ES2336940T3 - Analogos a las azinomicinas como agentes anti-tumores y como promedicamentos. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de la formula I o una sal de la misma: **(Ver fórmula)** En el que X1 se selecciona de un grupo consistente en O, S y NR0 en el que R0 es alcilo C1-4 ó H; R3 es NH2, NHR5, SR4, OR4, CH2R4 u OH; R1 R6 es naftilo, antranilo o un grupo de la formula III, opcionalmente sustituidos **(Ver fórmula)** R2 es H, C1-4-alcílico opcionalmente sustituido, C1-4-alcóxido, fenilo opcionalmente sustituido, C7-12-arálcilo, heterorarilo o un enlazante opcionalmente sustituidos; R4 es C1-4-alcílico, C1-4-alcílico sustituido, C1-4-alcóxido, fenilo opcionalmente sustituido, C7-12-arálcilo, heterorarilo, CnH2nNR5R6 o un enlazante opcionalmente sustituidos; En el que al menos uno de R5 y R1 es (CH2)2A2 o conjuntamente con el nitrógeno al que está agregado forma un anillo de formula II **(Ver fórmula)** En el que al menos uno de R7, R8 y R9 se selecciona de A1 y A1, C1-4-alcílico sustituido, y algunos otros son H ó C1-4-alcílico; R10 se selecciona de H, C1-4-alcílico, A1 y A1, C1-4-alcílico sustituido; A1 es un grupo de salida o un átomo de halógeno; m es 1-4; n es 1-7; siendo seleccionados los grupos sustituyentes de C1-4-alcílico, hidróxilo, amino, alcilamino, halo, y aziridina, y el enlazante es un oligopéptido, biotina, avidina, estreptavidina o grupo polimérico, un oligonucleótido o una proteína.
Description
Análogos de las azinomicinas como agentes
anti-tumores y como promedicamentos.
La presente invención se refiere a
promedicamentos activados por oxidación aromática, especialmente
promedicamentos anti-tumores y aquellos activados
por las actividades de oxidación de la familia de enzimas citocromo
P450. Los promedicamentos pueden ser agentes alcilativos con
actividades de inhibición de topoisómeros II.
Se conocen muchas drogas citotóxicas
convencionales que pueden ser usadas con fines terapéuticos. Sin
embargo, generalmente sufren del problema que son, por lo general,
citotóxicas y, en consecuencia, pueden afectar a células distintas
a aquéllas cuya destrucción se requiere. Esto puede ser aliviado
hasta cierta medida por el uso de sistemas de distribución dirigida
de drogas, por ejemplo, inyección a una zona de tejido tumoroso, o,
por ejemplo, enlazando el agente citotóxico a un anticuerpo que
reconoce específicamente un antígeno que se despliegue únicamente
sobre la superficie celular cancerosa. Alternativamente, puede
usarse radiación electromagnética para provocar alteración química
en una agente en una zona deseada de tal forma que se convierta en
citotóxica. Sin embargo, todas estas técnicas tienen, en mayor o
menor medida, ciertas limitaciones y desventajas.
Las azinomicinas A y B son potentes agentes
anti-tumores que se enlazan al ADN por acilación en
el canal principal y llevan a la muerte celular. Sin embargo, son
relativamente inestables, son escasamente disponibles de fuentes
naturales y es improbable su desarrollo en el ámbito clínico.
Estos compuestos que se forman naturalmente,
además del análogo A truncado (vid. estructura infra), fueron
aislados del estreptomices griseofuscus S42227 por Nagaoka y
otros en Japón (J. Antibiot. (Tokio) 1986, 39,
1527-1532).
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Armstrong en Tetrahedron Lett. 1991, 32,
3807-3810, descubrió posteriormente, usando datos
especiales NMR y masivos, que el antibiótico
anti-tumor carzinofilina, aislado en 1954 del
estreptomices sahaquiror (Onda y otros, J. Antibiot. 1969,
22, 42-44) era de la misma composición que el
producto natural azinomicina B.
Shibuya en Tetrahedron Lett. 1983, 24,
1175-1178, describe los primeros estudios sintéticos
de las azinomicinas, pero estos son inexactos, en cuanto se basan
en la estructura errónea de carzinofilina sugerida por Lain y otros
en J. Am. Chem. Soc. 1982, 104,
3213-3214.
El análogo truncado A fue sintetizado
correctamente por primera vez por Shibuya y otros en Tetrahedron
Lett. 1987, 28, 2619-2622, donde la diacetona
D-glucosa de la reserva quiral, disponible
comercialmente, se usaba en una síntesis larga, de múltiples
etapas, para generar estereoespecíficamente el análogo A, de la
estructura que se muestra supra, con la misma estereoquímica
que los productos naturales.
La mayoría de los otros estudios sobre fragmento
epóxido de las azinomicinas y sobre la síntesis de A se han
enfocado en el uso de epoxidación asimétrica sin ángulos agudos. Los
esfuerzos directos sobre precursores enantiopuros sintetizadores
son descritos por Konda y otros en Chem. Pharmac. Bull 1994,
42, 285-288. Shipman y otros en Chem. Soc.
Perkin Trans. 11998, 1249-1255, discuten
ulteriormente una metodología de dihidroxilación
asimétrica/epoxidación asimétrica para obtener el isómero S,S
requerido con una producción excelente.
Tanto Amstrong y otros (J. Am. Chem. Soc.
1992, 114, 371-372) y Coleman y otros (J. Org.
Chem. 1992, 57, 5813-5815) han descrito
independientemente rutas sintéticas al núcleo aziridino de la
Azinomicina A. La síntesis total se mostró más elusiva y sólo ha
sido recientemente descrita por Coleman y otros (Angew. Chem.
Int. Ed. 2001, 491736-1739). La clave hacia la
síntesis total fue un ensamblaje de la parte esencial del producto
natural, incluyendo la parte epóxida, seguido de la tardía
introducción de etapas del sistema azabicíclico por una reacción
tipo Wadsworth-Homer-Emmons.
La síntesis del fragmento de la izquierda de las
azinomicinas permitió el estudio de sus interacciones con el ADN.
Zang y otros en Biochemistry 2000, 39,
14968-14975 presentan datos que sugieren que la
estructura A se intercala con el ADN por la vía de su subunidad de
naftalina y de sus residuos de guanina de alcilatos en N7, con poca
selectividad de secuencias, si es que hay alguna. Shipman y otros
usaron estos descubrimientos en investigaciones de actividad de
estructuras para identificar análogos de los productos naturales que
podrían ser útiles como agentes anti-tumores
(Bioorg. Med. Chem. Lett 2000, 10, 239-241).
