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ES2548987T3 - Ácido nucleico antisentido de kanamicina para el tratamiento del cáncer - Google Patents

Ácido nucleico antisentido de kanamicina para el tratamiento del cáncer Download PDF

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ES2548987T3 ES10711388.8T ES10711388T ES2548987T3 ES 2548987 T3 ES2548987 T3 ES 2548987T3 ES 10711388 T ES10711388 T ES 10711388T ES 2548987 T3 ES2548987 T3 ES 2548987T3
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Abstract

Un ácido nucleico aislado para su uso en terapia, en el que dicho ácido nucleico aislado comprende una secuencia antisentido complementaria a un fragmento de la secuencia que codifica para la proteína de resistencia a la kanamicina, fragmento que es de al menos 50 nucleótidos de longitud y en el que dicho ácido nucleico aislado es capaz de provocar una respuesta inmunitaria en un mamífero.

Description

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E10711388
30-09-2015
[0079] pCDNA3PML-RARαFrC (VVACS01) y pVaxPML-RARαKanAS (VVACS03) se transfectaron transitoriamente en células COS. Los experimentos de RQ-PCR demostraron que PML-RARα se expresa con ambas construcciones.
5 Ejemplo 2: Kanas prolonga la esperanza de vida en un modelo de ratón LPA
[0080] Se estudió el efecto de diferentes construcciones de ADN en un modelo de ratón LPA utilizando el protocolo descrito en Padua et al. (2003, Nature Medicine 9: 1413-1417). En resumen, 104 células LPA se inyectaron a ratones FVB/N. A continuación, se introdujo una pastilla de ATRA, que libera 5 mg/día de ATRA durante 21 días,
10 detrás del cuello de los ratones con un trocar. Se inyectó ADN (2 x 50 microgramos de plásmido) el día después de la introducción de la pastilla de ATRA, y cada 20 días para un total de tres inyecciones. Se inyectaron las siguientes construcciones de ADN a los ratones:
-la construcción pVaxKanAS, también denominado pVax14;
15 -la construcción pCDNA3PML-RARαFrC (VVACS01); -la construcción pVaxPML-RARαFrC; y -la construcción pCDNA3PML-RARαASFrC (VVACS04).
[0081] Como placebo se usó una pastilla adquirida del fabricante de la pastilla de ATRA (Innovative 20 Research, Sarasota, EE.UU.).
[0082] Se hizo un seguimiento de los ratones durante dos años y se construyeron curvas de Kaplan-Meier.
[0083] Los resultados se muestran en Figura 2 y en la Tabla 1 a continuación. Se aplicaron los ensayos log
25 rank (Mantel-Cox) y de Wilcoxon general a las curvas de Kaplan-Meier. Los dos ensayos estadísticos condujeron a idénticas conclusiones en términos de importancia.
Tabla 1
log-rank (Mantel-Cox)
Wilcoxon general
Valor Chi-2
valor de p Valor Chi-2 valor de p
ATRA vs. ATRA + pCDNA3PML-RARαASFrC
8,7257E+00 3,1375E03 p < 0,005 7,1234E+00 7,6086E-03 p < 0,01
ATRA vs. ATRA + pCDNA3PML-RARαFrC
1,7729E+01 2,5473E05 p < 0,0001 1,0263E+01 1,3571E-03 p < 0,005
ATRA vs. ATRA + pVaxPML-RARαFrC
5,0145E+00 2,5136E02 p < 0,05 5,1840E+00 2,2796E-02 p < 0,05
ATRA vs. ATRA + pVaxKanAS
6,5927E+00 1,0240E02 p < 0,05 2,3055E+00 1,2892E-01 n.s.
ATRA vs. placebo
6,0018E+01 9,3994E15 p < 0,0001 5,1827E+01 6,0611 E13 p < 0,0001
ATRA vs. placebo+ADN
8,7059E+00 3,1718E03 p < 0,005 1,6318E+01 5,3547E-05 p < 0,0001
ATRA + pCDNA3PML-RARαASFrC vs. ATRA + pCDNA3PML-RARαFrC
2,9314E-02 8,6406E01 n.s. 7,4390E-03 9,3127E-01 n.s.
ATRA + pCDNA3PML-RARαASFrC vs. ATRA + pVaxPML-RARαFrC
2,3666E+00 1,2395E01 n.s. 1,0271E+00 3,1085E-01 n.s.
ATRA + pCDNA3PML-RARαASFrC vs. ATRA + pVaxKanAS
