ES2440000T3 - Compuestos de 8-aza-tetraciclina - Google Patents

Abstract

Un compuesto de Fórmula o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: X se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C6, fenilo y alcoxi C1-C6, en donde cada alquilo C1-C6 y alcoxi C1-C6 representado por X está opcionalmente sustituido con halo, alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6,alcoxi C1-C6 no sustituido o haloalcoxi C1-C6; Y se selecciona de entre hidrógeno, flúor, cloro, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquilen (C0-C6)-N(R1)(R2) y fenilo, endonde cada cada alquilo C1-C6, alquileno C0-C6 y alcoxi C1-C6 representado por Y está opcionalmente sustituido conhalo, alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido o haloalcoxi C1-C6; cada R1 y R2 se selecciona independientemente de entre hidrógeno y alquilo C1-C6; y Z se selecciona de entre hidrógeno, halo, alquilo C1-C6, fenilo, -N(R3)(R4), alquilen C1-C6-N(R5)(R6), en dondeR3 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C6, -(alquilen C1-C6)-fenilo, fenilo, (alquilen C1-C6)-(cicloalquiloC3-C7), -(alquilen C1-C6)-O-(alquilo C1-C6), -(alquilen C1-C6)-N(R5)(R6), -C(O)-(alquilen C0-C6)-N(R5)(R6), -C(O)-(alquilo C1-C6), -C(O)H, -C(O)-fenilo y -S(O)2-R5 . R4 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C6; o R3 y R4 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico (de 4-7miembros) que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre S, O o N; y R5 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C6 y fenilo; R6 se selecciona de entre hidrógeno y alquilo C1-C6; o R5 y R6 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico (de 4-7miembros) que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre S, O o N, en la que cada alquilo C1-C6, alquileno C1-C6 o un anillo heterocíclico (de 4-7 miembros) del grupo representado porZ está opcionalmente sustituido con flúor,-OH o -CH3; y en la que cada fenilo del grupo representado por X, Y, Z, R3y R5 está opcionalmente sustituido con halo, alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido,haloalcoxi C1-C6, ciano o nitro, en la que Y y Z no son simultáneamente hidrógeno.

Description

Compuestos de 8-aza-tetraciclina

5 Antecedentes de la invención

Las tetraciclinas son agentes antimicrobianos de amplio espectro que se usan ampliamente en la medicina humana y veterinaria. La producción total de tetraciclinas por fermentación o semi-síntesis se mide en miles de toneladas métricas al año.

10 El uso generalizado de las tetraciclinas con fines terapéuticos ha dado lugar a la aparición de resistencia a estos antibióticos, incluso entre especies bacterianas altamente susceptibles. Por lo tanto, se necesitan nuevos análogos de tetraciclina con mejores actividades antibacterianas y eficacias contra otras enfermedades o trastornos sensibles a las tetraciclinas.

Resumen de la invención

Los compuestos de Fórmula I son nuevos análogos de tetraciclina con mejores actividades antibacterianas y eficacias contra otras enfermedades o trastornos sensibles a las tetraciclinas:

También se incluyen las sales farmacéuticamente aceptables del compuesto de Fórmula I. A continuación, se proporciona una primera realización de la invención que incluye valores de las variables de la Fórmula I:

25 X se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C6, fenilo y alcoxi C1-C6, en el que cada alquilo C1-C6 y alcoxi C1-C6 representado por X está opcionalmente sustituido con halo, alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido o haloalcoxi C1-C6; Y se selecciona de entre hidrógeno, flúor, cloro, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquilen (C0-C6)-N(R1)(R2) y fenilo, en

30 el que cada R1 y R2 se selecciona independientemente de entre hidrógeno y alquilo C1-C6; Z se selecciona de entre hidrógeno, halo, alquilo C1-C6, fenilo, -N(R3)(R4), alquilen (C1-C6)-N(R5)(R6), en el que R3 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C6, alquilen (C1-C6)-fenilo, fenilo, alquilen (C1-C6)-(cicloalquilo C3-C7), alquilen (C1-C6)-O-(alquilo C1-C6), alquilen (C1-C6)-N(R5)(R6), -C(O)-alquilen (C0-C6)-N(R5)(R6) y -C(O)-alquilo

35 C1-C6; R4 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C6; o R3 y R4 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico (de 4-7 miembros) que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre S, O o N, R5 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C6 y fenilo;

40 R6 se selecciona de entre hidrógeno y alquilo C1-C6; o R5 y R6 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico (de 4-7 miembros) que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre S, O o N,

en la que cada alquilo C1-C6, alquileno C1-C6 o un anillo heterocíclico (de 4-7 miembros) del grupo representado por

45 Z está opcionalmente sustituido con flúor,-OH o -CH3; y en la que cada fenilo del grupo representado por X, Y, Z, R3 y R5 está opcionalmente sustituido con halo, alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido o haloalcoxi C1-C6, ciano o nitro.

En la primera realización, R3 se selecciona además de entre -C(O)H, -C(O)-fenilo y -S(O)2-R5, e Y y Z no son 50 simultáneamente hidrógeno.

Otra realización de la presente invención se dirige a una composición farmacéutica que comprende un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable y un compuesto divulgado en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La composición farmacéutica se usa en terapia, tal como en el tratamiento

55 de una infección en un sujeto.

También se divulga un método de tratamiento de una infección en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto divulgado en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Otra realización de la presente invención es el uso de un compuesto divulgado en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para tratar una infección en un sujeto.

5 Otra realización de la presente invención es el uso de un compuesto divulgado en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para terapia, tal como el tratamiento de una infección en un sujeto.

Descripción detallada de la invención

10 La presente invención se dirige a un compuesto representado por la Fórmula estructural I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Los valores y los valores alternativos de las variables de la Fórmula estructural I se definen de la siguiente manera:

X es hidrógeno, alquilo C1-C6, fenilo o alcoxi C1-C6. Cada alquilo C1-C6 o alcoxi C1-C6 del grupo representado por 15 X está opcionalmente sustituido con halo, alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido

o haloalcoxi C1-C6. X es hidrógeno o alquilo C1-C6. Alternativamente, X es hidrógeno. Y es hidrógeno, flúor, cloro, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquilen (C0-C6)-N(R1)(R2) o fenilo. Alternativamente, Y es flúor, cloro, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquilen (C0-C6)-N(R1)(R2) o fenilo. Cada alquilo C1-C6, alquileno C0-C6 o alcoxi C1-C6 del grupo representado por Y está opcionalmente sustituido con halo, alquilo C1-C6 no sustituido,

20 haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido o haloalcoxi C1-C6. Y es hidrógeno, cloro, flúor, -N(CH3)(CH3), -OCH3, fenilo o alquilo C1-C6. Z es hidrógeno, halo, alquilo C1-C6, fenilo, -N(R3)(R4) o alquilen (C1-C6)-N(R5)(R6). Alternativamente, Z es hidrógeno, alquilo C1-C6, fenilo o N(R3)(R4). Alternativamente, Z es hidrógeno, -NH2, -NH(CH2)2CH3, -NH(CH2)2OCH3, -NHCH2CF3 o -NHCH2C(CH3)2CH2N(CH3)CH3. En otra alternativa, Z es hidrógeno.

25 Cada R1 y R2 es independientemente hidrógeno o alquilo C1-C6.

R3 es hidrógeno, alquilo C1-C6, -(alquilen C1-C6)-fenilo, fenilo, -(alquilen C1-C6)-(cicloalquilo C3-C7), -(alquilen C1-C6)O-(alquilo C1-C6), -(alquilen C1-C6)-N(R5)(R6), -C(O)-(alquilen C0-C6)-N(R5)(R6) o -C(O)-(alquilo C1-C6). 30 Alternativamente, R3 se selecciona además de entre -C(O)H, -C(O)-fenilo y -S(O)2-R5.

R4 es hidrógeno o alquilo C1-C6.

Alternativamente, R3 y R4 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo 35 heterocíclico (de 4-7 miembros) que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre S, O o

N.

R5 es hidrógeno, alquilo C1-C6 o fenilo.

40 R6 se selecciona de entre hidrógeno y alquilo C1-C6; o

Alternativamente, R5 y R6 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico (de 4-7 miembros) que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre S, O o

N.

45 Cada alquilo C1-C6, alquileno C1-C6 o un anillo heterocíclico (de 4-7 miembros) del grupo representado por Z está opcionalmente sustituido con flúor, -OH o -CH3.

Cada fenilo del grupo representado por X, Y, Z, R3 y R5 está opcionalmente sustituido con halo, alquilo C1-C6 no

50 sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido, haloalcoxi C1-C6, ciano o nitro. Preferentemente, cada fenilo del grupo representado por X, Y, Z, R3 y R5 está opcionalmente sustituido con halo, alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido o haloalcoxi C1-C6. Más preferentemente, cada fenilo del grupo representado por X, Y, Z, R3 y R5 está opcionalmente sustituido con flúor, -CF3, -OCH3 o -OCF3.

55 Una segunda realización es un compuesto de Fórmula estructural II, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: Los valores y los valores alternativos de las variables de la Fórmula estructural II son como se han definido para la

Fórmula estructural I anterior. Alternativamente, para las Fórmulas estructurales I o II, Y es hidrógeno, cloro, flúor,

N(CH3)(CH3), -OCH3, alquilo C1-C6, o fenilo opcionalmente sustituido con halo, alquilo C1-C6 no sustituido, halo

alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido, haloalcoxi C1-C6, ciano o nitro y Z se selecciona de entre hidrógeno, alquilo

5 C1-C6, fenilo y N(R3)(R4 ), en el que el fenilo del grupo representado por Z está opcionalmente sustituido con halo,

alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido, haloalcoxi C1-C6, ciano o nitro. En otra

alternativa, Y es hidrógeno, cloro, flúor, -N(CH3)(CH3)-OCH3, alquilo C1-C6 o fenilo opcionalmente sustituido con halo,

alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido, haloalcoxi C1-C6, ciano o nitro, y Z es

hidrógeno, -NH2, -NH(CH2)2CH3, -NH(CH2)2OCH3, -NHCH2CF3 o -NHCH2C(CH3)2CH2N(CH3)CH3. En otra alternativa 10 más, Z es hidrógeno, -NH2, -NH(CH2)2CH3, -NH(CH2)2OCH3, -NHCH2CF3 o -NHCH2C(CH3)2CH2N(CH3)CH3 e Y es

hidrógeno, cloro, flúor o -N(CH3)(CH3).

En la segunda realización, Y y Z no son simultáneamente hidrógeno.

15 Una tercera realización es un compuesto de Fórmula estructural III, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

Los valores y los valores alternativos para las variables de la Fórmula estructural III son como se han definido para la

20 Fórmula estructural I anterior. Alternativamente, Y es cloro, flúor, -N(CH3)(CH3), -OCH3, fenilo o alquilo C1-C6 y X es hidrógeno o alquilo C1-C6. En un aspecto específico de la tercera realización, Y es flúor, cloro, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquilen (C0-C6)-N(R1)(R2) y fenilo.

Los ejemplos específicos de compuestos de la invención y compuestos de referencia están representados por la 25 Fórmula estructural I, en la que X, Y y Z son como se definen en la siguiente tabla:

Compuesto Nº

X Y Z

100

101

102 de referencia

103

104

105

106

107

108

109

110

111 de referencia

112

113 de referencia

114

115

116

117

118

119

120

121

122

123

124

125

126

127

128

129

130

131

132

133

134

135

136

137

138

139

140

141

142

143

144

145

146

147

148

149

150

'

151

152

153

154

155

156

157

158

159

160

161

162

163

164

165

Los ejemplos preferidos de los compuestos de la invención se seleccionan de uno cualquiera de los Compuestos 101, 109, 110, 124, 125, 144, 146, 147, 150, 151 y 156, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Como alternativa, los ejemplos preferidos de los compuestos de la invención se seleccionan de uno cualquiera de

5 los Compuestos 101, 109, 110, 124, 125, 144, 146, 147, 150, 151 y 156, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

DEFINICIONES

10 "Alquilo" significa un radical de hidrocarburo monovalente de cadena lineal o ramificado alifático saturado que tiene el número especificado de átomos de carbono. Por lo tanto, "alquilo (C1-C6)” significa un radical que tiene 1 a 6 átomos de carbono en una disposición lineal o ramificada. "Alquilo (C1-C6)" incluye metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo y hexilo.

15 "Alquileno" un radical de hidrocarburo divalente de cadena lineal alifático saturado que tiene el número especificado de átomos de carbono. Por lo tanto, "alquileno (C1-C6)" significa un radical alifático divalente saturado que tiene 1-6 átomos de carbono en una disposición lineal. "Alquileno (C1-C6)" incluye metileno, etileno, propileno, butileno, pentileno y hexileno.

20 "Heterociclo" significa un anillo heterocíclico monocíclico (de 4-7 miembros) saturado o parcialmente insaturado que contiene un átomo de nitrógeno y, opcionalmente, 1 heteroátomo adicional seleccionado independientemente de entre N, O o S. Cuando un heteroátomo es S, puede estar opcionalmente mono- o di-oxigenado (es decir, -S(O)- o -S(O)2-).

25 Los ejemplos de heterociclo monocíclico incluyen, pero sin limitación, azetidina, pirrolidina, piperidina, piperazina, hexahidropirimidina, tetrahidrofurano, tetrahidropirano, morfolina, tiomorfolina, 1,1-dióxido de tiomorfolina, tetrahidro2H-1,2-tiazina, 1,1-dióxido de tetrahidro-2H-1,2-tiazina, isotiazolidina o 1,1-dióxido de isotiazolidina.

"Cicloalquilo" significa anillo de hidrocarburo cíclico alifático saturado. Por lo tanto, "cicloalquilo C3-C7" significa anillo

30 de hidrocarburo cíclico alifático saturado de (3-7 miembros). Cicloalquilo C3-C7 incluye, pero sin limitación, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo.

"Alcoxi" significa un radical alquilo unido a través de un átomo de unión de oxígeno. "Alcoxi (C1-C6)" incluye metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi y hexoxi.

Haloalquilo y halocicloalquilo incluyen grupos mono-, poli- y perhaloalquilo donde cada halógeno se selecciona independientemente de entre flúor, cloro y bromo.

"Hetero" se refiere a la sustitución de al menos un miembro de átomo de carbono de un sistema de anillo con al 5 menos un heteroátomo seleccionado de entre N, S y O. Un sistema de anillo hetero puede tener 1 o 2 miembros de átomos de carbono reemplazados por un heteroátomo.

"Halógeno" y "halo" se usan indistintamente en el presente documento, y cada uno se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.

"Ciano" significa -C≡N.

"Nitro" significa -NO2.

15 Otra realización de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende uno o más vehículos y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables y un compuesto divulgado en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

"Vehículo farmacéuticamente aceptable" y "diluyente farmacéuticamente aceptable" significan componentes no terapéuticos que son de suficiente pureza y calidad para su uso en la formulación de una composición de la invención que, cuando se administra apropiadamente a un animal o ser humano, por lo general, no producen una reacción adversa, y que se usan como vehículo para una sustancia farmacológica (es decir, un compuesto de la presente invención).

25 También se incluyen las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención. Por ejemplo, se puede obtener una sal de ácido de un compuesto de la presente invención que contiene una amina u otro grupo básico haciendo reaccionar el compuesto con un ácido orgánico o inorgánico adecuado, lo que produce formas de sales aniónicas farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de sales aniónicas incluyen las sales acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bitartrato, bromuro, edetato de calcio, camsilato, carbonato, cloruro, citrato, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gliceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, bromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, pamoato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato y trietyoduro.

35 Las sales de los compuestos de la presente invención que contienen un ácido carboxílico u otro grupo funcional ácido se pueden preparar haciendo reaccionar con una base adecuada. Tal sal farmacéuticamente aceptable se puede preparar con una base que proporcione un catión farmacéuticamente aceptable, que incluye sales de metales alcalinos (especialmente sodio y potasio), sales de metales alcalinotérreos (especialmente calcio y magnesio), sales de aluminio y sales de amonio, así como sales preparadas a partir de bases orgánicas fisiológicamente aceptables tales como trimetilamina, trietilamina, morfolina, piridina, piperidina, picolina, diciclohexilamina, N,N'dibenciletilendiamina, 2-hidroxietilamina, bis-(2-hidroxietil)amina, tri-(2-hidroxietil)amina, procaína, dibencilpiperidina, deshidroabietilamina, N,N'-bisdeshidroabietilamina, glucamina, N-metilglucamina, colidina, quinina, quinolina y aminoácidos básicos tales como lisina y arginina.

45 La invención también incluye diversos isómeros y mezclas de los mismos. Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en diversas formas estereoisoméricas. Los estereoisómeros son compuestos que solo difieren en su disposición espacial. Los enantiómeros son pares de estereoisómeros cuyas imágenes especulares no son superponibles, más comúnmente debido a que contienen un átomo de carbono asimétricamente sustituido que actúa como un centro quiral. "Enantiómero" significa uno de un par de moléculas que son imágenes especulares entre sí y no son superponibles. Los diastereómeros son estereoisómeros que no se relacionan como imágenes especulares, lo más comúnmente, debido a que contienen dos o más átomos de carbono asimétricamente sustituidos. "R" y "S" representan la configuración de los sustituyentes en torno a uno o más átomos de carbono quirales. Cuando un centro quiral no se define como R o S, está presente bien un enantiómero puro o una mezcla de

55 ambas configuraciones.

"Racemato" o "mezcla racémica" significa un compuesto de cantidades equimolares de dos enantiómeros, en el que tales mezclas no presentan actividad óptica, es decir, no giran el plano de luz polarizada.

Los compuestos de la invención se pueden preparar como isómeros individuales bien mediante síntesis específica del isómero o mediante resolución a partir de una mezcla isomérica. Las técnicas de resolución convencionales incluyen la formación de la sal de una base libre de cada isómero de un par isomérico usando un ácido ópticamente activo (seguida de la cristalización fraccionada y la regeneración de la base libre), la formación de la sal de la forma ácida de cada isómero de un par isomérico usando una amina ópticamente activa (seguida de la cristalización

65 fraccionada y la regeneración del ácido libre), la formación de un éster o una amida de cada uno de los isómeros de un par isomérico usando un ácido, un amina o un alcohol ópticamente puros (seguida de la separación cromatográfica y la eliminación del auxiliar quiral) o la resolución de una mezcla isomérica bien de un material de partida o de un producto final usando diversos métodos cromatográficos bien conocidos.

Cuando la estereoquímica de un compuesto divulgado se nombra o se representa por la estructura, el

5 estereoisómero nombrado o representado es al menos un 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 99 % o 99,9 % en peso puro en relación con los otros estereoisómeros. Cuando se nombra o se representa un solo enantiómero por la estructura, el enantiómero representado o nombrado es al menos un 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 99 % o 99,9 % en peso ópticamente puro. El porcentaje de pureza óptica en peso es la proporción del peso del enantiómero que está presente dividido entre el peso combinado del enantiómero que está presente y el peso de su isómero óptico.

La presente invención también proporciona un compuesto de la presente invención para su uso en un método de tratamiento de un sujeto con una enfermedad o un trastorno sensibles a las tetraciclinas que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

15 "Enfermedad o trastorno sensible a las tetraciclinas" se refiere a una enfermedad o un trastorno que se puede tratar, prevenir o, si no, mejorar mediante la administración de un compuesto de tetraciclina de la presente invención. La enfermedad o el trastorno sensibles a las tetraciclinas incluye infecciones, cáncer, trastornos inflamatorios, enfermedades autoinmunes, arteriosclerosis, ulceración de la córnea, enfisema, artritis, osteoporosis, osteoartritis, esclerosis múltiple, osteosarcoma, osteomielitis, bronquiectasias, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedades de la piel y de los ojos, periodontitis, osteoporosis, artritis reumatoide, colitis ulcerosa, trastornos inflamatorios, crecimiento e invasión de tumores, metástasis, lesión pulmonar aguda, apoplejía, isquemia, diabetes, aneurismas de aorta o vasculares, heridas de tejidos cutáneos, sequedad ocular, degradación de huesos y cartílagos, malaria, senescencia, diabetes, apoplejía vascular, trastornos neurodegenerativos, enfermedad cardiaca,

25 diabetes juvenil, bronquitis aguda y crónica, sinusitis e infecciones respiratorias, incluyendo el resfriado común; gastroenteritis y colitis aguda y crónica; cistitis y uretritis aguda y crónica; dermatitis aguda y crónica; conjuntivitis aguda y crónica; serositis aguda y crónica; pericarditis urémicas; colecistitis aguda y crónica; fibrosis quística, vaginitis aguda y crónica; uveítis aguda y crónica; reacciones a fármacos; picaduras de insectos; quemaduras y quemaduras de sol, trastorno de la masa ósea, lesión pulmonar aguda, trastornos pulmonares crónicos, isquemia, apoplejía o apoplejía isquémica, herida cutánea, aneurisma de la aorta o vascular, retinopatía diabética, apoplejía hemorrágica, angiogénesis y otros estados para los que se ha descubierto que los compuestos de tetraciclina son activo (véase, por ejemplo, las patentes de EE.UU. Nº 5.789.395; 5.834.450; 6.277.061 y 5.532.227, cada una de las cuales se incorpora expresamente en el presente documento por referencia). Los compuestos de la invención se pueden usar para prevenir o controlar importantes enfermedades veterinarias y de

35 mamíferos tales como diarrea, infecciones del tracto urinario, infecciones de la piel y de la estructura cutánea, infecciones de oído, nariz y garganta, infección de heridas, mastitis y similares. Además, también se incluyen métodos para el tratamiento de neoplasias usando los compuestos de tetraciclina de la invención (van der Bozert et al., Cancer Res., 48: 6686-6690 (1988)).

Las infecciones que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, infecciones de la piel, infecciones gastrointestinales, infecciones del tracto urinario, infecciones genito-urinarias, infecciones de las vías respiratorias, infecciones sinusales, infecciones del oído medio, infecciones sistémicas, cólera, gripe, bronquitis, acné, malaria, enfermedades de transmisión sexual incluyendo sífilis y gonorrea, enfermedad del legionario, enfermedad de Lyme, fiebre maculosa de las Montañas 45 Rocosas, fiebre Q, tifus, peste bubónica, gangrena gaseosa, infecciones hospitalarias, leptospirosis, tos ferina, carbunco e infecciones causadas por los agentes responsables del linfogranuloma venéreo, conjuntivitis de inclusión

o psitacosis. Las infecciones pueden ser de bacterias, hongos, parásitos y virus (incluyendo aquellas que son resistentes a otros compuestos de tetraciclina).

En una realización, la infección puede estar causada por bacterias. En otra realización, la infección está causada por una bacteria Gram-positiva. En un aspecto específico de la presente realización, la infección está causada por una bacteria Gram-positiva seleccionados de entre S. aureus, S. pneumoniae, P. granulosum y P. acnes.

En otra realización, la infección está causada por una bacteria Gram-negativa. En un aspecto específico de la

55 presente realización, la infección está causada por una bacteria Gram-negativa seleccionada de entre E. coli o B. thetaiotaomicron.

En otra realización, la infección está causada por un organismo seleccionado del grupo que consiste en K. pneumoniae, Salmonella, E. hirae, A. baumannii, B. catarrhalis, H. influenzae, P. aeruginosa, E. faecium, E. coli, S. aureus y E. faecalis. En otra realización, la infección está causada por un organismo seleccionado del grupo que consiste en rickettsias, clamidias y Mycoplasma pneumoniae. En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a la tetraciclina. En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a la meticilina. En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a la vancomicina. En otra realización, la infección está una infección por Bacillus anthracis. "La infección por Bacillus anthracis" incluye

65 cualquier estado, enfermedades o trastornos causados o que se producen como consecuencia de la exposición o la supuesta exposición a Bacillus anthracis u otro miembro del grupo de bacterias de Bacillus cereus.

En otra realización, la infección está causada por una bacteria Gram-positiva. En un aspecto específico de la presente realización, la infección está causada por una bacteria Gram-positiva seleccionada de la clase Bacilli, incluyendo, pero sin limitación, Staphylococcus sp., Streptococcus sp., Enterococcus sp., Bacillus sp., Listeria sp.; filo Actinobacteria, incluyendo, pero sin limitación, Propionibacterium sp., Corynebacterium sp., Nocardia sp.,

5 Actinobacteria sp., y la clase Clostridia, incluyendo, pero sin limitación, Clostridium sp.

En otra realización, la infección está causada por una bacteria Gram-negativa. En un aspecto de la presente realización, la infección está causada por un filo Proteobacteria (por ejemplo, Betaproteobacteria y Gammaproteobacteria), incluyendo Escherichia coli, Salmonella, Shigella, otras Enterobacteriaceae, Pseudomonas, 10 Moraxella, Helicobacter, Stenotrophomonas, Bdellovibrio, bacterias de ácido acético, Legionella o alfaproteobacterias como Wolbachia. En otro aspecto, la infección está causada por una bacteria Gram-negativa seleccionada de entre cianobacterias, espiroquetas, bacterias verdes del azufre o bacterias no verdes del azufre. En un aspecto específico de la presente realización, la infección está causada por una bacteria Gram-negativa seleccionada de entre Enterobactericeae (por ejemplo, E. coli, Klebsiella pneumoniae incluyendo las que contienen 15 β-lactamasas y/o carbapenemasas de espectro extendido), Bacteroidetes (por ejemplo, Bacteroides fragilis), Vibrionaceae (Vibrio cholerae), Pasteurellaceae (por ejemplo, Haemophilus influenzae), Pseudomonadaceae (por ejemplo, Pseudomonas aeruginosa), Neisseriaceae (por ejemplo, Neisseria meningitidis), Rickettsiae, Moraxellaceae (por ejemplo, Moraxella catarrhalis), cualquier especie de Proteeae, Acinetobacter sp., Helicobacter sp. y Campylobacter sp. En una realización particular, la infección está causada por una bacteria Gram-negativa

20 seleccionada del grupo que consiste en Enterobactericeae (por ejemplo, E. coli, Klebsiella pneumoniae), Pseudomonas y Acinetobacter sp. En otra realización, la infección está causada por un organismo seleccionado del grupo que consiste en K. pneumoniae, Salmonella, E. hirae, A. baumannii, M. catarrhalis, H. influenzae, P. aeruginosa, E. faecium, E. coli, S. aureus y E. faecalis.

25 En una realización, la infección está causada por un organismo que crece intracelularmente como parte de su proceso de infección.

En otra realización, la infección está causada por un organismo seleccionado del grupo que consiste en el orden Rickettsiales; filo Chlamydiae; orden Chlamydiales; Legionella sp.; clase Mollicutes, incluyendo, pero sin limitación,

30 Mycoplasma sp. (Por ejemplo, Mycoplasma pneumoniae); Mycobacterium sp. (por ejemplo, Mycobacterium tuberculosis); y filo Spriochaetales (por ejemplo, Borrelia sp. y Treponema sp.).

En otra realización, la infección está causada por un organismo de biodefensa de Categoría A según lo descrito en http://www.bt.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp. Los ejemplos de organismos de Categoría A incluyen, pero sin

35 limitación, Bacillus anthracis (carbunco), Yersinia pestis (peste), Clostridium botulinum (botulismo) o Francisella tularensis (tularemia). En otra realización, la infección es una infección por Bacillus anthracis. "La infección por Bacillus anthracis" incluye cualquier estado, enfermedades o trastornos causados o que se producen como consecuencia de la exposición o la supuesta exposición a Bacillus anthracis u otro miembro del grupo de bacterias de Bacillus cereus.

40 Otras infecciones que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, carbunco, botulismo, peste bubónica y tularemia.