La sustitución del
3-metóxido-5-metilnaftalina
con un grupo fenilo (del que se podría esperar que muestre poca
afinidad con el ADN por intercalación) eliminaría de forma efectiva
la potencia biológica del epóxido en una variedad de líneas
celulares. En Chem. Commun. 2000, 2325-2326,
Hortley y otros estudian actividad de entrelazamiento de ADN de
dimeros simétricos basada en el dominio de epóxido de las
azinomicinas. Demostraron que que una longitud de enlazamiento
óptima parecía ser la de 4 grupos de metileno y que los agentes
pueden entrelazarse con el ADN, y tener una potente actividad
citotóxica, aunque ninguno de los componentes tuvieron una actividad
significativamente superior que el A que se entrelaza.
Las azinomicinas parecen actuar interrumpiendo
la replicación celular del ADN por formación de entrelazamiento
filamentoso. Lain y otros en Can. J. Biochem. 1997, 55,
630-635, fueron los primeros en notar la aptitud de
la azinomicina B para formar lazos covalentes entre filamentos
complementarios de ADN. Fujiwara y otros en Tetrahedron
Lett. 1999, 40, 315-318 sugieren, además, que el
entrelazamiento tiene lugar por la vía de una alcilación inicial de
la aziridina con el N7 de adenina seguida por el entrelazamiento
eficiente a través de una segunda reacción del N7 de una guanina 2
que se basa lejanamente en el epóxido.
Casely-Hayford y otros en
Bioorganic and Med. Chem. Letters (2005) 15,
653-656, discuten el diseño y la síntesis de un
análogo B de azinomicina, potencialmente viable en terapia, basado
en A implicando el emparejamiento de una mostaza de piperidina con
el clorido ácido del cromoforo de azinomicina.
Los autores concluyen con que la monoalcilación
es suficiente para la actividad biológica y que el entrelazado
puede incluso ser perjudicial.
La presente invención se refiere al uso
terapéutico primario de una gama de análogos de la azinomicina y su
síntesis. Los compuestos que se incorporan aquí son nuevos. La
presente invención también se relaciona con precursores sintéticos
de análogos de azinomicina que no tienen el anillo de epóxido o de
la aziridina de los productos naturales, y que por sí mismos son
sustancialmente inactivos como agentes alcilantes del ADN.
Se ha informado (Murray y otros, 1997, Cancer
Research, 57, 3026-3031 y Patente Mundial
A-9712246) que la enzima CYP1B1, miembro de la
familia cicotrónica P450 (CYP) de enzimas metabolizantes
xenobióticos, aparece de forma muy frecuente en una variedad de
cánceres humanos, incluyendo cánceres de mama, colon, pulmón,
esófago, piel, nudos linfáticos, cerebro y testículos, y que no se
detecta en tejido normal. Esto llevó a la conclusión que la
expresión de isoformas P450 de citocromo en células tumorosas
proporciona un objetivo molecular para el desarrollo de nuevos
medicamentos anti-tumores que podrían ser activadas
selectivamente por las encimas CYP en células tumorosas, aunque no
se dan ejemplos de medicamentos. Muchos de los CYPs expresados en
tumores se mencionan en Patterson, LH y otros (1999) Anticancer
Drug Des. 14 (6) 473-486.
En la Patente Mundial 02/067930A1, Searcey y
Petterson describen diversos componentes de
benz-indola y benzo-quinolina como
pro-medicamentos para tratamiento de tumores. En la
Patente 02/068412A1 describen también derivados de pirrolo-índola y
pirrolo-quinolina para su uso con
pro-medicamentos oxidables-CYP y en
la Patente Mundial 02/067937A1 se describen
pro-medicamentos oxidables-CYP de
indolita y tetrahidro-quinolina. De todos estos
compuestos se espera su hidroxilatación en el átomo de carbono al
que X está unido por el citocromo P450, en particular CYP1 B1, que
aparece en altos niveles en tumores.
La presente invención se dirige a una nueva
clase de pro-medicamentos de los que se espera su
oxidización in situ por encimas CYP, en particular encimas
presentes a altos niveles en tumores. En particular, se cree que
los pro-medicamentos por la encima CYP1B1. Las
encimas P450 están implicadas en el metabolismo de Fase I y son
conocidas como aptas para convertir un alcino en un epóxido para
formar un componente activo. Se cree que ningún medicamento ha sido
previamente activado de esta forma. Algunos de los componentes de la
presente invención contienen mostazas de nitrógeno y que pueden
actuar como agentes alcilantes.
De acuerdo con la presente invención, se
suministran pro-medicamentos novedosos de la formula
I o una sal de la misma:
En el que X^{1} se selecciona de
un grupo consistente en O, S y NR^{0} en el que R^{0} es alcilo
C_{1-4} ó
H;
R^{3} es NH_{2}, NHR^{4}, SR^{4},
OR^{4}, CH_{2}R^{4} u OH;
R^{1} es naftilo, antranilo o un grupo de la
formula III, opcionalmente sustituido.
R^{2} es H,
C_{1-4}-alcílico opcionalmente
sustituido, C_{1-4}-alcóxido,
fenilo opcionalmente sustituido,
C_{7-12}-arálcilo, heterorarilo o
un enlazante opcionalmente
sustituidos;
R^{4} es
C_{1-4}-alcílico,
C_{1-4}-alcílico sustituido,
C_{1-4}-alcóxido, fenilo
opcionalmente sustituido,
C_{7-12}-arálcilo, heterorarilo,
C_{n}H_{2n}NR^{5}R^{6} o un enlazante opcionalmente
sustituidos;
En el que al menos uno de R^{5} y R^{1} es
(CH_{2})_{2}A^{2} o conjuntamente con el nitrógeno al
que está agregado forma un anillo de formula II
En el que al menos uno de R^{7},
R^{8} y R^{9} se selecciona de A^{1} y A^{1},
C_{1-4}-alcílico sustituido, y
algunos otros son H ó
C_{1-4}-alcílico; R^{10} se
selecciona de H, C_{1-4}-alcílico,
A1 y A1, C_{1-4}-alcílico
sustituido;
A^{1} es un grupo de salida o un átomo de
halógeno;
m es 1-4;
n es 1-7;
siendo seleccionados los grupos sustituyentes de
C_{1-4}-alcílico, hidróxilo,
amino, alcilamino, halo, y aziridina, y el enlazante es un
oligopéptido, biotina, avidina, estreptavidina o grupo polimérico,
un oligonucleótido o una proteína.
