ES2576684T3 - Compuestos de tiazol y oxazol bencenosulfonamida - Google Patents

Abstract

N-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida, que es un compuesto de la fórmula (Ia)**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCION

Compuestos de tiazol y oxazol bencenosulfonamida Campo de la invencion

La presente invencion se relaciona con un compuesto de tiazol benceno sulfonamida, composiciones que contienen 5 el mismo, as! como tambien procesos para la preparacion y metodos para utilizar dicho compuesto y composiciones.

Antecedentes de la invencion

Ambos receptores tirosina quinasa y serina/treonina quinasas se han implicado en las rutas de senalizacion celular que controlan la funcion, division, crecimiento, diferenciacion, y muerte celular (apoptosis) a traves de la fosforilacion reversible de los grupos hidroxilo de residuos de tirosina o serina y treonina, respectivamente, en las protelnas. En la 10 transduccion de senal, por ejemplo, las senales extracelulares se transducen a traves de la activacion del receptor de membrana, con amplificacion y propagation utilizando una coreografla compleja de las cascadas de fosforilacion de protelnas, y eventos de desfosforilacion de protelnas para evitar la senalizacion no controlada. Estas rutas de senalizacion se regulan altamente, a menudo mediante rutas de quinasa interconectadas y complejas donde cada quinasa puede en si misma ser regulada por una o mas quinasas y fosfatasas de protelnas. La importancia biologica 15 de estos sistemas finamente sintonizados es tal que una variedad de trastornos proliferativos celulares se han relacionado con defectos en una o mas de las diversas rutas de senalizacion celular mediadas por tirosina o serina/treonina quinasas.

Las tirosina quinasas receptoras (RTK) catalizan la fosforilacion de ciertos residuos de aminoacido tirosil en diversas protelnas, que incluyen a si mismas, que rigen el crecimiento, proliferation y diferenciacion celular.

20 En direction 3' de las diversas RTK se encuentran varias rutas de senalizacion, entre ellas esta la ruta de Ras-Raf- MEK-ERK quinasa. Actualmente se entiende que la activacion de las protelnas Ras GTPasa en respuesta a factores de crecimiento, hormonas, citoquinas, etc. estimula la fosforilacion y activacion de quinasas Raf. Estas quinasas luego fosforilan y activan la protelna intracelular quinasas MEK1 y MEK2, que a su vez fosforilan y activan otras protelnas quinasas, ERK1 y 2. Esta ruta de senalizacion, tambien conocida como la ruta de protelna quinasa 25 activada por mitogeno (MAPK) o cascada citoplasmatica, media las respuestas celulares a senales de crecimiento. La ultima funcion de esta es vincular la actividad del receptor en la membrana celular con la modification de objetivos citoplasmaticos o nucleares que regulan la proliferacion, diferenciacion y supervivencia celular. Se ha identificado que las mutaciones de diversas Ras GTPasas y la quinasa B-Raf pueden conducir a la activacion sostenida y constitutiva de la ruta MAPK, lo que en ultima instancia resulta en un aumento de la division y 30 supervivencia celular. Como consecuencia de esto, estas mutaciones se han ligado fuertemente a la creation, desarrollo y progresion de un amplio rango de canceres humanos. La funcion biologica de las quinasas Raf, y especlficamente aquella de B-Raf, en la transduccion de senal se describe en Davies, H., et al., Nature (2002) 9:1-6; Garnett, M.J. & Marais, R., Cancer Cell (2004) 6:313-319; Zebisch, A. & Troppmair, J., Cell. Mol. Life Sci. (2006) 63:1314-1330; Midgley, R.S. & Kerr, D.J., Crit. Rev. Onc/Hematol. (2002) 44:109-120; Smith, R.A., et al., Curr. Top. 35 Med. Chem. (2006) 6:1071-1089; and Downward, J., Nat. Rev. Cancer (2003) 3:11-22.

Las mutaciones de origen natural de la quinasa B-Raf que activan la senalizacion de la ruta MAPK se han encontrado en un gran porcentaje de melanomas humanos (Davies (2002) supra) y de canceres de tiroides (Cohen et al J. Nat. Cancer Inst. (2003) 95(8) 625-627 and Kimura et al Cancer Res. (2003) 63(7) 1454-1457), as! como en menores frecuencias, pero todavla significativas, en los siguientes:

40 adenocarcinoma de Barret (Garnett et al., Cancer Cell (2004) 6 313-319 and Sommerer et al Oncogene (2004) 23(2) 554-558),

carcinomas del tracto biliar (Zebisch et al., Cell. Mol. Life Sci. (2006) 63 1314-1330), cancer de mama (Davies (2002) supra),

cancer de cuello uterino (Moreno-Bueno et al Clin. Cancer Res. (2006) 12 (12) 3865-3866),

45 colangiocarcinoma (Tannapfel et al Gut (2003) 52 (5) 706 -712),

tumores del sistema nervioso central, que incluyen tumores primarios del SNC tales como glioblastomas, astrocitomas y ependimomas (Knobbe et al Acta Neuropathol. (Berl.) (2004) 108 (6) 467-470, Davies (2002) supra, y Garnett et al., Cancer Cell (2004) supra) y tumores secundarios del SNC (es decir, metastasis al sistema nervioso central de los tumores que se originan fuera del sistema nervioso central),

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cancer colorrectal, que incluye carcinoma de colon de intestino grueso (Yuen et al Cancer Res. (2002) 62 (22) 64516455, Davies (2002) supra y Zebisch et al., Cell. Mol. Life Sci. (2006),

cancer gastrico (Lee et al Oncogene (2003) 22 (44) 6942-6945),

carcinoma de cabeza y cuello, que incluye carcinoma de celulas epidermoides de cabeza y cuello (Cohen et al J. Nat. Cancer Inst. (2003) 95 (8) 625-627 y Weber et al Oncogene (2003) 22 (30) 4757 -4759),

canceres hematologicos que incluyen leucemias (Garnett et al., Cancer Cell (2004) supra, particularmente leucemia linfoblastica aguda (Garnett et al., Cancer Cell (2004) supra y Gustafsson et al Leucemia (2005) 19 (2) 310-312), leucemia mielogena aguda (AML) (Lee et al Leucemia (2004) 18 (1) 170-172, y Christiansen et al Leucemia (2005) 19 (12) 2232-2240), slndromes mielodisplasicos (Christiansen et al Leucemia (2005) supra) y leucemia mielogena cronica (Mizuchi et al Biochem. Biophys. Res. Commun. (2005) 326 (3) 645-651); linfoma de Hodgkin (Figl et al Arch. Dermatol. (2007) 143(4) 495-499), linfoma no Hodgkin (Lee et al Br. J. Cancer (2003) 89(10) 1958-1960), leucemia megacarioblastica (Eychene et al Oncogene (1995) 10 (6) 1159-1165) y mieloma multiple (Ng et al Br. J. Haematol. (2003) 123 (4) 637-645),

carcinoma hepatocelular (Garnett et al., Cancer Cell (2004),

cancer de pulmon (Brose et al Cancer Res. (2002) 62 (23) 6.997-7.000, Cohen et al J. Nat. Cancer Inst. (2003) supra y Davies (2002) supra), que incluye cancer de pulmon de celulas microclticas (Pardo et al EMBO J. (2006) 25 (13) 3078-3088) y cancer de pulmon de celulas no microclticas (Davies (2002) supra),

cancer de ovario (Russell y McCluggage J. Pathol. (2004) 203 (2) 617-619 y Davies (2002) supr), cancer endometrial (Garnett et al., Cancer Cell (2004) supra, y Moreno-Bueno et al Clin. Cancer Res. (2006) supra),

cancer pancreatico (Ishimura et al Cancer Lett. (2003) 199 (2) 169-173),

adenoma de pituitaria (De Martino et al J. Endocrinol. Invest. (2007) 30 (1) RC1-3),

cancer de prostata (Cho et al Int. J. Cancer (2006) 119 (8) 1858-1862),

cancer renal (Nagy et al Int. J. Cancer (2003) 106 (6) 980-981),

sarcoma (Davies (2002) supra), y

canceres de piel (Rodriguez-Viciana et al Science (2006) 311 (5765) 1287-1290 y Davies (2002) supra).

La sobreexpresion de c-Raf se ha vinculado con AML (Zebisch et al., Cancer Res. (2006) 66 (7) 3401-3408, y Zebisch (Cell. Mol. Life Sci. (2006)) y eritroleucemia (Zebisch et la., Cell. Mol. Life Sci. (2006).

En virtud de la funcion desempenada por las quinasas de la familia Raf en estos canceres y los estudios exploratorios con un rango de agentes precllnicos y terapeuticos, que incluyen uno dirigido selectivamente a inhibicion de la actividad de quinasa B-Raf (King A.J., et al., (2006) Cancer Res. 66:11100-11105), en general se acepta que los inhibidores de una o mas quinasas de la familia Raf seran utiles para el tratamiento de dichos canceres u otra afeccion asociada con la quinasa Raf.

Tambien se ha implicado la mutacion de B-Raf en otras afecciones, que incluyen slndrome cutaneo cardio-facio (Rodriguez-Viciana et al Science (2006) 311 (5765) 1287-1290) y enfermedad renal poliqulstica (Nagao et al Kidney Int. (2003) 63 (2) 427-437).

El documento WO2008/022286 describe compuestos de la formula

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en la que A se selecciona del grupo que consiste de arilo y heteroarilo; Ar y Ar se seleccionan independientemente del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo, y heteroarilo sustituido; R3 se selecciona del grupo que consiste de hidrogeno, alquilo, alquilo sustituido, alcoxi, alcoxi sustituido, halo, amino, amino sustituido, alquiltio alquiltio sustituido, sulfonilo sustituido, sulfinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, y heteroarilo sustituido; R6 se selecciona del grupo que consiste de hidrogeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, y heteroarilo sustituido; n es un entero desde 0 hasta 3; o su tautomero y/o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, con la condicion que A no es 1,3-tiazol-2-ilo. Se ensena que estos compuestos son inhibidores de quinurenina-3-monooxigenasa.

Resumen de la invencion

Se describen aqul compuestos de la formula (I):

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en donde: a es 0, 1, 2 o 3;

cada R1 es el mismo o diferente y se selecciona independientemente de halo, alquilo, haloalquilo, -OR6, -CO2R6, - NR6R7, y -CN;

El anillo A se selecciona de cicloalquilo C3-6, fenilo, heterociclo de 5 a 6 miembros y heteroarilo de 5 a 6 miembros, dicho heterociclo y dicho heteroarilo cada uno tiene 1 o 2 heteroatomos seleccionados de N, O y S;

cada uno de Q1, Q2, Q3 y Q4 es CH, C-R2 o N, en donde no mas de uno de Q1, Q2, Q3, y Q4 es N;

cada R2 es el mismo o diferente y se selecciona independientemente de halo, alquilo, haloalquilo, y -OR6;

W se selecciona de -O- y -S-;

R3 se selecciona de H, alquilo, haloalquil-, -alquileno-OH, -NR6R7, -cicloalquilo C3-6, -alquileno-C(O)-OH, -alquileno- NH2, y Het;

en donde dicho R cicloalquilo C3-6 se sustituye opcionalmente con 1 o 2 sustituyentes que son los mismos o diferentes y se seleccionan independientemente de halo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, OH, O-alquilo C1-3, oxo, S(alquilo C1-3), SO2, NH2, N(H)alquilo C1-3 y N(alquilo C1-3)2;

Het es un heterociclo de 5 a 6 miembros que tiene 1 o 2 heteroatomos seleccionados de N, O y S y opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes que son los mismos o diferentes y cada uno se seleccionan independientemente de halo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1-3, alquileno C1-3-O-alquilo C1-3, OH, alquileno C1-3-OH, oxo,

SO2(alquilo 1-3), alquileno C1-3- SO2(alquilo C1-3), NH2, N(H)alquilo C1-3, N(alquilo C1-3)2, CN, y -CH2CN;

R4 se selecciona de H, alquilo, haloalquilo, alquenilo, -OR6, -R5-OR6, -R5-CO2R6, -R5-SO2R6, -R5-Het, -R5-C(O)-Het, - N(H)R8, -N(CH3)R8, y -R5-NR6R7; cada R5 es el mismo o diferente y es independientemente alquileno C1-4;

cada R6 y cada R7 es el mismo o diferente y se selecciona independientemente de H, alquilo, haloalquilo, -C(O)- alquilo, y -C(O)-cicloalquilo;

R8 se selecciona de H, alquilo (opcionalmente sustituido por -OH), haloalquilo, cicloalquilo C3-6, -R5-cicloalquilo C3-6, Het2, -R5-Het2, -R5-OR6, -R5-O-R5-OR6, -R5-C(O)2R6, -R5-C(O)NR6R7, -R5-N(H)C(O)-R6, -R5-N(H)C(O)-R5-OR6, -R5- N(H)C(O)2-R6, -R5-NR6R7, -R5-S(O)2R6, -R5-CN, y -R5-N(H)S(O)2R6;

en donde dicho R8 cicloalquilo C3-6 se sustituye opcionalmente con 1 o 2 sustituyentes que son los mismos o diferentes y se seleccionan independientemente de halo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, OH, O-alquilo C1-3, oxo, S(alquilo C1-3), SO2(alquilo C1-3), NH2, N(H)alquilo C1-3 y N(alquilo C1-3)2, y N(H)SO2alquilo C1-3; y

Het2 es un heterociclo de 4 a 6 miembros que tiene 1 o 2 heteroatomos seleccionados de N, O y S y opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 o 5 alquilo C1-3 o 1 o 2 sustituyentes que son los mismos o diferentes y cada uno se seleccionan independientemente de halo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1-3, alquileno C1-3-O-alquilo C1-3, OH, alquileno C1-3-OH, oxo, SO2(alquilo C1-3), alquileno C1-3-SO2(alquilo C1-3), NH2, N(H)alquilo C1-3, N(alquilo C1-3)2, 5 N(H)SO2alquilo C1.3, C(O)(alquilo C1.3), CO2(alquilo C1.3), CN, y -CH2CN; y

R9 y R10 se seleccionan independientemente de H y alquilo,

y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos.

En un primer aspecto de la presente invencion, se proporciona un compuesto de la formula (la)

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10 N-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil} -2,6-difluorobencenosulfonamida, o una

sal farmaceuticamente aceptable del mismo. Particularmente la base libre del compuesto.

En otro aspecto de la presente invencion, se proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de la formula (la) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. En una realizacion, la composicion farmaceutica comprende adicionalmente uno o mas de portadores, diluyentes o excipientes farmaceuticamente 15 aceptables.

Tambien se describe aqul un proceso para preparar un compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. El proceso comprende hacer reaccionar un compuesto de la formula (VIII):

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en donde R10 es halo o tiometilo;

20 con uno de:

i) hidrogeno molecular, o

ii) un reactivo de metal alquilo o reactivo de metal alquenilo, o

iii) un alcohol, o

iv) un compuesto de la formula (IX): N(Ra)-R8, en donde Ra es H o CH3 y R8 es como se definio anteriormente; 25 para preparar un compuesto de la formula (I).

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Tambien se describe aqul un proceso para preparar un compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. El proceso comprende hacer reaccionar un compuesto de la formula (XVIII):

con un compuesto de la formula (VII):

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En otro aspecto de la presente invencion, se proporciona un compuesto de la formula (Ia), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para uso en terapia.

En otro aspecto, se proporciona un compuesto de la formula (Ia) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para uso en el tratamiento de un neoplasma susceptible (por ejemplo, adenocarcinoma de Barret; carcinomas del tracto biliar; cancer de mama; cancer de cuello uterino; colangiocarcinoma; tumores del sistema nervioso central que incluyen tumores del SNC primarios tales como glioblastomas, astrocitomas (por ejemplo, glioblastoma multiforme) y ependimomas, y tumores del SNC secundarios (es decir, metastasis a el sistema nervioso central de tumores que se originan fuera del sistema nervioso central); cancer colorrectal que incluye carcinoma de colon de intestino grueso; cancer gastrico; carcinoma de cabeza y cuello que incluye carcinoma de celula epidermoide de cabeza y cuello; canceres hematologicos que incluyen leucemias y linfomas tales como leucemia linfoblastica aguda, leucemia mielogena aguda (AML), slndromes mielodisplasicos, leucemia mielogena cronica, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, leucemia megacarioblastica, mieloma multiple y eritroleucemia; carcinoma hepatocelular; cancer de pulmon que incluye cancer de pulmon de celula microcltica y cancer de celula no microcltica; cancer de ovario; cancer endometrial; cancer pancreatico; adenoma de pituitaria; cancer de prostata; cancer renal; sarcoma; canceres de piel que incluyen melanomas; y canceres de tiroides) en un mamlfero (por ejemplo, humano) en necesidad del mismo.

En otro aspecto, se proporciona un compuesto de la formula (Ia) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para uso en el tratamiento de cancer de mama, colangiocarcinoma, cancer colorrectal, melanoma, cancer de celula no microcltica, cancer de ovario, o cancer de tiroides en un mamlfero (por ejemplo, humano) en necesidad del mismo.

En un otro aspecto de la presente invencion, se proporciona el uso de un compuesto de la formula (Ia) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la preparation de un medicamento para uso en el tratamiento de un neoplasma susceptible (por ejemplo, adenocarcinoma de Barret; carcinomas del tracto biliar; cancer de mama; cancer de cuello uterino; colangiocarcinoma; tumores del sistema nervioso central que incluyen tumores del SNC primarios tales como glioblastomas, astrocitomas (por ejemplo, glioblastoma multiforme) y ependimomas, y tumores del SNC secundarios (es decir, metastasis a el sistema nervioso central de tumores que se originan fuera del sistema nervioso central); cancer colorrectal que incluye carcinoma de colon de intestino grueso; cancer gastrico; carcinoma de cabeza y cuello que incluye carcinoma de celula epidermoide de cabeza y cuello; canceres hematologicos que incluyen leucemias y linfomas tales como leucemia linfoblastica aguda, leucemia mielogena aguda (AML), slndromes mielodisplasicos, leucemia mielogena cronica, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, leucemia megacarioblastica, mieloma multiple y eritroleucemia; carcinoma hepatocelular; cancer de pulmon que incluye cancer de pulmon de celula microcltica y cancer de celula no microcltica; cancer de ovario; cancer endometrial; cancer pancreatico; adenoma de pituitaria; cancer de prostata; cancer renal; sarcoma; canceres de piel que incluyen melanomas; y canceres de tiroides) en un mamlfero (por ejemplo, humano) en necesidad del mismo.

En un otro aspecto de la presente invencion, se proporciona el uso de un compuesto de la formula (Ia) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la preparacion de un medicamento para uso en el tratamiento de cancer de mama, colangiocarcinoma, cancer colorrectal, melanoma, cancer de celula no microcltica, cancer de ovario, o cancer de tiroides en un mamlfero (por ejemplo, humano) en necesidad del mismo.

En otro aspecto de la presente invencion, se proporciona una composition farmaceutica que comprende un compuesto de la formula (Ia) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para uso en el tratamiento de un

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neoplasma susceptible (por ejemplo, adenocarcinoma de Barret; carcinomas del tracto biliar; cancer de mama; cancer de cuello uterino; colangiocarcinoma; tumores del sistema nervioso central que incluyen tumores del SNC primarios tales como glioblastomas, astrocitomas (por ejemplo, glioblastoma multiforme) y ependimomas, y tumores del SNC secundarios (es decir, metastasis a el sistema nervioso central de tumores que se originan fuera del sistema nervioso central); cancer colorrectal que incluye carcinoma de colon de intestino grueso; cancer gastrico; carcinoma de cabeza y cuello que incluye carcinoma de celula epidermoide de cabeza y cuello; canceres hematologicos que incluyen leucemias y linfomas tales como leucemia linfoblastica aguda, leucemia mielogena aguda (AML), slndromes mielodisplasicos, leucemia mielogena cronica, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, leucemia megacarioblastica, mieloma multiple y eritroleucemia; carcinoma hepatocelular; cancer de pulmon que incluye cancer de pulmon de celula microcltica y cancer de celula no microcltica; cancer de ovario; cancer endometrial; cancer pancreatico; adenoma de pituitaria; cancer de prostata; cancer renal; sarcoma; canceres de piel que incluyen melanomas; y canceres de tiroides) en un mamlfero (por ejemplo, humano) en necesidad del mismo.

En otro aspecto de la presente invencion, se proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de la formula (la) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para uso en el tratamiento de cancer de mama, cancer colorrectal, melanoma, cancer de celula no microcltica, cancer de ovario, o cancer de tiroides en un mamlfero (por ejemplo, humano) en necesidad del mismo.

Estos y otros aspectos de la invencion se describen adicionalmente en la Descripcion Detallada y Ejemplos que siguen.

Breve descripcion de los dibujos

La Figura 1 es un Patron de Difraccion en Polvo de Rayos X de una forma de estado solido particular de N-{3-[5-(2- amino-4-pirimidinil)- 2-(1, 1 -dimetiletil) -1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida. El patron XRD se expresa en terminos de 2 angulos teta y obtenidos con un difractometro PANanalltico equipado con un filtro de nlquel de rayo difractado que utiliza radiacion X Ka de cobre, de acuerdo con los procedimientos descritos aqul.

La Figura 2 es un termograma de calorimetrla diferencial de barrido (DSC) de una forma de estado solido particular N-{3-[5-(2-amino- 4-pi rimidinil)-2-(1, 1 -dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida. El DSC se lleva a cabo sobre un sistema TA Instruments DSC Q100 a un Indice de calor de 10° C por minuto, utilizando un tamano de muestra de 0.4-1.5 mg, de acuerdo con los procedimientos descritos aqul.

Descripcion detallada de la invencion

Como se utiliza aqul, el termino “quinasa de la familia Raf” se refiere a quinasas Raf que incluyen A-Raf, B-Raf y c- Raf (tambien conocidas como Raf-1). A menos que se distinga aqul, el termino se refiere a variaciones del tipo natural y mutante de las mismas.

Como se utiliza aqul, “compuesto(s) de la formula (I)” significa cualquier compuesto que tiene la formula estructural (I) segun se define por las definiciones variables proporcionadas, posibles solvatos, que incluyen hidratos de los mismos, y formas amorfas y cristalinas, que incluyen una o mas formas polimorficas y mezclas de las mismas. En el caso de compuestos de formula (I) que poseen uno o mas centros quirales, los compuestos pueden estar en forma de una mezcla racemica, o uno o mas estereoisomeros isomericamente enriquecidos o puros, que incluyen enantiomeros y diastereomeros de los mismos. En dichas realizaciones, el “compuesto (s) de formula (I)” incluye la forma racemica as! como los enantiomeros y diastereomeros enriquecidos o puros. Los compuestos enantiomericamente enriquecidos o puros se designaran utilizando la nomenclatura convencional, que incluye las designaciones +, -, R, S, d, I, D y L, de acuerdo con el isomero predominante presente. Cuando un compuesto de la invencion contiene un grupo alquilo o alquileno, tambien puede ocurrir el isomerismo cis (E) y trans (Z). En dichas realizaciones, “compuesto (s) de formula (I)” incluye los estereoisomeros individuales del compuesto de la invencion, que se indicara utilizando nomenclatura cis/trans convencional. Tambien se debe entender que los compuestos de formula (I) pueden existir en formas tautomericas diferentes a las mostradas en la formula y formas tautomericas alternativas tambien se incluyen dentro del “compuesto (s) de formula (I)”.

Como se utiliza aqul, “compuesto (s) de la invencion” significa un compuesto de formula (Ia) (como se definio anteriormente) en cualquier version, es decir, como la base libre o como una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. El compuesto como cualquier version puede estar en cualquier forma, que incluye formas amorfas o cristalinas, formas polimorficas especlficas, solvatos, que incluyen hidratos (por ejemplo, mono-, di- y hemi- hidratos), y mezclas de diversas formas.

Los intermedios tambien pueden estar presentes como sales. Por lo tanto, en referencia a los intermedios, la frase “compuesto (s) de formula (numero)” significa un compuesto que tiene esa formula estructural o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

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El termino “alquilo” como se utiliza aqul se refiere a cadenas de hidrocarburo lineal o ramificada que tienen desde 1 a 8 atomos de carbono, a menos que se especifique un numero de atomos diferentes. Ejemplos de “alquilo” como se utilizan aqul incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, n-pentilo, sec-butilo, isobutilo, y tert-butilo. Se entiende que el termino “alquilo” y variaciones del mismo (es decir, “alquilo CW) describen independientemente cada miembro del genero. De forma similar, el termino “alquileno” se refiere a cadenas de hidrocarburo divalente lineal o ramificada que contienen desde 1 a 8 atomos de carbono, a menos que se especifique un numero de atomos diferentes. Ejemplos de “alquileno” como se utiliza aqul incluyen, pero no se limitan a, metileno, etileno, propileno, butileno, y isobutileno. Se pretende que el termino “alquileno” y variaciones del mismo (es decir, “alquileno C1-3”) describe independientemente cada miembro del genero.

Como se utiliza aqul, el termino “alquenilo” se refiere a cadenas de hidrocarburo lineal o ramificada que tienen desde

2 hasta 8 atomos de carbono, a menos que se especifique un numero de atomos diferentes, y por lo menos uno y hasta tres enlaces dobles carbono- carbono. Ejemplos de “alquenilo” como se utiliza aqul incluyen, pero no se limitan a etenilo y propenilo, Se pretende que el termino “alquenilo” y variaciones del mismo (es decir, “alquenilo C2- 4”) describa independientemente cada miembro del genero.

Como se utiliza aqul, el termino “cicloalquilo” se refiere a un anillo carboclclico monoclclico saturado que tiene desde

3 hasta 8 atomos de carbono, a menos que se especifique un numero de atomos diferentes. “Cicloalquilo” incluye por via de ejemplo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo. Los grupos cicloaloquilo preferidos incluyen cicloalquilo C3.6 sustituido y no sustituido. Se pretende que el termino “cicloalquilo” y variaciones del mismo (es decir, “cicloalquilo C3-6”) describa independientemente cada miembro del genero.

Los terminos “halo” y “halogeno” son sinonimos y se refieren a fluoro, cloro, bromo y yodo. En realizaciones particulares, “halo” se refiere a fluoro y cloro.

Como se utiliza aqul, “haloalquilo” se refiere a un alquilo, como se definio anteriormente, sustituido por uno o mas atomos de halogeno, fluoro, cloro, bromo o yodo. Donde el grupo haloalquilo tiene menos de 8 atomos de carbono, el numero de atomos de carbono en el grupo se indica como, por ejemplo, “haloalquilo C1-3”, que indica que el grupo haloalquilo tiene 1, 2 o 3 atomos de carbono. Ejemplos de haloalquilo como se utiliza aqul incluyen, pero no se limitan a fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, fluoroetilo, trifluoroetilo, y similares. Se pretende que el termino “haloalquilo” y variaciones del mismo (es decir, “haloalquilo C1-3”) describa independientemente cada miembro del genero.

