ES2608329T3 - Imidazo[1,2-b][1,2,4]triazinas como inhibidores de c-Met - Google Patents

Abstract

Un compuesto que se selecciona entre: 2-fluoro-N-[(2R)-2-hidroxipropil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida; y 2-cloro-N-[(1S)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2- il]benzamida; y sales farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los mencionados.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

DESCRIPCION

Imidazo[1,2-b][1,2,4]triazinas como inhibidores de c-Met Solicitud relacionada Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a imidazo[1,2-b][1,2,4]triazinas que son inhibidores de c-Met y son utiles en el tratamiento de enfermedades asociadas a c-Met incluyendo el cancer.

Antecedentes de la invencion

Las protelnas cinasas (PK, del ingles protein kinases) son un grupo de enzimas que regulan diversos procesos biologicos importantes incluyendo el crecimiento, la supervivencia y la diferenciacion celulares, la formacion y la morfogenia de organos, la neovascularizacion, la reparacion y la regeneracion tisulares, entre otros. Las protelnas cinasas ejercen sus funciones fisiologicas a traves de la catalisis de la fosforilacion de protelnas (o sustratos) y modulando de este modo las actividades celulares de los sustratos en diversos contextos biologicos. Ademas de las funciones en tejidos/organos normales, muchas protelnas cinasas tambien desempenan funciones mas especializadas en una gran cantidad de enfermedades humanas incluyendo el cancer. Un subconjunto de protelnas cinasas (tambien denominado protelna cinasas oncogenicas), cuando se desregula, puede causar la formacion y el crecimiento de tumores y puede contribuir adicionalmente al mantenimiento y la progresion del tumor (Blume-Jensen P et al., Nature 2001, 411(6835):355-365). Hasta el momento, las protelnas cinasas oncogenicas representan uno de los grupos mas grandes y mas atractivos de protelnas diana para la intervencion en el cancer y el desarrollo de farmacos.

c-Met, un protooncogen, es un miembro de una subfamilia distinta de tirosina cinasas receptoras heterodimericas que incluye Met, Ron y Sea (Birchmeier, C. et al., Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2003, 4(12):915-925; Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26). El unico ligando de alta afinidad para c-Met es el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF, del ingles hepatocyte growth factor), tambien conocido como factor de dispersion (SF, del ingles scatter factor). La union del HGF a c-Met induce la activacion del receptor a traves de la autofosforilacion dando como resultado un aumento de la senalizacion dependiente del receptor. Tanto c-Met como el HGF se expresan ampliamente en una diversidad de organos, pero su expresion normalmente esta confinada a las celulas de origen epitelial y mesenquimal, respectivamente. Las funciones biologicas de c-Met (o via de senalizacion de c-Met) en tejidos normales y en tumores malignos humanos tales como el cancer se han documentado bien (Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26; Corso, S. et al., Trends in Mol. Med. 2005, 11(6):284-292).

HGF y c-Met son necesarios, cada uno, para el desarrollo normal de los mamlferos y las anormalidades notificadas tanto en ratones con HGF anulado como en ratones con c-Met anulado, son coherentes con la proximidad de defectos de expresion embrionaria y de transicion epitelio-mesenquimatosa durante la morfogenia de organos (Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26). Coherente con estos hallazgos, la transduccion de la senalizacion y los efectos biologicos posteriores de la via HGF/c-Met han demostrado ser importante para la interaccion epitelio-mesenquimatosa y la regulation de la migration celular, la invasion, la proliferation y la supervivencia celulares, la angiogenesis, la morfogenia y la organization de las estructuras tubulares tridimensionales (por ejemplo, las celulas tubulares renales, la formacion de glandulas) durante el desarrollo. Las consecuencias especlficas de la activacion de la via c-Met en una celula/tejido dado son altamente dependientes del contexto.

La via c-Met desregulada desempena papeles importantes y a veces causativos (en el caso de alteraciones geneticas) en la formacion, el crecimiento, el mantenimiento y la progresion tumorales (Birchmeier, C. et al., Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2003, 4(12):915-925; Boccaccio, C. et al., Nat. Rev. Cancer 2006, 6(8):637-645; Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26. HGF y/o c-Met se sobreexpresan en porciones significativas de la mayorla de los canceres humanos y con frecuencia se asocian a malos resultados cllnicos tales como una enfermedad mas agresiva, la progresion de la enfermedad, la metastasis tumoral y la el acortamiento de la supervivencia del paciente. Ademas, los pacientes con niveles altos de protelnas HGF/c-Met son mas resistentes a la quimioterapia y la radioterapia. Ademas de la expresion anormal de HGF/c-Met, el receptor c-Met tambien puede activarse en los pacientes con cancer a traves de mutaciones geneticas (tanto de la estirpe germinal como somaticas) y la amplification genica. Aunque la amplification genica y las mutaciones son las alteraciones geneticas mas comunes que se han reportado en pacientes, el receptor tambien puede activarse por deleciones, truncamientos, reordenamiento de genes, as! como por el procesamiento anormal del receptor y mecanismos reguladores negativos defectuosos.

Los diversos canceres en los que c-Met esta implicada incluyen, pero se limitan a: carcinomas (por ejemplo, de vejiga, de mama, del cuello uterino, colangiocarcinoma, colorrectal, esofagico, gastrico, de cabeza y cuello, renal, hepatico, pulmonar, nasofarlngeo, ovarico, pancreatico, prostatico, tiroideo); sarcomas musculoesqueleticos (por ejemplo, osteosarcaoma, sarcoma sinovial, rabdomiosarcoma); sarcomas de tejidos blandos (por ejemplo,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

HFM/fibrosarcoma, leiomiosarcoma, sarcoma de Kaposi); tumores malignos hematopoyeticos (por ejemplo, mieloma multiple, linfomas, leucemia de linfocitos T en adultos, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide cronica); y otras neoplasias (por ejemplo, glioblastomas, astrocitomas, melanoma, mesotelioma y tumor de Wilm (
www.vai.org/met/; Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26).

La idea de que la via c-Met activada contribuye a la formacion y progresion tumorales y podrla ser una buena diana para la intervencion eficaz del cancer se ha consolidado aun mas por numerosos estudios precllnicos (Birchmeier, C. et al., Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2003, 4(12):915-925; Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26; Corso, S. et al., Trends in Mol. Med. 2005, 11 (6): 284-292). Por ejemplo, los estudios demostraron que el gen de fusion tpr- met, la sobreexpresion de c-met y las mutaciones de c-Met activada provocaron, todos, la transformacion oncogenica de diversas estirpes celulares modelo y dieron como resultado la formacion de tumores y la metastasis en ratones. Mas importante aun, se han demostrado actividades antitumorales (a veces la regresion del tumor) y antimetastasicas significativas in vitro e in vivo con agentes que alteran y/o bloquean especlficamente la senalizacion HGF/c-Met. Esos agentes incluyen anticuerpos anti-HGF y anti-c-Met, antagonistas de peptidos de HGF, receptor de c-Met senuelo, antagonistas de peptido c-Met, mutaciones de c-Met negativas dominantes, oligonucleotidos y ribozimas antisentido especlficos de c-Met, e inhibidores selectivos de la cinasa c-Met de molecula pequena (Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26).

Ademas del papel establecido en el cancer, la senalizacion HGF/c-Met anormal tambien esta implicada en la aterosclerosis, la fibrosis pulmonar, la fibrosis y la regeneracion renales, las enfermedades hepaticas, los trastornos alergicos, los trastornos inflamatorios y autoinmunes, las enfermedades cerebrovasculares, las enfermedades cardiovasculares, las afecciones asociadas al trasplante de organos (Ma, H. et al., Atherosclerosis. 2002, 164(1):79- 87; Crestani, B. et al., Lab. Invest. 2002, 82(8):1015-1022; Sequra-Flores, A. A. et al., Rev. Gastroenterol. Mex. 2004, 69(4)243-250; Morishita, R. et al., Curr. Gene Ther. 2004, 4(2)199-206; Morishita, R. et al., J. Endocr. 2002, 49(3)273-284; Liu, Y., Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 2002, 11(1):23-30; Matsumoto, K. et al., Kidney Int. 2001, 59(6):2023-2038; Balkovetz, D. F. et al., Int. Rev. Cytol. 1999, 186:225-250; Miyazawa, T. et al., J. Cereb. Blood Flow Metab. 1998, 18(4)345-348; Koch, A. E. et al., Arthritis Rheum. 1996, 39(9):1566-1575; Futamatsu, H. et al., Circ. Res. 2005, 96(8)823-830; Eguchi, S. et al., Clin. Trasplant. 1999, 13(6)536-544).

Se necesitan continuamente formas nuevas o mejoradas de agentes existentes que inhiban cinasas tales como c- Met para desarrollar productos farmaceuticos mas eficaces para tratar el cancer y otras enfermedades. Los compuestos y sales que se describen en el presente documento se refieren a estas necesidades y otros fines. 39(9):1566-1575; Futamatsu, H. et al., Circ. Res. 2005, 96(8)823-830; Eguchi, S. et al., Clin. Trasplant. 1999, 13(6)536-544).

El documento WO2008/064157 describe imidazo[1,2-b][1,2,4]triazinas y imidazo[1,2-a]pirimidinas que son inhibidores de cinasas tales como c-Met.

Se necesitan continuamente formas nuevas o mejoradas de agentes existentes que inhiban cinasas tales como c- Met para desarrollar productos farmaceuticos mas eficaces para tratar el cancer y otras enfermedades. Los compuestos y sales que se describen en el presente documento se refieren a estas necesidades y otros fines.

Sumario de la invencion

La presente invencion proporciona, entre otros, los siguientes compuestos que son inhibidores de c-Met:

2-fluoro-N-[(2R)-2-hidroxipropil-(4-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida (Formula I);

2-cloro-N-[(1S)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etil-(4-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2- il]benzamida (Formula III);

La presente invencion proporciona adicionalmente una sal farmaceuticamente aceptable de uno cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente.

La presente invencion proporciona adicionalmente un metodo in vitro de inhibicion de la actividad proliferativa de una celula que comprende poner en contacto la celula con un compuesto o sal de la invencion.

La presente invencion proporciona adicionalmente un compuesto para su uso en un metodo de inhibicion de la metastasis tumoral en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto o sal de la invencion.

La presente invencion proporciona adicionalmente un compuesto para su uso en un metodo de tratamiento de una enfermedad en un paciente, en el que la enfermedad esta asociada a la desregulacion de la via de senalizacion HGF/c-MET, que comprende administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto o sal de la invencion.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

La presente invention proportions adicionalmente un compuesto para su uso en un metodo de tratamiento del cancer en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto o sal de la invention.

