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ES2756603T3 - Inhibidores de EZH2 - Google Patents

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ES2756603T3
ES2756603T3 ES16757513T ES16757513T ES2756603T3 ES 2756603 T3 ES2756603 T3 ES 2756603T3 ES 16757513 T ES16757513 T ES 16757513T ES 16757513 T ES16757513 T ES 16757513T ES 2756603 T3 ES2756603 T3 ES 2756603T3
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ES
Spain
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methyl
compound
add
mmol
ethyl
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ES16757513T
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English (en)
Inventor
Esteban Dominguez
Deqi Guo
Mary Margaret Mader
Anh-Quan Hannah Nguyen
Prado Miriam Filadelfa Del
Michael Enrico Richett
Michael John Rodriguez
Yvonne Yee Mai Yip
Kuo-Long Yu
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Eli Lilly and Co
Original Assignee
Eli Lilly and Co
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Publication date
Application filed by Eli Lilly and Co filed Critical Eli Lilly and Co
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Abstract

Un compuesto de fórmula:**Fórmula** en la que: X es -CH2- o -CH2-CH2-; Y' es -NR4R5, -CH(CH3)-ciclohexil-4-il-N-metil-N-metoxietilo o -CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, 2-propoxi, metoximetilo, metoxietoxi, ciclopropiloxi, ciclopropilmetoxi, pirazolilo, metilpirazolilo, triazolilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranoiloxi o morfolinilo; R4 es ciclohex-4-ilo sustituido con N-metil-N-metoxietilamino, N-metil-N-ciclopropilamino o azetidinilo en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxi, etoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi o pirazolilo; R5 es metilo o etilo y R6 es metilo o cloro o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores de EZH2
La presente invención se refiere a compuestos que inhiben la actividad de la histona lisina metiltransferasa, Potenciador del Zeste Homólogo 2 (EZH2), a composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos y a procedimientos para el uso de los compuestos para tratar el cáncer, tales como tumores hematológicos y sólidos.
EZH2 está codificada por el gen EZH2, y es el componente catalítico dentro del complejo represivo polycomb 2 (PRC2) que es responsable de la metilación de la lisina 27 en la histona 3 (H3K27) en la cromatina. Se cree que la sobreexpresión de EZH2 promueve el cáncer como resultado del aumento de la metilación de histonas que silencia la expresión de genes supresores de tumores. La actividad catalítica de EZH2 está mediada por 130 aminoácidos Su(var)3-9, potenciador del Zeste y dominio trithorax (SET), que proporciona los huecos de unión para el cofactor de S-adenosilmetionina (SAM) y el resto de sustrato de lisina. El complejo central PRC2 está compuesto por EZH2 y proteínas EED (Desarrollo de Ectodermo Embrionario), SUZ12 (supresor del homólogo de Zeste 12) y RbAp46/48 (también conocido como RBBP7/4), y también puede incluir otras proteínas como JARID2, AEBP2 y de tipo Polycomb (PCL) 1/2/3.
Además de la sobreexpresión de EZH2, el aumento de la metilación de H3K27 también puede surgir debido a mutaciones que aumentan la eficiencia catalítica de EZH2, tales como Y641N, A677G y A678V. Además, también se ha documentado que los niveles de metilación de H3K27 se pueden modular en tumores sólidos a través de varias vías de señalización, tales como las que implican VEGFR2 y PI3K/AKT.
Los complejos SWI/SNF y PRC2 desempeñan papeles antagónicos en la activación y represión de la transcripción, respectivamente. Los tumores que carecen o son defectuosos en la proteína SNF5 de SWI/SNF (también conocida como SMARCB1/INI1) pueden demostrar metilación y represión anómalas por PRC2 e inhiben el crecimiento después del tratamiento con inhibidores de molécula pequeña EZH2. Además, los tumores que carecen o son defectuosos en la proteína ARID1A de SWI/SNF (también conocida como BAF250), combinada con mutaciones activadoras constitutivas en componentes de la vía PI3K como PIK3CA, también inhiben el crecimiento después del tratamiento con inhibidores de molécula pequeña EZH2. Además, los tumores que carecen o son defectuosos tanto en SMARCA2 (también conocido como BRM) como en SMARCA4 (también conocido como BRG1) también se inhiben del crecimiento después del tratamiento con inhibidores de molécula pequeña EZH2.
Los complejos de metiltransferasa H3K4 (también conocida como MLL o COMPASS) cooperan con el complejo SWI/SNF para antagonizar los efectos represivos de PRC2 (revisado en Van der Meulen, J. y col. (2014) Epigenetics 9:658-68, Xu, B. y col. (2015) Exp. Hematol. 43:698-712). Los tumores que carecen o son defectuosos en los componentes del complejo de metiltransferasa H3K4, incluyendo pero sin limitación MLL2 (datos mostrados en el presente documento para el tratamiento combinado con un inhibidor de EZH2 más quimioterapia estándar de atención en modelos de xenoinjerto de cáncer gástrico derivados de pacientes), MLL3 (datos mostrados en el presente documento para el tratamiento combinado con un inhibidor de EZH2 más quimioterapia estándar de atención en modelos de xenoinjerto de cáncer de pulmón derivados de pacientes), demetilasa 6A específica de lisina, también conocida como repetición tetratricopeptídica transcrita ubicuamente, Cromosoma X (UTX, también conocido como KDM6A [Ezponda, T. y col. (2014) Blood 124:611]), solo o en combinación con la ausencia o defecto en los componentes del complejo SWI/SNF descrito anteriormente, incluyendo pero sin limitación ARID1A (datos mostrados en el presente documento para el tratamiento combinado con un inhibidor de EZH2 más quimioterapia estándar de atención en modelos de xenoinjerto de cáncer gástrico derivados de pacientes), inhiben el crecimiento después del tratamiento con inhibidores de molécula pequeña EZH2 como agente único o en combinación con agentes quimioterapéuticos de estándar de atención (SOC). Los linfomas con orígenes de linfocitos B del centro germinal inhiben el crecimiento con alteraciones en EZH2 (Beguelin y col. (2013) Cancer Cell 23:677-92; Velichutina, I. y col. (2010) Blood 116:5247-5255) y también tienen una alta frecuencia de mutaciones en MLL2, CREBBP, EP300, ARID1A y Sm Ar CA4 (Lunning, M.A. y Green, M.R. (2015) Blood Cancer Journal 5, e361; Carbone, A. y col. (2014) Ann. Hematol. 93:1263-1277).
Ya se conocen inhibidores de EZH2 en las referencias. Véanse, por ejemplo, los documentos WO2012/142504, WO2012/142513, WO2013/120104, WO2013/173441, WO2013/075083, WO2014/177982, WO2014/097041 y WO2016/066697.
Sigue existiendo la necesidad de proporcionar inhibidores de EZH2 alternativos para el tratamiento de cáncer. Por consiguiente, la presente invención proporciona ciertos inhibidores de EZH2 que pueden ser útiles para el tratamiento de cáncer.
La presente invención proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000003_0001
en la que:
X es -CH2- o -CH2-CH2-;
Y' es -NR4R5, CH(CH3)-cidohex-4-il-dimetilamino, CH(CH3)-cidohex-4-il-N-metil-N-metoxietilamino o -CH(CH3)-ddohex-4-N-azetidin-1-ilo en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, 2-propoxi, metoximetilo, metoxietoxi, ciclopropiloxi, ciclopropilmetoxi, N-triazolilo, N-pirrolidinilo, morfolinilo, tetrahidrofuran-3-iloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo;
R4 es piperidin-4-ilo o ciclohex-4-ilo sustituido con dimetilamino, N-metil-N-metoxietilamino, N-metil-N-ciclopropilamino o azetidin-1 -ilo en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxi, etoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo;
R5 es metilo o etilo; y
R6 es metilo o cloro o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000003_0002
en la que:
X es -CH2- o -CH2-CH2-;
Y' es -NR4R5, -CH(CH3)-ciclohexil-4-il-N-metil-N-metoxietilo o -CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1 -ilo en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, 2-propoxi, metoximetilo, metoxietoxi, ciclopropiloxi, ciclopropilmetoxi, pirazolilo, metilpirazolilo, triazolilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranoiloxi o morfolinilo;
R4 es ciclohex-4-ilo sustituido con N-metil-N-metoxietilamino, N-metil-N-ciclopropilamino o azetidin-1-ilo en el que el azetidin-1 -ilo está sustituido con metoxi, etoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi o pirazolilo;
R5 es metilo o etilo y
R6 es metilo o cloro o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000003_0003
en la que:
X es -CH2-;
Y' es -NR4R5, CH(CH3)-ciclohex-4-il-dimetilamino, CH(CH3)-ciclohex-4-il-N-metil-N-metoxietilamino o -CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, 2-propoxi, metoximetilo, metoxietoxi, ciclopropiloxi, ciclopropilmetoxi, N-triazolilo, N-pirrolidinilo, morfolinilo, tetrahidrofuran-3-iloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo;
R4 es ciclohex-4-ilo sustituido con dimetilamino, N-metil-N-metoxietilamino, N-metil-N-ciclopropilamino o azetidin-1-ilo en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxi, etoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo;
R5 es metilo o etilo y
R6 es metilo o cloro o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000004_0001
en la que:
X es -CH2-;
Y' es -NR4R5, CH(CH3)-cidohex-4-il-N-metil-N-metoxietilamino o -CH(CH3)-ddohex-4-il-azetidin-1 -No en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, 2-propoxi, metoximetilo, metoxietoxi, cidopropiloxi, cidopropilmetoxi, N-triazolilo, N-pirrolidinilo, morfolinilo, tetrahidrofuran-3-iloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo;
R4 es ciclohex-4-ilo sustituido con N-metil-N-metoxietilamino, N-metil-N-ciclopropilamino o azetidin-1-ilo en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxi, etoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo;
R5 es metilo o etilo y
R6 es metilo o cloro o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000004_0002
en la que:
X es -CH2- o -CH2-CH2-;
Y' es -CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1 -ilo en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, propoxi, metilmetoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi, ciclopropilmetoxi, morfolinilo, N-triazolilo, N-pirrolidinilo, tetrahidrofuran-3-iloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo y
R6 es metilo o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000004_0003
en la que:
X es -CH2-;
Y' es -CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1 -ilo en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, propoxi, metilmetoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi, ciclopropilmetoxi, morfolinilo, N-triazolilo, N-pirrolidinilo, tetrahidrofuran-3-iloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo y
R6 es metilo o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000004_0004
en la que:
X es -CH2-CH2-;
Y' es -CH(CH3)-cidohex-4-il-azetidin-1 -ilo en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, propoxi, metilmetoxi, metoxietoxi, cidopropiloxi, cidopropilmetoxi, morfolinilo, N-triazolilo, N-pirrolidinilo, tetrahidrofuran-3-iloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo y
R6 es metilo o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000005_0001
en la que:
X es -CH2- o -CH2-CH2-;
Y' es -NR4R5;
R4 es ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo, en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxi, etoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo; y
R5 es metilo o etilo y
R6 es metilo o cloro o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000005_0002
en la que:
X es -CH2-;
Y' es -NR4R5;
R4 es ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo, en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxi, etoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo;
R5 es metilo o etilo y
R6 es metilo o cloro o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000005_0003
en la que:
X es -CH2-CH2-;
Y' es -NR4R5;
R4 es ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo, en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxi, etoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo;
R5 es metilo o etilo y
R6 es metilo o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000006_0001
en la que:
X es -CH2- o -CH2-CH2-;
Y ’ es-CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, propoxi, metilmetoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi, ciclopropilmetoxi, morfolinilo, N-triazolilo, N-pirrolidinilo, tetrahidrofuran-3-iloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo y
R6 es metilo o cloro o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; en el que el carbono unido a la posición 2 de la 6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona está en la configuración (R).
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000006_0002
en la que:
X es -CH2- o -CH2-CH2-;
Y ’ es-CH[CH3]-ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, propoxi, metilmetoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi, ciclopropilmetoxi, morfolinilo, N-triazolilo, N-pirrolidinilo, tetrahidrofuran-3-iloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo y
R6 es metilo o cloro o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; en la que el carbono unido a la posición 2 de la 6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona está en la configuración (R) y el anillo ciclohexano está en la configuración trans.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000006_0003
en la que:
X es -CH2- o -CH2-CH2-;
Y ’ es -NR4R5;
R4 es ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo, en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxi, etoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo;
R5 es metilo o etilo y
R6 es metilo o cloro o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; en la que el anillo ciclohexano está en la configuración trans. La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
en la que:
X es -CH2- o -CH2-CH2- e
Y es CHCH3, N(CH3) o N(CH2CH3) o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000007_0001
en la que:
X es -CH2- o -CH2-CH2- e
Y es CHCH3, N(CH3) o N(CH2CH3) y
R7 es hidrógeno, metoxi, etoxi, propoxi, metilmetoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi, ciclopropilmetoxi, morfolinilo, N-triazolilo, N-pirrolidinilo, tetrahidrofuran-3-iloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000007_0002
en la que:
X es -CH2- o -CH2-CH2-;
Y es CHCH3, N(CH3) o N(CH2CH3); y
R7 es hidrógeno, metoxi, etoxi, propoxi, metilmetoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi, ciclopropilmetoxi, morfolinilo, N-triazolilo, N-pirrolidinilo, tetrahidrofuran-3-iloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula:
Figure imgf000007_0003
en la que:
X es -CH2- o -CH2-CH2- e
Y es CHCH3, N(CH3) o N(CH2CH3) o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona un compuesto que es
Figure imgf000008_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona un compuesto que es
Figure imgf000008_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona un compuesto que es
Figure imgf000008_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona un compuesto que es
Figure imgf000008_0004
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona un compuesto que es
Figure imgf000009_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona un compuesto que es
Figure imgf000009_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona un compuesto que es
Figure imgf000009_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona un compuesto que es
Figure imgf000009_0004
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona un compuesto que es
Figure imgf000010_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona un compuesto que es
Figure imgf000010_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona un compuesto que es
Figure imgf000010_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona un compuesto que es
Figure imgf000010_0004
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona un compuesto que es
Figure imgf000011_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto o una sal del mismo, de la presente invención, y uno o más excipientes y uno o más excipientes, transportadores o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
La presente invención también proporciona un compuesto o una sal del mismo, de la presente invención, para su uso en terapia. Además, la presente invención proporciona un compuesto o una sal del mismo, de la presente invención, para su uso en el tratamiento de cáncer, en el que el cáncer se selecciona entre el grupo que consiste en linfomas, tumores rabdoides, tumores que carecen o son deficientes en uno o más componentes del complejo SWI/SNF (por ejemplo, SNF5), complejos m Ll y ruta PI3K constitutivamente activa, sarcomas, mieloma múltiple, melanoma, cáncer gastrointestinal, cáncer colorrectal, cáncer de pulmón, cáncer de riñón, cáncer de mama, cáncer de ovario y cáncer de próstata. Preferentemente, el cáncer es linfoma difuso de linfocitos B grandes o linfoma folicular. Preferentemente el cáncer el linfoma difuso de linfocitos B grandes. Preferentemente el cáncer es cáncer gástrico. Preferentemente el cáncer es cáncer ovárico. Preferentemente el cáncer es mieloma múltiple. Preferentemente el cáncer es cáncer de pulmón. Preferentemente el cáncer es cáncer colorrectal. Preferentemente, el cáncer es un tumor sólido o hematológico que lleva EZH2 de tipo silvestre (TS), así como un tumor sólido o hematológico que lleva EZH2 mutante. Preferentemente el cáncer es un tumor sólido o hematológico que porta EZH2 TS. Preferentemente el cáncer es un tumor sólido o hematológico que porta EZH2 mutante.
De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se presenta un compuesto o una sal del mismo de la presente invención para su uso en combinación simultánea, por separado o secuencial con carboplatino y paclitaxel en el tratamiento de cáncer ovárico.
De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se presenta un compuesto o una sal del mismo de la presente invención para su uso en combinación simultánea, por separado o secuencial con oxaliplatino y paclitaxel en el tratamiento de cáncer gástrico.
De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se presenta un compuesto o una sal del mismo de la presente invención para su uso en combinación simultánea, por separado o secuencia con gemcitabina y cisplatino en el tratamiento de cáncer de pulmón.
De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se presenta un compuesto o una sal del mismo de la presente invención para su uso en combinación simultánea, por separado o secuencial con irinotecán y oxaliplatino en el tratamiento de cáncer colorrectal.
Los párrafos siguientes describen las clases preferidas de la presente invención:
a) X es -CH2-b) X es -CH2-CH2-;
c) Y' es -CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, ciclopropiloxi o tetrahidrofuran-3-iloxi;
d) Y' es NR4R5;
e) R4 es ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo, en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxi o metoxietoxi;
f) R5 es etilo;
g) R6 es metilo;
h) X es -CH2-, Y' es -CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxi y R6 es metilo;
i) X es -CH2-, Y' es -CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1 -ilo en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con ciclopropiloxi y R6 es metilo;
j) X es -CH2-, Y' es -CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con tetrahidrofuran-3-iloxi y R6 es metilo;
k) X es -CH2-, Y' es NR4R5, R4 es ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo, en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxi, R5 es etilo y R6 es metilo;
l) X es -CH2-CH2-, Y' es NR4R5, R4 es ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo, en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxietoxi, R5 es etilo y R6 es metilo y
m) X es -CH2-CH2-, Y' es -CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1 -ilo en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxi y R6 es metilo.
Un experto en la técnica habitual entenderá que el término "trans" es como se representa a continuación, en el que los sustituyentes en las posiciones 1, 4 alrededor del resto ciclohexilo están transrelacionados entre sí:
Figure imgf000012_0001
en el que R se selecciona entre dimetilamino, N-metil-N-metoxietilamino, N-ciclopropil-N-metilamino o azetidin-1-ilo, opcionalmente sustituido con metoxi, etoxi, propoxi, metilmetoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi, ciclopropilmetoxi, morfolinilo, N-triazolilo, pirrolidin-4-ilo, tetrahidrofuran-3-iloxi o N-pirazolilo opcionalmente sustituido con metilo y X e Y son como se han definido anteriormente.
El experto lector entenderá que un compuesto de la presente invención es capaz de formar sales. El compuesto de la presente invención es una base y, en consecuencia, reacciona con cualquiera de una variedad de ácidos inorgánicos y orgánicos para formar sales farmacéuticamente aceptables. Dichas sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables y el procedimiento común para su preparación se conocen bien en la técnica. Véanse, por ejemplo, P. Stahl y col., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2008); S. M. Berge y col., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, n.° 1, enero de 1977.
Se puede preparar un compuesto o una sal del mismo de la presente invención mediante una variedad de procedimientos conocidos en la técnica, algunos de los cuales se ilustran en las preparaciones y ejemplos siguientes. Las etapas sintéticas específicas descritas pueden combinarse de diferentes formas para preparar compuestos o sales de la presente invención. Los productos de las etapas sintéticas se pueden recuperar por procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica, incluyendo extracción, evaporación, precipitación, cromatografía, filtración, trituración y cristalización. Los reactivos y materiales de partida están fácilmente disponibles para un experto habitual en la materia.
Algunos intermedios o compuestos de la presente invención pueden tener uno o más centros quirales. La presente invención contempla todos los enantiómeros o diastereómeros individuales, así como las mezclas de enantiómeros y diastereómeros de dichos compuestos incluyendo los racematos. Se prefiere que los compuestos de la presente invención que contienen al menos un centro quiral existan como enantiómeros o diastereómeros individuales. Los enantiómeros o diastereómeros individuales pueden prepararse comenzando con reactivos quirales o mediante técnicas sintéticas estereoselectivas o estereoespecíficas. Como alternativa, los enantiómeros o diastereómeros individuales pueden aislarse a partir de mezclas mediante técnicas habituales de cristalización o de cromatografía quiral. El experto en la técnica apreciará que, en algunas circunstancias el orden de elución de los enantiómeros o diastereómeros puede ser diferente debido a columnas cromatográficas y fases móviles diferentes.
Algunos centros estereoquímicos se han dejado sin especificar y algunos sustituyentes se han eliminado de los esquemas siguientes por motivos de claridad y no se pretende que limiten de forma alguna las enseñanzas de los esquemas. Asimismo, un experto habitual en la técnica puede separar o resolver los isómeros, enantiómeros o diastereómeros individuales en cualquier punto conveniente en la síntesis de los compuestos de la presente invención mediante procedimientos tales como técnicas de cristalización selectiva o cromatografía quiral (véase, por ejemplo, J. Jacques y col., "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981 y E.L. Eliel y S.H. Wilen, "Stereochemistry of Organic Compounds", Wiley-Interscience, 1994). Además, los intermedios descritos en los esquemas siguientes contienen varios grupos protectores de nitrógeno. El grupo protector variable puede ser el mismo o diferente en cada aparición dependiendo de las condiciones de reacción particulares y las transformaciones particulares a realizar. Las condiciones de protección y desprotección son bien conocidas por el experto en la técnica y se describen en la literatura (véase, por ejemplo, "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis", cuarta edición, de Peter G. M. Wuts y Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc. 2007).
Algunas abreviaturas se definen del siguiente modo: "AcOH" se refiere a ácido acético o ácido acético glacial; "ACN" se refiere a acetonitrilo; "AdoMet" se refiere a S-adenosil-L-metionina; "AEBP" se refiere a proteína de unión a potenciador de adipocitos; "ABC" se refiere a área bajo la curva; "BOC" se refiere a ferc-butoxicarbonilo; "dvd" se refiere a dosificación dos veces al día; "ma" se refiere a multiplete ancho; "Bn" se refiere a bencilo; "BSA" se refiere a albúmina de suero bovino; "c" se refiere a concentración en gramos por mililitro; "n.° CAT." se refiere a número de catálogo; "CDI" se refiere a carbonildiimidazol; "CO2" se refiere a dióxido de carbono; "VC" se refiere a volumen de columna; "Ci" se refiere a curios; "CPM" se refiere a cuentas por millón; "cPr" se refiere a ciclopropilo; "DCE" se refiere a 1,2-dicloroetano; "DCM" se refiere a cloruro de metileno o diclorometano; "DIBAL-H" se refiere a hidruro de diisobutil aluminio; "DIPEA" se refiere a diisopropiletil amina; "dm" se refiere a decímetros o 10 centímetros; "DMA" se refiere a dimetilacetamida; "DMEA" se refiere a N,N-dimetiletilamina; "DMF" se refiere a dimetilformamida o N,N-dimetilformamida; "DMSO" se refiere a dimetilsulfóxido; "ADNasa" se refiere a desoxirribonucleasa; "DTT" se refiere a ditiotreitol; "EED" se refiere a desarrollo de ectodermo embriónico; "Et2O" se refiere a éter dietílico; "EtOAc" se refiere a acetato de etilo; "EN/EM" se refiere a espectrometría de masas por electronebulización; "EtOH" se refiere a etanol o alcohol etílico; "Ej" se refiere a ejemplo; "GAPDH" se refiere a gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa; "h" se refiere a hora u horas; "HEC" se refiere a hidroxietilcelulosa; "HOAt" se refiere a hidroxiazabenzotriazol; "HOBt" se refiere a hidroxibenzotriazol; "HSQC" se refiere a coherencia heteronuclear simple cuántica; "IPAm" se refiere a isopropilamina, propan-2-amina o 2-aminopropano; "iPr" se refiere a isopropilo o 1 -metiletilo; "IrMeO(COD)2" se refiere a dímero (1,5-ciclooctadieno)(metoxi)iridio (I) o bis(1,5-ciclooctadieno)di-p-metoxidiiridio (I); "kPa" se refiere a kilopascal o kilopascales; "KHMDS" se refiere a bis(trimetilsilil)amida de potasio; "KOtBu" se refiere a ferc-butóxido de potasio o tbutóxido de potasio; "LAH" se refiere a hidruro de litio y aluminio; "LiBHV se refiere a borohidruro de litio; "CL" se refiere a cromatografía líquida; "LiHMDS" se refiere a bis(trimetilsilil)amida de litio; "LOF" se refiere a pérdida de función; "3H-SAM" se refiere a adenosil-L-metionina, S[metil-3H]; "CI50" se refiere a la concentración de un agente que produce un 50% de la respuesta inhibidora máxima posible para ese agente; "Me" se refiere a metilo; "MgSOV se refiere a sulfato de magnesio; "mpk" se refiere a miligramos por kilogramo; "min" se refiere a minuto o minutos; "NaH" se refiere a hidruro sódico; "NBS" se refiere a N-bromosuccinimida; "NH3" se refiere a amoniaco; "nm" se refiere a nanómetro o nanómetros; "MeOH" se refiere a metanol o alcohol metílico; "MsOH" se refiere a ácido metanosulfónico; "MTBE" se refiere a metil ferc-butil éter; "mut" se refiere a mutante; "OAc" se refiere a acetato; "PBS" se refiere a tampón fosfato salino; "RCP" se refiere a reacción en cadena de la polimerasa; "PDX" se refiere a xenoinjerto derivado de paciente; "PRC2" se refiere a Complejo represivo Polycomb 2"; "Prep" se refiere a preparación; "psi" se refiere a libras por pulgada cuadrada; "PTSA" se refiere a ácido para-tolueno sulfónico; "rendimiento cuantitativo" se refiere a un rendimiento esencialmente mayor del 99 %; "RBBP4" se refiere a proteína 4 de unión al retinoblastoma; "ARNasa" se refiere a ribonucleasa; "rpm" se refiere a revoluciones por minuto; "TA" se refiere a temperatura ambiente; "Tr" se refiere a tiempo de retención en minutos; "RuPhos-G3-Paladaciclo" se refiere a metanosulfonato de (2-diciclohexilfosfin-2',6'-diisopropoxi-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio (II); "SCX" se refiere a intercambio selectivo de cationes; "CFS" se refiere a cromatografía de fluidos supercríticos; "SPA" se refiere a ensayo de proximidad de centelleo; "NaHCO3" se refiere a bicarbonato sódico; "Na2SO4" se refiere a sulfato sódico; "SoC" se refiere a tratamiento habitual; "THF" se refiere a tetrahidrofurano, "TEA" se refiere a trietilamina; "Tris" se refiere a tris(hidroximetil)-aminometano; "TS" se refiere a tipo silvestre; "XPhos Pd Gen 2" se refiere a cloro(2-diciclohexilfosfin-2',4',6'-triisopropil-1,1'-bifenil)-[2-(2'-amino-1,1'-bifen-il)]-paladio (II); "A" se refiere a ángstrom o ángstroms; "A" se refiere a longitud de onda; y "[a]D20" se refiere a la rotación óptica de un compuesto que rota el plano de luz polarizada usando la línea D de una lámpara de sodio (longitud de onda 589,3 nm) en un polarímetro, con una medida de polarimetría observada a, en un disolvente adecuado tal como MeOH, medido a 20 °C, a una concentración definida c, un volumen de 2 ml y una longitud de trayectoria de 1 dm.
En los esquemas siguientes, todos los sustituyentes, a menos que se indique otra cosa, son como se han definido anteriormente. Los reactivos y materiales de partida están fácilmente disponibles para un experto habitual en la materia. Los siguientes esquemas, preparaciones, ejemplos y ensayos ilustran de manera adicional la invención, pero no debe considerarse que limitan el ámbito de la presente invención en modo alguno.
Preparaciones y ejemplos
Los siguientes preparaciones y ejemplos ilustran de manera adicional la invención y representan síntesis habituales de los compuestos de la invención. Los reactivos y los materiales de partida están fácilmente disponibles o pueden sintetizarse fácilmente por un experto habitual en la técnica. Debe entenderse que las preparaciones y los ejemplos se presentan a continuación con fines ilustrativos y no limitativos y que un experto habitual en la técnica puede realizar diversas modificaciones.
La configuración R o S de los compuestos de la invención puede determinarse mediante técnicas convencionales tales como análisis por rayos X. Puede usarse RMN 1H, CLAR quiral y correlación con tiempo de retención de la CLAR quiral para elucidar adicionalmente el estereoisomerismo si se conoce un centro.
Se realiza CL-EN/EM en un sistema de cromatografía líquida HP1100 de Agilent. Las mediciones de la espectrometría de masas por electronebulización (recogidas en modo positivo y/o negativo) se realizan en un espectrómetro de masas cuadrupolo Mass Selective Detector conectado a la CLAR HP1100. Condiciones CL-EM (pH bajo): columna: Phenomenex GEMINI® NX C-182,1 x 50 mm 3,0 pm; gradiente: B al 5-100 % en 3 min, después B al 100 % durante 0,75 min temperatura de columna: 50 °C /- 10 °C; caudal: 1,2 ml/min; Disolvente A: agua desionizada con HCOOH al 0,1 %; Disolvente B: ACN con ácido fórmico al 0,1 %; longitud de onda 214 nm. Condiciones alternativas de CL-EM (pH alto): columna: WATERS™ XTERRA® MS C-18 columnas de 2,1 x 50 mm, 3,5 pm; gradiente: 5% de disolvente A durante 0,25 min, gradiente del 5 % al 100 % de disolvente B en 3 min y el 100 % de disolvente B durante 0,5 min o del 10 % al 100 % de disolvente B en 3 min y al 100 % de disolvente B durante 0,75 min; temperatura de la columna: 50 °C /- 10 °C; caudal: 1,2 ml/min; Disolvente A: NH4HCO310 mM pH 9; Disolvente B: ACN; longitud de onda: 214 nm.
Se realiza cromatografía preparativa de fase inversa en un Agilent 1200 CL-EN/EM equipado con a espectrómetro de masas Mass Selective Detector y un colector de fracciones/muestreador automático Leap. Los procedimientos de pH alto se llevan a cabo en un 75 X 30 mm Phenomenex GEMINI®-NX, columna de 5 |jm de tamaño de partículas con un protector de 10 X 20 mm. Caudal de 85 ml/min. El eluyente es bicarbonato de amonio 10 mM (pH 10) en ACN.
Los espectros de la RMN se realizan en un espectrómetro de RMN AVIII HD 400 MHz de Bruker, obtenidos en forma de soluciones de CDCh o (CD3)2SO indicados en ppm, usando el disolvente residual [CDCh, 7,26 ppm; (CD3)2SO, 2,50 ppm] como patrón interno. Cuando se indican multiplicidades de pico, se pueden usar las abreviaturas siguientes: s (singlete), d (doblete), t (triplete), c (cuartete), m (multiplete), s a (singlete ancho), dd (doblete de dobletes), dt (doblete de tripletes). Las constantes de acoplamiento (J), cuando se indican, se indican en hertzios (Hz).
Figure imgf000014_0001
El esquema 1 ilustra la formación de un 1,4-dioxaespiro[4.5]decano sustituido (compuesto 5) partiendo de un 4­ oxociclohexanocarboxilato protegido (compuesto 1). El 4-oxociclohexanocarboxilato protegido puede tratarse con ácido p-toluenosulfónico, ortoformiato de trietilo y etilenglicol en un disolvente tal como EtOH para dar el éster 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-carboxílico protegido, que se puede desproteger después mediante procedimientos bien conocidos en la técnica, tales como usando una base acuosa, para dar ácido 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-carboxílico en 2 etapas (compuesto 2, esquema 1, etapa A). Puede prepararse amida de Weinreb (compuesto 3) a partir del producto ácido de la etapa Q con la adición de un reactivo de acoplamiento tal como CDI o HOBt en porciones pequeñas, seguido de la adición de clorhidrato de N-metoximetanamina en porciones pequeñas (esquema 1, etapa B). La amida de Weinreb (compuesto 3) puede convertirse en la cetona (compuesto 4) usando un reactivo organometálico tal como reactivo de Grignard o un reactivo de organolitio (esquema 1, etapa C). Más específicamente, puede añadirse bromuro de metilmagnesio en un disolvente apropiado tal como Et2O y/o THF para dar la metil cetona (compuesto 4). La metil cetona (compuesto 4) puede convertirse en el fosfato de vinilo (compuesto 5) con la adición gota a gota de una base no nucleófila tal como LiHMDS en un disolvente tal como THF con la adición de difenilfosforocloridato (esquema 1, etapa D).