En otra realización, la infección está causada por un organismo de biodefensa de la Categoría B según lo descrito

45 en http://www.bt.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp. Los ejemplos de organismos de la Categoría B incluyen, pero sin limitación, Brucella sp., Clostridium perfringens, Salmonella sp., Escherichia coli O157:H7, Shigella sp., Burkholderia mallei, Burkholderia pseudomallei, Chlamydia psittaci, Coxiella burnetii, enterotoxina estafilocócica B. Rickettsia prowazekii, Vibrio cholerae y Cryptosporidium parvum.

50 Otras infecciones que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, brucelosis, Clostridium perfringens, enfermedades transmitidas por alimentos, muermo, melioidosis, psitacosis, fiebre Q y enfermedades transmitidas por el agua.

En otra realización más, la infección puede estar causada por uno o más de un organismo descrito anteriormente.

55 Los ejemplos de tales infecciones incluyen, pero sin limitación, infecciones intra-abdominales (a menudo una mezcla de una especie Gram-negativa como E. coli y un anaerobio como B. fragilis), pie diabético (diversas combinaciones de Streptococcus, Serratia, Staphylococcus y Enterococcus sp., anaerobios (S. E. Dowd, et al., PIoS one 2008; 3: e3326) y enfermedades respiratorias (especialmente en pacientes que tienen infecciones crónicas como la fibrosis quística, por ejemplo, S. aureus más P. aeruginosa o H. influenzae, patógenos atípicos), heridas y abscesos

60 (diversas bacterias gram-negativas y gram-positivas, especialmente MSSA/MRSA, estafilococos coagulasa negativos, enterococos, Acinetobacter, P. aeruginosa, E. coli, B. fragilis) e infecciones del torrente sanguíneo (13 % correspondiente a polimicrobianas (H. Wisplinghoff, et al., Clin. Infect. Dis. 2004; 39:311-317)).

En una realización, la infección está causada por un organismo resistente a uno o más antibióticos. 65

En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a la tetraciclina o cualquier miembro de primera y segunda generación de antibióticos de tetraciclina (por ejemplo, doxiciclina o minociclina).

En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a la meticilina. 5 En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a la vancomicina.

En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a una quinolona o la fluoroquinolona.

10 En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a la tigeciclina o cualquier otro derivado de la tetraciclina. En una realización particular, la infección está causada por un organismo resistente a la tigeciclina.

En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a una β-lactama o antibiótico de cefalosporina o un organismo resistente a penems o carbapenems.

15 En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a un péptido antimicrobiano o un tratamiento bioterapéutico similar. Los péptidos antimicrobianos (también denominados péptidos de defensa del huésped) son un componente conservado evolutivamente de la respuesta inmune innata y se encuentran en todas las clases de vida. En este caso, péptido antimicrobiano se refiere a cualquier molécula de origen natural o cualquier

20 molécula semi/sintética que sea análoga de péptidos aniónicos, péptidos α-helicoidales catiónicos lineales, péptidos catiónicos enriquecidos en aminoácidos específicos (es decir, ricos en prolina, arginina, fenilalanina, glicina, triptófano), y péptidos aniónicos y catiónicos que contienen cisteína y forman enlaces de tipo disulfuro.

En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a los macrólidos, lincosamidas, 25 antibióticos de estreptogramina, oxazolidinonas y pleuromutilinas.

En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a PTK0796 (7-dimetilamino, 9-(2,2-dimetilpropil)-aminometilciclina).

30 En otra realización, la infección está causada por un patógeno multirresistente (que tiene una resistencia intermedia

o completa a dos o más antibióticos).

En una realización adicional, la enfermedad o el trastorno sensibles a las tetraciclinas no es una infección bacteriana. En otra realización, los compuestos de tetraciclina de la invención son esencialmente no antibacterianos.

35 Por ejemplo, los compuestos no antibacterianos de la invención pueden tener valores de CIM superiores a aproximadamente 4 μg/ml (medidos mediante ensayos conocidos en la técnica y/o el ensayo dado en el Ejemplo 1).

La enfermedad o el trastorno sensibles a las tetraciclinas también incluyen enfermedades o trastornos asociados con estados asociados con procesos inflamatorios (EAPI). La expresión "estado asociado con un proceso inflamatorio" 40 incluye los estados en los que la inflamación o los factores inflamatorios (por ejemplo, metaloproteinasas matriciales (MMP), óxido nítrico (NO), TNF, interleucinas, proteínas plasmáticas, sistemas de defensa celular, citoquinas, metabolitos de lípidos, proteasas, tóxico radicales, moléculas de adhesión, etc.) participan o están presentes en una superficie en cantidades anómalas, por ejemplo, en cantidades que pueden ser ventajosas para modificar, por ejemplo, para beneficiar al sujeto. El proceso inflamatorio es la respuesta de los tejidos vivos a los daños. La causa

45 de la inflamación se puede deber a daños físicos, sustancias químicas, microorganismos, necrosis tisular, cáncer u otros agentes. La inflamación aguda es de corta duración, que dura sólo unos cuantos días. Sin embargo, si dura más, se puede denominar inflamación crónica.

Los EAPI incluyen trastornos inflamatorios. Los trastornos inflamatorios se caracterizan generalmente por calor,

50 enrojecimiento, hinchazón, dolor y pérdida funcional. Los ejemplos de causas de los trastornos inflamatorios incluyen, pero sin limitación, infecciones microbianas (por ejemplo, infecciones bacterianas y fúngicas), agentes físicos (por ejemplo, quemaduras, radiación y trauma), agentes químicos (por ejemplo, toxinas y sustancias cáusticas), necrosis tisular y diversos tipos de reacciones inmunológicas.

55 Los ejemplos de trastornos inflamatorios que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, osteoartritis, artritis reumatoide, infecciones agudas y crónicas (bacterianas y fúngicas, incluyendo difteria y tos ferina); bronquitis aguda y crónica, sinusitis e infecciones del tracto respiratorio superior, incluyendo el resfriado común; gastroenteritis y colitis aguda y crónica; enfermedad inflamatoria del intestino; cistitis y uretritis aguda y crónica; vasculitis; sepsis; nefritis,

60 pancreatitis, hepatitis; lupus; trastornos inflamatorios de la piel, incluyendo, por ejemplo, eczema, dermatitis, psoriasis, pioderma gangrenoso, acné rosácea, y dermatitis aguda y crónica; conjuntivitis aguda y crónica; serositis aguda y crónica (pericarditis, peritonitis, sinovitis, pleuritis y tendinitis); pericarditis urémicas; colecistitis aguda y crónica; vaginitis aguda y crónica; uveítis aguda y crónica; reacciones a fármacos; picaduras de insectos; quemaduras (térmicas, químicas y eléctricas); y quemaduras solares.

Los EAPI también incluyen estados asociados con metaloproteinasas matriciales (MMPAS). Las MMPAS incluyen estados caracterizados por cantidades anómalas de MMP o de actividad de MMP. Los ejemplos de estados asociados con metaloproteinasas matriciales ("MMPAS") que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, incluyen, pero sin limitación, arteriosclerosis, 5 ulceración de la córnea, enfisema, osteoartritis, esclerosis múltiple (Liedtke et al., Ann. Neurol. 1998, 44: 35-46; Chandler et al., J. Neuroimmunol. 1997, 72: 155-71), osteosarcoma, osteomielitis, bronquiectasias, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedades de la piel y de los ojos, periodontitis, osteoporosis, artritis reumatoide, colitis ulcerosa, trastornos inflamatorios, crecimiento e invasión tumoral (Stetler-Stevenson et al., Annu. Rev. Cell. Biol. 1993, 9: 541-73; Tryggvason et al., Biochim. Biophys. Acta 1987, 907: 191-217; Li et al., Mol. Carcillog. 1998,

22:

84-89)), metástasis, lesión pulmonar aguda, apoplejía, isquemia, diabetes, aneurismas de aorta o vasculares, heridas de tejidos cutáneos, sequedad ocular, degradación de huesos y cartílagos (Greenwald et al., “Bone” 1998,

22:

33-38; Ryan et al., Curr. Op. Rheumatol. 1996, 8: 238-247). Otras MMPAS incluyen las descritas en la patente de EE.UU. Nº 5.459.135; 5.321.017; 5.308.839; 5.258.371; 4.935.412; 4.704.383, 4.666.897 y RE 34656.

15 En una realización adicional, el EAPI incluye trastornos descritos en la patente de EE.UU. Nº 5.929.055; y 5.532.227.

La enfermedad o el trastorno sensibles a las tetraciclinas también incluyen enfermedades o trastornos asociados con estados asociados con el NO. La expresión "estados asociados con el NO" incluye estados que implican o que están asociados con el óxido nítrico (NO) u óxido nítrico sintasa inducible (iNOS). El estado asociado con el NO incluye estados que se caracterizan por cantidades anómalas de NO y/o iNOS. Preferentemente, el estado asociado con el NO se puede tratar mediante la administración de compuestos de tetraciclina de la invención. Los trastornos, las enfermedades y los estados descritos en las patentes de EE.UU. Nº 6.231.894; 6.015.804; 5.919.774 y 5.789.395 también se incluyen como estados asociados con el NO.

25 Los ejemplos de enfermedades o trastornos asociados con estados asociados con el NO que se pueden tratar usando los compuestos de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, malaria, senescencia, diabetes, apoplejía vascular, trastornos neurodegenerativos (enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Huntington), enfermedad cardiaca (lesión por reperfusión después de un infarto), diabetes juvenil, trastornos inflamatorios, osteoartritis, artritis reumatoide, infecciones agudas, recurrentes y crónicas (bacterianas, víricas y fúngicas); bronquitis aguda y crónica, sinusitis e infecciones respiratorias, incluyendo el resfriado común; gastroenteritis y colitis aguda y crónica; cistitis y uretritis aguda y crónica; dermatitis aguda y crónica; conjuntivitis aguda y crónica; serositis aguda y crónica (pericarditis, peritonitis, sinovitis, pleuritis y tendinitis); pericarditis urémicas; colecistitis aguda y crónica; fibrosis quística, vaginitis aguda y crónica; uveítis aguda y crónica; reacciones a fármacos; picaduras de insectos; quemaduras (térmicas, químicas y eléctricas); y quemaduras solares.

35 En otra realización, la enfermedad o el trastorno sensibles a las tetraciclinas es cáncer. Los ejemplos de cáncer que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen todos los tumores sólidos, es decir, carcinomas, por ejemplo, adenocarcinomas y sarcomas. Los adenocarcinomas son carcinomas derivados de tejido glandular o en el que las células tumorales forman estructuras glandulares reconocibles. En términos generales, los sarcomas incluyen tumores cuyas células están incrustadas en una sustancia fibrilar u homogénea como el tejido conjuntivo embrionario. Los ejemplos de carcinomas que se pueden tratar usando los métodos de la invención incluyen, pero sin limitación, carcinomas de próstata, mama, ovario, testículo, pulmón, colon y mama. Los métodos de la invención no se limitan al tratamiento de estos tipos de tumores, sino que se extienden a cualquier tumor sólido derivado de cualquier sistema de órganos.

45 Los ejemplos de cáncer que se pueden tratar incluyen, pero sin limitación, cáncer de colon, cáncer de vejiga, cáncer de mama, melanoma, carcinoma de ovario, carcinoma de próstata, cáncer de pulmón, así como otros varios tipos de cáncer. Los métodos de la invención también provocan la inhibición del crecimiento del cáncer en adenocarcinomas tales como, por ejemplo, los de próstata, mama, riñón, ovario, testículos y colon. En una realización, los cánceres tratados mediante los métodos de la invención incluyen los descritos en la patente de EE.UU. Nº 6.100.248; 5.843.925; 5.837.696; o 5.668.122.

Como alternativa, los compuestos de tetraciclina pueden ser útiles para prevenir o reducir la probabilidad de recurrencia del cáncer, por ejemplo, para tratar el cáncer residual tras resección quirúrgica o radioterapia. Los compuestos de tetraciclina útiles de acuerdo con la invención son especialmente ventajosos, ya que son

55 sustancialmente no tóxicos en comparación con otros tratamientos del cáncer.

En una realización adicional, los compuestos de la invención se administran en combinación con la terapia convencional para el cáncer tal como, pero sin limitación, la quimioterapia.

Los ejemplos de estados sensibles a las tetraciclinas que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos también incluyen trastornos neurológicos que incluyen tanto trastornos neuropsiquiátricos como neurodegenerativos, pero sin limitación, tales como la enfermedad de Alzheimer, demencias relacionadas con la enfermedad de Alzheimer (tales como la enfermedad de Pick), Parkinson y otras enfermedades difusas por cuerpos de Lewy, demencia senil, enfermedad de Huntington, síndrome de Gilles de Ia

65 Tourette, esclerosis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), parálisis supranuclear progresiva, epilepsia y enfermedad de Creutzfeldt-Jakob; trastornos de la función autonómica tales como hipertensión y trastornos del sueño, y trastornos neuropsiquiátricos tales como depresión, esquizofrenia, trastorno esquizoafectivo, psicosis de Korsakoffs, manía, trastornos de ansiedad o trastornos fóbicos; trastornos de aprendizaje o de memoria, por ejemplo, amnesia o pérdida de la memoria relacionada con la edad, trastorno de déficit de atención, trastorno distímico, trastorno depresivo mayor, manía, trastorno obsesivo-compulsivo, trastornos por consumo de sustancias

5 psicoactivas, ansiedad, fobias, trastorno de pánico, así como el trastorno afectivo bipolar, por ejemplo, trastorno (estado de ánimo) afectivo bipolar grave (BP-1), trastornos neurológicos afectivos bipolares, por ejemplo, migraña y obesidad.

Otros trastornos neurológicos incluyen, por ejemplo, los que se enumeran en el manual de la Asociación de Psiquiatría Estadounidense “Diagnostic and Statistical manual of Mental Disorders” (DSM).

En otra realización, la enfermedad o el trastorno sensibles a las tetraciclinas es la diabetes. Las diabetes que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, diabetes juvenil, diabetes mellitus, diabetes de tipo I o diabetes de tipo II. En una

15 realización adicional, la glucosilación de proteínas no se ve afectada por la administración de los compuestos de tetraciclina de la invención. En otra realización, el compuesto de tetraciclina de la invención se administra en combinación con terapias diabéticas convencionales tales como, pero sin limitación, la terapia con insulina.

En otra realización, la enfermedad o el trastorno sensibles a las tetraciclinas es un trastorno de la masa ósea. Los trastornos de la masa ósea que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen trastornos en los que la formación, la reparación o la remodelación ósea son ventajosas. Por ejemplo, los trastornos de la masa ósea incluyen osteoporosis (por ejemplo, una disminución de la resistencia y la densidad ósea), fracturas de hueso, formación de hueso asociada con procedimientos quirúrgicos (por ejemplo, reconstrucción facial), osteogénesis imperfecta (enfermedad de los huesos

25 frágiles), hipofosfatemia, enfermedad de Paget, displasia fibrosa, osteopetrosis, enfermedad ósea de mieloma y agotamiento del calcio óseo, tal como el relacionado con hiperparatiroidismo primario. Los trastornos de la masa ósea incluyen todos los estados en los que la formación, la reparación o la remodelación ósea son ventajosas para el sujeto, así como el resto de trastornos asociados con los huesos o el esqueleto de un sujeto que se puede tratar con los compuestos de tetraciclina de la invención. En una realización adicional, los trastornos de la masa ósea incluyen los descritos en las patentes de EE.UU. Nº 5.459.135; 5.231.017; 5.998.390; 5.770.588; RE 34.656; 5.308.839; 4.925.833; 3.304.227 y 4.666.897.

En otra realización, la enfermedad o el trastorno sensibles a las tetraciclinas es lesión pulmonar aguda. Las lesiones pulmonares agudas que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente

35 aceptable de los mismos incluyen el síndrome de dificultad respiratoria del adulto (SDRA), síndrome post-bomba (PPS) y traumatismos. El traumatismo incluye cualquier lesión del tejido vivo causada por un agente o hecho extrínseco. Los ejemplos de traumatismo incluyen, pero sin limitación, lesiones por aplastamiento, contacto con una superficie dura, o de corte u otros daños en los pulmones.

La enfermedad o los trastornos sensibles a las tetraciclinas de la invención también incluyen trastornos pulmonares crónicos. Los ejemplos de trastornos pulmonares crónicos que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, asma, fibrosis quística, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y enfisema. En una realización adicional, los trastornos pulmonares agudos y/o crónicos que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal

45 farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen los descritos en la patente de EE.UU. Nº 5.977.091; 6.043.231; 5.523.297; y 5.773.430.

En otra realización más, la enfermedad o el trastorno sensibles a las tetraciclinas es isquemia, apoplejía o apoplejía isquémica.

En una realización adicional, los compuestos de tetraciclina de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos se pueden usar para tratar trastornos tales como los descritos anteriormente y en las patentes de EE.UU. Nº 6.231.894; 5.773.430; 5.919.775 y 5.789.395.

55 En otra realización adicional, los compuestos de tetraciclina de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos se pueden usar para tratar el dolor, por ejemplo, el dolor inflamatorio, nociceptivo o neuropático. El dolor puede ser bien agudo o crónico.

En otra realización, la enfermedad o el trastorno sensibles a las tetraciclinas es una herida de la piel. La invención también proporciona un método para mejorar la respuesta de cicatrización del tejido epitelializado (por ejemplo, piel, mucosas) a una lesión traumática aguda (por ejemplo, corte, quemadura, raspado, etc.). El método incluye el uso de un compuesto de tetraciclina de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para mejorar la capacidad del tejido epitelializado para curar heridas agudas. El método puede aumentar la tasa de acumulación de colágeno del tejido cicatrizante. El método también puede disminuir la actividad proteolítica en el tejido epitelializado 65 mediante la disminución de la actividad colagenolítica y/o gelatinolítica de MMP. En una realización adicional, el compuesto de tetraciclina de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra en la

superficie de la piel (por ejemplo, tópicamente). En una realización adicional, el compuesto de tetraciclina de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se usa para tratar una herida de la piel, y otros trastornos tales como los descritos, por ejemplo, en las patentes de EE.UU. Nº 5.827.840; 4.704.383; 4.935.412; 5.258.371; 5.308.839, 5.459.135; 5.532.227; y 6.015.804.

5 En otra realización más, la enfermedad o el trastorno sensibles a las tetraciclinas es un aneurisma aórtico o vascular del tejido vascular de un sujeto (por ejemplo, un sujeto que padece o está en riesgo de padecer un aneurisma aórtico o vascular, etc.). El compuesto de tetraciclina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo pueden ser eficaces para reducir el tamaño del aneurisma vascular o se pueden administrar al sujeto antes de la aparición del aneurisma vascular de modo que se prevenga el mismo. En una realización, el tejido vascular es una arteria, por ejemplo, la aorta, por ejemplo, la aorta abdominal. En una realización adicional, los compuestos de tetraciclina de la invención se usan para tratar los trastornos descritos en las patentes de EE.UU. Nº 6.043.225 y 5.834.449.

Los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos se pueden usar solos o en

15 combinación con uno o más agentes terapéuticos en los métodos de la invención divulgados en el presente documento.

La expresión "en combinación con" otro agente terapéutico o tratamiento incluye la administración conjunta del compuesto de tetraciclina con el otro agente terapéutico o tratamiento, bien como una sola forma de dosificación combinada o como múltiples formas de dosificación separadas, primero la administración del compuesto de tetraciclina, seguida por el otro agente terapéutico o tratamiento, y primero la administración del otro agente terapéutico o tratamiento, seguida por el compuesto de tetraciclina.

El otro agente terapéutico puede ser cualquier agente conocido en la técnica para tratar, prevenir o reducir los

25 síntomas de una enfermedad o un trastorno sensible a las tetraciclinas. La elección del/de los agente/s terapéutico/s adicional/es se basa en la enfermedad o el trastorno sensibles a las tetraciclinas que se esté tratando en particular. Tal elección pertenece al conocimiento de un médico tratante. Además, el otro agente terapéutico puede ser cualquier agente beneficioso para el paciente cuando se administra en combinación con la administración de un compuesto de tetraciclina.

Como se usa en el presente documento, el término "sujeto" significa un mamífero en necesidad de tratamiento, por ejemplo, animales de compañía (por ejemplo, perros, gatos y similares), animales de granja (por ejemplo, vacas, cerdos, caballos, ovejas, cabras y similares) y animales de laboratorio (por ejemplo, ratas, ratones, cobayas y similares). Por lo general, el sujeto es un ser humano en necesidad del tratamiento especificado.

35 Como se usa en el presente documento, el término "tratar" o "tratamiento" se refiere a la obtención del efecto farmacológico y/o fisiológico deseado. El efecto puede ser profiláctico o terapéutico, que incluye lograr, parcial o sustancialmente, uno o más de los siguientes resultados: reducción parcial o total de la propagación de la enfermedad, del trastorno o del síndrome; mejoría o mejora de un síntoma clínico o indicador asociado con el trastorno; retrasar, inhibir o disminuir la probabilidad de la progresión de la enfermedad, del trastorno o del síndrome;

o retrasar, inhibir o reducir parcial o totalmente la probabilidad de la aparición o el desarrollo de la enfermedad, el trastorno o el síndrome.

"Cantidad eficaz" significa la cantidad de agente de compuesto activo que provoca la respuesta biológica deseada

45 en un sujeto. Tal respuesta incluye el alivio de los síntomas de la enfermedad o del trastorno que se está tratando. En una realización, la cantidad eficaz de un compuesto de la invención es de aproximadamente 0,01 mg/kg/día a aproximadamente 1.000 mg/kg/día, de aproximadamente 0,1 mg/kg/día a aproximadamente 100 mg/kg/día, o de aproximadamente 0,5 mg/kg/día a aproximadamente 50 mg/kg/día.

La invención incluye además el proceso para la fabricación de la composición que comprende la mezcla de uno o más de los presentes compuestos y un vehículo farmacéuticamente aceptable opcional; e incluye aquellas composiciones que resultan de un proceso de este tipo, proceso que incluye técnicas farmacéuticas convencionales.

Las composiciones de la invención incluyen ocular, oral, nasal, transdérmica, tópica con o sin oclusión, intravenosa

55 (tanto en bolo como en infusión) e inyección (por vía intraperitoneal, subcutánea, intramuscular, intratumoral o parenteral). La composición puede estar en una unidad de dosificación tal como en comprimido, píldora, cápsula, polvo, gránulo, liposoma, resina de intercambio iónico, solución ocular estéril o dispositivo de administración ocular (tal como una lente de contacto y similares para facilitar la liberación inmediata, la liberación gradual o la liberación sostenida), solución o suspensión parenteral, aerosol medido o pulverizado líquido, gota, ampolla, dispositivo autoinyector o supositorio; para la administración ocular, oral, intranasal, sublingual, parenteral o rectal, o por inhalación

o insuflación.

Las composiciones de la invención adecuadas para la administración oral incluyen formas sólidas tales como píldoras, comprimidos, comprimidos oblongos, cápsulas (incluyendo cada una formulaciones de liberación

65 inmediata, liberación gradual y liberación sostenida), gránulos y polvos; y formas líquidas tales como soluciones, jarabes, elixires, emulsiones y suspensiones. Las formas útiles para la administración ocular incluyen soluciones estériles o dispositivos de administración ocular. Las formas útiles para administración parenteral incluyen soluciones estériles, emulsiones y suspensiones.

Las composiciones de la invención se pueden administrar en una forma adecuada para una administración semanal

5 o mensual. Por ejemplo, una sal insoluble del compuesto activo se puede adaptar para proporcionar una preparación de depósito para una inyección intramuscular (por ejemplo, una sal decanoato) o para proporcionar una solución para una administración oftálmica.

La forma de dosificación que contiene la composición de la invención contiene una cantidad eficaz del principio 10 activo necesaria para proporcionar un efecto terapéutico. La composición puede contener de aproximadamente

5.000 mg a aproximadamente 0,5 mg (preferentemente, de aproximadamente 1.000 mg a aproximadamente 0,5 mg) de un compuesto de la invención o una forma de sal del mismo, y puede ser constituida en cualquier forma adecuada para el modo de administración seleccionado. La composición se puede administrar de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 veces al día. Se pueden emplear la administración diaria o dosificación post-periódica.

15 Para la administración oral, la composición está preferentemente en forma de un comprimido o una cápsula que contiene, por ejemplo, de 500 a 0,5 miligramos del compuesto activo. Las dosis variarán en función de factores asociados con el paciente que se esté tratando en particular (por ejemplo, edad, peso, dieta y momento de la administración), la gravedad de la afección por tratar, el compuesto que se esté empleando, el modo de

20 administración y el poder de la preparación.

La composición oral se formula preferentemente como una composición homogénea, en la que el principio activo se dispersa uniformemente por toda la mezcla, que se puede subdividir fácilmente en unidades de dosificación que contienen cantidades iguales de un compuesto de la invención. Preferentemente, las composiciones se preparan 25 mezclando un compuesto de la invención (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) con uno o más vehículos farmacéuticos opcionalmente presentes (tales como un almidón, azúcar, diluyente, agente de granulación, lubricante, agente de deslizamiento, agente aglutinante y agente desintegrante), uno o más excipientes farmacéuticos inertes opcionalmente presentes (tales como agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes aromatizantes, conservantes, agentes colorantes y jarabe), uno o más ingredientes de formación de comprimidos

30 convencionales opcionalmente presentes (tales como almidón de maíz, lactosa, sacarosa, sorbitol, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, fosfato dicálcico y cualquiera de varias gomas) y un diluyente opcional (tal como agua).

Los agentes aglutinantes incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales (por ejemplo, glucosa y beta-lactosa), 35 edulcorantes de maíz, y gomas naturales y sintéticas (por ejemplo, goma arábiga y tragacanto). Los agentes desintegrantes incluyen almidón, metilcelulosa, agar y bentonita.

Los comprimidos y las cápsulas representan una forma unitaria de dosificación oral ventajosa. Los comprimidos se pueden recubrir con azúcar o una película usando técnicas convencionales. Los comprimidos también se pueden 40 recubrir o combinar de otro modo para proporcionar un efecto terapéutico prolongado de liberación controlada. La forma de dosificación puede comprender un componente de dosificación interna y un componente de dosificación externo, en la que el componente externo esté en forma de envoltura sobre el componente interno. Además, los dos componentes pueden estar separados por una capa que resista la disgregación en el estómago (tal como una capa entérica) y permita que el componente interno pase intacto al duodeno o una capa que retrase o sostenga la

45 liberación. Se pueden usar varios materiales de recubrimiento o de capa entérica y no entérica (tales como ácidos poliméricos, goma laca, alcohol acetílico y acetato de celulosa o combinaciones de los mismos).

Los compuestos de la invención también se pueden administrar a través de una composición de liberación lenta; composición que incluye un compuesto de la invención y un vehículo de liberación lenta biodegradable (por ejemplo, 50 un vehículo polimérico) o un vehículo farmacéuticamente aceptable de liberación lenta no-biodegradable (por ejemplo, un vehículo de intercambio iónico).

Los vehículos de liberación lenta biodegradables y no biodegradables son bien conocidos en la técnica. Los vehículos biodegradables se usan para formar partículas o matrices que retienen uno o varios agentes activos y que 55 se degradan/disuelven lentamente en un entorno adecuado (por ejemplo, acuoso, ácido, básico y similares) para liberar el agente. Tales partículas se degradan/disuelven en los fluidos corporales para liberar el/los compuesto/s activo/s en su interior. Las partículas son preferentemente nanopartículas (por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 1 a 500 nm de diámetro, preferentemente de aproximadamente 50-200 nm de diámetro, y más preferentemente de aproximadamente 100 nm de diámetro). En un proceso para preparar una composición de

60 liberación lenta, primero se disuelven o dispersan un vehículo de liberación lenta y un compuesto de la invención en un disolvente orgánico. Se añade la mezcla resultante a una solución acuosa que contiene uno o varios tensioactivos opcionales para producir una emulsión. A continuación, se evapora el disolvente orgánico de la emulsión, proporcionando una suspensión coloidal de partículas que contiene el vehículo de liberación lenta y el compuesto de la invención.

