ES2322468T3

ES2322468T3 - Derivados de disulfuro, sulfuro, sulfoxido y sulfona de azucares ciclicos y sus usos.

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Publication number: ES2322468T3
Application number: ES04765682T
Authority: ES
Inventors: Jose Lacer S.A. REPOLLES MOLINER; Eduardo Lacer S.A. SALAS PEREZ-RASILLA; Francisco Lacer S.A. PUBILL COY
Original assignee: Lacer SA
Current assignee: Lacer SA
Priority date: 2003-10-03
Filing date: 2004-09-29
Publication date: 2009-06-22
Anticipated expiration: 2024-09-29
Also published as: JP4809769B2; BRPI0415020A; US8541607B2; US7521571B2; HRP20090152T3; GB2421241B; GEP20084490B; GT200400200A; MXPA06003610A; CN1863805A; AP1976A; UY28547A1; IL174371A0; IS8436A; HK1092807A1; PT1668017E; PL1668017T3; US7777058B2; NZ546043A; DE602004019666D1

Abstract

Un compuesto según la fórmula (I) o un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de la misma: **(Ver fórmula)** en la que: n es un número entero de 0, 1 ó 2, X representa -S(O)m-, -(C=O)- o un enlace sencillo, en la que m es un número entero de 0, 1 ó 2, con la condición de que cuando X represente -(C=O)- entonces n es 0, R representa hidrógeno o es un residuo R a , residuo R a que se selecciona del grupo que está constituido por: alquilo C1 - 6; alquenilo C2 - 6; cicloalquilo C3 - 8; cicloalquilo C3 - 8, en el que un grupo CH2 está sustituido por O, S, NH o NCH3; cicloalquenilo C4 - 8; cicloalquenilo C4 - 8, en el que un grupo CH2 está sustituido por O, S, NH o NCH3; fenilo; piridilo; tiofenilo; nitrosilo; S-cisteinilo; S-glutationilo; y

Description

Derivados de disulfuro, sulfuro, sulfóxido y sulfona de azúcares cíclicos y sus usos.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a derivados de disulfuro, sulfuro, sulfóxido y sulfona de mononitrato de 1,4:3,6 dianhidrohexitol y su uso para la prevención y/o tratamiento de trastornos vasculares.

Antecedentes técnicos

El óxido nítrico (NO) es una de las moléculas biológicamente activas más pequeñas y sencillas que podemos encontrar en la naturaleza. Además, el NO parece ser una de las moléculas más ubicuas en las especies de mamíferos. Al ser una de las moléculas de señalización más generalizadas, el NO tiene una gran importancia en el control de prácticamente todas las funciones orgánicas y celulares del cuerpo. El NO es la única molécula endógena capaz de funcionar como un neurotransmisor, autacoide, mediador constitutivo, mediador inducible, molécula citoprotectora y molécula citotóxica.

Dado que el NO desempeña múltiples acciones fisiológicas en la regulación de numerosas y diversas funciones orgánicas, los defectos en la ruta del NO conllevan el desarrollo de diferentes afecciones patológicas. Estos trastornos incluyen la hipertensión, aterosclerosis, enfermedades de las arterias coronarias, insuficiencia cardiaca, hipertensión pulmonar, ictus, impotencia, complicaciones vasculares de la diabetes mellitus, úlceras gastrointestinales, asma y otros trastornos del sistema nervioso central y sistémico.

Todos los donantes de óxido nítrico (DNOs) comparten la propiedad común de producir actividad relacionada con el NO cuando se aplican en sistemas biológicos y, por tanto, mimetizan las respuestas al NO endógeno. No obstante, las rutas que llevan a la formación/liberación del NO difieren de manera significativa entre las clases de compuestos, al igual que entre sus reactividades químicas. Mientras que algunos compuestos requieren catálisis enzimática, otros producen NO de manera no enzimática. En algunos compuestos, la liberación de NO es precedida por una reducción o por una oxidación. El proceso se complica aún más por la susceptibilidad específica de los compuestos a los cambios en el pH, oxígeno, luz y temperatura y por la formación de diferentes subproductos que se produce durante la descomposición o el metabolismo. Además, la cinética de la liberación de NO a partir de un compuesto determinado es, a menudo, más importante que la cantidad absoluta de NO liberado. Es más, la distribución tisular de los DNOs y el lugar en el que se genera el NO es también muy importante. Todas estas consideraciones son importantes ya que explican los muy diferentes perfiles farmacológicos obtenidos con los distintos DNOs descritos en la bibliografía, y hacen necesario caracterizar completamente el perfil farmacológico de los DNOs recientemente desarrollados en investigación y desarrollo.

Los DNOs farmacéuticamente útiles que tienen un esqueleto de mononitrato de isosorbida se revelan en el documento WO 00/20420. Los compuestos como tales revelados en este documento no forman parte de la presente invención. Esta solicitud de patente describe nitratos orgánicos capaces de proporcionar un potente efecto vasodilatador y que, al mismo tiempo, muestran poco efecto de tolerancia o nulo. Sin embargo, no existe indicación alguna sobre el posible uso de dichos compuestos para el tratamiento de la activación de plaquetas; trombosis; ictus; daño tisular debido a isquemia y/o a isquemia/reperfusión; afecciones patológicas en las que el estrés oxidativo desempeña un importante papel en su patogénesis; y/o aterosclerosis. Por consiguiente, el nuevo uso de dichos compuestos forma parte de la presente invención.

La publicación de O. de Lucchi y col., Gazzetta Chimica Italiana, 117, 1987, págs. 173-176, describe la acción quimioselectiva de 2,5-dinitrato de isosorbida. J. P. Nallet y col., Eur. J. Org. Chem., 1998, págs. 933-943, se refiere a la síntesis de una serie de derivados de mononitrato de hexitol y aminodesoxihexitol que contienen un grupo azufre. Los compuestos descritos tienen un efecto vasorelajante superior al mononitrato de isosorbida, y uno de los compuestos tiene un buen efecto en comparación con el dinitrato de isosorbida. El documento EP 0 530 887 Al desvela mononitratos de isosorbida sustituidos con feniltiobenzoílo y sus efectos vasorelajantes en vasos aislados. El documento EP 0 290 885 A2 describe ésteres de 2- y 5-mononitrato de isosorbida con ácidos o diácidos alifáticos, de arilo, cinámicos o sustituyentes de alquilcarboniloxi y su uso en la terapia cardiovascular. El documento FR-A 2 134 698 se refiere a ésteres de mononitrato O-sustituidos de 1,4:3,6-dianhidro-D-glucitol que poseen actividad cardiovascular. Los compuestos desvelados en estos documentos se diferencian de los descritos en la presente invención. Además, no existe indicación alguna en ninguno de estos documentos sobre el posible uso de los compuestos para la prevención o el tratamiento de aterosclerosis, disfunciones endoteliales, vasoespasmos, vasculopatía del trasplante alogénico cardiaco, activación de plaquetas, trombosis, ictus, afecciones patológicas en las que el estrés oxidativo desempeña un importante papel en su patogénesis y/o daño tisular debido a isquemia y/o debido a isquemia-reperfusión.

Uno de los principales problemas de los compuestos orgánicos nitrados descritos en la literatura y de aquellos utilizados clínicamente reside en el hecho de que su mecanismo de acción radica en la relajación del músculo liso vascular sin modificar otros procesos patológicos involucrados en las enfermedades cardiovasculares.

La isquemia tisular resulta en la depleción de las reservas intracelulares de adenosina-trifosfato (ATP), lo que consecuentemente compromete el funcionamiento de las bombas iónicas dependientes del ATP asociadas a la membrana en las células endoteliales. Esta disfunción de la membrana permite la entrada de calcio, sodio y agua en las células. La acumulación resultante de calcio y otros iones en la célula puede derivar en una tumefacción celular y en la inapropiada activación de las enzimas celulares. Una enzima que se activa por el aumento del calcio intracelular durante la isquemia es la xantina deshidrogenasa (XDH). En condiciones normales, la XDH oxida la hipoxantina (un producto de descomposición del metabolismo del ATP) de una manera dependiente de NADPH para producir xantina y ácido úrico. Sin embargo, durante la condición hipóxica de la isquemia, los niveles de hipoxantina aumentan dentro de la célula debido a la hidrólisis de ATP y se produce una activación dependiente del calcio de las proteasas que convierte la XDH reductora de NADPH en una forma de enzima reductora de oxígeno denominada xantina oxidasa (XO). Al producirse el restablecimiento del flujo de sangre (reperfusión) al tejido y con la reintroducción de oxígeno molecular, la XO convertirá la hipoxantina en xantina y ácido úrico y ello catalizará la reducción de oxígeno molecular para formar tanto radicales de anión superóxido (O_{2}^{-}) como peróxido de hidrógeno (H_{2}O_{2}). Este mecanismo de producción de radicales de oxígeno dependiente de la XO ha sido invocado para explicar la participación del O_{2}^{-} y el H_{2}O_{2} en las lesiones de la reperfusión producidas en una variedad de órganos, incluyendo el intestino, el cerebro, el corazón y el músculo esquelético.

La generación de radicales de oxígeno en tejidos post-isquémicos parece sobrepasar la capacidad de los antioxidantes endógenos tales como la superóxido dismutasa (SOD), catalasa, glutatión para proteger las células endoteliales y parenquimatosas. Los antioxidantes exógenos tales como el SOD y la catalasa han demostrado atenuar la infiltración de leucocitos y las lesiones a tejidos producidas por la isquemia y la reperfusión.

La biodisponibilidad del óxido nítrico parece estar reducida en la reperfusión, lo que probablemente se deba a un deterioro de la producción endotelial de NO y a una inactivación aumentada de NO por el O_{2}^{-} derivado de células endoteliales. La biodisponibilidad limitada del NO contribuye a las interacciones anormales célula-célula y a la disfunción vascular durante la reperfusión. Los compuestos donantes de óxido nítrico han demostrado resultados prometedores como agentes protectores en modelos experimentales de isquemia-reperfusión. No obstante, considerando los procesos involucrados en los daños producidos por la isquemia-reperfusión, sería muy interesante disponer de una molécula con ambas propiedades: que fuera un donante de NO y que, al mismo tiempo, tuviera propiedades antioxidantes.

La aterosclerosis es un proceso activo originado por el daño continuo del endotelio vascular. Se desarrolló la hipótesis de la aterosclerosis como respuesta al daño del endotelio cuando se estudió la asociación de aterosclerosis con factores de riesgo (niveles plasmáticos elevados de LDL, bajos niveles plasmáticos de HDL, hipertensión, estrés oxidativo, tabaquismo, diabetes mellitus, niveles plasmáticos elevados de Lp(a)o modificaciones de la LDL tales como oxidación o glucación que evitan la eliminación de LDL por los receptores específicos). La LDL se acumula en la pared vascular como consecuencia de un transporte activo de células endoteliales vasculares. Durante este proceso, la LDL sufre la oxidación de una parte de la molécula. La presencia de LDL oxidada (ox-LDL) es de vital importancia para el desarrollo de la lesión aterosclerótica. En el mismo sentido, la teoría de que la LDL oxidada es responsable de algunas de las características patológicas de las lesiones ateroscleróticas deriva de los hallazgos en sistemas de células en cultivo de que la LDL oxidada causa cambios celulares que se correlacionan con aspectos conocidos de las lesiones arteriales pero que no están inducidos por la LDL nativa. La lesión endotelial, la retención de LDL en el intersticio de la íntima, el reclutamiento de monocitos en la íntima, el enriquecimiento de los macrófagos con lípidos derivados de lipoproteínas, la migración y proliferación de células musculares lisas, la acumulación de detritus de células necróticas y las tendencias hacia la vasoconstricción y la actividad pro-coagulante son características de la
aterosclerosis.

La vasculopatía del trasplante alogénico cardiaco es una forma inusualmente acelerada y difusa de aterosclerosis coronaria que limita el éxito a largo plazo del trasplante de corazón. La disfunción vasodilatadora del endotelio coronario es un marcador común y temprano para el desarrollo de vasculopatía del trasplante alogénico cardiaco.

Por tanto, los compuestos orgánicos nitrados novedosos que, además de su actividad vasodilatadora, podrían combinar actividades que les permitieran modificar otros procesos patológicos que forman parte de las enfermedades cardiovasculares, tales como la aterosclerosis y el daño tisular debido a la isquemia y/o debido a la isquemia y a la reperfusión, supondrán una importante ventaja con respecto a los compuestos utilizados hoy en día.

Resumen de la invención

Un objeto de la invención es un novedoso tipo de compuestos, derivados del mononitrato de dianhidrohexitol, que son capaces de proporcionar un potente efecto vasodilatador y que, al mismo tiempo, modifican otros procesos patológicos involucrados en las enfermedades cardiovasculares tales como aterosclerosis, vasculopatía del trasplante alogénico cardiaco y daño tisular debido a isquemia y/o isquemia-reperfusión.

