ES2321166T3

ES2321166T3 - Uso de esteres de acidos grasos de cadena larga para el tratamiento de enfermedades autoinmunes.

Info

Publication number: ES2321166T3
Application number: ES02724589T
Authority: ES
Inventors: Pinchas Burstein; Avraham Ben-Nun
Original assignee: Yeda Research and Development Co Ltd
Current assignee: Yeda Research and Development Co Ltd
Priority date: 2001-04-11
Filing date: 2002-04-11
Publication date: 2009-06-03
Anticipated expiration: 2022-04-11
Also published as: DE60230067D1; ATE415157T1; WO2002083059A2; WO2002083059A3; IL158228A; EP1480595A2; IL142537A0; US20040186072A1; US8614248B2; AU2002255242A1; EP1480595B1; EP1480595A4

Abstract

Uso de un éster de un ácido graso C 18 saturado o cis-insaturado con un alcanol C 1 - C 24, con un poliol que tenga como mínimo cuatro grupos hidroxi o un anhidro derivado del mismo, o con un monosacárido, o una combinación de dichos ésteres, para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades autoinmunes organoespecificas.

Description

Uso de ésteres de ácidos grasos de cadena larga para el tratamiento de enfermedades autoinmunes.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a los agentes antiinflamatorios, y en particular, a ciertos ésteres de ácidos grasos de cadena larga útiles en el tratamiento de enfermedades autoinmunes y otros trastornos inflamatorios asociados al sistema inmune.

Abreviaciones: AFC: adyuvante de Freund completo; EAE: encefalomielitis autoinmune experimental; OAE: oleato de etilo; DMID: diabetes mellitus insulinodependiente; AFI: adyuvante de Freund incompleto; PBM: proteína básica de mielina; MOM: monooleato de manido; EM: esclerosis múltiple; HMER: homogeneizado de médula espinal de ratón; TFS: tampón fosfato salino; PPL: proteína proteolípida.

Antecedentes de la invención

Una enfermedad autoinmune es el resultado de la imposibilidad por parte del sistema inmune de mantener la autotolerancia al antígeno (los antígenos) en el órgano afectado. Se han observado más de cuarenta enfermedades autoinmunes sistémicas y organoespecíficas, algunas de las cuales, por ejemplo el lupus eritematoso sistémico y la miastenia gravis, son mediadas por anticuerpos, mientras otras, como la esclerosis múltiple (EM), la diabetes mellitus insulinodependiente, la artritis reumatoide y la tiroiditis, son mediadas por las células T reactivas contra antígenos específicos en el órgano diana relevante. Estas células T anormalmente activadas inician una reacción inflamatoria en el órgano diana mientras que las células T, las células B y los macrofagos, al igual que otras células mononucleares, son reclutadas lo cual conlleva daño tisular organoespecífico.

Las enfermedades autoinmunes humanas pueden dividirse en dos amplias categorías: enfermedades autoinmunes organoespecíficas y sistémicas.

Las enfermedades autoinmunes organoespecíficas incluyen: EM, diabetes mellitus insulinodependiente (DMID), artritis reumatoide, varias formas de anemia (aplásica, hemolítica), hepatitis autoinmune, tiroiditis, iridociclitis, escleritis, uveitis, orquitis, miastenia gravis, púrpura trombocitopénica idiopática y enfermedades inflamatorias del intestino: tales como enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa.

Las enfermedades autoinmunes sistémicas incluyen: escleroderma y esclerosis sistémica, síndrome de Sjogren, síndrome indiferenciado del tejido conectivo, síndrome antifosfolípido, diferentes formas de vasculitis (poliarteritis nodosa, granulomatosis alérgica y angiitis, granulomatosis de Wegner, enfermedad de Kawasaki, vasculitis de hipersensibilidad; púrpura de Henoch-Schoenlein, síndrome de Behcet, arteritis de Takayasu, arteritis de células gigantes, tromboangiitis obliterante), lupus eritematoso sistémico, polimialgia reumática, psoriasis vulgar y artritis psoriática, polimiositis y otras miopatías inflamatorias idiopáticas, paniculitis recidivante, policondritis recidivante, granulomatosis linfomatoide, eritema nodoso, espondilitis anquilosante, síndrome de Reiter, y distintas formas de dermatitis inflamatoria.

Para el estudio de la autoinmunidad se han desarrollado varios modelos animales. Entre las enfermedades autoinmunes, la esclerosis múltiple (EM) y su modelo animal, la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) se han investigado detalladamente como una enfermedad autoinmune prototípica organoespecífica mediada por células T. La EM es una enfermedad autoinmune inflamatoria del sistema nervioso central (SNC) que se caracteriza por demielinación primaria, la cual se manifiesta clínicamente por grados variables de deterioro neurológico en pacientes distintos. Se cree que la enfermedad aparece como resultado de una respuesta anormal de las células T a los antígenos de mielina en el SNC.