El termino “oxo” como se utiliza aqul se refiere a el grupo =O adherido directamente a un atomo de carbono de un anillo de hidrocarburo (por ejemplo, cicloalquilo o cicloalquenilo) o un C, N o S de un anillo heteroclclico o heteroarilo para resultar en oxidos, N-oxidos, sulfonas y sulfoxidos.

Como se utiliza aqul, los terminos “heterociclo” y “heteroclclico” son sinonimos y se refieren a grupos no aromaticos saturados o insaturados monoclclicos, que tiene desde 4 hasta 6 miembros (a menos que se especifique un numero de miembros diferente) y que incluyen 1, 2, o 3 heteroatomos seleccionados de N, O y S, a menos que se especifique un numero de heteroatomos diferente. En todas las realizaciones en donde el heterociclo incluye 2 o mas heteroatomos, los heteroatomos pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan independientemente de N, O y S. En todas las realizaciones en donde el compuesto de la formula (I) incluye dos o mas grupos heteroclclicos, los grupos heteroclclicos pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan independientemente. Ejemplos de grupos heteroclclicos particulares incluyen pero no se limitan a tetrahidrofurano, dihidropirano, tetrahidropirano, pirano, tietano, 1,4-dioxano, 1,3-dioxano, 1,3-dioxalano, piperidina, piperazina, pirrolidina, morfolina, tiomorfolina, tiazolidina, oxazolidina, tetrahidrotiopirano, tetrahidrotiofeno y similares. Se entiende que el termino “heterociclo” y variaciones del mismo (es decir, “N-heterociclo”) describe independientemente cada miembro del genero.

Como se utiliza aqul, el termino “N-heterociclo” se refiere a grupos no aromaticos saturados o insaturados monoclclicos que tienen desde 4 hasta 6 miembros, que incluyen por lo menos un N y opcionalmente 1 o 2 heteroatomos seleccionados adicionales de N, O y S, a menos que se especifique un numero diferente de heteroatomos adicionales. Por “heteroatomos adicionales” significa 1 o 2 heteroatomos ademas del N ya especificado en el anillo N-heterociclo. En todas las realizaciones en donde el heterociclo incluye 1 o mas heteroatomos adicionales, los heteroatomos pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan independientemente de N, O y S. Los N-heterociclos incluyen ambos grupos unidos a traves del N del N-heterociclo y grupos unidos a traves de un C o S del N-heterociclo. En todas las realizaciones en donde el compuesto de la formula (I) incluye dos o mas grupos N-heteroclclicos, los grupos N-heteroclclicos pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan independientemente. Ejemplos de N-heterociclos incluyen piperidina, piperazina, pirrolidina, morfolina, tiomorfolina y similares.

Como se utiliza aqul, el termino “heteroarilo” se refiere a grupos monoclclicos aromaticos que tienen 5 o 6 miembros (a menos que se especifique un numero de miembros diferente) que incluye 1, 2 o 3 heteroatomos seleccionados de N, O y S, a menos que se especifique un numero de heteroatomos diferente. En todas las realizaciones en donde el

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heteroarilo incluye 2 o mas heteroatomos, los heteroatomos pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan independientemente de N, O y S. En todas las realizaciones en donde el compuesto de la formula (I) incluye dos o mas grupos heteroarilo, los grupos heteroarilo pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan independientemente. Ejemplos de grupos heteroarilo particulares incluyen pero no se limitan a furano, tiofeno, pirrol, imidazol, pirazol, triazol, tetrazol, tiazol, oxazol, isoxazol, oxadiazol, tiadiazol, isotiazol, piridina, piridazina, pirazina, pirimidina, y triazina. Se entiende que el termino “heteroarilo” y variaciones del mismo (es decir, “N-heteroarilo”) describe independientemente cada miembro del genero.

Como se utiliza aqul, el termino “N-heteroarilo” se refiere a grupos monoclclicos aromaticos que tienen 5 o 6 miembros (a menos que se especifique un numero de miembros diferente) que incluyen por lo menos un N y opcionalmente 1 o 2 heteroatomos seleccionados adicionales de N, O y S, a menos que se especifique un numero de heteroatomos diferente. Por “heteroatomos adicionales” se entiende 1 o 2 heteroatomos ademas del N ya especificado en el anillo N-heteroarilo. En todas las realizaciones en donde el heteroarilo incluye 1 o mas heteroatomos adicionales, los heteroatomos pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan independientemente de N, O y S. Los N-heteroarilos incluyen ambos grupos unidos a traves del N del N-heteroarilo y grupos unidos a traves de un C o S del N-heteroarilo. En todas las realizaciones en donde el compuesto de la formula (I) incluye dos o mas grupos N-heteroarilo, los grupos N-heteroarilo pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan independientemente. Ejemplos de N-heteroarilos incluyen pirrol, imidazol, pirazol, tiazol, isoxazol, piridina, piridazina, pirazina, pirimidina y triazina.

Como se utiliza aqul, el termino “miembros” (y variantes del mismo por ejemplo, “con miembros”) en el contexto de grupos de heteroclclico y heteroarilo se refieren a el numero total de atomos en el anillo, que incluyen carbono y heteroatomos N, O y/o S. Por lo tanto, un ejemplo de un anillo heteroclclico de 6 miembros es piperidina y un ejemplo de un anillo heteroarilo de 6 miembros es piridina.

Como se utiliza aqul, el termino “opcionalmente sustituido” significa grupos o anillos sustituidos (por ejemplo, grupos cicloalquilo, heterociclo, y heteroarilo) y anillos sustituidos con uno o mas sustituyentes especificados.

A lo largo de esta descripcion, una lista de alternativas, tales como aquellas proporcionadas anteriormente y adelante, tienen por objeto describir particularmente cada especie individualmente, as! como los subgrupos de una o mas especies dentro de la lista de alternativas (por ejemplo, “o subconjunto de los mismas”).

Ejemplos especlficos de los compuestos de la presente invencion incluyen aquellos mencionados en los Ejemplos que siguen as! como tambien sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos ejemplificaos como la base libre y otras sales farmaceuticamente aceptables de aquellos compuestos ejemplificados como sales.

La presente invencion proporciona un compuesto de la formula (la), N-{3-[5-(2-amino-4- pirimidinil)-2-(1, 1-dimetiletil)- 1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida,

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. En una realizacion, el compuesto es la base libre. En otra realizacion, el compuesto es una forma de sal farmaceuticamente aceptable del mismo, seleccionada de las formas de sal de mesilato, sulfato, clorhidrato y sodio del compuesto.

Se apreciara por aquellos expertos en la tecnica que se pueden utilizar los compuestos de la formula (I) como una version de sal farmaceuticamente aceptable de los mismos. Las sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos de la formula (I) incluyen sales convencionales formadas de acidos o bases organicos o inorganicos farmaceuticamente aceptables (es decir, no toxicos) as! como tambien sales de amonio cuaternario. Las sales

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representatives incluyen las siguientes: acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, edetato de calcio, camsilato, carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, etanol amina, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicol-lilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato (metanosulfonato), metilbromuro, metilnitrato, metilsulfato, maleato de monopotasio, mucato, napsilato, nitrato, N-metilglucamina, oxalato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, potasio, salicilato, sodio, estearato, subacetato, succinato, tannato, tartrato, teoclato, tosilato (metilbencenosulfonato), trietioduro, trimetilamonio y valerato. Otras sales, tales como oxalica y trifluoroacetica, que no son en si mismas farmaceuticamente aceptables, pueden ser utiles en la preparacion de sales utiles como intermedios en obtener los compuestos de esta invencion. En una realizacion, el compuesto de la formula (I) esta en la forma de la base libre. En una realizacion, el compuesto de la formula (I) esta en la forma de la sal de mesilato. En una realizacion, el compuesto de la formula (I) esta en la forma de la sal de sulfato. En una realizacion, el compuesto de la formula (I) esta en la forma de la sal de clorhidrato. En una realizacion, el compuesto de la formula (I) esta en la forma de la sal de sodio. Ciertas versiones de sal de los compuestos pueden ser solvatos, particularmente hidratos. En una realizacion, el compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo esta en la forma de un mono-, di-, tri- o hemi- hidrato.

Los procesos para preparar sales farmaceuticamente aceptables de compuestos tales como los compuestos de la formula (I) son convencionales en la tecnica. Vease, por ejemplo, Burger's Medicinal Chemistry And Drug Discovery 5th Edicion, Vol 1: Principles And Practice. Sera evidente para aquellos expertos en la tecnica, en los procesos descritos adelante para la preparacion de compuestos de la formula (I), que ciertos intermedios, pueden estar en la forma de sales farmaceuticamente aceptables del compuesto. Los procesos para preparar sales farmaceuticamente aceptables de intermedios se conocen en la tecnica y son analogos a los procesos para preparar sales farmaceuticamente aceptables de otros compuestos tales como los compuestos de la formula (I).

Se considera que los compuestos de la invencion inhiben una o mas quinasas y en particular una o mas quinasas de la familia Raf (“inhibidor de Raf”). Los compuestos de la invencion tambien pueden inhibir una o mas de otras quinasas, y particularmente tirosina quinasas. Ciertos compuestos de la invencion pueden inhibir B-Raf (“inhibidor de B-Raf”). Esta bien documentado que los inhibidores de Raf, que incluyen inhibidores de B-Raf, se consideran utiles como agentes anticancerlgenos y antitumorales. Vease, por ejemplo, Davies (2002) supra, Garnett (2004) supra, y Zebisch (2006) supra. Actualmente se considera que los efectos anticancerlgenos y antitumorales de estos inhibidores de quinasa resultan de la inhibicion de una o mas quinasas de la familia Raf, y el efecto de dicha inhibicion en las estirpes celulares cuyo crecimiento y/o viabilidad depende de la actividad quinasa de las quinasas de la familia Raf.

Los compuestos de la invencion pueden ser inhibidores de Raf y opcionalmente tambien inhiben una o mas quinasas de la familia ErbB (es decir, EGFR, ErbB2 y ErbB4). Ciertos compuestos de la invencion pueden inhibir B- Raf y tambien inhiben una o mas quinasas de la familia ErbB (es decir, EGFr, ErbB2 y ErB4).

Algunos compuestos de la invencion pueden ser inhibidores selectivos de quinasas de la familia Raf (“inhibidor selectivo de Raf”), lo que significa que la inhibicion preferencial de una o mas quinasas de la familia Raf es significativamente mayor que aquella de cualquier numero de otras quinasas, por ejemplo por un factor de 5 veces o mas.

Sin embargo, la presente invencion no se limita a compuestos que son inhibidores selectivos de una o mas quinasas de la familia Raf mas bien, la presente invencion contempla expresamente que ciertos compuestos de la invencion pueden poseer actividad contra multiples quinasas, que incluyen quinasas diferentes a quinasas de la familia Raf. Por ejemplo, los compuestos particulares de la invencion pueden poseer actividad contra multiples otras quinasas, que incluyen pero no se limitan a EGFR, ErbB2, ErbB4, IGF-1R, IR, IRR, Src, VEGFR, PDGFR, Met, Lyn, Lck, Alk5, Aurora A y B, JNK, Syk, p38, BTK, FAK, Abl, CK1. cKit, receptores de Eferina (por ejemplo EphB4), fGfR, Flt, Fyn, Hck, JAK, MLK, PKCm, Ret, Yes, y tambien BRK. Los compuestos particulares de la invencion se pueden considerar como selectivos o no selectivos, lo que significa que no se consideran por un experto en la tecnica que son selectivos para cualquier quinasa particular, sobre las otras.

Como se utiliza aqul, un inhibidor de Raf es un compuesto que exhibe un pIC50 de mas de aproximadamente 6 contra por lo menos una quinasa de la familia Raf en el ensayo de enzima de inhibicion de Raf descrito adelante y/o un IC50 de no mas de aproximadamente 5 pM de potencia contra por lo menos una estirpe celular que expresa quinasa B-Raf mutada (por ejemplo, A375P, Colo205, HT-29, SK-MEL-3, SK-MEL-28) en azul de metileno y/o los ensayos de proliferacion celular CellTiter-Glo descritos adelante. En una realizacion particular, un inhibidor de Raf se refiere a un compuesto de la invencion que exhibe un pIC50 de mas de aproximadamente 6.5 contra por lo menos una quinasa de la familia Raf en el ensayo de enzima de inhibicion de Raf descrito adelante y un IC50 de no mas de aproximadamente 500 nM de potencia contra por lo menos una estirpe celular que expresa quinasa B-Raf mutada en azul de metileno y/o los ensayos de proliferacion celular CellTiter-Glo descritos adelante.

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Un “inhibidor de B-Raf” se refiere a un compuesto de la invencion que exhibe un pIC50 de mas de aproximadamente 6.5 contra B-Raf (que incluye mutantes B-Raf) en el ensayo de enzima de inhibicion de Raf descrito adelante y un IC50 de no mas de aproximadamente 500 nM de potencia contra por lo menos una estirpe celular que expresa quinasa B-Raf mutada en azul de metileno y/o el ensayo de proliferacion celular CellTiter-Glo descrito adelante.

La presente invencion proporciona compuestos para uso en terapia medica en un mamlfero, por ejemplo, un humano, en necesidad del mismo. Se describen aqul metodos para el tratamiento de diversas afecciones en un mamlfero, en necesidad del mismo, todas las cuales comprenden la etapa de administrar una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la invencion. Todos los metodos descritos aqul son aplicables a mamlferos, y particularmente a humanos.

Como se utiliza aqul, el termino “tratamiento” o “que trata” en el contexto de metodos terapeuticos, se refiere a aliviar la afeccion especificada, eliminar o reducir los slntomas de la afeccion, ralentizar o eliminar la progresion, invasion, o diseminacion metastasica de la afeccion y prevenir o retardar la recurrencia de la afeccion en un sujeto afligido previamente. La presente invencion proporciona adicionalmente el uso de los compuestos de la invencion para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de diversas afecciones en un mamlfero (por ejemplo, humano) en necesidad del mismo.

Mas particularmente, la presente invencion proporciona compuestos para uso en el tratamiento de una afeccion mediada por al menos una quinasa de la familia Raf (por ejemplo, B-Raf) en un mamlfero en necesidad del mismo.

Los compuestos de la invencion son para uso en regulacion, modulacion, union o inhibicion de una o mas quinasas de la familia Raf (por ejemplo, B-Raf) en un mamlfero, que incluye los metodos de regulacion, modulacion, union o inhibicion de por lo menos una quinasa de la familia Raf (por ejemplo, B-Raf) al administrar una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la invencion. “Regular, modular, unir o inhibir por lo menos una quinasa de la familia Raf” se refiere a regulacion, modulacion, union o inhibicion de la actividad de por lo menos una quinasa de la familia Raf, as! como tambien regulacion, modulacion, union o inhibicion de la sobreexpresion de un regulador en direction 5' de por lo menos una quinasa de la familia Raf con el fin de inhibir la potencia celular de la capacidad de serialization.

En una realization particular, la invencion proporciona compuestos para uso en el tratamiento de una afeccion mediada por actividad inapropiada de una o mas quinasas de la familia Raf (por ejemplo, B-Raf), o un activador en direccion 5' de una o mas quinasas de la familia Raf en un mamlfero. En un aspecto adicional, la presente invencion proporciona el uso de un compuesto de la invencion para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de una afeccion mediada por actividad inapropiada de una o mas quinasas de la familia Raf (particularmente B-Raf), en un mamlfero. Un ejemplo de una afeccion mediada por actividad inapropiada de una o mas quinasas de la familia Raf incluye neoplasmas.

Por “actividad inapropiada” se entiende la actividad quinasa de la familia Raf que se desvla de la actividad esperada para esa quinasa o para un activador en direccion 5' de esa quinasa en un mamlfero particular. La actividad inapropiada de una quinasa de la familia Raf puede surgir de una o mas de A-Raf, B-Raf o c-Raf o un activador direccion 5' de una quinasa de la familia Raf. La actividad de quinasa de la familia Raf inapropiada puede tomar la forma de, por ejemplo, un aumento anormal de la actividad, o una aberration en tiempo y/o control de la actividad de quinasa de la familia Raf. Dicha actividad inapropiada puede resultar, por ejemplo, de la sobreexpresion o mutation de la quinasa, el activador en direccion 5', receptor o ligando que conduce a la activation inapropiada o incontrolada de la quinasa o receptor correspondiente. Adicionalmente, tambien se contempla que la actividad de quinasa de la familia Raf no deseada puede residir en una fuente anormal, tal como un neoplasma. Por lo tanto, el nivel de actividad de quinasa de la familia Raf no necesita ser anormal para considerarse inadecuado en el caso en el que la actividad se deriva de una fuente anormal, que incluye, pero no se limita a, activadores en direccion 5' (por ejemplo, GTPasas Ras activadas mutantes) o neoplasma. En un ejemplo de actividad inadecuada de quinasa de la familia Raf que no resulta de mutacion o sobreexpresion de una quinasa de la familia Raf, la actividad inadecuada de una Ras GTPasa puede ser consecuencia de la mutacion o sobreexpresion de Ras GTPasa, por ejemplo la mutacion G13D en Kras2, y puede llevar a la sobreactivacion de la ruta mApK mediada por la actividad quinasa de la familia Raf.

Por lo tanto, en una realizacion, la presente invencion proporciona compuestos para uso en el tratamiento de una afeccion que resulta directa o indirectamente de una mutacion de una quinasa de la familia Raf o sobreexpresion de una quinasa de la familia Raf, o una mutacion de un activador en direccion 5' de una quinasa de la familia Raf o sobreexpresion de un activador en direccion 5' de una quinasa de la familia Raf en un mamlfero en necesidad del mismo. En un aspecto adicional, la presente invencion proporciona el uso de un compuesto de la invencion para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de una afeccion que resulta directa o indirectamente de mutacion de una quinasa de la familia Raf o sobreexpresion de una quinasa de la familia Raf, o una mutacion de un activador en direccion 5' de una quinasa de la familia Raf o sobreexpresion de un activador en direccion 5' de una quinasa de la familia Raf en un mamlfero. Las afecciones que son mediadas por al menos una quinasa de la familia Raf, y particularmente afecciones mediadas por actividad inapropiada de una o mas quinasas de la familia Raf, que

incluyen aquellas que resultan directa o indirectamente de la mutacion de una quinasa de la familia Raf, sobreexpresion de una quinasa de la familia Raf, o mutacion de un activador en direction 5' de una quinasa de la familia Raf o sobreexpresion de un activador en direccion 5' de una quinasa de la familia Raf se conocen en la tecnica e incluyen pero no se limitan un neoplasmas.

5 Los compuestos de la invention tambien se pueden utilizar en el tratamiento de afecciones atenuadas por inhibition de una quinasa de la familia Raf (particularmente B-Raf). Tambien se proporciona el uso de un compuesto de la invencion para la preparation de un medicamento para el tratamiento de una afeccion atenuada por la inhibicion de una quinasa de la familia Raf (particularmente B-Raf) en un mamlfero. Las afecciones atenuadas por inhibicion de una quinasa de la familia Raf (que incluye B-Raf) incluyen pero no se limitan a neoplasmas.

10 Por consiguiente, se pueden utilizar los compuestos de la invencion en el tratamiento de un neoplasma, particularmente un neoplasma susceptible (un cancer o tumor) en un mamlfero. La invencion tambien proporciona el uso de un compuesto de la invencion para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de neoplasma, particularmente un neoplasma susceptible, en un mamlfero.

“Neoplasma susceptible” como se utiliza aqul se refiere un neoplasmas que son susceptibles al tratamiento por un 15 inhibidor de quinasa y particularmente neoplasmas que son susceptibles al tratamiento por un inhibidor de Raf. Los neoplasmas que se han asociado con actividad inapropiada de una o mas quinasas de la familia Raf y particularmente neoplasmas que se exhiben en mutacion de una quinasa de la familia Raf, sobreexpresion de una quinasa de la familia Raf, o mutacion de un activador en direccion 5' de una quinasa de la familia Raf o sobreexpresion de un activador en direccion 5' de una quinasa de la familia Raf, y por lo tanto son susceptibles al 20 tratamiento con un inhibidor de Raf se conocen en la tecnica, e incluyen tumores primarios y metastasicos y canceres. Vease, Catalogue of Somatic Mutations in Cancer (COSMIC), the Wellcome Trust Sanger Institute,
http://www.sanger.ac.uk/genetics/ CGP/cosmic/ y aquellas referencias citadas en los antecedentes.

Ejemplos especlficos de neoplasmas susceptibles dentro del alcance de la invencion incluyen, pero no se limitan a:

adenocarcinoma de Barret;

25 carcinomas del tracto biliar;

cancer de mama;

cancer de cuello uterino;

colangiocarcinoma;

tumores del sistema nervioso central que incluyen tumores del SNC primarios tales como glioblastomas, 30 astrocitomas (que incluyen glioblastoma multiforme) y ependimomas, y tumores del SNC secundarios (es decir, metastasis a el sistema nervioso central de tumores que se originan fuera del sistema nervioso central),

cancer colorrectal, que incluye carcinoma de colon de intestino grueso;

cancer gastrico;

carcinoma de cabeza y cuello que incluye carcinoma de celula epidermoide de cabeza y cuello;

35 canceres hematologicos que incluyen leucemias y linfomas tales como leucemia linfoblastica aguda, leucemia mielogena aguda (AML), slndromes mielodisplasicos, leucemia mielogena cronica, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, leucemia megacarioblastica, mieloma multiple y eritroleucemia;

carcinoma hepatocelular;

cancer de pulmon que incluye cancer de pulmon de celula microcltica y cancer de celula no microcltica;

40 cancer de ovario; cancer endometrial; cancer pancreatico; adenoma de pituitaria;

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cancer de prostata; cancer renal; sarcoma;

canceres de piel que incluyen melanomas; y canceres de tiroides.

Se pretende que la anterior lista describa cada uno de los neoplasmas mencionados individualmente. En una realizacion particular, el neoplasma susceptible es un neoplasma que exhibe una mutacion en BRaf.

La presente invencion tambien proporciona un compuesto de la formula (la) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para uso en el tratamiento de adenocarcinoma de Barret; carcinomas del tracto biliar; cancer de mama; cancer de cuello uterino; colangiocarcinoma; tumores del sistema nervioso central que incluyen tumores del SNC primarios tales como glioblastomas, astrocitomas (por ejemplo, glioblastoma multiforme) y ependimomas, y tumores del SNC secundarios (es decir, metastasis a el sistema nervioso central de tumores que se originan fuera del sistema nervioso central); cancer colorrectal que incluye carcinoma de colon de intestino grueso; cancer gastrico; carcinoma de cabeza y cuello que incluye carcinoma de celula epidermoide de cabeza y cuello; canceres hematologicos que incluyen leucemias y linfomas tales como leucemia linfoblastica aguda, leucemia mielogena aguda (AML), slndromes mielodisplasicos, leucemia mielogena cronica, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, leucemia megacarioblastica, mieloma multiple y eritroleucemia; carcinoma hepatocelular; cancer de pulmon que incluye cancer de pulmon de celula microcltica y cancer de celula no microcltica; cancer de ovario; cancer endometrial; cancer pancreatico; adenoma de pituitaria; cancer de prostata; cancer renal; sarcoma; canceres de piel que incluyen melanomas; y canceres de tiroides, o cualquier subconjunto de las mismas, en un mamlfero (por ejemplo, humano).

La presente invencion proporciona adicionalmente el uso de un compuesto de la formula (la) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de adenocarcinoma de Barret; carcinomas del tracto biliar; cancer de mama; cancer de cuello uterino; colangiocarcinoma; tumores del sistema nervioso central que incluyen tumores del SNC primarios tales como glioblastomas, astrocitomas (por ejemplo, glioblastoma multiforme) y ependimomas, y tumores del SNC secundarios (es decir, metastasis a el sistema nervioso central de tumores que se originan fuera del sistema nervioso central); cancer colorrectal que incluye carcinoma de colon de intestino grueso; cancer gastrico; carcinoma de cabeza y cuello que incluye carcinoma de celula epidermoide de cabeza y cuello; canceres hematologicos que incluyen leucemias y linfomas tales como leucemia linfoblastica aguda, leucemia mielogena aguda (AML), slndromes mielodisplasicos, leucemia mielogena cronica, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, leucemia megacarioblastica, mieloma multiple y eritroleucemia; carcinoma hepatocelular; cancer de pulmon que incluye cancer de pulmon de celula microcltica y cancer de celula no microcltica; cancer de ovario; cancer endometrial; cancer pancreatico; adenoma de pituitaria; cancer de prostata; cancer renal; sarcoma; canceres de piel que incluyen melanomas; y canceres de tiroides, o cualquier subconjunto de las mismas, en un mamlfero (por ejemplo, humano).

Como se conoce bien en la tecnica, los tumores pueden hacer metastasis a partir de un primer locus o locus primario de tumor a uno o mas otros tejidos o sitios del cuerpo. En particular, las metastasis al sistema nervioso central (es decir, tumores del SNC secundarios), y particularmente del cerebro (es decir, metastasis cerebrales), estan bien documentadas para tumores y canceres, tales como de mama, pulmon, melanoma, renal y colorrectal. Como se utiliza aqul, la referencia a usos o metodos para tratamiento o tratamientos para un “neoplasma”, “tumor” o “cancer” en un sujeto incluye el uso y tratamiento del neoplasma primario, tumor o cancer, y cuando sea apropiado, tambien el uso y el tratamiento de metastasis (es decir, el crecimiento del tumor metastasico).

En otra realizacion, el neoplasma susceptible es cancer colorrectal y la invencion proporciona compuestos para uso en el tratamiento de cancer colorrectal en un mamlfero (por ejemplo, humano) y el uso de dichos compuestos para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de cancer colorrectal en un mamlfero (por ejemplo, humano).

En otra realizacion, el neoplasma susceptible es melanoma, y la invencion proporciona compuestos para uso en el tratamiento de melanoma en un mamlfero (por ejemplo, humano) y el uso de dichos compuestos para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de melanoma en un mamlfero (por ejemplo, humano).

En otra realizacion, el neoplasma susceptible es colangiocarcinoma, y la invencion proporciona compuestos para uso en el tratamiento de colangiocarcinoma en un mamlfero (por ejemplo, humano) y el uso de dichos compuestos para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de colangiocarcinoma en un mamlfero (por ejemplo, humano).

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En otra realizacion, el neoplasma susceptible es cancer de tiroides, y la invention proporciona compuestos para uso en el tratamiento de cancer de tiroides en un mamifero (por ejemplo, humano) y el uso de dichos compuestos para la preparation de un medicamento para el tratamiento de cancer de tiroides en un mamifero (por ejemplo, humano).

En una realizacion particular, el neoplasma susceptible es cancer de mama y la invencion proporciona compuestos para uso en el tratamiento de cancer de mama en un mamifero (por ejemplo, humano) y el uso de dichos compuestos para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de cancer de mama en un mamifero (por ejemplo, humano).