Otro objeto de la invención es un novedoso tipo de compuestos, derivados del mononitrato de dianhidrohexitol, que son capaces de proporcionar un potente efecto antitrombótico incluso a una dosis que no modifica la tensión arterial.

Otro objeto de la invención es un novedoso tipo de compuestos, derivados del mononitrato de dianhidrohexitol, que son capaces de proporcionar un efecto sinérgico con fármacos trombolíticos, anticoagulantes, antitrombóticos, antioxidantes e hipolipemiantes.

Otro objeto más de la presente invención se refiere al nuevo uso de los derivados del mononitrato de dianhidrohexitol para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de trastornos cardiovasculares relacionados con la aterosclerosis.

Descripción detallada de la invención

Un objeto de la presente invención es proporcionar un compuesto según la fórmula (I), o un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de la misma:

1

en la que

n es un número entero de 0, 1, ó 2,

X representa -S(O)_{m}-, -(C=O)- o un enlace sencillo, en la que m es un número entero de 0, 1 ó 2; con la condición de que cuando X represente -(C=O)- entonces n es 0,

R representa hidrógeno o es un residuo R^{a}, residuo R^{a} que se selecciona del grupo que está constituido por:

alquilo C_{1-6};

alquenilo C_{2-6};

cicloalquilo C_{3-8};

cicloalquilo C_{3-8}, en el que un grupo CH_{2} está sustituido por O, S, NH o NCH_{3};

cicloalquenilo C_{4-8};

cicloalquenilo C_{4-8}, en el que un grupo CH_{2} está sustituido por O, S, NH o NCH_{3};

fenilo;

piridilo;

tiofenilo;

nitrosilo;

S-cisteinilo;

S-glutationilo; y

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2

en la que R* se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquenilo C_{4-8}, acetiloxi, hidroxilo, ONO_{2} y halógeno,

en la que R^{a} está opcionalmente sustituido por uno a tres grupos seleccionados independientemente de alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquenilo C_{4-8}, acetiloxi, hidroxilo, ONO_{2} y halógeno.

Se prefiere que en los compuestos según la fórmula (I) cuando R-X-S(O)_{n}- y -ONO_{2} estén en trans uno respecto al otro con respecto al plano del anillo, tal y como se describe en las fórmulas (Ia) y (Ib):

3

entonces R-X-S(O)_{n}- no represente 4 en la que Z es un grupo alquilo C_{1-4}, un grupo arilo o un grupo aralquilo.

Sorprendentemente, los compuestos de la fórmula (I), además del potente efecto vasodilatador con poca o nula tolerancia, poseen propiedades antiactivación de las plaquetas, antitrombóticas, antiictus, antioxidantes, antilesión/daño tisular debido a isquemia y/o isquemia/reperfusión y antiateroscleróticas.

Otra realización de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende como principio activo al menos uno de los derivados de mononitrato de dianhidrohexitol según la fórmula (I), un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de la misma.

Otra realización de la presente invención se refiere al uso de al menos un derivado de mononitrato de dianhidrohexitol según la fórmula (I), un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de la misma como principio activo para la preparación de una composición farmacéutica para la prevención y/o tratamiento de la aterosclerosis, disfunciones endoteliales, vasoespasmos, vasculopatía del trasplante alogénico cardiaco, disfunciones del sistema circulatorio, activación de plaquetas, trombosis, ictus, afecciones patológicas en las que el estrés oxidativo desempeña un importante papel en sus patogénesis tales como, pero sin limitarse a, enfermedad de Alzheimer, afecciones patológicas en las que el déficit de óxido nítrico desempeña un papel importante en su patogénesis y/o daño tisular debido a isquemia y/o debido a isquemia - reperfusión.

Las expresiones empleadas anteriormente serán explicadas con mayor detalle a continuación:

La expresión "sal farmacéuticamente aceptable o solvato de la misma" describe cualquier sal farmacéuticamente aceptable, éster, solvato o cualquier compuesto que, administrado a un paciente (directa o indirectamente), proporciona un compuesto descrito en este documento. Sin embargo, se considerará que las sales no aceptables farmacéuticamente también se engloban dentro del ámbito de esta invención ya que estos compuestos pueden ser útiles en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables. La preparación de sales y derivados puede ser llevada a cabo por métodos conocidos en el estado de la técnica.

Por ejemplo, sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en este documento se sintetizan a partir del compuesto correspondiente, que contiene un grupo ácido o básico, por procedimientos químicos convencionales. Generalmente, dichas sales se preparan, por ejemplo, mediante la reacción de las formas ácidas o básicas libres de estos compuestos en una cantidad estequiométrica con un ácido o base correspondiente en agua o en un disolvente orgánico o en una mezcla de ambos. Generalmente se prefieren medios no acuosos como éter, acetato de etilo, isopropanol o acetonitrilo. Ejemplos de sales de ácido incluyen sales de ácidos minerales tales como clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, sulfato, nitrato, fosfato y sales de ácidos orgánicos tales como acetato, maleato, fumarato, citrato, oxalato, succinato, tartrato, mandelato, metilsulfonato y p-toluenosulfonato. Ejemplos de sales básicas incluyen sales inorgánicas tales como sales de sodio, potasio, calcio, amonio, magnesio, aluminio y litio, y sales orgánicas tales como etilendiamina, etanolamina, N,N-dialquilenetanolamina, trietanolamina, glucamina y sales básicas de aminoácidos.

Los derivados particularmente preferidos son aquellos que aumentan la biodisponibilidad de los compuestos de la presente invención cuando tales compuestos son administrados a un paciente (por ejemplo, permitiendo que un compuesto administrado de forma oral sea más rápidamente absorbido en sangre) o aquellos que incrementan la liberación del correspondiente compuesto a un compartimento biológico (por ejemplo, el cerebro o el sistema linfático).

Los compuestos de la presente invención pueden estar preferentemente en su forma cristalina, o como compuestos libres o solvatos. Los procedimientos de solvatación que pueden aplicarse son aquellos generalmente conocidos en el estado de la técnica. Los solvatos adecuados son solvatos farmacéuticamente aceptables. Se prefiere que el solvato sea un hidrato.

Se prefiere que los compuestos de fórmula (I) o sus sales o solvatos estén en su forma farmacéuticamente aceptable sustancialmente pura. Por forma farmacéuticamente aceptable se entiende, "entre otras cosas", que tiene un nivel farmacéuticamente aceptable de pureza excluyendo aditivos normales farmacéuticos tales como diluyentes y vehículos e incluyendo material considerado no tóxico a niveles de dosis normales. Los niveles de pureza para el fármaco están por encima del 50%, preferentemente por encima del 70% y aún más preferible por encima del 90%. En una realización incluso más preferida, los compuestos de fórmula (I), o las sales o solvatos de las mismas, tienen una pureza superior al 95%.

Los compuestos de la presente invención representados por la fórmula (I) pueden incluir enantiómeros, dependiendo de la presencia de centros quirales o isómeros, y/o dependiendo de la presencia de enlaces múltiples (por ejemplo, Z, E). Los isómeros, enantiómeros o diaestereoisómeros puros y sus mezclas están dentro del alcance de la presente invención.

El término "halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo, de entre los que se prefiere el bromo.

El término "alquilo C_{1-6}", tal y como se utiliza en el presente documento, se refiere a un resto alquilo de cadena ramificada o lineal que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, incluyendo, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, pentilo y hexilo.

El término "alquenilo C_{2-6}", tal y como se utiliza en el presente documento, se refiere a un resto alquenilo de cadena ramificada o lineal que tiene de 2 a 6 átomos de carbono y al menos un doble enlace de estereoquímica E o Z, según proceda. Este término incluirá, por ejemplo, vinilo, alilo, 1- y 2-butenilo y 2-metil-2-propenilo.

El término "cicloalquilo C_{3-8}", tal y como se utiliza en el presente documento, se refiere a un grupo alicíclico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono. Algunos ejemplos ilustrativos de tales grupos cicloalquilo son ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

Por consiguiente, el término "cicloalquilo C_{3-8} en el que un grupo CH_{2} es reemplazado por O, S, NH o NCH_{3}" se refiere a un grupo alicíclico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono en el que un grupo CH_{2} está reemplazado por O, S, NH o NCH_{3}. Algunos ejemplos ilustrativos de tales grupos son tetrahidropirano, tetrahidrofurano, pirrolidina, piperidina y tetrahidrotiofeno.

El término "cicloalquenilo C_{4-8}" se refiere a un grupo alicíclico que tiene de 4 a 8 átomos de carbono. Algunos ejemplos ilustrativos de tales grupos cicloalquenilo son ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptenilo y ciclooctenilo.

Se prefiere que R represente hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquenilo C_{4-8}, (alquil C_{1-6})cicloalquilo C_{3-8}, (alquil C_{1-6})cicloalquenilo C_{4-8}, fenilo o (alquil C_{1-6})fenilo, mientras que se prefiere especialmente alquilo C_{1-6}.

También se prefiere que en la fórmula (I) uno cualquiera o ambos de m y n sean O.

También se prefiere que X represente un enlace sencillo o -S-.

Se prefiere especialmente que los compuestos de fórmula (I) se correspondan con compuestos que están representados por la fórmula (Ia) y/o la fórmula (Ib):

5

Los compuestos de fórmula (I) también incluyen diaestereoisómeros (R) y (S) según las fórmulas (Ic) y (Id):

6

Los compuestos especialmente preferidos de fórmula I son:

5-mononitrato de 2-tioisosorbida,

5,5'-dinitrato-2,2'-ditio-diisosorbida,

5-mononitrato de 2-metiltioisosorbida,

5-mononitrato de 2-[(R)-metilsulfinil]isosorbida,

5-mononitrato de 2-[(S)-metilsulfinil]isosorbida,

5-mononitrato de 2-metilsulfinilisosorbida,

5-mononitrato de S-nitroso-2-tioisosorbida,

5-mononitrato de 2-(tetrahidropiran-2-il-tio)-isosorbida,

5-mononitrato de 2-(isosorbidil-2'-ditio)-isosorbida, y

5-mononitrato de 2-(5'-acetiloxiisosorbidil-2'-ditio)isosorbida.

Además, se prefiere especialmente el uso de 5-mononitrato de 2-acetiltio-isosorbida (compuesto 12), un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable y/o un solvato de la misma:

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como principios activos para la preparación de una composición farmacéutica para la prevención y/o el tratamiento de trombosis, isquemia, daño celular/tisular inducido por isquemia y/o isquemia y reperfusión, hipertensión, vasoespasmos, aterosclerosis y/o vasculopatía del trasplante alogénico cardiaco.

Adicionalmente, los compuestos de fórmula (I), especialmente 5-mononitrato de 2-acetiltio-isosorbida (12), sus tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos de las mismas, también pueden utilizarse en la terapia para la prevención y/o el tratamiento de la aterosclerosis, vasculopatía del trasplante alogénico cardiaco, activación de plaquetas, trombosis, ictus, afecciones patológicas en las que el estrés oxidativo desempeña un papel importante en su patogénesis, y/o daño tisular debido a isquemia y/o debido a isquemia-reperfusión. Estos compuestos pueden ser utilizados especialmente en la prevención y/o el tratamiento de afecciones patológicas en las que el estrés oxidativo desempeña un papel importante en su patogénesis, tales como alergia, ictus, enfermedad de Alzheimer y/o enfermedades cardiovasculares isquémicas. Las composiciones farmacéuticas pueden administrarse por diferentes vías. Por ejemplo, pueden administrarse por vía oral en forma de preparados farmacéuticos tales como comprimidos, cápsulas, jarabes y suspensiones. Parenteralmente en forma de disoluciones o emulsiones, etc. También pueden administrarse por vía tópica en forma de cremas, pomadas, bálsamos, etc. y transdérmicamente, por ejemplo, mediante el uso de parches o vendas. También pueden aplicarse directamente en el recto como supositorios. Estos preparados pueden contener vehículos, excipientes, activadores, agentes quelantes, estabilizadores, etc. fisiológicamente aceptables. En el caso de las inyecciones, se pueden incorporar tampones, agentes solubilizantes o isotónicos fisiológicamente aceptables.

Las composiciones farmacéuticas según la presente invención pueden comprender además un agente trombolítico, preferentemente un activador del plasminógeno, uroquinasa, estreptoquinasa, alteplasa o anistreplasa. También pueden contener un agente anticoagulante, preferentemente heparina, dicumarol, acenocumarol, enoxaparina o polisulfato de pentosano. Además, pueden contener adicionalmente un agente antitrombótico, preferentemente ácido acetilsalicílico, dipiridamol, ticlopidina, clopidrogel, triflusal, polisulfato de pentosano o abciximab. También pueden contener una inmunoglobulina o un fragmento de ésta que tenga especificidad por la glicoproteína IIb/IIIa.

