ES2337530T3 - Aislamiento de cristales de carotenoide a partir de biomasa microbiana. - Google Patents
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Abstract
Un proceso para el aislamiento de un compuesto carotenoide cristalino a partir de una biomasa microbiana que comprende los pasos de desbaratar las paredes celulares microbianas, separar los restos celulares del residuo que contiene carotenoide, que incluye un lavado de la biomasa microbiana, la masa celular desbaratada o bien el residuo que contiene carotenoide con un disolvente adecuado para eliminar lípido, suspender los cristales carotenoides que se obtienen en agua para hacer flotar los cristales, recuperar los cristales, donde el residuo que contiene carotenoide se lava con un disolvente adecuado para eliminar lípido y con agua antes de eliminar lípido.
Description
Aislamiento de cristales de carotenoide a partir
de biomasa microbiana.
La presente invención se refiere al campo de
compuestos carotenoides que se producen por métodos microbianos.
\vskip1.000000\baselineskip
En la actualidad, los cristales de
\beta-caroteno de alta pureza (96% o más) se
producen por síntesis química. La mayoría de las veces, cuando se
extrae de una fuente natural, el \beta-caroteno
aparece en forma de extracto aceitoso (aceite de palma, aceite de
alga). Aunque también es posible obtener cristales de
\beta-caroteno a partir de fuentes naturales como
los vegetales (por ejemplo, las zanahorias) o los microorganismos
(por ejemplo, las algas (Dunallella) o los hongos
(Blakeslea), los procesos de obtención de cristales
relativamente puros a partir de dichas fuentes naturales disponibles
en la actualidad acarrean importantes desventajas.
La purificación de cristales de
\beta-caroteno a partir de fuentes naturales
comprende la extracción de \beta-caroteno de
dicha fuente con un extractante adecuado, seguido de pasos de
purificación adicionales opcionales hasta obtener la pureza
deseada.
La extracción se lleva a cabo con diversos
extractantes: disolventes orgánicos como acetato de etilo, acetato
de butilo, hexano; aceites vegetales o fluidos supercríticos como
propano, etileno, CO_{2}. Después, los cristales de
\beta-caroteno se pueden cristalizar directamente
a partir del extracto que se obtiene tras la extracción con
disolvente de dicha fuente natural, por ejemplo, por evaporación del
disolvente.
Una importante desventaja del proceso de
extracción con disolvente es que los cristales de
\beta-caroteno se deben solubilizar en un
disolvente primero, con lo cual, tras separar el residuo de biomasa
del disolvente que contiene \beta-caroteno, los
cristales de \beta-caroteno se deben cristalizar
una vez más. Además, puede tener lugar fácilmente una pérdida
sustancial de \beta-caroteno.
Para evitar el uso de grandes cantidades de
disolvente necesarias para solubilizar el
\beta-caroteno, sería deseable aislar
directamente el \beta-caroteno, o cualquier otro
carotenoide, en una forma cristalina a partir de una biomasa
microbiana.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención describe un proceso para
el aislamiento de un compuesto carotenoide a partir de una biomasa
microbiana. El proceso de la invención se puede aplicar a una
biomasa microbiana en la que estén presentes compuestos
carotenoides en una forma cristalina. Según el proceso de la
presente invención, los cristales de carotenoide se separan
directamente de la biomasa microbiana. Una ventaja importante del
proceso de la invención es que se puede aplicar sin usar grandes
cantidades de disolvente. En particular, la cantidad de disolvente
que se usa en el proceso de la invención se reduce considerablemente
si se compara con las grandes cantidades de disolvente que se
requieren para solubilizar el carotenoide usando un proceso normal
de extracción con disolvente.
El proceso de la invención comprende en esencia
los pasos de desbaratar las paredes celulares microbianas, separar
los restos celulares del residuo que contiene carotenoide, que
incluye un lavado de la biomasa microbiana, la masa celular
desbaratada o bien el residuo que contiene carotenoide con un
disolvente adecuado para eliminar lípido, hacer flotar los
cristales de carotenoide que se obtienen en agua, donde el residuo
que contiene carotenoide se lava con un disolvente adecuado para
eliminar lípido y con agua antes de eliminar lípido.
