y la desregulacion de la secrecion de insulina. La exendina-(9-39) se une al receptor de GLP-1 y disminuye los niveles basales de cAMP, lo que da como resultado la disminucion de la secrecion de insulina a pesar de los niveles elevados de calcio. De modo similar, al disminuir la acumulacion de cAMP estimulada por aminoacidos, la exendina-(9-39) inhibe la secrecion de insulina estimulada por aminoacidos.

Descripcion detallada de la invencion

Esta invencion proporciona un antagonista del receptor del peptido similar al glucagon tipo 1 (GLP-1) para uso en el tratamiento de hipoglucemia posprandial, en donde dicho antagonista es el peptido presentado en la SEQ ID N°. 1. En una realización, la hipoglucemia posprandial se asocia con una cirugfa de bypass gastrico o con una funduplicatura de Nissen.

Como se describe en la presente memoria, una perfusion continua de exendina-(9-39) elevo los niveles de glucosa en sangre en ayunas en ratones normales, un efecto que ha sido observado en los babuinos y en los sujetos humanos sanos. Cuando se administra como una perfusion continua, la exendina-(9-39) aumenta significativamente los niveles de glucosa en sangre en ayunas en ratones portadores de una mutacion completa en el SUR-1, sin afectar significativamente al aumento de peso, tolerancia a la glucosa o sensibilidad a la insulina. Tambien se describe que la relacion elevada de insulina/glucosa se disminuye con la exendina-(9-39), lo que indica que el efecto de la exendina-(9-39) esta mediado por el receptor de GLP-1 en el islote sin tener ningun impacto significativo sobre otras acciones mediadas por el receptor de GLP-1 periferico o central.

En una realización, la exendina-(9-39) o sus analogos y fragmentos descritos en la presente memoria, suprimen la secrecion de insulina estimulada por aminoacidos. En otra realización la exendina-(9-39) o sus analogos y fragmentos descritos en la presente memoria, bloquean la estimulacion por nutrientes anormales de la secrecion de insulina en ausencia de canales de K+ATP funcionales. En una realización, la exendina-(9-39) o sus analogos y fragmentos descritos en la presente memoria, disminuyen la secrecion de insulina basal y de insulina estimulada por aminoacidos y la acumulacion de cAMP intracelular. En consecuencia, y en una realización, la exendina-(9-39) corrige el patron anormal de secrecion de insulina responsable de la hipoglucemia: la secrecion de insulina basal elevada en ausencia de glucosa y la secrecion de insulina estimulada por aminoacidos.

En otra realización, el antagonista del receptor de GLP-1 R suprime la secrecion de insulina por el sujeto.

Como se indica en la presente memoria, los pacientes con hiperinsulinismo HI Katp presentan hipoglucemia en respuesta a la protema oral. Ademas, la exendina-(9-39) aumenta los niveles de glucosa en sangre en ayunas en ratones SUR-1'/_. Por lo tanto, la presente solicitud describe que la exendina-(9-39) y otro antagonista GLP-1R son eficaces en el tratamiento de hiperinsulinismo congenito.

En una realización, el AMP ciclico estimula la exocitosis por rutas dependientes de PKA (protema cinasa), a traves de la fosforilacion de dianas aguas abajo, incluyendo los canales de potasio sensibles a ATP (canal KATP), y por mecanismos independientes de PKA, a traves de la activacion de factores de intercambio de nucleotidos de guanina (GEFs), tales como cAMP-GEFII (tambien conocido como Epac). La ruta independiente de PKA es cntica en otra realización en la potenciacion de la secrecion de insulina por las hormonas incretinas GLP-1 y GIP y en una realización, ejerce su efecto sobre los granulos secretores que contienen insulina situados en el conjunto facilmente liberable. En los islotes pancreaticos, el efecto de cAMPGEFII sobre la secrecion de insulina depende en una realización del calcio citosolico, asf como del cAMP, y el cAMP sensibiliza en otra realización la maquinaria de exocitosis para el calcio. En una realización, la inhibicion de la secrecion de insulina en islotes SUR-1' ' mediante la exendina-(9-39) o sus analogos y fragmentos descrita en la presente memoria, esta mediada por el efecto de cAMP sobre una etapa tardfa dependiente de calcio en la ruta de exocitosis que implica el conjunto facilmente liberable de granulos de insulina (Figura 7).

La Figura 7 muestra un esquema que describe el mecanismo de accion propuesto de la exendina-(9-39) en los islotes SUR-1'1'. En los islotes de raton SUR-1'1', la despolarizacion de la membrana plasmatica da como resultado una elevacion del Ca2+ citosolico y la desregulacion de la secrecion de insulina. La exendina-(9-39) se une al receptor de GLP-1 y disminuye los niveles basales de cAMP, lo que da como resultado la disminucion de la secrecion de insulina a pesar de los niveles elevados de calcio. De modo similar, al disminuir la acumulacion de cAMP estimulada por aminoacidos, la exendina-(9-39) inhibe la secrecion de insulina estimulada por aminoacidos. La presente solicitud describe tambien un metodo para tratar a un sujeto con una hipoglucemia posprandial, que comprende la etapa de administrar al sujeto un antagonista del receptor de GLP-1, tratando asf a un sujeto con una hipoglicemia posprandial.

La presente solicitud tambien describe un metodo para reducir una incidencia de una hipoglucemia posprandial en un sujeto, que comprende la etapa de administrar al sujeto un antagonista de GLP-1R, reduciendo asf la incidencia de una hipoglucemia posprandial en un sujeto.

La presente solicitud tambien describe un metodo para mitigar una hipoglucemia posprandial en un sujeto, que comprende la etapa de administrar al sujeto un antagonista de GLP-1R, mitigando asf una hipoglucemia posprandial en un sujeto.

La presente solicitud tambien describe un metodo para inhibir el desarrollo de una hipoglucemia posprandial en un sujeto, que comprende la etapa de administrar al sujeto un antagonista de GLP-1R, inhibiendo asf un desarrollo de una hipoglucemia posprandial en un sujeto.

La presente solicitud tambien describe un metodo para disminuir el requerimiento de glucosa para mantener la euglucemia de un sujeto con hipoglucemia posprandial, que comprende la etapa de administrar al sujeto un antagonista de GLP-1R, disminuyendo asf el requerimiento de glucosa para mantener la euglucemia. de un sujeto con hipoglucemia posprandial.

En otra realización, el antagonista de GLP-1R suprime la secrecion de insulina por parte del sujeto.