En otra realizacion, el neoplasma susceptible es cancer de ovario y la invencion proporciona compuestos para uso en el tratamiento de cancer de ovario en un mamifero (por ejemplo, humano) y el uso de dichos compuestos para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de cancer de ovario en un mamifero (por ejemplo, humano).

En otra realizacion, el neoplasma susceptible es cancer de celula no microcitica, y la invencion proporciona compuestos para uso en el tratamiento de cancer de celula no microcitica en un mamifero (por ejemplo, humano) y el uso de dichos compuestos para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de cancer de celula no microcitica en un mamifero (por ejemplo, humano).

Los compuestos de la invencion se pueden utilizar solos en el tratamiento de cada uno de las afecciones anteriores o se pueden utilizar para proporcionar efectos aditivos o potencialmente sinergicos con ciertas quimioterapias existentes, radiation, productos biologicos o inmunoterapeuticos (que incluyen anticuerpos monoclonales) y vacunas. Los compuestos de la invencion pueden ser utiles para restaurar la efectividad de ciertas quimioterapia y radiacion existentes y o aumentar la sensibilidad a ciertas quimioterapias y/o radiacion existentes.

Ademas del tratamiento de neoplasmas susceptibles, los compuestos de la invencion tambien se pueden utilizar en el tratamiento de otras afecciones atenuadas por inhibition de una quinasa de la familia Raf, tales como sindrome cutaneo cardio-facio y enfermedad renal poliquistica.

Por lo tanto, un metodo para tratar un neoplasma susceptible en un mamifero en necesidad del mismo puede comprender las etapas de:

(a) analizar una muestra de dicho neoplasma para determinar si una mutation de activation esta presente en la secuencia de codification para B-Raf en celulas de dicho neoplasma;

(b) seleccionar un mamifero que tiene un neoplasma con una mutacion de activacion en la secuencia de codificacion para B-Raf; y

(c) administrar una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la presente invencion al mamifero seleccionado en la etapa (b).

En ciertas realizaciones, la mutacion de activacion presente en la secuencia de codificacion para BRAF resulta en un BRAF que tiene una sustitucion de aminoacido seleccionada del grupo que consiste de R462I, I463S, G464V, G464E, G466A, G466E, G466V, G469A, G469E, D594V, F595L, G596R, L597V, L597R, T599I, V600E, V600D, V600K, V600R, T119S, y K601 E. Vease, por ejemplo, Figura 2 de Halilovic y Solvit (2008) Current Opinion in Pharmacology 8:419-26.

Por lo tanto, un metodo para tratar un neoplasma susceptible en un mamifero en necesidad del mismo puede comprender las etapas de:

(a) analizar una muestra de dicho neoplasma para determinar si una mutacion que codifica una sustitucion de aminoacidos V600E esta presente en la secuencia de codificacion para B-Raf en celulas de dicho neoplasma;

(b) seleccionar un mamifero que tiene un neoplasma con una mutacion que codifica la sustitucion de aminoacido V600E en B-Raf; y

(c) administrar una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la presente invencion al mamifero seleccionado en la etapa (b).

Se describe la sustitucion de aminoacido V600E en B-Raf, por ejemplo, en Kumar et al. (2004) J Invest Dermatol. 122(2):342-8. Esta mutacion comunmente resulta de una mutacion T1799A en la secuencia de codificacion para humano B-Raf. Por consiguiente, se realiza la etapa de analizar una muestra de dicho neoplasma para determinar si una mutacion que codifica una sustitucion de aminoacido V600E esta presente en la secuencia de codificacion para

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B-Raf al determinar si la secuencia de codificacion para B-Raf en celulas del neoplasma contiene la mutacion T1799A.

El neoplasma se puede seleccionar de adenocarcinoma de Barret; carcinomas del tracto biliar; cancer de mama; cancer de cuello uterino; colangiocarcinoma; tumores del sistema nervioso central que incluyen tumores del SNC primarios tales como glioblastomas, astrocitomas (por ejemplo, glioblastoma multiforme) y ependimomas, y tumores del SNC secundarios (es decir, metastasis a el sistema nervioso central de tumores que se originan fuera del sistema nervioso central); cancer colorrectal que incluye carcinoma de colon de intestino grueso; cancer gastrico; carcinoma de cabeza y cuello que incluye carcinoma de celula epidermoide de cabeza y cuello; canceres hematologicos que incluyen leucemias y linfomas tales como leucemia linfoblastica aguda, leucemia mielogena aguda (AML), slndromes mielodisplasicos, leucemia mielogena cronica, linfoma de Hodgkin, non- linfoma de Hodgkin, leucemia megacarioblastica, mieloma multiple y eritroleucemia; carcinoma hepatocelular; cancer de pulmon que incluye cancer de pulmon de celula microcltica y cancer de celula no microcltica; cancer de ovario; cancer endometrial; cancer pancreatico; adenoma de pituitaria; cancer de prostata; cancer renal; sarcoma; canceres de piel que incluyen melanomas; y canceres de tiroides.

En realizaciones particulares, el neoplasma se selecciona de cancer de mama, colangiocarcinoma, cancer colorrectal, melanoma, cancer de celula no microcltica, cancer de ovario, y cancer de tiroides. En una realization preferida, el neoplasma es melanoma.

En una realizacion, el mamlfero es un humano.

En una realizacion, el compuesto de la invention es una sal farmaceuticamente aceptable de N-{3-[5-(2-amino- 4- pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida. En una realizacion particular, el compuesto de la invencion es mesilato de N-{3- [5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4- il]-2- fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida. En una realizacion alternativa, el compuesto de la invencion es N- {3-[5-(2-amino-4 -pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida.

La muestra del neoplasma que se va a analizar para la presencia de mutaciones de activation B-raf se puede derivar de una variedad de fuentes, que incluyen, pero no se limitan a, celulas individuales, una coleccion de celulas, tejido, cultivo de celulas, medula osea, sangre, u otros fluidos corporales. La fuente de tejido o celula puede incluir una muestra de biopsia de tejido, una poblacion de celulas clasificadas, cultivo celular, o de una sola celula. En la selection de una muestra, se debe considerar el porcentaje de la muestra que constituye celulas neoplasicas. En algunas realizaciones, la muestra de neoplasma se fija mediante un conservante antes de analizar la presencia de una mutacion de activacion.

La etapa de analizar una muestra del neoplasma para determinar si una mutacion de activacion esta presente en la secuencia de codificacion para B-Raf en celulas de dicho neoplasma se puede realizar utilizando cualquier metodo conocido en la tecnica. Por ejemplo, se puede analizar la secuencia de codificacion para B-raf en celulas de la muestra para determinar si contiene una mutacion que resulta en la expresion de B-Raf activado. Los metodos para detectar dichas mutaciones son bien conocidos en la tecnica. Vease, por ejemplo, Whitcombe et al. (1999) Nature Biotechnology 17:804-7, Gibson (2006) Clinica Chimica Acta 363: 32-47, Kim y Misra (2007) Annual Review of Biomedical Engineering 9:289-320, y Patentes Estadounidenses Nos. 6,326,145 y 6,270,967). Alternativamente, se pueden identificar las mutaciones de activacion en B-Raf al detectar directamente la protelna activada B-Raf utilizando un agente (por ejemplo un anticuerpo) que se une selectivamente a B-Raf activado.

Como se utiliza aqul, el termino “cantidad terapeuticamente efectiva” significa una cantidad de un compuesto de la invencion que es suficiente, en el sujeto al que se administra, para provocar una respuesta biologica o medica de un cultivo celular, tejido, sistema, mamlfero (que incluye humano) que es buscado, por ejemplo, por un investigador y cllnico. El termino tambien incluye dentro de su alcance cantidades efectivas para mejorar la funcion fisiologica normal. Por ejemplo, una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la invencion para el tratamiento de una afeccion mediada por al menos una quinasa de la familia Raf es una cantidad suficiente para tratar la afeccion en el sujeto particular. De forma similar, una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la invencion para el tratamiento de un neoplasma susceptible es una cantidad suficiente para tratar el neoplasma susceptible particular en el sujeto. En una realizacion de la presente invencion, una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la invencion es una cantidad suficiente para regular, modular, unir o inhibir por lo menos una quinasa de la familia Raf. Mas particularmente, en dicha realizacion, la cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la invencion es una cantidad suficiente para regular, modular, unir o inhibir B-Raf.

La cantidad terapeuticamente efectiva precisa de los compuestos de la invencion dependera de una serie de factores. Existen variables inherentes a los compuestos que incluyen, pero no se limitan a, las siguientes: peso molecular, actividad inhibidora en la quinasa objetivo, absorcion, biodisponibilidad, distribution en el cuerpo, penetration del tejido, vida media, metabolismo, union de protelna, y excretion. Estas variables determinan que dosis de compuesto debe ser administrado con el fin de inhibir la quinasa objetivo en un porcentaje suficiente y durante una cantidad de tiempo suficiente para tener el efecto deseado sobre la afeccion a tratar (por ejemplo,

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neoplasma). En general, el objetivo sera para inhibir la quinasa objetivo en 50% o mas durante el tiempo que sea posible. La duracion de la exposicion al farmaco se limitara solo por la vida media del compuesto, y los efectos secundarios del tratamiento que requieran el cese de la dosificacion. La cantidad de compuesto administrado dependera tambien de factores relacionados con los pacientes y la enfermedad, que incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: edad, peso, medicamentos concomitantes y condicion medica del sujeto que se va a tratar, la afeccion precisa que requiere tratamiento y su gravedad, la naturaleza de la formulacion, y la ruta de administracion. En ultima instancia la dosis sera a discrecion del medico o veterinario. Normalmente, el compuesto de la invention se suministrara para tratamiento en el rango de 0.01 a 30 mg/kg de peso corporal del receptor (mamlfero) por dla o por dosis o por ciclo de tratamiento y mas usualmente en el rango de 0.1 a 10 mg/kg de peso corporal por dla o por dosis o por ciclo de tratamiento. Por lo tanto, para un humano adulto de 70 kg que se va a tratar por una afeccion mediada por o correlacionada a por lo menos una quinasa de la familia Raf, la cantidad real por dla o por dosis o por ciclo de tratamiento usualmente serla desde 1 hasta 2000 mg y esta cantidad se puede dar en una unica dosis o multiples dosis por dla o por dosis o por ciclo de tratamiento. Los reglmenes de dosificacion pueden variar significativamente y se determinaran y alteraran con base en la experiencia cllnica con el compuesto. El espectro completo de los reglmenes de dosificacion que se puede emplear varla desde dosificacion continua (con dosis diarias) hasta dosificacion intermitente. Se puede determinar una cantidad terapeuticamente efectiva de una sal farmaceuticamente aceptable de un compuesto de la formula (I) como una proportion de la cantidad terapeuticamente efectiva del compuesto de la formula (I) como la base libre. Se preve que dosis similares serlan apropiadas para el tratamiento de los neoplasmas susceptibles descritos anteriormente.

Aunque es posible que, para uso en terapia, una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la invencion se pueda administrar como el producto qulmico en bruto, normalmente esta presente como el ingrediente activo de una composition o formulacion farmaceutica. Por consiguiente, la invencion proporciona adicionalmente una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de la invencion. La composicion farmaceutica puede comprender adicionalmente uno o mas portadores, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables. El portador(s), diluyente(s) y/o excipiente(s) deben ser aceptables en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulacion y no perjudiciales para el receptor de los mismos. Un proceso para la preparation de una formulacion farmaceutica incluye mezclar un compuesto de la invencion con uno o mas portadores, diluyentes y/o excipientes farmaceuticamente aceptables.

Las formulaciones farmaceuticas pueden estar presentes en formas de dosis unitarias que contienen una cantidad predeterminada de ingrediente activo por unidad de dosis. Dicha unidad puede contener, por ejemplo, 0.5 mg a 1 g, preferiblemente 1 mg a 700 mg, mas preferiblemente 5 mg a 100 mg de un compuesto de la invencion (como una base libre, solvato (que incluye hidrato) o sal, en cualquier forma), dependiendo de la afeccion que se va a tratar, la ruta de administracion, y la edad, peso y condicion del paciente. Las formulaciones de dosificacion unitaria preferidas son aquellas que contienen una dosis diaria, dosis semanal, dosis mensual, una sub-dosis o una fraction apropiada de la misma, de un ingrediente activo. Adicionalmente, dichas formulaciones farmaceuticas se pueden preparar por cualquiera de los metodos bien conocidos en la tecnica de farmacia.

Las formulaciones farmaceuticas se pueden adaptar para administracion por cualquier ruta apropiada, por ejemplo por la ruta oral (que incluye capsulas, comprimidos, capsulas rellenas de llquido, comprimidos desmiembros, comprimidos de liberation retardada y controlada, inmediata, tiras orales, soluciones, jarabes, bucal y sublingual), rectal, nasal, inhalation, topica (que incluye transdermica), vaginal o parenteral (que incluye subcutanea, intramuscular, intravenosa o intradermica). Dichas formulaciones se pueden preparar por cualquier metodo conocido en la tecnica de farmacia, por ejemplo, al poner en asociacion el ingrediente activo con el portador(s), excipiente (s) o diluyente. En general, el portador, excipiente o diluyente empleado en la formulacion farmaceutica es “no toxico”, lo que significa que es/se considerada seguro para su consumo en la cantidad suministrada en la composicion farmaceutica, e “inerte” significa que no reacciona/reaccionan apreciablemente con o resultan en un efecto no deseado sobre la actividad terapeutica del ingrediente activo.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para administracion oral se pueden presentar como unidades discretas tales como capsulas llenas de llquido o solidas; comprimidos de liberacion inmediata, retardada o controlada; polvos o granulos; soluciones o suspensiones en llquidos acuosos o no acuosos; espumas o batidos comestibles; emulsiones llquidas aceite en agua, emulsiones llquidas agua en aceite o tiras orales, tales como tiras de gel impregnadas.

Por ejemplo, para administracion oral en la forma de un comprimido o capsula, el componente de farmaco activo se puede combinar con un portador farmaceuticamente aceptable oral tal como etanol, glicerol, agua y similares. Los polvos se preparan al triturar el compuesto hasta un tamano fino adecuado y mezclarlo con un portados farmaceutico triturado de forma similar tal como un carbohidrato comestible, como, por ejemplo, almidon o manitol. Tambien pueden estar presentes aromatizantes, conservantes, dispersantes y agentes colorantes.

Las capsulas solidas se fabrican al preparar una mezcla en polvo, como se describio anteriormente, y rellenar cubiertas formadas de gelatina. Los deslizantes y lubricantes tales como sllice coloidal, talco, estearato de magnesio, estearato de calcio o polietilenglicol solido se pueden agregar a la mezcla en polvo antes de la operacion

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de llenado. Tambien se puede agregar un agente disgregante o solubilizante tal como agar-agar, carbonato de calcio o carbonato de sodio para mejorar la disponibilidad del medicamento cuando se ingiere la capsula.

Mas aun, cuando se desee o sea necesario, tambien se pueden incorporar aglutinantes, lubricantes, agentes disgregantes y agentes colorantes adecuados en la mezcla. Los aglutinantes adecuados incluyen almidon, gelatina, azucares naturales tales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de malz, gomas naturales y sinteticas tales como acacia, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol, ceras y similares. Los lubricantes utilizados en estas formas de dosificacion incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los disgregantes incluyen, sin limitacion, almidon, metilcelulosa, agar, bentonita, goma de xantano y similares. Los comprimidos se formulan, por ejemplo, al preparar una mezcla en polvo, granular o golpear, agregar un lubricante y disgregante y prensar en comprimidos. Una mezcla en polvo se prepara al mezclar el compuesto, adecuadamente triturado, con un diluyente o base como se describio anteriormente, y opcionalmente, con un aglutinante tal como carboximetilcelulosa, un alginato, gelatina o polivinilpirrolidona, un retardante de solucion tal como parafina, un acelerador de reabsorcion tal como una sal cuaternaria y/o un agente de absorcion tal como bentonita, caolln o fosfato de dicalcio. La mezcla de polvo se puede granular al humedecer con un aglutinante tal como jarabe, pasta de almidon, mucllago de goma arabiga o soluciones de materiales celulosicos o polimericos y forzandola a traves de un tamiz. Como alternativa a la granulacion, la mezcla en polvo se puede pasar a traves de la maquina de comprimidos y el resultado son lingotes imperfectos divididos en granulos. Los granulos se pueden lubricar para evitar que se pegue al comprimido formando dados por medio de la adicion de acido estearico, una sal estearato, talco o aceite mineral. La mezcla lubricada se comprime despues en comprimidos. Los compuestos de la presente invencion tambien se pueden combinar con un portador inerte de flujo libre y comprimir en comprimidos directamente sin pasar a traves de las etapas de granulacion o trituracion. Se puede proporcionar un recubrimiento protector transparente u opaco que consiste en una capa de sellado de goma laca, un recubrimiento de azucar o material polimerico y un recubrimiento pulido de cera. Se pueden agregar colorantes a estos recubrimientos para distinguir diferentes dosificaciones unitarias.

Los fluidos orales tales como soluciones, jarabes y elixires se pueden preparar en forma de dosificacion unitaria de tal manera que una cantidad dada contenga una cantidad predeterminada del compuesto. Las soluciones y jarabes se pueden preparar al disolver el compuesto en una solucion acuosa adecuadamente aromatizada, mientras que los elixires se preparan mediante el uso de un vehlculo alcoholico farmaceuticamente aceptable. Las suspensiones se pueden formular al dispersar el compuesto en un vehlculo farmaceuticamente aceptable. Tambien se pueden agregar solubilizantes y emulsionantes tales como alcoholes de isoestearilo etoxilados y eteres de polioxietilensorbitol, conservantes, aditivo de sabor tales como aceite de menta o edulcorantes naturales o sacarina u otros edulcorantes artificiales, y similares.

Cuando sea apropiado, se pueden microencapsular las formulaciones de dosificacion unitaria para administracion oral. La formulacion tambien se pueden preparar para prolongar o mantener la liberacion como por ejemplo al recubrir o incorporar material en partlculas en pollmeros, cera o similares.

Los compuestos de la invencion tambien se pueden administrar en forma de sistemas de liberacion de liposomas, tales como veslculas unilamelares pequenas, veslculas unilamelares grandes y veslculas multilamelares. Los liposomas se pueden formar a partir de una variedad de fosfollpidos, tales como colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas.

Los compuestos de la invencion tambien se pueden administrar mediante el uso de anticuerpos monoclonales como portadores individuales a los que se acoplan las moleculas del compuesto. Los compuestos tambien se pueden acoplar con pollmeros solubles como portadores de farmacos dirigibles. Dichos pollmeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copollmero de pirano, polihidroxipropil-methcrilamidefenol, polihidroxietilaspartamidafenol u oxido de polietileno-polilisina sustituido con residuos de palmitoilo. Adicionalmente, los compuestos se pueden acoplar a una clase de pollmeros biodegradables utiles para conseguir la liberacion controlada de un farmaco, por ejemplo, acido policentrico, caprolactona poliepsilon, acido polihidroxi butlrico, poliortoesteres, poliacetales, polidihidropiranos, policianoacrilatos y copollmeros de bloque entrecruzados o anfipaticos de hidrogeles.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para la administracion transdermica se pueden presentar como parches discretos destinados a permanecer en contacto Intimo con la epidermis del receptor durante un perlodo prolongado de tiempo. Por ejemplo, el ingrediente activo se puede suministrar desde el parche mediante iontoforesis como se describe generalmente en Pharmaceutical Research (1986) 3 (6): 318.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para administracion topica se pueden formular como pomadas, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, pulverizaciones, aerosoles o aceites. Para tratamientos de tejidos externos, tales como piel, las formulaciones se pueden aplicar como una pomada o crema topica. Cuando se formulan en una pomada, el ingrediente activo se puede emplear con una base de pomada paraflnica o miscible en agua. Alternativamente, el ingrediente activo se puede formular en una crema con una base de crema de aceite en agua o una base de agua en aceite. Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para administraciones topicas al

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ojo incluyen gotas para los ojos en las que el ingrediente activo se disuelve o suspende en un portador adecuado, especialmente un solvente acuoso. Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para administracion topica en la boca incluyen pastillas para chupar, pastillas y enjuagues bucales.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para administracion rectal se pueden presentar como supositorios o como enemas.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para administracion nasal en donde el portador es un solido incluyen un polvo grueso que tiene un tamano de partlcula por ejemplo en el rango de 20 a 500 micras que se administra de la manera en que se toma tabaco, es decir, por inhalacion rapida a traves del conducto nasal desde un recipiente de polvo mantenido cerca a la nariz. Las formulaciones adecuadas en donde el portador es un llquido, para administracion como una pulverizacion nasal o como gotas nasales, incluyen soluciones acuosas u oleosas del ingrediente activo.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para administracion por inhalacion incluyen polvos de partlculas finas o nieblas, que se pueden generar por medio de diversos tipos de aerosoles presurizados de dosis medida, inhaladores de dosis medida, inhaladores de polvo seco, nebulizadores o insufladores.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para administracion vaginal se pueden presentar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de pulverizacion.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para administracion parenteral incluyen soluciones de inyeccion esteriles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, reguladores, bacteriostaticos y solutos que hacen que la formulacion de la tonicidad farmaceuticamente aceptable con la sangre del receptor previsto; y suspensiones esteriles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspension y agentes espesantes. Las formulaciones se pueden presentar en recipientes de dosis unitaria o multiples dosis, por ejemplo ampollas selladas y frascos, y se pueden almacenar en una condicion seca por congelacion (liofilizado) que requiere solo la adicion del portador llquido esteril, por ejemplo agua para inyeccion, inmediatamente antes de uso. Las soluciones y suspensiones para inyeccion extemporanea se pueden preparar a partir de polvos esteriles, granulos y comprimidos.

Se debe entender que ademas de los ingredientes particularmente mencionados anteriormente, las formulaciones pueden incluir otros agentes convencionales en la tecnica teniendo en cuenta el tipo de formulacion en cuestion, por ejemplo aquellos adecuados para administracion oral pueden incluir agentes aromatizantes.

En los usos descritos anteriormente, se puede emplear solo un compuesto de la invencion, en combinacion con uno o mas de otros compuestos de la invencion o en combinacion con otros metodos o agentes terapeuticos. En particular, en metodos de tratamiento de una afeccion atenuada por la inhibicion de por lo menos una quinasa de la familia Raf y en los metodos de tratamiento de neoplasmas susceptibles, la combinacion con otros agentes quimioterapeuticos, biologicos, hormonales, anticuerpos y para cuidados de apoyo, esta prevista as! como tambien la combinacion con terapia quirurgica y radioterapia. Los agentes de cuidado de apoyo incluyen analgesicos, antiemeticos y agentes utilizados para tratar los efectos secundarios heamatologicos como neutropenia. Los analgesicos son bien conocidos en la tecnica. Los antiemeticos incluyen, pero no se limitan a antagonistas de 5HT3, tales como ondansetron, granisetron, dolasetron, palonosetron y similares; proclorperazina; metaclopromida; difenhidramina; prometazina; dexametasona; lorazepam; haloperidol; dronabinol; olanzapina; y antagonistas de neuroquinina-1, tales como aprepitant, fosaprepitant y casopitant administrados solos o en diversas combinaciones.

El termino “quimioterapeutico” como se utiliza aqul, se refiere a cualquier agente qulmico que tiene un efecto terapeutico sobre el sujeto al que se administra. Los agentes “quimioterapeuticos” incluyen, pero no se limitan a agentes antineoplasicos. Como se utiliza aqul, “agentes antineoplasicos” incluyen agentes citotoxicos y citostaticos, que incluyen terapias biologicas, inmunologicas y con vacunas. Las terapias de combinacion de este modo comprenden la administracion de por lo menos un compuesto de la invencion y el uso de por lo menos otro metodo de tratamiento. En una realizacion, las terapias de combinacion comprenden la administracion de por lo menos un compuesto de la invencion y la terapia quirurgica. En una realizacion, las terapias de combinacion comprenden la administracion de por lo menos un compuesto de la invencion y radioterapia. En una realizacion, las terapias de combinacion comprenden la administracion de por lo menos un compuesto de la invencion y por lo menos un agente de cuidados de apoyo (por ejemplo, por lo menos un agente antiemetico). En una realizacion, las terapias de combinacion comprenden la administracion de por lo menos un compuesto de la invencion y por lo menos otro agente quimioterapeutico. En una realizacion particular, la invencion comprende una combinacion que comprende un compuesto de la invencion y por lo menos un agente antineoplasico.

Como un aspecto adicional, los usos como se describio anteriormente, comprenden administrar un compuesto de la invencion junto con por lo menos un agente quimioterapeutico. En una realizacion particular, el agente quimioterapeutico es un agente antineoplasico. En otra realizacion, la invencion proporciona una composicion

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farmaceutica como se describio anteriormente que comprende adicionalmente por lo menos otro agente antineoplasico.

Los compuestos de la invencion y por lo menos una terapia antineoplasica o de cuidado de apoyo adicional se pueden emplear en combinacion de forma concomitante o secuencial en cualquier combination terapeuticamente apropiada. La administracion de un compuesto de la invencion con uno o mas de otros agentes antineoplasicos puede estar en combinacion de acuerdo con la invencion mediante administration concomitantemente en una composition farmaceutica unitaria que incluye ambos o todos los compuestos o dos o mas composiciones farmaceuticas separadas que incluye cada una uno o mas de los compuestos. Los componentes de la combinacion se pueden administrar por separado de una manera secuencial en la que un ingrediente activo se administra primero y el otro(s) despues o viceversa. Dicha administracion secuencial puede ser cercana en tiempo o remota en tiempo.

Cuando se utiliza un compuesto de la invencion en combinacion con un agente antineoplasico y/o de cuidados de apoyo, la dosis de cada compuesto puede diferir de aquella cuando el compuesto se utiliza solo. Las dosis apropiadas seran apreciadas facilmente por aquellos expertos en la tecnica. La dosis apropiada del compuesto (s) de la invencion y el otro agente terapeuticamente activo (s) y los tiempos relativos de administracion se seleccionaran con el fin de conseguir el efecto terapeutico combinado deseado, y estan dentro de la experiencia y el criterio del cllnico.

Normalmente, cualquier agente quimioterapeutico que tiene actividad contra un neoplasma susceptible que esta siendo tratado se puede utilizar en combinacion con los compuestos de la invencion, siempre que el agente particular sea cllnicamente compatible con la terapia que emplea un compuesto de la invencion. Los agentes antineoplasicos tlpicos utiles en la presente invencion incluyen, pero no se limitan a: agentes alquilantes, antimetabolitos, antibioticos antitumorales, agentes antimitoticos, inhibidores de topoisomerasa I y II, hormonas y analogos hormonales; retinoides, inhibidores de la ruta de transduction de senales, que incluyen inhibidores del crecimiento celular o de funcion del factor de crecimiento, inhibidores de angiogenesis, y inhibidores de serina/treonina u otras quinasas; inhibidores de quinasa dependientes de ciclina; terapias antisentido y agentes inmunoterapeuticos, que incluyen anticuerpos monoclonales, vacunas u otros agentes biologicos.