Ejemplos aceptables de átomos de halógeno son
fluorina, clorina, bromina y iodina, preferiblemente clorina.
Ejemplos adecuados de grupos de salida son sulfonatos de alcílico o
arilo, grupos carboxilatos, alcilóxidos, acilóxidos y
arilóxidos.
En la presente invención, el termino enlazante
incluye un grupo con determinadas características, útiles, por
ejemplo, en entornos tipo pro-medicamento de enzima
de anticuerpo o dirigida a genes. Un enlazante puede ser un
oligopéptido, avidita o estreptavidina, un grupo polimérico, un
oligonucleótido o una proteína. Preferiblemente, tienen específicas
características de enlazamiento y es preferiblemente un anticuerpo o
fragmento, un antígeno, un oligonucleótido de sentido o
antisentido, o uno de avidina, estreptavidina, y biotina, que es un
componente de un par ligante específico. Alternativamente, puede
ser un grupo diseñado para objetivo pasivo, tal como un grupo
polimérico, o un grupo diseñado para prolongar la estabilidad o
reducir la inmunogenicidad, como un grupo hidrofílico. La Patente
estadounidense 5843937 revela enlazantes adaptados para enlazar con
estos tipos de activos y métodos para llevar a cabo el
enlazamiento.
En estos compuestos, el grupo R^{1} es elegido
de tal forma que facilite la intercalación del compuesto en el ADN.
Para una aptitud de enlazamiento optimizado de ADN, el grupo R^{1}
se selecciona del grupo consistente de naftilo y antranilo
opcionalmente sustituidos. Cuando R^{1} es sustituido
opcionalmente por naftilo, se observa una excelente
intercalación.
Un grupo preferido para R^{1} es III
En los compuestos de la presente invención
X^{1} es preferiblemente oxígeno, aunque también se han generado
análogos de sulfuro y nitrógeno y tienen propiedades útiles.
En una realización referida, X^{1} es O,
R^{2} es CH_{3} y R^{3} es NH_{2}.
Dos ejemplos de tal clase de compuestos son
Algunos análogos de estos compuestos han sido
generados y representan una realización ulterior de la presente
invención. El siguiente derivado de alilglicina ejemplifica esta
realización:
Los compuestos de la presente invención pueden
ser presentados como mezclas de racimo o como enantiómeros R ó S
aislados. A menudo se descubre que un enantiómero muestra más
actividad biológica que otro y, en consecuencia, es preferido.
Estos compuestos son convertidos en epóxidos
in vivo por un proceso biooxidativo intermediado por CYP.
Esto se muestra en el diagrama infra.
Los productos activados, los epóxidos, de esta
clase preferente de compuestos del ADN monoalcilato por el epóxido
al N7 de guanina en el canal principal. Las mostazas de nitrógeno,
que alcilan el ADN por la mitad de la mostaza pero tienen el
potencial para hacerse agentes entrelazadores por la formación de un
grupo epóxido, constituyen las realizaciones preferentes de la
presente invención. Aunque las mostazas de nitrógeno, por sí
mismas, tienen potente actividad antitumoral, se cree que la
conversión a un agente entrelazador por bioxidación mediada por CYP
podría llevar a una intensificación de la actividad o un cambio en
el espectro relativo de actividad de un compuesto.
En consecuencia, una segunda clase de compuestos
preferidos de la presente invención de la formula general I tienen
R^{3}=NHR^{4}, en el que R^{4} es un grupo de fórmula
C_{n}H_{2n}NR^{5}R^{6} como se define supra. Se les
pueden unir R^{5} y R^{6} para formar un anillo de la fórmula
general II. Los compuestos de la presente invención pueden ser
derivados de la pirrolidina, que está en que m=1. Otra clase de
compuestos de la invención son derivados de la pirrolidina, en los
que m=2.
En una clase preferente de tales compuestos de
la presente invención
i) R^{7} es CH_{2}A^{1} y R^{8} es H;
o
ii) R^{7} es H y R^{8} es A^{1}.
En esta realización R^{10} es H o es el mismo
grupo que R^{7} y el o cada R^{9} es H o del mismo grupo que
R^{6}. Tales compuestos han mostrado entrelazar ADN duplicado en
concentraciones similares a aquellas dadas para los productos
naturales Azinomicina A y B o análogos próximos. Sin embargo, los
compuestos de la presente invención son más estables y
terapéuticamente vigorosos, mostrando un mayor potencial como
agentes anti-tumores.
Los compuestos en los que los grupos R^{7} y
R^{8} no son una de las definiciones mencionadas supra en
relación con agentes alcilantes, pueden, sin embargo, enlazarse con
el ADN y causar citotoxicidad.
Una estructura preferida del grupo
C_{n}H_{2n}NR^{5}R^{6}, en el que n=2 se muestra
infra.
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Un ejemplo específico de esta segunda clase de
compuestos de la fórmula I que contiene una mostaza de nitrógeno y
puede ser biooxidativamente activada es
Se considera que una isoforma particular de la
familia de enzimas citocromo P450, la CYP1B1, es específica para
los tumores. Esto proporciona un sistema de distribución de fármaco
auto-dirigido en el que un compuesto no tóxico (o
inocuamente tóxico) puede ser administrado a un paciente, por
ejemplo, de forma sistemática, siendo activado entonces el
compuesto en el emplazamiento de las células tumorosas para formar
un compuesto altamente citotóxico que actúa para matar las células
tumorosas.
De acuerdo con la presente invención, también se
suministra un método sintético en el que un compuesto de fórmula
V
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en el que R^{11} se selecciona de
un grupo consistente de neftilo, antranilo y un grupo de fórmula
III, opcionalmente sustituidos, se reactiva con un compuesto de
fórmula
VI
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en el que R^{12} es H,
C_{1-4}-alcílico, opcionalmente
sustituido, C_{1-4}-alcóxido,
fenilo opcionalmente sustituido,
C_{7-12}-arálcilo, heterorarilo o
un enlazante, opcionalmente
sustituidos;
X^{2} es O, NH o S;
R^{13} es OH, Cl,
C1-4-alcóxido u OPG donde PG es un
grupo protector;
Tal que Cl en V es reemplazado en una reacción
de sustitución nucleofílica por un grupo de fórmula VII
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donde el enlazante es un
oligopéptido, biotina, avidita, estreptavidina, un grupo polimérico,
un oligonucleótido o una
proteína.