De forma alternativa, las composiciones farmacéuticas según la invención pueden comprender además un agente hipolipemiante preferentemente simvastatina, lovastatina, atorvastatina, pravastatina, fluvastatina, eptastatina, lifibrol, acifrán, acitemato, glunicato y rosuvastatina. También pueden contener un agente antioxidante/secuestrador de radicales libres, preferentemente seleccionado de nicaravén, ranolazina, emoxipina, glutatión, edaravona, raxofelast, licopeno, N-acetil-L-cisteína, N-acetil-D-cisteína, una mezcla racémica de N-acetil-L-cisteína y N-acetil-D-cisteína o carvedilol.

Las composiciones farmacéuticas según la presente invención pueden utilizarse para el tratamiento y/o la prevención de aterosclerosis, vasculopatía del trasplante alogénico cardiaco, activación de plaquetas, trombosis, ictus, daño tisular debido a isquemia y/o debido a isquemia-reperfusión y/o afecciones patológicas en las que el estrés oxidativo desempeña un papel importante en su patogénesis (tales como, pero sin limitarse a, alergia, ictus, enfermedad de Alzheimer, enfermedades cardiovasculares isquémicas); y/o afecciones patológicas en las que un déficit de NO desempeña un papel importante en su patogénesis. También pueden utilizarse para el tratamiento y/o la prevención de disfunciones del sistema circulatorio, preferentemente disfunciones cardiovasculares y coronarias.

La dosis diaria puede variar en función de los síntomas específicos, la edad, el peso corporal del paciente, el modo específico de administración, etc. y la dosis normal diaria para un adulto puede podría estar entre 0,1 y 500 mg y podría administrarse en una dosis única o dividida en diferentes dosis a lo largo del día.

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse mediante procedimientos de preparación conocidos en la técnica mediante adaptación de los procedimientos conocidos por un experto en la materia o mediante un nuevo procedimiento descrito más adelante.

Por tanto, otra realización de la presente invención se refiere a procedimientos para preparar los compuestos de fórmula (I), tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos de las mismas.

Según la invención se prefiere preparar un compuesto de fórmula (I), un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de la misma mediante el procedimiento explicado resumidamente más adelante:

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8

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en la que

n es un número entero de 0, 1 ó 2,

X representa -S(O)_{m}-, -(C=O)- o un enlace sencillo, en la que m es un número entero de 0, 1 ó 2; y

R representa hidrógeno o es un residuo R^{a}, residuo R^{a} que se selecciona del grupo constituido por:

alquilo C_{1-6};

alquenilo C_{2-6};

cicloalquilo C_{3-8};

cicloalquenilo C_{4-8};

fenilo;

piridilo;

tiofenilo;

nitrosilo;

S-cisteinilo;

S-glutationilo; y

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9

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en la que R* se selecciona del grupo constituido por alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquenilo C_{4-8}, acetiloxi, hidroxilo, ONO_{2} y halógeno,

en la que R^{a} está opcionalmente sustituido por uno a tres grupos seleccionados independientemente de alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquenilo C_{4-8}, acetiloxi, hidroxilo, ONO_{2} y halógeno,

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procedimiento que comprende realizar las siguientes etapas:

a) efectuar la hidrólisis de un compuesto de fórmula (IIa):

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10

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en la que R' es alquilo C_{1-6}, preferentemente metilo, para obtener el siguiente compuesto

11

y

b) opcionalmente, efectuar sobre el compuesto preparado según la etapa a):

I. una reacción de oxidación para obtener:

12

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opcionalmente seguido por una segunda oxidación para obtener el siguiente compuesto:

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13

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en el que:

n es 1 ó 2,

X es -S(O)_{m}- en la que m es 0, 1 ó 2, y

R* representa hidroxilo o ONO_{2};

II. una reacción de sustitución para obtener:

un compuesto según la fórmula (I) en la que:

n es un número entero de 0,

X representa un enlace, y

R no representa nitrosilo,

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opcionalmente seguida por una oxidación para obtener un compuesto según la fórmula (I) en la que:

n es un número entero de 0,

X representa -S(O)_{m}- en la que m es un número entero de 0 ó 1, y

R no representa nitrosilo;

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III. una reacción de sustitución para obtener:

un compuesto según la fórmula (I) en la que:

n es un número entero de 0,

X representa -S-,

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n es un número entero de 1 ó 2, y

X representa -S(O)_{m}- en la que m es 0, 1 ó 2; o

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IV. una nitrosación para obtener:

14

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Según el procedimiento anterior de la invención es especialmente preferible preparar un compuesto de fórmula (Ia), un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de la misma:

15

en la que n, X, m y R tienen el significado anterior, y en la que dicho procedimiento comprende realizar las siguientes etapas:

a) efectuar la hidrólisis de un compuesto de fórmula (II):

16

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en la que R' es alquilo C_{1}-C_{6}, preferentemente metilo, para obtener 5-mononitrato de 2-tioisosorbida (1),

17

y

b) opcionalmente efectuar en el compuesto (1) preparado según la etapa (a):

I. una reacción de oxidación para obtener:

5,5'-dinitrato-2,2'-ditio-diisosorbida (2) ó

5-mononitrato de 2-(isosorbidil-2'-ditio)-isosorbida (8),

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opcionalmente seguido por una segunda oxidación para obtener un compuesto según la fórmula (Ie):

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en la que

n es 1 ó 2,

X es -S(O)_{m}- en la que m es 0, 1 ó 2, y

R* representa hidroxilo o ONO_{2};

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II. una reacción de sustitución para obtener:

un compuesto según la fórmula (Ia) en la que:

n es un número entero de 0,

X representa un enlace, y

R no representa nitrosilo,

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opcionalmente seguida por una oxidación para obtener un compuesto según la fórmula (Ia) en la que:

n es un número entero de 0,

X representa -S(O)_{m}- en la que m es un número entero de 0 ó 1, y

R no representa nitrosilo;

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III. una reacción de sustitución para obtener:

un compuesto según la fórmula (Ia) en la que:

n es un número entero de 0, y

X representa -S-,

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n es un número entero de 1 ó 2, y

X representa -S(O)_{m}- en la que m es 0, 1 ó 2; o

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IV. una reacción de nitrosación para obtener:

5-mononitrato de S-nitroso-2-tioisosorbida (6).

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La etapa (b) opcional de este nuevo procedimiento de la invención se describe esquemáticamente en los esquemas 1 a 4 para compuestos específicos de la invención. Estos esquemas 1 a 4 se refieren a la reacción de oxidación 1, la reacción de sustitución (II), la reacción de sustitución (III) y la reacción de nitrosación (IV), respectivamente.

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Un procedimiento específicamente preferido de la invención incluye las etapas (a) a (b) II para la preparación de:

5-mononitrato de 2-[(R)-alquilsulfinil]isosorbida y/o

5-mononitrato de 2-[(S)-alquilsulfinil]isosorbida.

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Se prefiere adicionalmente que ambos diaestereómeros se separen sucesivamente posteriormente, separación que puede llevarse a cabo usando procedimientos convencionales conocidos en la técnica.

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Otro procedimiento de preparación preferido de la invención se refiere a la preparación de un compuesto de fórmula (11) o un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de la misma:

19

procedimiento que comprende las siguientes etapas:

a) efectuar la reacción de oxidación de un compuesto de fórmula (III):

20

en la que R' es alquilo C_{1}-C_{6}, preferentemente metilo, para obtener 2,2'-ditiodiisosorbida (10),

21

y

b) efectuar una reacción de nitración del compuesto preparado en la etapa (a) con un agente de nitración en presencia de un anhídrido carboxílico, preferentemente anhídrido acético.

Finalmente, otra realización de la presente invención se refiere al compuesto 2,2'-ditiodiisosorbida (10), que es un compuesto intermedio en la preparación del compuesto (11) de la invención.

En los ejemplos de trabajo incluidos en este documento (véase más adelante) se describen con detalle los procedimientos adecuados para obtener varios de los compuestos según la fórmula general (I). A la vista de estos ejemplos, es de conocimiento general para los expertos obtener los compuestos no ejemplificados explícitamente en este documento a través de las modificaciones adecuadas de los ejemplos de trabajo en este documento. Resultará obvio para un experto que estos ejemplos son meramente ilustrativos y no deben considerarse como una limitación de la invención.

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Ejemplos

Los compuestos obtenidos en los ejemplos que aparecen a continuación se identifican mediante sus datos de la espectroscopia de resonancia magnética nuclear de protón (RMN ^{1}H) y carbono 13 (RMN ^{13}C).

Los espectros de resonancia magnética nuclear fueron registrados utilizando espectrómetros Varian Gemini-2000 o Varian Gemini-300.

La frecuencia de operación y el disolvente utilizado para registrar el espectro aparecen indicados en los espectros de RMN ^{1}H. La posición de las señales se indican en \delta (ppm) y la señal de los protones del disolvente se toma como referencia. Los valores de referencia fueron 7,24 ppm para el cloroformo deuterado y 2,49 ppm para dimetilsulfóxido deuterado. La señal obtenida para los protones de tetrametilsilano (TMS) se toma ocasionalmente como referencia interna, con 0 ppm como valor de referencia. El número de protones de cada señal como se mide mediante integración electrónica y el tipo de señal se indican entre paréntesis utilizando las siguientes abreviaturas: s (singlete), d (doblete), t (triplete), dd (doblete de dobletes), ddd (doblete de doblete de dobletes), sa (señal ancha), sc (señal compleja), s.a. D_{2}O (simplifica al deuterar), d.a. D_{2}O (desaparece al deuterar).

La frecuencia de operación y el disolvente utilizado en cada espectro aparecen indicados en los espectros de RMN ^{13}C. La posición de las señales se indican en \delta (ppm) y la señal de los carbonos del disolvente se toma como referencia. Los valores de referencia son 77,00 ppm para cloroformo deuterado y 39,50 ppm para dimetilsulfóxido hexadeuterado.

En algunos casos, también se llevaron a cabo experimentos de resonancia magnética nuclear utilizando las secuencias de pulso APT (prueba de protones unidos "Attached Proton Test"), HETCOR (correlación de desplazamiento químico heteronuclear "Heteronuclear Chemical Shift Correlation") o COSY (espectroscopia correlacionada "Correlated Spectroscopy") como ayuda para la asignación.

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En la parte experimental, se emplean las siguientes abreviaturas:

AcOEt: acetato de etilo

AcOH: ácido acético

DMSO-d_{6}: dimetilsulfóxido hexadeuterado

EtOH: alcohol etílico

EtOEt: éter dietílico

HPLC: cromatografía líquida de alta resolución

Hx: hexano

MeI: yoduro de metilo

MeOH: alcohol metílico

EM (ApcI)-CL: espectrometría de masas mediante ionización química a presión atmosférica acoplada a cromatografía líquida

d.e.: desviación estándar

e.e.m.: error estándar de la media

THP: tetrahidropiranilo

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Ejemplo 1

Procedimiento para la obtención de 5-mononitrato de 2-tioisosorbida (1)

22

En un matraz de 50 ml, se disolvieron 1,00 g (4,02 mmol) de 5-mononitrato de 2-acetiltioisosorbida (12) obtenido de acuerdo con el documento WO 00/20420 en 20,0 ml de alcohol metílico. Se añadieron 10,0 ml de una disolución de metanol al 10% de hidróxido de sodio de una vez. Después de tapar el matraz rápidamente se agitó durante 1 minuto a temperatura ambiente (aproximadamente 25ºC), se añadieron de una vez 2,23 ml de ácido clorhídrico concentrado. Se agitó y se concentró hasta sequedad, eliminando el disolvente a presión reducida a una temperatura por debajo de los 30ºC.

El residuo se suspendió en cloroformo. Esta disolución de cloroformo se filtró y posteriormente se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Tras la filtración, se eliminó el disolvente a presión reducida. Se secó a presión reducida para obtener 0,83 g de un aceite anaranjado-amarillento correspondiente al producto de interés. Rendimiento: 100%.

RMN ^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}): 5,36-5,26 (1H, m, CHONO_{2}), 4,95 (1H, t, J=5,0 Hz, CHCHONO_{2}), 4,42 (1H, d, 4,8 Hz, CHCHS), 4,07 (1H, dd, J=4,6 Hz, J=4,4 Hz, H-CHCHS), 3,97 (1H, dd, J=5,64 Hz, J=2,5 Hz, H-CHCHONO_{2}), 3,87-3,76 (2H, sc, H-CHCHS, H-CHCHONO_{2}), 3,45-3,35 (1H, m, CHS), 1,77 (1H, d, J=8,6 Hz, SH).

