ES2654111T3

ES2654111T3 - Fragmentos p97 con actividad de transferencia

Info

Publication number: ES2654111T3
Application number: ES12746240.6T
Authority: ES
Inventors: Wilfred Jefferies; Mei Mei TIAN; Timothy Vitalis
Original assignee: Bioasis Technologies Inc
Current assignee: Bioasis Technologies Inc
Priority date: 2011-08-05
Filing date: 2012-08-03
Publication date: 2018-02-12
Anticipated expiration: 2032-08-03
Also published as: WO2013022738A1; US20130058873A1; AU2012294673A1; EP3321281A1; EP3321281B1; US9161992B2; US20150056218A1; HK1198332A1; NO2739649T3; EP2739649B1; EP2739649A1; PT2739649T; US8722019B2; AU2012294673B2; DK2739649T3; PL2739649T3; CA2842492A1

Abstract

Un conjugado, que comprende un polipéptido p97 aislado que consiste en (a) una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEQ ID NO: 1 y 5-6, (b) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 97 % de identidad a lo largo de su longitud con una secuencia de (a), o (c) una secuencia de aminoácidos que difiere de una secuencia de (a) por la adición o la eliminación de 1, 2, 3, 4, o 5 restos del extremo N y/o del extremo C, donde el polipéptido p97 está unido covalente u operativamente a un agente para formar un conjugado p97-agente, y en donde el polipéptido p97 es capaz de unirse al receptor del p97.

Description

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agente que es al menos un 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% puro, incluyendo todos los decimales entre ellos, como se mide, por ejemplo y sin significar limitación, por cromatografía líquida de alta presión (HPLC), una forma bien conocida de cromatografía en columna que se utiliza frecuentemente en bioquímica y química analítica, para separar, identificar y cuantificar compuestos.

5 Los términos “polipéptido” y “proteína” se utilizan de manera intercambiable en el presente documento para referirse a un polímero de restos de aminoácidos y a variantes y análogos sintéticos de los mismas. Por lo tanto, estos términos se aplican a polímeros de aminoácidos en los que uno o más restos de aminoácidos son aminoácidos sintéticos no de origen natural, tales como un análogo químico de un aminoácido de origen natural correspondiente, así como a polímeros de aminoácidos de origen natural. Los polipéptidos descritos en el presente documento no se limitan a una longitud específica del producto; por lo tanto, los péptidos, oligopéptidos, y proteínas se incluyen en la definición de polipéptido, y dichos términos se pueden utilizar de manera intercambiable en el presente documento a menos de que se indique específicamente otra cosa. Los polipéptidos descritos en el presente documento también pueden comprender modificaciones después de la expresión, tales como glicosilaciones, acetilaciones,

15 fosforilaciones, y similares, así como otras modificaciones conocidas en la técnica, tanto de origen natural como no natural. Un polipéptido puede ser una proteína completa, o una subsecuencia, fragmento, variante, o derivado de la misma.

Un enlace “fisiológicamente escindible” o “hidrolizable” o “degradable” es un enlace que reacciona con agua (es decir, se hidroliza) en condiciones fisiológicas. La tendencia a hidrolizarse de un enlace en agua dependerá no solamente del tipo de enlace general que conecta dos átomos centrales, sino también de los sustituyentes unidos a esos átomos centrales. Los enlaces inestables hidrolíticamente apropiados o débiles incluyen, pero no se limitan a: éster carboxilato, éster fosfato, anhídrido, acetal, cetal, aciloxialquil éter, imina, ortoéster, tioéster, carbonato, e hidrazona, peptídicos y oligonucleotídicos.

25 Un “enlazador liberable” incluye, pero no se limita a, un enlazador escindible fisiológicamente y un enlazador enzimáticamente degradable. Por lo tanto, un “enlazador liberable” es un enlazador que puede sufrir una hidrólisis espontánea, o una escisión por cualquier otro mecanismo (por ejemplo, catalizada por una enzima, catalizada por un ácido, catalizada por una base, y etc.) en condiciones fisiológicas. Por ejemplo, un “enlazador liberable” puede implicar una reacción de eliminación que tiene una abstracción básica de un protón (por ejemplo, un átomo de hidrógeno ionizable, Hα), como la fuerza directora. Para los fines del presente documento un “enlazador liberable” es sinónimo de un “enlazador degradable”. Un “enlazador degradable enzimáticamente” incluye un enlace, por ejemplo, una secuencia de aminoácidos, que es el sujeto de la degradación por una o más enzimas, por ejemplo, peptidasas

o proteasas. En realizaciones p articulares, un enlazador liberable tiene una semivida a pH 7,4, 25 ⁰C, por ejemplo,