El grupo R^{13} incorpora preferiblemente un
grupo protector para asegurar que el sustituyente X^{2} actúa
como el extremo nucleófilo de la molécula. Grupos protectores
adecuados para alcoholes incluyen éter de bencilo, sililo triálcilo
(por ejemplo, TBDMS) y tetrahidropiranilo (THP). De estos, se
prefiere el éter de bencilo.
Una vez que el emparejamiento está completo, el
grupo protector puede ser eliminado por una reacción de
desprotección. En una realización preferida, el grupo protector es
éter de benzilo y esto puede ser eliminado usando H^{2} sobre un
catalizador Pd/C o mediante el uso de un reagente HBr para producir
un ácido carboxílico.
El ácido carboxílico puede ser entonces
reaccionado con un nucleófilo adecuado, HR^{14}, en el que
R^{14} se selecciona del grupo consistente de
NH_{2n}NHR^{15}, SR^{15} y OR^{15} para dar un compuesto de
formula VIII
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R^{15} se selecciona del grupo consistente en
C_{1-4}-alcílico,
C_{1-4}-alcílico sustituido,
C_{1-4}-alcóxido, fenilo
opcionalmente sustituido,
C_{7-12}-arálcilo, heterorarilo,
C_{p}H_{2p}NR^{16}R^{17} o un enlazante, opcionalmente
sustituidos;
En el que al menos uno de R^{16} y R^{17} es
(CH_{2})_{2}A^{3} o conjuntamente con el nitrógeno al
que está agregado forma un anillo de formula IX
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En el que al menos uno de R^{18}, R^{19} y
R^{20} se selecciona de A^{2} y A^{2}
C_{1-4}-alcílico sustituido, y
algunos otros son H ó
C_{1-4}-alcílico;
R^{21} se selecciona de H,
C_{1-4}-alcílico, A^{2} y
A^{2} alcílico sustituido;
A^{2} es un grupo de salida, hidrófilo,
hidróxilo protegido o un átomo de halógeno;
q es 1-4;
p es 1-7;
siendo seleccionados los grupos sustituyentes de
C_{1-4}-alcílico, hidróxilo,
amino, alcilamino, halo y aziridina.
El producto del método sintético supra
puede ser oxidizado en el alcino al que R^{12} está agregado para
formar el correspondiente compuesto activo. Reagentes adecuados para
llevar a cabo esta transformación incluyen dioxirano de dimetilo
(DODM), peróxido de hidrógeno, los ácidos peroxicarboxílicos y los
ácidos peróxidos, por ejemplo, el ácido
meta-cloroperbenzoico.
En una síntesis de compuestos de la presente
invención que contiene el anillo de la formula IX, o un grupo
C_{p}H_{2p}NR^{16}R^{17}, los grupos
R^{16}-R^{21} pueden ser los mismos en el
producto final deseado de la fórmula general
R^{5}-R^{10}. Alternativamente, estos grupos
pueden ser precursores para los grupos finales deseados y pueden ser
reemplazados en una etapa o etapas de reacción subsiguiente para
generar el sustitutivo deseado. Ejemplos de etapas de reacción
subsiguiente serían etapas halogenantes llevadas a cabo sobre un
grupo hidróxilo, o un grupo hidróxilo protegido después de su
desprotección. En tales procesos, un grupo A^{2} que es un grupo
hidróxilo o un grupo hidróxilo protegido, es reaccionado con un
agente halogenante, tal como un agente clorinante, opcionalmente
después de su desprotección, opcionalmente para reemplazar el
A^{2} o cada uno de ellos, por un átomo de halógeno.
Preferentemente, este átomo de halógeno es la clorina.
En la síntesis, R^{11} es naftilo, antranilo
o, preferiblemente, un grupo de la fórmula III, opcionalmente
sustituidos.
X^{2} es preferentemente oxígeno, R^{12} es
preferentemente metilo y R^{14} es preferentemente NH^{2} o
C_{p}H_{2p}NR^{16}R^{17}, donde R^{16} y R^{17}, junto
con el hidrógeno al cual se agregan, forman un anillo de fórmula
IX.
Se cree que los intermediarios para la síntesis
de la fórmula general I de la presente invención son nuevos
compuestos, que pueden ser representados por la fórmula general
X
en el que X^{3} se selecciona del
grupo consistente en O, NH y
S;
R^{22} es H,
C_{1-4}-alcílico,
C_{1-4}-alcóxido, fenilo
opcionalmente sustituido,
C_{7-12}-arálcilo, heterorarilo o
un enlazante, opcionalmente sustituidos;
R^{23} es un enlazante o NHR^{24} donde
R^{24} es C_{r}H_{2r}NR^{25}R^{26} o un enlazante;
R^{25} y R^{26} son
(CH_{2})_{2}A^{3} o conjuntamente con el nitrógeno al
que están agregados forman un anillo de formula XI
En el que al menos uno de R^{27}, R^{28} y
R^{29} se selecciona se selecciona de A^{3} y A^{3},
C_{1-4}-alcílico sustituido, y
algunos otros son H ó
C_{1-4}-alcílico; R^{30} se
selecciona de H,
C_{1-4}-alcílico, A^{3} y
A^{3} C_{1-4}-alcílico
sustituido;
A^{3} es un grupo de salida, OH, hidroxilo
protegido o un átomo de halógeno;
s es 1-4;
r es 1-7;
en los intermediarios de la presente invención,
R^{22} es preferentemente CH_{3}. X^{3} es preferentemente O
y, como en los componentes de la presente invención de la fórmula
general I, R^{25} y R^{26} preferentemente de un anillo
conjunto con el nitrógeno al que están agregados, para dar una
mostaza de nitrógeno.
Los grupos R^{27}-R^{30}
pueden ser los mismos o diferentes a los grupos
R^{7}-R^{10} en el compuesto II. Caso de ser
diferentes, los grupos R^{27}-R^{30} pueden ser
convertidos en los correspondientes R^{7} -R^{10} en una fase
subsiguiente de reacción.