RMN ^{13}C (50 MHz, CDCl_{3}): 91,21 (CHCHS), 81,22 (CHONO_{2}), 81,07 (CHCHONO_{2}), 76,15 (CH_{2}CHS), 69,26 (CH_{2}CHONO_{2}), 42,82 (CHS).

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Ejemplo 2

Procedimiento para la obtención de 5,5'-dinitrato-2,2'-ditio-diisosorbida (2)

23

Procedimiento 1

Se disolvieron 0,50 g de 5-mononitrato de 2- acetiltioisosorbida (12) obtenido de acuerdo con el documento WO 00/20420 en 10,0 ml de alcohol metílico. Esta disolución se añadió lentamente, gota a gota, a 200 ml de plasma humano en un matraz de 250 ml con agitación magnética intensa. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas. El bruto de reacción se vertió sobre 500,0 ml de acetonitrilo mientras se agitaba vigorosamente, observándose la precipitación instantánea de un sólido blanco floculante correspondiente a las proteínas del plasma. Se centrifugó a 3000 rpm y a 20ºC durante 30 min y se separó el líquido y el sólido (masa proteica) se suspendió en 250,0 ml de acetonitrilo. Se agitó y centrifugó bajo las mismas condiciones señaladas anteriormente (3000 rpm/20ºC/30 min).

Se decantó y se combinó el líquido sobrenadante con el anterior. El disolvente se evaporó a presión reducida a una temperatura por debajo de los 30ºC. El residuo acuoso resultante (alrededor de 200 ml) se extrajo con cloroformo 4 x 500 ml. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro. Se filtró y se concentró el disolvente a presión reducida. Se obtienen 350 mg de un sólido blanco que se purifica mediante cromatografía: (CHCl_{3}/AcOEt 6:1), aislándose 250 mg de un sólido blanco correspondiente al producto de disulfuro 5-mononitrato de 2-tioisosorbida (2). Rendimiento: 60%.

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Procedimiento 2

En un matraz de 50 ml, se disolvió 1,00 g (4,02 mmol) de 5-mononitrato de 2-acetiltioisosorbida (12) obtenido de acuerdo con el documento WO 00/20420 en 20 ml de alcohol metílico y se añadieron 10 ml de una disolución de metanol al 10% de hidróxido de potasio. La mezcla de reacción se tapó y se agitó durante 5 horas a temperatura ambiente. Se observa la precipitación de un sólido blanco correspondiente al disulfuro (2) durante la reacción. El sólido se separó por filtración y se lavó varias veces con alcohol metílico. Mediante el secado a presión reducida se obtienen 0,58 g de un sólido blanco correspondiente al producto de disulfuro 5-mononitrato de 2-tioisosorbida (2). Rendimiento: 70%.

RMN ^{1}H (200 MHz, DMSO-d_{6}): 5,51-5,43 (2H, m, 2CHONO_{2}), 4,96 (2H, t, J=5,4 Hz, 2CHCHONO_{2}), 4,51 (2H, d, J=4,8 Hz, 2CHCHS), 4,04-3,73 (10H, sc, 2CH_{2}CHONO_{2}, 2CH_{2}CHS, 2CHS).

RMN ^{13}C (50 MHz, DMSO-d_{6}): 88,46 (2CHCHS), 83,31 (2CHONO_{2}), 81,50 (2CHCHONO_{2}), 73,24 (2 CH_{2}CHS), 69,95 (2CH_{2}CHONO_{2}), 54,01 (2CHS).

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Ejemplo 3

Procedimiento para la obtención de 5-mononitrato de 2-metiltioisosorbida (3)

24

En un matraz de 50 ml, se disolvió 1,00 g (4,02 mmol) de 5-mononitrato de 2-acetiltioisosorbida (12) obtenido de acuerdo con el documento WO 00/20420 en 20,0 ml de alcohol metílico y se añadieron de una vez 5,0 ml de una disolución de metanol al 10% de hidróxido de potasio. La mezcla de reacción se tapó y se agitó durante 5 minutos a temperatura ambiente. Se añadieron 2,0 ml de yoduro de metilo (32,00 mmol) de una vez, la mezcla se tapó y se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Se concentró hasta sequedad, eliminando el disolvente a presión reducida. El residuo se disolvió en 250 ml de cloroformo y se lavó con 50 ml de agua. La fase orgánica se separó y se lavó con 3 x 50,0 ml de agua.

Tras el secado sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se eliminó el disolvente a presión reducida. Tras el secado a presión reducida, se obtuvieron 0,68 g de un sólido blanco correspondiente al producto de interés. Rendimiento: 76%.

RMN ^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}): 5,34-5,26 (1H, m, CHONO_{2}), 4,93 (1H, t, J=5,2 Hz, CHCHONO_{2}), 4,48 (1H, d, J=4,8 Hz, CHCHS), 4,14 (1H, dd, J=9,7 Hz, J=4,8 Hz, H-CHCHS), 4,01 (1H, dd, J=11,2 Hz, J=3,0 Hz, H-CHCHONO_{2}), 4,01-3,81 (2H, sc, H-CHCHS, H-CHCHONO_{2}), 3,30-3,24 (1H, m, CHS), 2,15 (3H, s, CH_{3}).

RMN ^{13}C (50 MHz, CDCl_{3}): 88,65 (CHCHS), 81,55 (CHCHONO_{2}), 81,26 (CHONO_{2}), 73,87 (CH_{2}CHS), 69,10 (CH_{2}CHONO_{2}) 50,74 (CHS), 14,74 (CH_{3}).

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Ejemplo 4

Procedimiento para la obtención de 5-mononitrato de 2[(R)-metilsulfinil]isosorbida (4) y 5-mononitrato de 2-[(S)-metilsulfinil]isosorbida (4bis)

25

En un matraz de 500 ml, se disolvieron 7,3 g (32,9 mmol) de 5-mononitrato de 2-metiltioisosorbida (3) obtenido de acuerdo con el ejemplo 3 en 75 ml de dioxano. Se añade muy lentamente una disolución de 7,04 g (32,9 mmol) de NaIO_{4} en 110 ml de agua, gota a gota, y después se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Se filtró la mezcla y luego se eliminó el dioxano del filtrado a presión reducida. Se añadieron 150 ml de agua. La mezcla se extrajo con 2 x 300 ml porciones de cloroformo. Se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se eliminó el disolvente a presión reducida. Se obtuvieron 6,6 g de un bruto de reacción que contenía una mezcla de diaestereoisómeros en una proporción del 65% de (4) y el 35% de (4bis). El bruto de reacción resultante se recristalizó dos veces en dioxano para obtener 2,9 g del producto de interés (4) con una pureza del 95% mediante HPLC. Se eliminó a presión reducida el disolvente usando las aguas madres de la primera recristalización y se recristalizó el residuo resultante en dioxano para obtener 1 g del producto de interés (4bis) con una pureza del 95% mediante HPLC.

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5-mononitrato de 2-[(R)-metilsulfinil]isosorbida (4):

RMN ^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}): 5,39-5,28 (1H, m, CHONO_{2}), 5,02 (1H, dd, J=5,6 Hz, J=1,6 Hz, CHCHS), 4,89 (1H, t, J=5,5 Hz, CHCHONO_{2}), 4,29 (1H, dd, J=10,4 Hz, J=6,4 Hz, H-CHCHS), 4,20-3,91 (3H, sc, H-CHCHS, CH_{2}CHONO_{2}), 3,38-3,31 (1H, m, CHSO), 2,61 (3H, s, CH_{3}).

RMN ^{13}C (50 MHz, CDCl_{3}): 82,11 (CHCHONO_{2}), 81,51 (CHCHS), 80,55 (CHONO_{2}), 69,65 (CH_{2}CHS) 69,28 (CH_{2}CHONO_{2}), 66,24 (CHSO), 37,28 (CH_{3}).

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Microanálisis

calculado (%):	35,44 C;	4,67 H;	5,90 N;	13,51 S;	40,47 O
experimental (%):	35,31 C;	4,67 H;	5,98 N;	13,5 S;	40,60 O

Espectrometría de masas (EM (ApcI)-CL a 20V): 238 (M+1)^{+}

Punto de fusión: 153ºC por DSC

Difracción de rayos X en monocristal: Se establece que la configuración del diaestereómero (4) es: (R)-S, (S)-C2, (S)-C3, (S)-C4, (R)-C5

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5-mononitrato de 2-[(S)-metilsulfinil]isosorbida (4bis):

RMN ^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}): 5,39-5,28 (1H, m, CHONO_{2}), 4,89 (1H, t, J=5,6 Hz, CHCHONO_{2}), 4,68 (1H, d, 5,4 Hz, CHCHS), 4,40-3,88 (4H, sc, CH_{2}CHS, CH_{2}CHONO_{2}), 3,48-3,40 (1H, m, CHSO), 2,58 (3H, s, CH_{3}).

RMN ^{13}C (50 MHz, CDCl_{3}): 82,89 (CHCHS), 82,26 (CHCHONO_{2}), 80,55 (CHONO_{2}), 69,19 (CH_{2}CHONO_{2}) 67,88 (CH_{2}CHS), 66,94 (CHSO), 36,64 (CH_{3}).

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Microanálisis

calculado (%):	35,44 C;	4,67 H;	5,90 N;	13,51 S;	40,47 O
experimental (%):	35,65 C;	4,66 H;	5,87 N;	13,56 S;	40,57 O

Espectrometría de masas (EM (ApcI)-CL a 20V): 238 (M+H)^{+}

Punto de fusión: 115ºC por DSC

Difracción de rayos X en monocristal: Se establece que la configuración del diaestereómero (4bis) es: (S)-S, (S)-C2, (S)-C3, (S)-C4, (R)-C5.

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Ejemplo 5

Procedimiento para la obtención de 5-mononitrato de 2-metilsulfonilisosorbida (5)

26

En un matraz se disolvió 1,0 g (4,5 mmol) de 5-mononitrato de 2-metiltiosiosorbida (3) obtenido de acuerdo con el ejemplo 3 en 20 ml de acetonitrilo. Se añadieron, de una sola vez, 4,11 g (18,1 mmol) de ácido peryódico (H_{5}IO_{6}) y se agitó durante 48 h a temperatura ambiente. Se añadieron 50 ml de una disolución saturada de Na_{2}S_{2}O_{3}. Se extrajo con 2 x 30 ml de cloruro de metileno. Se unen las fases orgánicas y se lavan con 2 x 30 ml de una disolución saturada de Na_{2}S_{2}O_{3}. Se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se eliminó el disolvente a presión reducida. Se obtienen 662 mg del producto de interés (5). Se suspenden 640 mg del bruto en 25 ml de hexano, se filtran, se lavan con 7,5 ml de cloroformo, obteniéndose 450 mg del producto (5) con una pureza del 99,7% por HPLC.

RMN ^{1}H (200 MHz, DMSO-d_{6}): 5,53-5,47 (1H, m, CHONO_{2}), 5,00-4,88 (2H, sc, CHCHONO_{2}, CHCHS), 4,38 (1H, dd, J=9,8 Hz, J=1,8 Hz, H-CHCHS), 4,12-3,86 (4H, sc, H-CHCHS, CH_{2}CHONO_{2}, CHSO_{2}), 3,07 (3H, s, CH_{3}).

RMN ^{13}C (50 MHz, DMSO-d_{6}): 82,77 (CHCHS), 82,36 (CHCHONO_{2}), 81,81 (CHONO_{2}), 68,95 (CH_{2}CHONO_{2}), 68,46 (CH_{2}CHS), 67,48 (CHSO_{2}), 39,31 (CH_{3}).

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Microanálisis

calculado (%):	33,20 C;	4,38 H;	5,53 N;	12,66 S;	44,23 O
experimental (%):	33,45 C;	4,34 H;	5,52 N;	12,69 S;	44,43 O

Espectrometría de masas (EM (ApcI)-CL a 20V): 254 (M+H)^{+}

Punto de fusión: 173ºC por DSC.

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Ejemplo 6

Procedimiento para la obtención de 5-mononitrato de S-nitroso-2-tioisosorbida (6)

27

En un vial de ámbar se disolvieron 0,5 g (2,41 mmol) de 5-mononitrato de 2-tioisosorbida (1) obtenido de acuerdo con el ejemplo 1 en 4,0 ml de MeOH, se tapó y se agitó en un baño de hielo. Se añadieron 320 \mul (0,249 g, 2,41 mmol) de terc-butoxinitrito y se agitó con el vial tapado bajo condiciones de frío durante 7 horas. El sólido blanco se separó por filtración y el filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida protegido de la exposición a la luz y a temperatura ambiente. Se obtienen 0,48 g (rendimiento: 84%) de un sólido rojo intenso identificado como 5-mononitrato de S-nitroso-2-tioisosorbida (6).

RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 200 MHz): 5,40-5,25 (sc, 1H, CHONO_{2}), 4,84-4,64 (sc, 2H, CHSNO, CHCHONO_{2}), 4,40-4,30 (m, 2H, H-CHCHSNO, CHCHSNO), 4,12 (dd, 1H, J=11,4 Hz, J=2,6 Hz, H-CHCHONO_{2}), 4,00-3,80 (sc, 2H, H-CHCHSNO, H-CHCHONO_{2}).

RMN ^{13}C (CDCl_{3}, 50 MHz): 88,2 (CHCHSNO), 81,9+81,1 (CHCHONO_{2}, CHONO_{2}), 73,4 (CH_{2}CHSNO), 69,5 (CH_{2}CHONO_{2}), 51,6 (CHSNO).

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Ejemplo 7

Procedimiento para la obtención de 5-mononitrato de 2- (tetrahidropiran-2-il-tio)-isosorbida (7)

28

Se suspendieron 0,5 g (2,41 mmol) de 5-mononitrato de 2-tioisosorbida (1) obtenidos de acuerdo con el ejemplo 1 en 6 ml de 3,4-dihidro-2H-pirano y se enfrió la mezcla en un baño de hielo. Se añadieron 0,10 g (0,40 mmol) de p-toluenosulfonato de piridinio y se agitó a temperatura ambiente durante una noche bajo atmósfera de nitrógeno. Se añadieron 50 ml de EtOEt y se lavó la mezcla con 2 x 40 ml de una disolución saturada de NaCl. Se obtienen 1,15 g de un bruto de reacción que se purifica por cromatografía (Hx:AcOEt 3:2) rindiendo 0,65 g del producto de interés con una pureza del 83%. La recristalización en hexano dio 0,45 g del producto con una pureza del 95%, identificado por sus datos espectroscópicos como 5-mononitrato de 2-(tetrahidropiran-2-il)-2-tioisosorbida (7).

RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 200 MHz): 5,28 (ddd, 1H, J=11, 0 Hz, 5,4 Hz, 2,8 Hz, CHONO_{2}), 5,0-4,85 (sc, 2H, CHSTHP, CHCHONO_{2}), 4,59 (dd, 1H, J=11,2 Hz, 4,6 Hz, CHCHSTHP), 4,20-3,80 (sc, 5H, CH_{2}CHSTHP, H-CHCHONO_{2}, CH_{2 \ THP}), 3,60-3,40 (sc, 2H, H-CHCHONO_{2}, CH_{THP}), 2,00-1,45 (sc, 6H, 3CH_{2 \ THP}).

RMN ^{13}C (CDCl_{3}, 50 MHz): 89,5 y 89,1 (CHCHS), 83,0 y 81,6 (CHCHONO_{2}), 81,4 y 81,3 (CHSTHP, CHONO_{2}), 74,9 y 74,1 (CH_{2 \ THP}), 69,0 y 68,9 (CH_{2}CHSTHP), 64,8 y 64,7 (CH_{2}CHONO_{2}), 49,1 y 47,6 (CH_{2 \ THP}), 31,3 y 31,2 (CH_{2 \ THP}), 25,4 (CH_{2 \ THP}), 21,7 y 21,6 (CH_{2 \ THP}).

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Ejemplo 8

Procedimiento para la obtención de 5-mononitrato de 2-(isosorbidil-2'-ditio)-isosorbida (8)

29

Se añadió una disolución de 0,170 g (1,72 mmol) de succinimida en EtOH a 0,323 g (1,56 mmol) de 5-mononitrato de 2-tioisosorbida (1). Tras la aparición de un precipitado blanco, se añadieron 0,168 mg (2 mmol) de NaHCO_{3}. Tras agitar a temperatura ambiente durante 3 horas y 45 minutos, se añadieron otros 100 mg (1,19 mmol) de NaHCO_{3} y 10 gotas de agua. Tras otra hora y 30 minutos de agitación, se llevó la mezcla a reflujo. Tras dos horas a reflujo, se eliminó el EtOH a presión reducida; se añadieron 150 ml de agua y 150 ml de AcOEt. Se forma una emulsión y se añade NaCl_{(s)} hasta que las dos fases se separan. La fase orgánica se separa y la fase acuosa se lava con porciones de 2 x 150 ml de AcOEt. Cada una de las tres fases orgánicas se lavan por separado con 100 ml de agua y las fases orgánicas se combinan y secan sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. Se filtra, se lava con AcOEt y se elimina el disolvente del filtrado a presión reducida, obteniéndose así 336 mg de un bruto de reacción que se purifica por cromatografía ultrarrápida. Se usa una mezcla de CHCl_{3}/AcOEt 1:1 como eluyente para la separación cromatográfica y se obtiene una fracción de 98 mg del producto de interés (8).

RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): 5,40-5,32 (1H, sc, CHONO_{2}), 5,04-4,98 (1H, sc, CHCHONO_{2}), 4,70-4,60 (3H, sc, 3CH), 4,36-4,26 (1H, sc, CHOH), 4,22-4,12 (2H, sc, 2H-CH), 4,10-4,00 (3H, sc, 3H-CH), 3,94-3,86 (2H, sc, 2H-CH), 3,68-3,56 (3H, sc, 2CH-S, 1 H-CH), 2,55 (1H, d, J=6,9 Hz, OH).

Espectroscopia infrarroja (en pastilla KBr): 3461 cm^{-1}, 2987 cm^{-1}, 1642 cm^{-1}, 1465 cm^{-1}, 1279 cm^{-1}, 1077 cm^{-1}, 846 cm^{-1}.

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Microanálisis

experimental (%):	39,53 C,	34,70 H,	4,77 O,	3,96 N,	17,04 S.
calculado(%):	39,23 C,	34,84 H,	4,66 O,	3,81 N,	17,45 S.

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Espectrometría en masa

Electropulverización: 368(M+1).

Impacto electrónico (m/z, (% abundancia relativa)): 367 (7, 4) (M+), 261 (3,8), 160 (8,6), 129 (15,5), 127(14,2), 85 (35,7), 69 (100).

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Ejemplo 9

Etapa 1

Procedimiento para la obtención de 2-tioisosorbida (9) y 2,2'-ditiodiisosorbida (10)

30

En un matraz de 500 ml se disuelven 15 g (74 mmol) de 2-acetiltioisosorbida (13) obtenidos de acuerdo con el documento WO 00/20420 en 225 ml de EtOH. Se añade una disolución de 11,3 g de KOH al 85% en 150 ml de agua. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 2 horas, se neutraliza con AcOH_{(c)} y se elimina el EtOH a presión reducida. La disolución resultante se lleva a pH básico mediante la adición de NaOH_{(S)} y se agita a temperatura ambiente mientras que se burbujea una corriente de aire a través de la disolución durante 10 horas. Se acidifica la disolución con HCl_{(c)} y se lleva a pH=4. Se elimina el agua a presión reducida y el residuo resultante se vuelve a disolver en CH_{2}Cl_{2}, se filtra y se seca sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La disolución se filtra, se lava y el disolvente de la filtración se elimina a presión reducida, obteniéndose así 9,22 g de un bruto de reacción que se purifica mediante cromatografía ultrarrápida utilizando diferentes mezclas de ciclohexano/acetato de etilo como eluyente. La elución se inicia con 3 1 de una mezcla 1:1 y, después de ello, el porcentaje del disolvente polar aumenta, primero con 2 1 de una mezcla 3:5, posteriormente con 2 1 de una mezcla 1:2 y finalmente se eluye únicamente con AcOEt. Del eluato se aísla una fracción de 2,64 g del tiol (9) y otros 3,06 g del disulfuro (10).

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2-Tioisosorbida (9)

RMN ^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}): 4,68-4,58 (1H, sc, CHCHOH), 4,48-4,40 (1H, sc, CHCHSH), 4,34-4,18 (1H, sa, s.a. D_{2}O, CHOH), 4,16-4,06 (1H, m H-CHCHSH), 3,96-3,78 (2H, sc, H-CHCHOH, H-CHCHSH), 3,62-3,50 (1H, sc, 1 H-CHCHOH), 3,48-3,36 (1H, sc, s.a. D_{2}O, CHS), 2,80-2,60 (1H, sa, d.a. D_{2}O, OH), 1,75 (1H, d, J=8 Hz, d.a. D_{2}O, SH).

RMN ^{13}C (50 MHz, CDCl_{3}): 90,42 (CHCHSH), 81,47 (CHCHOH), 76,27 (CH_{2}CHSH), 74,00 (CH_{2}CHOH), 72,04 (CHOH), 43,81 (CHSH).

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2,2'-Ditiodiisosorbida (10)

RMN ^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}): 4,68-4,56 (4H, sc, 2CHCHS, 2CHCHOH), 4,34-4,19 (2H, sc, s.a. D_{2}O, 2 CHOH), 4,19-3,97 (4H, sc, 2CH_{2}CHS), 3,92-3,80 (2H, sc, 2H- CHCHOH), 3,66-3,52 (4H, sc, 2H-CHCHOH, 2CHS), 2,63 (2H, d, J=6,6 Hz, d.a. D_{2}O, 2OH).

RMN ^{13}C (50 MHz, CDCl_{3}): 87,42 (2CHCHS), 81,98 (2CHCHOH), 73,93 (2CH_{2}CHOH) 72,89 (2CH_{2}CHS), 72,07 (2CHOH), 54,74 (2CHS).

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Etapa 2

Procedimiento para la obtención de 5,5'-diacetiloxi-2,2'-ditiodiisosorbida (14) y de 5-mononitrato de 2-(5'-acetiloxiisosorbidil-2'-ditio)-isosorbida (11)

31

Se prepara una mezcla de nitración mediante la adición, lenta y cuidadosa, a 0ºC de 1,8 ml de HNO_{3} al 60% a una mezcla de 7,5 ml de anhídrido acético y 12,5 ml de ácido acético. En un matraz de 100 ml dotado de refrigerante de reflujo, termómetro y un agitador magnético se disuelven 2,77 g (8,6 mmol) de 2,2'-ditiodiisosorbida (10) obtenidos de acuerdo con el ejemplo 8 en 17 ml de ácido acético y se añaden 3,5 ml de anhídrido acético. Se enfría la mezcla a 0ºC en un baño de hielo y sal. Durante 15 minutos se añaden 4 ml de la mezcla de nitración previamente preparada, gota a gota. Se agita a 0ºC durante 2 horas, observando la solidificación del bruto de reacción. Posteriormente, se agita durante 2 horas y 30 minutos a temperatura ambiente. El bruto de reacción se vierte sobre 100 ml de agua, se filtra y se lava con mucha cantidad de agua. El sólido resultante se seca a presión reducida en presencia de P_{2}O_{5}. Se obtienen 2,69 g de un bruto de reacción que se purifica mediante cromatografía preparativa de fase reversa. Se utiliza como eluyente una mezcla 1:1 de acetonitrilo:agua. Se aísla una fracción de 1,01 g del diacetato (14)(R=COCH_{3}) y otra fracción de 0,5 g de acetato-nitrato (11)(R=NO_{2}).

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5,5'-diacetiloxi-2,2'-ditiodiisosorbida (R=COCH_{3}) (14)

RMN ^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}): 5,16-5,02 (2H, sc, 2CHOCO), 4,85-4,76 (2H, sc, 2CH-O-C), 4,63-4,56 (2H, sc, 2CHOC), 4,17-4,05 (2H, sc, 2H-CH), 4,00-3,74 (6H, sc, 6 H-CH), 3,56-3,48 (2H, sc, 2CHS), 2,09 (6H, s, CH_{3}).

RMN ^{13}C (50 MHz, CDCl_{3}): 170,27 (2CO), 87,73 (2CHCHS), 80,76 (2CHCHO), 73,79 (2CHO), 72,66
(2CH_{2}CHS), 70,46 (2CH_{2}CHO), 54,42 (2CHS), 20,63 (2CH_{3}).

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5-Mononitrato de 2-(5'-acetiloxiisosorbidil-2'-ditio)-isosorbida (R=NO_{2}) (11)

RMN ^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}): 5,37-5,28 (1H, sc, CHONO_{2}), 5,18-5,06 (1H, sc, CHOCO), 5,02-4,94 (1H, sc, CHOC), 4,87-4,78 (1H, sc, CHOC), 4,64-4,56 (2H, sc, 2 CHOC), 4,18-3,75 (8H, sc, 4CH_{2}), 3,59-3,50 (2H, sc, 2 CHS), 2,10 (3H, s, CH_{3}).