Los siguientes pasos del proceso de la invención
se describen con más detalle.
El microorganismo que contiene carotenoide puede
ser un microorganismo bacteriano, de levadura, fúngico o de alga.
Preferiblemente, el microorganismo que contiene carotenoide es una
levadura, un hongo o una alga. De manera más preferible, es una
levadura del género Phaffia, un hongo del orden
Mucorales o una alga del género Dunaliella.
La biomasa microbiana que contiene carotenoide
se obtiene de cualquier fermentación adecuada de un microorganismo
elegido que produzca carotenoide, según se especifica
anteriormente.
La biomasa microbiana que se somete al proceso
de la invención puede aparecer en forma de una pasta de células
húmeda o seca. Por razones económicas, se prefiere el uso de la
pasta de células húmeda. La biomasa seca puede estar, por ejemplo,
en forma de extruido, según se describe en la publicación WO
97/36996.
La disrupción celular puede ocurrir por métodos
que se conocen en la técnica. La disrupción puede ocurrir física
(mecánicamente), enzimática y/o químicamente. Preferiblemente, la
disrupción celular se realiza por medios mecánicos. La disrupción
mecánica puede tener lugar, por ejemplo, homogeneizando biomasa
microbiana en un homogeneizador a alta presión o empleando un
molino de bolas o sometiéndola a ultrasonidos. La disrupción
química puede ocurrir en un entorno de pH alto o bajo, o añadiendo
un disolvente como octanol. La disrupción enzimática puede tener
lugar a causa de la actividad degradante de constituyentes de la
pared celular microbiana por parte de una enzima o una mezcla de
enzimas.
Para ejercer una disrupción celular eficaz, la
biomasa puede tener normalmente un contenido en materia seca de
aproximadamente 10 a aproximadamente 200 g/l. Convenientemente, se
use el caldo de fermentación que se obtiene directamente tras la
fermentación, que tiene un contenido en materia seca de
aproximadamente 50 g/l. Cuando el material de partida es una
biomasa seca, dicha biomasa se mezcla con una cantidad de agua
suficiente para obtener un contenido en materia seca de
aproximadamente 10 a aproximadamente 200 g/l, según se especifica
anterior-
mente.
mente.
Para mejorar el rendimiento del proceso de
recuperación de la invención se puede añadir, opcionalmente, un
disolvente orgánico inmiscible con agua a la masa celular
desbaratada antes de que se lleve a cabo cualquier otro paso de
procesado más. Dependiendo del tipo de proceso de disrupción que se
aplique, la adición de dicho disolvente comprenderá añadirlo antes,
durante o después de la disrupción celular. Por ejemplo, en el caso
en el que las células se desbaratan por homogeneización, el
disolvente se añade preferiblemente después del paso de disrupción.
El aceite o el disolvente se añade en una cantidad de 1% a 100%
respecto a la cantidad de suspensión de biomasa o de masa celular
desbaratada, preferiblemente de 3% a 10% respecto a la cantidad de
suspensión de biomasa o de masa celular desbaratada. Un disolvente
orgánico inmiscible con agua adecuado es, por ejemplo, un aceite,
hexano o acetato de etilo. Preferiblemente, se añade un aceite a la
masa celular desbaratada. Los ejemplos de aceites adecuados
incluyen los aceites vegetales como el aceite de soja.
Se elimina decantando o centrifugando una parte
sustancial de los restos celulares de la masa celular desbaratada
resultante. Preferiblemente, se emplea un paso de centrifugación.
Dicha centrifugación genera una capa superior sólida, media líquida
e inferior sólida, conteniendo la capa sólida superior los cristales
de carotenoide, la cual se denomina también el residuo que contiene
carotenoide. Se pierde solamente una cantidad muy pequeña de
carotenoide en este paso.
