ES2420231A1 - Composición para el sellado endodóntico con efecto antibacteriano - Google Patents

Abstract

Composición para el sellado endodóntico con efecto antibacteriano. La presente invención describe una composición para el sellado endodóntico con actividad antibacteriana y con capacidad para impedir la formación de películas o biofilms bacterianos tras el proceso de sellado en tratamientos de endodoncia. Comprende un sellador endodóntico al que se le incorpora uno o más antisépticos catiónicos de forma que, sin afectar a las propiedades físico-químicas del sellador, le confieren, en condiciones fisiológicas, propiedades inhibidoras de formación de biopelículas. Por otro lado, la adición de estos antisépticos al sellador le confiere actividad bactericida. Estas características antimicrobianas, particularmente frente a E. faecalis se mantienen en el tiempo.

Description

COMPOSICION PARA EL SELLADO ENDODONTICO CON EFECTO ANTIBACTERIANO

SECTOR DE LA TECNICA

La presente invenci6n se enmarca en el sector de los productos de uso odontol6gico. Mas concretamente se trata de una composici6n de cemento sellador con efecto antibacteriano de aplicaci6n en tratamientos endod6nticos.

ESTADO DE LA TECNICA

El objetivo mas importante del tratamiento endod6ntico es la eliminaci6n de microorganismos del sistema de conductos radiculares y la prevenci6n de la reinfecci6n. Sin embargo, en la mayoria de los casos, la completa eliminaci6n de bacterias es imposible. [Torabinejad M, Handysides R, Khademi AA, Bakland LK. Clinical implications of the smear layer in endodontics: a review. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2002; 94:658-66].

La utilizaci6n de materiales de obturaci6n de conductos radiculares con actividad antibacteriana puede reducir el numero de microorganismos remanentes [Zhang H, Shen Y, Ruse ND, Haapasalo M. Antibacterial activity of endodontic sealers by modified direct contact test against Enterococcus faecalis. J Endod 2009; 35:1051-5], [Baer J, Maki JS. In vitro evaluation of the antimicrobial effect of three endodontic sealers mixed with amoxicillin. J Endod 2010;36:1170-3.], prevenir la infecci6n recurrente de los conductos y favorecer la curaci6n de los tejidos apicales y periapicales [Leonardo MR, da Silva LA, Tanomaru Filho M Bonifacio KC, Ito IY. In vitro evaluation of antimicrobial activity of sealers and pastes used in endodontics.J Endod 2000; 26:391-4.].

El Genero Enterococcus engloba un conjunto de especies morfol6gicamente semejantes a los estreptococos. Causan infecciones muy diversas y poseen un creciente interes en el caso de los procesos oportunistas. Se asocian en parejas y cadenas cortas y, aunque su habitat natural es el intestino, se ha podido aislar como microbiota normal en la mucosa bucal y dorso de la lengua y en bolsas periodontales.

Enterococcus faecalis, una de sus especies mas comunes, se encuentra frecuentemente en dientes con tratamiento de conductos radiculares, tanto en casos asintomaticos como en los que ha fracasado dicho tratamiento, asi como casos de periodontitis apical persistente [Stuart CH, Schwartz SA, Beeson TJ, Owatz CB. Enterococcus faecalis: its role in root canal treatment failure and current concepts in retreatment. J Endod 2006; 32:93-8]. Esta bacteria penetra en los tubulos dentinarios y crece como biofilm en las paredes de los conductos radiculares incluso en condiciones de deficit de nutrientes lo que hace que su eliminaci6n sea especialmente dificil [George S, Kishen A, Song KP. The role of environmental changes on monospecies biofilm formation on root canal wall by Enterococcus faecalis. J Endod 2005; 31:86772].

Los cementos selladores endod6nticos tienen cierta capacidad antibacteriana inherente dependiendo de su composici6n quimica. Existen en el mercado una gran variedad de selladores. La mayor parte se basan en 6xido de cinc eugenol, resinas plasticas, hidr6xido de calcio y siliconas. AH Plus es un sellador endod6ntico basado en epoxi resina que tiene buenas propiedades fisicas, adecuada adhesi6n a dentina, excelente fluidez y estabilidad en soluci6n acuosa. Ademas, es biocompatible [Neff T, Layman D, Jeansonne BG: In vitro cytotoxicity evaluation of endodontic sealers exposed to heat before assay. J Endod 2002, 28:12.], no es genot6xico [Leyhausen G, Heil J, Reifferscheid G, Waldmann P, Geurtsen W. Genotoxicity and cytotoxicity of the

epoxy resin-based root canal sealer AH Plus. J Endod 1999;25:109-13.], tiene buena

tolerancia tisular, capacidad de sellado y estabilidad dimensional a largo plazo [Leonardo MR, da Silva LA, Almeida WA, Utrilla LS. Tissue response to an epoxy resin

-

based root canal sealer. Endod Dent Traumatol.1999;15:28]. Su capacidad antibacteriana, relacionada con su composici6n, se reduce en gran medida tras el fraguado [Leonardo MR, L.A. Bezerra da Silva, M.T. Filho, D.S. Santana Release of formaldehyde by 4 endodontic sealers Oral Surgery, Oral Medicine, Oral Pathology, Oral Radiology and Endodontics1999; 88: 221-5.] y es menor que la encontrada para otros selladores [Leonardo MR, da Silva LA, Tanomaru Filho M Bonifacio KC, Ito IY. In vitro evaluation of antimicrobial activity of sealers and pastes used in endodontics. J Endod 2000;26:391-4].