6,0339E-05 9,9380E01 n.s. 8,7577E-02 7,6728E-01 n.s.
ATRA + pCDNA3PML-RARαASFrC vs. placebo
3,1948E+01 1,5838E08 p < 0,0001 2,4578E+01 7,1365E-07 p < 0,0001
ATRA + pCDNA3PML-RARαASFrC vs. placebo+ADN
1,3354E+01 2,5792E04 p < 0,0005 1,3575E+01 2,2917E-04 p < 0,0005
ATRA + pCDNA3PML
3,8212E+00 5,0608E n.s. 1,0797E+00 2,9876E-01 n.s.
12
E10711388
30-09-2015
RARαFrC vs. ATRA + pVaxPML-RARαFrC
02
ATRA + pCDNA3PML-RARαFrC vs. ATRA + pVaxKanAS
1,3756E-02 9,0663E01 n.s. 2,5419E-01 6,1414E-01 n.s.
ATRA + pCDNA3PML-RARαFrC vs. placebo
7,3553E+01 9,7951E18 p < 0,0001 6,4450E+01 9,9035E-16 p < 0,0001
ATRA + pCDNA3PML-RARαFrC vs. placebo+ADN
2,9433E+01 5,7887E08 p < 0,0001 3,0640E+01 3,1065E-08 p < 0,0001
ATRA + pVaxPML-RARαFrC vs. ATRA + pVaxKanAS
2,2960E+00 1,2971E01 n.s. 5,2380E-01 4,6923E-01 n.s.
ATRA + pVaxPML-RARαFrC vs. placebo
2,6830E+01 2,2214E07 p < 0,0001 2,1359E+01 3,8082E-06 p < 0,0001
ATRA + pVaxPML-RARαFrC vs. placebo+ADN
1,0216E+01 1,3921E03 p < 0,005 1,0704E+01 1,0688E-03 p < 0,005
ATRA + pVaxKanAS vs. placebo
1,7202E+01 3,3607E05 p < 0,0001 1,2455E+01 4,1695E-04 p < 0,0005
ATRA + pVaxKanAS vs. placebo+AND
7,8950E+00 4,9572E03 p < 0,005 6,2853E+00 1,2174E-02 p < 0,05
placebo vs. placebo+ADN
4,0649E+00 4,3783E02 p < 0,05 4,1371 E+00 4,1953E-02 p < 0,05
[0084] Así, la construcción pVaxKanAS, administrada en combinación con ATRA, tiene un efecto protector en el modelo de ratón LPA. Aproximadamente el 40 % de los ratones fueron rescatados de la muerte. Este efecto protector es comparable con el efecto protector de la construcción pCDNA3PML-RARαFrC. Por otra parte, el efecto
5 protector de la construcción pVaxKanAS es significativamente diferente del ATRA solo (p = <0,05 para ATRA vs. ATRA + pVaxKanAS).
[0085] Se llevó a cabo un experimento separado para estudiar el efecto de la construcción de PMLRARαKanAS (también denominado pVax15). El protocolo fue el mismo que el anterior, excepto por el hecho de que 10 las células LPA usadas para este experimento se habían sometido a más pasos y más agresivos, y que el seguimiento de los ratones fue de nueve meses.
[0086] Los resultados se muestran en la Figura 3 y en la Tabla 2 a continuación.
15 Tabla 2
log-rank (Mantel-Cox)
Valor Chi-2
valor de p
ATRA vs. ATRA + pCDNA3PML-RARαFrC
9,883 0,0017
ATRA vs. ATRA + pVAXKanASFrC
11,080 0,0009
ATRA + pCDNA3PML-RARαFrC vs. ATRA + pVAXKanAS
0,004 0,9482
[0087] La construcción PML-RARαKanAS también tiene un efecto protector en comparación con el ATRA solo (p = 0,0009). La construcción PML-RARαKanAS es al menos tan eficaz como la construcción pCDNA3PML
20 RARaFrC.
Ejemplo 3: Kanas y PMLRARaASFrC prolongan la esperanza de vida en un modelo de ratón SMD
[0088] Se utilizó el modelo de ratón SMD descrito en Omidvar et al. (2007, Cancer Res 67: 11657-67) para
25 estudiar el efecto de KanAS en SMD. Este modelo de ratón se basa en el uso de ratones portadores de NRAS mutante con BCL-2, a los que se hace un seguimiento hasta que presentan un recuento plaquetario reducido indicativo de trombocitopenia y muerte inminente.
[0089] El protocolo de vacunación era el siguiente: se administraron 2 x 50 microgramos de ADN el día
30 después del diagnóstico (día 0), que correspondía a la fecha en la que el recuento de plaquetas en sangre periférica cayó por debajo de lo normal (<105/microlitro). El día 20 y el día 40, se volvieron a inyectar 2 x 50 microgramos de ADN.
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Claims (1)

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