35 un pH fisiológico, temperatura corporal humana (por ejemplo, in vivo), de aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 1 hora, aproximadamente 2 horas, aproximadamente 3 horas, aproximadamente 4 horas, aproximadamente 5 horas, aproximadamente 6 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 18 horas, aproximadamente 24 horas, aproximadamente 36 horas, aproximadamente 48 horas, aproximadamente 72 horas, o aproximadamente 96 horas o menos.

La expresión “secuencia de referencia” se refiere en general a una secuencia codificante de ácido nucleico, o una secuencia de aminoácidos, con la que se va a comparar otra secuencia. Todas las secuencias de polipéptido y polinucleótido descritas en el presente documento se incluyen como secuencias de referencia, incluyendo las descritas por su nombre y las descritas en el listado de secuencias.

45 La expresión “identidad de secuencia” o, por ejemplo, que comprende una “secuencia un 50 % idéntica a”, como se utiliza en el presente documento, se refiere a la extensión en que las secuencias son idénticas basándose en nucleótido a nucleótido o basándose en aminoácido por aminoácido en una ventana de comparación. Por lo tanto, un “porcentaje de identidad de secuencia” se puede calcular comparando dos secuencias alineadas óptimamente en una ventana de comparación, determinando el número de posiciones en el cual la base de ácido nucleico (por ejemplo, A, T, C, G, I) o el resto de aminoácido idéntico (por ejemplo, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gin, Cys y Met) se encuentran en ambas secuencias para dar lugar al número de posiciones coincidentes, dividiendo el número de posiciones coincidentes por el número total de posiciones de la ventana de comparación (es decir, el tamaño de la ventana), y multiplicando el resultado por 100 para dar lugar al

55 porcentaje de identidad de secuencia. Se incluyen nucleótidos y polipéptidos que tienen al menos aproximadamente un 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% o 100% de identidad de secuencia con cualquiera de las secuencias de referencia que se describen en el presente documento (véase, por ejemplo, el Listado de Secuencias), normalmente cuando la variante polipeptídica mantiene al menos una actividad biológica del polipéptido de referencia.

Las expresiones que se utilizan para describir las relaciones de secuencia entre dos o más polinucleótidos o polipéptidos incluyen “secuencia de referencia”, “ventana de comparación”, “identidad de secuencia”, “porcentaje de identidad de secuencia” y “identidad sustancial”. Una “secuencia de referencia” tiene al menos 12 pero frecuentemente 15 a 18 y a menudo al menos 25 unidades monoméricas, incluyendo nucleótidos y restos de

65 aminoácidos, de longitud. Debido que dos polinucleótidos pueden comprender cada uno (1) una secuencia (es decir, solo una parte de la secuencia del polinucleótido completo) que sea similar entre los dos polinucleótidos, y (2) una

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secuencia que sea divergente entre los dos polinucleótidos, las comparaciones de secuencia entere dos (o más) polinucleótidos se llevan a cabo comparando las secuencias de los dos polinucleótidos en una “ventana de comparación” para identificar y comparar regiones locales de similitud de secuencia. Una “ventana de comparación” se refiere a un segmento conceptual de al menos 6 posiciones contiguas, habitualmente aproximadamente 40 a 5 aproximadamente 100, más habitualmente aproximadamente 100 a aproximadamente 150 en la que la secuencia se compara con una secuencia de referencia del mismo número de posiciones contiguas después de alinearse óptimamente las dos secuencias. La ventana de comparación puede comprender adiciones o eliminaciones (es decir, huecos) de aproximadamente un 20 % o menos en comparación con la secuencia de referencia (que no comprende adiciones o eliminaciones) para el alineamiento óptimo de las dos secuencias. El alineamiento óptimo de las secuencias para el alineamiento de una ventana de comparación se puede llevar a cabo por implementaciones de algoritmos computarizados (GAP, BESTFIT, FASTA, y TFASTA en el Paquete de Software de Wisconsin Genetics Edición 7.0, Genetics Computer Group, 575 Science Drive Madison, WI, USA) o por inspección y el mejor alineamiento (es decir, el que resulta del mayor porcentaje de homología en la ventana de comparación) generado por cualquiera de los distintos métodos seleccionados. También se puede hacer referencia a la familia de programas