Estudios previos han mostrado que AH Plus no es capaz de matar bacterias o inhibir la formaci6n de biopeliculas de E. faecalis [Zhang H, Shen Y, Ruse ND, Haapasalo M. Antibacterial activity of endodontic sealers by modified direct contact test against Enterococcus faecalis. J Endod 2009;35:1051-5] [Baer J, Maki JS. In vitro evaluation of the antimicrobial effect of three endodontic sealers mixed with amoxicillin. J Endod 2010;36:1170-3].

Como parte esencial del tratamiento endod6ntico, junto a la instrumentaci6n mecanica, es indispensable el uso de soluciones irrigadoras que posean, entre otras propiedades, actividad antimicrobiana. Hipoclorito de sodio es una de ellas, si bien plantea problemas de toxicidad para el periapice, en caso de extrusi6n accidental, y no tiene actividad antimicrobiana residual. En este sentido, diversos desinfectantes cati6nicos han sido probados con exito como soluciones irrigadoras. Clorhexidina (CHX), es una bisguanida con potente acci6n antimicrobiana y probada acci6n residual que se utiliza como soluci6n irrigadora en el tratamiento de conductos radiculares. Se ha informado que es capaz de inactivar la mayoria de los microorganismos resistentes

al tratamiento endod6ntico en tan solo 15 segundos de contacto [Vianna ME, Gomes

BP, Berber VB, Zaia AA, Ferraz CC, de Souza-Filho FJ. In vitro evaluation of the antimicrobial activity of chlorhexidine and sodium hypochlorite. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2004;97:79-84]. Cetrimida (CTR), es un surfactante cati6nico que ha demostrado su capacidad para erradicar E. faecalis in vitro [Arias-Moliz MT, Ferrer-Luque CM, Gonzalez-Rodriguez MP, Valderrama MJ, Baca P. Eradication of Enterococcus faecalis biofilms by cetrimide and chlorhexidine. J Endod 2010;36:87-90.] y ex vivo [Baca P, Junco P, Arias-Moliz MT, Gonzalez-Rodriguez MP, Ferrer-Luque CM. Residual and antimicrobial activity of final irrigation protocols on Enterococcus faecalis biofilm in dentin. J Endod 2011;37:363-6. Baca P, Mendoza-Llamas ML, Arias-Moliz MT, Gonzalez-Rodriguez MP, Ferrer-Luque CM. Residual effectiveness of final irrigation regimens on Enteroccus faecalis-infected root canals. J Endod 2011;37:1121-3]. Tanto CHX como CTR son inocuos a las concentraciones de uso en odontologia. Otras bisguanidas, como alexidina, u otros detergentes cati6nicos como el cloruro de cetilpiridinio, podrian ser en el futuro antisepticos de elecci6n en el ambito de la endodoncia.

Con el fin de evaluar el efecto antibacteriano de los cementos selladores endod6nticos se ha utilizado ampliamente el test de agar difusi6n (TAD). No obstante, debido a sus limitaciones, actualmente el test de contacto directo (TCD) esta considerado como el mas id6neo para evaluar la actividad antibacteriana de los materiales odontol6gicos, incluidos los cementos selladores. Las tecnicas para evaluar la inhibici6n de formaci6n de biopeliculas, particularmente de E. faecalis, sobre materiales son mas recientes y no existe un consenso sobre la mas adecuada, si bien existen varias validas y fiables.

Dado que las bacterias dentro del conducto radicular crecen como biopeliculas [Costerton JW, Stewart PS, Greenberg EP. Bacterial biofilms: a common cause of persistent infections. Science 1999; 284:1318-22], especialmente E. faecalis, es importante determinar la actividad antibacteriana de materiales capaces de inhibir su formaci6n. En este sentido, cobra particular interes valorar la actividad antibacteriana y capacidad de inhibir la formaci6n de biopeliculas de E. faecalis de AH Plus, solo, mezclado con CHX o CTR, y combinado con ambos.

No se conoce ninguna referencia de cementos selladores que impidan por completo la formaci6n de biopeliculas ni tengan efecto bactericida, especialmente para E. faecalis.

OBJETO DE LA INVENCION

El objeto de la presente invenci6n es una composici6n para el sellado endod6ntico con actividad antibacteriana y con capacidad para impedir la formaci6n de peliculas o biofilms bacterianos tras el proceso de sellado en tratamientos de endodoncia. Comprende un sellador endod6ntico al que se le incorpora uno o mas antisepticos cati6nicos de forma que, sin afectar a las propiedades fisico-quimicas del sellador, le confieren, en condiciones fisiol6gicas, propiedades antibacterianas e inhibidoras de formaci6n de biopeliculas que, ademas, se mantienen en el tiempo. Por otro lado, la adici6n de estos antisepticos al sellador le confiere actividad bactericida a corto y largo plazo, erradicando las bacterias e inhibiendo la formaci6n de biopeliculas, particularmente a E. faecalis.

Normalmente, la incorporaci6n de sustancias extrafas a un cemento sellador puede hacer que este pierda sus propiedades. No obstante, el invento esta basado en el sorprendente hallazgo, de que al mezclar el cemento sellador del tipo epoxi resina con antisepticos del tipo CHX, CTR o ambos, a concentraciones adecuadas, sus propiedades fisicas estaban dentro de los estandares requeridos, y se mantuvo la actividad antibacteriana e inhibici6n de formaci6n de biopeliculas bacterianas de E. faecalis de forma eficaz durante semanas y meses.