RMN ^{13}C (50 MHz, CDCl_{3}): 170,29 (CO), 88,25 (CH), 87,43 (CH), 81,58 (CH), 81,16 (CH), 80,79 (CH), 73,80 (CH), 72,78 (CH_{2}), 72,66 (CH_{2}), 70,51 (CH_{2}), 69,32 (CH_{2}), 54,42 (CHS), 53,72 (CHS), 20,65 (CH_{3}).

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Espectrometría de masas

Ionización química (NH_{3}): 410 (M+1)^{+}, 427 (M+18)^{+}.

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Pruebas de vasorelajación

El procedimiento utilizado en las pruebas es sustancialmente el mismo que el descrito en las siguientes referencias:

* Furchgot, R.F., "Methods in nitric oxide research"; Feelisch & Stamler, eds., John Wiley & Sons, Chichester, England, pp 567-581.

* Trongvanbichnam K. y col., Jpn. J. Pharmacol. 71 (1996); 167-173.

* Salas, E. y col., Eur. J. Pharmacol. 258 (1994); 47-55.

Los diferentes compuestos se prueban a 5 concentraciones diferentes, con un intervalo de concentración que oscila de 0,0001 a 10 mM, utilizando entre 6 y 9 anillos arteriales para cada compuesto. Los resultados obtenidos se comparan con los del 5-mononitrato de isosorbida, que se utiliza como producto de referencia.

Los resultados se muestran en la tabla 1 y se expresan como CE_{50} (concentración efectiva 50), que es la concentración de cada uno de los compuestos probados que produce una vasodilatación igual al 50% del tono máximo al que el anillo arterial se ha contraído con 1 \muM de fenilefrina.

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32

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Como puede observarse en la tabla, todos los compuestos probados son más potentes como vasorelajantes que el producto de referencia.

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Prueba in vitro de la inhibición de la agregación de plaquetas

El procedimiento empleado en los ensayos es sustancialmente el mismo que el descrito en la siguiente referencia:

* Salas, E. y col., Br. J. Pharmacol. 112 (1994); 1071-1076.

Los compuestos se prueban a cuatro concentraciones diferentes utilizando plasma humano rico en plaquetas obtenido a partir de por lo menos 6 donantes humanos sanos diferentes. Los resultados obtenidos se comparan con los de 5-mononitrato de isosorbida, que se utiliza como producto de referencia.

Los resultados se muestran en la tabla 2 y se expresan como CI_{50} (concentración inhibidora 50), que es la concentración de cada uno de los compuestos probados que produce una inhibición igual al 50% de la agregación obtenida con una concentración submáxima (1-4 \muM) de ADP (una concentración submáxima de ADP es la cantidad mínima de ADP que produce la agregación máxima).

33

Como puede observarse en la tabla 2, todos los compuestos probados tienen una potente actividad inhibidora de la agregación de plaquetas, actividad que resulta superior a la del compuesto de referencia.

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Inhibición de la adhesión de monocitos humanos y plaquetas a células endoteliales humanas

Los procedimientos utilizados en los ensayos para determinar el efecto de los compuestos sobre la adhesión de plaquetas y monocitos a células endoteliales humanas son sustancialmente iguales a los descritos en las siguientes referencias:

Del Maschio A. y col., J Cell Biol 1996; 135: 497-510

Bombeli T. y col., Blood 1999; 93: 3831-3838

Colomé C. y col; Atherosclerosis 2000; 149: 295-302; and

Martin-Satue M. y col.; British Journal of Cancer 1999; 80; 1169-1174

La adhesión de células monocíticas U937 a células endoteliales confluentes de la microvasculatura humana
(HMEC-1) activadas mediante TNF-\alpha (50 ng/ml) y de las plaquetas a células endoteliales umbilicales humanas (HUVEC) fueron los métodos utilizados para determinar el efecto inhibidor de los compuestos sobre la adhesión celular. La adhesión de los monocitos previamente marcados con calceína-AM (Molecular Probes) a HMEC-1 activadas mediante TNF-a se evaluó mediante la determinación de la fluorescencia celular asociada. La adhesión de plaquetas humanas lavadas previamente marcadas con MoAb contra CD36-FITC a HUVEC activado (50 \mug/ml de LDL mínimamente modificado, LDLmm) se determinó mediante citometría de barrido láser (LSC, Olympus), determinando la fluorescencia celular asociada. Los resultados se expresan como el porcentaje de inhibición con respecto al control (adhesión de las células en ausencia de compuestos). La tabla 3 muestra el efecto de los compuestos sobre la adhesión de U947 a HMEC-1 activadas. La tabla 4 muestra el efecto de los compuestos sobre la adhesión de plaquetas a HUVEC activadas.

TABLA 3

34

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TABLA 4

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Inhibición de transcitosis de LDL en células endoteliales microvasculares humanas

El procedimiento utilizado en los ensayos para determinar el efecto de los compuestos en la transcitosis de LDL en células endoteliales microvasculares humanas es sustancialmente el mismo que el descrito en Colomé C. y col.; Atherosclerosis 2000; 149: 295-302. Esta prueba permite predecir el potencial antiaterosclerótico de los compuestos, ya que la acumulación de LDL en la pared vascular como consecuencia del transporte activo de una célula endotelial vascular es uno de las primeras etapas en el desarrollo de la aterosclerosis.

El procedimiento empleado en los ensayos para aislar las partículas de LDL a partir de plasma humano fresco y el marcaje con Dil es sustancialmente igual al descrito en Pedreño J. y col., Atherosclerosis 2001; 155: 99-112, y Stephan Z.F. y Yuracheck E.C. J. Lipid Res. 1993; 34:325-330.

Las HMEC-1 activadas (histamina 100 \muM) y no activadas se cultivaron hasta alcanzar la confluencia en el pocillo superior de insertos de cocultivo (Falcon HTS FluorBloK). Posteriormente, se añadió LDL-Dil (hasta 200 \mug/ml) y se incubaron las células durante 2 h en presencia y ausencia de los compuestos. Tras esas dos horas, se evaluó la transcitosis de partículas LDL-Dil a través de células endoteliales mediante la determinación de la presencia de fluorescencia en el pocillo inferior del inserto de cocultivo. Los resultados se expresan en forma de porcentaje de inhibición con respecto al control (en ausencia de compuestos). La tabla 5 muestra el efecto de los compuestos en la transcitosis LDL-Dil a través de HMEC-1.

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TABLA 5

36

Inhibición de la oxidación de LDL

El procedimiento utilizado en los ensayos para determinar el efecto de los compuestos sobre la oxidación de LDL es sustancialmente el mismo que el descrito en las siguientes referencias:

Spranger T. y col., Chem. Phys. Lipids 1998; 91:39-52

Lynch S.M. y col., Biochim. Biophys. Acta 2000; 1485:11-22

Pedreño J. y col., Thromb. Res. 2000; 99: 51-60.

El procedimiento utilizado en los ensayos para aislar las partículas de LDL del plasma humano fresco es sustancialmente igual al descrito en Pedreño J. y col., Atherosclerosis 2001; 155: 99-112.

La modificación oxidativa de la lipoproteína de baja densidad (LDL) es considerada actualmente como el acontecimiento central del desarrollo de la enfermedad cardiovascular aterosclerótica. La exposición de LDL a hemina libre de globina (el complejo de ión férrico (Fe^{3+}) con protoporfirina IX), derivada de la hemoglobina de los eritrocitos circulantes, sirve de fuente fisiológica del Fe^{3+} prooxidante capaz de promover la oxidación de LDL. Los compuestos se añadieron in vitro para determinar su actividad inhibidora en la oxidación de LDL inducida por la hemina y H_{2}O_{2}. Se incubó LDL a una concentración final de proteína de 0,2 mg/ml en presencia de hemina 2,5 \muM y H_{2}O_{2} 5 AM. La modificación oxidativa de las partículas de LDL se evaluó mediante la medición de los dienos conjugados. Las muestras experimentales se incubaron a 37ºC y el aumento de la absorbancia a 234 nm se registró automáticamente cada 5 min durante al menos 5 h. El efecto de los compuestos sobre la oxidación de LDL inducida por la hemina se probó a 7 concentraciones diferentes utilizando preparados de LDL de 7 donantes sanos diferentes. La tabla 6 muestra la actividad inhibidora de los compuestos a 10 \muM expresada como el porcentaje de aumento de la fase de retraso (tiempo que se requiere para que se inicie la reacción de formación de dienos conjugados) con respecto al
control.

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TABLA 6

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Inhibición de la oxidación de plasma

El procedimiento utilizado en los ensayos para determinar el efecto de los compuestos sobre la capacidad de oxidación del plasma es sustancialmente igual al descrito en Spranger T. y col., Chem Phys Lipids 1998; 91: 39-52.

Se espera que la oxidación de lipoproteínas inducida in vitro en la matriz plasmática represente un modelo relevante de la oxidación de lipoproteínas en la pared arterial. La oxidación de las lipoproteínas del plasma se evaluó como la capacidad de oxidación del plasma heparinizado y se midió mediante espectrofotometría como un aumento en la absorbancia a 234 nm. Se añadieron los compuestos in vitro para determinar su actividad inhibidora sobre la capacidad de oxidación del plasma inducido por Cu^{2+} (CuSO_{4}). El plasma heparinizado se diluyó con disolución salina tamponada con fosfato (PBS) que contenía NaCl 0,16 M y la oxidación se inició con CuSO_{4} 50 \muM. Se incubaron las muestras experimentales a 37ºC y el aumento en la absorbancia a 234 nm se registró automáticamente cada 15 minutos durante al menos 12 h. El efecto de los compuestos sobre la capacidad de oxidación del plasma inducido por Cu^{2+} se probó a 7 concentraciones diferentes utilizando plasma heparinizado de 7 donantes sanos diferentes. La tabla 7 muestra la actividad inhibidora de los compuestos a 10 \muM expresada como el porcentaje de aumento de la fase de retraso con respecto al control.

TABLA 7

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Efecto preventivo y curativo sobre la aterogénesis en conejos alimentados con una dieta rica en colesterol

El procedimiento utilizado es sustancialmente igual al descrito por Shore B, Shore V. en: Day CE (ed) Atherosclerosis Drug Discovery, Plenum Press, Nueva York y Londres, pp 123-141, 1976.

Se mantuvieron veintiún conejos blancos machos de Nueva Zelanda (de 10 semanas de edad al principio del protocolo) bajo condiciones estándar (22ºC, 40% a 60% de humedad) con ciclos día/noche regulares y acceso libre a agua. Los animales se asignaron a uno de los 3 grupos de manera aleatoria. El grupo 1 (n=5) recibió una dieta de mantenimiento estándar durante 75 días; el grupo 2 (n=16) recibió la misma dieta pero con un suplemento del 1% (peso/peso) de colesterol durante 45 días. Al final de este periodo, se dividió el grupo 2 en dos grupos aleatorios. El grupo tratado (n=9) recibió durante otros 30 días 1,9 mg/kg/día del compuesto 12 (manteniendo el 1% de colesterol en su dieta) y el grupo no tratado (n=7) recibió una dieta con un 1% de colesterol durante otros 30 días.

Las variables del estudio incluían triglicéridos y colesterol total. Los animales se sacrificaron al día 75 tras el inicio del protocolo con pentobarbital i.v. Se extrajo la aorta completa hasta 1 ó 2 cm de las arterias ilíacas y se fijó en tampón fosfato 0,1 M (pH 7,4) conteniendo glutaraldehído (4%). Los análisis macroscópico y microscópico de las muestras se llevaron a cabo de manera ciega. Se diseccionaron las aortas y se tiñeron con Red Oil. Se eliminó la grasa adventicia y se abrieron las aortas longitudinalmente, se sumergieron en una disolución de Red oil durante la noche, se lavaron con propilenglicol y se fijaron sobre una superficie plana. Se tomaron imágenes de las aortas con una cámara estándar. Posteriormente, se tomaron 3 secciones de la zona del arco aórtico, la aorta torácica y la aorta abdominal (orificios renales). Se incluyeron las secciones en parafina, se cortaron con un micrótomo Ultracut (España) y se tiñeron de forma convencional con hematoxilina-eosina. Se tomaron imágenes de las aortas teñidas con Red Oil y hematoxilina-eosina con una cámara estándar. Se importaron dichas imágenes a la aplicación Photoshop (Adobe) mediante un escáner de diapositivas AGFA. Mediante el procedimiento previamente descrito por Lillie RD (Lillie, R.D., 1994, Stain Technology, vol. 19, pp 55) se determinó la superficie de lesión en toda la aorta y el grosor de la íntima en muestras histológicas. La superficie o el área de la lesión arteriosclerótica (evaluada a partir de las aortas teñidas con Red Oil) se determina por el número de pixeles de la imagen convertidos a mm2. El grosor de la íntima de la arteria (evaluado a partir de las muestras histológicas teñidas con hematoxilina-eosina) se cuantificó en mm de forma similar a como se describe para la superficie o el área de la lesión aterosclerótica. Para ello, se seleccionaron las secciones que contenían lesiones de estrías grasas y se determinó el grosor de la íntima (desde la media arterial hasta el endotelio). El grosor medio de la zona de lesión se evaluó en secciones representativas por cuadrante aórtico y se calculó la media estadística. La tabla 8 muestra los niveles plasmáticos en ayunas de el colesterol total, el colesterol HDL y de triglicéridos. El examen estadístico (t de Student) no reveló diferencia significativa alguna entre el grupo medicado y el grupo de control (el grupo no medicado pero con dieta rica en colesterol) en lo que respecta a los lípidos plasmáticos.