El compuesto divulgado en el presente documento se puede incorporar para la administración por vía oral o por inyección en una forma líquida tal como soluciones acuosas, jarabes adecuadamente aromatizados, suspensiones acuosas u oleosas, emulsiones aromatizadas con aceites comestibles tales como aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, aceite de coco o aceite de cacahuete y similares, o en elixires o vehículos farmacéuticos 5 similares. Los agentes dispersantes o de suspensión para suspensiones acuosas incluyen gomas sintéticas y naturales tales como tragacanto, acacia, alginato, dextrano, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, polivinilpirrolidona y gelatina. Las formas líquidas en agentes de suspensión o dispersantes adecuadamente aromatizados también pueden incluir gomas sintéticas y naturales. Para la administración parenteral, se desean suspensiones y soluciones estériles. Las preparaciones isotónicas, que, en general, contienen conservantes

10 adecuados, se emplean cuando se desea la administración intravenosa.

Los compuestos se pueden administrar por vía parenteral mediante inyección. Una formulación parenteral puede consistir en el principio activo disuelto en o mezclado con un vehículo líquido inerte apropiado. Los vehículos líquidos aceptables generalmente comprenden disolventes acuosos y otros ingredientes opcionales para ayudar a la 15 solubilidad o la conservación. Tales disolventes acuosos incluyen agua estéril, solución de Ringer o una solución salina acuosa isotónica. Otros ingredientes opcionales incluyen aceites vegetales (tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón y aceite de sésamo) y disolventes orgánicos (tales como solcetal, glicerol y formilo). Se puede emplear un aceite estéril no volátil como un agente disolvente o de suspensión. La formulación parenteral se prepara disolviendo o suspendiendo el principio activo en el vehículo líquido, mediante lo cual la unidad de

20 dosificación final contiene del 0,005 al 10 % en peso del principio activo. Otros aditivos incluyen conservantes, isotonizantes, solubilizantes, estabilizantes y agentes calmantes del dolor. También se pueden preparar suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear vehículos líquidos apropiados, agentes de suspensión y similares.

25 Los compuestos de la invención se pueden administrar por vía intranasal usando un vehículo intranasal adecuado.

Los compuestos de la invención también se pueden administrar tópicamente usando un vehículo transdérmico tópico adecuado o un parche transdérmico.

30 Para la administración ocular, la composición está preferentemente en forma de una composición oftálmica. Las composiciones oftálmicas se formulan preferentemente como formulaciones de gotas para los ojos y se introducen en recipientes apropiados para facilitar la administración en el ojo, por ejemplo, un gotero dotado de una pipeta adecuada. Preferentemente, las composiciones son estériles y con una base acuosa, usando agua purificada. Además del compuesto de la invención, una composición oftálmica puede contener uno o más de: a) un tensioactivo

35 tal como un éster de ácido graso de polioxietileno; b) agentes espesantes tales como celulosa, derivados de celulosa, polímeros de carboxivinilo, polímeros de polivinilo y polivinilpirrolidonas, normalmente, a una concentración en el intervalo del aproximadamente 0,05 al aproximadamente 5,0 % (peso/vol); c) (como alternativa al o además del almacenamiento de la composición en un recipiente que contiene nitrógeno y que incluye opcionalmente un absorbente de oxígeno libre tal como Fe), un antioxidante tal como hidroxianisol butilado, ácido ascórbico, tiosulfato

40 de sodio o hidroxitolueno butilado a una concentración del aproximadamente 0,00005 al aproximadamente 0,1 % (peso/vol); d) etanol a una concentración del aproximadamente 0,01 al 0,5 % (peso/volumen); y e) otros excipientes tales como un agente isotónico, un tampón, un conservante y/o el agente de control del pH. Lo deseable es que el pH de la composición oftálmica esté dentro del intervalo de 4 a 8.

45 En ciertas realizaciones, la composición de la presente invención incluye uno o más agentes adicionales. El otro agente terapéutico puede ser cualquier agente que sea capaz de tratar, prevenir o reducir los síntomas de una enfermedad o un trastorno sensible a las tetraciclinas. Como alternativa, el otro agente terapéutico puede ser cualquier agente beneficioso para un paciente cuando se administre en combinación con el compuesto de tetraciclina en esta invención.

Ejemplificación

Las siguientes abreviaturas y los términos tienen los significados indicados:

55 Abreviaturas

(Boc)2O

dicarbonato di-terc-butílico

Ac

acetilo

Ac.

acuoso

BBr3

tribromuro de boro

Bn

bencilo

Boc

terc-butoxicarbonilo o t-butoxicarbonilo

a

ancho

salmuera

solución acuosa saturada de cloruro sódico

Bu

butilo

Cbz

benciloxicarbonilo

CH2Cl2

cloruro de metileno

CH3CN o MeCN

acetonitrilo

d

doblete

dba

dibencilidenacetona

DIC

diisopropilcarbodiimida

DIEA

N,N-diisopropiletilamina

DMAP

4-(dimetilamino)piridina

DMF

N,N-dimetilformamida

DMSO

dimetilsulfóxido

eq o equiv

equivalente

ESI

ionización por electronebulización

Et

etilo

Et2O

éter etílico

EtOAc

acetato de etilo

h

hora

HCl

ácido clorhídrico

HOBt

1-hidroxibenzotriazol

HPLC

cromatografía de líquidos de alta resolución

J

constante de acoplamiento

KHPO4

hidrógenofosfato de potasio

LDA

diisopropilamida de litio

LHMDS

bis(trimetilsilil)amida de litio

m/z

proporción de masa con respecto a la carga

mCPBA

ácido meta-cloroperoxibenzoico

Me

metilo

MeI

yoduro de metilo

MeOH

metanol

min

minuto

EM

espectro de masas

Ms

metanosulfonilo

EM

espectrometría de masas

PM

peso molecular

n

normal

Na2SO4

sulfato de sodio

NaHCO3

bicarbonato de sodio

NaOH

hidróxido de sodio

NMP

1-metil-2-pirrolidinona

RMN

espectrometría de resonancia magnética nuclear

NOE

Efecto nuclear de Overhauser

o-tol

orto-tolilo

Ph

fenilo

c

cuadruplete

Rf

factor de retención

RP

fase inversa

ta

temperatura ambiente

s

singlete

t

triplete

TBAF

fluoruro de tetrabutilamonio

TBS

terc-butildimetilsililo

THF

tetrahidrofurano

TLC

cromatografía de capa fina

TMEDA

N,N,N’N’-tetrametiletilendiamina

Xantphos

4,5-bis(difenilfosfin)-9,9-dimetilxanteno

Ejemplo de referencia 1. Preparación de compuestos intermedios útiles en la síntesis de compuestos de la invención.

Los compuestos intermedios útiles en la síntesis de compuestos de la invención se prepararon de acuerdo con el Esquema 1.

Síntesis de S1-2.

10 Se añadió hidruro sódico (dispersión al 60 % en aceite mineral, 4,37 g, 109 mmol) en porciones a una solución de ácido 3,5-dicloroisonicotínico (10,24 g, 53,3 mmol) en NMP (100 ml). Una vez cesada la evolución de gas, se añadió alcohol bencílico (5,52 ml, 53,3 mmol) gota a gota. Una vez cesada la evolución de gas, se calentó la mezcla de reacción hasta 80 ºC. Tras 1 h, la reacción se había completado, y se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente y reposar durante una noche. Se diluyó la mezcla de reacción con agua (300 ml) y se lavó con Et2O (2 x 100 ml,

15 desechado). Se llevó la capa acuosa a pH ~ 2 con HCl conc., haciendo que se formara un precipitado. Se diluyó la mezcla con salmuera (100 ml) y se dejó en reposo durante 30 minutos. Se recogió el sólido por filtración, se lavó con agua (x 3) y se secó en un horno de vacío a 45 ºC durante una noche. Esto dio 9,36 g (67 %) del producto en forma de un sólido blanco. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 14,30-14,10 (s ancho, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,507,30 (m, 5H), 5,33 (s, 2H), EM (ESI) m/z 264,20 (M + H).

Síntesis de S1-3.

Se añadió cloruro de oxalilo (4,9 ml, 56 mmol) a una suspensión de S1-2 (3,71 g, 14,1 mmol) en CH2Cl2 (50 ml) 25 durante ~ 2 minutos. Se añadió DMF gota a gota en porciones de ~ 20 μl cada 5 minutos hasta que se logró la

solución completa. Tras agitar durante 30 minutos más, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. Se disolvió el sólido resultante en CH2Cl2 (50 ml), y se añadieron fenol (2,65 g, 28,1 mmol), DMAP (0,172 g, 1,41 mmol) y Et3N (9,76 ml, 70,4 mmol). Tras 1 h, se diluyó la mezcla de reacción con CH2Cl2 (50 ml) y se lavó con agua (2 x 100 ml) y NaHCO3 (saturado, acuoso, 100 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se

5 concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 50 g, EtOAc del 0 al 25 % en gradiente de hexanos), produciéndose 4,20 g (88 %) del producto en forma de un sólido de color blanquecino. Rf = 0,43 en EtOAc al 30 %/hexanos. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,70 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,52-7,30 (m, 8H), 7,15-7,8 (m, 2H), 5,44 (s, 2H), EM (ESI) m/z 340,25 (M + H).

10 Síntesis de S1-4.

Se calentaron el producto intermedio S1-3 (2,01 g, 5,92 mmol), ácido metilborónico (1,06 g, 17,7 mmol), diclorobis(triciclohexilfosfin)paladio (II) (102 mg, 0,296 mmol) y K3PO4 (3,76 g, 17,7 mmol) hasta 100 ºC en tolueno (20 ml) y agua (2 ml). Tras 16 h, se dejó enfriar la mezcla de reacción hasta la ta y se diluyó con EtOAc (20 ml). Se

15 lavó esta con agua (20 ml) y salmuera (20 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 50 g, gradiente de EtOAc del 0 al 40 %/hexanos), produciéndose 1,66 g (88 %) del producto en forma de un sólido blanco. Rf = 0,18 en EtOAc al 30 %/hexanos. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,50 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,52-7,30 (m, 8H), 7,20-7,10 (m, 2H), 5,37 (s, 2H), 2,38 (s, 3H), EM (ESI) m/z 320,27 (M + H).

Síntesis de S1-5.

Se calentó el producto intermedio S1-4 (25,9 g, 81,1 mmol) hasta 80 ºC en ácido acético (160 ml) y peróxido de hidrógeno (solución acuosa al 30 %, 40 ml). Tras agitar durante una noche, la CL/EM indicó que el material de 25 partida se había consumido y que había N-óxido presente. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida, se diluyó con EtOAc y se lavó con NaHCO3 (solución acuosa saturada, 3 veces). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida, produciéndose 25,4 g (93 % bruto) del N-óxido en forma de un sólido de color tostado. Se suspendió el material en tolueno (200 ml) y se calentó hasta 80 ºC, en cuyo punto la mayor parte del sólido se había disuelto. Se añadió oxibromuro de fósforo (25 g, 87,2 mmol) en una porción. Tras 30 30 minutos, la CL/EM indicó que la reacción se había completado. Tras enfriar hasta la ta, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2CO3 (83 g) en agua (300 ml). Se usó más agua (∼50 ml) para transferir el material restante del matraz de reacción a la solución de K2CO3, Esto se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se separaron las capas, y se extrajo la capa acuosa con EtOAc. Se secaron los extractos combinados sobre MgSO4, se filtraron a través de Celite y se concentraron a presión reducida. Se recristalizó el material en EtOAc/hexanos (1:

35 1), produciéndose 20,6 g (64 %) del producto en forma de un sólido de color blanquecino. Isómero individual según RMN de 1H. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,05 (s, 1H), 7,43-7,30 (m, 7H), 7,29-720 (m, 1H), 7,07 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 5,21 (s, 2H), 2,46 (s, 3H), EM (ESI) m/z 398,22; 400,22 (M + H).

Síntesis de S1-6.

Se calentó el producto intermedio S1-5 (1,06 g, 2,66 mmol), dimetilamina (solución 2,0 M en THF, 4,0 ml, 8,0 mmol), K3PO4 (1,7 g, 8,0 mmol), tris(dibenciliden-acetona)dipaladio (120 mg, 0,13 mmol) y 9,9-dimetil-4,5-bis-(difenilfosfinoxanteno (220 mg, 0,40 mmol) hasta 100 ºC en 1,4-dioxano (10 ml) en un recipiente a presión sellado. Tras calentar durante una noche, se enfrió la mezcla de reacción hasta la ta, se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (3 x 50 ml) y salmuera (50 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 50 g, gradiente de EtOAc del 0 a 15 % en hexanos), produciéndose 388 mg (40 %) de S1-6 intermedio. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,96 (s, 1H), 7,45-7,20 (m, 8H), 7,08 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 5,16 (s, 2H ), 2,76 (s, 6H), 2,37 (s, 3H), EM (ESI) m/z 363,45 (M

+ H).

Síntesis de S1-7.

10 Se calentó el producto intermedio S1-5 (8,54 g, 21,4 mmol) hasta 80 ºC en ácido acético (120 ml) y peróxido de hidrógeno (solución acuosa al 30 %, 30 ml). Tras agitar durante una noche, la CL/EM indicó que el material de partida se había consumido en su mayoría y que había N-óxido presente. Se enfrió la mezcla de reacción hasta la ta y se diluyó con salmuera (150 ml). Se enfrió la mezcla en un congelador a -20 ºC durante 30 minutos. Se recogió el precipitado resultante por filtración y se lavó con agua/salmuera (1:1, 2 veces). Se disolvió el sólido en CH2Cl2 y se

15 secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Esto dio 7,83 g (88 % bruto) del N-óxido en forma de un sólido de color tostado. Se suspendió el material en tolueno (200 ml) y se calentó hasta 100 ºC, en cuyo punto la mayor parte del sólido se había disuelto. Se añadió rápidamente una solución de oxibromuro de fósforo (10,8 g, 37,8 mmol) en tolueno (10 ml). Tras 45 minutos, la CL/EM indicó que la reacción se había completado. Tras enfriar hasta la ta, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2CO3 (40 g) en agua (150 ml). Se usó más agua

20 (∼50 ml) para transferir el material restante del matraz de reacción a la solución de K2CO3. Se agitó esta durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se separaron las capas, y se extrajo la capa acuosa con EtOAc. Se secaron los extractos combinados sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 50 g, gradiente de EtOAc del 0 al 8 % en hexanos para aislar el producto, luego EtOAc al 15 % en hexanos para recuperar material de partida), produciéndose 5,02 g

25 (49 %) del producto en forma de un sólido blanquecino. También se recuperó el producto intermedio S1-5. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,49-7,32 (m, 8H), 7,10 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 5,15 (s, 2H), 2,41 (s, 3H), EM (ESI) m/z 476,18; 478,16; 480,16 (M + H).

Síntesis de S1-8.

30 Se calentó el producto intermedio S1-4 (9,66 g, 30,28 mmol) hasta 80 ºC en ácido acético (50 ml) y peróxido de hidrógeno (solución acuosa al 30 %, 16,9 ml, 5 equiv). Tras 6 h, la CL/EM indicó que el material de partida se había consumido y que había N-óxido presente. Se retiró la mayor parte del ácido acético y del agua mediante un evaporador rotatorio a 40 ºC Se diluyó el material con EtOAc (200 ml) y se lavó con NaHCO3 (solución acuosa

35 saturada, 3 x 50 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Esto dio 9,37 g (92 % de rendimiento bruto) del N-óxido. Se disolvió este en tolueno (60 ml). Se añadió oxicloruro de fósforo (7,69 g, 3 equiv) y se calentó la mezcla de reacción hasta 100 ºC. Tras 2 h, la CL/EM indicó que la reacción se había completado. Tras enfriar hasta la ta, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2CO3 (40 g) en agua (200 ml). Se extrajo esta mezcla con EtOAc (3 x 150 ml), y se secaron los extractos combinados sobre

40 Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. La RMN de 1H indicó una mezcla de regioisómeros (4,5:1). Se volvió a disolver el material en EtOAc (30 ml) con calentamiento y después se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente y reposar durante una noche. Se obtuvo un sólido cristalino blanco (4,99 g, 51 %). Se obtuvieron otros 1,92 g (19 %) del sólido blanco cristalino del licor madre tras reposar en un refrigerador durante una noche. Ambos son el regioisómero puro deseado S1-8 según RMN de 1H. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,05 (s,

45 1H), 7,43-7,30 (m, 7H), 7,29-7,22 (m, 1H), 7,08 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 5,22 (s, 2H), 2,45 (s, 3H), EM (ESI) m/z 354,11 (M + H).

Síntesis de S1-9.

Se disolvió el producto intermedio S1-8 (4,99 g, 14,1 mmol) en cloruro de metileno (30 ml) y se añadió ácido 3cloroperbenzoico (77 %, 6,33 g, 28,2 mmol, 2) en una porción. Tras 6 h, se añadió más ácido 3-cloroperbenzoico 5 (3,15 g, 14,10 mmol), y se agitó la reacción a ta durante una noche. La CL/EM indicó que el material de partida se había consumido y que había N-óxido presente. Se diluyó la mezcla de reacción con cloruro de metileno (200 ml) y se lavó con Na2CO3 (solución acuosa saturada, 100 ml) y salmuera. Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 70 g, gradiente de EtOAc del 5 al 50 % en hexanos), produciéndose 3,90 g (75 %) del N-óxido puro en 10 forma de un sólido blanco (Rf = 0,33 en EtOAc al 66 %/hexanos). Se disolvió el N-óxido en tolueno (30 ml), y se añadió oxibromuro de fósforo (6,36 g, 22,1 mmol). Se calentó la mezcla de reacción hasta 80 ºC. Tras 1 h, la CL/EM indicó que la reacción se había completado. Tras enfriar hasta la ta, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2CO3 (10 g) en agua (50 ml). Se extrajo esta mezcla con EtOAc (3 x 100 ml), y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material resultante

15 mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 50 g, gradiente de EtOAc del 0 al 10 % en hexanos), produciéndose 2,06 g (45 %) del producto deseado S1-9 en forma de un aceite que solidificó lentamente después de reposar durante una noche. Además, se recuperaron 1,01 g (20 %) de S1-8 intermedio. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,49-7,41 (m, 2H), 7,40-7,27 (m, 7H), 7,02 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 5,15 (s, 2H), 2,43 (s, 3H), EM (ESI) m/z 432,02; 434,02 (M + H).

Ejemplo de referencia 2. Preparación de 5-(benciloxi)-2-metoxi-3-metilisonicotinato de fenilo (S2-5).

Se preparó S2-5, un producto intermedio útil en la síntesis de compuestos de la invención de acuerdo con el

Se añadió cloruro de oxalilo (6,6 ml, 76 mmol) a una suspensión de S1-2 (5,00 g, 19,0 mmol) en CH2Cl2 (100 ml) durante ~ 5 minutos. Se añadió DMF gota a gota en porciones de ~20 μl cada 5 minutos hasta que se logró la 30 disolución completa. Tras agitar durante 30 minutos más, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. Se disolvió el sólido resultante en metanol (100 ml). Tras 3 h, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida,

produciéndose 6,2 g (> 100 % de rendimiento bruto con un poco de disolvente residual) del producto en forma de un sólido de color tostado. El material se usó sin purificación. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,58 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,42-7,30 (m, 5H), 5,36 (s, 2H ), 3,88 (s, 3H), EM (ESI) m/z 278,24 (M + H).

Síntesis de S2-2.

Se calentaron el producto intermedio bruto S2-1 (6,2 g, ≤ 19,0 mmol), ácido metilborónico (3,4 g, 57 mmol), diclorobis(triciclohexilfosfin)paladio (II) (326 mg, 0,95 mmol) y K3PO4 (12 g, 57 mmol) hasta 100 ºC en tolueno (75 ml) y agua (8 ml). Tras 16 h, se dejó enfriar la mezcla de reacción hasta la ta y se diluyó con EtOAc (100 ml). Se lavó

10 esta con agua (100 ml) y salmuera (100 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 50 g, EtOAc del 0 al 50 %/hexanos), produciéndose 3,99 g (82 %) del producto en forma de un aceite espeso. Rf = 0,20 en EtOAc al 50 %/hexanos. RMN de 1H (400 MHz, OMSO-d6) δ 8,37 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,42-7,28 (m, 5H), 5,27 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), EM (ESI) m/z 258,27 (M + H).

Síntesis de S2-3.

Se calentó el producto intermedio S2-2 (2,00 g, 7,77 mmol) hasta 80 ºC en ácido acético (10 ml) y peróxido de hidrógeno (solución acuosa al 30 %, 10 ml). Tras 3 h, la CL/EM indicó que el material de partida se había consumido 20 y que había N-óxido presente. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida, se diluyó con EtOAc (50 ml), y se lavó con NaHCO3 (solución acuosa saturada, 3 x 50 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en tolueno (20 ml) y se añadió oxibromuro de fósforo (4,46 g, 15,5 mmol). Se calentó la mezcla de reacción hasta 80 ºC. Tras 30 minutos, la CL/EM indicó que la reacción se había completado. Tras enfriar hasta la ta, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2CO3 (25 g) en 25 agua (100 ml). Se usó más agua (∼50 ml) para transferir el material restante del matraz de reacción a la solución de K2CO3. Se extrajo esto con EtOAc (3 x 100 ml), y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 20 g, EtOAc del 0 al 15 %/hexanos), produciéndose 1,74 g (67 %) del producto en forma de un sólido de color blanquecino. Rf = 0,44 en EtOAc al 20 %/hexanos. Mezcla 25:1 de regioisómeros según RMN de 1H. RMN de 1H

30 (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,24 (s, 1H), 7,45-7,28 (m, 5H), 5,28 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), EM (ESI) m/z 336,1; 338,1 (M + H).

Síntesis de S2-5.

35 Se añadió metóxido de sodio (38 mg, 0,702 mmol) a una solución del producto intermedio S2-3 (118 mg, 0,351 mmol) en N-metilpirrolidinona (2 ml), y se calentó la mezcla de reacción hasta 100 ºC. Tras calentar durante una noche, se añadió más metóxido de sodio (57 mg, 1,05 mmol) y se continuó calentando a 100 ºC Tras 1 h, se calentó la mezcla de reacción hasta 120 ºC. Tras una h más, se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente, se añadió agua (20 ml), y se ajustó el pH a 2 con HCl acuoso 6 N. Se extrajo esto con EtOAc (3 x 20 ml),

40 y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el ácido intermedio bruto en CH2Cl2 (10 ml), y se añadió cloruro de oxalilo (0,123 ml, 1,40 mmol). Tras 1 h, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. Se disolvió el material en CH2Cl2 (10 ml), y se añadieron fenol (66 mg, 0,70 mmol), DMAP (4 mg, 0,035 mmol) y Et3N (0,245 ml, 1,76 mmol). Tras 1 h, se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (50 ml), y se lavó con agua (2 x 30 ml) y salmuera (30 ml). Se secaron los orgánicos sobre

45 Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 10 g, gradiente de EtOAc del 0 al 12 % en hexanos), produciéndose 20,3 mg (17 %) de producto limpio. También se aislaron otros 29,1 mg más de producto contaminado con algo de fenol residual. Rf = 0,39 en EtOAc al 20 %/hexanos. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,75 (s, 1H), 7,45-7,24 (m, 9H), 7,10 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 5,13 (s, 2H), 3,91 (s, 3H), 2,67 (s, 3H).

Ejemplo 3. Preparación de compuestos de Fórmula I, en la que X y Z son simultáneamente hidrógeno.

Los compuestos de Fórmula I, en la que X y Z son simultáneamente hidrógeno (así como los compuestos de Fórmula II, en la que Z es hidrógeno, y los compuestos de Fórmula III, en la que X es hidrógeno) se prepararon de

10 acuerdo con el Esquema 3.

Esquema 3

A continuación, se exponen detalladamente los productos intermedios y los compuestos específicos de la invención 15 preparados de acuerdo con el Esquema 3.

Síntesis de S3-2-1.

Se preparó diisopropilamida de litio a -78 ºC de n-butil-litio (solución 1,6 M en hexano, 0,495 ml, 0,792 mmol) y

20 diisopropilamina (0,112 ml, 0,792 mmol) en THF (5 ml). Se añadió TMEDA (0,318 ml, 2,11 mmol), seguido de la adición gota a gota de una solución del producto intermedio S1-4 (169 mg, 0,529 mmol) en THF (2 ml). Esto dio como resultado una solución de color rojo intenso. Tras 5 min, se añadió una solución de S3-1 (128 mg, 0,264 mmol) en THF (2 ml). Una vez completada la adición, se dejó calentar la mezcla de reacción hasta -10 ºC durante 1 h. Se inactivó la reacción mediante la adición de cloruro de amonio (saturado, solución acuosa, 20 ml) y se extrajo con

25 EtOAc (2 x 20 ml). Se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 65,5 mg (35 %) del producto deseado S3-2-1 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,77 (s, 1H),

30 8,36 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,55-7,24 (m, 10H), 5,40-5,25 (m, 4H), 3,93 (d, J = 11,0 Hz, 1 H), 3,16-3,4 (m, 1H), 2,982,90 (m, 1H), 2,76-2,64 (m, 1H ), 2,60-2,40 (m, 8H), 2,12 (d, J = 14 Hz, 1H), 0,82 (s, 9H), 0,26 (s, 3H), 0,13 (s, 3H), EM (ESI) m/z 708,72 (M + H).

Compuesto de referencia 102

Compuesto 102

5 Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S3-2-1 (65,5 mg, 0,093 mmol) en CH3CN (0,6 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua (20 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (3 x 20 ml). Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml) y 1,4-dioxano (1 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~5 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de

10 reacción durante 2 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 18,4 mg (41 %, 2 etapas) del producto de Compuesto

15 102 deseado en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 8,55 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 4,19 (s, 1H), 3,26-2,98 (m, 9H ), 2,71 (t, J = 14,2 Hz, 1H), 2,39-2,32 (m, 1H), 1,75-1,63 (m, 1H), EM (ESI) m/z 416,44 (M + H).

Síntesis de S3-2-2.

solución a -78 ºC de diisopropilamida de litio (suspensión al 10 % en peso en hexanos, 2,55 ml, 1,70 mmol) y TMEDA (0,684 ml, 4,54 mmol) en THF (10 ml), dando como resultado una solución de color naranja rojizo. Tras 10 min, se añadió una solución de S3-1 (274 mg, 0,568 mmol) en THF (1 ml) gota a gota. El color se fue iluminando 25 gradualmente a naranja. Una vez completada la adición, se dejó calentar la mezcla de reacción hasta 0 ºC durante 1 h. Se inactivó la reacción mediante la adición de cloruro de amonio (solución acuosa saturada), se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (x 3). Se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN

30 con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 21 mg (50 %) del producto deseado S3-2-2 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,65 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,52-7,22 (m, 10H), 5,36 (s, 2H), 5,17 (c, J = 11,0 Hz, 2H), 4,02 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,05 (dd, J = 17,2 Hz, J = 11,6 Hz, 1H), 2,98-2,86 (m, 1H), 2,73 (s, 6H), 2,62-2,38 (m, 9H), 2,12 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 0,81 (s, 9H), 0,26 (s, 3H ), 0,13 (s, 3H), EM (ESI) m/z 751,79 (M + H).