Como se describe en la presente memoria, la hipoglucemia posprandial despues de la funduplicatura de Nissen se caracterizan por niveles altos de insulina y GLP-1 despues de la carga de glucosa oral. Ademas, la exendina-(9-39) antagoniza la senalizacion de GLP-1. Por lo tanto, la presente solicitud describe que la exendina-(9-39) y otros antagonistas de GLP-1R son eficaces en el tratamiento de la hipoglucemia posprandial (por ejemplo, en respuesta a la funduplicatura de Nissen o a la cirugfa de bypass gastrico).

La hipoglucemia posprandial tratada por la presente invencion, se asocia, en otra realización, con una funduplicatura de Nissen. En otra realización, la hipoglucemia posprandial ocurre despues de una funduplicatura de Nissen.

En otra realización, la hipoglucemia posprandial se asocia con una cirugfa de bypass gastrico. En otra realización, la hipoglucemia posprandial ocurre despues de una cirugfa de bypass gastrico.

En otra realización, el antagonista de GLP-1R se administra despues del diagnostico de la hipoglucemia posprandial. En otra realización, el antagonista de GLP-1R se administra despues de una cirugfa de bypass gastrico. En otra realización, el antagonista de GLP-1R se administra durante de una cirugfa de bypass gastrico. En otra realización, el antagonista de GLP-1R se administra antes de una cirugfa de bypass gastrico.

En otra realización, el antagonista de GLP-1R se administra despues de una funduplicatura de Nissen. En otra realización, el antagonista de GLP-1R se administra durante de una funduplicatura de Nissen. En otra realización, el antagonista de GLP-1R se administra antes de una funduplicatura de Nissen.

El antagonista de GLP-1R utilizado en la presente invencion, es, en otra realización, un analogo de GLP-1. En otra realización, el analogo es un antagonista de GLP-1R.

En otra realización, el analogo es resistente a la escision por una dipeptidilpeptidasa-IV (DPPIV). En otra realización, el analogo muestra una vida media biologica prolongada con respecto a GLP-1- En otra realización, el analogo es resistente a la degradacion por DPPIV.

“Resistente a la escision” se refiere, en otra realización, a la resistencia a la proteolisis por la DPPIV con respecto a GLP-1. En otra realización, el termino se refiere a la resistencia con respecto a un fragmento de GLP-1. En otra realización, el termino se refiere a la resistencia a la proteolisis por otra dipeptidilpeptidasa. En otra realización, la dipeptidilpeptidasa es DPP10 (protema 3 relacionada con dipeptidilpeptidasa-IV). En otra realización, la dipeptidilpeptidasa es DPP7. En otra realización, la dipeptidilpeptidasa es DPP6. En otra realización, la dipeptidilpeptidasa es DPP3. En otra realización, la dipeptidilpeptidasa es DPP9.

En otra realización, el antagonista del receptor de GLP-1R utilizado en la presente invencion presenta una mejora en una propiedad biologica deseable con respecto al GLP-1. En otra realización, la propiedad biologica que se mejora es la semivida biologica. En otra realización, la propiedad biologica que se mejora es la afinidad por el receptor de GLP-1R. En otra realización, la propiedad biologica que se mejora es la potencia del antagonismo del receptor de GLP-1R.

En otra realización, el antagonista del receptor de GLP-1R comprende un grupo amida en su C-terminal (por ejemplo, el extremo de un peptido que normalmente contiene un grupo carboxi). En otra realización, el grupo amida confiere una mejora en una propiedad biologica deseable por el antagonista. En otra realización, la propiedad es la resistencia a la proteolisis. En otra realización, la propiedad biologica que se mejora es la semivida biologica. En otra realización, la propiedad biologica que se mejora es la afinidad por el receptor de GLP-1R. En otra realización, la propiedad biologica que se mejora es la potencia del antagonismo del receptor de GLP-1R.

En otra realización, el antagonista es un peptido de exendina (9-39) (Ex9-39). En otra realización, el peptido se conoce tambien como "exendina-3". En esta invencion, el peptido tiene una secuencia presentada en la SEQ ID No: 1. En otra realización, el fragmento es un antagonista de un receptor de GLP-1R. En otra realización, el fragmento presenta una semivida biologica prolongada con respecto al GLP-1. En otra realización, el fragmento es resistente a la escision por DPPIV. En otra realización, el fragmento es resistente a la degradacion por DPPIV.

En otra realización, el antagonista es exendina (9-39). En otra realización, el peptido exendina9-39 tiene la secuencia: DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-amida (SEQ ID N.°: 1).

En otra realización, un antagonista del receptor de GLP-1R es un compuesto mimetico de Ex9-39. En otra realización, el compuesto mimetico presenta resistencia a la proteasa con respecto al GLP-1. En otra realización, el compuesto mimetico es resistente a la degradacion por DPPlV.

En otra realización, uno o mas de los extremos terminales del compuesto mimetico se derivatiza para incluir un grupo de bloqueo, esto es, un sustituyente qmmico adecuado para proteger y/o estabilizar los terminales N y C de una degradacion indeseable. En otra realización, "degradacion indeseable" se refiere a cualquier tipo de descomposicion enzimatica, qmmica o bioqmmica del compuesto en sus extremos terminales lo que es probable que afecte a la funcion del compuesto, esto es, la degradacion secuencial del compuesto en un extremo terminal del mismo.

En otra realización, los grupos de bloqueo incluyen grupos protectores utilizados convencionalmente en la tecnica de la qmmica de peptidos que no afecten negativamente a las actividades in vivo del peptido. Por ejemplo, se pueden introducir grupos adecuados de bloqueo del N-terminal mediante alquilacion o acilacion del N-terminal. Los ejemplos de grupos adecuados de bloqueo del N-terminal incluyen grupos alquilo C¹-C⁵ramificados o no ramificados, grupos acilo tales como grupos formilo y acetilo, asf como las formas sustituidas de los mismos, tal como el grupo acetamidometilo (Acm). Los analogos de desamino-aminoacidos son tambien grupos utiles de bloqueo del N-terminal, y pueden ser o bien acoplados al N-terminal del peptido o bien utilizados en lugar del residuo N-terminal. Los grupos adecuados de bloqueo de C-terminal, en los que el grupo carboxilo del C-terminal se incorpora o no, incluyen esteres, cetonas o amidas. Son ejemplos de grupos de bloqueo del C-terminal los grupos alquilo que forman esteres o cetonas, particularmente los grupos alquilo inferiores tales como metilo, etilo y propilo, y los grupos amino que forman amidas tales como aminas primarias (-NH²), y los grupos mono- y di-alquil-amino tales como metilamino, etilamino, dimetilamino, dietilamino, metiletilamino y similares. Los analogos de aminoacidos descarboxilados tal como agmatina son tambien grupos utiles de bloqueo del C-terminal y pueden ser acoplados al residuo C-terminal del peptido o pueden ser utilizados en lugar del mismo. En otra realización, los grupos amino y carboxilo libres en los extremos terminales se separan totalmente del peptido para producir formas desaminadas y descarboxiladas del mismo sin afectar a la actividad del peptido.