La presente invention proporciona adicionalmente un compuesto de la invention o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en la inhibition del crecimiento tumoral.

La presente invention proporciona adicionalmente un compuesto de la invention o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en la inhibition de la metastasis tumoral.

La presente invention proporciona adicionalmente un compuesto de la invention o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad asociada a la desregulacion de la via de senalizacion HGF/c-MET.

La presente invention proporciona adicionalmente un compuesto de la invention o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de un cancer.

Description detallada

La presente invention proporciona, entre otros, los siguientes compuestos que son inhibidores de c-Met:

2-fluoro-N-[(2R)-2-hidroxipropil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida (Formula I); 2-cloro-N-[(1s)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2- il]benzamida (Formula III).

imagen1

ocupan dos o mas posiciones de un sistema heterocfclico, por ejemplo, 1H- y 3H-imidazol, 1H-, 2H- y 4H- 1,2,4- triazol, 1H- y 2H- isoindol, y 1H- y 2H-pirazol. Las formas tautomericas pueden estar en equilibrio o bloqueadas estericamente en una forma mediante una sustitucion apropiada.

Los compuestos de la invention tambien incluyen todos los isotopos de atomos que aparecen en los intermedios o compuestos finales. Los isotopos incluyen aquellos atomos que tienen el mismo numero atomico pero diferentes numeros masicos. Por ejemplo, los isotopos de hidrogeno incluyen tritio y deuterio.

En algunas realizaciones, los compuestos de la invention, o sus sales, se afslan sustancialmente. Por "aislado sustancialmente" significa que el compuesto o sal esta, al menos parcial o sustancialmente, separado del entorno en el que se formo o detecto. La separation parcial puede incluir, por ejemplo, una composition enriquecida en el compuesto de la invention. La separation sustancial puede incluir composiciones que contienen al menos

aproximadamente el 50 %, al menos aproximadamente el 60 %, al menos aproximadamente el 70 %, al menos

aproximadamente el 80 %, al menos aproximadamente el 90 %, al menos aproximadamente el 95 %, al menos

aproximadamente el 97 %, o al menos aproximadamente el 99 % en peso del compuesto de la invention, o sal del

mismo.

La presente invention tambien incluye sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos descritos en el presente documento. Como se usa en el presente documento, "sales farmaceuticamente aceptables" se refiere a derivados de los compuestos desvelados, en los que el compuesto precursor se modifica convirtiendo un resto de acido o base existente en su forma de sal. Los ejemplos de sales farmaceuticamente aceptables incluyen, pero sin

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

limitacion, sales de acidos minerales u organicos de residuos basicos, tales como aminas; sales alcalinos u organicas de residuos acidos, tales como acido carboxilicos; y similares. Las sales farmaceuticamente aceptables de la presente invencion incluyen las sales no toxicas convencionales del precursor formadas, por ejemplo, a partir de acidos inorganicos u organicos no toxicos. Las sales farmaceuticamente aceptables de la presente invencion pueden sintetizarse a partir del precursor que contiene un resto basico o acido mediante metodos quimicos convencionales. Generalmente, dichas sales pueden prepararse haciendo reaccionar las formas de acido o base libre de estos compuestos con una cantidad estequiometrica de la base o acido apropiado en agua o en un disolvente organico, o en una mezcla de los dos; generalmente, se prefieren medios no acuosos como eter, acetato de etilo, etanol, isopropanol, o acetonitrilo. Se encuentran listas de sales adecuadas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, pag. 1418 y Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1 977.

La frase "farmaceuticamente aceptable" se emplea en el presente documento para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificacion que son, dentro del alcance del criterio medico, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad, irritacion, respuesta alergica u otro problema o complication excesivos, coherentes con una relation beneficio/riesgo razonable.

Usos

En el presente documento se describe un compuesto de la invencion para su uso en terapia.

En el presente documento tambien se describe el uso de un compuesto de la invencion para la preparation de un medicamento para el tratamiento del cancer.

Los compuestos de la presente invencion pueden actuar como inhibidores de c-Met. El tratamiento de una celula (in vitro o in vivo) que expresa c-Met con un compuesto de la invencion puede dar como resultado la inhibicion de la via de serialization ligando/cinasa y la inhibition de los eventos corriente abajo relacionadas con la via de serialization, tal como la proliferation celular y el aumento de la motilidad celular. Por ejemplo, los compuestos de la invencion pueden bloquear y/o alterar los procesos bioquimicos y biologicos que son resultado de la activation de la via c-Met, incluyendo, pero no limitados a, la activacion (por ejemplo, la fosforilacion de c-Met) y la senalizacion (la activacion y el reclutamiento de sustratos celulares, tales como Gab1, Grb2, Shc y c-Cbl y la activacion posterior de varios transductores de senales incluyendo PI-3 cinasa, PLC-y, STAT, ERK1/2 y FAK) de la cinasa c-Met, la proliferacion y la supervivencia celulares, la motilidad celular, la migration y la invasion, la metastasis, la angiogenesis y similares. Por tanto, en el presente documento se describen metodos de inhibicion de una via de senalizacion cinasa/ligando tal como la via de senalizacion HGF/cinasa c-Met en una celula poniendo en contacto la celula con un compuesto de la invencion. En el presente documento tambien se describen metodos de inhibicion de la actividad proliferativa de una celula o de inhibicion de la motilidad celular poniendo en contacto la celula con un compuesto de la invencion.

En el presente documento se describen metodos de tratamiento de enfermedades asociadas a una via de senalizacion de cinasa c-Met desregulada, incluyendo la actividad anormal y/o la sobreexpresion de la c-Met, en un individuo (por ejemplo, un paciente) mediante la administration al individuo que necesita dicho tratamiento de una cantidad o dosis terapeuticamente eficaz de un compuesto de la presente invencion o una composition farmaceutica del mismo. En algunas realizaciones, la cinasa desregulada se sobreexpresa en el tejido enfermo del paciente. En algunas realizaciones, la cinasa desregulada es anormalmente activa en el tejido enfermo del paciente. La desregulacion de c-Met y la via de senalizacion de HGF/c-Met pretenden incluir la activacion de la enzima a traves de diversos mecanismos incluyendo, pero no limitados a, la activacion autocrina y paracrina dependiente de HGF, la sobreexpresion y la amplification del gen c-met, las mutaciones puntuales, las deleciones, los truncamientos, el reordenamiento, asi como el procesamiento anormal del receptor c-Met y los mecanismos de regulation negativos defectuosos.

En algunas realizaciones de la invencion, los compuestos de la invencion son para su uso en el tratamiento de enfermedades tales como el cancer, la aterosclerosis, la fibrosis pulmonar, la fibrosis y la regeneration renales, la enfermedad hepatica, el trastorno alergico, la enfermedad inflamatoria, el trastorno autoinmune, la enfermedad cerebrovascular, la enfermedad cardiovascular o la afeccion asociada al trasplante de organos. En realizaciones adicionales, los compuestos de la invencion son para su uso en metodos de inhibicion del crecimiento tumoral o la metastasis de un tumor en un paciente.

Los ejemplos de canceres que pueden tratarse mediante los metodos del presente documento incluyen el cancer de vejiga, el cancer de mama, el cancer del cuello uterino, el cancer colangiocarcinoma, el cancer colorrectal, el cancer de esofago, el cancer gastrico, el cancer de cabeza y cuello, el cancer de rinon, el cancer de higado, el cancer de pulmon, el cancer nasofaringeo, el cancer de ovario, el cancer de pancreas, el cancer de prostata, el cancer de tiroides, el osteosarcoma, el sarcoma sinovial, el rabdomiosarcoma, el HFM/fibrosarcoma, el leiomiosarcoma, el sarcoma de Kaposi, el mieloma multiple, el linfoma, la leucemia de linfocitos T en adultos, la leucemia mieloide aguda, la leucemia mieloide cronica, el glioblastoma, el astrocitoma, el melanoma, el mesotelioma o el tumor de Wilm y similares.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Por tanto, en una realization, en el presente documento se proporciona 2-fluoro-N-[(2R)-2-hidroxipropil-(4-(7- (quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma para su uso en el tratamiento del cancer en un sujeto.

En el presente documento se describe un metodo de tratamiento del cancer en un sujeto, que comprende administrar al sujeto 2-cloro-N-metil-4-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il)benzamida o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, de manera que se trate el cancer.

En otra realization, en el presente documento se proporciona 2-cloro-N-[(1S)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etil-(4-(7- (quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma para su uso en el tratamiento del cancer en un sujeto.

En el presente documento se describe un metodo de tratamiento del cancer en un sujeto que comprende administrar al sujeto N-metil-5-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]piridina-2-carboxamida o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, de manera que se trate el cancer.

En el presente documento se describe un metodo de tratamiento del cancer en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto N,2-dimetil-4-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, de manera que se trate el cancer.

Por tanto, en una realization, en el presente documento se proporciona 2-fluoro-N-[(2R)-2-hidroxipropil]-4-(7- (quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma para su uso en la inhibition del crecimiento tumoral en un sujeto que lo necesite.

En el presente documento se describe un metodo de inhibition del crecimiento tumoral en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto 2-cloro-N-metil-4-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il)benzamida o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma.

En otra realization, en el presente documento se proporciona 2-cloro-N-[(1S)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etil-(4-(7- (quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma para su uso en la inhibition del crecimiento tumoral en un sujeto que lo necesite.

En el presente documento se describe un metodo de inhibition del crecimiento tumoral en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto N-metil-5-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]piridina-2- carboxamida o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, de manera que se trate el cancer.

En el presente documento se describe un metodo de inhibition del crecimiento tumoral en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto N,2-dimetil-4-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma.

Como se usa en el presente documento, el termino "celula" tiene por objeto referirse a una celula que esta in vitro, ex vivo o in vivo. En algunas realizaciones, una celula ex vivo puede ser parte de una muestra de tejido extirpado de un organismo tal como un mamlfero. En algunas realizaciones, una celula in vitro puede ser una celula en un cultivo celular. En algunas realizaciones, una celula in vivo es una celula viva en un organismo tal como un mamlfero.

Como se usa en el presente documento, la expresion "poner en contacto" se refiere a la reunion de restos indicados en un sistema in vitro o un sistema in vivo. Por ejemplo, "poner en contacto" un compuesto de la invention con una protelna cinasa incluye la administration de un compuesto de la presente invention a un individuo o paciente, tal como un ser humano, as! como, por ejemplo, introducir un compuesto de la invention en una muestra que contiene una preparation celular o purificada de la protelna cinasa.