Figure imgf000015_0001
R2 = OCH3, OCH2CH3, O-cPr, O-iPr, OCH2-cPr, CH2OCH3, O(CH2)2OCH3, N-pirazolilo, N-(pirazolilo sustituido), N-triazolilo, tetrahidrofuran-3-ilo, morfolinilo, N-pirrolidinMo
Los esquemas 2 y 3 ilustran la síntesis de azetidinas sustituidas. Puede prepararse viniloxiazetidina N-protegida (compuesto 7a, R1 = alilo) mediante alquilación de la 3-hidroxiazetidina sustituida apropiadamente (compuesto 6) con un haluro de alquilo y una base no nucleófila tal como DIPEA o, como alternativa, mediante eterificación mediada por metal con una fuente de paladio (II) en presencia de un ligando dibásico tal como 1,10-fenantrolina en presencia de una base no nucleófila tal como DIPEA o TEA usando un éter vinílico asimétrico como disolvente. Un experto en la técnica reconocerá que la azetidina puede estar protegida con una amplia serie de grupos protectores tales como un grupo alquilo, un alquilo sustituido, un aralquilo, una amida o un carbamato de alquilo. Más específicamente, puede tratarse una solución de N-BOC-3-hidroxiazetidina con acetato de paladio (II) en presencia de TEA y 4,7-difenil-1,10-fenantrolina en n-butil vinil éter para dar la viniloxiazetidina N-protegida (compuesto 7a, R1 = alilo, esquema 2, etapa A). El grupo vinilo puede convertirse en la 3-ciclopropoxiazetidina protegida (compuesto 8) mediante una reacción de Simmons-Smith o condiciones similares de generación de carbeno, por ejemplo, usando cloroyodometano y un reactivo de alquilcinc en DCE, como se muestra en el esquema 2, Etapa B. La desprotección de la 3-ciclopropoxiazetidina protegida (compuesto 8) en condiciones convencionales, como las que se describen bien en la técnica, seguida de tratamiento de la base libre con una solución de ácido mineral en un disolvente orgánico, tal como HCl en éter dietílico o 1,4-dioxano, puede proporcionar la sal estable de azetidina (compuesto 9a). Más específicamente, cuando el grupo protector es BOC, un experto en la técnica reconocerá que el tratamiento de la 3-ciclopropoxiazetidina protegida (compuesto 8) con un ácido tal como HCl en 1,4-dioxano, seguido de evaporación del disolvente, puede proporcionar el clorhidrato de 3-ciclopropoxiazetidina en bruto (compuesto 9a, esquema 2, etapa C). Además, la ciclopropilmetoxiazetidina (compuesto 7b, R1 = ciclopropilmetilo, esquema 2, etapa A) puede prepararse mediante alquilación de la 3-hidroxiazetidina apropiadamente sustituida (compuesto 6) con bromometilciclopropano en condiciones de desprotonación fuertemente básicas, por ejemplo, con NaH en un disolvente polar tal como DMF o DMSO, con desprotección posterior de la ciclopropilmetoxiazetidina protegida (compuesto 7b, R1 = ciclopropilmetilo) para obtener el clorhidrato de ciclopropilmetoxiazetidina en bruto (compuesto 9b, esquema 2, etapa D).
Pueden prepararse otras azetidinas sustituidas a partir del mesilato de benzhidrilazetidina disponible en el mercado (compuesto 10) mediante tratamiento con una gran diversidad de nucleófilos que contienen N, O, C y S en condiciones de sustitución nucleófila usando una base apropiada tal como NaHCO3, K2CO3, DIPEA o TEA y calentamiento por microondas o, mediante tratamiento con una base fuerte tal como NaH, KOtBu o LHMDS y calentamiento en un disolvente orgánico polar tal como DMF o DMSO, para dar una benzhidrilazetidina sustituida (compuesto 11, esquema 3, etapa A). La posterior desprotección bajo hidrogenación catalítica (esquema 3, etapa B) puede producir la azetidina sustituida deseada (compuesto 12 ).
Figure imgf000016_0001
El esquema 4 representa la preparación de 2-alcoxi-3-clorometil-4,6-dimetilpiridinas (compuesto 17, en el que Raes CH3, CH2CH3 o Bn), que puede prepararse partiendo de 3-ciano-4,6-dimetilpiridona disponible en el mercado (compuesto 13). La alquilación de la 3-ciano-4,6-dimetilpiridona (compuesto 13) con el haluro de alquilo apropiado en condiciones estándar de la literatura conocidas por un experto en la técnica, puede proporcionar la 2-alcoxi-3-ciano-4,6-dimetil-piridina deseada (compuesto 14). Específicamente, el tratamiento de 3-ciano-4,6-dimetilpiridona (compuesto 13) con yoduro de metilo o cloruro de bencilo con AgCO3 o Ag2O en un disolvente aprótico tal como 1,4-dioxano, DMF, tolueno o CHCh con posterior calentamiento, puede dar el 2-metoxi- o la 2-benciloxi-3-ciano-4,6-dimetilpiridina requeridos (compuesto 14, esquema 4, etapa A). La posterior reducción del grupo ciano en la 2-alcoxi-3-ciano-4,6-dimetilpiridina (compuesto 14) en condiciones convencionales bien conocidas en la literatura para un experto en la técnica, tales como tratamiento lento con un agente reductor tal como DIBAL-H en un disolvente aprótico tal como DCM a 0 °C o TA, puede dar el correspondiente aldehído de piridina (compuesto 15, esquema 4, etapa B). La reducción adicional al carbinol (compuesto 16, esquema 4, etapa C) puede realizarse en condiciones estándar bien conocidas por un experto en la técnica; específicamente, tratando el aldehído de piridina (compuesto 15) en porciones con un agente reductor común tal como NaBH4 a 0 °C o temperatura inferior, para obtener el carbinol (compuesto 16). La posterior cloración del carbinol (compuesto 16) con un agente de cloración típico tal como SOCl2 o POCl3 en un disolvente aprótico tal como DCM a bajas temperaturas tales como de -40 °C a -60 °C puede dar la clorometilpiridina requerida (compuesto 17, esquema 4, etapa D).
Figure imgf000016_0002
El esquema 5 ilustra la síntesis de 4-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)tiofen-3-carboxilato de metilo (compuesto 20). Como es bien conocido en la técnica, el bromuro de arilo (compuesto 18) puede carbonilarse usando una serie de catalizadores de paladio (II) y una variedad de ligandos de fosfina apropiados, específicamente acetato de paladio (II) y 1, 1'-bis(difenilfosfino)ferroceno, en presencia de un alcohol tal como MeOH en un disolvente polar tal como DMF o DMA con o sin una base orgánico no nucleófila tal como DIPEA o TEA, en atmósfera presurizada de monóxido de carbono, para obtener el éster (compuesto 19, esquema 5, etapa A). La posterior esterificación de borolano puede llevarse a cabo por desprotonación con un reactivo de metalación de alquilo tal como un n-butil-, sbutil- o f-butilitio con inactivación del anión arilo con un éster de borato o por complejos de coordinación de metales de transición usando paladio (ll), iridio (I) o hierro (III), para obtener el éster borónico deseado. Específicamente, el éster (compuesto 19) puede tratarse con bis(1,5-ciclooctadieno)di-|j-metoxidiiridio (I) y 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano en porciones en un disolvente no polar tal como ciclohexano con calor concomitante para obtener 4metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)tiofen-3-carboxilato de metilo (compuesto 20, esquema 5, etapa B).
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Puede prepararse la 2-etoxipiridina (compuesto 27) de acuerdo con la ruta representada en el esquema 6, partiendo con condensación de malononitrilo con acetilceteno en condiciones básicas en un disolvente orgánico polar apropiado, tal como hidruro sódico y THF, para obtener la 2-amino-3-cianopiranona (compuesto 21, esquema 6, etapa A). El posterior reordenamiento térmico con un ácido inorgánico, tal como HCl, puede dar la 3-ciano-4-hidroxi-6-metilpiridona (compuesto 22, esquema 6, etapa B). Puede realizarse cloración de la 4-cloropiridona (compuesto 23) usando muchos agentes de cloración bien conocidos en la técnica, más específicamente, una mezcla de POCh y PCl5 (esquema 6, etapa C); la alquilación de la piridona resultante (compuesto 23) puede conseguirse mediante eterificación mediada por metal con un haluro de alquilo en un disolvente orgánico no polar apropiado, más específicamente usando óxido de plata (I) y yodoetano en tolueno, para dar la 2-etoxi-3-ciano-4-cloropiridina (compuesto 24, esquema 6, etapa D). Reducción de dos etapas usando agentes de reducción tales como DIBAL-H seguido de NaBH4 o NaCNBH3 puede dar el alcohol (compuesto 26, esquema 6, etapas E-F) y posterior cloración con un agente de cloración tal como POCl3 o PCl5 en un disolvente orgánico apropiado puede producir la etoxipiridina (compuesto 27). Más específicamente, la cloración del alcohol (compuesto 26) se puede conseguir mediante preparación in situ del mesilato mediante tratamiento con cloruro de metanosulfonilo en DCM de 0 °C a TA para dar la etoxipiridina (compuesto 27, esquema 6, etapa G).
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El esquema 7 representa la síntesis de los compuestos de fórmula I. El acoplamiento del fosfato de vinilo preparado (compuesto 5, esquema 1, etapa D) con el éster de aril boronato (compuesto 20, esquema 5, etapa B) en condiciones estándar de acoplamiento del tipo Suzuki utilizando un catalizador de paladio (II) y un ligando de fosfina con una base inorgánica suave tal como K3PO4 en un disolvente orgánico polar tal como 1,4-dioxano puede dar el éster vinil tiofeno (compuesto 28, esquema 7, etapa A). La reducción del resto vinilo puede conseguirse mediante procedimientos bien documentados en la técnica para obtener el éster metil tiofeno a (compuesto 29, esquema 7, etapa B). Puede conseguirse reducción estereoselectiva del grupo vinilo usando una serie de catalizadores y ligandos bien documentada en la técnica, especialmente con un complejo catalizador/ligando de iridio (I) tal como tetraquis (3,5-bis(trifluorometil)fenilborato de [(4R,5R)-(+)-O-[1-bencil-1-(5-metil-2-fenil-4,5-dihidrooxazol-4-il)-2-feniletil](diciclohexilfosfinito) (1,5-COD) iridio (I) para producir el éster estereoespecífico deseado (compuesto 29). La posterior bromación en el esquema 7, etapa C, para dar el éster 5-bromotiofeno (compuesto 30), puede llevarse a cabo usando un agente de bromación tal como bromo elemental o NBS en un disolvente orgánico adecuado tal como CHCl3, DCM, EtOAc, 1,4-dioxano o CCU. La alquilación a 2-[2-(benciloxicarbonilamino)etil]-5-[1-(1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-il)etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (compuesto 31) en condiciones estándar de acoplamiento mediado por paladio, específicamente usando RuPhos-G3-palaciclo (esquema 7, etapa D), seguido de desprotección de la carbobenciloxi amina (compuesto 31) en condiciones habituales de hidrogenólisis bien conocidas en la técnica, específicamente, ciclación in situ en un disolvente alcohólico orgánico polar tal como MeOH (esquema 7, etapa E) y desenmascarar la cetona en condiciones ácidas estándar, por ejemplo, usando HCl en un disolvente polar adecuado tal como THF o EtOH, puede lograrse para dar 3-metil-2-[1-(4-oxociclohexil)etil]-6,7-dihidro-5H-tieno[3,2-c]piridin-4-ona (compuesto 33, esquema 7, etapa F). Puede realizarse aminación reductora en presencia de un ácido de Lewis tal como isopropóxido de titanio y un agente reductor tal como NaBH4, Na(OAc3)BH o NaCNBH3, en un disolvente adecuado tal como DCM o MeOH, para obtener una mezcla del ciclohexano trans y cis (compuesto 34, esquema 7, etapa G), que se puede separar por cristalización o procedimientos de cromatografía bien conocidos en la técnica. Además, un experto en la técnica puede reconocer que la utilización de LiBH4 como agente reductor puede conducir, principalmente, al estereoisómero trans. La alquilación en condiciones bien conocidas con un haluro de aralquilo sustituido de forma apropiada, tal como haluro de bencilo, seguido o de desmetilación o de desbencilación en condiciones ácidas, por ejemplo usando LiCl en presencia de PTSA con calentamiento, puede dar el compuesto de fórmula I (esquema 7, etapas H y M).
Como alternativa, la carbobenciloxi amina (compuesto 31, esquema 7, etapa D) puede someterse a hidrogenólisis usando condiciones bien conocidas en la técnica, por ejemplo con Pd(OH)2 sobre carbono en un disolvente orgánico adecuado tal como MeOH y puede realizarse hidrogenólisis en presencia de un aldehído de piridina (por ejemplo, compuesto 15, esquema 4, etapa B), para dar 5-[1-(1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-il)etil]-4-metil-2-[2-[(6-metil-3-piridil)metilamino]etil]tiofen-3-carboxilato de metilo (compuesto 35, esquema 7, etapa I). El posterior desenmascaramiento de la cetona, la aminación reductora, la ciclación en condiciones ácidas térmicas y la O-desprotección como anteriormente, pueden producir compuestos de fórmula I (esquema 7, etapas J-M).
Como alternativa, una amina tal como el compuesto 38, en la que R3=H, R4= bencilo, puede someterse a hidrogenólisis usando condiciones bien conocidas en la técnica para proporcionar una amina en la que R3=R4=H. Someter esta amina a condiciones de aminación reductora y O-desprotección como anteriormente, pueden producir compuestos de fórmula I. En especial, el uso de ácido, formaldehído y triacetoxiborohidruro puede dar como resultado un producto de aminación reductora en el que R3=R4=Me.
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El esquema 8 representa la síntesis de compuestos de fórmula II. La nitración del éster (compuesto 19, esquema 5, etapa A) con posterior reducción de nitro en condiciones convencionales puede proporcionar 5-amino-4-metil-tiofen-3-carboxilato de metilo (compuesto 40, esquema 8, etapas A-B). La amino protección con un grupo protector de amina adecuado, tal como BOC y la posterior alquilación en condiciones habituales, por ejemplo, alquilación con yoduro de metilo en presencia de una base suave tal como K2CO3 o Cs2CO3 en un disolvente polar tal como DMF, puede proporcionar un amino tiofeno protegido N-alquilado de forma apropiada, lo que puede estar seguido in situ de escisión de carbamato y posterior aminación reductora, por ejemplo con una ciclohexanona, tal como 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ona y Na(OAc3)BH o NaCHBH3, en un disolvente orgánico adecuado tal como DCE, para obtener la amina terciaria requerida (compuesto 41, esquema 8, etapa C, en la que R5 = CH3). Como alternativa, el 5-amino-4-metil-tiofen-3-carboxilato (compuesto 40) puede someterse primero a condiciones de aminación reductora con una ciclohexanona, tal como 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ona, en presencia de Na(OAc)3BH o NaCNBH3 en un disolvente orgánico adecuado tal como DCE, seguido de una segunda aminación reductora in situ con acetaldehído, para obtener la amina terciaria requerida (compuesto 41, esquema 8, etapa C, en la que R5 = CH2CH3). La posterior bromación, la alquilación mediada por metal, la ciclación a la lactama bicíclica (compuesto 44), la N-alquilación de la lactama, el desenmascaramiento de la cetona, la aminación reductora y la desmetilación o la desbencilación finales, todas pueden realizarse de manera similar a los procedimientos del esquema 7 para obtener los compuestos finales de fórmula II (esquema 8, etapas D-J).
Como alternativa, el cetal (compuesto 45, esquema 8, etapa G) primero se puede desalquilar para obtener la piridona cetona (compuesto 48, esquema 8, etapa K) en condiciones similares a las descritas en el esquema 7. La posterior alquilación seguida de aminación reductora o doble aminación reductora (en condiciones similares al esquema 8, etapa C) puede realizarse para obtener los compuestos de fórmula II (esquema 8, etapa l)
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El esquema 9 representa la síntesis de compuestos de fórmula III. Un 2-bromo-5-[R5 *105-(1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-il)amino]-4-metil-tiofen-3-carboxilato de metilo N-alquilado (compuesto 42, esquema 8, etapa D) puede alquinilarse mediante procedimientos de acoplamiento mediados por metales de transición bien conocidos en la técnica. Más específicamente, el bromotiofeno (compuesto 42) puede tratarse con prop-2-in-1-il carbamato de bencilo en presencia de CuI, un complejo de ligando-paladio (II)-, tal como dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) y una base orgánica no nucleófila tal como TEA, para obtener el alquino (compuesto 49, esquema 9, etapa A). La posterior reducción del alquino y la desprotección del resto amina se conocen bien en la técnica. Específicamente, el tratamiento del alquino (compuesto 49) en condiciones de hidrogenación catalítica estándar y la hidrogenólisis in situ con H2 en presencia de Pd sobre carbono o Pd(OH)2 sobre carbono en un disolvente orgánico tal como MeOH, EtOH o EtOAc a presión, pueden dar la amina (compuesto 50, esquema 9, etapa B), que posteriormente puede ciclarse en condiciones básicas tal como KOtBu y calentarse para obtener la lactama (compuesto 51, esquema 9, etapa C). La alquilación del nitrógeno de la lactama, el desenmascaramiento de la cetona, la aminación reductora y la desalquilación finales, todos pueden realizarse de forma similar a la descrito en el esquema 8 para obtener los compuestos de fórmula III (esquema 9, etapas D-F).
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El esquema 10 representa la síntesis de compuestos de fórmula IV partiendo con el 5-bromotiofen éster sustituido de forma apropiada (compuesto 30), utilizando procedimientos similares a los descritos en el esquema 9 (esquema 10, etapas A-F).
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La preparación de compuestos de fórmula V se representa en el esquema 11. Tratar el aminotiofeno (compuesto 40, esquema 8, etapa B) con una aminoalquil cetona protegida de forma apropiada, en condiciones de aminación reductora bien conocidas en la técnica, con posterior alquilación, usando un agente de alquilación tal como CH3I o CH3CH3I en condiciones básicas con una base apropiada tal como NaH o K2CO3, o alquilación mediante una segunda aminación reductora con, por ejemplo, acetaldehído, (esquema 11, etapa A), puede dar el N-piperidinil tiofen éster N-alquilado (compuesto 59). Más específicamente, la 3,4-dimetiltiofen-2-amina (compuesto 40) puede tratarse con terc-butil-4-oxopiperidin-1-carboxilato en un disolvente orgánico apropiado, tal como DCE con adición en porciones de un agente reductor adecuado tal como Na(OAc)3BH con adición posterior de formaldehído o acetaldehído para obtener el N piperidinil tiofeno N-alquilado (compuesto 59). La posterior bromación, la alquilación del bromuro de arilo (compuesto 60) en condiciones de acoplamiento catalizadas con Pd para obtener alquiltiofeno (compuesto 61), la ciclación a la lactama, la N-alquilación de la lactama y finalmente la desprotección de un modo similar al descrito en el esquema 8, pueden dar compuestos de fórmula V (esquema 11, etapas B-F).
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El esquema 12 muestra la síntesis de compuestos de fórmula VI. La doble alquilación del aminotiofeno (compuesto 40) en condiciones de aminación reductora, específicamente usando primero una 4-aminociclohexanona protegida de forma apropiada y después acetaldehído en presencia de Na(OAc)3BH, puede dar la tienilciclohexilamina N-alquilada (compuesto 64, esquema 12, etapa A). Además, La N-metilación a esta tienilciclohexil amina N-alquilada (compuesto 64) se puede realizar protegiendo primero el amino tiofeno con un grupo protector de amina apropiado, tal como BOC, seguido de tratamiento del posterior carbamato con una base fuerte, tal como NaH o KOtBu, tratamiento del anión resultante con un haluro de alquilo tal como CH3I, eliminación de grupo protector de amina y, finalmente, aminación reductora con una 4-aminociclohexanona protegida de forma apropiada. La desprotección del grupo ciclohexilamino que proporciona el 4-aminociclohexano (compuesto 65) se puede llevar a cabo mediante una serie de condiciones bien reconocidas por un experto en la técnica (esquema 12, etapa B). La alquilación (esquema 12, etapa C) de este 4-aminociclohexano (compuesto 65, esquema 12, etapa C) se puede realizar usando el triflato generado in situ de 2-metoxipropan-1,3-diol (compuesto 66) y la posterior bromación, usando o bromo elemental o NBS, da el bromotiofeno (compuesto 69, esquema 12, etapa E). La alquilación del arilbromuro (compuesto 69) en condiciones catalizadas por paladio, por ejemplo, usando una sal de trifluoroborato de potasio sustituida con RuPhos-G3-palaciclo catalítico en una mezcla de tolueno y agua, en presencia de una base inorgánica tal como K2CO3 y calentamiento, puede dar como resultado el 2-[2-(benciloxicarbonilamino)etil]-5-[[4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]amino]-4-metil-tiofen-3-carboxilato de metilo N-alquilado (compuesto 70, esquema 12, etapa F). La desprotección en condiciones bien descritas en la técnica, con aminación reductora concomitante in situ usando un heteroaril aldehído sustituido de forma apropiada, por ejemplo, en presencia de Pd(OH)2 sobre carbono en un disolvente alcohólico, tal como EtOH, bajo presión y calentamiento, puede dar la aminometil piridina sustituida (compuesto 71, Ra = CH3 o Bn, esquema 12, etapa G). La posterior ciclación y desprotección en condiciones similares a las descritas en el esquema 8, puede producir compuestos de fórmula VI (esquema 12, etapas H-I).
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El esquema 13 representa una síntesis alternativa de compuestos de fórmula II. El desenmascaramiento del cetal (compuesto 42, esquema 8, Etapa D) en condiciones ácidas similares a las descritas en el esquema 7, etapa J o el esquema 8, etapa K, puede dar la cetona correspondiente (compuesto 73, esquema 13, etapa A). La doble aminación reductora en condiciones similares a las del esquema 8, etapa L, pueden dar como resultado la ciclohexilamina (compuesto 74, esquema 13, etapa B) y el posterior acoplamiento mediado por metales de transición en las condiciones descritas en el esquema 7, etapa D, seguido de la desprotección de la amina, bien descrita en la literatura, puede dar aminociclohexano (compuesto 75, esquema 13, etapa C). La ciclación de la 6,7-dihidro-5H-tieno[3,2-c]piridin-4-ona (compuesto 76) en condiciones similares a la condiciones descritas en el esquema 11, etapa D, seguida de condiciones de alquilación similares a las descritas en el esquema 7, etapa H, puede dar piridina sustituida (compuesto 77, esquema 13, etapa E) y la desalquilación final en condiciones similares a las descritas en el esquema 7, etapa M, pueden dar como resultado el compuesto de fórmula II (esquema 13, etapa F).
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El esquema 14 ilustra una ruta sintética alternativa para compuestos de fórmula IV. El alquino compuesto 54 (esquema 10, etapa A) se puede reducir y desproteger de forma simultánea usando una serie de técnicas bien conocidas en la materia, tales como hidrogenación catalítica con hidróxido de paladio (II) y la aminación reductora in situ con una 2-alcoxipiridina sustituida de forma apropiada, tal como 4,6-dimetil-2-alcoxipiridina, puede realizarse en condiciones similares a las representadas en el esquema 9, etapa B para dar el cetal compuesto 78. El posterior desenmascaramiento de la cetona compuesto 79, la ciclación a la lactama compuesto 80, la aminación reductora con una amina sustituida de forma apropiada para obtener el compuesto 81 y la desalquilación finales, todos en condiciones similares a las representadas en el esquema 7 (etapas J-M), pueden producir compuestos de fórmula IV.
Un experto en la técnica reconocerá que puede realizarse la separación de todos los isómeros cis y trans relevantes descritos en los esquemas 7 a 12 usando técnicas habituales bien conocidas en la materia, por ejemplo, o usando cromatografía ultrarrápida sobre sílice estándar y una mezcla de disolventes orgánicos apropiada (por ejemplo, EtOAc/hexanos) o mediante cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 usando una mezcla de agua/disolventes orgánicos apropiada (por ejemplo, H2O tamponada con NH4OAc o NH4HCO3 y ACN).
Preparación 1
3-viniloxiazetidin-1-carboxilato de tere-butilo
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Añadir 3-hidroxiazetidin-1-carboxilato de tere-butilo (12,0 g, 69,3 mmol), n-butil vinil éter (125,0 ml, 961 mmol) y TEA (4,1 ml, 29 mmol) a un matraz cerrado herméticamente. Burbujear la mezcla con N2 vigorosamente durante 10 min. Añadir 4,7-difenil-1,10-fenantrolina (1,0 g, 2,92 mmol) y Pd(OAc)2 (0,66 g, 2,91 mmol). Cerrar herméticamente el matraz y agitar la mezcla en atmósfera de N2 a 80 °C durante 7 días. Filtrar la mezcla a través de tierra de diatomeas y aclarar la torta de filtro con EtOAc. Concentrar el filtrado y someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-20 % en hexanos, para dar el compuesto del título (9,95 g, 72 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo después de la evaporación del disolvente. RMN 1H (400,1 MHz, CDCl3) 81,44 (s, 9H), 3,90 (dd, J = 4,2, 10,1 Hz, 2H), 3,97 (dd, J = 2,5, 14,5 Hz, 1H), 4,08 (dd, J = 2,5, 6,8 Hz, 1H), 4,17 (dd, J = 6,5, 10,1 Hz, 2H), 4,55-4,61 (m, 1H), 6,37 (dd, J = 6,8, 14,5 Hz, 1H).
Preparación 2
3-(ciclopropoxi)azetidin-1-carboxilato de tere-butilo
Figure imgf000024_0002
Enfriar una solución de 3-viniloxiazetidin-1-carboxilato de tere-butilo (9,9 g, 50 mmol) y cloroyodometano (12 ml, 159,8 mmol) en DCE (50 ml) a -5 °C y después añadir una solución 1 M de dietilcinc en heptano (80 ml, 80 mmol) gota a gota durante 60 min mientras se mantiene la temperatura interna entre 0 y -5 °C. Calentar a TA y agitar la mezcla durante 30 min. Volver a enfriar la mezcla en un baño de hielo e inactivar la reacción con solución acuosa saturada de NH4CL Añadir solución concentrada de NH4OH y después, extraer la mezcla resultante tres veces con MTBE. Lavar los extractos combinados con solución acuosa saturada de NH4Cl, secar sobre K2CO3 anhidro, filtrar y concentrar al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-20 % en hexanos, para dar el compuesto del título (4,90 g, 46 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro después de la evaporación del disolvente. RMN 1H (400,1 MHz, CDCh) 80,45-0,50 (m, 2H), 0,57-0,62 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 3,21­ 3,26 (m, 1H), 3,85 (dd, J = 4,2, 9,8 Hz, 2H), 4,08 (dd, J = 6,6, 9,8 Hz, 2H), 4,32 (m, 1H).
Preparación 3
Clorhidrato de 3-(ciclopropoxi)azetidina
Figure imgf000024_0003
Enfriar una solución de 3-(ciclopropoxi)azetidin-1-carboxilato de tere-butilo (4,45 g, 20,9 mmol) en THF (10 ml, 123 mmol) en un baño de hielo y añadir gota a gota una solución de HCl 4 N en 1,4-dioxano (20 ml, 80 mmol). Agitar la solución a TA durante 3 h y concentrar al vacío. Disolver el residuo en 2-propanol, concentrar y secar al vacío para dar el compuesto del título (3,0 g, 96 % de rendimiento), el cual puede usarse sin más purificación. RMN 1H (400,1 MHz, CD3OD) 80,48-0,54 (m, 2H), 0,56-0,61 (m, 2H), 3,35-3,40 (m, 1H), 3,98 (dd, J = 4,8, 11,8 Hz, 2H), 4,29 (dd, J = 6,8, 11,8 Hz, 2H), 4,51-4,58 (m, 1H).
Preparación 4
1-benzhidril-3-[(3S)-tetrahidrofuran-3-il]oxi-azetidina
Figure imgf000025_0001
Calentar una mezcla de (3S)-tetrahidrofuran-3-ol (10 ml, 122,0 mmol) y metanosulfonato de 1 -benzhidrilazetidin-3-ilo (3,0 g, 9,3 mmol) a 100 °C en un microondas durante 20 min. Enfriar la mezcla a TA y diluir con EtOAc y solución acuosa saturada de Na2CO3. Separar las capas, lavar la capa orgánica secuencialmente con agua y NaCl acuoso saturado y secar sobre Mg2SO4. Filtrar y concentrar al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 10-30 % en hexanos para dar el compuesto del título (0,9 g, 30 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro, después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 310 (M+H).
Preparar la preparación 5 esencialmente mediante el procedimiento de preparación 4 usando (3R)-tetrahidrofuran-3-ol.
Figure imgf000025_0004
3-[(3S)-tetrahidrofuran-3-il]oxiazetidina
Figure imgf000025_0002
Descargar N2 a través de una mezcla de 1-benzhidril-3-[(3S)-tetrahidrofuran-3-il]oxi-azetidina (0,85 g, 2,7 mmol), MeOH (20 ml), EtOAc (5 ml) y AcOH (1 ml) durante 10 min. Añadir Pd al 10 % sobre carbono (0,50 g) y agitar la suspensión resultante en atmósfera de H2 a 413,685 kPa durante 18 h. Eliminar el catalizador mediante filtración y aclarar la torta de filtro con MeOH. Concentrar y secar el residuo al vacío para dar el compuesto del título (0,39 g, 95 % de rendimiento) adecuado para su uso sin más purificación. RMN 1H (400,1 MHz, CDCh): 81,85-2,05 (m, 2H), 2,05 (s a, 1H), 3,58-3,72 (m, 5H), 3,74 (d, 1H), 3,80 (m, 1H), 3,89 (m 1H), 4,07 (m, 1H), 4,34 (m, 1H).
Preparar la preparación 7 esencialmente mediante el procedimiento de preparación 6 usando 1-benzhidril-3-[(3R)-tetrahidrofuran-3-il]oxi-azetidina.
Figure imgf000025_0003
Preparación 8
1-[1-(difenilmetil)azetidin-3-il]-3-metil-1H-pirazol y 1-(1-benzhidrilazetidin-3-il)-5-metil-pirazol (mezcla de regioisómeros)
Figure imgf000026_0001
En un tubo sellado herméticamente, añadir a una solución de metanosulfonato de (1-benzhidrilazetidin-3-ilo) (7 g, 22,05 mmol) en DMF (15 ml), 3-metiMH-pirazol (2,17 g, 26,47 mmol) y Cs2CO3 (8,6 g, 26,47 mmol) y agitar la mezcla a 120 °C durante 24 h. Enfriar a TA, verter la mezcla en agua enfriada con hielo y extraer con una solución de MeOH al 5 % en DCM. Separar las capas, secar la fase orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente de EtOH al 7-30 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título como una mezcla de regioisómeros en forma de un aceite de color amarillo (3,5 g, 49 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 304 (M+H).
Preparar los compuestos siguientes esencialmente mediante el procedimiento de preparación 8.
Figure imgf000026_0003
Preparación 11
1-(azetidin-3-il)-3-metil-1H-pirazol y 1-(azetidin-3-il)-5-metil-pirazol (mezcla de regioisómeros)
Figure imgf000026_0002
A un autoclave de 300 ml Parr, añadir una mezcla de 1-[1-(difenilmetil)azetidin-3-il]-3-metil-1H-pirazol (3,5 g, 11,5 mmol) y 1-(1-benzhidrilazetidin-3-il)-5-metil-pirazol (mezcla de regioisómeros) con Pd al 10 % sobre carbono (3,5 g, 1 g/g) a una solución de MeOH (75 ml) y EtOAc (25 ml). Purgar el recipiente tres veces con H2, cargar a 344,738 kPa de H2 y agitar vigorosamente a TA durante 24 h. Filtrar a través de un lecho de tierra de diatomeas y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título como una mezcla de regioisómeros en forma de un aceite incoloro (1,58 g, 93 % de rendimiento). EN/EM (m/z): 138 (M+H).