Los agentes alquilantes son agentes no especlficos de fase antineoplasicos y electrofilos fuertes. Normalmente, los agentes alquilantes forman enlaces covalentes, mediante alquilacion, al aDn a traves de unidades estructurales nucleofilas de la molecula de ADN tales como el fosfato, amino, y grupos hidroxilo. Dicha alquilacion altera la funcion del acido nucleico lo que lleva a la muerte celular. Los agentes alquilantes se pueden emplear en combinacion con los compuestos de la invencion en las composiciones y metodos descritos anteriormente. Los ejemplos de agentes alquilantes incluyen, pero no se limitan a mostazas de nitrogeno tales como ciclofosfamidas, temozolamida, melfalan, y clorambucilo; oxazafosforinas; sulfonatos de alquilo tales como busulfan; nitrosoureas tales como carmustina; triazenos tales como dacarbazina; y complejos de coordination de platino tales como cisplatino, oxaliplatino y carboplatino.

Los agentes neoplasicos antimetabolitos son agentes antineoplasicos con especificidad de fase que actuan en la fase S (slntesis de ADN) del ciclo celular al inhibir la slntesis de ADN o al inhibir la slntesis de purina o base de pirimidina y limitando de esta manera la slntesis de ADN. El resultado final de la interruption de la fase S es la muerte celular. Los agentes neoplasicos antimetabolitos se pueden emplear en combinacion con los compuestos de la invencion en las composiciones y metodos descritos anteriormente. Los ejemplos de agentes antineoplasicos antimetabolitos incluyen, pero no se limitan a analogos de purina y pirimidina y compuestos de antifolato, y mas especlficamente, hidroxiurea, citosina, arabinosido, ralitrexed, tegafur, fluorouracilo (por ejemplo, 5-FU), metotrexato, citarabina, mercaptopurina y tioguanina.

Los agentes antibioticos antitumorales son agentes sin especlficos de fase, que se unen o se intercalan con el ADN. Normalmente, dicha action altera la funcion ordinaria de los acidos nucleicos, lo que lleva a la muerte celular. Los antibioticos antitumorales se pueden emplear en combinacion con los compuestos de la invencion en las composiciones y metodos descritos anteriormente. Ejemplos de agentes antibioticos antitumorales incluyen, pero no se limitan a, actinomicinas tales como dactinomicina; antraciclinas tales como daunorrubicina, doxorrubicina, idarrubicina, epirrubicina y mitoxantrona; mitomicina C y bleomicinas. Los agentes antimicrotubulares o antimitoticos son agentes especlficos de fase activos contra los microtubulos de celulas tumorales durante la fase M o la mitosis del ciclo celular. Los agentes antimitoticos se pueden emplear en combinacion con los compuestos de la invencion en las composiciones y metodos descritos anteriormente. Ejemplos de agentes antimitoticos incluyen, pero no se limitan a, diterpenoides, alcaloides vinca, inhibidores de quinasa similar a polo (PLK) e inhibidores de CenpE. Ejemplos de diterpenoides incluyen, pero no se limitan a, paclitaxel y su analogo docetaxel. Ejemplos de alcaloides vinca incluyen, pero no se limitan a, vinblastina, vincristina, vindesina y vinorelbina. Los inhibidores de Plk se discuten mas adelante.

Los inhibidores de topoisomerasa incluyen inhibidores de topoisomerasa II e inhibidores de topoisomerasa I. Los inhibidores de topoisomerasa II, tales como epipodofilotoxinas, son agentes antineoplasicos derivados de la planta mandragora, que normalmente afecta a las celulas en las fases S y G2 del ciclo celular al formar un complejo

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ternario con la topoisomerasa II y el ADN, provocando roturas de la cadena de ADN. Las roturas de la cadena se acumulan y sigue la muerte celular. Ejemplos de epipodofilotoxinas incluyen, pero no se limitan a, etoposido y teniposido. Las camptotecinas, que incluyen camptotecina y derivados de camptotecina, estan disponibles o en desarrollo como inhibidores de topoisomerasa I. Ejemplos de camptotecinas incluyen, pero no se limitan a amsacrina, irinotecan, topotecan, y diversas formas opticas de 7- (4-metil-piperazino-metileno) 10,11 -etilenodioxi- 20-camptotecina. Se pueden emplear inhibidores de topoisomerasa en combinacion con los compuestos de la invencion en las composiciones y metodos descritos anteriormente.

Las hormonas y los analogos hormonales son compuestos utiles para el tratamiento de canceres en los que existe una relacion entre la hormona (s) y el crecimiento y/o la falta de crecimiento del cancer. Las hormonas y analogos hormonales antitumorales se pueden emplear en combinacion con los compuestos de la invencion en las composiciones y metodos descritos anteriormente. Ejemplos de hormonas y analogos hormonales que se considera son utiles en el tratamiento de neoplasmas incluyen, pero no se limitan a antiestrogenos, tales como tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, fulvestrant, yodoxifeno y droloxifeno; antiandrogenos; tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida y acetato de ciproterona; adrenocorticosteroides tales como prednisona y prednisolona; aminoglutetimida y otros inhibidores de aromatasa tales como anastrozol, letrozol, vorazol, y exemestano; progestrinas tales como acetato de megestrol; inhibidores de 5a-reductasa tales como el finasterida y dutasterida; y hormonas liberadora de gonadotropina (GnRH) y analogos de los mismos, tales como agonistas y antagonistas de hormona liberadora de hormona luteinizante (LHRH) tales como goserelina luprolida, leuprorelina y buserelina.

Los retinoide (s) son compuestos que se unen y activan por lo menos un receptor de acido retinoico seleccionado de RARa, RARp, y RARy y/o compuestos que se unen y activan por lo menos uno de RARa, RARp, y RARy y tambien por lo menos un receptor retinoico X (RXR), que incluyen RXRa, RXRp, y RXRy. Los retinoides para uso en la presente invencion normalmente tienen afinidad para RAR, y en particular para RARa y/o RARp. Sin embargo, ciertos retinoides sinteticos, tales como el acido 9-cis-retinoico tambien tienen afinidad para RAR y RXR. En una realizacion, el retinoide tiene afinidad por RARa (y agonista de RARa). Ejemplos de retinoides especlficos que se pueden utilizar en combinacion con los compuestos de la invencion incluyen: acido retinoico; acido todo-trans- retinoico (“ATRA”, tambien conocido como “tretinolna”); tamibarotene (“AM80”); acido 9-cis-retinoico (acido (2E,4E, 6Z,8E) - 3,7-dimetil-9- (2,6,6-trimetilciclohex-1-enil) nona-2,4,6,8-tetraenoico) (tambien conocido como “9-cis- tretinolna”) (disponible de Sigma); isotretinolna (acido (2Z,4E,6E,8E) -3,7-dimetil-9- (2,6,6-trimetil-1-ciclohexenil) nona- 2,4,6,8- tetraenoico) (tambien conocido como “acido 13-cis-retinoico”) (ACCUTANE®); Am580 (acido 4- (5,6,7,8-tetrahidro-5,5,8,8-tetrametil-2-naftamido) benzoico), Vease, M. Gianni, Blood 1996 87 (4): 1520-1531; TTNPB (acido 4- [E-2- (5,6,7,8-tetrahidro-5,5,8,8-tetrametil-2- naftalenil) -1-propenil] benzoico) (tambien conocido como “Ro 13- 7410”) Vease, MF Boehm et al. J. Med. Chem. 1994 37: 2930 y R.P. Bissonnette et al., Mol. Cell. Biol. 1995 15: 5576; y bMs753 (acido 4 - [[(2,3-dihidro-1, 1,3,3-tetrametil- 2-oxo-1 H-inden-5-il) carbonil] amino] benzoico) Vease, USPN 6184256. Otros agonistas de RARa conocidos en la tecnica tambien se pueden utilizar en la presente invencion.

Los inhibidores de la ruta de transduccion de senal son aquellos inhibidores que bloquean o inhiben un proceso qulmico que provoca un cambio intracelular. Como se utiliza aqul estos cambios incluyen, pero no se limitan a, proliferacion o diferenciacion celular o supervivencia. Los inhibidores de la ruta de transduccion de senal utiles en la presente invencion incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de tirosina quinasas receptoras, tirosina quinasas no receptoras, bloqueadores de dominio SH2/SH3, serina/treonina quinasas, fosfatidil inositol-3-OH quinasas, serialization de mioinositol, y oncogenes Ras. Los inhibidores de ruta de transduccion de senal se pueden emplear en combinacion con los compuestos de la invencion en las composiciones y metodos descritos anteriormente.

Diversas protelnas de tirosina quinasas catalizan la fosforilacion de residuos de tirosina especlficos en diversas protelnas implicadas en la regulation del crecimiento celular. Dichas protelnas de tirosina quinasas se pueden clasificar ampliamente como quinasas receptoras o no receptoras.

Los inhibidores del receptor de tirosina quinasa que se pueden combinar con los compuestos de la invencion incluyen aquellos implicados en la regulacion del crecimiento celular, cuyos receptores tirosina quinasas se refieren a veces como “receptores de factores de crecimiento”. Ejemplos de inhibidores del receptor del factor de crecimiento, incluyen, pero no se limitan a inhibidores de: receptores del factor de crecimiento de insulina (IGF-1R, IR y IRR); receptores de la familia del factor de crecimiento epidermico (EGFR, ErbB2 y ErbB4); receptores del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR), receptores del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGFRs), tirosina quinasa con dominios de homologla del factor de crecimiento epidermico y similar a inmunoglobulina y (TIE-2), factor estimulante de colonias de macrofagos (c-FMS), c-kit, c-met, receptores del factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR), receptores del factor de crecimiento de hepatocitos (HGFRs), los receptores Trk (TrkA, TrkB, y TrkC), receptores de efrina (EPH) y protooncogen RET.

Diversos inhibidores de receptores de factores de crecimiento estan en desarrollo e incluyen antagonistas de ligandos, anticuerpos, inhibidores de tirosina quinasa, oligonucleotidos antisentido y aptameros. Cualquiera de estos inhibidores del receptor del factor de crecimiento se puede emplear en combinacion con los compuestos de la invencion en cualquiera de las composiciones y metodos/usos descritos aqul. El Trastuzumab (Herceptin®) es un

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ejemplo de un inhibidor de anticuerpo anti-erbB2 de la funcion del factor de crecimiento. Un ejemplo de un inhibidor de anticuerpo anti-erbB1 de la funcion del factor de crecimiento es cetuximab (Erbitux™, C225). El Bevacizumab (Avastin®) es un ejemplo de un anticuerpo monoclonal dirigido contra VEGFR. Ejemplos de inhibidores de molecula pequena de los receptores del factor de crecimiento epidermico incluyen, pero no se limitan a lapatinib (Tykerb™) y erlotinib (TARCEVA®). El Imatinib (Gleevec®) es un ejemplo de un inhibidor de PDGFR. Ejemplos de inhibidores de VEGFR incluyen pazopanib, ZD6474, AZD2171, PTK787, sunitinib y sorafenib.

En una realizacion, la invention proporciona un compuesto de la invention en combination con un inhibidor de EGFR o ErbB para uso en tratamiento de cualquiera de las diversas afecciones enumeradas anteriormente. En una realizacion particular de la presente invencion un compuesto de la invencion se utiliza en combinacion con lapatinib. En una realizacion particular de la presente invencion un compuesto de la invencion se utiliza en combinacion con trastuzumab. En una realizacion particular de la presente un compuesto de la invencion se utiliza en combinacion con erlotinib. En una realizacion particular de la presente invencion un compuesto de la invencion se utiliza en combinacion con gefitinib.

En otra realizacion, la presente invencion proporciona un compuesto de la invencion en combinacion un inhibidor de VEGFR para uso en el tratamiento de cualquiera de las diversas afecciones enumeradas anteriormente. En una realizacion particular de la presente invencion un compuesto de la invencion se utiliza en combinacion con pazopanib.

Las tirosina quinasas que son no son quinasas del receptor de factor de crecimiento de transmembrana se denominan tirosina quinasas no receptoras o intracelulares. Los Inhibidores de las tirosina quinasas no receptoras algunas veces se denominan como “agentes antimetastasicos” y son utiles en la presente invencion. Los objetivos y objetivos potenciales de los agentes antimetastasicos, incluyen, pero no se limitan a, c-Src, Lck, Fyn, Yes, Jak, quinasa Abl (c-Abl y Bcr-Abl), FAK (quinasa de adhesion focal) y tirosina quinasa de Bruton (BTK). Quinasas no receptoras y agentes, que inhiben la funcion de la tirosina quinasa no receptora, se describen en Sinha, S. y Corey, S.J., (1999) J. Hematother. Stem Cell Res. 8:465-80; y Bolen, J.B. y Brugge, J.S., (1997) Annu. Rev. of Immunol. 15:371-404.

Los bloqueadores de dominio SH2/SH3 son agentes que interrumpen la union del de dominio SH2 o SH3 en una variedad de enzimas o protelnas adaptadoras que incluyen, pero no se limitan a, subunidad p85PI3-K, quinasas de la familia Src, moleculas adaptadoras (Shc, Crk, Nck, Grb2) y Ras-GAP. Ejemplos de inhibidores de Src incluyen, pero no se limitan a, dasatinib y y BMS-354825 (J.Med.Chem (2004) 47:6658-6661).

Los inhibidores de serina/treonina quinasas tambien se pueden utilizar en combinacion con los compuestos de la invencion en cualquiera de las composiciones y metodos descritos anteriormente. Ejemplos de inhibidores de serina/treonina quinasas que tambien se pueden utilizar en combinacion con un compuesto de la presente invencion incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de quinasas similares a polo (familia Plk por ejemplo, Plk1, Plk2, y Plk3), que desempenan una funcion crlticas en los procesos regulares en el ciclo celular que incluyen la entrada y salida de mitosis; bloqueadores de la cascada de MAP quinasa, que incluyen otros inhibidores de la quinasa Ras/Raf, mitogeno o quinasas reguladas extracelulares (MEKs), y quinasas reguladas extracelulares (ERKs); inhibidor de quinasas Aurora (que incluyen inhibidores de Aurora A y Aurora B); bloqueadores del miembro de la familia de la protelna de quinasa C (PKC), que incluyen inhibidores de subtipos PKC (alfa, beta, gamma, ypsilon, mu, lambda, iota, zeta); inhibidores de la familia de quinasa kappa-B (IkB) (IKK-alpha, IKK-beta); inhibidores de familia de quinasa PKB/Akt; e inhibidores de receptor quinasa receptorasTGF-beta s. Ejemplos de inhibidores de Plk se describen en la Publication PCT No. WO04/014899 y WO07/03036. Otros ejemplos de inhibidores de serina/treonina quinasa se conocen en la tecnica. En otra realizacion, la presente invencion proporciona un compuesto de la invencion en combinacion con un inhibidor de Plk para uso en el tratamiento de cualquiera de las diversas afecciones enumeradas anteriormente. En una realizacion particular la presente invencion comprende un compuesto de la invencion en combinacion con 5-{6-[(4-metilpiperazin-1-il)metil]-1H- bencimidazol- 1-il}-3-{(1R)-1- [2-

(trifluorometil)fenil]etoxi} tiofeno-2- carboxamida para dicho uso.

La uroquinasa, tambien conocida como activador del plasminogeno tipo uroquinasa (uPA), es una serina proteasa. La activation de la plasmina de la proteasa serina desencadena una cascada proteolisis que esta implicado en la trombolisis o degradation de matriz extracelular. La expresion elevada de la uroquinasa y diversos otros componentes del sistema de activacion del plasminogeno se han correlacionado con tumor maligno que incluyen diversos aspectos de la biologla del cancer tales como adhesion celular, migration y tambien rutas de mitosis celular. Los inhibidores de expresion de uroquinasa se pueden utilizar en combinacion con los compuestos de la invencion en las composiciones y metodos descritos anteriormente.

Los inhibidores de Ras oncogen tambien pueden ser utiles en combinacion con los compuestos de la presente invencion. Dichos inhibidores incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de la farnesiltransferasa, transferasa de geranilo-geranilo, y proteasas CAAx as! como oligonucleotidos antisentido, ribozimas e inmunoterapia. Dichos inhibidores han demostrado que bloquean la activacion de Ras en celulas que contienen Ras mutante, actuando de esta manera como agentes antiproliferativos.

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Los inhibidores de quinasas implicadas en el eje de senalizacion de IGF-1R tambien pueden ser utiles en combinacion con los compuestos de la presente invention. Dichos inhibidores incluyen, pero no se limitan a inhibidores de JNK1/2/3, PI3K, AKT y MEK, e inhibidores de senalizacion 14.3.3. Ejemplos de inhibidores de AKT se describen en la Publication PCT No. WO 2007/058850, publicada 24 de mayo 2007, que corresponde a la Solicitud PCT No. PCT/US2006/043513, presentada el 9 de noviembre de 2006. Una inhibidor de AKT particular, describe all! es 4-(2-(4-amino-1,2,5-oxadiazol-3-il)-1-etil-7-{[(3S)-3- piperidinilmetil] oxi}-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3- butin-2-ol.

Los inhibidores de senalizacion ciclo celular, que incluyen inhibidores de quinasas dependientes de ciclina (CDKs) son tambien utiles en combinacion con los compuestos de la invencion en las composiciones y metodos descritos anteriormente. Los ejemplos de quinasas dependientes de ciclina, que incluyen CDK2, CDK4, y CDK6 e inhibidores para el mismo se describen en, por ejemplo, Rosania G. R., et al., Exp. Opin. Ther. Patentes (2000) 10: 215-230.

Los inhibidores de la angiogenesis de la quinasa receptora tambien pueden encontrar uso en la presente invencion. Los inhibidores de la angiogenesis relacionados con VEGFR y TIE-2 se analizan anteriormente con respecto a la inhibidores de transduction de senal (ambas son tirosina quinasas receptoras). Otros inhibidores se pueden utilizar en combinacion con los compuestos de la invencion. Por ejemplo, los anticuerpos anti-VEGF, que no reconocen VEGFR (la tirosina quinasa receptora), pero se unen al ligando; inhibidores de moleculas pequenas de integrina (alfaV beta3) que inhiben la angiogenesis; endostatina y angiostatina (no RTK) tambien pueden resultar utiles en combinacion con los compuestos de la invencion. Un ejemplo de un anticuerpo VEGFR es bevacizumab (AVASTIN®).

Los inhibidores de miembros de la familia de fosfatidil inositol-3-OH quinasa que incluyen bloqueadores de PI3- quinasa, ATM, DNAPK, y Ku tambien pueden ser utiles en combinacion con la presente invencion.

Tambien de uso potencial en combinacion con los compuestos de la invencion son inhibidores de senalizacion de mioinositol tales como bloqueadores de la fosfolipasa C y analogos de mioinositol.

Tambien se pueden utilizar siARN, ARNi, polinucleotidos de acido nucleico bloqueados, y las terapias antisentido tambien se pueden utilizar en combinacion con los compuestos de la invencion. Ejemplos de dichas terapias antisentido incluyen aquellas dirigidas hacia los objetivos descritos anteriormente, tales como ISIS 2503 y los metodos de terapia genica tales como aquellos que utilizan la timidina quinasa o la citosina desaminasa. Los agentes utilizados en reglmenes inmunoterapeuticos tambien pueden ser utiles en combinacion con los compuestos de la invencion. Los reglmenes inmunoterapeuticos incluyen metodos ex-vivo e in-vivo para aumentar la inmunogenicidad de las celulas tumorales del paciente, tales como transfection con citoquinas (por ejemplo. IL-2, IL- 4, GMCFS y MCFS), metodos para aumentar la actividad de las celulas T, metodos con celulas inmunes transfectadas y metodos con anticuerpos anti-idiotlpicos. Otro regimen inmunoterapeutico potencialmente util es el de anticuerpos monoclonales con los receptores Fc de tipo natural que pueden illcitar una respuesta inmune en el anfitrion (anticuerpos monoclonales por ejemplo, IGF-1R).

Tambien se pueden utilizar agentes utilizados en reglmenes proapoptoticos (por ejemplo, oligonucleotidos antisentido Bcl-2) en combinacion con los compuestos de la invencion. Los miembros de la familia de protelnas Bcl-2 bloquean la apoptosis. Por lo tanto, la regulation por aumento de Bcl-2 se ha vinculado con la quimiorresistencia. Los estudios han demostrado que el factor de crecimiento epidermico (EGF) estimula los miembros antiapoptoticos de la familia Bcl-2 (es decir, mcl-1). Por lo tanto, las estrategias disenadas para regular por disminucion la expresion de Bcl-2 en tumores han demostrado beneficio cllnico y estan ahora en la fase II/III, a saber, oligonucleotidos antisentido bcl-2 G3139 de Genta. Dichas estrategias proapoptoticas que utilizan la estrategia de oligonucleotidos antisentido para Bcl-2 se analizan en Water, J.S., et al., J. Clin. Oncol. (2000) 18:1812-1823; y Kitada, S., et al., Antisense Res. Dev. (1994) 4:71-79.

Los compuestos de formula (I) se pueden preparar utilizando los procesos descritos adelante. En todos los esquemas descritos a continuation, se entiende que se pueden emplear donde sea necesario grupos protectores de acuerdo con los principios generales conocidos por aquellos expertos en la tecnica, por ejemplo, vease Green, T.W. y Wuts, P.G.M. (1991) Group protectors in Organic Synthesis, John Wiley & Sons. La selection de un grupo protector particular, y los procesos para instalacion y eliminacion de los grupos protectores estan dentro de la experiencia de aquellos expertos en la tecnica. La seleccion de los procesos de instalacion y elimination de grupos protectores, as! como las condiciones de reaction y orden de su ejecucion sera consistente con la preparation de compuestos de la invencion.

Los compuestos de la formula (I), se pueden preparar de forma conveniente por los metodos representados en el Esquema 1 adelante.

Esquema 1

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R10 es halo (preferiblemente cloro) o tiometilo;

5 E es un ester carboxllico adecuado o ester carboxllico equivalente, particularmente un ester de metilo, ester de etilo, o amida de Weinreb;

Ra es H o CH3;

alqu es alquilo o alquenilo; y

todas las otras variables son como se definio anteriormente.

10 En este y los Esquemas de reaccion posterior, NBS es N-bromosuccinimida.

El proceso para preparar los compuestos de la formula (I) de acuerdo con Esquema 1 (todas las formulas y todas las variables que se han definido anteriormente) comprende las etapas de:

a) hacer reaccionar un compuesto de la formula (II) con un compuesto de la formula (VII) para preparar un compuesto de la formula (X);

15 b) condensar el compuesto de la formula (X) con una pirimidina sustituida de la formula (III) para preparar un compuesto de la formula (XI);

c) hacer reaccionar el compuesto de la formula (XI) con un agente de bromacion adecuado, seguido por hacer reaccionar con uno de:

i) una tiourea,

20 ii) una formamida,

iii) una amida,

iv) una tioamida, o

v) una urea;

para preparar un compuesto de la formula (VIII);

d) hacer reaccionar el compuesto de la formula (VIII) con uno de: i) hidrogeno molecular

5 ii) un reactivo de metal alquilo o reactivo de metal alquenilo

iii) un alcohol, o

iv) un compuesto de la formula (IX): N(Ra)-R8, en donde Ra es H o CH3, para preparar un compuesto de la formula (I);

e) opcionalmente convertir el compuesto de la formula (I) a una sal farmaceuticamente aceptable del mismo; y

10 f) opcionalmente convertir el compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo a un compuesto diferente de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

El orden de las etapas anteriores no es crltico a los procesos y el proceso se puede llevar a cabo utilizando cualquier orden de las etapas.

Los compuestos de la formula (I) en donde R4 es H se puede preparar al hacer reaccionar un compuesto de la 15 formula (VIII) con una fuente de hidrogeno molecular en la presencia de un catalizador de metal de transicion:

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en donde todas las variables son como se definio anteriormente.

Las condiciones apropiadas para la reaccion de reduccion seran evidentes para aquellos expertos en la tecnica e incluyen hidroxido de paladio sobre carbono, paladio sobre carbono, platino sulfurado sobre carbono, o nlquel Raney 20 utilizando formiato de amonio u otra fuente adecuada de hidrogeno molecular o alternativamente bajo una atmosfera de hidrogeno. La reaccion se puede llevar a cabo en un solvente inerte a ya sea presion atmosferica o elevada. La reaccion se puede llevar a cabo a una temperatura de aproximadamente 25°C a 80°C, preferiblemente 50-70°C. Los solventes inertes adecuados incluyen, pero no se limitan a etanol, metanol, y acetato de etilo.

Los compuestos de la formula (I) en donde R4 es alquilo, haloalquilo, alquenilo, -R5-OR6, R5-CO2R6, -R5-SO2R6, -R5- 25 Het o -R5-NR6R7, se puede preparar al hacer reaccionar un compuesto de la formula (VIII) con un alquilo o reactivo de metal alquenilo tal como los compuestos que tienen la formula AlqunMXm o XmMR5-CO2R6

en donde Alqu es alquilo o alquenilo;

n es 1, 2, 3 o 4; M es un metal de transicion tal como Zn, B o Sn;

X es halo, particularmente Cl o Br;

30 m es 0, 1 o 2; y

todas las otras variables son como se definio anteriormente:

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R4a es alquilo, haloalquilo, alquenilo, -R5-OR6, o R5-CO2R6 ; y todas las otras variables son como se definio anteriormente.

5 Ejemplos especificos de alquilo adecuado o reactivos de metal alquenilo incluyen pero no se limitan a dialquilcinc, alquilcinc haluros, alquilboranos, alqueniloboranos, alqueniloboratos y alqueniloestannanos, ya sea encontrados comercialmente o que se pueden preparar por aquellos expertos comunes en la tecnica por medios convencionales.

En particular, se realiza la reaccion en la presencia de una fuente de una fuente de paladio, opcionalmente un ligando de fosfina y opcionalmente una base en un solvente inerte adecuado. Ejemplos de fuentes de paladio 10 adecuadas incluyen pero no se limitan a bis(tri-t-butilfosfina) paladio (0), tris(dibencilidenoacetona)dipaladio (0), diclorobis(trifenilfosfina)- paladio (II) o acetato(2'-di-t-butilfosfino-1,1'-bifenil-2-il)paladio (II). Ejemplos de ligandos de fosfina adecuados incluyen pero no se limitan a 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino) xanteno y trifenilfosfina. Ejemplos de bases adecuadas incluyen pero no se limitan a acetato de potasio, carbonato de cesio, metoxido de sodio, y trietilamina. Ejemplos de solventes inertes adecuados incluyen pero no se limitan a THF, tolueno, N,N- 15 dimetilformamida o 1,4-dioxano, o isopropanol en el caso de alqueniloboratos. La reaccion se puede llevar a cabo a una temperatura de aproximadamente 25°C a 100°C.