DESCRIPCION DE LA INVENCION

La presente invenci6n describe una composici6n para el sellado endod6ntico con actividad antibacteriana y con capacidad para impedir la formaci6n de biopeliculas o biofilms bacterianos tras el proceso de sellado en el tratamiento de conductos radiculares. La composici6n comprende un sellador endod6ntico al que se le incorpora uno o mas antisepticos cati6nicos. En particular, la composici6n comprende un sellador endod6ntico y al menos un antiseptico de naturaleza cati6nica, preferentemente un surfactante y/o una bisguanida.

De forma preferente, el surfactante cati6nico empleado es cetrimida (CTR), teniendo siempre en cuenta que cuando se asocia con agentes ani6nicos puede inactivarlos.

De forma preferente, la bisguanida utilizada es clorhexidina (CHX), y aun mas preferentemente una soluci6n de digluconato de clorhexidina.

En una realizaci6n preferente, la composici6n comprende un cemento sellador endod6ntico con al menos un 0.1% de CTR.

En una realizaci6n preferente, la composici6n comprende un sellador endod6ntico al

que se le incorpora entre 1 y 3% de CHX (p/p) y entre un 0.1 y un 1% de CTR (p/p). En una realizaci6n aun mas preferente la composici6n comprende un sellador endod6ntico al que se incorpora entre un 2 y un 3% de CHX y entre un 0.1 y 0.5% de CTR.

En una realizaci6n mas preferente la composici6n comprende un sellador endod6ntico, y mas preferentemente con un 2% de CHX y un 0.3% de CTR.

En otra realizaci6n preferente, la composici6n se caracteriza porque el unico desinfectante cati6nico que se incorpora al sellador endod6ntico es CTR en una proporci6n superior o igual al 0.1% (p/p), mas preferentemente en una proporci6n mayor o igual al 1% y aun mas preferentemente en una proporci6n del 1%.

En otra realizaci6n preferente, la CHX empleada es digluconato de CHX.

En otra realizaci6n preferente, la CTR empleada es bromuro de hexadeciltrimetilamonio.

De forma preferente, el sellador endod6ntico es un material seleccionado del grupo compuesto por resinas plasticas (epoxi-resina, resinas de metacrilato, resinas polivinilicas). De forma mas preferente el material es resina epoxi. De forma aun mas preferente, el sellador es una pasta de dos componentes basado en una resina epoxiamina. De forma aun mas preferente, el sellador es AH Plus@, compuesto por dos pastas que se mezclan en el momento de la aplicaci6n: pasta A: Resina epoxi de Bisfenol-A, Resina epoxi de Bisfenol-F, Tungstenato de calcio, Oxido de zirconio, Silice y Oxido de hierro; y pasta B: Dibenzil-diamina, Aminoadamantano, Triciclodecano-diamina, Tungstenato de calcio, Oxido de zirconio, Silice y Aceite de silicona.

La adici6n de CTR y CHX al sellador le confiere actividad bactericida, particularmente frente a E. faecalis.

La combinaci6n de AH Plus con CHX + CTR ha mejorado notablemente su efecto antimicrobiano. Usando el TCD un 2% CHX combinado con 0.3% CTR alcanz6 un 100% de muerte bacteriana; y el 1% de CHX + 0.1% CTR fue capaz de inhibir completamente la formaci6n de biopeliculas de E. faecalis. Ademas, bajas concentraciones de agentes antisepticos son suficientes para obtener este efecto sin menoscabar las propiedades fisico-quimicas del sellador. Estudios previos con cementos de vidrio ion6mero a los que incorporaron CHX y CTR mostraron que las propiedades antimicrobianas mejoradas se acompafaban de un deterioro de sus propiedades fisicas.

MODOS DE REALIZACION DE LA INVENCION

Para determinar las caracteristicas de la composici6n objeto de esta invenci6n se realizaron una serie de ensayos sobre distintas composiciones que basadas en el producto comercial AH Plus. A este sellador endod6ntico se le incorpor6 digluconato de CHX en soluci6n acuosa a distintas concentraciones (1%, 2% y 3%) (Guinama, Alboraya, Espafa), CTR en polvo a distintas concentraciones (0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%. 1%, 2% y 3%) (Sigma-Aldrich, Steinheim, Alemania), y combinaciones de ambos antisepticos cati6nicos, dando lugar a 35 grupos de estudio.

Ademas, en el ensayo se utiliz6 AH Plus sin incorporaci6n de antisepticos como grupo de control.

Las distintas concentraciones y combinaciones de ambos antisepticos con el sellador se muestran en las Tablas 1 y 2. Se utiliz6 el termino "inhibici6n absoluta" (IA) para indicar la inhibici6n del 100% de la formaci6n de biopeliculas y el termino "erradicaci6n" (E) se utiliz6 para expresar el 100% de muerte bacteriana.

A partir de un subcultivo de E. faecalis ATCC 29212, una suspensi6n estandar 1 de McFarland se prepar6 en BHI y despues se diluy6 para obtener una suspensi6n bacteriana inicial de aproximadamente 1 x 107 unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC / ml) que se utiliz6 para el TCD y la determinaci6n de biopeliculas. Los experimentos se realizaron en condiciones esteriles en una camara de flujo laminar (Telstar SA, modelo de Bio-II-B, Tarrasa, Espafa).

Test de Actividad Antimicrobiana

Para probar la actividad antimicrobiana de los materiales se utiliz6 una metodologia basada en el TCD adaptada por Zhang et al. [Zhang H, Shen Y, Ruse ND, Haapasalo

M. Antibacterial activity of endodontic sealers by modified direct contact test against Enterococcus faecalis. J Endod 2009;35:1051-5.]. Se utiliz6 una placa de microtitulaci6n de 96 pocillos. Para estandarizar el area de los materiales probados, se hizo un molde de silicona a medida, para encajar dentro de cada pocillo en la placa, dejando un area lateral pequefa para introducir la misma cantidad de material en cada uno de ellos. Los materiales se introdujeron usando un sistema de jeringa con aguja esteril (BD DISCARDIT II, Becton Dickinson SA Fraga, Huesca, Espafa) y se dejaron fraguar de acuerdo a las instrucciones del fabricante.