Como se usa en el presente documento, el termino "individuo" o "paciente", utilizado indistintamente, se refiere a cualquier animal, incluyendo mamlferos, preferentemente ratones, ratas, otros roedores, conejos, perros, gatos, cerdos, ganado, ovejas, caballos o primates y mucho mas preferentemente seres humanos.

Como se usa en el presente documento, la expresion "cantidad terapeuticamente eficaz" se refiere a la cantidad de compuesto activo o agente farmaceutico que desencadena la respuesta biologica o medicinal que se busca en un tejido, sistema, animal, individuo o ser humano por un investigador, veterinario, doctor en medicina u otro cllnico, que incluye uno o mas de los siguientes: (1) prevenir la enfermedad; por ejemplo, prevenir una enfermedad, afeccion o trastorno en un individuo que puede estar predispuesto a la enfermedad, afeccion o trastorno pero que aun no experimenta o presenta la patologla o sintomatologla de la enfermedad; (2) inhibir la enfermedad; por ejemplo, inhibir una enfermedad, afeccion o trastorno en un individuo que esta experimentando o presentando la patologla o sintomatologla de la enfermedad, afeccion o trastorno; y (3) mejorar la enfermedad; por ejemplo, mejorar una enfermedad, afeccion o trastorno en un individuo que esta experimentando o presentando la patologla o sintomatologla de la enfermedad, afeccion o trastorno (es decir, revertir la patologla y/o sintomatologla), tal como reducir la gravedad de la enfermedad.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

El termino "tratado", "tratar" o "tratamiento" incluye la disminucion o el alivio de al menos un slntoma asociado a la actividad de la cinasa c-Met, la via de senalizacion HGF/cinasa c-Met y/o la actividad proliferativa de una celula. El termino "tratado", "tratar" o "tratamiento" tal como se usa en referencia a una enfermedad o afeccion significa intervenir en dicha enfermedad o afeccion a fin de prevenir o retardar el desarrollo, prevenir o retardar la progresion, detener la progresion o eliminar la enfermedad o afeccion.

El termino "uso" incluye una cualquiera o mas de las siguientes realizaciones de la invencion, respectivamente: el uso en el tratamiento de un trastorno; el uso para la fabricacion de composiciones farmaceuticas para su uso en el tratamiento de un trastorno, por ejemplo, en la fabricacion de un medicamento; metodos de uso de compuestos de la invencion en el tratamiento de estas enfermedades; preparaciones farmaceuticas que tienen compuestos de la invencion para el tratamiento de estas enfermedades; y compuestos de la invencion para su uso en el tratamiento de estas enfermedades; segun sea apropiado y conveniente, si no se indica lo contrario. En particular, las enfermedades que se tratan y que por tanto se prefieren para el uso de un compuesto de la presente invencion se seleccionan entre enfermedades asociadas a la actividad de la cinasa c-Met, la via de senalizacion de HGF/cinasa c-Met y/o la actividad proliferativa de una celula, y al cancer.

Terapia de combination

Pueden usarse uno o mas agentes farmaceuticos o metodos de tratamiento adicionales tales como, por ejemplo, agentes quimioterapicos, agentes contra el cancer, agentes citotoxicos o terapias contra el cancer (por ejemplo, radiacion, hormonales, etc.), en combinacion con los compuestos y sales de la presente invencion para su uso en el tratamiento de las enfermedades, trastornos o afecciones que se describen en el presente documento. Los agentes o terapias pueden ser para la administracion junto con los compuestos o sales de la invencion (por ejemplo, combinados en una forma de dosificacion individual) o los agentes o terapias pueden administrarse simultanea o secuencialmente por vlas de administracion separadas.

Los agentes contra el cancer adecuados incluyen los agentes inhibidores de cinasas incluyendo trastuzumab (Herceptin), imatinib (Gleevec), gefitinib (Iressa), clorhidrato de erlotinib (Tarceva), cetuximab (Erbitux), bevacizumab (Avastin), sorafenib (Nexavar), sunitinib (Sutent) e inhibidores de RTK descritos en, por ejemplo, el documento WO 2005/004808, el documento WO 2005/004607, el documento WO 2005/005378, el documento WO 2004/076412, el documento WO 2005/121125, el documento WO 2005/039586, el documento WO 2005/028475, el documento WO 2005/040345, el documento WO 2005/039586, el documento WO 2003/097641, el documento WO 2003/087026, el documento WO 2005/040154, el documento WO 2005/030140, el documento WO C, paclitaxel (Taxol™), mitramicina, desoxico-formicina, mitomicina-C, L-asparaginasa, interferones (especialmente IFN-a), etoposido y teniposido.

Otros agentes citotoxicos incluyen navelbeno, CPT-11, anastrozol, letrozol, capecitabina, reloxafina, ciclofosfamida, ifosamida y droloxafina.

Tambien son adecuados los agentes citotoxicos tales como epidofilotoxina; una enzima antineoplasica; un inhibidor de topoisomerasas; procarbazina; mitoxantrona; complejos de coordinacion de platino tales como cis-platino y carboplatino; modificadores de respuesta biologica; inhibidores de crecimiento; agentes terapeuticos antihormonales; leucovorina; tegafur; y factores de crecimiento hematopoyeticos.

Otro agente o agentes contra el cancer incluyen anticuerpos terapeuticos tales como trastuzumab (Herceptin), anticuerpos contra moleculas coestimuladoras tales como CTLA-4, 4-1BB y PD-1 o anticuerpos contra citocinas (IL- 10, TGF-p, etc.). Terapias adicionales de anticuerpos incluyen anticuerpos de tirosina cinasas y/o sus ligandos, tales como anticuerpos anti-HGF y/o anticuerpos anti-c-Met. El termino "anticuerpo" pretende incluir anticuerpos completos (por ejemplo, monoclonales, policlonales, quimericos, humanizados, humanos, etc.), as! como fragmentos de union a antlgeno de los mismos.

Otros agentes contra el cancer tambien incluyen los que bloquean la migracion de celulas inmunitarias tales como los antagonistas de los receptores de quimiocinas, incluyendo CCR2 y CCR4.

Otros agentes contra el cancer tambien incluyen los que aumentan el sistema inmunitario tales como adyuvantes o la transferencia de linfocitos T adoptivos.

Otros agentes contra el cancer incluyen vacunas contra el cancer, tales como las vacunas de celulas dendrlticas, peptidos sinteticos, ADN y los virus recombinantes.

Los metodos para la administracion segura y eficaz de la mayorla de los agentes anteriores son conocidos por los expertos en la materia. Ademas, su administracion se describe en la bibliografla convencional. Por ejemplo, la administracion de muchos de los agentes quimioterapicos se describe en el "Physicians' Desk Reference" (PDR, por ejemplo, edicion de 1996, Medical Economics Company, Montvale, NJ), cuya divulgacion se incorpora en el presente documento por referencia como si se expusiera en su totalidad.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Formulaciones farmaceuticas y formas de dosificacion

Cuando se emplean como productos farmaceuticos, los compuestos o sales de la invencion pueden administrarse en forma de composiciones farmaceuticas que corresponden a una combinacion de un compuesto de la invencion (o sal del mismo) y un vehlculo farmaceuticamente aceptable. Estas composiciones pueden prepararse de una manera bien conocida en la tecnica farmaceutica y pueden administrarse por una diversidad de vlas, dependiendo de si se desea un tratamiento local o sistemico y del area que se trata. La administracion puede ser topica (incluyendo la oftalmica y a las membranas mucosas incluyendo la liberacion intranasal, vaginal y rectal), pulmonar (por ejemplo, por inhalacion o insuflacion de polvos o aerosoles, incluyendo mediante nebulizador; intratraqueal, intranasal, epidermica y transdermica), ocular, oral o parenteral. Los metodos para la liberacion ocular pueden incluir la administracion topica (colirios), la inyeccion subconjuntival, periocular o intravltrea o la introduccion mediante cateter con balon o insertos oftalmicos colocados quirurgicamente en el saco conjuntival. La administracion parenteral incluye la inyeccion o infusion intravenosa, intraarterial, subcutanea, intraperitoneal o intramuscular; o la administracion intracraneal, por ejemplo, intratecal o intraventricular. La administracion parenteral puede ser en forma de una sola dosis en bolo o puede ser, por ejemplo, mediante una bomba de perfusion continua. Las composiciones y formulaciones farmaceuticas para la administracion topica pueden incluir parches transdermicos, pomadas, lociones, cremas, geles, gotas, supositorios, pulverizaciones, llquidos y polvos. Pueden ser necesarios o deseables vehlculos farmaceuticos convencionales, bases acuosas, en polvo u oleosas, espesantes y similares.

La presente invencion tambien incluye composiciones farmaceuticas que contienen, como principio activo, uno o mas de los compuestos de la invencion anterior en combinacion con uno o mas transportadores farmaceuticamente aceptables. Al preparar las composiciones de la invencion, el principio activo normalmente se mezcla con un excipiente, se diluye mediante un excipiente o se incluye dentro de un vehlculo de este tipo en forma de, por ejemplo, una capsula, sobrecito, papelina u otro recipiente. Cuando el excipiente sirve como diluyente, puede ser un material solido, semisolido o llquido, que actua como un vehlculo, excipiente o medio para el principio activo. Por tanto, las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, plldoras, polvos, grageas, sobrecitos, obleas, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles (como un solido o en un medio llquido), pomadas que contienen, por ejemplo, hasta el 10 % en peso de compuesto activo, capsulas de gelatina blandas y duras, supositorios, soluciones inyectables esteriles y polvos envasados esteriles.

En la preparacion de una formulacion, el compuesto activo puede molerse para proporcionar el tamano de partlcula apropiado antes de combinarlo con los otros ingredientes. Si el compuesto activo es sustancialmente insoluble, puede molerse hasta un tamano de partlcula inferior a 200 de malla. Si el compuesto activo es sustancialmente hidrosoluble, el tamano de partlcula puede ajustarse moliendo para proporcionar una distribucion sustancialmente uniforme en la formulacion, por ejemplo, aproximadamente 40 de malla.

Algunos ejemplos de excipientes adecuados incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma arabiga, fosfato de calcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de calcio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, agua, jarabe y metilcelulosa. Las formulaciones pueden incluir adicionalmente: agentes lubricantes tales como talco, estearato de magnesio y aceite mineral; agentes humectantes; agentes emulsionantes y de suspension; agentes conservantes tales como metil- y propil-hidroxi-benzoatos; agentes edulcorantes; y agentes aromatizantes. Las composiciones de la invencion pueden formularse de manera que proporcionen una liberacion rapida, sostenida o retardada del principio activo tras la administracion al paciente empleando procedimientos conocidos en la tecnica.