En otra realización, los compuestos mimeticos son sales de adicion de acido de un peptido de exendina. En otra realización, un peptido de exendina se trata con un acido inorganico tal como acido clorhfdrico, bromhidrico, sulfurico, mtrico, fosforico, y similares, o un acido organico tal como acido acetico, propionico, glicolico, piruvico, oxalico, malico, malonico, succmico, maleico, fumarico, tartarico, citrico, benzoico, cinamico, mandelico, metanosulfonico, etanosulfonico, p-toluenosulfonico, salicilico y similares, para proporcionar una sal del peptido soluble en agua adecuada para uso en la invencion.

En otra realización, un compuesto mimetico se produce por un procedimiento que comprende la etapa de derivatizacion qmmica in vivo o in vitro de un peptido de exendina, por ejemplo, acetilacion, o carboxilacion. Tambien se incluyen modificaciones de glucosilacion, por ejemplo, las realizadas modificando los patrones de glucosilacion de un polipeptido durante su smtesis y procesamiento o en etapas de procesamiento adicionales; por ejemplo, exponiendo el polipeptido a enzimas que afectan la glucosilacion, por ejemplo, enzimas de glucosilacion o desglucosilacion de mairnferos. En otra realización, un compuesto mimetico de la presente invencion comprende un residuo de aminoacidos fosforilados, por ejemplo, fosfotirosina, fosfoserina, o fosfotreonina.

Los metodos de identificacion de compuestos mimeticos son bien conocidos en la tecnica, y estan descritos, por ejemplo, en Song J et al, Biochem Cell Biol 76 (2-3): 177-188, 1998; Vogt A et al, J Biol Chem. 270 (2): 660-4, 1995;

Alexopoulos K et al, J Med Chem 47 (13): 3338-52, 2004; Andronati SA et al, Curr Med Chem 11 (9): 1183-211,

2004; Breslin MJ et al, Bioorg Med Chem Lett 13 (10): 1809-12, 2003; y en el documento WO 02/081649 ("ErbB

interface peptidomimetics and methods of use thereof') a nombre de Greene et al. En otra realización, la construccion del modelo se utiliza para disenar los compuestos mimeticos como se describe en una de las referencias anteriores. En otra realización, la solubilidad de los compuestos mimeticos se optimiza como se describe

en una de las referencias anteriores.

En otra realización, el mimetico de GLP-1 utilizado en la presente invencion muestra una mejora en una propiedad biologica deseable con respecto a GLP-1. En otra realización, el mimetico muestra una mejora en una propiedad biologica deseable en relacion a un fragmento de GLP-1 (por ejemplo, el fragmento de GLP-1 sobre el que se modelo el mimetico). En otra realización, la propiedad biologica es una vida media biologica mejorada. En otra realización, la propiedad biologica es una afinidad mejorada para GLP-1R. En otra realización, la propiedad biologica

es la disponibilidad oral mejorada. En otra realización, la propiedad biologica es una selectividad mejorada para

inhibir la secrecion de insulina. En otra realización, la propiedad biologica es una potencia mejorada para el antagonismo de GLP-1R.

En otra realización, el sujeto tratado segun la presente invencion es un sujeto humano. En otra realización, el sujeto

es un sujeto pediatrico. En otra realización, el sujeto es un nino. En otra realización, el sujeto es un joven. En otra realización, el sujeto es un recien nacido. En otra realización, el sujeto es un lactante. En otra realización, el sujeto

es un adolescente. En otra realización, el sujeto es un adulto.

En otra realización, el sujeto es menor de 10 anos de edad. En otra realización, es menor de 9 anos de edad. En

otra realización, es menor de 8 anos de edad. En otra realización, es menor de 7 anos de edad. En otra realización,

es menor de 6 anos de edad. En otra realización, es menor de 5 anos de edad. En otra realización, es menor de 4

anos de edad. En otra realización, es menor de 3 anos de edad. En otra realización, es menor de 2 anos de edad.

En otra realización, es menor de 18 meses de edad. En otra realización, es menor de 1 ano de edad. En otra realización, es menor de 10 meses de edad. En otra realización, es menor de 8 meses de edad. En otra realización,

es menor de 6 meses de edad. En otra realización, es menor de 4 meses de edad. En otra realización, es menor de

3 meses de edad. En otra realización, es menor de 2 meses de edad. En otra realización, es menor de 1 mes de

edad.

En otra realización, el sujeto es mayor de 6 meses de edad. En otra realización, es mayor de 1 ano de edad. En otra realización, es mayor de 2 anos de edad. En otra realización, es mayor de 3 anos de edad. En otra realización, es

mayor de 5 anos de edad. En otra realización, es mayor de 7 anos de edad. En otra realización, es mayor de 10

anos de edad. En otra realización, es mayor de 15 anos de edad. En otra realización, es mayor de 20 anos de edad. En otra realización, es mayor de 30 anos de edad. En otra realización, es mayor de 40 anos de edad. En otra realización, es mayor de 50 anos de edad. En otra realización, es mayor de 60 anos de edad. En otra realización, es

mayor de 65 anos de edad. En otra realización, es mayor de 70 anos de edad.

En otra realización, la edad del sujeto es de 1 mes a 5 anos. En otra realización, la edad es de 2 meses a 5 anos. En

otra realización, la edad es de 3 meses a 5 anos. En otra realización, la edad es de 4 meses a 5 anos. En otra realización, la edad es de 6 meses a 5 anos. En otra realización, la edad es de 9 meses a 5 anos. En otra realización, la edad es de 1-5 anos. En otra realización, la edad es de 2-5 anos. En otra realización, la edad es de 3

5 anos. En otra realización, la edad es 1-10 anos. En otra realización, la edad es de 1-5 anos. En otra realización, la

edad es de 2-10 anos. En otra realización, la edad es de 3-10 anos. En otra realización, la edad es de 5-10 anos. En

otra realización, la edad es de 1-6 meses. En otra realización, la edad es de 2-6 meses. En otra realización, la edad

es de 3-12 meses. En otra realización, la edad es de 6-12 meses.

En otra realización, el antagonista del receptor de GLP-1R se administra por perfusion. En otra realización, la administracion comprende el uso de una bomba.