Preparar los compuestos siguientes esencialmente mediante el procedimiento de preparación 11 usando la 1-(difenilmetil)azetidina correspondiente.
Figure imgf000027_0003
Preparación 14
3-(ddopropNmetoxi)azetidin-1-carboxNato de terc-butilo
Figure imgf000027_0001
Añadir NaH (al 60 % en aceite, 900 mg, 22,5 mmol) a una solución de 3-hidroxiazetidin-1-carboxilato de ferc-butilo (3 g, 17,32 mmol) en DMF (10 ml) a 0 °C. Agitar la mezcla a TA durante 1,5 h, después añadir lentamente bromometNddopropano (2,80 g, 20,7 mmol) y agitar durante 72 h. Diluir la mezcla con EtOAc y Et2O, lavar dos veces con agua, una vez con NaCl acuoso saturado, separar las capas, secar el extracto orgánico sobre MgSO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-20 % en hexanos para dar el compuesto del título (1,91 g, 48 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro, después de la evaporación del disolvente. RMN 1H (400,1 MHz, CDCh) 80,18-0,22 (m, 2H), 0,54-0,58 (m, 2H), 1,00-1,04 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 3,23 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 3,85 (dd, J = 4,3, 10,1 Hz, 2H), 4,06 (dd, J = 6,5, 10,1 Hz, 2H), 4,20-4,26 (m, 1H).
Preparación 15
Clorhidrato de 3-(ciclopropilmetoxi)azetidina
Figure imgf000027_0002
Añadir una solución 4 N de HCl en 1,4-dioxano (15 ml, 60 mmol) a 3-(ciclopropilmetoxi)-azetidin-1-carboxilato de terc-butilo (1,91 g, 8,40 mmol) en un matraz de fondo redondo y agitar a TA durante una noche. Concentrar la mezcla de reacción al vacío y secar el residuo resultante al vacío para dar el compuesto del título (1,68 g, rendimiento cuantitativo), adecuado para su uso sin más purificación. RMN 1H (400,1 MHz, DMSO-d6) 80,14-0,18 (m, 2H), 0,44­ 0,48 (m, 2H), 0,91-0,99 (m, 1H), 3,21 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 3,72-3,82 (m, 2H), 4,02-4,12 (m, 2H), 4,30-4,37 (m, 1H), 9,17 (s a, 2H).
Preparación 16
2-metoxi-4,6-dimetil-piridin-3-carbonitrilo
Figure imgf000028_0001
Añadir una solución de NaOCH3 en MeOH (30 % en masa, 175 ml, 940 mmol) gota a gota a una solución de 2-cloro-4,6-dimetil-piridin-3-carbonitrilo (75 g, 441,1 mmol) en MeOH (450 ml) en un baño de agua seguido de otra adición gota a gota de NaOCH3 en MeOH (25 % en masa, 250 ml, 1090 mmol). Agitar la mezcla resultante durante 1 h, verter en agua enfriada en hielo, agitar durante 30 min y después filtrar el sólido resultante. Lavar la torta de filtro con hexano y secar en un horno de vacío durante una noche. Extraer el filtrado acuoso con DCM, secar la fase orgánica sobre MgSO4, filtrar y concentrar al vacío. Combinar el sólido filtrado y el residuo evaporado para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido (71,8 g, rendimiento cuantitativo). EN/EM (m/z): 163 (M+H).
Preparación 17
2-metoxi-4,6-dimetil-piridin-3-carbaldehído
Figure imgf000028_0002
Añadir una solución 1 M de DIBAL-H en tolueno (240 ml, 240 mmol) a una solución de 2-metoxi-4,6-dimetil-piridin-3-carbonitrilo (48 g, 295,95 mmol) en DCM (480 ml) a 0 °C durante 2 h. Eliminar el baño de hielo después de 1 h y agitar a TA durante una noche. Enfriar en un baño de agua a TA e inactivar añadiendo lentamente una mezcla de HCl acuoso 1 M (192 ml) y AcOH (192 ml). Añadir DCM, separar las capas, lavar la fase orgánica con NaCl acuoso saturado, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-20 %/hexano para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido (22,6 g, 46 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 166 (M+H). RMN 1H (400,1 m Hz , CDCh) 8 2,43 (s, 3H), 2,54 (s, 3H), 4,01 (s, 3H), 6,61 (s, 1H), 10,48 (s, 1H).
Preparación 18
(2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metanol
Figure imgf000028_0003
Añadir NaBH4 (6,4 g, 170 mmol) en porciones a una solución de 2-metoxi-4,6-dimetil-piridin-3-carbaldehído (22,6 g, 137 mmol) en MeOH (500 ml) a 0 °C. Calentar la solución a TA y agitar durante una noche. Añadir más NaBH4 (1,0 g) y agitar la mezcla durante 1 h. Enfriar el matraz a 0 °C, añadir agua enfriada en hielo (50 ml) y concentrar la mezcla resultante a ~ A volumen al vacío. Añadir NaHCO3 acuoso saturado al residuo resultante, extraer con DCM, separar las capas, lavar la fase orgánica con NaCl acuoso saturado y secar la fase orgánica sobre Na2SO4. Filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite (23 g, rendimiento cuantitativo). EN/EM (m/z): 168 (M+H).
Preparación 19
3-(clorometil)-2-metoxi-4,6-dimetil-piridina
Figure imgf000028_0004
Añadir una solución de cloruro de metanosulfonilo (22 ml, 281 mmol) disuelto en DCM (100 ml) a una solución de (2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metanol (39 g, 233,25 mmol) en DCM (500 ml) que contiene DlPEA (54 ml) a 0 °C. Calentar lentamente a TA y agitar durante aproximadamente 48 h. Concentrar la mezcla de reacción al vacío y someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 2-5 %/hexano, para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido (30,85 g, 71 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. RMN 1H (399,8 MHz, DMSO-da): 2,28 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 4,69 (s, 2H), 6,70 (s, 1H).
Preparación 20
2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-carbonitrilo
Figure imgf000029_0001
Añadir gota a gota de bencilo (100 ml, 859,5 mmol) a una mezcla de 2-hidroxi-4,6-dimetil-piridin-3-carbonitrilo (100 g, 675 mmol) y óxido de plata (174 g, 747 mmol) en tolueno (1 l) en un matraz de tres bocas de 2 l equipado con un agitador mecánico. Agitar la mezcla a 110 °C durante 6 h. Enfriar la mezcla a ~60 °C, filtrar sobre tierra de diatomeas, aclarar con DCM y concentrar el filtrado al vacío. Disolver el producto en bruto en DCM y añadir gota a gota MeOH hasta que aparezca un sólido. Filtrar y recoger el sólido resultante para dar el producto del título en forma de un sólido de color pardo (144,9 g, 90 % de rendimiento). EN/EM (m/z): 239 (M+H).
Preparación 21
2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-carbaldehído
Figure imgf000029_0002
Añadir gota a gota una solución 1 M de DIBAL-H en tolueno (200 ml, 200 mmol) a una solución de 2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-carbonitrilo (40,3 g, 169 mmol) en DCM (400 ml) a 0 °C durante 3 h. Calentar la mezcla de reacción a TA y agitar durante 3 h. Inactivar muy lentamente la reacción con una mezcla 1:1 de HCl 1 N (160 ml) y ácido acético (160 ml) a TA. Añadir NaCl acuoso saturado (100 ml) y extraer con DCM. Separar las capas y secar los extractos orgánicos sobre Na2SO4 durante una noche. Filtrar, concentrar el filtrado al vacío y someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-5 % en hexanos, para obtener el compuesto del título (24,47 g, 60 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 242 (M+H).
Preparación 22
(2-benciloxi-4,6-dimetil-3-piridil)metanol
Figure imgf000029_0003
Disolver 2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-carbaldehído (46,5 g, 193 mmol) en MeOH (1 l) en un matraz de tres bocas de 2 l en un baño de hielo equipado con un agitador mecánico y añadir NaBH4 (8,7 g, 230 mmol) en porciones pequeñas durante 1 h. Calentar la mezcla a TA y agitar durante 3 h. Volver a enfriar la mezcla a 0 °C e inactivar con agua enfriada con hielo (50 ml). Concentrar la mezcla de reacción al vacío y añadir solución acuosa saturada de NaHCO3. Extraer tres veces con DCM, lavar los extractos combinados con NaCI acuoso saturado y secar sobre Na2SO4. Filtrar y concentrar el filtrado al vacío para dar el compuesto del título (46,8 g, 99,8 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro. EN/EM (m/z): 244 (M+H).
Preparación 23
2-benciloxi-3-(clorometil)-4,6-dimetil-piridina
Figure imgf000030_0001
Añadir SOCl2 (4,0 g, 33 mmol) lentamente a una solución de (2-benciloxi-4,6-dimetil-3-piridil)metanol (6,0 g, 25 mmol) en DCM (100 ml) a -60 °C en atmósfera de N2 y después calentar a -40 °C durante 30 min. Verter la mezcla de reacción fría en hielo/agua (100 ml). Ajustar el pH de la mezcla con NaHCO3 acuoso saturado hasta que sea ligeramente básico, después secuencialmente, extraer la mezcla acuosa dos veces con DCM, combinar los extractos orgánicos y secar sobre MgSO4. Filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-30 % en hexanos para dar el compuesto del título (4,90 g, 76 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400,1 MHz, CDCh) 82,35 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 4,71 (s, 2H), 5,43 (s, 2H), 6,61 (s, 1H), 7,28-7,33 (m, 1H), 7,35-7,40 (m, 2H), 7,47-7,51 (m, 2H).
Preparación 24
2-amino-6-metil-4-oxo-4H-piran-3-carbonitrilo
Figure imgf000030_0002
Enfriar una suspensión de NaH (85,4 g, 2,10 mol) en THF anhidro (0,70 l) a 0 °C. Añadir malononitrilo puro (238 g, 3,6 mol) gota a gota a la suspensión en agitación. Agitar a 0 °C durante 10 min, después enfriar a -10 °C y añadir una solución de acetil ceteno (163 g, 1,91 mol) en THF (0,6 l) gota a gota. Agitar a de -10 a 0 °C durante 1 h, después neutralizar usando HCl concentrado y diluir con agua (1,0 l). Agitar a TA durante 16 h. Recoger el sólido por filtración y secar al aire para dar un sólido de color amarillo. Recristalizar a partir de EtOH para obtener el compuesto del título en forma de un polvo de color amarillo (120 g, 42 % de rendimiento). RMN 1H (400,1 MHz, DMSO-d6) 82,15 (3H, s) 5,87 (1H, s), 8,50 (2H, s).
Preparación 25
4-hidroxi-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-carbonitrilo
Figure imgf000030_0003
Calentar una suspensión de 2-amino-6-metil-4-oxo-4H-piran-3-carbonitrilo (120 g, 0,80 mol) en HCl acuoso al 10 % (1,0 l) a 100 °C durante 12 h con agitación. Enfriar a TA y concentrar a presión reducida. Añadir EtOH (0,40 l) al residuo resultante y recoger el sólido por filtración para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (103 g, 86 % de rendimiento). RMN 1H (400,1 MHz, DMSO-d6,) 82,15 (3H, s), 5,87 (1H, s), 11,68 (1H, s), 12,49 (sa).
Preparación 26
4-cloro-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-carbonitrilo
Figure imgf000031_0001
Suspender 4-hidroxi-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-carbonitrilo (103 g, 0,69 mol) en CHCI3 (1,0 l) y añadir cloruro de fosforilo (210 g, 1,37 mol) y pentacloruro de fósforo (286 g, 1,37 mol). Calentar a 70 °C durante 8 h con agitación. Enfriar a TA, verter lentamente en hielo-agua con agitación vigorosa, neutralizar la mezcla usando NH3 acuoso concentrado y recoger el precipitado resultante por filtración para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color pardo (77 g, 65 % de rendimiento) después de secar en un horno de vacío. RMN 1H (DMSO-d6, 400,1 MHz, ppm) 82,27 (3H, s), 6,50 (1H, s).
Preparación 27
4-cloro-2-etoxi-6-metilpiridin-3-carbonitrilo
Figure imgf000031_0002
Añadir yodoetano (3,3 ml, 41 mmol) a una mezcla de 4-cloro-6-metil-2-oxo-1H-piridin-3-carbonitrilo (4,6 g, 27 mmol) y Ag2O (13 g, 55,8 mmol) en tolueno (250 ml) y agitar la mezcla resultante a reflujo durante 4 h. Enfriar la mezcla a 60 °C, filtrar a través de tierra de diatomeas y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-100% en hexanos, para proporcionar el compuesto del título (2,5 g, 47 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): (35Cl/37Cl) 197/199 (M+H).
Preparación 28
4-cloro-2-etoxi-6-metilpiridin-3-carbaldehído
Figure imgf000031_0003
Añadir DIBAL-H 1 M en tolueno (18 ml, 18 mmol) a una solución de 4-cloro-2-etoxi-6-metilpiridin-3-carbonitrilo (2,2 g, 11 mmol) en DCM (100 ml) gota a gota a 0 °C. Calentar la mezcla de forma gradual a TA, agitar durante una noche, colocar el matraz en un baño de agua a TA e inactivar la reacción añadiendo una mezcla de HCl acuoso 1 M (9 ml) y AcOH (9 ml) gota a gota. Diluir la mezcla resultante con DCM, separar las capas resultantes, lavar el extracto orgánico con NaCl acuoso saturado y secar el extracto orgánico sobre Na2SO4 anhidro. Filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título (1,7 g, 76 % de rendimiento) en forma de un sólido de color naranja. EN/EM (m/z): (35Cl/37Cl) 200/202 (M+H).
Preparación 29
(4-cloro-2-etoxi-6-metilpiridin-3-il)metanol
Figure imgf000031_0004
Añadir NaBH4 (0,230 g, 6,08 mmol) a una solución de 4-cloro-2-etoxi-6-metilpiridin-3-carbaldehído (1 g, 5 mmol) en MeOH (50 ml) a 0 °C. Calentar la mezcla de forma gradual a TA, agitar durante 2 h aproximadamente, inactivar la mezcla con solución acuosa saturada de NaHCO3, concentrar la mezcla al vacío, diluir el residuo resultante con solución acuosa saturada de NaHCO3 y extraer con DCM. Separar las capas, secar la capa orgánica sobre Na2SO4 anhidro, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título (1,03 g, 82 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo. EN/EM (m/z): (35Cl/37Cl) 202/204 (M+H).
Preparación 30
4-cloro-3-(clorometil)-2-etoxi-6-metilpiridina
Figure imgf000032_0001
Añadir DIPEA (0,762 ml, 4,33 mmol) a una solución a TA de (4-cloro-2-etoxi-6-metilpiridin-3-il)metanol (1,03 g, 4,09 mmol, 80 % de pureza) en DCM (40 ml). Enfriar la solución a 0 °C, después añadir cloruro de metanosulfonilo (0,335 ml, 4,28 mmol) gota a gota. Calentar la solución de forma gradual a TA, agitar la mezcla resultante a TA durante aproximadamente 3 h y concentrar la mezcla al vacío. Añadir solución acuosa saturada de NaHCO3 y extraer con EtOAc. Separar las capas, secar el extracto orgánico sobre Na2SO4 anhidro, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 5-30 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título (0,788 g, 88 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo después de la evaporación del disolvente. RMN 1H 8 (400,1 MHz, DMSO): 1,31 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 2,37 (s, 3H), 4,37 (c, J = 7,0 Hz, 2H), 4,71 (s, 2H), 7,05 (s, 1H).
Preparación 31
Ácido 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-carboxílico
Figure imgf000032_0002
Añadir ortoformiato de trietilo (2,35 kg, 2,65 l, 15,9 mol), PTSA (2,8 g, 16 mmol) y etilenglicol (1,64 kg, 26,4 mol) a una solución de 4-oxociclohexanocarboxilato de etilo (900 g, 5,29 mol) en EtOH (4 l) y agitar la mezcla a 50 °C durante 1 h. Enfriar a TA y añadir lentamente una solución acuosa 5 M de NaOH (4,24 l, 21,18 mol) durante 20 min; agitar la mezcla resultante durante 2 h. Evaporar la mayoría del EtOH a presión reducida, añadir agua (5 l) y MTBE (4 l), agitar, separar las fases y descartar la fase orgánica. Enfriar la fase acuosa a 15 °C y acidificar mediante la adición lenta de HCl acuoso 5 M hasta pH~3,3 (~3,7 l). Añadir DCM (8 l), separar las capas, secar la fase orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para dar el compuesto del título en forma de un aceite viscoso que solidifica lentamente después de un periodo de reposo en forma de un sólido de baja fusión (887 g, 90 % de rendimiento), adecuado para su uso en la etapa siguiente sin más purificación. (CG-EM) EM (m/z): 99 (M-87).
Preparación 32
N-metoxi-N-metil-1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-carboxamida
Figure imgf000032_0003
Añadir lentamente CDI (915 g, 5,64 mol) en porciones pequeñas durante 20 min a una solución de ácido 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-carboxílico (988,6 g, 5,31 mol) en d Cm (10 l) y agitar durante 1 h. Añadir clorhidrato de N-metoximetanamina (577 g, 5,92 mol) en porciones pequeñas durante 15 min y agitar durante 12 h. Añadir más clorhidrato de N-metoximetanamina (53 g, 0,55 mol) y agitar durante 12 h más. Añadir agua (10 l), separar las fases, lavar la fase orgánica secuencialmente con agua (5 l) y NaCl acuoso saturado (5 l), secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para obtener el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (1,24 kg, rendimiento cuantitativo) adecuado para su uso en la etapa siguientes sin más purificación. EN/EM (m/z): 230 (M+H).
Preparación 33
1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etanona
Figure imgf000033_0001
Enfriar una solución de N-metoxi-N-metil-1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-carboxamida (400 g, 1,74 mol) en THF (3,5 l) a 0 °C en atmósfera de N2y añadir solución 3 M de MeMgBr en Et2O (697,87 ml, 2,1 mol) durante 30 min. Agitar durante 30 min mientras se calienta a TA. Inactivar la reacción mediante la adición lenta de NH4Cl acuoso saturado (1 l) y extraer con MTBE (500 ml x 3). Separar las capas y lavar la capa orgánica con NaCl acuoso saturado. Secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para obtener el compuesto del título en bruto en forma de un aceite de color amarillo claro (275 g, 86 % de rendimiento), adecuado para su uso sin más purificación. (CG-EM) EM (m/z): 184 (M+).
Preparación 34
Fosfato de 1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etenildifenilo
Figure imgf000033_0002
Enfriar una solución de 1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etanona (150 g, 0,81 mol) en THF (1 l) a -70 °C y añadir gota a gota una solución de LiHMDS 1 M en Th F (896 ml, 0,89 mol) durante 30 min. Agitar la mezcla durante 15 min a -60 °C y añadir gota a gota difenilfosforoclorhidato (240,6 g, 896 mmol) en THF (450 ml) a -70 °C. Agitar la mezcla de reacción durante 14 h mientras se calienta a TA. Inactivar la reacción con solución acuosa saturada de NaHCO3 (1 l) y agitar durante 1 h. Extraer con MTBE (8 l x 3), separar las capas, secar los extractos orgánicos combinados sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 2-33 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite de color amarillo (190 g, 56 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 417 (M+H).
Preparación 35
4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000033_0003
Mezclar 3-bromo-4-metiltiofeno (200 g, 1,13 mol), MeOH (800 ml), DMA (1200 ml), TEA (390 ml, 2,8 mol) y purgar con nitrógeno durante 10 min. Añadir 1,1'-bis(difenilfosfino) ferroceno (50 g, 0,09 mol) y acetato de paladio (II) (20 g, 0,09 mol) y agitar en atmósfera de CO a 413,685 kPa durante 30 h a 80 °C. Enfriar la mezcla a TA, diluir con EtOAc, lavar secuencialmente con agua y NaCl acuoso saturado y secar la fase orgánica sobre Na2SO4. Filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título (360 g) en forma de un aceite de color amarillo, suficiente para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 157 (M+H).
Preparación alternativa de 4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Disolver 3-bromo-4-metiltiofeno (1,00 kg, 5,65 mol) y TEA (1,43 kg, 14,12 mol) en DMA (2,5 l) y MeOH (1,32 l) y añadir 1,1-bis-difenilfosfinoferroceno (187,9 g, 0,34 mol) seguido de Pd(OAc)2 (63,4 g, 0,28 mol). Agitar la mezcla resultante en atmósfera de CO a 344,738 kPa a 80 °C durante 16 h. Después de enfriar a t A, añadir EtOAc (5 l), lavar secuencialmente con solución acuosa al 10 % de ácido cítrico (1,6 l x 2 ), solución acuosa saturada de NaHCO3 (1,6 l x 2), agua (1,2 l x 2) y NaCl acuoso saturado (1 l x 2). Separar las capas, secar la fase orgánica sobre MgSO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con EtOAc al 5 % en hexanos, para dar el compuesto del título en forma de un aceite de color amarillo (653 g, 74 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 157 (M+H).
Preparación 36
4-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)tiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000034_0001
Mezclar 4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (250 g, 1,60 mol), 4-ferc-butil-2-(4-ferc-butil-2-piridil)piridina (8,59 g, 32,01 mmol) y [IrMeO(COD)]2 (5,37 g, 8,00 mmol) en ciclohexano (2,5 l). Desgasificar la mezcla al vacío, purgar exhaustivamente con N2 y añadir después 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (409,67 g, 3,20 mol) en porciones pequeñas durante 1 h. Agitar la mezcla resultante a 70 °C durante 3 h. Enfriar la mezcla a TA, concentrar al vacío y someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-1 % en hexanos, para obtener el compuesto del título en forma de un sólido (300 g, 66 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 283 (M+H).
Preparación 37
5-[1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etenil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000034_0002
Agitar una mezcla de difenilfosfato de 1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etenilo (240 g, 576,37 mmol), 4-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)tiofen-3-carboxilato de metilo (211,4 g, 749,28 mmol) y una solución acuosa 2 M de K3PO4 (367 g, 1,73 mol) en dioxano (2,4 l) a TA. Añadir cloro(2-diciclohexilfosfin-2',4',6'-triisopropiM,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio (II) (9,07 g, 11,53 mmol) y agitar a 80 °C durante 3 h. Evaporar el disolvente a presión reducida, extraer con EtOAc (750 ml x 2), separar las capas, lavar secuencialmente las fases orgánicas combinadas con agua (150 ml) y NaCl acuoso saturado, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con EtOAc al 5 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido (375 g, 67 % de rendimiento) después de eliminar el disolvente. EN/EM (m/z): 323 (M+H).
Preparación 38
5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000034_0003
Añadir tetraquis (3,5-bis(trifluorometil)fenilborato de [(4R,5R)-(+)-O-[1-bencil-1-(5-metil-2-fenil-4,5-dihidrooxazol-4-il)-2-feniletil](diciclohexilfosfinita)(1,5-COD) iridio (I) (1,61 g, 0,93 mmol) a una solución de 5-[1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etenil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (60 g, 186 mmol) en DCM (1,9 l) y eluir la solución a través de un reactor de acero inoxidable de 48 ml en atmósfera de hidrógeno de 80 parr a 12 ml/min durante 2 h a TA. Filtrar la solución y concentrar el filtrado al vacío para obtener el compuesto del título en bruto en forma de un aceite de color pardo (60 g, rendimiento cuantitativo), adecuado para su uso en la etapa siguiente sin más purificación. EN/EM (m/z): 325 (M+H).
Preparación 39
4-metil-5-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]tiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000035_0001
Añadir a una solución de 5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (64,7 g, 178 mmol) en THF (450 ml) una solución de HCl 1 N (450 ml, 5,53 mol) y agitar durante 16 horas a TA seguido de 45 °C durante 2 horas. Concentrar la mezcla de reacción al vacío, añadir MTBE (500 ml) y separar las fases. Lavar la fase orgánica secuencialmente con agua (200 ml), solución acuosa saturada de NaHCO3 (100 ml) y NaCl acuoso saturado (100 ml). Secar la fase orgánica sobre MgSO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para dar el compuesto del título en bruto en forma de un aceite de color pardo (53,3 g, 96 % de rendimiento) que puede ser usada sin más purificación. EN/EM (m/z): 281 (M+H).
Preparación 40a
5-[(1R)-1-[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000035_0002
Agitar una solución de clorhidrato de 3-metoxiazetidina (43,4 g, 351 mmol) y DIPEA (65 ml, 373 mmol) en MeOH (500 ml) durante 45 min a TA. Añadir esta mezcla a una solución de 4-metil-5-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]tiofen-3-carboxilato de metilo (50,0 g, 160 mmol) en THF (250 ml) y agitar 40 min a TA. Enfriar la mezcla a -70 °C y añadir LiBH4 (4,9 g, 220 mmol) en cinco porciones durante 25 min. Dejar en agitación durante 4 h mientras se calienta a -20 °C. Verter la mezcla lentamente en una solución acuosa de HCl 1 M (500 ml) y agitar durante 10 min. Evaporar al vacío la mayoría del disolvente orgánico, añadir DCM (500 ml) y una solución acuosa de K2CO35 M (~ pH 9), separar las capas y lavar la fase acuosa otra vez con DCM (250 ml). Combinar los extractos orgánicos, lavar con NaCl acuoso saturado, secar la fase orgánica sobre MgSO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Añadir EtOAc (50 ml) y concentrar otra vez al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con EtOAc al 20 % en trietilamina al 2 %/hexanos para dar aceite después de la evaporación del disolvente. Disolver el aceite resultante en MTBE (200 ml), lavar con HCl acuoso 1 M (200 ml) y añadir K3PO4 acuoso 2 M a la fase acuosa (~pH 7,5). Extraer la solución acuosa con EtOAc (2 x 300 ml), secar sobre MgSO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para obtener el compuesto del título en forma de un aceite de color amarillo claro (15,5 g, 57 % de rendimiento). EN/EM (m/z): 352 (M+H).
Preparación 40b
Clorhidrato de 5-[(1R)-1-[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000035_0003
Puede prepararse clorhidrato de 5-[(1R)-1-[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo esencialmente como se describe en la preparación 40a, con evaporación del disolvente de la mezcla de reacción en bruto seguido de inactivación con HCl y cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de NH32 M al 0­ 100 %/MeOH en DCM, para dar aceite después de la evaporación del disolvente, que cristalizó parcialmente al secar al vacío. La posterior recristalización en EtOAc y una traza de MeOH da material cristalino suficiente para cristalografía por rayos X. EN/EM (m/z): 352 (M+H).
Preparar un cristal individual de clorhidrato de 5-[(1R)-1-[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo mediante recristalización en EtOAc y MeOH. Montar sobre una fibra delgada a -173 °C. Recoger los datos usando una fuente de radiación de I^CuKo (A = 1,54178 A) y un difractómetro con goniómetro de 3 círculos basado en Bruker D8 equipado con un detector de área SMART® 6000CCD (dimensiones del cristal = 0,150 x 0,080 x 0,020 mm). Realizar refinamiento de la celda y reducción de datos usando el programa V8.32b de SAINT. Indexar la celda unitaria, que tiene parámetros monoclínicos de 12,2214(3) A, b = 7,0314(2) A, c = 12,8284(3) A, y p= 108,8099(15)° (volumen de celda a partir de la estructura cristalina = 1043,52(5) A3, densidad calculada de la estructura = 1,235 g/cm3 a -173 °C). Determinar la estructura por procedimientos directos usando el programa SHELXS. Definir de forma independiente todos los parámetros atómicos anisotrópicamente salvo los átomos de hidrógeno. Colocar en posiciones calculadas idealizadas. Confirmar la elección del grupo espacial, denominado P2-i, mediante la convergencia exitosa del refinamiento de mínimos cuadrados de matriz completa en F2 usando el programa SHELXL, que tiene una calidad final de ajuste de 1,110. Los índices R finales (I>2sigma(I)) son R1 = 0,0603, R2 = 0,1242. Refinar el parámetro de estructura absoluta a 0,081(12). Determinar la estructura. Se determina que la estructura es la sal de clorhidrato y se determina que la estructura absoluta es la configuración R en el estereocentro y la configuración trans alrededor del anillo ciclohexano.
Preparación 41
2-bromo-5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-il)etil]-4-metil-tiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000036_0001
Añadir N-bromosuccinimida (6,18 g, 34,7 mmol) a una solución de 5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (15,56 g, 47,97 mmol) en EtOAc (60 ml) y agitar la mezcla a 55 °C durante 30 min, después a 40 °C durante una noche. Lavar la mezcla de reacción dos veces con solución acuosa saturada de NaHSO3, separar las capas y secar las capas orgánicas combinadas sobre MgSO4. Filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-20 % en hexanos, para dar el compuesto del título (15,67 g, 81 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z) (79Br/81Br): 403/405 (M+H).
Preparación 42
2-(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000036_0002
Añadir 2-bromo-5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-il)etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (15,44 g, 38,28 mmol), tolueno (350 ml) y agua (40 ml) en un matraz de tres bocas de 1 l equipado con un agitador mecánico. Desgasificar la mezcla bajo vacío ligero durante 15 min. Añadir N-[2-(trifluoroboranuidil)etil]carbamato de bencil potasio (17,3 g, 57,6 mmol), Cs2CO3 (37,4 g, 115 mmol) y RuPhos-G3-paladaciclo (2,30 g, 2,69 mmol). Desgasificar la mezcla durante otros 15 min y después agitar en atmósfera de N2 a 80-85 °C durante una noche. Añadir solución acuosa saturada de NaHCO3 y extraer tres veces con EtOAc; lavar los extractos combinados secuencialmente con agua y NaCl acuoso saturado, secar sobre MgSO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-50 % en hexanos para proporcionar el compuesto del título (14,72 g, 76 % de rendimiento) en forma de un aceite. EN/EM (m/z): 502 (M+H).
Preparación 43
2-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000037_0001
Agitar una mezcla de 2-(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (14,72 g, 29,35 mmol) y Pd al 10 % seco sobre carbono (3,0 g) en MeOH (8o ml) en atmósfera de H2 a 413,685 kPa durante una noche. Filtrar la mezcla de reacción sobre tierra de diatomeas, agitar el filtrado a TA durante 24 h y concentrar al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 20-100% en hexanos y después un gradiente de MeOH al 10% en EtOAc, para dar el compuesto del título (8,20 g, 83 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 336 (M+H).
Preparación 44
3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000037_0002
Agitar una solución de 2-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (6,18 g, 18,4 mmol) en una mezcla de Th F (30 ml) y HCl 1 N (30 ml) a Ta durante una noche, después a 55 °C durante 2 h. Inactivar la reacción con Na2CO3 sólido y extraer con EtOAc. Lavar los extractos combinados con NaCl acuoso saturado y secar sobre MgSO4. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-100 % en hexanos, para dar el compuesto del título (4,69 g, 87 % de rendimiento) en forma de espuma después de la eliminación del disolvente. EN/EM (m/z): 292 (M+H).
Preparación 45
4-metil-5-nitrotiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000037_0003
Añadir anhídrido acético (2,5 l) a una solución de 4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (150 g, 0,96 mol) en AcOH (4,5 l) por debajo de 25 °C. Enfriar la mezcla a 10 °C, añadir lentamente HNO3 fumante (220 ml), manteniendo la temperatura por debajo de 15 °C, calentar a TA y agitar durante 1 h. Verter lentamente la reacción en agua enfriada con hielo y extraer con EtOAc (2 x 3 l). Separar las capas resultantes, lavar secuencialmente la fase orgánica con agua (4 x 3 l) y solución acuosa saturada de NaHCO3, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con EtOAc al 5 %/hexano, para proporcionar el compuesto del título (91 g, 47 % de rendimiento) en forma de un sólido de color naranja después de la evaporación del disolvente. RMN 1H (400,1 MHz, DMSO-da) 52,77 (s, 3H); 3,83 (s, 3H); 8,61 (s, 1H).
