ES2472115B1 - Utilización de derivados bicíclicos de 1-desoxigalactonojirimicina en la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades relacionadas con beta-enzimas galactosidasas lisosómicas mutantes humanas - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un uso de un compuesto de fórmula (I)#****IMAGEN****#o una de sus sales, donde:#R representa una cadena alifática, lineal o ramificada, que se selecciona del grupo que consiste en cadena hidrocarbonada saturada C{sub,1}-C{sub,16}, y cadena hidrocarbonada insaturada C{sub,2}-C{sub,16},#en la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades relacionadas con enzimas {be} galactosidasas lisosómicas mutantes en humanos.

Description

Sector y objeto de la invención

La presente invención va dirigida al seclor farmacéutico, con aplicaciones destinadas al tratamiento de enfermedades de almacenamiento lisosomal relacionadas con mutaciones de la 13-glucosidasa ácida lisosÓmica. El objeto de la invención es el uso de un compuesto de fórmula (1)

Hotl~N R

HO .

OH

o una de sus sales, donde: R representa una cadena alifática, lineal o ramificada, que se selecciona del grupo que consiste en cadena hidrocarbonada saturada C1-C 16 . y cadena hidrocaroonada insaturada C2""CI6, para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de enfermedades relacionadas con 13-enzimas galactosidasas lisosómicas mutantes humanas.

Estado de la técníca

Los trastornos de almacenamiento lisosóm ico son un grupo de enfermedades resultantes del metabolismo anormal de varios sustratos que no se degradan y se acumulan en los lisosomas, conduciendo a una serie de fenotipos que incluyen megalovisceralia, patologias neurológicas, lesiones esqueléticas y muerte prematura. Estas enfermedades son el resultado de mutaciones en los genes que codifican enzimas implicadas en el proceso de degradación. Actualmente sólo hay disponibles terapias sintomáticas para estos enfermos, diferenciandose dos estrategias terapéuticas: la terapia de reducción de sustrato, basada la inhibición de la producción de sustrato usando inhibidores de las enzimas implicadas en su biosintesis, y la terapia de reemplazamiento enzimatico, basada en la administración exógena de enzimas activas recombinantes. Para el trastorno de almacenamiento lisosómico mas predominante, la enfermedad de Gaucher, esta terapia cuesta entre 100.000 y 750.000 dólares al año, y no es muy eficaz para los casos que muestran implicación del sistema nervioso central.

Dentro de este tipo de patologías de almacenamiento lisosómico, la deficiencia heredita ria de p-galactosidasa ácida lisosómica (p-galactosidosis), causa dos enfermedades clinicamente distintas en seres humanos, la gangliosidosis GM1 y la enfermedad de Morquio B. Ambas son el resultado de mutaciones en el gen GLB1 que conducen a un plegamiento proteico erróneo. El modo de herencia es recesivo autosómico. La gangliosidosis GM1 es una enfermedad neurosomática generalizada que aparece principalmente en la primera infancia, y raramente en la niñez o en adultos jóvenes. La enfermedad de Morquio B es una rara enfermedad ósea sin implicación del sistema nervioso central. En pacientes con estos fenotipos clínicos se acumulan glicoconjugados con restos de p-galactosa terminales en los tejidos y orina. El gangliósido GM1 y su derivado asiálico GA1 se acumulan en el cerebro en el caso de la gangliosidosis GM1 . Tanto en pacientes con gangliosidosis GM1 como en pacientes que padecen la enfermedad de Morquio B se detectan altas cantidades de oligosacáridos derivados de sulfato de queratano o glicoprote¡nas en órganos viscerales y orina. Se han identificado más de 160 mutaciones puntuales diferentes en el gen que codifica la Il-galactosidasa. Las mutaciones conducen a defectos significativos en el plegamiento de la proteína durante la traducción en el ret¡culo endoplasmatico, dando como resultado una reducción del transporte de la enzima al lisosoma (degradación mediada por la maquinaria celular de cont rol de calidad). La forma cHnica de la enfermedad depende de la mutación en la p-galactosidasa ácida que presenta el enfermo, y su gravedad se relaciona con la actividad enzimatica residual.