La capa sólida superior con el residuo que
contiene carotenoide, dicho residuo estando formado esencialmente
por cristales de carotenoide, lípido microbiano y restos celulares
restantes, se lava una o más veces con agua para eliminar más
restos celulares. Dicha agua puede contener, opcionalmente, una sal
como cloruro de sodio. La sal puede estar presente en una
concentración de hasta 25% (p/p). El proceso de la invención incluye
además un paso de lavado con un disolvente adecuado para eliminar
una parte sustancial del lípido microbiano y, opcionalmente, un
aceite añadido anteriormente a las células desbaratadas.
Un disolvente adecuado para la eliminación de
lípido es un disolvente miscible con lípido y agua en el que el
carotenoide cristalino posee una solubilidad baja. Preferiblemente,
dicho disolvente es un alcohol inferior como metanol, etanol,
isopropanol o acetona. De manera más preferible, dicho disolvente es
etanol. Debe tenerse en cuenta que la cantidad de disolvente
requerida para eliminar lípido es sustancialmente inferior a la
cantidad de disolvente requerida para la extracción con disolvente
de un carotenoide a partir de una biomasa microbiana.
En una realización preferida de la invención, el
residuo que contiene carotenoide que se obtiene tras la separación
de los restos celulares se lava con dicho disolvente adecuado para
eliminar lípido. Dicho lavado se lleva a cabo agitando el residuo
que contiene carotenoide durante un periodo conveniente, por
ejemplo, durante aproximadamente 10 minutos, con dicho disolvente y
recuperando la capa sólida del fondo tras centrifugar.
Opcionalmente, dicho lavado con dicho disolvente se repite una o
más veces.
En otra realización de la invención, se puede
eliminar lípido de la biomasa microbiana antes que tenga lugar la
disrupción celular. Esta realización alternativa se puede emplear en
particular si el material de biomasa de partida está en una forma
seca. Normalmente, la biomasa seca se suspende en el disolvente
elegido en una cantidad de 10 a 400 g de biomasa por litro de
disolvente. Para aumentar la cantidad de lípido que se elimina, se
puede emplear una temperatura elevada, por ejemplo de 50ºC. La
biomasa tratada de este modo se separa del disolvente que contiene
lípido por filtración o centrifugación. Se repite el tratamiento
opcionalmente.
Lavar, según se usa en esta invención, incluye
un paso de suspensión o agitación del material a lavar en una
cantidad adecuada del disolvente elegido y un paso de decantación o
centrifugación y la posterior recuperación de la capa
apropiada.
Los cristales que se obtienen tras la
eliminación de los restos celulares y lípido se suspenden después en
agua, lo que hace que los cristales de carotenoide floten. El flote
de los cristales se estimula haciendo burbujear gas a través de la
suspensión. Normalmente, a modo de operación por lotes, se continúa
haciendo burbujear gas hasta que la capa del fondo pierda
considerablemente el color. El gas que se usa no es importante y
puede ser, por ejemplo, aire o nitrógeno. Tras este paso de flote,
los cristales se recuperan por centrifugación o decantación. De
esta manera, los cristales, que se encuentran en la capa superior,
se separan de cualquier resto celular restante, presente en la capa
inferior, por medio de una capa media líquida.
\newpage
El flote de los cristales se puede mejorar en
presencia de una sal o un aceite en el agua que se usa para
suspender los cristales crudos. Por lo tanto, el agua puede
contener, opcionalmente, una sal como cloruro de sodio y/o un
aceite vegetal como aceite de soja. La sal puede aparecer en una
concentración de hasta 25% (p/p), el aceite en una concentración de
hasta 2%. Preferiblemente, en el agua en el cual se suspenden los
cristales de carotenoide hay un aceite.
Los cristales crudos que se obtienen tras el
lavado o los lavados con disolvente y el flote de los cristales en
agua se secan o bien se siguen purificando hasta alcanzar el grado
de pureza deseado.