Un ejemplo específico de nuevo intermediario
es
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La presente invención proporciona nuevos
pro-medicamentos que tienen un grupo R^{1} que se
intercala con el ADN y una mostaza de nitrógeno que alciliza el
ADN.
Ejemplos aceptables de átomos de halógeno, son
fluorina, clorina, bromita y yodina, preferentemente clorina.
Ejemplos aceptables de grupos de salida como A^{4} son
carboxilatos, alcilo sulfonatos, arilo sulfonatos, grupos
alcilóxidos, acilóxidos y arilóxidos.
Los compuestos de la presente invención pueden
ser presentados como mezclas de racimo o enantiómeros aislados R- ó
S-. A menudo se encuentra que un enantiómero muestra más actividad
biológica y, en consecuencia, es preferido.
Grupos protectores adecuados para los alcoholes
incluyen éter de bencilo, sililo triálcilo (por ejemplo, TBDMS) y
tetrahidropiranilo (THP). De estos, el preferido es éter de
bencilo.
Los compuestos de la presente invención de la
fórmula general I pueden ser útiles en un método de tratamiento de
un animal por terapia. En particular, las propiedades citotóxicas
del propio compuesto o de la forma activa, como puede darse el
caso, pueden ser útiles en el tratamiento
anti-tumoroso. La invención proporciona además el
uso de estos compuestos en la fabricación de composiciones para su
uso en un método de tratamiento de un animal. Los compuestos pueden
ser incorporados en una composición farmacéutica conjuntamente con
un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Las composiciones farmacéuticas pueden ser
aceptables para administración intramuscular, intraperitoneal,
intrapulmonar, oral o, más preferentemente, intravenosa. Las
composiciones pueden contener matrices aceptables, por ejemplo,
para administración controlada o retardada. Los composiciones pueden
estar en forma de soluciones, sólidos, por ejemplo polvos, tabletas
o implantes, y pueden comprender el compuesto de la fórmula I en
forma sólida o disuelta. El compuesto puede estar incorporado en un
sistema particular de suministro de fármacos, por ejemplo, en una
formulación líquida. Ejemplos específicos de excipientes aceptables
incluyen lactosa, sucrosa, manitol y sorbitol; almidón de maíz,
trigo, arroz, patata u otras plantas; celulosa, tal como
metilcelulosa, hidroxipropilmetil-celulosa, o
carboximetilcelulosa de socio; gomas, incluida la arábiga o el
tragacanto; y proteínas, como la gelatina y el colágeno. Si se
desea, se pueden añadir agentes desintegrantes o solubilizantes,
tal como la pirrolidona de polivinilo entrelazante, agar, y ácido
algínico o una sal de los mismos, tal como el alginato de sodio.
Las composiciones sólidas pueden tomar la forma de polvos y geles
pero son, más convenientemente, de un tipo formado, por ejemplo
como tabletas, pastillas o cápsulas (incluyendo espánsulas).
Alternativamente, tipos de formulación más especializados incluyen
liposomas, nanosomas y nanopartículas.
El animal que es tratado es generalmente un
humano, aunque los compuestos pueden también tener un uso
veterinario. La indicación tratada en generalmente cáncer,
incluyendo adenocarcinoma, leucemia, linfoma, melanoma, mieloma,
sarcoma, teracarinoma y, en particular, cánceres de la glándula
adrenal, vejiga, hueso, médula espinal, cerebro, mama, cuello de
útero, vesícula biliar, ganglios, tracto gastrointestinal, corazón,
hígado, riñón, pulmón, músculo, ovario, páncreas, paratiroide,
pene, próstata, glándulas salivales, piel, bazo, timo, tiroide y
útero. El tumor puede, por ejemplo, ser definido como un tumor que
expresa altos niveles de CYP1B1.
Las formas oxidadas de los
pro-medicamentos del primer aspecto de la presente
invención y los componentes de mostaza del segundo aspecto de la
invención alcilan el ADN y causan citotoxicidad. Como tales, son
potentes agentes citotóxicos cuyo mecanismo biológico de acción
exacto se desconoce, pero implica la interrupción de la plantilla y
de otras funciones del ADN. La inhibición general de la función de
plantilla del ADN afectará a todas las células que se dividen en el
cuerpo y llevará a inaceptables efectos colaterales en un un
contexto terapéutico. Sin embargo, la producción deseada de las
formas epóxidas sólo en las células tumorosas que presenten una
sobreexposición de isoformas peculiares del citocromo P450 llevará a
un efecto citotóxico específico solamente en dichas células
Figura 1: Efecto de 2 sobre la movilidad
electroforética del ADN plástico F174.
Figura
2:
- (a)
- citotoxicidad de 2 sobre células CHO (con o sin CYP3A4).
- (b)
- citotoxicidad de "mach" 361/1 {(25, 35)-(1)} sobre células CHO (con o sin CYP3A4).
Figura
3:
- (a)
- Efecto de 20 sobre el entrelazamiento del ADN después de una hora de incubación con ADN plásmico pUC 18
- (b)
- El porcentaje de ADN entrelazado (doble hilado)
Figura 4: Como para la Figura 3 pero después de
2 horas de incubación.
Figura 5: Como para la Figura 3 pero después de
3 horas de incubación.
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Los siguientes ejemplos ilustran la
invención:
Ejemplo
1
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Esquema
1
Síntesis de 2. Reagentes y
condiciones: (i) Tionilclorido, reflujo (ii)
(S)-alcino, Et_{3}N, DCM (iii)
Pd(OAc)2 Et_{3}N Et_{3}SIH (iii) H_{2},
Pd-C, Metanol (iv) Et_{3}N, PyBOP, HOBt,
NH_{3}
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Las nuevas amidas de alcino de la fórmula
general I fueron preparadas a partir del ácido carboxílico 7 en
cuatro etapas. El ácido clorido (8) fue emparejado al
hidroxibutenato de benzilo por adición, gota a gota, a una solución
removida de alcohol conjuntamente con Et_{3}N en CH_{2}Cl_{2}
seco bajo una atmósfera de nitrógeno a 0ºC. Después de 4 horas, la
reacción fue enfriada con H_{2}O, extraída con CH_{2}Cl_{2} y
purificada para obtener 9 en una producción del 65%. El análisis
del protón NMR confirmó la estructura y mostró los protones de
alcenilo como múltiplos en 5.33 y 5.18 ppm. Los protones de bencilo
CH_{2} también aparecieron como un múltiplo a 5.31 ppm, el protón
H-2 fue detectado a 5.77 ppm y los hidrógenos de
metilo tuvieron valores de 2.68 ppm para el metilo aromático y 3.96
ppm para el metilo metóxido.