Las composiciones farmaceuticas que contienen el antagonista del receptor de GLP-1R pueden ser administradas a

un sujeto, en otra realización, por cualquier metodo conocido por los expertos en la tecnica, tal como por via parenteral, transmucosal, transdermica, intramuscular, intravenosa, intradermica, subcutanea, intraperitoneal, intra ventricular, intra-craneal, intra-vaginal o intra-tumoral.

En otra realización de la presente invencion, las composiciones farmaceuticas se administran oralmente, y se formulan por lo tanto en una forma adecuada para la administracion oral, esto es, como una preparacion solida o

lfquida. Las formulaciones orales solidas adecuadas incluyen comprimidos, capsulas, pfldoras, granulos, pelets y similares. Las formulaciones orales lfquidas adecuadas incluyen soluciones, suspensiones, dispersiones, emulsiones, aceites y similares. En otra realización, el ingrediente activo se formula en una capsula. De acuerdo con

esta realización, las composiciones comprenden, ademas del compuesto activo y el vefnculo o diluyente inerte, una capsula de gelatina dura.

En otra realización, las composiciones farmaceuticas se administran por inyeccion intravenosa, intraarterial, o intramuscular de una preparacion l^quida. Las formulaciones Uquidas adecuadas incluyen soluciones, suspensiones, dispersiones, emulsiones, aceites y similares. En otra realización, las composiciones farmaceuticas se administran por via intravenosa y por lo tanto se formulan en una forma adecuada para administracion intravenosa. En otra realización, las composiciones farmaceuticas se administran por via intraarterial y por lo tanto se formulan en una forma adecuada para administracion intraarterial. En otra realización, las composiciones farmaceuticas se administran por via intramuscular y por lo tanto se formulan en una forma adecuada para administracion intramuscular.

En otra realización, las composiciones farmaceuticas se administran topicamente a las superficies corporales y por lo tanto se formulan en una forma adecuada para administracion topica. Las formulaciones topicas adecuadas incluyen geles, pomadas, cremas, lociones, gotas y similares. Para la administracion topica, el antagonista del receptor de GLP-1R o sus derivados fisiologicamente tolerados tales como sales, esteres, N-oxidos, y similares se preparan y se aplican como soluciones, suspensiones, o emulsiones en un diluyente fisiologicamente aceptable con o sin un vehnculo farmaceutico.

En otra realización, la composicion farmaceutica se administra como un supositorio, por ejemplo un supositorio rectal o un supositorio uretral. En otra realización, la composicion farmaceutica se administra por implantacion subcutanea de un pelet. En otra realización, el pelet proporciona la liberacion controlada del antagonista del receptor de GLP-1R durante un penodo de tiempo.

En otra realización, el compuesto activo se administra en una vesfcula, por ejemplo un liposoma.

En otras realizaciónes, los vehnculos o diluyentes usados en los metodos de la presente invencion incluyen, pero no se limitan a, una goma, un almidon (por ejemplo almidon de mafz, almidon pregelatinizado), un azucar (por ejemplo, lactosa, manitol, sacarosa, dextrosa), un material celulosico (por ejemplo celulosa microcristalina), un acrilato (por ejemplo polimetilacrilato), carbonato de calcio, oxido de magnesio, talco, o mezclas de los mismos.

En otras realizaciónes, los vetnculos farmaceuticamente aceptables para formulaciones lfquidas son soluciones acuosas o no acuosas, suspensiones, emulsiones o aceites. Ejemplos de disolventes no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, y esteres organicos inyectables tales como oleato de etilo. Los vetnculos acuosos incluyen agua, soluciones alcoholicas/acuosas, emulsiones o suspensiones, incluyendo solucion salina y medios tamponados. Son ejemplos de aceites los de origen animal, vegetal, o sintetico, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite de oliva, aceite de girasol, aceite de tngado de pescado, otros aceites marinos, o un lfpido de la leche o de los huevos.

En otra realización, los vehnculos parenterales (para inyeccion subcutanea, intravenosa, intraarterial, o intramuscular) incluyen solucion de cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, solucion de Ringer lactada y aceites fijos. Los vehnculos intravenosos incluyen reponedores de fluidos y nutrientes, reponedores de electrolitos tales como los basados en la dextrosa de Ringer, y similares. Son ejemplos los lfquidos esteriles tales como agua y aceites, con o sin la adicion de un tensioactivo y otros adyuvantes farmaceuticamente aceptables. En general, el agua, solucion salina, dextrosa acuosa y soluciones de azucares relacionados, y glicoles tales como propilenglicol o polietilenglicol son los vehnculos lfquidos preferidos, particularmente para soluciones inyectables. Son ejemplos de aceites los de origen animal, vegetal, o sintetico, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite de oliva, aceite de girasol, aceite de hngado de pescado, otros aceites marinos, o un lfpido de la leche o de los huevos.

En otras realizaciónes, las composiciones comprenden ademas aglutinantes (por ejemplo goma arabiga, almidon de mafz, gelatina, carbomero, etilcelulosa, goma guar, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, povidona), agentes disgregantes (por ejemplo almidon de mafz, almidon de patata, acido algmico, dioxido de silicio, croscarmelosa de sodio, crospovidona, goma guar, almidon-glicolato sodico), tampones (por ejemplo, Tris-HCl., acetato, fosfato) de diferentes pH y fuerza ionica, aditivos tales como albumina o gelatina para evitar la absorcion a superficies, detergentes (por ejemplo, Tween 20, Tween 80, Pluronic F68, sales de acidos biliares), inhibidores de la proteasa, tensioactivos (por ejemplo laurilsulfato de sodio), potenciadores de la permeacion, agentes solubilizantes (por ejemplo, glicerol, polietilenglicerol), antioxidantes (por ejemplo, acido ascorbico, metabisulfito de sodio, hidroxianisol butilado), estabilizantes (por ejemplo, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa), agentes para aumentar la viscosidad (por ejemplo, carbomero, dioxido de silicio coloidal, etilcelulosa, goma guar), edulcorantes (por ejemplo aspartamo, acido dtrico), conservantes (por ejemplo, timerosal, alcohol bendlico, parabenos), lubricantes (por ejemplo, acido estearico, estearato de magnesio, polietilenglicol, laurilsulfato de sodio), ayudantes de fluidez (por ejemplo, dioxido de silicio coloidal), plastificantes (por ejemplo ftalato de dietilo, citrato de trietilo), emulsionantes (por ejemplo carbomero, hidroxipropilcelulosa, laurilsulfato de sodio), recubrimientos polimericos (por ejemplo, poloxameros o poloxaminas), agentes de recubrimiento y formadores de pelfcula (por ejemplo, etilcelulosa, acrilatos, polimetacrilatos) y/o adyuvantes.