Posteriormente, los moldes se retiraron de cada pocillo y la placa de microtitulaci6n de 96 pocillos se posicion6 verticalmente y 10 �l de la suspensi6n bacteriana de E. faecalis se coloc6 con cuidado sobre los materiales. Despues de la incubaci6n a 37 0 C durante 1 h en una atm6sfera humeda, lo que garantiza el contacto entre la bacteria y el material, la placa se puso en posici6n horizontal; entonces 220 �l de BHI se afadieron a cada pocillo y se mezcl6 suavemente con la pipeta durante 1 minuto. Finalmente, 50 �l fueron tomados de cada pocillo y se realizaron diluciones seriadas para su siembra y posterior recuento de celulas viables.

Formaci6n de biopeliculas sobre los materiales testados

Para el estudio de la formaci6n de biopeliculas de E. faecalis sobre los cementos selladores, se utiliz6 una metodologia basada en el dispositivo biofilm Calgary (disponible comercialmente como MBEC-highthroughput [HTP]; Innovotech, Edmonton, Alberta, Canada), originalmente descrita por Ceri et al [Ceri H, Olson ME, Stremick C, Read RR, Morck D, Buret A. The Calgary Biofilm Device: new technology for rapid determination of antibiotic susceptibilities of bacterial biofilms. J Clin Microbiol 1999;37:1771-6 ] y adaptado y modificado para E. faecalis [Arias-Moliz MT, Ferrer-Luque CM, Espigares-Garcia M, Baca P. Enterococcus faecalis biofilms eradication by root canal irrigants. J Endod 2009;35:711-4 ]. La mitad superior del MBEC-HTP es una tapa con 96 pivotes identicos, que en este caso se utilizaron para hacer los moldes de silicona. Cada material se introdujo en los moldes para obtener cilindros de material identicos. Un alambre de ortodoncia esteril de 1 cm de longitud se coloc6 en cada cilindro, mientras que el material fraguaba, siempre dejando aproximadamente 3 mm del mismo fuera del material para facilitar su posterior manipulaci6n. Los moldes se incubaron a 37 0 C en medio humedo hasta su completo fraguado.

Una placa de microtitulaci6n de 96 pocillos se inocul6 con 180 l/pocillo de la suspensi6n de E. faecalis en BHI, tras lo cual se introdujeron los cilindros de cada material en los pocillos. El conjunto placa de microtitulaci6n/cilindros fue colocado en una mesa oscilante (modelo de oscilaci6n Sw 8 10000-00015; OVAN, Badalona, Espafa), con 5 oscilaciones por minuto, y se incub6 a 37 0 C durante 24 horas. A continuaci6n, los cilindros se introdujeron dos veces en placas de lavado conteniendo 200 l de soluci6n salina al 0,9% durante 2 minutos (cada vez). Seguidamente, se transfirieron a una placa de recuperaci6n de microtitulaci6n de 96 pocillos con 200 l de BHI / pocillo, la cual se sonic6 en un sonicador de mesa de agua (modelo 5510E-MT; Branson, Danbury, CT) durante 10 minutos para romper la estructura del biofilm y recuperar las bacterias. Este procedimiento se realiz6 por cuadruplicado. Se realizaron diluciones seriadas de los biofilms recuperados y se sembraron en agar BHI que se incubaron para el recuento de celulas viables.

Los resultados de la actividad antimicrobiana y de la inhibici6n de la formaci6n de biopeliculas de E. faecalis se expresaron, respectivamente, como porcentaje de muerte bacteriana y porcentaje de inhibici6n de la formaci6n de biopeliculas, calculado para cada material de la siguiente manera: (1 -[media CFU material probado / media CFU AH Plus] x 100). Se utiliz6 el termino "inhibici6n absoluta" (IA) para indicar la inhibici6n del 100% de la formaci6n de biopeliculas y el termino "erradicaci6n" (E) para expresar el 100% de muerte bacteriana. Para comparar la eficacia de los diferentes materiales, siempre que el porcentaje de muerte y el porcentaje de inhibici6n variaron de 100%, se utiliz6 la prueba t de Student, sometiendo los datos previamente a la transformaci6n Anscombe.

Tabla 1. Porcentaje de inhibici6n de biopeliculas de E. faecalis de AH Plus combinado con CHX

y/o CTR.

Grupos Sin CHX CHX 1.0% CHX 2.0% CHX 3.0%

Sin CTR -40.816%1 97.510%2 99.693%3 CTR 0.1% 99.853% IA IA IA CTR 0.2% IA IA IA IA CTR 0.3% IA IA IA IA CTR 0.4% IA IA IA IA CTR 0.5% IA IA IA IA CTR 1.0% IA IA IA IA CTR 2.0% IA IA IA IA CTR 3.0% IA IA IA IA

CTR: cetrimida, CHX: chlorhexidina. Leido horizontalmente, los mismos numeros no muestran diferencias estadisticamente significativas. IA: inhibici6n absoluta (100%).

Tabla 2. Media del porcentaje de muerte de E. faecalis de AH Plus combinado con CHX y/o CTR usando el test de contacto directo modificado.