Las composiciones pueden formularse en una forma de dosificacion unitaria, conteniendo cada dosis de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg, mas habitualmente de aproximadamente 10 a aproximadamente 100 mg, del principio activo. La expresion "formas de dosificacion unitarias" se refiere a unidades flsicamente aisladas adecuadas como dosis unitarias para sujetos humanos y otros mamlferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapeutico deseado, en asociacion con un excipiente farmaceutico adecuado.

El compuesto activo puede ser eficaz en un amplio intervalo de dosificacion y se administra generalmente en una cantidad farmaceuticamente eficaz. Se entendera, sin embargo, que la cantidad de compuesto realmente administrada sera normalmente determinada por un medico, de acuerdo con las circunstancias pertinentes, incluyendo la afeccion que se trata, la via de administracion elegida, el compuesto real administrado, la edad, el peso y la respuesta del paciente individual, la gravedad de los slntomas del paciente y similares.

Para preparar composiciones solidas tales como comprimidos, el principio activo principal se mezcla con un excipiente farmaceutico para formar una composicion de preformulacion solida que contiene una mezcla homogenea de un compuesto de la presente invencion. Cuando se hace referencia a estas composiciones de preformulacion como homogeneas, el principio activo se dispersa normalmente de manera uniforme en toda la composicion de manera que la composicion pueda subdividirse facilmente en formas de dosificacion unitarias igualmente eficaces tales como comprimidos, plldoras y capsulas. Esta preformulacion solida se subdivide despues en formas de dosificacion unitarias del tipo descrito anteriormente que contienen de, por ejemplo, de 0,1 a aproximadamente 500 mg del principio activo de la presente invencion.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Los comprimidos o plidoras de la presente invencion pueden recubrirse o conformarse de otra forma para proporcionar una forma de dosificacion que proporcione la ventaja de la accion prolongada. Por ejemplo, el comprimido o plldora puede comprender un componente de dosificacion interno y uno de dosificacion externo, estando este ultimo en forma de una envoltura sobre el primero. Los dos componentes pueden estar separados por una capa enterica que sirve para evitar la disgregacion en el estomago y permitir que el componente interno pase intacto al duodeno o que se retrase su liberation. Puede usarse una diversidad de materiales para dichas capas o recubrimientos entericos, incluyendo dichos materiales varios acidos polimericos y mezclas de acidos polimericos con materiales tales como goma laca, alcohol cetllico y acetato de celulosa.

Las formas llquidas en las que los compuestos y composiciones de la presente invencion pueden incorporarse para la administration por via oral o por inyeccion incluyen soluciones acuosas, jarabes adecuadamente aromatizados, suspensiones acuosas u oleosas y emulsiones aromatizadas con aceites comestibles tales como aceite de semilla de algodon, aceite de sesamo, aceite de coco o aceite de cacahuete, como as! como elixires y vehlculos farmaceuticos similares.

Las composiciones para inhalation o insuflacion incluyen soluciones y suspensiones en disolventes farmaceuticamente aceptables, acuosos u organicos o mezclas de los mismos, y polvos. Las composiciones llquidas o solidas pueden contener excipientes farmaceuticamente aceptables adecuados como se ha descrito anteriormente. En algunas realizaciones, las composiciones se administran por via respiratoria oral o nasal para un efecto local o sistemico. Las composiciones pueden nebulizarse mediante el uso de gases inertes. Las soluciones nebulizadas pueden aspirarse directamente desde el dispositivo de nebulizacion o el dispositivo de nebulizacion puede estar unido a mascaras para cara, una carpa o a una maquina de respiration de presion positiva intermitente. Las composiciones de solution, suspension o en polvo pueden administrarse por via oral o nasal desde dispositivos que suministran la formulation de una manera apropiada.

La cantidad de compuesto o composition administrada a un paciente variara dependiendo de lo que se este administrando, del proposito de la administracion, tal como profilaxis o terapia, del estado del paciente, de la forma de administracion y similares. En aplicaciones terapeuticas, las composiciones pueden administrarse a un paciente que ya padece una enfermedad en una cantidad suficiente para curar o al menos detener parcialmente los slntomas de la enfermedad y sus complicaciones. Las dosis eficaces dependeran de la patologla que se esta tratando, as! como del criterio del medico especialista dependiendo de factores tales como la gravedad de la enfermedad, la edad, el peso y el estado general del paciente y similares.

Las composiciones administradas a un paciente pueden estar en forma de las composiciones farmaceuticas descritas anteriormente. Estas composiciones pueden esterilizarse mediante tecnicas de esterilizacion convencionales o pueden filtrarse de forma esteril. Las soluciones acuosas pueden envasarse para su uso tal cual o liofilizarse, combinandose la preparation liofilizada con un vehlculo acuoso esteril antes de la administracion. El pH de las preparaciones de compuesto normalmente estara entre 3 y 11, mas preferentemente de 5 a 9 y mucho mas preferentemente de 7 a 8. Se entendera que el uso de algunos de los excipientes, vehlculos o estabilizadores anteriores dara como resultado la formation de sales farmaceuticas.

La dosis terapeutica de los compuestos de la presente invencion puede variar de acuerdo con, por ejemplo, el uso particular para el que se hace el tratamiento, la forma de administracion del compuesto, la salud y el estado del paciente y el criterio del medico prescriptor. La proportion o concentration de un compuesto de la invencion en una composicion farmaceutica puede variar dependiendo de varios factores que incluyen la dosificacion, las caracterlsticas qulmicas (por ejemplo, la hidrofobia) y la via de administracion. Por ejemplo, los compuestos de la invencion pueden proporcionarse en una solucion tampon fisiologica acuosa que contiene de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 10 % p/v del compuesto para la administracion parenteral. Algunos intervalos de dosis tlpicos son de aproximadamente 1 pg/kg a aproximadamente 1 g/kg de peso corporal por dla. En algunas realizaciones, el intervalo de dosis es de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por dla. Es probable que la dosis dependa de variables tales como el tipo y grado de progresion de la enfermedad o trastorno, el estado de salud general del paciente particular, la eficacia biologica relativa del compuesto seleccionado, la formulacion del excipiente y su via de administracion. Las dosis eficaces pueden extrapolarse a partir de curvas de dosis-respuesta derivadas de sistemas de ensayo in vitro o en modelos animales.

Los compuestos de la invencion tambien pueden formularse en combination con uno o mas principios activos adicionales que pueden incluir cualquier agente farmaceutico tal como agentes antivirales, vacunas, anticuerpos, potenciadores inmunitarios, inmunosupresores, agentes antiinflamatorios y similares.

Se aprecia, ademas, que ciertas caracterlsticas de la invencion, que por claridad se describen en el contexto de realizaciones separadas, tambien pueden proporcionarse en combinacion en una unica realization. A la inversa, diversas caracterlsticas de la invencion que por brevedad se describen en el contexto de una unica realizacion, tambien pueden proporcionarse por separado o en cualquier subcombinacion adecuada.

La invencion se describira con mayor detalle por medio de ejemplos especlficos. Los siguientes ejemplos se ofrecen con fines ilustrativos y no pretenden limitar la invencion de ninguna manera. Los expertos en la materia reconoceran

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

facilmente una diversidad de parametros no crfticos que pueden cambiarse o modificarse para producir esencialmente los mismos resultados. Se descubrio que los compuestos de los Ejemplos son inhibidores de c-Met de acuerdo con uno o mas de los ensayos que se proporcionan en el presente documento.

Ejemplos

A continuacion, se proporcionan procedimientos experimentales para los compuestos de la invencion. Generalmente, el producto se purifico en una escala preparativa por cromatograffa lfquida de alto rendimiento (HPLC) o cromatograffa ultrarrapida (gel de sflice) como se indica en los Ejemplos. Las condiciones de la columna de cromatograffa lfquida de alto rendimiento de fase inversa preparativa (RP-HPLC) tfpicas son como se indica a continuacion:

pH = 2 purificaciones: Columna Waters Sunfire™ Cis 5 Tm, 19 x 100 mm, eluyendo con fase movil A: TFA al 0,1 % (acido trifluoroacetico) en agua y fase movil B: TFA al 0,1 % en acetonitrilo; el caudal es 30 ml/m; el gradiente de separation esta optimizado para cada compuesto usando el Protocolo de optimization del metodo especffico del compuesto como se describe en la bibliograffa ["Preparative LCMS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization", K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Comb. Chem., 6, 874-883 (2004)].

pH = 10 purificaciones: Columna Waters XBridge C18 5 Tm, 19 x 100 mm, eluyendo con fase movil A: NH4OH al 0,15 % en agua y fase movil B: NH4OH al 0,15 % en acetonitrilo; el caudal fue 30 ml/m; el gradiente de separacion esta optimizado para cada compuesto usando el Protocolo de optimizacion del metodo especffico del compuesto como se describe en la bibliograffa ["Preparative LCMS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization", K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Comb. Chem., 6, 874-883 (2004)].

Los isomeros separados se sometieron tfpicamente a cromatograffa lfquida-espectrometrfa de masas analftica (LCMS) para determinar la pureza en las siguientes condiciones: Instrumento; Agilent 1100 series, LC/MSD, Columna: Waters Sunfire™ C18 5 Tm, 2,1 x 5,0 mm, Tampones: fase movil A: TFA al 0,025 % en agua y fase movil B: TFA al 0,025 % en acetonitrilo; gradiente del 2 % al 80 % de B en 3 min con un caudal de 1,5 ml/min.

Ejemplo 1

2-Fluoro-N-[(2R)-2-hidroxipropil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida

imagen2

Etapa 1: 4-Bromo-3-fluoro-N-metoxi-N-metilbenzamida

imagen3

O

acetonitrilo; el caudal es 30 ml/m; el gradiente de separacion esta optimizado para cada compuesto usando el Protocolo de optimizacion del metodo especffico del compuesto como se describe en la bibliograffa ["Preparative LCMS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization", K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Comb. Chem., 6, 874-883 (2004)].

pH = 10 purificaciones: Columna Waters XBridge C18 5 Tm, 19 x 100 mm, eluyendo con fase movil A: NH4OH al 0,15 % en agua y fase movil B: NH4OH al 0,15 % en acetonitrilo; el caudal fue 30 ml/m; el gradiente de separacion esta optimizado para cada compuesto usando el Protocolo de optimizacion del metodo especffico del compuesto como se describe en la bibliograffa ["Preparative LCMS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization", K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Comb. Chem., 6, 874-883 (2004)].