Varias proteínas de mielina han sido identificadas como potenciales antígenos diana primarios contra los cuales se dirigen las células inmunes nocivas, basándose en su habilidad de causar EAE en animales de laboratorio (Kerlero de Rosbo y Ben-Nun, 1998). La EAE, el supuesto modelo experimental de la EM, presenta muchas similitudes en las manifestaciones neuropatológicas y clínicas con su equivalente humano. La EAE puede inducirse activamente en las cepas genéticamente susceptibles de animales de laboratorio por inmunización con homogeneizado de médula espinal, proteínas de mielina purificadas tales como proteína básica de mielina (PBM), proteína proteolípida (PPL) y glicoproteína oligodendrocítica de mielina (GOM), o sus péptidos, emulsificados en un adyuvante, o bien puede inducirse pasivamente por inyección de líneas o clones de células T CD4+ activadas, específicas a aquellos antígenos de mielina (Kerlero de Rosbo y Ben-Nun, 1999). La EAE inducida en ratones SJL/J con PPL 139-151 o en ratones C3H.SW con MOG 35-55, es una enfermedad crónica grave adecuada para estudios inmunomodulatorios (Kerlero de Rosbo y Ben-Nun, 1999).

Numerosos enfoques inmunoespecíficos y no inmunoespecíficos de tratamiento de enfermedades autoinmunes se han investigado en modelos animales experimentales. En el contexto de la EM, algunos de estos enfoques han llevado al desarrollo de tales medicinas como Copaxona y Interferon-\beta, la eficacia de las cuales en el tratamiento de EM es limitada.

Los enfoques inmunoespecíficos del tratamiento de enfermedades autoinmunes han sido investigados detalladamente. Entre otros, la administración de autoantígenos ha dado resultados prometedores en roedores. Así, la inyección y/o la administración oral de PBM, péptidos de PBM, péptidos de PPL o mielina entera podría suprimir el desarrollo de la EAE en roedores y la administración oral de descarboxilasa del ácido glutámico (DAG), S-antígeno o colágeno del tipo II fue eficaz en suprimir el desarrollo de diabetes, uveitis o artritis reumatoide, respectivamente, en animales de laboratorio. Sin embargo, los resultados del estudio clínico de fase II de alimentación oral con mielina de pacientes que padecen la EM no fueron favorables.

Una de las principales dificultades en el diseño de un tratamiento inmunoespecífico eficaz de las enfermedades autoinmunes es la complejidad de la respuesta autoinmune potencialmente nociva de las células T que podría dirigirse contra la multiplicidad de autoantigenos. Por lo tanto, los tratamientos no inmunoespecíficos por medio de agentes inmunosupresores, tales como corticoesteroides, ciclosporina A, azatioprina, metotrexato etc, se utilizan a menudo en el tratamiento de la EM, y asimismo de otras enfermedades autoinmunes. Sin embargo, estos tratamientos a menudo se asocian a la "inmunosupresión generalizada" y efectos colaterales de gravedad variable en los pacientes tratados.

Sería muy deseable descubrir nuevos agentes que pudieran utilizarse para el tratamiento de las enfermedades autoinmunes y otros trastornos inflamatorios asociados al sistema inmune.

Resumen de la invención

En conformidad con la presente invención, durante la investigación de la inmunomodulación no antígeno específica de las enfermedades autoinmunes por medio de compuestos cuyo efecto no está relacionado con la inmunosupresión generalizada, se ha descubierto de manera inintencionada que algunos ésteres de ácidos grasos de cadena larga representados por oleato de etilo (en lo sucesivo, OAE) y monooleato de manido (en lo sucesivo MOM), que, según consta, no son tóxicos al inyectarse en humanos, proporcionan una protección altamente eficaz contra el desarrollo de la EAE crónica grave. Es más, el tratamiento de la enfermedad en curso con cualquiera de estos agentes o su combinación ha dado como resultado una reducción considerable o una detención del deterioro neurológico.

De esta manera, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades autoinmunes organoespecíficas que incluya como ingrediente activo un agente escogido entre:

(i) un alquil éster C1 - C24 de un ácido graso C18 saturado o cis-insaturado;

(ii) un monoéster o poliéster de un poliol que tenga al menos cuatro grupos hidroxi con un ácido graso C18 saturado o cis-insaturado o un anhidro derivado del mismo;

(iii) un monoéster o poliéster de un mono-, di- o polisacárido con un ácido graso C18 saturado o cis-insaturado; y

(iv) combinaciones de cualquiera de las opciones de (i) a (iv).

En otra realización, la invención se refiere al uso de un agente en conformidad con lo estipulado en las opciones de (i) a (iii) arriba o de su combinación, para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades autoinmunes organoespecíficas.