Compuesto 109 Compuesto 109

40 Se añadió HF acuoso (1,3 ml, 48 %) a una solución de S3-2-2 (21 1 mg, 0,281 mmol) en CH3CN (1,3 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción a una solución de K2HPO4 (15,6 g) en agua (50 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (3 x 50 ml). Se diluyó la capa acuosa con salmuera (25 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 75 ml). Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se

disolvió el material en metanol (5 ml) y 1,4-dioxano (5 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~30 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno y se agitó la mezcla de reacción durante 1 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex 5 Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 10→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 142 mg (96 %, 2 etapas) del producto de compuesto 109 deseado en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 8,22 (s, 1H), 4,19 (s, 1H), 3,38-3,30 (m, 2H), 3,24 (s, 6H), 3,12-2,95 (m, 7H), 2,60 (t, J = 14,2Hz, 1H), 2,42-2,34 (m, 1H), 1,75-1,63 (m, 1H), EM (ESI) m/z

10 459,50 (M + H).

Síntesis de S3-2-3.

Se añadió una solución del producto intermedio S2.5 (20,3 mg, 0,058 mmol) en THF (1 ml) gota a gota a una

15 solución a -78 ºC de diisopropilamida de litio (solución 1,8 M en hexanos, 0,050 ml, 0,090 mmol) y TMEDA (0,022 ml, 0,15 mmol) en THF (2 ml). Tras 10 min, se añadió una solución de S3-1 (14 mg, 0,029 mmol) en THF (0,5 ml). Una vez completada la adición, se dejó calentar la mezcla de reacción hasta 0 ºC durante 1 h. La CL/EM indicó una gran cantidad de S2-5 y S3-1 restante. Se enfrió la mezcla de reacción de nuevo hasta -78 ºC, y se añadió más diisopropilamida de litio (solución 1,8 M en hexanos, 0,050 ml, 0,090 mmol). Se dejó calentar esto hasta 0 ºC durante

20 30 min. Se inactivó la reacción mediante la adición de cloruro de amonio (solución acuosa saturada, 20 ml), se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml). Se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa],

25 produciéndose 5,9 mg (27 %) del producto deseado S3-2-3 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,70 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,55-7,24 (m, 10H), 5,36 (s, 2H), 5,17 (c, J = 13,4 Hz, 2H), 3,98 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,18 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 3,04 -2,96 ( m, 1H), 2,60-2,30 (m, 9H), 2,15 (d, J = 14 Hz, 1H), 0,82 (s, 9H), 0,26 (s, 3H), 0,13 (s, 3H), EM (ESI) m/z 738,66 (M + H).

30 Compuesto 121

Compuesto 121

Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S3-2-3 (5,9 mg, 0,008 mmol) en CH3CN (0,4 ml) en un vial de

35 plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción a una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua (20 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (3 x 20 ml). Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml) y 1,4-dioxano (1 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~5 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 1 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida.

40 Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 10→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 2,1 mg (51 %, 2 etapas) del producto de compuesto 121 deseado en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1gota de DCl) δ 7,80 (s, 1H), 4,15 (s,

45 1H), 3,97 (s, 3H), 3,40-2,98 (m, 9H), 2,32-2,20 (m, 2H), 1,72-1,56 (m, 1H), EM (ESI) m/z 446,39 (M + H).

Ejemplo 4. Preparación de compuestos adicionales de Fórmula I, en la que X y Z son simultáneamente hidrógeno.

Los compuestos adicionales de Fórmula I, en la que X y Z son simultáneamente hidrógeno (así como los compuestos de Fórmula II, en la que Z es hidrógeno, y los compuestos de Fórmula III, en la que X es hidrógeno) se prepararon de acuerdo con el Esquema 4.

10 Síntesis de S3-2-4.

Se preparó diisopropilamida de litio a -78 ºC a partir de n-butil-litio (solución 1,6 M en hexano, 0,850 ml, 1,36 mmol) y diisopropilamina (0,192 ml, 1,36 mmol) en THF (10 ml). Se añadió TMEDA (0,546 ml, 3,63 mmol), seguido de la adición gota a gota de una solución del producto intermedio S1-5 (361 mg, 0,907 mmol) en THF (3,5 ml). Esto dio 15 como resultado una solución de color rojo intenso. Tras 5 min, se añadió una solución de S3-1 (219 mg, 0,454 mmol) en THF (1 ml). Una vez completada la adición, se dejó calentar la mezcla de reacción hasta 0 ºC durante 1,5 h. Se inactivó la reacción mediante la adición de cloruro de amonio (solución acuosa saturada) y se extrajo con EtOAc (x 3). Se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 20 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 252 mg (71 %) del producto deseado S3-2-4 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,55 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,55-7,24 (m, 10H), 5,40-5,22 (m, 4H), 3,90 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,25 (dd, J = 16,5 Hz, J = 4,88 Hz, 1H), 3,12-3,02 (m, 1H), 2,62-2,42 (m, 9H ), 2,14 (d, J = 14,0 Hz, 1H), 0,82 (s, 9H), 0,26 (s, 3H), 0,13 (s, 3H), EM (ESI) m/z 786,63;

25 788,63 (M + H).

A continuación, se exponen detalladamente los productos intermedios y los compuestos específicos preparados usando S3-2-4 de acuerdo con el Esquema 4.

Síntesis de S4-1-1.

Se calentó una solución del producto intermedio S3-2-4 (52,5 mg, 0,067 mmol), ácido metilborónico (40 mg, 0,67 mmol), aducto de cloruro de metileno y dicloro[1,1'-bis(difenilfosfin)-ferrocen]paladio (II) (3 mg, 0,003 mmol) y 5 fosfato de potasio (142 mg, 0,667 mmol) en tolueno (1 ml), 1,4-dioxano (1 ml) y agua (0,2 ml) hasta 70 ºC. Tras 2 h, se calentó la mezcla de reacción hasta 100 ºC. Tras 2 h más, se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (20 ml) y se lavó con agua (15 ml) y salmuera (15 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN

10 con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 18,3 mg (38 %) del producto deseado S4-1-1 en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,71 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,55-7,24 (m, 10H), 5,36 (s, 2H), 5,30-5,20 (m, 2H), 3,95 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,10-2,92 (m, 2H), 2,62-2,42 (m, 12H), 2,12 (d, J = 14,0 Hz, 1H), 0,82 (s, 9H), 0,26 (s, 3H), 0,14 (s, 3H), EM (ESI) m/z 722,72 (M + H).

Compuesto 152

Compuesto 152

20 Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S4-1-1 (18,3 mg, 0,025 mmol) en CH3CN (0,6 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción a una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua (20 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (3 x 20 ml). Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (2 ml) y 1,4-dioxano (2 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~5 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de

25 reacción durante 1 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 10→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 4,3 mg (34 %, 2 etapas) del producto de compuesto

30 152 deseado en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 8,35 (s, 1H), 4,19 (s, 1H), 3,25-2,95 (m, 9H), 2,80-2,25 (m, 5H), 1,80-1,63 (m, 1H), EM (ESI) m/z 430,46 (M + H).

Síntesis de S4-1-2.

35 Se calentó una solución del producto intermedio S3-2-4 (31,6 mg, 0,040 mmol), ácido fenilborónico (24,5 mg, 0,201 mmol), aducto de cloruro de metileno dicloro[1,1’-bis(difenilfosfin)-ferroceno]paladio (II) (1,6 mg, 0,002 mmol) y carbonato de sodio (21,3 mg, 0,201 mmol) en tolueno (1 ml), 1,4-dioxano (1 ml) y agua (0,2 ml) hasta 100 ºC a través de reactor de microondas durante 10 min. Se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (10 ml) y se lavó con agua (5 ml) y salmuera (5 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión

40 reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 16,9 mg (54 %) del producto deseado S4-1-2 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,66 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,52-7,24 (m, 15H), 5,42-5,30 (m, 4H), 3,97 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,00-2,86 (m, 2H), 2,78-2,62 (m, 1H), 2,58-2,30 (m, 8H), 2,00 (d, J = 14,0 Hz, 1H), 0,80 (s, 9H), 0,25 (s, 3H), 0,14 (s, 3H), EM (ESI) m/z 784,75 (M + H).

Compuesto 160

10 Compuesto 160 Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S4-1-2 (12,2 mg, 0,0156 mmol) en CH3CN (0,6 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción a una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua (20 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (3 x 20 ml). Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (2 ml) y 1,4-dioxano (2 ml), y se añadió paladio

15 sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~5 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 2 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 10→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las

20 fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 2,1 mg (24 %, 2 etapas) del producto de compuesto 160 deseado en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 8,53 (s, 1H), 7,62 (s, 5H), 4,18 (s, 1H), 3,14-2,82 (m, 9H), 2,81-2,66 (m, 1H), 2,24-2,14 (m, 1H), 1,66-1,52 (m, 1H), EM (ESI) m/z 492,48 (M + H).

25 Ejemplo 5. Preparación de compuestos de Fórmula I, en la que X es hidrógeno, Y es Cl o hidrógeno y Z esN(R3)(R4).

Los compuestos de Fórmula I, en la que X es hidrógeno, Y es Cl o hidrógeno, y Z es -N(R3)(R4) (así como los compuestos de Fórmula II, en la que Z es -N(R3 )(R4)) se prepararon de acuerdo con el Esquema 5.

30 Esquema 5

Los siguientes productos intermedios y compuestos específicos de la invención se prepararon de acuerdo con el Esquema 5.

Síntesis de S5-1.

5 Se disolvieron los productos intermedios S1-9 (793 mg, 1,84 mmol) y S3-1 (885 mg, 1,84 mmol, 1,0 eq) en THF (anhidro, 16 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno en un matraz de Schlenck secado a la llama. Se enfrió la solución resultante hasta -78 ºC en un baño de hielo seco/acetona. Se añadió solución de LHMDS (1,0 M, 5,51 ml, 3,0 equiv) lentamente con una jeringa. Tras 10 min, la CL/EM indicó que el material de partida se había consumido y que había 10 producto presente. Se dejó calentar la mezcla de reacción lentamente hasta 0 ºC durante 1 hora. Se añadió una solución de tampón fosfato (pH 7,0, 20 ml), seguida de la adición de cloruro de amonio (saturado, solución acuosa, 50 ml). Se extrajo la mezcla resultante con cloruro de metileno (3 x 50 ml), y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se lavó el sólido marrón resultante con metanol frío (3 x 5 ml), produciéndose el producto deseado S5-1 en forma de un polvo de color marrón amarillento (1,11 g, 15 74 %). Se concentraron los orgánicos a presión reducida y se purificaron mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 20 g, gradiente de EtOAc del 5 al 20 % en hexanos), produciéndose otros 150 mg (10 %) del producto intermedio S5-1. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,45 (a, 1H), 7,54-7,48 (m, 4H), 7,40-7,30 (m, 6H), 5,36 (s, 2H), 5,03 (ABc, J = 10,4 Hz, 2H), 3,87 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,27-3,23 (m, 1H), 3,10-3,00 (m, 1H), 2,65-2,57 (m, 1H), 2,57-2,43 (m, 8H), 2,16 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 0,81 (s, 9H), 0,26 (s, 3H), 0,12 (s, 3H), EM (ESI) m/z 820,37; 20 822,37 (M + H).

Síntesis de S5-2-1.

Se añadieron el producto intermedio S5-1 (50 mg, 0,061 mmol), K3PO4 (39 mg, 0,18 mmol, 3,0 equiv),

25 tris(dibencilidenacetona)dipaladio (2,8 mg, 0,003 mmol, 5 % molar) y 9,9-dimetil-4,5-bis-(difenilfosfin)xanteno (5,1 mg, 0,009 mmol, 15 % molar) a un pequeño vial dotado de un septo. A continuación, se vació el matraz y se lavó abundantemente con nitrógeno 3 veces, y se añadieron 0,5 ml de dioxano anhidro, seguidos de la adición de etilamina (2,0 M/THF, 0,091 ml, 0,18 mmol, 3 equiv). Se calentó la mezcla de reacción hasta 100 ºC y se agitó durante 3 h. La CL/EM indicó que el material de partida se había consumido en un 40 % y que había producto

30 presente. Se dejó enfriar la mezcla de reacción hasta la ta y se filtró a través de un lecho corto de Celite. Se purificó el aceite negro en bruto en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 90→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 11 mg (23 %) del producto deseado S5-2-1 en forma de un sólido

35 amarillo: RMN de 1H (400 MHz, CCl3D) δ] 15,6 (a, 1H), 7,56-7,49 (m, 4H), 7,42-7,30 (m, 6H), 5,37 (s, 2H), 5,03 (s, 2H), 3,89 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,24-3,4 (m, 3H), 2,97 (dd, J = 15,6; 4,9Hz, 1H), 2,64-2,43 (m, 3H), 2,49 (s, 6H), 2,14 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 1,25 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 0,81 (s, 9H), 0,25 (s, 3H), 0,11 (s, 3H); EM (ESI) m/z 785,57 (M + H).

Compuesto 110

Compuesto 110

Se añadió HF acuoso (0,3 ml, 48 %) a una solución de S5-1-2 (11 mg, 0,014 mmol) en CH3CN (7 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción a una solución de K2HPO4 (2 g) en agua (10 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (x 3). Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (2 ml) y dioxano (2 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 5 10 % en peso, 5,6 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 1 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de un lecho corto de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las

10 fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 3,2 mg (46 %, 2 etapas) del producto de compuesto 110 deseado en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,08 (s, 1H), 3,43 (c, J = 7,4 Hz, 2H), 3,08-2,92 (m, 9H), 2,30-2,15 (m, 2H), 1,67-1,55 (m, 1H), 1,22 (t, J = 7,4 Hz, 3H), EM (ESI) m/z 493,24 (M + H).

Los siguientes compuestos se prepararon de acuerdo con los métodos del Compuesto 110, sustituyendo la amina 15 apropiada con etilamina:

Compuesto 156

20 Compuesto 156 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con una gota de DCl) δ 4,16 (s, 1H), 3,47 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,15-2,96 (m, 9H), 2,322,20 (m, 2H), 1,78-1,55 (m, 3H), 1,01 (t, J = 7,4 Hz, 3H); EM (ESI) m/z 507,29 (M+H). 25 Compuesto 112

Compuesto 112

30 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con una gota de DCl) δ 4,18 (s, 1H), 3,38 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 3,20-2,96 (m, 9H), 2,342,20 (m, 2H), 2,10-1,98 (m, 1H), 1,68-1,54 (m, 1H), 1,00 (d, J = 6,4 Hz, 6H); EM (ESI) m/z 521,40 (M+H).

Compuesto 150

Compuesto 150

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con una gota de DCI) δ 4,13 (s, 1H), 3,72-3,60 (m, 4H), 3,40 (s, 3H), 3,12-2,95 (m, 9H), 2,32-2,21 (m, 2H), 1,69-1,56 (m, 1H); EM (ESI) m/z 523,32 (M+H).

40 Compuesto 153

Compuesto 153

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con una gota de DCl) δ 4,19 (s, 1H), 3,82-3,69 (m, 5H), 3,20-2,98 (m, 9H), 2,35-2,22 (m, 2H), 1,68-1,56 (m, 1H), 1,18 (d, J = 6,4 Hz, 6H); EM (ESI) m/z 551,41 (M+H).

Compuesto 101

Compuesto 101

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,08 (s, 1H), 3,41 (s, 3H), 3,08-2,92 (m, 9H), 2,30-2,15 (m, 2H), 1,67-1,55 (m, 1H); 10 EM (ESI) m/z 479,22 (M+H).

Compuesto 154

15 Compuesto 154 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,09 (s, 1H), 3,42-3,38 (m, 2H), 3,20 (s, 1H), 3,09-2,92 (m, 9H), 2,29-2,16 (m, 2H), 1,66-1,55 (m, 3H), 1,45-1,36 (m, 2H), 0,96 (t, J = 7,3 Hz, 3H); EM (ESI) m/z 521,34 (M+H). 20 Compuesto 157

Compuesto 157

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,21-4,13 (m, 1H), 4,08 (s, 1H), 3,14-2,92 (m, 9H), 2,31-2,15 (m, 2H), 1,67-1,56 (m, 25 1H), 1,23 (dd, J = 6,4; 1,8 Hz, 6H); EM (ESI) m/z 507,24 (M+H).

Compuesto 126

30 Compuesto 126 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,09 (s, 1H), 3,45-3,40 (m, 2H), 3,20 (s, 1H), 3,08-2,93 (m, 9H), 2,30-2,16 (m, 2H), 1,72-1,58 (m, 2H), 1,55-1,48 (m, 2H), 0,96 (d, J = 6,4 Hz, 6H); EM (ESI) m/z 535,30 (M+H). 35 Compuesto 162

Compuesto 162

40 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,16 (s, 1H), 3,47-3,42 (m, 2H), 3,11-2,93 (m, 9H), 2,32-2,19 (m, 2H), 1,67-1,57 (m, 1H), 1,19-1,14 (m, 1H), 0,79-0,73 (m, 2H), 0,48-0,42 (m, 2H); EM (ESI) m/z 519,30 (M+H).

Compuesto 115

5

Compuesto 115 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,12 (s, 1H), 3,41-3,37 (s, 2H), 3,14-2,93 (m, 9H), 2,34-2,20 (m, 2H), 1,68-1,57 (m, 1H), 1,06 (s, 9H); EM (ESI) m/z 535,34 (M+H).

10

Compuesto 148

Compuesto 148

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,09 (s, 1H), 3,44-3,40 (m, 2H), 3,08-2,93 (m, 9H), 2,30-2,16 (m, 2H), 1,67-1,51 (m, 3H), 0,98 (s, 9H); EM (ESI) m/z 549,34 (M+H).

Compuesto 140

20

Compuesto 140 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,13 (s, I H), 3,84-3,77 (m, 2H), 3,44-3,38 (m, 2H), 3,10-2,92 (m, 15H), 2,32-2,20 (m, 2H), 1,68-1,55 (m, 1H); EM (ESI) m/z 536,25 (M+H).

25

Compuesto 119

Compuesto 119

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,09 (s, 1H), 3,70-3,46 (m, 4H), 3,10-2,90 (m, 15H), 2,31-2,17 (m, 2H), 2,10-2,00 30 (m, 2H), 1,68-1,56 (m, 1H); EM (ESI) m/z 550,34 (M+H).

Compuesto 134

35 Compuesto 134 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,09 (s, 1H), 3,58-3,50 (m, 1H), 3,12-2,92 (m, 13H), 2,30-2,17 (m, 2H), 2,04-1,95 (m, 2H), 1,67-1,55 (m, 1H), 1,33 (d, J = 6,4 Hz, 6H); EM (ESI) m/z 564,39 (M+H). 40

Compuesto 124

5

Compuesto 124 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,22-4,15 (m, 2H), 4,09 (s, 1H), 3,08-2,92 (m, 9H), 2,33-2,18 (m, 2H), 1,68-1,57 (m, 1H) EM (ESI) m/z 547,0 (M+H).

10

Compuesto 107

Compuesto 107

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,29 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,18 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 7,08 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 5,12-5,06 15 (m, 1H), 3,99 (s, 1H), 2,97-2,82 (m, 9H), 2,15-2,07 (m, 2H); 1,58-1,49 (m, 1H), 1,47 (d, J = 7,6 Hz, 3H); EM (ESI) m/z 569,1 (M+H).

Compuesto 139

Compuesto 139

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,77 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,31 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 7,01 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 4,11 (s, 1H), 3,16-2,95 (m, 9H), 2,41-2,19 (m, 2H), 1,70-1,60 (m, 1H); EM (ESI) m/z 541,1 (M+H).

Síntesis de S5-2-19.

Se añadieron el producto intermedio S5-1 (100 mg, 0,122 mmol), carbamato t-butílico (42,9 mg, 0,366 mmol), K3PO4 (77,7 mg, 0,366 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (5,6 mg, 0,006 mmol) y 9,9-dimetil-4,5-bis30 (difenilfosfin)xanteno (10,3 mg, 0,018 mmol) a un pequeño vial dotado de un septo. A continuación, se vació el matraz y se lavó abundantemente con nitrógeno 3 veces, y se añadieron 0,5 ml de dioxano anhidro. Se calentó la mezcla de reacción hasta 100 ºC y se agitó durante 2 h. Se dejó enfriar la mezcla de reacción hasta la ta y se filtró a través de Celite y se concentró a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con 35 HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 41,7 mg (40 %) del producto deseado en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,65-15,45 (s ancho, 1H), 7,56-7,50 (m, 2H), 7,43-7,34 (m, 7H), 7,29-7,20 (m, 1H), 5,38 (s, 2H), 4,94 (dd, J = 29,3 Hz, J = 11,0 Hz, 2H), 3,90 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,27 (dd, J = 16,4 Hz, J = 11,6 Hz, 1H), 3,12-3,3 (m, 1H), 2,68-2,60 (m, 1H), 2,60-2,45 (m,

40 8H), 2,18 (d, J = 14,6 Hz, 1H), 1,47 (s, 9H), 0,85 (s, 9H), 0,29 (s, 3H), 0,15 (s, 3H), EM (ESI) m/z 857,67 (M + H).

Compuesto 147

Compuesto 147

5 Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S5-2-19 (47,7 mg, 0,049 mmol) en CH3CN (0,6 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción a una solución de K2HPO4 (7,8 g) en agua (15 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (x 3). Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml) y dioxano (1 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ∼2 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante

10 3 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de un lecho corto de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 17,7 mg (98 %, 2 etapas) de Compuesto 148 en forma

15 de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) con 1 gota de DCl) δ 4,19 (s, 1H), 3,20-2,98 (m, 8H), 2,35-2,22 (m, 2H), 1,68-1,56 (m, 1H), EM (ESI) m/z 465,32 (M + H).

Compuesto 146

Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S5-2-19 (31,3 mg, 0,037 mmol) en CH3CN (0,6 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción a una solución de K2HPO4 (7,8 g) en agua (15 ml). Se extrajo 25 la mezcla con EtOAc (x 3). Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml) y dioxano (1 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ∼10 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante una noche. La CL/EM indicó que el producto principal era el producto intermedio clorado. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se volvió a someter aproximadamente la 30 mitad del producto intermedio aislado a las condiciones de hidrogenación anteriores. Tras 2 días, se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron,

35 produciéndose 1,7 mg (18 %, 2 etapas) de Compuesto 147 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) con 1 gota de DCl) δ 7,29 (s, 1H), 4,18 (s, 1H), 3,20-2,80 (m, 8H), 2,34-2,18 (m, 2H), 1,66-1,52 (m, 1H), EM (ESI) m/z 431,33 (M + H).

Compuesto 123

Compuesto 123

Preparado a partir de S5-1 mediante tratamiento con HF e hidrogenación: RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,08 (d, J 45 = 6,0 Hz, 1H), 4,09 (s, 1H), 3,08-2,92 (m, 9H), 2,30-2,15 (m, 2H), 1,70-1,58 (m, 1H), EM (ESI) m/z 450,18 (M + H).

Ejemplo 6. Preparación del Compuesto 159.

El Compuesto 159 se preparó de acuerdo con el Esquema 6.

Esquema 6

Síntesis de S6-1.

Se añadieron el producto intermedio S1-7 (1,51 g, 3,16 mmol), Cs2CO3 (3,1 g, 9,5 mmol),

10 tris(dibencilidenacetona)dipaladio (145 mg, 0,158 mmol) y 9,9-dimetil-4,5-bis-(difenilfosfin)xanteno (267 mg, 0,474 mmol) a un pequeño vial dotado de un septo. Tras vaciar el matraz y lavarlo abundantemente con nitrógeno 3 veces, se añadieron 1,4-dioxano (7 ml) y dimetilamina (solución 2,0 M en THF, 4,75 ml, 9,50 mmol). Se calentó la mezcla de reacción hasta 60 ºC y se agitó durante 4 h. Se dejó enfriar la mezcla de reacción hasta la ta, se filtró a través de Celite y se concentró a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna

15 (columna Biotage de 50 g, gradiente de EtOAc del 0 al 10 % en hexanos), produciéndose 868 mg (58 %) del regioisómero principal S6-1. También se obtuvieron 354 mg (24 %) del regioisómero secundario S6-2. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,50-7,46 (m, 2H), 7,41-7,30 (m, 5H), 7,30-7,24 (m, 1H), 7,8-7,2 (m, 2H), 5,08 (s, 2H), 2,85 (s, 6H), 2,32 (s, 3H), EM (ESI) m/z 441,19; 443,18 (M + H); Rf = 0,29 en EtOAc al 10 %/hexanos. La regioquímica se confirmó mediante NOE entre los protones de metilo y los protones de N,N-dimetilamino (0,61 %).

Síntesis de S6-2.

Se calentaron el producto intermedio S1-7 (344 mg, 0,721 mmol) y dimetilamina (solución 2,0 M en THF, 0,72 ml, 1,44 mmol) hasta 80 ºC en 1,4-dioxano (1,3 ml) en un vial sellado. Tras 6 h, se añadió más dimetilamina (0,35 ml, 25 0,70 mmol). Tras agitar durante una noche, se enfrió la mezcla de reacción hasta la ta y se concentró a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 20 g, gradiente de EtOAc del 0 al 8 % en hexanos), produciéndose 103 mg (33 %) del regioisómero principal S6-2. También se aisló S6-2 adicional como una mezcla con el regioisómero secundario S6-1. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,41-7,31 (m, 7H),

7,30-7,20 (m, 1H), 7,01 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 4,94 (s, 2H), 3,04 (s, 6H), 2,33 (s, 3H), EM (ESI) m/z 441,19; 443,18 (M + H); Rf = 0,40 en EtOAc al 10 %/hexanos. La regioquímica se confirmó mediante NOE entre los protones bencílicos del grupo O-bencilo y los protones de N,N-dimetilamino (0,44 %).

Síntesis de S6-3.

Se añadió una solución del producto intermedio S6-2 (95 mg, 0,22 mmol) en THF (1 ml) gota a gota a una solución a -78 ºC de diisopropilamida de litio (suspensión al 10 % en peso en hexanos, 0,48 ml, 0,32 mmol) y TMEDA (0,13 ml, 10 0,86 mmol) en THF (2 ml), dando como resultado una solución de color púrpura inmediata. Tras 2 min, se añadió una solución de S3-1 (52 mg, 0,108 mmol) en THF (1 ml) gota a gota durante ∼30 segundos. El color se fue iluminando gradualmente hasta volverse naranja. Una vez completada la adición, se dejó calentar la mezcla de reacción hasta -10 ºC durante ~45 min. Se inactivó la reacción mediante la adición de cloruro de amonio (solución acuosa saturada), se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (x 2). Se secaron los extractos combinados sobre

15 Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 90→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 31,1 mg (35 %) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. EM (ESI) m/z 829,44; 831,43 (M + H).

Compuesto 159

Compuesto 159

25 Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S6-3 (10 mg, 0,012 mmol) en CH3CN (0,4 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción a una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua (15 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (x 3). Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml) y 1,4-dioxano (1 ml), y se añadió paladio

30 sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ∼2 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las

35 fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 4,5 mg (70 %, 2 etapas) del producto deseado en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) con 1 gota de DCl) δ 7,38 (s, 1H), 4,20 (s, 1H), 3,44 (s, 6H), 3,18-2,86 (m, 9H), 2,42-2,26 (m, 2H), 1,64-1,52 (m, 1H), EM (ESI) m/z 459,39 (M + H).

Ejemplo 7. Preparación del Compuesto 118

El Compuesto 118 se preparó de acuerdo con el Esquema 7.