15 BLAST como por ejemplo los que se desvelan en Altschul et al., Nucl. Acids Res. 25:3389, 1997. Una exposición detallada del análisis de secuencia se puede encontrar en la Unidad 19.3 de Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology," John Wiley & Sons Inc, 1994-1998, Capítulo 15.

Por “estadísticamente significativo” se quiere decir que el resultado es improbable que ocurra por casualidad. La significación estadística se puede determinar por cualquier método conocido en la técnica. Las medidas utilizadas comúnmente de significación incluyen el valor p, que es la frecuencia o probabilidad con la que se produciría un evento observado, si la hipótesis nula fuera verdad. Si el valor obtenido es menor que el nivel de significación, entonces la hipótesis nula es rechazada. En casos simples, el nivel de significación se define como un valor de p de 0,05 o menos.

25 El término “solubilidad” se refiere a la propiedad de un fragmento del polipéptido p97 o un conjugado para disolverse en un disolvente líquido y formar una solución homogénea. La solubilidad se expresa normalmente como una concentración sea por peso del soluto por unidad de volumen del disolvente (g de soluto por kg de disolvente, g por dl (100 ml), mg/ml, etc.), molaridad, molalidad, fracción molar u otras descripciones similares de concentración. La cantidad de equilibrio máximo de soluto que se puede disolver por cantidad de disolvente es la solubilidad de ese soluto en ese disolvente en las condiciones especificadas, incluyendo temperatura, presión, pH y la naturaleza del disolvente. En ciertas realizaciones, la solubilidad se mide a pH fisiológico u otro pH, por ejemplo, a un pH 5,0, pH 6,0, pH 7,0, o pH 7,4. En ciertas realizaciones, la solubilidad se mide en agua o un tampón fisiológico tal como PBS

o NaCl (con o sin NaP). En realizaciones específicas, la solubilidad se mide a un pH relativamente bajo (por ejemplo,

35 un pH de 6,0) y sal relativamente más alta (por ejemplo, 500 mM de NaCl y 10 mM de NaP). En ciertas realizaciones, la solubilidad se mide en un fluido biológico (disolvente) tal como la sangre o el suero. En ciertas realizaciones la temperatura puede ser aproximadamente la temperatura ambiente (por ejemplo, aproximadamente 20, 21, 22, 23, 24, 25 ⁰C) o aproximadamente la temperatura corporal (~ 37 ⁰C). En ciertas realizaciones, un polipéptido o conjugado de p97 tiene una solubilidad de al menos aproximadamente 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, o 30 mg/ml a temperatura ambiente o a aproximadamente 37 ⁰C.

Un “sujeto” como se utiliza en el presente documento, incluye cualquier animal que presenta un síntoma. o tiene el riesgo de presentar un síntoma que se puede tratar o diagnosticar con un conjugado de p97 de la invención. Los

45 sujetos (pacientes) adecuados incluyen animales de laboratorio (tales como ratón, rata, conejo o cobaya), animales de granja, y animales domésticos o mascotas (tales como perros y gatos). Se incluyen los primates no humanos y, preferentemente pacientes humanos.

“Sustancialmente” o “esencialmente” significa casi total o completamente, por ejemplo, un 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más de una cantidad determinada.

“Sustancialmente libre” ser refiere a la ausencia casi completa o completa de una cantidad determinada, por ejemplo, menos de aproximadamente un 10 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % o menos de una cantidad determinada. Por ejemplo, ciertas composiciones pueden estar “sustancialmente libres” de proteínas celulares,

55 membranas, ácidos nucleicos, endotoxinas, u otros contaminantes.