El grupo bencilo fue desprotegido selectivamente
usando catalítico Pd(OAc)_{2}. Una solución de
Pd(OAc)_{2} Et_{3}N y Et_{3}SIH en
CH_{2}Cl_{2} seco fue removida a RT bajo N_{2} durante 15
minutos. Una solución del estero 9 en CH_{2}Cl_{2} seco se
añadió entonces, gota a gota. La mezcla fue removida a RT durante
toda la noche antes de enfriar la la reacción por la adición de
NH_{4}Cl. Después de la extracción con Et_{2}O, el ácido
carboxílico alcenilo fue recuperado en una producción del 90%. Este
ácido fue tratado entonces con 35% NH_{3}, Et_{3}N, HOBt y
PyBOP para obtener la amida 2 en una producción del 66%. El análisis
NMR mostró los protones de NH_{2} como unidades amplias en 6.13 y
5.65 ppm, en donde el protón H-2 apareció en 5.87
ppm. Los protones de metileno de alcino fueron identificados como
dos múltiplos en 5.36 y 5.21 ppm, y los grupos de metilo como
unidades en 3.95 (OCH_{3}), 2.52 (Ar-CH_{3}) y
1.96 ppm (CH_{3}). Los protones aromáticos del cromoforo de
naftalina estuvieron en 8.85 (1 H), 7.90 (1 H), 7.50 (1 H) y 7.36
ppm (2 H). El compuesto de esterocisómero, (R)-2
fue sintetizado usando la misma ruta pero empleando
(R)-butenato de hidróxido.
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Ejemplo
2
Los estudios iniciales de citotoxicidad
estuvieron en las líneas celulares U2-OS y HoeR. El
U2-OS es una línea celular de osteosarcoma y HoeR
es una variante de la misma resistente al enlazante del canal menor
del ADN. Ambas están disponibles en la Colección Estadounidense de
Cultivos Típicos (American Type Culture Collection, ATCC), Dr.
Raymon H., 10801 University Boulevard, Manassas, MA,
20110-2209, USA. Los estudios revelaron que los
análogos de amida de alcino 2 y (R)-2 no fueron
compuestos citotóxicos mientras que sus contrapartes epóxidos (2S,
3S)-1, (2S, 3R)-1, (2R,
3R)-1 (2R, 3S)-1 demostraron buena
actividad en estas líneas celulares (Tabla 1).
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La Figura 1 muestra el efecto de 2 en la
movilidad electroforética del ADN plástico F174. La fila 1 contiene
solamente ADN, las filas 2-8 tienen,
respectivamente, una relación entre medicamento y bp de 10^{-3},
10^{-2}, 10^{-1}, 1, 10, 20. La concentración de ADN fue de
posiciones 3.8 \mum y SC para el ADN superenrollado y OC para ADN
Circular Abierto.
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Ejemplo
3
La tabla 1 muestra que 2 adolece de actividad
citotóxica en las líneas celulares U2-OS y HoeR
in vitro en concentraciones tan elevadas como puede ser 10
\muM. Ulteriores estudios de 2 en células CHO tipo salvaje y
células CHO que han sido transfectadas con CYP3A4 revelaron que el
promedicamento 2 parece ser más citotóxico en células CHO CYP3A4
comparadas con el tipo salvaje (ausente en CYP3A4). La figura 2 (a)
muestra la citotoxicidad de 2 en células CHO, con o sin CYP3A4.
La figura 2 (b), de forma similar, muestra la
citotoxicidad de (25, 35)-1. Por comparación, el
compuesto (activo) epóxido tiene alta citotoxicidad en cada línea
celular. Esto es un indicador inicial que muestra que la
funcionalidad del alcino puede, ciertamente, ser metabolizada por
encimas P-450 citocrómicas para conseguir un
compuesto que es más citotóxico que el precursor alcino de su misma
familia.
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Referencia del ejemplo
4
La síntesis de un compuesto de la fórmula XII
fue llevada a cabo de acuerdo con los esquemas 2 y 3.
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Esquema
2
Síntesis de cadena lateral de
mostaza. Reagentes y condiciones: (i) EtN, Boc_{2}O, CH_{3}OH,
45ºC, 20 h, 95%. (ii) EtN, MsCl, anhídrido CH_{2}Cl_{2},
NH_{2}, 0ºC, 1 h, 71% (iii) TBAC, anhídrido DMF 90ºC, 30 minutos,
92% (iv) 2.5 M HCl/EtOAc, 1
h
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Esquema
3
Síntesis de 20 Reagentes y
condiciones: (i) H_{2}, Pd-C, MeOH (ii) 16,
Et_{3}N, PyBOP, HOBt (iii) Et_{3}N, PyBOP,
HOBt
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El 2-cloropiperidina (16) fue
sintetizado desde
1-(2-aminoetilo)-piperidina-3-olo
(11) siguiendo la protección Boc de la amina primaria. Esto se
consiguió removiendo el alcohol de diamino (11) en CH_{3}OH
durante 5 minutos, tras lo cual se añadió Boc2o (disuelto en
CH_{3}OH), gota a gota, sobre unos 20 minutos y la mezcla de
reacción se removió a 45ºC durante 20 horas. Esto fue concentrado
al vacío, disuelto en EtOAc y lavado con H_{2}O para conseguir 12
como un aceite de color paja con una producción del 95%.
La amina con protección Boc (12) fue convertida
entonces en el mesilato (13) removiéndola en anhídrido
CH_{2}Cl_{2}, con Et_{3}N y añadiendo MsCl gota a gota a 0ºC.
Después de 1 hora, la reacción fue enfriada con hielo frío
NaHCO_{3} en salmuera y extraído con CH_{2}Cl_{2} frío para
conseguir 14, el precursor al derivado de
2-cloropiperidina con protección Boc en una
producción de 71%. El mesilato fue transformado inmediatamente en
la mostaza con protección Boc (15) por calentamiento en en anhídrido
DMF a 90ºC en presencia de TBAC durante 30 minutos para conseguir
la mostaza con protección Boc (15) en una producción de 92%. Previo
a su acoplamiento a la funcionalidad del ácido carboxílico de la
parte izquierda de la azinomicina, la amina protegida por Boc fue
desprotegida removiéndola en 2.5 M de HCl seco en EtOAc durante una
hora. El EtOAc fue entonces eliminado por evaporación para
conseguir la sal de clorido de la amina.