La terapia de reemplazamiento enzimático para los casos en los que el sistema nervioso central se ve afectado presenta una eficacia baja o nula, ya que las enzimas recombinantes no atraviesan la barrera hematoencefálica. De este modo, existe un gran numero de pacientes para los cuales no existe tratamiento o la efectividad del mismo es muy baja.

En los últimos años se ha descrito que algunos inhibidores de estas enzimas glicosidasas son capaces de unirse al sitio activo y estabilizar el plegamiento apropiado, pudiendo actuar como ·chaperonas farmacológicas" que

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facilitan el transporte de la forma calaliticamenle activa a los lisosomas. De este modo, el desarrollo de compuestos con actividad de chaperonas farmacológica se ha postulado como una posible estrategia terapéutica para el tratamiento de enfermedades de almacenamiento li5050mal, y de particular interés para aquellas manifestaciones cl ínicas de la enfermedad que involucran al sistema nervioso cenlral.

Algunos alcaloides polihidroxilados naturales y sintéticos estructuralmente relacionados con los azucares (glicomimélicos) que incorporan un nitrógeno endocíclico de tipo amina (hibridación Sp3) exhiben una actividad inhibidora significativa frente a glicosidasas. En algunos casos, se ha demostrado que estos compuestos usados a concentraciones subinhibidoras actúan como chaperonas de I}-galactosidasa mutantes responsables de la enfennedad de gangliosidosis GM1 y de Morquio B (US 2006f0100241 ; W02004/037373). Sin embargo, estos tipos de compuestos se comportan en general como inhibidores de glicosidasas de amplio espectro, inhibiendo simultáneamente varias glicosidasas, lo que representa un inconveniente serio para aplicaciones clínicas. Esta falta de selectividad de acción frente a glicosidasas ha sido corregida con el desarrollo de compuestos donde el nitrógeno endocíclico de tipo amina se ha transfonnado en un nitrógeno de tipo pseudoamida (como por ejemplo,

15 un grupo carbamato, tiocarbamato, isourea, isotiourea, urea, tiourea o guanidina), con hibridación Sp2 (en adelante, iminoazúcares Sp2). De este modo, se han desarrollado iminoazúcares Sp2 de notable actividad chaperona y que muestran gran selectividad frente a p-glucocerebrosidasa, a-galactosidasa o I}-galactosidasa (W02010046517A1; C. Ortiz Mellet, J. M. García Femández, Y. Suzuki, et al., Chem. Commun., 2012, 48, 65146516)

Compuestos derivados de valienamina como N-octil-4-epi-¡3-valienamina (NOEV), que no presenta estructura quimica de iminoazúcar, también han demostrado actuar como chaperonas farmacológicas para enzimas mutantes responsables de estas enfennedades de almacenamiento lisosómico.

25 Un problema con el que se encuentra esta estrategia terapeútica basada en el uso de chaperonas fannacológicas para el tratamiento de la enfermedad de Morquio B y de la Gangliosidosis GM1 es que los compuestos conocidos hasta la fecha son efectivos para un número reducido de mutaciones en el gen que codifica la ¡3-galactosidasa. Por tanto, y dada la gran variabilidad de las mismas que presentan los enfermos, es necesario el desarrollo de compuestos que tengan un amplio espectro de acción respecto a estas mutaciones para posibilitar el desarrollo de medicamentos de uso generalizado.

Existe, por la tanto, la necesidad de desarrollar moléculas con una alta especificad de unión a la ¡3-galactosidasa, con una elevada relación de actividad chaperona frente a actividad inhibidora y que sean efectivas para un amplio espectro de enzimas p-galactosidasas mutantes.