Un compuesto de la formula (I2) en donde R4 es alquenilo, se puede convertir a un compuesto de la formula (I) en donde R4 es -R5-SO2R6, -R5-Het o -R5-NR6R7 mediante reaccion con un nucleofilo apropiado. Por ejemplo un compuesto de la formula (I) en donde R4 es -R5-SO2R6, o -R5NR6R7 se puede preparar al hacer reaccionar un 20 compuesto de la formula (I2) en donde R4 es alquenilo con un tiol o amina, respectivamente. Las condiciones de reaccion para dichas transformaciones se conocen por aquellos expertos en la tecnica.

Se preparan los compuestos de la formula (I) en donde R4 es -OR6, d al hacer reaccionar un compuesto de la formula (VIII) con un alcohol adecuado:

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25 en donde todas las variables son como se definio anteriormente.

Ejemplos especificos de alcoholes adecuados incluyen pero no se limitan a metanol, etanol, n-propanol o n-butanol. La reaccion opcionalmente se puede llevar a cabo en la presencia de una base tal como, pero no limitada a carbonato de cesio, metoxido de sodio, y trietilamina. La reaccion normalmente se lleva a cabo a una temperatura de aproximadamente 50-120°C, a presion atmosferica o elevada y opcionalmente en un microondas.

30 Se preparan los compuestos de la formula (I) en donde R4 es N(H)R8 (es decir, los compuestos de la formula (I4)) al hacer reaccionar un compuesto de la formula (VIII) con un compuesto de la formula (IX):

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en donde R es H o CH3 y todas las otras variables son como se definio anteriormente.

Aquellos expertos en la tecnica reconoceran que las condiciones requeridas para la anterior reaccion diferi ran dependiendo de la definicion de R10. Cuando R10 es halo (preferiblemente cloro), la reaccion en general se realiza en un solvente puro. Los solventes adecuados incluyen pero no se limitan a isopropanol, metanol, 1,4-dioxano, etanol, dimetilacetamida, triflouroetanol, y N,N-dimetilformamida. La reaccion normalmente se lleva a cabo a una temperatura desde aproximadamente 30 hasta aproximadamente 120°C, o opcionalmente en un aparato de microondas. En la realizacion donde R4 es NH2, la reaccion se lleva a cabo con una fuente de amoniaco, por ejemplo, amoniaco en metanol o preferiblemente hidroxido de sodio. La reaccion normalmente se lleva a cabo sin la adicion de otros solventes y a temperaturas de aproximadamente 60°C a aproximadamente 120°C, en un recipiente de reaccion sellado u opcionalmente en un aparato de microondas. Sera evidente para aquellos expertos en la tecnica de la qulmica organica, tambien puede ser deseable instalar grupos protectores adecuados apropiados antes de hacer reaccionar el compuesto de la formula (VIII) con el compuesto de la formula (IX). Por ejemplo, en la realizacion, en donde R4 es un grupo que contiene una amina primaria pendiente o secundaria, la adicion preferiblemente se lleva a cabo cuando la amina pendiente se protege como, por ejemplo, su carbamato de t-butilo correspondiente o trifluoracetamida. La eleccion, instalacion y eliminacion de los grupos protectores apropiados para las reacciones de este tipo es convencional en la tecnica. Los compuestos de formula (IX) estan disponibles comercialmente o se pueden sintetizar utilizando tecnicas convencionales en la arte.

Cuando R10 es tiometilo, el tiometilo primero se puede convertir a un grupo saliente mas adecuado, por ejemplo sulfoxido, sulfona, o cloruro. El tiometilo se puede convertir en un sulfoxido o sulfona mediante oxidacion con un agente de oxidacion apropiado, por ejemplo oxona, peryodato de sodio, o acido meta-cloroperbenzoico, en un solvente apropiado, por ejemplo diclorometano, metanol, o agua. Aquellos expertos en la tecnica reconoceran que esto producira un analogo del compuesto de la formula (VIII) en el que R10 es un sulfoxido o sulfona. El producto oxidado luego se hace reaccionar con el compuesto de la formula (IX) para preparar un compuesto de la formula (I).

Estas reacciones en general se realizan en un solvente adecuado, por ejemplo 2-propanol, dimetilacetamida, o dioxano, opcionalmente con la adicion de acido, por ejemplo acido clorhldrico, y a una temperatura de 25-110°C, preferiblemente 70-90°C, o en un reactor de microondas a una temperatura de 90-220°C, preferiblemente 160- 190°C.

Alternativamente, el pirimidinil sulfoxido o sulfona se pueden convertir a la hidroxil pirimidina mediante reaccion con un acido acuoso apropiado, por ejemplo acido clorhldrico o acido acetico, a una temperatura de 25-110°C, preferiblemente 70-90°C. La hidroxil pirimidina luego se puede convertir a un cloruro utilizando un reactivo de clorinacion apropiado, por ejemplo oxicloruro de fosforo o cloruro de tionilo, opcionalmente en un solvente, por ejemplo diclorometano, a una temperatura de 25-120°C, preferiblemente 60-80°C. Aquellos expertos en la tecnica reconoceran que este proceso producira un compuesto de la formula (VIII) en donde R10 es cloro, que se puede hacer reaccionar con un compuesto de la formula (IX) como se describio anteriormente.

Los compuestos de la formula (VIII) se puede preparar al hacer reaccionar un compuesto de la formula (XI) con un reactivo de bromacion adecuado, particularmente bromo o NBS, seguido al hacer reaccionar con uno de: 1) una tiourea, 2) una formamida 3) una amida 4) una tioamida o 5) una urea dependiendo de si el tiazol u oxazol y que sustituyentes R3 particulares, se desean:

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en donde todas las variables son como se definio anteriormente.

En este y los Esquemas posteriores, la referencia a tiourea, formamida, amida, tioamida o urea en relacion con este tipo de reaccion se refiere a tiourea no sustituida, formamida, amida, tioamida o urea y analogos sustituidos de los mismos. En particular, la tiourea, formamida, amida, tioamida o urea se pueden sustituir con el grupo deseado R3. 5 Los analogos de tiourea, formamida, amida, tioamida o urea adecuadamente sustituidos estan comercialmente disponibles o se pueden preparar utilizando tecnicas convencionales.

Cuando un aminotiazol (es decir, el compuesto de la formula (VIII) en donde W es S y R3 es -NR6R7 o Het se desea, la reaccion se puede lograr mediante bromacion inicial de un compuesto de la formula (XI) utilizando un reactivo de bromacion apropiado, por ejemplo bromo en solvente tal como acido acetico o NBS:

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La reaccion normalmente se lleva a cabo en un solvente apropiado, por ejemplo diclorometano, N,N- dimetilformamida, o N,N-dimetilacetamida, y a una temperatura de 25-50°C, particularmente 25C. El analogo brominado (es decir, un compuesto de la formula (XI-A)) luego se hace reaccionar con una tiourea apropiadamente sustituida:

15

en donde W es S, R3a es -NR6R7 o Het y todas las otras variables son como se definio anteriormente.

La reaccion normalmente se lleva a cabo en un solvente apropiado, por ejemplo, N,N-dimetilformamida, N,N- dimetilacetamida, diclorometano, tetrahidrofurano, dioxano, o acetonitrilo, opcionalmente en la presencia de una base adecuada, por ejemplo carbonato de magnesio o bicarbonato de sodio, y a una temperatura de 25-90°C, 20 particularmente 25-50°C. Aquellos expertos en la tecnica reconoceran que la tiourea puede ser no sustituida, resultando de esta manera en un compuesto de la formula (VIII) en donde R3 es NH2; o la tiourea puede llevar uno o mas sustituyentes adicionales sobre uno de los atomos de nitrogeno.

En esta y reacciones posteriores, un compuesto, tal como un compuesto de la formula (VIII), en donde R3 es un grupo amino (es decir, -NR6R7), se puede convertir a un compuesto correspondiente en donde R3 es diferente de 25 amino (o amino sustituido) utilizando las tecnicas descritas aqul y aquellas convencionales en la tecnica.

Por ejemplo, el compuesto aminotiazol de la formula (VIII-A) en donde R3 es un grupo amino, se puede convertir a un tiazol no sustituido (es decir, un compuesto de la formula (VIII) en donde R3 es H) utilizando metodos familiares a aquellos expertos en la tecnica. Por ejemplo, el tiazol se puede preparar al hacer reaccionar el aminotiazol con un reactivo apropiado, por ejemplo nitrito de t-butilo, en un solvente apropiado, por ejemplo tetrahidrofurano, y a una 30 temperatura de 35-75°C, particularmente 40-60°C.

Cuando se desea un tiazol sustituido, se puede modificar un aminotiazol de la formula (VIII) de acuerdo con metodos que seran familiares a aquellos expertos en la tecnica. Por ejemplo, el compuesto aminotiazol de la formula (VIII-A) se puede convertir a un compuesto de la formula (VIII-B) mediante reaccion con reactivos capaces de reemplazar el grupo amino con un haluro, preferiblemente un bromuro:

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10

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20

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La conversion a un halo-tiazol de la formula (VIII-B) se puede llevar a cabo mediante reaccion con por ejemplo, nitrito de t-butilo y bromuro de cobre (II) en un solvente adecuado, tal como tetrahidrofurano o acetonitrilo, y a una temperatura desde -10°C hasta 50°C, preferiblemente 0°C a 25°C. El halo-tiazol de la formula (VIII-B), luego se puede hacer reaccionar bajo una variedad de condiciones conocidas por aquellos expertos en la tecnica para producir diferentes compuestos de tiazol de la formula (VIII-C) en donde R3 puede ser una variedad de sustituyentes consistentes con la definition de R3 en referencia a los compuestos de la Formula (I).

Un ejemplo de dicha reaccion es similar al metodo de J. Tsuji “Palladium Reagents and Catalysts: Innovations in Organic Synthesis”, Wiley, Chichester, UK, 1995, que involucra la reaccion del halo-tiazol de la formula (VIII-B) con un reactivo capaz de experimentar acoplamiento con base en paladio para preparar los compuestos de la formula (VIII-C) en donde R3c es alquilo, haloalquilo, o alquenilo:

imagen16

en donde Hal es halogeno;

R3c es alquilo, haloalquilo o alquil-OH; y

todas las otras variables son como se definio anteriormente.

Por ejemplo se puede hacer reaccionar el halo-tiazol de la formula (VIII-B) con un acido boronico, ester de boronato, alquilo estano, alquilo cinc o reactivo de Grignard, en un solvente apropiado, por ejemplo tetrahidrofurano, dioxano, o dimetilformamida, en la presencia de un catalizador capaz de inducir dicha transformation, particularmente un catalizador de paladio, por ejemplo paladiodicolorobistrifenilfosfina, y a una temperatura de 25-150°C, preferiblemente 25-60°C. Aquellos expertos en la tecnica reconoceran que aquellas reacciones de acoplamiento a menudo requeriran la adicion de una base adecuada, tal como carbonato de sodio acuoso, carbonato de cesio, o trietilamina y/o la adicion de un ligando adecuado para las especies de paladio, por ejemplo una trialquilfosfina o una triarilfosfina, por ejemplo trifenilfosfina.

Otro ejemplo de dicha reaccion involucra la reaccion del halo-tiazol de la formula (V-B) con un reactivo capaz de desplazar el bromuro, por ejemplo una amina, tal como piperidina, metilamina, o metil piperazina:

5

10

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25

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en donde Hal es halogeno;

R3d es -NR6R7; y

todas las otras variables son como se definio anteriormente.

En el caso de hacer reaccionar un halo-tiazol de la formula (VIII-B) con una amina o amina sustituida (por ejemplo, dimetilamina) la reaccion en general se realiza al hacer reaccionar el compuesto de la formula (V-B) con la amina o amina sustituida opcionalmente en un solvente adecuado, tal como 2-propanol, dioxano, o dimetilformamida, a una temperatura de 25° C a 150°C, preferiblemente 50-90°C, opcionalmente en la presencia de un acido adecuado, por ejemplo acido clorhldrico.

De acuerdo con otro proceso para producir un tiazol sustituido de la formula (VIII), un compuesto de la formula (XIA) se hace reaccionar con una tioamida, por ejemplo tioacetamida, para preparar un compuesto de la formula (VIII-D) en donde R3d es alquilo:

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en donde todas las variables son como se definio anteriormente.

Las tioamidas sustituidas con alquilo para uso en este proceso estan comercialmente disponibles o se puede preparar utilizando tecnicas convencionales. Normalmente, la reaccion se lleva a cabo en un solvente apropiado, por ejemplo, diclorometano, tetrahidrofurano, dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, o acetonitrilo, particularmente dimetilformamida o N,N-dimetilacetamida, opcionalmente en la presencia de una base adecuada, por ejemplo carbonato de magnesio o bicarbonato de sodio, y a una temperatura de 35-100°C, preferiblemente 50-80°C.

En la realizacion en donde se desea un oxazol de la formula (VIII) en donde R3 es H, la reaccion se puede lograr al hacer reaccionar el compuesto de la formula (XI-A) con formamida en la presencia de un acido, tal como acido sulfurico, y a una temperatura de 60-150°C, preferiblemente 90-130°C:

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en donde todas las variables son como se definio anteriormente.

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Un oxazol sustituido de la formula (VIII-F) se puede preparar a partir del compuesto de la formula (XI-A):

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en donde

R3e es Het o -NR6R7 y

todas las otras variables son como se definio anteriormente.

La reaccion se puede llevar a cabo al hacer reaccionar el compuesto de la formula (XI-A) con urea o urea sustituida en un solvente apropiado, por ejemplo, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida diclorometano, tetrahidrofurano, dioxano, o acetonitrilo, opcionalmente en la presencia de una base adecuada, por ejemplo carbonato de magnesio o bicarbonato de sodio, y a una temperatura de 25-170°C, particularmente 60-l50°C o en un reactor de microondas a una temperatura de 100-190° C, particularmente 120-160°C. Aquellos expertos en la tecnica contemplaran que se pueden emplear ureas sustituidas en el metodo anterior para preparar compuestos de la formula (VIII-F) en donde R3e es como se definio anteriormente. Un ejemplo de una urea sustituida para uso en este metodo es 1- pirrolidinacarboxamida. Las ureas sustituidas estan disponibles comercialmente o se pueden hacer utilizando tecnicas conocidas por aquellos expertos en la tecnica.

Un oxazol sustituido de la formula (VIII-G), tambien se pueden preparar a partir de un compuesto de la formula (XI- A):

imagen21

en donde

R3f es alquilo o haloalquilo y

todas las otras variables son como se definio anteriormente.

Normalmente, la reaccion se puede llevar a cabo al hacer reaccionar el compuesto de la formula (XI-A) con una amida (es decir, un compuesto de la formula R3f-C(O)NH2), por ejemplo acetamida, en un solvente apropiado, por ejemplo, diclorometano, tetrahidrofurano, dimetilformamida, o acetonitrilo, particularmente dimetilformamida pura, opcionalmente en la presencia de una base adecuada, por ejemplo carbonato de magnesio o bicarbonato de sodio, y a una temperatura de 35-170°C, preferiblemente 60-150°C o en un reactor de microondas a una temperatura de 100-190°C, particularmente 130-170°C. Las amidas adecuadas para uso en esta reaccion seran evidentes para aquellos expertos en la tecnica y estan comercialmente disponibles o se puede preparar utilizando tecnicas convencionales.

Como se apreciara por aquellos expertos en la tecnica un bromo-oxazol sustituido de la formula (VIII-H),

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en donde todas las otras variables son como se definio anteriormente;

tambien se puede preparar mediante conversion de un oxazol de la formula (VIII-F) (en donde R3 es una amina o grupo amino sustituido) al analogo de bromo utilizando tecnicas conocidas para aquellos expertos en la tecnica, que 5 incluyen aquellas descritas anteriormente.

Aquellos expertos en la tecnica reconoceran que algunas de las reacciones descritas anteriormente pueden ser incompatibles con compuestos de la formula (VIII) en los que R10 es cloruro. En dichas realizaciones, las reacciones anteriores se puede realizar utilizando compuestos de la formula (XI) en donde R10 es tiometilo, y posteriormente convertir el tiometilo a un grupo saliente mas adecuado, tal como un sulfoxido, sulfona o cloruro utilizando tecnicas 10 convencionales en la tecnica, que incluyen aquellas descritas anteriormente.

Los compuestos de la formula (XI) se puede preparar al hacer reaccionar un compuesto de la formula (X) con una pirimidina sustituida de la formula (III):

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15 La reaccion en general se realiza al hacer reaccionar un compuesto de la formula (X) y un compuesto de la formula (III) en la presencia de una base adecuada capaz de desprotonar un compuesto de la formula (III), por ejemplo hexametildisilazida de litio (LiHMDS), hexametildisilazida de sodio, o diisopropilamida de litio, particularmente LiHMDS, en un solvente apropiado, tal como THF, y a una temperatura de aproximadamente -78°C a aproximadamente 25°C, particularmente aproximadamente 0°C a aproximadamente 25°C.

20 Un compuesto de la formula (X) se puede preparar al hacer reaccionar el compuesto de la formula (II) con un compuesto de la formula (VII):

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Esta reaccion se puede llevar a cabo utilizando condiciones convencionales en la tecnica para dichas reacciones de acoplamiento, que incluyen el uso de un solvente tal como tetrahidrofurano, 1,4-dioxano o diclorometano a 25 temperatura ambiente o con calentamiento desde aproximadamente 40°C a aproximadamente 100°C. Aquellos expertos en la tecnica reconoceran que puede ser deseable llevar a cabo esta reaccion en la presencia de una base adecuada, por ejemplo piridina o trietilamina. Los compuestos de la formula (VII) estan disponibles comercialmente o se pueden sintetizar utilizando tecnicas convencionales en la tecnica.

Los compuestos de la formula (II) en donde Q1, Q2, Q3 y Q4 son CH estan disponibles comercialmente. Los 30 compuestos de la formula (II) en donde uno de Q1, Q2, Q3 y Q4 es C-R2 se puede preparar mediante reduccion del compuesto de la formula (XIII). Las condiciones apropiadas para la reaccion de reduccion seran evidentes para aquellos expertos en la tecnica e incluyen paladio sobre carbono bajo una atmosfera de hidrogeno, platino sulfurado sobre carbono bajo una atmosfera de hidrogeno, o polvo de hierro en acido acetico. En una realizacion, la reduccion se puede efectuar utilizando nlquel Raney bajo una atmosfera de hidrogeno. La reaccion se puede llevar a cabo en

un solvente inerte a ya sea presion atmosferica o elevada. Los solventes inertes adecuados incluyen pero no se limitan a etanol, metanol, y acetato de etilo.

imagen25

Los compuestos de la formula (XI11) se pueden preparar mediante oxidacion del compuesto de la formula (XX) 5 utilizando un agente de oxidacion apropiado tal como pero no limitado a trioxido de cromo o permanganato de potasio para producir compuestos de la formula (XXI). En una realizacion, la reaccion se realiza con trioxido de cromo bajo condiciones altamente acidas tales como en la presencia de acido sulfurico. La reaccion se puede llevar a cabo a una temperatura de aproximadamente 80°C a 100°C. Los compuestos de la formula (XXI) luego se pueden convertir a compuestos de la formula (XIII) mediante esterificacion de la funcionalidad acido utilizando condiciones 10 estandar para dichas transformaciones, especlficamente en metanol en la presencia de acido sulfurico catalltico:

imagen26

en donde todas las variables son como se definio anteriormente.

Alternativamente, los compuestos de la formula (II) en donde uno de Q1, Q2, Q3 y Q4 es C-R2 se puede preparar mediante reaccion del compuesto de la formula (XV) con una fuente de nitrogeno tal como benzofenona imina o 15 carbamato de t-butilo utilizando condiciones convencionales en la tecnica para reacciones de acoplamiento cruzado Buchwald. En particular, en la presencia de una fuente de paladio, opcionalmente un ligando de fosfina, y una base en un solvente inerte adecuado. Ejemplos de fuentes de paladio adecuadas incluyen pero no se limitan a tris(dibencilidenoacetona) dipaladio (0), diclorobis(trifenilfosfina)-paladio (II) o acetato( 2'-di-t-butilfosfino-1,1'-bifenil- 2-il)paladio (II). Ejemplos de ligandos de fosfina adecuados incluyen pero no se limitan a 9,9-dimetil-4,5- 20 bis(difenilfosfino) xanteno y trifenilfosfina. Ejemplos de bases adecuadas incluyen pero no se limitan a acetato de potasio, carbonato de cesio, metoxido de sodio, y trietilamina. Ejemplos de solventes inertes adecuados incluyen pero no se limitan a tolueno, N,N-dimetilformamida o 1,4-dioxano. La reaccion se puede llevar a cabo a una temperatura de aproximadamente 80°C a 150°C, opcionalmente en el microondas:

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25 en donde

X es halo, particularmente Br;

P es nitrogeno protegido, particularmente benzofenona imina o carbamato de t-butilo; y todas las otras variables son como se definio anteriormente.

Se puede lograr la conversion de los compuestos de la formula (XVI) a compuestos de la formula (II) mediante 30 reaccion con un acido fuerte en un solvente organico adecuado utilizando tecnicas de desproteccion acidas

10

convencionales. Los acidos adecuados utilizados en dichas transformaciones incluyen pero no se limitan a acido ciorhldrico. Los solventes adecuados para dichas transformaciones incluyen pero no se limitan a tetrahidrofurano y 1,4-dioxano. Vease, Kocienski, P.J. Protecting Groups, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1994; and Greene, T.W., Wuts, P. G. M. Protecting Groups in Organic Synthesis (2nd Edition), J. Wiley and Sons, 1991.

Como se anoto anteriormente, el orden de las etapas anteriores no es crltica. En otra realizacion, los compuestos de la formula (I) tambien se pueden preparar de acuerdo con Esquema 2, que demuestra un orden alternativo de las etapas de Esquema 1.

Esquema 2

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R10 es halo (preferiblemente cloro) o tiometilo;

E es un ester carboxllico adecuado o equivalente de ester, particularmente un ester de metilo, ester de etilo, o amida de Weinreb;

Alloc es alilcloroformato;

BusSnH es hidruto de estano de tri-n-butilo; y

todas las otras variables son como se definio anteriormente.

El proceso de acuerdo con el Esquema 2 comprende las etapas de:

a) instalar un grupo protector tal como alilcloroformato, sobre un compuesto de la formula (II) para preparar un compuesto de la formula (II-A);

b) condensar el compuesto de la formula (II-A) con un compuesto de pirimidina sustituida de la formula (III) para preparar un compuesto de la formula (IV);

c) hacer reaccionar el compuesto de la formula (IV) con un agente de bromacion adecuado seguido por uno de

i) una tiourea,

5 ii) una formamida,

iii) una amida,

iv) una tioamida, o

v) una urea;

para preparar un compuesto de la formula (V);

10 d) hacer reaccionar el compuesto de la formula (V) en la presencia de un catalizador de paladio para preparar un compuesto de la formula VI;

e) hacer reaccionar un compuesto de la formula (VI) con un compuesto de la formula (VII) para preparar un compuesto de la formula (VIII);

f) hacer reaccionar el compuesto de la formula (VIII) con uno de:

15 i) hidrogeno molecular

ii) un reactivo de metal alquilo o reactivo de metal alquenilo

iii) un alcohol, o

iv) un compuesto de la formula (IX),

para preparar un compuesto de la formula (I);

20 g) opcionalmente convertir el compuesto de la formula (I) a una sal farmaceuticamente aceptable del mismo; y

h) opcionalmente convertir el compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo a un compuesto diferente de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

La instalacion y eliminacion del grupo protector Alloc se puede alcanzar utilizando medios convencionales. Por ejemplo, el compuesto de la formula (II) se puede hacer reaccionar con alilcloroformato utilizando condiciones de 25 acilacion convencionales para aquellos expertos en la tecnica para la instalacion de grupos protectores de carbamato. Se puede alcanzar la eliminacion del grupo protector al hacer reaccionar el compuesto de la formula (V) con hidruro de tributilestano en la presencia de un catalizador de Pd y acido debil. En una realizacion diclorobis(trifenilfosfina)-paladio (II) se utiliza junto con acido acetico. Se puede utilizar una variedad de solventes que incluyen pero no se limitan a diclorometano, tolueno, eter de dietilo, acetona y N,N-dimetilformamida. Vease, 30 Kocienski, P.J. Protecting Groups, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1994; y Greene, T.W., Wuts, P. G. M. Protecting Groups in Organic Synthesis (2nd Edition), J. Wiley y Sons, 1991.

Las etapas restantes de la reaccion se pueden llevar a cabo generalmente de la manera descrita anteriormente para las etapas analogas en el Esquema 1.

Como un ejemplo adicional para cambiar el orden de las etapas, los compuestos de la formula (I) tambien se pueden 35 preparar de acuerdo con Esquema 3.

5

10

15

20

25

Esquema 3

imagen29

en donde

R10 es halo (preferiblemente cloro) o tiometilo, y

todas las otras variables son como se definio anteriormente.

De manera general, el proceso para preparar los compuestos de la formula (I) de acuerdo con Esquema 3 (todas las formulas y todas las variables que se han definido anteriormente) comprende las etapas de:

a) hacer reaccionar el compuesto de la formula (V) con uno de:

i) hidrogeno molecular

ii) un alquilo o reactivo de metal alquenilo

iii) un alcohol, o

iv) un compuesto de la formula (IX),

para preparar un compuesto de la formula (XVIII);

b) hacer reaccionar el compuesto de la formula (XVII) en la presencia de un catalizador de paladio para preparar un compuesto de la formula (XVIII);

c) hacer reaccionar el compuesto de la formula (XVIII) con un compuesto de la formula (VII) para preparar un compuesto de la formula (I);

d) opcionalmente convertir el compuesto de la formula (I) a una sal farmaceuticamente aceptable del mismo; y

e) opcionalmente convertir el compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo a un compuesto diferente de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

Cada uno de las etapas anteriores se puede llevar a cabo usando las tecnicas descritas mas arriba para reacciones analogas con diferentes materiales de partida.

Se apreciara por aquellos expertos en la tecnica que la eleccion optima de la secuencia de reaccion empleada para preparar un compuesto de la invencion particular puede depender del compuesto especlfico de la invention que se desea as! como tambien la preferencia y disponibilidad de materiales de partida.

Sera evidente para aquellos expertos en la tecnica, un compuesto de la formula (I) se puede convertir a otro compuesto de la formula (I) utilizando tecnicas bien conocidas en el arte. Por ejemplo, los compuestos de la formula

5

10

15

20

25

30

35

(I) se pueden modificar utilizando tecnicas convencionales para modificar o diversificar los grupos definidos por la variable R3 y de esta manera proporciona diferentes compuestos de la formula (I). Especlficamente, un compuesto de la formula (I-1) (en donde R3 es -NH2) se puede convertir a un compuesto de la formula (I-2) mediante aminacion reductora de la amina con acetona y cianoborohidruro de sodio:

imagen30

en donde todas las variables son como se definio anteriormente.