Preparación 46
5-amino-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000037_0004
Añadir hierro (166 g, 2,98 mol) lentamente a una solución de 4-metil-5-nitrotiofen-3-carboxilato de metilo (120 g, 0,55 mol) en AcOH (1200 ml) y EtOH (1200 ml). Agitar la mezcla a 80 °C durante 15 min. Enfriar la reacción, verter lentamente en agua enfriada con hielo y añadir una solución saturada acuosa de NaHCO3 hasta pH 7-7,5. Extraer con EtOAc (2 x 3 l), separar las capas, lavar las capas orgánicas combinadas con NaCl acuoso saturado, secar sobre Na2SO4, filtrar y evaporar el filtrado al vacío para obtener el compuesto del título (98 g, 98 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo, suficiente para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 172 (M+H).
Preparación 47
5-[(ferc-butoxicarbonil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000038_0001
A una solución de 5-amino-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (7,79 g, 37,3 mmol) en 1,4-dioxano (40 ml), añadir carbonato de ferc-butoxicarbonil ferc-butilo (16,3 g, 74,6 mmol), calentar a reflujo durante 2 h, después enfriar a TA y concentrar la mezcla de reacción al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-10 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título (8,88 g, 88 % de rendimiento) en forma de un aceite espeso de color amarillo después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 272 (M+H).
Preparación 48
5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000038_0002
A una solución de 5-[(ferc-butoxicarbonil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (2,01 g, 7,41 mmol) en DMF (20 ml) añadir Cs2CO3 (6,03 g, 18,5 mmol) y CH3I (1,05 g, 7,41 mmol). Calentar la mezcla a 80 °C durante 10 min y enfriar la mezcla de reacción a TA. Diluir con DCM (50 ml) y agua (10 ml), separar la capa orgánica, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Añadir MeOH (40 ml) y HCl acuoso 5 M (20 ml) al residuo resultante y calentar a 50 °C durante aproximadamente 1 h. Concentrar la mezcla al vacío, diluir con DCM y añadir NaHCO3 sólido hasta que la mezcla se neutraliza a aproximadamente pH 7. Separar la capa orgánica, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para dar 4-metil-5-(metilamino)-tiofen-3-carboxilato de metilo en bruto. EN/EM (m/z): 186 (M+H).
Disolver el 4-metil-5-(metilamino)-tiofen-3-carboxilato de metilo en bruto en DCM (20 ml), añadir 1,4­ dioxaespiro[4.5]decan-8-ona (1,16 g, 7,40 mmol) mientras se agita durante 30 min, añadir después triacetoxiborohidruro sódico (3,13 g, 14,8 mmol) y agitar a TA durante 30 min más. Añadir más 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ona (0,289 g, 1,85 mmol), agitar durante 15 min, añadir más triacetoxiborohidruro sódico (0,784 g, 3,70 mmol) y agitar la mezcla resultante durante una noche a TA. Diluir la reacción con solución acuosa saturada de NaHCO3 (10 ml) y DCM (40 ml), agitar durante 1 h, separar la capa orgánica, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-10 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título (1,21 g, 50 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 326 (M+H).
Preparación 49
2-bromo-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000038_0003
Añadir N-bromosuccinimida (0,701 g, 3,82 mmol) a TA al 5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (1,13 g, 3,47 mmol) en DCM (11 ml). Después de 5 min, diluir la reacción con DCM (40 ml) y lavar con NaOH 0,1 M (2 x 10 ml). Separar la capa orgánica, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título en bruto (1,47 g, rendimiento cuantitativo) en forma de un aceite de color pardo. EN/EM (m/z): (79Br/81Br) 404/406 (M+H).
Preparación 50
2-(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000039_0001
Añadir tolueno (15 ml) y agua (2,5 ml) a 2-bromo-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo en bruto (1,36 g, 3,20 mmol), N-[2-(trifluoroboranuidil)etil]carbamato de bencil potasio (1,25 g, 4,15 mmol) y Cs2CO3 (3,64 g, 11,2 mmol) en un matraz. Purgar la mezcla con N2, después añadir RuPhos (0,0761 g, 0,160 mmol) y precatalizador Ruphos de 2a generación (0,124 g, 0,160 mmol). Agitar la mezcla vigorosamente y calentar a 100 °C durante 18 h. Enfriar a TA y diluir la reacción con EtOAc (40 ml) y agua (10 ml). Separar la capa orgánica, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-30 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título (0,93 g, 58 % de rendimiento) en forma de un aceite de color naranja después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 503 (M+H).
Preparación 51
2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000039_0002
Añadir Pd(OH)2 al 20% sobre carbono (0,500 g, 3,56 mmol) y TEA (0,78 ml, 5,57 mmol) al 2-(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (0,93 g, 1,86 mmol) en MeOH (10 ml). Cargar el recipiente de reacción con H2 (345 kPa) y agitar a TA. Después de aproximadamente 1,5 h eliminar el catalizador por filtración, después calentar la mezcla a 70 °C durante 5 h. Enfriar la mezcla a TA y concentrar al vacío para proporcionar el compuesto del título (0,513 g, 82 % de rendimiento) en forma de una espuma de color amarillo, suficiente para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 337 (M+H).
Preparación 52
5-[{trans-4-[(terc-butoxicarbonil)amino]ciclohexil}(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000039_0003
Añadir triacetoxiborohidruro sódico (441 g, 2,05 mol) a una solución de 5-amino-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (98 g, 0,57 mol) en DCE (1000 ml) que contiene (4-oxociclohexil)carbamato de terc-butilo (156,7 g, 0,75 mol) y AcOH (118 ml) a TA. Agitar la mezcla resultante durante 30 min a TA, añadir acetaldehído (63,7 ml, 1,15 mol), agitar durante otros 45 min y añadir agua seguida de solución acuosa saturada de NaHCO3 (pH -9-10). Extraer la mezcla acuosa con EtOAc (2 x 3 l), lavar los extractos orgánicos combinados con NaCl acuoso saturado, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con EtOAc al 5 % en hexanos, para dar 337 g de mezcla cis/trans después de eliminar el disolvente. Separar los isómeros cis y trans mediante múltiples series secuenciales de CFS quiral (CHIRALPAK® AD, 5 |jm, 5 x 25 cm; eluyente: mezcla isocrática de MeOH al 5 % en CO2; Temp. de la columna: 50 °C; Caudal: 400 g/min) para proporcionar el compuesto trans del título puro (183 g, 76 % de rendimiento) en forma de un sólido de color pardo después de eliminar el disolvente. Tr = 3,54 min. EN/EM (m/z): 397 (M+H).
Preparación 53
5-[(trans-4-aminociclohexil)(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000040_0001
Enfriar una solución de 5-[[4-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexil]-etil-amino]-4-metil-tiofen-3-carboxilato de metilo (40 g, 100,9 mmol) en THF (200 ml) a 0 °C. Añadir una solución de HCl 4 M en dioxano (250 ml, 1000 mmol) gota a gota y agitar la mezcla resultante a TA durante 16 h. Concentrar al vacío hasta -1/4 de volumen, añadir EtOAc (400 ml) y solución acuosa saturada de K2CO3 (200 ml) y agitar la mezcla resultante a TA durante 1 h. Separar las fases resultantes, lavar la fase acuosa con EtOAc (2 x 100 ml), combinar las capas orgánicas y lavar de forma secuencial con agua (100 ml) y NaCl acuoso saturado (100 ml). Secar la capa orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para dar el compuesto del título (31,7 g, rendimiento cuantitativo) en forma de un aceite de color pardo oscuro después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 297 (M+H).
Preparación 54
2-metoxipropan-1,3-diol
H O '^ s f/ N O H
C>
A una solución fría de 2-metoxipropanodioato de dimetilo (25 g, 154,19 mmol) en THF (300 ml) a -15 °C, añadir una solución de LAH 2,3 M en 2-metiltetrahidrofurano (170 ml, 150 g, 385,47 mmol) gota a gota a -15 °C y agitar durante 2 h a 0 °C, después durante 1 h a TA. Volver a enfriar a -15 °C e inactivar lentamente con agua (15 ml), KOH 2 N (15 ml) y agua (30 ml) y agitar la mezcla resultante durante 30 min a TA. Filtrar los sólidos de color blanco resultantes, lavar los sólidos con EtOAc (250 ml) seguido de MeOH al 40 % (v/v)/EtOAc (500 ml) y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-20 % en EtOAc, para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (6,66 g, 40 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. RMN 1H (400,1 MHz, CDCla) 62,50 (s a, 2H), 3,47 (s, 3H), 3,36 (quintuplete, J = 4,5 Hz, 1H) 3,69 (dd, J = 4,6, 11,7 Hz, 2H), 3,79 (dd, J = 4,2, 11,7 Hz, 2H).
Preparación 55
5-{etil[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]amino}-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000040_0002
Añadir gota a gota anhídrido trifluorometanosulfónico (36,47 ml, 61,16 g, 214,6 mmol) a una solución de 2-metoxipropan-1,3-diol (14,81 g, 139,6 mmol) en ACN (500 ml) a -20 °C durante 45 min. Después añadir DIPEA (44,4 ml, 32,9 g, 255 mmol) gota a gota durante 35 min y agitar la mezcla resultante durante 45 min a -15 °C. Enfriar la mezcla a -25 °C y añadir DIPEA (44,4 ml, 32,9 g, 255 mmol) gota a gota durante 20 min. Añadir una solución de 5­ [(trans-4-aminociclohexil)(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (31,72 g, 107,0 mmol) en ACN (300 ml) gota a gota durante 30 min. Calentar la reacción a TA y después agitar a 70 °C durante 1 h más. Enfriar la mezcla a TA, diluir con EtOAc (500 ml) y agua (500 ml), separar las fases y extraer la fase acuosa con EtOAc (2 x 250 ml). Añadir una solución 4 M de K2CO3 acuoso (250 ml) a los extractos orgánicos combinados y agitar durante 2 h a TA. Separar las fases, lavar la capa orgánica con NaCl acuoso saturado (250 ml), secar la capa orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-10 % en EtOAc, para proporcionar el compuesto del título (29,2 g, 74 % de rendimiento) en forma de un sólido de color pardo después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 367 (M+H).
Preparación 56
2-bromo-5-{etil[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]amino}-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000041_0001
Mezclar 5-{etil[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]amino}-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (29,17 g, 79,59 mmol) y NBS (17,00 g, 95,51 mmol) en DMF (400 ml) y agitar la mezcla resultante durante 2 h a TA. Diluir con EtOAc (400 ml) y agua (250 ml), separar las fases y lavar la capa orgánica secuencialmente con solución acuosa 4 M de K2CO3 (2 x 200 ml), agua (200 ml) y NaCl acuoso saturado (200 ml). Secar la capa orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para dar el compuesto del título (32,4 g, 89 % de rendimiento) en forma de un aceite de color pardo, adecuado para su uso en la etapa siguiente sin más purificación. EN/EM (m/z) (79Br/81Br): 445, 447 (M+H).
Preparación 57
2-(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-5-{etil[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]amino}-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000041_0002
A una solución de K2CO3 (657,8 g, 414,3 mmol) en agua (123 ml, 6828 mmol) añadir N-[2-(trifluoroboranuidil)etil]carbamato de bencil potasio (23,62 g, 82,85 mmol) gota a gota seguido de una solución de 2-bromo-5-{etil[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]amino}-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (32,37 g, 69,04 mmol) en tolueno (450 ml). Purgar la mezcla suavemente con N2 mientras se calienta a 90 °C durante 30 min, después añadir 2-diciclohexilfosfin-2',6'-diisopropoxi-1, 1'-bifenilo (2,46 g, 5,18 mmol) y cloro(2-diciclohexilfosfin-2',6'-diisopropoxi-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio (II) (4,02 g, 5,18 mmol). Agitar la mezcla resultante a 105 °C durante 4 h, enfriar a TA, diluir con EtOAc (300 ml) y agua (100 ml), separar las fases, extraer la fase acuosa con EtOAc (3 x 100 ml) y lavar las capas orgánicas combinadas secuencialmente con K2CO3 acuoso 4 M (2 x 100 ml), agua (150 ml) y NaCl acuoso saturado (150 ml). Secar la capa orgánica sobre Na2SO4, concentrar el filtrado al vacío y someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-5 % en EtOAc, para proporcionar el compuesto del título (23,1 g, 51 % de rendimiento) en forma de un aceite de color pardo después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 544 (M+H).
Preparación 58
5-{etil[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]amino}-2-(2-{[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]amino}etil)-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000042_0001
Añadir Pd(OH)2 sobre carbono, al 20% en base seca, agua fresca (5,75 g) a una mezcla de 2-(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-5-{etil[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)cidohexil]amino}-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (23,00 g, 35,11 mmol) y 2-metoxi-4,6-dimetil-piridin-3-carbaldehído (7,03 g, 42,13 mmol) en EtOH (280 ml) y agitar a 50 °C en atmósfera de H2 (482,633 kPa) durante 24 h. Filtrar la mezcla a través de tierra de diatomeas, aclarar con EtOH y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-25 % en DCM, para proporcionar el compuesto del título (18,4 g, 89 % de rendimiento) en forma de un aceite de color pardo después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 559 (M+H).
Preparación 59
2-{etil[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]amino}-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000042_0002
Agitar una mezcla de 5-{etil[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]amino}-2-(2-{[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]amino}etil)-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (18,35 g, 30,21 mmol) y AcOH (9,07 g, 151,1 mmol) en tolueno (175 ml) a 110 °C durante 3 h. Enfriar la mezcla, diluir con EtOAc (250 ml) y agua (150 ml), separar las fases, extraer la fase acuosa con EtOAc (3 x 100 ml), lavar los extractos orgánicos combinados secuencialmente con solución acuosa 4 M de K2CO3 (2 x 100 ml), agua (150 ml) y NaCl acuoso saturado (150 ml). Secar la capa orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío, para proporcionar el compuesto del título (16,42 g, 95 % de rendimiento) en forma de un aceite de color pardo adecuado para su uso son más purificación. EN/EM (m/z): 527 (M+H).
Preparación 60
5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000042_0003
A una solución de 5-amino-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (43 g, 251 mmol), 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ona (39,23 g, 251 mmol) y AcOH (47 ml) en DCE (430 ml), añadir lentamente triacetoxiborohidruro sódico (159,6 g, 754 mmol) a menos de 25 °C. Agitar la mezcla a TA durante 30 min y después añadir acetaldehído (28 ml, 503 mmol). Agitar la mezcla a TA durante 30 min. Verter el contenido de la mezcla en agua enfriada con hielo y basificar mediante la adición de una solución acuosa saturada de NaHCO3 hasta pH 7,0-7,5. Extraer la mezcla resultante con EtOAc (2 x 3 l), lavar con NaCl acuoso saturado, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con EtOAc al 5 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título (55 g, 67 % de rendimiento) en forma de un sólido después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 340 (M+H).
Preparación 61
2-bromo-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000043_0001
A un matraz de tres bocas, de fondo redondo, equipado con un embudo de adición, añadir una solución de 5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (91 g, 268,1 mmol) en DCM (1,2 l). Enfriar el matraz a 0 °C, después añadir NBS (58,4 g, 322 mmol) en porciones durante 1 h. Eliminar el baño de hielo y agitar la mezcla de reacción a TA durante 2 h. Añadir agua, separar la capa orgánica y concentrar la fase orgánica al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice en cuatro lotes, eluyendo cada uno con EtOAc al 10-50 % en hexanos. Concentrar las fracciones combinadas de los primeros dos lotes para proporcionar un aceite. Secar material al vacío durante una noche para proporcionar un sólido de color blanco (40,9 g). Concentrar las fracciones de los lotes tres y cuatro para proporcionar un aceite de color pardo. Tratar el material resultante con una pequeña cantidad de hexanos hasta que aparece un sólido, filtrar y secar al vacío durante una noche para proporcionar un sólido de color pardo claro (37,9 g). Combinar los dos lotes recogidos resultantes para proporcionar el compuesto del título (78,8 g, 70 % de rendimiento) en forma de un sólido oleoso de color pardo. EN/EM (m/z): (79Br/81Br) 418/420 (M+H).
Preparación 62
2-bromo-5-[etil(4-oxociclohexil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000043_0002
Al 2-bromo-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (7,81 g, 18,7 mmol) en THF (140 ml), añadir HCl acuoso 1 M (100 ml). Agitar la reacción a TA durante aproximadamente 25 h. Diluir la mezcla de reacción con EtOAc (200 ml) y separar las capas. Lavar la capa orgánica con NaHCO3 acuoso saturado (2 x 25 ml). Secar la capa orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título en bruto (6,71 g, 96 % de rendimiento) en forma de un aceite espeso de color pardo rojizo, suficiente para su uso en la etapa siguiente sin más purificación. EN/EM (m/z): (79Br/81Br) 374/376 (M+H).
Preparación 63
2-(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000043_0003
En dos lotes separados, añadir tolueno (428 ml) y agua (100 ml) a una mezcla de 2-bromo-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (20 g, 48 mmol), N-[2-(trifluoroboranuidil)etil]carbamato de bencil potasio (17,5 g, 58,9 mmol), metanosulfonato de (2-diciclohexilfosfin-2',6-diisopropoxi-1,1'-bifenil)[2-(2-amino-1,1'-bifenil)]paladio (II) (4,1 g, 4,8 mmol) y Cs2CO3 (47 g, 144 mmol). Enjuagar la mezcla de reacción con N2, después calentar a 80 °C durante 4 h. Verter la mezcla de reacción en agua enfriada con hielo, añadir EtOAc, separar las capas, filtrar la fase orgánica sobre tierra de diatomeas y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 5-40 % en hexanos. Concentrar las fracciones deseadas resultantes y secar al vacío durante 72 h para proporcionar el compuesto del título (41,9 g de masa combinada, 85 % rendimiento combinado para dos series) en forma de un aceite de color pardo. EN/EM (m/z): 517 (M+H).
Preparación 64
2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000044_0001
Purgar un matraz Parr con N2, añadir Pd(OH)2 al 20 % sobre carbono (40 g, 284,9 mmol), purgar el matraz de nuevo con N2 y añadir TEA (150 ml, 1080 mmol), MeOH (500 ml) y una solución de 2-(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (39,5 g, 76,5 mmol) en MeOH (500 ml). Cerrar herméticamente el matraz, purgar con N2, purgar con H2 gaseoso y rellenar el sistema con H2 (414 kPa). Agitar durante aproximadamente 4 h a t A y dejar reposar la mezcla de reacción durante 72 h. Filtrar la suspensión resultante, concentrar el filtrado al vacío, disolver el residuo resultante en EtOAc y añadir un poco de Et2O hasta que se forme un sólido. Filtrar y recoger el sólido resultante para dar el compuesto del título (15,3 g) en forma de un sólido de color blanco. Concentrar el filtrado de color amarillo y someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 10-60 % en hexanos, para proporcionar más compuesto del título (8 g). Combinar el material filtrado y cromatografiado para su uso posterior (23,3 g, 86 % de rendimiento). EN/EM (m/z): 351 (M+H).
Preparación 65
4-{etil[4-(metoxicarbonil)-3-metiltiofen-2-il]amino}piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000044_0002
A un matraz de fondo redondo, añadir 5-amino-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (-50 % de pureza, 34 g, 99 mmol), ferc-butil-4-oxopiperidin-1-carboxilato (25,7 g, 129 mmol) en DCE (408 ml) y AcoH (17 ml, 297 mmol), agitar a t A durante 10min, después enfriar a 0 °C y añadir lentamente triacetoxiborohidruro sódico (54,2 g, 248 mmol) en porciones. Calentar la mezcla de reacción de forma gradual a TA y agitar durante 2 h. Añadir acetaldehído (11,1 ml, 199 mmol) gota a gota, después agitar durante 72 h. Enfriar la mezcla de reacción a 0 °C, inactivar con solución acuosa saturada de NaHCO3 y diluir con DCM. Separar las capas, extraer la capa acuosa con DCM, combinar las fases orgánicas, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-10 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título (6,4 g, 17 % de rendimiento) en forma de un sólido de color naranja después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 383 (M+H).
Preparación 66
4-{[5-bromo-4-(metoxicarbonil)-3-metiltiofen-2-il](etil)amino}piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000044_0003
A un matraz de fondo redondo, añadir 4-{etil[4-(metoxicarbonil)-3-metiltiofen-2-il]amino}piperidin-1-carboxilato de fercbutilo (6,4 g, 17 mmol) en DCM (84 ml), enfriar a 0 °C, añadir Nb S (3,3 g, 18 mmol) en porciones y agitar durante 1 h. Diluir la mezcla de reacción con agua, separar las capas, extraer la capa acuosa con más DCM, combinar las fases orgánicas, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-20 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título (6,7 g, 87 % de rendimiento) en forma de un aceite de color naranja después de eliminar el disolvente. EN/EM (m/z): (79Br/81Br) 405/407 (M+H - t-butilo).
Preparación 67
4-{[5-(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-4-(metoxicarbonil)-3-metiltiofen-2-il](etil)amino}piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000045_0001
En dos lotes separados, añadir 4-{[5-bromo-4-(metoxicarbonil)-3-metiltiofen-2-il](etil)amino)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (0,900 g, 1,95 mmol),N-[2-(trifluoroboranuidil)etil]carbamato de bencil potasio (0,695 g, 2,34 mmol), metanosulfonato de (2-diciclohexil-fosfin-2',6’-diisopropoxi-1,1’-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio (II) (0,167 g, 0,195 mmol), Cs2CO3 (1,91 g, 5,85 mmol), tolueno (9,75 ml) y agua (3,55 ml) a un matraz de fondo redondo. Desgasificar cada mezcla con N2 durante 15 min, después calentar a 90 °C durante una noche. Enfriar cada mezcla de reacción a TA y combinar. Inactivar con agua enfriada con hielo, diluir con EtOAc, separar las capas, extraer la capa acuosa con más EtOAc, combine las fases orgánicas y secar sobre Na2SO4. Filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-30 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título (1,29 g, 59% de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 460 (M+H- BOC).
Preparación 68
4-[etil(3-metil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidrotieno[3,2-c]piridin-2-il)amino]piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000045_0002
A un matraz de fondo redondo, añadir 4-{ [5-(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-4-(metoxicarbonil)-3-metiltiofen-2-il](etil)amino}piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (1,29 g, 2,30 mmol) en MeOH (23 ml) y THF (15 ml), desgasificar con N2 durante ~10 min, añadir Pd al 10 % sobre carbono (1,29 g) y TEA (0,400 ml, 2,84 mmol), después colocar en atmósfera de H2 y agitar a TA durante aproximadamente 72 h. Filtrar la mezcla de reacción a través de tierra de diatomeas, lavar con MeOH y concentrar el filtrado al vacío. Transferir el residuo a un recipiente de microondas, añadir TEA (0,300 ml) y calentar a 90 °C durante 2 h. Enfriar a TA con agitación durante una noche, después concentrar la mezcla de reacción al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de ACN al 0-30 % en DCM, para proporcionar el compuesto del título (0,466 g, 51 % de rendimiento) en forma de una espuma de color amarillo después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 394 (M+H).
Preparación 69
2-(3-{[(benciloxi)carbonil]-amino}prop-1-in-1-il)-5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-4-metil-tiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000045_0003
A una mezcla de 2-bromo-5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-il)etil]-4-metil-tiofen-3-carboxilato de metilo en bruto (10,1 g, 25,0 mmol), CuI (1,91 g, 10,0 mmol) y prop-2-in-1-ilcarbamato de bencilo (11,4 g, 60,3 mmol) en 1,4-dioxano (130 ml), añadir TEA (52 ml, 369 mmol). Desgasificar y purgar la mezcla con N2, después añadir dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) (3,6 g, 5,1 mmol). Agitar a 40 °C durante 1 h. Filtrar la mezcla sobre tierra de diatomeas y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-20 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título (10,8 g, 80 % de rendimiento) en forma de un aceite de color pardo claro después de la evaporación del disolvente. e N/EM (m/z): 512 (M+H).
Preparación 70
2-(3-aminopropil)-5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000046_0001
Añadir TEA (0,500 ml, 3,55 mmol) a una mezcla de 2-(3-{[(benciloxi)carbonil]-amino}prop-1-in-1-il)-5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-4-metil-tiofen-3-carboxilato de metilo (10 g, 19,55 mmol) en MeOH (150 ml). Desgasificar y purgar la mezcla con N2, añadir Pd(OH)2 al 20 % sobre carbono (4,10 g, 5,84 mmol), cargar el recipiente de reacción con H2 (414 kPa) y agitar durante una noche. Añadir una porción adicional de Pd(OH)2 al 20 % sobre carbono (500 mg, 0,712 mmol) y TEA (0,500 ml, 3,55 mmol), desgasificar con N2 otra vez y cargar el recipiente de reacción con H2 (414 kPa). Agitar durante 6 h más, filtrar la reacción sobre tierra de diatomeas y concentrar el filtrado al vacío hasta un aceite de color amarillo. Someter el aceite resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-30 % en DCM, para proporcionar el compuesto del título (6,6 g, 89 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo después de la evaporación del disolvente. EN/e M (m/z): 382 (M+H).
Preparación 71
2-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000046_0002
A un recipiente de microondas, añadir una solución de 2-(3-aminopropil)-5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (1,5 g, 3,9 mmol) en tolueno (8 ml), después añadir KOtBu (940 mg, 7,87 mmol). Agitar la mezcla a 90 °C durante una noche. Verter la reacción en solución acuosa saturada de NaHCO3 enfriada en hielo, extraer con DCM, separar las capas y concentrar la capa orgánica al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-5 % en DCM, para proporcionar el compuesto del título (1,3 g, 85 % de rendimiento) en forma de un sólido de color pardo claro después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 350 (M+H).
Preparación 72
2-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
A una solución de 2-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona (1,1 g, 3,1 mmol) en t Hf (10 ml) añadir KOH molido (700 mg, 12,4 mmol). Agitar durante 30 min, después añadir 3-(dorometil)-2-metoxi-4,6-dimetil-piridina (700 mg, 3,77 mmol), disolver en THF (1 ml) y agitar la mezcla resultante durante 2 h. Verter la mezcla de reacción en solución acuosa saturada de NaHCO3 enfriada en hielo, extraer con DCM, separar las capas y concentrar la capa orgánica al vacío. Secar el residuo resultante al vacío para proporcionar el compuesto del título en bruto (2,2 g, 87 % de rendimiento) en forma de un aceite de color pardo, adecuado para su uso adicional sin más purificación. EN/EM (m/z): 499 (M+H).
Preparación 73
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000047_0001
Añadir PTSA (1,3 g, 7,2 mmol) a 2-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona en bruto (1,0 g, 1,2 mmol) en DMF (10 ml) y agitar la mezcla resultante a 70 °C durante 2 h. Verter la mezcla en solución acuosa saturada de NaHCO3 enfriada con hielo, extraer con DCM, separar las capas y concentrar la capa orgánica al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-5 % en DCM, para proporcionar el compuesto del título (680 mg, rendimiento cuantitativo) en forma de un aceite de color pardo claro después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 441 (M+H).
Preparación 74
2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(ciclopropoxi)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000047_0002
Añadir isopropóxido de titanio (IV) (1,40 g, 4,9 mmol) y clorhidrato de 3-(ciclopropiloxi)azetidina (0,74 g, 4,9 mmol) a una solución de 3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,72 g, 2,5 mmol) en DCM (10 ml) que contiene DIPEA (0,87 ml, 4,9 mmol), agitar la mezcla de reacción resultante a TA durante 18 h y concentrar la mezcla de reacción al vacío. Añadir THF (4 ml) y MeOH (6 ml) al residuo restante y enfriar la solución resultante a -78 °C. Añadir LiBH42 M en THF (1,9 ml, 3,8 mmol) gota a gota y calentar gradualmente a TA durante 3 h. Diluir la mezcla de reacción con una mezcla 1:1 de DCM/CHCl3 (100 ml) y solución saturada al 50 % de NaHCO3 (50 ml), separar las capas resultantes, secar los extractos orgánicos combinados sobre MgSO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de 10-50 % de una mezcla de MeOH al 10 % en DCM y DCM para dar el compuesto del título (0,40 g, 42 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/e M (m/z): 389 (M+H).
Preparar los compuestos siguientes esencialmente mediante el procedimiento de preparación 74, usando la azetidina sustituida correspondiente.
Figure imgf000047_0003
Figure imgf000048_0001
continuación
Figure imgf000049_0003
Preparación 81
2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(metoximetil)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000049_0001
Agitar una mezcla de clorhidrato de 3-(metoximetil)azetidina (368 mg, 2,67 mmol) y DIPEA (400 mg, 3,06 mmol) en MeOH (5 ml) en atmósfera de N2 a TA durante 10min, añadir 3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (400 mg, 1,37 mmol) y agitar la mezcla durante 4 h. Enfriar a -78 °C, añadir lentamente LiBH42 M en THF (0,90 ml, 1,8 mmol) y calentar gradualmente a TA durante una noche. Concentrar la mezcla al vacío, diluir el residuo resultante con solución acuosa saturada de NaHCO3, extraer con DCM y separar las capas resultantes. Secar la capa orgánica sobre MgSO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de 0-80 % de una mezcla de (solución al 10 % de NH3 MeOH 2 N) en DCM y DCM. Combinar las fracciones que contienen el producto deseado y concentrar al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (40 g), eluyendo con NH4HCO310 mM, pH 10, en MeOH al 5 %/agua y ACN usando un gradiente en etapas del 100 % de NH4HCO310 mM en MeOH al 5 %/agua durante 5 min, después ACN al 25 %/NH4HCO310 mM en MeOH al 5%/agua durante 5 min, después un gradiente lineal de ACN al 25 %-90 %/NH4HCO310 mM en MeOH al 5%/agua. Combinar las fracciones puras y concentrar al vacío para dar el compuesto del título (114 mg, 22 % de rendimiento). EN/EM (m/z): 377 (M+H).
Preparación 82
5-{[2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-il]metil}-2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(ciclopropiloxi)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000049_0002
Añadir lentamente KHMDS 0,7 M en tolueno (1,2 ml, 0,84 mmol) a una solución de 2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(ciclopropoxi)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (230 mg, 0,59 mmol) en THF (10 ml) a TA durante 30 min y agitar 30 min más. Añadir gota a gota una solución de 2-benciloxi-3-(clorometil)-4,6-dimetil-piridina (200 mg, 0,76 mmol) en THF (5 ml) y agitar a TA durante 18 h. Calentar la mezcla de reacción a 55 °C, agitar durante 1 h, enfriar a TA, verter en una solución acuosa de NaHCO3 enfriada con hielo y extraer con EtOAc. Separar las capas, lavar el extracto orgánico con NaCl acuoso saturado, secar sobre MgSO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 10-50 % en hexanos, para producir el compuesto del título (210 mg, 57 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 614 (M+H).
Prepare los compuestos siguientes esencialmente mediante el procedimiento de preparación 82 y la 6,7-dihidro-5H-tieno[3,2-c]piridin-4-ona sustituida de forma apropiada.
Figure imgf000050_0001
continuación
Figure imgf000051_0003
Preparación 90
5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-2-(2-{[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]amino}etil)-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000051_0001
Disolver 2-(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (77 g, 153,5 mmol) y 2-metoxi-4,6-dimetil-piridin-3-carbaldehído (23,3 g, 140 mmol) en EtOH (500 ml) en un reactor Parr y añadir Pd(OH)2 sobre carbono, al 20 % en base seca, agua fresca (11,5 g). Rellenar el recipiente con H2 (689,476 kPa) y agitar durante 3,5 h a 50 °C. Después de enfriar a TA, filtrar la mezcla a través de tierra de diatomeas y lavar con EtOH. Concentrar el filtrado al vacío, añadir tolueno (800 ml) al residuo y continuar la destilación parcial de los volátiles hasta un peso final de aproximadamente 400 g, para obtener el compuesto del título en forma de una solución en tolueno, adecuada para su uso en la etapa siguiente sin más purificación. EN/EM de una muestra evaporada (m/z): 517 (M+H).