Los isomeros separados se sometieron tipicamente a cromatograffa liquida-espectrometria de masas analitica (LCMS) para determinar la pureza en las siguientes condiciones: Instrumento; Agilent 1100 series, LC/MSD, Columna: Waters Sunfire™ C18 5 Tm, 2,1 x 5,0 mm, Tampones: fase movil A: TFA al 0,025 % en agua y fase movil B: TFA al 0,025 % en acetonitrilo; gradiente del 2 % al 80 % de B en 3 min con un caudal de 1,5 ml/min.

Los ejemplos marcados con un asterisco (*) se incluyen por referencia.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Ejemplo 1

imagen4

Etapa 1: 4-Bromo-3-fluoro-N-metoxi-N-metilbenzamida

imagen5

0

Se anadio lentamente cloruro de oxalilo (38,1 ml, 450 mmol) a una mezcla de acido 4-bromo-3-fluorobenzoico (49,3 g, 225 mmol) (Alfa Aesar, Cat. n.° B25475) en diclorometano (300 ml). Posteriormente, se anadio N,N- dimetilformamida (1,0 ml) y la mezcla de reaction se agito a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reaction se concentro a temperatura ambiente reducida, y se vertio en hielo agua. El precipitado se filtro y se lavo con agua, y el solido se seco al vacfo durante una noche para obtener 8,1 g del producto deseado. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo 3 veces. Los extractos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron, se filtraron y se concentraron para dar 2,2 g mas del producto deseado (10,3 g en total).

Etapa 4: 1-(4-Bromo-3-fluorofenil)-2,2-dietoxietanona

imagen6

O

A una mezcla de 1-(4-bromo-3-fluorofenil)-2,2-dihidroxietanona y 4-bromo-3-fluorofenil)(oxo)acetaldehfdo (producto en bruto de la Etapa 3, 7,0 g, 28 mmol) en tolueno (50 ml) se le anadieron ortoformiato de etilo (12 ml, 70 mmol) y acido p-toluenosulfonico (200 mg, 1 mmol). La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 4 h. La mezcla de reaccion se enfrio a TA, se diluyo con acetato de etilo, se lavo con bicarbonato sodico acuoso, agua y salmuera, y se seco sobre sulfato de magnesio. La concentration a presion reducida dio el producto deseado que se uso en la siguiente etapa sin purification adicional.

Etapa 5: 6-(4-Bromo-3-fluorofenil)-1,2,4-triazin-3-amina

N-x

H2N—(7 /

N=N

Una mezcla de 1-(4-bromo-3-fluorofenil)-2,2-dietoxietanona (Etapa 4, 15,2 g, 50 mmol), bicarbonato de aminoguanidina (10,2 g, 75 mmol) y hidroxido potasico (6,6 g, 100 mmol) en etanol (200 ml) y agua (4 ml) se calento a reflujo durante una noche. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se lavo con acetonitrilo y se filtro. El filtrado se concentro a presion reducida. El residuo se disolvio en diclorometano (100 ml), se lavo con agua y salmuera, y se concentro a presion reducida. El residuo se disolvio en etanol (50 ml). A la solution se le anadio acido clorhfdrico 0,2 N (50 ml). La mezcla resultante se calento a 110 °C durante 8 h y se enfrio con un bano de hielo-agua. El precipitado que se formo se recogio por filtration y se lavo con isopropanol para dar el producto deseado. (5,5 g, 41 %) LCMS: (M+H) = 286,8/288,8. 1H RMN (400 MHz, CDCls): 8,60 (s, 1H), 7,79 (dd, J = 8,6,

2,0 Hz, 1H), 7,68 (dd, J = 8,3, 7,0 Hz, 1H), 7,61 (dd, J = 8,3, 2,0 Hz, 1H), 5,43 (s, 2H).

Etapa 6: 3-Quinolin-6-ilpropanal

imagen7

imagen8

Se evacuo tris(dibencilidenoacetona)dipaladio (480 mg, 0,52 mmol) (Aldrich, Cat. n.° 328774) y tri-terc-butil-fosfonio tetrafluoroborato (300 mg, 1,0 mmol) en un matraz y se cargo de nuevo con nitrogeno (2 veces). Se anadio 1,4-

5

10

15

20

25

30

35

40

45

dioxano (31 ml) seguido de la adicion consecutiva de 6-bromoquinolina (7,2 g, 35 mmol) (TCI, Cat. n.° B2015), 2- propen-1-ol (4,7 ml, 69 mmol) y N-ciclohexil-N-metil-ciclohexanamina (8,9 ml, 42 mmol). El recipiente de reaccion se evacuo y se cargo de nuevo con nitrogeno (2 veces). La mezcla de reaccion se agito a 30 °C durante 24 h. A la mezcla de reaccion se le anadio eter dietflico (30 ml), despues se filtro y se lavo con eter dietflico. El extracto organico se concentro a presion reducida. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida eluyendo con acetato de etilo en hexanos (0-50 %) para proporcionar el producto deseado. (~55 %) LCMS (M+H)+: m/z = 186,0; (M+H2O+H)+: m/z = 204,0.

Etapa 7: 1-(2-Cloro-1-hidroxi-3-quinolin-6-ilpropil)pirrolidin-2, 5-diona

imagen9

A una solucion de 3-quinolin-6-ilpropanal (Etapa 6, 2,3 g, 0,012 mol) en cloroformo (5 ml) enfriada a 0 °C se le anadio L-prolina (0,4 g, 0,004 mol). Despues, a la mezcla se le anadio N-clorosuccinimida (1,74 g, 0,0130 mol) a 0 °C. La reaccion se calento a t.a. y se agito durante una noche. La reaccion era una suspension espesa. El solido se filtro y se lavo con cloroformo para dar el producto puro (2 g, 50,5 %). 1H RMN (300 MHz, CDCl3): 8,90 (dd, J = 4,0, 2,0 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,65 (dd, J = 8,0, 2,0 Hz, 1H), 7,40 (dd, J = 8,4, 4,0 Hz, 1H), 5,46 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 4,95 (ddd, J = 9,4, 8,0, 3,1 Hz, 1H), 3,73 (dd, J = 14,3, 3,1 Hz, 1H), 3,19 (dd, J = 14,3, 8,0 Hz, 1H), 2,75 (s, 4H).

Etapa 8: 6-[2-(4-Bromo-3-fluorofenil)imidazo[ 1,2-b][ 1,2,4]triazin-7-il]metilquinolina

imagen10

Una mezcla de 6-(4-bromo-3-fluorofenil)-1,2,4-triazin-3-amina (Etapa 5, 200 mg, 0,743 mmol) y 1-(2-cloro-1-hidroxi- 3-quinolin-6-ilpropil)pirrolidin-2,5-diona (Etapa 7, 284 mg, 0,892 mmol) en alcohol isopropflico (7,4 ml) y agua (0,11 ml) en un tubo cerrado hermeticamente se calento a 105 °C durante 5 d. Despues de que la mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente, el precipitado se recogio por filtracion, se lavo con alcohol isopropanflico, y se seco al vacfo para dar el producto deseado (180 mg, 55 %) LCMS (M+H)+: m/z = 433,9/436,0.

Etapa 9: 2-Fluoro-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzonitrilo

imagen11

Se anadieron sucesivamente cianuro de cinc (131 mg, 1,11 mmol), tris(dibencilidenoacetona)dipaladio (0) (35 mg, 0,038 mmol) (Aldrich, Cat. n.° 328774), (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5-diil)bis-(difenilfosfina) (78,5 mg, 0,136 mmol) (Aldrich, Cat. n.° 526460), y N,N,N',N'-tetrametiletilendiamina (0,22 ml, 1,4 mmol) a una mezcla de 6-[2-(4-bromo-3- fluorofenil)imidazo[1,2-b][1,2,4]-triazin-7-il]metilquinolina (Etapa 8, 480 mg, 1,10 mmol) en N,N-dimetilformamida (8,7 ml) en un tubo para microondas. El tubo se cerro hermeticamente, y se desgasifico tres veces y se calento a 160 °C en irradiation por microondas durante 500 s. La mayor parte del disolvente se retiro a presion reducida y el residuo se disolvio en acetato de etilo, se lavo con bicarbonato sodico acuoso, agua y salmuera, y se seco sobre sulfato de magnesio. La filtracion y se concentration proporcionaron un residuo que se purifico sobre una columna de gel de sflice con metanol en diclorometano (0-6 %) para dar el producto deseado. (90 %) LCMS (M+H)+: m/z = 381,0.

imagen12

5 Se agito 2-fluoro-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzonitrilo (Etapa 9, 750 mg, 2 mmol) en una solution concentrada de acido clorhfdrico (5,0 ml, 53 mmol) y agua (1,0 ml) a 105 °C durante una noche. El disolvente se retiro a presion reducida y el residuo resultante se lavo con agua y se filtro para proporcionar el producto en bruto en forma de la sal HCl que se uso directamente en la siguiente etapa de reaction sin purification adicional. LCMS (M+H)+: m/z = 400,0.

10

Etapa 11: 2-Fluoro-N-[(2R)-2-hidroxipropil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida

imagen13

15 Una mezcla de sal HCl del acido 2-fluoro-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzoico (180,0 mg, 0,381 mmol, Etapa 10) y hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfonio (220 mg, 0,50 mmol) (Aldrich, Cat. n.° 226084) en N,N-dimetilformamida (9,0 ml) se agito a t.a. durante 3 min. Despues, se anadio lentamente (2R)-1-aminopropan-2-ol (57 mg, 0,76 mmol) seguido de trietilamina (318,7 gl, 2,287 mmol). La mezcla se agito a t.a. durante 3 h, y despues se anadio agua. El precipitado se recogio por filtration y se lavo con 20 acetonitrilo acuoso. El precipitado se disolvio en una solucion acuosa 1 N de HCl, y despues se seco por liofilizacion para dar el producto deseado en forma de la sal HCl. LCMS (M+H)+: m/z = 457,3. 1H RMN (500 mHz, DMSO-d6): 9,30 (s, 1H), 9,20 (dd, J = 5,0, 1,5 Hz, 1H), 9,02 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,35 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,16 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 1H), 8,08 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 8,00 (dd, J = 8,5, 5,0, Hz, 1H), 7,80 (t, J =

8,0 Hz, 1 H), 4,75 (s, 2H), 3,79 (m, 1H), 3,21 (m, 2H), 1,09 (d, J = 7,0 Hz, 3H).