El benzilastero (S, S)-17
fue sintetizado usando un método estereoselectivo como se describe
en Bryant y otros en Synlett. 1996, 10, 973. 17 es
convertido en el ácido carboxílico epóxido libre del esquema 3, paso
(i), por hidrogenolisis, usando Pd-C en CH_{3}OH
bajo atmósfera de hidrógeno.
Para preparar 20, el ácido carboxílico epóxido
recién preparado fue disuelto en DMF seco, removido a 0ºC y fue
tratado sucesivamente con 16, Et_{3}N y PyBOP. La mezcla de
reacción fue calentada a RT y removida durante 18 horas después de
que se añadiera tolueno y la solución resultante fue sucesivamente
lavada con NaHCO_{3} y salmuera. La cromatografía de columna
(10-20% CH_{3}OH/CH_{2}Cl_{2}) suministró 20
en una producción de 67%.
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Referencia del ejemplo 5 de
entrelazado de
ADN
El pUC de ADN plásmico (18) fue alineado por
digestión con Hind III. El ADN linear fue entonces desfosforilatado
con BAP y ^{32}P-radioetiquetado al
extremo-5'. El ADN fue purificado entonces por
precipitación de EtOH para eliminar \gamma^{32}P ATP y el ADN
fue resuspendido en H_{2}O estéril doble destilado. A cada muestra
de reacción se añadió ADN etiquetado de
^{32}P-extremo y droga en concentración apropiada.
Siguiendo la incubación a 37ºC durante el tiempo requerido, la
reacción se terminó por la adición de una solución amortiguadora de
detención. El aductor de droga de ADN fue EtOH precipitado y secado
por liofilización. Cada muestra de ADN secada, incluyendo una
hilera individual de ADN no tratada, fue desnaturalizada por
resuspensión en amortiguador desnaturalizante alcalino. El ADN de
control de doble hilera fue disuelto entonces en amortiguador de
carga de sucrosa y las muestras cargadas y electroforesadas en un
gel de agarosa horizontal al 0.8% de una longitud de 20 cm.,
sumergido en amortiguador 1 x TAE a 40 V durante 16 horas. Los geles
fueron entonces secados y autoradiografiados.
El compuesto 20, que consiste tanto en la
funcionalidad de epóxido como en la de mostaza fue testado en
concentraciones de entre 0.1 y 50 \muM a intervalos de 1, 2 y 3
horas. La Figura 3 muestra una autoradiografía y una curva de
respuesta de concentración que muestra que 20 puede imitar el
producto natural Azinomicina A y entrelaza ADN puC 18 plásmico
linear de doble hilera tras una hora de incubación. La formación del
entrelazado comienza a concentraciones tan bajas como 0.1 \muM y
alcanza el 100% de entrelazamiento a -10 \muM. Tras incubación
durante una hora, se determinó que el CR50 era de 3.1 \muM
(concentración a la que el 50% del dúplice es entrelazado). El
porcentaje de ADN entrelazado se determinó por densitometría
autoradiográfica.
La formación de entrelazado progresó firmemente
durante el tiempo y, después de 2 horas, se redujo el CR_{50} de
3.1 \muM a 2.7 \muM (Figura 4). Después de 3 horas, el CR_{50}
era 2.2 \muM (Figura 5).
En las figuras 3-5, el DS
corresponde al ADN de doble hilera, SS corresponde al ADN de hilera
única, U corresponde al ADN no tratado y no desnaturalizado y UD al
ADN desnaturalizado pero no tratado.
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Referencia del ejemplo 6 de
actividad
antitumorosa
Los ejemplos 6 y 7 hacen uso del panel celular
NCl 60. Esta es un proyecto de exploración de líneas celulares
in vitro que proporciona apoyo directo al Programa
Terapéutico de Desarrollo del Instituto Nacional del Cáncer de
Estados Unidos para investigación anticancerígena. La metodología
para la operación de línea celular fue descrita por Boyd y otros en
Drug Development Research 1995, 34,
91-109.
La actividad antitumorosa en el panel de línea
celular NCl 60 muestra que el compuesto tiene actividad que oscila
entre la baja micromolecular a la alta nanomolecular. La tabla 2
muestra la actividad antitumorosa (GI_{50}, \mum) del compuesto
20, donde el valor GI_{50} es la concentración que resulta en una
inhibición del crecimiento del 50%.
Ejemplo
7
Un método similar al usado al Ejemplo 4
(Esquemas 2 y 3) fue usado para sintetizar el análogo alcilante
usando la mostaza (16) y el ácido carboxílico de alcino (10) para
obtener 21 (producción del 59%).
Esquema
4
Síntesis de 21 Reagentes y
condiciones: (i) 16, Et_{3}N, PyBOP,
HOBt
La tabla 2 muestra la actividad antitumorosa
(GI_{50}, \muM) de 21.
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Los resultados de los ejemplos 6 y 7 muestran
que los compuestos 20 y 21 tienen citotoxicidad significativa en el
bajo rango micromolecular a lo largo de un rango ancho de líneas
celulares tumorosas humanas.
\newpage
Ejemplo
8
Esquema
5
Para sintetizar el análogo no alcilante 22, el
compuesto 10 del intermediario de ácido carboxílico fue emparejado
con hidroxipiperidina (11) en una producción de 66% usando
metodología PyBOP. 21 fue sintetizado como se describió en el
ejemplo 7.