“Tratamiento” o “tratar”, como se utiliza en el presente documento, incluye cualquier efecto deseable sobe los síntomas o patología de una enfermedad o afección, y puede incluir incluso mínimos cambios o mejoras en uno o más marcadores medibles de la enfermedad o afección que se va a tratar. “Tratamiento” o “tratar” no indica necesariamente la erradicación completa o la cura de la enfermedad o afección, o los síntomas asociados de las mismas. El sujeto que recibe este tratamiento es cualquier sujeto que necesita el mismo. Los marcadores a modo de ejemplo de la mejora clínica serán evidentes para los expertos en la técnica.

La expresión “de tipo silvestre” se refiere a un gen o producto genético que tiene las características de este gen o

65 producto genético cuando se aísla de una fuente de origen natural. Un gen o producto genético de tipo silvestre (por ejemplo un polipéptido) es el que se observa más frecuentemente en una población y por lo tanto se designa

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arbitrariamente como la forma “normal” o “de tipo silvestre” del gen.

A lo largo de la presente memoria descriptiva, a menos de que el contexto necesite otra cosa, la palabra “comprender”, o variaciones tales como “comprende” o “que comprende”, se entenderá que implica la inclusión de 5 un elemento o número entero establecido o grupos de elementos o números enteros pero no la exclusión de cualquier otro elemento o número entero o grupo de elementos o números enteros.

Se pueden utilizar técnicas convencionales para el ADN recombinante, síntesis de oligonucleótido, y cultivo tisular y transformación (por ejemplo, electroporación, lipofección). Las reacciones enzimáticas y técnicas de purificación se

10 pueden llevar a cabo de acuerdo con las especificaciones del fabricante o como se consigue comúnmente en la técnica o como se describe en el presente documento. Estas y las técnicas y procedimientos relacionados se pueden llevar a cabo en general de acuerdo con métodos convencionales bien conocidos en la técnica y como se describen en distintas referencias generales y más específicas que se citan y exponen a lo largo de la presente memoria descriptiva. A menos de que se proporcionen definiciones específicas, la nomenclatura utilizada en

15 conexión con, y los procedimientos y técnicas de laboratorio de biología molecular, química analítica, química orgánica sintética, y química medicinal y farmacéutica que se describen en el presente documento se conocen bien y se utilizan comúnmente en la técnica. Las técnicas convencionales se pueden utilizar para la tecnología recombinante, de biología molecular, microbiológica, síntesis química, análisis químicos, preparación farmacéutica, formulación, y suministro, y paciente de pacientes.

20 COMPOSICIONES Y PREPARACIÓN DE LAS MISMAS

En general los conjugados de un fragmento de p97 se puede preparar utilizando técnicas bien conocidas en la técnica. Existen numerosas estrategias para conjugación o entrecruzamiento químico de agentes para un polipéptido

25 tal como el fragmento de p97, y un experto en la técnica puede determinar qué método es el más apropiado para conjugar un agente particular. El método empleado debe ser capaz de unir el agente con el fragmento p97 sin interferir con la capacidad del fragmento p97 para unirse a su receptor, preferentemente sin influenciar en la biodistribución del fragmento p97-agente en comparación con el fragmento p97 solo, y/o sin alterar significativamente la actividad deseada del agente (sea terapéutica o profiláctica o similar) una vez suministrado. Un

30 método particularmente preferido para unir moléculas complejas al fragmento p97 es la reacción de unión cruzada SATA/sulfo-SMCC (Pierce (Rockford, IL)). Los métodos para unir de manera cruzada las proteínas y péptidos son bien conocidos por los expertos en la técnica. Hay varios cientos de enlazadores de cruzamiento para conjugar un compuesto de interés al fragmento de p97 o con una sustancia que se une al fragmento p97 (véase, por ejemplo, Chemistry of Protein Conjugation and

35 Crosslinking, Shans Wong, CRC Press, Ann Arbor (1991) y Patente de EE. UU. Nº 5.981.194 y Publicaciones de Patente PCT Nº WO 02/13843 y WO 01/59459). Se pueden utilizar muchos reactivos y enlazadores de cruzamiento para preparar conjugados de un agente activo y un fragmento de p97. Véase, por ejemplo, Hermanson, GT et al. Bioconjugate Techniques, Academic Press, (1996). El enlazador de cruzamiento se escoge en general basándose en los grupos funcionales reactivos disponibles o insertados en el agente terapéutico. Además, si no hay grupos