Grupos Sin CHX CHX 1.0% CHX 2.0% CHX 3.0%

Sin CTR -88.947%a,1 90.262%a,1 91.052%a,1 CTR 0.1% 97.618%a,1 98.223%b,2 98.052%b,2 98.381%b,2 CTR 0.2% 98.25%b,1 98.355% b,1 98.5%c,1 98.855%c,2 CTR 0.3% 98.565%b,c,1 98.684% c,1 E E CTR 0.4% 98.789% c,1 99.013% c,1 E E CTR 0.5% 99.868%d,1 99.940%d,1 E E CTR 1.0% EE E E CTR 2.0% EE E E CTR 3.0% EE E E

CTR: cetrimida, CHX: chlorhexidina.

10 Leido verticalmente, las mismas letras no muestran diferencias estadisticamente significativas. Leido horizontalmente, los mismos numeros no muestran diferencias estadisticamente significativas

E: erradicaci6n.

Estudios previos mostraron que AH Plus por si solo no es capaz de matar a las bacterias o inhibir la formaci6n de biopeliculas de E. faecalis [Slutzky-Goldberg I, Slutzky H, Solomonov M, Moshonov J, Weiss EI, Matalon S. Antibacterial properties of four endodontic sealers. J Endod 2008;34:735-8] [Zhang H, Shen Y, Ruse ND, Haapasalo M. Antibacterial activity of endodontic sealers by modified direct contact test against Enterococcus faecalis. J Endod 2009; 35:1051-5]. El porcentaje de muerte y el porcentaje de inhibici6n de la formaci6n de biopeliculas de AH Plus combinado con CHX muestran una relaci6n directa con la concentraci6n utilizada, aunque ninguna de las concentraciones ensayadas logr6 E o IA.

AH Plus mezclado solo con CTR logr6 IA de la formaci6n de biopeliculas en una concentraci6n de 0,2%. Sin embargo, la erradicaci6n necesito una concentraci6n 5 veces mayor, del 1%.

Los resultados de las combinaciones de CTR y CHX con AH Plus indican un efecto antimicrobiano sinergico de ambos antisepticos, dado el porcentaje de muerte y la inhibici6n de la formaci6n de biopeliculas obtenidos. Fue necesario un 0,3% de CTR para erradicar E. faecalis cuando se combina con 2% o 3% CHX, y s6lo se necesit6 el 0,1% CTR para la IA de la formaci6n de biopeliculas cuando se mezcl6 con cualquier concentraci6n CHX.

Propiedades fisico quimicas

Los antimicrobianos ensayados han sido Clorhexidina al 1 y 2%, Cetrimida al 0.1, 0.2,

0.3 y 0.5% y todas la combinaciones posibles.

Las pruebas fisicas realizadas han sido las siguientes: 1. tiempo de fraguado, 2. fluidez, 3. solubilidad y 4. radiopacidad. La metodologia utilizada ha seguido las normas estandar ANSI/ADA para materiales selladores del conducto radicular

(especificaci6n N0 57). Todos los materiales fueron manipulados segun las

instrucciones del fabricante. La evaluaci6n fue realizada por un operador que desconocia las concentraciones de los antimicrobianos que incorporaba cada cemento. De cada prueba y grupo de estudio se han realizado cinco replicas. Los resultados se han expresado como media (desviaci6n estandar). Los resultados se analizaron estadisticamente mediante el test de Tukey.

1. Tiempo de fraguado:

Para cada grupo se rellenaron 5 pocillos de 10 mm de diametro por 2 mm de grosor perforados en placas de polietileno y fijadas en placas de vidrio. Las muestras fueron almacenadas en estufa con 95% de humedad relativa y 37 °C. A los 150 ± 10 segundos desde que se comenzara a mezclar el sellador, una aguja tipo Gillmore con una masa de 100±0.5 g con una terminaci6n plana de 2.0±0.1 mm de diametro, fue apoyada cuidadosamente sobre la superficie horizontal de cada muestra testada. La punta de la aguja se limpi6 y la prueba se repiti6 hasta que la huella de la aguja en la superficie del cemento dej6 de ser visible. El tiempo desde el inicio de la mezcla hasta ese momento se consider6 el tiempo de fraguado. Si los resultados diferian en mas de ± 5%, la prueba era repetida.

Segun las normas ANSI/ADA se considera valido cuando la variaci6n del tiempo de fraguado es inferior al 10% del tiempo informado por el fabricante.

2. Fluidez:

Para la prueba de la fluidez, segun la especificaci6n n0 57 de la American Dental Association (REF), los selladores en todos los grupos testados fueron espatulados homogeneamente y un total de 0,5 ml de cada mezcla fue colocada sobre una placa de vidrio (40x 40x5 mm). Despues de 180 ± 5 segundos de la mezcla, se coloc6 encima otra placa con una masa de 20 ± 2 g, sobre la que se aplic6 una carga de 100 g en la parte superior del material. Diez minutos despues del comienzo de la mezcla, se retir6 la carga y se midieron los diametros mayores y menores de los discos comprimidos utilizando un calibre digital con una resoluci6n de 0,01 mm (Mitutoyo MTI Corporation, Tokio, Jap6n).

Dos condiciones son necesarias para validar el test, la primera que la diferencia entre

5 los diametros maximo y minimo no sea mayor de 1mm y que los discos comprimidos tengan una forma uniforme. Si las condiciones no se cumplen la prueba debe de ser repetida.

Segun las normas ANSI/ADA se considera que la fluidez de un sellador de endodoncia debe obtener un diametro minimo 20mm.