Breve descripción de las figuras

Fig. 1 demuestra que la administración subcutánea (s.c.) de oleato de etilo (OAE) protege contra el desarrollo de la EAE. Los ratones SJL/J fueron inducidos a desarrollar la EAE por el péptido PPL 139-151 en AFC. 100 \mul de OAE fueron inyectados s.c. diariamente desde el día de la carga encefalitogénica (día 0) hasta el día 11, cuando se observó el primer deterioro neurológico. Posteriormente, el tratamiento con OAE fue continuado en días alternos (día 13, 15 y 17), seguido de tres inyecciones más los días 20, 23 y 26.

Fig. 2 demuestra que la administración intraperitoneal (i.p.) de OAE protege contra el desarrollo de la EAE. Cuatro grupos de ratones SJL/J (7-8 ratones por grupo) fueron inducidos a desarrollar la EAE por PPL 139-151/AFC. Diariamente a cada grupo se le inyectó i.p. TFS (control), OAE, aceite de parafina o AFI, a partir del día de carga encefalitogénica (día 0). El tratamiento se suspendió el día 50 y se realizó el seguimiento y la evaluación del progreso de la enfermedad en los ratones hasta el día 70.

Fig. 3 demuestra que la administración i.p. de monooleato de manido (MOM) protege contra el desarrollo de la Ratones EAE. (5-6 ratones por grupo) fueron inducidos a desarrollar EAE con PPL 139-151/AFC. 100 \mul de TFS (control) o MOM fueron inyectados i.p. diariamente a partir del día de carga encefalitogénica (día 0). El tratamiento se suspendió el día 25 y la evaluación de signos clínicos continuó hasta el día 73 después de la carga encefalitogénica.

Figs. 4A-4C demuestra la detención del progreso de enfermedad y regresión de signos clínicos de la EAE como resultado de la administración i.p. de OAE o AFI. Fig. 4A - Desarrollo de la EAE en ratones a los que se les inyectó i.p. OAE o AFI diariamente. Los ratones SJL/J fueron inducidos a desarrollar la EAE por PPL 139-151/AFC. El día 12 después de carga encefalitogénica, a los ratones se les inyectaron i.p. diariamente 100 \mul de TFS (control; 5 ratones) o OAE (13 ratones) o bien AFI (14 ratones), hasta el día 35 después de carga encefalitogénica. Fig. 4B - Curso clínico de la EAE después de la suspensión de tratamiento en ratones completamente recuperados, subgrupos OAE-F (8 ratones) y AFI-F (11 ratones). Fig 4C - Curso clínico de EAE después de que el tratamiento fuera reiniciado a partir del día 40 en ratones parcialmente recuperados, subgrupos OAE-P (5 ratones) y AFI-P (3 ratones).

Fig. 5 demuestra la detención del progreso de la enfermedad (EAE) como resultado de administración s.c. de OAE y MOM Los ratones SJL/J fueron inducidos a desarrollar la EAE por PPL 139-151/CFA. A los ratones (5-6 ratones por grupo) se les inyectaron s.c. diariamente 100 \mul de TFS (control), MOM, OAE, o una mezcla 1:1 de OAE+MOM, a partir del día 11 después de carga encefalitogénica, justo antes del inicio clínico de EAE.

Fig. 6 demuestra que la administración s.c. de OAE o MOM protege contra el desarrollo de EAE inducido por el homogeneizado de médula espinal de ratón (HMER). Los ratones SJL/J fueron inducidos a desarrollar EAE por inyección de HMER emulsificado en AFC. A los ratones de cada grupo (4 ratones por grupo) se les inyectaron s.c. diariamente 100 \mul de TFS (control) o de OAE, MOM o de mezcla 1:1 de OAE+MOM, a partir del día 4 después de carga encefalitogénica. X indica muerte de todos los ratones del grupo.

Descripción detallada de la invención

La presente invención presenta los ésteres de ácidos grasos de cadena larga como agentes para el tratamiento de enfermedades autoinmunes y otros trastornos inflamatorios asociados al sistema inmune.

El agente para el uso según la invención puede ser derivado de un ácido graso C18 saturado o cis-insaturado como ácido esteárico y ácido oleico (ácido cis-9-octadecanoico), ácido cis-vaccénico (ácido cis-11-octadecanoico), ácido linoleico (ácido cis-9,12-octadecadienoico), ácido g-linolénico (ácido cis-6,9,12-octadecatrienoico), ácido linolénico (ácido cis-9,12,15-octadecatrienoico). En la realización más preferente el ácido graso es ácido oleico.

Según una realización de la invención, el agente es un alquil éster de un ácido alifático C18 saturado o cis-insaturado, por ejemplo un alquil éster C1-C24, preferentemente C1-C8, el más preferente C2. Así el grupo alquil puede ser, por ejemplo, metilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, hexilo y, el más preferente, etilo.