25

El enantiomero S puede hacerse de acuerdo con el procedimiento anterior usando (2S)-1-aminopropan-2-ol o por racemizacion del producto y la separation de los enantiomeros usando tecnicas de separation quiral convencionales (por ejemplo, una columna quiral).

30 Ejemplo 2

2-Cloro-N-metil-4-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il)benzamida

35

imagen14

Etapa 1: 6-Bromo-1,2,4-triazin-3-amina

Br,., N ..

N

N NH,

A una suspension de 1,2,4-triazin-3-amina (3,84 g, 40,0 mmol) (Aldrich, Cat. n.° 100625) en acetonitrilo (40 ml) se le 40 anadio agua (60 ml) y se agito hasta que se formo una solucion transparente. A esta solucion se le anadio N- bromosuccinimida (7,48 g, 42,0 mmol) a 0 °C y la mezcla resultante se agito durante 10 min. El bano de refrigeration se retiro, y la mezcla se dejo calentar a temperatura ambiente. Despues, la mezcla se diluyo con acetato de etilo (150 ml) y se enfrio a 0 °C (bano de hielo-agua). Se anadio Na2CO3 (3,0 g) y se agito durante 10 min. Las dos capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (150 ml). Las capas organicas combinadas se lavaron 45 con NaHCO3 sat. y salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se filtraron. El filtrado se concentro a presion reducida para proporcionar el producto deseado (4 g, 57,15 %). LCMS (M+H)+: m/z =175,2/177,2.

5

10

15

20

25

30

35

40

Etapa 2: 4-(3-Amino-1,2,4-triazin-6-il)-2-clorobenzoato de metilo

N

NH,

A una mezcla de 6-bromo-1,2,4-triazin-3-amina (Etapa 1, 1,0 g, 5,7 mmol) y acido [3-cloro-4-

(metoxicarbonil)fenil]bor6nico (1,5 g, 6,8 mmol) (VMR, Cat. n.° 100013-404) en 1,4-dioxano (22 ml) se le anadio una solution de fosfato potasico (2,4 g, 11 mmol) en agua (5,1 ml). La mezcla se desgasifico mediante purga de nitrogeno durante 10 min. A la mezcla se le anadio tetraqwis(trifenilfosfina)paladio (0) (0,20 g, 0,17 mmol) y se desgasifico de nuevo con nitrogeno. La mezcla se agito y se calento a 82 °C (un bano de aceite) durante 1 h. La mezcla se enfrio a t.a., se diluyo con agua, se agito durante 30 min, y se formo un solido de color gris. El solido se aislo por filtration, se aclaro varias veces con agua, y se seco al aire. Despues, el solido se trituro secuencialmente con hexanos, diclorometano-hexanos (1:1), y hexanos para proporcionar el producto deseado (840 mg, 55,54 %). LCMS (M+H)+: m/z = 264,9/267,0.

El enantiomero S puede hacerse de acuerdo con el procedimiento anterior usando (2S)-1-aminopropan-2-ol o por racemizacion del producto y separation de los enantiomeros usando tecnicas de separation quiral convencionales (por ejemplo, una columna quiral).

*Ejemplo 2

2-Cloro-N-metil-4-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il)benzamida

imagen15

imagen16

Etapa 1: 6-Bromo-1,2,4-triazin-3-amina

Br\ . N ,.

T N

■" NNHn

A una suspension de 1,2,4-triazin-3-amina (3,84 g, 40,0 mmol) (Aldrich, Cat. n.° 100625) en acetonitrilo (40 ml) se le anadio agua (60 ml) y agito hasta que se formo una solucion transparente. A esta solucion se le anadio N- bromosuccinimida (7,48 g, 42,0 mmol) a 0°C y la mezcla resultante se agito durante 10 min. El bano de refrigeration se retiro, y la mezcla se dejo calentar a temperatura ambiente. Despues, la mezcla se diluyo con acetato de etilo (150 ml) y se enfrio a 0 °C (bano de hielo-agua). Se anadio Na2CO3 (3,0 g) y se agito durante 10 min. Las dos capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (150 ml). Las capas organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 sat. y salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se filtraron. El filtrado se concentro a presion reducida para proporcionar el producto deseado (4 g, 57,15 %). LCMS (M+H)+: m/z =175,2/177,2.

Etapa 2: 4-(3-Amino-1,2,4-triazin-6-il)-2-clorobenzoato de metilo

imagen17

A una mezcla de 6-bromo-1,2,4-triazin-3-amina (Etapa 1, 1,0 g, 5,7 mmol) y [3-cloro-4-

5

10

15

20

25

30

35

40

imagen18

Se agitaron acido 2-cloro-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzoico (Etapa 4, 5,0 mg,

0,012 mmol) y hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfonio (10,0 mg, 0,020 mmol) (Aldrich, Cat. n.° 226084) en N,N-dimetilformamida (0,5 ml) a t.a. durante 3 min. Despues, se anadio lentamente Metilamina 2,0 M en tetrahidrofurano (0,012 ml, 0,023 mmol) a 0 °C seguido de trietilamina (6,4 gl, 0,046 mmol). La mezcla se agito a t.a. durante 2 h., y se purifico por RP-HPLC (pH = 2) para proporcionar el producto deseado en forma de la sal trifluoroacetato (TFA). LCMS (M+H)+: m/z = 429,3.

Ejemplo 3

2-Cloro-N-[(1S)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida

imagen19

Etapa 1: [(1S)-2-amino-1-metil-2-oxoetil]carbamato de terc-butilo

Q

A una solution agitada de acido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]propanoico (1 g, 0,005 mol) en THF a 0 °C se le anadio 4-metilmorfolina (0,588 g, 0,00581 mol) seguido de la adicion gota a gota de cloroformiato de isobutilo (0,794 g, 0,00581 mol) durante 2 min. La reaction se agito a 0 °C durante 30 min, despues de lo cual se vertio rapidamente en la reaccion una solucion de hidroxido de amonio al 30 % en peso (12,0 ml, 0,0925 mol). La reaccion se calento a temperatura ambiente y se agito durante 5 h. La mezcla de reaccion se concentro. Se anadio agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar el producto en bruto que se uso directamente en la siguiente etapa de reaccion sin purification adicional (800 mg, 80 %). 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6): 12,40 (s, 1H), 7,10 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 3,88 (m, 1H), 1,35 (s, 9H), 1,20 (d, J = 7,3 Hz, 3H).

Etapa 2: [(1S)-1-cianoetil]carbamato de terc-butilo

H

n k o 1

H

1 o s

A una solucion agitada de [(1S)-2-amino-1-metil-2-oxoetil]carbamato de terc-butilo (Etapa 1, 0,7 g, 0,004 mol) en N,N-dimetilformamida (5 ml) se le anadieron 343 mg de cloruro cianurico (0,00186 mol) de una unica vez. La mezcla de reaccion se agito durante 4 h. Se anadio agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre una columna de gel de sflice con EtOAc en hexano (3050 %) para producir el producto deseado (400 mg, 63 %). 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6): 7,74 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,48 (m, 1H), 1,40 (s, 9H), 1,35 (d, J = 7,0 Hz, 3H).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Etapa 3: [(1S,2Z)-2-amino-2-(hidroxiimino)-1-metiletil]carbamato de terc-butilo

imagen20

A una mezcla de [(1S)-1-cianoetil]carbamato de terc-butilo (Etapa 2, 250 mg, 1,5 mmol) en etanol (3 ml) se le anadieron trietilamina (0,41 ml, 2,9 mmol) y hidroxilamina (58 mg, 1,8 mmol). La mezcla se agito a 50 °C durante una noche. La mezcla de reaction se concentro para proporcionar el producto en bruto deseado (300 mg) que se uso directamente en la siguiente etapa de reaccion sin purification adicional. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6): 8,94 (s, 1H), 6,80 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,24 (s, 2H), 4,01 (m, 1H), 1,36 (s, 9H), 1,15 (d, J = 7,0 Hz, 3H).

Etapa 4: {(1S,2Z)-2-[(acetiloxi)imino]-2-amino-1-metiletil}carbamato de terc-butilo

imagen21

A una mezcla de [(1S,2Z-2-amino-2-(hidroxiimino)-1-metiletil]carbamato de terc-butilo (Etapa 3, 100 mg, 0,5 mmol) en cloruro de metileno (2 ml) enfriada a 0 °C se le anadio trietilamina (0,10 ml, 0,74 mmol). Despues, a la mezcla se le anadio gota a gota cloruro de acetilo (42 mg, 0,54 mmol) y la reaccion se calento a temperatura ambiente. Despues de agitar a temperatura ambiente durante 1 h, la reaccion se concentro. El residuo se disolvio en diclorometano (DCM), se lavo con agua y salmuera, se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro para proporcionar el producto en bruto deseado (100 mg, 82,8 %) que se uso directamente en la siguiente etapa de reaccion sin purificacion adicional. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6): 6,90 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,22 (s, 2H), 4,05 (m, 1H), 2,01 (s, 3H), 1,36 (s, 9H), 1,20 (d, J = 7,0 Hz, 3H).

Etapa 5: (1S)-1-(5-Metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etanamina

imagen22

A una solution de {(1S,2Z)-2-[(acetiloxi)imino]-2-amino-1-metiletil}carbamato de terc-butilo (Etapa 4, 80 mg, 0,3 mmol) en etanol (3 ml) se le anadio una solucion de acetato sodico trihidrato (49 mg, 0,36 mmol) en agua (1 ml). La mezcla se calento a 85 °C durante 3 h. El etanol se evaporo; se anadio agua y se extrajo con EtOAc. Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se disolvio en cloruro de metileno (1 ml). A la solucion se le anadio acido trifluoroacetico (1 ml). Despues de agitar 30 min, la mezcla de reaccion se concentro para proporcionar el producto deseado en forma de sal TFA que se uso directamente en la siguiente etapa de reaccion sin purificacion adicional.