10 3. Solubilidad

Sobre una placa de vidrio cubierta con papel de celofan, se colocaron placas de polietileno con anillos perforados de 20 mm de diametro y 1.5 mm de grosor que fueron rellenados completamente con los selladores evaluados. Hilos de nylon fueron introducidos dentro de los selladores, y otra placa de vidrio cubierta con papel de 15 celofan fue colocada encima. Todo este montaje se incub6 en estufa a 370 y humedad relativa del 95%, por un periodo correspondiente a tres veces el tiempo de fraguado indicado por el fabricante. Tras este tiempo, los especimenes fueron desmoldados, deshumidificados durante 1 hora, y pesados tres veces cada especimen, en balanza con una precisi6n de 0.0001 g. Las muestras, suspendidas por los hilos de nylon, 20 fueron introducidas en recipientes de plastico que contenian 7.5 ml de agua desionizada destilada, teniendo especial cuidado en que la muestra no tocase las paredes del recipiente. Todo el dispositivo se incub6 en estufa con 95% de humedad relativa y 37 °C durante una semana. Transcurrido este tiempo, los materiales fueron secados con papel absorbente, desecados en camara durante 24 horas y pesados de

nuevo. La perdida de peso de cada muestra (diferencia entre el peso inicial y final) se expresa como porcentaje de la masa original.

Segun las normas ANSI/ADA se considera valida cuando la perdida de peso no exceda el 3%.

4. Radiopacidad

Se confeccionaron 5 muestras cilindricas de cada material vertiendo los cementos mezclados en moldes de polietileno de 10 mm de diametro por 1mm de grosor, de acuerdo con la especificaci6n n0 57 de la ADA. Los anillos rellenos se mantuvieron en estufa a 370 C hasta que fraguaron completamente. Las muestras se retiraron entonces, y el espesor se comprob6 con un calibre digital (Mitutoyo Corp, Tokio, Jap6n).

Las muestras de sellador fueron colocadas sobre radiografias oclusales (D-speed; Kodak Comp, Rochester, NY) cerca de un escalimetro de aluminio graduado desde 2 a 16 mm de aluminio (en incrementos de 2mm). Se tomaron radiografias, usando una unidad radiografica (Trophy Radiologie, Vincennes, France) operando a 60 kV y 10 mA con un tiempo de exposici6n de 0,3 segundos y una distancia foco-pelicula de 30 cm. Inmediatamente despues, las radiografias fueron digitalizadas utilizando un escaner digital e importadas a Adobe Photoshop 11.1 para Windows (Adobe System Inc. San Jose CA, USA) para la determinaci6n de la densidad radiografica (analisis densitometrico) en escala de grises. El valor de la radiopacidad se determin6 de acuerdo con la densidad radiografica transformada en milimetros de aluminio siguiendo el metodo descrito por Duarte et al ([Duarte MA, Ordinola-Zapata R, Bernardes RA, Bramante CM, Bernardineli N, Garcia RB, de Moraes IG. Influence of calcium hydroxide association on the physical properties of AH Plus. J Endod. 2010;36:1048-51].

La media y desviaci6n estandar del tiempo de fraguado, fluidez, solubilidad y radiopacidad del cemento de epoxi-resina AH Plus y las combinaciones testadas se exponen en la Tabla 3.

Tiempo de fraguado: El cemento AH Plus, segun el fabricante, requiere al menos un

5 minimo de 8 horas y 25 minutos de tiempo de fraguado (505 min). No se especifica el tiempo maximo. En nuestro estudio los resultados del cemento asi como de todas las combinaciones con los antimicrobianos, estan dentro de las normas requeridas por la ANSI/ADA. De forma global, la incorporaci6n de CHX y sus combinaciones con CTR reducen el tiempo de fraguado mientras que CTR sola lo aumenta.

10 Fluidez: El cemento AH Plus y todas las combinaciones testadas cumplen los requisitos de la ANSI/ADA ya que se consiguen diametros superiores a 20 mm. La incorporaci6n de los antimicrobianos modifica ligeramente los diametros obtenidos con AH Plus. Clorhexidina aumenta la fluidez, cetrimida la reduce y las combinaciones obtienen valores intermedios y por lo tanto superponibles a AH Plus.

15 Solubilidad: AH Plus y todas sus mezclas no excedieron el porcentaje de perdida de peso del 3% requerido por las normas ANSI/ADA. En ningun caso la solubilidad de las muestras alcanz6 el 1%.

Radiopacidad: Todos los materiales testados mostraron una radiopacidad superior a los 3 mm requeridos por las normas internacionales. La incorporaci6n de los

20 antimicrobianos modifica ligeramente la radiopacidad obtenida con AH Plus. CHX la disminuye, CTR la aumenta y las combinaciones obtienen valores intermedios y por lo tanto, superponibles a AH Plus.

TABLA 3. Propiedades 1isicas de AH Plus y sus combinaciones con Clorhexidina y Cetrimida. Media (desviaci6n

standard).

AH Plus

AH Plus + 1%CHX AH Plus + 2%CHX

AH Plus + O.1%CTR AH Plus + O.2%CTR AH Plus + O.3%CTR AH Plus + O.5%CTR

AH Plus + 1%CHX + O.1%CTR AH Plus + 1%CHX + O.2%CTR AH Plus + 1%CHX + O.3%CTR AH Plus + 1%CHX + O.5%CTR

AH Plus + 2%CHX + O.1%CTR AH Plus + 2%CHX + O.2%CTR AH Plus + 2%CHX + O.3%CTR AH Plus + 2%CHX + O.5%CTR

Tiempo de fraguado (min)

890.59 (1.15)a

588.43 (1.09)b

577.70 (1.46)c,d

906.10 (0.38)g 911.35 (0.46)h

911.44 (1.47)h

913.07 (0.79)h

579.65 (0.80)d,e,1

581.64 (1.15)1

588.73

(0.65)b

589.87

(0.58)b

576.79 (0.56)c

578.81 (0.62)c,d,e

580.64

(1.06)e,1

581.44

(1.53)1

Fluidez (mm)