35 Si bien se han descrito tanto iminoazúcares como iminoazúcares Sp2 con actividad como chaperonas farmacológicas frente a mutantes de la ¡3-galactosidasa asociados a las enfermedades de gangliosidosis GM1 y de Morquio B conteniendo en su estructura un anillo de piperidina polihidroxilado con un patrón de sustitución que corresponde con el de la D-glucosa o la D-galactosa (es decir, son derivados de la nojirimicina o de la galacto nojirimicina), no existian datos que pennitiesen predecir que derivados biciclicos de 1desoxigalactonojirimicina pudieran actuar como chaperonas efectivas de amplio rango de mutantes, incluyendo mutaciones para las que no se conocían compuestos con actividad chaperona.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula general (1) o una de sus sales

OH

dónde R representa una cadena alifática, lineal o ramificada, que se selecciona del grupo que consiste en cadena hidrocarbonada saturada Cl-C1S, y cadena hidrocarbonada insaturada C2-C 16, para la elaboración de un medicamento destinado al tratamiento de la deficiencia de la forma activa de la enzima p-galactosidasa en el ser humano, que se relaciona con enfennedades tales como la gangliosidosis GM1 y la

55 enfennedad de Morquio B.

En la presente invención se ha encontrado que compuestos bicicl icos condensados (seis miembrosfcinco miembros) derivados de 1-desoxigalactonojirimicina en los que el átomo de nitrógeno cabeza de puente fonna

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parte de un grupo funcional isotiourea que, a su vez, porta un sustiluyente de naturaleza hidrófoba, se comportan como inhibidores especificas de la ~-galaclosidasa lis050mal capaces de actuar como chaperonas farmacológicas a concentraciones inferiores a las de inhibición, con la ventaja significativa respecto a otros

g1icomiméticos, incluidos otros iminoazucares Sp2, de que no presentan toxicidad y que su actividad chaperona es efectiva para un rango amplio de mutaciones diferentes, entre las que se incluyen las G1900, R201C, R201H, V216A, D332N, Y444C, R457Q, R590H, 151T, R148T, L 155R, R208C, D214Y, C230Y, L264S, N266S, W273R, K346N, S434L, G438E, R482H, D491Y. E632G Y D640E, que son relativamente frecuentes en varios fenotipos clínicos. Para algunas de estas mutaciones (151T, R148T, L 155R, R208C, D214Y, C230Y, L264S, N266S, W273R, K346N, S434L, G438E, R482H, D491Y, E632G Y D640E), algunos compuestos bien conocidos como activadores de la p-galactosidasa, tales como NOEV, no mostraron sin embargo ninguna actividad.

La estructura quimica de los compuestos de la invención les permite atravesar la barrera hematoencefálica, por lo que su uso en la fabricación de medicamentos destinados al tratamiento de enfermedades de almacenamiento lisosomal con implicaciones en el sistema nervioso central, como la gangliosidosis GM1, es de especial interés. El término -cadena hidrocarbonada saturada" se refiere, en la presente invención, a cadenas alifáticas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 16 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, ¡-propilo, n-butilo, lercbutilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo, etc. Preferiblemente la cadena hidrocarbonada saturada tiene entre 1 y 8 átomos de carbono. Más preferiblemente es n-butilo. La cadena hidrocarbonada saturada puede estar opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes tales como halógeno, hidroxilo, azida, ácido carboxilico o un grupo sustituido o no seleccionado de entre amino, amida, éster carboxilico, éter, tiol, acilamino o carboxiamida.

El término ·cadena hidrocarbonada insaturada" se refiere, en la presente invención, a cadenas alifáticas insaturadas, lineales o ramificadas, que tienen de 2 a 16 átomos de carbono, y que poseen entre 1 o más insaturaciones elegidas de forma independiente entre dobles y triples enlaces, por ejemplo, vinilo, alilo, 2propinilo, 1,3-pentadiiniI0, but-1-en-3-inilo, etc. Las cadenas hidrocarbonadas insaturadas pueden estar opcionalmente sustituidas por uno o más sustituyentes tales como halógeno, hidroxilo, azida, ácido carboxilico o un grupo sustituido o no sustituido seleccionado de entre ami no, amida, éster carboxllico, éter, tiol, acilamino o carboxiamida.