En otra realización de la invención, el agente es un monoéster o un poliéster de un ácido alifático C18 saturado o cis-insaturado, con un poliol que tenga al menos cuatro grupos hidroxi, por ejemplo, pero no limitándose a, eritritol, pentaeritritol, sorbitol o manitol.

En otra realización de la invención, el agente es un monoéster o un poliéster de un ácido alifático C18 saturado o cis-insaturado, con un monosacárido, como glucosa, manosa, fructosa, galactosa o ribosa, o con un disacárido, como sucrosa, lactosa, maltosa o trehalosa, o con un polisacárido, como dextrano, dextrina o amilodextrina (almidón soluble).

En la realización más preferente de la invención el éster es oleato de etilo (en lo sucesivo abreviado como OAE) o monooleato de manido (en lo sucesivo abreviado como MOM) o una combinación de ambos.

Los trastornos autoinmunes y otros trastornos inflamatorios asociados al sistema inmune que pueden ser tratados en conformidad con la invención incluyen las enfermedades autoinmunes organoespecíficas tales como esclerosis múltiple (EM), diabetes mellitus insulinodependiente (DMID), artritis reumatoide, varias formas de anemia (aplásica, hemolítica), hepatitis autoinmune, tiroiditis, iridociclitis, escleritis, uveitis, orquitis, miastenia gravis, púrpura trombocitopénica idiopática y enfermedades inflamatorias del intestino, tales como enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa

Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden incluir además del ingrediente activo un portador farmacéuticamente aceptable y excipientes inertes. El agente puede ser administrado por cualquier vía conveniente, por ejemplo, oral, tópica, subcutánea e intramuscular. Estas composiciones pueden fabricarse con métodos convencionales con los que están familiarizados los conocedores de la materia, por ejemplo, según se describe en "Remington's Pharmaceutical Science", A.R. Gennaro, ed., 17a edición, 1985, Mack Publishing Company, Easton, PA, EE.UU.

A continuación ilustraremos la invención con los siguientes ejemplos.

Ejemplos Materiales y métodos

Ratones. Hembras de ratones SJL/J (H-2^{S}) fueron adquiridas de Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME, EE.UU.). Todos los ratones tenían la edad de 2-3 meses cuando fueron utilizados en los experimentos.

Materiales. El péptido PPL 139-151 que consiste de aminoácidos 139-151 de la secuencia de PPL de ratón que es encefalitogénico para los ratones SJL/J (Tuohy et al., 1994), fue sintetizado por la Unidad de síntesis del Instituto Weizmann, utilizando una técnica de fase sólida en un sintetizados de péptidos (Applied Biosystems Inc., Foster City, CA EE.UU.). La EAE inducida por péptido PPL 139-151 en ratones SJL/J fue usada como modelo para la EM y para otras enfermedades inflamatorias autoinmunes organoespecíficas mediadas por células T.

Adyuvante de Freund incompleto (AFI), adyuvante de Freund completo (AFC), y mycobacterium tuberculosis H37Ra se obtuvieron de Difco (MI, EE.UU.); éster etílico de ácido oleico (oleato de etilo, OAE) de ICN (CA, USA); monooleato de manido (MOM) de Sigma (Israel); y aceite de parafina de Sigma (Israel).

Inducción de EAE. A los ratones se les inyectaron s.c. bajo anestesia general en dos lugares en el costado 100 \mul de emulsión que contenía 200 \mug de PPL 139-151 en AFC que contenía 500 \mug de Mycobacterium tuberculosis (Difco, MI, EE.UU.). Alternativamente, a los ratones se les inyectaron s.c. en las cuatro patas 200 \mul (volumen total) de emulsión que contenía homogeneizado de médula espinal de ratón (HMER; 600 \mug) y Mycobacterium tuberculosis (400 \mug). Después de la carga encefalitogénica, los ratones fueron observados diariamente y las manifestaciones clínicas de EAE fueron evaluadas usando una escala de 0-5, en la cual 0: no hay signos clínicos, 1: cola flácida, 2: parálisis de extremidad posterior, 3: parálisis de extremidad posterior y paresis de extremidades anteriores, 4: parálisis completa de las cuatro extremidades, 5: muerte.

Tratamiento de EAE por administración s.c. o i.p. de OAE, MOM o AFI. En los tiempos indicados, a los ratones les fueron inyectados s.c. en el costado o i.p. 100 \mul de OAE, MOM, o AFI en forma de aceite.