Claims (20)
1. Un compuesto de la formula I o una sal de la
misma:
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En el que X^{1} se selecciona de un grupo
consistente en O, S y NR^{0} en el que R^{0} es alcilo
C_{1-4} ó H;
R^{3} es NH_{2}, NHR^{5}, SR^{4},
OR^{4}, CH_{2}R^{4} u OH;
R^{1} R^{6} es naftilo, antranilo o un grupo
de la formula III, opcionalmente sustituidos
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R^{2} es H,
C_{1-4}-alcílico opcionalmente
sustituido, C_{1-4}-alcóxido,
fenilo opcionalmente sustituido,
C_{7-12}-arálcilo, heterorarilo o
un enlazante opcionalmente
sustituidos;
R^{4} es
C_{1-4}-alcílico,
C_{1-4}-alcílico sustituido,
C_{1-4}-alcóxido, fenilo
opcionalmente sustituido,
C_{7-12}-arálcilo, heterorarilo,
C_{n}H_{2n}NR^{5}R^{6} o un enlazante opcionalmente
sustituidos;
En el que al menos uno de R^{5} y R^{1} es
(CH_{2})_{2}A^{2} o conjuntamente con el nitrógeno al
que está agregado forma un anillo de formula II
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En el que al menos uno de R^{7},
R^{8} y R^{9} se selecciona de A^{1} y A^{1},
C_{1-4}-alcílico sustituido, y
algunos otros son H ó
C_{1-4}-alcílico; R^{10} se
selecciona de H, C_{1-4}-alcílico,
A^{1} y A^{1},
C_{1-4}-alcílico
sustituido;
A^{1} es un grupo de salida o un átomo de
halógeno;
m es 1-4;
n es 1-7;
siendo seleccionados los grupos sustituyentes de
C_{1-4}-alcílico, hidróxilo,
amino, alcilamino, halo, y aziridina, y el enlazante es un
oligopéptido, biotina, avidina, estreptavidina o grupo polimérico,
un oligonucleótido o una proteína.
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 en la que X^{1} es O.
3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 ó la reivindicación 2 en la que R^{2} es CH_{3}.
4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1-3 en la que R^{3} es NHR^{4}.
5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
4 en el que R^{4} es C_{n}H_{2n}NR^{5}R^{6}.
6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
5 en el que R^{4} es C_{n}H_{2n}NR^{5}R^{6} es IV
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7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 que es
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8. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1-3 en el que R^{3} es
NH_{2}.
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
8 seleccionado de
\vskip1.000000\baselineskip
10. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de
las reivindicaciones anteriores para su uso en un método de
tratamiento médico terapéutico de un animal.
11. El uso de un compuesto de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1-9 en la
fabricación de una composición para uso en un método de tratamiento
médico terapéutico de un animal, preferentemente un tratamiento
antitumoroso.
12. Una composición farmacéutica que comprenda
el compuesto de cualquiera de las reivindicaciones
1-9 y un excipiente farmacéuticamente
aceptable.
13. Un método sintético en que un compuesto de
fórmula V
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\vskip1.000000\baselineskip
en el que R^{11} se selecciona de
un grupo consistente de neftilo, antranilo y un grupo de fórmula
III, opcionalmente sustituidos, se reactiva con un compuesto de
fórmula
VI
en el que R^{12} es H,
C_{1-4}-alcílico, opcionalmente
sustituido, C_{1-4}-alcóxido,
fenilo, opcionalmente sustituido,
C_{7-12}-arálcilo, heterorarilo o
un enlazante, opcionalmente
sustituidos;
X^{2} es O, NH o S;
R^{13} es OH, Cl,
C_{1-4}-alcóxido u OPG donde PG es
un grupo protector;
Tal que Cl en V es reemplazado en una reacción
de sustitución nucleofílica por un grupo de fórmula VII
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
donde el enlazante es un
oligopéptido, biotina, avidita, estreptavidina, un grupo polimérico,
un oligonucleótido o una
proteína.
14. Un método de acuerdo con la reivindicación
13 seguido por eliminación del grupo protector para conseguir
R^{13} = OH.
\newpage
15. Un método de acuerdo con la reivindicación
14 seguido por reacción con un grupo de la fórmula HR^{14} para
dar un compuesto de formula VIII
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en el que R^{14} se selecciona
del grupo consistente en NH^{2}, NH3^{15}, SR^{15} y
OR^{15};
R^{15} es
C_{1-4}-alcílico,
C_{1-4}-alcílico sustituido,
C_{1-4}-alcóxido, fenilo
opcionalmente sustituido,
C_{7-12}-arálcilo, heterorarilo,
C_{p}H_{2p}NR^{16}R^{17} o un enlazante, opcionalmente
sustituidos;
\vskip1.000000\baselineskip
En el que al menos uno de R^{16} y R^{17} es
(CH_{2})_{2}A^{2} o conjuntamente con el nitrógeno al
que está agregado forma un anillo de formula IX
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En el que al menos uno de R^{18}, R^{19} y
R^{20} se selecciona de A^{2} y A^{2}
C_{1-4}-alcílico sustituido, y
algunos otros son H ó
C_{1-4}-alcílico;
R^{21} se selecciona de H,
C_{1-4}-alcílico, A y A
C_{1-4}-alcílico sustituido;
A^{2} es un grupo de salida, átomo de
halógeno, hidroxilo o un hidroxilo protegido;
q es 1-4;
p es 1-7;
siendo los grupos sustituidos seleccionados de
C_{1-4}-alcílico, hidróxilo,
amino, alcilamino, halo, y aziridina.
\vskip1.000000\baselineskip
16. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 13-15 donde el grupo protector en
bencilo.
17. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 13-16 en el que X^{2} es O.
18. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 13-17 en el que R^{12} es
CH_{3}.
19. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 13-18 en el que el alcino al que
R^{12} está agregado es oxidado para conseguir el epóxido
correspondiente.
\newpage
20. Un compuesto de la fórmula general X
en el que X^{3} se selecciona del
grupo consistente en O, NH y
S;
R^{22} es H,
C_{1-4}-alcílico,
C_{1-4}-alcóxido, fenilo
opcionalmente sustituido,
C_{7-12}-arálcilo, heterorarilo o
un enlazante, opcionalmente sustituidos;
R^{23} es un enlazante o NHR^{24} donde
R^{24} es C_{r}H_{2r}NR^{25}R^{26} o un enlazante;
R^{25} y R^{26} son
(CH_{2})_{2}A^{3} o conjuntamente con el nitrógeno al
que está agregado forma un anillo de formula XI
En el que al menos uno de R^{27},
R^{28} y R^{29} se selecciona se selecciona de A^{3} y
A^{3}, C_{1-4}-alcílico
sustituido, y algunos otros son H ó
C_{1-4}-alcílico; R^{30} se
selecciona de H,
C_{1-4}-alcílico, A^{3} y
A^{3} C_{1-4}-alcílico
sustituido;
A^{3} es un grupo de salida, átomo de
halógeno, hidroxilo o hidroxilo protegido;
s es 1-4;
r es 1-7 y el enlazante es un
oligopéptido, biotina, avidita, estreptavidina, un grupo polimérico,
un oligonucleótido o una proteína.
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