En otra realización, las composiciones farmaceuticas proporcionadas en la presente memoria son composiciones de liberacion controlada, esto es, composiciones en las que el antagonista del receptor de GLP-1R se libera durante un penodo de tiempo despues de la administracion. Las composiciones de liberacion controlada o sostenida incluyen la formulacion en depositos lipofilos (por ejemplo acidos grasos, ceras, aceites). En otra realización, la composicion es una composicion de liberacion inmediata, esto es, una composicion en la que todo el antagonista del receptor de GLP-1R se libera inmediatamente despues de la administracion.

En otra realización, la composicion farmaceutica se administra en un sistema de liberacion controlada. En otra realización, el agente se administra utilizando perfusion intravenosa, una bomba osmotica implantable, un parche transdermico, liposomas, u otros modos de administracion. En otra realización, se utiliza una bomba (vease Langer, supra; Sefton, CRC Crit Ref Biomed Eng 14: 201 (1987); Buchwald et al, Surgery 88: 507 (1980); Saudek et al., N. Engl J. Med 321: 574 (1989). En otra realización, se utilizan materiales polimericos; por ejemplo, en microesferas o en un implante. En otra realización mas, se coloca un sistema de liberacion controlada en la proximidad de la diana terapeutica, necesitando de este modo solo una fraccion de la dosis sistemica (vease, por ejemplo, Goodson, en Medical Applications of Controlled Release, supra, vol 2, pp 115-138 (1984); y Langer R, Science 249: 1527-1533 (1990).

Las composiciones incluyen tambien, en otra realización, la incorporacion del material activo en o sobre preparaciones en forma de partfculas de compuestos polimericos tales como poli(acido lactico), poli(acido glicolico), hidrogeles, etc., o sobre liposomas, microemulsiones, micelas, vesfculas unilamelares o multilamelares, fantasmas de eritrocitos, o esferoplastos). Tales composiciones influiran en el estado ffsico, solubilidad, estabilidad, velocidad de liberacion in vivo, y velocidad de aclaramiento in vivo.

Se incluyen tambien en la presente invencion composiciones en forma de partfculas recubiertas con polfmeros (por ejemplo poloxameros o poloxaminas) y el compuesto acoplado a anticuerpos que se dirigen contra receptores, ligandos o antfgenos espedficos de tejido o acoplado a ligandos de receptores espedficos de tejido.

Tambien estan comprendidos en la invencion los compuestos modificados por la union covalente de polfmeros solubles en agua tales como polietilenglicol, copolfmeros de polietilenglicol y polipropilenglicol, carboximetilcelulosa, dextrano, alcohol polivimlico, polivinilpirrolidona o poliprolina. Los compuestos modificados son conocidos por presentar semividas en sangre sustancialmente mas largas despues de inyeccion intravenosa que las de los correspondientes compuestos no modificados (Abuchowski et al, 1981; Newmark. et al, 1982, y Katre et al,. 1987). Tales modificaciones aumentan tambien, en otra realización, la solubilidad del compuesto en solucion acuosa, eliminan la agregacion, mejoran la estabilidad ffsica y qdmica del compuesto, y reducen en gran medida la inmunogenicidad y reactividad del compuesto. En otra realización, la actividad biologica in vivo deseada se logra mediante la administracion de dichos aductos de compuesto-polfmero menos frecuentemente o en dosis mas bajas que con el compuesto sin modificar.

La preparacion de composiciones farmaceuticas que contienen un componente activo, por ejemplo mediante mezclado, granulacion, o procesos de formacion de comprimidos, es bien conocida en la tecnica. El ingrediente terapeutico activo se mezcla a menudo con excipientes que son farmaceuticamente aceptables y compatibles con el ingrediente activo. Para la administracion oral, el antagonista del receptor de GLP-1R o sus derivados fisiologicamente tolerados tales como sales, esteres, N-oxidos, y similares se mezclan con aditivos habituales para este fin, tales como veldculos, estabilizantes, o diluyentes inertes, y se convierten por metodos usuales en formas adecuadas para la administracion, tales como comprimidos, comprimidos recubiertos, capsulas de gelatina dura o blanda, soluciones acuosas, alcoholicas u oleosas. Para la administracion parenteral, el antagonista del receptor de GLP-1R o sus derivados fisiologicamente tolerados tales como sales, esteres, N-oxidos, y similares, se convierten en una solucion, suspension o emulsion, si se desea con las sustancias habituales y adecuadas para este fin, por ejemplo, solubilizantes u otras sustancias.

Un componente activo se formula en la composicion, en otra realización, como formas de sales neutralizadas farmaceuticamente aceptables. Las sales farmaceuticamente aceptables incluyen las sales de adicion de acido (formadas con los grupos amino libres de la molecula de polipeptido o anticuerpo), que se forman con acidos inorganicos tales como, por ejemplo, acido clorddrico o fosforico, o acidos organicos tales como acido acetico, oxalico, tartarico, mandelico, y similares. Las sales formadas a partir de los grupos carboxilo libres tambien se pueden derivar de bases inorganicas tales como, por ejemplo, hidroxidos de sodio, potasio, amonio, calcio, o ferricos, y bases organicas tales como isopropilamina, trimetilamina, 2-etilaminoetanol, histidina, procama, y similares.

En otra realización, la dosis del antagonista del receptor de GLP-1R es 1 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 2 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 3 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 5 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 7 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 10 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 12 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 15 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 20 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 25 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 30 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 50 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 70 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 100 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 120 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 150 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 200 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 250 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 300 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 400 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 500 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 700 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 1000 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 1200 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 1500 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es mas de 1500 pmol/kg/min.

En otra realización, la dosis es 30-500 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 1-2 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 1-3 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 1-5 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 1-10 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 1-20 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 1-40 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 1-60 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 1-100 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 1-200 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 1-300 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 2-5 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 2-10 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 2-20 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 2-40 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 2-70 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 2-100 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 2-200 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 2-300 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 5-10 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 5-20 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 5-40 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 5-70 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 5-100 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 5-200 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 5-300 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 10-20 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 10-40 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 10-70 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 10-100 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 10-150 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 10-200 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 10-300 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 10-500 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 20-40 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 20-70 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 20-100 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 20-150 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 20-200 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 20-300 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 20-500 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 30-40 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 30-70 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 30-100 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 30-150 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 30-200 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 30-300 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 30-500 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 50-100 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 50-150 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 50-200 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 50-300 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 50-500 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 100-150 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 100-200 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 100-300 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 100-500 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 100-1000 pmol/kg/min. En otra realización, la dosis es 100-1500 pmol/kg/min.