Esquema 7

Síntesis de S7-1.

10 Se añadieron yoduro de cobre (I) (4,7 mg, 0,025 mmol) y K3PO4 (209 mg, 0,984 mmol) a un vial dotado de un septo. Tras vaciar el matraz y lavarlo abundantemente con nitrógeno 3 veces, se añadieron una solución del producto intermedio S6-1 (217 mg, 0,492 mmol) en DMF (2 ml), 1-propilamina (0,162 ml, 1,97 mmol) y 2-acetilciclohexanona (0,013 ml, 0,098 mmol). Se calentó la mezcla de reacción hasta 100 ºC durante 3 h. Se dejó enfriar la mezcla de reacción hasta la ta, se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó con agua (3 x 40 ml). Se secaron los orgánicos sobre

15 Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 10 g, gradiente de EtOAc del 0 al 12 % en hexanos), produciéndose 74,6 mg (36 %) del producto en forma de un aceite espeso. EM (ESI) m/z 420,34 (M + H); Rf = 0,32 en EtOAc al 10 %/hexanos.

Síntesis de S7-2.

20 Se añadió LHMDS (solución 1,0 M en THF, 0,167 ml, 0,167 mmol) a una solución de S7-1 (63,5 mg, 0,152 mmol) en THF (2 ml), dando como resultado una solución de color amarillo brillante. Se añadió una solución de dicarbonato dit-butílico (99,5 mg, 0,456 mmol) en THF (1 ml). Tras 10 min, se inactivó la reacción mediante la adición de cloruro de amonio (solución acuosa saturada,) y se extrajo con EtOAc (x 2). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se

25 filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 10 g, gradiente de EtOAc del 0 al 12 % en hexanos), produciéndose 13,6 mg (17 %) del producto. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,40-7,28 (m, 7H), 7,28-7,22 (m, 1H), 7,05-7,00 (m, 2H), 4,90 (s, 2H), 2,79 (s, 6H), 2,34 (s, 3H), 1,76-1,66 (m, 2H), 1,56-1,50 (m, 2H), 0,91 (t, J = 7,56 Hz, 3H), EM (ESI) m/z 520,38 (M + H); Rf = 0,22 en

EtOAc al 10 %/hexanos.

Síntesis del S7-3.

5 Se añadió una solución del producto intermedio S7-2 (24 mg, 0,047 mmol) en THF (0,5 ml) gota a gota a una solución a -78 ºC de diisopropilamida de litio (solución 0,5 M en THF, 0,102 ml, 0,051 mmol) y TMEDA (0,041 ml, 0,27 mmol) en THF (2 ml), dando como resultado una solución de color naranja amarillento. Tras 10 min, se añadió una solución de S3-1 (16,4 mg, 0,034 mmol) en THF (0,5 ml) gota a gota. Una vez completada la adición, se dejó calentar la mezcla de reacción hasta -20 ºC durante ~45 min. Se inactivó la reacción mediante la adición de cloruro

10 de amonio (solución acuosa saturada) y se extrajo con EtOAc (x 2). Se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 90→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 6,1 mg (20 %) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo.

15 RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,56 (s, 1H), 7,52-7,24 (m, 10H), 5,36 (s, 2H), 4,99-4,64 (m, 2H), 4,02 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,10-2,81 (m, 2H), 2,78 (s, 6H), 2,62-2,40 (m, 10H), 2,20-2,14 (m, 1H), 1,80-1,45 (m, 2H), 1,44-1,15 (m, 11H), 1,00-0,70 (m, 12H), 0,25 (s, 3H), 0,12 (s, 3H), EM ( ESI) m/z 908,65 (M + H).

Compuesto 118

Compuesto 118

Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S7-3 (6,1 mg, 0,007 mmol) en CH3CN (0,6 ml) en un vial de

25 plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción a una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua (15 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (x 3). Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml) y 1,4-dioxano (1 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ∼2 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 4 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida.

30 Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 2,8 mg (70 %, 2 etapas) del producto deseado en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) con 1 gota de DCl) δ 4,19 (s, 1H), 3,44 (t, J = 7,6 Hz,

35 2H), 3,24-3,12 (m, 7H), 3,12 -2,97 (m, 8H), 2,39-2,26 (m, 2H), 1,73-1,56 (m, 3H), 0,98 (t, J = 8,4 Hz, 3H), EM (ESI) m/z 516,42 (M + H).

Ejemplo 8. Preparación de los compuestos 138 y 144.

Los compuestos 138 y 144 se prepararon de acuerdo con el Esquema 8.

Esquema 8

Síntesis de S8-1 y S8-2.

Se pesaron en un matraz el producto intermedio S1-7 (2,15 g, 4,50 mmol), carbamato t-butílico (633 mg, 5,40 mmol), Cs2CO3 (2,93 g, 9,00 mmol), tris(dibencilidenacetona)-dipaladio (206 mg, 0,225 mmol) y 9,9-dimetil-4,5bis-(difenilfosfin)-xanteno (380 mg, 0,673 mmol). Se vació este y se lavó abundantemente a contracorriente con 15 nitrógeno (x 3), y se añadió 1,4-dioxano (15 ml). Se calentó la mezcla de reacción hasta 80 ºC. Tras 3 h, se enfrió la mezcla de reacción hasta la ta, se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (2 x 50 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 50 g, gradiente de EtOAc del 0 al 12 % en hexanos), produciéndose 1,43 g (62 %) de una mezcla 4:1 de los dos compuestos regioisómeros. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,51-7,46

20 (m, 2H), 7,42-7,32 (m, 7H), 7,30-7,24 (m, 1H), 7,12 (d, J = 8,2 Hz, 0,5H), 7,03 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 6,88 (s, 0,25H), 6,71 (s, 1H), 5,12 (s, 2H), 5,02 (s, 0,5H ), 2,43 (s, 0,75H), 2,34 (s, 3H), 1,50 (s, 9H), 1,47 (s, 2,25H), EM (ESI) m/z 535,10; 537,10 (M + Na).

Síntesis de S8-3 y S8-4.

Se agitó la mezcla de S8-1 y S8-2 (1,43 g, 2,78 mmol) en HCl 4 M en 1,4-dioxano (20 ml) y 1,4-dioxano (5 ml) durante una noche. Se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (100 ml) y se lavó con NaHCO3 (solución acuosa saturada, 2 x 100 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 20 g, gradiente de EtOAc del 0 al 30 % en hexanos), produciéndose 805 mg (70 %) del regioisómero principal S8-3 y 270 mg (24 %) del regioisómero secundario S8-4. Los datos para S8-3: Rf = 0,39 en EtOAc al 40 %/hexanos; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,507,42 (m, 2H), 7,40-7,30 (m, 5H), 7,30-7,24 (m, 1H), 7,04 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 5,06 (s, 2H), 4,56 (s, 2H), 2,16 (s, 3H), EM ( ESI) m/z 413,11; 415,01 (M + H). Los datos para S8-4: Rf = 0,72 en EtOAc al 40 %/hexanos; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,42-7,34 (m, 8H), 7,13-7,10 (m, 2H), 5,01 (s, 2H), 4,64 (s, 2H), 2,35 (s, 3H), EM (ESI) m/z 413,09; 415,09 (M + H).

Síntesis de S8-5.

10 Se añadió solución de HF-piridina (HF al ∼70 %, 2 ml) a una solución a 0 ºC del producto intermedio S8-3 (884 mg, 2,14 mmol) en piridina (1 ml). Se añadió nitrito de sodio (177 mg, 2,57 mmol) (burbujeo), y se dejó calentar la reacción lentamente hasta la temperatura ambiente. Tras 3 días, se vertió la mezcla de reacción en Na2CO3 (solución acuosa saturada, 30 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 30 ml). Se lavaron los extractos combinados con HCl 15 (solución acuosa 1 N, 2 x 50 ml) y se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 20 g, gradiente de EtOAc del 0 al 6 % en hexanos), produciéndose 687 mg (77 %) del producto en forma de un aceite incoloro que solidificó lentamente al dejarlo en reposo. Rf = 0,39 en EtOAc al 10 %/hexanos; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,50-7,42 (m, 2H), 7,40-7,30 (m, 5H), 7,30-7,24 (m, 1H), 7,8-7,2 (m, 2H), 5,14 (s, 2H), 2,33 (s, 3H), EM (ESI) m/z 416,17; 418,15 20 (M + H).

Síntesis de S8-6.

Se añadió solución de LHMDS (1,0 M, 0,621 ml, 0,621 mmol) durante ~2 min a una solución a -78 ºC del producto

25 intermedio S8-5 (86 mg, 0,207 mmol) y S3-1 (99 mg, 0,207 mmol) en THF (2 ml). Tras 45 min, se dejó calentar la mezcla de reacción lentamente hasta -20 ºC durante 1 h. Se inactivó la mezcla de reacción mediante la adición de NH4Cl (solución acuosa saturada) y se extrajo con EtOAc. Se secaron los extractos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %;

30 Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 75,3 mg (45 %) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,55 (s, 1H), 7,56-7,26 (m, 10H), 5,36 (s, 2H), 5,02 (s, 2H), 3,88 ( d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,18-3,4 (m, 2H), 2,62-2,58 (m, 1H), 2,58-2,40 (m, 8H), 2,17 (d, J = 14,6 Hz, 1H), 0,81 (s, 9H), 0,25 (s, 3H), 0,12 (s, 3H), EM (ESI) m/z 804,34; 806,34 (M + H).

Compuesto 144

Compuesto 144

40 Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S8-6 (37,5 mg, 0,0466 mmol) en CH3CN (0,6 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción a una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua. Se extrajo la mezcla con EtOAc y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión

reducida. Se disolvió el material en metanol (2 ml) y 1,4-dioxano (2 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ∼5 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm 5 Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 14,9 mg (68 %, 2 etapas) del Compuesto 144 en forma de un sólido amarillo. Además, se aislaron 3,8 mg (15 %) del compuesto 9-Br, Compuesto 138 (ver más adelante). Datos para el Compuesto 144: RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 7,81 (s, 1H), 4,17 (s, 1H), 3,26-2,96 (m, 9H),

10 2,42 -2,25 (m, 2H), 1,70-1,58 (m, 1H), EM (ESI) m/z 434,27 (M + H).

Compuesto 138

Compuesto 138

15 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 4,18 (s, 1H), 3,26-2,94 (m, 9H), 2,42-2,26 (m, 2H), 1,72-1,57 (m, 1H), EM (ESI) m/z 512,17; 514,17 (M + H).

Ejemplo 9. Preparación de compuestos de fórmula I, en la que X es hidrógeno y Z es -NH(R3).

20 Los compuestos de Fórmula I, en la que X es hidrógeno y Z es -NH (R3) (así como los compuestos de Fórmula II, en la que Z es -NH(R3)) se prepararon de acuerdo con el Esquema 9.

Esquema 9

A continuación, se describen los productos intermedios y los compuestos específicos de la invención preparados de acuerdo con el Esquema 9.

Síntesis de S9-1-1.

Se pesaron en un matraz el producto intermedio S8-5 (100 mg, 0,24 mmol), Cs2CO3 (235 mg, 0,720 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (11 mg, 0,012 mmol) y 9,9-dimetil-4,5-bis-(difenilfosfin)xanteno (20 mg, 5 0,036 mmol). Se vació este y se lavó abundantemente a contracorriente con nitrógeno (x 3), y se añadieron 1,4dioxano (0,5 ml) y N,/V-dimetilenopentanodiamina (0,057 ml, 0,36 mmol). Se calentó la mezcla de reacción hasta 70 ºC. Tras 1,5 h, se enfrió la mezcla de reacción hasta la ta y se filtró a través de Celite. Se concentró el filtrado a presión reducida y se purificó mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 10 g, metanol del 0 al 3 % en gradiente de CH2Cl2), dando 76,9 mg (69 %) del producto. Rf = 0,25 en metanol al 5 %/CH2Cl2; EM (ESI) m/z

10 466,28 (M + H).

Síntesis de S9-2-1.

Se añadió solución de LHMDS (1,0 M, 0,22 ml, 0,22 mmol) gota a gota a una solución a -78 ºC de S9-1-1 (93 mg,

15 0,20 mmol) en THF (5 ml). Tras 5 min, se añadió cloroformiato de bencilo (0,084 ml, 0,60 mmol). Tras 15 min, se inactivó la mezcla de reacción mediante la adición de NH4Cl (solución acuosa saturada, 15 ml) y se extrajo con EtOAc. Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 10 g, metanol del 0 al 7 % en gradiente de CH2Cl2), dando 111 mg (93 %) del producto. Rf = 0,42 en metanol al 10 %/CH2Cl2; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ

20 7,45-7,20 (m, 13H), 7,06-6,98 (m, 2H), 5,16 (s, 2H), 4,87 (s, 2H), 3,78 (s ancho, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,18 (s ancho, 6H), 1,62 (s ancho, 2H), 0,90 (s ancho, 6H), EM (ESI) m/z 600,28 (M + H).

Síntesis de S9-3-1.

25 Se añadió una solución del producto intermedio S9-2-1 (54 mg, 0,090 mmol) en THF (0,5 ml) gota a gota a una solución a -78 ºC de diisopropilamida de litio (solución 2,0 M en THF, 0,112 ml, 0,224 mmol) y TMEDA (0,081 ml, 0,54 mmol) en THF (2 ml), dando como resultado una solución de color naranja. Tras 10 min, se añadió una solución de S3-1 (43 mg, 0,090 mmol) en THF (0,5 ml) gota a gota durante ~30 segundos. Una vez completada la adición, se dejó calentar la mezcla de reacción hasta -10 ºC durante 1 h. Se inactivó la reacción mediante la adición de cloruro

30 de amonio (solución acuosa saturada), se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (x 2). Se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 20→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 22,9 mg (26 %) del producto deseado en forma de un

35 sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,55 (s ancho, 1H), 7,52-7,20 (m, 15H), 5,36 (s, 2H), 5,205,00 (m, 2H), 4,80 (s, 2H), 3,90 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,19-3,5 (m, 2H), 2,62-2,57 (m, 1H), 2,56-2,12 (m, 19H), 0,940,74 (m, 15H), 0,26 (s, 3H), 0,12 (s, 3H), EM (ESI) m/z 988,59 (M + H).

Compuesto 133

Compuesto 133

5 Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S9-3-1 (22,9 mg, 0,0232 mmol) en CH3CN (0,8 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción a una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua. Se extrajo la mezcla con EtOAc y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml) y HCl 0,5 N en metanol (2 ml) y 1,4-dioxano (1 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ∼2 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la

10 mezcla de reacción durante 3 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 9,9 mg (67 %, 2 etapas) del Compuesto 133 en

15 forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 4,16 (s, 1H), 3,43 (s, 2H), 3,15-2,90 (m, 17H), 2,30-2,22 (m, 1H), 2,22-2,12 (m, 1H), 1,65-1,54 (m, 1H), 1,17, (s, 6H), EM (ESI) m/z 562,43 (M + H).

Los siguientes compuestos se prepararon de forma similar al Compuesto 133 mediante la sustitución de la amina apropiada con N,N-dimetilenopentanodiamina.

20 Compuesto 114

Compuesto 114

25 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,09 (s, 1H), 3,33 (t, J = 6,9 Hz, 2H) 3,42-3,38 (m, 2H), 3,20 (s, 1H ), 3,07-2,94 (m, 8H), 2,91 (dd, J = 14,6; 4,6 Hz, 1H), 2,23-2,12 (m, 2H), 1,68-1,55 (m, 3H), 0,96 (t, J = 7,3 Hz, 3H), EM (ESI) m/z 491,23 (M + H).

Compuesto 108

Compuesto 108

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,09 (s, 1H), 3,88-3,78 (m, 2H), 3,50-3,39 (m, 2H), 3,18-2,92 (m, 9H), 2,32-2,08 (m, 6H), 1,67-1,56 (m, 1H), 1,15 (s, 6H), EM (ESI) m/z 604,29 (M + H).

Compuesto 129

Compuesto 129

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,11 (s, 1H), 3,54-3,39 (m, 4H), 3,15-2,92 (m, 9H), 2,38-2,20 (m, 2H), 1,69-1,55 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), EM (ESI) m/z 606,34 (M + H).

Compuesto 135

10 Compuesto 135

Se aisló como un producto secundario en la síntesis del Compuesto 129. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,85 (s, 1H), 4,12 (s, 1H), 3,68-3,45 (m, 4H), 3,17-2,94 (m, 9H), 2,42-2,21 (m, 2H), 1,69-1,59 (m, 1H), 1,47 (s, 9H), EM (ESI) m/z 572,28 (M + H).

Compuesto 151 Compuesto 151

20 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,10 (s, 1H), 3,51-3,36 (m, 4H), 3,10-2,92 (m, 15H), 2,33-2,18 (m, 2H), 1,68-1,57 (m, 1H), 1,174 (s, 3H), 1,169 (s, 3H), EM (ESI) m/z 578,35 (M + H).

Compuesto 130

25 Compuesto 130

Se aisló como un producto secundario en la síntesis del Compuesto 151. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,75 (s, 1H), 4,10 (s, 1H), 3,72-3,54 (m, 4H), 3,09-2,94 (m, 15H), 2,44-2,26 (m, 2H), 1,70-1,57 (m, 1H), 1,22 (s, 3H), 1,17 (s, 3H), EM (ESI) m/z 544,49 (M + H).

Ejemplo 10. Preparación de compuestos de Fórmula I, en la que X es hidrógeno y Z es -N (R3)(R4).

Los compuestos de Fórmula I, en la que X es hidrógeno y Z es -N(R3)(R4) (así como compuestos de Fórmula II, en la que Z es -N(R3)(R4)) se prepararon de acuerdo con el Esquema 10.

Esquema 10

A continuación, se describen los productos intermedios y compuestos específicos de la invención preparados de acuerdo con el Esquema 10.

Síntesis de S10-1-1.

Se pesaron en un vial el S8-5 (63 Mg, 0,15 mmol), Cs2CO3 (1473 g, 0,453 mmol), tris(dibencilidenacetona)-dipaladio

(6,9 mg, 0,008 mmol) y 9,9-dimetil-4,5-bis-(difenilfosfin)-xanteno (13 mg, 0,023 mmol). Se vació este y se lavó 15 abundantemente a contracorriente con nitrógeno (x 3), y se añadieron 1,4-dioxano (0,4 ml) y N-metilpiperazina

(0,020 ml, 0,182 mmol). Se calentó la mezcla de reacción hasta 70 ºC. Tras 3 h, se añadió una porción adicional de

N-metilpiperazina (0,020 ml, 0,182 mmol), y se calentó la mezcla de reacción hasta 100 ºC. Tras calentar durante

una noche, se enfrió la mezcla de reacción hasta la ta y se filtró a través de Celite. Se concentró el filtrado a presión

reducida y se purificó mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 10 g, gradiente de metanol del 0 al 20 3 % en CH2Cl2), produciéndose 18,7 mg (28 %) del producto. Rf = 0,23 en metanol al 5 %/CH2Cl2; EM (ESI) m/z

436,16 (M + H).

Síntesis de S10-2-1.

25 Se añadió una solución del producto intermedio S10-1-1 (18,7 mg, 0,043 mmol) en THF (0,5 ml) gota a una solución a -78 ºC de diisopropilamida de litio (solución 2,0 M en THF, 0,043 ml, 0,086 mmol) y TMEDA (0,052 ml, 0,34 mmol) en THF (2 ml), dando como resultado una solución de color rojo. Se añadió una solución de S3-1 (20,7 mg, 0,043 mmol) en THF (0,5 ml), y se dejó calentar la mezcla de reacción hasta -10 ºC. Se inactivó la reacción mediante la adición de cloruro de amonio (solución acuosa saturada), se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (x 2). Se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 20→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 4,3 mg (12 %) del

5 producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,80 (s ancho, 1H), 7,527,20 (m, 10H), 5,36 (s, 2H), 4,83 (c, J = 31,8 Hz; J = 9,76 Hz, 2H), 3,88 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,85-3,72 (m, 4H), 3,012,94 (m, 2H), 2,88-2,76 (m, 4H), 2,60-2,32 (m, 12H), 2,16-2,10 (m, 1H), 0,81 (s, 9H), 0,26 (s, 3H), 0,12 (s, 3H), EM (ESI) m/z 824,51 (M + H).

10 Compuesto 106

Compuesto 106

Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) se añadió a una solución de S10-2-1 (4,3 mg, 0,0052 mmol) en CH3CN (0,8 ml)

15 en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua. Se extrajo la mezcla con EtOAc, y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml), se añadieron HCl 0,5 M en metanol (0,2 ml) y 1,4dioxano (1 ml) y paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~2 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el

20 filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 1,9 mg (61 %, 2 etapas) del Compuesto 106 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 4,40

25 4,28 (m, 2H), 4,18 (s, 1H), 3,60-3,54 (m, 2H), 3,15-2,92 (m, 12H), 2,32-2,22 (m, 6H), 1,66-1,54 (m, 1H), EM (ESI) m/z 532,15 (M + H).

Los compuestos de Fórmula I, en la que X es hidrógeno y Z es -NH-C(O)-alquilen (C0-C6)-N(R5)(R6), -NH-S(O)2-R5 o –NH-C(O)-R5 (así como los compuestos de Fórmula II, en la que Z es -NH-C(O)-alquilen (C0-C6)-N(R5)(R6), -NHS(O)2-R5 o -NH-CO-R5) se prepararon de acuerdo con el Esquema 11.

Esquema 11

A continuación, se describen los productos intermedios y compuestos específicos de la invención preparados de acuerdo con el Esquema 11.

Síntesis de S11-1-1.

Se pesaron en un vial el producto intermedio S6-1 (467 mg, 1,06 mmol), carbamato t-butílico (372 mg, 3,17 mmol), Cs2CO3 (1,04 g, 3,17 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (48 mg, 0,053 mmol) y 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfin)xanteno (89,3 mg, 0,159 mmol). Se vació este y se lavó abundantemente a contracorriente con nitrógeno (x 3), y se añadió 1,4-dioxano (3 ml). Se calentó la mezcla de reacción hasta 100 ºC. Tras 4 h, se enfrió la

5 mezcla de reacción hasta la ta y se filtró a través de Celite. Se concentró el filtrado a presión reducida, y se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 20 g, gradiente de EtOAc del 0 al 16 % en hexanos), produciéndose 493 mg (98 %) del producto que contenía ∼20 % de una impureza sin identificar. Rf = 0,45 en EtOAc al 30 %/hexanos; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,43-7,32 (m, 8H), 7,30-7,24 (m, 1H), 7,15-7,10 (m, 2H), 6,80 (s, 1H), 4,94 (s, 2H), 2,85 (s, 6H), 2,31 (s, 3H), 1,48 (s, 9H), EM (ESI) m/z 478,27 (M + H).

Síntesis de S11-2-1.

Se trató el producto intermedio S11-1-1 (490 mg, 1,03 mmol) con dicarbonato d-t-butílico (672 mg, 3,08 mmol) y 4dimetilaminopiridina (12,5 mg, 0,103 mmol) en DMF (5 ml). Tras agitar durante una noche, se diluyó la mezcla de

15 reacción con EtOAc (25 ml) y se lavó con agua (3 x 20 ml) y salmuera (20 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 10 g, gradiente de EtOAc del 0 al 10 % en hexanos), produciéndose 424 mg (72 %) del producto. Rf = 0,22 en EtOAc al 15 %/hexanos; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,42-7,24 (m, 8H), 7,06-7,00 (m, 2H), 4,92 (s, 2H ), 2,79 (s, 6H), 2,36 (s, 3H), 1,39 (s, 18H), EM (ESI) m/z 578,33 (M + H).

Síntesis de S11-3-1.

Se preparó diisopropilamida de litio a -40 ºC mediante la adición de n-BuLi (solución 1,84 M en hexano, 0,458 ml,

0,843 mmol) a una solución de diisopropilamina (0,119 ml, 0,843 mmol) en THF (7 ml). Se añadió TMEDA (0,507 ml, 25 3,37 mmol), y se enfrió la mezcla de reacción hasta -78 ºC. Se añadió una solución de producto intermedio S11-2-1

(422 mg, 0,731 mmol) en THF (1,5 ml) gota a gota, dando una solución de color naranja rojizo. Tras 5 min, se añadió

una solución de S3-1 (271 mg, 0,562 mmol) en THF (1,5 ml). Se dejó calentar la mezcla de reacción hasta -10 ºC

durante ∼30 min. Se inactivó la mezcla de reacción mediante la adición de NH4Cl (solución acuosa saturada) y se

extrajo con EtOAc (x 2). Se secaron los extractos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. 30 Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD

[5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al

0,1 %; gradiente: 90→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 288 mg (53 %) del

producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,50 (s, 1H), 7,52-7,24

(m, 10H), 5,36 (s, 2H), 4,85 (c, J = 86,1 Hz, J = 9,76 Hz, 2H), 4,02 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,08 -3,00 (m, 1H), 3,00-2,82 35 (m, 1H), 2,77 (s, 6H), 2,62-2,38 (m, 9H), 2,20-2,12 (m, 1H), 1,35, (s ancho, 18H), 0,79 (s, 9H), 0,26 (s, 3H), 0,12 (s,

3H), EM (ESI) m/z 966,59 (M + H).

Síntesis de S11-4-1.

Se agitó el producto intermedio S11-3-1 (284 mg, 0,294 mmol) en 1,4-dioxano (3 ml) y HCl 4 M en 1,4-dioxano (3 ml) durante una noche. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida, produciéndose 261 mg (> 100 % bruto) del producto deseado en forma de un sólido de color naranja oscuro. El material se usó sin purificación. EM (ESI) m/z 766,38 (M + H).

Síntesis de S11-5-1.

Se añadió isocianato de metilo (0,0032 ml, 0,056 mmol) a una solución del producto intermedio S11-4-1 (23,3 mg, 0,028 mmol) en THF (1 ml). Tras 1 h, se añadió más isocianato de metilo, y se calentó la mezcla de reacción hasta 10 50 ºC. Tras calentar durante una noche, se añadió más isocianato de metilo y se continuó el calentamiento. Tras 1 h, se enfrió la mezcla de reacción hasta la ta y se concentró a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]], produciéndose 10,9 mg (47 %) del producto deseado contaminado con

15 ∼20 % de la amina de partida, S11-4-1. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,64 (s, 0,2H), 15,52 (s, 0,8H), 9,10 (s, 0,8H), 7,58-7,24 (m, 10H), 5,36 ( s, 2H), 4,98-4,78 (m, 2H), 4,02-3,98 (m, 1H), 3,00-2,75 (m, 11H), 2,62-2,40 (m, 9H), 2,20-2,10 (m, 1H), 0,80 (s, 9H), 0,26 (s, 3H), 0,12 (s, 3H), EM (ESI) m/z 823,51 (M + H).

Compuesto 142

Compuesto 142

Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S11-5-1 (10,9 mg, 0,013 mmol) en CH3CN (0,6 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua (15 ml). Se extrajo 25 la mezcla con EtOAc (3 x 15 ml), y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 3,4 mg (36 %, 2 30 etapas) del producto intermedio desililado deseado en forma de un sólido amarillo. Se disolvió el material en metanol (2 ml), HCl 0,5 M en metanol (0,2 ml) y 1,4-dioxano (2 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~2 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex

35 Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 2,5 mg (86 %) del Compuesto 142 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 4,20 (s, 1H), 3,35-3,15 (m, 6H), 3,14-2,90 (m, 12H), 2,56-2,45 (m, 1H), 2,40-2,32 (m, 1H), 1,71-1,60 (m, 1H), EM (ESI) m/z 531,44 (M + H).