Tambien se puede convertir un compuesto de la formula (I-1) a un compuesto de la formula (I-3) al hacerla reaccionar con cloruro de mesilo:

imagen31

en donde todas las variables son como se definio anteriormente.

Con base en esta descripcion y los ejemplos contenidos all! un experto en la tecnica puede convertir facilmente un compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo en un compuesto diferente de la formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

La presente invencion tambien proporciona compuestos radiomarcados de la formula (I) y compuestos biotinilados de la formula (I) y versiones unidas a soporte solido de los mismos, es decir un compuesto de la formula (I) que tiene una radiomarca o biotina unida a este. Se pueden preparar los compuestos radiomarcados de la formula (I) y los compuestos biotinilados de la formula (I) utilizando tecnicas convencionales. Por ejemplo, se pueden preparar los compuestos radiomarcados de la formula (I) al hacer reaccionar el compuesto de la formula (I) con gas de tritio en la presencia de un catalizador apropiado para producir compuestos radiomarcados de la formula (I). En una realizacion, se tritian los compuestos de la formula (I).

Los compuestos radiomarcados de la formula (I) y compuestos biotinilados de la formula (I) son utiles en ensayos para la identificacion de compuestos que inhiben por lo menos una quinasa de la familia Raf, para la identificacion de compuestos para el tratamiento de una afeccion capaz de ser tratada con un inhibidor de Raf, por ejemplo, para el tratamiento de neoplasmas susceptibles a tratamiento con un inhibidor de Raf. Dicho metodo de ensayo para identificar dichos compuestos, comprende la etapa de especlficamente unir un compuesto radiomarcado de la invencion o un compuesto biotinilado de la invencion a la protelna objetivo u homogenato celular. Mas especlficamente, los metodos de ensayo adecuados incluiran ensayos de union de competicion. Los compuestos radiomarcados de la invencion y compuestos biotinilados de la invencion y versiones unidas a soporte solido de los mismos, tambien se pueden emplear en ensayos de acuerdo con los metodos convencionales en la tecnica.

Los siguientes ejemplos estan destinados solo para ilustracion y no estan destinados a limitar el alcance de la invencion en ninguna forma. La invencion se define por las reivindicaciones que siguen.

EJEMPLOS

Como se utiliza aqul, los slmbolos y convenciones utilizados en estos procesos, esquemas y ejemplos son consistentes con aquellos utilizados en la literatura cientlfica contemporanea, por ejemplo, the Journal of the American Chemical Society o the Journal of Biological Chemistry. En general se utilizan abreviaturas de una sola letra estandar o de tres letras para designar restos de aminoacidos, que se supone estan en la configuracion L a no

ser que se indique lo contrario. A menos que se indique lo contrario, todos los materiales de partida se obtuvieron de proveedores comerciales y se usaron sin purification adicional. Especlficamente, las siguientes abreviaturas se pueden utilizar en los ejemplos y en toda la especificacion:

atm (atmosfera);

CHCl3 (cloroformo);

g (gramos);

mCPBA (acido meta-cloroperbenzoico);

mg (miligramos);

DCC (diciclohexilcarbodiimida);

h (hora(s));

DCE (dicloroetano);

min (minutos);

DCM (CH2Cl2; diclorometano);

Hz (Hertz);

DIEA (N,N-Diisopropiletilamina);

MHz (megahertz);

DMA (dimetil acetamida);

i. v. (intravenosa);

DMAP (4-dimetilaminopiridina);

L (litros);

DME (1,2-dimetoxietano);

mL (mililitros); pL (microlitros);

DMEM (medio Eagle modificado con Dulbecco)

M (molar);

DMF (N,dimetilformamida);

mM (milimolar);

DMSO (dimetilsulfoxido);

mol (moles);

EDC (clorhidrato de etilcarbodiimida);

mmol (milimoles);

EDTA (acido etilenodiaminatetraacetico);

mp (punto de fusion);

Et (etilo; -CH2CH3)

psi (libras por pulgada cuadrada);

EtOH (etanol);

rt (temperatura ambiente);

EtOAc (acetato de etilo);

TLC (cromatografla de capa fina);

FBS (suero bovino fetal);

Tr (tiempo de retention);

FMOC (9-fluorenilmetoxicarbonilo);

RP (fase inversa;

HATU (O-(7-Azabenzotriazol-1-il-

H2 (hidrogeno); N2 (nitrogeno);

hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametiluronio

Ac (acetilo);

HCl (acido clorhldrico)

ACN (acetonitrilo) Ac2O (anhldrido acetico);

HEPES (acido 4-(2-hidroxietil)-1 -piperazina etano sulfonico);

ATP (adenosin trifosfato);

Hex (hexanos);

BOC (tert-butiloxicarbonilo);

HOAc (acido acetico);

BSA (albumina de suero bovina)

HPLC (cromatografla llquida de alto desempeno); NaHSO4 (bisulfato de sodio);

NBS es N-bromosuccinamida;

i-PrOH (isopropanol);

K2CO3 (carbonato de potasio);

KOH (hidroxido de potasio);

LiHMDS (hexametildisilazida de litio); LiOH (hidroxido de litio);

NH4OH (hidroxido de sodio);

Pd(PPh3)2Cl2 (cloruro de bis(trifenilfosfina)- paladio (II));

PdCl2(dppf) aducto de diclorometano de (dicloro[1,1'bis(difenil- fosfino)ferroceno]paladio (II)

UOHH2O (monohidrato de hidroxido de litio); Me (metilo; -CH3)

MeOH (metanol);

MgCO3 (carbonato de magnesio);

MgSO4 (sulfato de magnesio);

Na2CO3 (carbonato de sodio);

NaHCO3 (bicarbonato de sodio);

NaH (hidruro de sodio)

Na2SO4 (sulfato de sodio);

TBAF (fluoruro de tetrabutilamonio); TEA (trietilamina);

TFA (acido trifluoroacetico);

THF (tetrahidrofurano);

TIPS (triisopropilsililo);

TMS (trimetilsililo); y TMSE (2-(trimetilsilil)etilo); y TsOH (acido p-Toluenosulfonico).

Todas las referencias a eter son a eter de dietilo; la solucion salina se refiere a una solucion acuosa saturada de NaCl. A menos que se indique lo contrario, todas las temperaturas se expresan en °C (grados centlgrados). Todas las reacciones se llevan a cabo bajo una atmosfera inerte a temperatura ambiente a menos que se indique lo contrario.

5 Los espectros de 1H-RMN se registran en un instrumento Varian VXR-300, Varian Unity-300, Varian Unity-400, un General Electric QE-300, un Bruker 300, o un Bruker 400. Los desplazamientos qulmicos se expresan en partes por millon (ppm, unidades 5). Las constantes de acoplamiento estan en unidades de hertz (Hz). Los patrones de division describen multiplicidades aparentes y se designan como s (singlete), d (doblete), t (triplete), q (cuarteto), m (multiplete), br (amplio).

10 Los espectros de masas de baja resolution (MS) se registran en un espectrometro Agilent LCMS, JEOL JMS- AX505Ha, JOEL SX-102, un SCIEX-APIiii, un Finnegan MSQ, Waters SQD, Waters ZQ, o un Finnegan LCQ; MS de alta resolucion se obtuvieron utilizando un espectrometro JOEL SX-102A. Todos los espectros de masas se tomaron bajo ionization por electrorrociado (ESI), ionization qulmica (CI), impacto electronico (EI) o por metodos de bombardeo con atomos rapidos (FAB). Todas las reacciones se monitorizan mediante cromatografla en capa fina 15 sobre placas de 0.25 mm de E. Merck de gel de sllice (60F-254), se visualizan con luz UV, solucion de acido p- anisaldehldo o fosfomollbdico etanolico al 5% o espectrometrla de masas (electrorrociado o AP). La cromatografla en columna ultrarrapida se realiza sobre gel de sllice (malla 230-400, Merck) o utilizando cromatografla de gel de sllice automatizada (Isco, Inc. Sq 16x o 100sg Combiflash). Se obtiene tiempos de retention de HPLC reportados (RT) en un instrumento Waters 2795 unido a un detector de diodos lectura 210-500 nm de Waters 996. La columna 20 utilizada fue una Synergi Max-RP (50 x 2 mm) modelo # 00B-4337-B0. El gradiente de disolvente fue de MeOH al 15%: agua a MeOH al 100% (acido formico al 0.1%) durante 6 min. La velocidad de flujo fue 0.8 ml/min. El volumen de inyeccion fue de 3 pl.

Intermedio 1: 2-Metilpropanotioamida

5

10

15

20

25

30

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Una solucion de 2-metilpropanamida (6.53 g, 75.0 mmol) y 2,4-bis(4-metoxifenil)-1,3-ditia-2,4-difosfetano- 2,4- disulfuro (15.17 g, 37.51 mmol) en THF (100 mL) se calienta a reflujo durante 4 h. La mezcla de reaccion luego se enfrla a temperatura ambiente y se vierte en NaHCO3 acuoso saturado (200 mL). La mezcla se extrae con eter (4 x 100 mL). Las fracciones organicas se combinan, secan sobre Na2SO4, se filtran, y concentran. La purificacion por cromatografla del columna flash (EtOAC al 20%:hexanos) proporciona 4.77 g (62%) del compuesto del tltulo. 1H- RMN (400 MHz, CDCb) 5 7.63 (brs, 1 H), 6.90 (brs, 1 H), 2.88 (m, 1 H), y 1.27 (d, 6H, J= 6.8 Hz).

Intermedio 2: 1-Pirrolidinacarbotioamida

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Para obtener el compuesto del tltulo, pirrolidina (1.5 g, 21 mmol) se coloca en un matraz de fondo redondo bajo N2 con agitacion. Se agrega THF (4mL) seguido por la adicion en forma de gotas de HCl 4N en dioxano (5.3 mL, 21 mmol). Luego se agrega tiocianato de Potasio (2.0 g, 21 mmol) en una porcion a la solucion de agitacion de clorhidrato de pirrolidina. Esta mezcla luego se agita a temperatura ambiente durante 30 min seguido por calentamiento a 100°C durante 2 h. La reaccion luego se enfrla a temperatura ambiente, se agrega MeOH (50 mL), y los solidos que persisten se filtran lejos. La concentracion posterior de MeOH/ solucion de reaccion proporciona 3.0 g de la 1-pirrolidinacarbotioamida cruda. 1H- RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 8.60 (brs, 2 H), 3.07 (m, 4 H), y 1.82 (m, 4 H).

Intermedio 3: 2,2-Dimetilpropanotioamida

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El compuesto del tltulo se prepara (3.2 g, 36%) a partir de 2,2-dimetilpropanamida (7.59 g, 75.0 mmol) y 2,4- bis(4- metoxifenil)-1,3-ditia-2,4-difosfetano-2,4-disulfuro (15.17 g, 37.51 mmol) mediante un procedimiento analogo al Intermedio 1. 1H- RMN (400 MHz, CDCb) 5 7.92 (brs, 1 H), 7.03 (brs, 1 H), y 1.38 (s, 9 H).

Intermedio 4: N-{3-[(Z)-2-(2-Cloro-4-pirimidinil)-1-hidroxietenil]fenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida

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Etapa A: 3-{[(2,6-difluorofenil)sulfonil] amino}benzoato de etilo

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A una solucion de etil-3-aminobenzoato (50 mL, 333 mmol) y cloruro de 2,6-difluorobencenosulfonilo (44.2 mL, 333 mmol) en DCM (300 mL) a 0°C se agrega piridina (32.2 mL, 400 mmol). La mezcla de reaccion se calienta a temperatura ambiente, se agita durante 36 h, y se detiene con 2 mL de NH3 (7 M en MeOH). La suspension se lava con NaHSO4 al 10% y los extractos organicos se combinan y pasan a traves de una columna corta de gel de sllice. El material residual se enjuaga desde la columna con MeOH/EtOAc al 10%. Los extractos organicos se combinan y

el solvente se elimina bajo presion reducida para proporcionar 107.9 g (95 %) del compuesto del tltulo de la Etapa A. 1H- RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 11.20 (s, 1 H), 7.77 (s, 1 H), 7.71 (t, J = 7.4 Hz, 1 H), 7.63 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.35 - 7.49 (m, 2 H), 7.29 (t, J = 9.3 Hz, 2 H), 4.28 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), y 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 3 H).

Etapa B: N-{3-[(Z)-2-(2-Cloro-4-pirimidinil)-1-hidroxietenil]fenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida

5 A una solucion de agitacion de 3-{[(2,6-difluorofenil)sulfonil] amino}benzoato de etilo (47.9 g, 140 mmol) en 100 mL de THF anhidro a 0°C se agrega LiHMDS 1 M en tHf (421 mL, 421 mmol). Una solucion de 2-cloro-4-metilpirimidina (19.9 g, 154 mmol) en 100 mL de THF anhidro se agrega a la mezcla de reaccion durante 30 min y se calienta a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se detiene con 50 mL de MeOH y concentra a un solido negro bajo vaclo. El residuo se somete a particion entre DCM y NaHSO4 al 10%. Los solidos acuosos y suspendidos se extraen 10 2X con DCM y los extractos organicos combinados se filtran a traves de una almohadilla de Celita, se concentran, y pasan a traves de una columna corta de gel de sllice (elucion con THF) para proporcionar 57 g (96%) del compuesto del tltulo de la Etapa B. 1H- RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 11.03 - 11.34 (m, 1 H), 8.49 - 8.91 (m, 1 H), 7.79 (d, J = 7.4 Hz, 1 H), 7.65 - 7.76 (m, 2 H), 7.55 - 7.63 (m, 1 H), 7.50 (t, J = 7.7 Hz, 1 H), 7.35 - 7.47 (m, 1 H), 7.22 - 7.34 (m, 2 H), 6.43 (s, 1 H), y 4.60 (s, 1 H); ES-LCMS m/z 423.93 (M+H).

15 Intermedio 5: N-{3-[5-(2-Cloro-4-pirimidinil)-2-(1- pirrolidinil)-1,3-tiazol-4-]fenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida

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A una suspension agitada de N-{3-[(Z)-2-(2-cloro-4- pirimidinil)-1-hidroxietenil]fenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida (1.0 g, 2.36 mmol, 1.0 eq) en DCM (~5 mL) se agrega NBS (0.44 g, 2.48 mmol, 1.05 eq). Luego de la formation de una solucion roja (~10 minutos) la mezcla de reaccion se concentra a un solido y se toma en dioxano (10 mL). A esta

20 solucion se agrega MgCO3 (0.38 g) seguido por 1-pirrolidinacarbotioamida (0.384 g, 2.95 mmol, 1.25 eq). Despues de agitacion 3 h, la mezcla se detiene con agua (50 mL) y HCl 1 N (10 mL) y se agita 0.25 h. La mezcla se filtra y el solido resultante se tritura con EtOAc/Hexanos para dar 0.52 g (41%) del compuesto del tltulo. 1H- RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 11.11 (s, 1 H), 8.14 (d, J = 5.7 Hz, 1 H), 7.65 - 7.74 (m, 1 H), 7.41 (t, J = 7.7 Hz, 1 H), 7.18 - 7.29 (m, 5 H), 6.44 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 3.45 - 3.52 (m, 4 H), y 1.98 - 2.05 (m, 4 H).

25 Intermedio 6: 2-Propen-1-il{3-[(2-cloro-4-pirimidinil)acetil] fenil}carbamato

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Etapa A: 3-{[(2-propen-1-iloxi)carbonil] amino}benzoato de etilo

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Una solucion de etil-3-aminobenzoato (25.0 g, 151.33 mmol) en DCM (500 mL) se enfria a 0°C. Se agrega 2,630 Lutidina (19.46 g, 181.60 mmol) a la solucion seguido por adicion de cloridocarbonato de 2-propen-1-ilo (20.07 g, 166.46 mmol). Luego de adicion, la reaccion se retira del bano de hielo y se agita a temperatura ambiente durante 30 min. La reaccion se detiene con NaHCO3 saturado y las capas se separan. La mezcla se extrae con DCM x 3, y los organicos combinados se lavan con HCl al 10%/H2O x 3, se secan sobre MgSO4 y el solvente se elimina para dar el compuesto del tltulo de la Etapa A (38.80 g, 80% de rendimiento). 1H- RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 9.96 (s, 1 H), 35 8.15 (s, 1 H), 7.66 - 7.72 (m, 1 H), 7.59 (d, J = 7.7 Hz, 1 H), 7.43 (t, J = 7.9 Hz, 1 H), 5.94 - 6.04 (m, 1 H), 5.37 (dd, J

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= 17.4 y 1.7 Hz, 1 H), 5.24 (dd, J = 10.6 y 1.5 Hz, 1 H), 4.63 (d, J = 5.5 Hz, 2 H), 4.31 (q, J = 7.3 Hz, 2 H), y 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3 H); ESLCMS m/z 250 (M+H).

Etapa B: 2-Propen-1-il{3-[(2-cloro-4-pirimidinil)acetil] fenil}carbamato

3-{[(2-propen-1-iloxi)carbonil] amino}benzoato de etilo (20.0 g, 80.24 mmol) se disuelve en LiHMDS 1 M en THF (260 mL) y se enfrla a 0°C. Una solucion que contiene 2-cloro-4-metilpirimidina (10.32 g, 80.24 mmol) en 20 mL de THF seco se agrega a la mezcla de reaccion. La reaccion se agita a 0°C durante 2 h, se detiene con MeOH (100 mL), se seca directamente sobre sliice, y se purifica a traves de cromatografla flash con EtOAc/CH2Cl2, gradiente 0-100% durante 60 min. Las fracciones deseadas se combinan y el solvente se elimina para dar el compuesto del tltulo (13.6 g, 51% de rendimiento); ES-LCMS m/z 332 (M+H).

Intermedio 7: 2-Propen-1-il{3-[5-(2-cloro-4-pirimidinil)-2-(1-metiletil)-1,3-tiazol-4-il]fenil} carbamato

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Siguiendo un procedimiento analogo al procedimiento descrito en Intermedio 5, utilizando 2-propen-1-il {3-[(2- cloro- 4-pirimidinil)acetil] fenil}carbamato (10.0 g, 30.14 mmol), y 2-metilpropanotioamida (3.73 g, 36.17 mmol), se preparan mediante un procedimiento analogo al Intermedio 1, se obtiene 5.74 g del compuesto del tltulo. MS (ESI): 415 [M+H]+.

Intermedio 8: 3-[5-(2-cloro-4-pirimidinil)-2-(1-metiletil)- 1,3-tiazol-4-il] anilina

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A una solucion que contiene 2-propen-1-il {3-[5-(2- cloro-4-pirimidinil)-2-(1-metiletil)-1,3-tiazol-4-il]fenil} carbamato (5.3 g, 12.77 mmol) y DCM (225 mL) se agrega hidruro de tri-n-butilestano (5.95 g, 20.43 mmol), seguido por transdiclorobis(trifenilfosfina)paladio (II) (0.53 g, 0.64 mmol) y HOAc (1.84 g, 30.65 mmol). En la conclusion de la reaccion, se agrega sllice y los volatiles se eliminan bajo presion reducida. El residuo se purifica mediante cromatografla del columna flash con (DCM al 84%, MeOH al 15%, y NH4OH al 1%): DCM 0% a 100% para producir 3.4 g del compuesto del tltulo. 1H- RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 8.57 (d, J=5.1 Hz, 1 H), 7.16 (d, J=5.1 Hz, 1 H), 7.10 (t, J=7.7 Hz, 1 H), 6.72 - 6.75 (m, 1 H), 6.64 - 6.69 (m, 1 H), 6.60 - 6.63 (m, 1 H), 5.28 (s, 2 H), 3.27 - 3.40 (m, 1 H), y 1.38 (d, J=7.0 Hz, 6 H). MS (ESI): 331 [M+H]+.

Intermedio 9: N-{3-[5-(2-Cloro-4-pirimidinil)-2-(1- metiletil)-1,3-tiazol-4-il]fenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida

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A una solucion de 3-[5-(2-cloro-4-pirimidinil)-2-(1- metiletil)-1,3-tiazol-4-il]fenil amina (1.0 g, 3.0 mmol), y piridina (360 pL, 4.5 mmol) en DCM (50 mL) se agrega una solucion de cloruro de 2,6-difluorobencenosulfonilo (620 pL, 4.5 mmol) en DCM (25 mL). La reaccion se agita durante 48 h a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se concentra, se adsorbe sobre gel de sllice, y se purifica a traves de cromatografla flash con EtOAc/DCM al 0-50% para dar 1.39 g (91% de rendimiento) del compuesto del tltulo como un polvo blanco. ES-LCMS m/z 507 (M+H).

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Etapa A: 3-bromo-2-fluorobenzoato de metilo

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5 A un matraz de fondo redondo de 100 mL se agrega acido 3-bromo-2- fluorobenzoico (10.4 g, 47.5 mmol), MeOH (100 mL, 2472 mmol) y acido sulfurico (6 mL, 113 mmol). La mezcla de reaccion se somete a reflujo durante 1 hr. Despues de enfriamiento a temperatura ambiente, el MeOH se elimina bajo presion reducida y el residuo acido se vierte en agua frla y EtOAc, las capas se separan y la capa acuosa se extrae con EtOAc. Las capas organicas se combinan, se lavan con solucion salina, se secan sobre NaSO4 y concentran bajo presion reducida para 10 proporcionar 10.02 g de 3-bromo-2-fluorobenzoato de metilo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 7.95 (ddd, J = 8.1, 6.4, y 1.7 Hz, 1 H), 7.82 - 7.87 (m, 1 H), 7.26 (t, J = 7.9 Hz, 1 H), y 3.86 (s, 3 H).

Etapa B: 3-amino-2-fluorobenzoato de metilo

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En un matraz de 500 se coloca carbamato de 1, 1 -dimetiletilo (6.03 g, 51.5 mmol), 3-bromo-2-fluorobenzoato de 15 metilo (10 g, 42.9 mmol), Pd2(dba)3.CHCl3(0.89 g, 0.86 mmol), xantphos (1.49 g, 2.57 mmol) y carbonato de cesio (16.8 g, 51.5 mmol). El matraz se sella con un tapon de caucho, se coloca bajo alto vaclo, y se agrega tolueno (200 mL). Tres ciclos de alto vaclo/N2 se realizan y la mezcla de reaccion se agita a 90°C durante la noche. La reaccion se filtra a traves de una almohadilla de celita con lavado de EtOAc y concentra. Al residuo se agrega DCM (200 mL) seguido por TFA (50 mL, 649 mmol), y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante 1 h. Los volatiles se 20 eliminan bajo presion reducida y el residuo se toma en EtOAc y se lava con NaHCO3 saturado y solucion salina. La capa organica se seca sobre NaSO4, se pela sobre sllice y se cromatografla en columna sobre sllice con EtOAc:Hexano al 5% a 50% para dar 5.53 g (76%) del compuesto del tltulo de la Etapa B. 1H- RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 6.92 - 7.01 (m, 3 H), 5.37 (s, 2 H), y 3.81 (s, 3 H). MS (ESI): 170 [M+H]+.

Etapa C: 3-{[(2,6-difluorofenil)sulfonil] amino}-2-fluorobenzoato de metilo

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En un matraz de 500 mL se coloca 3-amino-2- fluorobenzoato de metilo (5.5 g, 32.5 mmol) y DCM (100 mL), y se agrega piridina (2.9 mL, 35.8 mmol). Se agrega cloruro de 2,6-Difluorobencenosulfonilo (7.6 g, 35.8 mmol) en DCM (50 mL) en forma de gotas a traves de un tunel de adicion y la mezcla de reaccion se deja agitar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reaccion se separa sobre sllice y se cromatografla en columna sobre sllice 30 con EtOAc:Hexano al 5% a 100% para dar 9.75 g (87%) del compuesto del tltulo de la Etapa C. 1H- RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 10.98 (s, 1 H), 7.64 - 7.82 (m, 3 H), 7.46 - 7.61 (m, 1 H), 7.29 (t, J = 8.8 Hz, 2 H), y 3.81 (s, 3 H). MS (ESI): 346 [M+H]+.

En un matraz de 1000 mL se coloca 3-{[(2,6-difluorofenil)sulfonil se agrega] amino}-2-fluorobenzoato de metilo (9.64 g, 27.9 mmol) y THF (200 mL). El matraz se coloca en un bano de hielo/agua y se agrega LiHMDS (90 mL, 90 mmol). Se agrega en forma de gotas 2-Cloro-4-metilpirimidina (4.5 g, 35.0 mmol) en THF (60 mL) a traves de un 5 tunel de adicion. Despues que se completa la adicion, la reaccion se deja calentar a 20°C durante 1 h. El volumen de THF se reduce hasta la mitad bajo presion reducida y luego se trata con HCl 6 N. Se agrega EtOAc y las capas se separan. La capa acuosa se extrae dos veces con EtOAc y la capa organica combinada se lava una vez con solucion salina, se seca sobre NaSO4, y concentra. El residuo se tritura con EtOAc/eter para proporcionar 8.71 g (71 %) del compuesto del tltulo de la Etapa D. MS (ESI): 442 [M+H]+.

10 Metodo alternativo para preparar 3-amino-2-fluorobenzoato de metilo (Etapa B del Intermedio 10, anterior)

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Etapa A: acido 2-Fluoro-3- nitrobenzoico

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Se agrega cuidadosamente acido sulfurico concentrado (195 ml) con agitacion a una solucion de 2-fluoro-3- 15 nitrotolueno (100 g, 645 mmol) en acido acetico (1000 ml). La mezcla se calienta hasta 95°C y se agrega en forma

de gotas la solucion de trioxido de cromo (226 g, 2.25 mol) en agua (200 ml) con agitacion durante 2h. Despues de

adicion la mezcla se calienta con agitacion durante otras 3h, se permite que se enfrle a temperatura ambiente y se vierte en agua (3 L). La mezcla se extrae con acetato de etilo (3 x 1 L), las capas organicas combinadas se secan sobre Na2SO4 y concentran bajo presion reducida para proporcionar un solido verde claro, que se lava con 20 diclorometano (3 x 300 ml) y se seca bajo vaclo para proporcionar el compuesto del tltulo que se obtiene como un

solido amarillo claro (75 g, 62.8%). 1H RMN (300MHz, DMSO) 5 ppm 8.27 (m, 1H), 8.15 (m, 1H), 7.48 (m, 1H).

Etapa B: 2-fluoro-3-nitrobenzoato de metilo

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Acido 2-Fluoro-3-nitrobenzoico (75 g) se disuelve en 300 ml de metanol, y luego se agrega 20 ml H2SO4 25 concentrado. La mezcla se agita a 70°C durante la noche y se enfrla a temperatura ambiente, el solido resultante se filtra y se lava con agua (3 x 200 ml), al filtrado se agrega agua (400 ml), el precipitado resultante se filtra y se lava con agua (2 x 100 ml) para proporcionar otra tanda de producto. Los solidos se combinan y se secan bajo vaclo para proporcionar el compuesto del tltulo que se obtiene como un solido amarillo claro (78 g, 96%).