Preparación 91
2-(2-{[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]amino}etil)-4-metil-5-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]tiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000051_0002
A la solución en tolueno en bruto (aproximadamente 76 g) de 5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)etil]-2-(2-{[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]amino}etil)-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo, de la preparación 90, añadir HCl acuoso 1 M (800 ml) y agitar a TA durante 1 h. Separar las capas, lavar la capa orgánica secuencialmente con HCl acuoso 2 M (2 x 50 ml) y lavar las capas acuosas ácidas combinadas con tolueno (100 ml). Añadir tolueno (0,4 l) a la capa acuosa y añadir K2CO3 acuoso 6 M hasta pH 9, agitar durante 5 min, separar las fases, lavar la capa orgánica con NaCl acuoso saturado, después pasar a través de un lecho pequeño de Na2SO4. Aclarar adicionalmente el lecho de Na2SO4 con tolueno para obtener una solución de tolueno en bruto del compuesto del título (volumen aproximadamente 1 l), adecuada para su uso en la etapa siguiente sin más purificación. EN/EM de una muestra evaporada (m/z): 473 (M+H).
Preparación 92
5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000052_0001
Añadir AcOH (9 ml, 157,1 mmol) a la solución en bruto de 2-(2-{[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]amino}etil)-4-metil-5-[(1R)-1-(4-oxocidohexil)etil]tiofen-3-carboxilato de metilo (1 l, aproximadamente 79 g, de la preparación 91) y agitar a 90 °C durante 2 h. Lavar la mezcla dos veces con HCl acuoso 2 M (total 0,15 l) y, de forma secuencial, una vez con cada uno de agua, K3PO4 acuoso 1 M y NaCl acuoso saturado (cada uno 0,1 l). Secar la capa orgánica sobre MgSO4, filtrar y evaporar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite viscoso de color naranja (40,98 g, 48,5 % de rendimiento). EN/EM (m/z): 441 (M+H).
Preparación 93
5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-2-{(1R)-1-[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]etil}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000052_0002
Añadir DIPEA (29 ml, 21,5 g, 166 mmol) a una solución de clorhidrato de 3-metoxiazetidina (18,7 g, 151 mmol) en MeOH (280 ml) y agitar a TA durante 30 minutos. Añadir esta mezcla a 5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (27,55 g, 56,28 mmol), agitar a TA durante 1,5 horas en atmósfera de N2 y después añadir THF (50 ml). Enfriar la reacción a -70 °C y añadir LiBH42 M en THF (40 ml, 80 mmol) durante 30 minutos. Agitar la reacción a la misma temperatura durante 2 h. Inactivar la reacción vertiendo lentamente la reacción en solución acuosa 1 M de HCl (aproximadamente 1 l) durante 10 minutos. Lavar con MTBE (2 x 0,25 l), tratar después la fase acuosa con K3PO4 acuoso 2 M hasta pH 9 y extraer con EtOAc (aproximadamente 0,5 l). Lavar la fase orgánica de forma secuencial con K2CO3 acuoso 3 M y NaCl acuoso saturado (cada uno aproximadamente 100 ml), secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente del 10-25 % de una solución al 20 % de NH3/MeOH 7 N en EtOAc para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (19,5 g, 68 % de rendimiento). EN/EM (m/z): 512 (M+H).
Preparación 94
5-[2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil-3-metil-2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(3-metil-1H-pirazol-1-il)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona y
5-[(2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-[trans-4-[3-(5-metilpirazol-1-il)azetidin-1-il]ciclohexil]etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4-ona (mezcla de regioisómeros)
Figure imgf000052_0003
Agitar una solución de una mezcla de 1-(azetidin-3-il)-3-metil-1H-pirazol y 1-(azetidin-3-il)-5-metil-pirazol (0,53 g, 3,59 mmol, mezcla de regioisómeros), DIp Ea (1,37 ml, 7,79 mmol) y HCl 4 N en dioxano (1,8 ml, 7,190 mmol) en MeOH (5 ml) durante 30 min a TA. Añadir esto a una solución de 5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-2[(1R)-1-(4-oxocidohexil)etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (600 mg, 1,2 mmol) en MeOH (19 ml) y agitar 2 h a TA. Enfriar la mezcla a -78 °C y añadir una solución de LÍBH42 M en THF (0,78 ml, 1,56 mmol); calentar gradualmente a TA y agitar la mezcla de reacción durante una noche. Concentrar la mezcla de reacción al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre SCX (cartucho de 25 g), eluyendo con MeOH (2 x 100 ml) seguido de una solución de NH32 N en MeOH. Concentrar el MeOH en la fracción de NH3 al vacío para dar el compuesto del título como una mezcla de regioisómeros en forma de un aceite de color amarillo pálido (0,51 g, 65 % de rendimiento). EN/EM (m/z): 562 (M+H).
Preparar los compuestos siguientes esencialmente mediante el procedimiento de preparación 94 usando 5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxociclohexM)etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona y la azetidina sustituida de forma apropiada.
Figure imgf000053_0001
Preparación 99
5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-2-[(1R)-1-{4-[3-(2-metoxietoxi)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (mezcla de diastereómeros)
Figure imgf000054_0001
Añadir DIPEA (0,45 ml, 2,49 mmol) a una solución de clorhidrato de 3-(2-metoxietoxi)azetidina (0,42 g, 2,38 mmol,) en MeOH (5,6 ml) y agitar a TA durante 30 min. Añadir 5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxocidohexil)etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,62 g, 1,12 mmol) y agitar a TA durante una noche. Enfriar la mezcla a -78 °C, añadir una solución 2 M de LiBH4 en THF (0,74 ml, 1,47 mmol), calentar a TA y agitar durante una noche. Añadir solución acuosa saturada de NaHCO3, extraer con EtOAc y separar las capas. Secar la fase orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite (0,5 g, 98 % de rendimiento). EN/EM (m/z): 556 (M+H).
Preparación 100
2-{(1R)-1-[trans-4-(bencilamino)ciclohexil]etil}-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000054_0002
Agitar una solución de bencil amina (0,257 g, 2,397 mmol), DIPEA (0,95 ml, 5,39 mmol) y HCl 4 N en dioxano (600 |jl, 2,397 mmol) en MeOH (5 ml) durante 30 min a TA. Añadir esta mezcla a una solución de la 5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,6 g, 1,2 mmol) en MeOH (19 ml) y agitar la mezcla resultante durante 18 h a TA. Enfriar la mezcla a -70 °C y añadir una solución de LiBH42 M en THF (0,78 ml, 1,558 mmol). Dejar calentar de forma gradual a temperatura ambiente. Añadir una solución saturada de NaHCO3 enfriada con hielo, extraer con EtOAc (100 ml), separar las capas, lavar el extracto orgánico con NaCl acuoso saturado y secar el extracto orgánico sobre Na2SO4. Filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite de color amarillo (0,75 g, 99 % de rendimiento) adecuado para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 532 (M+H).
Preparación 101
2-[(1R)-1-(trans-4-aminociclohexil)etil]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000054_0003
Agitar una solución de 2-{(1R)-1-[trans-4-(bencilamino)ciclohexil]etil}-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (750 mg, 1,19 mmol) en MeOH (20 ml). Añadir Pd al 10 %-C (500 mg, 0,474 mmol) y agitar en atmósfera de H2 a 206,843 kPa a TA durante una noche. Filtrar a través de tierra de diatomeas y lavar con MeOH. Evaporar el filtrado para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite de color amarillo (0,5 g, 80 % de rendimiento), adecuado para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 442 (M+H).
Preparación 102
2-{(1R)-1-[trans-4-(dimetilamino)cidohexil]etil}-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000055_0001
Agitar una solución de 2-[(1R)-1-(trans-4-aminociclohexil)etil]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,5 g, 0,95 mmol) en MeOH (10 ml). Añadir AcOH (172 mg, 2,85 mmol), formaldehído acuoso al 37 % (232 mg, 2,853 mmol). Enfriar la solución con un baño de hielo y añadir triacetoxiborohidruro (605 mg, 2,853 mmol). Dejar calentar de forma gradual a TA y agitar durante una noche. Añadir solución saturada de NaHCO3 enfriada en hielo y extraer con DCM (2 x 100 ml). Separar las capas, combinar las fases orgánicas y lavar los extractos orgánicos combinados con NaCl acuoso saturado. Secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite de color amarillo (390 mg, 70 % de rendimiento), adecuado para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 470 (M+H).
Preparación 103
5-{[2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-il]metil}-2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-3-metil-6,7-dihidro-tieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000055_0002
A 2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,51 g, 1,53 mmol) en THF (5 ml) a 0 °C, añadir una solución de KHMDS 1 M en THF (2,14 ml, 2,14 mmol). Calentar a TA y después de 15 min añadir 2-benciloxi-3-(clorometil)-4,6-dimetil-piridina (0,60 g, 2,29 mmol). Agitar a TA durante aproximadamente 17 h, después, inactivar con solución acuosa saturada de NH4Cl (1 ml). Diluir la mezcla con EtOAc (40 ml) y agua (5 ml), separar la capa orgánica, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título (0,94 g, 92 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo, adecuado para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 562 (M+H).
Preparación 104
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[metil(4-oxociclohexil)amino]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000055_0003
A la 5-{[2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-il]metil}-2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona en bruto (0,94 g, 1,4 mmol) en THF (14 ml), añadir HCl acuoso 1 M (14 ml, 14 mmol), calentar la mezcla a 50 °C durante 8 h y agitar a TA durante 2 días. Añadir NaHCO3 sólido (1,8 g, 21 mmol) y EtOAc (125 ml), separar la capa orgánica y secar sobre Na2SO4. Filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente del 0-10 de % NH3 metanólico 7 N en DCM, para proporcionar el compuesto del título (0,408 g, 62 % de rendimiento) en forma de una espuma de color amarillo después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 428 (M+H).
Preparación 105
2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000056_0001
En dos lotes separados, añadir una solución 0,91 M de bis(trimetilsilil)amida de potasio en THF (22 ml, 20 mmol) lentamente a una solución de 2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (6 g, 17,12 mmol) en THF (70 ml) a TA durante 30 min. Agitar la mezcla resultante durante 30 min más a TA, después añadir gota a gota 3-(clorometil)-2-metoxi-4,6-dimetil-piridina (3,4 g, 18 mmol) en THF (10 ml). Agitar la mezcla resultante a TA durante una noche. Combinar ambas mezclas, verter en una solución acuosa saturada de NaHCO3 enfriada con hielo y extraer con EtOAc. Separar las fases, secar el extracto orgánico sobre MgSO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título (total 18,55 g, rendimiento cuantitativo) en forma de una goma de color amarillo, adecuado para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 500 (M+H).
Preparación 106
2-[etil(4-oxociclohexil)amino]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000056_0002
Añadir HCl acuoso 6 M (20 ml, 120 mmol) a la solución de 2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona en bruto (18,05 g, 36,12 mmol) en THF (20 ml). Calentar la mezcla resultante a 50 °C durante 2 h y agitar a TA durante una noche. Verter la mezcla de reacción en NaHCO3 acuoso saturado enfriado en hielo, extraer con DCM, separar las capas y concentrar la capa orgánica al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 10-50 % en hexanos para proporcionar el compuesto del título (4,01 g, 24 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo claro después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 456 (M+H).
Preparación 107
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-[etil(4-oxociclohexil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000056_0003
En un tubo cerrado herméticamente, añadir una solución de 2-[etil(4-oxociclohexil)amino]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (6,3 g, 14 mmol) en d Mf (50 ml), enfriar el tubo a 0 °C y añadir LiCl (3 g, 70 mmol) seguido de PTSA (13 g, 72 mmol). Calentar la mezcla resultante a 70 °C durante 2 h. Enfriar a TA y verter lentamente en NaHCO3 acuoso saturado enfriado en hielo (400 ml). Filtrar el sólido precipitado y lavar con agua. Transferir el sólido a un matraz de fondo redondo, diluir con MeOH y concentrar al vacío. Azeotropar el sólido otra vez con MeOH y THF al vacío, después secar el residuo en un horno de vacío durante una noche para proporcionar el compuesto del título (6,1 g, 100 % de rendimiento) en forma de un sólido de color pardo. EN/EM (m/z): 442 (M+H).
Preparación 108
2-{[trans-4-(bencilamino)ciclohexil](etil)amino}-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000057_0001
A un matraz de fondo redondo, añadir fenilmetanamina (0,445 ml, 4,076 mmol), 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-[etil(4-oxocidohexil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,600 g, 1,359 mmol) a THF (25 ml) y MeOH (5 ml) y agitar a TA durante una noche. Enfriar la mezcla de reacción a -78 °C y añadir gota a gota LiBH42 M en THF (1,698 ml, 3,397 mmol). Colocar la reacción en un baño de hielo y dejar calentar a TA con agitación durante 3 h. Inactivar la mezcla de reacción con solución acuosa saturada de NaHCO3 y diluir con DCM. Separar la capa orgánica y extraer adicionalmente la capa acuosa con DCM. Combinar las fases orgánicas, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-10 % en DCM y concentrar la mezcla resultante de isómeros trans y cis al vacío. Someter la mezcla resultante cromatografía de fase inversa, eluyendo con un gradiente de ACN al 10-75 % en NH4CO3 acuoso 10 mM/agua, para proporcionar el compuesto del título (0,132 g, 18 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 533 (M+H).
Preparación 109
2-[(trans-4-aminociclohexil)(etil)amino]-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000057_0002
A un matraz de fondo redondo, añadir 2-{[trans-4-(bencilamino)ciclohexil](etil)amino-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,095 g, 0,178 mmol), Pd al 10 % sobre carbono (0,095 g) y NH4HCO2 (0,057 g, 0,892 mmol) en EtOH al 90 % húmedo (0,89 ml). Desgasificar con N2 durante 10 min, cerrar herméticamente el recipiente de reacción y calentar a 90 °C durante una noche. Enfriar la mezcla de reacción a TA, filtrar a través de tierra de diatomeas y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente del 7-100% de solución 87,5:11:1,5 de DCM:MeOH:NH4OH/DCM para proporcionar el compuesto del título (0,045 g, 57 % de rendimiento) en forma de un polvo de color blanco después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 443 (M+H).
Preparación 110
4-(etil{5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidrotieno[3,2-c]piridin-2-il}amino)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000057_0003
A un matraz de fondo redondo, añadir 4-[etil(3-metil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidrotieno[3,2-c]piridin-2-il)amino]piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,770 g, 1,957 mmol) y 3-(clorometil)-2-metoxi-4,6-dimetil-piridina (0,436 g, 2,348 mmol) en THF (20 ml) que contiene una solución de KHm Ds en THF (0,91 M, 2,6 ml, 2,348 mmol). Agitar la mezcla de reacción a TA durante 4 h, inactivar con NaHCO3 acuoso saturado enfriado con hielo, diluir con EtOAc, separar las capas y extraer la capa acuosa con más EtOAc. Combinar las fases orgánicas, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título (1,17 g, 99 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo, suficiente para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 543 (M+H).
Preparación 111
2-(etil{4-[(2-metoxietil)(metil)amino]cidohexil}amino)-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (mezcla de diastereómeros cis y trans)
Figure imgf000058_0001
Añadir 2-[etil(4-oxociclohexil)amino]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,57 g, 1,25 mmol) a una solución de 2-metoxietanamina (0,19 g, 2,64 mmol) en MeOH (10 ml) y agitar la mezcla durante 4 h. Enfriar a -78 °C y añadir una solución 2 M de LiBH4 en THF (0,82 ml, 1,63 mmol). Aumentar lentamente la temperatura a TA y agitar 1 h. Concentrar la mezcla al vacío, añadir NaHCO3 acuoso saturado, extraer con EtOAc, separar las capas resultantes, secar la capa orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Disolver el residuo resultante en DCM (6,2 ml) y añadir formaldehído al 37 % en H2O (0,27 ml, 3,7 mmol), agitar la mezcla resultante a TA durante 15 min, después añadir triacetoxiborohidruro sódico (1,06 g, 5,03 mmol) y agitar la mezcla resultante a TA durante una noche. Cargas los contenidos de la mezcla de reacción en un cartucho SCX, eluyendo primero con MeOH, después con NH32 M en MeOH y concentrar las fracciones de amoniaco metanólico al vacío para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite (0,57 g, 86 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 529 (M+H).
Preparación 112
2-[{4-trans-[ciclopropil(metil)amino]ciclohexil}(etil)amino]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000058_0002
Añadir 2-[etil(4-oxociclohexil)amino]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,57 g, 1,26 mmol) a una solución de ciclopropanamina (0,15 g, 2,641 mmol) en MeOH (10 ml) y agitar la mezcla durante 4 h. Enfriar a -78 °C y añadir una solución 2 M de LiBH4 en THF (0,82 ml, 1,64 mmol). Calentar lentamente la mezcla de reacción a TA y agitar 1 h. Eliminar el disolvente al vacío, añadir solución acuosa saturada de NaHCO3, extraer con EtOAc, separar las capas resultantes y secar la fase orgánica sobre Na2SO4. Filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Disolver el residuo resultante en DCM (6,2 ml), añadir solución al 37 % de formaldehído en H2O (0,27 ml, 3,77 mmol) y agitar 15 min. Después, añadir triacetoxiborohidruro sódico (0,8 g, 5,03 mmol) y agitar a TA durante una noche. Cargar la mezcla de reacción directamente en un cartucho SCX, eluyendo primero con MeOH, después con NH32 M en MeOH. Concentrar la fracción de amoniaco metanólico al vacío para proporcionar un aceite (0,56 g, 87 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente, adecuado para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 511 (M+H).
Preparación 113
2-bromo-5-{[trans-4-(3-etoxiazetidin-1-il)ciclohexil](etil)amino}-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000059_0001
A una muestra en bruto de 2-bromo-5-[etil(4-oxocidohexil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (2,17 g, 5,80 mmol) en DCM (20 ml), añadir isopropóxido de titanio (IV) (6,79 g, 23,2 mmol) y clorhidrato de 3-etoxiazetidina (1,60 g, 11,6 mmol). Agitar la reacción a t A durante aproximadamente 18 h. Añadir THF (20 ml), después concentrar la mezcla al vacío hasta aproximadamente 20 ml. Enfriar la mezcla resultante a -78 °C, después añadir MeOH (25 ml) seguido de la adición gota a gota de LiBH42 M en THF (4,34 ml, 8,70 mmol). Agitar la mezcla resultante durante aproximadamente 3 h, después eliminar el baño de refrigeración y dejar que la mezcla se caliente lentamente a TA. Diluir la mezcla de reacción con EtOAc (200 ml) y solución acuosa saturada de NaHCO3 (50 ml), eliminar los sólidos por filtración, concentrar el filtrado al vacío, diluir el residuo con EtOAc (50 ml) y filtrar los sólidos otra vez. Concentrar la capa orgánica al vacío para proporcionar el compuesto del título (2,25 g, 78 % de rendimiento) en forma de una goma de color amarillo, adecuado para su uso si separación de los isómeros o de más cromatografía. EN/EM (m/z): (79Br/81Br) 459/461 (M+H).
Preparación 114
2-{2-[(ferc-butoxicarbonil)amino]etil}-5-{[trans-4-(3-etoxiazetidin-1-il)ciclohexil](etil)amino}-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000059_0002
Añadir A/-[2-(trifluoroboranu¡d¡l)et¡l]carbamato de terc-butil potasio (0,47 g, 1,8 mmol) y carbonato de cesio (0,89 g, 2,7 mmol, 0,89 g) en agua (0,6 ml) para 2-bromo-5-{[trans-4-(3-etoxiazetidin-1-il)ciclohexil](etil)amino}-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo en bruto (0,68 g, 1,4 mmol) en tolueno (6 ml), después añadir acetato de paladio (II) (0,031 g, 0,14 mmol) y 2-diciclohexilfosfin-2',6'-diisopropoxi-1,1'-bifenilo (0,13 g, 0,27 mmol). Desgasificar la mezcla resultante con corriente de N2. Calentar la mezcla resultante a 100 °C durante aproximadamente 2 h, diluir la mezcla con EtOAc (60 ml) y separar las capas. Secar la capa orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente del 0-10 % de NH37 N en MeOH/DCM, para proporcionar el compuesto del título (0,401 g, 44 % de rendimiento) en forma de una goma de color amarillo después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 524 (M+H).
Preparación 115
2-(2-aminoetil)-5-{[trans-4-(3-etoxiazetidin-1-il)ciclohexil](etil)amino}-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000059_0003
Añadir HCl 4 M en dioxano (5 ml, 20 mmol) a 2-{2-[(ferc-butoxicarbonil)amino]etil}-5-{[trans-4-(3- etoxiazetidin-1 il)cidohexil](etil)amino}-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (0,401 g, 0,605 mmol) en DCM (5 ml) a TA. Agitar la reacción durante aproximadamente 2 h a TA y concentrar la mezcla al vacío. Añadir MeOH (5 ml) y concentrar la mezcla al vacío otra vez. Diluir el residuo resultante con DCM (25 ml), lavar con solución acuosa saturada de NaHCO3 (3 ml), separar las capas y secar la capa orgánica sobre Na2SO4. Filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título en bruto (0,380 g, 95 % de rendimiento) en forma de una goma de color amarillo, adecuado para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 424 (M+H).
Preparación 116
2-{[trans-4-(3-etoxiazetidin-1-il)ciclohexil](etil)amino}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000060_0001
Calentar 2-(2-aminoetil)-5-{[trans-4-(3-etoxiazetidin-1-il)ciclohexil](etil)amino}-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (0,380 g, 0,574 mmol) en MeOH (4 ml) a reflujo durante 3 h, concentrar la mezcla de reacción al vacío y someter el residuo a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (WATERS™ XBRIDGE® OBD, 30 x 75 mm, 5 pm), eluyendo con un gradiente de ACN al 20-90 % en NH4CO3 acuoso 10 mM que contiene MeOH al 5 %, para proporcionar el compuesto del título (0,113 g, 50 % de rendimiento) en forma de una goma de color blanquecino después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 392 (M+H).
Preparación 117
5-{[2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-il]metil}-2-{[trans-4-(3-etoxiazetidin-1-il)ciclohexil](etil)amino}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona 20*53
Figure imgf000060_0002
Enfriar 2-{[trans-4-(3-etoxiazetidin-1-il)ciclohexil](etil)amino}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,113 g, 0,289 mmol) en THF (2 ml) en un baño de hielo, añadir Kh Md S 1 M en THF (0,404 ml, 0,404 mmol), eliminar el baño de hielo, calentar a TA y agitar la mezcla durante 30 min. Añadir gota a gota 2-benciloxi-3-(clorometil)-4,6-dimetilpiridina (0,113 g, 0,433 mmol) en THF (2 ml). Agitar la mezcla de reacción a TA durante 22 h. Inactivar la mezcla de reacción con NH4Cl acuoso saturado (2 ml), extraer con EtOAc (40 ml), separar la capa orgánica, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente de NH37 N al 0-10 %/MeOH en DCM, para proporcionar el compuesto del título (0,084 g, 45 % de rendimiento) en forma de una goma de color amarillo. En /e M (m/z): 617 (M+H).
Preparación 118
5-[(4-cloro-2-etoxi-6-metilpiridin-3-il)metil]-2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000061_0001
Añadir KOH pulverizado (0,427 g, 7,53 mmol) a una solución de 2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,660 g, 1,88 mmol) en THF (10 ml) en una porción. Agitar la mezcla resultante durante 30 min, añadir 4-cloro-3-(clorometil)-2-etoxi-6-metilpiridina (0,500 g, 2,27 mmol) en THF (1 ml) y agitar la mezcla resultante a TA durante una noche. Inactivar la mezcla con NaHCO3 acuoso saturado, extraer con DCM, separar las capas, secar la fase orgánica sobre Na2SO4 anhidro, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-100 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título (0,988 g, 98 % de rendimiento), en forma de un aceite de color amarillo pálido después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): (35Cl/37Cl) 534/536 (M+H).
Preparación 119
5-[(4-cloro-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-[etil(4-oxociclohexil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000061_0002
Añadir LiCI (0,395 g, 9,22 mmol) y PTSA (1,67 g, 9,21 mmol) a una solución de 5-[(4-cloro-2-etoxi-6-metil-piridin-3-iI)metiI]-2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-iI(etiI)amino]-3-metiI-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,985 g, 1,84 mmol) en DMF (20 ml) y calentar la mezcla resultante a 70 °C durante 1 h. Aumentar la temperatura a 90 °C, agitar durante 5 h, enfriar la mezcla a TA, añadir agua y agitar a TA durante una noche. Inactivar la mezcla con NaHCO3 acuoso saturado, extraer con DCM, separar las capas resultantes y lavar la fase orgánica con LiCl acuoso al 5 %. Separar las capas, secar la fase orgánica sobre Na2SO4 anhidro, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-50 % en hexanos seguido de un gradiente de MeOH al 0-20 % en DCM, para proporcionar el compuesto del título (0,450 g, 26 % de rendimiento), en forma de un aceite de color naranja después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): (15Cl/37Cl) 462/464 (M+H).
Preparación 120
2-(3-{[(benciloxi)carbonil]amino}prop-1-in-1-il)-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000061_0003
Añadir TEA (55,6 g, 550,0 mol) a una mezcla de 2-bromo-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (7,9 g, 19,0 mmol), CuI (1,5 g, 7,90 mmol) y N-prop-2-inilcarbamato de bencilo (8,9 g, 47 mmol) en THF (200 ml). Desgasificar la mezcla con corriente de N2 y añadir dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) (2,8 g, 3,9 mmol). Agitar la mezcla a TA durante una noche. Filtrar la mezcla de reacción sobre tierra de diatomeas y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-60 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título (8,2 g, 82 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 513 (M+H).
Preparación 121
2-(3-aminopropil)-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000062_0001
A un recipiente a presión, añadir una solución de 2-(3-{[(benciloxi)carbonil]amino}prop-1-in-1-il)-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (7,6 g, 14 mmol) en MeOH (200 ml) que contiene TEA (1,0 ml, 7,1 mmol) y Pd al 10 % sobre carbono (3 g, 2,82 mmol). Rellenar el recipiente de reacción con H2 (414 kPa) y agitar durante 4 h. Filtrar la mezcla de reacción sobre tierra de diatomeas, concentrar el filtrado al vacío hasta aproximadamente 150 ml, añadir Pd(OH)2 al 20 % sobre carbono (2,0 g), desgasificar con N2 seguido de H2 y agitar en atmósfera de H2 durante una noche. Filtrar la mezcla de reacción sobre un lecho de tierra de diatomeas, concentrar al vacío hasta aproximadamente 100 ml, añadir Pd(OH)2 al 20% sobre carbono (1,2 g) y agitar en atmósfera de H2 (414 kPa) durante una noche. Filtrar la reacción sobre tierra de diatomeas y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título (6,5 g, rendimiento cuantitativo) en forma de un aceite de color pardo, adecuado para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 397 (M+H).
Preparación 122
2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona 15*20
Figure imgf000062_0002
Añadir KOtBu (3 g, 25 mmol) a una solución de 2-(3-aminopropil)-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (7,6 g, 19 mmol) en THF (200 ml) y TEA (1,0 ml, 7,1 mmol). Calentar la mezcla a 80 °C durante 4 h, enfriar a TA y añadir agua (100 ml). Concentrar toda la mezcla al vacío y tratar el residuo resultante con una pequeña cantidad de MeOH hasta que aparezca un sólido. Eliminar por filtración el sólido resultante y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (Thermo Scientific Hypersil GOLD™), eluyendo con un gradiente de ACN al 0-50 % que contiene ácido fórmico al 0,1 % y agua que contiene ácido fórmico al 0,1 %, para proporcionar el compuesto del título (1,7 g, 24 % de rendimiento) en forma de un sólido de color pardo claro después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 365 (M+H).
Preparación 123
2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000062_0003
A una solución de 2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(etil)amino]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona (1,7 g, 4,7 mmol) en dimetilsulfóxido (20 ml) y THF (20 ml) añadir KOH pulverizado (1,1 g, 19 mmol). Agitar la mezcla durante 30 min, después añadir 3-(clorometil)-2-metoxi-4,6-dimetil-piridina (1,0 g, 5,4 mmol). Agitar la mezcla resultante durante 1 h, verter la mezcla en solución acuosa de NaHCO3 enfriada con hielo y extraer con DCM. Separar las capas resultantes y concentrar la fase orgánica al vacío para proporcionar el compuesto del título (2,1 g, 61 % de rendimiento) en forma de un aceite de color pardo, adecuado para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 514 (M+H).
Preparación 124
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-[etil(4-oxocidohexil)amino]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000063_0001
Añadir LiCI (0,830 g, 19,4 mmol) y PTSA (3,5 g, 19 mmol) a una solución de 2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-iI(etil)amino]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetiIpiridin-3-iI)metiI]-3-metiI-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona (2,0 g, 2,7 mmol, -70 % de pureza) en DMF (20 ml) y calentar la mezcla resultante a 70 °C durante 1 h. Enfriar la mezcla de reacción a TA, verter en solución acuosa saturada de NaHCO3 enfriada con hielo, extraer con DCM (2 x 100 ml) y separar las capas. Concentrar las capas orgánicas combinadas al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-10 % en DCM, para proporcionar el compuesto del título (1,8 g, -85 % de pureza por CLEM analítica) en forma de un aceite de color pardo claro después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 456 (M+H).
Preparación 125
2-(3-{[(benciloxi)carbonil]amino}prop-1-in-1-il)-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000063_0002
Añadir TEA (35,4 g, 350,0 mmol) a una suspensión de 2-bromo-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (5,40 g, 13,0 mmol), CuI (0,987 g, 5,18 mmol) y N-prop-2-inilcarbamato de bencilo (3,17 g 14,3 mmol, 85 % de pureza) en 1,4-dioxano (54 ml). Desgasificar la mezcla con corriente de N2, añadir dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) (1,84 g, 2,59 mmol), agitar la mezcla a 40 °C durante 1 h, añadir más N-prop-2-inilcarbamato de bencilo (3,17 g, 14,3 mmol, 85 % de pureza) y calentar a 40 °C durante 1 h. Concentrar la mezcla de reacción al vacío, añadir DCM/hexanos (aproximadamente 1:1), filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo oleoso de color pardo a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de MTBE al 0-75 % en hexanos, concentrar las fracciones de la cromatografía al vacío, disolver el residuo resultante en MeOH y concentrar al vacío otra vez para proporcionar el compuesto del título (5,23 g, 75 % de rendimiento) en forma de un residuo pegajoso de color pardo. EN/EM (m/z): 513 (M+H).
Preparación 126
2-(3-aminopropil)-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo 30*5
Figure imgf000063_0003
A 2-(3-{[(benciloxi)carbonil]amino}prop-1-in-1-il)-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (5,23 g, 9,18 mmol) en MeOH (45 ml) y EtOAc (15 ml), añadir TEA (6,40 ml, 45,9 mmol) y Pd al 10 % sobre carbono (2,6 g, 2,4 mmol). Evacuar el recipiente de reacción y agitar a TA en atmósfera de H2 (345 kPa) durante 5 h. Añadir Pd(OH)2 al 20 % sobre carbono (2,78 g, 3,96 mmol), evacuar el recipiente de reacción, cargar con H2 y agitar durante aproximadamente 17 h a TA. Añadir más Pd(OH)2 al 20 % sobre carbono (1,0 g, 1,4 mmol), cargar con H2 y agitar a TA durante 4 h. Filtrar la mezcla de reacción sobre un lecho de tierra de diatomeas y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de NH3 metanólico 7 N al 0-12 % en DCM. Concentrar las fracciones de la a presión reducida, disolver el residuo resultante en MeOH y concentrar al vacío otra vez para proporcionar el compuesto del título (2,60 g, 73 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo. EN/Em (m/z): 383 (M+H).