En otra realización, la dosis es 20 nmol/kg/dfa. En otra realización, la dosis es 25 nmol/kg/dfa. En otra realización, la dosis es 30 nmol/kg/dfa. En otra realización, la dosis es 40 nmol/kg/dfa. En otra realización, la dosis es 60 nmol/kg/dfa. En otra realización, la dosis es 80 nmol/kg/dfa. En otra realización, la dosis es 100 nmol/kg/dfa. En otra realización, la dosis es 150 nmol/kg/dfa. En otra realización, la dosis es 200 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 300 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 400 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 600 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 800 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 1000 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 1200 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 1500 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 2000 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es mas de 2000 nmol/kgMa.

En otra realización, la dosis es 20-2000 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 20-700 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 20-100 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 20-200 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 20-300 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 20-500 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 20-1000 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 40-100 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 40-200 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 40-300 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 40-500 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 40-1000 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 60-100 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 60-150 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 60-200 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 60-300 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 60-500 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 60-1000 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 100-150 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 100-200 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 100-300 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 100-500 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 100-1000 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 100-1500 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 200-300 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 200-500 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 200-1000 nmol/kgMa. En otra realización, la dosis es 200-1500 nmol/kgMa.

En otra realización, se describe en la presente memoria, un kit que comprende un compuesto o composicion utilizado en un tratamiento de la presente invencion.

En una realización, el termino "administracion" se refiere a un metodo de poner en contacto, que puede ser directo o indirecto. En un metodo dicho contacto comprende la inyeccion directa de la celula diana a traves de cualquier medio bien conocido en la tecnica, tal como la microinyeccion. En otra realización, el suministro a la celula es indirecto, tal como a traves de la disposicion en un medio de cultivo que rodea a la celula, o la administracion a un sujeto, o a traves de cualquier via conocida en la tecnica. En otra realización, el termino significa que el antagonista del receptor de GLP-1R de la presente invencion se introduce en un sujeto que recibe el tratamiento, y se deja que el compuesto entre en contacto con el antagonista del receptor de GLP-1R in vivo.

"Administracion", en una realización, se refiere a poner en contacto directamente la celula diana con una composicion de la presente invencion. En otra realización, "poner en contacto" se refiere a poner en contacto indirectamente la celula diana, con una composicion de la presente invencion. En otra realización, los metodos de la presente invencion incluyen metodos en los que el sujeto se pone en contacto con un antagonista del receptor de GLP-1R que es puesto en contacto con la celula diana mediante difusion o cualquier otro procedimiento de transporte activo o transporte pasivo conocido en la tecnica mediante el cual los compuestos circulan dentro del cuerpo. En otra realización, el antagonista del receptor de GLP-1R se transporta en el torrente sangumeo del sujeto hasta la celula diana del sujeto. En otra realización, el antagonista del receptor de GLP-1R se transporta por difusion hasta la celula diana del sujeto. En otra realización, el antagonista del receptor de GLP-1R se transporta por transporte activo hasta la celula diana del sujeto. En otra realización, el antagonista del receptor de GLP-1R se administra al sujeto de tal manera que se pone directamente en contacto con la celula diana del sujeto.

El tejido diana de las composiciones para su uso en la presente invencion es, en otra realización, el islote pancreatico. En otra realización, el tejido diana es el hipotalamo. En otra realización, el tejido diana es el hipocampo. En otra realización, el tejido diana es la corteza cerebral. En otra realización, el tejido diana es el rinon. En otra realización, el tejido diana es el corazon. En otra realización, el tejido diana es el tracto gastrointestinal. En otra realización, el tejido diana es cualquier otro tejido diana conocido en la tecnica que expresa un receptor de GLP-1 R. La presente solicitud describe un metodo para tratar cualquier enfermedad, desorden, smtoma, o efecto secundario asociado con la hipoglucemia posprandial, comprendiendo el metodo la administracion de un antagonista GLP-1R. En otra realización, el antagonista del receptor de GLP-1R se administra en combinacion con un farmaco utilizado para tratar uno de los trastornos anteriores. En otra realización, el farmaco es diazoxido. En otra realización, el farmaco es octreotida. En otra realización, el farmaco es cualquier otro farmaco conocido en la tecnica que puede ser utilizado para tratar una hipoglucemia posprandial.

Detalles de la seccion experimental

Materiales y metodos

Animales

Los ratones SUR-1-/- fueron proporcionados amablemente por el doctor Mark A. Magnuson. La generacion y genotipado de los ratones SUR-1-1- se ha descrito previamente (8). Los ratones se mantienen en un fondo genetico C57B1/6. Se utilizaron en todos los experimentos ratones SUR-1'/_ de doce a dieciocho semanas y ratones control naturales de la misma camada. Se mantuvieron los ratones en un ciclo de luz-oscuridad de 12:12 h y fueron alimentados con una dieta estandar de pienso para roedores. Todos los procedimientos fueron aprobados y realizados de acuerdo con las directrices del Comite Institutional de Uso y Cuidado Animal de la Universidad de Pensilvania.

Administracion de exendina-(9-39)

Se implantaron subcutaneamente mini-bombas osmoticas Alzet (modelo 2002; Alza, Palo Alto, CA) para administrar exendina-(9-39) (Bachem Bioscience, King of Prussia, PA) a una velocidad de 150 pmol/kg/min o vetnculo (NaCl al 0,9 % /BSA al 1 %) durante 2 semanas.

Homeostasis de la glucosa

Para la determinacion de los niveles de glucosa en sangre en ayunas se dejaron los ratones en ayunas durante 12 16 horas. Se realizo la prueba de tolerancia a la glucosa oral despues de un ayuno de 12-16 horas administrando 2 g/kg de dextrosa por sonda oral (agujas de alimentacion; Popper and Sons, Inc., Hyde Park, NY). Para el ensayo de tolerancia a la insulina los ratones recibieron 0,5 unidades/kg de insulina por via intraperitoneal despues de un ayuno de 4 horas. Se midieron los niveles de glucosa en sangre utilizando un medidor de glucosa manual (FreeStyle; TheraSense, Alameda, CA). La insulina y el glucagon se midieron por ELISA (Mouse Endocrine Immunoassay Panel; Linco Research, Inc., St. Charles, MO).