Los compuestos derivados de la 1-desoxigalactonojirimicina de la invención, según se representa en la fórmula general (1), incluyen biciclos condensados de seis miembrosfcinco miembros que tienen un átomo de nitrógeno cabeza de puente que es parle de una funcionalidad isotiourea cíclica. Por "funcionalidad isotiourea cíclica", se define un grupo de fórmula general N-C(=NR)S, en el que el atomo de nitrógeno que no porta el doble enlace y el átomo de azufre forman parle de un ciclo y en el que el átomo de nitrógeno exocíciico porla como sustituyente una cadena hidrocarbonada tal y como se ha definido en los párrafos anteriores.

Una realización preferida de la presente invención, comprende el uso de un compuesto de fórmula general (1) donde R es una cadena hidrocarbonada saturada.

En una realización preferida de la invención R es una cadena lineal.

En una realización preferida de la invención R es una cadena hidrocarbonada de 1 a 8 atómos de carbono. En otra realización más preferida R es butilo, y por tanto el compuesto de fórmula general (1) es 5N,6S-(N'butiliminometiliden}-6-tio-1-desoxigalactonojirimicina (6S-NBI-DGJ).

Otro aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica, destinada al tratamiento de enfermedades relacionadas con el mal funcionamiento de la enzima p-galactosidasa lisosómica en un sujeto humano, que comprende en su formulación al menos un compuesto como el descrito anteriormente, en cualquiera de sus variantes. Opcionalmente dicha composición puede comprender otro principio activo y un vehiculo farmacéutica mente aceptable.

Los "vehiculos farmacéuticamente aceptables" Que pueden ser utilizados en dichas composiciones son los vehiculos conocidos por los técnicos en la materia.

Breve descripción de la figura

Figura 1: Datos correspondientes a 24 mutaciones, en comparación con la ~-galactosidasa silvestre (WT) y con una enzima de referencia (mock).

Modo de realización de la invención Los compuestos de la invención pueden ser preparados siguiendo el procedimiento sintético desarrollado por García Fernandez el al. (J . M. García Femández, et al., Chem. Commun., 2012, 48, 6514-6516).

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Ejemplo 1 Inhibición selectiva in vitro de (3-aalactosidasa 1¡5050mal humana por 5N6S-lN'-butiliminomelilideno}-6-tio-1desoxiqalac!onoiirimicina f6$-NBI-DGJl.

En primer lugar, se determinaron las actividades de varias glicosidasas lisosomales humanas, en concreto de ~glucosidasa (P-glucocerebrosidasa), a-glucosidasa, p-galactosidasa, a-galactosidasa, y hexosaminidasa en lisados celulares usando el correspondiente D-glicopiranósido conjugado con 4-melilumbeliferona como sustrato

(A.M. Vaccaro, M. Muschilli, M. Tatti, R. Salvioli, E. Gallozzi, K. Suzuki. Clin. Biochem. 20: 429-43, 1987). Brevemente, se incubaron 4IJL de lisados celulares a 37 oC con 8IJL de disolución sustrato en tampón citrato 0,1 M, pH 5,2, suplementada con taurocolato de sodio (0,8% plv). Se terminó la reacción añadiendo 1,0 mL de tampon de glicina-hidróxido de sodio 0,2 M (pH 10,7). Se definió una unidad de actividad enzimática como nmoles de 4-metilumbeliferona liberados por hora.