Preparación 127
2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4h-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000064_0001
Añadir KOtBu (20% en peso en THF, 5,46 g, 9,72 mmol) a una mezcla de 2-(3-aminopropil)-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (2,53 g, 6,48 mmol) en tolueno (25 ml). Agitar a 120 °C durante 1 h, enfriar a TA, añadir anhídrido propilfosfónico (50 % en peso en acetato de etilo, 0,386 ml 0,648 mmol) y agitar durante 30 min. Inactivar la mezcla de reacción con solución saturada de NH4Cl, diluir con EtOAc (aproximadamente 50 ml) y separar las capas. Secar la capa orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar el compuesto del título (2,21 g, 97 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo, adecuado para su uso sin más purificación. EN/EM (m/z): 351 (M+H).
Preparación 128
5-{[2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-il]metil}-2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000064_0002
A una solución de 2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4h-tieno[3,2-c]azepin-4-ona (2,21 g, 6,31 mmol) en THF (10 ml) y dimetilsulfóxido (10 ml), añadir KOH pulverizado (1,43 g, 25,2 mmol) en una porción, agitar durante 30 min, después añadir 2-benciloxi-3-(clorometil)-4,6-dimetil-piridina (1,98 g, 6,81 mmol, 90 % de pureza) disuelta en THF (2 ml). Agitar la mezcla resultante a TA durante 4 h, después verter en solución acuosa de NaHCO3 enfriada con hielo y extraer con DCM. Separar las capas y concentrar la capa orgánica al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-50 % en hexanos, para proporcionar el compuesto del título (3,2 g, 86 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 576 (M+H).
Preparación 129
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[metil(4-oxociclohexil)amino]-5,6,7,8-tetrahidro- 4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000064_0003
Añadir LiCl (1,4 g, 33 mmol) y PTSA (5,8 g, 32 mmol) a una solución de 5-{[2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-il]metil}-2-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona (3,2 g, 5,4 mmol) en DMF (30 ml). Calentar a 70 °C durante 1 h, enfriar a TA, verter en solución acuosa saturada de NaHCO3 enfriada con hielo y extraer con DCM. Separar las capas resultantes y concentrar la fase orgánica al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de NH3 metanólico 7 N al 0-5 % en DCM, para proporcionar el compuesto del título (1,7 g, 60 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 442 (M+H).
Preparación 130
5-[(2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metil]-2-[(1R)-1-{trans-4-[2-metoxietil(metil)amino]ciclohexil}etil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4-ona
Figure imgf000065_0001
Disolver 2-metoxietanamina (100 mg, 1,33 mmol) en MeOH (4 ml) y añadir 5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (160 mg, 0,36 mmol). Agitar la mezcla durante 4 horas. Enfriar a -78 °C y añadir gota a gota LiBH42 M en THF (235 pl, 0,47 mmol). Agitar la mezcla resultante durante 15 minutos y calentar a TA con agitación durante 1 h. Concentrar la mezcla de reacción al vacío y diluir con DCM y NaHCO3 acuoso saturado. Separar las capas, extraer la fase acuosa con más DCM, combinar los extractos orgánicos y secar la fase orgánica sobre MgSO4. Filtrar y concentrar el filtrado para obtener 5-[(2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metil]-2-[(1R)-1-{trans-4-[(2-metoxietilamino)ciclohexil]etil}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4-ona en bruto (150 mg, 83 % de rendimiento) en forma de un aceite, suficiente para su uso en la etapa siguiente sin más purificación. EN/EM (m/z): 500 (M+H).
Disolver la 5-[(2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metil]-2-[(1R)-1-{trans-4-[(2-metoxietilamino)ciclohexil]etil}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4-ona en bruto (100 mg, 0,20 mmol) en DCM (2 ml) y añadir una solución de formaldehído acuoso al 37 % (0,4 ml, 5,0 mmol); agitar la mezcla a TA durante 15 min. Añadir Na(OAc)3BH (170 mg, 0,80 mmol) y agitar la mezcla a TA durante aproximadamente 3 horas. Añadir una solución adicional de formaldehído acuoso al 37 % (1,5 ml, 18,75 mmol) a la mezcla de reacción y agitar durante 2 h a TA. Concentrar la mezcla de reacción al vacío y añadir DCM (25 ml). Volver a suspender la mezcla en MeOH (8 ml) con TEA (1,5 ml, 11 mmol). Añadir una solución de formaldehído acuoso al 37 % (6 ml, 80,0 mmol). Agitar la mezcla a TA durante 1 h. Añadir Na(OAc)3BH (300 mg, 1,42 mmol) y agitar la mezcla resultante a TA durante aproximadamente 4 h. Diluir la reacción con DCM (40 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (1,0 ml). Separar las capas, secar la fase orgánica sobre MgSO4 y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-10 % en DCM, para proporcionar el compuesto del título (48 mg, 47 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 514 (M+H).
Preparación 131
5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-il)etil]-2-[3-[(2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metilamino]propil]-4-metil-tiofen-3-carboxilato de metilo
Figure imgf000065_0002
Someter una solución de 2-(3-{[(benciloxi)carbonil]amino}prop-1-in-1-il)-5-[1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il(metil)amino]-4-metiltiofen-3-carboxilato de metilo (803 g, 1,57 mol), 2-metoxi-4,6-dimetil-piridin-3-carbaldehído (314,5 g, 1,90 mol) y paladio Pd(OH)2 sobre carbono activado (298 g) en EtOH (7,5 l) a hidrogenación a 689,476 kPa a 60 °C. Tras cesar la absorción de H2 (18 h), enfriar la reacción y filtrar la mezcla resultante a través de tierra de diatomeas, aclarando con EtOH (2 l). Eliminar el disolvente a presión reducida para dar el compuesto del título (892 g, >99 % de rendimiento) en forma de un aceite. EN/EM (m/z): 531 (M+H).
Preparación 132
5-[(2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxocidohexil)etil]-7,8-dihidro-6H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000066_0001
Añadir trimetilsilanolato de potasio (256,7 g, 2,0 mol) a una solución de 5-[(1R)-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-il)etil]-2-[3-[(2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metilamino]propil]-4-metil-tiofen-3-carboxilato de metilo (531,4 g, 1,0 mol) en THF (6,4 l). Calentar la mezcla a 65 °C durante 18 h, enfriar a 5 °C y añadir de forma secuencial TEA (382 ml, 2,7 mol) y clorhidrato de trietilamina (471 g, 3,4 mol). Después de agitar durante 10 minutos, añadir 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosforinan-2,4,6-trióxido en EtOAc (887 ml, 1,5 mol) durante un periodo de 30 minutos mientras se mantiene la temperatura a ~5 °C. Agitar la mezcla de reacción durante una noche a TA y añadir HCl acuoso 2 N (5,0 L, 10,0 mol) a 23 °C. Agitar la reacción durante 16 h, diluir con EtOAc (6,5 l) y neutralizar con K3PO42 M (6,5 l). Lavar la capa orgánica con NaCl acuoso saturado (3,2 l), separar las capas, secar la capa orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado resultante a presión reducida. Purificar el residuo resultante por cromatografía sobre sílice (4 kg), eluyendo con un gradiente del 10 al 50 % de EtOAc en heptanos. Triturar las fracciones purificadas con heptanos (2,3 l) y secar al vacío a 40 °C para obtener el compuesto del título (196,2 g, 43 % de rendimiento). EN/EM (m/z): 455 (M+H).
Preparación 133
2-[(1R)-1-[4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]etil]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metil]-3-metil-7,8-dihidro-6H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000066_0002
Añadir 5-[(2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]-7,8-dihidro-6H-tieno[3,2-c]azepin-4- ona (246,3 g, 0,5418 mol) a una solución de clorhidrato de 3-metoxiazetidina (186,9 g, 1,51 mol) en MeOH (2,9 l) que contiene DIPEA (573 ml, 3,29 mol). Agitar la mezcla de reacción resultante a TA durante una noche. Añadir THF (991 ml) y enfriar la solución a -72 °C. Añadir una solución de UBH42 M en THF (379 ml, 0,758 mol) gota a gota sobre 45 min, mientras se mantiene la temperatura interna por debajo de -70 °C. Después de agitar durante 2,5 h, inactivar la reacción añadiendo la mezcla de reacción a HCl acuoso 1 M (6,6 l) durante 20 min. Agitar la mezcla durante 10 min y ajustar a pH ~ 9 con K2CO3 acuoso 6 M (1,25 l). Concentrar la mezcla resultante para eliminar los volátiles y diluir la mezcla acuosa restante con EtOAc (6 l). Separar las capas y lavar la capa orgánica secuencialmente con K2CO33 M (1,65 l) y NaCl acuoso saturado. Secar la capa orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo resultante sobre gel de sílice (3,2 kg), eluyendo con un gradiente de una mezcla del 0 al 5 % de NH3 7 N/MeOH en EtOAc, para obtener el compuesto del título (208,6 g, 73 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 526 (M+H).
Ejemplo 1
5- [(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-{(1R)-1-[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]etil}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000067_0001
Añadir LiCl (9,83 g, 230 mmol) y PTSA (41,6 g, 230 mmol) a una solución de 5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-2-{(1R)-1-[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)cidohexil]etil}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (23,5 g, 45,9 mmol) en DMF (188 ml). Agitar la mezcla resultante a 50 °C durante 8 h y a TA durante 16 h. Añadir agua (400 ml) y solución acuosa 2 M de K2CO3 (300 ml), extraer con EtOAc (2 x 250 ml), separar las capas, secar las fases orgánicas combinadas sobre MgSO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Suspender el sólido resultante en heptano (400 ml) y calentar a 80 °C durante 3 h. Enfriar la suspensión, filtrar y secar al vacío a 45 °C durante 16 h. Suspender el sólido resultante en diisopropil éter (195 ml), calentar a 70 °C durante 2 h, enfriar la suspensión, filtrar y secar al vacío a 45 °C durante 16 h. Suspender el sólido recogido en agua (180 ml) y calentar a 70 °C durante 5 h, después a TA durante 5 h. Filtrar los sólidos resultantes y secar al vacío a 45 °C durante 16 h para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanquecino (16,6 g, 70 % de rendimiento). EN/EM (m/z): 498 (M+H). [a]p20 *25= -68,93° (c=1,0, MeOH).
Ejemplos 2 y 3
Ejemplo 2: 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(3-metil-1H-pirazol-1-il)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000067_0002
Ejemplo 3: 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1H-piridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-[4-[3-(5-metilpirazol-1-il)azetidin-1-M]cidohexM]etM]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridm-4-ona
Figure imgf000067_0003
A una solución de 5-[2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(3-metil-1H-pirazol-1-il)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona y 5-[(2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-[trans-4-[3-(5-metilpirazol-1-il)azetidin-1-il]ciclohexil]etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4-ona (800 mg, 0,925 mmol, mezcla de regioisómeros) en DMF (5 ml) a 0 °C, añadir LiCl (198 mg, 4,63 mmol) y PTSA (839 mg, 4,63 mmol). Calentar la suspensión resultante a 50 °C durante una noche. Añadir solución acuosa saturada de NaHCO3 enfriada con hielo, extraer con DCM (2 x 100 ml), separar las capas, combinar las fases orgánicas, lavar con NaCl acuoso saturado, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (XBRIDGE™, 5 ^m, 19 x 100 mm, caudal: 25 ml/min), usando un gradiente de NH4HCO3 acuoso 20 mM al 40-60 % (pH 9) en ACN, para proporcionar el compuesto del título como una mezcla de regioisómeros en forma de un polvo sólido de color amarillo claro (130 mg, 26 %) después de la evaporación del disolvente. Separar los regioisómeros mediante cromatografía CFS (CHIRALPAK® IA, EtOH al 35 % (0,2 % IPAm)/CO2, 21 x 250 mm) y las estructuras de asignación basadas en espectroscopía 1H y HSQC. Regioisómero 1 (Ejemplo 2): 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(3-metil-1H-pirazol-1-il)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona, EN/EM (m/z): 548 (M+H), tR = 2,93 min (CFS analítica CHIRALPAK® IA, 35 % (0,2 % IPAm)/CO2, 5 ml/min, 225 nm, 5 x 25 mm). RMN 1H (400,1 MHz, CDCls): 8 0,87-1,04 (m, 4H), 1,22 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,31-1,25 (m, 1H), 1,60-1,69 (m, 1H), 1,69-1,79 (m, 1H), 1,86-1,91 (m, 1H), 1,92-2,01 (m, 1H), 2,08-2,17 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,79-2,89 (m, 3H), 3,33-3,43 (m, 2H), 3,62-3,71 (m, 2H), 3,77 (c, J = 6,8 Hz, 2H), 4,71 (s, 2H), 4,85 (quintuplete, J = 7,2 Hz, 1H), 5,92 (s, 1H), 6,01 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 12,53-12,55 (s a, 1H). El C5 del pirazol muestra un desplazamiento del carbono de 128,6 ppm en la espectroscopía HSQC. Regioisómero 2 (Ejemplo 3): 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1H-piridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-[4-[3-(5-metilpirazol-1-il)azetidin-1 -il]ciclohexil]etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4-ona, EN/EM (m/z): 548 (M+H), tR = 3,69 min (CFS analítica CHIRALPAK® IA, 35 % (0,2 % IPAm)/CO2, 5 ml/min, 225 nm, 5 x 25 mm). RMN 1H (400,1 MHz, CDCla): 80,90-1,04 (m, 4H), 1,21 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,25-1,31 (m, 1H), 1,62-1,67 (m, 1H), 1,79 (s, 1H), 1,84-1,91 (m, 1H), 1,99-2,01 (m, 1H), 2,09-2,19 (m, 1H), 2,23 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,81-2,89 (m, 3H), 3,50-3,56 (m, 2H), 3,62-3,71 (m, 2H), 3,79 (c, J = 6,7 Hz, 2H), 4,71 (s, 2H), 4,81-4,88 (m, 1H), 5,92 (s, 1H), 5,99 (s, 1H), 7,43 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 12,32-12,34 (s a, 1H). El C3 del pirazol muestra un desplazamiento del carbono de 138,4 ppm en la espectroscopía HSQC.
Preparar los compuestos siguientes esencialmente mediante el procedimiento del ejemplo 2 utilizando la 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1H-piridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-[4-sustituido-ciclohexil]etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4-ona apropiada y purificando por cromatografía de fase normal o inversa.
Figure imgf000068_0001
continuación
Figure imgf000069_0002
Ejemplo 9
2-[(1R)-1-[4-[3-(ciclopropoxi)azetidin-1-il]ciclohexil]etil]-5-[(4,6-dimetM-2-oxo-1H-piridin-3-M)metil]-3-metM-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4-ona
Figure imgf000069_0001
Agitar una mezcla de 5-{[2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-il]metil}-2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(cidopropiloxi)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (200 mg, 0,33 mmol) en THF (6 ml) y HCl 1 N (10 ml) a 90 °C durante 2 h. Enfriar a TA y verter la mezcla en una solución acuosa saturada de NaHCO3 con hielo y después extraer dos veces con EtOAc. Lavar los extractos combinados con NaCl acuoso saturado, secar sobre MgSO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente del 20-50 % de una mezcla de (NH37 N al 10 % MeOH) en DCM y DCM para proporcionar 66 mg del producto puro después de la evaporación del disolvente. Someter las fracciones combinadas menos puras (54 mg después de la evaporación del disolvente) a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (Phenomenex LUNA®, 5 pm C-18 AXIA®, 30 x 75 mm, temperatura de columna 25 °C, 85 ml/min), usando un gradiente de ACN al 10-75 % en NH4HCO3 10 mM (pH 10) en agua. Combinar las fracciones similares, concentrar al vacío, y someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente del 20-50 % de una mezcla de (NH37 N al 10 % en MeOH) en DCM y DCM, para proporcionar 22 mg más del compuesto del título después de la evaporación del disolvente. Combinar los dos materiales purificados en forma del compuesto del título (88 mg, 51 % de rendimiento). EN/EM (m/z): 524 (M+H). RMN 1H (400,1 MHz, CDCb): 0,40-0,47 (m, 2H), 0,49-0,55 (m, 2H), 0,91-1,01 (m, 4H), 1,20 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,24-1,29 (m, 1H), 1,55-1,65 (m, 1H), 1,67-1,76 (m, 1H), 1,76-1,82 (m, 1H), 1,86-1,97 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,38 (s, 3H), 2,77-2,89 (m, 5H), 3,17-3,22 (m, 1H), 3,57-3,69 (m, 4H), 4,71 (s, 2H), 4,20 (quintuplete, J = 6,0 Hz, 1H), 5,92 (s, 1H), 12,81-12,83 (s a, 1H).
Preparar los compuestos siguientes esencialmente mediante el procedimiento del ejemplo 9, usando la 5-[(2-benciloxi-4,6-dimetil-3-piridil)metil]-2-[(1R)-1-[4-azetidin-1-il]ciclohexil]etil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4-ona sustituida apropiada.
Figure imgf000070_0001
Ejemplo 12: RMN 1H (399,8 MHz, CDCI3): 1,05-1,07 (m, 2H), 1,32-1,46 (m, 2H), 1,83-1,85 (m, 2H), 1,93-1,94 (m, 2H), 2,14-2,16 (m, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,62 (s, 3H), 2,58-2,67 (m, 1H), 2,76-2,80 (m, 2H), 3,43-3,47 (m, 2H), 3,62-3,66 (m, 2H), 3,77-3,81 (m, 2H), 4,69 (s, 2H), 4,92-4,95 (m, 1H), 5,90 (s, 1H), 6,24 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 1,9 Hz, 1H). (Protón NH intercambiable no observado.)
Ejemplo 15
2-{(1R)-1-[trans-4-(azetidin-1-il)ciclohexM]etil}-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metM]-3-metM-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000071_0001
Agitar una mezcla de 2-{(1R)-1-[trans-4-(azetidin-1-il)cidohexil]etil}-5-[[2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-il]metil}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (190 mg, 0,34 mmol) y Pd al 10 % sobre carbono (60 mg) en MeOH (15 ml) en atmósfera de H2 a 413,685 kPa durante una noche. Filtrar la mezcla de reacción sobre un lecho de tierra de diatomeas y concentrar el filtrado. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de 0-60 % de una mezcla de NH37 N al 10 % MeOH/DCM en DCM, para obtener el compuesto del título (117 mg, 73 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 468 (M+H).
Ejemplo 16
2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(ciclopropilmetoxi)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000071_0002
Agitar una mezcla de 5-{[2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-il]metil}-2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(ciclopropilmetoxi)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (96 mg, 0,15 mmol), LiCI (34 mg, 0,79 mmol) y ácido ptoluenosulfónico monohidrato (135 mg, 0,77 mmol) en DMF (3 ml) a 62 °C durante 1,5 h y concentrar la mezcla de reacción al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de 0-70 % de una mezcla de NH32 N al 10 % en MeOH/DCM en DCM para dar el compuesto del título (40 mg, 48 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 538 (M+H).
Ejemplos 17 y 18
Ejemplo 17: 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-[(1R)-{trans-4-[3-(2-metoxietoxi)azetidin-1-il]ciclohexil}etil)]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000071_0003
Ejemplo 18: 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-[(1R)-{cis-4-[3-(2-metoxietoxi)azetidin-1-il]ciclohexil}etil)]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000072_0001
Añadir LiCI (0,2 g, 5,57 mmol) y PTSA (1,01 g, 5,578 mmol) a una solución de 5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-N)metN]-2-[(1R)-1-{4-[3-(2-metoxietoxi)azetidin-1-M]cicIohexM}etM]-3-metN-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,62 g, 1,11 mmol, mezcla de diastereómeros cis y trans) en DMF (5,6 ml) y agitar a 90 °C durante 2 h. Añadir NaHCO3 acuoso saturado, extraer con EtOAc, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre SCX (10 g), eluyendo primero con MeOH, después con NH32 M en MeOH. Concentrar el MeOH en fracción de amoniaco al vacío y someter el residuo resultante a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (columna Xterra XBRIDGE®, 5 pm, 19 x 100 cm), eluyendo con un gradiente de NH4CO320 mM al 35-55 % (pH 9) en agua/ACN durante 3 min a 25 ml/minuto, para proporcionar el primer compuesto de elución trans, ejemplo 17, en forma de un sólido (0,148 g, 25 % de rendimiento) después de la evaporación del disolvente, EN/EM (m/z): 541 (M+H) y el segundo compuesto de elución cis, ejemplo 18, en forma de un sólido (0,027 g, 4,5 % de rendimiento), EN/EM (m/z): 541 (M+H).
Ejemplo 19
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-{[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil](metil)amino}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000072_0002
Agitar clorhidrato de 3-metoxiazetidina (0,304 g, 2,460 mmol) en MeOH (5 ml) y THF (5 ml) con DIPEA (0,308 ml, 1,77 mmol) a TA durante 30 min. Añadir 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[metil(4-oxociclohexil)amino]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,28 g, 0,49 mmol) y agitar a TA durante 1 h. Enfriar la mezcla a -78 °C y añadir una solución de LiBH42 M en THF (6,4 ml, 13 mmol), agitar la mezcla resultante durante 1 h a -78 °C y calentar a TA. Verter la mezcla de reacción en solución saturada de NaHCO3 enfriada con hielo, extraer con DCM, separar las capas, secar los extractos orgánicos sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el extracto orgánico al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de 0-50 % de una solución al 10 % de NH3 metanólico 7 N en DCM a DCM. Recoger las fracciones de cromatografía que contienen los isómeros trans y cis y concentrar al vacío. Separar los isómeros trans y cis mediante cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (30 g Thermo Scientific Hypersil GOLD™), eluyendo con un gradiente de ACN al 10-100 % en NH4CO3 acuoso 10 mM, para proporcionar el compuesto del título (0,064 g, 26 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 499 (M+H).
Ejemplo 20
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-(metil{trans-4-[3-(1H-pirazol-1-il)azetidin-1-il]ciclohexil}amino)-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Añadir isopropóxido de titanio (IV) (0,373 g, 1,27 mmol) a 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[metil(4-oxociclohexil)amino]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,148 g, 0,32 mmol) en DCM (2,5 ml) a TA seguido de diclorhidrato de 1-(azetidin-3-il)pirazol (0,187 g, 0,955 mmol). Después de 3 h, añadir THF (2,5 ml), después concentrar la mezcla a aproximadamente 2,5 ml al vacío. Enfriar la mezcla resultante a -78 °C, añadir MeOH (2,5 ml) seguido de una solución de LiBH42 M en THF (0,24 ml, 0,48 mmol), calentar gradualmente a TA y agitar durante una noche. Diluir la mezcla con DCM (50 ml) y agua (10 ml), filtrar sobre un lecho de tierra de diatomeas y lavar la torta de filtro con DCM (100 ml). Concentrar el filtrado al vacío y someter el residuo resultante a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (Wa Te RS™ XBRIDGE®, 30 x 75 mm, 5 pm), eluyendo con un gradiente de ACN al 20-60 % en NH4CO3 acuoso 10 mM que contiene MeOH al 5 %, para proporcionar el compuesto del título (0,025 g, 14 % de rendimiento) en forma de una película fina transparente después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 535 (M+H).
Ejemplo 21
5-[(4-cloro-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-{etil[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]amino}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000073_0001
Añadir clorhidrato de 3-metoxiazetidina (0,300 g, 2,43 mmol) en metanol (5 ml) a un matraz de fondo redondo que contiene THF (5 ml) y DIPEA (0,306 ml, 1,75 mmol), agitar a TA durante 30 min, después añadir 5-[(4-cloro-6-metil-2-oxo-1,2- dihidropiridin-3-il)metil]-2-[etil(4-oxociclohexil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,450 g, 0,487 mmol, 50 % de pureza) a la solución y agitar a TA durante 1 h. Enfriar la mezcla de reacción a -78 °C y añadir una solución de LiBH42 M en THF (0,63 ml, 1,3 mmol). Agitar durante 1 h, después calentar gradualmente la mezcla a TA, verter la mezcla en NaHCO3 acuoso saturado enfriado con hielo, extraer con DCM, separar las capas, secar la fase orgánica sobre Na2SO4 anhidro, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de 0-40% de una mezcla de NH37 N al 10%/MeOH en DCM/DCM. Para separar los isómeros cis y trans, evaporar las fracciones que contienen el producto y someter el residuo resultante a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (15,5 g Thermo Scientific Hypersil GOLD™), eluyendo con un gradiente de ACN al 10-100 % en NH4CO310 mM que contiene MeOH al 5 %, para proporcionar el compuesto del título (0,120 g, 46 % de rendimiento), en forma de un sólido de color blanco después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): (35Cl/37Cl) 533/535 (M+H).
Ejemplo 22
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-{etil[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]amino}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000073_0002
Añadir LiCI (6,13 g, 143,2 mmol) a una mezcla de 2-{etil[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]amino}-5-[(2-metoxi-4,6-dimetiIpiridin-3-iI)metiI]-3-metiI-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (16,40 g, 28,65 mmol) y pTsA (25,96 g, 143,2 mmol) en Dm F (100 ml) y agitar a 50 °C durante 9 h y después a TA durante 18 h. Diluir con EtOAc (400 ml) y solución acuosa 4 M de K2CO3 (200 ml). Separar las fases, extraer la fase acuosa con EtOAc (3 x 100 ml) y lavar de forma secuencial las capas orgánicas combinadas con solución acuosa 4 M de K2CO3 (2 x 100 ml), agua (100 ml) y NaCl acuoso saturado (100 ml). Secar la fase orgánica sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío para proporcionar un sólido de color pardo claro. Suspender el sólido con EtOAc (100 ml) y agitar durante 1 h a TA. Añadir éter dietílico (100 ml), agitar durante 2 h a TA, filtrar el sólido, lavar con éter dietílico frío (50 ml) y secar al vacío. Añadir TEA (21,54 g, 212,8 mmol) a una mezcla del sólido resultante en ACN (500 ml) y agitar durante 24 h a 85 °C. Enfriar la mezcla, concentrar al vacío, suspender el residuo resultante en agua (165 ml) y agitar durante 4 h a TA. Filtrar el sólido resultante, lavar con agua (50 ml) y secar al vacío a 50 °C durante 16 h para proporcionar el compuesto del título (10,83 g, 76 % de rendimiento) en forma de un sólido de color marfil claro. EN/EM (m/z): 513 (M+H).
Ejemplo 23
2-[{trans-4-[3-(cidopropiloxi)azetidin-1-il]cidohexil}(etil)amino]-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000074_0001
A un matraz de fondo redondo, añadir clorhidrato de 3-(ciclopropoxi)azetidina (0,6776 g, 4,529 mmol), MeOH (4 ml), DIPEA (0,5853 g, 4,529 mmol), 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-[etil(4-oxociclohexil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,500 g, 1,13 mmol) y THF (20 ml). Agitar la solución resultante a TA durante una noche. Enfriar la mezcla de reacción a -78 °C y añadir gota a gota UBH42 M en THF (1,13 ml, 2,26 mmol). Colocar la reacción en un baño de hielo a 0 °C y dejar que se caliente lentamente a TA sobre 1,5 h. Inactivar la mezcla de reacción con solución acuosa saturada de NaHCO3, diluir con DCM, separar las capas y extraer la fase acuosa con más DCM. Combinar las fases orgánicas, secar sobre Na2SO4 anhidro, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18. Concentrar las fracciones deseadas al vacío para proporcionar el compuesto del título (0,092 g, 15 %) en forma de un polvo de color blanco. EN/EM (m/z): 539 (M+H).
Ejemplos 24 y 25
Ejemplo 24: 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-(etil{trans-4-[3-(1H-pirazol-1-il)azetidin-1 -il]ciclohexil}amino)-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000074_0002
Ejemplo 25: 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-(etil{cis-4-[3-(1H-pirazol-1-il)azetidin-1-il]ciclohexil}amino)-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000074_0003
A un matraz de fondo redondo, añadir diclorhidrato de 1-(azetidin-3-il)pirazol (0,266 g, 1,36 mmol), MeOH (6,8 ml) y DIPEA (0,239 ml, 1,36 mmol) y agitar a TA durante 30 min. Añadir 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-[etil(4-oxociclohexil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,150 g, 0,340 mmol) a la mezcla de reacción y agitar durante 3 h. Enfriar la mezcla de reacción a -78 °C, después añadir LiBH42 M en THF (0,255 ml, 0,510 mmol) gota a gota y agitar durante 3 h. Calentar la mezcla de reacción a TA, verter en solución acuosa saturada de NaHCO3 enfriada con hielo, diluir la suspensión resultante con DCM/agua y extraer tres veces con DCM. Separar las capas, combinar las fases orgánicas, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18, eluyendo con un gradiente de ACN al 0-55 % en NH4CO3 10 mM/agua, para proporcionar el compuesto trans del título ejemplo 24 (0,088 g, 47 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco, EN/EM (m/z): 549 (M+H) y el compuesto cis del título ejemplo 25 (0,048 g, 26 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco, EN/EM (m/z): 549 (M+H).
Ejemplo 26
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-(etil{trans-4-[3-(2-metoxietoxi)azetidin-1-il]ciclohexil}amino)-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000075_0001
A un matraz de fondo redondo, añadir clorhidrato de 3-(2-metoxietoxi)azetidina (1,5 g, 8,9 mmol) y DIPEA (2 ml, 11,5 mmol) en MeOH (20 ml). Agitar a TA durante 30 min, después añadir 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-[etil(4-oxociclohexil)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (1,0 g, 2,3 mmol) en Th F (5 ml) y agitar la mezcla resultante a TA durante una noche. Enfriar la mezcla de reacción a -78 °C y añadir gota a gota LiBH4 2 M en THF (2,8 ml, 5,6 mmol). Colocar la reacción en un baño de hielo y calentar lentamente a TA durante 2 h. Verter la mezcla de reacción en solución acuosa saturada de NaHCO3 enfriada con hielo, extraer con DCM, separar las capas y concentrar los extractos orgánicos al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de 0-3 % de una mezcla de NH37 N/MeOH en DCM, para proporcionar el isómero trans (0,450 g, 36 % de rendimiento) en forma de un sólido impuro de color pardo claro y el isómero cis (0,220 g, 17 % de rendimiento) en forma de un aceite de color pardo claro después de la evaporación del disolvente. Someter el isómero trans a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18, eluyendo con un gradiente de ACN al 0-60 % en NH4CO310 mM/agua, para proporcionar el compuesto trans del título (233 mg, 18 % de rendimiento) en forma de un sólido de color pardo claro después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 557 (M+H). RMN 1H (400,1 MHz, CDCla): 0,94 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 0,98-1,03 (m, 2H), 1,20-1,28 (m, 2H), 1,78-1,81 (m, 2H), 1,86-1,92 (m, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,35 (s, 6H), 2,67-2,77 (m, 1H), 2,83 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 2,85-2,95 (m, 4H), 3,39 (s, 3H), 3,59 (dd, J= 6,1, 7,5 Hz, 2H), 3,52 (s, 4H), 3,69 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 4,13 (quintuplete, J = 5,9 Hz, 1H), 4,73 (s, 2H), 5,94 (s, 1H), 12,24-12,25 (s a, 1H).