Etapa 6: 2-Cloro-N-[(1S)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[ 1,2-b][1,2,4]triazin-2-

il]benzamida

imagen23

A una solucion de acido 2-cloro-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzoico (50 mg, 0,1 mmol, Ejemplo 2, Etapa 4) en N,N-dimetilformamida (2 ml, 20 mmol) se le anadieron hexafluorofosfato de N,N,N',N'- tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronio (68 mg, 0,18 mmol) (Aldrich, Cat. n.° 226084) y N,N-diisopropiletilamina (42 gl, 0,24 mmol). Despues de agitar la solucion durante 15 min, se anadio sal TFA de (1S)-1-(5-metil-1,2,4- oxadiazol-3-il)etanamina (18 mg, 0,14 mmol, Etapa 5) y se agito durante una noche. La mezcla se purifico por RP- HPLC (pH = 10) para dar el producto deseado que se purifico adicionalmente por RP-HPLC (pH = 2) para proporcionar el producto puro deseado en forma de la sal TFA. LCMS (M+H)+: m/z = 525,0/427,0. 1H RmN (500 MHz, DMSO-d6): 9,22 (s, 1H), 8,98 (dd, J = 5,0, 1,5 Hz, 1H), 9,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,56 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,16 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,14 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 1H), 8,06 (s, 1H), 8,04 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,90 (dd, J

5

10

15

20

25

30

35

40

= 9,0, 2,0 Hz, 1H), 7,68 (dd, J = 8,5, 5,0 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 5,24 (m, 1H), 4,66 (s, 2H), 2,60 (s, 3H), 1,51 (d, J = 7,0 Hz, 3H).

En enantiomero R puede hacerse de acuerdo con el procedimiento anterior usando (1R)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol- 3-il)etanamina o por racemizacion del producto y separation de los enantiomeros usando tecnicas de separation quiral convencionales (por ejemplo, una columna quiral).

Ejemplo 4

N-Metil-5-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]piridin-2-carboxamida

-A

O N

r N >

Etapa 1: 5-(3-Amino-1,2,4-triazin-6-il)-N-metilpiridin-2-carboxamida

N

N )■ 1)

H N .;, JL ... N .

"VN ' NH,

Una mezcla de N-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-carboxamida (200 mg, 0,80 mmol) (VWR, Cat. n.° 200068-640), 6-bromo-1,2,4-triazin-3-amina (130 mg, 0,76 mmol, Ejemplo 2, Etapa 1), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (40 mg, 0,04 mmol) y carbonato potasico (0,32 g, 2,3 mmol) en tolueno (1,3 ml), etanol (0,66 ml) y agua (0,66 ml) se calento a 120 °C durante 1,5 h. La mezcla se filtro y se lavo con metanol. El filtrado se purifico por Rp-HPLC (pH = 10) para proporcionar el producto deseado (80 mg, 45,54 %). LCMS (M+H)+: m/z = 231,4; LCMS (M+H+H2<O)+: m/z = 249,3.

Etapa 2: N-Metil-5-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[ 1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]piridin-2-carboxamida

Una mezcla de 5-(3-amino-1,2,4-triazin-6-il)-N-metilpiridin-2-carboxamida (Etapa 1, 6,5 g, 0,022 mol) y 1-(2-cloro-1- hidroxi-3-quinolin-6-ilpropil)pirrolidin-2,5-diona (8,71 g, 0,0273 mol, Ejemplo 1, Etapa 7) en 1,2-etanodiol (100 ml) se agito a 120 °C durante una noche. La mezcla de reaction se concentro. La mezcla se neutralizo a pH = 10 con metilamina en una solution de THF (2,0 M), y despues se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre una columna de gel de sflice con MeOH al 5 % en diclorometano para proporcionar el producto deseado que se contamino con parte del material de partida. El producto se disolvio en MeOH al 10 % en diclorometano, y se concentro hasta un volumen de aproximadamente 2 ml. El solido resultante se filtro, se lavo con MeOH (2 ml) para proporcionar el producto puro (4,50 g, 50 %). El producto se trato con HCl 2 N (acuoso) y acetonitrilo, y se seco por liofilizacion para dar el producto deseado en forma de la sal HCl. LCMS (M+H)+: m/z = 396,4. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 9,40 (s, 1H), 9,27 (s, 1H), 9,20 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 9,10 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,64 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,26 (d, J =

8,0 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 8,0, Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,17 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,03 (dd, J = 8,0, 5,5 Hz, 1 H), 4,76 (s, 2H), 2,81 (s, 3H).

imagen24

5

10

15

20

25

30

35

40

Ejemplo 5

imagen25

8,14 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 1H), 8,06 (s, 1H), 8,04 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,90 (dd, J = 9,0, 2,0 Hz, 1H), 7,68 (dd, J = 8,5, 5,0 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 5,24 (m, 1H), 4,66 (s, 2H), 2,60 (s, 3H), 1,51 (d, J = 7,0 Hz, 3H).

El enantiomero R puede hacerse de acuerdo con el procedimiento anterior usando (1R)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3- il)etanamina o por racemizacion del producto y separation de los enantiomeros usando tecnicas de separation quiral convencionales (por ejemplo, una columna quiral).

*Ejemplo 4

N-Metil-5-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]piridin-2-carboxamida

imagen26

Etapa 1: 5-(3-Amino-1,2,4-triazin-6-il)-N-metilpiridin-2-carboxamida

imagen27

Una mezcla de N-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-carboxamida (200 mg, 0,80 mmol) (VWR, Cat. n.° 200068-640), 6-bromo-1,2,4-triazin-3-amina (130 mg, 0,76 mmol, Ejemplo 2, Etapa 1), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (40 mg, 0,04 mmol) y carbonato potasico (0,32 g, 2,3 mmol) en tolueno (1,3 ml), etanol (0,66 ml) y agua (0,66 ml) se calento a 120 °C durante 1,5 h. La mezcla se filtro y se lavo con metanol. El filtrado se purifico por Rp-HPLC (pH = 10) para proporcionar el producto deseado (80 mg, 45,54 %). LCMS (M+H)+: m/z = 231,4; LCMS (M+H+H2<O)+: m/z = 249,3.

Etapa 2: N-Metil-5-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[ 1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]piridin-2-carboxamida

imagen28

Una mezcla de 5-(3-amino-1,2,4-triazin-6-il)-N-metilpiridin-2-carboxamida (Etapa 1, 6,5 g, 0,022 mol) y 1-(2-cloro-1- hidroxi-3-quinolin-6-ilpropil)pirrolidin-2,5-diona (8,71 g, 0,0273 mol, Ejemplo 1, Etapa 7) en 1,2-etanodiol (100 ml) se agito a 120 °C durante una noche. La mezcla de reaction se concentro. La mezcla se neutralizo a pH = 10 con metilamina en una solution de THF (2,0 M), y despues se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre una columna de gel de sflice con MeOH al 5 % en diclorometano para proporcionar el producto deseado que se contamino con parte del material de partida. El producto se disolvio en MeOH al 10 % en diclorometano, y se concentro hasta un volumen de aproximadamente 2 ml. El solido resultante se filtro, se lavo con MeOH (2 ml) para proporcionar el producto puro (4,50 g, 50 %). El producto se trato con HCl 2 N (acuoso) y acetonitrilo, y se seco por liofilizacion para dar el producto deseado en forma de la sal HCl. LCMS (M+H)+: m/z = 396,4. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 9,40 (s, 1H), 9,27 (s, 1H), 9,20 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 9,10 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,64 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,26 (d, J =

5

10

15

20

25

30

35

40

45

8,0 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 8,0, Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,17 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,03 (dd, J = 8,0, 5,5 Hz, 1 H), 4,76 (s, 2H), 2,81 (s, 3H).

*Ejemplo 5

N,2-Dimetil-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida

imagen29

Etapa 1: 4-Bromo-N,2-dimetilbenzamida

Se purifico por RP-HPLC (pH = 2) para proporcionar el producto deseado (150 mg) en forma de la sal TFA. LCMS (M+H)+: m/z = 409,3,1H RMN (400 MHz, CD3OD): 9,64 (s, 1H), 9,21 (d, J = 5,0, 1H), 9,18 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,32 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,27 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,12 (dd, J = 9,0, 5,0, Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,57 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 4,86 (s, 2H), 2,92 (s, 3H), 2,48 (s, 3H).

Ejemplo A

Ensayos de enzima cinasa c-Met in vitro

Los compuestos de la invention se exploraron in vitro para determinar su capacidad de inhibir la actividad de la cinasa c-Met. Los valores de CI50 para la inhibition de la cinasa c-Met se determinaron como se describe en la bibliograffa, con algunas modificaciones (Wang, X. et al., Mol Cancer Ther. 2003, 2(11):1085-1092; Calic, M. et al., Croatica Chemical ACTA. 2005, 78(3):367-374). Brevemente, se uso protefna de fusion del dominio catalftico de c- Met marcada con histidina (Invitrogen, n.° PV3143) para el ensayo. Las mediciones de CI50 se basaron en el grado de fosforilacion de la poli Glu-Tyr (Sigma-Aldrich, n.° P0275) que se aplico como recubrimiento (0,01 mg/por pocillo) en microplacas de 96 pocillos (R&D Systems, n.° DY990). La reaction se realizo en 50 gl de una solution que contenfa HEPES 50°mM (pH 7,5), MnCh 10°mM, MgCh 10°mM, DTT 0,5°mM, NasVO4 100°gM, ATP 5°gM (Cell Signaling Technology, n.° 9804 ) y diluciones en serie del compuesto de ensayo. La reaccion se prolongo durante 25 minutos a 30 °C. Despues de finalizada la reaccion, se desecharon los contenidos de las placas. Despues, las placas se lavaron con TBS-T (250 gl/pocillo, 5 veces) y despues se bloquearon con TBS-T que contenfa bSa al 1 % durante 2 horas. El contenido de las placas se desecho y despues se anadieron 100 gl (por pocillo) de anticuerpo anti-fosfo-tirosina marcado con peroxidasa (Sigma, n.° A5964) diluido (1:60.000) en TBS-T que contenfa BSA al 1 % y se incubaron durante 1 hora. Las placas se lavaron con TBS-T (250 gl/pocillo, 5 veces) seguido de la reaccion de color usando 100 gl (mezcla 1:1) de H2O2 y tetrametilbenzidina (R&D Systems, n.° DY999). La reaccion se detuvo en minutos con 100 gl de H2SO4 2 N. La densidad optica se midio inmediatamente usando un lector de microplacas a 450 nm con correction de longitud de onda a 540 nm. Los valores de CI50 se calcularon con el software GraphPad Prism. El intervalo lineal (es decir, el perfodo de tiempo durante el cual la tasa se mantuvo equivalente a la tasa inicial) se determino para la cinasa y se realizaron determinaciones de CI50 dentro de este intervalo.

Wang, X., et al. Potent and selective inhibitors of the Met [hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF) receptor] tyrosine kinase block HGF/SF-induced tumor cell growth and invasion. Mol. Cancer Ther. 2003, 2(11):1085-1092.

Calic, M., et al. Flavonoids as inhibitors of Lck and Fyn kinases. Croatica Chemica ACTA. 2005, 78(3):367-374.