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Ejemplo 1

Protección contra EAE por administración subcutánea de OAE

El efecto de OAE en el desarrollo de la EAE fue probado en ratones SJL/J que desarrollan EAE clínica grave después de inmunización con PPL 139-151/AFC. A partir del día de la carga encefalitogénica (día 0), hasta la primera detección de deterioro neurológico manifiesto (pérdida del tono de la cola, el día 11-12 después de la inmunización), los ratones recibieron diariamente una inyección s.c. de OAE (100 NI). Posteriormente, se administró OAE (s.c.) en días alternos (día 13, 15 y 17), seguido de tres inyecciones más de OAE en los días 20, 23 y 26. Como se puede ver en Fig. 1, el tratamiento con OAE dio como resultado una reducción significante de la gravedad clínica y la incidencia de la EAE. En comparación con el grupo de control no tratado en el cual 5 ratones de los 5 desarrollaron parálisis con la puntuación clínica media máxima de 1.67 \pm 0.29, sólo 2 de los 5 ratones tratados con OAE desarrollaron EAE, y sólo con deterioro clínico leve (gravedad media máxima = 0.5 \pm 0.32, X^{2} = 0.031 en comparación con el grupo de control). Estos resultados indican que OAE podría tener un efecto beneficioso sobre el desarrollo de la EAE.

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Ejemplo 2

Protección contra EAE por administración intraperitoneal de OAE

A continuación, el efecto beneficioso de OAE sobre la EAE fue probado utilizando una ruta distinta de administración, por vía de inyección i.p. Un grupo adicional de ratones tratados con aceite de parafina fue incluido en calidad de "control de aceite". La EAE fue inducida en ratones SJUJ con PPL 139-151/AFC. A los ratones tratados con OAE- o con aceite de parafina se les inyectaron i.p. diariamente 100 \mul del aceite pertinente, a partir del día de la carga encefalitogénica (día 0). El tratamiento se suspendió el día 50 y se realizó el seguimiento y la evaluación del progreso de enfermedad en los ratones hasta el día 70. Según se muestra en Fig. 2, el tratamiento con aceite de parafina no tuvo efecto sobre el desarrollo de la enfermedad, y de manera similar a los ratones de control no tratados, 8 de los 8 ratones desarrollaron EAE clínica grave con la puntuación clínica media máxima de 2.70 \pm 1.02. Por otro lado, los 5 de los 8 ratones tratados con OAE que desarrollaron EAE, el inicio de la cual fue tardío, presentaban solamente un deterioro neurológico muy leve (evaluación media máxima 0.63 \pm 0.28, p = 0.043 en comparación con los grupos de control). Como se puede ver en Fig. 2, el efecto protector del tratamiento con OAE fue duradero ya que los ratones permanecieron estables durante 20 días después de la suspensión del tratamiento con OAE.

Cabe mencionar que un protocolo idéntico de tratamiento con AFI, que contiene otro derivado de ácido oleico, monooleato de manido (MOM), fue tan eficaz como OAE en la protección contra la EAE y en la prevención del progreso de la enfermedad (Fig. 2).

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Ejemplo 3

Protección contra EAE por administración intraperitoneal de MOM

La posibilidad de que el efecto protector de AFI pudiera ser atribuido a MOM fue comprobada por la administración diaria de MOM a partir del día de la carga encefalitogénica (día 0). La administración de MOM fue suspendida el día 25 después de la inmunización, y la evaluación de los signos clínicos continuó hasta el día 73 después de la carga encefalitogénica. Los resultados en Fig. 3 demuestran que MOM administrado i.p. a diario a partir del día 0 detuvo por completo el desarrollo de la enfermedad. El día 20, cuando los ratones de control (5 ratones afectados por EAE de los 5) habían alcanzado una puntuación clínica media máxima de 3.4 \pm 0.69, todos los 6 ratones tratados con MOM seguían sin presentar signos clínicos de EAE (p = 0.02). A partir del día 25, cuando la administración i.p. diaria de MOM fue suspendida, con el tiempo aparecieron signos clínicos muy leves en 3 de los 6 ratones. El día 40 (15 días después de que las inyecciones de MOM fueran suspendidas), la puntuación clínica media máxima en el grupo tratado con MOM fue de 0.17 \pm 0.11, en comparación con la puntuación clínica media máxima de 2.6 \pm 0.99 en el grupo de control (p = 0.014). El día 73 (48 días después de que las inyecciones de MOM fueran suspendidas), la puntuación clínica media máxima en los ratones tratados con MOM fue de 0.67 \pm 0.44 en comparación con 3.2 \pm 0.75 en el grupo de control (p = 0.012).