Ejemplo 27
2-{[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil](etil)amino}-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000075_0002
A un recipiente de microondas de 5 ml, añadir 2-[(trans-4-aminociclohexil)(etil)amino]-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,050 g, 0,113 mmol), ácido acético (0,019 ml, 0,339 mmol) y formaldehído acuoso al 37 % (0,025 ml, 0,3389 mmol) en MeOH (4 ml). Enfriar el recipiente a 0 °C y añadir lentamente NaCNBH4 (0,0213 g, 0,3389 mmol) a la mezcla de reacción. Calentar a TA, agitar durante 4,5 h, después concentrar la mezcla de reacción al vacío. Diluir el residuo resultante con DCM y agua, separar las capas y extraer la capa acuosa con más DCM. Combinar las fases orgánicas, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (50 g), eluyendo con ACN en NH4CO310 mM/agua, para proporcionar el compuesto del título (0,0135 g, 25 % de rendimiento) en forma de un polvo de color blanco después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 471 (M+H).
Ejemplo 28
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-[etil(piperidin-4-il)amino]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000076_0001
Añadir 4-(etil{5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidrotieno[3,2-c]piridin-2-il}amino)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,700 g, 1,290 mmol) en DMF (6,45 ml) a un recipiente de microondas. Enfriar a 0 °C, después añadir LiCl (0,276, 6,45 mmol) y PTSA (1,17 g, 6,45 mmol). Calentar la mezcla resultante a 90 °C durante una noche, enfriar la mezcla de reacción a TA, inactivar con NaHCO3 acuoso saturado enfriado con hielo y diluir con DCM. Separar las capas, extraer la capa acuosa con más DCM, combinar las fases orgánicas, secar sobre Na2SO4, filtrar y concentrar al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente del 0-10 % de NH37 N en MeOH/DCM, para proporcionar el compuesto del título (0,284 g, 51 % de rendimiento) en forma de un sólido de color beis después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 429 (M+H).
Ejemplos 29 y 30
Ejemplo 29: 5-[(4,6-dimetN-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-N)metN]-2-(etN{trans-4-[(2-metoxietil)(metil)amino]ciclohexil}amino)-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000076_0002
Ejemplo 30: 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-(etil{cis-4-[(2-metoxietil)(metil)amino]ciclohexil}amino)-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000076_0003
Añadir LiCl (0,22 g, 5,20 mmol) y PTSA (0,94 g, 5,20 mmol) a una solución de 2-(etil{4-[(2-metoxietil)(metil)amino]ciclohexil}amino)-5-[(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,55 g, 1,04 mmol, mezcla de diastereómeros cis y trans) en DMF (5,2 ml) y calentar a 90 °C en un tubo cerrado herméticamente durante 1 h. Enfriar la reacción a TA, añadir solución acuosa saturada de NaHCO3, extraer con EtOAc y concentrar el extracto orgánico al vacío. Cargar el residuo resultante sobre un cartucho SCX (25 g), eluyendo primero con MeOH y después con NH32 M en MeOH. Concentrar las fracciones de amoniaco metanólico al vacío y someter el residuo resultante a cromatografía de fluidos supercríticos (CHIRALCEL® OD, 5 um, 2 x 25 cm), eluyendo isocráticamente al 30 % con una fase móvil de CO2/MeOH que contiene DMA al 0,2 % a 65 ml/min, para proporcionar los compuestos del título: 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-(etil{trans-4-[(2-metoxietil)(metil)amino]ciclohexil}amino)-3-metil-6,7-dihidro-tieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona, ejemplo 29, (0,07 g, 13% de rendimiento), EN/EM (m/z): 515 (M+H). 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2- dihidropiridin-3-il)metil]-2-(etil{cis-4-[(2-metoxietil)(metil)amino]ciclohexil}-amino)-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona, ejemplo 30, (0,04 g, 8 % de rendimiento), EN/EM (m/z): 515 (M+H).
Ejemplo 31
2-[{trans-4-[ciclopropil(metil)amino]ciclohexil}(etil)amino]-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000077_0001
Añadir LiCI (0,23 g, 5,38 mmol) y PTSA (0,97 g, 5,38 mmol) a una solución de 2-[{4-trans-[ciclopropil(metil)amino]cidohexM}(etN)amino]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetNpiridin-3-N)metM]-3-metN-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,55 g, 1,07 mmol) en DMF (5,4 ml) y calentar a 90 °C durante 1 h. Enfriar a TA y añadir solución acuosa saturada de NaHCO3, extraer con EtOAc y separar las capas. Secar la fase orgánica sobre Na2SO4 anhidro, filtrar, concentrar al vacío y cargar el residuo resultante sobre un cartucho SCX, eluyendo primero con MeOH y después con NH32 M en MeOH. Concentrar la fracción de amoniaco metanólico al vacío y someter el residuo resultante a cromatografía mediante CFS (CHIRALCEL® OD, 5 pm, 2 x 25 cm), eluyendo isocráticamente al 30 % con una fase móvil de CO2/MeOH que contiene DMA al 0,2 % a 65 ml/minuto, para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido (0,15 g, 29 % de rendimiento). EN/EM (m/z): 497 (M+H).
Ejemplo 32
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-{[trans-4-(3-etoxiazetidin-1-il)ciclohexil](etil)amino}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000077_0002
Añadir Pd al 10 % sobre carbono (0,035 g, 0,033 mmol) a una solución de 5-{[2-(benciloxi)-4,6-dimetilpiridin-3-il]metil}-2-{[trans-4-(3-etoxiazetidin-1-il)ciclohexil](etil)amino}-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (0,084 g, 0,13 mmol) en EtOAc (2 ml) y MeOH (2 ml). Cargar el recipiente de reacción con H2 (345 kPa), agitar durante aproximadamente 3 h, filtrar y concentrar la mezcla de reacción al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc al 20 % en DCM seguido de NH37 N al 0-10 %/MeOH en DCM, para proporcionar el compuesto del título (0,041 g, 57 % de rendimiento) en forma de una goma de color amarillo después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 527 (M+H).
Ejemplo 33
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-(etil{trans-4-[3-(1H-pirazol-1-il)azetidin-1-il]ciclohexil}amino)-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4h-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000077_0003
Añadir 1-(azetidin-3-il)pirazol (0,600 g, 4,87 mmol) a una solución de MeOH (10 ml) que contiene DIPEA (1,5 ml, 8,6 mmol), agitar a TA durante 30 min, después añadir 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-[etil(4-oxociclohexil)amino]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona (0,800 g, 1,76 mmol) en THF (10 ml). Agitar a TA durante 1 h, enfriar la mezcla de reacción a -78 °C y añadir una solución de LiBH42 M en THF (0,9 ml, 1,8 mmol). Agitar la mezcla resultante durante 3 h, calentar gradualmente a TA y agitar durante una noche. Verter la mezcla de reacción en solución saturada de NaHCO3 enfriada con hielo, extraer con DCM, separar las capas y concentrar la fase orgánica al vacío. Someter el residuo a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (100 g, Thermo Scientific Hypersil GOLD™), eluyendo con un gradiente de ACN al 0-50 % que contiene ácido fórmico al 0,1 % y agua que contiene ácido fórmico al 0,1 %, evaporar el disolvente y someter el residuo resultante un tiempo adicional a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (100 g, Thermo Scientific Hypersil GOLD™), eluyendo con un gradiente de ACN al 0-40 % que contiene ácido fórmico al 0,1 % y agua que contiene ácido fórmico al 0,1 %. Tratar las fracciones de cromatografía combinadas con solución acuosa saturada de NaHCO3, extraer con DCM, separar las capas, secar la fase orgánica sobre MgSO4, filtrar, concentrar el filtrado al vacío y secar en un horno de vacío durante una noche para proporcionar el compuesto del título como un isómero individual (0,047 g, 4,7 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco. EN/EM (m/z): 563 (M+H).
Ejemplo 34
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-{etil[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]amino}-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000078_0001
Añadir clorhidrato de 3-metoxiazetidina (0,580 g, 4,69 mmol) a una solución de MeOH (5 ml) y DIPEA(1 ml, 5,7 mmol), agitar a TA durante 30 min, después añadir 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-[etil(4-oxociclohexil)amino]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona (0,600 g, 1,12 mmol, 85 % de pureza) en THF (5 ml). Agitar la mezcla resultante a TA durante 1 h, enfriar a -78 °C y añadir una solución de LiBH42 M en THF (1,2 ml, 2,4 mmol). Agitar la mezcla resultante durante 1 h, calentar a TA con agitación durante 2 h, después verter la mezcla de reacción en solución saturada de NaHCO3 enfriada con hielo. Extraer con DCM (3 x 100 ml), separar las capas y concentrar la fase orgánica al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-10 % en DCM, para proporcionar una mezcla de los isómeros trans y cis después de la evaporación del disolvente. Separar los isómeros trans y cis mediante cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (100 g, Thermo Scientific Hypersil GOLD™), eluyendo con un gradiente de ACN al 0-60 % en NH4CO3 acuoso 10 mM, para proporcionar el compuesto del título (0,0779 g, 13 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 527 (M+H).
Ejemplo 35
2-[{trans-4-[3-(ciclopropiloxi)azetidin-1-il]ciclohexil}(metil)amino]-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000078_0002
Suspender clorhidrato de 3-(ciclopropoxi)azetidina (0,400 g, 2,67 mmol) en MeOH (10 ml), añadir THF (10 ml) y DIPEA (0,600 ml, 3,44 mmol), agitar a Ta durante 30 min, añadir 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[metil(4-oxociclohexil)amino]-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona (0,300 g, 0,577 mmol, 85 % de pureza) y agitar la mezcla resultante a TA durante una noche. Enfriar la mezcla a -78 °C y añadir una solución de LiBH42 M en THF (0,700 ml, 1,4 mmol). Agitar la mezcla resultante durante 1 h a -78 °C. Calentar la mezcla a TA, agitar durante 1 h, verter la mezcla de reacción en solución saturada de NaHCO3 enfriada con hielo, extraer con DCM, separar las capas y concentrar la capa orgánica al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de NH3 metanólico 7 N al 0-5 % en DCM. Recoger las fracciones de cromatografía que contienen los isómeros trans y cis y concentrar al vacío. Separar los isómeros trans y cis mediante cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (40 g, Thermo Scientific Hypersil GOLD™) eluyendo con un gradiente de ACN al 5-60 % en NH4CO3 acuoso 10 mM, para proporcionar el compuesto del título (0,0662 g, 21 % de rendimiento; en forma de un sólido de color pardo claro después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 539 (M+H).
Ejemplo 36
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-{(trans-4-[3-(2-metoxietoxi)azetidin-1-il]cidohexil}(metil)amino]-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000079_0001
Agitar 3-(2-metoxietoxi)azetidina (0,437 g, 2,460 mmol) en MeOH (5 ml) y THF (5 ml) contiene DIPEA (0,418 ml, 2,40 mmol) a TA durante 30 min. Añadir 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[metil(4-oxociclohexil)amino]-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona (0,35 g, 0,67 mmol) y agitar a TA durante 1 h. Enfriar la mezcla a -78 °C y añadir una solución de LiBH42 M en THF (0,87 ml, 1,7 mmol), agitar la mezcla resultante durante 2 h a -78 °C y calentar a TA durante una noche. Enfriar la mezcla a -78 °C, añadir una solución de LiBH42 M en THF (0,5 ml, 1,0 mmol) y calentar a TA. Verter la mezcla de reacción en solución saturada de NaHCO3 enfriada con hielo, extraer con DCM, separar las capas, secar los extractos orgánicos sobre Na2SO4, filtrar y concentrar los extractos orgánicos al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de 0-40 % de una solución al 10 % de NH3 metanólico 7 N/DCM en DCM. Recoger las fracciones de cromatografía que contienen los isómeros trans y cis y concentrar al vacío. Separar los isómeros trans y cis mediante cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (15,5 g Thermo Scientific Hypersil GOLD™), eluyendo con un gradiente de ACN al 10­ 100 % en NH4CO3 acuoso al 10 mM que contiene MeOH al 5 %, para proporcionar el compuesto del título (0,036 g, 9 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 557 (M+H).
Ejemplo 37
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-{[trans-4-(3-etoxiazetidin-1-il)ciclohexil](metil)amino}-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000079_0002
A 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[metil(4-oxociclohexil)amino]-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona (0,320 g, 0,616 mmol) en THF (10 ml), añadir clorhidrato de 3-etoxiazetidina (0,424 g, 3,08 mmol) en MeOH (5 ml) y DIPEA (0,55 ml, 3,15 mmol). Agitar a TA durante 30 min. Enfriar la mezcla a -78 °C y añadir lentamente una solución de LiBH42 M en THF (0,650 ml, 1,3 mmol), agitar la mezcla resultante durante 1 ha -78 °C, calentar a TA y agitar durante 1 h. Verter la mezcla de reacción en solución saturada de NaHCO3 enfriada con hielo, extraer con DCM, separar las capas, secar el extracto orgánico sobre Na2SO4, filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de 0-70 % de una solución al 10 % de NH3 metanólico 7 N en DCM a DCM. Recoger las fracciones de cromatografía que contienen los isómeros trans y cis y concentrar al vacío. Separar los isómeros trans y cis mediante cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18 (Phenomenex Luna), eluyendo con un gradiente de ACN al 40-75 % en NH4CO3 acuoso 10 mM que contiene MeOH al 5 %, para proporcionar el compuesto del título (0,099 g, 37 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco después de la evaporación del disolvente. EN/EM (m/z): 527 (M+H).
Ejemplo 38
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-{(1R)-1-[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]etil}-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000080_0001
A clorhidrato de 3-metoxiazetidina (480 mg, 3,88 mmol) en MeOH (10 ml) y THF (10 ml), añadir DIPEA (1,0 ml, 5,7 mmol) y agitar a TA durante 30 min. Añadir 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona (0,25 g, 0,57 mmol) a la solución y agitar a Ta durante 1 h. Enfriar la mezcla de reacción a -78 °C y añadir después borohidruro de litio 2 M en THF (1,0 ml, 2,0 mmol). Después de 3 h, eliminar el baño de refrigeración y agitar durante 1 h a TA. Verter la mezcla de reacción en una solución acuosa saturada de NaHCO3 enfriada con hielo y concentrar al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía de fase inversa eluyendo con un gradiente de ACN al 0-50 % (que contiene ácido fórmico al 0,1 %) en agua (que contiene ácido fórmico al 0,1 %). Recoger las fracciones puras y concentrar para proporcionar el producto en forma de la sal de ácido fórmico. Combinar el producto con material de una reacción realizada previamente de aproximadamente 2 veces la escala siguiendo un procedimiento similar. A la mezcla de producto combinado añadir solución acuosa saturada de NaHCO3, extraer con DCM, lavar con salmuera, secar sobre MgSO4 y filtrar. Concentrar el filtrado al vacío y secar en un horno durante una noche para proporcionar el compuesto del título (0,057 g de masa combinada, 6 % de rendimiento combinado) en forma de un sólido de color blanco. EN/EM (m/z): 512 (M+H). [a]o20 = -42,80° (c=1,0, MeOH).
Procedimiento alternativo al ejemplo 38
Añadir clorotrimetilsilano (233 ml, 1,83 mol) durante un periodo de 10 minutos a una temperatura de 25 a 34 °C a una mezcla de 2-[(1R)-1-[4-(3-metoxiazetidin-í-il)ciclohexil]etil]-5-[(2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metil]-3-metil-7,8-dihidro-6H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona (240 g, 0,456 mol) y Nal (267 g, 1,78 mol) en acetonitrilo. Calentar la reacción a de 33 a 41 °C durante 2 h. Enfriar a TA y diluir dos veces con acetonitrilo (4 l), concentrar la mezcla al volumen original cada vez, a presión reducida. Diluir la mezcla con acetato de etilo (2,4 l) y agua (2,4 l) y ajustar a aproximadamente pH 10 con NH4OH (380 ml). Separar las capas resultantes, lavar la capa orgánica con NaCl acuoso saturado (1,9 l). Secar la capa orgánica sobre Na2SO4, filtrar y eliminar el disolvente a presión reducida. Purificar el residuo resultante por filtración sobre un lecho de gel de sílice, eluyendo primero con EtOH al 10 % en EtOAc, después con una mezcla de NH37 N al 5 % en MeOH y EtOH al 10 % en EtOAc. Evaporar el amoniaco metanólico filtrado y triturar el residuo resultante con acetona (3 volúmenes) a 0 °C. Secar al vacío a TA para obtener el compuesto del título (186,4 g, 80 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco. EN/EM (m/z): 512 (M+H).
Ejemplo 39
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1H-piridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-[4-(3-pirazol-1-ilazetidin-1-il)ciclohexil]etil]-7,8-dihidro-6H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona
Figure imgf000080_0002
Añadir THF (5 ml) y DIPEA (0,500 ml, 2,87 mmol) a una solución de 1-(azetidin-3-il)pirazol (0,380 g, 3,09 mmol) en MeOH (5 ml), agitar la mezcla resultante a TA durante 30 min, añadir 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-(4-oxociclohexil)etil]-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona (0,400 g, 0,763 mmol, 84% de pureza) y agitar la mezcla durante una noche a TA. Enfriar la mezcla de reacción a -78 °C, añadir una solución de LiBH42 M en THF (0,720 ml, 1,4 mmol), agitar la mezcla resultante a -78 °C durante 2 h, calentar a TA, agitar durante 2 h, verter la mezcla en solución acuosa saturada de NaHCO3 enfriada en hielo, extraer con DCM (3x100 ml), separar las capas y concentrar las fases orgánicas combinadas al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía de fase inversa sobre sílice C-18, eluyendo con un gradiente de ACN al 5-60 % en NH4CO3 acuoso 10 mM, para proporcionar el compuesto del título (0,110 g, 26 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco después de la evaporación del disolvente y secado al vacío. EN/EM (m/z): 548 (M+H).
Ejemplo 40
Metanosulfonato de 2-{(1R)-1-[trans-4-(dimetilamino)cidohexil]etil}-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000081_0001
Añadir MsOH (9,1 mg, 94,3 mmol) a una suspensión de 2-{(1R)-1-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]etil}-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (42,9 mg, 90,5 mmol) en MeOH (2 ml) y someter a sonicación para obtener una solución incolora. Concentrar la solución al vacío para obtener el compuesto del título (47,8 mg, 93,8 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco. EN/EM (m/z): 454,3 (M-H).
Ejemplo 41
Metanosulfonato de 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(5-metil-1H-pirazol-1-il)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000081_0002
Añadir una solución de MsOH (1,55 ^l, 0,0238 mmol) en MeOH (1 ml) a una solución de 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1H-piridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-[4-[3-(5-metilpirazol-1-il)azetidin-1-il]ciclohexil]etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4-ona (12,7 mg, 0,023 mmol) en MeOH (2 ml). Someter la mezcla a sonicación para obtener una solución transparente. Concentrar al vacío y secar el residuo resultante en un horno a aproximadamente 40 °C, después a TA durante varios días, para proporcionar el compuesto del título (13,8 mg, 84 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco. EN/EM (m/z): 548 (M+H).
Ejemplo 42
Metanosulfonato de 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(3-metil-1H-pirazol-1-il)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000081_0003
Añadir MsOH (1,73 ^l, 0,0265 mmol) a una suspensión de 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-3-metil-2-[(1R)-1-{trans-4-[3-(3-metil-1H-pirazol-1-il)azetidin-1-il]ciclohexil}etil]-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4(5H)-ona (14,5 mg, 0,027 mmol) en MeOH (2 ml). Concentrar la solución al vacío y secar el residuo resultante en un horno de vacío a 50 °C durante 2 h para proporcionar el compuesto del título (15,1 mg, 89 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco. EN/EM (m/z): 548 (M+H).
Ejemplo 43
5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-[(1R)-1-[trans-4-[(2-metoxietil)(metil)amino]cidohexil}etil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-C]piridin-4(5H)-ona
Figure imgf000082_0001
Disolver 5-[(2-metoxi-4,6-dimetil-3-piridil)metil]-2-[(1R)-1-{trans-4-[2-metoxietil(metil)amino]ciclohexil}etil]-3-metil-6,7-dihidrotieno[3,2-c]piridin-4-ona (48,0 mg, 0,093 mmol) en DMF (3,0 ml). Añadir LíC i (30,0 mg, 0,71 mmol) y PTSA (30 mg, 0,16 mmol). Calentar la mezcla a 60 °C durante 4 h. Enfriar a TA y agitar durante una noche. Diluir con EtOAc (30 ml) y agua (3 ml). Extraer la capa de acetato de etilo con agua y secar la fase EtOAc sobre MgSO4. Filtrar y concentrar el filtrado al vacío. Someter el residuo resultante a cromatografía sobre sílice, eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-10 % en DCM, para proporcionar el compuesto del título (47 mg, rendimiento cuantitativo) en forma de un polvo de color blanco después de eliminar el disolvente. EN/EM (m/z): 500 (M+H).
Ensayos Biológicos
La expresión de EZH2 se ha relacionado en las referencias con múltiples tipos de cáncer, por ejemplo, linfomas (Velichutina, I. y col. (2010) Blood 116:5247-55; Sneeringer, C.J. y col. (2010) Proc Natl Acad Sci USA. 107:20980-5; McCabe y col. (2012) Nature 492:108-12. Béguelin, W. y col. (2013) Cancer Cell 23:677-92; Knutson, S.K. y col. Mol Cancer Ther 13:842-54), tumores rabdoides (Knutson, S.K. y col. (2013) Proc Natl Acad Sci USA. 110: 7922-7), tumores que carecen o son defectuosos para SNF5 (Wilson, B.G. y col. (2010) Cancer Cell 18:316-28), sarcomas (Kadoch y Crabtree (2013) Cell 153:71-85; Shen y col. (2016) Sci Rep 6:25239), mieloma múltiple (Kalushkova, A. y col. (2010) PLoS One 5:e11483; Popovic, R. y col. (2014) PLoS Genet.10:e1004566; Hernando, H. y col. (2016) Mol Cancer Ther. 15(2):287-98; Agarwal, P y col. (2016) Oncotarget 7:6809-23), melanoma (Zingg y col.(2015) Nat Commun. 6:6051; Barsotti, A.M. y col. (2015) Oncotarget 6(5):2928-38; Souroullas, G.P. y col. (2016) Nat. Med.
22:632-40), cáncer colorrectal (Nagarsheth, N. y col. (2016) Cancer Res. 76:275-82), cáncer de pulmón (Byers, L.A. y col. (2012) Cancer Discov. 2:798-811; Behrens, C. y col. (2013) Clin Cancer Res.19:6556-65; Riquelme, E. y col. (2014) Clin Cancer Res. 20:3849-61; Fillmore, C.M. y col. (2015) Nature 520:239-42), cáncer de riñón (Adelaiye, R. y col. (2015) Mol Cancer Ther.14(2):513-22), cáncer de mama (Kleer, CG y col. (2003), Proc Natl Acad Sci U S A.
100:11606-11; Ren y col. (2012) Cancer Res 72:3091-104), cáncer de ovario (Bitler y col. (2015) Nat Med 21:231-8) y cáncer de próstata (Varambally, S. et al. (2002) Nature 419:624-9; Yu, J. y col. (2007) Cancer Res. 67:10657-63; Varambally, S. y col. (2008) Science 322:1695-9; Yu, J. y col. (2010) Cancer Cell 17:443-54).
Los resultados de los siguientes ensayos demuestran que los compuestos de los ejemplos 1-43 son inhibidores de EZH2 y que los compuestos de la presente invención, por ejemplo, los Ejemplos 1, 9, 13, 22 y 38, en el presente documento pueden ser útiles en el tratamiento del cáncer. Tal como se usa en el presente documento, "CI50" se refiere a la concentración de un agente que produce un 50 % de la respuesta inhibidora máxima posible para ese agente, (CI50 relativo), o la concentración de un agente que produce un 50% de inhibición de la actividad enzimática diana en comparación con el control con placebo (CI50 absoluta).
Ensayo bioquímico en 384 pocillos de EZH2 TS/Y641N mut
El fin de este ensayo es medir el efecto del compuesto sobre la actividad catalítica de EZH2 TS/Y641N en el entorno del complejo PRC2.
Expresar EZH2 marcado con FLAG o EZH2 Y641N como el complejo PRC2 de 5 miembros (5-mero) que consiste en las proteínas EZH2, EED, SUZ12, RBBP4 y AEBP utilizando un sistema de expresión de baculovirus en células Sf9 y purificar utilizando la purificación por afinidad de FLAG® (Sigma-Aldrich). Diluir el complejo enzimático en un reservorio de trabajo de 3,33 nM (6,67 nM para ensayo mut) con tampón de ensayo (Tris-HCl 50 mM pH 8,5, DTT 10 mM, TRITON®-X 100 al 0,005 %). En el ensayo TS, diluir el péptido co-activador de histona H3 (21-44) trimetilado lisina no biotina 27 (CPC Scientific N.° de cat. 869799) en la solución enzimática de trabajo anterior a una concentración final de 13,33 nM. Codiluir sustrato peptídico de biotina histona H3 (21-44) (restos 21-44, CPC Scientific N.° de Cat. 811115) para el ensayo TS o sustrato peptídico de biotina lisina 27 de histona H3 (21-44) dimetilada (CPC Scientific, N.° de Cat. 830754) para el ensayo mut con 3H-SAM (adenosil-L-metionina, S-(metil)-3H(Adomet), lote 169500/12, 15 Ci/mmol o 0,55 mCi/ml, 36,7 |jM, Perkin Elmer NET155) a una concentración final de 4 j M (ensayo TS) o 2 j M (ensayo mut) en tampón de ensayo.
Añadir los compuestos de ensayo en DMSO al 100 % (50 |jl de un reservorio de 4 mM para el ensayo de TS o 50 |jl de un reservorio de 0,2 mM para el ensayo de mut) a una placa NUNC ™ de 384 pocillos (Thermo Scientific, N.° de Cat. 264573). Colocar 20 j l de DMSO al 100 % en pocillos de dilución. Realizar diluciones en serie a 3x transfiriendo 10 j l de un pocillo al siguiente. En el ensayo TS, mezclar 2 j l de compuesto diluido en serie con 38 j l de DMSO en una placa Labcyte de 384 pocillos (N.° de Cat. P-05525), mientras que en el ensayo mut, transferir los 20 j l de compuesto diluido en serie a una placa Labcyte de 384 pocillos de bajo volumen (N.° de Cat. LP-0200). Tranferir acústicamente el compuesto de 200 nl (ensayo de TS) o el compuesto de 100 nl (ensayo de mut) a una placa de ensayo receptora de 384 pocillos (Corning 3706). En el ensayo TS, dispensar 15 j l de la mezcla de péptido coactivador enzima/trimetil H3 en la placa de ensayo, seguido de 5 j l de la mezcla sustrato del péptido biotina H3 /3H-SAM. Sellar las placas y agitar durante 2 horas a TA. Las condiciones finales del ensayo son complejo enzimático 2,5 nM, péptido trimetil histona/co-activador H310 nM, péptido de sustrato de biotina 1 jM , 3H-SAM 1 jM , y compuesto de ensayo a una concentración máxima de 1 jM (ensayo TS); o complejo enzimático 5 nM, péptido de sustrato de biotina 0,5 jM , 3H-SAM 0,5 jM , y compuesto de ensayo a una concentración máxima de 1 jM (ensayo mut). Reconstituir las perlas de estreptavidina de silicato de itrio SPA (Perkin Elmer, N.° de Cat. RPNQ0012) a 1 mg/ml (ensayo TS) o a 0,5 mg/ml (ensayo mut) en guanidina-HCL 3 M. Añadir la mezcla de perlas a las placas de ensayo a 20 j l por pocillo, agitar durante 10 minutos y dejar reposar durante 1 hora a temperatura ambiente antes de contar con un MICROBETA®. Calcular los datos sin tratar (CPM) y normalizarlos a % de inhibición utilizando el analizador de ensayos Genedata como % de inhibición = 100 -[(CPM del compuesto de ensayo - CPM mínimo medio) / (CPM máximo medio - CPM mínimo medio) x 100]. Representar los datos normalizados y crear las curvas usando GENEDATA® Condoseo como % de inhibición (eje y) frente a la concentración de compuesto logarítmico (eje x), y determinar los valores de CI50 utilizando un algoritmo de ajuste logístico no lineal de 4 parámetros. Los compuestos dentro del ámbito de la invención se pueden ensayar en el presente ensayo de manera sustancial tal como se describe anteriormente. Por ejemplo, los compuestos de los Ejemplos 1 y 20 tienen resultados bioquímicos de CI50 que demuestran la inhibición de la actividad metiltransferasa de EZH2 TS recombinante/mut en el entorno del complejo PRC2. Por ejemplo, el compuesto del Ejemplo 1 muestra una CI50 de 2,06 ± 1,90 nM (n=5) frente al 5-mero EZH2 de TS y 2,11 ± 0,58 nM (n=2) frente al 5-mero EZH2 mut. El compuesto del Ejemplo 22 muestra una CI50 de 3,29 ± 1,24 nM (n = 3) frente al 5-mero EZH2 de TS y 7,21 nM (n = 1) frente al 5-mero EZH2 mut. El compuesto del Ejemplo 38 muestra una CI50 de 0,923 ± 0,091 nM (n = 2) frente al 5-mero EZH2 de TS y 2,65 nM (n = 1) frente al 5-mero EZH2 mut.
ELISA basado en células H3K27me3
El fin de este ensayo es evaluar la capacidad de un compuesto para inhibir la actividad funcional de EZH2 en las células, a través de la medición de niveles de células H3K27 trimetiladas. Colocar en placas células Karpas-422 (EZH2 Y641N) a 5.000 células/100 jl/pocillo en placas de polilisina negras de 96 pocillos BD BIOCOAT® Cellware (BD Biosciences, N.° de Cat. 354640). Prepare placas de compuesto en una placa MICROWELL ™ de polipropileno NUNC™ de 96 pocillos (Thermo Scientific N.° de Cat. 249944) con la adición de 40 jl/pocillo de compuesto a 10 mM (que representa la concentración final inicial de 20 jM ) o 40 j l de DMSO, después, preparar diluciones en serie mediante la transferencia de 20 j l de un pocillo al siguiente. Agregue 5 j l de compuesto de ensayo a 245 jl/pocillo de medio de crecimiento en una placa MICROWELL ™ de polipropileno NUNC™ de 96 pocillos separada, y sellar 11 j l de la mezcla de compuesto/medio en las placas celulares. Colocar las placas celulares en una incubadora a 37 °C durante 48 h. Sacar las placas de la incubadora, colocar las placas a temperatura ambiente durante 15-20 minutos y hacer girar las placas a 1000 rpm durante 5 minutos. Fijar las células con 30 j l de paraformaldehído al 16 % durante 15 minutos a TA. Retirar el paraformaldehído y permeabilizar las células con 100 jl/pocillo de PBS menos calcio o magnesio (-/-) que contenga TRITON® X-100 al 0,1 % durante 20 minutos a TA. Lavar las placas con PBS(-/-) (2x), seguido de incubación durante 2 horas a TA de 50 jl/pocillo de solución de anticuerpo primario (Diagenode anti-H3K27me3 MAb-181-050; dilución a 1:3000 en PBS más calcio y magnesio (+/+) que contiene BSA al 1 %). Lavar las placas con PBS-/-, (3x) seguido de incubación con 50 jl/pocillo de solución de anticuerpo secundario (Invitrogen anti-IgG de ratón en cabra Alexa 488, N.° de Cat. A11001; dilución a 1:1000 en PBS /+) durante 1 hora a TA en la oscuridad. Lavar las placas con PBS-/-, (3x), seguido de la adición de 50 jl/pocillo de 5 jg/m l de solución de tinción de yoduro de propidio (Invitrogen; N.° de Cat. p3566) en PBS que contiene 200 jg/m l de RNasa (Invitrogen; N.° de Cat. 12091021). Cubrir las placas con sellos de placa negra y escanear en el citómetro de escaneo láser ACUMEN® (TTP Lab Tech) con Ex 488nm/Em 505 nm-530 nm (señal H3K27m3) y LP655nm (señal nuclear celular). Los compuestos dentro del ámbito de la invención se pueden ensayar en el presente ensayo de manera sustancial tal como se describe anteriormente. Por ejemplo, el compuesto del ejemplo 1 muestra una CI50 en células H3K27me3 de 19,2 ± 1,55 nM (n = 2) o de 23,6 ± 20,5 nM (n=6) en MDA MB-231 y Karpas-422, respectivamente. El compuesto del Ejemplo 22 muestra una CI50 en células H3K27me3 de <1 nM (n=1) o 0,0148 ± 0,0147 nM (n = 6) en MDA MB-231 y Karpas-422, respectivamente. El compuesto del Ejemplo 38 muestra una CI50 en células H3K27me3 de 0,00973 ± 0,00956 nM (n=4) en Karpas-422.