38.85 (0.24)a,g

40.14 (0.30)b,c

40.50 (0.42)c

37.77 (0.22)d

37.03 (0.57)d

36.23 (0.81)e

35.19 (0.32)1

39.30 (0.21)a,g

39.06 (0.11)a,g

39.05 (0.27)a,g

38.59

(0.39)a

39.58

(0.19)b,g

39.29 (0.23)a,g

39.41 (0.24)b,g

39.14 (0.24)a,g Solubilidad Radiopacidad (% reduccion) (mm Al)

0.197 (1.15)a 6.80 (0.03)a,c,d

0.111 (0.074)a,b 6.43 (0.04)b

0.09 (0.045)a,b 6.45 (0.07)b

0.046 (0.053)b 7.06 (0.04)1,g

0.040 (0.039)b 7.08 (0.04)1,g

0.041 (0.022)b 7.10 (0.71)g

0.097 (0.028)a,b 7.14 (0.05)g

0.098 (0.024)a,b 6.78 (0.08)a,c

0.107 (0.075)a,b 7.05 (0.01)e,1,g

0.109 (0.025)a,b 6.91 (0.16)c,d,e

0.134 (0.026)a,b 6.81 (0.05)a,c,d

0.080 (0.036)a,b 6.57 (0.03)b

0.098 (0.02)a,b 6.89 (0.05)c,d

0.026 (0.053) c 6.72 (0.02)a

0.088 (0.083)a,b 6.94 (0.07)d,e,1

*Leido verticalmente, los mismas letras muestran que no hay diferencias estadisticamente significativas (test de Tukey). "mm Al" indica milimetros de aluminio.

Claims (20)

1. REIVINDICACIONES

   1.

   Composici6n para el sellado endod6ntico que comprende un sellador endod6ntico al que se le incorpora uno o mas antisepticos cati6nicos.

2. 2.

   Composici6n para el sellado endod6ntico que comprende un sellador endod6ntico y un antiseptico cati6nico, preferentemente un surfactante cati6nico y una bisguanida.

3. 3.

   Composici6n, segun reivindicaci6n anterior, en el que el surfactante cati6nico es Cetrimida (CTR).

4. 4.

   Composici6n, segun reivindicaci6n anterior, en el que la bisguanida es Clohexidina (CHX).

5. 5.

   Composici6n para el sellado endod6ntico que comprende un sellador endod6ntico al que se le incorpora entre 2 y 3% de CHX (p/p).

6. 6.

   Composici6n para el sellado endod6ntico que comprende un sellador endod6ntico al que se le incorpora al menos un 0.1% de CTR (p/p).

7. 7.

   Composici6n para el sellado endod6ntico que comprende un sellador endod6ntico al que se le incorpora al menos un 1% de CTR (p/p), preferentemente un 1% de CTR (p/p).

8. 8.

   Composici6n para el sellado endod6ntico que comprende un sellador endod6ntico al que se le incorpora entre 1 y 3% de CHX (p/p) y entre un 0.1 y un 1% de CTR (p/p).

9. 9.

   Composici6n segun reivindicaci6n anterior que comprende entre un 2 y un 3% de CHX y entre un 0.1 y 0.5% de CTR.

10. 10.

    Composici6n segun reivindicaci6n anterior que un 2% de CHX y un 0.3% de CTR.

11. 11.

    Composici6n segun reivindicaciones 6 6 7, caracterizada porque el unico desinfectante cati6nico que se incorpora es CTR.

12. 12.

    Composici6n segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la que la clorhexidina empleada es digluconato de clorhexidina en soluci6n acuosa.

13. 13.

    Composici6n segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la que la cetrimida empleada es bromuro de hexadeciltrimetilamonio.

14. 14.

    Composici6n segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizada porque el sellador endod6ntico comprende mayoritariamente un material seleccionado del grupo compuesto por resinas plasticas.

15. 15.

    Composici6n segun reivindicaci6n anterior caracterizada porque el sellador endod6ntico comprende mayoritariamente resina epoxi, preferentemente resina epoxi-amina.

16. 16.

    Uso de una composici6n segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores

    para fabricar un sellador endod6ntico que previene la formaci6n de biopeliculas

    bacterianas tras su aplicaci6n en el sellado de conductos radiculares.

17. 17.

    Uso segun reivindicaci6n anterior en el que la biopelicula bacteriana esta

18. 18.

    Uso segun cualquiera de las reivindicaciones para fabricar un sellador

19. 19.

    Uso segun cualquiera de las reivindicaciones para fabricar un sellador

    formada por E. Faecalis.

    endod6ntico con actividad bactericida.

    endod6ntico con actividad bactericida frente a E. Faecalis.

    OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

    N.º solicitud: 201330953

    ESPAÑA

    Fecha de presentación de la solicitud: 25.06.2013

    Fecha de prioridad:

    INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA

    51 Int. Cl. : Ver Hoja Adicional

    DOCUMENTOS RELEVANTES

    Categoría

    56 Documentos citados Reivindicaciones afectadas

    X

    EP 2229929 A1 (DENTSPLY DETREY GMBH) 22/09/2010, párrafos [0008]-[0011]; [0042]-[0043]; ejemplo 11. 1-5, 12-14, 16, 18

    Y

    6-11, 15, 17, 19

    X

    WO 0016712 A2 (ADVANTAGE DENTAL PRODUCTS INC et al.) 30/03/2000, página 3, línea 11 1, 2, 4, 5, 12, 14,

    – página 8, línea 22; ejemplos.