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Ejemplo 4

Detención del progreso de enfermedad y regresión de signos clínicos de EAE por administración i.p. de OAE

En vista del fuerte efecto protector que proporciona OAE contra la EAE, a continuación analizamos si también podía tratar una enfermedad en curso. El efecto terapéutico potencial de OAE fue evaluado en ratones SJL/J inmunizados por inducción de EAE con PPL 139-151/AFC. Con nuestro protocolo de inmunización estándar, los primeros signos clínicos manifiestos de la EAE generalmente aparecen el día 11-12. Por lo tanto, el tratamiento con OAE (inyección i.p. diaria de 100 \mul OAE; 13 ratones tratados) fue iniciado el día 12 después de la inmunización cuando más de 60% de los ratones ya presentaban síntomas clínicos. Según se muestra en la Fig. 4A, la administración i.p. de OAE iniciada en el momento de inicio clínico de la EAE, detuvo inmediatamente el empeoramiento de los síntomas clínicos de EAE, en comparación con los ratones de control. Es más, la continuación del tratamiento con EOA dio como resultado no sólo la detención inmediata del progreso de la enfermedad, sino una regresión completa de los síntomas clínicos durante 8-10 días después del inicio del tratamiento (día 20, Fig. 4A). De esta manera, mientras la enfermedad en los ratones de control progresó a la puntuación clínica media máxima de 3.5 \pm 0.69, el progreso de la enfermedad en los ratones tratados con OAE se detuvo en la puntuación clínica media máxima de 0.83 \pm 0.53 inmediatamente después de la primera inyección de OAE, y los síntomas clínicos disminuyeron después de ello. Como puede apreciarse claramente en Fig. 4A, en los días 20-21, cuando los síntomas en los ratones de control alcanzaron gravedad clínica máxima (puntuación media = 3.5 \pm 0.69), los ratones tratados con OAE casi no presentaban signos clínicos de EAE (puntuación clínica media máxima= 0.17 \pm 0.11): El tratamiento con OAE continuó hasta el día 35 después de la inmunización sin reaparición obvia de síntomas clínicos de EAE (Fig. 4A). Se siguió un régimen similar de tratamiento con AFI (14 ratones tratados), y se observó un efecto terapéutico similar o mejor en EAE (Fig. 4A).

El día 40, después de 9 días sin administrar tratamiento con OAE o AFI, los ratones habían permanecido estables sin evidencia de exacerbación de la enfermedad o desarrollo de recaídas (Fig. 4A). Para evaluar adicionalmente la eficacia de los tratamientos, el día 40 cada grupo de tratamiento fue dividido en dos subgrupos en función del grado de recuperación de la enfermedad. De esta manera, para cada grupo de tratamiento (OAE o AFI), los ratones que se habían recuperado con regresión completa de signos clínicos de EAE, fueron unidos en un subgrupo mientras que el otro subgrupo incluía a los ratones con signos clínicos residuales de EAE (cola débil a flácida). En lo sucesivo estos subgrupos se denominarán OAE-F o AFI-F (subgrupos completamente recuperados; 8 y 11 ratones en los subgrupos OAE-F y AFI-F respectivamente) y OAE-P o AFI-P (subgrupos parcialmente recuperados; 5 y 3 ratones en los subgrupos OAE-P y AFIP respectivamente). En los subgrupos OAE-F y AFI-F que no presentaban signos clínicos de EAE, los ratones permanecieron sin tratamiento y fueron monitorizados para detectar la expresión clínica de EAE (Fig. 4B). Por otro lado, el tratamiento i.p. diario con OAE o AFI fue reiniciado durante 40 días más en los ratones de los subgrupos OAE-P y AFI-P respectivamente (Fig. 4C). Los resultados obtenidos demuestran que la regresión de los signos clínicos de EAE después del tratamiento con OAE o AFI es estable y que la recuperación relativa es duradera. Por lo tanto, los ratones que se habían recuperado por completo (OAE-F o AFI-F) y no recibieron ningún tratamiento más, permanecieron sanos o desarrollaron sólo signos clínicos muy leves de EAE (puntuación clínica media máxima < 0.5) (Fig. 4B). En los ratones que no se habían recuperado por completo durante el primer curso de tratamiento (OAE-P o AFIP), el segundo curso de administración i.p. diaria de OAE o AFI respectivamente no tuvo un efecto más beneficioso en los signos clínicos de EAE (Fig. 4C); los ratones permanecieron relativamente estables con signos clínicos leves (puntuación clínica media máxima para OAE-P = 1.3 \pm 0.19, para AFI-P = 0.68 \pm 0.20), los cuales, sin embargo, fueron significantemente más bajos que los que se observaron en los ratones de control no tratados (puntuación clínica media máxima= 3.1 \pm 0.7).

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Ejemplo 5

Detención del progreso de enfermedad por administración s.c. de OAE y MOM

A continuación el potencial efecto terapéutico de OAE y MOM fue evaluado por medio de administración s.c. diaria de cada uno de ellos o de una combinación 1:1 de los mismos a partir del día 11 después de la carga encefalitogénica, justo antes del inicio clínico de EAE. Según se muestra en Fig. 5, todos los tratamientos fueron altamente eficaces en detener el progreso de la enfermedad, siendo la mezcla 1:1 de MOM y OAE la más potente. De esta manera, el día 22, cuando el experimento fue detenido, la puntuación clínica media de los ratones de control tratados con TFS fue de 2.5 \pm 0.84, mientras que puntuación clínica media de los ratones tratados con OAE fue de 0.83 \pm 0.40 (p = 0.07), y la de los ratones tratados con MOM y MOM+OAE fue de 0.08 \pm 0.08 (p = 0.03) (Fig. 5).