TABLA 8

39

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El porcentaje de superficie cubierto por las lesiones ateroscleróticas se muestra en la tabla 9.

TABLA 9

40

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El grosor de la capa de íntima de la aorta se muestra en la tabla 10.

TABLA 10

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En la tabla 8 se muestra que no existía diferencia alguna en los lípidos plasmáticos entre el grupo de control y el medicado, por lo que se demuestra que el compuesto (12) no tuvo influencia alguna sobre el metabolismo de lípidos. Tal y como se puede ver en la tabla 9 y en la tabla 10, tanto el porcentaje de área de las lesiones ateroscleróticas como el grosor de íntima se redujeron significativamente en el grupo tratado con el compuesto (12) en comparación con el grupo de control.

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Efecto preventivo y curativo en aterogénesis en ratón deficiente de apo E

El efecto preventivo y terapéutico de los presentes compuestos sobre la aterosclerosis también se ilustrará a través del siguiente ejemplo.

El efecto preventivo y curativo en la aterogénesis de los compuestos se investigó en el modelo de ratón deficiente de apo E alimentado con dieta estándar. Se alimentaron ratones hembra y macho con deficiencia de apo E (OLA129X C57/BL6J) de tres meses de edad con dieta estándar. El grupo de control incluía 8 ratones macho y 7 ratones hembra, mientras que el grupo tratado consistía en 8 ratones macho y 7 ratones hembra. Todos los animales tenían niveles de colesterol y peso corporal similares al comienzo del experimento. Tanto el grupo de control como el tratado se estudiaron durante 12 semanas. El grupo tratado recibió 5 mg/kg/día del compuesto (12).

Los parámetros de lípidos plasmáticos (colesterol total, colesterol HDL y triglicéridos) y el estrés oxidativo (medido como niveles de 8-iso-prostaglandina F2\alpha) se midieron a intervalos predeterminados. Tras la finalización del periodo de administración, la aorta torácica se aisló y se tiñó para determinar el área de las lesiones ateroscleróticas depositadas en la pared interna del vaso sanguíneo de acuerdo con el método de Red Oil (Lillie, R.D., 1994, Stain Technology, vol. 19, pp 55).

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Los niveles plasmáticos en ayunas de el colesterol total, el colesterol HDL, los triglicéridos y los niveles de 8-iso-prostaglandina F2\alpha se muestran en la tabla 11.

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TABLA 11

42

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El porcentaje de área cubierto por las lesiones ateroscleróticas depositadas en la pared interna del vaso sanguíneo y el área cubierta con macrófagos se muestran en la tabla 12.

TABLA 12

43

En la tabla 11 se muestra que el compuesto (12) es capaz de disminuir los niveles de triglicéridos en plasma, así como el estrés oxidativo de estos animales. En la tabla 12 se muestra cómo el compuesto (12) reduce tanto el área de lesiones arterioscleróticas como el área cubierta con macrófagos.

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Efecto antitrombótico in vivo

El procedimiento utilizado es sustancialmente igual al descrito por Kurz (Kurz K.D. y col., Thromb. Res. 1990, 60:269-280) y modificado por Feuerstein (Feuerstein G.Z. y col., Artherioscler. Thromb. Vasc. Biol. 1999, 19: 2554-25562).

Las ratas recibieron una única dosis oral de 100 mg/kg de los compuestos.

Cuarenta y cinco minutos después de administrarse la dosis, las ratas se anestesiaron con pentobarbital sódico (40 mg/kg, i.p.) y posteriormente se colocaron de manera dorsal sobre una mesa quirúrgica calentada (37ºC).

Se aisló la arteria carótida izquierda y se colocó bajo ésta una lámina de Parafilm M (7 x 20 mm, American National Can). Se colocó una sonda electromagnética de flujo (Transonic Systems Inc.) en la arteria para medir el flujo de sangre.

Sesenta minutos tras la administración del producto, se colocó (y no se retiró durante todo el experimento) un parche de papel saturado con disolución de FeCl_{3} (70%) sobre la arteria carótida izquierda y distal a la sonda de flujo para iniciar la trombosis. Se controló el flujo de sangre durante los 60 min posteriores a la aplicación del parche en la arteria.

Se consideró que el vaso se había ocluido totalmente por el trombo formado cuando se detectó ausencia del flujo sanguíneo (0,0 ml/min). En este modelo, la formación de trombos normalmente tiene lugar en un plazo de 15 a 20 minutos en animales no tratados. Se consideró que un animal estaba totalmente protegido por el tratamiento si un trombo no ocluía el vaso durante el periodo de estudio (60 min tras la aplicación continua del parche de FeCl_{3}).

Los resultados se muestran en la tabla 13 y se expresan como el porcentaje de animales totalmente protegidos por el tratamiento.

TABLA 13

44

Como puede observarse en la tabla 13, todos los compuestos probados tienen una potente actividad antitrombótica in vivo.

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Efecto antitrombótico sinérgico in vivo

El procedimiento utilizado es sustancialmente igual al descrito por Kurz (Kurz K.D. y col., Thromb. Res. 1990, 60: 269-280) y modificado por Feuerstein (Feuerstein G.Z. y col., Artherioscler. Thromb. Vasc. Biol. 1999, 19: 2554-25562).

Las ratas recibieron una única dosis oral de un compuesto o la combinación de dos compuestos, tal y como se describe en la tabla 14. Las dosis de los compuestos utilizados no modificaron la presión arterial ni la frecuencia cardiaca de los animales.

Se consideró que el vaso se había ocluido totalmente por el trombo formado cuando se detectó ausencia de flujo sanguíneo (0,0 ml/min). En este modelo, la formación de trombos oclusivos normalmente tiene lugar en un plazo de 15 a 20 minutos en animales no tratados. Se consideró que un animal estaba totalmente protegido por el tratamiento si un trombo no ocluía el vaso durante el periodo de estudio (60 min tras la aplicación del parche de FeCl_{3}).

Se utilizó el concepto de producto fraccional para identificar la sinergia entre los compuestos. De acuerdo con este concepto, si consideramos la protección completa de un animal como:

Inhibición fraccional = \left(1 - \frac{A}{B}\right)\times 100

en la que A es la tasa de animales con oclusión trombótica en el grupo tratado; y B es la tasa de animales con oclusión trombótica en el grupo de control.

Para dos fármacos que actúan de manera independiente:

Inhibición fraccional = \left[1 - \left(\frac{A_{1}}{B} \times \frac{A_{2}}{B}\right)\right] \times 100

en la que A_{1} es la tasa de animales con oclusión trombótica en el grupo de tratamiento A_{1}; A_{2} es la tasa de animales con oclusión trombótica en el grupo de tratamiento A_{2}; y B es la tasa de animales con oclusión trombótica en el grupo de control.

Si la protección obtenida con la combinación de los fármacos es superior a la inhibición fraccional para dos compuestos que actúan de manera independiente, entonces se considera que la sinergia tiene lugar.

Los resultados se muestran en la tabla 14 y se expresan como la tasa de animales con oclusión trombótica en cada grupo.

TABLA 14

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45

Inhibición fraccional (ácido acetilsalicílico + compuesto 12) = \left[1 - \left(\frac{0 . 5}{1} \times \frac{0 . 5}{1}\right)\right] \times 100 = 75%

Dado que el porcentaje de animales protegidos con la combinación de los dos fármacos (ácido acetilsalicílico + compuesto 12) es superior al 75% (es del 100%), existe una sinergia entre los dos productos.

Inhibición fraccional (clopidogrel + compuesto (12)) = \left[1 - \left(\frac{0 . 5}{1} \times \frac{0 . 5}{1}\right)\right] \times 100 = 75%

Dado que el porcentaje de animales protegidos con la combinación de los dos fármacos (clopidogrel + compuesto 12) es superior al 75% (es del 83%), existe una sinergia entre los dos productos.

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Protección in vitro contra la citotoxicidad inducida por radicales de oxígeno utilizando el procedimiento basado en XTT en células HUVEC

El procedimiento utilizado es sustancialmente igual al descrito por Caveda L. y col. (J. Clin. Invest. 1996; 98: 886-893).

Para la determinación de la capacidad de inhibir la citotoxicidad inducida por radicales de oxígeno se utilizaron células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC). Se aislaron las HUVEC y se cultivaron en M199 y 20% de SBF (suero bovino fetal).

El ensayo XTT se basa en la hidrólisis por las células metabólicamente activas de la sal de tetrazolio XTT para formar un producto naranja, el colorante formazán formado es soluble y se cuantifica directamente usando un espectrofotómetro.

Las células HUVEC se cultivaron hasta un estado de sub-confluencia en una placa de cultivo de tejidos de 96 pocillos y se pretrataron con 50 \muM del compuesto durante una hora. Tras ello, las células se trataron con 800 \muM de peroxinitrito durante toda la noche.

Tras la incubación nocturna, las células se incubaron con la disolución amarilla XTT (concentración final 0,3 mg/ml) durante 4 horas. Tras este periodo de incubación, se formó la disolución naranja de formazán, la cual se cuantificó espectrofotométricamente a 450 nm utilizando un lector de placas de ELISA.

Los resultados se muestran en la tabla 15 y se expresan como el porcentaje de células muertas.

TABLA 15

46

Como puede observarse en la tabla 15, todos los compuestos probados tienen una actividad protectora (p<0,05) de la célula contra daños celulares inducidos por radicales de oxígeno.

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Protección in vivo contra daños coronarios por isquemia - reperfusión

Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con el modelo previamente descrito por Hirata Y. Y col. (Journal of Cardiovascular Pharmacology. 1998, 31: 322-326).

Tras un periodo de ayuno alimenticio de 6 horas, los animales se dividieron en grupos de al menos 8 animales cada uno. Las dosis de productos se administraron mediante sonda oral 1 h antes de la inducción de la isquemia. Los animales se anestesiaron con pentobarbital (40 mg/kg, i.p.) y se registró el electrocardiograma de la derivación estándar II para detectar la depresión de la onda S. Se inyectaron 0,3 U/kg de arginina-vasopresina (AVP) (Sigma Chemicals, St Louis, Mo, EE.UU.) en la arteria carótida para inducir la vasoconstricción de arterias coronarias pequeñas y el aumento de la resistencia coronaria. Todos los grupos recibieron AVP 60 min después del fármaco de prueba. En todos los grupos, tras la inyección de AVP, se efectuó un registro de ECG de 10 minutos.

Los resultados se muestran en la tabla 16 y se expresan como decrementos de la onda S (\muvoltios).

TABLA 16

47

Como puede observarse en la tabla 16, todos los compuestos probados protegen contra el daño cardiaco por isquemia - reperfusión.

Esquema 1

48

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Esquema 2

49

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Esquema 3

50

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Esquema 4

51

Claims

1. Un compuesto según la fórmula (I) o un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de la misma:

52

en la que:

n es un número entero de 0, 1 ó 2,

X representa -S(O)_{m}-, -(C=O)- o un enlace sencillo, en la que m es un número entero de 0, 1 ó 2, con la condición de que cuando X represente -(C=O)- entonces n es 0,

alquilo C_{1-6};

alquenilo C_{2-6};

cicloalquilo C_{3-8};

cicloalquenilo C_{4-8};

fenilo;

piridilo;

tiofenilo;

nitrosilo;

S-cisteinilo;

S-glutationilo; y

53

en la que R* se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquenilo C_{4-8}, acetiloxi, hidroxilo, ONO_{2} y halógeno;

siempre que cuando R-X-S(O)_{n}- y -ONO_{2} estén en trans entre sí con respecto al plano del anillo, tal y como se representa en las fórmulas(Ia) y (Ib):

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54

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entonces R-X-S (O)_{n}- no representa 55 en la que Z es un grupo alquilo C_{1}-C_{4}, un grupo arilo o un grupo aralquilo.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en la que uno cualquiera o ambos de m y n son 0.

3. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en la que X represente un enlace sencillo o -S-.

4. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que R representa hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquenilo C_{4-8}, (alquil C_{1-6})cicloalquilo C_{3-8}, (alquil C_{1-6})cicloalquenilo C_{4-8}, fenilo, (alquil C_{1-6})fenilo, 5-acetiloxiisosorbid-2-ilo, 5-hidroxiisosorbid-2-ilo o 5-nitratoisosorbid-2-ilo.

5. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que R es alquilo C_{1-6}.

6. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que es un compuesto según la fórmula (Ic) o (Id):

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56

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7. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que se selecciona de:

5-mononitrato de 2-tioisosorbida,

5,5'-dinitrato-2,2'-ditiodiisosorbida,

5-mononitrato de 2-metiltioisosorbida,

5-mononitrato de 2-[(R)-metilsulfinil]isosorbida,

5-mononitrato de 2-[(S)-metilsulfinil]isosorbida,

5-mononitrato de 2-metilsulfinilisosorbida,

5-mononitrato de 2-metilsulfonilisosorbida,

5-mononitrato de S-nitroso-2-tioisosorbida,

5-mononitrato de 2-(tetrahidropiran-2-il-tio)isosorbida,

5-mononitrato de 2-(isosorbidil-2'-ditio)isosorbida, y

5-mononitrato de 2-(5'-acetiloxiisosorbidil-2'-ditio)isosorbida.

8. Una composición farmacéutica que comprende como principio(s) activo(s) al menos un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, opcionalmente junto con uno o más excipiente(s), activador(es), agente(s) quelante(s) y/o estabilizador(es) fisiológicamente aceptables.

9. La composición farmacéutica según la reivindicación 8, que comprende además un agente trombolítico, preferentemente un activador del plasminógeno, uroquinasa, estreptoquinasa, alteplasa o anistreplasa.

10. La composición farmacéutica según las reivindicaciones 8 ó 9, que comprende además un agente anticoagulante, preferentemente heparina, dicumarol, acenocumarol, enoxaparina o polisulfato de pentosano.

11. La composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, que comprende además un agente antitrombótico, preferentemente ácido acetilsalicílico, dipiridamol, ticlopidina, clopidrogel, triflusal, polisulfato de pentosano o abciximab.

12. La composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, que comprende además una inmunoglobulina o un fragmento de ésta que tiene especificidad para la glicoproteína IIb/IIIa.

13. La composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, que comprende además un agente hipolipemiante, preferentemente simvastatina, lovastatina, atorvastatina, pravastatina, fluvastatina, eptastatina, lifibrol, acifrán, acitemato, glunicato y rosuvastatina.

14. La composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13, que comprende además un agente antioxidante/secuestrador de radicales libres, preferentemente nicaravén, ranolazina, emoxipina, glutatión, edaravona, raxofelast, licopeno, N-acetil-L-cisteína, N-acetil-D-cisteína, una mezcla racémica de N-acetil-L-cisteína y N-acetil-D-cisteína, o carvedilol.

15. La composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14 para la prevención y/o el tratamiento de la aterosclerosis, disfunciones endoteliales, vasoespasmos, vasculopatía del trasplante alogénico cardiaco, disfunciones del sistema circulatorio, activación de plaquetas, trombosis, ictus, afecciones patológicas en las que el estrés oxidativo desempeña un importante papel en su patogénesis, y/o daño tisular debido a isquemia y/o debido a isquemia - reperfusión.

16. La composición farmacéutica según la reivindicación 15, en la que las afecciones patológicas en las que el estrés oxidativo desempeña un importante papel en su patogénesis se seleccionan de alergias, ictus, enfermedad de Alzheimer y enfermedades cardiovasculares isquémicas.

17. La composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14 para el tratamiento y/o la prevención de disfunciones del sistema circulatorio, preferentemente disfunciones cardiovasculares y/o coronarias.

\newpage

18. Uso de al menos un compuesto de fórmula (I) o un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de la misma:

57

en la que:

n es un número entero de 0, 1 ó 2,

alquilo C_{1-6};

alquenilo C_{2-6};

cicloalquilo C_{3-8};

cicloalquenilo C_{4-8};

fenilo;

piridilo;

tiofenilo;

nitrosilo;

S-cisteinilo;

S-glutationilo; y

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58

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como principio(s) activo(s) para la preparación de una composición farmacéutica para la prevención y/o el tratamiento de la aterosclerosis, disfunciones endoteliales, vasoespasmos, vasculopatía del trasplante alogénico cardiaco, activación de plaquetas, trombosis, ictus, afecciones patológicas en las que el estrés oxidativo desempeña un importante papel en su patogénesis y/o el daño tisular debido a isquemia y/o debido a isquemia - reperfusión.

19. El uso según la reivindicación 18, en la que uno cualquiera o ambos de m y n son 0.

20. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 18 ó 19, en la que X represente un enlace sencillo o -S-.

21. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 20, en la que R represente hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquenilo C_{4-8}, (alquil C_{1-6})cicloalquilo C_{3-8}, (alquil C_{1-6})cicloalquenilo C_{4-8}, fenilo o (alquil C_{1-6})fenilo.

22. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 21, en la que R es alquilo C_{1-6}.

23. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 22, en el que el compuesto según la fórmula (I) es un compuesto según la fórmula (Ic) o (Id):

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59

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24. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 23, en el que el compuesto de fórmula (I) se selecciona de:

5-mononitrato de 2-tioisosorbida,

5,5'-dinitrato-2,2'-ditiodiisosorbida,

5-mononitrato de 2-metiltioisosorbida,

5-mononitrato de 2-[(R)-metilsulfinil]isosorbida,

5-mononitrato de 2-[(S)-metilsulfinil]isosorbida,

5-mononitrato de 2-metilsulfinilisosorbida,

5-mononitrato de 2-metilsulfonilisosorbida,

5-mononitrato de S-nitroso-2-tioisosorbida,

5-mononitrato de 2-(tetrahidropiran-2-il-tio)isosorbida,

5-mononitrato de 2-(isosorbidil-2'-ditio)isosorbida, y

5-mononitrato de 2-(5'-acetiloxiisosorbidil-2'-ditio)isosorbida.

\newpage

25. El uso según la reivindicación 18, en el que el compuesto es 5-mononitrato de 2-acetiltioisosorbida, que se representa mediante la siguiente fórmula:

60

26. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 25, en el que la composición farmacéutica comprende además un agente trombolítico, preferentemente un activador del plasminógeno, uroquinasa, estreptoquinasa, alteplasa o anistreplasa.

27. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 26, en el que la composición farmacéutica comprende además un agente anticoagulante, preferentemente heparina, dicumarol, acenocumarol, enoxaparina o polisulfato de pentosano.

28. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 27, en el que la composición farmacéutica comprende además un agente antitrombótico, preferentemente ácido acetilsalicílico, dipiridamol, ticlopidina, clopidrogel, triflusal, polisulfato de pentosano o abciximab.

29. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 28, en el que la composición farmacéutica comprende además una inmunoglobulina o un fragmento de ésta que tiene especificidad por la glicoproteína IIb/IIIa.

30. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 29, en el que la composición farmacéutica comprende además un agente hipolipemiante, preferentemente simvastatina, lovastatina, atorvastatina, pravastatina, fluvastatina, eptastatina, lifibrol, acifrán, acitemato, glunicato o rosuvastatina.

31. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 30, en el que la composición farmacéutica comprende además un agente antioxidante/secuestrador de radicales libres, preferentemente nicaravén, ranolazina, emoxipina, glutatión, edaravona, raxofelast, licopeno, N-acetil-L-cisteína, N-acetil-D-cisteína, una mezcla racémica de N-acetil-L-cisteína y N-acetil-D-cisteína, o carvedilol.

32. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 31, en el que las afecciones patológicas en las que el estrés oxidativo desempeña un importante papel en su patogénesis se seleccionan de alergias, ictus, enfermedad de Alzheimer y enfermedades cardiovasculares isquémicas.

33. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I), un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de la misma:

61

en la que:

n es un número entero de 0, 1 ó 2,

X representa -S(O)_{m}- o un enlace sencillo, en la que

m es un número entero de 0, 1 ó 2, y

R representa hidrógeno o es un residuo R^{a}, residuo R^{a} que se selecciona del grupo que está constituido por: alquilo C_{1-6};

alquenilo C_{2-6};

cicloalquilo C_{3-8};

cicloalquenilo C_{4-8};

fenilo;

piridilo;

tiofenilo;

nitrosilo;

S-cisteinilo;

S-glutationilo; y

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62

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en la que R^{a} está opcionalmente sustituido por uno a tres grupos seleccionados independientemente del grupo constituido por alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquenilo C_{4-8}, acetiloxi, hidroxilo, ONO_{2} y halógeno,

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procedimiento que comprende realizar las siguientes etapas:

a) efectuar la hidrólisis de un compuesto de fórmula (IIa):

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63

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en la que R' es alquilo C_{1}-C_{6}, preferentemente metilo,

para obtener el siguiente compuesto:

64

y

b) opcionalmente, efectuar sobre el compuesto preparado según la etapa a):

I. una reacción de oxidación para obtener:

65

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66

en el que:

n es 1 ó 2,

X es -S (O)_{m}- en la que m es 0, 1 ó 2, y

R* representa hidroxilo o ONO_{2};

\newpage

II. una reacción de sustitución para obtener:

un compuesto según la fórmula (I), en la que:

n es un número entero de 0,

X representa un enlace, y

R no representa nitrosilo,

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opcionalmente seguida por una oxidación para obtener un compuesto según la fórmula (I), en la que:

n es un número entero de 0,

X representa -S(O)_{m}-, en la que m es un número entero de 0 o 1, y

R no representa nitrosilo;

\vskip1.000000\baselineskip

III. una reacción de sustitución para obtener:

un compuesto según la fórmula (I), en la que:

n es un número entero de 0, y

X representa -S-;

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n es un número entero de 1 ó 2, y

X representa -S(O)_{m}-, en la que m es 0, 1 ó 2; o

\vskip1.000000\baselineskip

IV. una reacción de nitrosación para obtener:

67

34. Un procedimiento según la reivindicación 33 para la preparación de un compuesto de fórmula (Ia), un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de la misma:

68

en la que:

n es un número entero de 0, 1 ó 2,

X representa -S(O)_{m}- o un enlace sencillo, en la que m es un número entero de 0, 1 ó 2, y

alquilo C_{1-6};

alquenilo C_{2-6};

cicloalquilo C_{3-8};

cicloalquenilo C_{4-8};

fenilo;

piridilo;

tiofenilo;

nitrosilo;

S-cisteinilo;

S-glutationilo; y

69

y en el que dicho procedimiento comprende las siguientes etapas:

a) efectuar la hidrólisis de un compuesto de fórmula (II):

70

71

y

b) opcionalmente, efectuar sobre el compuesto (1) preparado según la etapa a):

I. una reacción de oxidación para obtener:

5,5'-dinitrato-2,2'-ditio-diisosorbida (2) ó

5-mononitrato de 2-(isosorbidil-2'-ditio)isosorbida (8),

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72

en la que:

n es 1 ó 2,

X es -S(O)_{m}-, en la que m es 0, 1 ó 2, y

R* representa hidroxilo o ONO_{2};

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II. una reacción de sustitución para obtener un compuesto según la fórmula (Ia), en la que:

n es un número entero de 0,

X representa un enlace, y

R no representa nitrosilo,

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opcionalmente seguida por una oxidación para obtener:

un compuesto según la fórmula (Ia), en la que:

n es un número entero de 0,

X representa -S(O)_{m}-, en la que m es un número entero de 0 ó 1, y

R no representa nitrosilo;

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III. una reacción de sustitución para obtener:

un compuesto según la fórmula (Ia), en la que:

n es un número entero de 0, y

X representa -S-;

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opcionalmente seguida por una oxidación para

obtener un compuesto según la fórmula (Ia), en la que:

n es un número entero de 1 ó 2, y

X representa -S(O)_{m}-, en la que m es 0, 1 ó 2; o

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IV. una reacción de nitrosación para obtener:

5-mononitrato de S-nitroso-2-tioisosorbida (6).

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35. Un procedimiento según la reivindicación 33 ó 34 que incluye las etapas a) y b) II para la preparación de:

5-mononitrato de 2-[(R)-metilsulfinil]isosorbida y/o

5-mononitrato de 2-[(S)-metilsulfinil]isosorbida.

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36. Un procedimiento según la reivindicación 35, que incluye la separación de ambos diaestereoisómeros.

37. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (11) o un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de la misma:

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73

\newpage

cuyo procedimiento comprende las siguientes etapas:

a) efectuar una oxidación de un compuesto de fórmula (III):

74

en la que R' es alquilo C_{1}-C_{6}, preferentemente metilo, para obtener 2,2'-ditio-diisosorbida (10),

75

y

b) efectuar una nitración del compuesto preparado en la etapa a) con un agente de nitración en presencia de un anhídrido carboxílico, preferentemente anhídrido acético.

38. 2,2'-ditio-diisosorbida.