Síntesis de S11-4-2.

Se agitó el producto intermedio S5-2-19 (113,7 mg, 0,133 mmol) en HCl 4 M en 1,4-dioxano (3 ml) y 1,4-dioxano (1 ml) durante 1 h. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. El material se usó sin más purificación ni caracterización. EM (ESI) m/z 757,30 (M + H).

Síntesis de S11-5-2.

Se añadió metilisocianato (19 mg, 0,033 mmol) a una solución del producto intermedio S11-4-2 (27 mg, 0,33 mmol)

10 en THF (1 ml), y se calentó la mezcla de reacción hasta 50 ºC. Tras calentar durante una noche, se calentó la mezcla de reacción hasta 70 ºC. Tras 4 h, se calentó la mezcla de reacción hasta 90 ºC. Tras agitar durante una noche, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se purificó en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 20→100 % de B; recogida de fracciones

15 dirigida por la masa]. Esto dio 14,4 mg del producto deseado S11-5-2 mezclado con S11-4-2 intermedio sin reaccionar. El material se usó directamente en la siguiente etapa. EM (ESI) m/z 814,41 (M + H).

Compuesto 143

20 Compuesto 143

Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S11-5-2 (14,4 mg, 0,018 mmol) en CH3CN (0,8 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua. Se extrajo la mezcla con EtOAc. Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a 25 presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml), 1,4-dioxano (1 ml) y HCl 0,5 M en metanol (0,1 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~5 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 30 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron. Se volvió a purificar el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 10→50 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron,

35 produciéndose 3,3 mg (33 %, 2 etapas) del Compuesto 143 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 4,19 (s, 1H), 3,20-2,90 (m, 12H), 2,56-2,45 (m, 1H), 2,40-2,32 (m, 1H), 1,71-1,60 (m, 1H), EM (ESI) m/z 522,13 (M + H).

Síntesis de S11-5-3.

Se añadió isocianato de fenilo (0,036 ml, 0,33 mmol) a una solución del producto intermedio S11-4-2 (27 mg, 0,033 mmol) en THF (1 ml), y se calentó la mezcla de reacción hasta 50 ºC. Tras calentar durante una noche, se 5 calentó la mezcla de reacción hasta 70 ºC. Tras 4 h, se calentó la mezcla de reacción hasta 90 ºC. Tras agitar durante una noche, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se purificó en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 70→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Esto dio 10,1 mg del producto deseado que se usaron directamente en

10 la siguiente etapa. EM (ESI) m/z 876,43 (M + H).

Compuesto 131

Compuesto 131

15 Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S11-5-3 (10,1 mg, 0,0115 mmol) en CH3CN (0,8 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua. Se extrajo la mezcla con EtOAc. Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml), 1,4-dioxano (1 ml) y HCl 0,5 M en metanol (0,1 ml), y se

20 añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~5 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se

25 recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 3,8 mg (54 %, 2 etapas) del Compuesto 131 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 7,55-7,45 (m, 2H), 7,40-7,25 (m, 2H), 7,12-7,2 (m, 1H), 4,18 (s, 1H), 3,20-2,90 (m, 9H), 2,38-2,22 (m, 2H), 1,70-1,58 (m, 1H), EM (ESI) m/z 584,28 (M + H).

30 Síntesis de S11-7-1.

Se añadió cloruro de bromoacetilo (1 1,5 mg, 0,073 mmol) a una solución del producto intermedio S11-4-1 (51 mg, 0,061 mmol) en THF (1 ml). Tras 2 h, se añadió más cloruro de bromoacetilo. Tras 1 h más, se añadió t-butilamina (0,064 ml, 0,61 mmol), y se calentó la mezcla de reacción hasta 50 ºC. Tras calentar durante una noche, se añadió 35 más t-butilamina (0,060 ml, 0,57 mmol), y se calentó la reacción hasta 70 ºC. Tras 2 h, se calentó la mezcla de reacción hasta 100 ºC (sellada). Tras 1 h, se enfrió la mezcla de reacción hasta la ta y se concentró a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 50→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 23,2 mg 40 (43 %) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,4 (s ancho,

1H), 7,52-7,24 (m, 10H), 5,36 (s, 2H), 4,98-4,82 (m, 2H), 4,00 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,02-2,79 (m, 9H), 2,63-2,40 (m, 10H), 2,18 (d, J = 14,1 Hz, 1H), 1,40 (s ancho, 9H), 0,80 (s, 9H), 0,26 (s, 3H), 0,12 (s, 3H), EM (ESI) m/z 879,63 (M + H).

Compuesto 149

Compuesto 149

Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S11-7-1 (23,2 mg, 0,0246 mmol) en CH3CN (0,8 ml) en un

10 vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua. Se extrajo la mezcla con EtOAc, y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (2 ml) y 1,4-dioxano (2 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~5 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el

15 material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 9,5 mg (55 %, 2 etapas) del Compuesto 149 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 4,30-4,40 (m, 3H), 3,40-3,25 (m, 8H), 3,12-3,4 (m, 4H),

20 2,99 (s, 3H), 2,62-2,52 (m, 1H), 2,41-2,35 (m, 1H), 1,73-1,60 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), EM (ESI) m/z 587,43 (M + H).

Síntesis de S11-1-2.

Se pesaron en un matraz el producto intermedio S8-5 (538 mg, 1,29 mmol), carbamato t-butílico (302 mg,

25 2,58 mmol), Cs2CO3 (840 mg, 2,58 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (59 mg, 0,065 mmol) y 9,9-dimetil-4,5bis-(difenilfosfin)xanteno (109 mg, 0,190 mmol). Se vació este y se lavó abundantemente a contracorriente con nitrógeno (x 3), y se añadió 1,4-dioxano (3 ml). Se calentó la mezcla de reacción hasta 80 ºC. Tras 4 h, se enfrió la mezcla de reacción hasta la ta, se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó con agua (2 x 25 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en

30 columna (columna Biotage de 20 g, gradiente de EtOAc del 0 al 12 % en hexanos), produciéndose 451 mg (77 %) del producto. Rf = 0,35 en EtOAc al 20 %/hexanos; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,42-7,24 (m, 8H), 7,04-6,99 (m, 2H), 4,99 (s, 2H), 2,38 (s, 3H), 1,40 (s, 18H), EM (ESI) m/z 453,14 (M + H).

Síntesis de S11-2-2.

35 Se trató el producto intermedio S11-2-1 (451 mg, 1,00 mmol) con dicarbonato d-t-butílico (1,09 g, 5,00 mmol) y 4dimetilaminopiridina (24 mg, 0,20 mmol) en DMF (15 ml). Tras 30 min, se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (100 ml), y se lavó con agua (3 x 50 ml) y salmuera (50 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 40 10 g, gradiente de EtOAc del 0 al 8 % en hexanos), produciéndose 481 mg (87 %) del producto. Rf = 0,16 en EtOAc al 10 %/hexanos; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,42-7,24 (m, 8H), 7,04-6,99 (m, 2H), 4,99 (s, 2H), 2,38 (s, 3H), 1,40 (s, 18H), EM (ESI) m/z 575,25 (M + Na).

Síntesis de S11-3-2.

Se añadió solución de LHMDS (1,0 M, 2,6 ml, 2,6 mmol) durante ~1 min a una solución a -78 ºC del producto intermedio S11-2-2 (480 mg, 0,868 mmol) y S3-1 (418 mg, 0,867 mmol) en THF (8 ml). Tras 1 h, se dejó calentar la 5 mezcla de reacción lentamente hasta -10 ºC durante 1 h. Se inactivó la mezcla de reacción mediante la adición de NH4Cl (solución acuosa saturada, 15 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml). Se lavaron los extractos con agua (15 ml) y se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B;

10 recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 459 mg (56 %) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,59 (s, 1H), 7,56-7,24 (m, 10H), 5,36 (s, 2H), 4,92 (c, J = 67,8 Hz, J = 9,16 Hz, 2H), 3,91 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,20-3,2 (m, 2H), 2,62-2,45 (m, 9H), 2,19-2,12 (m, 1H ), 1,37 (s, 18H), 0,82 (s, 9H), 0,26 (s, 3H), 0,13 (s, 3H), EM (ESI) m/z 941,59 (M + H).

15 Síntesis de S11-4-3.

Se agitó el producto intermedio S11-3-2 (459 mg, 0,488 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) y HCl 4 M en 1,4-dioxano (5 ml) durante una noche. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida, produciéndose 389 mg (98 %) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. El material se usó sin purificación. EM (ESI) m/z 742,23

20 (M + H).

Compuesto 125

Compuesto 125

25 Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S11-4-3 (15 mg, 0,018 mmol) en CH3CN (0,6 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua. Se extrajo la mezcla con EtOAc, y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml), HCl 0,5 M en metanol (0,2 ml) y 1,4-dioxano (1 ml), y se añadió

30 paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~5 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron

35 las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 4,4 mg (49 %, 2 etapas) del Compuesto 125 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 4,20 (s, 1H), 3,40-2,90 (m, 9H), 2,42-2,22 (m, 2H), 1,70-1,54 (m, 1H), EM (ESI) m/z 449,27 (M + H).

Síntesis de S11-7-2.

Se añadió bromuro de bromoacetilo (0,008 ml, 0,09 mmol) a una solución del producto intermedio S11-4-3 (50 mg,

0,061 mmol) en THF (1 ml). Tras 1,5 h, se añadió t-butilamina (0,032 ml, 0,31 mmol). Tras 1 h, se concentró la

5 mezcla de reacción a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado

de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al

0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 50→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la

masa], produciéndose 35,4 mg (68 %) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H

(400 MHz, CDCl3) δ 15,6 (s ancho, 1H), 7,51-7,48 (m, 2H), 7,42-7,30 (m, 8H), 5,36 (s, 2H), 4,94 (c, J = 23,2 Hz, J = 10 10,4 Hz, 2H), 3,89 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,17-3,2 (m, 2H), 2,63-2,58 (m, 1H), 2,56-2,40 (m, 10H), 2,15 (d, J =

14,1HZ5 IH), 1,07 (s ancho, 9H), 0,82 (s, 9H), 0,26 (s, 3H), 0,13 (s, 3H), EM (ESI) m/z 854,51 (M + H).

Compuesto 120

15 Compuesto 120

Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S11-7-2 (35,4 mg, 0,0414 mmol) en CH3CN (0,8 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua. Se extrajo la mezcla con EtOAc, y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión 20 reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml), HCl 0,5 M en metanol (0,2 ml) y 1,4-dioxano (1 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~5 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en

25 agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 15,3 mg (58 %, 2 etapas) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 4,24-4,65 (m, 3H), 3,262,97 (m, 9H), 2,38-2,28 (m, 2H), 1,69-1,56 (m, 1H), 1,44 (s, 9H), EM (ESI) m/z 562,37 (M + H).

30 Los siguientes compuestos se prepararon de forma similar al compuesto 120 anterior:

Compuesto 163

Compuesto 163

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 4,58-4,48 (m, 2H), 4,20 (s, 1H), 3,86-3,77 (m, 2H), 3,34-3,14 ( m, 2H), 3,14-2,97 (m, 9H), 2,38-2,28 (m, 2H), 2,26-2,2 (m, 4H), 1,70-1,56 (m, 1H), EM (ESI) m/z 560,34 (M + H).

Compuesto 100

Compuesto 100

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 4,50-4,40 (m, 2H), 4,19 (s, 1H), 3,14-3,1 (m, 12H), 2,98 (s, 3H), 2,39-2,28 (m, 2H), 1,69-1,57 (m, 1H), EM (ESI) m/z 534,33 (M + H).

Compuesto 132

10 Compuesto 132

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 4,30-4,20 (s, 2H), 4,19 (s, 1H), 3,25-2,96 (m, 9H), 2,48-2,28 (m, 2H), 1,72-1,58 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), EM (ESI) m/z 578,48 (M + H).

15 Ejemplo 12. Preparación de compuestos de Fórmula I, en la que X es hidrógeno, Y es Cl o hidrógeno, y Z es –alquilen (C1-C6)-N(R5)(R6).

Los compuestos de Fórmula I, en la que X es hidrógeno, Y es Cl o hidrógeno, y Z es –alquilen (C1-C6)-N(R5)(R6) (así como los compuestos de Fórmula II, en la que Z es -alquilen (C1-C6)-N(R5)(R6)) se prepararon de acuerdo con el 20 Esquema 12.

Esquema 12

25 Los siguientes productos intermedios y compuestos específicos de la invención se prepararon de acuerdo con el Esquema 12.

Síntesis de S12-1.

Se añadió una solución de fenil-litio (0,384 ml, 1,8 M en éter di-n-butílico, 0,69 mmol) gota a gota a una solución del producto intermedio S5-1 (284 mg, 0,345 mmol, 1,0 equiv) en THF (4 ml) a -78 ºC, formándose una solución naranja. 5 Tras 1 min, se añadió una solución de n-butil-litio (216 μl, 1,6 M en hexanos, 0,345 mmol) gota a gota a -78 ºC, seguida, 2 minutos más tarde, de la adición de N,N-dimetilformamida (133 μl, 1,73 mmol). Se agitó la mezcla de reacción de color rojo oscuro resultante a -78 ºC durante 30 min, y luego se calentó hasta -40 ºC y se agitó durante una hora. Se añadió cloruro de amonio (solución acuosa saturada, 10 ml) gota a gota a -40 ºC. Se dejó calentar la mezcla de reacción hasta 25 ºC, se diluyó con cloruro de amonio (solución acuosa saturada) y se extrajo con EtOAc

10 (2 x 25 ml). Se combinaron los extractos orgánicos, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron, proporcionando 239 mg del producto en bruto en forma de un aceite de color amarillo: EM (ESI) m/z 110,61 (M + H). Este se usó directamente en las siguientes reacciones.

Síntesis de S12-2-1.

15 Se añadieron dimetilamina (179 μl, 1,0 mmol), ácido acético (57,2 μl, 1,0 mmol) y triacetoxiborohidruro de sodio (212 mg, 1,0 mmol) secuencialmente a una solución de producto intermedio S12-1 (80 mg, 0,1 mmol) en cloruro de

metileno (2 ml) a 25 ºC. Tras agitar durante una noche, se inactivó la mezcla de reacción mediante la adición de bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera (1: 1, 15 ml), y se extrajo con cloruro de metileno (2 x 15 ml). Se 20 secaron los extractos orgánicos combinados sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron, produciéndose el producto en bruto: EM (ESI) m/z 799,57 (M + H).

Compuesto 128

25 Compuesto 128

Se añadió HF acuoso (48-50 %, 0,6 ml) a una solución del producto intermedio S12-2-1 (59 mg, en bruto) en

acetonitrilo (3 ml) en un recipiente de reacción de polipropileno a 25 ºC. Se agitó vigorosamente la mezcla a 25 ºC

durante una noche y se vertió en una solución de K2HPO4 (4,0 g) en agua (20 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc 30 (3 x 25 ml). Se secaron los extractos orgánicos combinados sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se

concentraron. Se añadió Pd-C (10 % en peso, 5 mg) en una porción a la solución de color amarillo del producto en

bruto anterior en una mezcla de 1,4-dioxano (2 ml) y metanol (2 ml) a 25 ºC. Se selló el recipiente de reacción y se

purgó con hidrógeno, vaciando brevemente el matraz seguido de un lavado abundante con gas de hidrógeno

(1 atm). Se agitó la mezcla resultante a 25 ºC durante 2 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de un lecho corto 35 de Celite. Se concentró el filtrado. Se purificó el residuo mediante HPLC preparativa de fase inversa en un sistema

de autopurificación de Waters usando una columna 100A RP-γ de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 150 x

21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; volumen de inyección: 3,0 ml

(HCl 0,05 N/agua); gradiente: 0→100 % de B durante 10 min; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se

recogieron las fracciones que contenían el producto deseado y se liofilizaron, produciéndose el Compuesto 128 40 (3,6 mg, 6,6 % durante 4 etapas): RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,19 (s, 1H), 4,54 ( s, 2H), 4,12 (s, 1H), 3,08-2,92

(m, 15H), 2,64-2,54 (m, 1H), 2,30-2,22 (m, 1H), 1,70-1,60 (m, 1H), EM (ESI) m/z 473,39 (M + H).

Los siguientes compuestos se prepararon de forma similar al compuesto 128 usando la amina apropiada en lugar de dimetilamina:

Compuesto 161

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,17 (s, 1H), 4,53 (m, 2H), 4,12 (s, 1H), 3,08-2,92 (m, 9H), 2,83 (s, 3H), 2,32-2,08 (m, 2H), 1,70-1,60 (m, 1H), EM (ESI) m/z 459,36 (M + H).

10 Compuesto 164

Compuesto 164

15 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,17 (s, 1H), 4,54 (s, 2H), 4,25-4,17 (m, 4H), 4,12 (s, 1H), 3,08-2,92 (m, 9H), 2,542,39 (m, 2H), 2,30-2,22 (m, 2H), 1,70-1,60 (m, 1H), EM (ESI) m/z 485,44 (M + H ).

Compuesto 116

20 Compuesto 116 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,15 (s, 1H), 4,40 (s, 2H), 4,11 (s, 1H), 3,14-2,90 (m, 1 1H), 2,30-2,20 (m, 1H), 2,17-2,05 (m, 2H), 1,71-1,57 (m, 1H), 1,06 (d, J = 6,4 Hz, 6H), EM (ESI) m/z 501,44 (M + H). 25 Compuesto 137

Compuesto 137

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,34 (s, 1H), 4,50 (s, 2H), 4,11 (s, 1H), 3,14-2,90 (m, 11H), 2,48-2,39 (m, 1H), 2,3030 2,22 (m, 1H), 1,69-1,55 (m, 1H), 1,10 (s, 9H), EM (ESI) m/z 515,46 (M + H).

Ejemplo 13. Preparación de Compuestos de Fórmula I, en la que X y Z son hidrógeno e Y es alquilen (C1-C6)-N (R1)(R2)

Los Compuestos de Fórmula I, en la que X y Z son hidrógeno e Y es alquilen (C1-C6)-N(R1)(R2) se sintetizan usando 5 el Esquema 12’.

Esquema 12'

Los compuestos específicos de la invención preparados de acuerdo con el Esquema 12' se describen a 10 continuación.

Compuesto 155

15 Compuesto 155

Se convirtió una mezcla de S12'-1 y S1-8 (1:2) en una mezcla de S12'-4 y S12-1 (1:1,8) usando procedimientos establecidos en los Esquemas 1, 5 y 12. Se separaron los dos regioisómeros mediante HPLC preparativa. A continuación, se aminó reductivamente S12'-4 con isobutilamina, tras lo que se realizaron las desprotecciones en

20 condiciones similares a las descritas anteriormente para proporcionar el Compuesto 155 en forma de un sólido amarillo: RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,34 (s, 1H ), 4,47, 4,23 (ABc, J = 15,6 Hz, 2H), 4,13 (s, 1H), 3,20-2,90 (m, 11H), 2,49-2,40 (m, 1H), 2,34 -2,25 ( m, 1H), 2,18-2,06 (m, 1H), 1,71-1,61 (m, 1H), 1,07 (d, J = 6,4 Hz, 6H), EM (ESI) m/z 501,44 (M + H).

Compuesto 105

Compuesto 105

5 Preparado de manera similar al Compuesto 155: RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,32 (s, 1H), 4,49, 4,24 (ABc, J = 15,6 Hz, 2H), 4,11 (s, 1H), 3,19-2,90 (m, 11H), 2,48-2,36 (m, 1H), 2,30-2,20 (m, 1H), 1,69-1,57 (m, 1H), 1,09 (s, 9H); EM (ESI) m/z 515,46 (M + H).

10 Los compuestos 117 y 122 se prepararon de acuerdo con el siguiente Esquema 13.

Esquema 13

Compuesto 117

Compuesto 117

20 Se añadió triacetoxiborohidruro sódico (16,5 mg, 0,078 mmol, 2 equiv) a una solución de S12-1 (30 mg, 0,039 mmol) en cloruro de metileno (2 ml) a 25 ºC. Tras agitar durante una noche, se inactivó la mezcla de reacción mediante la adición de bicarbonato de sodio acuoso saturado (10 ml) y se extrajo con cloruro de metileno (2 x 15 ml). Se secaron los extractos orgánicos combinados sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron, produciéndose el alcohol intermedio. EM (ESI) m/z 772,51 (M + H). Se añadió HF acuoso (48-50 %, 0,3 ml) a una solución del

25 producto intermedio en acetonitrilo (1,5 ml) en un recipiente de reacción de polipropileno a 25 ºC. Se agitó vigorosamente la mezcla a 25 ºC durante una noche y se vertió en K2HPO4 acuoso (4,0 g disueltos en 20 ml de agua). Se extrajo la mezcla con EtOAc (3 x 25 ml). Se secaron los extractos orgánicos combinados sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron. Se añadió Pd-C (10 % en peso, 5 mg) a una solución del producto en bruto anterior en una mezcla de 1,4-dioxano (2 ml) y metanol (2 ml). Se selló el recipiente de reacción y se purgó

con hidrógeno, vaciando brevemente el matraz seguido de un lavado abundante con gas de hidrógeno (1 atm). Se agitó la mezcla resultante a 25 ºC durante 2 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de un lecho corto de Celite. Se concentró el filtrado. Se purificó el residuo mediante HPLC preparativa de fase inversa en un sistema de autopurificación de Waters usando una columna 100A RP-γ de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 150 x 5 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; volumen de inyección: 3,0 ml (HCl 0,05 N/agua); gradiente: 0→100 % de B durante 10 min; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones que contenían el producto deseado y se liofilizaron, produciéndose 4,2 mg (22 %, 3 etapas) del Compuesto 1 17 y 2,2 mg (13 %) de Compuesto 122 en forma de sólidos amarillos. Datos para el Compuesto 117: RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,70 (s, 2H), 4,10 (s, 1H), 3,15-2,92 (m, 9H), 2,35-2,15 (m, 2H),

10 1,84-1,70 (m, 1H), EM (ESI) m/z 480,22 (M + H) y compuesto desclorado (2,23 mg, 12,8 %).

Compuesto 122

Compuesto 122

15 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,68 (s, 1H), 4,15 (s, 1H), 4,04-3,90 (m, 2H), 3,14-2,90 (m, 9H), 2,30-2,12 (m, 2H), 1,80-1,71 (m, 1H), EM (ESI) m/z 446,26 (M + H).

20 Los compuestos de Fórmula I, en la que X es hidrógeno y Z es alquilo C1-C6 o fenilo, (así como los compuestos de Fórmula II, en la que Z es alquilo C1-C6 o fenilo, se prepararon de acuerdo con el Esquema 14.

Esquema 14

preparados mediante el Esquema 14.

Síntesis de S14-1.

Se preparó diisopropilamida de litio a -40 ºC mediante la adición de n-BuLi (solución 2,5 M en hexano, 0,60 ml, 0,1,5 mmol) a una solución de diisopropilamina (0,213 ml, 0,1,51 mmol) en THF (10 ml). Se enfrió la mezcla de 5 reacción hasta -78 ºC, y se añadió TMEDA (0,542 ml, 3,62 mmol). Se añadió una solución del producto intermedio S6-1 (266 mg, 0,603 mmol) en THF (4 ml) gota a gota, dando una solución de color rojo oscuro. Tras 5 min, se añadió una solución de S3-1 (242 mg, 0,502 mmol) en THF (2 ml). Se dejó calentar la mezcla de reacción hasta 20 ºC durante ~45 min. Se inactivó la mezcla de reacción mediante la adición de NH4Cl (solución acuosa saturada) y se extrajo con EtOAc (x 2). Se secaron los extractos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida.

10 Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 90→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 225 mg (54 %) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. EM (ESI) m/z 829,49; 831,48 (M + H).

15 Síntesis de S14-2-1.

Se pesaron en un vial de 8 ml el producto intermedio S14-1 (105 mg, 0,126 mmol), tetraquis(trifenil-fosfin)paladio (0) (15 mg, 0,013 mmol) y fosfato de potasio (80 mg, 0,379 mmol). Se selló este con un septo, y se vació y se lavó abundantemente a contracorriente con nitrógeno (x 3). Se añadió tolueno (1 ml), 1,4-dioxano (1 ml) y agua (0,5 ml), 20 seguida de pinacoléster de ácido alilborónico (63,7 mg, 0,379 mmol). Se calentó la mezcla de reacción hasta 90 ºC. Tras 2,5 h, se enfrió la mezcla de reacción hasta la ta y se concentró a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 90→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 28,6 mg (29 %) del producto deseado en forma de

25 un sólido de color amarillo. EM (ESI) m/z 791,64 (M + H).

Compuesto 141

Compuesto 141

30 Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S14-2-1 (28,6 mg, 0,036 mmol) en 1,4-dioxano (1 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua. Se extrajo la mezcla con EtOAc, y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml), HCl 0,5 M en metanol (0,5 ml) y 1,4-dioxano (1 ml), y se añadió

35 paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~5 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 1 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→70 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las

40 fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 14,3 mg (69 %) del Compuesto 141 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 4,20 (s, 1H), 3,38-3,15 (m, 7H), 3,14-2,94 (m, 8H), 2,91-2,82 (m, 2H), 2,56 (t, J = 13,8 Hz, 1H), 2,40-2,32 (m, 1H), 1,86-1,76 (m, 2H), 1,74-1,62 (m, 1H), 1,01 (t, J = 7,34 Hz, 3H), EM (ESI) m/z 501,35 (M + H).

Los siguientes compuestos se prepararon de forma similar al Compuesto 141 usando los materiales de partida apropiados y ácidos alquil- o aril-borónicos

Compuesto 104

10 Compuesto 104 RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,10 (s, 1H), 3,22-2,92 (m, 9H), 2,81-2,74 (m, 2H), 2,49-2,38 (m, 1H), 2,26-2,19 (m, 1H), 1,77-1,60 (m, 3H), 0,97 (t, J = 7,3 Hz, 3H), EM (ESI) m/z 492,27 (M + H). 15 Compuesto 103

Compuesto 103

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,09 (s, 1H), 3,22-2,92 (m, 9H), 2,85 (s, 3H), 2,49-2,38 (m, 1H), 2,26-2,19 (m, 1H), 20 1,77-1,60 (m, 1H), EM (ESI) m/z 464,30 (M + H).

Compuesto 158

Compuesto 158

Se aisló como producto secundario en la síntesis del Compuesto 103. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,78 (s, 1H), 4,12 (s, 1H), 3,22-2,91 (m, 9H), 2,78 (s, 3H), 2,49-2,21 (m, 1H), 1,77-1,62 (m, 1H), EM (ESI) m/z 430,46 (M + H).

Compuesto 136

Compuesto 136

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,04-7,98 (m, 2H), 7,47-7,39 (m, 3H), 4,08 (s, 1H), 3,14-2,92 (m, 9H), 2,57-2,47 (m, 1H), 2,28-2,7 (m, 1H), 1,73-1,65 (m, 1H), EM (ESI) m/z 526,26 (M + H).

Compuesto 165

Compuesto 165

5 Se aisló como producto secundario en la síntesis del Compuesto 136. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,29 (s, 1H), 7,98-7,81 (m, 2H), 7,47-7,32 (m, 3H), 4,07 (s, 1H), 3,14-2,92 (m, 9H), 2,61-2,49 (m, 1H), 2,28-2,18 (m, 1H), 1,78-1,65 (m, 1H), EM (ESI) m/z 492,30 (M + H).

10 El Compuesto 145 se preparó de acuerdo con el Esquema 15.

Esquema 15

Síntesis de S15-1.