La protección por administración s.c. de OAE o MOM o una mezcla de OAE+MOM fue eficaz no solamente para la EAE inducida por un péptido que representaba un único epitopo encefalitogénico (PPL 139-151, Fig. 5), sino también para la EAE inducida con homogeneizado de médula espinal de ratón (HMER), que incluye todas las proteínas encefalitogénicas posibles. Según se muestra en Fig. 6, después de la carga encefalitogénica con HMER/AFC, todos los ratones de control habían muerto para el día 15 después de la inmunización; a diferencia de éstos, los ratones tratados diariamente por administración s.c. de OAE o MOM o una mezcla de OAE+MOM a partir del día 4 después de la carga encefalitogénica, presentaban gravedad clínica marcadamente reducida y el tratamiento con MOM dió como resultado una detención casi completa del desarrollo de enfermedad.

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Ejemplo 6

Tratamiento de otras enfermedades autoinmunes

A pesar de que los mecanismos por los cuales OAE, MOM o una mezcla de OAE+MOM suprimen eficazmente el desarrollo de la EAE inducida por PPL 139-151- o HMER y detienen el progreso de enfermedad en ratones aún no se han comprendido, es obvio que el modo de acción mediante el cual OAE y MOM bloquean el desarrollo de la EAE no consiste en dirigirse a las células T encefalitogénicas a través de un mecanismo antigenoespecífio. Estos resultados indican que el tratamiento por OAE, MOM o una mezcla de OAE+MOM es asimismo eficaz en el bloqueo del desarrollo de otras enfermedades autoinmunes.

6.1 Tratamiento de artritis reumatoide

La artritis autoinmune inducida por colágeno en animales de laboratorio es similar a la artritis reumatoide humana en varios aspectos y se utiliza ampliamente como modelo para su equivalente humano (Harris, 1989). La enfermedad puede inducirse inyectando a ratones H-2^{q} o H-2^{r} colágeno del tipo II disuelto en 0.01M de ácido acético y emulsificado en proporción 1:1 con AFC (Stuart et al., 1982). La artritis, los síntomas de la cual consisten en edema y eritema marcado de las patas anteriores y posteriores, se desarrolla 20-25 días después de la inmunización (Wooley et al., 1981). En base a la modulación eficaz de EAE por OAE o MOM, se espera que las inyecciones diarias (s.c. o i.p.) de OAE o MOM o de una mezcla de OAE+MOM iniciadas 7-10 días antes del inicio de la enfermedad protegerían a los ratones contra el desarrollo de artritis. Es más, se espera que la administración diaria de OAE, MOM o de una mezcla de OAE+MOM detenga el progreso de la enfermedad, si se aplica a partir del momento cuando los signos clínicos de artritis puedan ser detectados por primera vez.

6.2 Tratamiento de diabetes mellitus insulinodependiente (DMID)

La DMID es una enfermedad autoinmune que aparece como resultado de la destrucción de las células productoras de insulina en los islotes de Langerhans del páncreas. Esta destrucción se manifiesta por infiltrados de células mononucleares y un proceso inflamatorio crónico en los islotes de individuos afectados (Castano y Eisenbarth, 1990). La DMID se desarrolla espontáneamente en los ratones NOD y proporciona un sistema de modelo animal que se asemeja en alto grado a la DMID humana (Castano y Eisenbarth, 1990). Los ratones NOD desarrollan la insulitis espontáneamente a la edad de 4-6 semanas y la hiperglicemia a partir de 12 semanas de edad (Bach, 1994). En vista de los resultados obtenidos con la EAE, se espera que las inyecciones diarias (s.c. o i.p.) de OAE o MOM o de una mezcla de OAE+MOM a partir de 3 semanas de edad suprimiría el desarrollo de la insulitis y la diabetes posterior en los ratones NOD tratados. Es más, se espera que las inyecciones diarias de OAE, MOM o OAE+MOM a las 10-11 semanas de edad detengan su progreso hacia la diabetes completamente desarrollada.

6.3 Tratamiento de otras enfermedades autoinmunes y de inflamación inmune mediada

El desarrollo de enfermedades autoinmunes mediadas por anticuerpos tales como el lupus eritematoso o la miastenia gravis, depende de las células T auxiliares efectivas. Por lo tanto es razonable suponer que la administración de OAE, MOM o de una mezcla de OAE+MOM podría modular la producción de anticuerpos patogénicos a través de los mecanismo(s) que afectan las células T auxiliares. Por lo tanto, OAE o MOM o una mezcla de OAE+MOM, los cuales es improbable que sean tóxicos para humanos, pueden considerarse agentes potenciales para el tratamiento de diversas enfermedades autoinmunes, y asimismo para las enfermedades de injerto-contra-huésped y rechazo de injerto, que están asociadas a reacciones inflamatorias mediadas por las células T.