Los pasos de purificación adicionales pueden
comprender más pasos de lavado con un disolvente adecuado. Por
ejemplo, se lleva a cabo de manera ventajosa un tratamiento
adicional de los cristales empleando un disolvente en el cual el
carotenoide cristalino posee una baja solubilidad. Dicho tratamiento
con disolvente comprende los pasos de agitar los cristales de
carotenoide crudos en dicho disolvente durante un periodo
suficientemente largo para permitir la disolución de las impurezas,
filtrar los cristales y lavar los cristales varias veces con
disolvente fresco. Dicha agitación se puede realizar a cualquier
temperatura deseada dentro de un intervalo de aproximadamente 20 a
80ºC. Preferiblemente, cuando se agita a una temperatura
relativamente elevada, la mezcla se enfría antes de filtrar
los
cristales.
cristales.
Opcionalmente, este tratamiento se repite una o
más veces, pudiéndose repetir el tratamiento con el mismo
disolvente que se usó primero o uno diferente. Tras el último paso
de lavado, el disolvente residual se evapora.
Los disolventes adecuados para seguir
purificando son los disolventes en los cuales el carotenoide posee
una solubilidad baja, es decir, una solubilidad de como mucho 1 g/l
a 25ºC. Preferiblemente, el disolvente es agua o un disolvente
orgánico. cuando se emplea agua, el pH del agua no es un factor
importante en el tratamiento, aunque se prefiere que el pH esté por
debajo de 7. De manera más preferible, el pH del agua es de
4-6. El disolvente orgánico es preferiblemente un
alcohol inferior o un éster de acilo inferior de este, en los cuales
se entiende que inferior comprende de 1 a 5 átomos de carbono, o
acetona. De manera más preferible, el disolvente orgánico es etanol
o acetato de
etilo.
etilo.
El proceso de la presente invención se aplica de
manera ventajosa a cualquier microorganismo en el cual esté
presente predominantemente en forma cristalina un compuesto de
carotenoide. Preferiblemente, el proceso de la invención se lleva a
cabo empleando un microorganismo que contiene un carotenoide que
esté al menos en un 50% en forma cristalina, de manera más
preferible al menos en un 60% y de la manera más preferible al menos
en un 70%.
Los carotenoides apolares en particular están
presentes predominantemente en forma cristalina en la célula debido
a su baja solubilidad en un entorno celular. Ejemplos de compuestos
carotenoides apolares son fitoeno, presente en, por ejemplo,
algunas cepas de Phaffia rhodozyma, o
\beta-caroteno, presente en, por ejemplo,
Blakeslea trispora o Phycomyces blakesleanus.
Los cristales de carotenoide que se obtienen
cuando se aplica el proceso de la invención son de alta pureza y se
usan de manera ventajosa en composiciones alimenticias,
farmacéuticas y cosméticas.
\vskip1.000000\baselineskip
Se homogeneizaron dos veces 2.0 L de caldo de
fermentación de Blakeslea trispora con un contenido de 0.164%
(p/p) en \beta-caroteno a una presión de
800-1000 bar. Tras centrifugar la mezcla, la capa
superior se mezcló con 750 mL de agua desmineralizada. La mezcla
se centrifugó y la capa superior se volvió a mezclar con 750 mL de
agua desmineralizada. Tras centrifugar la mezcla, la capa superior
se agitó con 750 mL de etanol durante 5 minutos. Tras centrifugar
se decantó la capa superior. Se lavó posteriormente cuatro veces la
capa del fondo con etanol (según se redactó anteriormente) y se
agitó con 700 mL de agua desmineralizada (etapa 1) durante 10
minutos, lo cual indujo el flote de los cristales. Los cristales que
se obtuvieron tras centrifugar se secaron al vacío.