Etapa C: 3-amino-2-fluorobenzoato de metilo

30 A una solucion de 2-fluoro-3-nitrobenzoato de metilo (78 g) en THF (400 ml) y metanol (100 ml) se agrega Ni Raney (40 g), la mezcla se calienta a 70°C, y luego 25 ml de hidrato de hidrazina (N2H4H2O, 85%) se agrega en forma de gotas. La reaccion se monitoriza por TLC, cuando el material de partida se consume totalmente la adicion de hidrazina se detiene. La mezcla se enfrla a temperatura ambiente y filtra, el filtrado se concentra bajo vaclo para dar un aceite marron, que se purifica mediante cromatografla (SiO2, 300-400 mesh, PE: EtOAc=11:2) para proporcionar 35 el compuesto del tltulo que se obtiene como un aceite amarillo (45 g, 68%). 1H RMN (300MHz, DmSO) 5 ppm 6.96 (m, 3H), 5.36 (s, 2H), 3.81 (s, 3H).

Intermedio 11: N-{3-[5-(2-Cloro-4-pirimidinil)-2-(1,1- dimetiletil)-1,3-ti azol -4-il]-2-fluo rofeni l}-2,6-

difluorobencenosulfonamida

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A una solucion de N-{3-[(2-cloro-4-pirimidinil)acetil] -2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida (2.0 g, 4.53 mmol) en 40 mL de DMA, se agrega 1.0 eq. De NBS (0.806 g, 4.53 mmol) y la solucion se deja agitar 15 min a temperatura ambiente. Luego se agrega 2,2-dimetilpropanotioamida (0.531 g, 4.53 mmol) a temperatura ambiente. La reaccion se calienta a 60°C durante 2 horas. La reaccion no se completa mediante LC-MS. La mezcla de reaccion luego se calienta a 80°C durante una hora adicional. La mezcla de reaccion se diluye con agua y se extrae x 2 con EtOAc. Los lavados de EtOAc combinados se lavan con agua x 3 para eliminar DMA, se secan sobre MgSO4, filtran y concentran sobre gel de sllice. El material crudo se cromatografla en EtOAc al 10-80% en Hexanos para dar el producto deseado, 1.6 g (64%). MS (ESI): 539.1 [M+H]+.

Intermedio 12: 2-Propen-1-il{3-[(2-cloro-4- pirimidinil)acetil] -2-fluorofenil} carbamato

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Etapa A: 3-(aliloxicarbonilamino)-2-fluorobenzoato de metilo

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A una solucion de 3-amino-2-fluorobenzoato de metilo (200.0 g, 1183 mmol, 1 eq) en THF (500 mL), se agrega NaHCO3 saturado (1600 mL). Luego se agrega en forma de gotas cloridocarbonato de 2-propen-1-ilo (170.0 g, 1420 mmol, 1.2 eq) a 0°C. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 2 h. La solucion se extrae con EtOAc (1 L x 3). Las capas organicas combinadas se lavan con agua y solucion salina de forma sucesiva, se secan sobre Na2SO4, se filtran y concentran bajo presion reducida para dar el producto crudo (260 g, 86.9% de rendimiento), que se utiliza en la siguiente etapa directamente. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 9.66 (s, 1 H), 7.96 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.64 (t, J = 6.4 Hz, 1 H),7.33 (t, J = 8.0 Hz, 1 H), 6.07-6.00 (m, 1 H), 5.43 (dd, J = 1.6, 17.6 Hz, 1 H), 5.30 (dd, J = 1.2, 10.4 Hz, 1 H) 4.67 (d, J = 5.6 Hz, 2 H), 3.91 (s, 3 H).

Etapa B: {3-[(2-cloro-4-pirimidinil)acetil] -2-fluorofenil}carbamato de 2-Propen-1-ilo

A una solucion de 3-(aliloxicarbonilamino)-2-fluorobenzoato de metilo (86.7g, 342 mmol, 1 eq) en THF seco (500 mL) a -10°C, se agrega en forma de gotas LiHMDS (1 M en THF, 1198 mmol, 1198 mL, 3.5 eq) y la solucion se deja agitar durante 1 h a 0°C. Luego se agrega en forma de gotas una solucion de cloruro pirimidina (48.0 g, 376 mmol,

1.2 eq) en THF (200 mL) a la solucion de ester y base a 0°C durante 20 min. La solucion se deja agitar 1 h a temperatura ambiente. El TLC muestra que la reaccion se completa. La reaccion se detiene mediante adicion de NH4O acuoso saturado (800 mL) a 0°C. La mezcla de reaccion se extrae con EtOAc (1 L x 3). Las capas organicas combinadas se lavan con agua y solucion salina de forma sucesiva, se secan sobre Na2SO4, se filtran y concentran bajo presion reducida para dar el producto crudo, que se purifica mediante columna flash sobre gel de sllice, enjuangando con DCM. Esta solucion se concentra para obtener un solido. El solido naranja se tritura con una pequena cantidad de EtOAc y filtra, enjuagando con eter de dietilo para dar el producto (240.1 g, 67.0%, tres tandas combinadas). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 13.70 (s, 1 H), 8.52 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 0.3 H), 8.34 (dd, J = 0.8,

5.2 Hz, 1 H), 8.27 (s, 0.4 H), 8.10 (s, 1 H), 7.47 (t, J = 8.0 Hz, 1.4 H), 7.22-7.12 (m, 1.8 H), 6.96 (s, 1.4 H), 6.85 (d, J = 4.2 Hz, 1 H), 6.07 (s, 1 H), 5.97-5.86 (m, 1.4 H), 5.32 (d, J = 15.6 Hz,1.4 H), 5.24 (d, J = 6.4 Hz, 1.4 H), 4.64 (d, J = 6.0 Hz, 2.8 H), 4.38 (d, J = 2.8 Hz, 0.8 H).

Intermedio 13: {3-[5-(2-cloro-4-pirimidinil)-2-(4-morfolinil)-1,3-tiazol-4-il] -2-fluorofenil}carbamato de 2-Propen-1-ilo

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A una solucion de {3-[(2-cloro-4-pirimidinil)acetil] -2-fluorofenil} carbamato de 2-propen-1-ilo (20 g, 57 mmol) (Intermedio 12) en dMa (300 mL), se agrega NBS (10.2 g, 57 mmol). La mezcla de reaccion se agita a temperatura 5 ambiente durante 1 h. Luego se agrega morfolina-4-carbotioamida (9.2 g, 63 mmol) a 0°C. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se vierte en agua y se extrae con EtOAc (1 L x 3). Las capas organicas combinadas se lavan con agua y solucion salina de forma sucesiva, se secan sobre Na2SO4, se filtran y concentran bajo presion reducida para dar el producto crudo, que se purifica mediante cromatografla de columna sobre gel de sllice (DCM: eter de petroleo 2:1) para proporcionar el compuesto del tltulo (20 g, 83.5% de 10 rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 ppm 8.20-8.27 (m, 1H), 8.19 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.20-7.26 (m, 1H), 7.087.12 (m, 1H), 6.92-6.98 (br, 1H), 6.62 (d, J=5.5 Hz, 1 H), 5.90-6.03 (m, 1 H), 5.25-5.41 (m, 2H), 5.65-5.70 (m, 2H), 3.57-3.63 (m, 4H), 3.77-3.86 (m, 4H). m/z (ES+): 476 [M+H]+

Intermedio 14: 3-(5-(2-Cloropirimidin-4-il)-2-morfolinotiazol-4-il)-2-fluoroanilina

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15 A una solucion de {3-[5-(2-cloro-4-pirimidinil)-2-(4-morfolinil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil} carbamato de 2-propen-1-ilo (57 g, 120 mmol) (preparada mediante un proceso analogo a aquel descrito para el Intermedio 13) en DCM (500 mL), se agregan HOAc (17.3 g, 288 mmol), Pd(PPh3)2Cl2 (1.68 g, 2.4 mmol). Luego se agrega en forma de gotas hidruro de tri-n-butilestano (38.4 g, 132 mmol) a la mezcla a 0°C. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 30 min. La reaccion se detiene al agregar NaHCO3 saturado (300 mL) lentamente. Las dos capas se separan. La 20 capa acuosa se extrae con DCM (1 L x 2). Las capas organicas combinadas se lavan con agua y solucion salina de forma sucesiva, se secan sobre Na2SO4, se filtran y concentran bajo presion reducida para dar el producto crudo, que se lava con eter de petroleo (500 mL) para proporcionar el compuesto del tltulo (43 g, 91.6% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 ppm 8.15 (d, J=5.5 Hz, 1H), 6.95-7.07 (m, 1 H), 6.83-6.92 (m, 1 H), 6.74-6.80 (m, 1 H), 6.70 (d, J=5.5 Hz, 1 H), 3.57-3.63 (m, 4H), 3.75-3.88 (m, 4H) .

25 Ejemplo de Referenda A: N-{3-[5-(2-Amino-4-pirimidinil)-2- (4-morfolinil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}

ciclopropanosulfonamida

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Etapa A: N-{3-[5-(2-Cloro-4-pirimidinil)-2-(4-morfolinil)- 1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil} ciclopropanosulfonamida

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Siguiendo un procedimiento analogo a el procedimiento descrito en Intermedio 9 utilizando 3-(5-(2-cloropirimidin- 4- il)-2-morfolinotiazol-4-il)-2- fluoroanilina (150 mg, 0.383 mmol) y cloruro de ciclopropanosulfonilo (0.039 mL, 0.383 5 mmol) el compuesto del tltulo de la Etapa A se obtiene como un solido amarillo (125 mg, 66% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 9.71 (s, 1 H), 8.27 - 8.39 (m, 1 H), 7.54 (td, J=7.6, 1.7 Hz, 1 H), 7.22- 7.42 (m, 2 H), 6.62 - 6.72 (m, 1 H), 5.30 (s, 1 H), 3.68 (t, J=4.7 Hz, 4 H), 3.52 (t, J=4.6 Hz, 4 H), 2.59 - 2.70 (m, 1 H), 0.75 - 0.93 (m, 3 H).

Etapa B: N-{3-[5-(2-Amino-4-pirimidinil)-2-(4-morfolinil)- 1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil} ciclopropanosulfonamida

10 Una suspension de N-{3-[5-(2-cloro-4-pirimidinil)-2- (4-morfolinil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil} ciclopropanosulfonamida (125 mg, 0.252 mmol) y amoniaco 7M en MeOH (7 mL, 49 mmol) se calienta en un tubo sellado a 80°C durante 2 dlas. La reaccion se diluye con DCM y se agrega gel de sllice y se concentra. El producto crudo se cromatografla sobre gel de sllice eluyendo con dCm al 100% a 1:1 [DcM:(9:1 EtOAc:MeOH)]. Las fracciones limpias se concentran para producir el producto crudo como un solido amarillo (62 mg). El producto crudo 15 se vuelve a purificar mediante HPLC de fase inversa (un gradiente de acetonitrilo:agua con TFA al 0.1% en ambos). Las fracciones limpias combinadas se concentran luego se someten a particion entre DCM y NaHCO3 saturado. La capa de DCM se separa y se seca sobre Na2SO4. El compuesto del tltulo se obtiene como un solido amarillo (26 mg, 21% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 9.67 (s, 1 H), 7.86 (d, J=5.4 Hz, 1 H), 7.49 (td, J=7.4, 2.2 Hz, 1 H), 7.11 - 7.38 (m, 2 H), 6.53 (s, 2 H), 5.84 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 3.68 (t, J=4.7 Hz, 4 H), 3.43 (t, J=4.7 Hz, 4 H), 20 2.53 - 2.68 (m, 1 H), 0.74 - 0.92 (m, 4 H). MS (ESI): 477.0 [M+H]+.

Ejemplo 1a: N-{3-[5-(2-Amino-4-pirimidinil)-2-(1,1- dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-

difluorobencenosulfonamida

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Siguiendo un procedimiento analogo a el procedimiento descrito en el Ejemplo de Referencia A, Etapa B utilizando 25 N-{3-[5-(2- cloro-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3- tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida (196

mg, 0.364 mmol) y amoniaco en metanol 7M (8 ml, 56.0 mmol) y calentando a 90°C durante 24 h, se obtiene el compuesto del tltulo, N-{3-[5-(2- amino-4-pirimidinil) -2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol- 4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida (94 mg, 47% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 10.83 (s, 1 H), 7.93 (d, J=5.2 Hz, 1 H), 7.55 - 7.70 (m, 1 H), 7.35 - 7.43 (m, 1 H), 7.31 (t, J=6.3 Hz, 1 H), 7.14 - 7.27 (m, 3 H), 6.70 (s, 2 30 H), 5.79 (d, J=5.13 Hz, 1 H), 1.35 (s, 9 H). MS (ESI): 519.9 [M+H]+.

Ejemplo 1b: N-{3-[5-(2-Amino-4-pirimidinil)-2-(1,1- dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-

difluorobencenosulfonamida

19.6 mg de N-{3-[5-(2-Amino-4-pirimidinil)-2-(1,1- dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida (se puede preparar de acuerdo con el Ejemplo 1a) se combina con 500 pL de acetato

35 de etilo en un frasco de 2 mL a temperatura ambiente. La suspension se alterna a temperatura entre 0-40°C durante 48 horas. La suspension resultante se deja enfriar a temperatura ambiente y los solidos se recolectan mediante filtracion de vaclo. Los solidos se analizan mediante analisis Raman, PXRD, DSC/TGA, que indican una forma diferente de la forma de cristal resultante del Ejemplo 1a, anterior.

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Etapa A: 3-{[(2,6-difluorofenil)sulfonil] amino}-2-fluorobenzoato de metilo

5

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3-amino-2-fluorobenzoato de metilo (50 g, 1 eq) se carga al reactor seguido por diclorometano (250 mL, 5 vol). Los contenidos se agitan y se enfrlan a ~15°C y se agrega piridina (26.2 mL, 1.1 eq). Despues de la adicion de la piridina, los contenidos del reactor se ajustan a ~15°C y la adicion de cloruro de 2,6-difluorobencenosulfonilo (39.7 10 mL, 1.0 eq) se inicia a traves de un tunel de adicion. La temperatura durante la adicion se mantiene <25°C. Despues de que se completa la adicion, los contenidos del reactor se calientan a 20-25°C y se conservan durante la noche. Se agrega acetato de etilo (150 mL) y se elimina el diclorometano mediante destilacion. Una vez se completa la destilacion, la mezcla de reaccion luego se diluye una vez mas con acetato de etilo (5 vol) y se concentra. La mezcla de reaccion se diluye con acetato de etilo (10 vol) y agua (4 vol) y los contenidos se calientan a 50-55°C con 15 agitacion hasta que todos se disuelven. Las capas se sedimentan y separan. La capa organica se diluye con agua (4 vol) y los contenidos se calientan a 50-55°C durante 20-30 min. Las capas se sedimentan y luego se separan y la capa de acetato de etilo se evapora bajo presion reducida a ~3 volumenes. Se agrega acetato de etilo (5 vol.) y de nuevo se evapora bajo presion reducida a ~3 volumenes. Luego se agrega Ciclohexano (9 vol) al reactor y los contenidos se calientan a reflujo durante 30 min luego se enfrlan a 0°C. Los solidos se filtran y enjuagan con 20 ciclohexano (2 x 100 mL). Los solidos se secan al aire durante la noche para obtener 3-{[(2,6- difluorofenil)sulfonil] amino}-2-fluorobenzoato de metilo (94.1 g, 91%).

Etapa B: N-{3-[(2-Cloro-4-pirimidinil)acetil] -2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida

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5

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15

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25

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35

40

45

3-{[(2,6-difluorofenil)sulfonil] amino}-2-fluorobenzoato de metilo (490 g, 1 equiv.), preparado de manera general de acuerdo con la Etapa A, anterior, se disuelve en THF (2.45 L, 5 vols) y se agita y se enfrla a 0-3°C. Se carga solucion de bis(trimetilsilil) amida de litio 1M en THF (5.25 L, 3.7 equiv.) a la mezcla de reaccion seguida por adicion de 2-cloro-4- metilpirimidina (238 g, 1.3 equiv.) en THF (2.45 L, 5 vols). La reaccion luego se agita durante 1 hr. La reaccion se detiene con HCl 4.5M (3.92 L, 8 vols). La capa acuosa (capa inferior) se elimina y desecha. La capa organica se concentra bajo presion reducida a ~2L. Se agrega IPAC (acetato de isopropilo) (2.45 L) a la mezcla de reaccion que luego se concentra a ~2L. Se agrega IPAC (0.5 L) y MTBE (2.45 L) y se agita durante la noche bajo N2. Los solidos se filtran. Los solidos y el filtrado madre se agregan de nuevo y se agitan durante varias horas. Los solidos se filtran y se lavan con MTBE (~5 vol). Los solidos se colocan en un horno de vaclo a 50°C durante la noche. Los solidos se secan en el horno de vaclo a 30°C durante el fin de semana para obtener N-{3-[(2-cloro-4- pirimidinil)acetil] -2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida (479 g, 72%).

Etapa C: N-{3-[5-(2-Cloro-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)- 1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-

difluorobencenosulfonamida

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En un recipiente de reactor se carga N-{3-[(2-cloro-4-pirimidinil)acetil] -2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida (30 g, 1 eq) seguido por diclorometano (300 mL). La suspension de reaccion se enfrla a ~10°C y se agrega N- bromosuccinimida (“NBS”) (12.09 g, 1 eq) en 3 porciones aproximadamente iguales, agitacion durante 10-15 minutos entre cada adicion. Despues de la adicion final de NBS, la mezcla de reaccion se calienta a ~20°C y se agita durante 45 min. Luego se agrega agua (5 vol) al recipiente de reaccion y la mezcla se agita y luego las capas se separan. Se agrega de nuevo agua (5 vol) a la capa de diclorometano y la mezcla se agita y las capas se separan. Las capas de diclorometano se concentran a -120 mL. Se agrega acetato de etilo (7 vol) a la mezcla de reaccion y concentra a - 120 mL. Luego se agrega dimetilacetamida (270 mL) a la mezcla de reaccion y se enfrla a ~10°C. Se agrega 2,2- Dimetilpropanotioamida (1.3 g, 0.5 eq) en 2 porciones iguales a los contenidos del reactor con agitacion durante ~5 minutos entre adiciones. La reaccion se calienta a 20-25°C. Despues de 45 min, los contenidos del recipiente se calientan a 75°C y se conservan durante 1.75 horas. La mezcla de reaccion luego se enfrla a 5°C y agua (270 ml) se cargan lentamente manteniendo la temperatura por debajo de 30°C. Luego se carga acetato de etilo (4 vol) y la mezcla se agita y capas se separan. Se carga de nuevo acetato de etilo (7 vol) a la capa acuosa y los contenidos se agitan y se separan. Se carga de nuevo acetato de etilo (7 vol) a la capa acuosa y los contenidos se agitan y se separan. Las capas organicas se combinan y se lavan con agua (4 vol) 4 veces y se agitan durante la noche a 20- 25°C. Las capas organicas luego se concentran bajo calor y vaclo a 120 mL. Los contenidos del recipiente luego se calientan a 50°C y se agregan lentamente heptanos (120 mL). Despues de la adicion de heptanos, los contenidos del recipiente se calientan a reflujo luego se enfrlan a 0°C y se conservan durante ~2 horas. Los solidos se filtran y enjuagan con heptanos (2 x 2 vol). El producto solido luego se agrega bajo vaclo a 30°C para obtener N-{3- [5-(2- cloro-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4- il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida (28.8 g, 80%).

Etapa D: N-{3-[5-(2-Amino-4-pirimidinil)-2-(1,1 -dimetiletil)- 1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-

difluorobencenosulfonamida

En un reactor de presion de 1 gal, una mezcla de N-{3- [5-(2-cloro-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4- il]-2- fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida (120 g) preparada de acuerdo con Etapa C, anterior, y hidroxido de sodio (28-30%, 2.4 L, 20 vol) se calienta en el reactor a presion sellado a 98-103°C y se agita a esta temperatura durante 2 horas. La reaccion se enfrla lentamente a temperatura ambiente (20°C) y se agita durante la noche. Los solidos se filtran y se lavan con cantidad minima del licor madre y se secan bajo vacio. Los solidos se agregan a una mezcla de EtOAc (15 vol)/ agua (2 vol) y se calientan hasta completar disolucion a 60-70°C y la capa acuosa se elimina y se desecha. La capa de EtOAC se carga con agua (1 vol) y se neutraliza con HCl ac. a -pH 5.4-5.5. y se agrega agua (1 vol). La capa acuosa se elimina y se descarga a 60-70°C. La capa organica se lava con agua (1 vol) a 60-70°C y la capa acuosa se elimina y se descarga. La capa organica se filtra a 60°C y se concentra a 3 volumenes. Se carga EtOAc (6 vol) en la mezcla y se calienta y se agita a 72°C durante 10 min, luego se enfria a

20°C y se agita durante la noche. Se elimina EtOAc a traves de destilacion por vaclo para concentrar mezcla de reaccion a ~3 volumenes. La mezcla de reaccion se mantiene a ~65-70°C durante ~30 mins. Se cargan los cristales del producto que tienen la misma forma de cristal como aquellas preparadas en el Ejemplo 1 b (y que se pueden preparar mediante el procedimiento del Ejemplo 1 b), anterior, en suspension de heptanos. Se agrega lentamente el 5 heptano (9 vol) a 65-70°C. La suspension se agita a 65-70°C durante 2-3 horas y luego se enfrla lentamente a 0- 5°C. El producto se filtra, se lava con EtOAc/heptano (3/1 v/v, 4 vol) y se seca a 45°C bajo vaclo para obtener N-{3- [5-(2- amino-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2- fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida (102.3 g, 88%).

Ejemplo 1 d: metanosulfonato de N-{3-[5-(2-amino-4- pirimidinil)-2-(1,1- dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- 10 difluorobencenosulfonamida

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A una solucion de N-{3-[5-(2-ammo-4-pmmidinil)-2- (1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-

difluorobencenosulfonamida (204 mg, 0.393 mmol) en isopropanol (2 mL), se agrega acido metanosulfonico (0.131 mL, 0.393 mmol) y la solucion se deja agitar a temperatura ambiente durante 3 horas. Se forma un precipitado 15 blanco y lka suspension se filtra y enjuaga con eter de dietilo para dar el producto del tltulo como un solido cristalino blanco (210 mg, 83% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 10.85 (s, 1 H) 7.92 - 8.05 (m, 1 H) 7.56 - 7.72 (m, 1 H) 6.91 - 7.50 (m, 7 H) 5.83 - 5.98 (m, 1 H) 2.18 - 2.32 (m, 3 H) 1.36 (s, 9 H). MS (ESI): 520.0 [M+H]+.

Ejemplo 1e: metanosulfonato de N-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1,1- dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida

20 N-{3-[5-(2-Amino-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)- 1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida (que se puede preparar de acuerdo con el Ejemplo 1 a) (2.37 g, 4.56 mmol) se combina con acetonitrilo pre-filtrado (5.25 vol, 12.4 mL). Una solucion pre-filtrada de acido mesico (1.1 eq., 5.02 mmol, 0.48 g) en H2O (0.75 eq., 1.78 mL) se agrega a 20°C. La temperatura de la mezcla resultante se eleva a 50-60°C mientras que se mantiene una velocidad de agitacion baja. Una vez la temperatura de la mezcla alcanza a 50-60°C, se agrega una suspension de semilla de 25 metanosulfonato de N-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)- 2-(1,1 -dimetiletil)- 1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-

difluorobencenosulfonamida (1.0%V p/p suspendida en 0.2 vol de acetonitrilo pre-filtrado), y la mezcla se madura agitando a una velocidad muy rapida para mantener los solidos de la sedimentacion a 50-60°C durante 2 hr. La mezcla luego se enfrla a 0-5°C a 0.25°C/min y se conserva a 0-5°C durante a 6 hr. La mezcla se filtra y la torta de filtro se lava dos veces con acetonitrilo pre-filtrado. El primer lavado consiste de 14.2 ml (6 vol) de acetonitrilo pre- 30 filtrado y el segundo lavado consiste de 9.5 ml (4 vol) de acetonitrilo pre-filtrado. El solido humedo se seca a 50°C bajo vaclo, produciendo 2.39 g (85.1% de rendimiento) del producto.

Ejemplos biologicos

Los compuestos de formula (I) se ensayaron para determinar la actividad inhibidora de la protelna B-Raf quinasa en ensayos de fosforilacion de sustrato y ensayos de proliferacion celular.

35 A. Ensayo enzimatico de B-Raf:

Los compuestos de formula (I) se ensayaron para determinar la actividad inhibidora de protelna B-Raf serina quinasa en un ensayo de MEK ATPasa de B-Raf acelerado (BRAMA). El BRAF V600E expresado por baculovirus, marcado con His6 de longitud completa (aminoacidos 2-766) se utilizo en el ensayo BRAMA. Este es un ensayo de alta sensibilidad que mide una hidrolisis de ATP mediada por MEK intrlnseca desacoplada de la fosforilacion de ERK 40 en direccion 3' mediante el acoplamiento de la formacion de ADP a la oxidacion de NADH a traves de las enzimas piruvato quinasa y lactato deshidrogenasa. Cuando la produccion de ADP se inicia mediante adicion de cantidades catallticas de una enzima Raf activada y MEK no fosforilado, se observa produccion concomitante robusta de ADP con la fosforilacion mediada por Raf de MEK. El metodo se describe en: C. Rominger, M. Schaber, E. May. Assay for B-Raf Activity Based on Intrinsic MEK ATPase Activity. Statutory Invention Registration 11/084,993 (March, 2005) 45 sino que incluye los siguientes cambios: 1) El ensayo se realizo con una concentracion de MEK final de 150 nM y 2) el ensayo se leyo como punto final individual en lugar de una lectura cinetica.

La aceleracion de la actividad de MEK ATPasa se determino a partir de los datos y se grafica como una funcion de la concentracion de inhibidor para dar curvas de respuesta de concentracion, a partir de las cuales se generaron los valores de pIC50 siguiendo el protocolo de ajuste de pIC50 estandar.

El compuesto ejemplificado del Ejemplo 1 se realizo en el ensayo mencionado (A). Los resultados se reportan en la 5 siguiente Tabla 1a en la que los mas altos pIC50 para una o mas series de cada compuesto ensayado se clasifican como se indica. En la siguiente tabla:

“+” indica que no hay medicion de pCI50 mayor de 6 contra B-Raf

“++” indica por lo menos una medicion pIC50 mayor de 6 contra B-Raf, pero no mayor que la medicion de pIC50 de 7; y

10 “+++” indica por lo menos una medicion pCI50 mayor de 7 en contra de B-Raf.