Los resultados de CI50 para los compuestos de la invencion se muestran a continuation:

Compuesto

CI50

Formula I

0,1-1,0 nM

Formula II

0,1-1,0 nM

Formula III

0,1-1,0 nM

Formula IV

0,1-1,0 nM

Formula V

0,1-1,0 nM

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Ejemplo B

Ensayos de proliferacion/supervivencia celular

Pueden obtenerse estirpes celulares que representan diversos canceres humanos (SNU-1 y SUN-5 gastrico, A549 y NCI-H441 de pulmon, U-87 glioblastoma, HT-29 de colon, 786-O de rinon, PC-3 pancreatico) de la American Type Culture Collection y mantenerse de forma habitual en medios y condiciones de cultivo recomendados por la ATCc. La densidad celular optima utilizada en el ensayo de proliferacion/supervivencia puede predeterminarse para estirpes celulares individuales. Los compuestos se exploran para determinar su capacidad de inhibir la proliferacion/supervivencia celular y se determinan los valores de CI50. A continuacion se presentan los protocolos de muestra para los ensayos de proliferacion/supervivencia celular de SNU-5 y SNU-1. Las celulas SNU-5 y SNU-1 se siembran en placas de cultivo celular de 96 pocillos a 4000 celulas/pocillo y 2000 celulas/pocillo, respectivamente, en los medios apropiados que contienen SFB al 2 % y se complementan con diluciones en serie de compuestos individuales en un volumen final de 100 jl/pocillo. Despues de 72 horas de incubacion, se anaden 24 jl de reactivo CellTiter 96® AQueous One Solution (Promega, n.° G3581) a cada pocillo (concentration final = 333 jg/ml) y las placas se incuban durante 2 horas mas en una incubadora a 37 °C. La densidad optica se mide en el intervalo lineal usando un lector de microplacas a 490 nm con correction de longitud de onda a 650 nm. Los valores de CI50 se calculan con el software GraphPad Prism. Para los ensayos de proliferation usando celulas A549, NCI-H441, T-87, HT-29, 786-0 y PC-3, a las celulas primero se las priva de alimento durante 48 horas en condiciones de suero pobre (SFB al 0,1-0,5 % en medio de cultivo apropiado), despues, se tratan con diferentes concentraciones de compuestos durante 2 horas. Despues de tratar las celulas con HGF (50 ng/ml) (R&D, n.° 294-HGN) durante 24 horas, se anade reactivo CellTiter 96® AQueous One Solution y las placas se incuban durante 2 horas. Los resultados se registran con un lector de placas.

Ejemplo C

Ensayos de fosforilacion de c-Met basados en celulas

El efecto inhibidor de los compuestos sobre la fosforilacion de c-Met en estirpes celulares pertinentes (estirpes celulares SNU-5 de cancer gastrico, A549 y NCI-H441 de cancer de pulmon, U-87 de glioblastoma, HT-29 de cancer de colon, 786-S de cancer de rinon y PC-3 de cancer de pancreas y la estirpe celular HUVEC) pueden evaluarse mediante el analisis de inmunotransferencia y ensayos de fosforilacion de c-Met basados en ELISa. Las celulas se cultivan en medios de cultivo apropiados y se tratan con diversas concentraciones de compuestos individuales. Para las celulas SNU-5, HT-29, 786-0, las celulas se cultivan en medios apropiados complementados con SFB al 0,2 % o al 2 % y se tratan con compuestos durante 3-4 horas. Se preparan extractos de protelnas de celulas enteras usando reactivos y un protocolo (n.° FNN0011) obtenidos de Biosource International con ligeras modificaciones. Brevemente, los extractos de protelna se hacen mediante incubacion en tampon de lisis con inhibidores de proteasa y fosfatasa [HEPES 50 mM (pH 7,5), NaCl 100°mM, MgCh 1,5°mM, glicerol al 10 %, Triton X-100 al 1 %, ortovanadato de sodio 1°mM, fluoruro de sodio 1°mM, aprotinina (2 jg/ml), leupeptina (2 jg/ml), pepstatina A (2 jg/ml) y fluoruro de fenilmetilsulfonilo (1°mM)] a 4 °C. Se eliminan los restos celulares de los extractos de protelna por centrifugation a 14.000 x g durante 20 minutos. Para las celulas A549, H441, U-87 y PC-3, a las celulas se las priva de suero (SFB al 0,2 %) durante al menos 24 horas, despues, se pretratan con diversas concentraciones de compuestos durante 1 hora. Se preparan extractos de celulas enteras despues de que las celulas se trataran con HGF (50 ng/ml) durante 10 minutos.

Analisis de inmunotransferencia

Se obtienen anticuerpos pertinentes de fuentes comerciales: anticuerpos policlonales de conejo que inclulan anti-c- Met humana (Santa Cruz Biotechnology, n.° sc-161) y anti-c-Met fosforilada (Biosource International, pY1230/4/5 y pY1003). Para la inmunotransferencia, se resuelven 10-20 jg de extractos de protelnas de las condiciones de tratamiento individual por electroforesis en gel de SDS-PAGE al 10 % y se electrotransfieren a una membrana de nitrocelulosa (o PVDF). La membrana se bloquea en PBS que contiene leche al 3 % y Tween-20 al 0,1 % durante 1 hora y despues se incuba con anticuerpos anti-c-Met primarios en solution de bloqueo durante 1 hora. Despues de 3 lavados, la membrana se incuba con anticuerpos secundarios de conjugados con rabano rusticano apropiados durante 1 hora. Despues del lavado final, la mancha de transferencia se incuba con reactivo de detection de quimioluminiscencia durante 5 minutos y se expone a pellcula de rayos X. Las imagenes se exploran, se cuantifican y se corrigen con c-Met total y se calculan los valores de CI50. Los compuestos que tienen una CI50 de 10 jM o menos se consideran activos.

La tasa inicial se determino para la cinasa y las determinaciones de CI50 se realizaron dentro de este intervalo.

Wang, X., et al. Potent and selective inhibitors of the Met [hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF) receptor] tyrosine kinase block HGF/SF-induced tumor cell growth and invasion. Mol. Cancer Ther. 2003, 2(11):1085-1092.

Calic, M., et al. Flavonoids as inhibitors of Lck and Fyn kinases. Croatica Chemica ACTA. 2005, 78(3):367-374.

Los resultados de CI50 para los compuestos de la invencion se muestran a continuacion (los compuestos marcados con un asterisco (*) se incluyen por referencia):

Compuesto

CI50

Formula I

0,1-1,0 nM

*Formula II

0,1-1,0 nM

Formula III

0,1-1,0 nM

*Formula IV

0,1-1,0 nM

*Formula V

0,1-1,0 nM

5 Ejemplo B

Ensayos de proliferacion/supervivencia celular

Pueden obtenerse estirpes celulares que representan diversos canceres humanos (SNU-1 y SUN-5 gastrico, A549 y 10 NCI-H441 de pulmon, U-87 glioblastoma, HT-29 de colon, 786-O de rinon, PC-3 pancreatico) de la American Type Culture Collection y mantenerse de forma habitual en medios y condiciones de cultivo recomendados por la ATCc. La densidad celular optima utilizada en el ensayo de proliferacion/supervivencia puede predeterminarse para estirpes celulares individuales. Los compuestos se exploran para determinar su capacidad de inhibir la proliferacion/supervivencia celular y se determinan los valores de CI50. A continuacion se presentan los protocolos de 15 muestra para los ensayos de proliferacion/supervivencia celular de SNU-5 y SNU-1. Las celulas SNU-5 y SNU-1 se siembran en placas de cultivo celular de 96 pocillos a 4000 celulas/pocillo y 2000 celulas/pocillo, respectivamente, en los medios apropiados que contienen SFB al 2 % y se complementan con diluciones en serie de compuestos individuales en un volumen final de 100 pl/pocillo. Despues de 72 horas de incubacion, se anaden 24 pl de reactivo CellTiter 96® AQueous One Solution (Promega, n.° G3581) a cada pocillo (concentration final = 333 pg/ml) y las 20 placas se incuban durante 2 horas mas en una incubadora a 37 °C. La densidad optica se mide en el intervalo lineal usando un lector de microplacas a 490 nm con correction de longitud de onda a 650 nm. Los valores de CI50 se calculan con el software GraphPad Prism. Para los ensayos de proliferation.

Claims (12)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto que se selecciona entre:

   2-fluoro-N-[(2R)-2-hidroxipropil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida; y

   2-cloro-N-[(1s)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-

   il]benzamida;

   y sales farmaceuticamente aceptables de cualquiera de los mencionados.
2. 2. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1 que es 2-cloro-N-[(1S)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etil]-4-[7- (quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
3. 3. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1 que es 2-fluoro-N-[(2R)-2-hidroxipropil]-4-[7-(quinolin-6- ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
4. 4. Una composicion que comprende un compuesto de la reivindicacion 1, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y al menos un vehlculo farmaceuticamente aceptable.
5. 5. Un metodo in vitro de inhibicion de la actividad proliferativa de una celula que comprende poner en contacto dicha celula con un compuesto de la reivindicacion 1, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
6. 6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en la inhibicion del crecimiento tumoral.
7. 7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en la inhibicion de la metastasis tumoral.
8. 8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad asociada a la desregulacion de la via de senalizacion HGF/c-MET.
9. 9. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 8, en el que dicha enfermedad es cancer, aterosclerosis, fibrosis pulmonar, fibrosis y regeneracion renales, enfermedad hepatica, trastorno alergico, enfermedad inflamatoria, enfermedad autoinmune, enfermedad cerebrovascular, enfermedad cardiovascular, o una afeccion asociada al trasplante de organos.
10. 10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de un cancer.
11. 11. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 10, en el que dicho cancer es un carcinoma, un sarcoma musculoesqueletico, un sarcoma de tejido blando o una neoplasia hematopoyetica.
12. 12. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 10, en el que dicho cancer es cancer de vejiga, cancer de mama, cancer del cuello uterino, cancer colangiocarcinoma, cancer colorrectal, cancer de esofago, cancer gastrico, cancer de cabeza y cuello, cancer de rinon, cancer de hlgado, cancer de pulmon, cancer nasofarlngeo, cancer de ovario, cancer de pancreas, cancer de prostata, cancer de tiroides, osteosarcoma, sarcoma sinovial, rabdomiosarcoma, HFM/fibrosarcoma, leiomiosarcoma, sarcoma de Kaposi, mieloma multiple, linfoma, leucemia de linfocitos T del adulto, leucemia mielogena aguda, leucemia mieloide cronica, glioblastoma, astrocitoma, melanoma, mesotelioma o tumor de Wilms.