40 reactivos, se puede utilizar un enlazador de cruzamiento fotoactivable. En ciertos casos, puede ser deseable incluir un espaciador entre el fragmento p97 y el agente. En una realización, el fragmento p97 y los agentes terapéuticos proteicos se pueden conjugar por la introducción de un grupo sulfhidrilo en el fragmento p97 y por la introducción de un enlazador de cruzamiento que contienen un grupo tiol reactivo en el compuesto proteico mediante grupos carboxílicos (Wawizynczak y Thorpe in Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimaging and Therapy of

45 Cancer, Vogel (Ed.) Oxford University Press, pp. 28-55 (1987); y Blair y Ghose (1983) J. Immunol. Methods 59:129). En algunas realizaciones, el enlazador es vulnerable a la hidrólisis al pH ácido del lisosoma de manera que se libera el agente del fragmento p97 y/o el enlazador.

En algunas realizaciones de la presente invención, el conjugado fragmento p97-agente es una proteína de fusión del

50 fragmento p97. Las proteínas de fusión se pueden preparar utilizando técnicas convencionales conocidas en la técnica. Normalmente se une una molécula de ADN que codifica el fragmento p97 o una parte del mismo a una molécula de ADN que codifica el compuesto proteico. La construcción de ADN quimérico, junto con los elementos reguladores adecuados se puede clonar en un vector de expresión y se expresa en un huésped adecuado. Las proteínas de fusión resultantes contienen el fragmento p97 fusionado al compuesto proteico seleccionado.

55 Cuando se utiliza un enlazador, el enlazador es preferentemente un resto orgánico construido para que contenga una estructura alquilo, arilo, y/o aminoácido, y que contenga un enlace amida, éter, éster, hidrazona, disulfuro o cualquier combinación de los mismos. Los enlaces que contienen aminoácidos, éter y amida que unen los componentes son estables en condiciones de pH fisiológico normalmente 7,4 en el suero. Los enlaces preferidos

60 son los que contienen ésteres o hidrazonas que son estables al pH del suero, pero que se hidrolizan para liberar el fármaco cuando se exponen a un pH lisosómico. Se prefieren los enlaces disulfuro debido a que son sensibles a la escisión reductora. Además, los enlazadores aminoacídicos se pueden diseñar para que sean sensibles a la escisión por enzimas específicas en el órgano diana deseado o más preferentemente, los propios lisosomas. Los enlazadores a modo de ejemplo se describen en Blattler et al. (19S5) Biochem. 24:1517-1524; King et al (1986)

65 Biochem. 25:5774-5779; Srinivasachar y Nevill (1989) Biochem. 28:2501-2509.

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Las secuencias de ADN que codifican el fragmento p97 se puede expresar mediante una amplia variedad de células huésped procariotas y eucariotas, incluyendo pero sin limitarse a, células bacterianas, de mamífero, de levaduras, fúngicas, víricas, vegetales y de insecto. Los métodos para transformar o transfectar dichas células para expresar un ADN ajeno son bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Itakura et al, Patente de EE. UU. Nº 4.704.362;

5 Hinnen et al. (1978) PNAS USA 75:1929-1933; Murray et al, Patente de EE. UU. Nº 4.801.542; Upshall et al, Patente de EE. UU. Nº 4.935.349; Hagen et al, Patente de EE. UU. Nº 4.784.950; Axel et al, Patente de EE. UU. Nº 4.399.216; Goeddel et al, Patente de EE. UU. Nº 4.766.075; y Sambrook et al, supra).

Pueden conseguirse los promotores, terminadores, y métodos para la introducción de los vectores de expresión de un tipo apropiado en, por ejemplo, células vegetales, aviares, y de insecto por los expertos en la técnica. El fragmento de p97 producido recombinantemente puede purificarse adicionalmente como se ha descrito con mayor detalle posteriormente.

La forma soluble de p97 se puede preparar cultivando células que contienen el p97 soluble mediante la fase log del

15 crecimiento celular y recolectar el sobrenadante. Preferentemente, el sobrenadante se recolecta antes del momento en el que las células pierdan la viabilidad. El p97 soluble se puede purificar entonces como se ha descrito posteriormente, con el fin de obtener el p97 soluble. Los métodos adecuados para purificar el p97 soluble se puede seleccionar basándose en la propiedad hidrófila del p97 soluble. Por ejemplo, el p97 soluble puede obtenerse fácilmente por separación en fases por Triton X-1 14. Una vez que el p97 soluble se ha purificado, se puede digerir con, por ejemplo, hidroxilamina como se describe en los Ejemplos para generar el fragmento p97.