Tabla 1 Actividad de B-Raf

Ejemplo

Actividad

1

+ + +

En un momento despues de las series de ensayo mostradas en la Tabla 1a, anterior, los compuestos ejemplificados del Ejemplo 1 se repitieron en el ensayo mencionado (A). Los resultados se reportan en la siguiente Tabla 1b en la 15 que se clasifica el pIC50 promedio de una o mas series de cada compuesto ensayado como se indica. En la siguiente tabla:

Los valores pIC50 para los compuestos de los ejemplos se categorizaron por la inhibicion relativa de B-Raf. Los resultados se resumen en las tablas siguientes.

B-Raf pCI50

Ejemplo No.

8.5 y mas

1a, 1d

20 B. Ensayos celulares. - Ensayo de inhibicion de Crecimiento Celular

Las celulas tumorales de colon humano (Colo205) se cultivaron en RPMI (Mediatech 50-020-PB) que contenla FBS al 10% y penicilina-estreptomicina al 1%. Las celulas de cancer de melanoma humano (SK-MEL-28) se cultivaron en EMEM con aminoacidos no esenciales (Mediatech 50 a 011-pb) que contenlan FBS al 10%, piruvato de sodio al 1% (JT Baker 3354-04), y penicilina-estreptomicina al 1%. Todas las estirpes celulares se mantuvieron a 37°C en una 25 atmosfera humidificada de CO2 al 5%, 95% de aire de incubadora. Las celulas se recogieron utilizando tripsina/EDTA (Invitrogen 25200), se contaron utilizando un hemocitometro, y se colocaron en placas. Para los ensayos de 96 pozos (utilizando placas NUNC de area completa blancas cat #136102), las celulas se colocaron en placas en 105 pl a las siguientes densidades (celulas/pozo): Colo205, 500; SKMEL- 28, 500. Para los ensayos de 384 pozos (placas NUNC de area completa blancas, cat # 781080), las celulas se colocaron en placas en 48 pL a 30 las siguientes densidades (celulas/pozo): Colo205, 500; SK-MEL-28, 500.

Al dla siguiente, los compuestos se diluyeron como sigue: Para ensayos de 96 pozos, 13.5 pL de compuesto en DMSO se diluyeron con nueve (9) de 1:3 diluciones seriales de 4.5 pL en 9 pL de DMSO. El medio (270 pL /pozo de RPMI con FBS al 10% y penicilina-estreptomicina al 1%) se agrego a las placas. Se agregaron allcuotas (7 pL) a las celulas en el ensayo final dando una concentracion final de DMSO del 0.2%. Para los ensayos de 384 pozos, 15 pL 35 del compuesto en DMSO se diluyeron con nueve (9) de 1:3 diluciones seriales de 5 pL en 10 pL de DMSO, seguido de una dilucion adicional de 5 pL del compuesto con 95 pL de medio, de los cuales 2 pL se agregaron a las celulas en el ensayo final dando una concentracion final de DMSo del 0.2%. Las celulas se incubaron a 37°C, 5% de CO2 durante 3 dlas.

Se midio el ATP total (como una estimacion subrogada del numero de celulas) utilizando el reactivo CellTiter-Glo® 40 (Promega G7571). Brevemente, las placas se retiraron de la incubadora y se dejaron equilibrar a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se agrego reactivo CellTiter-Glo® (25 pL o 55 pL para ensayos de 384 pozos o 96 pozos, respectivamente) a cada pozo y las placas se agitaron en un agitador de placas orbital durante 2 minutos.

5

10

15

20

25

30

Las placas se incubaron sin agitacion durante otros 30 minutos y se leyeron en un lector de LJL Analyst GT en modo de luminometro con un tiempo de integracion de 0.5 segundos por pozo. El porcentaje de inhibicion del crecimiento celular se calculo en relacion con pozos de control tratados con vehlculo DMSO. La concentration de compuesto requerida para dar 50% de inhibicion del crecimiento de celulas de control tratado con vehlculo (IC50) se interpolo utilizando un ajuste de 4 parametros para determination del IC50 utilizando la siguiente ecuacion: Y = A + ((BA)/(1 + ((C/X) A D))), donde X = IC50.

Los compuestos del Ejemplo 1 se aplicaron en el ensayo mencionado y los resultados se reportan en la siguiente Tabla 2a. En la siguiente tabla:

“+” indica que el compuesto mostro actividad de> 1 pM en celulas tumorales Colo205;

“++” Indica que el compuesto mostro una actividad entre 100 nM y 1 pM en celulas tumorales Colo205; y “+++” indica que el compuesto mostro una actividad de menos de 100 nM en celulas tumorales Colo205.

Tabla 2a Actividad en Celulas Tumorales Colo205

Ejemplo

Actividad

1

+ + +

En un momento despues de las series de ensayo mostradas en la Tabla 2a, anterior, los compuestos ejemplificados de Ejemplo 1 se repitieron en el ensayo mencionado (B). Los resultados se presentan en la siguiente Tabla 2b en la que se clasifica la inhibicion promedio de una o mas series de cada compuesto ensayado como se indica. En la siguiente tabla:

Los valores de IC50 (nM) para compuestos de los Ejemplos seleccionados se categorizaron por la inhibicion relativa de la proliferation celular. Los resultados se resumen en las siguientes tablas.

IC50 para Colo205

Ejemplo No.

<100 Nm

1a, 1d

Los compuestos del Ejemplo 1 se aplicaron en el ensayo mencionado y los resultados se reportan en la siguiente Tabla 3a. En la siguiente tabla:

“+” indica que el compuesto mostro actividad de >1 pM en celulas tumorales SK-MEL-28;

“++” indica que el compuesto mostro una actividad de entre 100 nM y 1 pM en celulas tumorales SK-MEL-28; y “+++” indica que el compuesto mostro una actividad de menos de 100 nM en celulas tumorales SK-MEL-28.

Tabla 3a - Actividad en Celulas de Tumor SK-MEL 28

Ejemplo

Actividad

1

+ + +

En un momento despues de las series de ensayo mostradas en la Tabla 3a, anterior, los compuestos ejemplificados de Ejemplo 1 se repitieron una o mas veces en el ensayo mencionado (B). Los resultados se reportan en la siguiente Tabla 3b en la que se clasifica la inhibicion promedio de una o mas series de cada compuesto ensayado como se indica. En la siguiente tabla:

Los valores de IC50 (nM) para los compuestos de los ejemplos seleccionados se categorizaron por la inhibicion relativa de la proliferacion celular. Los resultados se resumen en las tablas siguientes.

IC50 para SK-MEL-28

Ejemplo No.

<100 nM

1a, 1d

C. Estirpes celulares de cancer mutante.

Veintidos (22) estirpes celulares de cancer que codifican mutacion B-Raf V600E, cultivadas generalmente de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el proveedor de cultivo celular American Type Culture Collection, 5 Manassas, VA, se ensayaron para determinar la sensibilidad a la del compuesto del Ejemplo 1a en un ensayo de proliferacion de 3 dlas. Los datos demostraron que 16 de cada 22 estirpes celulares de cancer que codifican B-Raf V600E eran sensibles con gIC50<100 nM, mientras que 2 de cada 22 demostraron una respuesta intermedia (gIC50> 100nM y <1000 nM) y 4 de cada 22 no fueron sensibles (gIC50>1000M) en el compuesto. La actividad del compuesto del Ejemplo 1a contra estirpes celulares de cancer mutante B-Raf V600E se muestra en la Tabla 4.

10 Tabla 4

ESTIRPE CELULAR

Origen de Tejido BRAF IgC50 promedio (nM)

MALME-3M

Piel V600E (+++)

UACC-62

Piel V600E (+++)

C32TG

Piel V600E (+++)

SK-MEL-1

Piel V600E (+++)

UCLA-SO-M14

Piel V600E (+++)

SK-MEL-28

Piel V600E (+++)

DU4475

Mama V600E (+++)

WM115

Piel V600D, V600E (+++)

UACC-257

Piel V600E (+++)

COLO 205

Colon V600E (+++)

SK-MEL-3

Piel V600E (+++)

A375P F11s

Piel V600E (+++)

SH-4

Piel V600E (+++)

A101D

Piel V600E (+++)

ES-2

Ovario V600E (+++)

HT-29

Colon T119S, V600E (+++)

SW1417

Colon V600E (++)

SW872

Tejido conjuntivo V600E (++)

RKO

Colon V600E (-)

A673

Musculo V600E (-)

ESTIRPE CELULAR

Origen de Tejido BRAF IgC50 promedio (nM)

GCT

Piel V600E (-)

NCI-H292

Pulmon T119S, V600E (-)

(+++) gIC50<100nM (++) gIC50 >100nM y <1000nM (-) gIC50 >1000nM

D. Experimentos in vivo

1. Inhibicion tumoral dependiente de dosis utilizando el compuesto del ejemplo 1a

Se cultivaron F11S A375P en medio RPMI 1640 suplementado con suero fetal bovino al 10%, Penicilina- 5 estreptomicina al 1% y piruvato de sodio al 1%. Las celulas tumorales (2 x106 F11S A375P) se implantaron subcutaneamente en el flanco derecho de ratones atlmicos el dla 1. Para facilitar su crecimiento, las celulas A375P F11S se suspendieron en Matrigel diluido 1:1 en solucion salina regulada con fosfato antes de implantacion. Cuando los tumores hablan alcanzado aproximadamente 200 mm3 en volumen (dla 19 a 22), los ratones portadores de tumores se asignaron al azar en grupos de estudio (n=7 u 8). Los animales se dosificaron por via oral una o dos 10 veces al dla durante un perlodo de 14 dlas. El compuesto del Ejemplo 1a se dosifico en un HpMC 0.5%/Tween 80 al

0.2% pH 7-8 del vehlculo. El crecimiento del tumor se midio dos veces a la semana utilizando calibradores durante el estudio. Los volumenes tumorales se calcularon como el producto de (longitud x anchura x anchura)/2 y los valores de mediana se utilizaron para comparar los grupos. Las regresiones completas (CR) se definieron como tres mediciones consecutivas de tumor < 13.5 mm3. Las regresiones parciales se definieron como tres mediciones 15 consecutivas de < 50% del volumen inicial del tumor. El retardo en el crecimiento del tumor se define como la diferencia de tiempo tomado para que los grupos tratados y de control alcancen 1000 mm3 (T-C1000).

En la siguiente tabla:

“-” no indica respuesta

“+” indica retardo en el crecimiento (duplicacion 1-2x)

20 “++” indica retardo de crecimiento (duplicacion >2x)

“+++” indica enfermedad estable “++++” indica regresion parcial “+++++ “indica regresion completa

Tabla 5- Evaluacion in vivo

Estirpe celular

Dosificacion Respuesta

A375P F11s

300 mg/kg bid ++++(+)

A375P F11s

300 mg/kg qd ++++(+)

A375P F11s

100 mg/kg bid ++++(+)

A375P F11s

100 mg/kg qd ++++(+)

A375P F11s

10 mg/kg qd ++(+)

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

Estirpe celular

Dosificacion Respuesta

A375P F11s

1 mg/kg qd +

A375P F11s

0.1 mg/kg qd -

2. Efecto farmacodinamico de diversos compuestos

La actividad de los compuestos seleccionados de formula (I) se ensayo in vivo contra modelo de raton con xenoinjerto A375PF11s (estirpe celular de melanoma que codifica una mutacion B-Raf V600E). La estirpe celular A375P F11S, que codifica una mutacion para BRAFV60 E, se subclono de la estirpe celular de melanoma humano A375P (obtenida de ATCC, Cat # CRL-1619) por dilucion limitante y seleccionada sobre la base de alta sensibilidad (90%) al inhibidor de BRAF, SB-590885 (disponible comercialmente), en ensayos de proliferacion de 3 dlas. El clon seleccionado (A375P F11S) se aislo y se volvio a confirmar la mutacion en B-Raf (T1799A) que codifica el cambio de aminoacido V600E.

Se utilizaron ratones CD-1 nu/nu hembras de 8-10 semanas de edad en estos estudios; todos los ratones se obtuvieron de Charles River Laboratories (Wilmington, DE). Los animales se alojaron en condiciones libres de patogenos y se manipularon con una tecnica aseptica. Se recogieron F11S A375P de matraces de cultivo por exposicion a tripsina/EDTA al 0.25% durante 5 min a 37°C. Se recogieron las celulas desprendidas, se centrifugaron (1500 rpm, 5 min, 4°C) y se enjuagaron para eliminar la solucion de tripsina. Las celulas se resuspendieron en PBS sin magnesio o calcio y se contaron. Las celulas se centrifugaron como anteriormente para eliminar PBS y una suspension de celulas se ha creado ya sea en Matrigel al 50%: PBS al 50% (v: v) o PBS al 100% de modo que una inyeccion subcutanea de 100 pL suministrarla el numero necesario de celulas por raton. La estirpe celular de de melanoma A375P F11S fue inyectada con Matrigel a 4 millones de celulas por raton. Se establecieron tumores (~150-300 mm3) para todas las estirpes celulares dentro de 2-4 semanas despues de la inyeccion.

El compuesto del Ejemplo 1 y otros nueve compuestos de referencia dentro de la formula (I) se prepararon en las formulaciones de ya sea hPmC al 0.5%/Tween 80 al 0.2%, pH 7-8 o Encapsina al 20%/ DMSO al 1%. Las preparaciones se administran por via oral a los ratones como una dosis oral unica de 100 mg/kg.

2h despues de la administracion oral de compuestos, los ratones se sacrificaron utilizando dioxido de carbono. Los tumores se escindieron cuidadosamente, se homogenizaron utilizando Medimachine (BD Bioscience) con 1 ml de regulador de lisis (Tris-HCl 25 mM (pH 7.5), EDTA 2 mM (pH 8.0), EGTA 2 mM (pH 8.0), Triton X- 100 al 1%, SDS al

0.1%, Na-B-PO4 50 mM, NaVO4 2 mM, Na- Pyr-PO4 4 mM, coctel de inhibidor de fosfatasa 2x. El homogeneizado crudo se transfirio a un tubo de polipropileno de 12 ml que contiene 1.5 ml de regulador de lisis y se mantiene en hielo. Despues de la homogeneizacion de todas las muestras, se transfirio 1 ml de homogeneizado a un tubo Eppendorf y se centrifugo a 14,000 rpm durante 15 min a 4°C. Quinientos microlitros de lisado clarificado se transfirieron a un nuevo tubo, se congelaron flash y se procesaron para cuantificacion de pERK y TERK utilizando transferencia de Western o ensayos ELISA (MSD). Antes se determino la relacion de pERK/TERK y se asegura el rango lineal, una curva estandar de BSA se realizo mediante la realizacion de dilucion de 1/3 de veces en serie para alcanzar concentraciones de 20, 13.3, 8.9, 5.9, 3.9, 2.6, 1.7, 1.2, 0.8, 0.5, 0 pg/pl. Se agrego colorante BioRad a diluciones de BSA y lisados de ensayo diluidos. Las muestras se incubaron a temperatura ambiente durante 15 min y se leyeron en el lector de placas SpectraMax a 595 nM. La comparacion con la curva estandar proporciona una medida relativa de la concentracion de protelna. Para la determinacion de la relacion de pERK/TERK por analisis de transferencia Western 50 pg microgramo de lisados tumorales se sometieron a electroforesis en Invitrogen bis-Tris HCl SDS-PAGE al 4-12%. Los geles se transfirieron a membranas de nitrocelulosa utilizando el aparato de transferencia de iBlot, que luego se bloquearon y se incubaron con diferentes anticuerpos primarios durante la noche a 4°C. Las transferencias Western sondadas doblemente contra Perk y Terk se escanearon utilizando el lector LI- COR Odyssey @. Una relacion de la densidad de inmunofluorescencia obtenida para pERK/TERK se calcula y se expresa como una relacion (en porcentaje) para controlar las muestras sin tratar. Para determinacion de la relacion de Perk/TERK por ELISA, se utilizo la placa MesoScale Discovery (MSD) (cat # K15107) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. En resumen, las placas MSD bloque se bloquearon con 150 pl/pozo de regulador de bloqueo durante 1 hr antes de ser lavadaa 4 veces con 200 pl de regulador de lavado. Se agregaron treinta microlitros (30 pl) de las muestras diluidas en serie a los pozos y las placas se incubaron durante la noche a 4°C bajo agitacion lenta (-500 rpm). Las placas se lavaron 4 veces en 200 pl de regulador de lavado Tris 1X y se agregaron 25 pl de solucion de anticuerpo de detection a todos los pozos y se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hr (-500 rpm). Las placas se lavaron 4 veces en 200 pl de regulador de lavado y se agrego 150 pl de regulador de lectura a todos los pozos. Las placas se leyeron en MSD.SI6000. En este las muestras tratadas de vehlculo de ensayo y compuesto se probaron a 4 diluciones diferentes para permitir la cobertura de rango lineal del ensayo. A partir de la senal pERK y TERK, se sustrajo los antecedentes (senal de BSA) y la relacion de pERK/TERK se determino y normalizo a las muestras no tratadas de vehlculos, arbitrariamente fijas en 100%.

5

10

15

20

25

30

La inhibicion de pERK por los inhibidores de B-Raf es un buen marcador farmacodinamico (marcador PD) para la inhibicion de BRAF. El compuesto del Ejemplo 1 y los otros nueve compuestos exhiben inhibicion de pERK (pERK/TERK) de igual o mayor que 30%.

3. Estudio de eficacia in vivo en el raton.

De los 10 compuestos ensayados para inhibicion de pERK, en C.2 anterior, ocho de los compuestos (el compuesto descrito en el Ejemplo 1 y siete de los otros compuestos) se ensayaron en un estudio de eficacia similar al estudio de D.1 anteriormente. Los resultados demostraron que seis de los ocho compuestos ensayados provocaron la regresion del tumor (volumen del tumor promedio mas pequeno despues de tratamiento de 14 dlas que el volumen inicial del tumor) o enfermedad estable (volumen de tumor promedio similar despues de tratamiento de 14 dlas al volumen del tumor promedio inicial) en comparacion con los animales tratados con vehlculo.

Ejemplo de Formulacion Farmaceutica --Preparaciones de capsulas que contienen un compuesto de la invencion (base libre):

■ Contenido en cada capsula:

= 60 mg de ingrediente farmaceutico activo (API) + 60 mg de Avicel + 13 mg SSG.

■ 133 mg de polvo total en una capsula de gelatina dura de tamano 0. El peso de Avicel/SSG se puede aproximar razonablemente.

Procedimiento:

1. Separar las mitades de la capsula de gelatina dura y marcar/identificar cada una segun sea apropiado/necesario.

2. Colocar en la mitad inferior el relleno de la capsula de con el embudo de llenado en la parte superior.

3. Pesar los componentes (Avicel, glicolato de almidon sodio (SSG), API) en un unico papel de peso (tarado sobre una balanza analltica entre cada pesaje).

4. Registrar los pesos de cada componente.

5. Mezclar con cuidado y completamente los polvos secos en el papel de peso con una pequena espatula.

6. Transferir con cuidado los polvos mezclados en la capsula a traves del embudo.

7. Colocar la mitad superior sobre la capsula y cerca hasta que quede firme, agitar la capsula para mezclar /distribuir los contenidos.

8. Si el polvo comienza cerca de la parte superior de la capsula, golpee suavemente la capsula y el polvo se debe conformar.

9. Colocar la capsula en un pequeno frasco debidamente etiquetado (pero lo suficientemente grande como para retirarlo facilmente).

Ejemplo de Formulacion Farmaceutica -- Preparaciones de comprimidos que contienen un compuesto de la invencion (base libre):

Componente

Cantidad (mg/comprimido) % w/w

nucleo del comprimido

API

405.0 71.6

Monohidrato de Lactosa

59.0 10.4

Polisorbato 80

1.0 0.2

Povidona

40.0 7.1

Componente

Cantidad (mg/comprimido) % w/w

Dioxido de silicio coloidal

5.5 1.0

Crospovidona

51.0 9.0

Estearato de magnesio

4.5 0.8

Agua purificada

cs

Pellcula de recubrimiento

Opadry® Orange, YS-1-13065-A

17.0 3.0

Agua purificada

cs

Procedimiento:

1. Tamizar lactosa, dioxido de silicio, crospovidona y povidona media.

2. Agregar API.

5 3. Granular en Granulador de Alto Corte con solucion de granulacion que contiene polisorbato 80 disuelto y otro

medio de povidona en agua purificada.

4. Moler utilizando tamiz Comil 197, 0.375”.

5. Secar utilizando Secador de Lecho Fluido

6. Moler utilizando tamiz Comil 197, 0.075”

10 7. Agregar Crospofidona, estearato de magnesio.

8. Mezclar 5 minutos

9. Comprimir tableta

10. Formar comprimidos de recubrimiento con pellcula acuosa Cristalografla de rayos X del Ejemplo N° 1:

15 El patron de difraccion de polvo de rayos X de la Forma 1 del Ejemplo N° 1 se puede determinar utilizando tecnicas y equipos convencionales conocidos por aquellos expertos en la tecnica de la qulmica analltica y la caracterizacion flsica. Los patrones de difraccion de la Figura 1 se obtuvieron con un sistema difractometro PANalltico que utiliza K X-radiacion de cobre y equipado con ranuras automatizadas divergentes, filtro de nlquel, y un detector de multiples tiras de tiempo real. La muestra en polvo utilizada para generar los datos de difraccion de polvo de rayos X se monto 20 en una placa de fondo de cero silicio. En la figura 1, 2 angulos theta en grados (eje x) se grafican contra la intensidad pico (eje y). El patron de XRD para cada forma de Ejemplo No. 1 es unica para la forma particular; que exhibe un conjunto unico de picos de difraccion que se pueden expresar en angulos 2 theta, espacios d (A) y/o intensidades relativas a los picos.

Desde un cierto margen de error es posible en la asignacion de 2 angulos theta y espacios d, el metodo preferido 25 para comparar los patrones de difraccion de rayos X con el fin de identificar una forma particular de una muestra es superponer el patron de XRD de la muestra desconocida sobre el patron de difraccion de rayos X de una forma conocida. Por ejemplo, un experto en la tecnica puede superponer un patron de difraccion de rayos X de una muestra desconocida del Ejemplo No. 1, obtenido utilizando los metodos descritos aqul, sobre la Figura 1 y, utilizando la experiencia y conocimiento en la tecnica, determinar facilmente si el patron de XRD de la muestra 30 desconocida es sustancialmente el mismo que el patron de XRD de la forma 1 del Ejemplo No. 1. Si el patron de

difraccion de rayos X es sustancialmente el mismo que la figura 1, la forma previamente desconocida se puede identificar facil y precisamente como la forma 1 del Ejemplo No. 1.

A pesar de que los angulos 2 theta o los espacios d son el metodo principal para identificar una forma cristalina particular, puede ser deseable comparar tambien las intensidades de pico relativas. Como se senalo anteriormente, 5 las intensidades de pico relativas pueden variar dependiendo del difractometro especlfico empleado y de la tecnica de preparacion de muestras del analista. Las intensidades de pico se reportan como intensidades relativas a la intensidad de pico del pico mas fuerte. Las unidades de intensidad en el XRD son conteos/s. Los conteos absolutos = conteos/tiempo x tiempo de conteo = conteos /seg x 10 seg.

Calorimetrla de barrido diferencial de la Forma 1 del Ejemplo No. 1.

10 La calorimetrla diferencial de barrido se llevo a cabo en el sistema de TA Instruments DSC Q100 DSC. La velocidad de calentamiento de 10°C por minuto. Tamano de la muestra 0.4-1.5 mg. El termograma se proporciona en la Figura 2.

Como un aspecto adicional, la presente invencion proporciona una forma de estado solido particular, identificada como “Forma 1” de N-{3-[5-(2-amino-4- pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2- fluorofenil}-2,6- 15 difluorobencenosulfonamida.

Claims (19)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   REIVINDICACIONES

   1. N-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida, que es un compuesto de la formula (la)

   imagen1

   o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
2. 2. Una sal farmaceuticamente aceptable de N-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2- fluorofenil}- 2,6-difluorobencenosulfonamida, que es un compuesto de la formula (la)

   imagen2
3. 3. Mesilato de N-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-

   difluorobencenosulfonamida.
4. 4. N-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida.
5. 5. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de la formula (la) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y que comprende adicional y opcionalmente uno o mas portadores, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables.
6. 6. Una composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 5 en forma de dosificacion unitaria.
7. 7. Una composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 6 en donde la forma de dosificacion unitaria contiene 1 mg a 700 mg de un compuesto de la formula (la) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.
8. 8. Una composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 7 en donde la forma de dosificacion unitaria contiene 5 mg a 100 mg de un compuesto de la formula (la) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
9. 9. Una combinacion que comprende un compuesto de la formula (la) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y por lo menos un agente antineoplasico.
10. 10. Una combinacion de acuerdo con la reivindicacion 9 en donde un agente antineoplasico es un inhibidor de serina/treonina quinasas.
11. 11. Una combinacion de acuerdo con la reivindicacion 10 en donde el inhibidor de serina/treonina quinasas es un inhibidor de mitogeno o quinasas reguladas extracelulares (MEKs).
12. 12. Un compuesto de la formula (la) o una sal farmaceuticamente aceptable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una combinacion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, para uso en terapia.

    5

    10

    15

    20

    25
13. 13. Un compuesto de la formula (la) o una sal farmaceuticamente aceptable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una composicion farmaceutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, o una combinacion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, para uso en el tratamiento de un neoplasma susceptible en un humano.
14. 14. El uso de un compuesto de la formula (la) o una sal farmaceuticamente aceptable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o de una composicion farmaceutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, o de una combinacion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de un neoplasma susceptible en un humano.
15. 15. Un compuesto, composicion farmaceutica, o combinacion para uso de acuerdo con la reivindicacion 13 o el uso de un compuesto, una composicion farmaceutica, o una combinacion de acuerdo con la reivindicacion 14, en donde dicho neoplasma susceptible se selecciona de cancer de mama, colangiocarcinoma, cancer colorrectal, melanoma, cancer de celula no microcltica, cancer de ovario y cancer de tiroides.
16. 16. Un compuesto, composicion farmaceutica, o combinacion para uso de acuerdo con la reivindicacion 13 o el uso de un compuesto, una composicion farmaceutica, o una combinacion de acuerdo con la reivindicacion 14, en donde dicho neoplasma susceptible es un melanoma.
17. 17. Un compuesto, composicion farmaceutica, o combinacion para uso o el uso de un compuesto, una composicion farmaceutica, o una combinacion de acuerdo con la reivindicacion 16, en donde dicho melanoma es un melanoma metastasico.
18. 18. Un compuesto, composicion farmaceutica, o combinacion para uso de acuerdo con la reivindicacion 13 o el uso de un compuesto, una composicion farmaceutica, o una combinacion de acuerdo con la reivindicacion 14, en donde el neoplasma susceptible es un neoplasma que exhibe una mutacion en BRaf.
19. 19. Un compuesto, composicion farmaceutica, o combinacion para uso o el uso de un compuesto, una composicion farmaceutica, o una combinacion de acuerdo con la reivindicacion 18, en donde la mutacion resulta en el BRaf que tiene una sustitucion de aminoacido V600E.