Referencias

Bach, J.-F. 1994. Insulin-dependent diabetes mellitus as an autoimmune disease. Endoc. Rev. 15: 516-542.

Castano, L., and Eisenbarth, G. S. 1990. Type I diabetes: a chronic autoimmune disease of human, mouse and rat. Annu. Rev. Immunol. 8: 647-680.

Harris, E.D. 1989. Pathogenesis of rheumatoid arthritis. In "Textbook of Rheumatology", 3rd Ed. (W.N.Kelley, D.H. Harris, S. Ruddy and C.B. Sledge, eds.) W.B. Saunders, Philadelphia, p. 905.

Kerlero de Rosbo, N., and A. Ben-Nun. 1998. T-cell responses to myelin antigens in multiple sclerosis: Relevance of the predominant autoimmune reactivity to myelin oligodendrocyte glycoprotein. J. Autoimmun. 11: 287-299.

Kerlero de Rosbo, N. and Ben-Nun, A. 1999. Experimental autoimmune encephalomyelitis induced by various antigens of the central nervous system.

Overview and relevance to multiple sclerosis. In "The Decade of Autoimmunity 1987-1997" (Y. Shoenfeld, ed.), Elsevier Science, Amsterdam, pp. 169-177.

Stuart, J. M., Townes, A. S., and Kang, A. H. 1982. Nature and specificity of the immune response to collagen in type II collagen-induced arthritis in mice. J. Clin. Invest. 69: 673.

Tuohy, V.K. 1994. Peptide determinants of myelin proteolipid protein (PLP) in autoimmune disease: A review. Neurochem. Res. 19: 935-944.

Wooley, P. H., Luthra, H. W., Stuart, J. M. and David, C. S. 1981. Type II collagen-induced arthritis in mice. I. Major histocompatibility complex (I region) linkage and antibody correlates. J. Exp. Med. 154: 688.

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Referencias citadas en la descripción Esta lista de referencias citadas por el solicitante es solamente para la comodidad del lector. No forma parte del documento de patente europea. Aunque se ha tenido mucho cuidado en la recopilación de las referencias, no se pueden excluir errores u omisiones y la OEP declina cualquier responsabilidad en este sentido. Literatura no patentaria citada en la descripción

\bullet Remington's Pharmaceutical Science. Mack Publishing Company, 1985 [0024]

\bulletBACH, J.-F. Insulin-dependent diabetes mellitus as an autoimmune disease. Endoc. Rev., 1994, vol. 15, 516-542 [0042]

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\bulletWOOLEY, P. H.; LUTHRA, H. W.; STUART, J. M.; DAVID, C. S. Type II collagen-induced arthritis in mice. I. Major histocompatibility complex (I region) linkage and antibody correlates. J. Exp. Med., 1981, vol. 154, 688 [0042]

Claims

1. Uso de un éster de un ácido graso C_{18} saturado o cis-insaturado con un alcanol C_{1} - C_{24}, con un poliol que tenga como mínimo cuatro grupos hidroxi o un anhidro derivado del mismo, o con un monosacárido, o una combinación de dichos ésteres, para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades autoinmunes organoespecificas.

2. Uso según la reivindicación 1 en el cual dicho ácido graso C_{18} saturado es ácido esteárico y dicho ácido graso C_{18} cis-insaturado es ácido oléico.

3. Uso según la reivindicación 2 en el cual dicho éster es oleato de etilo.

4. Uso según la reivindicación 2 en el cual dicho éster es monooleato de manido.

5. Uso según la reivindicación 2 de una mezcla de oleato de etilo y monooleato de manido.

6. Uso según la reivindicación 5 de una mezcla 1:1 de oleato de etilo y monooleato de manido.

7. Uso según una de las reivindicaciones de 1 a 6 en el cual dicha enfermedad autoinmune organoespecífica se selecciona entre esclerosis múltiple (MS), diabetes mellitus insulinodependiente (IDDM), artritis reumatoide, tiroiditis, miasthenia gravis, anemia aplástica, anemia hemolítica, hepatitis autoinmune, iridociclitis, escleritis, uveitis, orquitis, púrpura trombocitopenica idiopática y enfermedades inflamatorias del intestino, tales como enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa.

8. Una composición farmacéutica que incluya un éster de un ácido graso C_{18} saturado o cis-insaturado con un alcanol C_{1} - C_{24}, con un poliol que tenga como mínimo cuatro grupos hidroxi o un anhidro derivado del mismo, o con un monosacárido, o una combinación de dichos ésteres, para el tratamiento de enfermedades autoinmunes organoespecificas.