Seguidamente, para explorar el efecto del compuesto 6S-NBI-DGJ sobre las diferentes glicosidasas lisosomales, se cultivaron células de controles sanos durante 4 dias en ausencia o presencia de concentraciones crecientes del compuesto. Después de la exposición, se rascaron en H20 enfriada con hielo (106/mL) y se lisa ron mediante sonicación. Se retiraron los materiales insolubles mediante centrifugación a 12.000 g durante 10 min a 4 oC y se midieron las actividades de las enzimas en lisados celulares. Los resultados indicaron que el compuesto 6S-NBIDGJ in hibe selectivamente y de manera competitiva la ~-galactosidasa, con un valor de concentración necesaria para alcanzar un 50% de inhibición (ICso) de 32 ¡.1M. A esta concentración, la actividad del resto de enzimas lisosomales humanas determinadas se afectó en menos de un 2%.

Ejemplo 2 Estabilización in vitro de B-galactosidasa lisosomal humana frente a la desnaturalización inducida por calentamiento en presencia de 6S-NBI-DGJ.

Para evaluar el potencial del compuesto 6S-NBI -DGJ como chaperona farmacológica se determinó su capacidad para proteger la ~-galactosidasa lisosomal humana frente a la degradación inducida por calor a pH neutro. Para ello, los lisados celulares se incubaron en ausencia y en presencia de concentraciones crecientes de 6S-NBIDGJ en tampón citrato 0.1 M (pH 7) a 48 oC. La incubación se terminó mediante adición de dos volúmenes de tampón citrato 0.1 M (pH 4.5) Y se midió entonces la actividad de la ~-galactosidasa como en el ejemplo anterior. En ausencia de 6S-NBI-DGJ,la actividad de la enzima cayó a menos del 20% del valor inicial tras 20 minutos de incubación. En presencia de 6S-NBI-DGJ se observó la supresión de la degradación de la enzima de manera dependiente de la dosis, con valores residuales de actividad de la enzima tras 20 minutos de incubación que permanecieron entre el 80% ye1100% para concentraciones de 6S-NBI-DG entre 20 ¡.1M Y 160 ¡.1M.

Ejemplo 3 Potenciación in vitro de la actividad de mutantes de la B-galactosidasa asociados a enfermedades de deficiencia de esta enzima por 6S-NBI-DGJ en fibroblastos humanos.

Se cultivaron fibroblastos cutáneos derivados de personas sanas y de pacientes con deficiencia de la ~galactosidasa presentando las mutaciones 151T1I51T, 151T1Y316C, 151T/R457Q, G190D/G190D, R201C1R201C, G438E/G438E, R457QIR457Q Y R59HfR59H, siguiendo el procedimiento descrito (Iwasaki H, Watanabe H, lida M, Ogawa S, Tabe M, Higaki K et al. Brain Dev 28:482-486, 2006). Los fibroblastos humanos de cultivaron en medio de Eagle modificado por Dulbecco suplementado con antibióticos (estreptomicina y penicilina) y suero bovino fetal a110% en ausencia y en presencia de concentraciones crecientes de 6S-NBI-DGJ durante 96 h. Tras este tiempo se midió la actividad de la enzima en lisados como se describe en el ejemplo1. Los resultados indicaron que 6S-NBI-DGJ incrementó de manera estadlstica mente significativa la actividad de la enzima para las mutaciones 151T1I51T, 151T1Y316C, 151T/R457Q, G190D/G190D, R201C/R201C, G438E1G438E Y R457Q/R457Q a concentraciones 20 ¡.1M (incremento entre 1.3 y 3 veces) y 80 ¡.1M (incremento entre 2 y 5 veces). La única excepción en esta serie fue la enzima con la mutación R59H/R59H.

Ejemplo 4 Potenciación in vitro de la actividad de mutantes de la B-aalactosidasa recombinante humana asociados a enfermedades de deficiencia de esta enzima por 6S-N81-DGJ en células COS7.