\vskip1.000000\baselineskip
En vez de agua desmineralizada, se añadió en la
etapa 1 agua salada (cloruro de sodio al 25% (p/p) en agua) o agua
que contenía aceite de soja (1%). De este modo, se obtuvo un
rendimiento global de \beta-caroteno más
alto.
\vskip1.000000\baselineskip
Se mezcló una cantidad de 7 g de la suspensión
cristalina que se obtuvo tras el último paso de centrifugación
(véase el Ejemplo 1) una vez con 45 mL de agua desmineralizada.
Tras centrifugar se añadieron 300 mL de etanol a la capa superior
y la mezcla se mezcló y se centrifugó. La capa superior se decantó y
se mezclaron 300 mL de etanol con la capa del fondo. Se volvió a
decantar la capa superior, tras lo cual la capa del fondo
(suspensión cristalina) se mezcló con 20 mL de acetato de etilo a
50ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 30 minutos. La
suspensión se enfrió a 5ºC en 30 minutos. Los cristales se fueron
filtrando sucesivamente, se lavaron con 5 mL de acetato de etilo a
5ºC y se agitaron con 20 mL de etanol a 50ºC en una atmósfera de
nitrógeno durante 30 minutos. La suspensión se enfrió a 20ºC en 30
minutos. Los cristales se filtraron, se lavaron dos veces con 5 mL
de etanol y se secaron al vacío a temperatura ambiente para dar 1.22
g de \beta-caroteno con una pureza de 93.3%
determinada por HPLC (92.8% de \beta-caroteno y
1.1% de
13-cis-\beta-caroteno).
El rendimiento global fue de 35%.
Claims (10)
1. Un proceso para el aislamiento de un
compuesto carotenoide cristalino a partir de una biomasa microbiana
que comprende los pasos de desbaratar las paredes celulares
microbianas, separar los restos celulares del residuo que contiene
carotenoide, que incluye un lavado de la biomasa microbiana, la masa
celular desbaratada o bien el residuo que contiene carotenoide con
un disolvente adecuado para eliminar lípido, suspender los cristales
carotenoides que se obtienen en agua para hacer flotar los
cristales, recuperar los cristales, donde el residuo que contiene
carotenoide se lava con un disolvente adecuado para eliminar lípido
y con agua antes de eliminar lípido.
2. El proceso de la reivindicación 1, donde el
disolvente adecuado para eliminar lípido es un alcohol inferior o
acetona, preferiblemente etanol.
3. El proceso de la reivindicación 1 ó 2, donde
se añade un disolvente inmiscible con agua a las células microbianas
antes, durante y después de desbaratar las paredes celulares.
4. El proceso de la reivindicación 3, donde se
añade dicho disolvente inmiscible con agua a la masa celular
desbaratada tras desbaratar las paredes celulares.
5. El proceso de la reivindicación 3 ó 4, donde
dicho disolvente inmiscible con agua es un aceite, preferiblemente
un aceite vegetal.
6. El proceso de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, donde el flote de los cristales se mejora
haciendo burbujear un gas a través de la suspensión.
7. El proceso de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, donde el agua para hacer flotar los
cristales contiene además una sal y/o un aceite.
8. El proceso de la reivindicación 7, donde el
agua para hacer flotar los cristales contiene un aceite vegetal.
9. El proceso de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8, donde la biomasa microbiana es de
Blakeslea trispora.
10. El proceso de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 9, donde el compuesto carotenoide es
\beta-caroteno.
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| JP2004269663A (ja) * | 2003-03-07 | 2004-09-30 | Riken Vitamin Co Ltd | クロセチンの精製方法 |
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| US20080020437A1 (en) * | 2006-07-20 | 2008-01-24 | Savarese John J | Apparatus and method for producing fuel ethanol from biomass |
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| BR112016014517B1 (pt) | 2013-12-20 | 2022-06-28 | Dsm Ip Assets B.V. | Processo para a obtenção de um óleo microbiano compreendendo um ou mais ácidos graxos poli-insaturados de uma ou mais células microbianas |
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Family Cites Families (10)
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