Agentes terapéuticos

Como se ha señalado anteriormente, ciertas realizaciones comprenden un polipéptido p97 que está unido a un

25 agente terapéutico o fármaco de interés, por ejemplo, una molécula pequeña o un polipéptido (por ejemplo, un péptido, un anticuerpo). También se incluyen conjugados que comprenden más de un agente terapéutico de interés, por ejemplo, un fragmento p97 conjugado con un anticuerpo y una molécula pequeña.

Se prefieren enlaces covalentes, sin embargo, también se pueden emplear enlaces no covalentes, incluyendo los que se utilizan interacciones proteína-ligando no covalentes relativamente fuertes, tales como la interacción entre biotina y avidina. Los enlaces opcionales también están incluidos, que no necesitan imprescindiblemente una interacción directamente covalente o no covalente entre el fragmento p97 y el agente de interés; ejemplos de dichos enlaces incluyen mezclas de liposomas que comprenden un polipéptido p97 y un agente de interés. Los métodos a modo de ejemplo de generación de conjugados proteicos se describen en el presente documento, y otros métodos

35 se conocen bien en la técnica.

Las moléculas pequeñas a modo de ejemplo incluyen agentes citotóxicos, quimioterápicos, y anti-angiogénicos, por ejemplo, los que se han considerado útiles en el tratamiento de distintos cánceres, incluyendo cánceres del sistema nervioso central y cánceres que han metastatizado al sistema nervioso central. Las clases particulares de moléculas pequeñas incluyen, sin limitación, agentes alquilantes, anti-metabolitos, antraciclinas, antibióticos antitumorales, platinos, inhibidores de la topoisomerasa tipo I, topoisomerasa tipo II, alcaloides de la vinca, y taxanos.

Ejemplos específicos de moléculas pequeñas incluyen clorambucilo, ciclofosfamida, cilengitida, lomustina (CCNU), melfalan, procarbacina, tiotepa, carmustina (BCNU), enzastaurina, busulfan, daunorrubicina, doxorrubicina, gefitinib,

45 erlotinib idarrubicina, temozolomida, epirrubicina, mitoxantrona, bleomicina, cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, camptotecina, irinotecan, topotecan, amsacrina, etopósido, fosfato de etopósido, tenipósido, temsirolimus, everolimus, vincristina, vinblastina, vinorelbina, vindesina, CT52923, y paclitaxel, y sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.

Ejemplos adicionales de moléculas pequeñas incluyen los que se dirigen a proteína cinasas para el tratamiento de trastornos del sistema nervioso (por ejemplo, SNC), incluyendo imatinib, dasatinib, sorafenib, pazopanib, sunitnib, vatalanib, gefitinib, erlotinib, AEE-788, dicloroacetato, tamoxifeno, fasudil, SB-681323, y semaxanib (SU5416) (véase, Chico et al., Nat Rev Drug Discov. 8:829-909, 2009). Los ejemplos de moléculas pequeñas incluyen también donepizil, galantamina, memantina, rivastigmina, tacrina, rasigilina, naltrexona, lubiprostona, safinamida, istradefilina,

55 pimavanserina, pitolisant, isradipina, pridopidina (ACR16), tetrabenazina, y bexaroteno (por ejemplo, para el tratamiento de la Enfermedad de Alzheimer, Enfermedad de Parkinson, Enfermedad de Huntington); y acetato de glatirimer, fingolimod, mitoxantrona (por ejemplo, para tratar la MS). También se incluyen sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de los anteriores.

Ejemplos adicionales de moléculas pequeñas incluyen agentes alquilantes tales como tiotepa, ciclofosfamida (CITOX-AN™); sulfonatos de alquilo tales como busulfan, improsulfan y piposulfan; aziridinas tales como benzodopa, carbocuona, meturedopa, y uredopa; etileniminas y metilmelaminas que incluyen altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilolomelamina; mostazas nitrogenadas tales como clorambucilo, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, óxido hidroclorhídrico de 65 mecloretamina, melfalan, novembicina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza uracilo; nitrosoureas tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina; antibióticos tales como

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