Células COS7 se transfectaron con plásmidos conteniendo ADN complementario (cADN) de la ~-galactosidasa silvestre (WT) y de mutanles asociados a enfermedades de deficiencia de la ~-galactosidasa usando como vector lipofectamine 2000 (Higaki K, Linjing L, 8ahrudin U, Okuzawa S, Takamura A, Yamamoto K et al. Hum Mutat 32:843-852,201 1). Tras 5 horas de incubación, las células se expusieron a medio de cultivo fresco en ausencia o en presencia de 6S-NBI-DGJ a concentraciones 20 IJM Y 80 ¡.1M, tras lo cual se determinó la actividad de la ~-galactosidasa en lisados como se describe en los ejemplos anteriores. Se ensayaron 88 mutantes diferentes. Los resultados indicaron un incremento significativo en 24 de estos mutantes: G190D, R201C, R201H, V216A, D332N, Y444C, R457Q, R590H, 151T, R148T, L155R, R208C, D214Y, C230Y, L264S, N266S, W273R,

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K346N, S434L, G438E, R482H, 0491 Y, E632G, D640E. Los datos correspondientes a estas 24 mutaciones, en comparación con la b-galactosidasa silvestre (WT) y con una enzima de referencia irrelevante (mock) se recogen en la Figura 1.

En las siguientes mutaciones no se observó incremento de actividad significativo a las concentraciones estudiadas:

S54N, V83e, Y83H, E131K, L 173P, Y199C, R201Y, Q255H, N318H, Y324C, D332E,N484K,G494S, R590C, R49C, 5541, R59C, R59H, R68W, T82M. F1Q7L, R121S, G123R, G134V, P136S, R148C, R148S,D151V,W161G, L 1625, G178R, 1181K, V240M, R263S, Y270D, G272D, W273L, H281Y,Y316C,T329A, Y333H, Y347C, R351X, Q408P, T420K, T420P, L422R, V439G, D441N, R442Q, D448V, R457X, M480V, R482C, D491N, G494C, T500A, W509C, P549L, G554E, K578R, G5790, Y591N, Y591C.

Es importante destacar que no existe hasta el momento ningún otro compuesto que haya demostrado comportarse como activador de ¡3-galactosidasa mutante en un rango tan amplio de mutaciones asociadas a enfermedades de deficiencia de esta enzima. Por ejemplo, en 16 de las 24 mutaciones para las que el compuesto incrementa significativamente la actividad (151T, R148T, L 155R, R208C, D214Y, C230Y, L264S, N266S, W273R, K346N, S434L, G438E, R482H, D491Y, E632G, D640E), el NOEV, un compuesto ampliamente estudiado como activador de ¡3-galactosidasa mutante, no mostró ninguna activad en un ensayo realizado en paralelo.

Ejemplo 5 Ausencia de toxicidad del compuesto 6S-NBI-OGJ

La posible toxicidad de 6S-NBI-DGJ en fibroblastos humanos se determinó mediante el ensayo de la lactato deshidrogenasa (LHD; Wako) en el sobrenadante de los correspondientes cultivos celulares. No se encontró efecto tóxico a concentraciones de hasta 600 IJM de este compuesto.

Ejemplo 6 Supresión de la acumulación de gangliósido GM1 en fibroblastos de pacientes de enfermedades asociadas a la deficiencia de la B-qalactosidasa por el compyesto 6S-N Bl-pGJ

La deficiencia de !a ¡3-galactosidasa lisosomal humana conduce a la acumulación del gangliósido GM1 en las células del paciente. Esta es, de hecho, la causa primera de la patogénesis en la gangliosidosis GM1 . Cuando se cultivaron fibroblastos de enfermos homozigóticos para las mutaciones 151T y R201C en medio suplementado con gangliósido GM1, se observó su acumulación de manera importante. El tratamiento con 6S-NBI-DGJ (80 mM) suprimió esta acumulación, reduciendo sus niveles a menos del 50% del valor inicial en ausencia del compuesto. En un ensayo comparativo, el compuesto de referencia NOEV presentó una eficacia similar en fibroblastos con la mutación R201C, pero fue ineficaz en el caso de la mutación 151T.