Ensayo de proliferación de Karpas-422
La finalidad de este ensayo es demostrar la capacidad de los compuestos de ensayo para inhibir el crecimiento de las células tumorales in vitro.
Colocar en placas células Karpas-422 a una densidad de 5000 células/100 jl/pocillo en 96 pocillos de una placa negra de polilisina de 96 pocillos BD BIOCOAT® Cellware (BD Biosciences, N.° de Cat. 354640). Añadir 40 j l de compuesto de ensayo a 10 mM (que representa la concentración final inicial de 20 jM ) o añadir DMSO al 100 % a una placa MICROWELL™ de polipropileno de 96 pocilios NUNC™ (Thermo Scientific N.° de Cat. 249944). Realizar diluciones en serie a través de la transferencia de 20 j l de un pocillo al siguiente. Añadir 5 j l de compuesto a 245 jl/pocillo de medio de crecimiento en una placa separada MICROWELL™ de polipropileno de 96 pocillos NUNC™, y sellar 11 j l de la mezcla de compuesto/medio en las placas celulares. Incubar las placas celulares a 37 °C durante 7 días. Añadir 100 jl/pocillo de reactivo Cell Titer GLO® (Promega, N.° de Cat. G7671) a las placas celulares. Agitar 2 minutos y medir la luminiscencia usando un lector de placas. Los compuestos dentro del ámbito de la invención se pueden ensayar en el presente ensayo de manera sustancial tal como se describe anteriormente. Por ejemplo, el compuesto del Ejemplo 1 muestra una CI50 de 176 ± 165 nM (n=5). El compuesto del Ejemplo 22 muestra una CI50 de 84,5 ± 42,7 nM (n=5). El compuesto del Ejemplo 38 muestra una CI50 de 10,1 ± 4,6 nM (n=4).
Estudios de xenoinjerto
La finalidad de este ensayo es evaluar la capacidad de un compuesto de ensayo para inhibir la función tumoral de EZH2 y el crecimiento tumoral mediado por EZH2 in vivo.
Llevar a cabo estudios de inhibición in vivo de la diana y de eficacia con el compuesto del Ejemplo 1 usando el modelo de xenoinjerto Karpas-422 esencialmente como se describe en McCabe y col. (2012) Nature 492:108-12, con los siguientes cambios/especificaciones: 1) Usa hidroxietilcelulosa (HEC al 1 %/ TWEEN® 80 al 0,25 %/ antiespumante al 0,05 %) en lugar de CAPTISOL® al 20 % como vehículo de formulación; 2) Administrar el compuesto por sonda oral en lugar de por inyección intraperitoneal; 3) Comenzar el tratamiento del compuesto cuando los volúmenes tumorales alcancen un intervalo de 150-200 mm3 para experimentos de eficacia y 300-350 mm3 para experimentos de inhibición de diana y; 4) Medir la inhibición de la metilación tumoral o la expresión tumoral de TNFRSF21 el día 7 en lugar del día 10.
Medición basada en ELISA de H3K27 trimetilado derivado del tumor
Para extraer con ácido histonas de tumores, colocar secciones tumorales de aproximadamente 0,5 cm por 0,25 cm o 20-30 mg de peso en matriz de lisado D 500 x 2 ml. Añadir tubos sin RNASA/DNASA con perlas para homogeneización (MP Biomedicals, N.° de Cat. 6913-500). Añadir 650 j l de tampón de lisis ácida (comprimidos de mezcla inhibidora de proteasa que contienen HCl 0,4 N (Roche; N.° de Cat. 11836153001)). Homogeneizar muestras tumorales 2-3 veces a una velocidad de 6 m/segundo durante 20 segundos en un homogeneizador FASTPREP® FP120. Poner las muestras en hielo durante 1 hora para separar. Transferir los sobrenadantes a un tubo Eppendorf y colocarlos en un rotador de tubos para lisar durante la noche a 4 °C. Centrifugar las muestras a 8000 rpm durante 10 minutos a 4 °C. Transferir los sobrenadantes a un nuevo tubo y medir la concentración de proteínas.
Añadir 150 jl/pocillo de Solución Bloqueante A de MSD (Meso Scale Discovery (MSD); concentración final del 3 %) en una placa SINGLEPLEX® de Tri-Metil-Histona H3(K27) MULTI-SPOT® (MSD; N.° de Cat: N45CA-1). Agitar a TA durante 1 hora. Lavar la placa con IX MSD Tris Wash Buffer ™ (MSD), (3x). Dispensar 0,25 jg de lisado tumoral en 25 j l de tampón de lisis ácida por pocillo por triplicado. Agitar durante la noche a 4 °C. Lavar la placa tres veces con IX MSD Tris Wash Buffer™. Añadir 25 jl/pocillo de anticuerpo de detección SULFO-TAG™ -Trimetil-Histona H3 (K27) diluido a una concentración final de 1,5 jg / j l en tampón de dilución de anticuerpos (concentraciones finales de bloqueador A de MSD 1 %; Bloqueador D-B de MSD al 0,1 % y bloqueador D-G de MSD® al 0,1 %). Agitar durante 1­ 2 h a TA. Lavar la placa tres veces con IX MSD Tris Wash Buffer. Fijar la placa con la adición de 100 jl/pocillo de formaldehído al 4 % en PBS. Agitar durante 30 minutos a TA. Lavar las placas tres veces con tampón de lavado con tris de MSD a 1 x. Añadir 150 jl/pocillo de Tampón de lectura IX de MSD® y medir la quimioelectroluminiscencia usando un instrumento generador de imágenes MSD SECTOR® 6000. Un compuesto dentro del ámbito de la invención se puede probar en este ensayo sustancialmente tal como se describe anteriormente. Por ejemplo, la administración BID en ratones de 50 mpk del compuesto del Ejemplo 1 da como resultado una inhibición del 53 % de la metilación del tumor (n=8 ratones; p<0,0001). la administración BID en ratones de 15 mpk del compuesto del Ejemplo 38 da como resultado una inhibición del 73 % de la metilación del tumor (n=8 ratones; p<0,0001).
Medición basada en PCR de la expresión de ARNm de TNFRSF21 derivado de tumor
Para aislar el ARN del tejido tumoral, colocar secciones tumorales de aproximadamente 0,5 cm por 0,25 cm o 20-30 mg de peso en matriz de lisado D 500 x 2 ml. Añadir tubos sin RNASA/DNASA con perlas para homogeneización (MP Biomedicals, REF: 6913-500). Añadir 650 j l de tampón RLT del kit RNEASY® (Qiagen; N.° de Cat. 74104). Homogeneizar las muestras de 2 a 3 veces a velocidad 6 durante 20 segundos en el homogeneizador FASTPREP® FP120. Colocar las muestras en hielo para enfriar durante 10 min. Centrifugar a 13.000 rpm durante 10 minutos a 4 °C. Colocar los sobrenadantes en un tubo QIA y aislar el ARN usando el kit RNEASY® (Qiagen; N.° de Cat. 74104).
Preparar ADNc a partir de 3 jg de ARN tumoral utilizando el kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad (Applied Biosystems; N.° de Cat. 4368813) e incubar muestras en un termociclador de PCR usando las siguientes condiciones de ciclo: 10 min a 25 °C; 2 horas a 37 °C, mantener a 4 °C. Amplificar el producto de ADNc utilizando la mezcla Thermo Scientific ABsolute Blue QPCR ROX (Applied Biosystems; N.° de Cat. AB-4139) y sondas Taqman para TNFRSF21 (Applied Biosystems; N.° de Cat. Hs01560899_ml) y el gen constitutivo GAPDH (Applied Biosystems; N.° de Cat. Hs02758991-gl) en el ciclador de PCR en tiempo real ViiA 7™ de Applied Biosystems. Calcular los valores de umbral del ciclo TNFRSF21 y normalizar a los niveles de GAPDH de su muestra respectiva. Un compuesto dentro del ámbito de la invención se puede probar en este ensayo sustancialmente tal como se describe anteriormente. Por ejemplo, la administración BID de 50 mpk del compuesto del Ejemplo 1 da como resultado un aumento de 25 veces la expresión del gen TNFRSF21 tumoral (n=8 ratones; p<0,0001). la administración BID de 15 mpk del compuesto del Ejemplo 38 da como resultado un aumento de 60 veces la expresión del gen TNFRSF21 tumoral (n=8 ratones; p<0,0001).
Tratamientos combinados con inhibidores de EZH2 y otros agentes quimioterapéuticos para el cáncer
Los siguientes párrafos proporcionan evidencia que respalda el uso de inhibidores de EZH2, incluyendo pero no exclusivo del Ej. 1 o el Ej. 38, solo y/o en combinación con quimioterapia de tratamiento habitual (SoC, del inglés Standard of Care), en el tratamiento de cánceres de ovario, gástricos, de pulmón o colorrectales que llevan combinaciones de mutaciones en componentes del complejo SWI/SNF y/o del complejo MLL y/o de la vía de PI3K. Estos incluyen, pero no son exclusivos de los cánceres de ovario que carecen de la expresión de la proteína ARID1A combinada con mutaciones en PTEN o PIK3CA y/o la expresión de la proteína constitutiva de Akt fosforilada en treonina 308 (Thr308). Además, estos incluyen pero no son exclusivos de los cánceres de ovario que carecen de la expresión de proteínas SMARCA2 y SMARCA4. Además, estos incluyen, entre otros, cánceres gástricos con mutaciones heterocigóticas de pérdida de función (LOF, del inglés Loss of function) (incluidas, entre otras, mutaciones sin sentido, de desplazamiento de marco y empalme de codificación) en ARID1A combinadas con mutaciones heterocigóticas de LOF en MLL2, y que no tienen mutaciones homocigóticas en TP53. Además, éstos incluyen pero no son exclusivos de cánceres gástricos que tienen una mutación heterocigótica de LOF (incluidas, entre otras, mutaciones sin sentido, de desplazamiento de marco y de empalme de codificación) en ARID1A combinado con una mutación en PTEN o PIK3CA y/o expresión proteica constitutiva de Akt fosforilada en Thr308, y que no tienen una mutación homocigótica en TP53. Además, estos incluyen, pero no son exclusivos de los cánceres de pulmón con mutaciones de LOF heterocigóticas en MLL3. Además, éstos incluyen, pero no son exclusivos de cánceres colorrectales con mutaciones heterocigóticas de LOF en ARID1A combinadas con mutaciones con mutaciones en PTEN o PIK3CA y/o expresión de proteínas constitutivas de Akt fosforiladas en Thr308.
Ensayar las líneas celulares de cáncer de ovario para la respuesta al Ejemplo 1 o al Ejemplo 38 en un ensayo de proliferación de 7 o de 10 días. Optimizar cada línea celular para el número de células y las pautas de división que maximice el crecimiento de la fase log en formato de 96 pocillos durante el período de 7 o 10 días. Colocar las células en 96 pocillos de una placa negra de 96 pocillos de fondo claro, recubierta con poli-D-lisina (BD BioSciences; BD BIOCOAT™ Cellware, Polilisina, N.° de Cat. 354640) el día 0 en un volumen total de 90 pl de medio de cultivo celular e incubar a 37 °C/ CO2 al 5 % durante 18-24 horas. El día 1, preparar una placa de dilución del compuesto mediante la adición de 150 pl de medio que contiene dimetilsulfóxido al 2 % (DMSO; Sigma-Aldrich N.° de Cat. D2438) a las columnas 3-12 de una placa de fondo plano transparente de 96 pocillos (placa de cultivo celular CORNING® COSTAR® N.° de Cat. 3596). Preparar reservorios de 10 mM del Ejemplo 1 o del Ejemplo 38 en DMSO al 100%, y diluir adicionalmente a una concentración de trabajo de 200 pM en medios de cultivo celular. Añadir 225 pl del Ejemplo 1 o del Ejemplo 38 a la columna 2 de la placa de dilución del compuesto y preparar diluciones en serie de 10 puntos a 1:3 del compuesto de ensayo con las columnas 3 a 12. Añadir 10 pl de compuesto diluido en serie a las placas celulares, dando un intervalo de concentración final del compuesto de ensayo de 1 nM a 20 pM y una concentración final de DMSO del 0,2 %. Al final del período de ensayo de 7 o 10 días, someter a las células al ensayo de viabilidad de células luminiscentes CELLTITER-GLO® (Promega, N.° de Cat. G7570) de la siguiente manera: 1) Descongelar el tampón CELLTITER-GLO® y equilibrar a temperatura ambiente; 2) Equilibrar el sustrato liofilizado CELLTITER-GLO® a temperatura ambiente; 3) Transferir el tampón CELLTITER-GLO® a la botella de sustrato para formar el reactivo CELLTITER-GLO®; 4) Equilibrar las placas celulares a temperatura ambiente; 5) Solo para células adherentes: retirar el medio de las placas celulares; 6) Añadir 25 pl de reactivo CELLTITER-GLO® a cada pocillo; 7) Dejar que las placas se incuben 20-30 minutos adicionales a temperatura ambiente; 8) Leer la luminiscencia utilizando el lector de microplacas de detección múltiple Perkin Elmer EnVision 2104.
Derivar los lisados de células completas de las líneas celulares de cáncer de ovario tal como se describe en Ye, X.S. y col. (1997) Methods Enzymol. 283:520-32 y medir mediante análisis por transferencia de Western la expresión de proteínas del complejo sW i/SNF, complejo MLL y componentes de la vía PI3K, incluido ARID1A, SMARCA2, SMARCA4 (usando SDS-PAGE al 3-8 %) y Akt fosforilado en Thr308 (usando SDS-PAGE al 4-20 %), utilizando los siguientes anticuerpos: anti-ARIDIA (Bethyl, N.° de Cat. A301-040A); anti-SMARCA2/BRM (Abcam, N.° de Cat. ab15597); anti-BRG 1/ SMARCA4 (Bethyl, N.° de Cat. A300-813A) y anti-fosfo-Akt (Thr308) Anticuerpo D25E6 (Cell Signaling, N.° de Cat. 13038). Utilizar los anticuerpos anti-Akt (pan) 40D4, (Cell Signaling, N.° de Cat. 2920) y anti-pactina AC-74 (Sigma, N.° de Cat. A2228) para medir los niveles totales de Akt y actina como controles para la carga de proteínas.
La Tabla 1 resume el efecto del Ejemplo 38 en un panel de líneas celulares de ovario y muestra sensibilidad a los inhibidores de EZH2 en líneas celulares de cáncer de ovario que son AR1D1A negativas y fosforiladas en Thr308 en Akt, o que carecen de expresión en SMARCA2 y SMARCA4.
Tabla 1. Efecto del Ejemplo 38 sobre la proliferación de 9 líneas celulares de cáncer de ovario, así como sus perfiles de expresión de proteínas de componentes de vía PI3K y de SWI/SNF.
Línea celular de | CI50 de proliferación del | Expresión a nivel de proteína
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Se ensaya el efecto del Ejemplo 38 en comparación con el cáncer de ovario con SoC de carboplatino más paclitaxel in vivo utilizando un modelo de xenoinjerto A2780. Implantar 2 millones de células A2780 en MATRIGEL® al 50 % por vía subcutánea en el flanco trasero derecho de 10 ratones atímicos desnudos (Envigo RMS, Inc., Indianápolis, IN) por grupo. Comenzar el tratamiento cuando los volúmenes de los tumores alcancen 100-150 mm.3 Pretratar a los animales durante 5 días con el Ejemplo 38 seguido de la administración conjunta del Ejemplo 38 y SoC durante al menos 23 días adicionales o hasta que los volúmenes tumorales del vehículo alcancen 2000 mm3. Formular el Ejemplo 38 en HEC al 1 %/ TWEEN® 80 al 0,25 %/ Antiespumante al 0,05 % y administrar a 50 mpk dos veces al día (BID) por sonda oral (p.o.). Formular carboplatino (APP Pharmaceuticals NDC 63323-172-60) en solución salina tamponada con fosfato (PBS) y administrar a 60 mpk cada 2 semanas (Q14D) mediante inyección intraperitoneal (i.p.). Formular paclitaxel (Hospira, Inc NDC 61703-342-50) en PBS y administrar a 10 mpk Q14D por inyección intravenosa (IV). Medir la inhibición del crecimiento tumoral como AT/C (%), calculada como la media de un animal individual [(volumen tumoral en el día 28 de tratamiento con el Ejemplo 38 menos el volumen tumoral en el día 0), dividido entre (volumen tumoral en el día 28 del tratamiento con vehículo menos el volumen tumoral en el día 0)], multiplicado por 100. La Tabla 2 resume los resultados de los efectos del Ejemplo 38 y el del cáncer de ovario con SoC sobre el crecimiento tumoral de A2780 en el día 28 de tratamiento. En contraste con el débil efecto del SoC solo en el crecimiento tumoral A2780, se observa una inhibición significativa del crecimiento tumoral A2780 después del tratamiento con 50 mpk BID p.o. Ejemplo 38 solo, y después del tratamiento con 50 mpk QD p.o. Ejemplo 38 en combinación con SoC.
Tabla 2: Efecto del Ejemplo 38, SoC con carboplatino más paclitaxel en ovario, y el Ejemplo 38 en combinación con SoC en el crecimiento tumoral A2780, en el día de dosificación 28.
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START Discovery (http://startdiscovery.net/) tiene una plataforma de modelos tumorales derivados de pacientes. Seleccionar dos modelos derivados de pacientes ováricos de START Discovery basados en la presencia o ausencia de pérdida de función del componente SWI/SNF y mutaciones de la vía PI3K, y probar en START Discovery el efecto del Ejemplo 1 sobre el crecimiento tumoral. Tratar 2 grupos de 2 ratones cada uno durante 28 días. Tratar el Grupo 1 con compuestos de tratamiento habitual (SoC) de ovario de carboplatino (formulado en NaCl al 0,9 % y administrado a 60 mpk Q14D i.p.) y paclitaxel (formulado en NaCl al 0,9 % y administrado a 10 mpk Q14D IV). Pretratar el grupo 2 con el Ejemplo 1 (formulado en HEC al 1 %/ TWEEN® 80 al 0,25 %/ Antiespumante al 0,05 % y administrado a 50 mpk BID p.o.) durante 5 días, seguido de la administración conjunta con el Ejemplo 1 y SoC durante 23 días o hasta que los volúmenes tumorales alcancen 2000 mm3. Controlar los modelos que muestran estasis tumoral o regresión con tratamiento combinado en el día 28 después del cese de la dosis hasta que se observe un nuevo crecimiento tumoral. Compare el % de cambio promedio en el volumen del tumor con el volumen del tumor inicial en el día 0, y calcularlo como la media del animal individual [(volumen del tumor en el día de tratamiento x menos volumen del tumor en el día 0), dividido entre el volumen del tumor en el día 0], multiplicado por 100. La Tabla 3 resume el efecto del tratamiento del Ejemplo 1 sobre el crecimiento de los dos modelos de tumor de ovario derivados de pacientes. ST884 - un modelo de tumor ovárico derivado de una paciente que muestra una inhibición significativa del crecimiento tumoral con el tratamiento del Ejemplo 1 presenta una mutación homocigótica en ARID1A combinada con una mutación en PIK3CA. Por el contrario, ST416 - un modelo de tumor ovárico derivado de una paciente que es mutante heterocigótica ARID1A y sin mutación en PIK3CA o PTEN - no muestra inhibición del crecimiento tumoral con el tratamiento del Ejemplo 1.
Tabla 3: Efecto del tratamiento habitual (SoC) con carboplatino y paclitaxel de cáncer de ovario, o la combinación del Ejemplo 1 más SoC, sobre el crecimiento de 2 modelos tumorales derivados de pacientes de ovario.
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Oncotest (http://www.oncotest.com/) también tiene una gran colección establecida de explantes de tumores de pacientes trasplantados directamente de pacientes y pasados por vía subcutánea en ratones desnudos como PDX. Seleccionar 9 PDX gástricos de Oncotest en función de la presencia de mutaciones del complejo SWI/SNF y/o MLL de pérdida de función (LOF), y ensayar en Oncotest el efecto del Ejemplo 1 o el vehículo sobre el crecimiento tumoral. Para los modelos GXA-3011, ensayar 5 animales por grupo y tratar durante 28 días con vehículo (HEC al 1 %/ TWEEN® 80 al 0,25 %/ Antiespumante al 0,05 %) o con el Ejemplo 1 a 50 mpk BID p.o. Controlar los modelos que muestren estasis tumoral o regresión en el día 28 después de la interrupción de la dosis hasta que se observe un nuevo crecimiento tumoral. Calcular AT/C (%) como la media de un animal individual [(volumen tumoral en el día de tratamiento > 28 con el Ejemplo 1 menos el volumen tumoral en el día 0), dividido entre (volumen tumoral en el día de tratamiento > 28 con vehículo menos el volumen tumoral en el día 0)], multiplicado por 100.
Para otros PDX gástricos de Oncotest, tratar 2 grupos de 2 ratones cada uno durante 28 días. Tratar el grupo 1 con compuestos de tratamiento habitual (SoC) gástrico de oxaliplatino (formulado en glucosa al 5 % y administrado a 8 mpk Q14D i.p.) y paclitaxel (formulado en NaCl al 0,9 % y administrado a 10 mpk Q14D IV). Pretratar los animales del grupo 2 con el Ejemplo 1 (formulado en HEC al 1 %/ TWEEN® 80 al 0,25 %/ Antiespumante al 0,05 % y administrado a 50 mpk BID p.o.) durante 5 días, seguido de la administración conjunta con el Ejemplo 1 y SoC durante 23 días o hasta que los volúmenes tumorales alcancen 2000 mm3. Calcular el % de cambio promedio en el volumen del tumor como la media del animal individual [(volumen del tumor en el día de tratamiento > 28 menos el volumen del tumor en el día 0), dividido entre el volumen del tumor en el día 0], multiplicado por 100.
La Tabla 4 resume los resultados de los efectos del tratamiento del Ejemplo 1 sobre el crecimiento de los modelos de cáncer gástrico derivados de pacientes (carcinomas o adenocarcinomas), y muestra que los modelos cuyo crecimiento está impedido con el tratamiento del Ejemplo 1 tienen dos mutaciones: 1) al menos una mutación heterocigótica de LOF en ARID1A y 2) una LOF heterocigótica en MLL2 (que se encuentra en los PDX GXA-3052, GXA-3079, GXA-3083) y/o una mutación que afecta a los componentes de la vía PI3K (incluidos, entre otros, PIK3CA y PTEN; encontrada en los PDX GXA-3002 y GXA-3005). Los modelos cuyo crecimiento no se inhibe después del tratamiento del Ejemplo 1 tienen una mutación homocigótica en p53, independientemente del estado de la mutación de LOF en ARID1A o MLL2 (como en PDX GXA 3011), e independientemente del estado de la mutación de los componentes de la vía PI3K (como en PDX GXA-3069).
Tabla 4: Efecto de SoC de oxaliplatino más paclitaxel, o la combinación del Ejemplo 1 más SoC, sobre el crecimiento de modelos de cáncer gástrico derivados de pacientes.
Figure imgf000087_0002
continuación
Figure imgf000087_0003
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De forma similar, el crecimiento del modelo de tumor pulmonar derivado del paciente LXFE 937 que lleva dos mutaciones heterocigóticas MLL3 de pérdida de función, se inhibe significativamente después del tratamiento con el Ejemplo 1 en combinación con el SoC de gemcitabina para cáncer de pulmón (formulada en NaCl al 0,9% y administrada una vez por semana a 120 mpk i.p.) más cisplatino (formulado en NaCl al 0,9 % y administrada por vía subcutánea a 3,2 mpk una vez por semana). Los datos se muestran en la Tabla 5.
Tabla 5: Efecto del tratamiento habitual (SoC) con gemcitabina más cisplatino, o la combinación del Ejemplo 1 más SoC, sobre el crecimiento de un modelo de carcinoma de células escamosas de NSCLC derivado del pulmón de un paciente
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De forma similar, el tumor colorrectal derivado del paciente CXF 1034, que no expresa la proteína ARID1A y tiene mutaciones en PIK3CA y PTEN, inhibe significativamente el crecimiento cuando se prueba con el Ejemplo 1 con la combinación de SoC de trihidrato de clorhidrato de irinotecán (formulado en NaCl al 0,9% y administrado a 20 mpk Q7D IV) más oxaliplatino (formulado en glucosa al 5 % y administrado a 8 mpk Q14D i.p.). Los datos se muestran en la Tabla 6.
Tabla 6: Efecto del tratamiento habitual (SoC) con irinotecán más oxaliplatino, o la combinación del Ejemplo 1 más SoC, sobre el crecimiento de un modelo de carcinoma colorrectal derivado del paciente.
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En conclusión, los resultados descritos anteriormente proporcionan evidencia que respalda el uso de inhibidores de EZH2, incluidos, entre otros, el Ejemplo 1 o el Ejemplo 38, solo y/o en combinación con quimioterapia de tratamiento habitual (SoC, del inglés Standard of Care), en el tratamiento de cánceres de ovario, gástricos, de pulmón o colorrectales que llevan combinaciones de mutaciones en componentes del complejo SWI/SNF y/o del complejo MLL y/o de la vía de PI3K.
Los compuestos de la presente invención se formulan preferentemente como composiciones farmacéuticas administradas por una diversidad de vías. Más preferentemente, tales composiciones son para administración oral. Dichas composiciones farmacéuticas y procedimientos para preparar algunas son bien conocidas en la técnica. Véanse, por ejemplo, REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (D. Troy, y col., eds., 21a ed., Lippincott Williams y Wilkins, 2005).
Las dosis para los compuestos de SoC en pacientes pueden administrarse según la dosis aprobada o pueden variar según la recomendación de un médico. Los ejemplos de dosificación para los compuestos de SoC pueden ser, por ejemplo, de la siguiente manera: Para el cáncer de ovario, las dosis de carboplatino más paclitaxel pueden ser de 175 mg/m2 IV cada 3 semanas de paclitaxel seguido de 175 mg/m2 IV cada 3 semanas de carboplatino. Para cánceres gástricos, las dosis de paclitaxel más oxaliplatino pueden ser de 50 mg/m2 IV semanal de paclitaxel y AUC de 2 mg/ml semanalmente de oxaliplatino. Para el cáncer de pulmón, las dosis de gemcitabina más cisplatino pueden ser de 1250 mg/m2 IV cada 3 semanas de gemcitabina más 75 mg/m2 IV cada 3 semanas de cisplatino. Para los cánceres colorrectales, las dosis de irinotecán más oxaliplatino pueden ser de 125 mg/m2 IV semanal o de 350 mg/m2 IV cada 3 semanas de irinotecán y de 85 mg/m2 IV cada 2 semanas de oxaliplatino. (La referencia para las dosis de tratamiento con SoC también se puede encontrar en http://www.cancertherapyadvisor.com/gastrointestinal-cancers/gastriccancer-treatment-regimens/article/218159/).
Los compuestos de EZH2 la presente invención generalmente son eficaces en un amplio intervalo de dosificación. Por ejemplo, las dosis por día pueden estar dentro del intervalo diario de hasta 5000 mg/día, preferentemente aproximadamente 100-2000 mg/día, administrado en una o más dosis. Sin embargo, se entenderá que la cantidad del compuesto administrada realmente será determinada por un médico, según las circunstancias relevantes, incluyendo la afección que se va a tratar, la vía de administración escogida, el compuesto o compuestos reales administrados, la edad, peso y respuesta del paciente individual y la gravedad de los síntomas del paciente.

Claims (24)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula:
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en la que:
X es -CH2- o -CH2-CH2-;
Y' es -NR4R5, -CH(CH3)-cidohexil-4-il-N-metil-N-metoxietilo o -CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, 2-propoxi, metoximetilo, metoxietoxi, ciclopropiloxi, cidopropilmetoxi, pirazolilo, metilpirazolilo, triazolilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranoiloxi o morfolinilo;
R4 es ciclohex-4-ilo sustituido con N-metil-N-metoxietilamino, N-metil-N-ciclopropilamino o azetidinilo en el que el azetidin-1-ilo está sustituido con metoxi, etoxi, metoxietoxi, ciclopropiloxi o pirazolilo;
R5 es metilo o etilo y
R6 es metilo o cloro o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. El compuesto o una sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que X es -CH2-.
3. El compuesto o una sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que X es -CH2-CH2-.
4. El compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que Y' es -CH(CH3)-ciclohexil-4-il-N-metil-N-metoxietilo o -CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo, en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, 2-propoxi, metoximetilo, metoxietoxi, ciclopropiloxi, ciclopropilmetoxi, pirazolilo, metilpirazolilo, triazolilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuraniloxi o morfolinilo.
5. El compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que Y' es -CH(CH3)-ciclohex-4-il-azetidin-1-ilo, en el que el azetidin-1-ilo está opcionalmente sustituido con metoxi, 2-propoxi, metoximetilo, metoxietoxi, ciclopropiloxi, ciclopropilmetoxi, pirazolilo, metilpirazolilo, triazolilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuraniloxi o morfolinilo.
6. El compuesto o una sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que R6 es metilo.
7. El compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que Y' es -NR4R5.
8. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la 3, que es
Figure imgf000090_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
9. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 8 que es 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-{(1R)-1-[4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]etil}-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
10. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 9 que es 5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-{(1R)-1-[trans-4-(3-metoxiazetidin-1-il)ciclohexil]etil}-3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tieno[3,2-c]azepin-4-ona o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
11. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10 y uno o más excipientes, vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
12. El compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para su uso en terapia.
13. El compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para su uso en el tratamiento de cáncer.
14. El compuesto o una sal del mismo para su uso de acuerdo con la reivindicación 13, en el que el cáncer se selecciona entre el grupo que consiste en linfomas, tumores rabdoides, tumores que carecen o son deficientes en uno o más componentes del complejo SWI/SNF, complejos MLLy ruta PI3K constitutivamente activa, sarcomas, mieloma múltiple, melanoma, cáncer gastrointestinal, cáncer colorrectal, cáncer de pulmón, cáncer de riñón, cáncer de mama, cáncer de ovario y cáncer de próstata.
15. El compuesto o una sal del mismo para su uso de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el cáncer es linfoma difuso de linfocitos B grandes o linfoma folicular.
16. El compuesto o una sal del mismo para su uso de acuerdo con la reivindicación 14 o la 15, en el que el cáncer es linfoma difuso de linfocitos B grandes.
17. El compuesto o una sal del mismo para su uso de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el cáncer es un tumor rabdoide que carece de SNF5.
18. El compuesto o una sal del mismo para su uso de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el cáncer es cáncer gástrico.
19. El compuesto o una sal del mismo para su uso de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el cáncer es cáncer ovárico.
20. El compuesto o una sal del mismo para su uso de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el cáncer es mieloma múltiple.
21. Un compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para su uso en combinación simultánea, por separado o secuencial con carboplatino y paclitaxel en el tratamiento de cáncer ovárico.
22. Un compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para su uso en combinación simultánea, por separado o secuencial con oxaliplatino y paclitaxel en el tratamiento de cáncer gástrico.
23. Un compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para su uso en combinación simultánea, por separado o secuencial con gemcitabina y cisplatino en el tratamiento de cáncer de pulmón.
24. Un compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para su uso en combinación simultánea, por separado o secuencial con irinotecán y oxaliplatino en el tratamiento de cáncer colorrectal.
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