Estudios de los islotes

Se aislaron los islotes por digestion con colagenasa y se cultivaron durante 3 dfas en medio RPMI 1640 que contema glucosa 10 mM. El medio de cultivo se suplemento con 10 % de suero fetal bovino, glutamina 2 mM, 100 unidades/mL de penicilina, y 50 pg/mL de estreptomicina. Se incubaron los islotes a 37 °C en un incubador con 5 % de CO²y 95 % de aire humidificado. Se cargaron lotes de 100 islotes de raton cultivados a un filtro de nilon en una camara y se perfundieron con tampon Krebs-Ringer-bicarbonato (NaCl 115 mM, NaHCO³24 mM, KCl 5 mM, MgCh 1 mM, CaCl²2,5 mM, HEPES 10 mM, pH 7,4) con 0,25 % de seroalbumina bovina a un caudal de 2 mL/min. Las soluciones perfundidas se gasearon con 95 % de O²y 5 % de CO²y se mantuvieron a 37 °C. Se estimularon los islotes con una rampa de aminoacidos. La mezcla fisiologica de 19 aminoacidos cuando se utilizo a una concentracion maxima 12 mM (aproximadamente 3 veces la concentracion fisiologica) tema la siguiente composicion (en mM): glutamina 2, alanina 1,25, arginina 0,53, aspartato 0,11, citrulina 0,27, glutamato 0,35, glicina 0,85, histidina 0,22, isoleucina 0,27, leucina 0,46, lisina 1,06, metionina 0,14, ornitina 0,20, fenilalanina 0,23, prolina 1, serina 1,62, treonina 0,77, triptofano 0,21, valina 0,57. Se recogieron muestras cada minuto para ensayos de insulina. Se midio la insulina por radioinmunoensayo (Linco Research Inc., St. Charles, MO).

Determinacion del contenido de cAMP

Se aislaron los islotes como anteriormente, se escogieron a mano y se cultivaron durante tres dfas. Se preincubaron los islotes cultivados en tampon Krebs-Ringer-bicarbonato exento de glucosa durante 60 minutos, se anadio exendina-(9-39) 100 nM durante 30 min en el periodo de preincubacion. Despues, se expusieron los islotes a diferentes tratamientos durante 30 minutos adicionales en presencia de isobutil-metilxantina 0,1 mM (IBMX). Despues de la incubacion, se lavaron los islotes 2 veces con tampon de Hank fno exento de glucosa. Se midio el cAMP en lisados de los islotes mediante ELISA (GE/Amersham Biosciences, Piscataway, NJ).

Medidas de Ca2+ citosolico libre

Se aislaron islotes de raton y se cultivaron en cubreobjetos de vidrio recubiertos de poli-lisina en las mismas condiciones que se han descrito antes. El procedimiento de perfusion y la medida de Ca2+ citosolico libre ([Ca2+]i) se han descrito previamente (24). En resumen, el cubreobjetos con los islotes unidos se incubo con Fura-2 acetoximetilester 15 pM (Molecular Probes, Eugene, OR) en tampon Krebs-Ringer-bicarbonato con glucosa 5 mM durante 35 minutos a 37 °C. Se perfundieron despues los islotes con tampon Krebs-Ringer-bicarbonato con 0,25 % de seroalbumina bovina a 37 °C a un caudal de 2 mL/min, mientras se aplicaron diferentes agentes. Se midio el [Ca2+]i con un microscopio de fluorescencia de longitud de onda dual como se ha descrito antes.

Evaluacion estad^stica

Los datos presentados son la media ± SEM (error estandar de la media) y se compararon utilizando la prueba t de Student. Para el ensayo de glucosa y de tolerancia a la insulina, se compararon los valores mediante ANOVA de medidas repetidas. Las diferencias se consideraron significativas a p <0,05.

Ejemplo 1: la exendina-(9-39) aumenta significativamente los niveles de glucosa en sangre en ayunas en ratones SUR-1-/-Se sometieron ratones SUR-1'/_ machos de 12-18 semanas de edad y sus companeros naturales de camada a una evaluacion basica incluyendo las medidas de glucosa en sangre en ayunas y el ensayo de tolerancia a la glucosa oral, seguido por la asignacion aleatoria al tratamiento con exendina-(9-39) (150 pmol/kg/min) o con vehnculo (NaCl al 0,9 %, BSA al 1 %). Se determinaron los niveles de glucosa en sangre en ayunas despues del ayuno nocturno los dfas 3 y 7 de la perfusion. En adicion, se evaluaron durante el tratamiento la tolerancia a la glucosa oral y la sensibilidad a la insulina. Los niveles de glucosa en sangre en ayunas fueron significativamente mas bajos en los ratones SUR-1'/_ en comparacion con los ratones naturales de la misma camada (59,4 ± 1,5 mg/dL frente a 75 ± 1,8 mg/dL, p = 0,00000003) (Figura 1A), mientras que el peso corporal no fue diferente (Figura 1B). Despues de una carga oral de glucosa, los ratones SUR-1'/_ fueron intolerantes a la glucosa en comparacion con los controles naturales de la misma camada (p <0,0001, ANOVA de medidas repetidas) (Figura 1C). Los ratones SUR-1'/_ tienen un deterioro significativo de la secrecion de insulina en respuesta a una carga de glucosa oral (naturales frente a SUR-1'/_: p = 0,02, ANOVA de medidas repetidas) (Figura 1D). Se administro exendina-(9-39) mediante una mini bomba osmotica Azlet subcutanea a una velocidad de perfusion continua de 150 pmol/kg/min durante 2 semanas. Se eligio esta dosis en base a los resultados de un estudio piloto de evaluacion de diferentes dosis que previamente habfan demostrado tener un efecto en los seres humanos y en los ratones normales.