Ejemplo 7 Efecto del compuesto 6S-NBI-OGJ en elteiido cerebral y en otros órganos de ratones que expresan la mutación R201C en la B-galactosidasa

Para obtener una prueba de concepto de la capacidad del compuesto 6S-NBI-OGJ para atravesar la membrana hematoencefálica, así como para activar la ¡3-galactosidasa mutante en diferentes órganos, se aplicaron dosis del mismo (1 mM, 2 mM, 5 mM y 10 mM en agua) a ratones que expresan la ~-galactosidasa humana con la mutación R201C por vía oral durante una semana. Cuando se usaron concentraciones de 1 mM y 2 mM, se observó un aumento de más de dos veces de la actividad de la enzima en lisados del corazón, riñón y pulmones, y de 1,2 veces en lisados del cerebro. A concentraciones de 5 mM y 10 mM la actividad en lisados del cortex cerebral y del tallo cerebral aumentó en más de cuatro veces. Además, se observó una reducción muy notable de la acumulación de gangliósido GM1 en los lisosomas. Los datos demuestran de manera inequivoca que el compuesto 6S-NBI-DGJ atraviesa la barrera hematoencefálica, aumenta la actividad de la ¡3-galactosidasa mutante y produce una mejora significativa en la patologia cerebral asociada a la deficiencia de la 13galactosidasa.

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Claims (9)

1. REIVINDICACIONES

   1.-Uso de un compuesto de fórmula (1)

   5 OH

   o una de sus sales, donde: R representa una cadena alifática. lineal o ramificada, que se selecciona del grupo que consiste en cadena hidrocarbonada saturada e1-C16, y cadena hidrocarbonada insaturada e2-C16,

   10 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfennedades relacionadas con enzimas I}galactosidasas lisosómicas mutanles en humanos.
2. 2.-Uso de un compuesto se fórmula general (1) según la reivindicación 1, caracterizado porque R es una cadena hidrocarbonada saturada e 1-C16.
3. 3.-Uso de un compuesto de fórmula general (1) segun una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque R es una cadena hidrocarbonada lineal.
4. 4.-Uso de un compuesto de según la reivindicación 3, caracterizado porque dicho compuesto es 5N,6S-(N'20 butilimi nometiliden )-6-tio-1-desoxigalactonojirimicina.
5. 5.-Uso de un compuesto de fórmula general (1) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad Morquio B en humanos.

   25 6.-Uso de un compuesto de fórmula general (1) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad Gangliosidosis GM1 en humanos.
6. 7.-Uso de un compuesto de fórmula general (1) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades relacionadas con enzimas ~30 galactosidasas lisosómicas mutantes humanas seleccionadas entre algunos de los siguientes mutantes: G190D, R201C, R201H, V216A, D332N, Y444C, R457Q, R590H, 151T, R148T, L155R, R208C, D214Y, C230Y, L264S, N266S, W273R, K346N, S434L, G438E, R482H, D491Y, E632G Y D640E.
7. 8.-Uso de un compuesto de fórmula general (1) según la reivindicación 7, caracterizado porque las enzimas~

   35 galactosidasas lisosómicas mutantes humanas se seleccionan entre algunos de los siguientes mutantes: 151T, R148T, L 155R, R208C, D214Y, C230Y, L264S, N266S, W273R, K346N, S434L, G438E, R482H, D491Y, E632G Y D640E.
8. 9.-Composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades relacionadas con enzimas ~-galactosidasas 40 lisosómicas mutantes en humanos que comprende un compuesto de fórmula general (1)
9. 10.-Composición farmacéutica según la reivindicación 9, caracterizada porque que adicionalmente comprende otro principio activo.

   45 11.-Composición farmacéutica según las reivindicaciones 9 y 10 caracterizada porque comprende un vehículo farmaceuticamente aceptable.