    16, 18

    Y

    3, 6-11, 13, 15, 17,

    19

    X

    WO 2007038764 A2 (ESSENTIAL DENTAL SYSTEMS INC et al.) 05/04/2007, párrafos [0009] 1, 2, 4, 5, 12, 14

    [0011]; [0043].

    16, 18

    Y

    3, 6-11, 13, 17, 19

    Y

    ARIAS-MOLIZ MARIA TERESA et al. Eradication of Enterococcus faecalis biofilms by cetrimide 3, 6-11, 13, 15, 17,

    and chlorhexidine..Journal of endodontics United States Jan 2010 00/01/2010 VOL: 36 No: 1 Pags: 87 – 90 ISSN 1878-3554 (Electronic) Doi: doi:10.1016/j.joen.2009.10.013 pubmed:20003941

    19

    Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud

    El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº:

    Fecha de realización del informe 29.07.2013

    Examinador N. Vera Gutiérrez Página 1/4

    INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA

    Nº de solicitud: 201330953

    CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD

    C08L63/00 (2006.01) A61K6/08 (2006.01) C08K5/19 (2006.01) C08K5/31 (2006.01)

    Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación)

    C08L, A61K, C08K

    Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados)

    INVENES, EPODOC, REGISTRY, CAS, WPI, MEDLINE, EMBASE, BIOSIS, NPL, XPESP

    Informe del Estado de la Técnica Página 2/4

    OPINIÓN ESCRITA

    Nº de solicitud: 201330953

    Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 29.07.2013

    Declaración

    Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986)

    Reivindicaciones Reivindicaciones 6-11, 17, 19 1-5, 12-16, 18 SI NO

    Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986)

    Reivindicaciones Reivindicaciones 1-19 SI NO

    Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986).

    Base de la Opinión.-

    La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.

    Informe del Estado de la Técnica Página 3/4

    OPINIÓN ESCRITA

    Nº de solicitud: 201330953

    1. Documentos considerados.-

    A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.

    Documento

    Número Publicación o Identificación Fecha Publicación

    D01

    EP 2229929 A1 (DENTSPLY DETREY GMBH) 22.09.2010

    D02

    WO 0016712 A2 (ADVANTAGE DENTAL PRODUCTS INC et al.) 30.03.2000

    D03

    WO 2007038764 A2 (ESSENTIAL DENTAL SYSTEMS INC et al.) 05.04.2007

    D04

    ARIAS-MOLIZ MARIA TERESA et al. Eradication of Enterococcus faecalis biofilms by cetrimide and chlorhexidine..Journal of endodontics United States Jan 2010 00/01/2010 VOL: 36 No: 1 Pags: 87 - 90 ISSN 1878-3554 (Electronic) Doi: doi:10.1016/j.joen.2009.10.013 pubmed:20003941 01.2010

20. 2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaración

    La invención se refiere a una composición para el sellado endodóntico que comprende un sellador endodóntico al que se le incorpora uno o más antisépticos catiónicos, como clorhexidina o cetrimida.

    El documento D01 divulga una composición selladora endodóntica en forma de dispersión que comprende una fase acuosa con un componente polimérico y una fase dispersa con un agente radio-opaco. La composición puede incluir un antiséptico para prevenir la infección bacteriana; entre ellos se cita clorhexidina y bromuro de cetiltrimetilamonio (párrafos [0042], [0043]). En el ejemplo 11 se prepara una composición selladora a base de polietilenimina que contiene clorhexidina (2,09%).

    El documento D02 divulga una composición selladora para uso dental que comprende una resina polimerizable y un agente antimicrobiano. En los ejemplos se preparan composiciones que incluyen polímeros acrílicos y clorhexidina en proporciones 1%, 3%, 5%, 6% y 10%. Se cita que las composiciones pueden incluir otros agentes biocidas y antimicrobianos (página 8, líneas 1-7; líneas 18-20).

    El documento D03 divulga una composición selladora endodóntica a base de un polímero epoxi, que puede incluir clorhexidina (0.01-3%) como agente antimicrobiano (párrafos [0009]-[0011]; [0043]).

    A la vista de los documentos citados, se considera que la invención tal como se define en las reivindicaciones 1-5, 12-16, 18 no es nueva (Artículo 6.1 L.P.).

    El documento D04 divulga un estudio para valorar la eficacia de los antisépticos cetrimida y clorhexidina, solos o en asociación, en la erradicación de biopelículas de Enterococcus faecalis. Para ello, se preparan soluciones de irrigación dental que comprenden distintas proporciones de cetrimida (0,1%-0,0025%) y de clorhexidina (4%-0,0078%). Las composiciones que contienen 0,1% y 0,05% de cetrimida y cualquiera de las proporciones de clorhexidina se muestran eficaces en todos los tiempos de contacto ensayados. El uso asociado de cetrimida y clorhexidina proporciona mejores resultados que sus aplicaciones como agentes individuales.

    Se considera que el experto en la materia, a la vista del estado de la técnica (en particular en el documento D02 se cita la posibilidad de incluir varios agentes antisépticos en la composición), podría incorporar los conocimientos divulgados en D04 a cualquiera de las composiciones selladoras que incluyen clorhexidina u otros antisépticos ya existentes en el estado de la técnica, con una expectativa razonable de éxito. Por ello, y en ausencia de un efecto técnico sorprendente asociado a la selección de una proporción de cetrimida superior a 0,1%, se considera que la invención tal como se define en las reivindicaciones 6-11, 17, 19 de la solicitud no implica actividad inventiva (Artículo 8.1 L.P.).

    Informe del Estado de la Técnica Página 4/4