El dfa 7, la glucosa en sangre en ayunas fue significativamente mas baja en los ratones SUR-1'/_ tratados con vehnculo en comparacion con sus companeros de camada naturales tratados con vehnculo (p = 0,000002) (Figura 2). El tratamiento con exendina-(9-39) aumento significativamente los niveles de glucosa en sangre en ayunas en los ratones SUR-1'/_ en comparacion con los ratones SUR-1'/_ tratados con vefnculo (82,2 ± 6,3 mg/dL frente a 63,2 ± 4,9 mg/dL, p = 0,03, el dfa 3; 82 ± 4,7 mg/dL frente a 56,4 ± 4,3 mg/dL, p = 0,0006, el dfa 7). Los niveles de glucosa en sangre en ayunas no fueron diferentes en los ratones naturales tratados con exendina-(9-39) en comparacion con los controles naturales tratados con vehnculo, en contraste con nuestras observaciones anteriores en los ratones naturales BALB/c, lo que sugiere un papel espedfico de la cepa del receptor de GLP-1 en la glucemia en ayunas. La exendina-(9-39) no afecto al aumento de peso en los SUR-1'A ni en los controles naturales de la misma camada. Ejemplo 2: La exendina-(9-39) afecta directamente a la secrecion de insulina de los islotes

Durante el tratamiento, los niveles de insulina y de glucagon en ayunas no fueron diferentes entre los grupos de tratamiento (Figura 3A); sin embargo, en el ajuste de los niveles mas bajos de glucosa en sangre en ayunas, los niveles de insulina fueron anormalmente elevados en los ratones SUR-1-/- tratados con vehnculo y los niveles de glucagon no subieron tanto como se esperaba en respuesta a la hipoglucemia. La relacion insulina/glucosa se aumenta en los ratones SUR-1-/- en comparacion con los ratones controles naturales de la misma camada (Figura 3B) (naturales frente a SUR-1-/-: p = 0,04) y se normaliza por tratamiento con exendina-(9-39) (naturales frente a SUR-1-/- Ex (9-39): p = 0,32), lo que sugiere un efecto directo de la exendina-(9-39) sobre la secrecion de insulina en los islotes.

Dados los efectos observados in vivo sobre la secrecion de insulina, pero no sobre la sensibilidad a la insulina, se determino a continuacion si la exendina-(9-39) ejerda un efecto directo sobre la funcion de los islotes SUR-1'/_. Se realizo el examen del efecto de la exendina-(9-39) sobre la respuesta anormal de los islotes SUR-1-/- a la secrecion de insulina inducida por combustible (espedficamente, la hiperreactividad a los aminoacidos). Los islotes aislados se perfundieron con una mezcla de aminoacidos. Los islotes SUR-1'/_ liberaron anormalmente insulina en respuesta a la estimulacion en rampa por una mezcla fisiologica de 19 aminoacidos (utilizando un incremento de 0,04 mM/min para glutamina y 0,2 mM/min para los otros aminoacidos). Esta respuesta a los aminoacidos fue bloqueada por la exendina-(9-39) (Figura 5). La respuesta de insulina al KCI fue similar en presencia y ausencia de exendina-(9-39). Ejemplo 3: La exendina-(9-39) no altera la tolerancia a la glucosa ni la sensibilidad a la insulina en ratones SUR-1-/-A pesar del marcado efecto sobre los niveles de glucosa en sangre en ayunas, el tratamiento con exendina-(9-39) no deterioro de forma significativa la tolerancia a la glucosa en los ratones SUR-1-/-, a excepcion de un pequeno retraso en el retorno a los valores basales de los niveles de glucosa en sangre a los 120 minutos. Similarmente, no hubo ningun efecto sobre la tolerancia a la glucosa en los companeros de camada naturales durante el tratamiento con exendina-(9-39) (Figura 4A).

Para determinar el mecanismo de accion para el efecto de la exendina-(9-39) sobre los niveles de glucosa en sangre en ayunas, se evaluo la sensibilidad a la insulina mediante un ensayo de tolerancia a la insulina. La sensibilidad a la insulina no fue diferente entre los ratones SUR-1-/- y los ratones naturales de la misma camada y la exendina-(9-39) no tuvo impacto sobre la sensibilidad periferica a la insulina en ninguno de los grupos de tratamiento (Figura 4B). Ejemplo 4: Los efectos de la exendina-(9-39) sobre la secrecion de insulina en islotes SUR-1'/_ estan mediados por cambios en cAMP

El efecto de la exendina-(9-39) sobre el cAMP se determino en incubaciones estaticas de islotes aislados. En ausencia de GLP-1 exogeno, la exendina-(9-39) redujo significativamente el cAMP intracelular basal en los islotes SUR-1'/_ (40,1 ± 4,2 frente a 20,5 ± 2,3 pmol/100 islotes, p <0,05) (Tabla 1). El aumento de cAMP estimulado por aminoacidos se redujo de manera similar por la exendina-(9-39) (52,5 ± 9,4 frente a 20,9 ± 4,4 pmol/100 islotes, p <0,05). En estas incubaciones estaticas, el efecto de la exendina-(9-39) sobre los niveles de cAMP reflejo el efecto sobre la secrecion de insulina, lo que sugiere que los efectos de la exendina-(9-39) sobre la secrecion de insulina en islotes SUR-1'/_ estan mediados por los cambios del cAMP. La secrecion de insulina basal fue reducida significativamente por la exendina-(9-39) (221 ± 22 frente a 126 ± 12 ng/100 islotes/30 min, p <0,05). Similarmente, la exendina-(9-39) redujo significativamente la secrecion de insulina estimulada por aminoacidos (389 ± 17 frente a 219 ± 14 ng/100 islotes/30 min, p <0,01).

Tabla 1. La exendina-(9-39) reduce el contenido de cAMP citosolico basal y estimulado y la liberacion de insulina en islotes SUR-1-/-

Se cultivaron islotes aislados de raton SUR-1'/_ en glucosa 10 mM durante 3 dfas. Los islotes se incubaron previamente en KRBB exento de glucosa durante 60 min. Se anadio exendina-(9-39) 100 nM despues de 30 minutos de preincubacion. Despues se expusieron los islotes a diferentes condiciones de tratamiento durante 30 min adicionales. En comparacion con la condicion basal, a: p <0,05, b: p <0,01. En comparacion con exendina-9100 nM/ AAM 4 mM, c: p <0,05, d: p <0,01.

Ejemplo 5: El efecto de la exendina-(9-39) sobre la secrecion de insulina es independiente del calcio

Se estudio el efecto de la exendina-(9-39) sobre la concentracion de calcio intracelular caractensticamente elevada de los islotes SUR-1'/_. La exendina-(9-39) no afecto al calcio intracelular basal (Figura 6). Como se ha informado anteriormente, los aminoacidos causaron un aumento adicional transitorio en el calcio intracelular. La exendina-(9-39) no tuvo ningun efecto sobre el aumento del calcio intracelular estimulado por aminoacidos, lo que indica que su efecto sobre la secrecion de insulina es independiente del calcio.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un antagonista del receptor del peptido similar al glucagon-1 (GLP-1) para uso en el tratamiento de la hipoglucemia posprandial, en donde dicho antagonista es el peptido presentado en la SEQ ID N.° 1.

2. Un antagonista para uso segun la reivindicación 1, en donde la hipoglucemia posprandial se asocia con una cirugfa de bypass gastrico o con una funduplicatura de Nissen.

3. Un antagonista para uso segun la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el antagonista se administra subcutaneamente.