Se pesaron en un vial de 8 ml el producto intermedio S14-1 (95,7 mg, 0,115 mmol), Pd(OAc)2 (2,7 mg, 0,012 mmol) y tri-(o-tolil)fosfina (7,0 mg, 0,023 mmol). Se selló este con un septo, y se vació y lavó abundantemente a 20 contracorriente con nitrógeno (x 3). Se añadieron acetonitrilo (2 ml), trietilamina (0,080 ml, 0,58 mmol) y aliloxi-tbutildimetilsilano (0,049 ml, 0,23 mmol). Se calentó la mezcla de reacción hasta 100 ºC. Tras 4 h, se enfrió la mezcla de reacción hasta la ta, se filtró a través de Celite y se concentró a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente:

25 100→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 55,5 mg (52 %) de una mezcla de los productos en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,6-15,5 (m, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,45-7,24 (m, 10H), 6,22-5,98 (m, 0,3H ), 5,27 (s, 2H), 4,86-4,78 (m, 1H), 4,78-4,50 (m, 1,3H), 4,36-4,30 (m, 0,7H), 3,98 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,65-3,55 (m, 0,7H), 2,98-2,88 (m, 1H), 2,87-2,55 (m, 8H), 2,54-2,30 (m, 9H), 2,11-2,4 (m, 1H), 0,84 (s, 9H), 0,71 (s, 9H), 0,17 (s, 3H), 0,06-0,05 (m, 9H), EM (ESI) m/z 921,74 (M + H ).

Síntesis de S15-2.

Se añadió fluoruro de tetrabutilamonio (solución 1,0 M en THF, 1 ml, 1 mmol) a una solución del producto intermedio S15-1 (55 mg, 0,060 mmol) en THF (1 ml). Tras 1 h, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. Se 5 disolvió el material en EtOAc, y se lavó con agua (x 3) y salmuera. Se secó el material sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se disolvió el alcohol en bruto en THF (2 ml), y se añadieron anhídrido metanosulfónico (10 mg, 0,060 mmol) y trietilamina (0,084 ml, 0,060 mmol). Tras 30 min, se añadió una porción más de anhídrido metanosulfónico (10 mg, 0,060 mmol). Tras 30 min, se añadió dimetilamina (solución 2,0 M en THF (0,3 ml, 0,6 mmol). Tras 30 min, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se purificó en un sistema 10 de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 50→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 14 mg (28 %) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,25 (s, 1H), 7,52-7,46 (m, 2H), 7,42-7,24 (m, 8H), 6,986,92 (m, 1H ), 6,88-6,78 (m, 1H), 5,36 (s, 2H), 4,90-4,75 (m, 2H), 4,08-4,00 (m, 1H), 3,75-3,66 (m, 2H), 3,06-3,00 (m,

15 1H), 2,84 (s, 6H), 2,82-2,70 (m, 8H), 2,65-2,40 (m, 8H), 2,21-2,13 (m, 1H), 0,79 (s, 9H), 0,26 (s, 3H), 0,11 (s, 3H), EM (ESI) m/z 834,70 (M + H).

Compuesto 145

20 Compuesto 145

Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S15-2 (14,0 mg, 0,0168 mmol) en 1,4-dioxano (0,6 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua (15 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (x 3), y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se 25 concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml), HCl 0,5 M en metanol (0,2 ml) y 1,4dioxano (1 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~5 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min;

30 Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→70 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 5,5 mg (50 %) del Compuesto 145 en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 4,20 (s, 1H), 3,70-3,58 (m, 1H), 3,38-3,20 (m, 7H), 3,14-2,88 (m, 17H), 2,66-2,53 (m, 1H), 2,42-2,34 (m, 1H), 2,33-2,24 (m, 2H), 1,75-1,63 (m, 1H), EM (ESI) m/z 544,40 (M + H).

Ejemplo 17. Preparación de Compuestos de Fórmula I, en la que Y es hidrógeno y Z es hidrógeno.

Los compuestos de Fórmula I, en la que Y es hidrógeno y Z es hidrógeno (así como los compuestos de Fórmula III, en la que Y es hidrógeno), se prepararon de acuerdo con el Esquema 16.

Esquema 16

10 A continuación, se describen detalladamente los productos intermedios y los compuestos específicos de la invención preparados mediante el Esquema 16.

Síntesis de S16-1-1.

15 Se calentaron el producto intermedio S1-2 (326 mg, 0,959 mmol), ácido 4-(trifluorometoxi)-bencilborónico (579 mg, 1,92 mmol), diclorobis(triciclohexilfosfin)-paladio (II) (16 mg, 0,048 mmol) y K3PO4 (814 mg, 17,7 mmol) hasta 100 ºC en tolueno (4 ml) y agua (1 ml). Tras 4 h, se añadió más ácido 4-(trifluorometoxi)-bencilborónico (579 mg, 1,92 mmol) y diclorobis(triciclohexilfosfin)-paladio (II) (16 mg, 0,0,048 mmol). Tras otras 4 h, se añadieron más ácido 4-(trifluorometoxi)-bencilborónico (579 mg, 1,92 mmol) y diclorobis(triciclohexilfosfin)paladio (II) (16 mg,

20 0,0,048 mmol). Tras calentar durante una noche, se dejó enfriar la mezcla de reacción hasta la ta y se diluyó con EtOAc (20 ml). Se lavó esto con agua (20 ml) y NaHCO3 (solución acuosa saturada, 20 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 20 g, gradiente de EtOAc del 0 al 35 %/hexanos), produciéndose 17,9 mg (4 %) del producto en forma de un sólido blanco. Rf = 0,21 en EtOAc al 30 %/hexanos. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,42 (s, 1H), 8,26 (s, 1H),

25 7,45-7,15 (m, 12H), 6,78-6,71 (m, 2H), 5,26 (s, 2H), 4,14 (s, 2H).

Síntesis de S16-2-1.

Se añadió una solución del producto intermedio S16-1-1 (43,8 mg, 0,0907 mmol) en THF (0,5 ml) gota a gota a una

5 solución a -78 ºC de diisopropilamida de litio (solución 1,8 M en hexanos, 0,050 ml, 0,091 mmol), y se añadió TMEDA (0,014 ml, 0,091 mmol) en THF (2 ml). Tras 5 min, se añadió una solución de S3-1 (14,6 mg, 0,0302 mmol) en THF (0,5 ml) gota a gota. Una vez completada la adición, se dejó calentar la mezcla de reacción hasta -20 ºC. La CL/EM indicó que quedaba una gran cantidad de S16-1-1 y S3-1. Se volvió a enfriar la mezcla de reacción hasta -78 ºC, y se añadió más diisopropilamida de litio (solución 1,8 M en hexanos, 0,050 ml, 0,091 mmol). Se dejó

10 calentar la mezcla de reacción hasta -10 ºC y se inactivó mediante la adición de cloruro de amonio (solución acuosa saturada), se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml). Se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B; recogida de fracciones

15 dirigida por la masa], produciéndose 3,9 mg (15 %) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 16,10 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 7,58-7,24 (m, 15H), 5,40-5,30 (m, 5H), 3,96 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,90-3,83 (m, 1H), 3,42-3,36 (m, 1H), 2,55-2,48 (m, 7H), 2,00-1,92 (m, 1H), 0,84 (s, 9H), 0,25 (s, 3H), 0,18 (s, 3H), EM (ESI) m/z 868,58 (M + H).

20 Compuesto de referencia 111

Compuesto 111

Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S16-2-1 (3,9 mg, 0,0045 mmol) en CH3CN (0,4 ml) en un vial

25 de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua (20 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (2 x 20 ml). Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml) y 1,4-dioxano (1 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~2 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 1 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida.

30 Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 10→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 1,7 mg (59 %, 2 etapas) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 8,29 (s, 1H), 7,40-7,20 (m, 5H), 3,95 (s, 1H),

35 3,70-3,00 (m ancho, 3H), 2,95-2,60 (m, 7H), 1,45-1,25 (m, 1H), EM (ESI) m/z 576,35 (M + H).

Síntesis del S16-1-2.

Se calentaron el producto intermedio S1-2 (104 mg, 0,306 mmol), pinacoléster de ácido alilborónico (154 mg,

5 0,918 mmol), diclorobis(triciclohexilfosfin)paladio (II) (5 mg, 0,015 mmol) y K3PO4 (195 mg, 0,918 mmol) hasta 200 ºC en tolueno (1 ml) y agua (0,1 ml) mediante microondas durante 5 min. Se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (10 ml). Se lavó esto con agua (5 ml) y salmuera (5 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 10 g, gradiente del EtOAc 0 al 30 %/hexanos), produciéndose 74,6 mg (71 %) del producto en forma de un aceite espeso. Rf = 0,43 en EtOAc

10 al 50 %/hexanos. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,55 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,50-7,29 (m, 8H), 7,15-7,5 (m, 2H), 6,00-5,89 (m, 1H), 5,36 (s, 2H), 5,12-5,5 (m, 2H), 3,48 (d, J = 6,44 Hz, 2H), EM (ESI) m/z 346,28 (M + H).

Síntesis de S16-2-2.

15 Se añadió gota a gota una solución del producto intermedio S16-1-2 (72 mg, 0,21 mmol) en THF (0,5 ml) a una solución a -78 ºC de diisopropilamida de litio (solución 1,8 M en hexanos, 0,23 ml, 0,42 mmol), y se añadió TMEDA (0,125 ml, 0,832 mmol) en THF (3 ml). Tras 5 min, se añadió una solución de S3-1 (50 mg, 0,10 mmol) en THF (0,5 ml) gota a gota. Una vez completada la adición, se dejó calentar la mezcla de reacción hasta 0 ºC durante

20 ∼45 min. Se inactivó la mezcla de reacción mediante la adición de cloruro de amonio (solución acuosa saturada) y se extrajo con EtOAc (x 3). Se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 18,7 mg

25 (26 %) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 16,09 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,52-7,24 (m, 10H), 5,80-5,70 (m, 1H), 5,62-5,56 (m, 1H), 5,41-5,26 (m, 5H), 3,89 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,26 (dd, J = 14,0 Hz, J = 9,76 Hz, 1H), 2,85 (t, J = 1 1,3 Hz, 1H), 2,60-2,38 (m, 8H), 2,24-2,14 (m, 1H), 0,81 (s, 9H), 0,25 (s, 3H), 0,13 (s, 3H), EM (ESI) m/z 734,70 (M + H).

30 Compuesto de referencia 113

Compuesto 113

Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S16-2-2 (18,7 mg, 0,025 mmol) en CH3CN (0,6 ml) en un vial

35 de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua (20 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (3 x 20 ml). Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (2 ml) y 1,4-dioxano (2 ml), y se añadieron HCl (conc., 2 gotas) y paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, 10 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de reacción durante 2 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el

40 filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→50 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 6,9 mg (52 %, 2 etapas) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 8,56 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 4,22 (s, 1H), 3,90-3,78 (m, 1H), 3,30-2,88 (m, 8H), 2,46-2,32 (m, 1H), 2,30-2,16 (m, 1H), 2,12-1,95 (m, 1H), 1,68-1,52 (m, 1H ), 0,96 (s ancho, 3H), EM (ESI) m/z 444,46 (M + H).

Los compuestos de Fórmula I, en la que X es hidrógeno y Z es -NC(O)-(alquilo C1-C6) (así como los compuestos de Fórmula II, en la que Z es -NC(O)-alquilo (C1-C6)) se prepararon de acuerdo con el Esquema 17.

Esquema 17

A continuación, se describen detalladamente los productos específicos y los compuestos intermedios de la invención preparados mediante el Esquema 17.

Síntesis del S17-1.

15 Se añadió el producto intermedio S2-3 (2,09 g, 6,22 mmol) a H2SO4 (conc., 25 ml) a 50 ºC. Tras 30 min, se añadió HNO3 (conc., 1,18 ml) en porciones de 0,2 ml cada 2 min. Según la CL/EM todavía quedaba material de partida, por lo que se añadió una porción más de HNO3 (conc., 0,50 ml). Se enfrió la mezcla de reacción hasta la ta y se vertió sobre hielo (100 ml). Se enjuagó el matraz de reacción con agua (50 ml) y esto se añadió a la mezcla de hielo. Se

20 extrajo esto con EtOAc (3 x 100 ml), y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se calentaron el material en bruto, el bromuro de bencilo (1,0 ml, 8,4 mmol) y Cs2CO3 hasta 70 ºC en acetonitrilo (40 ml). Tras 2 h, se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se diluyó con agua (50 ml). Se extrajo esto con EtOAc (3 x 50 ml), y se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna

25 (columna Biotage de 20 g, gradiente de EtOAc del 0 al 10 % en hexanos), produciéndose 972 mg (41 %) del producto en forma de un sólido amarillo. Rf = 0,45 en EtOAc al 50 %/hexanos. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,467,24 (m, 5H), 5,09 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), EM (ESI) m/z 381,28 (M + H).

Síntesis de S17-2.

Se añadió polvo de cinc (870 mg, 13,3 mmol) en porciones de ∼200 mg a una solución del producto intermedio S171 (507 mg, 1,33 mmol) en ácido acético (4 ml) y THF (16 ml) durante ~10 min. Tras 1 h, se filtró el material a través 5 de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se disolvió el material en EtOAc (50 ml) y se lavó con NaHCO3 (solución acuosa saturada, 2 x 50 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se calentaron el material en bruto, dicarbonato di-t-butílico (762 mg, 3,49 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (14 mg, 0,12 mmol) hasta 70 ºC en N,N-dimetilformamida (5 ml). Tras calentar durante una noche, se añadió una porción más de dicarbonato di-t-butílico (300 mg, 1,37 mmol). Tras 30 min, se enfrió la mezcla 10 de reacción hasta la temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc (20 ml), y se lavó con agua (3 x 20 ml) y salmuera (20 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 10 g, gradiente de EtOAc del 0 a 14 % en hexanos), produciéndose 464 mg (78 %) del producto en forma de un sólido ceroso de color blanco. Rf = 0,37 en EtOAc al 20 %/hexanos. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,46-7,29 (m, 5H), 4,85 (s, 2H), 3,89 (s, 3H), 2,29 (s,

15 3H), 1,34 (s, 18H), EM (ESI) m/z 551,42, 553,42 (M + H).

Síntesis de S17-3.

20 Se añadió monohidrato de hidróxido de litio (300 mg, 7,16 mmol) a una solución de S17-2 (395 mg, 0,716 mmol) en metanol (5 ml), THF (5 ml) y agua (50 ml). Se calentó la mezcla de reacción hasta 50 ºC. Tras calentar durante una noche, se llevó la mezcla de reacción a pH ~2 con HCl 1 N y se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml). Se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se agitaron el material en bruto, fenol (126 mg, 1,33 mmol), hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (153 mg, 0,998 mmol), diisopropilcarbodiimida

25 (0,156 ml, 0,998 mmol) y diisopropiletilamina (0,347 ml, 2,00 mmol) durante 2 h en N,N-dimetilformamida (1 ml) y cloruro de metileno (5 ml). Se añadió una porción más de fenol (126 mg, 1,33 mmol), y se calentó la mezcla de reacción hasta 40 ºC. Tras 3 h, se enfrió la mezcla de reacción hasta la temperatura ambiente, y el se eliminó cloruro de metileno a presión reducida. Se añadieron dicarbonato di-t-butílico (725 mg, 3,33 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (8 mg, 0,07 mmol), y se calentó la mezcla de reacción hasta 70 ºC. Tras 30 min, se enfrió la mezcla de reacción a

30 temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc (50 ml), y se lavó con agua (3 x 30 ml) y salmuera (30 ml). Se secaron los orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material mediante cromatografía en columna (columna Biotage de 20 g, gradiente de EtOAc del 0 al 10 % en hexanos), produciéndose 319 mg (78 %) del producto en forma de un aceite espeso e incoloro. Rf = 0,37 en EtOAc al 15 %/hexanos. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,39-7,30 (m, 8H), 6,98 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 5,00 (s, 2H), 2,49 (s, 3H), 1,40 (s, 18H), EM (ESI)

35 m/z 613,49, 615,49 (M + H).

Síntesis del S17-4.

Se añadió diisopropilamida de litio (suspensión al 10 % en peso en hexanos, 0,60 ml, 0,40 mmol) en porciones de

40 ∼0,020 ml a una solución a -78 ºC del producto intermedio S17-3 (76,2 mg, 0,124 mmol), TMEDA (0,070 ml, 0,58 mmol) y S3-1 (35 mg, 0,072 mmol) en THF (2 ml). En este momento, persistió una solución de color rojizo, y se dejó calentar la mezcla de reacción hasta 0 ºC. Se inactivó la mezcla de reacción mediante la adición de cloruro de amonio (solución acuosa saturada) y se extrajo con EtOAc (x 2). Se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 40 mg (55 %) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,46 (s, 1H), 7,56-7,24 (m, 10H), 5,36 (s, 2H), 4,93 (dd, J = 36,0 Hz, J = 9,8 Hz, 2H), 3,90 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,28 (dd, J = 16,5 Hz, J = 5,48 Hz, 1H), 3,14-3,5 (m, 1H), 2,65-2,42 (m, 9H), 2,17 (d, J = 14,6 Hz, 1H), 1,40 (s, 18H), 0,81 (s, 9H), 0,26 (s, 3H), 0,12 (s, 3H), EM (ESI) m/z 1001,86; 1003,86 (M + H).

Síntesis de S17-5-1.

10 Se agitó el producto intermedio S17-4 (84,1 mg, 0,0,0839 mmol) en HCl 4 M en 1,4 -dioxano (2 ml) y 1,4-dioxano (2 ml) durante una noche. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. Se disolvió aproximadamente 1/3 del material en piridina (0,25 ml), y se añadió cloruro de t-butilacetilo (0,0039 ml, 0,028 mmol). Tras 2 h, se añadió más cloruro de t-butilacetilo (2 gotas), y se calentó la mezcla de reacción hasta 40 ºC. Tras 30 min, se observó la

15 diacilación completa mediante CL/EM. Se añadieron Na2CO3 (solución acuosa 1 M, 1 ml), metanol (1 ml) y THF (1 ml), y se continuó calentando hasta 40 ºC. Tras calentar durante una noche, se ajustó el pH a ~7 con HCl acuoso 1 M, y se extrajo esto con EtOAc (x 3). Se secaron los extractos combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 μm, 19 x 50 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %;

20 Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 80→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa], produciéndose 7,6 mg (30 %) del producto deseado en forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 15,47 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,54-7,48 (m, 2H), 7,42-7,32 (m, 8H), 5,36 (s, 2H), 4,94 (dd, J = 59,8 Hz, J = 11,0 Hz, 2H), 3,88 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,23 (dd, J = 16,5 Hz, J = 4,88 Hz, 1H), 3,12-3,2 (m, 1H), 2,65-2,42 (m, 9H), 2,36-2,14 (m, 3H), 1,02 (s, 9H), 0,82 (s, 9H), 0,27 (s, 3H), 0,13 (s, 3H), EM (ESI) m/z 899,75; 901,74 (M + H).

25 Compuesto 127

Compuesto 127

30 Se añadió HF acuoso (0,4 ml, 48 %) a una solución de S17-5-1 (7,6 mg, 0,0084 mmol) en CH3CN (0,6 ml) en un vial de plástico. Tras 18 h, se vertió la mezcla de reacción en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua (10 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (3 x 15 ml). Se secaron los extractos de EtOAc combinados sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el material en metanol (1 ml) y 1,4-dioxano (1 ml), y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ∼15 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno, y se agitó la mezcla de

35 reacción durante 1 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el material en un sistema de autopurificación de Waters dotado de una columna 100A de fase inversa de 10 μm Phenomenex Polymerx [10 μm, 30 x 21,20 mm; caudal: 20 ml/min; Disolvente A: HCl 0,05 N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0→100 % de B; recogida de fracciones dirigida por la masa]. Se recogieron las fracciones con el PM deseado y se liofilizaron, produciéndose 2,0 mg (42 %, 2 etapas) del producto deseado en

40 forma de un sólido de color amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCl) δ 7,82 (s, 1H), 4,18 (s, 1H), 3,40-2,95 (m, 9H), 2,65-2,54 (m, 3H), 2,36-2,28 (m, 1H), 1,70-1,59 (m, 1H), 1,12 (s, 9H), EM (ESI) m/z 529,54 (M + H).

Ejemplo 19. Ensayos antibacterianos

Las actividades antibacterianas de los compuestos de la invención se estudiaron de acuerdo con los siguientes protocolos. 5 Ensayo de concentración inhibidora mínima

Se descongelaron cepas bacterianas congeladas y se subcultivaron en caldo Mueller Hinton (MHB) u otros medios apropiados (Streptococcus requieren sangre y Haemophilus requiere hemina y NAD). Tras la incubación durante una 10 noche, se subcultivaron las cepas en agar Mueller Hinton y se volvieron a incubar durante una noche. Se observaron colonias en busca de la morfología apropiada de las mismas y ausencia de contaminación. Se seleccionaron colonias aisladas para preparar un inóculo de partida equivalente a un patrón de 0,5 de McFarland. Se diluyó el inóculo de partida 1:125 usando MHB para un uso posterior. Los compuestos de ensayo se prepararon mediante dilución en agua estéril a una concentración final de 5,128 mg/ml. Se volvieron a diluir antibióticos (criocongelados,

15 descongelados y usados en las 3 horas posteriores a la descongelación) y los compuestos hasta las concentraciones de trabajo deseadas.

Los ensayos se realizaron de la siguiente manera. Se añadieron cincuenta μl de MHB a los pocillos 2-12 de una placa de 96 pocillos. Se añadieron cien μl de antibiótico o compuesto diluidos apropiadamente al pocillo 1. Se 20 retiraron cincuenta μl de antibióticos o compuesto del pocillo 1 y se añadieron al pocillo 2, y se mezcló el contenido del pocillo 2 pipeteando arriba y abajo cinco veces. Se retiraron cincuenta μl de la mezcla del pocillo 2 y se añadieron al pocillo 3, y se mezcló como antes. Se continuó con las diluciones en serie de la misma manera hasta el pocillo 12. Se retiraron cincuenta μl de la mezcla del pocillo 12 de modo que todos contenían 50 μl. Entonces, se añadieron cincuenta μl del inóculo de trabajo a todos los pocillos de ensayo. Se preparó un pocillo de control del

25 crecimiento añadiendo 50 μl del inóculo de trabajo y 50 μl de MHB a un pocillo vacío. A continuación, se incubaron las placas a 37 ºC durante una noche, se retiraron de la incubadora y se leyó cada pocillo en un espejo de lectura de placas. Se registró la concentración más baja (CIM) del compuesto de ensayo que inhibía el crecimiento de las bacterias.

30 Ejemplo:

1

2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

[Abt]

32 16 8 4 2 1 0,5 0,25 0,125 0,06 0,03 0,015

Crecimiento

- - - - - + + + + + + +

[abt] = concentración de antibiótico del pocillo; Crecimiento = crecimiento bacteriano (turbidez) Interpretación: CIM = 2 mg/ml

Protocolo para la determinación de la concentración del inóculo (recuento de viables)

35 Se pipetearon noventa μl de NaCl al 0,9 % estéril en los pocillos 2-6 de una placa de microtitulación de 96 pocillos. Se pipetearon cincuenta μl del inóculo en el pocillo 1. Se retiraron diez μl del pocillo 1 y se añadieron al pocillo 2, tras lo que se mezclaron. Se retiraron diez μl del pocillo dos y se mezclaron con el contenido del pocillo 3, y así sucesivamente creando diluciones en serie hasta el pocillo 6. Se retiraron diez μl de cada pocillo y se aplicaron puntualmente sobre una placa de agar apropiada. Se colocó la placa en una incubadora de CO2 durante una noche.

40 Se contaron las colonias de las manchas que contenían distintas colonias. El recuento de viables se calculó multiplicando el número de colonias por el factor de dilución.

Mancha del pocillo

1 2 3 4 5 6

Factor de dilución

102 103 104 105 106 107

Cepas bacterianas

En los ensayos de concentración inhibidora mínima (CIM), se examinaron quince cepas bacterianas, que se enumeran a continuación.

ORGANISMO

DESIGNACIÓN DE LA CEPA PROPIEDADES CLAVE

Staphylococcus aureus

SA100 ATCC 13709, MSSA, Cepa Smith

Staphylococcus aureus

SA101 ATCC 29213, cepa de control de calidad del CLSI, MSSA

Staphylococcus aureus

SA191 HA-MRSA, resistente a las tetraciclinas, aislado de modelo de infección pulmonar

Staphylococcus aureus

SA161 HA-MRSA, resistente a las tetraciclinas, tet(M)

Staphylococcus aureus aaaureusaureus

SA 158 Resistente a las tetraciclinas tet(K)

Staphylococcus epidermidis

SE164 ATCC 12228, cepa de control de calidad del CLSI, resistente a las tetraciclinas

Enterococcus faecalis

EF103 ATCC 29212, tet-I/R, cepa de control

Enterococcus faecalis

EF159 Resistente a las tetraciclinas, tet(M)

Enterococcus faecalis

EF327 Aislado de herida (EE.UU.) tet(M)

Enterococcus faecium

EF404 Aislado de sangre (EE.UU.) tet(M)

Streptococcus pneumoniae

SP106 ATCC 49619, cepa de control de calidad del CLSI

Streptococcus pneumoniae

SP160 Resistente a las tetraciclinas, tet(M)

Streptococcus pyogenes

SP312 Aislado clínico de 2009, tet(M)

Streptococcus pyogenes

SP193 S. pyogenes para modelos de eficacia; tetS; sensible a sulfonamidas

Haemophilus influenzae

HI262 Resistente a las tetraciclinas, resistente a la ampicilina

Moraxella catermalis

MC205 ATCC 8176, cepa de control de calidad del CLSI

Escherichia coli

EC107 ATCC 25922, cepa de control de calidad del CLSI

Escherichia coli

EC155 Resistente a las tetraciclinas, tet(A)

Escherichia coli

EC878 MG1655 tolC::kan

Escherichia coli

EC880 IpxA

Escherichia coli

EC882 impA

Escherichia coli

EC200 Uropatogénicas MDR; serotipo O17:K52: H18; UMN 026; trimet/sulfa-R; BAA-1161

Enterobacter cloacae

EC108 ATCC 13047, tipo natural

Enterobacter cloacae

EC603 Aislado de orina (España)

Klebsiella pneumoniae

KP109 ATCC 13883, tipo natural

Klebsiella pneumoniae

KP153 Resistente a las tetraciclinas, tet(A), MDR, ESBL+

Klebsiella pneumoniae

KP457 2009 ESBL+, CTX-M, OXA

Proteus mirabilis

PM112 ATCC 35659

Proteus mirabilis

PM385 Aislado ESBL+ de orina

Pseudomonas aeruginosa

PA111 ATCC 27853, tipo natural, cepa de control

Pseudomonas aeruginosa

PA169 Tipo natural, precursora de PA170-173

Pseudomonas aeruginosa

PA173 PA170 ΔmexX; MexXY-(carente de bomba de eflujo funcional)

Pseudomonas aeruginosa

PA555 ATCC BAA-47, cepa PAO1 de tipo natural

Pseudomonas aeruginosa

PA556 Cepa con gen para la bomba de eflujo múltiple-Mex desactivado

Pseudomonas aeruginosa

PA689 Aislado de sangre (EE.UU.)

Acinetobacter baumannii

AB110 ATCC 19606, tipo natural

Acinetobacter baumannii

AB250 Aislado de fibrosis quística, MDR

Stenotrophomonas maltophilia

SM256 Aislado de fibrosis quística, MDR

Burkholderia cenocepacia

BC240 Aislado de fibrosis quística, MDR

*MDR, resistente a múltiples fármaco; MRSA, S. aureus resistente a la meticilina; MSSA, S. aureus sensible a la meticilina; HA-MRSA, MRSA hospitalaria; tet(K), mecanismo principal de eflujo de resistencia a las tetraciclinas de Gram-positivas; tet(M), mecanismo principal de protección ribosomal de resistencia a las tetraciclinas de gram-positivas; ESBL+ , β-lactamasa de espectro ampliado.

Resultados

Los valores de concentración de inhibición mínima (CIM) para los compuestos de la invención y para los Compuestos de referencia 102, 111 y 113 se proporcionan en la Tabla 2.

Tabla 2: Valores de CIM para los compuestos de la invención en comparación con la sanciclina, la minociclina y la tigeciclina. A = inferior o igual a la CIM más baja entrelos tres compuestos de control; B = superior a la CIM más baja entre los tres compuestos de control, pero inferior a la CIM máxima entre tres compuestos de control; C =superior a la CIM de los tres compuestos de control.

Comp.

SA101 29213 SA100 13709 SA161MRSA,tetM SA158 tetK EF10329212 EF159tetM SP10649619 SP160tetM EC107 25922 EC155 tetA AB110 19606 PA111 27853 EC108 13047 KP109 13883 KP153 tetA

100

C C C C B C C B C C C C C C C

101

A A B B B B A B B B A A B B B

102

B B C C C C B C B C C A B B C

103

C C B C B B C B B C c C C B C

104

C B B B B B C B C B C C C C C

105

C C C C C C C C C C C C C C C

106

C C C C C B C B C C C C C C C

107

C C B B B B C C C C C C C C C

108

B B B B B B B B B B C C B B B

109

A B C B B C B B B C C A B B C

110

A A B B B B B B B B A B B B B

111

C C NT B B B C B C C C C C C C

112

B B B B B B C B C C C C C C C

113

B B C C C C NT C B C B C B B C

114

B B B B B B C B B B B B B B B

115

C B B B B B C B C C C C C C C

116

C C C C C C C C C C C C C C C

117

C C C C C C C C C C C C C C C

118

C C C C C C C C C C C C C C C

119

C C B B B C C B B C C C C C C

120

C C C C B C C B B C C C C C C

121

B B B B B C B C B C C C B B C

122

C C C C C C C C C C C C C C C

123

C B C C C C c c B C c c B B C

124

A A B B B B B B B B A B B B B

125

B B B C B B B B B C C A B B C

126

B B B B B B C C C C C C C C C

127

C C C C C C C C C C C C C C C

128

C C C C C C C C C C C C C C C

129

B B B B B B B B B B C C B B B

130

C C C B B B C B B B C C B B B

131

C C B B B B C C C C C C C C C

132

C C C C B C C C B C C C B B C

133

C B B B B B C B B B C C B B B

134

C C C C C C C C C C c C C C C

135

C C C B B B C B B B c C C C B

136

C B B B B B C B C C c C C C C

137

C C C C C C C C C C c C C C C

138

C C C C C C C C C C c C C C C

139

C B B B B B C C C C c C C C C

140

C C B B B B C B B B c C B B B

141

B B B B B B C B C C c c C C C

142

C C C C B B C B C C c c C B C

143

B B C C B C B B B C c c B B C

144

A B B C B C A B B C B A B B C

145

C C C C C C C B B C c C C C C

146

C B C C B C C C B C C A B B C

147

B A B C B C A B B C c A B B C

148

C B B B B B C C C c c C C C c

149

C C C C B B C B C c c C C C c

150

A A B B B B B B B B B C B B c

151

B B B B B B A B B B C C B B B

152

B B C B C C B C B C C B B B C

153

B B B B B B B B B C B C C C C

154

B B B B B B C C C C C C C C C

155

C C C C C C C C C C C C C C C

156

A B B B B B B B B B C C C B B

157

C B B B B B C C C C C c C C C

158

C C C C C C C C B C C C B B C

159

C C C C C C C C B C C C B C C

160

B B C B B C B B B C B C B B C

161

C C C C C C C C c C C C C C C

162

B B B B B B C B C C C C C C C

163

C C C C B B C B B C C c C C C

164

C C C C C C C C C C C c C C C

165

C C B C B B C B C C C c C C C

San.

0,5 1 NT 4 8 8 0.25 8 8 32 0,25 > 32 8 8 32

Mino.

0,06 0,06 8 0,03 1 16 < 0,015 2 0,5 8 0,06 16 2 1 8

Tige.

0,06 0,06 0,125 0,06 0,03 0,06 0,0156 0,0156 0,03 0,5 0,25 8 0,25 0,125 1

Ejemplo 20: Estudios in vitro de los compuestos 108, 124, 141, 133 y 151 seleccionados

Actividades antibacterianas

5 Se evaluaron las actividades antibacterianas de los compuestos 108, 124, 141, 133 y 151 frente a paneles de aislados clínicos de E. faecalis, S. pneumoniae y S. aureus en los protocolos de ensayos antibacterianos descritos anteriormente.

La CIM50 y CIM90 son las concentraciones inhibidoras mínimas requeridas para inhibir respetuosamente el

10 crecimiento del 50 % de los organismos o del 90 % de una colección de organismos. Se determinaron ambos valores, así como el intervalo de CIM (el valor de CIM más bajo y más alto observado para una colección de organismos), para los aislados enumerados en la Tabla 3.

Resultados 15

Tabla 3

S. pneumoniae

MRSA E. faecalis

19 aislados

30 aislados 24 aislados

Compuesto

CIM50 CIM90 Intervalo CIM50 CIM90 Intervalo CIM50 CIM90 Intervalo

124

1 4 ≤ 0,016-8 0,5 2 0,25-4 4 4 0,008-4

151

0,063 0,25 ≤ 0,016-0,25 1 2 0,5-8 0,5 2 0,031-4

133

0,13 0,25 ≤ 0,016-0,25 1 2 0,5-8 1 2 0,25-4

141

4 4 0,25-8 4 4 2-4 8 8 1-8

108

0,0312 0,125 ≤ 0,016-0,13 0,5 2 0,5-8 0,5 2 0,063-4

tetraciclina

32 >32 0,031->32 0,25 >32 0,25->32 >32 >32 0,5->32

tigeciclina

≤ 0,016 ≤ 0,016 ≤ 0,016 0,13 0,13 0,063-0,25 0,063 0,13 ≤ 0,016-0,13

doxiciclina

4 16 ≤ 0,016-16 0,25 8 0,063-8 8 16 0,063-16

Actividad de los compuestos contra E. coli que expresan recombinantemente tet(M) o tet(K)

Los primeros antibióticos de tetraciclina fueron descubiertos hace más de 50 años, y representaron un importante avance en el tratamiento de muchas infecciones bacterianas Gram-positivas y Gram-negativas. Sin embargo, tras su 5 uso generalizado inicial, la alta incidencia de resistencia a las tetraciclinas entre muchas bacterias llevó a que las tetraciclinas fueran relegadas a una terapia de segundo o tercer plano. Los dos mecanismos principales de resistencia a las tetraciclinas adquiridos son la protección ribosomal y el eflujo del fármaco activo. La protección ribosomal está mediada por una de las 14 clases de proteínas que eliminan la tetraciclina y compuestos relacionados de su sitio de unión en la subunidad ribosómica 30S e incluyen proteínas de tipo tet(M) y tet(O) (véase

10 la dirección de internet faculty.washington.edu/marilynr para consultar la lista completa). Las bombas de eflujo específicas de las tetraciclinas se pueden clasificar en 26 clases e incluyen tet(K) y tet(L), encontrados principalmente en las bacterias Gram-positivas, y tet(A) y tet(B), encontrados principalmente en las bacterias Gramnegativas.

15 Construcción de DH10BpBAD-tetM) y DH10B(pBAD-tetK)

Para determinar si los nuevos tetracíclicos eran igualmente activos en presencia o en ausencia de los mecanismos resistentes a las tetraciclinas Tet(M) y tet(K), se construyeron cepas de E. coli recombinantes para expresar cualquier proteína tras la inducción con arabinosa. Se clonaron los genes que codifican tet(M) y tet(K) por PCR a 20 partir de S. pneumoniae (SP160) y S. aureus (SA158) resistentes a las tetraciclinas, respectivamente, usando cebadores que permitieron la clonación en los sitios NcoI y XhoI del vector de expresión inducible por arabinosa, pBAD/Myc-His (Invitrogen, Carlsbad, CA). Se transformaron las construcciones en E. coli DH10B para la expresión. Se indujeron previamente las cepas recombinantes en condiciones optimizadas con L-arabinosa antes de su uso como inóculos en los ensayos de CIM estandarizados del CLSI. La preinducción óptima de DH10B (pBAD-tetM), que

25 expresaba tet(M), y DH10B (pBAD-tetK), que expresaba tet(K), fue con 1 % de L-arabinosa en 35 ºC y 0,1 % de Larabinosa a temperatura ambiente, respectivamente. Se incubaron los ensayos de CIM durante una noche a 35 ºC.

Resultados

30 Como se muestra a continuación, a diferencia de la tetraciclina y la doxiciclina, de los compuestos analizados, las actividades del compuesto 151, compuesto 108 y compuesto 133 son afectadas mínimamente por la expresión de (tet)M y no son afectadas por la expresión de (tet)K. Como era de esperar, las actividades de los antibióticos distintos de la tetraciclina (levofloxacina, amikacina y ceftriaxona) no se vieron afectadas por la expresión de los genes tet, mientras que las CIM de la tetraciclina y la doxiciclina en presencia de la expresión de tet(K) fueron más

35 de 8 y 4 veces superiores, respectivamente, que cuando no se expresó tet(K). Del mismo modo, las CIM de la tetraciclina y la doxiciclina se vieron afectadas cuando se expresó la proteína DE protección ribosomal Tet(M). Por lo tanto, los compuestos 151, 108 y 133 son igualmente activos según lo medido por la actividad de células enteras en presencia de cualquier tipo de mecanismo principal de resistencia a las tetraciclinas.

40 Tabla 4: Potencia de los compuestos en presencia de eflujo de Tet(K)

Compuesto

No inducido Inducido por TetK Proporción de TetM

124

8 16 2

151

1 1 1

108

4 2 0,5

133

2 1 0,5

141

>32 32 nd

Tetraciclina

4 >32 >8

Doxiciclina

2 8 4

Levofloxacina

0,0156 0,0156 1

Amicacina

8 8 1

Ceftriaxona

0,125 0,25 2

Tabla 5: Potencia de los compuestos contra la protección ribosomal de Tet(M)

Compuesto

No inducido Inducido por TetM Proporción

124

4 16 4

151

0,5 1 2

108

2 2 1

133

0,5 2 4

141

32 32 1

Tetraciclina

4 >32 >8

Doxiciclina

4 32 8

Levofloxacina

0,0156 0,0156 1

Amicacina

4 4 1

Ceftriaxona

0,0625 0,125 2

Ensayo de transcripción/traducción in vitro

5 Se analizaron soluciones madre de los compuestos preparadas y diluidas en agua desionizada estéril en cuanto a la inhibición de la transcripción/traducción in vitro acoplada usando un sistema de extracto S30 de E. coli con una lectura de luciferasa de luciérnaga de Promega (Cat Nº L1020, Madison, WI). En síntesis, se diluyeron los compuestos en agua y se añadieron a la mezcla de reacción dividida en alícuotas para placas de microtitulación de 96 pocillos con pared trasera (Cat Nº 3650, Costar, Corning, NY). Se usó una titulación de tres puntos apropiada

10 para cada compuesto, y las reacciones se realizaron por duplicado. El volumen final de reacción total fue de 20 μl. Se incubaron las placas a 37 ºC durante una hora y luego se colocaron sobre hielo durante 5 minutos para detener la transcripción/traducción. Se añadió sustrato de luciferasa (25 μl, Promega Cat. Nº E1500) a cada pocillo y se detectó la luminiscencia en un instrumento BMG LabTech LUMIstar-OPTIMA. Se promediaron los valores de control de ensayo positivos, de reacciones sin inhibidor, por placa para determinar el porcentaje de inhibición de la

15 producción de luciferasa. Los resultados se representaron gráficamente usando Microsoft Excel y se determinaron los valores de inhibición del cincuenta por ciento (CI50).

Resultados

20 Como se muestra en la Tabla 6, los compuestos representativos de esta clase, los compuestos 151, 108 y 133, tienen valores de CI50 por debajo de los μg/ml (0,7, 0,62, 0,6 μg/ml, respectivamente) en un sistema de transcripción/traducción in vitro, que mantiene un mecanismo de acción contra la traducción.

Tabla 6: Ensayo de transcripción/traducción in vitro

Compuesto

CI50 de TnT

124

> 4,5

151

0,89

108

0,6

133

0,56

141

> 4,5

Tetraciclina

1,7

Doxiciclina

2,63

TIG

0,3

Levofloxacina

Amicacina

Ceftriaxona

Como se muestra en la Tabla 7, los compuestos representativos de esta clase, los compuestos 109, 125, 132, 120, 149, 119 y 151, tienen valores de CI50 por debajo de los μg/ml en un sistema de transcripción/traducción in vitro, que mantiene un mecanismo de acción contra la traducción.

Tabla 7: Datos de ensayo de transcripción/traducción (TnT)

Compuesto

CI50 de TnT (μg/ml)

109

0,76

147

1,1

125

0,93

132

0,78

120

0,36

149

0,71

119

0,58

151

0,70

104

5,3

114

2,8

141

3,4

Tetraciclina

2,0

Tigeciclina

0,47

Ejemplo 21: Estudios in vitro de los compuestos 109, 123, 144, 151, 108 y 133

Actividades antibacterianas

10 Se estudiaron las actividades antibacterianas de los compuestos 109, 123, 144, 151, 108 y 133 de acuerdo con el ensayo antibacteriano descrito anteriormente. Las actividades antibacterianas de los valores de CIM de los compuestos se determinaron de acuerdo con la metodología del CLSI. Los aislados clínicos recientes se obtuvieron de Eurofins-Medinet. Los antibióticos se obtuvieron de fuentes comerciales convencionales.

15 Resultados

Los resultados mostraron que, a diferencia de la tetraciclina, cuya actividad se vio gravemente abrogada por estos mecanismos, la actividad antibacteriana de los compuestos 108, 151 y 133 se mantuvo potente contra las cepas 20 tet(M) y tet(S) de E. faecalis (≤ 4 μg/ml)), cepas tet(M) de S. pneumoniae (≤ 0,25 μg/ml), cepas tet(M) de S. aureus (≤ 8 μg/ml) y cepas tet(K) de S. aureus (≤ 1 μg/ml).

Tabla 8: Compuestos representativos y espectro de actividad

Compuesto

E. coli S. aureus E. faecalis S. pneumoniae E. coli

TnT

ATCC 29213 MRSA, tet M tetK ATCC 29212 tetM ATCC 49619 tetM ATCC 25922 tetA

g/ml

g/ml

g/ml

g/ml

g/ml

g/ml

g/ml

g/ml

g/ml

g/ml

tetraciclina

1,7 0,25 64 16 8 64 0,063 16 1 >64

doxiciclina

2,6 0,13 8 2 4 4 0,06 4 1 32

minociclina

3,1 0,06 8 0,03 1 16 <0,016 2 0,5 8

109

0,9 0,031 16 2 1 32 0,031 8 0,13 >32

123

n/d 1 32 32 32 >32 1 32 2 >32

144

n/d 0,031 8 8 4 32 0,016 8 0,25 >32

151

0,7 0,25 2 0,13 0,25 2 0,063 0,5 0,5 8

108

0,62 0,25 2 0,13 0,5 2 0,031 0,25 2 8

133

0,6 1 2 0,5 0,5 2 0,5 1 1 8

Ejemplo 22. Actividades in vitro e in vivo del Compuesto 109 y 151

Actividad antibacteriana

Se analizaron el Compuesto 109 y el Compuesto 151 para determinar la actividad antibacteriana de acuerdo con los protocolos descritos anteriormente. Los valores de CIM, CIM50 y CIM90 se determinaron de acuerdo a la metodología del CLSI. Los aislados de S. pneumoniae y H. influenzae se obtuvieron de Eurofins-Medinet, siendo aislados clínicos recientes. Las cepas de S. aureus se obtuvieron de diversas fuentes geográficas.

Tabla 9: CIM (μg/ml) contra el panel de exploración de patógenos bacterianos

Comp.

S.aureus ATCC 29213 S.aureus ATCC 13709 MRSA (tet)MSA161 S.aureus SA158(tet)K E.faecalisATCC 29212 E.faecalisEF159(tet)M S.pneumATCC 49619 S.pneumSP160(tet)M E. coliATCC 25922 E. coliEC155 (tet)A A baumAB110 P.Aeruginosa ATCC 27853 EnterobactercloaceaeATCC13047 Klebsiella pneumATCC 13883 KlebsiellapneumKP153(tet)A

109

0,03 0,13 32 1 1 32 0,03 8 0,13 >32 0,5 8 1 0,5 >32

151

0,25 0,5 2 0,125 0,25 2 0,016 0,125 0,5 8 2 32 2 2 8

Tetraciclina

0,5 1 32 >32 16 >32 0,25 >32 2 >32 1 32 2 4 >32

Doxiciclina

0,5 0,13 8 2 4 8 0,25 8 1 32 2 >32 4 2 32

Tabla 10: Análisis de CIM50 y CIM90 (μg/ml)

Comp.

S. aureus (n = 20) S. pneumoniae (n = 20) H. influenzae (n = 12)

Intervalo de CIM

CIM50 CIM90 Intervalo de CIM CIM50 CIM90 Intervalo de CIM CIM50 CIM90

109

� 0,016-1 � 0,016 � 0,016 � 0,016-8 2 4 0,063 -4 0,5 2

151

0,063-0,5 0,13 0,25 �0,016 0,063 � 0,016 0,063 0,25 - 2 1 1

Tetraciclina

0,06-32 0,13 0,25 0,13->32 >32 >32 0,25 -16 0,5 16

Doxiciclina

ND ND ND � 50,016 16 8 8 0,5 - 4 1 4

Oxacilina/ Amoxicilina

0,06-64 8 64 � 0,016 -8 8 8 2-32 4 16

Análisis farmacocinético del Compuesto 109 y Compuesto 151

5 Se determinaron las propiedades farmacocinéticas del Compuesto 109 y Compuesto 151 en ratas Sprague-Dawley (n = 5 y 3, respectivamente) tras una sola dosis de 1 mg/kg o IV/10 mg/kg po usando el programa informático de modelización Pharsight® WinNonlin, versión 5.2. La biodisponibilidad oral de la tetraciclina en ratas es del 12,1 %.

10 Resultados:

Para el Compuesto 109, se obtuvieron los siguientes parámetros farmacocinéticos tras la administración IV: ABC: 1087 ng x h/ml, Cl 919 ml/h/kg, Vz 4177 ml/kg y T1/2 de 3 h. La biodisponibilidad oral en la rata fue del 13 %.

15 Tabla 11: Farmacocinética del Compuesto 109 y Compuesto 151 en ratas Sprague-Dawley.

Parámetro

151, IV (n = 3) 151, PO (n = 3) 109, IV (n = 5) 109, PO (n = 5)

Media

DE Media DE Media DE Media DE

Semivida (h)

4,30 0,10 5,21 0,42 3,14 0,51 4,51 2,59

Tmax (h)

0,22 0,24 0,83 0,29 0,08 0,00 1,40 0,55

Clobs (ml/h/kg)

202,34 14,07 -- -- 918,65 68,61 -- --

Vzobs (ml/kg)

1256,14 102,39 -- -- 4176,97 861,89 -- --

ABCfinal (h•ng/ml)

4872,33 359,13 394,91 92,72 1086,51 86,55 1247,57 206,78

Cmax (ng/ml)

2404,67 1534,79 69,77 4,88 602,80 286,03 192,20 32,22

%F

0,80% 12,74%

Modelos de infección sistémica en ratones

Se analizaron los compuestos para determinar la actividad antibacteriana in vivo en un modelo de infección

20 sistémica (septicemia) en ratones. En el modelo, ratones CD-1 hembra (18-20 gramos) recibieron una inyección IP con un inóculo que resultó tener una supervivencia del 0 % en las 24 a 48 horas. Previamente, se estableció la dosis bacteriana que permitió lograr este efecto a través de estudios de virulencia. A la hora de la infección, los ratones recibieron bien 3 mg/ml IV o 30 mg/ml PO. Por lo general, se trataron seis ratones por grupo de dosis. Se evaluó y se registró la supervivencia de los animales durante 48 horas. Se registró el porcentaje de supervivencia a las 48

25 horas para cada compuesto.

a) Modelo de septicemia de S. aureus

Se mezcló S. aureus ATCC 13709 (Smith) con mucina al 5 %, y se inoculó por inyección intraperitoneal a 2,1 x

30 106/ratón. Una hora después de la estimulación, los ratones recibieron tratamiento intravenoso con cualquiera de los compuestos 109, compuesto 151, tetraciclina o tigeciclina a concentraciones que variaban de 0,05 a 10 mg/kg. Se

calculó la DP50 en mg/kg como la supervivencia tras 48 horas. b.) Modelo de septicemia de E. coli 5 Se mezcló E. coli ATCC 25922 con mucina al 5 %, y se inoculó por inyección intraperitoneal a 2,1 x 107 ufc/ratón. Una hora después de la estimulación, los ratones recibieron tratamiento intravenoso con el compuestos 109, compuesto 151, tetraciclina o tigeciclina a concentraciones que variaban de 30 a 0,3 mg/kg. Se evaluó la supervivencia tras 48 horas y se calcularon los valores de DP50 en mg/kg. 10 Resultados La DP50 del Compuesto 109 y del compuesto 151 en el modelo de septicemia murino fue < 0,3 y 0,36 mg/kg frente a

S. aureus, y de 4,3 y 17,0 mg/kg frente a E. coli, respectivamente. 15 Tabla 12

Compuesto

S. aureus ATCC 13709 E. coli ATCC 25922

CIM (μg/ml)

DP50 (mg/kg) I.C. del 95 % CIM (μg/ml) DP50 (mg/kg) I.C. del 95 %

109

0,25 < 0,30 -- 0,13 4,3 4,1 – 4,6

151

0,5 0,36 0,36 – 0,56 0,25 17,0 4,1 – 30

Tetraciclina

0,5 0,35 0,34 -0,37 1 17,0 7,3 – 26,8

Tigeciclina

0,13 0,35 0,24 – 0,47 0,13 2,1 1,8 – 2,4

Claims (12)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto de Fórmula

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

   X se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C6, fenilo y alcoxi C1-C6, en donde cada alquilo C1-C6 y alcoxi C1

   10 C6 representado por X está opcionalmente sustituido con halo, alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido o haloalcoxi C1-C6; Y se selecciona de entre hidrógeno, flúor, cloro, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquilen (C0-C6)-N(R1)(R2) y fenilo, en donde cada cada alquilo C1-C6, alquileno C0-C6 y alcoxi C1-C6 representado por Y está opcionalmente sustituido con

   15 halo, alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido o haloalcoxi C1-C6; cada R1 y R2 se selecciona independientemente de entre hidrógeno y alquilo C1-C6; y Z se selecciona de entre hidrógeno, halo, alquilo C1-C6, fenilo, -N(R3)(R4), alquilen C1-C6-N(R5)(R6), en donde R3 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C6, -(alquilen C1-C6)-fenilo, fenilo, (alquilen C1-C6)-(cicloalquilo C3-C7), -(alquilen C1-C6)-O-(alquilo C1-C6), -(alquilen C1-C6)-N(R5)(R6), -C(O)-(alquilen C0-C6)-N(R5)(R6), -C(O)

   20 (alquilo C1-C6), -C(O)H, -C(O)-fenilo y –S(O)2-R5. R4 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C6; o R3 y R4 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico (de 4-7 miembros) que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre S, O o N; y R5 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C6 y fenilo;

   25 R6 se selecciona de entre hidrógeno y alquilo C1-C6; o R5 y R6 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico (de 4-7 miembros) que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre S, O o N,

   en la que cada alquilo C1-C6, alquileno C1-C6 o un anillo heterocíclico (de 4-7 miembros) del grupo representado por

   30 Z está opcionalmente sustituido con flúor,-OH o -CH3; y en la que cada fenilo del grupo representado por X, Y, Z, R3 y R5 está opcionalmente sustituido con halo, alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido, haloalcoxi C1-C6, ciano o nitro, en la que Y y Z no son simultáneamente hidrógeno.
2. 2. El compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es de Fórmula II: 35

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
3. 3. El compuesto de la reivindicación 1 o 2, en el que Z se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C6, fenilo y

   40 N(R3)(R4), en el que el fenilo del grupo representado por Z está opcionalmente sustituido con halo, alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido, haloalcoxi C1-C6, ciano o nitro.
4. 4. El compuesto de la reivindicación 1, 2 o 3, en el que Y se selecciona de entre hidrógeno, cloro, flúor, -N(CH3)(CH3) , -OCH3, fenilo y alquilo (C1-C6), en el que el fenilo del grupo representado por Y está opcionalmente

   45 sustituido con halo, alquilo C1-C6 no sustituido, haloalquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 no sustituido, haloalcoxi C1-C6, ciano o nitro.
5. 5. El compuesto de la reivindicación 4, en el que:

   Z se selecciona de entre hidrógeno, -NH2, -NH(CH2)2CH3, -NH(CH2)2OCH3, -NHCH2CF3 y -NHCH2C(CH3)2CH2N (CH3)CH3.
6. 6. El compuesto de la reivindicación 5, en el que: Y se selecciona de entre hidrógeno, cloro, flúor y -N(CH3)(CH3).

   10 7. El compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es de Fórmula III:

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que Y es flúor, cloro, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, (alquilen C0-C6)-N(R1)(R2) y fenilo.
7. 8. El compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es de Fórmula III:

   20 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que Y no es hidrógeno.

8. 9.

   El compuesto de la reivindicación 8, en el que: Y se selecciona de entre cloro, flúor, -N(CH3)(CH3), -OCH3, fenilo y alquilo C1- C6.

9. 10.

   El compuesto de la reivindicación 9, en el que:

   X es hidrógeno o alquilo C1-C6. 30 11. El compuesto de la reivindicación 1, en el que X, Y y Z son como se definen en la siguiente tabla:

   Compuesto Nº

   X Y Z

   100

   101

   103

   104

   105

   106

   107

   108

   109

   110

   112

   114

   115

   116

   117

   118

   119

   120

   121

   122

   123

   124

   125

   126

   127

   128

   129

   130

   131

   132

   133

   134

   135

   136

   137

   138

   139

   140

   141

   142

   143

   144

   145

   146

   147

   148

   149

   150

   '

   151

   152

   153

   154

   155

   156

   157

   158

   159

   160

   161

   162

   163

   164

   165

10. 12. El compuesto de la reivindicación 11 seleccionado de entre uno cualquiera de Compuesto 101, 109, 110, 124, 125, 144, 146, 147, 150, 151 y 156, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

    5 13. El compuesto de la reivindicación 1, en el que Z es -NR3R4.
11. 14. Una composición farmacéutica que comprende un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptables y un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-13.

    10 15. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición de la reivindicación 14 para su uso en el tratamiento de una infección en un sujeto.
12. 16. El compuesto o la composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 15, en donde la infección está causada por:

    15 un organismo Gram-positivo, un organismo Gram-negativo, un organismo seleccionado del grupo que consiste en rickettsias, clamidias y Mycoplasma pneumonia, un organismo resistente a la tetraciclina,

    20 un organismo resistente a la meticilina o un organismo resistente a la vancomicina.